JP3282583B2 - Adjuvant composition, vaccine using the same and novel saponin - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、オレアナン型ビス
デスモシドサポニンを含むアジュバント組成物およびそ
れを用いたワクチン、並びに新規なオレアナン型ビスデ
スモシドサポニンに関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an adjuvant composition containing an oleanane-type bisdesmoside saponin, a vaccine using the same, and a novel oleanane-type bisdesmoside saponin.

【０００２】[0002]

【従来の技術】人あるいは動物の感染予防のために何ら
かの物質を抗原とともに投与すると、その抗原に対する
免疫応答を増強させることができる。この物質をアジュ
バントと呼んでいる。従来、アジュバントのひとつとし
てサポニンが使用されている。代表的なアジュバントの
ひとつとしてキラヤサポニンあるいはキル−Ａ（Ｑuil-
Ａ）などが知られている。しかし、いずれのサポニンも
粗混合物あるいは活性成分の分子構造が未決定であっ
た。このように、従来のサポニンアジュバントは、粗混
合物であるがために活性成分の量が不均一であり、また
不純物が副反応を起こすおそれがあり、さらには分子構
造未知あるいは構造推定にとどまるために定量および定
性基準が明確でない、といった問題があった。これらの
理由により、従来はサポニンをアジュバントとしてワク
チンの製造に安定供給することが困難であった。2. Description of the Related Art When some substance is administered together with an antigen to prevent infection of humans or animals, an immune response to the antigen can be enhanced. This substance is called an adjuvant. Conventionally, saponin has been used as one of adjuvants. One of the representative adjuvants is Kyaryasaponin or Kill-A (Quil-A).
A) is known. However, the molecular structure of the crude mixture or active ingredient of any of the saponins was undetermined. As described above, the conventional saponin adjuvant is a crude mixture, so that the amount of the active ingredient is not uniform, and there is a possibility that impurities may cause a side reaction, and further, the molecular structure is unknown or the structure is estimated only. There was a problem that the quantitative and qualitative criteria were not clear. For these reasons, it has been conventionally difficult to stably supply saponin as an adjuvant for vaccine production.

【０００３】上記の問題を解決する目的で、特表平７−
５０４１５６号公報、Ｖａｃｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．１３，
Ｎｏ．１５，ｐ１４０３−１４１０，１９９５などに
は、サポニン−抗原複合物やサポニンアジュバントＱＳ
−２１とその用途が開示されている。これにより、活性
成分を特定し、副反応を軽度とすることができるように
なった。しかし、サポニンアジュバントを人あるいは動
物へ適用するためには活性成分の単離と構造決定が必要
である。For the purpose of solving the above problem, Japanese Patent Application Laid-Open No.
No. 504156, Vaccine, Vol. 13,
No. 15, p1403-1410, 1995, etc., include a saponin-antigen complex and a saponin adjuvant QS.
-21 and its use are disclosed. As a result, the active ingredient can be specified, and the side reaction can be reduced. However, application of saponin adjuvant to humans or animals requires isolation and structure determination of the active ingredient.

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】上記のように、ワクチ
ンをはじめとする、人あるいは動物用の免疫賦活剤とし
てサポニンアジュバントを適用するためには、アジュバ
ント活性を有するサポニンの分子構造を特定すると同時
に、精製品の生物活性の知見をもとに得られる構造活性
相関の解明が不可欠であった。そこで本発明の目的は、
アジュバントとして使用しうるサポニンの分子構造を決
定し、精製純度を向上させることにより、活性成分が多
く、副反応を抑制しうるアジュバント組成物を提供せん
とするものである。As described above, in order to apply saponin adjuvant as an immunostimulant for humans or animals including vaccines, it is necessary to specify the molecular structure of saponin having adjuvant activity while Therefore, it was essential to clarify the structure-activity relationship obtained based on the knowledge of the biological activity of purified products. Therefore, the object of the present invention is to
It is an object of the present invention to provide an adjuvant composition having a large amount of active ingredients and capable of suppressing side reactions by determining the molecular structure of saponin that can be used as an adjuvant and improving the purification purity.

【０００５】[0005]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記のよ
うな従来のサポニンアジュバントの問題点を解決すべく
鋭意研究を重ねた結果、新規なオレアナン型ビスデスモ
シドサポニンの分子構造を解明すると同時に、この新た
なオレアナン型ビスデスモシドサポニンが、安全性が高
く、かつ高アジュバント活性を有することを見いだし、
本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventors have intensively studied to solve the above-mentioned problems of the conventional saponin adjuvant, and as a result, elucidated the molecular structure of a novel oleanane-type bisdesmosidic saponin. At the same time, they found that this new oleanane-type bisdesmoside saponin is highly safe and has high adjuvant activity,
The present invention has been completed.

【０００６】すなわち、本発明のアジュバント組成物
は、一般式That is, the adjuvant composition of the present invention has the general formula

【化１５】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は糖鎖基を表す）で表されるオレア
ナン型ビスデスモシドサポニンを含有することを特徴と
するアジュバント組成物、および、一般式Embedded image (Wherein R ₁ and R ₂ each represent a sugar chain group), comprising an oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the general formula:

【化１６】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は糖鎖基を表す）で表されるオレア
ナン型ビスデスモシドサポニンを含有することを特徴と
するアジュバント組成物、である。Embedded image (Wherein R ₁ and R ₂ each represent a sugar chain group), which is an adjuvant composition characterized by containing an oleanan-type bisdesmoside saponin.

【０００７】前記一般式〔Ｉ〕、〔II〕中の糖鎖Ｒ
₁ 基、糖鎖Ｒ₂ 基は、Ｄ−グルコース、Ｄ−アラビノー
ス、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フコー
ス、Ｌ−ラムノース、あるいはＤ−グルクロン酸分子な
どの単糖類が１〜６個程度結合したものである。すなわ
ち、本発明のアジュバント組成物に使用されるサポニン
は、これらの糖鎖がオレアナン基本骨格の３位および２
８位にそれぞれ結合したオレアナン型ビスデスモシドサ
ポニンである。The sugar chain R in the above general formulas [I] and [II]
₁ group, sugar chain R ₂ group, about 1 to 6 monosaccharides such as D-glucose, D-arabinose, D-galactose, D-xylose, D-fucose, L-rhamnose, or D-glucuronic acid molecule It is a combination. That is, the saponin used in the adjuvant composition of the present invention is such that these sugar chains are at positions 3 and 2 of the oleanane basic skeleton.
It is an oleanane-type bisdesmoside saponin bonded to the 8-position.

【０００８】前記一般式〔Ｉ〕で表されるオレアナン型
ビスデスモシドサポニンは、一般式〔Ｉ〕中、３位の糖
鎖Ｒ₁ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グル
コピラノシドウロン酸基が結合し、かつ２８位の糖鎖Ｒ
₂ 基としてβ−Ｄ−グルコピラノシル基が結合した新規
なオレアナン型ビスデスモシドサポニン（以下、lablab
oside Ａという）であり、下記式The oleanane-type bisdesmosidic saponin represented by the above general formula [I] can be obtained by converting α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2)-into the 3-position sugar chain R ₁ in the general formula [I].
β-D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside uronic acid group is bonded, and sugar chain R at position 28
A novel oleanane-type bisdesmoside saponin having a β-D-glucopyranosyl group bonded as _two groups (hereinafter, lablab
oside A) and the following formula

【化１７】 で表される。Embedded image It is represented by

【０００９】また、前記一般式〔II〕で表されるオレア
ナン型ビスデスモシドサポニンのひとつは、一般式〔I
I〕中、３位の糖鎖Ｒ₁ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸基が結合し、
かつ２８位の糖鎖Ｒ₂ 基としてβ−Ｄ−グルコピラノシ
ル基が結合した新規なオレアナン型ビスデスモシドサポ
ニン（以下、lablabosideＢという）であり、下記式One of the oleanan-type bisdesmosidic saponins represented by the general formula [II] is represented by the general formula [I
During I], alpha-L-rhamnopyranosyl as 3-position of the sugar chain R ₁ groups (1 → 2) -β-D- galactopyranosyl (1 →
2) -β-D-glucopyranoside uronic acid group binds,
And a novel oleanane-type bisdesmoside saponin (hereinafter, referred to as lablaboside B) to which a β-D-glucopyranosyl group is bonded as the sugar chain R ₂ group at the 28-position.

【化１８】 で表される。Embedded image It is represented by

【００１０】前記一般式〔II〕で表される他のオレアナ
ン型ビスデスモシドサポニンは、一般式〔II〕中、３位
の糖鎖Ｒ₁ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→
２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシドウロン酸基が結合し、かつ２８位の
糖鎖Ｒ₂ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）
−β−Ｄ−グルコピラノシル基が結合した新規なオレア
ナン型ビスデスモシドサポニン（以下、lablaboside Ｃ
という）であり、下記式[0010] Other Oleanane type bis desmosterol glycoside saponins represented by the general formula [II], the general formula (II), alpha-L-rhamnopyranosyl as 3-position of the sugar chain R ₁ groups (1 →
2) -β-D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-D
Α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) to which a glucopyranosiduronic acid group is bonded and a sugar chain R ₂ group at position 28
A novel oleanane-type bisdesmoside saponin to which a -β-D-glucopyranosyl group is bonded (hereinafter, lablaboside C)
And the following formula

【化１９】 で表される。Embedded image It is represented by

【００１１】また、前記一般式〔II〕で表される他のオ
レアナン型ビスデスモシドサポニンは、一般式〔II〕
中、３位の糖鎖Ｒ₁ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸基が結合し、かつ２
８位の糖鎖Ｒ₂ 基として６−Ｏ−（３−ヒドロキシ−３
−メチルグルタロイル）β−Ｄ−グルコピラノシル基が
結合した新規なオレアナン型ビスデスモシドサポニン
（以下、lablaboside Ｄという）であり、下記式Another oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the above general formula [II] is represented by the general formula [II]:
Among, alpha-L-rhamnopyranosyl as 3-position of the sugar chain R ₁ groups (1 → 2) -β-D- galactopyranosyl (1 → 2) -
β-D-glucopyranoside uronic acid group is bound, and 2
6-O- (3-hydroxy-3) as the sugar chain R ₂ group at the 8-position
-Methylglutaroyl) β-D-glucopyranosyl group-bonded novel oleanane-type bisdesmoside saponin (hereinafter referred to as lablaboside D);

【化２０】 で表される。Embedded image It is represented by

【００１２】さらに、前記一般式〔II〕で表される他の
オレアナン型ビスデスモシドサポニンは、一般式〔II〕
中、３位の糖鎖Ｒ₁ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸基が結合し、かつ２
８位の糖鎖Ｒ₂ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル（１
→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基が結合した新規なオレアナン型ビ
スデスモシドサポニン（以下、lablaboside Ｅという）
であり、下記式Further, another oleanan-type bisdesmosidic saponin represented by the above general formula [II] is
Among, alpha-L-rhamnopyranosyl as 3-position of the sugar chain R ₁ groups (1 → 2) -β-D- galactopyranosyl (1 → 2) -
β-D-glucopyranoside uronic acid group is bound, and 2
As the sugar chain R ₂ group at the 8-position, α-L-rhamnopyranosyl (1
→ 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D
A novel oleanane-type bisdesmoside saponin to which a glucopyranosyl group is bound (hereinafter, referred to as lalabboside E)
And the following equation

【化２１】 で表される。Embedded image It is represented by

【００１３】また、前記一般式〔Ｉ〕で表される他のオ
レアナン型ビスデスモシドサポニンは、一般式〔Ｉ〕
中、３位の糖鎖Ｒ₁ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸基が結合し、かつ２
８位の糖鎖Ｒ₂ 基としてα−Ｌ−ラムノピラノシル（１
→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−グルコピラノシル基が結合した新規なオレアナン型ビ
スデスモシドサポニン（以下、lablaboside Ｆという）
であり、下記式Another oleanane-type bisdesmosidic saponin represented by the above general formula [I] is
Among, alpha-L-rhamnopyranosyl as 3-position of the sugar chain R ₁ groups (1 → 2) -β-D- galactopyranosyl (1 → 2) -
β-D-glucopyranoside uronic acid group is bound, and 2
As the sugar chain R ₂ group at the 8-position, α-L-rhamnopyranosyl (1
→ 4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D
A novel oleanane-type bisdesmosidic saponin to which a glucopyranosyl group is bonded (hereinafter, referred to as lalabboside F)
And the following equation

【化２２】 で表される。Embedded image It is represented by

【００１４】本発明のアジュバント組成物は、上記のよ
うな一般式〔Ｉ〕、〔II〕で表されるオレアナン型ビス
デスモシドサポニンをリン酸緩衝食塩水や生理食塩水に
添加して調製される。このアジュバント組成物は、イム
ノグロブリンＧ（以下、ＩｇＧという）などの可溶化抗
原に対する抗体、特にＩｇＧ１抗体の産生を増大させ
る。また、ＩｇＧ２ａ抗体も従来のキラヤサポニンＱＳ
−２１と同等に増大させる。また、豚ヘルペス不活化ウ
イルス抗原（ＰＲＶウイルス抗原）と混合して接種する
と当該ウイルスの感染による致死を回避させる高い免疫
賦活活性を有する。また、本発明のアジュバント組成物
は、免疫賦活活性が高く、かつ安全性の高いアジュバン
トである。The adjuvant composition of the present invention is prepared by adding the oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the general formulas [I] and [II] to a phosphate buffered saline or a physiological saline. You. This adjuvant composition increases the production of antibodies to solubilized antigens, such as immunoglobulin G (hereinafter, IgG), particularly IgG1 antibodies. In addition, the IgG2a antibody is also the same as the conventional Kiraya saponin QS.
Increase equivalent to -21. In addition, when inoculated by mixing with a swine herpes inactivated virus antigen (PRV virus antigen), it has a high immunostimulatory activity to avoid lethality due to infection with the virus. Further, the adjuvant composition of the present invention is a highly safe adjuvant having high immunostimulating activity.

【００１５】[0015]

【発明の実施の形態】サポニンの水溶液は石鹸様の持続
性の泡を生じる。サポニンの名は、石鹸を意味する接頭
語「サポ（ｓａｐｏ−）」に由来する。水に易溶性〜難
溶性で、メタノールおよびエタノールに熱時可溶性を示
し、無晶形をなす。またＬｉｅｂｅｒｍａｎｎ−Ｂｕｒ
ｃｈａｒｄテストにて陽性反応を示す。化学構造とし
て、ステロイドアルコール、トリテルペンアルコール、
あるいはステロイドアルカロイドをアグリコンとする配
糖体をなす。主として植物に分布するが、ナマコやヒト
デなどの動物からも見い出されている。サポニンは、商
業的には、例えばベルハウゼンコーポレーション（米国
オハイオ州、シンシナチ）、シグマケミカルコーポレイ
ション（米国ミズリー州、セントルイス）、アルドリッ
チ（米国ウイスコンシン州、ミルウオーキー）、アルフ
ァ（米国マサチューセッツ州、ワードヒル）などより入
手可能である。また、サポニンは、多くの植物、例え
ば、サボンソウ（Ｓaponaria offisinalis）、キラヤサ
ポナリア（Ｑuillaja saponaria ）、オタネニンジン
（Ｐanax ginseng）、カンゾウ（Ｇlysyrrhiza uralens
is）、アケビ（Ａkebia quinata ）、タイソウ（Ｚizyp
hus jujuba）、サイコ（Ｂupleurumfalcatum ）、セネ
ガ（Ｐolygala senega）、あるいはオンジ（Ｐolygala
tenuifolia）などから抽出できる。これらのサポニンの
抽出方法はよく知られている。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION An aqueous solution of saponin produces a soap-like persistent foam. The name saponin comes from the prefix "sapo-", meaning soap. It is readily soluble in water, hardly soluble in water, soluble in methanol and ethanol when heated, and has an amorphous form. Also Liebermann-Bur
It shows a positive reaction in the chard test. Chemical structures include steroid alcohol, triterpene alcohol,
Alternatively, it forms a glycoside using a steroid alkaloid as an aglycone. It is mainly distributed in plants, but has also been found in animals such as sea cucumber and starfish. Saponin is commercially available from, for example, Bellhausen Corporation (Cincinnati, Ohio, USA), Sigma Chemical Corporation (St. Louis, Missouri, USA), Aldrich (Milwalkie, Wisconsin, USA), Alpha (Wardhill, Mass., USA) Available. In addition, saponin is used in many plants, for example, Saponaria offisinalis, Quillaja saponaria, Panax ginseng, Licorice (Glysyrrhiza uralens).
is), Akebia quinata, and Zizyp
hus jujuba), psycho (Bupleurumfalcatum), senega (Polygala senega) or onji (Polygala)
tenuifolia). Methods for extracting these saponins are well known.

【００１６】また、オレアナン型サポニンは、マメ科植
物をはじめとして広範囲にわたる植物に含有されるサポ
ニンで、例えば、大豆（マメ科）に含まれるソヤサポニ
ン（soyasaponin ）群がある。オレアナン型サポニンの
非糖部は、オレアナン基本骨格をアグリコンとしたトリ
テルペノイドからなる。オレアナン基本骨格の３位、２
８位、ときには２２位には、それぞれ糖鎖が結合し、サ
ポニンの構造をなす。純品は無晶形白色粉末である。糖
鎖部分の構成糖は、Ｄ−グルコース、Ｄ−アラビノー
ス、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−キシロース、Ｄ−フコー
ス、Ｌ−ラムノース、あるいはＤ−グルクロン酸分子な
どの単糖類からなり、アグリコン部分への糖鎖の結合個
数により、糖鎖２本のビスデスモシド型サポニンと糖鎖
１本のモノデスモシド型サポニンの２種類に大別するこ
とができる。The oleanan-type saponin is a saponin contained in a wide range of plants including legumes. For example, there is a soyasaponin group included in soybeans (legumes). The non-sugar part of the oleanan-type saponin is composed of a triterpenoid having an oleanane basic skeleton as an aglycone. 3-position of the basic oleanan skeleton, 2
A sugar chain is bonded to each of the 8-position and sometimes the 22-position to form a saponin structure. The pure product is an amorphous white powder. The constituent sugars of the sugar chain portion are monosaccharides such as D-glucose, D-arabinose, D-galactose, D-xylose, D-fucose, L-rhamnose, or D-glucuronic acid molecule, and are sugars to the aglycone portion. According to the number of chain bonds, it can be roughly classified into two types: bisdesmoside type saponin with two sugar chains and monodesmoside type saponin with one sugar chain.

【００１７】本発明のアジュバント組成物に用いられる
サポニンは、白扁豆（ハクヘンズ。インゲンマメ乾燥種
子）から精製単離、構造決定された新規なサポニンであ
る上記lablaboside Ａ、lablaboside Ｂ、lablaboside
Ｃ、lablaboside Ｄ、lablaboside Ｅ、およびlablabos
ide Ｆなど（以下、lablaboside 類と総称する）をはじ
めとするオレアナン型ビスデスモシドサポニンである。
本発明のlablaboside類は以下のようにして得られた。The saponin used in the adjuvant composition of the present invention is a novel saponin purified and isolated from white tofu (Hakuhenzu; kidney bean dried seed), and is a novel saponin described above, lablaboside A, lablaboside B, lablaboside.
C, lablaboside D, lablaboside E, and lablabos
and oleanan-type bisdesmosidic saponins including ide F (hereinafter collectively referred to as labobosides).
The lablabosides of the present invention were obtained as follows.

【００１８】インゲンマメ（Dolichos lablab L.）白色
種子からの lablaboside Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、および
Ｆの精製：白扁豆（ハクヘンズ。インゲンマメDolichos
lablab L.の乾燥種子）（１０ｋｇ、中国産）を粉砕後
メタノールにて３回還流抽出した。減圧エバポレートに
てメタノールを除去して、粗エキスを得た（収量３２０
ｇ、収率３．２％）。本エキス３００ｇを酢酸エチル−
水（１：１）にて分液し、水層をさらにｎ−ブタノール
にて抽出処理した。減圧エバポレート後、酢酸エチル分
画より３９ｇ（０．３９％）およびｎ−ブタノール分画
より１１０ｇ（１．１％）のエキスを得た。ｎ−ブタノ
ール分画１１０ｇは、順層シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー [ＢＷ−２００（Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ
Ｃｈｅｍｉｃａｌ， Ltd.,２ｋｇ)、溶出液からＣＨＣ
ｌ₃ −ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ（６５：３５：１０，ｌｏｗｅ
ｒｌａｙｅｒ→６：４：１）→ＭｅＯＨ] にて５つの分
画 [Ｆｒ．1 (１２．０ｇ）、Ｆｒ．２（１９．１
ｇ）、Ｆｒ．３（６６．０ｇ）、Ｆｒ．４（３．９
ｇ）、およびＦｒ．５（６．０ｇ）] を得た。Ｆｒ．３
（６６．０ｇ）より、逆相シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー [１ｋｇ、ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ（６５：３５→７
０：３０→７５：２５ｖ／ｖ) →ＭｅＯＨ] およびＨＰ
ＬＣ [ＭｅＯＨ−１％ａｑ. ＡｃＯＨ (７５：２５、ｖ
／ｖ)]にて、チクセツサポニンIVａ (４１．０ｍｇ,
０．０００４１％) が得られた。Ｆｒ．４（３．９ｇ）
から、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー [Ｃｈ
ｒｏｍａｔｏｒｅｘ ＯＤＳ ＤＭ１０２０Ｔ（Ｆｕｊ
ｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ， Ltd., 100
g)、ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ（３０：７０→６０：４０→８
０：２０ｖ／ｖ) →ＭｅＯＨ] にて６つの分画 [Ｆｒ．
４−１（１．３２ｇ），Ｆｒ．４−２（０．０４７
ｇ），Ｆｒ．４−３（０．２３ｇ），Ｆｒ．４−４
（０．２８ｇ）, Ｆｒ．４−５（１．３４ｇ）、および
Ｆｒ．４−６（０．３４ｇ）] を得た。Ｆｒ．４−３
（０．２３ｇ）をＨＰＬＣ [ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤＳ
(ＹＭＣ Ｃｏ., Ltd.,２５０×２０ｍｍ ｉ．
ｄ．），ＭｅＯＨ−１％ ａｑ. ＴＦＡ（６５：３０、
ｖ／ｖ） ]にて精製することで、lablaboside Ａ（２
２．８ｍｇ, ０．０００２３％) 、Ｂ（３８．２ｍｇ、
０．０００３８％) 、およびＣ（１３．８ｍｇ、０．０
００１４％) が得られた。逆相シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー [１８０ｇ、ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ (７０：３
０→５０：５０→８０：２０、ｖ／ｖ) →ＭｅＯＨ] に
て、Ｆｒ．５（６．０ｇ）から４つの分画 [Ｆｒ．５−
１（３．４ｇ）、Ｆｒ．５−２（０．７ｇ）、Ｆｒ．５
−３（１．１ｇ）、およびＦｒ．５−４（０．２ｇ）]
を得た。Ｆｒ．５−３（１．１ｇ）からＨＰＬＣ [Ｍｅ
ＯＨ−１％ ａｑ. ＡｃＯＨ（３０：７０、ｖ／ｖ）]
により、８つの分画 [Ｆｒ．５−３−１（５９５．５ｍ
ｇ），Ｆｒ．５−３−２（８５．９ｍｇ）、Ｆｒ．５−
３−３（９４．９ｍｇ）、 Ｆｒ．５−３−４（１９．
４ｍｇ）、Ｆｒ．５−３−５（２４．０ｍｇ）、Ｆｒ．
５−３−６（１４．５ｍｇ）、Ｆｒ．５−３−７（４
３．５ｍｇ) 、およびＦｒ．５−３−８（１３．３ｍ
ｇ）] を得た。ＨＰＬＣ [ＭｅＯＨ−１％ ａｑ. Ａｃ
ＯＨ（６５：３５、ｖ／ｖ）] により、Ｆｒ．５−３−
２（８５．９ｍｇ) から、lablaboside Ｅ（６５．０ｍ
ｇ、０．０００６５％) が精製されるとともに、ＨＰＬ
Ｃ [１）ＭｅＯＨ−１％ ａｑ. ＡｃＯＨ（６５：３
５、ｖ／ｖ）；２）ＣＨ₃ ＣＮ−１％ ａｑ. ＡｃＯＨ
（３５：６５、ｖ／ｖ）] によりＦｒ．５−３−３（９
４．９ｍｇ) からはlablaboside Ｆ（２６．１ｍｇ、
０．０００２６％) が精製された。また、Ｆｒ．５−３
−７（４３．５ｍｇ) のＨＰＬＣ [ＭｅＯＨ−１％ ａ
ｑ. ＡｃＯＨ（６５：３５、ｖ／ｖ）] により、lablab
oside Ｄ（４３．２ｍｇ、０．０００４３％) が精製さ
れた。チクセツサポニンIVａはＴＬＣ、 ¹Ｈ−ＮＭＲ
（ピリジン−ｄ₅ ）、および¹³Ｃ−ＮＭＲ (ピリジン−
ｄ₅ ）の解析結果を標準品と比較することで同定した。
以上の経過を図１に示す。Purification of lablabosides A, B, C, D, E, and F from kidney beans (Dolichos lablab L.) white seeds: white flat beans (Hakuhens. Kidney beans Dolichos)
Lablab L. (dry seed) (10 kg, made in China) was pulverized and extracted with methanol three times under reflux. The methanol was removed by reduced pressure evaporation to obtain a crude extract (yield 320
g, yield 3.2%). Ethyl acetate-300 g of this extract
The layers were separated with water (1: 1), and the aqueous layer was further extracted with n-butanol. After evaporating under reduced pressure, 39 g (0.39%) of an extract from the ethyl acetate fraction and 110 g (1.1%) of the extract from the n-butanol fraction were obtained. 110 g of the n-butanol fraction was subjected to normal layer silica gel column chromatography [BW-200 (Fuji Silysia).
Chemical, Ltd., 2kg), CHC from eluate
_{l 3 -MeOH-H 2 O (} 65: 35: 10, lowe
rlayer → 6: 4: 1) → MeOH] [Fr. 1 (12.0 g), Fr. 2 (19.1
g), Fr. 3 (66.0 g), Fr. 4 (3.9
g), and Fr. 5 (6.0 g)]. Fr. 3
(66.0 g), reverse phase silica gel column chromatography [1 kg, MeOH-H ₂ O (65: 35 → 7
0: 30 → 75: 25 v / v) → MeOH] and HP
LC [MeOH-1% aq. AcOH (75:25, v
/ V)], and Chixetsusaponin IVa (41.0 mg,
0.00041%). Fr. 4 (3.9 g)
To reverse phase silica gel column chromatography [Ch
robotex ODS DM1020T (Fuji
i Silysia Chemical, Ltd., 100
g), MeOH—H ₂ O (30: 70 → 60: 40 → 8
0:20 v / v) → MeOH] with 6 fractions [Fr.
4-1 (1.32 g), Fr. 4-2 (0.047
g), Fr. 4-3 (0.23 g), Fr. 4-4
(0.28 g), Fr. 4-5 (1.34 g), and Fr. 4-6 (0.34 g)]. Fr. 4-3
(0.23 g) by HPLC [YMC-Pack ODS
(YMC Co., Ltd., 250 × 20 mm i.
d. ), MeOH-1% aq. TFA (65:30,
v / v)], and purified by lablaboside A (2
2.8 mg, 0.00023%), B (38.2 mg,
0.00038%), and C (13.8 mg, 0.0
0014%). Reverse phase silica gel column chromatography _{[180g, MeOH-H 2 O} (70: 3
0 → 50: 50 → 80: 20, v / v) → MeOH]. 5 (6.0 g) to 4 fractions [Fr. 5-
1 (3.4 g), Fr. 5-2 (0.7 g), Fr. 5
-3 (1.1 g), and Fr. 5-4 (0.2 g)]
I got Fr. 5-3 (1.1 g) to HPLC [Me
OH-1% aq. AcOH (30:70, v / v)]
Yields eight fractions [Fr. 5-3-1 (595.5 m
g), Fr. 5-3-2 (85.9 mg), Fr. 5-
3-3 (94.9 mg), Fr. 5-3-4 (19.
4 mg), Fr. 5-3-5 (24.0 mg), Fr.
5-3-6 (14.5 mg), Fr. 5-3-7 (4
3.5 mg), and Fr. 5-3-8 (13.3m
g)] was obtained. HPLC [MeOH-1% aq. Ac
OH (65:35, v / v)]. 5-3-
2 (85.9mg) from lablaboside E (65.0m
g, 0.00065%) was purified and HPL
C [1) MeOH-1% aq. AcOH (65: 3
5, v / v);. 2) CH 3 CN-1% aq AcOH
(35:65, v / v)]. 5-3-3 (9
From 4.9 mg), lablaboside F (26.1 mg,
0.00026%) was purified. In addition, Fr. 5-3
-7 (43.5 mg) HPLC [MeOH-1% a
q. AcOH (65:35, v / v)]
oside D (43.2 mg, 0.00043%) was purified. Tixetsaponin IVa is TLC, ¹ H-NMR
(Pyridine-d ₅ ) and ¹³ C-NMR (pyridine-
It was identified by comparing the analysis result of d ₅ ) with a standard product.
The above process is shown in FIG.

【００１９】lablaboside Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、および
Ｆのメタノシリス：lablaboside 類（Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、
Ｅ、およびＦ、各１ｍｇ) を９％ＨＣｌ−ｄｒｙＭｅＯ
Ｈ (０．５ｍｌ) に溶解し、２時間加熱処理した。冷却
後、溶液をＡｇ₂ ＣＯ₃ で中和、不溶残渣を濾別した。
濾液に含まれるサポゲニン部分は、薄相クロマトグラフ
ィー [ＣＨＣｌ₃ −酢酸エチル（１０：１）、ベンゼン
−アセトン（３：１）、ｎ−ヘキサン−ＡｃＯＥｔ
（１：２）] およびＨＰＬＣ [ＹＭＣ−Ｐａｃｋ ＯＤ
Ｓ−Ａ (ＹＭＣ Ｃｏ., Ltd.,２５０×４．６ｍｍ
ｉ．ｄ．) 、ＭｅＯＨ−１％ ａｑ. ＡｃＯＨ（８５：
１５、ｖ／ｖ）] にて標品 [Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥは２
４−エピ−ヘデラゲニン；ＡおよびＦはオレアノール
酸] と比較することで同定した。各残渣をピリジン
（０．０１ｍｌ) に溶解後、Ｎ，Ｏ−ビス（トリメチル
シリル）トリフルオロアセトアミド（ＢＳＴＦＡ、０．
０２ｍｌ) にて１時間処理した。反応液からＧＬＣ分析
によって、メチル化糖[Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦ
各々より得られたメチルグルクロニド (i)、メチルガラ
クトシド (ii) 、メチルラムノシド (iii)、およびメチ
ルグルコシド (iv）] のトリメチルシリル誘導体を検
出、同定した [ＧＬＣ分析諸条件；ＣＢＲ−Ｍ２５−０
２５、０．２５ｍｍ（ｉ．ｄ．）×２５ｍキャピラリー
カラム、カラム温度１４０−２８０℃、Ｈｅ流速１５ｍ
ｌ／ｍｉｎ、 t_R ; i （１８．４、１８．６ｍｉｎ) 、
ii （１８．９、１９．４ｍｉｎ）、 iii (１１．５、
１３．９ｍｉｎ）、およびiv（１７．８、１８．２、１
９．２ｍｉｎ）] 。Labanosides A, B, C, D, E, and F Methanosiris: Lablabosides (A, B, C, D,
E and F, 1 mg each) were added to 9% HCl-dryMeO
H (0.5 ml) and heat-treated for 2 hours. After cooling, the solution was neutralized with Ag ₂ CO ₃ and the insoluble residue was filtered off.
The sapogenin part contained in the filtrate was analyzed by thin-phase chromatography [CHCl ₃ -ethyl acetate (10: 1), benzene-acetone (3: 1), n-hexane-AcOEt.
(1: 2)] and HPLC [YMC-Pack OD]
SA (YMC Co., Ltd., 250 × 4.6 mm
i. d. ), MeOH-1% aq. AcOH (85:
15, v / v)] and [B, C, D, and E are 2
4-epi-hederagenin; A and F were identified by comparison with [oleanolic acid]. After dissolving each residue in pyridine (0.01 ml), N, O-bis (trimethylsilyl) trifluoroacetamide (BSTFA, 0.1 mL) was used.
02 ml) for 1 hour. From the reaction solution, methylated sugars [A, B, C, D, E and F
Methyl glucuronide (i), methyl galactoside (ii), methyl rhamnoside (iii), and methyl glucoside (iv)] obtained from each were detected and identified [GLC analysis conditions; CBR-M25-0]
25, 0.25 mm (id) × 25 m capillary column, column temperature 140-280 ° C., He flow rate 15 m
1 / min, t _R ; i (18.4, 18.6 min),
ii (18.9, 19.4 min), iii (11.5,
13.9 min), and iv (17.8, 18.2, 1
9.2 min)].

