JP3271357B2 - 生体内反応生成物吸着材料 - Google Patents
生体内反応生成物吸着材料Info
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- JP3271357B2 JP3271357B2 JP05346593A JP5346593A JP3271357B2 JP 3271357 B2 JP3271357 B2 JP 3271357B2 JP 05346593 A JP05346593 A JP 05346593A JP 5346593 A JP5346593 A JP 5346593A JP 3271357 B2 JP3271357 B2 JP 3271357B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は生体内反応生成物、特
に、グリケーション反応等、糖と蛋白質との非酵素的反
応による物質を除去する吸着材料に関する。
に、グリケーション反応等、糖と蛋白質との非酵素的反
応による物質を除去する吸着材料に関する。
【０００２】
【従来の技術】糖と蛋白質とが反応して着色化すること
は食品分野において古くから知られていた。最近ではこ
の反応が生体内（特に糖尿病患者など）で起こり、血管
障害合併症の発症に関与していると報告されるようにな
った。この反応はグリケーションあるいはメイラード反
応と呼ばれている。この反応はまずグルコースなどの還
元糖が非酵素的に蛋白質と結合してシッフ塩基を形成
し、さらにアマドリ転移して安定なケトアミンとなる。
ここまではグリケーションの初期段階であり、アマドリ
化合物は脱水、転移反応を繰り返し次々と蛋白と結合
し、分子間や分子内架橋を形成する。この変化はグリケ
ーションの後期反応であり、この安定な物質はａｄｖａ
ｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔ
（ＡＧＥ）と総称され、糖尿病の合併症の発症と発展に
関与するものとして注目されるようになった。現在この
物質の構造は明らかではないが、物質の定性、定量は蛍
光強度の測定あるいは抗原抗体反応により行われてい
る。
は食品分野において古くから知られていた。最近ではこ
の反応が生体内（特に糖尿病患者など）で起こり、血管
障害合併症の発症に関与していると報告されるようにな
った。この反応はグリケーションあるいはメイラード反
応と呼ばれている。この反応はまずグルコースなどの還
元糖が非酵素的に蛋白質と結合してシッフ塩基を形成
し、さらにアマドリ転移して安定なケトアミンとなる。
ここまではグリケーションの初期段階であり、アマドリ
化合物は脱水、転移反応を繰り返し次々と蛋白と結合
し、分子間や分子内架橋を形成する。この変化はグリケ
ーションの後期反応であり、この安定な物質はａｄｖａ
ｎｃｅｄ ｇｌｙｃａｔｉｏｎ ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔ
（ＡＧＥ）と総称され、糖尿病の合併症の発症と発展に
関与するものとして注目されるようになった。現在この
物質の構造は明らかではないが、物質の定性、定量は蛍
光強度の測定あるいは抗原抗体反応により行われてい
る。
【０００３】医学会では生体内でのグリケーション反応
を抑制して糖尿病の合併症の発症と発展を抑えようとす
る試みがある。アミノグアニジンがグリケーション反応
の後期段階化合物の生成を抑制すると報告されている
（第３５回日本糖尿病学会年次学術集会プログラム・抄
録集ｐ１１０，１９９２）。アミノグアニジンはグリケ
ーション反応中間生成物と結合し、それ以降の反応を阻
止すると考えられる。しかしながら、グリケーション反
応生成物と相互作用する物質を何かに固定し、それを用
いてグリケーション反応生成物を反応系から除去する方
法は報告されていないのが現状である。
を抑制して糖尿病の合併症の発症と発展を抑えようとす
る試みがある。アミノグアニジンがグリケーション反応
の後期段階化合物の生成を抑制すると報告されている
（第３５回日本糖尿病学会年次学術集会プログラム・抄
録集ｐ１１０，１９９２）。アミノグアニジンはグリケ
ーション反応中間生成物と結合し、それ以降の反応を阻
止すると考えられる。しかしながら、グリケーション反
応生成物と相互作用する物質を何かに固定し、それを用
いてグリケーション反応生成物を反応系から除去する方
法は報告されていないのが現状である。
【０００４】一方、この物質（特にＡＧＥ）を認識する
細胞レセプターが見付けられ（Ｔａｋａｔａ，Ｋ．，ｅ
ｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、ｖｏｌ２６３，ｐ１４８１９，１９８８）、こ
