JP3336275B2 - トキソプラズマ・ゴンディ抗原、該抗原に対する抗体及び該抗原又は抗体を用いた免疫測定方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規なトキソプラ
ズマ・ゴンディ（Toxoplasma gondii ）抗原、該抗原を
コードする核酸、該核酸を含む組換えベクター、該抗原
に対する抗体及び該抗原又は該抗体を用いて抗トキソプ
ラズマ・ゴンディ抗体又はトキソプラズマ・ゴンディ抗
原を免疫測定する方法に関する。本発明はトキソプラズ
マ・ゴンディによる感染症の診断に利用することができ
る。

【０００２】

【従来の技術】現在、トキソプラズマ虫体の各型に特異
的な抗原に関して、幾つかの抗原領域について明確化さ
れているが、増殖型虫体特異的抗原として１１６、７
８、６４、６１、５４、５２、４２、３０、２４、６Ｋ
Ｄａ蛋白質が知られている。また、シスト型虫体特異的
抗原としては、３６、３４、２１、１８ＫＤａ蛋白質が
知られている。さらに、スポロゾイト特異的抗原として
は、２５、６７ＫＤａが存在する。これら様々な抗原の
中でトキソプラズマ症に於ける病変は増殖型虫体の増殖
が原因で発生することから臨床的側面から現存している
各種抗トキソプラズマ特異抗体検出試薬は増殖型虫体抗
原を使用している例が多く存在する。また、最近では、
分子生物学的な手法を用いて増殖型虫体抗原の一つであ
るトキソプラズマ膜抗原であるＰ３０を大腸菌発現やそ
れらの領域の抗原エピトープを含む合成ペプタイドを用
いた試薬も存在している。

【０００３】トキソプラズマは、哺乳類、鳥類の血液、
組織の細胞内に寄生する細胞内寄生性原虫であり、広く
世界に分布する。その生活史は、終宿主であるネコの粘
膜上皮細胞内で有性生殖によってオーシストを生じ便内
に排出する。外界に出たオーシストはやがて８個のスポ
ロゾイトを生じ成熟オーシストとなり感染力を持つよう
になる。成熟オーシストの経口感染によって腸管内でス
ポロゾイトが遊離して、腸管壁から侵入し、増殖型虫体
となり増殖しながら全身に伝播される。

【０００４】トキソプラズマ症の急性期には増殖体によ
って発熱、リンパ節腫脹の症状を呈し、網脈絡膜炎、肺
炎、心筋炎などが起きるが、やがて慢性期に移行する
と、脳、リンパ節や筋肉内に嚢子型虫体を包含する嚢子
を形成して、ほとんど増殖を止めた状態でおとなしく感
染を継続する。

【０００５】トキソプラズマ原虫は、地域、年齢によっ
て異なるが、日本においても数十パーセントから７０〜
８０％の感染率を示す重要な原虫感染疾患である。最も
悲惨なトキソプラズマ症は先天性トキソプラズマ症であ
る。

【０００６】ＡＩＤＳの日和見感染として注目されてい
るトキソプラズマ症は、最近、医原病としての重要性が
言われてきている。すなわち未感染の臓器移植患者がト
キソプラズマ感染臓器の移植を受ける事により、急性ト
キソプラズマ症を起こす。臓器移植による拒絶反応を抑
える為に使用される免疫抑制剤は、同時に移植患者の感
染症に対する免疫反応を低下させ、その結果、感染臓器
の移植によって感染した場合のトキソプラズマ症は重症
であり、致命的な場合が多い。

【０００７】トキソプラズマ原虫は細胞内寄生によって
増殖、生存可能である。感染初期に於け る防御免疫の
面からはマクロファージ感染が重要である。マクロファ
ージが異物を貪食するとファゴソームを形成し、このフ
ァゴソームはやがてリソソームと融合し、ファゴリソソ
ーム（二次リソソーム）になり、プロテアーゼによる酵
素分解を行う。細胞内寄生体はこの異物消化機序から逃
れられる。

【０００８】トキソプラズマ原虫の場合は、マクロファ
ージに侵入、感染すると、細胞内に侵入したトキソプラ
ズマ原虫によってファゴソーム膜は修飾され、parasite
-phorous vacuoleと呼ばれる特異的な細胞内構造物を作
り上げる。このparasitophorous vacuole membraneは宿
主細胞質膜分子を欠いている。やがて、ロプトリーから
分泌された物質によりparasito phorous networkと呼ば
れる索状構造物が出来る。これはトキソプラズマ原虫の
生存、増殖に必要な栄養、環境の維持に機能しているの
だと考えられている。さらに、生存しているトキソプラ
ズマ原虫が感染しているparasitophorous vacuole はリ
ソソームと融合せす゛プロテアーゼによる攻撃を受けな
い。一方、死んだトキソプラズマの場合にはマクロファ
ージによって取り込まれた液胞（ファゴソーム）はリソ
ソームと融合し酵素消化を受ける。

【０００９】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、従来
知られていない新規なトキソプラズマ・ゴンディ抗原を
提供することである。また、本発明の目的は、本発明の
新規トキソプラズマ・ゴンディ抗原をコードする核酸、
該核酸を含む組換えベクター、該抗原に対する抗体及び
該抗原又は該抗体を用いて抗トキソプラズマ・ゴンディ
抗体又はトキソプラズマ・ゴンディ抗原を免疫測定する
方法を提供することである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】本願発明者は、鋭意研究
の結果、トキソプラズマ・ゴンディには、ヒトｈｓｐ７
０蛋白質（Hunt, C., and R.I. Morimoto. 1985. Conse
rved features of eukaryotic hsp70 genes revealed b
y comparison with the nucleotide sequenceof human
hsp70. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 82; 6455-6459）
にある程度類似した新規な抗原が存在することを見出
し、該抗原をコードするＤＮＡのクローニング及び発現
並びに該抗原の精製に成功し、該抗原に対する抗体を作
製することに成功し、該抗原又は抗体を用いて体液中の
抗トキソプラズマ・ゴンディ抗体又はトキソプラズマ・
ゴンディを免疫測定する方法を開発し、本発明を完成し
た。

【００１１】すなわち、本発明は、配列表の配列番号１
に示されるアミノ酸配列又は該アミノ酸配列において１
又は数個のアミノ酸残基が置換され、欠失され、挿入さ
れ及び／又は付加されたアミノ酸配列であって、トキソ
プラズマ・ゴンディに特異的な抗原性を発揮するアミノ
酸配列から成る、トキソプラズマ・ゴンディ抗原と、体
液中の抗トキソプラズマ・ゴンディ抗体との抗原抗体反
応を利用して体液中の抗トキソプラズマ・ゴンディ抗体
を測定する免疫測定方法を提供する。また、本発明は、
上記トキソプラズマ・ゴンディ抗原に対する抗体と、体
液中のトキソプラズマ・ゴンディ抗原との抗原抗体反応
を利用して体液中のトキソプラズマ・ゴンディ抗原を測
定する免疫測定方法を提供する。

【００１２】

【発明の実施の形態】下記実施例において精製された、
本発明の新規トキソプラズマ・ゴンディ抗原の好ましい
一例は、配列表の配列番号１に示されるアミノ酸配列を
有する。

【００１３】なお、一般に、タンパク質抗原において、
該タンパク質のアミノ酸配列のうち少数のアミノ酸残基
が置換し若しくは欠失し、又は少数のアミノ酸残基が挿
入若しくは付加された場合であっても、元のタンパク質
とほぼ同じ抗原性を有している場合があることは当業者
において広く知られている。従って、配列番号１に示さ
れるアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸残基が
置換され、欠失され、挿入され及び／又は付加されたア
ミノ酸配列を有し、かつ、トキソプラズマ・ゴンディに
特異的な抗原性を発揮するアミノ酸配列から成る抗原も
本発明の範囲に含まれる。なお、ここで、「トキソプラ
ズマ・ゴンディに特異的な抗原性」とは、配列番号１で
示されるアミノ酸配列から成るタンパク質に対する抗体
と特異的に抗原抗体反応を行うことを意味する。

【００１４】また、本発明は、上記本発明のトキソプラ
ズマ・ゴンディ抗原をコードする核酸を提供する。下記
実施例においてクローニングされた、配列番号１で示さ
れるアミノ酸配列を有するトキソプラズマ・ゴンディ抗
原をコードするＤＮＡの塩基配列が、そのコードする推
定アミノ酸配列とともに配列表の配列番号２に示されて
いる。なお、配列番号２に示されるアミノ酸配列は配列
番号１に示されるアミノ酸配列と同じである。なお、上
記した本発明のトキソプラズマ・ゴンディ抗原（配列番
号１のアミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸残基
が置換、欠失、挿入及び／又は付加されたものを包含す
る）をコードするいずれの核酸も本発明の範囲内に含ま
れる。

【００１５】さらに、本発明は、上記本発明の核酸を含
み、宿主細胞中で上記本発明のトキソプラズマ・ゴンデ
ィ抗原を発現することができる組換えベクターを提供す
る。この組換えベクターは、宿主中での複製を可能にす
る複製開始点と、プロモーターと、該プロモーターの下
流にクローニング部位とを少なくとも有する発現ベクタ
ーのクローニング部位に上記本発明の核酸を挿入、連結
することにより作製することができる。上記のような発
現ベクターは、この分野において周知であり、種々のも
のが市販されている。本発明の組換えベクターは、この
ような市販の発現ベクターのマルチクローニング部位に
常法により本発明の核酸を挿入、連結することにより容
易に作製することができる。なお、下記実施例に組換え
ベクター作製の手順の一例が具体的に記載されている。

【００１６】本発明のトキソプラズマ・ゴンディ抗原
は、上記の組換えベクターで常法により宿主細胞を形質
転換し、得られた形質転換体から目的のタンパク質を精
製することにより得ることができる。組換えベクター中
に挿入される核酸は、下記実施例において具体的に記載
する方法によっても作製することができるし、また、該
核酸の塩基配列が本発明により明らかにされているの
で、トキソプラズマ・ゴンディ細胞から常法であるＲＴ
−ＰＣＲ法により容易に作製することもできる。

【００１７】本発明はさらに、上記本発明のトキソプラ
ズマ・ゴンディ抗原に対する抗体を提供する。この抗体
は、ポリクローナル抗体でもモノクローナル抗体でもよ
いが、免疫測定に用いた場合の測定結果の信頼性の観点
からモノクローナル抗体がより好ましい。ポリクローナ
ル抗体もモノクローナル抗体も常法により得ることがで
きる。すなわち、ポリクローナル抗体は、上記抗原を常
法により動物に免疫し、抗血清として又は抗血清からさ
らに精製することにより得ることができる。また、モノ
クローナル抗体は、上記抗原を常法により動物に免疫
し、脾細胞又はリンパ球を回収してミエローマ細胞と常
法により融合し、融合細胞を選択し、上記抗原と抗原抗
体反応を行うモノクローナル抗体を産生しているクロー
ンを選択し、該クローンを培養してモノクローナル抗体
を回収することにより得ることができる。なお、モノク
ローナル抗体の作製方法の一例が下記実施例に具体的に
記載されている。

【００１８】本発明はさらに、上記本発明のトキソプラ
ズマ・ゴンディ抗原又は上記本発明の抗体を用いて検体
中の抗トキソプラズマ・ゴンディ抗体又はトキソプラズ
マ・ゴンディ抗原を免疫測定する方法を提供する。免疫
測定方法自体はこの分野において周知であり、種々の方
式のものが知られているが、そのいずれの方式をも採用
することができる。すなわち、例えば、反応形式により
分類すると、サンドイッチ法、競合法、凝集法等がある
が、これらのいずれであってもよく、また、用いる標識
の種類により分類すると、酵素免疫測定法、放射免疫測
定法、蛍光免疫測定法、ビオチン免疫測定法等があるが
これらのいずれであってもよい。要するに、本発明のト
キソプラズマ・ゴンディ抗原と、検体中の抗トキソプラ
ズマ・ゴンディ抗体との抗原抗体反応を利用して検体中
の抗トキソプラズマ・ゴンディ抗体を測定する免疫測定
方法、及び本発明の抗体と、検体中のトキソプラズマ・
ゴンディ抗原との抗原抗体反応を利用して検体中のトキ
ソプラズマ・ゴンディ抗原を測定する免疫測定方法は全
て本発明の範囲に含まれる。

【００１９】本発明の免疫測定方法の対象となる検体と
しては、トキソプラズマ・ゴンディによる感染が疑われ
る人の血液や血清等の体液が挙げられるがこれらに限定
されるものではない。

【００２０】

【実施例】以下、本発明を実施例に基づきより具体的に
説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定される
ものではない。

【００２１】実施例１ トキソプラズマ・ゴンディのｈｓｐ７０様蛋白質をコー
ドする遺伝子のクローニング ＭＯＳＥＩ ｃＤＮＡライブラリー作製キット（Amersha
m LIFE SCIENCE社より市販）を用い、トキソプラズマ・
ゴンディＲＨ株のtayzoiteから分離したｐｏｌｙ（Ａ）
⁺ＲＮＡから構成されたｃＤＮＡを作製した。これらの
ｃＤＮＡライブラリーに対してヒトのｈｓｐ７０ ＤＮ
Ａを放射性核種である（³²Ｐ）で標識したプローブ（Ａ
ＴＣＣ受託番号５７４９４ヒトｇＤＮＡ由来）を用いて
クロスハイブリダイゼーション法によってヒトｈｓｐ７
０遺伝子領域と特異的に反応するトキソプラズマ・ゴン
ディ遺伝子のスクリーニングを行った。ハイブリダイゼ
ーション時に使用したハイブリダイゼーションバッファ
ー、洗浄バッファーの各組成及び反応温度は次の通りで
あった。すなわち、３×ＳＳＣ、５×デンハート液、５
０ｍＭトリスベース（ｐＨ７．５）、１ｍＭ ＥＤＴ
Ａ、０．５％ ＳＤＳ及び６０℃で変性した２０μｇ／
μｌのサケ***を各々添加してハイブリダイゼーション
に用いた。また、０．１×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳを各
々添加し、各々６０℃で反応及び洗浄を行った。この方
法によって１×１０⁵個のｃＤＮＡクローンからヒトｈ
ｓｐ７０ ＤＮＡプローブに対して特異的に反応する１
５クローンを取得した。

【００２２】また、これらの１５クローンの内最もｃＤ
ＮＡのサイズが大きいｐＴＨ１４クローンをクローニン
グベクターpBluescript SKII(+)(Stratagene社製）のマ
ルチクローニングサイト内の制限酵素サイトＢａｍＨＩ
内に挿入し、クローン化した。

【００２３】実施例２ クローン化ＤＮＡ：ｐＴＨ１４の塩基配列の決定 塩基配列の決定は、ジェネティックアナライザー３１０
（パーキンエルマー社製）を使用して行った。この際、
シークエンスプライマーの標識には、サイクルシークエ
ンスキットＦＳ（パーキンエルマー社製）を使用しダイ
ターミネーター法により実施した。また、シークエンシ
ングに際しては、合計１２個のプライマーを合成し（パ
ーキンエルマー社 ＡＢＩＤＮＡシンセサイザー３９１
型）プライマーウォーキングによるシークエンシングに
供試した。決定された塩基配列を、これがコードする推
定アミノ酸配列とともに配列番号２に示す。

【００２４】実施例３ 塩基配列のデータ解析 遺伝子塩基配列及びアミノ酸配列の解析は、Genetyx-Ma
c software(Software development)を用いて行った。

【００２５】実施例４ 組換えトキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質の
発現と精製 （１）発現ベクターの構築 発現ベクターを構築する際には、ｐＴＨ１４クローンを
鋳型としてＰＣＲ法を用いてＴ．ｇｏｎｄｉｉｈｓｐ７
０領域を増幅し、発現ベクターｐＥＴ１５ｂ（米国Nova
gen 社より市販）の制限酵素サイトＸｈｏＩ−ＢａｍＨ
Ｉ内に再クローニングした。この際、５' 末端の転写開
始コドンを設定プライマー内から除外する事で削除し
た。この際目的領域を増幅する為に使用したプライマー
を以下に示す。

【００２６】 TH: 5'-CGGGATCCTTAACCGAGAGAGAGAGGCGC-3' T7: 5'-CATCTCGAGCTGGAGACAGCTGGTGGT-3'

【００２７】（２）目的遺伝子の発現及び発現蛋白質の
精製 トキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質をコード
する遺伝子を含む発現ベクターｐＥＴ１５ｂで形質転換
した宿主細胞 Escherichia coli BL21を培養して目的遺
伝子の発現を行った。その際、培養液としてＬＢ培地
（ＢＩＯ１０１社製）を使用し、抗生物質アンピシリン
を５０μｇ／μｌになる様に添加した。また、培養温度
は３７℃で実施した。更に、蛋白質の発現は終濃度１ｍ
ＭのＩＰＴＧ（ナカライタスク社製）を添加し、３時間
誘導した。

【００２８】（３）発現蛋白質の回収及び精製 ５ｍＭイミダゾール、 ０．５ＭＮａＣｌ、２０ｍＭＴｒ
ｉｓ（ｐＨ８．０）１０ｍｌに発現抗原を浮遊させ、超
音波破砕装置（オリンパス社製）によって２００Ｗ、５
分、０℃の条件で細胞を破砕した。次に、これらの細胞
破砕物を除外する為に１２０００ｒｐｍ、１０分、４℃
の条件で遠心沈殿した。

【００２９】次に、細胞破砕物を結合バッファ中（６０
ｍＭイミダゾール、０．５ＭＮａＣｌ、２０ｍＭＴｒｉ
ｓ−ＨＣｌｐＨ８．０）でホモジナイズした。遠心沈殿
後の上清をニッケルキレートカラム精製の為にProbond
column(Invitrogen、San Diego、CA) に１０ｍｌアプライ
した。 次に、Probond column を洗浄バッファー（６０ｍ
Ｍイミダゾール、０．５ＭＮａＣｌ、２０ｍＭＴｒｉｓ
−ＨＣｌ ｐＨ８．０）４ｍｌで２回洗浄した。

【００３０】そして最終的にカラムに結合した精製発現
蛋白質は、溶出バッファー（１Ｍイミダゾール、０．５
Ｍ ＮａＣｌ、２０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ）５ｍｌを用
いて溶出した。これらの蛋白質は、セントリプレップ−
３０（アミコン社製）濃縮器を用いて遠心濃縮した。そ
の結果、これらの組換え蛋白質の収量は、１Ｌの培養で
約１ｍｇであった。更に、これらの精製済み発現蛋白質
の精製度は、クマシーブリリアントブルー蛋白質染色で
７６ＫＤａ，４６ＫＤａ，３１ＫＤａの三本のメジャー
なバンドとして確認出来た。

【００３１】実施例５ トキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様組換え精製蛋白
質の抗原性の確認 実施例４で精製した組換えトキソプラズマ・ゴンディｈ
ｓｐ７０様蛋白質を用いてその免疫学的な特異性につい
て臨床材料を用いてウエスタンブロッティングによる抗
原解析を行った。この操作の具体的な手順は次の通りで
あった。すなわち、組換えトキソプラズマ・ゴンディhs
p70 様蛋白質１μｇを１０％ＳＤＳ−ポリアクリラマイ
ドゲルで電気泳動した後、ニトロセルロース膜へ再び電
気泳動によって転写した。ニトロセルロース膜の活性基
を脱脂粉乳液（明治乳業製）でコートした後、リン酸緩
衝液（0.01 M, pH7.2)で１００倍に希釈した血清検体１
ｍｌで室温２時間反応させた後、リン酸緩衝液（0.01
M, pH7.2)で４回洗浄した。その後、パーオキシダーゼ
結合抗ヒト免疫グロブリン抗体（Amersham製）を反応さ
せ、ＥＣＬキット（Amersham製）にてフィルム（フジフ
ィルム）に感光させた。

【００３２】その結果、各種特異抗体の検出状況とウエ
スタンブロッティングの結果が完全に一致する結果とな
った。結果を下記表１に示す。

【００３３】

【表１】 ＊：イムノグロブリンクラスＩｇＧ及びＩｇＭ抗体使用

【００３４】実施例６ トキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様精製発現蛋白質
を用いた抗体の作製 トキソプラズマ・ゴンディＨＲ株のTachyzoites は、ヒ
トＢ細胞系ＡＲＨで生成した。また、トキソプラズマ・
ゴンディＦＵＫＡＹＡ株は、Ｂ１０．Ａ（４Ｒ）マウス
で生成した。

【００３５】（１）抗トキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ
７０様タンパク質モノクローナル抗体の作製 ＢＡＬＢ／ｃマウスに対して、２００μｇ／ｍｌの精製
組換えトキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質を
Ｆｒｅｕｎｄの完全アジュバントと１：１で混合し、体
幹部皮下の３ヶ所に対して各々０．２５ｍｌ接種し初回
免疫を実施した。次に、２週間後、初回免疫時同様の抗
原を用いてＦｒｅｕｎｄの不完全アジュバントによって
誘導免疫を行った。この際のアジュバントと抗原の混合
比、接種容量及び接種部位は初回免疫時と同様である。

【００３６】さらに、誘導免疫以後３日後にハイブリド
ーマ作製のためマウス脾臓細胞を取り出し細胞融合装置
ＳＳＨ−１型（島津製作所社製、京都）を用いてＢＡＬ
Ｂ／ｃマウス由来ＳＰ２ミエローマ細胞と融合した。な
お、摘出された脾臓細胞はケラーらの方法（Kohler et
al.,Nature, vol.256,p495-497(1975) ）により実施し
た。

【００３７】さらに、融合細胞は、ＨＡＴ選択培地（ベ
ーリンガーマンハイム社製）で中２日ごとに２回に亘り
細胞選択を行った。この際の培養上清から、ＥＬＩＳＡ
によって抗トキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様タン
パク質モノクローナル抗体の存在を確認した。陽性ハイ
ブリドーマ細胞は、限界希釈法によってクローニングを
行った。また、ヒトｈｓｐ７０に対して非特異的な反応
を示すモノクローナル抗体については、ポリエチレング
リコールを用いた細胞融合方法を使用した事を除き他は
同様の方法によって選択した。さらに、取得した腹水
は、ヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーによって
ＩｇＧを精製しモノクロナール抗体とした。

【００３８】（２）ＥＬＩＳＡの構築 上記の工程で行なったＥＬＩＳＡは次ぎのように行なっ
た。ＥＬＩＳＡは、Current Protocols in immunology
1997, vol. 1, 2.1.2-2.1.20に従い構築した。すなわ
ち、平底マイクロタイタープレート（Dynatech社製、Ｚ
ｕｇ、スイス国）に２μｇ／ｍｌの濃度にＰＢＳ（−）
で調整した精製組換えトキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ
７０様発現蛋白質を固相した。固相条件は、４℃で１２
時間以上静置した。前述の固相プレートは、ブロッキン
グ液（０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０加ホウ酸バッファー、
１ｍＭＥＤＴＡ、０．２５％ＢＳＡ、 ０．０５％ＮａＮ
₃ ）を用いてブロッキングを行った。ブロッキングの条
件は、４℃で一夜静置した。

【００３９】以下にこれらの条件で作製した抗トキソプ
ラズマ・ゴンディＩｇＧ抗体ＥＬＩＳＡの行程を示す。

【００４０】１．非検血清及び培養上清を適宜希釈した
後各ホール内へ１００μｌ滴下し、むらなく免疫反応が
起こる様に振とうした後静置して常温（１５〜２５℃）
で１時間インキュベートした。

【００４１】２．１．の操作の後、洗浄液（０．０５％
Ｔｗｅｅｎ２０、１．４ｍＭリン酸二水素カリウム３．
６ｍＭリン酸水素二ナトリウム・１２水和物、１４６ｍ
Ｍ塩化ナトリウム）を用いて３回洗浄後、２０００倍希
釈アルカリフォスファターゼ標識抗マウスＩｇＧコンジ
ュゲート（Tago、Camarillo、CA ）を１００μｌ各ホール
内に分注し振とうした後常温で１時間インキュベートし
た。

【００４２】３．２．の操作後、前出同一の洗浄液にて
３回洗浄後、１ｍＭｐ−ニトロフェニルリン酸を各ホー
ルに１００μｌ分注した後、振とうし、常温暗所で３０
分間発色させる。その後１．５Ｎ硫酸１００μｌを添加
し反応を停止した。

【００４３】４．発色済みプレートは４９２ｎｍの波長
を用いて吸光度の測定を行った。

【００４４】実施例７ トキソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質に対する
ＩｇＧ抗体（ヒト）検出酵素免疫測定法の構築 平底マイクロタイタープレート（Dynatech社製、Zug 、
スイス国）に１０μｇ蛋白／ｍｌの濃度に０．０１ＭＰ
ＢＳ（ｐＨ７．０）で調整した精製組み換えトキソプラ
ズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質を５０μｌ固相し
た。固相条件は、４℃で一晩静置した。前述のプレート
は、ブロッキング液（０．２％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅ
ｅｎ２０加、０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０））２００
μｌを用いてブロッキングを行った。ブロッキングの条
件は常温（１５〜２５℃）２時間静置した。ブロッキン
グ後洗浄液（ブロッキング液と同様のもの）２００μｌ
で３回洗浄した。

【００４５】以下にこれらの条件で作製した抗トキソプ
ラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質ＩｇＧ抗体（ヒ
ト）酵素免疫測定法の行程を示す。

【００４６】１． ０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で
１００倍に希釈した被検血清及び髄液５０μｌを各ホー
ル内へ滴下し、むらなく免疫反応が起きるように振とう
した後静置して常温で２時間インキュベートした。

【００４７】２． １．の操作の後、洗浄液２００μｌ
を用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０
１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で１０００倍希釈したアルカ
リフォスファターゼ標識抗ヒトＩｇＧ（Ｔａｇｏ社製）
５０μｌを各ホール内に分注し振とうした後常温で２時
間インキュベートした。

【００４８】３． ２．の操作の後、洗浄液２００μｌ
を用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０
５Ｍ炭酸ナトリウム及び０．５ｍＭ塩化マグネシウムの
入った溶液で３ｍＭとなるように希釈したｐ−ニトロフ
ェニルリン酸１００μｌを各ホール内に分注し振とうし
た後常温で３０〜６０分間インキュベートした。

【００４９】４． 反応終了後４０５ｎｍの波長を用い
て吸光度の測定を行った。このときＯＤが0.110 以下を
陰性、0.200 以上を陽性、0.110 〜0.200 を判定保留と
した。

【００５０】５．結果を表２に示す。

【００５１】

【表２】

【００５２】６． これらは水頭症のなかで、血清での
トキソプラズマ・ゴンディ特異ＩｇＭ抗体の検出、胎盤
でのＰＣＲ法によるトキソプラズマ・ゴンディ特異ＤＮ
Ａの検出により先天性トキソプラズマ症と診断した症例
で、健常人２例に比べて先天性トキソプラズマ症新生児
やその母はODが高く、トキソプラズマ・ゴンディ感染急
性期及び治療効果判定のマーカーとして有用である。

【００５３】実施例８ トキソプラズマ・ゴンディｈｓ
ｐ７０様蛋白質の検出酵素免疫測定法の構築 平底マイクロタイタープレート（Dynatech社製、Zug 、
スイス国）に１０μｇ蛋白／ｍｌの濃度に０．０１ＭＰ
ＢＳ（ｐＨ７．０）で調整したトキソプラズマ・ゴンデ
ィｈｓｐ７０様蛋白質に対するモノクローナル抗体を１
００μｌ固相した。固相条件は、４℃で一晩静置した。
前述のプレートは、ブロッキング液（０．２％ＢＳＡ、
０．１％Ｔｗｅｅｎ２０加、０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ
７．０））２００μｌを用いてブロッキングを行った。
ブロッキングの条件は、常温（１５〜２５℃）２時間静
置した。ブロッキング後洗浄液（ブロッキング液と同様
のもの）２００μｌで３回洗浄した。

【００５４】以下にこれらの条件で作製したトキソプラ
ズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質検出の酵素免疫測定
法の行程を示す。

【００５５】１． ０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で
１０倍に希釈した被検血清及び髄液１００μｌを各ホー
ル内へ滴下し、むらなく免疫反応が起きるように振とう
した後静置して常温で１時間インキュベートした。

【００５６】２． １．の操作の後、洗浄液２００μｌ
を用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０
１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で希釈したビオチン標識トキ
ソプラズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質５０μｌ
（０．１μｇ蛋白）を各ホール内に分注し振とうした後
常温で２時間インキュベートした。

【００５７】３．２．の操作の後、洗浄液２００μｌを
用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０１
ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で希釈したアルカリフォスファ
ターゼ標識アビジン（１μｇ／ｍｌ Sigma 製、Mo、米
国）１００μｌを各ホール内に分注し振とうした後常温
で３０分間インキュベートした。

【００５８】４．３．の操作の後、洗浄液２００μｌを
用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０５
Ｍ炭酸ナトリウム及び０．５ｍＭ塩化マグネシウムの入
った溶液で３ｍＭとなるように希釈したｐ−ニトロフェ
ニルリン酸１００μｌを各ホール内に分注し振とうした
後常温で３０〜６０分間インキュベートした。

【００５９】５．反応終了後４０５ｎｍの波長を用いて
吸光度の測定を行った。このときＯＤが1.000 以上を陰
性、0.800 以下を陽性、0.800 〜1.000 を判定保留とし
た。

【００６０】６．結果を表３に示す。

【００６１】

【表３】

【００６２】７．これらは水頭症のなかで、血清でのト
キソプラズマ・ゴンディ特異ＩｇＭ抗体の検出、胎盤で
のＰＣＲ法によるトキソプラズマ・ゴンディ特異ＤＮＡ
の検出により先天性トキソプラズマ症と診断した症例
で、健常人２例に比べて先天性トキソプラズマ症新生児
やその母はODが低く、トキソプラズマ・ゴンディ感染急
性期及び治療効果判定のマーカーとして有用である。

【００６３】実施例９ トキソプラズマ・ゴンディｈｓ
ｐ７０様蛋白質の検出酵素免疫測定法の構築 平底マイクロタイタープレート（Dynatech社製、Zug 、
スイス国）に１０μｇ蛋白／ｍｌの濃度に０．０１ＭＰ
ＢＳ（ｐＨ７．０）で調整したトキソプラズマ・ゴンデ
ィｈｓｐ７０様蛋白質に対するモノクローナル抗体（Ｙ
Ａ−１）を１００μｌ固相した。固相条件は、４℃で一
晩静置した。前述のプレートは、ブロッキング液（０．
２％ＢＳＡ、０．１％Ｔｗｅｅｎ２０加、０．０１ＭＰ
ＢＳ（ｐＨ７．０））２００μｌを用いてブロッキング
を行った。ブロッキングの条件は、常温（１５〜２５
℃）２時間静置した。ブロッキング後洗浄液（ブロッキ
ング液と同様のもの）２００μｌで３回洗浄した。

【００６４】以下にこれらの条件で作製したトキソプラ
ズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質検出の酵素免疫測定
法の行程を示す。

【００６５】１．０．０１ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で１
０倍に希釈した被検血清及び髄液１００μｌを各ホール
内へ滴下し、むらなく免疫反応が起きるように振とうし
た後静置して常温で１時間インキュベートした。

【００６６】２．１の操作の後、洗浄液２００μｌを用
いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後０．０１ＭＰ
ＢＳ（ｐＨ７．０）で希釈したビオチン標識トキソプラ
ズマ・ゴンディｈｓｐ７０様蛋白質に対するモノクロー
ナル抗体（ＹＡ−２）５０μｌ（０．１μｇ蛋白／ml）
を各ホール内に分注し振とうした後常温で２時間インキ
ュベートした。

【００６７】３．２．の操作の後、洗浄液２００μｌを
用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０１
ＭＰＢＳ（ｐＨ７．０）で希釈したアルカリフォスファ
ターゼ標識アビジン（１μｇ／ｍｌ Sigma 製、Mo、米
国）１００μｌを各ホール内に分注し振とうした後常温
で３０分間インキュベートした。

【００６８】４．３．の操作の後、洗浄液２００μｌを
用いて２回、蒸留水２００μｌで１回洗浄後、０．０５
Ｍ炭酸ナトリウム及び０．５ｍＭ塩化マグネシウムの入
った溶液で３ｍＭとなるように希釈したｐ−ニトロフェ
ニルリン酸１００μｌを各ホール内に分注し振とうした
後常温で３０〜６０分間インキュベートした。

【００６９】５．反応終了後４０５ｎｍの波長を用いて
吸光度の測定を行った。このときＯＤが0.150 以下を陰
性、0.500 以上を陽性、0.150 〜0.500 を判定保留とし
た。

【００７０】６．結果を表４に示す。

【００７１】

【表４】

【００７２】７．これらは水頭症のなかで、血清でのト
キソプラズマ・ゴンディ特異ＩｇＭ抗体の検出、胎盤で
のＰＣＲ法によるトキソプラズマ・ゴンディ特異ＤＮＡ
の検出により先天性トキソプラズマ症と診断した症例
で、健常人２例に比べて先天性トキソプラズマ症新生児
やその母はODが高く、トキソプラズマ・ゴンディ感染急
性期及び治療効果判定のマーカーとして有用である。

【００７３】

【発明の効果】本発明により、新規なトキソプラズマ・
ゴンディ抗原が提供された。本発明の方法に従い、この
抗原又はこの抗原に対する抗体を免疫測定することによ
り、トキソプラズマ・ゴンディの感染を診断することが
できる。特に、本発明の抗原を用いた免疫測定による
と、感染初期に生じる抗体を感度良く測定することがで
きる。

【００７４】

【配列表】 <110> YANO Akihiko <120> Toxoplasma gondii antigen, antibody to the antigen and method for immunoassay using the antigen or antibody <130> 98579 <160> 4

【００７５】 <210> 1 <211> 647 <212> PRT <213> Toxoplasma gondii RH <400> 1 Met Ala Asp Ser Pro Ala Val Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser 1 5 10 15 Cys Val Gly Val Trp Lys Asn Asp Ala Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp 20 25 30 Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu 35 40 45 Arg Leu Val Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Arg Asn Pro Glu 50 55 60 Asn Thr Ile Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Lys Phe Asp Asp 65 70 75 80 Pro Ser Val Gln Ser Asp Met Lys His Trp Pro Phe Lys Val Ile Ala 85 90 95 Gly Pro Gly Asp Lys Pro Leu Ile Glu Val Thr Tyr Gln Gly Glu Lys 100 105 110 Lys Thr Phe His Pro Glu Glu Val Ser Ala Met Val Leu Gly Lys Met 115 120 125 Lys Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Lys Glu Val Lys Glu Ala Val 130 135 140 Ile Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys 145 150 155 160 Asp Ala Gly Thr Ile Ala Gly Leu Ser Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu 165 170 175 Pro Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys Gly Cys Gly 180 185 190 Glu Met Asn Val Leu Ile Phe Asp Met Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val 195 200 205 Ser Leu Leu Thr Ile Glu Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala 210 215 220 Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Leu Val Asp 225 230 235 240 Phe Cys Val Gln Asp Phe Lys Arg Lys Asn Arg Gly Lys Asp Ile Ser 245 250 255 Thr Asn Ser Arg Ala Leu Arg Arg Leu Arg Thr Gln Cys Glu Arg Thr 260 265 270 Lys Arg Thr Leu Ser Ser Ser Ile Gln Ala Thr Ile Glu Ile Asp Ser 275 280 285 Leu Phe Glu Gly Ile Asp Tyr Ser Val Ser Ile Ser Arg Ala Arg Phe 290 295 300 Glu Glu Leu Cys Met Asp Tyr Phe Arg Asn Ser Leu Leu Pro Val Glu 305 310 315 320 Lys Val Leu Lys Asp Ser Gly Ile Asp Lys Arg Ser Val Ser Glu Val 325 330 335 Val Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Ile Gln Gln Leu Ile 340 345 350 Thr Asp Phe Phe Asn Gly Lys Glu Pro Cys Arg Ser Ile Asn Pro Asp 355 360 365 Glu Ala Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Lys Gly 370 375 380 Val Thr Ser Ser Gln Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Ala Pro 385 390 395 400 Leu Ser Leu Gly Leu Glu Thr Ala Gly Gly Val Met Thr Lys Leu Ile 405 410 415 Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Lys Lys Ser Gln Thr Phe Thr Thr 420 425 430 Tyr Ala Asp Asn Gln Pro Gly Val Leu Ile Gln Val Tyr Glu Gly Glu 435 440 445 Arg Ala Met Thr Lys Asp Asn Asn Leu Leu Gly Lys Phe His Leu Asp 450 455 460 Gly Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe 465 470 475 480 Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile Met Asn Val Thr Ala Gln Asp Lys Ser 485 490 495 Thr Gly Lys Ser Asn Gln Ile Thr Ile Thr Asn Asp Lys Gly Arg Leu 500 505 510 Ser Ala Ser Glu Ile Asp Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Lys Tyr Lys 515 520 525 Ala Glu Asp Glu Gln Asn Lys His Arg Val Glu Ala Lys Asn Gly Leu 530 535 540 Glu Asn Tyr Cys Tyr His Met Arg Gln Thr Leu Asp Asp Glu Lys Leu 545 550 555 560 Lys Asp Lys Ile Ser Ser Glu Asp Arg Asp Thr Ala Asn Lys Ala Ile 565 570 575 Gln Glu Ala Leu Asp Trp Leu Asp Lys Asn Gln Leu Ala Glu Lys Glu 580 585 590 Glu Phe Glu Ala Lys Gln Lys Glu Val Glu Ser Val Cys Thr Pro Ile 595 600 605 Ile Thr Lys Leu Tyr Gln Ala Gly Ala Ala Ala Gly Gly Met Pro Gly 610 615 620 Gly Met Gly Gly Met Pro Gly Gly Met Gly Gly Met Pro Gly Gly Met 625 630 635 640 Gly Gly Met Pro Gly Gly Met 645

【００７６】 <210> 2 <211> 1941 <212> DNA <213> Toxoplasma gondii RH <400> 2 atg gcg gac tct cct gct gtg ggt att gac ctt ggc acc acc tat tct 48 Met Ala Asp Ser Pro Ala Val Gly Ile Asp Leu Gly Thr Thr Tyr Ser 1 5 10 15 tgc gta ggt gtg tgg aag aac gat gct gtg gaa atc atc gcg aac gac 96 Cys Val Gly Val Trp Lys Asn Asp Ala Val Glu Ile Ile Ala Asn Asp 20 25 30 cag gga aac agg acg acc ccg tcc tac gtc gcg ttc acc gac acg gag 144 Gln Gly Asn Arg Thr Thr Pro Ser Tyr Val Ala Phe Thr Asp Thr Glu 35 40 45 aga ctt gtc ggt gat gct gcg aag aac caa gtc gca cgc aac ccg gaa 192 Arg Leu Val Gly Asp Ala Ala Lys Asn Gln Val Ala Arg Asn Pro Glu 50 55 60 aac acc att ttc gat gcc aag cgc cta atc ggt cgc aag ttt gat gat 240 Asn Thr Ile Phe Asp Ala Lys Arg Leu Ile Gly Arg Lys Phe Asp Asp 65 70 75 80 ccc tcg gtc cag tcg gac atg aag cat tgg cca ttc aag gtc att gct 288 Pro Ser Val Gln Ser Asp Met Lys His Trp Pro Phe Lys Val Ile Ala 85 90 95 ggt ccg gga gac aag ccc ctc att gaa gtc acg tac cag gga gag aag 336 Gly Pro Gly Asp Lys Pro Leu Ile Glu Val Thr Tyr Gln Gly Glu Lys 100 105 110 aag acg ttc cac cct gaa gag gtt tcc gcc atg gtt ttg ggc aaa atg 384 Lys Thr Phe His Pro Glu Glu Val Ser Ala Met Val Leu Gly Lys Met 115 120 125 aag gaa atc gcg gag gct tac ctc ggc aag gaa gtg aag gag gcc gtc 432 Lys Glu Ile Ala Glu Ala Tyr Leu Gly Lys Glu Val Lys Glu Ala Val 130 135 140 att acc gtt cct gcg tac ttc aac gat tcg cag cgt cag gct acc aag 480 Ile Thr Val Pro Ala Tyr Phe Asn Asp Ser Gln Arg Gln Ala Thr Lys 145 150 155 160 gat gct ggt acc att gcc ggc ctc agc gtc ctc cgc att atc aac gag 528 Asp Ala Gly Thr Ile Ala Gly Leu Ser Val Leu Arg Ile Ile Asn Glu 165 170 175 ccc aca gcg gct gcc att gct tat ggt ctg gac aag aag ggc tgc ggt 576 Pro Thr Ala Ala Ala Ile Ala Tyr Gly Leu Asp Lys Lys Gly Cys Gly 180 185 190 gag atg aac gtc ctc atc ttc gac atg ggt ggc ggt acg ttc gat gtg 624 Glu Met Asn Val Leu Ile Phe Asp Met Gly Gly Gly Thr Phe Asp Val 195 200 205 tcg ctg ctt aca atc gaa gac ggt atc ttt gaa gtc aag gcc acc gct 672 Ser Leu Leu Thr Ile Glu Asp Gly Ile Phe Glu Val Lys Ala Thr Ala 210 215 220 ggt gac acc cat ctt ggt ggt gaa gat ttc gac aac cgt ttg gtg gac 720 Gly Asp Thr His Leu Gly Gly Glu Asp Phe Asp Asn Arg Leu Val Asp 225 230 235 240 ttc tgc gtc cag gac ttc aag cgc aag aac cgc gga aag gac atc agc 768 Phe Cys Val Gln Asp Phe Lys Arg Lys Asn Arg Gly Lys Asp Ile Ser 245 250 255 acc aac agc cgt gcc ctt cgt cgc ctg cgt acc cag tgc gag cgc acc 816 Thr Asn Ser Arg Ala Leu Arg Arg Leu Arg Thr Gln Cys Glu Arg Thr 260 265 270 aag aga act ctc tct agc agc atc cag gca acc atc gaa att gac tct 864 Lys Arg Thr Leu Ser Ser Ser Ile Gln Ala Thr Ile Glu Ile Asp Ser 275 280 285 ctt ttt gag ggc att gac tac tct gtg tct atc tct cgt gcg cgc ttt 912 Leu Phe Glu Gly Ile Asp Tyr Ser Val Ser Ile Ser Arg Ala Arg Phe 290 295 300 gag gag ctt tgc atg gac tac ttc cgc aac tcc ctg ttg ccc gtc gag 960 Glu Glu Leu Cys Met Asp Tyr Phe Arg Asn Ser Leu Leu Pro Val Glu 305 310 315 320 aag gtc ctc aag gac tct ggt att gac aag cgc tcg gtc agc gaa gtt 1008 Lys Val Leu Lys Asp Ser Gly Ile Asp Lys Arg Ser Val Ser Glu Val 325 330 335 gtg ttg gtt ggt gga tct acc cgt atc ccc aag att cag cag ctc atc 1056 Val Leu Val Gly Gly Ser Thr Arg Ile Pro Lys Ile Gln Gln Leu Ile 340 345 350 act gac ttc ttc aac gga aag gag ccg tgc agg tcg atc aac ccc gat 1104 Thr Asp Phe Phe Asn Gly Lys Glu Pro Cys Arg Ser Ile Asn Pro Asp 355 360 365 gag gcc gtt gcg tac ggt gct gct gtc cag gca gcg atc ttg aag gga 1152 Glu Ala Val Ala Tyr Gly Ala Ala Val Gln Ala Ala Ile Leu Lys Gly 370 375 380 gtt acc agc tct cag gtg cag gat ttg ctt ctt ctg gat gtt gcg cct 1200 Val Thr Ser Ser Gln Val Gln Asp Leu Leu Leu Leu Asp Val Ala Pro 385 390 395 400 ctc tct ctc ggt ctg gag aca gct ggt ggt gtc atg acc aag ctg att 1248 Leu Ser Leu Gly Leu Glu Thr Ala Gly Gly Val Met Thr Lys Leu Ile 405 410 415 gaa aga aac aca acg atc ccg acc aag aag tct cag acc ttc acc acg 1296 Glu Arg Asn Thr Thr Ile Pro Thr Lys Lys Ser Gln Thr Phe Thr Thr 420 425 430 tac gcg gac aac cag cca gga gtg ctg att cag gtg tac gaa ggt gag 1344 Tyr Ala Asp Asn Gln Pro Gly Val Leu Ile Gln Val Tyr Glu Gly Glu 435 440 445 cgt gcg atg acc aaa gac aac aac ctc ctg ggc aaa ttc cac ctg gat 1392 Arg Ala Met Thr Lys Asp Asn Asn Leu Leu Gly Lys Phe His Leu Asp 450 455 460 ggt atc ccc ccc gcc ccc cgt ggt gtc ccc caa atc gaa gtc act ttc 1440 Gly Ile Pro Pro Ala Pro Arg Gly Val Pro Gln Ile Glu Val Thr Phe 465 470 475 480 gat atc gac gct aac ggt atc atg aac gtc aca gcg caa gac aag tcc 1488 Asp Ile Asp Ala Asn Gly Ile Met Asn Val Thr Ala Gln Asp Lys Ser 485 490 495 acc gga aag agc aac caa atc acc atc acg aac gac aag ggc cgc ctc 1536 Thr Gly Lys Ser Asn Gln Ile Thr Ile Thr Asn Asp Lys Gly Arg Leu 500 505 510 agt gcg tcc gaa atc gac cgc atg gtg caa gag gca gag aag tac aaa 1584 Ser Ala Ser Glu Ile Asp Arg Met Val Gln Glu Ala Glu Lys Tyr Lys 515 520 525 gcc gaa gac gaa cag aac aag cac cgt gtg gag gcg aag aat ggc ctg 1632 Ala Glu Asp Glu Gln Asn Lys His Arg Val Glu Ala Lys Asn Gly Leu 530 535 540 gag aac tac tgc tac cac atg aga cag acc ttg gat gac gag aag ctt 1680 Glu Asn Tyr Cys Tyr His Met Arg Gln Thr Leu Asp Asp Glu Lys Leu 545 550 555 560 aag gac aag atc tcc tct gag gac aga gac act gcc aac aag gcc atc 1728 Lys Asp Lys Ile Ser Ser Glu Asp Arg Asp Thr Ala Asn Lys Ala Ile 565 570 575 cag gag gcc ctt gac tgg ctg gac aag aac caa cta gca gag aag gag 1776 Gln Glu Ala Leu Asp Trp Leu Asp Lys Asn Gln Leu Ala Glu Lys Glu 580 585 590 gaa ttc gag gcg aag cag aag gaa gtt gag tcc gtc tgc aca cca atc 1824 Glu Phe Glu Ala Lys Gln Lys Glu Val Glu Ser Val Cys Thr Pro Ile 595 600 605 atc acc aag ctg tac cag gca ggt gcg gct gca ggt ggc atg cct ggt 1872 Ile Thr Lys Leu Tyr Gln Ala Gly Ala Ala Ala Gly Gly Met Pro Gly 610 615 620 ggt atg ggc ggt atg cct ggt ggt atg ggc ggt atg cct ggt ggt atg 1920 Gly Met Gly Gly Met Pro Gly Gly Met Gly Gly Met Pro Gly Gly Met 625 630 635 640 ggc ggt atg ccc ggc ggg atg 1941 Gly Gly Met Pro Gly Gly Met 645

【００７７】 <210> 3 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 3 cgggatcctt aaccgagaga gagaggcgc 29

【００７８】 <210> 4 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <400> 4 catctcgagc tggagacagc tggtggt 27

フロントページの続き (56)参考文献 Ｅｘｐ．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ．，1992 年，75，ｐ．323−328 Ｇｅｎｅ，1996年，168，ｐ．103− 107 Ｍｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐａｒａｓ ｉｔｏｌ．，1993年，62，ｐ．187−197 Ｐａｒａｓｉｔｅ Ｉｍｍｕｎｏｌｏ ｇｙ，1995年，17（７），ｐ．353−359 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N 15/00 - 15/90 ＧｅｎＢａｎｋ／ＥＭＢＬ／ＤＤＢＪ／Ｇ ｅｎｅＳｅｑ ＳｗｉｓｓＰｒｏｔ／ＰＩＲ／ＧｅｎｅＳ ｅｑ ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)

Claims (7)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列表の配列番号１に示されるアミノ酸
   配列又は該アミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸
   残基が置換され、欠失され、挿入され及び／又は付加さ
   れたアミノ酸配列であって、トキソプラズマ・ゴンディ
   に特異的な抗原性を発揮するアミノ酸配列から成る、ト
   キソプラズマ・ゴンディ抗原と、体液中の抗トキソプラ
   ズマ・ゴンディ抗体との抗原抗体反応を利用して体液中
   の抗トキソプラズマ・ゴンディ抗体を測定する免疫測定
   方法。
2. 【請求項２】 前記トキソプラズマ・ゴンディ抗原は、
   配列表の配列番号１に示されるアミノ酸配列又はその一
   部分であってトキソプラズマ・ゴンディに特異的な抗原
   性を発揮するアミノ酸配列から成る請求項１記載の方
   法。
3. 【請求項３】 前記トキソプラズマ・ゴンディ抗原は、
   配列表の配列番号１に示されるアミノ酸配列から成る請
   求項２記載の方法。
4. 【請求項４】 配列表の配列番号１に示されるアミノ酸
   配列又は該アミノ酸配列において１又は数個のアミノ酸
   残基が置換され、欠失され、挿入され及び／又は付加さ
   れたアミノ酸配列であって、トキソプラズマ・ゴンディ
   に特異的な抗原性を発揮するアミノ酸配列から成る、ト
   キソプラズマ・ゴンディ抗原に対する抗体と、体液中の
   トキソプラズマ・ゴンディ抗原との抗原抗体反応を利用
   して体液中のトキソプラズマ・ゴンディ抗原を測定する
   免疫測定方法。
5. 【請求項５】 前記トキソプラズマ・ゴンディ抗原は、
   配列表の配列番号１に示されるアミノ酸配列又はその一
   部分であってトキソプラズマ・ゴンディに特異的な抗原
   性を発揮するアミノ酸配列から成る請求項４記載の方
   法。
6. 【請求項６】 前記トキソプラズマ・ゴンディ抗原は、
   配列表の配列番号１に示されるアミノ酸配列から成る請
   求項５記載の方法。
7. 【請求項７】 前記抗体はモノクローナル抗体である請
   求項４記載の方法。