【００２０】lablaboside Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、およびＦの
酸加水分解：lablaboside 類 (Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｅ、および
Ｆ、各２．０ｍｇ) を５％Ｈ₂ ＳＯ ₄ −１，４−ジオキ
サン（１：１、ｖ／ｖ、１．０ｍｌ) に溶解し、１時間
加熱処理した。冷却後、反応液にＡｍｂｅｒｌｉｔｅ
ＩＲＡ−４００（ＯＨ^- ｆｏｒｍ) を加えてろ過した。
ろ液をＳｅｐ−Ｐａｋ Ｃ₁₈カートリッジへ通し、Ｈ ₂
ＯおよびＭｅＯＨで溶出した。Ｈ₂ Ｏ分画を濃縮してＬ
−システインメチルエステル塩酸塩（３．０ｍｇ) のピ
リジン（０．５ｍｌ) 溶液を加えて６０℃、１時間、そ
の次にＢＳＴＦＡ（０．０２ｍｌ) にて、６０℃、１時
間処理した。反応液からＧＬＣ分析によってＡ、Ｂ、
Ｃ、Ｅ、およびＦ各々由来のＤ−グルクロニド(i) 、Ｄ
−ガラクトシド(ii), Ｌ−ラムノシド(iii) およびＤ−
グルコシド(iv)を同定した [ＧＬＣ分析諸条件；Ｓｕｐ
ｅｌｃｏ（登録商標）−１、０．２５ｍｍ（ｉ．ｄ．）
×３０ｍキャピラリーカラム、カラム温度２３０℃、Ｈ
ｅ流速１５ｍｌ／ｍｉｎ、 t_R ; i （２６．４ｍｉｎ)
、ii (１３．８ｍｉｎ）、 iii (１５．５ｍｉｎ）、
およびiv (２４．２ｍｉｎ）] 。Lablaboside A, B, C, E, and F
Acid hydrolysis: lablabosides (A, B, C, E, and
F, 2.0 mg each) in 5% H_TwoSO _Four-1,4-dioki
Dissolve in sun (1: 1, v / v, 1.0 ml), 1 hour
Heat treated. After cooling, Amberlite was added to the reaction solution.
IRA-400 (OH^-form) was added thereto, followed by filtration.
Separate the filtrate into Sep-Pak C₁₈H _Two
Eluted with O and MeOH. H_TwoConcentrate the O fraction to L
Cysteine methyl ester hydrochloride (3.0 mg)
A lysine (0.5 ml) solution was added, and the mixture was added at 60 ° C for 1 hour.
Followed by BSTFA (0.02 ml) at 60 ° C for 1 hour
For a while. A, B, and G were analyzed from the reaction solution by GLC analysis.
D-glucuronide (i), D from each of C, E, and F
-Galactoside (ii), L-rhamnoside (iii) and D-
Glucoside (iv) was identified [GLC analysis conditions; Sup
elco®-1, 0.25 mm (id)
× 30m capillary column, column temperature 230 ° C, H
eFlow rate 15ml / min, t_R; i (26.4 min)
 , Ii (13.8 min), iii (15.5 min),
And iv (24.2 min)].

【００２１】lablaboside Ｄのアルカリ加水分解：labl
aboside Ｄ（２ｍｇ) を１０％ＫＯＨ−５０％ジオキサ
ン（１：１、ｖ／ｖ、０．５ｍｌ) に溶解し、３７℃で
１５分間撹拌した。この溶液の０．１ｍｌをとり、残り
を５ｍｌの（ＣＨ₂ ）₂ Ｃｌ₂ に溶解後、ｐ−ニトロベ
ンゼン−Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルイソ尿素（１０ｍ
ｇ) を添加し、８０℃下、９０分間撹拌した。この反応
液からＨＰＬＣ分析によって３−ヒドロキシ−３−メチ
ルグルタル酸のｐ−ニトロベンジルエステル（ａ）が同
定された [ＨＰＬＣ分析諸条件；カラム、ＹＭＣ−Ｐａ
ｃｋ ＯＤＳ (２５０×４．６ｍｍ ｉ．ｄ．）；溶出
液、ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ (６０：４０、ｖ／ｖ) ；流速、
０．９ｍｌ／ｍｉｎ t_R; ａ（７．１ｍｉｎ）] 。残り
の溶液はＤｏｗｅｘ ＨＣＲ Ｗ×２（Ｈ⁺ ｆｏｒｍ）
処理後ろ過した。このろ液をエバポレートして２０ｍｇ
の粗体を得た。粗体の順相シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー [６００ｍｇ、ＣＨＣｌ₃ −ＭｅＯＨ−Ｈ₂ Ｏ
（７：３：１、ｌｏｗｅｒ ｌａｙｅｒ）] でlablabos
ide Ｂ（１．５ｍｇ) が得られた。lablaboside Ｂは標
品の薄層クロマトグラフィーと、 ¹Ｈ−および¹³Ｃ−Ｎ
ＭＲ分析から同定された。Alkaline hydrolysis of lablaboside D: labl
aboside D (2 mg) was dissolved in 10% KOH-50% dioxane (1: 1, v / v, 0.5 ml) and stirred at 37 ° C. for 15 minutes. After taking 0.1 ml of this solution and dissolving the remainder in 5 ml of (CH ₂ ) ₂ Cl ₂ , p-nitrobenzene-N, N′-diisopropylisourea (10 m
g) was added and the mixture was stirred at 80 ° C. for 90 minutes. From this reaction solution, p-nitrobenzyl ester of 3-hydroxy-3-methylglutaric acid (a) was identified by HPLC analysis [HPLC analysis conditions; column, YMC-Pa
ck ODS (250 × 4.6 mm id); eluate, MeOH—H ₂ O (60:40, v / v);
0.9 ml / min t _R ; a (7.1 min)]. The remaining solution is Dowex HCR W × 2 (H ⁺ form)
After the treatment, the mixture was filtered. Evaporate this filtrate to 20 mg
Was obtained. Crude normal phase silica gel column chromatography [600 mg, CHCl ₃ -MeOH-H ₂ O
(7: 3: 1, lower layer)] with lablabos
Ide B (1.5 mg) was obtained. lablaboside B was obtained by standard thin layer chromatography, ¹ H- and ¹³ C-N
Identified from MR analysis.

【００２２】lablaboside Ａ〜Ｆの化学構造の決定： （１）実験方法 以下の機器を物理化学データの解析に使用した。融点測
定、Ｙａｎａｇｉｍｏｔｏ ＭＰ−５００Ｄ；旋光度測
定、ＨＯＲＩＢＡ ＳＥＰＡ−３００ ｄｉｇｉｔａｌ
ｐｏｌａｒｉｍｅｔｅｒ（ｌ＝５ｃｍ）；紫外吸光分
析、ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＵＶ−１２００；赤外吸光分
析、ＳＨＩＭＡＤＺＵ ＦＴＩＲ−８１００；ＦＡＢ−
ＭＳおよび高分解能ＭＳ分析、ＪＯＥＬ ＪＭＳ−ＳＸ
１０２Ａ； ¹Ｈ−ＮＭＲ分析、ＪＯＥＬ ＥＸ２７０
（２７０ＭＨｚ）およびＬＮＭ−ＬＡ５００（５００Ｍ
Ｈｚ）；¹³Ｃ−ＮＭＲ分析、ＪＯＥＬ ＥＸ−２７０
（６８ＭＨｚ）およびＬＮＭ−ＬＡ５００（１２５ＭＨ
ｚ）。ＮＭＲにおいては、いずれもテトラメチルシラン
を内標準として使用した。順相シリカゲルカラムクロマ
トグラフィー、Ｓｉｌｉｃａ−ｇｅｌ ＢＷ−２００
（Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ，Lt
d., １５０−３５０ｍｅｓｈ）；逆相シリカゲルカラム
クロマトグラフィー、ＣｈｒｏｍａｔｏｒｅｘＯＤＳ
ＤＭ１０２０Ｔ (Ｆｕｊｉ Ｓｉｌｙｓｉａ Ｃｈｅｍ
ｉｃａｌ，Ltd., １００−２００ｍｅｓｈ）；薄層クロ
マトグラフィー、Ｓｉｌｉｃａ−ｇｅｌ ６０Ｆ₂₅₄ ｐ
ｒｅ−ｃｏａｔｅｄ ＴＬＣ ｐｌａｔｅ (Ｍｅｒｃ
ｋ、０．２５ｍｍ）（順相）；Ｓｉｌｉｃａ−ｇｅｌ
ＲＰ−１８ ６０ＷＦ₂₅₄ ( Ｍｅｒｃｋ、０．２５ｍ
ｍ) （逆相）；逆相ＨＰＴＬＣ、Ｓｉｌｉｃａ−ｇｅｌ
ＲＰ−１８ ６０ＷＦ_254sｐｒｅ−ｃｏａｔｅｄ Ｔ
ＬＣ ｐｌａｔｅ (Ｍｅｒｃｋ、０．２５ｍｍ) ；１％
Ｃｅ（ＳＯ₄ ）₂ −１０％Ｈ₂ ＳＯ₄ を噴霧後、加熱に
よってスポットを検出した。Determination of the chemical structures of lablaboside AF: (1) Experimental method The following equipment was used for analyzing physicochemical data. Melting point measurement, Yanagimoto MP-500D; optical rotation measurement, HORIBA SEPA-300 digital
polarimeter (l = 5 cm); ultraviolet absorption analysis, SHIMADZU UV-1200; infrared absorption analysis, SHIMADZU FTIR-8100; FAB-
MS and high resolution MS analysis, JOEL JMS-SX
102A; ¹ H-NMR analysis, JOEL EX270
(270 MHz) and LNM-LA500 (500M
Hz); ¹³ C-NMR analysis, JOEL EX-270
(68 MHz) and LNM-LA500 (125 MH)
z). In NMR, tetramethylsilane was used as an internal standard. Normal phase silica gel column chromatography, Silica-gel BW-200
(Fuji Silysia Chemical, Ltd.
d., 150-350 mesh); reverse phase silica gel column chromatography, Chromatorex ODS
DM1020T (Fuji Silysia Chem
ical, Ltd., 100-200 mesh); thin layer chromatography, Silica-gel 60F ₂₅₄ p.
re-coated TLC plate (Merc
k, 0.25 mm) (normal phase); Silica-gel
RP-18 60WF ₂₅₄ (Merck, 0.25m
m) (Reverse phase); Reverse phase HPTLC, Silica-gel
_{RP-18 60WF 254s pre-coated} T
LC plate (Merck, 0.25 mm); 1%
After spraying Ce (SO ₄ ) ₂ -10% H ₂ SO ₄ , spots were detected by heating.

【００２３】lablaboside Ａの化学構造 lablaboside Ａはｍｐ１８４．０−１８５．５℃の無色
微細結晶として得られた。ＩＲスペクトルにおいて、１
７１６と１７３６ｃｍ^-1にエステル基およびカルボキシ
ル基に基づく吸収が確認されるとともに、３４１９と１
０７６ｃｍ^-1に強い吸収が観察されたことから、オリゴ
グルコシドの構造が示唆された。ＦＡＢ−ＭＳの解析
[ｍ／ｚ１１２５ (Ｍ＋Ｎａ) ⁺ 、ｍ／ｚ１１０１（Ｍ
−Ｈ) ^- およびｍ／ｚ９３９（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₅ ）^- ，
７９３（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉)^- ] および高性能ＦＡＢ−Ｍ
Ｓにより分子式Ｃ₅₄Ｈ₈₆Ｏ₂₃を有することが明らかとな
った。lablaboside Ａを９％ＨＣｌ−ｄｒｙＭｅＯＨに
てメタノリシスすると、アグリコンとしてオレアノール
酸部分が得られるとともに、構成糖由来のメチルグルク
ロニド、メチルガラクトシド、メチルラムノシド、およ
びメチルグルコシドが約１：１：１：１の比で得られ
た。構成糖の立体配置を決めるために、lablaboside Ａ
を５％Ｈ₂ ＳＯ₄ −ジオキサン（１：１，ｖ／ｖ）で加
水分解した後、各糖のトリメチルシリルチアゾリジン誘
導体のガスクロマトグラフィーから、各々Ｄ−グルクロ
ン酸、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ラムノース、およびＤ−
グルコースが同定された。lablaboside Ａの ¹Ｈ−ＮＭ
Ｒおよび¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（表１）において、ア
グリコン部分［δ３．１７（ｄｄ，Ｊ＝３．１，１４．
７Ｈｚ，１８−Ｈ), δ３．３３（ｄｄ，Ｊ＝４．６，
１２．２Ｈｚ，３−Ｈ），δ５．３９（ｂｒ ｓ，１２
−Ｈ）] 、β−Ｄ−グルクロン酸基 [δ５．０３（ｄ，
Ｊ＝７．３Ｈｚ、１'-Ｈ）] 、β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル基 [δ５．６６（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１''−
Ｈ）] 、α−Ｌ−ラムノピラノシル基 [δ１．７４
（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，６''' −Ｈ₃ ）６．２５（ｂｒ
ｓ, １''' −Ｈ）] 、およびβ−Ｄ−グルコピラノシ
ル基 [δ６．２８（ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ、１''''−
Ｈ）] のシグナルが観測されるとともに、３−Ｏ−トリ
グリコシド部分の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、Ａ
がカイカサポニンIII （Ｋｉｔａｇａｗａら．薬学雑
誌、１０８、５３８−５４６（１９８８））のα−Ｌ−
ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルクロン酸部分のシグナル
データと重複することが明らかとなった。最終的にＨＭ
ＢＣによって、１''' 位水素と２''位炭素、１''位水素
と２' 位炭素、１' 位水素とアグリコンの３位炭素、お
よび１''''位水素と２８位炭素間に相関が観測されたこ
とから、その糖鎖構造が判明した。以上の結果、lablab
oside Ａの構造を３−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−
β−Ｄ−グルコピラノシドウロン酸] −２８−Ｏ−（β
−Ｄ−グルコピラノシル) オレアノール酸であると決定
した。Chemical structure of lablaboside A Lablaboside A was obtained as colorless fine crystals of mp 184.0-185.5 ° C. In the IR spectrum, 1
At 716 and 1736 cm ⁻¹ , absorption based on ester groups and carboxyl groups was confirmed.
Observation of strong absorption at 076 cm ^-1 suggested the structure of the oligoglucoside. Analysis of FAB-MS
[m / z 1125 (M + Na) ⁺ , m / z 1101 (M
-H) ^- and _{m / z939 (M-C 6} H 11 O 5) -,
_{793 (M-C 12 H 21} O 9) -] and high performance FAB-M
S revealed that it had the molecular formula C ₅₄ H ₈₆ O ₂₃ . When lablaboside A is subjected to methanolysis with 9% HCl-dry MeOH, an oleanolic acid portion is obtained as an aglycone, and methyl glucuronide, methyl galactoside, methyl rhamnoside, and methyl glucoside derived from constituent sugars are contained in a ratio of about 1: 1: 1: 1. Obtained. Lablaboside A to determine the configuration of the constituent sugars
Was hydrolyzed with 5% H ₂ SO ₄ -dioxane (1: 1, v / v), and then gas chromatography of the trimethylsilylthiazolidine derivative of each sugar revealed that D-glucuronic acid, D-galactose, L-rhamnose, And D-
Glucose was identified. ¹ H-NM of lablaboside A
In the R and ¹³ C-NMR spectra (Table 1), the aglycone moiety [δ 3.17 (dd, J = 3.1,14.
7 Hz, 18-H), δ 3.33 (dd, J = 4.6,
12.2 Hz, 3-H), δ 5.39 (brs, 12
-H)], a β-D-glucuronic acid group [δ5.03 (d,
J = 7.3 Hz, 1′-H)], β-D-galactopyranosyl group [δ 5.66 (d, J = 7.7 Hz, 1 ″-)
H)], α-L-rhamnopyranosyl group [δ 1.74
(D, J = 5.8 Hz, 6 ′ ″ − H ₃ ) 6.25 (br
s, 1 '''-H)], and a β-D-glucopyranosyl group [δ6.28 (d, J = 8.0 Hz, 1''''-
H)], and the ¹³ C-NMR spectrum of the 3-O-triglycoside moiety shows A
Is α-L- of Kaikasaponin III (Kitakawa et al., Pharmaceutical Journal, 108, 538-546 (1988)).
It was revealed that the signal data overlapped with the signal data of the rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucuronic acid portion. Finally HM
According to BC, 1 ′ ″ hydrogen and 2 ″ carbon, 1 ″ hydrogen and 2 ′ carbon, 1 ′ hydrogen and 3rd carbon of aglycone, and 1 ″ ″ hydrogen and 28 carbon Since a correlation was observed between the two, the sugar chain structure was revealed. As a result, lablab
The structure of oside A is 3-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-galactopyranosyl (1 → 2)-
β-D-glucopyranoside uronic acid] -28-O- (β
-D-glucopyranosyl) oleanolic acid.

【００２４】lablaboside Ｂの化学構造：lablaboside
Ｂはｍｐ２１９．６−２２０．５℃の無色微細結晶とし
て得られた。ＩＲスペクトルはlablaboside Ａに類似す
る。ＦＡＢ−ＭＳの解析［ｍ／ｚ１１４１（Ｍ＋Ｎａ）
⁺ 、ｍ／ｚ１１１７（Ｍ−Ｈ）^- およびｍ／ｚ９５５
（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₅ ）^- 、８０９（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）
^- ] および高分解能ＦＡＢ−ＭＳにより分子式Ｃ₅₄Ｈ₈₆
Ｏ₂₄を有することが明らかとなった。lablaboside Ｂを
メタノリシスすると、アグリコン由来の２４−エピ−ヘ
デラゲニンが得られるとともに、構成糖由来のメチルグ
ルクロニド、メチルガラクトシド、メチルラムノシド、
およびメチルグルコシドが約１：１：１：１の比で得ら
れた。lablaboside Ｂを酸加水分解して、各糖のトリメ
チルシリルチアノリジンン誘導体のガスクロマトグラフ
ィーを観測した結果、各々Ｄ−グルクロン酸、Ｄ−ガラ
クトース、Ｌ−ラムノース、およびＤ−グルコースが同
定された。lablaboside Ｂの ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−
ＮＭＲスペクトル（表１）において、アグリコン部分
[δ３．１５（ｄｄ，Ｊ＝４．３，１３．８Ｈｚ，１８
−Ｈ），３．２２，４．２２（ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１
１．３Ｈｚ，２４−Ｈ₂ ），３．３９（ｄｄ、Ｊ＝４．
０，１１. ６Ｈｚ，３−Ｈ），５．３８（ｂｒ ｓ, １
２−Ｈ)], β−Ｄ−グルクロン酸基［δ４．９６（ｄ，
Ｊ＝７．４Ｈｚ，１' −Ｈ）] 、β−Ｄ−ガラクトピラ
ノシル基 [δ５．７２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ、１''−
Ｈ）] 、α−Ｌ−ラムノピラノシル基 [δ１．７５
（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，６''' −Ｈ₃), ６．２１（ｂｒ
ｓ、１''' −Ｈ）] 、およびβ−Ｄ−グルコピラノシ
ル基 [δ６．２７（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１''''−
Ｈ）] のシグナルが観測されるとともに、糖鎖部分の¹³
Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、lablabosideＢがソヤ
サポニンＩ（Ｋｉｔａｇａｗａら．Ｃｈｅｍ．Ｐｈａ
ｍ．Ｂｕｌｌ．、２４、１２１−１２９（１９７６）、
Ｋｉｔａｇａｗａら．ｉｂｉｄ．３６、１５３−１６１
（１９８８））やデヒドロソヤサポニンＩ（Ｋｉｔａｇ
ａｗａら．薬学雑誌、１０８、５４７−５５４（１９８
８））のもつ２４位ＯＨ基と３−Ｏ− [α−Ｌ−ラムノ
ピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル
（１→２）−β−Ｄ−グルクロン酸] 部分のシグナルデ
ータと重複することが明らかとなった。ＨＭＢＣによっ
て１''' 位水素と２''位炭素、１''位水素と２' 位炭
素、１'位水素とアグリコンの３位炭素、および１''''
位水素と２８位炭素間に相関が観測されたことから、la
blaboside Ｂの糖鎖構造はlablaboside Ａと同様である
ことが判明した。以上の結果、lablaboside Ｂの構造を
３−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピ
ラノシドウロン酸] −２８−Ｏ−（β−Ｄ−グルコピラ
ノシル) ２４−エピ−ヘデラゲニンであると決定した。Chemical structure of lablaboside B: lablaboside
B was obtained as colorless fine crystals of mp 219.6-220.5 ° C. The IR spectrum is similar to lablaboside A. Analysis of FAB-MS [m / z 1141 (M + Na)
^{+, M / z1117 (M-} H) - and m / z955
_{(M-C 6 H 11 O} 5) -, 809 (M-C 12 H 21 O 9)
^- ] And the molecular formula C ₅₄ H ₈₆ by high resolution FAB-MS.
It was found to have O ₂₄ . When lablaboside B is subjected to methanolysis, 24-epi-hederagenin derived from aglycone is obtained, and methyl glucuronide, methyl galactoside, methyl rhamnoside derived from constituent sugars,
And methyl glucoside in a ratio of about 1: 1: 1: 1. As a result of acid hydrolysis of lablaboside B and observation of gas chromatography of a trimethylsilylthianolidine derivative of each sugar, D-glucuronic acid, D-galactose, L-rhamnose and D-glucose were identified, respectively. ¹ lablaboside B H-NMR and ¹³ C-
In the NMR spectrum (Table 1), the aglycone moiety
[δ 3.15 (dd, J = 4.3, 13.8 Hz, 18
-H), 3.22, 4.22 (both d, J = 1)
_{1.3Hz, 24-H 2),} 3.39 (dd, J = 4.
0, 11.6 Hz, 3-H), 5.38 (brs, 1
2-H)], β-D-glucuronic acid group [δ 4.96 (d,
J = 7.4 Hz, 1′-H)], β-D-galactopyranosyl group [δ5.72 (d, J = 7.4 Hz, 1 ″-)
H)], α-L-rhamnopyranosyl group [δ 1.75
(D, J = 6.1 Hz, 6 ′ ″ − H ₃ ), 6.21 (br
s, 1 ′ ″-H)] and a β-D-glucopyranosyl group [δ 6.27 (d, J = 7.9 Hz, 1 ″ ″-
H)] is observed, and ¹³
In the C-NMR spectrum, lablaboside B showed soyasaponin I (Kitagawa et al. Chem. Pha).
m. Bull. , 24, 121-129 (1976),
Kitagawa et al. ibid. 36, 153-161
(1988)) and dehydrosoyasaponin I (Kitag
awa et al. Pharmaceutical Magazine, 108, 547-554 (198
8)) and the signal of the 3-OH- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucuronic acid] moiety It was found to overlap with the data. According to HMBC, 1 ′ ″ hydrogen and 2 ″ carbon, 1 ″ hydrogen and 2 ′ carbon, 1 ′ hydrogen and 3rd carbon of aglycone, and 1 ″ ″
Since a correlation was observed between the hydrogen at position 28 and the carbon at position 28, la
It was found that the sugar chain structure of blaboside B was the same as that of lablaboside A. As a result, the structure of lablaboside B was changed to 3-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-
D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside uronic acid] -28-O- (β-D-glucopyranosyl) 24-epi-hedrageenin.

【００２５】lablaboside Ｃの化学構造：lablaboside
Ｃはｍｐ２２２．０−２２３．５℃の無色微細結晶とし
て得られた。ＩＲスペクトルにおいて、３４０９、１７
３６、１７１８、および１０７６ｃｍ^-1にヒドロキシル
基、エステル基およびカルボキシル基に基づく吸収が観
測される。ＦＡＢ−ＭＳの解析［ｍ／ｚ１２８７（Ｍ＋
Ｎａ）⁺ 、ｍ／ｚ１２６３（Ｍ−Ｈ) ^- およびｍ／ｚ１
１１７（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ）^- , ９５５（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁
Ｏ₉ ）^- ] および高分解能ＦＡＢ−ＭＳにより分子式Ｃ
₆₀Ｈ₉₆Ｏ₂₈を有することが明らかとなった。lablabosid
e Ｃをメタノリシスによる分析結果と、酸化水分解によ
るトリメチルシリルチアゾリジン誘導体のガスクロマト
グラフィーの観測から、lablaboside Ｃよりアグリコン
部分由来の２４−エピ−ヘデラゲニンが得られるととも
に、Ｄ−グルクロン酸、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ラムノ
ース、およびＤ−グルコースが約１：１：２：１の比で
得られた。lablaboside Ｃの ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−
ＮＭＲスペクトル（表１）において、２４−エピ−ヘデ
ラゲニン部分 [δ３．１０（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１４．
０Ｈｚ、１８−Ｈ）, ３．１３, ４．１９（ｂｏｔｈ
ｄ, Ｊ＝１１．０Ｈｚ、２４−Ｈ₂ ），３．３４（ｄ
ｄ, Ｊ＝４．９，１２. ２Ｈｚ，３−Ｈ），５．４１
（ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）] 、β−Ｄ−グルクロン酸基
［δ４．９８（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ, １' −Ｈ）] 、β
−Ｄ−ガラクトピラノシル基 [δ５．８０（ｄ，Ｊ＝
７．３Ｈｚ, １''−Ｈ）] 、２個のα−Ｌ−ラムノピラ
ノシル基 [δ１．７９（ｄ，Ｊ＝５．２Ｈｚ, ６'''''
−Ｈ₃ ）, １．８１（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，６''' −Ｈ
₃ ）、６．２８、６．６６（ｂｏｔｈ ｂｒ ｓ,
１''' −Ｈ，１''''' −Ｈ)]、およびβ−Ｄ−グルコピ
ラノシル基 [δ６．１９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ、１''''
−Ｈ）] のシグナルが観測された。lablaboside Ｃの¹³
Ｃ−ＮＭＲスペクトルは２８位糖鎖の末端のα−Ｌ−ラ
ムノピラノシル基由来のシグナルを除いて、lablabosid
e Ｂに類似することが明らかとなった。ＨＭＢＣによっ
て、１''' 位水素と２''位炭素、１''位水素と２' 位炭
素、１' 位水素とアグリコンの３位炭素、および
１''''' 位水素と２''''位炭素、および１''''位水素と
２８位炭素間に相関が観測されたことから、その糖鎖構
造が判明した。以上の結果、lablaboside Ｃの構造を３
−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ
−ガラクトピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラ
ノシドウロン酸] −２８−Ｏ− [α−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシル] ２４−エ
ピ−ヘデラゲニンであると決定した。Lablaboside Chemical structure of C: lablaboside
C was obtained as colorless fine crystals of mp 222.0-223.5 ° C. In the IR spectrum, 3409, 17
At 36, 1718, and 1076 cm ^-1 , absorptions based on hydroxyl, ester, and carboxyl groups are observed. Analysis of FAB-MS [m / z 1287 (M +
Na) ⁺ , m / z 1263 (M−H) ⁻ and m / z 1
_{117 (M-C 6 H 11} O 4) -, 955 (M-C 12 H 21
O ₉ ) ^- ] and high-resolution FAB-MS
To have ₆₀ H ₉₆ O ₂₈ revealed. lablabosid
From the results of analysis of e C by methanolysis and the observation of gas chromatography of a trimethylsilylthiazolidine derivative by hydrolysis with oxidized water, 24-lab-epi-hederagenin derived from the aglycone moiety was obtained from lablaboside C, and D-glucuronic acid, D-galactose, L-rhamnose and D-glucose were obtained in a ratio of about 1: 1: 2: 1. Lablaboside C of ¹ H-NMR and ¹³ C-
In the NMR spectrum (Table 1), the 24-epi-hederagenin moiety [δ 3.10 (dd, J = 4.9, 14.
0 Hz, 18-H), 3.13, 4.19 (both
d, J = 11.0 Hz, 24-H ₂ ), 3.34 (d
d, J = 4.9, 12.2 Hz, 3-H), 5.41
(Br s, 12-H)], β-D-glucuronic acid group [δ 4.98 (d, J = 7.4 Hz, 1′-H)], β
-D-galactopyranosyl group [δ 5.80 (d, J =
7.3 Hz, 1 ″ -H)], two α-L-rhamnopyranosyl groups [δ 1.79 (d, J = 5.2 Hz, 6 ′ ″ ″)
−H ₃ ), 1.81 (d, J = 5.8 Hz, 6 ′ ″ −H
₃ ), 6.28, 6.66 (both brs,
1 ′ ″-H, 1 ″ ″ ″-H)] and β-D-glucopyranosyl group [δ 6.19 (d, J = 8.3 Hz, 1 ″ ″)
-H)] was observed. lablaboside C ¹³
The C-NMR spectrum was lablabosid except for the signal derived from the α-L-rhamnopyranosyl group at the end of the 28-position sugar chain.
It turned out to be similar to eB. According to HMBC, 1 ′ hydrogen and 2 ″ carbon, 1 ″ hydrogen and 2 ′ carbon, 1 ′ hydrogen and aglycon 3 carbon, and 1 ′ ″ ″ hydrogen and 2 ′ The sugar chain structure was found from the correlation observed between the carbon at the '''-position and the hydrogen at the 1''''-position and the carbon at the 28-position. As a result, the structure of lablaboside C was changed to 3
-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D
-Galactopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosiduronic acid] -28-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] 24-epi-hederagenin Were determined.

【００２６】lablaboside Ｄの化学構造：lablaboside
Ｄはｍｐ１９３．４−１９５．０℃の無色微細結晶とし
て得られた。ＩＲスペクトルにおいて、１７４１、１７
３６、１７３１、および１７２４ｃｍ^-1にエステル基お
よびカルボキシル基に基づく吸収が観測されるととも
に、３４１９、１０７６ｃｍ^-1に強い吸収が観測された
ことから、オリゴグルコシドの構造が示唆された。ＦＡ
Ｂ−ＭＳの解析［ｍ／ｚ１２８５（Ｍ＋Ｎａ）⁺ ，ｍ／
ｚ１２６１（ Ｍ−Ｈ）^- およびｍ／ｚ１１１５（Ｍ−
Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ）^- , ９５５（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₁₉Ｏ₉ ）^- ，９
５３（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）^- ] および高分解能ＦＡＢ−
ＭＳにより分子式Ｃ₆₀Ｈ₉₄Ｏ₂₈を有することが明らかと
なった。lablaboside Ｄをメタノリシスすると、アグリ
コン部分由来の２４−エピ−ヘデラゲニンが得られると
ともに、構成糖由来のメチルグルクロニド、メチルガラ
クトシド、メチルラムノシド、およびメチルグルコシド
が約１：１：１：１の比で得られた。また１０％ＫＯＨ
−５０％ジオキサンでアルカリ加水分解すると、lablab
oside Ｂおよび３−ヒドロキシ−３−メチルグルタル酸
（メグルトール）が得られた。得られた３−ヒドロキシ
−３−メチルグルタル酸は、Ｏ−（ｐ−ニトロベンジ
ル）−Ｎ，Ｎ’−イソプロピル尿素でニトロベンジル化
し、標品により逆相ＨＰＬＣで同定した。lablaboside
Ｄの ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（表
２）において、先のlablaboside Ｂおよびlablaboside
Ｃと比較することで、アグリコン由来の２４−エピ−ヘ
デラゲニン部分 [δ３．１６（ｍ，１８−Ｈ），３．２
２，４．２３（ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２４
−Ｈ₂ ）、３．３８（ｄｄ、Ｊ＝４．６，１２. ２Ｈ
ｚ，３−Ｈ），５．３７（ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）] 、β
−Ｄ−グルクロン酸基［δ４．９６（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈ
ｚ, １' −Ｈ）] 、β−Ｄ−ガラクトピラノシル基 [δ
５．７２（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ, １''−Ｈ）] 、α−Ｌ
−ラムノピラノシル基 [δ１．７５（ｄ，Ｊ＝６．４Ｈ
ｚ, ６ ''' −Ｈ ₃ ）、６．２２（ｂｒ ｓ，１''' −
Ｈ] 、β−Ｄ−グルコピラノシル基 [δ４．７６，４．
９２（ｂｏｔｈ ｄｄ−ｌｉｋｅ，６''''−Ｈ₂ ），
６．２２（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ、１''''−Ｈ）] および
３−ヒドロキシ−３−メチルグルタロイル基 [δ３．０
３，３．１５（ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，２−
Ｈ₂ ），３．１０，３．１７（ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１
５．３Ｈｚ，４−Ｈ₂ ），１．７３（ｓ，６−Ｈ₃ ）]
に由来するシグナルが観測された。ＨＭＢＣによって、
１''' 位水素と２''位炭素、１''位水素と２' 位炭素、
１′位水素とアグリコンの３位炭素、１''''位水素とア
グリコンの２８位炭素、および６''''位水素と３−ヒド
ロキシ−３−メチルグルタロイル基の１位炭素間に相関
が観測されるとともに、６''''位がアセチレーションシ
フトしていたことから、lablaboside Ｄの３−ヒドロキ
シ−３−メチルグルタロイル基を有する糖鎖構造が判明
した。以上の結果、lablaboside Ｄの構造を３−Ｏ−
［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラ
クトピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシド
ウロン酸] −２８−Ｏ− [６−Ｏ−（３−ヒドロキシ−
３−メチルグルタロイル）−β−Ｄ−グルコピラノシ
ル] ２４−エピ−ヘデラゲニンであると決定した。Chemical structure of lablaboside D: lablaboside
D is colorless fine crystals of mp 193.4-195.0 ° C.
Obtained. In the IR spectrum, 1741, 17
36, 1731 and 1724 cm^-1Ester group
And absorption based on carboxyl groups are observed
3419, 1076cm^-1Strong absorption was observed
This suggested a structure of oligoglucoside. FA
Analysis of B-MS [m / z 1285 (M + Na)⁺, M /
z1261 (MH)^-And m / z 1115 (M-
C₆H₁₁O_Four)^-, 955 (MC₁₂H₁₉O₉)^-, 9
53 (MC₁₂H_{twenty one}O₉)^-] And high resolution FAB-
MS gives molecular formula C₆₀H₉₄O₂₈It is clear that it has
became. When lablaboside D is methanolyzed, agri
When 24-epi-hederagenin derived from the kon part is obtained,
In both cases, methyl glucuronide and methyl gallon derived from constituent sugars
Cutoside, methylrhamnoside, and methylglucoside
Was obtained in a ratio of about 1: 1: 1: 1. Also 10% KOH
Lablab with alkaline hydrolysis with -50% dioxane
oside B and 3-hydroxy-3-methylglutaric acid
(Meglitol) was obtained. 3-hydroxy obtained
-3-Methylglutaric acid is O- (p-nitrobenzyl)
) Nitrobenzylation with -N, N'-isopropylurea
The product was identified by reverse phase HPLC using a standard. lablaboside
D's¹H-NMR and¹³C-NMR spectrum (Table
2) In lablaboside B and lablaboside
In comparison with C, 24-glycol derived from aglycone
Delagenin moiety [δ 3.16 (m, 18-H), 3.2
2, 4.23 (both d, J = 11.3 Hz, 24
-H_Two), 3.38 (dd, J = 4.6, 12.2H)
z, 3-H), 5.37 (br s, 12-H)], β
-D-glucuronic acid group [δ 4.96 (d, J = 7.6H
z, 1′-H)], β-D-galactopyranosyl group [δ
5.72 (d, J = 7.6 Hz, 1 ″ -H)], α-L
-Rhamnopyranosyl group [δ 1.75 (d, J = 6.4H
z, 6 '' '-H _Three), 6.22 (brs, 1 '' '-
H], β-D-glucopyranosyl group [δ4.76,4.
92 (both dd-like, 6 ""-H_Two),
6.22 (d, J = 7.9 Hz, 1 ″ ″ − H)] and
3-hydroxy-3-methylglutaroyl group [δ3.0
3, 3.15 (both d, J = 14.1 Hz, 2-
H_Two), 3.10, 3.17 (both d, J = 1)
5.3Hz, 4-H_Two), 1.73 (s, 6-H_Three)]
Was observed. By HMBC,
1 '' 'hydrogen and 2' 'carbon, 1' 'hydrogen and 2' carbon,
1 'hydrogen and 3-position carbon of aglycone, 1' '' 'hydrogen and a
Glycon 28th carbon, 6 '' '' hydrogen and 3-hydrogen
Correlation between 1st carbon of roxy-3-methylglutaroyl group
Is observed, and acetylation
Lablaboside D 3-hydroxy
A sugar chain structure having a 3--3-methylglutaroyl group is found
did. As a result, the structure of lablaboside D was changed to 3-O-
[Α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-gala
Cutopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranoside
Uronic acid] -28-O- [6-O- (3-hydroxy-
3-methylglutaroyl) -β-D-glucopyranosi
Ru] 24-epi-hederagenin.

【００２７】lablaboside Ｅの化学構造：lablaboside
Ｅはｍｐ２０２．８−２０４．５℃の無色微細結晶とし
て得られた。ＩＲスペクトルにおいて、３４１９、２９
３６、１７３６、１７１６、１６３８、および１０７５
ｃｍ^-1にハイドロキシル基、エステル基およびカルボキ
シル基に基づく吸収が観測された。ＦＡＢ−ＭＳの解析
［ｍ／ｚ１４３３（Ｍ＋Ｎａ）⁺ ，ｍ／ｚ１４０９（Ｍ
−Ｈ）^- および、２''位（もしくは４''''' 位）、２′
位、および２８位グリコシド結合の開裂より生じた各々
ｍ／ｚ１２６３（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ）^- 、１１０１（Ｍ
−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）^- 、および９５５（Ｍ−Ｃ₁₈Ｈ
₃₁Ｏ₁₃）^- ] と、高分解能ＦＡＢ−ＭＳにより分子式Ｃ
₆₆Ｈ₁₀₆ Ｏ₃₂を有することが明らかとなった。lablabos
ide Ｅをメタノリシスすると、アグリコン部分由来の２
４−エピ−ヒデラジニンが得られるとともに、構成糖由
来のメチルグルクロニド、メチルガラクトシド、メチル
ラムノシド、およびメチルグルコシドが約１：１：３：
１の比で得られた。５％Ｈ₂ ＳＯ₄ −ジオキサン（１：
１，ｖ／ｖ）で加水分解した後、各糖のトリメチルシリ
ルチアゾリジン誘導体のガスクロマトグラフィーから、
各々Ｄ−グルクロン酸、Ｄ−ガラクトース、Ｌ−ラムノ
ース、およびＤ−グルコースの立体配置が同定された。
lablaboside Ｅの ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−ＮＭＲスペ
クトル（表２）において、アグリコン由来の２４−エピ
−ヘデラゲニン部分 [δ３．１０（ｍ，１８−Ｈ），
３．０９，４．１７（ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈ
ｚ，２４−Ｈ₂ ）、３．３２（ｄｄ、Ｊ＝４．６，１
１．６Ｈｚ，３−Ｈ），５．４２（ｂｒ ｓ，１２−
Ｈ）] 、β−Ｄ−グルクロン酸基［δ４．９３（ｄ，Ｊ
＝７．７Ｈｚ、１' −Ｈ）] 、β−Ｄ−ガラクトピラノ
シル基 [δ５．７０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ、１''−
Ｈ）] 、３つのα−Ｌ−ラムノピラノシル基 [δ１．６
２（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ、６''''''−Ｈ₃ ）、１．７４
（ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ、６''' −Ｈ₃ ）、１．７５
（ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ、６''''' −Ｈ₃ ）、６．１８
（ｂｒ ｓ，１''' −Ｈ，１''''''−Ｈ）、６．２２
（ｂｒ ｓ，１''''' −Ｈ）] 、およびβ−Ｄ−グルコ
ピラノシル基 [δ６．１０（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，
１''''−Ｈ）]に由来するシグナルが観測された。３−
Ｏ−トリグリコシド部分の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルにお
いて、lablaboside Ｅがlablaboside Ｂ、Ｄ、およびデ
ヒドロソヤサポニンＩ（Ｋｉｔａｇａｗａら．薬学雑
誌、１０８、５４７−５５４（１９９８））のシグナル
データと重複することが明らかとなった。ＨＭＢＣによ
って、１''' 位水素と２''位炭素、１''位水素と２' 位
炭素、１’位水素とアグリコンの３位炭素、１''''''位
水素と４''''' 位炭素、１'''''位水素と２''''位水
素、および１''''位水素とアグリコンの２８位炭素間に
相関が観測され、lablaboside Ｅの糖鎖構造が判明し
た。以上の結果、lablaboside Ｅの構造を３−Ｏ−［α
−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−ガラクト
ピラノシル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシドウロ
ン酸] −２８−Ｏ− [α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→
４）−α−Ｌ−ラムノピラノシル（１→２）−β−Ｄ−
グルコピラノシル] ２４−エピ−ヘデラゲニンであると
決定した。Chemical structure of lablaboside E: lablaboside
E was obtained as colorless fine crystals, mp 202.8-204.5 ° C. In the IR spectrum, 3419, 29
36, 1736, 1716, 1638, and 1075
At cm ⁻¹ , absorption based on a hydroxyl group, an ester group and a carboxyl group was observed. Analysis of FAB-MS [m / z 1433 (M + Na) ⁺ , m / z 1409 (M
-H) ^- and, 2 '' position (or 4 '''''position),2'
M / z 1263 (M-C ₆ H ₁₁ O ₄ ) ⁻ , 1101 (M
^{_{-C 12 H 21 O 9) -}} , and 955 (M-C ₁₈ H
₃₁ O ₁₃ ) ^- ] and high-resolution FAB-MS
It was found to have ₆₆ H ₁₀₆ O ₃₂ . lablabos
When ide E is subjected to methanolysis, 2
4-Epi-hyderazinin is obtained, and methyl glucuronide, methyl galactoside, methyl rhamnoside, and methyl glucoside derived from constituent sugars are contained in about 1: 1: 3:
A ratio of 1 was obtained. 5% H ₂ SO ₄ - dioxane (1:
1, v / v), and from gas chromatography of a trimethylsilylthiazolidine derivative of each sugar,
The configurations of D-glucuronic acid, D-galactose, L-rhamnose, and D-glucose, respectively, were identified.
In the ¹ H-NMR and ¹³ C-NMR spectra of lablaboside E (Table 2), the 24-epi-hederagenin moiety derived from aglycone [δ 3.10 (m, 18-H),
3.09, 4.17 (both d, J = 11.3H)
z, 24-H2), 3.32 (dd, J = 4.6, ₁ )
1.6 Hz, 3-H), 5.42 (brs, 12-
H)], β-D-glucuronic acid group [δ 4.93 (d, J
= 7.7 Hz, 1′-H)], β-D-galactopyranosyl group [δ5.70 (d, J = 7.7 Hz, 1 ″-)
H)], three α-L-rhamnopyranosyl groups [δ1.6
2 (d, J = 6.1 Hz, 6 ″ ″ ″ − H ₃ ), 1.74
(D, J = 6.1Hz, 6 '''-H 3), 1.75
(D, J = 5.8 Hz, 6 ″ ′ ″ − H ₃ ), 6.18
(Brs, 1 '"-H, 1"""-H), 6.22
(Br s, 1 ″ ″ ′-H)] and a β-D-glucopyranosyl group [δ 6.10 (d, J = 8.2 Hz,
1 ″ ″-H)]. 3-
In the ¹³ C-NMR spectrum of the O-triglycoside moiety, lablaboside E overlaps with the signal data of lablaboside B, D and dehydrosoyasaponin I (Kitagawa et al. Pharmaceutical Magazine, 108, 547-554 (1998)). It became clear. By HMBC, 1 ′ hydrogen and 2 ″ carbon, 1 ″ hydrogen and 2 ′ carbon, 1 ′ hydrogen and aglycon 3 carbon, 1 ″ ″ hydrogen and 4 ′ Correlation was observed between carbon at '''', hydrogen at 1 '''''and hydrogen at 2''''and hydrogen at 1''''and carbon at 28 in aglycone, indicating the sugar chain of lalabboside E The structure turned out. As a result, the structure of lablaboside E was changed to 3-O- [α
-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-D-glucopyranosiduronic acid] -28-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1 →
4) -α-L-rhamnopyranosyl (1 → 2) -β-D-
Glucopyranosyl] 24-epi-hederagenin.

【００２８】lablaboside Ｆの化学構造：lablaboside
Ｆはｍｐ２００．６−２０２．０℃の無色微細結晶とし
て得られるとともに、ＩＲスペクトルにおいて、ハイド
ロキシル基、エステル基およびカルボキシル基に基づく
吸収が観測された。ＦＡＢ−ＭＳの解析［ｍ／ｚ１４１
７（Ｍ＋Ｎａ）⁺ 、ｍ／ｚ１３９３（Ｍ−Ｈ）^- およ
び、ｍ／ｚ１２４７（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ）^- ，１０８５
（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ ₂₁Ｏ₉ ）^- ，９３９（Ｍ−Ｃ₁₈Ｈ₃₁Ｏ₁₃）
^- ] と、高分解能ＦＡＢ−ＭＳにより分子式Ｃ₆₆Ｈ₁₀₆
Ｏ₃₁ を有することが明らかとなった。lablaboside Ｆ
をメタノリシスすると、アグリコン部分由来のオレアノ
ール酸が得られるとともに、構成糖由来のメチルグルク
ロニド、メチルガラクトシド、メチルラムノシド、およ
びメチルグルコシドが約１：１：３：１の比で得られ
た。酸加水分解処理後、各糖のトリメチルシリルチアゾ
リジン誘導体のガスクロマトグラフィーから、各々Ｄ−
グルクロン酸、Ｄ−ガラクトース 、Ｌ−ラムノース、
およびＤ−グルコースの立体配置が同定された。lablab
oside Ｆの ¹Ｈ−ＮＭＲおよび¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル
（表２）において、アグリコン由来のオレアノール酸部
分 [δ３．１０（ｍ，１８−Ｈ），３．２７（ｍ，３−
Ｈ），５．４３（ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）] 、β−Ｄ−グ
ルクロン酸基［δ５．０１（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１'
−Ｈ）] 、β−Ｄ−ガラクトピラノシル基 [δ５．６２
（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１″−Ｈ）] 、３つのα−Ｌ−
ラムノピラノシル基 [δ１．６２（ｄ，Ｊ＝６．３Ｈ
ｚ，６''''''−Ｈ₃ ）] 、１．７３（ｄ，Ｊ＝５．９Ｈ
ｚ，６''' −Ｈ₃), １．７４（ｄ, Ｊ＝５．６Ｈｚ,
６''''' −Ｈ₃ ）、６．２０，６．２２，６．６１（ｅ
ａｃｈ ｂｒ ｓ，１''''''−Ｈ，１''' −Ｈ，
１''''' −Ｈ）] 、およびβ−Ｄ−グルコピラノシル基
[δ６．１１（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ、１''''−Ｈ）] に
由来するシグナルが観測された。３−Ｏ−トリグリコシ
ド部分の¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトルにおいて、lablabosid
e ＦがカイカサポニンIII やlablaboside Ａのシグナル
データと、また２８−Ｏ−トリグリコシド部分はlablab
oside Ｅのシグナルデータと重複することが明らかとな
った。lablaboside Ｆのオリゴグリコシド構造において
は、最終的にＨＭＢＣによって１''' 位水素と２''位炭
素、１''位水素と２' 位炭素、１' 位水素とアグリコン
の３位炭素、１''''''位水素と４''''' 位炭素、
１''''' 位水素と２''''位水素、および１''''位水素と
アグリコンの２８位炭素間に相関が観測され、lablabos
ide Ｆの糖鎖構造が判明した。以上の結果、lablabosid
e Ｆの構造を３−Ｏ−［α−Ｌ−ラムノピラノシル（１
→２）−β−Ｄ−ガラクトピラノシル（１→２）−β−
Ｄ−グルコピラノシドウロン酸] −２８−Ｏ− [α−Ｌ
−ラムノピラノシル（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノ
シル（１→２）−β−Ｄ−グルコピラノシル] オレアノ
ール酸であると決定した。Chemical structure of lablaboside F: lablaboside
F is colorless fine crystals of mp 200.6-202.0 ° C
In the IR spectrum.
Based on loxyl, ester and carboxyl groups
Absorption was observed. Analysis of FAB-MS [m / z 141
7 (M + Na)⁺, M / z 1393 (MH)^-And
And m / z 1247 (M-C₆H₁₁O_Four)^-, 1085
(MC₁₂H _{twenty one}O₉)^-, 939 (MC₁₈H₃₁O₁₃)
^-] And molecular formula C by high resolution FAB-MS.₆₆H₁₀₆
O₃₁ It became clear to have. lablaboside F
Methanolysis shows that oleano
Acid, and methyl gluc derived from constituent sugars
Lonide, methylgalactoside, methylrhamnoside, and
And methyl glucoside in a ratio of about 1: 1: 3: 1
Was. After acid hydrolysis treatment, trimethylsilylthiazo
From gas chromatography of lysine derivatives, D-
Glucuronic acid, D-galactose, L-rhamnose,
And the configuration of D-glucose were identified. lablab
oside F's¹H-NMR and¹³C-NMR spectrum
In Table 2, oleanolic acid derived from aglycone
Min [δ 3.10 (m, 18-H), 3.27 (m, 3-
H), 5.43 (brs, 12-H)], β-D-g
Lucuronic acid group [δ 5.01 (d, J = 7.3 Hz, 1 ′
-H)], β-D-galactopyranosyl group [δ5.62
(D, J = 7.2 Hz, 1 ″ -H)], three α-L−
Rhamnopyranosyl group [δ 1.62 (d, J = 6.3H
z, 6 '' '' ''-H_Three)], 1.73 (d, J = 5.9H)
z, 6 '' '-H_Three), 1.74 (d, J = 5.6 Hz,
6 '' '' '-H_Three), 6.20, 6.22, 6.61 (e
ach br s, 1 ″ ″ ″ − H, 1 ′ ″ −H,
1 "" '-H)], and a β-D-glucopyranosyl group
[δ 6.11 (d, J = 8.2 Hz, 1 ″ ″ − H)]
A derived signal was observed. 3-O-triglycoside
Part of¹³In the C-NMR spectrum, lablabosid
e F is the signal of Kaikasaponin III and lablaboside A
The data and also the 28-O-triglycoside moiety
It is clear that it overlaps with the signal data of oside E
Was. In the oligoglycoside structure of lablaboside F
Is finally converted by HMBC to 1 '' hydrogen and 2 '' carbon
Element, 1 '' hydrogen and 2 'carbon, 1' hydrogen and aglycone
3rd carbon, 1 '' '' '' hydrogen and 4 '' '' '' carbon,
1 '' '' 'hydrogen and 2' '' 'hydrogen, and 1' '' 'hydrogen
A correlation was observed between the 28th carbon of the aglycone, and lablabos
The sugar chain structure of ide F was found. As a result, lablabosid
The structure of eF is represented by 3-O- [α-L-rhamnopyranosyl (1
→ 2) -β-D-galactopyranosyl (1 → 2) -β-
D-glucopyranoside uronic acid] -28-O- [α-L
-Rhamnopyranosyl (1 → 4) -α-L-rhamnopyrano
Sil (1 → 2) -β-D-glucopyranosyl] oleano
It was determined to be oleic acid.

【００２９】構造解析の分析値詳細：以上のlablabosid
e Ａ〜Ｆの分析値の詳細を以下に示す。Details of analytical values of structural analysis: lablabosid above
e Details of the analytical values of A to F are shown below.

【００３０】lablaboside Ａ：無色微細結晶、融点１８
４．０−１８５．５℃、 [α] Ｄ²⁶−９．３°（ｃ＝
１．２、ＭｅＯＨ）。高分解能ポジティブイオンＦＡＢ
−ＭＳ：Ｃ₅₄Ｈ₈₆Ｏ₂₃Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ) ⁺ ：１１２５．
５４５８（理論値）；１１２５．５４３６（実測値）。
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１９、２９４３、１７３６、１７
１６、１６７６、１０７６ｃｍ^-1。 ¹Ｈ−ＮＭＲ（ピリ
ジン−ｄ₅ 、５００ＭＨｚ）δ：０．８２、０．８８、
０．９１、１．０６、１．１３、１．２５、１．３６
（３Ｈ ｅａｃｈ，ａｌｌ ｓ，２５，３０，２９，２
６，２４，２７，２３−Ｈ₃ ）、１．７４（３Ｈ，ｄ，
Ｊ＝５．８Ｈｚ，６''' −Ｈ₃ ）、３．１７（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝３．１，１４．７Ｈｚ，１８−Ｈ）、３．３０
（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．６，１２．２Ｈｚ，３−Ｈ）、
５．０３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１' −Ｈ）、
５．３９（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）、５．６６（１
Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１''−Ｈ）、６．２５（１
Ｈ，ｂｒ ｓ，１''' −Ｈ）、６．２８（１Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８．０Ｈｚ，１''''−Ｈ）、¹³Ｃ−ＮＭＲ（ピリジン
−ｄ ₅ 、１２５ＭＨｚ）δｃ：表１に記載。ネガティブ
イオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１０１（Ｍ−
Ｈ）^- 、９３９（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₅ ）^- 、７９３（Ｍ−
Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）^- 。ポジティブイオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ
／ｚ）：１１２５（Ｍ＋Ｎａ）⁺ 。Lablaboside A: colorless fine crystals, melting point 18
4.0-185.5 ° C, [α] D²⁶−9.3 ° (c =
1.2, MeOH). High resolution positive ion FAB
-MS: C₅₄H₈₆O_{twenty three}Na (M + Na)⁺: 1125.
5458 (theoretical); 1125.5436 (actual).
IR (KBr): 3419, 2943, 1736, 17
16, 1676, 1076 cm^-1.¹H-NMR (pyri
Gin-d_Five, 500 MHz) δ: 0.82, 0.88,
0.91, 1.06, 1.13, 1.25, 1.36
(3H reach, all s, 25, 30, 29, 2
6,24,27,23-H_Three), 1.74 (3H, d,
J = 5.8Hz, 6 '' '-H_Three), 3.17 (1H, d
d, J = 3.1, 14.7 Hz, 18-H), 3.30
(1H, dd, J = 4.6, 12.2 Hz, 3-H),
5.03 (1H, d, J = 7.3 Hz, 1'-H),
5.39 (1H, brs, 12-H), 5.66 (1
H, d, J = 7.7 Hz, 1 ″ -H), 6.25 (1
H, brs, 1 '' '-H), 6.28 (1H, d, J
= 8.0 Hz, 1 ""-H),¹³C-NMR (pyridine
-D _Five, 125 MHz) δc: described in Table 1. Negative
Ion FAB-MS (m / z): 1101 (M-z
H)^-, 939 (M-C₆H₁₁O_Five)^-, 793 (M-
C₁₂H_{twenty one}O₉)^-. Positive ion FAB-MS (m
/ Z): 1125 (M + Na)⁺.

【００３１】lablaboside Ｂ：無色微細結晶、融点２１
９．６−２２０．５℃、 [α] Ｄ²⁵−１０．４°（ｃ＝
２．２、ＭｅＯＨ）。高分解能ポジティブイオンＦＡＢ
−ＭＳ：Ｃ₅₄Ｈ₈₆Ｏ₂₄Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ) ⁺ ：１１４１．
５４０７（理論値）；１１４１．５３８５（実測値）。
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４０９、２９４２、１７３６、１７
１６、１６７６、１０７５ｃｍ^-1。 ¹Ｈ−ＮＭＲ（ピリ
ジン−ｄ₅ 、５００ＭＨｚ）δ：０．６５、０．８８、
０．９０、１．０１、１．２６、１．４１（３Ｈ ｅａ
ｃｈ，ａｌｌ ｓ，２５，３０，２９，２６，２７，２
３−Ｈ₃ ）、１．７５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．１Ｈｚ，
６''' −Ｈ₃ ）、３．１５（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．３，
１３．８Ｈｚ，１８−Ｈ）、３．２２、４．２２（１
Ｈ，ｅａｃｈ，ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２４
−Ｈ₂ ）、３．３９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．０，１１．
６Ｈｚ，３−Ｈ）、４．９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈ
ｚ，１' −Ｈ）、５．３８（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１２−
Ｈ）、５．７２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１''−
Ｈ）、６．２１（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１''' −Ｈ）、６．
２７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１''''−Ｈ）、¹³Ｃ
−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ₅ 、１２５ＭＨｚ）δｃ：表１
に記載。ネガティブイオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１
１１７（Ｍ−Ｈ）^- 、９５５（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₅ ）^- 、
８０９（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）^- 。ポジティブイオンＦＡ
Ｂ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１１４１（Ｍ＋Ｎａ）⁺。Lablaboside B: colorless fine crystals, melting point 21
9.6-220.5 ° C., [α] D ²⁵ -10.4 ° (c =
2.2, MeOH). High resolution positive ion FAB
_{-MS: C 54 H 86 O 24} Na (M + Na) +: 1141.
5407 (theoretical); 1141.5385 (found).
IR (KBr): 3409, 2942, 1736, 17
16, 1676, 1075 cm ^-1 . ¹ H-NMR (pyridine-d ₅ , 500 MHz) δ: 0.65, 0.88,
0.90, 1.01, 1.26, 1.41 (3H ea
ch, all s, 25, 30, 29, 26, 27, 2
_{3H 3), 1.75 (3H,} d, J = 6.1Hz,
_{6 '''-H 3),} 3.15 (1H, dd, J = 4.3,
13.8 Hz, 18-H), 3.22, 4.22 (1
H, each, both d, J = 11.3 Hz, 24
_{-H 2), 3.39 (1H,} dd, J = 4.0,11.
6 Hz, 3-H), 4.96 (1 H, d, J = 7.4 H)
z, 1'-H), 5.38 (1H, brs, 12-
H), 5.72 (1H, d, J = 7.4 Hz, 1 ″ −)
H), 6.21 (1H, brs, 1 '''-H), 6.
27 (1H, d, J = 7.9 Hz, 1 ″ ″ − H), ¹³ C
-NMR (pyridine-d ₅ , 125 MHz) δc: Table 1
Described in. Negative ion FAB-MS (m / z): 1
117 (M−H) ⁻ , 955 (M−C ₆ H ₁₁ O ₅ ) ⁻ ,
_{809 (M-C 12 H 21} O 9) -. Positive ion FA
B-MS (m / z): 1141 (M + Na) ^<+> .

【００３２】lablaboside Ｃ：無色微細結晶、融点２２
２．０−２２３．５℃、 [α] Ｄ²⁴−２２．９°（ｃ＝
０．９７、ＭｅＯＨ）。高分解能ポジティブイオンＦＡ
Ｂ−ＭＳ：Ｃ₆₀Ｈ₉₆Ｏ₂₈Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ) ⁺ ：１２８
７．５９８６（理論値）；１２８７．５９９６（実測
値）。ＩＲ（ＫＢｒ）：３４０９、２９４０、１７３
６、１７１８、１６７６、１０７６ｃｍ^-1。 ¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ（ピリジン−ｄ₅ 、５００ＭＨｚ）δ：０．６３、
０．８０、０．８９、０．９９、１．２８、１．３５
（３Ｈ ｅａｃｈ，ａｌｌ ｓ，２５，３０，２９，２
６，２７，２３−Ｈ₃ ）、１．７９（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝
５．２Ｈｚ，６''''' −Ｈ₃ ）、１．８１（３Ｈ，ｄ，
Ｊ＝５．８Ｈｚ，６''' −Ｈ₃ ）、３．１０（１Ｈ，ｄ
ｄ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，１４．０Ｈｚ，１８−Ｈ）、３．
１３、４．１９（１Ｈ，ｅａｃｈ，ｂｏｔｈｄ，Ｊ＝１
１．０Ｈｚ，２４−Ｈ₂ ）、３．３４（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ
＝４．９，１２．２Ｈｚ，３−Ｈ）、４．９８（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１' −Ｈ）、５．４１（１Ｈ，ｂ
ｒ ｓ，１２−Ｈ）、５．８０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３
Ｈｚ，１''−Ｈ）、６．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈ
ｚ，１''''−Ｈ）、６．２８（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１'''
−Ｈ）、６．６６（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１''''' −Ｈ）。
¹³Ｃ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ₅ 、１２５ＭＨｚ）δｃ：
表１に記載。ネガティブイオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／
ｚ）：１２６３（Ｍ−Ｈ）^- 、１１１７（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ ₁₁
Ｏ₄ ）^- 、９５５（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）^- 。ポジティブ
イオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１２８７（Ｍ＋Ｎａ）
⁺ 。Lablaboside C: colorless fine crystals, melting point 22
2.0-223.5 ° C, [α] D^{twenty four}−22.9 ° (c =
0.97, MeOH). High resolution positive ion FA
B-MS: C₆₀H₉₆O₂₈Na (M + Na)⁺: 128
7.55986 (theoretical value); 1287.5996 (actual measurement)
value). IR (KBr): 3409, 2940, 173
6, 1718, 1676, 1076 cm^-1.¹H-NM
R (pyridine-d_Five, 500 MHz) δ: 0.63,
0.80, 0.89, 0.99, 1.28, 1.35
(3H reach, all s, 25, 30, 29, 2
6,27,23-H_Three), 1.79 (3H, d, J =
5.2Hz, 6 '' '' '-H_Three), 1.81 (3H, d,
J = 5.8Hz, 6 '' '-H_Three), 3.10 (1H, d
d, J = 4.9 Hz, 14.0 Hz, 18-H);
13, 4.19 (1H, reach, bothd, J = 1
1.0Hz, 24-H_Two), 3.34 (1H, dd, J
= 4.9, 12.2 Hz, 3-H), 4.98 (1H,
d, J = 7.4 Hz, 1'-H), 5.41 (1H, b
rs, 12-H), 5.80 (1H, d, J = 7.3)
Hz, 1 ″ -H), 6.19 (1H, d, J = 8.3H)
z, 1 ″ ″ − H), 6.28 (1H, brs, 1 ′ ″)
-H), 6.66 (1H, brs, 1 '""-H).
¹³C-NMR (pyridine-d_Five, 125 MHz) δc:
See Table 1. Negative ion FAB-MS (m /
z): 1263 (MH)^-, 1117 (MC₆H ₁₁
O_Four)^-, 955 (MC₁₂H_{twenty one}O₉)^-. positive
Ion FAB-MS (m / z): 1287 (M + Na)
⁺.

【００３３】lablaboside Ｄ：無色微細結晶、融点１９
３．４−１９５．０℃、 [α] Ｄ²⁶−１５．１°（ｃ＝
２．５、ＭｅＯＨ）。高分解能ポジティブイオンＦＡＢ
−ＭＳ：Ｃ₆₀Ｈ₉₄Ｏ₂₈Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ) ⁺ ：１２８５．
５８２９（理論値）；１２８５．５８７３（実測値）。
ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１９、２９４６、１７４１、１７
３６、１７３１、１７２４、１６３８、１０７６ｃ
ｍ^-1。 ¹Ｈ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ₅ 、５００ＭＨｚ）
δ：０．６８、０．８８、０．８９、１．００、１．２
５、１．４１、１．７３（３Ｈ ｅａｃｈ，ａｌｌ
ｓ，２５，２９，３０，２６，２７，２３，Ｈｍｇ−６
−Ｈ₃ ）、１．７５（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，
６''' −Ｈ₃ ）、３．０３、３．１５（１Ｈ ｅａｃ
ｈ，ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１４．１Ｈｚ，Ｈｍｇ−２−Ｈ
₂ ）、３．１０、３．１７（１Ｈ ｅａｃｈ，ｂｏｔｈ
ｄ，Ｊ＝１５．３Ｈｚ，Ｈｍｇ−４−Ｈ₂ ）、３．１
６（１Ｈ，ｍ，１８−Ｈ）、３．２２、４．２３（１
Ｈ，ｅａｃｈ，ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１１．３Ｈｚ，２４
−Ｈ₂ ）、３．３８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．６，１２．
２Ｈｚ，３−Ｈ）、４．７６、４．９２（１Ｈ ｅａｃ
ｈ，ｂｏｔｈ ｄｄ−ｌｉｋｅ，６''''−Ｈ₂ ）、４．
９６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１' −Ｈ）、５．３
７（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）、５．７２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，１''−Ｈ）、６．２２（１Ｈ，
ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，１''''−Ｈ）、６．２２（１Ｈ，
ｂｒ ｓ，１''' −Ｈ）。¹³Ｃ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ
₅ 、１２５ＭＨｚ）δｃ：表２に記載。ネガティブイオ
ンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）；１２６１（Ｍ−Ｈ）^-、１
１１５（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ）^- 、９５５（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₁₉
Ｏ₉ ）^- 、９５３（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ₂₁Ｏ₉ ）^- 。ポジティブ
イオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１２８５（Ｍ＋Ｎａ）
⁺ 。Lablaboside D: colorless fine crystals, melting point 19
3.4-195.0 ° C., [α] D ²⁶ −15.1 ° (c =
2.5, MeOH). High resolution positive ion FAB
_{-MS: C 60 H 94 O 28} Na (M + Na) +: 1285.
5829 (theoretical); 1285.5873 (found).
IR (KBr): 3419, 2946, 1741, 17
36, 1731, 1724, 1638, 1076c
m ^-1 . ¹ H-NMR (pyridine-d ₅ , 500 MHz)
δ: 0.68, 0.88, 0.89, 1.00, 1.2
5, 1.41, 1.73 (3H reach, all
s, 25, 29, 30, 26, 27, 23, Hmg-6
−H ₃ ), 1.75 (3H, d, J = 6.4 Hz,
6 ′ ″-H ₃ ), 3.03, 3.15 (1H eac
h, both d, J = 14.1 Hz, Hmg-2-H
₂ ), 3.10, 3.17 (1H reach, both
d, J = 15.3Hz, Hmg- 4-H 2), 3.1
6 (1H, m, 18-H), 3.22, 4.23 (1
H, each, both d, J = 11.3 Hz, 24
_{-H 2), 3.38 (1H,} dd, J = 4.6,12.
2Hz, 3-H), 4.76, 4.92 (1H eac
h, both dd-like, 6 ″ ″-H ₂ );
96 (1H, d, J = 7.6 Hz, 1'-H), 5.3
7 (1H, brs, 12-H), 5.72 (1H,
d, J = 7.6 Hz, 1 ″ -H), 6.22 (1H,
d, J = 7.9 Hz, 1 ″ ″ − H), 6.22 (1H,
brs, 1 '''-H). ¹³ C-NMR (pyridine-d
₅ , 125 MHz) δc: described in Table 2. Negative ion FAB-MS (m / z); 1261 (MH) ^- , 1
_{115 (M-C 6 H 11} O 4) -, 955 (M-C 12 H 19
^{_{O 9) -, 953 (M}} -C 12 H 21 O 9) -. Positive ion FAB-MS (m / z): 1285 (M + Na)
⁺ .

【００３４】lablaboside Ｅ：無色微細結晶、融点２０
２．８−２０４．５℃、 [α] Ｄ²⁵−２０．３°（ｃ＝
２．８、ＭｅＯＨ）。高分解能ポジティブイオンＦＡＢ
−ＭＳ：Ｃ₆₆Ｈ₁₀₆ Ｏ₃₂Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ) ⁺ ：１４３
３．６５６５（理論値）；１４３３．６５４７（実測
値）。ＩＲ（ＫＢｒ）：３４１９、２９３６、１７３
６、１７１６、１６３８、１０７５ｃｍ^-1。 ¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ（ピリジン−ｄ₅ 、５００ＭＨｚ）δ：０．６５、
０．７９、０．８８、０．９８、１．３０、１．４３
（３Ｈ ｅａｃｈ，ａｌｌ ｓ，２５，３０，２９，２
６，２３，２７−Ｈ₃ ）、１．６２（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝
６．１Ｈｚ，６''''''−Ｈ₃ ）、１．７４（３Ｈ，ｄ，
Ｊ＝６．１Ｈｚ，６''' −Ｈ₃ ）、１．７５（３Ｈ，
ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，６''''' −Ｈ₃ ）、３．０９、
４．１７（１Ｈ ｅａｃｈ，ｂｏｔｈ ｄ，Ｊ＝１１．
３Ｈｚ，２４−Ｈ₂ ）、３．１０（１Ｈ，ｍ，１８−
Ｈ）、３．３２（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝４．６，１１．６Ｈ
ｚ，３−Ｈ）、４．９３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，
１' −Ｈ）、５．４２（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）、
５．７０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１''−Ｈ）、
６．１０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１''''−Ｈ）、
６．１８（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１''''''−Ｈ）、６．１８
（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１''' −Ｈ）、６．６２（１Ｈ，ｂ
ｒ ｓ，１''''' −Ｈ）。¹³Ｃ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ
₅ 、１２５ＭＨｚ）δｃ：表２に記載。ネガティブイオ
ンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４０９（Ｍ−Ｈ）^- 、１
２６３（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ） ^- 、１１０１（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ
₂₁Ｏ₉ ）^- 、９５５（Ｍ−Ｃ₁₈Ｈ₃₁Ｏ₁₃）^- 。ポジティ
ブイオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４３３（Ｍ＋Ｎ
ａ）⁺ 。Lablaboside E: colorless fine crystals, melting point 20
2.8-204.5 ° C, [α] D^{twenty five}-20.3 ° (c =
2.8, MeOH). High resolution positive ion FAB
-MS: C₆₆H₁₀₆O₃₂Na (M + Na)⁺: 143
3.6565 (theoretical value); 1433.6546 (actual measurement)
value). IR (KBr): 3419, 2936, 173
6, 1716, 1638, 1075 cm^-1.¹H-NM
R (pyridine-d_Five, 500 MHz) δ: 0.65,
0.79, 0.88, 0.98, 1.30, 1.43
(3H reach, all s, 25, 30, 29, 2
6,23,27-H_Three), 1.62 (3H, d, J =
6.1Hz, 6 "" "-H_Three), 1.74 (3H, d,
J = 6.1 Hz, 6 ″ ′ − H_Three), 1.75 (3H,
d, J = 5.8 Hz, 6 ″ ′ ″ − H_Three), 3.09,
4.17 (1H reach, both d, J = 11.
3Hz, 24-H_Two), 3.10 (1H, m, 18-
H), 3.32 (1H, dd, J = 4.6, 11.6H)
z, 3-H), 4.93 (1H, d, J = 7.7 Hz,
1′-H), 5.42 (1H, brs, 12-H),
5.70 (1H, d, J = 7.7 Hz, 1 ″ -H),
6.10 (1H, d, J = 8.2 Hz, 1 ″ ″ − H),
6.18 (1H, brs, 1 "" "-H), 6.18
(1H, brs, 1 '' '-H), 6.62 (1H, b
rs, 1 '' '' '-H).¹³C-NMR (pyridine-d
_Five, 125 MHz) δc: described in Table 2. Negative IO
FAB-MS (m / z): 1409 (MH)^-, 1
263 (MC₆H₁₁O_Four) ^-, 1101 (MC₁₂H
_{twenty one}O₉)^-, 955 (MC₁₈H₃₁O₁₃)^-. Positive
Bion FAB-MS (m / z): 1433 (M + N
a)⁺.

【００３５】lablaboside Ｆ：無色微細結晶、融点２０
０．６−２０２．０℃、 [α] Ｄ²⁴−４６．１°（ｃ＝
１．３、ＭｅＯＨ）。高分解能ポジティブイオンＦＡＢ
−ＭＳ：Ｃ₆₆Ｈ₁₀₆ Ｏ₃₁Ｎａ（Ｍ＋Ｎａ) ⁺ ：１４１
７．６６１６（理論値）；１４１７．６６３５（実測
値）。ＩＲ（ＫＢｒ）：３４２３、２９４０、１７３
６、１７１６、１６３８、１０７８ｃｍ^-1。 ¹Ｈ−ＮＭ
Ｒ（ピリジン−ｄ₅ 、２７０ＭＨｚ）δ：０．８０、
０．８３、１．０４、１．０８、１．２７、１．４０、
１．８２（３Ｈ ｅａｃｈ，ａｌｌ ｓ，３０，２５，
２６，２４，２３，２７，２９−Ｈ₃ ）、１．６２（３
Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，６''''''−Ｈ₃ ）、１．７３
（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．９Ｈｚ，６''' −Ｈ₃ ）、１．７
４（３Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．６Ｈｚ，６''''' −Ｈ₃ ）、
３．１０（１Ｈ，ｍ，１８−Ｈ）、３．２７（１Ｈ，
ｍ，３−Ｈ）、５．０１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，
１' −Ｈ）、５．４３（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１２−Ｈ）、
５．６２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１''−Ｈ）、
６．１１（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１''''−Ｈ）、
６．２０（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１''''''−Ｈ）、６．２２
（１Ｈ，ｂｒ ｓ，１''' −Ｈ）、６．６１（１Ｈ，ｂ
ｒ ｓ，１''''' −Ｈ）。¹³Ｃ−ＮＭＲ（ピリジン−ｄ
₅ 、６８ＭＨｚ）δｃ：表２に記載。ネガティブイオン
ＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１３９３（Ｍ−Ｈ）^- 、１２
４７（Ｍ−Ｃ₆ Ｈ₁₁Ｏ₄ ）^- 、１０８５（Ｍ−Ｃ₁₂Ｈ ₂₁
Ｏ₉ ）^- 、９３９（Ｍ−Ｃ₁₈Ｈ₃₁Ｏ₁₃）^- 。ポジティブ
イオンＦＡＢ−ＭＳ（ｍ／ｚ）：１４１７（Ｍ＋Ｎａ）
⁺ 。Lablaboside F: colorless fine crystals, melting point 20
0.6-202.0 ° C, [α] D^{twenty four}−46.1 ° (c =
1.3, MeOH). High resolution positive ion FAB
-MS: C₆₆H₁₀₆O₃₁Na (M + Na)⁺: 141
7.6616 (theoretical value); 1417.6635 (actual measurement)
value). IR (KBr): 3423, 2940, 173
6, 1716, 1638, 1078cm^-1.¹H-NM
R (pyridine-d_Five, 270 MHz) δ: 0.80,
0.83, 1.04, 1.08, 1.27, 1.40,
1.82 (3Heach, alls, 30, 25,
26, 24, 23, 27, 29-H_Three), 1.62 (3
H, d, J = 6.3 Hz, 6 ″ ″ ″ − H_Three), 1.73
(3H, d, J = 5.9 Hz, 6 '' '-H_Three) 1.7
4 (3H, d, J = 5.6 Hz, 6 ′ ″ ″ − H_Three),
3.10 (1H, m, 18-H), 3.27 (1H,
m, 3-H), 5.01 (1H, d, J = 7.3 Hz,
1′-H), 5.43 (1H, brs, 12-H),
5.62 (1H, d, J = 7.2 Hz, 1 ″ -H),
6.11 (1H, d, J = 8.2 Hz, 1 ″ ″ − H),
6.20 (1H, brs, 1 "" "-H), 6.22
(1H, brs, 1 '' '-H), 6.61 (1H, b
rs, 1 '' '' '-H).¹³C-NMR (pyridine-d
_Five, 68 MHz) δc: described in Table 2. Negative ion
FAB-MS (m / z): 1393 (MH)^-, 12
47 (MC₆H₁₁O_Four)^-, 1085 (MC₁₂H _{twenty one}
O₉)^-, 939 (M-C₁₈H₃₁O₁₃)^-. positive
Ion FAB-MS (m / z): 1417 (M + Na)
⁺.

【００３６】[0036]

【表１】 [Table 1]

【００３７】[0037]

【表２】 [Table 2]

【００３８】上記のような新規なサポニンlablaboside
類をはじめとする本発明のオレアナン型ビスデスモシド
サポニンは、卵白アルブミン（以下、ＯＶＡと記す）を
抗原としたときに、マウスの血中抗ＯＶＡ抗体価を上昇
させる。免疫原接種後３週間目の血中抗体価を測定する
と、キラヤサポニンＱＳ−２１以上の免疫賦活活性を有
する。このとき接種部位には、局所反応あるいは膨張形
成を含めて、何ら局所反応を引き起こさない。The novel saponin lablaboside as described above
Oleanane-type bisdesmosidic saponins of the present invention, including those of the class, increase the anti-OVA antibody titer in the blood of mice when ovalbumin (hereinafter referred to as OVA) is used as an antigen. When the antibody titer in the blood is measured three weeks after the inoculation of the immunogen, it has an immunostimulatory activity equal to or higher than that of Kirayasaponin QS-21. At this time, no local reaction is caused at the inoculation site, including a local reaction or swelling.

【００３９】また、上記新規なサポニンlablaboside 類
をはじめとする本発明のオレアナン型ビスデスモシドサ
ポニンは、体液性免疫を賦活する効果を有する。結果的
に、血中イムノグロブリンＧ濃度（ＩｇＧ１濃度）を増
大させ、抗原、特に可溶性抗原に対するアジュバント効
果を発揮する。さらに、新規なサポニンlablaboside類
をはじめとした本発明のオレアナン型ビスデスモシドサ
ポニンは、細胞性免疫賦活効果も有する。結果的には、
これらのサポニンによる細胞性免疫賦活効果によって、
生体はウイルス感染による致死を回避することができ
る。The oleanane-type bisdesmoside saponins of the present invention, including the novel saponins lalabbosides, have an effect of activating humoral immunity. As a result, the blood immunoglobulin G concentration (IgG1 concentration) is increased and exerts an adjuvant effect on antigens, particularly soluble antigens. Furthermore, the oleanane-type bisdesmoside saponins of the present invention, including the novel saponins lablabosides, also have a cellular immunostimulatory effect. In terms of results,
Due to the cellular immune stimulating effect of these saponins,
The living body can avoid lethality due to viral infection.

【００４０】上記新規なサポニンlablaboside 類をはじ
めとする本発明のオレアナン型ビスデスモシドサポニン
は、免疫量の２０倍量をマウス腹腔内に接種しても、マ
ウスは何ら異常を示さない。キラヤサポニンでは死亡に
至る接種量でも、lablaboside 類においては死亡例はな
い。これらのオレアナン型ビスデスモシドサポニンは、
従来のキラヤサポニンＱＳ−２１と比較して免疫賦活活
性が高く、かつ、安全性の高いものである。The oleanane-type bisdesmosidic saponins of the present invention including the novel saponins lablabosides described above do not show any abnormality even when inoculated intraperitoneally with a 20-fold immunization dose. There is no death in the case of lablabosides, even at the dose of killa saponin that causes death. These oleanan-type bisdesmoside saponins are:
It has higher immunostimulatory activity and higher safety than conventional Kirayasaponin QS-21.

【００４１】[0041]

【実施例】（１）免疫賦活活性の測定方法： (a) 免疫原の調製と接種；リン酸緩衝食塩水０．５ｍｌ
に、本発明のlablaboside 類を各々２００μｇ、ＯＶＡ
１００μｇを加えて、リン酸緩衝食塩水にて終濃度１．
０ｍｌにする。これを免疫原として、０．１ｍｌ／dose
をｄｄＹマウス雌４週齢の大腿部筋肉内に接種する。接
種後３週目にキャピラリーグラスにて２０μｌの眼窩採
血を行う。得られた血液は、１２，０００ｒｐｍ、５分
間遠心分離して、上清を抗ＯＶＡ抗体価の測定に供す
る。EXAMPLES (1) Method of measuring immunostimulatory activity: (a) Preparation and inoculation of immunogen; 0.5 ml of phosphate buffered saline
In addition, 200 μg of each of the lablabosides of the present invention, OVA
100 μg was added, and the final concentration was adjusted to 1.0 with phosphate buffered saline.
Make up to 0 ml. Using this as an immunogen, 0.1 ml / dose
Is inoculated intramuscularly into the thigh muscle of a 4-week-old female ddY mouse. Three weeks after the inoculation, 20 μl of orbital blood is collected using a capillary glass. The obtained blood is centrifuged at 12,000 rpm for 5 minutes, and the supernatant is subjected to measurement of anti-OVA antibody titer.

【００４２】（２）マウス血中抗ＯＶＡ抗体価の測定
（受身赤血球凝集反応法、以下ＰＨＡ法と記す）： （ａ）ＯＶＡ固定赤血球の調製；リン酸緩衝食塩水１０
ｍｌに、ＯＶＡ５０ｍｇおよびヒツジ生血球０．４ｍｌ
（ｐａｃｋｅｄ ｃｅｌｌ ｖｏｌ．）を添加し、２．
５％グルタルアルデヒド３ｍｌを滴下し、３７℃下、攪
拌器で１時間攪拌する。遠心後、血球をリン酸緩衝食塩
水１０ｍｌにて洗浄し、１ＭグリシンＮａＯＨ（ｐＨ
７．２）１ｍｌに浮遊し、４℃、１晩静置する。再び血
球をリン酸緩衝食塩水１０ｍｌにて洗浄し、血球の終濃
度が１％（ｖ／ｖ）となるようにゼラチンベロナールバ
ッファー（以下ＧＶＢと記す）に浮遊、これをＯＶＡ固
定赤血球とする。 （ｂ）ＰＨＡ価の測定；被検マウス血清をＧＶＢにて２
段階希釈し、９６ウェルＵ字底マイクロタイタープレー
ト（住友ベークライト社製）に１００μｌずつ添加す
る。次に、ＯＶＡ固定赤血球２５μｌを各ウェルに添加
して、プレートミキサーにて攪拌、室温下４時間静置す
る。プレート管底の血球凝集物の沈降円の大きさおよび
色調を、陽性／陰性対照血清群のものと比較し、陽性を
示す最大希釈倍数をＰＨＡ価すなわち被検血清の抗ＯＶ
Ａ抗体価とする。 （ｃ）参照群の設定；アジュバント活性物質の参照陽性
群としてキラヤサポニンＱＳ−２１接種群をおく。ま
た、参照陰性としては、サポニン未添加群を設定する。
なお、キラヤサポニンＱＳ−２１は、特表平７−５０４
１５６号公報、Ｖａｃｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．１３，Ｎｏ．
１５，ｐ１４０３−１４１０，１９９５の記載に基づき
調製した。 （ｄ）抗ＯＶＡ抗体価の測定；９６ウェルＵ字底マイク
ロタイタープレート（グライナー社製）に炭酸緩衝液で
０．１％に希釈したＯＶＡ溶液を１５０μｌ／ｗｅｌｌ
添加し、３７℃下、２時間感作、固相する。プレートを
ＴｗｅｅｎＰＢＳ（界面活性剤Ｔｗｅｅｎ２０を含むり
ん酸緩衝食塩水）にて３回洗浄後、ＴｗｅｅｎＰＢＳに
て１：１００に希釈した被検マウス血清を１００μｌ／
ｗｅｌｌ添加し、３７℃下、１時間感作する。プレート
をＴｗｅｅｎＰＢＳにて３回洗浄後、ＴｗｅｅｎＰＢＳ
にて１：５０００に希釈したペロキシダーゼ標識抗マウ
スＴｏｔａｌ ＩｇＧ、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２ａ、ＩｇＧ
２ｂ、およびＩｇＭを１００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、３
７℃下、１時間感作する。プレートをＴｗｅｅｎＰＢＳ
にて３回洗浄後、ｏ−フェニレンジアミン溶液（リン酸
クエン酸緩衝液２５ｍｌにｏ−フェニレンジアミン１０
ｍｇ／錠を溶解し、３０％過酸化水素水１０μｌを添加
したもの）を１００μｌ／ｗｅｌｌ添加し、２５℃下、
３０分感作、発色させる。２Ｎ硫酸を５０μｌ／ｗｅｌ
ｌ添加して、反応を停止する。４９２ｎｍの吸光度を抗
ＯＶＡ抗体価（ＥＬＩＳＡ価）とする。キラヤサポニン
ＱＳ−２１接種群の抗体サブクラス各々のＥＬＩＳＡ価
を１．０としたときのＥＬＩＳＡ比と比較した。(2) Measurement of anti-OVA antibody titer in mouse blood (passive hemagglutination test, hereinafter referred to as PHA method): (a) Preparation of OVA-fixed red blood cells; phosphate buffered saline 10
ml of OVA and 0.4 ml of live sheep blood cells
(Packed cell vol.), And 2.
3 ml of 5% glutaraldehyde is added dropwise, and the mixture is stirred at 37 ° C. for 1 hour with a stirrer. After centrifugation, the blood cells were washed with 10 ml of phosphate buffered saline, and 1M glycine NaOH (pH
7.2) Suspend in 1 ml and leave at 4 ° C overnight. The blood cells are washed again with 10 ml of a phosphate buffered saline, and suspended in a gelatin veronal buffer (hereinafter referred to as GVB) so that the final concentration of the blood cells becomes 1% (v / v), which is used as OVA-fixed red blood cells. . (B) Measurement of PHA titer;
Dilute serially and add 100 μl each to a 96-well U-bottom microtiter plate (Sumitomo Bakelite). Next, 25 μl of OVA-fixed red blood cells are added to each well, and the mixture is stirred with a plate mixer and allowed to stand at room temperature for 4 hours. The size and color of the sedimentation circle of the hemagglutinating substance at the bottom of the plate were compared with those of the positive / negative control sera, and the maximum dilution that showed positive was determined by the PHA titer, ie, the anti-OV of the test serum.
A antibody titer. (C) Setting of a reference group: A Kirayasaponin QS-21 inoculated group is set as a reference positive group for the adjuvant active substance. In addition, a saponin-free group is set as a reference negative.
In addition, Kirayasaponin QS-21 is listed in Tokuhei 7-504.
No. 156, Vaccine, Vol. 13, No.
15, p1403-1410, 1995. (D) Measurement of anti-OVA antibody titer; 150 μl / well of an OVA solution diluted to 0.1% with a carbonate buffer in a 96-well U-bottom microtiter plate (manufactured by Greiner)
Add, sensitize at 37 ° C for 2 hours, and solidify. The plate was washed three times with Tween PBS (a phosphate buffered saline containing a surfactant Tween 20), and 100 μl / ml of test mouse serum diluted 1: 100 with Tween PBS was used.
Add wells and sensitize at 37 ° C for 1 hour. After washing the plate three times with TweenPBS, TweenPBS
Peroxidase-labeled anti-mouse Total IgG, IgG1, IgG2a, IgG diluted 1: 5000
2b and IgM were added at 100 μl / well, and 3
Sensitize at 7 ° C for 1 hour. Plate Tween PBS
After washing three times with o-phenylenediamine solution (25 ml of phosphate citrate buffer in 10 ml of o-phenylenediamine 10
mg / tablet, and 10 μl of 30% hydrogen peroxide solution) were added thereto, and 100 μl / well was added thereto.
Sensitize for 30 minutes and develop color. 50 μl / well of 2N sulfuric acid
The reaction is stopped by adding 1 l. The absorbance at 492 nm is defined as the anti-OVA antibody titer (ELISA titer). The comparison was made with the ELISA ratio when the ELISA value of each antibody subclass of the Kirayasaponin QS-21 inoculated group was set to 1.0.

【００４３】ＰＨＡ価の測定結果を図２に示す。図２か
ら明らかなように、本発明のlablaboside 群をはじめと
する一般式〔Ｉ〕、一般式〔II〕で示されるオレアナン
型ビスデスモシドサポニンは、キラヤサポニンＱＳ−２
１接種群以上のＰＨＡ価を示した。また、これらのサポ
ニンはキラヤサポニンＱＳ−２１接種群と比較しても群
内でのばらつきが小さく、安定した値を示す。このこと
から、一般式〔Ｉ〕、一般式〔II〕で示されるオレアナ
ン型ビスデスモシドサポニンのオレアナン基本骨格が活
性に必要な構造であることが明らかとなった。FIG. 2 shows the measurement results of the PHA value. As is clear from FIG. 2, the oleanan-type bisdesmosidic saponins represented by the general formulas [I] and [II], including the lablaboside group of the present invention, are derived from the Kirayasaponin QS-2.
The PHA value of one or more inoculated groups was shown. In addition, these saponins show less variation within the group and a stable value even when compared to the Kiraya saponin QS-21 inoculated group. From this, it was revealed that the oleanane basic skeleton of the oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the general formulas [I] and [II] has a structure required for the activity.

【００４４】次に、マウス血中抗ＯＶＡ抗体の測定結果
を図３に示す。図３から明らかなよに、キラヤサポニン
ＱＳ−２１の示すＥＬＩＳＡ価を各々１．０としたとき
のＥＬＩＳＡ価を比較したところ、ＩｇＧ１はすべての
lablaboside 型サポニンでキラヤサポニンＱＳ−２１以
上の値を示した。また、ＩｇＧ２ａに関しては、キラヤ
サポニンＱＳ−２１と同等の値を示した。Next, FIG. 3 shows the measurement results of anti-OVA antibody in mouse blood. As is clear from FIG. 3, when the ELISA values of Quiraya saponin QS-21 were set to 1.0, the IgG1 was found to be all IgG1.
The lablaboside type saponin showed a value higher than Kirayasaponin QS-21. In addition, IgG2a showed a value equivalent to that of Quillaja saponin QS-21.

【００４５】（３）ＰＲＶ抗原の接種と攻撃試験： （ａ）不活化ウイルス抗原液の調製；７．５×１０⁷ Ｐ
ＦＵ／ｍｌのＰＲＶウイルス液に終濃度０．１％となる
ようにホルマリンを添加して、３７℃下、２日間静置す
る。この液をリン酸緩衝食塩水に２日間透析して、不活
性化ウイルス抗原液とする。 （ｂ）免疫原の調製と接種；抗原としてホルマリン不活
化ＰＲＶウイルス（豚ヘルペスウイルス）抗原液を用い
る。抗原液は、マウス１ｄｏｓｅあたりＰＲＶウイルス
７．５×１０⁶ ＰＦＵ（不活化処理前の数値）、および
lablaboside 類各々を２０μｇとなるようにリン酸緩衝
食塩水に加える。これを免疫原として、０．１ｍｌ／ｄ
ｏｓｅをｄｄＹマウス雌４週齢の右大腿部筋肉内に接種
する。免疫原接種後４週目に１ｄｏｓｅあたり２００Ｌ
Ｄ（／０．１ｍｌ）のＰＲＶウイルス液を背部皮下に接
種する。攻撃後１週間のマウス生存数を記録、（生存率
％）＝（生存数）／（供試数）を算出し、活性の指標と
する。 （ｃ）結果；ＰＲＶ抗原の攻撃試験結果を図４に示す。
図４から明らかなように、免疫原接種群においてはマウ
スの生存率が高く、７０〜８０％となった。この結果よ
り、本発明のlablaboside 型サポニンを含む免疫原を接
種した群は、キラヤサポニンを含む免疫原を接種した場
合に匹敵する生存率を示すことが明らかとなった。(3) PRV antigen inoculation and challenge test: (a) Preparation of inactivated virus antigen solution; 7.5 × 10 ⁷ P
Formalin is added to the FU / ml PRV virus solution to a final concentration of 0.1%, and the mixture is allowed to stand at 37 ° C. for 2 days. This solution is dialyzed against phosphate buffered saline for 2 days to obtain an inactivated virus antigen solution. (B) Preparation and inoculation of immunogen; Formalin-inactivated PRV virus (porcine herpes virus) antigen solution is used as an antigen. The antigen solution contained 7.5 × 10 ⁶ PFU of PRV virus per mouse dose (the value before inactivation treatment), and
Add 20 μg of each lablaboside to phosphate buffered saline. Using this as an immunogen, 0.1 ml / d
ose is inoculated into the right thigh muscle of a 4-week-old female ddY mouse. 200 L per dose 4 weeks after immunogen inoculation
D (/0.1 ml) PRV virus solution is inoculated subcutaneously on the back. The number of surviving mice for one week after the challenge is recorded, and (survival%) = (surviving number) / (test number) is calculated and used as an index of activity. (C) Results: The results of the PRV antigen challenge test are shown in FIG.
As is clear from FIG. 4, the survival rate of the mice was high in the immunogen-inoculated group, being 70 to 80%. These results revealed that the group inoculated with the immunogen containing the lalaboside-type saponin of the present invention exhibited a survival rate comparable to that inoculated with the immunogen containing Kiraya saponin.

【００４６】（４）毒性試験： （ａ）試験方法；本発明のlablaboside 類およびキラヤ
サポニンＱＳ−２１各々を４００、２００、および１０
０μｇ／０．２ｍｌ／ｄｏｓｅとなるようにリン酸緩衝
食塩水に溶解する。これをｄｄＹマウス雌４週齢の腹腔
内に接種する。接種後１週間後の生存率を記録し、これ
を毒性の指標とする。 (b) 結果；毒性試験結果を表３に示す。(4) Toxicity test: (a) Test method: Lablabosides of the present invention and Quillajasaponin QS-21 were respectively 400, 200 and 10
Dissolve in phosphate buffered saline to a concentration of 0 μg / 0.2 ml / dose. This is inoculated intraperitoneally into a 4-week-old female ddY mouse. One week after inoculation, the survival rate is recorded and used as an index of toxicity. (b) Results: The results of the toxicity test are shown in Table 3.

【００４７】[0047]

【表３】 [Table 3]

【００４８】表３の結果から、キラヤサポニンＱＳ−２
１においては、４００μｇ／ｄｏｓｅ接種群で全頭が死
亡したのに対して、本発明のlablaboside 類においては
死亡例は確認されなかった。lablaboside 類は、通常の
免疫量の２０倍量の４００μｇ／ｄｏｓｅでもマウスに
毒性を示さないことから、低毒性のアジュバントとして
有用であることが明らかとなった。From the results in Table 3, it was found that Kirayasaponin QS-2
In No. 1, all animals died in the 400 μg / dose inoculated group, whereas no deaths were observed in the lablabosides of the present invention. Lablabosides do not show toxicity in mice even at a dose of 400 μg / dose which is 20 times the normal immunization dose, indicating that they are useful as a low-toxicity adjuvant.

【００４９】[0049]

【発明の効果】以上から、新規なサポニンlablaboside
類をはじめとする本発明のオレアナン型サポニンは、Ｏ
ＶＡのような可溶化抗原に対する抗体価を上昇させるこ
とが明らかとなった。これらlablaboside 類をはじめと
するオレアナン型サポニンは、可溶化抗原に対する抗
体、特にＩｇＧ１抗体を産生を増大させる。また、Ｉｇ
Ｇ２ａ抗体もキラヤサポニンＱＳ−２１と同等に増大さ
せる。また、豚ヘルペス不活化ウイルス抗原（ＰＲＶウ
イルス抗原）と混合して接種すると、当該ウイルスの感
染による致死を回避させる高い免疫賦活活性を有するこ
とが明らかとなった。さらにlablaboside 類は、通常の
免疫量の２０倍量の４００μｇ／ｄｏｓｅでもマウスに
毒性を示さない。従って、本発明のサポニンを含むアジ
ュバントは、キラヤサポニンＱＳ−２１と比較して免疫
賦活活性が高く、かつ安全性の高いアジュバントであ
る。From the above, the novel saponin lalabboside
Oleanane-type saponins of the present invention, including
It was revealed that the antibody titer against a solubilized antigen such as VA was increased. Oleanan-type saponins, including these lablabosides, increase the production of antibodies to solubilized antigens, especially IgG1 antibodies. Also, Ig
The G2a antibody also increases the amount of Kirayasaponin QS-21. In addition, it was revealed that when inoculated with a mixture of pig herpes inactivated virus antigen (PRV virus antigen) and inoculated with the virus, it has a high immunostimulatory activity to avoid lethality due to infection with the virus. Further, lablabosides do not show toxicity in mice even at a dose of 400 μg / dose which is 20 times the normal immunization dose. Therefore, the adjuvant containing the saponin of the present invention is a highly safe adjuvant having a higher immunostimulatory activity as compared to Quillaja saponin QS-21.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】 インゲンマメ（Dolichos lablab L.）白色種
子からの lablaboside Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、およびＦ
の精製過程の説明図。FIG. 1. Lablabosides A, B, C, D, E and F from white beans (Dolichos lablab L.) white seeds
FIG.

【図２】 ＰＨＡ価の測定結果を示すグラフ。FIG. 2 is a graph showing a measurement result of a PHA value.

【図３】 マウス血中抗ＯＶＡ抗体の測定結果を示すグ
ラフ。FIG. 3 is a graph showing measurement results of anti-OVA antibody in mouse blood.

【図４】 ＰＲＶ抗原の攻撃試験結果を示すグラフ。FIG. 4 is a graph showing the results of a PRV antigen challenge test.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 吉川 雅之 大阪府箕面市粟生新家３−18−９ (56)参考文献 ＫＲＩＶＯＲＵＴＣＨＥＮＫＯ Ｙｕ ｒｉ Ｌ．ｅｔ ａｌ，Ｓｔｕｄｙ ｏ ｆ ｔｈｅ ａｄｊｕｖａｎｔ ａｃｔ ｉｖｉｔｙ ｏｆ ｎｅｗ ＭＤＰ ｄ ｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ａｎｄ ｐｕｒ ｉｆｉｅｄ ｓａｐｏｎｉｎｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ ｏ ｎ Ｈ，Ｖａｃｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．15, Ｎｏ．12／13，1479−1486，1997 ＫＨＵＳＨＢＡＫＡＴＯＶＡ Ｚ. Ａ． ｅｔ ａｌ，Ａｄｊｕｖａｎｔ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｓｏｍｅ ｔ ｒｉｔｅｒｐｅｎｉｃ ｓａｐｏｎｉｎ ｓ，Ｋｈｉｍ．−Ｆａｒｍ．Ｚｈ．，ロ シア，Ｖｏｌ．27，Ｎｏ．10，48−52, 1993 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A61K 39/39 A61K 39/245 C07H 15/256 C07J 63/00 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＥＭＢＡＳＥ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＳＴＮ)────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (72) Inventor Masayuki Yoshikawa 3-18-9 Aow Shinke, Minoh-shi, Osaka (56) References KRIVORUTCHENKO Yuri L. et al, Study of the adjuvant activity of new MDP derivatives and purified saponins and the air influence on H, Vaccine. 15, No. 12/13, 1479-1486, 1997 KHUSHBAKATOVA Z.A. et al, Adjuvant activity of some litereric saponins, Khim. -Farm. Zh. , Russia, Vol. 27, No. 10, 48-52, 1993 (58) Fields investigated (Int. Cl. ⁷ , DB name) A61K 39/39 A61K 39/245 C07H 15/256 C07J 63/00 CA (STN) REGISTRY (STN) MEDLINE (STN ) EMBASE (STN) BIOSIS (STN)

Claims (12)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】一般式 【化１】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は糖鎖基を表す）で表されるオレア
ナン型ビスデスモシドサポニンを含有することを特徴と
するアジュバント組成物。1. A compound of the general formula (Wherein R ₁ and R ₂ each represent a sugar chain group). An adjuvant composition comprising an oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the formula: 【請求項２】前記オレアナン型ビスデスモシドサポニン
が、式 【化２】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン、およ
び式 【化３】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン、の内
から選択される少なくとも１種のオレアナン型ビスデス
モシドサポニンである請求項１記載のアジュバント組成
物。2. The oleanane-type bisdesmoside saponin is represented by the formula: An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the formula: The adjuvant composition according to claim 1, which is at least one oleanane-type bisdesmoside saponin selected from the group consisting of: 【請求項３】一般式 【化４】 （式中、Ｒ₁ 、Ｒ₂ は糖鎖基を表す）で表されるオレア
ナン型ビスデスモシドサポニンを含有することを特徴と
するアジュバント組成物。3. A compound of the general formula (Wherein R ₁ and R ₂ each represent a sugar chain group). An adjuvant composition comprising an oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the formula: 【請求項４】前記オレアナン型ビスデスモシドサポニン
が、式 【化５】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン、式 【化６】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン、式 【化７】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン、およ
び式 【化８】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン、の内
から選択される少なくとも１種のオレアナン型ビスデス
モシドサポニンである請求項３記載アジュバント組成
物。4. The oleanane-type bisdesmoside saponin has the formula: An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the formula: Oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the formula: An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by the formula: The adjuvant composition according to claim 3, wherein the adjuvant composition is at least one oleanane-type bisdesmosidic saponin selected from the group consisting of: 【請求項５】 請求項１〜４のいずれかに記載のアジュ
バント組成物を含有することを特徴とする免疫賦活剤。5. An immunostimulant comprising the adjuvant composition according to claim 1. Description: 【請求項６】 請求項１〜４のいずれかに記載のアジュ
バント組成物と豚ヘルペス不活化ウイルス抗原（ＰＲＶ
ウイルス抗原）を含有することを特徴とするＰＲＶウイ
ルスワクチン。6. An adjuvant composition according to claim 1 and a swine herpes inactivated virus antigen (PRV).
A virus antigen). 【請求項７】式 【化９】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン。7. A compound represented by the formula: An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by 【請求項８】式 【化１０】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン。8. A compound of the formula An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by 【請求項９】式 【化１１】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン。9. A compound of the formula An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by 【請求項１０】式 【化１２】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン。10. A compound of the formula An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by 【請求項１１】式 【化１３】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン。11. A compound of the formula An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by 【請求項１２】式 【化１４】 で表されるオレアナン型ビスデスモシドサポニン。12. A compound of the formula An oleanane-type bisdesmoside saponin represented by