のレセプターはデキストラン硫酸やポリイノシン酸など
のポリアニオンに対する結合部位を有しているといわれ
ている（Ｔａｋａｔａ，Ｋ．，ｅｔａｌ，Ｂｉｏｃｈｉ
ｍｉｃａ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ）。しかし
ながら、このレセプターを短大に固定してグリケーショ
ン反応生成物を除去する方法は知られていないのが現状
であった。
細胞レセプターが見付けられ（Ｔａｋａｔａ，Ｋ．，ｅ
ｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓ
ｔｒｙ、ｖｏｌ２６３，ｐ１４８１９，１９８８）、こ
のレセプターはデキストラン硫酸やポリイノシン酸など
のポリアニオンに対する結合部位を有しているといわれ
ている（Ｔａｋａｔａ，Ｋ．，ｅｔａｌ，Ｂｉｏｃｈｉ
ｍｉｃａ，Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ Ａｃｔａ）。しかし
ながら、このレセプターを短大に固定してグリケーショ
ン反応生成物を除去する方法は知られていないのが現状
であった。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明はグリケーショ
ン反応生成物と相互作用する物質を固定したグリケーシ
ョン反応等の糖と蛋白質との非酵素的反応による生成物
を除去する吸着材料を提供するものである。
ン反応生成物と相互作用する物質を固定したグリケーシ
ョン反応等の糖と蛋白質との非酵素的反応による生成物
を除去する吸着材料を提供するものである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記目的は、以下の本発
明により達成される。すなわち本発明は、担体にヒアル
ロン酸等の多糖を固定した、糖化蛋白質等の糖と蛋白質
との非酵素的反応生成物を除去するための生体内反応生
成物吸着材料である。
明により達成される。すなわち本発明は、担体にヒアル
ロン酸等の多糖を固定した、糖化蛋白質等の糖と蛋白質
との非酵素的反応生成物を除去するための生体内反応生
成物吸着材料である。
【０００７】本発明において、グリケーション反応生成
物を除去するということは、糖化蛋白質等の初期段階生
成物や、中期段階生成物、後期段階生成物の蛍光物質を
除去することであり、反応系での最終的反応物（ＡＧ
Ｅ）の生成を押えることを意味する。
物を除去するということは、糖化蛋白質等の初期段階生
成物や、中期段階生成物、後期段階生成物の蛍光物質を
除去することであり、反応系での最終的反応物（ＡＧ
Ｅ）の生成を押えることを意味する。
【０００８】本発明における多糖とは、グルコースと
か、キシロースなどのような、単糖が数個以上脱水縮合
して生じた糖質であり、ホモ多糖とヘテロ多糖がある。
さらに多糖の中で、少なくとも一つのカルボキシル基を
有するものが好ましく用いられる。例えば、ヒアルロン
酸、アルギン酸、ポリガラクツロン酸、コンドロイチン
などが挙げられる。
か、キシロースなどのような、単糖が数個以上脱水縮合
して生じた糖質であり、ホモ多糖とヘテロ多糖がある。
さらに多糖の中で、少なくとも一つのカルボキシル基を
有するものが好ましく用いられる。例えば、ヒアルロン
酸、アルギン酸、ポリガラクツロン酸、コンドロイチン
などが挙げられる。
【０００９】多糖を固定する担体としては、高分子化合
物でも無機物質でもよく、例えば、第１級アミンを有す
る担体が用いられ、芳香族アミノ基を含むポリアクリル
アミド誘導体、ポリアミノスチレン、メタクリル酸−ｍ
−アミノスチレン共重合体、ｐ，ｐ´−ジアミノジフェ
ニルメタン誘導体、多孔性ガラスにアミノプロピルトリ
エトキシシランを導入した多孔性ガラスの芳香族アミノ
シラン誘導体、ＥＡＨ−セファロース４Ｂ、ＡＥ−セル
ロースなどが挙げられる。
物でも無機物質でもよく、例えば、第１級アミンを有す
る担体が用いられ、芳香族アミノ基を含むポリアクリル
アミド誘導体、ポリアミノスチレン、メタクリル酸−ｍ
−アミノスチレン共重合体、ｐ，ｐ´−ジアミノジフェ
ニルメタン誘導体、多孔性ガラスにアミノプロピルトリ
エトキシシランを導入した多孔性ガラスの芳香族アミノ
シラン誘導体、ＥＡＨ−セファロース４Ｂ、ＡＥ−セル
ロースなどが挙げられる。
【００１０】また、担体の形状は、特に限定されるもの
ではなく、例えば、ビーズ状、糸状、平板フィルムなど
が用いられる。
ではなく、例えば、ビーズ状、糸状、平板フィルムなど
が用いられる。
【００１１】本発明において、糖と蛋白質との反応生成
物とは、グルコースなどの還元糖が非酵素的に蛋白と結
合して生成されるアマドリ化合物（グリケーションの初
期生成物）以降に生成される物質をいう。
物とは、グルコースなどの還元糖が非酵素的に蛋白と結
合して生成されるアマドリ化合物（グリケーションの初
期生成物）以降に生成される物質をいう。
【００１２】多糖の固定方法は特に限定しないが、例え
ば、高分子化合物を担体として用いる場合、共有結合に
より固定化することが望ましく、例えば、多糖のカルボ
キシル基と担体のアミノ基とを水溶性のカルボジイミド
試薬を用いて共有結合させる方法が好ましく用いられ
る。
ば、高分子化合物を担体として用いる場合、共有結合に
より固定化することが望ましく、例えば、多糖のカルボ
キシル基と担体のアミノ基とを水溶性のカルボジイミド
試薬を用いて共有結合させる方法が好ましく用いられ
る。
【００１３】以下に、実施例を挙げて本発明をさらに具
体的に説明する。
体的に説明する。
【００１４】
実施例１ リガンド固定化用カップリングゲル（ＥＡＨ Ｓｅｐｈ
ａｒｏｓｅ４Ｂ、ファルマシア社製）５ｍｌに１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイ
ミドハイドロクロライド３２ｍｇを添加し、塩酸でｐＨ
４に調整したバイオソジウムヒアルロネイト（０．１％
濃度、資生堂製）溶液５ｍｌをさらに加えて一晩室温で
反応させ、ゲルにヒアルロン酸を固定した。このゲルを
０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で３回洗浄した。
一方牛血清アルブミン１．６ｇとグルコース３ｇを溶解
させたリン酸緩衝液（０．５Ｍ，ｐＨ７．４）１０ｍｌ
を脱酸素および０．４５ミクロンのフィルターに通し、
その後９０日間温度摂氏３７度の中で放置した。この溶
液を食塩０．１５Ｍを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
中にて透析した。この溶液は着色し、蛍光（励起光３７
０ｎｍ，放射光４４０ｎｍ）を有していた。この溶液５
００マイクロリットルにゲル３００マイクロリットルを
添加した。１０分後には上澄溶液の色はほとんどなくな
り、沈降したゲルは着色した。上澄溶液の蛍光強度はか
なり低下し、ゲルの表面は蛍光を有するようになった。
ａｒｏｓｅ４Ｂ、ファルマシア社製）５ｍｌに１−エチ
ル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイ
ミドハイドロクロライド３２ｍｇを添加し、塩酸でｐＨ
４に調整したバイオソジウムヒアルロネイト（０．１％
濃度、資生堂製）溶液５ｍｌをさらに加えて一晩室温で
反応させ、ゲルにヒアルロン酸を固定した。このゲルを
０．５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）で３回洗浄した。
一方牛血清アルブミン１．６ｇとグルコース３ｇを溶解
させたリン酸緩衝液（０．５Ｍ，ｐＨ７．４）１０ｍｌ
を脱酸素および０．４５ミクロンのフィルターに通し、
その後９０日間温度摂氏３７度の中で放置した。この溶
液を食塩０．１５Ｍを含むリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）
中にて透析した。この溶液は着色し、蛍光（励起光３７
０ｎｍ，放射光４４０ｎｍ）を有していた。この溶液５
００マイクロリットルにゲル３００マイクロリットルを
添加した。１０分後には上澄溶液の色はほとんどなくな
り、沈降したゲルは着色した。上澄溶液の蛍光強度はか
なり低下し、ゲルの表面は蛍光を有するようになった。
【００１５】実施例２ 牛血清アルブミンとグルコースとの反応時間（温度摂氏
３７度での放置時間）を９０日から３０日にしたこと以
外は実施例１と同様に行った。結果は実施例１と同様に
牛血清アルブミンとグルコースとの反応溶液とゲルを混
合すると１０分後には上澄溶液は脱色し、沈降したゲル
は着色した。
３７度での放置時間）を９０日から３０日にしたこと以
外は実施例１と同様に行った。結果は実施例１と同様に
牛血清アルブミンとグルコースとの反応溶液とゲルを混
合すると１０分後には上澄溶液は脱色し、沈降したゲル
は着色した。
【００１６】実施例３ 実施例１のヒアルロン酸の代わりにアルギン酸ナトリウ
ムを使用した以外は、実施例１と同様に行った。結果
は、実施例１と同様に牛血清アルブミンとグルコースと
の反応溶液とゲルを混合すると１０分後には上澄液は脱
色され、沈降ゲルは着色した。
ムを使用した以外は、実施例１と同様に行った。結果
は、実施例１と同様に牛血清アルブミンとグルコースと
の反応溶液とゲルを混合すると１０分後には上澄液は脱
色され、沈降ゲルは着色した。
【００１７】実施例４ 実施例１のヒアルロン酸の代わりにポリガラクツロン酸
を使用した以外は、実施例１と同様に行った。結果は、
実施例１と同様に牛血清アルブミンとグルコースとの反
応溶液とゲルを混合すると１０分後には上澄液は脱色さ
れ、沈降ゲルは着色した。
を使用した以外は、実施例１と同様に行った。結果は、
実施例１と同様に牛血清アルブミンとグルコースとの反
応溶液とゲルを混合すると１０分後には上澄液は脱色さ
れ、沈降ゲルは着色した。
【００１８】実施例５ 実施例１のヒアルロン酸の代わりにコンドロイチンを使
用した以外は、実施例１と同様に行った。結果は、実施
例１と同様に牛血清アルブミンとグルコースとの反応溶
液とゲルを混合すると１０分後には上澄液は脱色され、
沈降ゲルは着色した。
用した以外は、実施例１と同様に行った。結果は、実施
例１と同様に牛血清アルブミンとグルコースとの反応溶
液とゲルを混合すると１０分後には上澄液は脱色され、
沈降ゲルは着色した。
【００１９】実施例６ 実施例１の牛血清アルブミンの代わりにベータアラニン
を使用したこと、ベータアラニンとグルコースとの反応
時間を３０日にしたこと以外は、実施例１と同様に行っ
た。結果は、実施例１と同様にベータアラニンとグルコ
ースとの反応溶液はゲルを加えると１０分後には上澄液
の濃茶色は薄くなり、沈降ゲルは着色した。蛍光強度は
ゲルの混入前後であまり変化しなかった。
を使用したこと、ベータアラニンとグルコースとの反応
時間を３０日にしたこと以外は、実施例１と同様に行っ
た。結果は、実施例１と同様にベータアラニンとグルコ
ースとの反応溶液はゲルを加えると１０分後には上澄液
の濃茶色は薄くなり、沈降ゲルは着色した。蛍光強度は
ゲルの混入前後であまり変化しなかった。
【００２０】比較例１ リガンド固定化用カップリングゲルを未処理のまま使用
したこと以外は実施例１と同様に行った。アルブミンと
グルコースとが反応した着色溶液と未処理ゲルを混合し
ても溶液の脱色とゲルの着色は起こらなかった。
したこと以外は実施例１と同様に行った。アルブミンと
グルコースとが反応した着色溶液と未処理ゲルを混合し
ても溶液の脱色とゲルの着色は起こらなかった。
【００２１】
【発明の効果】本発明において、担体にヒアルロン酸等
の多糖を固定した吸着材料を用いることにより、溶液中
の糖と蛋白質との非酵素的反応生成物を溶液中から除去
することができる。
の多糖を固定した吸着材料を用いることにより、溶液中
の糖と蛋白質との非酵素的反応生成物を溶液中から除去
することができる。
Claims (3)
- 【請求項１】 担体に多糖を固定した、糖と蛋白質との
非酵素的反応生成物を除去するための生体内反応生成物
吸着材料。 - 【請求項２】 多糖が、少なくとも１つのカルボキシル
基を有する請求項１記載の生体内反応生成物吸着材料。 - 【請求項３】 多糖が、ヒアルロン酸、アルギン酸、ポ
リガラクツロン酸、コンドロイチンから選ばれる請求項
１記載の生体内反応生成物吸着材料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05346593A JP3271357B2 (ja) | 1993-03-15 | 1993-03-15 | 生体内反応生成物吸着材料 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05346593A JP3271357B2 (ja) | 1993-03-15 | 1993-03-15 | 生体内反応生成物吸着材料 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06261940A JPH06261940A (ja) | 1994-09-20 |
| JP3271357B2 true JP3271357B2 (ja) | 2002-04-02 |
Family
ID=12943621
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05346593A Expired - Fee Related JP3271357B2 (ja) | 1993-03-15 | 1993-03-15 | 生体内反応生成物吸着材料 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3271357B2 (ja) |
-
1993
- 1993-03-15 JP JP05346593A patent/JP3271357B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06261940A (ja) | 1994-09-20 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |