JP3283348B2 - Substance measurement method - Google Patents
Substance measurement methodInfo
- Publication number
- JP3283348B2 JP3283348B2 JP18832993A JP18832993A JP3283348B2 JP 3283348 B2 JP3283348 B2 JP 3283348B2 JP 18832993 A JP18832993 A JP 18832993A JP 18832993 A JP18832993 A JP 18832993A JP 3283348 B2 JP3283348 B2 JP 3283348B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- oxidase
- substance
- compound
- acid
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、臨床診断に有用な、オ
キシダーゼ等の酵素反応系を利用し生成する過酸化水素
の定量を手段とする、物質の測定法に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for measuring a substance, which is useful for clinical diagnosis, by quantifying hydrogen peroxide generated by using an enzyme reaction system such as oxidase.
【0002】[0002]
【従来の技術】従来、酵素を使用した物質の測定には、
測定するための酵素の他、正確な測定値を得るために、
検体中の妨害物を消去したり妨害物の影響を回避する目
的で、種々の界面活性剤、酵素、添加物等が使用されて
いる。例えば、検体中のアスコルビン酸は、被測定物よ
り酸化酵素によって発生する過酸化水素を還元消費し、
過酸化水素を色素に導いて測定する方法では測定値を低
下させてしまう。検体中のビリルビンも同様な過酸化水
素の妨害物としてあげられており(臨床化学、8巻、1
号、63−72頁)、その対策として、特開昭64−5
499号公報記載の酵素を用いる方法、クリニカルケミ
ストリー、26巻、2号、227−231頁(1980
年)記載の鉄シアノ化合物を用いる方法、特公昭58−
22200号公報記載の鉄キレート剤を用いる方法、特
開平3−119997号公報記載のベルリン酸あるいは
フェロセンを用いる方法等が知られている。2. Description of the Related Art Conventionally, in the measurement of a substance using an enzyme,
In addition to the enzyme for measurement, to obtain accurate measurement values,
Various surfactants, enzymes, additives, and the like have been used for the purpose of eliminating interfering substances in a sample and avoiding the influence of the interfering substances. For example, ascorbic acid in a sample reduces and consumes hydrogen peroxide generated by an oxidase from an analyte,
The method in which hydrogen peroxide is introduced into a dye to measure the value decreases the measured value. Bilirubin in specimens has also been cited as a similar hydrogen peroxide interfering substance (Clinical Chemistry, Vol. 8, 1).
No., pp. 63-72).
No. 499, enzymatic method, Clinical Chemistry, 26, 2, 227-231 (1980).
Year) using the iron cyano compound described in
A method using an iron chelating agent described in No. 22200 and a method using bernic acid or ferrocene described in JP-A-3-119997 are known.
【0003】[0003]
【発明が解決しようとする課題】上記方法によりビリル
ビンの影響はかなり軽減されるが、含量の少ない被測定
物の場合は、やはりビリルビンの影響が大きな意味を持
ってくる。例えば、被測定物の含量が数mMのときにビ
リルビンの影響が仮に5%程度の影響であった場合、被
測定物の含量がその10分の1のときには、発生する過
酸化水素が10分の1であるのでその影響はおおよそ1
0倍の数10%程度となり、無視できない状態となる。Although the effect of bilirubin is considerably reduced by the above method, the effect of bilirubin also has a great significance in the case of an analyte having a low content. For example, if the effect of bilirubin is about 5% when the content of the test object is several mM, and if the content of the test object is 1/10 of that, the amount of hydrogen peroxide generated is 10 minutes. The effect is roughly 1
It becomes several tens% of 0 times, and cannot be ignored.
【0004】低含量の物質の測定において、ビリルビン
の影響をより軽減した方法が望まれている。[0004] In the measurement of low-content substances, there is a demand for a method in which the influence of bilirubin is further reduced.
【0005】[0005]
【課題を解決するための手段】本発明は、検体中の物質
を、酵素反応を利用して化学量論量の過酸化水素に導
き、これをパーオキシダーゼの存在下色素源と反応さ
せ、呈色した反応液の可視部における吸収を測定するこ
とにより比色定量する方法において、一般式(I)According to the present invention, a substance in a sample is led to a stoichiometric amount of hydrogen peroxide by utilizing an enzymatic reaction, and this is reacted with a chromogen in the presence of peroxidase to give a substance. In a method for colorimetric quantification by measuring the absorption in the visible part of a colored reaction solution, the general formula (I)
【0006】[0006]
【化2】 Embedded image
【0007】{式中、R1およびR2は同一または異なっ
て、水素または置換もしくは非置換の低級アルキルを表
し、R3は水素を表すか、あるいはR3とR1とが一緒に
なって−R3−R1−として−NH−(CH2)n−(式
中、nは2〜4の整数を表す)を表し、R4は単結合ま
たはアルキレンを表し、R5はO-またはR6−X-(式
中、R6は置換もしくは非置換のアルキレンを表し、X
はCOO、SO2OまたはOPO2Oを表す)を表し、Y
は水素、ポリオキシエチレンまたはR7−NH−(式
中、R7は置換数1〜3のヒドロキシで置換されていて
もよいコラノイル基を表す)を表す}で表される化合物
を存在させることを特徴とする物質の測定法に関する。In the formula, R 1 and R 2 are the same or different and each represents hydrogen or substituted or unsubstituted lower alkyl, and R 3 represents hydrogen or R 3 and R 1 are taken together. -R 3 -R 1 - as -NH- (CH 2) n - represents (wherein, n represents an integer of 2 to 4), R 4 represents a single bond or an alkylene, R 5 is O - or R 6 -X - (wherein, R 6 represents a substituted or unsubstituted alkylene, X
Represents COO, SO 2 O or OPO 2 O);
Represents hydrogen, polyoxyethylene or a compound represented by (representing R 7 —NH— (wherein R 7 represents a cholanoyl group which may be substituted by hydroxy having 1 to 3 substituents). And a method for measuring a substance characterized by the following.
【0008】以下、式(I)で表される化合物を化合物
(I)という。式(I)の各基の定義において、低級ア
ルキルとしては、直鎖または分枝状の炭素数1〜7の、
例えば、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブ
チル、イソブチル、sec-ブチル、tert- ブチル、ペンチ
ル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、ヘプチル
等があげられ、アルキレンとしては、直鎖または分枝状
の炭素数1〜20の、例えば、メチレン、エチレン、プ
ロピレン、1−メチルエチレン、ブチレン、オクチレ
ン、ノニレン、デシレン、ウンデシレン、ドデシレン、
トリデシレン、ノナデシレン、エイコシレン等があげら
れ、ポリオキシエチレンとしては、重合度1〜500の
ポリオキシエチレンがあげられる。Hereinafter, the compound represented by the formula (I) is referred to as compound (I). In the definition of each group of the formula (I), the lower alkyl includes a straight-chain or branched C1-C7 group,
For example, methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, sec-butyl, tert-butyl, pentyl, isopentyl, neopentyl, hexyl, heptyl and the like are mentioned. As the alkylene, a straight-chain or branched carbon atom having 1 carbon atom -20, for example, methylene, ethylene, propylene, 1-methylethylene, butylene, octylene, nonylene, decylene, undecylene, dodecylene,
Examples include tridecylene, nonadecylene, eicosylene, and the like, and examples of polyoxyethylene include polyoxyethylene having a degree of polymerization of 1 to 500.
【0009】置換低級アルキルおよび置換アルキレンの
置換基としては、同一または異なって、置換数1〜3
の、例えば、ヒドロキシ、低級アルコキシ、アミノ、ハ
ロゲン等があげられる。置換基の定義において、低級ア
ルコキシの低級アルキル部分は、前記低級アルキルと同
意義を表し、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素
の各原子を意味する。コラノイル基上のヒドロキシの置
換位置としては、3位、7位、12位等があげられる。The substituents of the substituted lower alkyl and the substituted alkylene may be the same or different and each have 1 to 3 substituents.
For example, hydroxy, lower alkoxy, amino, halogen and the like. In the definition of the substituent, the lower alkyl moiety of the lower alkoxy has the same meaning as the lower alkyl, and the halogen means each atom of fluorine, chlorine, bromine and iodine. Examples of the hydroxy substitution position on the cholanoyl group include the 3-, 7-, and 12-positions.
【0010】本発明の系が適用される生体成分中の被測
定物質と測定に使用される酵素類としては、尿酸(ウリ
カーゼ、パーオキシダーゼ)、クレアチニン(クレアチ
ニナーゼ、クレアチナーゼ、ザルコシンオキシダーゼ、
パーオキシダーゼ)、コレステロール(コレステロール
オキシダーゼ、パーオキシダーゼ)、トリグリセライド
(リポプロテインリパーゼ、グリセロールキナーゼ、グ
リセロール−3−リン酸オキシダーゼ、パーオキシダー
ゼ)、ポリアミン(ポリアミンアミドヒドロラーゼ、ポ
リアミンオキシダーゼ、プトレスシンオキシダーゼ、パ
ーオキシダーゼ)、胆汁酸(3−α−ヒドロキシステロ
イドデヒドロゲナーゼ、ジアホラーゼ、パーオキシダー
ゼ)、1,5−アンヒドログルシトール(1,5−アン
ヒドログルシトールオキシダーゼ、ピラノースオキシダ
ーゼ、パーオキシダーゼ)、ピルビン酸(ピルビン酸オ
キシダーゼ、パーオキシダーゼ)、乳酸(乳酸オキシダ
ーゼ、パーオキシダーゼ)、リン脂質(ホスホリパーゼ
D、コリンオキシダーゼ、パーオキシダーゼ)、尿素
(ウレアアミドリアーゼ、ピルベートキナーゼ、ピルビ
ン酸オキシダーゼ、パーオキシダーゼ)等があげられ
る。The substances to be measured in biological components to which the system of the present invention is applied and the enzymes used for measurement include uric acid (uricase, peroxidase), creatinine (creatininase, creatinase, sarcosine oxidase,
Peroxidase), cholesterol (cholesterol oxidase, peroxidase), triglyceride (lipoprotein lipase, glycerol kinase, glycerol-3-phosphate oxidase, peroxidase), polyamine (polyamine amide hydrolase, polyamine oxidase, putrescine oxidase, peroxidase) ), Bile acids (3-α-hydroxysteroid dehydrogenase, diaphorase, peroxidase), 1,5-anhydroglucitol (1,5-anhydroglucitol oxidase, pyranose oxidase, peroxidase), pyruvate ( Pyruvate oxidase, peroxidase), lactic acid (lactate oxidase, peroxidase), phospholipid (phospholipase D, cholineoxy) Over Ze, peroxidase), urea (urea amide lyase, pyruvate kinase, pyruvate oxidase, peroxidase), and the like.
【0011】また、本発明は、酵素活性を測定する系、
例えば、N−アセチルグルコサミナーゼ(N−アセチル
グルコサミンオキシダーゼ、パーオキシダーゼ)、モノ
アミンオキシダーゼ(パーオキシダーゼ)等の活性を測
定する系、あるいは、酵素活性を測定することにより検
体中の電解質の量を測定する系、例えば、カルシウム
(ホスホリパーゼD、コリンオキシダーゼ、パーオキシ
ダーゼ)、マグネシウム(グリセロールキナーゼ、グリ
セロール−3−リン酸オキシダーゼ、パーオキシダー
ゼ)、カリウム(ピルベートキナーゼ、ピルビン酸オキ
シダーゼ、パーオキシダーゼ)等の量を測定する系にも
応用できる。これらの系に使用するパーオキシダーゼの
使用量としては、1〜100ku/lが好適である。[0011] The present invention also provides a system for measuring enzyme activity,
For example, a system for measuring the activity of N-acetylglucosamine (N-acetylglucosamine oxidase, peroxidase), monoamine oxidase (peroxidase), or the like, or the amount of electrolyte in a sample is measured by measuring the enzyme activity. Systems (eg, calcium (phospholipase D, choline oxidase, peroxidase), magnesium (glycerol kinase, glycerol-3-phosphate oxidase, peroxidase), potassium (pyruvate kinase, pyruvate oxidase, peroxidase), etc. It can also be applied to systems that measure The amount of peroxidase used in these systems is preferably from 1 to 100 ku / l.
【0012】色素源としては、4−アミノアンチピリン
とトリンダー試薬のカップリング色素系が使用される。
トリンダー試薬としては、N−エチル−N−スルホプロ
ピル−m−アニシジン、N−エチル−N−スルホプロピ
ルアニリン、N−エチル−N−スルホプロピル−3,5
−ジメトキシアニリン、N−スルホプロピル−3,5−
ジメトキシアニリン、N−エチル−N−スルホプロピル
−3,5−ジメチルアニリン、N−エチル−N−スルホ
プロピル−m−トルイジン、N−エチル−N−(2−ヒ
ドロキシ−3−スルホプロピル)−m−アニシジン、N
−エチル−N−(2−ヒドロキシ−3−スルホプロピ
ル)アニリン、N−エチル−N−(2−ヒドロキシ−3
−スルホプロピル)−3,5−ジメトキシアニリン、N
−(2−ヒドロキシ−3−スルホプロピル)−3,5−
ジメトキシアニリン、N−エチル−N−(2−ヒドロキ
シ−3−スルホプロピル)−3,5−ジメチルアニリ
ン、N−エチル−N−(2−ヒドロキシ−3−スルホプ
ロピル)−m−トルイジン、N−スルホプロピルアニリ
ン、3−ヒドロキシ−2,4,6−トリヨード安息香
酸、フェノール等があげられる。As a dye source, a coupling dye system of 4-aminoantipyrine and a Trinder reagent is used.
Examples of the Trinder reagent include N-ethyl-N-sulfopropyl-m-anisidine, N-ethyl-N-sulfopropylaniline, N-ethyl-N-sulfopropyl-3,5.
-Dimethoxyaniline, N-sulfopropyl-3,5-
Dimethoxyaniline, N-ethyl-N-sulfopropyl-3,5-dimethylaniline, N-ethyl-N-sulfopropyl-m-toluidine, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m -Anisidine, N
-Ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) aniline, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3
-Sulfopropyl) -3,5-dimethoxyaniline, N
-(2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-
Dimethoxyaniline, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -3,5-dimethylaniline, N-ethyl-N- (2-hydroxy-3-sulfopropyl) -m-toluidine, N- Sulfopropylaniline, 3-hydroxy-2,4,6-triiodobenzoic acid, phenol and the like.
【0013】化合物(I)は、市販品であるかまたは下
記製造法により得ることができる。化合物(I)におい
て、R5 がR6 −X- (式中、R6 およびXは前記と同
意義を表す)である化合物(Ia)は、次の反応工程に
より得られる。Compound (I) is commercially available or can be obtained by the following production method. In the compound (I), the compound (Ia) in which R 5 is R 6 —X − (wherein R 6 and X have the same meanings as described above) is obtained by the following reaction step.
【0014】[0014]
【化3】 Embedded image
【0015】[式中、R5aはR5 の定義中のR6 −X-
(式中、R6 およびXは前記と同意義を表す)を表し、
R8 はハロゲンを表し、R9 は水素またはアルカリ金属
を表すか、R8 とR9 が一緒になって単結合を表し、R
1 、R2 、R3 、R4 、R6 、XおよびYは前記と同意
義を表す]R9 の定義におけるアルカリ金属は、リチウ
ム、ナトリウム、カリウム等を表し、R8 の定義におけ
るハロゲンは前記と同義である。[0015] In the formulas, R 5a is R 6 in the definition of R 5 -X -
(Wherein, R 6 and X have the same meanings as described above),
R 8 represents halogen, R 9 represents hydrogen or an alkali metal, or R 8 and R 9 together represent a single bond;
1 , R 2 , R 3 , R 4 , R 6 , X and Y have the same meanings as described above.] The alkali metal in the definition of R 9 represents lithium, sodium, potassium or the like, and the halogen in the definition of R 8 is It is the same as the above.
【0016】化合物(Ia)は、アミン(II)の酸付加
塩を、塩基の存在下、水と有機溶媒との2相系中でフリ
ー体とした後、もしくはフリー体のアミン(II)を直
接、化合物(III )と、有機溶媒中、必要により塩基の
存在下反応させることにより得ることができる。アミン
(II)の酸付加塩の酸としては、塩酸、臭化水素酸等の
無機酸、フマル酸、マレイン酸等の有機酸があげられ、
酸付加塩をフリー体とするための塩基としては、水酸化
ナトリウム、水酸化カリウム等の水酸化アルカリ金属、
炭酸ナトリウム、炭酸カリウム等の炭酸アルカリ金属、
水酸化カルシウム等の水酸化アルカリ土類金属等があげ
られる。有機溶媒としては、塩化メチレン、クロロホル
ム、二塩化エタン等のハロゲン化炭化水素類、ジエチル
エーテル、ジイソプロピルエーテル等のエーテル類、ト
ルエン、キシレン等の芳香族炭化水素類等が用いられ
る。Compound (Ia) is prepared by converting the acid addition salt of amine (II) into a free form in a two-phase system of water and an organic solvent in the presence of a base, or by converting the free form of amine (II) It can be obtained by directly reacting compound (III) with an organic solvent in the presence of a base, if necessary. Examples of the acid of the acid addition salt of the amine (II) include inorganic acids such as hydrochloric acid and hydrobromic acid, and organic acids such as fumaric acid and maleic acid.
Examples of the base for converting the acid addition salt into a free form include sodium hydroxide, alkali metal hydroxides such as potassium hydroxide, and the like.
Alkali metal carbonates such as sodium carbonate and potassium carbonate,
And alkaline earth metal hydroxides such as calcium hydroxide. As the organic solvent, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride, chloroform and ethane dichloride, ethers such as diethyl ether and diisopropyl ether, and aromatic hydrocarbons such as toluene and xylene are used.
【0017】化合物(III )との反応において用いられ
る有機溶媒および塩基としては、上記と同様のものがあ
げられる。反応は、0℃から用いた溶媒の沸点で、30
秒〜10時間で終了する。上述した製造法における目的
化合物は、有機合成化学で常用される精製法、例えば、
濾過、抽出、洗浄、乾燥、濃縮、再結晶、各種クロマト
グラフィー等に付して単離精製することができる。As the organic solvent and the base used in the reaction with the compound (III), those similar to the above can be mentioned. The reaction is carried out from 0 ° C. to the boiling point of the solvent used, 30
Finish in seconds to 10 hours. The target compound in the above-mentioned production method is a purification method commonly used in organic synthetic chemistry, for example,
It can be isolated and purified by filtration, extraction, washing, drying, concentration, recrystallization, various types of chromatography and the like.
【0018】化合物(I)の具体例を第1表に示す。Table 1 shows specific examples of the compound (I).
【0019】[0019]
【表1】 [Table 1]
【0020】[0020]
【表2】 [Table 2]
【0021】[0021]
【表3】 [Table 3]
【0022】次に、本発明の測定法について説明する。
本発明を実施するに際しては、一般に、pH2〜11、
好ましくは4〜10の緩衝剤、例えば、リン酸、トリス
−塩酸、グッド緩衝剤等の5〜500M溶液中に化合物
(I)を0.1〜100mM、好ましくは1〜50mM
含有させ、これに1〜100ku/lのパーオキシダー
ゼおよび4−アミノアンチピリン/トリンダー試薬等の
色素源を加え、さらに0.1〜100ku/lのウリカ
ーゼ等の酸化酵素を加えて試験液とする。この溶液に検
体を加え、30〜45℃、好ましくは37℃で1〜30
分間加温し反応させる。反応後、生成色素の極大吸収波
長(500〜800nmの範囲)で吸光度を測定し、標
準液の吸光度と比較することにより検体の濃度を算出す
る。Next, the measuring method of the present invention will be described.
In practicing the present invention, generally, pH 2 to 11,
Preferably, compound (I) is 0.1 to 100 mM, preferably 1 to 50 mM in a 5 to 500 M solution of 4 to 10 buffers such as phosphoric acid, Tris-HCl, Good buffer and the like.
Then, 1 to 100 ku / l of a peroxidase and a dye source such as 4-aminoantipyrine / Trinder reagent are added thereto, and 0.1 to 100 ku / l of an oxidase such as uricase is further added to prepare a test solution. A sample is added to this solution, and 30 to 45 ° C, preferably 1 to 30 at 37 ° C.
Warm for a minute to react. After the reaction, the absorbance is measured at the maximum absorption wavelength (in the range of 500 to 800 nm) of the produced dye, and the concentration of the sample is calculated by comparing the absorbance with the standard solution.
【0023】化合物(I)は、同一分子上に、四級アミ
ンの様にカチオンに荷電する基およびカルボキシル、ス
ルホ、リン酸基等の様にアニオンに荷電する基を有し、
化合物(I)の中には界面活性効果を有するものもあ
る。その場合は、検体中の濁りの成分を測定試薬中で可
溶化させるために他の界面活性剤を使用しない場合もあ
るが、界面活性剤を使用して可溶化することも構わな
い。界面活性剤としては、一般に可溶化に用いられるノ
ニオン、アニオンまたはカチオンの界面活性剤があげら
れる。また、通常酵素反応に用いられる緩衝液あるいは
安定化剤等も効果に関係がなく、使用しても構わない。
緩衝剤の濃度としては、10〜400mMがあげられ
る。また、従来ビリルビンの影響等を軽減するために使
用されてきた、フェロシアン化カリウム、フェロシアン
化ナトリウム、ベルリン酸塩、フェロセン化合物、ビリ
ルビンオキシダーゼ等を併用するとより良い結果を与え
る場合もあり、これらの併用も構わない。フェロシアン
化カリウム、フェロシアン化ナトリウム、ベルリン酸
塩、フェロセン化合物の濃度としては、従来これらを単
独で使用していた場合より低濃度である0.0001〜
0.1mg/mlがあげられる。Compound (I) has, on the same molecule, a group which is charged to a cation such as a quaternary amine and a group which is charged to an anion such as a carboxyl, sulfo or phosphate group.
Some compounds (I) have a surfactant effect. In such a case, other surfactants may not be used in order to solubilize the turbid components in the sample in the measurement reagent, but the solubilization may be performed using a surfactant. Examples of the surfactant include nonionic, anionic and cationic surfactants generally used for solubilization. In addition, a buffer or a stabilizer usually used for an enzyme reaction has no relation to the effect, and may be used.
Examples of the concentration of the buffer include 10 to 400 mM. Also it has been used to alleviate the prior art bilirubin influence, potassium ferrocyanide, ferrocyanide
In some cases, a combination of sodium chloride , berlinate, a ferrocene compound, and bilirubin oxidase may give better results, and these combinations may be used. Ferrocyan
Potassium chloride , sodium ferrocyanide, berylate, and the concentration of the ferrocene compound are 0.0001 to less than those conventionally used alone.
0.1 mg / ml.
【0024】また、試薬を2部に分けて反応を2段階と
し測定する方法、例えば、第1反応で検体中のアスコル
ビン酸や濁り等を消去あるいは可溶化し、第2反応で目
的物の酸化酵素を加えて呈色反応させる方法において
は、本発明に使用される化合物(I)は目的物の酸化酵
素による呈色反応時に系内に存在すれば良く、第1、第
2試薬のいずれに含まれていても効果を発揮するが、通
常は、第1試薬に含有されている方が効果的である。A method of measuring the reaction in two steps by dividing the reagent into two parts, for example, eliminating or solubilizing ascorbic acid or turbidity in the sample in the first reaction, and oxidizing the target substance in the second reaction In the method of performing a color reaction by adding an enzyme, the compound (I) used in the present invention only needs to be present in the system at the time of the color reaction by the oxidase of the target substance. Although the effect is exhibited even if it is contained, it is usually more effective to contain it in the first reagent.
【0025】次に、実施例および参考例によって本発明
の態様を説明する。Next, embodiments of the present invention will be described with reference to Examples and Reference Examples.
【0026】[0026]
【実施例】実施例1 尿酸の測定 (試薬1):下記物質を含有するpH=7の溶液 (試薬1’):試薬1に同仁化学研究所製CHAPS
(化合物1)を4g/l添加し、pH=7としたもの (試薬2):下記物質を含有するpH=7の溶液 Example 1 Measurement of uric acid (Reagent 1): pH = 7 solution containing the following substances (Reagent 1 '): CHAPS manufactured by Dojin Chemical Research Lab.
(Compound 1) added to 4 g / l to make pH = 7 (Reagent 2): pH = 7 solution containing the following substances
【0027】試験管を6本準備し、3本に試薬1を2.
25mlずつ入れとし、残り3本に試薬1’を
2.25mlずつ入れてと名づけた。まず、
にブランクとしてそれぞれ精製水0.05mlを添加、
にそれぞれ尿酸の10mg/dl標準液を0.05
ml添加、にそれぞれ尿酸の10mg/dl標準液
にビリルビンを100mg/dl溶解した液を0.05
ml添加攪拌し、さらに全ての試験管に試薬2を0.7
5ml加えてよく攪拌し、37℃の恒温槽中で加温し
た。10分後にそれぞれの溶液の555nmにおける吸
光度を測定したところ、0.036、0.204、
0.192、0.034、0.203、0.2
02であった。ビリルビンの影響度を示す指標として、
ビリルビンが添加された場合に得られる吸光度と添加さ
れてない標準液の吸光度を比較した。試薬1はCHAP
Sが無い例で(−)/(−)は0.92であ
り、CHAPSを含む試薬1’では(−)/(−
)は0.99であった(1に近い程ビリルビンの影響
は少ないことを示す)。CHAPSを含んだ系では影響
が軽減されていた。Six test tubes were prepared, and three were filled with reagent 1.
25 ml each, and the remaining three tubes were named 2.25 ml each containing reagent 1 '. First,
0.05 ml of purified water was added to each as a blank,
10 mg / dl standard solution of uric acid to 0.05
ml addition, the liquid was each dissolved 100 mg / dl of bilirubin to 10 mg / dl standard solution of uric acid in 0.05
ml and stirred.
5 ml was added, the mixture was stirred well, and heated in a thermostat at 37 ° C. After 10 minutes, the absorbance at 555 nm of each solution was measured to be 0.036, 0.204,
0.192, 0.034, 0.203, 0.2
02. As an index indicating the degree of influence of bilirubin,
The absorbance obtained when bilirubin was added was compared with the absorbance of a standard solution not added. Reagent 1 is CHAP
In the example without S, (−) / (−) is 0.92, and in the reagent 1 ′ containing CHAPS, (−) / (−)
) Was 0.99 (closer to 1 indicates less effect of bilirubin). The effect was reduced in the system containing CHAPS.
【0028】実施例2 尿酸の測定 尿酸標準液の濃度を2mg/dl、4mg/dl、6m
g/dlおよび8mg/dlに変化させて実施例1と同
様に操作し、図1に示す検量線を作製した。Example 2 Measurement of Uric Acid The concentration of the uric acid standard solution was 2 mg / dl, 4 mg / dl, 6 m
The operation was performed in the same manner as in Example 1 except that the values were changed to g / dl and 8 mg / dl, and a calibration curve shown in FIG. 1 was prepared.
【0029】実施例3 クレアチニンの測定 (試薬1):下記物質を含有するpH=7.7の溶液 ピペラジン-1,4- ビス(2- エタンスルホン酸) 7.6g/l N-エチル-N-(3-メチルフェニル)- N'- サクシニルエチレンジアミン 0.2g/l カタラーゼ 300ku/l アスコルビン酸オキシダーゼ 3ku/l クレアチナーゼ 80ku/l ザルコシンオキシダーゼ 20ku/l アントヒール24B(化合物18) 0.3 % (試薬2):下記物質を含有するpH=7.7の溶液 ピペラジン-1,4- ビス(2- エタンスルホン酸) 7.6g/l クレアチニナーゼ 300ku/l パーオキシダーゼ 10ku/l 4−アミノアンチピリン 0.35g/l アジ化ナトリウム 0.1g/l フェロセンカルボン酸 0.05g/lExample 3 Determination of creatinine (Reagent 1): A solution of the following substance having a pH of 7.7: piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) 7.6 g / l N-ethyl-N -(3-methylphenyl) -N'-succinylethylenediamine 0.2 g / l catalase 300 ku / l ascorbate oxidase 3 ku / l creatinase 80 ku / l sarcosine oxidase 20 ku / l antheel 24B (compound 18) 0.3% ( Reagent 2): solution containing the following substances at pH = 7.7: piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) 7.6 g / l creatininase 300 ku / l peroxidase 10 ku / l 4-aminoantipyrine 0.35 g / l sodium azide 0.1 g / l ferrocenecarboxylic acid 0.05 g / l
【0030】試験管4本に試薬1を2.25mlずつ入
れ、これに、ブランクとして精製水0.05ml、
クレアチニンの5mg/dlの標準液を0.05ml、
3.5mg/dlのクレアチニンを含む血清を0.0
5ml、の血清にビリルビンを20mg/dlの濃
度で添加した検体を0.05ml添加して一旦攪拌し、
さらに試薬2を0.75ml加えてよく攪拌後、37℃
で10分間加温した。555nmにおける吸光度を測定
したところ、0.021、0.144、0.10
6、0.106であった。より血清中のクレア
チニンは3.46と計算され、またビリルビンの影響の
指標は1.0と計算され、影響がなかった。In four test tubes, 2.25 ml of Reagent 1 was placed, and 0.05 ml of purified water was placed as a blank.
0.05 ml of a 5 mg / dl standard solution of creatinine,
Serum containing 3.5 mg / dl creatinine was added to 0.0
0.05 ml of a sample obtained by adding bilirubin at a concentration of 20 mg / dl to 5 ml of serum was added, and the mixture was stirred once,
Further, 0.75 ml of reagent 2 was added, and the mixture was stirred well.
For 10 minutes. When the absorbance at 555 nm was measured, 0.021, 0.144, 0.10
6, 0.106. The serum creatinine was calculated to be 3.46, and the index of the effect of bilirubin was calculated to be 1.0, indicating no effect.
【0031】実施例4 フリーコレステロールの測定 (試薬1):下記物質を含有するpH=7の溶液 ピペラジン-1,4- ビス(2- エタンスルホン酸) 7.6g/l N-エチル-N-(3-メチルフェニル)- N'- サクシニルエチレンジアミン 0.3g/l トリトン X−100 3g/l パーオキシダーゼ 5ku/l アスコルビン酸オキシダーゼ 1ku/l ベタインハイドロクロライド (化合物3・塩酸塩) 5g/l (試薬2):下記物質を含有するpH=7の溶液 ピペラジン-1,4- ビス(2- エタンスルホン酸) 7.6g/l トリトン X−100 3g/l 4−アミノアンチピリン 0.5g/l パーオキシダーゼ 5ku/l ベルリン酸 0.05g/l コレステロールオキシダーゼ 3ku/lExample 4 Measurement of Free Cholesterol (Reagent 1): A solution containing the following substances at pH = 7: piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) 7.6 g / l N-ethyl-N- (3-methylphenyl) -N'-succinylethylenediamine 0.3 g / l Triton X-100 3 g / l peroxidase 5 ku / l ascorbate oxidase 1 ku / l betaine hydrochloride (compound 3 hydrochloride) 5 g / l (reagent 2): Solution of pH = 7 containing the following substances: piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) 7.6 g / l Triton X-100 3 g / l 4-aminoantipyrine 0.5 g / l peroxidase 5 ku / l berulinic acid 0.05 g / l cholesterol oxidase 3 ku / l
【0032】試験管4本に試薬1を2.25mlずつ入
れ、これに、ブランクとして精製水0.20ml、
コレステロールの100mg/dlの標準液を0.02
ml、20mg/dlのコレステロールを含む血清を
0.02ml、の血清にビリルビンを20mg/d
lの濃度で添加した検体を0.02ml添加して一旦攪
拌し、さらに試薬2を0.75ml加えてよく攪拌後、
37℃で10分間加温した。555nmにおける吸光度
を測定したところ、0.010、0.320、
0.072、0.072であり、ビリルビンの影響の
指標は1.0と計算された。ベタインハイドロクロライ
ドを添加しない場合の相当する値は0.015、
0.329、0.077、0.068で、ビリルビ
ン影響指標が0.85であり、かなりのビリルビン影響
回避ができた。Into four test tubes, 2.25 ml of Reagent 1 was added, and 0.20 ml of purified water was added as a blank.
0.02 standard solution of cholesterol at 100 mg / dl
ml, 0.02 ml of serum containing 20 mg / dl cholesterol, and 20 mg / d of bilirubin in serum.
After adding 0.02 ml of the sample added at a concentration of 1 l and stirring once, further adding 0.75 ml of reagent 2 and stirring well,
Heated at 37 ° C. for 10 minutes. When the absorbance at 555 nm was measured, 0.010, 0.320,
0.072, 0.072, and the index of the effect of bilirubin was calculated to be 1.0. The corresponding value without the addition of betaine hydrochloride is 0.015,
The bilirubin influence index was 0.85 at 0.329, 0.077, and 0.068, and the bilirubin influence was considerably avoided.
【0033】実施例5 クレアチニンの測定(自動分
析機) (試薬1):下記物質を含有するpH=7.7の溶液 ピペラジン-1,4- ビス(2- エタンスルホン酸) 7.6g/l Triton X−100 1g/l N-エチル-N-(3-メチルフェニル)- N'- サクシニルエチレンジアミン 0.2g/l カタラーゼ 300ku/l アスコルビン酸オキシダーゼ 3ku/l クレアチナーゼ 80ku/l ザルコシンオキシダーゼ 18ku/l CHAPS(化合物1) 表示量 (試薬2):下記物質を含有するpH=7.7の溶液 ピペラジン-1,4- ビス(2- エタンスルホン酸) 7.6g/l Triton X−100 1g/l クレアチニナーゼ 310ku/l パーオキシダーゼ 30ku/l 4−アミノアンチピリン 0.5g/l アジ化ナトリウム 0.1g/l フェロシアン化カリウム 0.02g/lExample 5 Determination of creatinine (automatic analyzer) (Reagent 1): A solution of the following substance having a pH of 7.7: piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) 7.6 g / l Triton X-100 1g / l N-ethyl-N- (3-methylphenyl) -N'-succinylethylenediamine 0.2g / l catalase 300ku / l ascorbate oxidase 3ku / l creatinase 80ku / l sarcosine oxidase 18ku / l CHAPS (compound 1) Labeled amount (reagent 2): pH = 7.7 solution containing the following substances: piperazine-1,4-bis (2-ethanesulfonic acid) 7.6 g / l Triton X-100 1 g / l Creatininase 310 ku / l peroxidase 30 ku / l 4-aminoantipyrine 0.5 g / l sodium azide 0.1 g / l Eroshian potassium of 0.02g / l
【0034】CHAPSの添加量は0,1,2,3,
4,5g/lとし、上記試薬を調製し自動分析機でビリ
ルビン40mg/dlの影響を見た。 自動分析機パラメータ(日立7150型) 測定方法 2ポイント 24−50 測定主波長 546nm 測定副波長 700nm サンプルボリューム 5μlThe amount of CHAPS added is 0, 1, 2, 3,
The reagent was prepared at 4.5 g / l, and the effect of bilirubin 40 mg / dl was observed with an automatic analyzer. Automatic analyzer parameters (Hitachi 7150 type) Measurement method 2 points 24-50 Measurement main wavelength 546nm Measurement auxiliary wavelength 700nm Sample volume 5μl
【0035】サンプルの調製 ビリルビン無添加血清: ネスコールX,2mlに生理
食塩水0.5mlを加えた。 ビリルビン40mg/dl添加血清: ネスコールX,
2mlに200mg/dlのビリルビン0.5mlを加
えた。 Preparation of Sample Serum without Bilirubin: Nescol X (2 ml) was supplemented with 0.5 ml of physiological saline. Serum supplemented with bilirubin 40 mg / dl: Nescol X,
0.5 ml of 200 mg / dl bilirubin was added to 2 ml.
【0036】結果を第2表に示す。The results are shown in Table 2.
【0037】[0037]
【表4】 [Table 4]
【0038】実施例6 尿酸の測定(自動分析機)
(試薬1):下記物質を含有するpH=7の溶液 (試薬2):下記物質を含有するpH=7の溶液ピペラ
ジン-1,4- Example 6 Measurement of uric acid (automatic analyzer)
(Reagent 1): pH = 7 solution containing the following substances (Reagent 2): Solution of pH = 7 containing the following substance piperazine-1,4-
【0039】上記試薬にアンヒトール20BS(化合物
17)、アンヒトール24B(化合物18)、アンヒト
ール20N(化合物20)、アンヒトール20Y(化合
物21)、CHAPS(化合物1)およびベタインハイ
ドロクロライド(化合物3・塩酸塩)を表示量添加し、
自動分析機でビリルビン40mg/dlの影響を見た。The above reagents include Amphitol 20BS (Compound 17), Amphitol 24B (Compound 18), Amphitol 20N (Compound 20), Amphitol 20Y (Compound 21), CHAPS (Compound 1), and betaine hydrochloride (Compound 3 hydrochloride). Is added in the indicated amount,
The effect of bilirubin 40 mg / dl was observed with an automatic analyzer.
【0040】自動分析機パラメータ(日立7150型) 測定方法 2ポイント 24−50 測定主波長 546nm 測定副波長 700nm サンプルボリューム 5μlAutomatic analyzer parameters (Hitachi 7150 type) Measurement method 2 points 24-50 Measurement main wavelength 546 nm Measurement auxiliary wavelength 700 nm Sample volume 5 μl
【0041】サンプルの調製 ビリルビン無添加血清: ネスコールX,2mlに生理
食塩水0.5mlを加えた。 ビリルビン40mg/dl添加血清: ネスコールX,
2mlに200mg/dlのビリルビン0.5mlを加
えた。 Preparation of Sample Serum without Bilirubin: Nescol X (2 ml) was supplemented with 0.5 ml of physiological saline. Serum supplemented with bilirubin 40 mg / dl: Nescol X,
0.5 ml of 200 mg / dl bilirubin was added to 2 ml.
【0042】結果を第3表に示す。The results are shown in Table 3.
【0043】[0043]
【表5】 [Table 5]
【0044】参考例1:化合物4 トリメチルアミン塩酸塩9.5gを水100mlに溶解
し、これにクロロホルム150mlを加え、さらに12
N水酸化ナトリウム20mlを滴下した。激しく攪拌し
てクロロホルム層にトリメチルアミンを遊離させ、クロ
ロホルム層を分離した。このクロロホルム層50mlに
β−プロピオラクトン3.6mlを添加し、40℃で反
応させた。生成する結晶を濾取し、真空乾燥することに
より、化合物3,5.2g(収率79.4%)を得た。 Rf=0.25(クロロホルム/メタノール/酢酸=6
0/40/2)Reference Example 1: Compound 4 9.5 g of trimethylamine hydrochloride was dissolved in 100 ml of water, and 150 ml of chloroform was added thereto.
20 ml of N sodium hydroxide was added dropwise. The mixture was vigorously stirred to release trimethylamine from the chloroform layer, and the chloroform layer was separated. 3.6 ml of β-propiolactone was added to 50 ml of the chloroform layer and reacted at 40 ° C. The resulting crystals were collected by filtration and dried in vacuo to give 3,5.2 g of compound (yield 79.4%). Rf = 0.25 (chloroform / methanol / acetic acid = 6
0/40/2)
【0045】参考例2:化合物5 トリメチルアミン塩酸塩の代わりにジメチルアミン塩酸
塩8.2gを用いる以外は、参考例1と同様の操作を行
うことにより、化合物5,4.3g(収率74.3%)
を得た。 Rf=0.21(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 2: Compound 5 The procedure of Reference Example 1 was repeated, except that 8.2 g of dimethylamine hydrochloride was used instead of trimethylamine hydrochloride, to thereby obtain 4.3 g of compound 5 (yield: 74. 3%)
I got Rf = 0.21 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0046】参考例3:化合物6 トリメチルアミン塩酸塩の代わりにメチルアミン塩酸塩
6.7gを用いる以外は、参考例1と同様の操作を行う
ことにより、化合物6,2.2g(収率42.3%)を
得た。 Rf=0.17(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 3: Compound 6 The same operation as in Reference Example 1 was carried out except that 6.7 g of methylamine hydrochloride was used instead of trimethylamine hydrochloride, to obtain 2.2 g of compound 6 (yield: 42.20 g). 3%). Rf = 0.17 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0047】参考例4:化合物7 トリメチルアミン塩酸塩9.5gを水100mlに溶解
し、これにクロロホルム150mlを加え、さらに12
N水酸化ナトリウム20mlを滴下した。激しく攪拌し
てクロロホルム層にトリメチルアミンを遊離させ、クロ
ロホルム層を分離した。このクロロホルム層50mlに
1,3−プロパンサルトン6mlを添加し、50℃で反
応させた。生成する結晶を濾取し、真空乾燥することに
より、化合物7,8.8g(収率97.2%)を得た。 Rf=0.14(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 4: Compound 7 9.5 g of trimethylamine hydrochloride was dissolved in 100 ml of water, and 150 ml of chloroform was added thereto.
20 ml of N sodium hydroxide was added dropwise. The mixture was vigorously stirred to release trimethylamine from the chloroform layer, and the chloroform layer was separated. 6 ml of 1,3-propane sultone was added to 50 ml of this chloroform layer, and reacted at 50 ° C. The resulting crystals were collected by filtration and dried in vacuo to give 8.8 g of Compound 7 (yield 97.2%). Rf = 0.14 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0048】参考例5:化合物8 トリメチルアミン塩酸塩の代わりにジメチルアミン塩酸
塩8.2gを用いる以外は、参考例4と同様の操作を行
うことにより、化合物8,5.1g(収率61.0%)
を得た。 Rf=0.26(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 5: Compound 8 Except that 8.2 g of dimethylamine hydrochloride was used instead of trimethylamine hydrochloride, the same operation as in Reference Example 4 was carried out to obtain 5.1 g of compound 8 (yield: 61.80 g). 0%)
I got Rf = 0.26 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0049】参考例6:化合物9 トリメチルアミン塩酸塩の代わりにメチルアミン塩酸塩
6.7gを用いる以外は、参考例4と同様の操作を行う
ことにより、化合物9,2.6g(収率34%)を得
た。 Rf=0.23(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 6: Compound 9 2.6 g of Compound 9 (34% yield) was obtained in the same manner as in Reference Example 4, except that 6.7 g of methylamine hydrochloride was used instead of trimethylamine hydrochloride. ) Got. Rf = 0.23 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0050】参考例7:化合物10 トリメチルアミン塩酸塩9.5gを水100mlに溶解
し、3−クロロ−2−ヒドロキシプロパンスルホン酸ナ
トリウム19.7gを添加し、さらに水酸化ナトリウム
でpHを10に調整した後、50℃で反応させた。生成
する結晶を濾取し、真空乾燥することにより、化合物1
0,1.3g(収率6.6%)を得た。 Rf=0.11(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 7: Compound 10 9.5 g of trimethylamine hydrochloride was dissolved in 100 ml of water, 19.7 g of sodium 3-chloro-2-hydroxypropanesulfonate was added, and the pH was adjusted to 10 with sodium hydroxide. After that, the reaction was carried out at 50 ° C. The resulting crystals are collected by filtration and dried in vacuo to give Compound 1.
And 1.3 g (yield 6.6%) were obtained. Rf = 0.11 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0051】参考例8:化合物11 トリメチルアミン塩酸塩の代わりにジメチルアミン塩酸
塩8.2gを用いる以外は、参考例7と同様の操作を行
うことにより、化合物11,4.6g(収率25.1
%)を得た。 Rf=0.22(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 8: Compound 11 The procedure of Reference Example 7 was repeated, except that 8.2 g of dimethylamine hydrochloride was used instead of trimethylamine hydrochloride, to thereby obtain 4.6 g of Compound 11 (yield: 25.25 g). 1
%). Rf = 0.22 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0052】参考例9:化合物12 トリメチルアミン塩酸塩の代わりにメチルアミン塩酸塩
6.7gを用いる以外は、参考例7と同様の操作を行う
ことにより、化合物12,0.8g(収率4.7%)を
得た。 Rf=0.16(クロロホルム/メタノール/酢酸=60/40/2)Reference Example 9: Compound 12 The procedure of Reference Example 7 was repeated except that 6.7 g of methylamine hydrochloride was used instead of trimethylamine hydrochloride to obtain 0.8 g of Compound 12 (yield 4. 7%). Rf = 0.16 (chloroform / methanol / acetic acid = 60/40/2)
【0053】[0053]
【発明の効果】本発明により、検体中の物質を、酵素反
応を利用して過酸化水素に導き、これをパーオキシダー
ゼの存在下色素源と反応させ、呈色した反応液の可視部
における吸収を測定することにより比色定量する方法に
おいて、ビリルビンの影響をより軽減した測定法が提供
される。According to the present invention, a substance in a sample is led to hydrogen peroxide using an enzymatic reaction, which is reacted with a dye source in the presence of peroxidase, and the colored reaction solution is absorbed in the visible part. In the method for colorimetric quantification by measuring the amount of bilirubin, a measurement method in which the influence of bilirubin is further reduced is provided.
【図1】測定物質として尿酸を用いたときの検量線であ
る。FIG. 1 is a calibration curve when uric acid is used as a measurement substance.
Claims (4)
学量論量の過酸化水素に導き、これをパーオキシダーゼ
の存在下色素源と反応させ、呈色した反応液の可視部に
おける吸収を測定することにより比色定量する方法にお
いて、一般式(I) 【化1】 {式中、R1およびR2は同一または異なって、水素また
は置換もしくは非置換の低級アルキルを表し、R3は水
素を表すか、あるいはR3とR1とが一緒になって−R3
−R1−として−NH−(CH2)n−(式中、nは2〜
4の整数を表す)を表し、R4は単結合またはアルキレ
ンを表し、R5はO-またはR6−X-(式中、R6は置換
もしくは非置換のアルキレンを表し、XはCOO、SO
2OまたはOPO2Oを表す)を表し、YはR7−NH−
(式中、R7は置換数1〜3のヒドロキシで置換されて
いてもよいコラノイル基を表す)を表す}で表される化
合物を存在させ、かつ自動分析機を用いて測定すること
を特徴とする物質の測定法。1. A substance in a sample is led to a stoichiometric amount of hydrogen peroxide using an enzymatic reaction, and this is reacted with a dye source in the presence of peroxidase. In a method for colorimetric determination by measuring absorption, a compound represented by the general formula (I): Wherein R 1 and R 2 are the same or different and represent hydrogen or substituted or unsubstituted lower alkyl, R 3 represents hydrogen, or R 3 and R 1 together represent -R 3
—R 1 — as —NH— (CH 2 ) n — (where n is 2 to
R 4 represents a single bond or alkylene; R 5 represents O − or R 6 —X − (wherein R 6 represents a substituted or unsubstituted alkylene; X represents COO; SO
Represents a represents a 2 O or OPO 2 O), Y is R 7 -NH-
(Wherein, R 7 represents a optionally substituted Koranoiru group with hydroxy 1 to 3 substituents) that you measured with the presence of a compound represented by} represents a, and the automatic analyzer A method for measuring a characteristic substance.
コレステロール、トリグリセライド、ポリアミン、胆汁
酸、1,5−アンヒドログルシトール、ピルビン酸、乳
酸、リン脂質または尿素である請求項1記載の物質の測
定法。2. The method according to claim 1, wherein the substance in the sample is uric acid, creatinine,
The method according to claim 1, wherein the substance is cholesterol, triglyceride, polyamine, bile acid, 1,5-anhydroglucitol, pyruvic acid, lactic acid, phospholipid or urea.
たはコレステロールである請求項1記載の物質の測定
法。3. The method according to claim 1, wherein the substance in the sample is uric acid, creatinine or cholesterol.
ゼ、クレアチニナーゼ、クレアチナーゼ、ザルコシンオ
キシダーゼ、コレステロールオキシダーゼ、リポプロテ
インリパーゼ、グリセロールキナーゼ、グリセロール−
3−リン酸オキシダーゼ、ポリアミンアミドヒドロラー
ゼ、ポリアミンオキシダーゼ、プトレスシンオキシダー
ゼ、3−α−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ、
ジアホラーゼ、1,5−アンヒドログルシトールオキシ
ダーゼ、ピラノースオキシダーゼ、ピルビン酸オキシダ
ーゼ、乳酸オキシダーゼ、ホスホリパーゼD、コリンオ
キシダーゼ、ウレアアミドリアーゼ、ピルベートキナー
ゼまたはピルビン酸オキシダーゼである請求項1記載の
物質の測定法。4. The enzyme used in the enzyme reaction is uricase, creatininase, creatinase, sarcosine oxidase, cholesterol oxidase, lipoprotein lipase, glycerol kinase, glycerol-
3-phosphate oxidase, polyamine amide hydrolase, polyamine oxidase, putrescine oxidase, 3-α-hydroxysteroid dehydrogenase,
The measurement of the substance according to claim 1, which is diaphorase, 1,5-anhydroglucitol oxidase, pyranose oxidase, pyruvate oxidase, lactate oxidase, phospholipase D, choline oxidase, urea amide lyase, pyruvate kinase or pyruvate oxidase. Law.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP18832993A JP3283348B2 (en) | 1993-07-29 | 1993-07-29 | Substance measurement method |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP18832993A JP3283348B2 (en) | 1993-07-29 | 1993-07-29 | Substance measurement method |
Related Child Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2001266872A Division JP3357667B2 (en) | 2001-09-04 | 2001-09-04 | Substance measurement method |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH0739394A JPH0739394A (en) | 1995-02-10 |
JP3283348B2 true JP3283348B2 (en) | 2002-05-20 |
Family
ID=16221710
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP18832993A Expired - Fee Related JP3283348B2 (en) | 1993-07-29 | 1993-07-29 | Substance measurement method |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3283348B2 (en) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JPH1146795A (en) * | 1997-08-04 | 1999-02-23 | Iatron Lab Inc | Oxidase-containing reagent for analysis |
US9671348B2 (en) | 2010-12-13 | 2017-06-06 | Kyowa Medex Co., Ltd. | Method for measuring component by treating aqueous sample with alpha-keto acid and then converting component to hydrogen peroxide |
US9551022B2 (en) | 2012-03-30 | 2017-01-24 | Sekisui Medical Co., Ltd. | Dual surfactant enzymatic method for measuring a substrate in a blood sample |
JP6203708B2 (en) | 2012-04-27 | 2017-09-27 | 協和メデックス株式会社 | Method for measuring components to be measured in a sample |
-
1993
- 1993-07-29 JP JP18832993A patent/JP3283348B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH0739394A (en) | 1995-02-10 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
EP0699767B1 (en) | Method of determining cholesterol in high-density lipoprotein | |
EP0007787B1 (en) | Method and reagent for the quantitative determination of hydrogen peroxide | |
EP0159870B1 (en) | Method for the determination of mercapto compounds and reagent for use therein | |
JP5188111B2 (en) | Aniline derivative, and method, quantitative reagent, and quantitative kit for component to be quantified in sample using the same | |
US20050287619A1 (en) | Method and reagent for measuring cholesterol in high-density lipoproteins | |
US4824779A (en) | Method for the determination of the reduced form of nicotinamide adenine dinucleotide | |
JP3283348B2 (en) | Substance measurement method | |
EP0488756B1 (en) | Oxidizable color producing reagent | |
JP3357667B2 (en) | Substance measurement method | |
JP3797603B2 (en) | Method for stabilizing reagent composition | |
JP2008197077A (en) | Method and reagent for measuring object substance to be measured in sample, method for inhibiting nonspecific coloring, and nonspecific coloring inhibitor | |
JP2516381B2 (en) | Method for quantifying hydrogen peroxide and reagent for quantifying the same | |
JP5614281B2 (en) | Phenyl phosphorylcholine derivative | |
JP2899061B2 (en) | Calcium determination method | |
KR100276749B1 (en) | Method of quantitating cholesterol in low-density lipoprotein | |
JP4328754B2 (en) | Stabilized reagent composition | |
JP3594331B2 (en) | Chlorine ion determination method | |
WO2023190714A1 (en) | Method for measuring lysophospholipase d activity, sensitivity enhancement agent for lysophospholipase d activity measurement, composition, and kit | |
JP2001352999A (en) | Oxidative chromogenic agent | |
JPH06197795A (en) | Determination of hydrogen peroxide | |
JPH03119997A (en) | Method for measuring ingredient | |
JPH08256794A (en) | Reagent for assaying calcium | |
EP1082453A1 (en) | Liquid reagent set for l-lactate determination | |
JPH10165198A (en) | Oxidative color-developing reagent | |
JP2001008698A (en) | Oxidative coloring reagent |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20010711 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20020122 |
|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080301 Year of fee payment: 6 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090301 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090301 Year of fee payment: 7 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100301 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110301 Year of fee payment: 9 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |