JP3137349B2 - Peptide derivative - Google Patents
Peptide derivativeInfo
- Publication number
- JP3137349B2 JP3137349B2 JP03085851A JP8585191A JP3137349B2 JP 3137349 B2 JP3137349 B2 JP 3137349B2 JP 03085851 A JP03085851 A JP 03085851A JP 8585191 A JP8585191 A JP 8585191A JP 3137349 B2 JP3137349 B2 JP 3137349B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- arg
- peptide
- boc
- bzl
- leu
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
【0001】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、新規なペプチド誘導体
に関する。詳しくは新規な血管作動性腸管ペプチド(Va
soactive Intestinal Peptide 以下VIPと略す)誘導
体に関する。The present invention relates to novel peptide derivatives. For details, please refer to the new vasoactive intestinal peptide (Va
soactive Intestinal Peptide).
【0002】[0002]
【従来の技術】VIPは脳−腸管ペプチドと呼ばれてい
る生理活性ペプチドの一種で、1970年ブタ腸管より
抽出された血流促進、血圧低下作用をもつ28個のアミ
ノ酸からなるペプチドである。そのアミノ酸配列がセク
レチン、グルカゴン等に類似しているところからグルカ
ゴンファミリーに属するペプチドとされている。VIP
はその強い血管拡張、血流促進作用から、潰瘍、しもや
け、インポテンツ、発毛あるいは育毛などの効果が期待
されている。2. Description of the Related Art VIP is a kind of physiologically active peptide called a brain-intestinal peptide, and is a peptide consisting of 28 amino acids having a blood flow promoting and blood pressure lowering action extracted from pig intestine in 1970. Since the amino acid sequence is similar to secretin, glucagon and the like, it is considered to be a peptide belonging to the glucagon family. VIP
Due to its strong vasodilation and blood flow promoting effects, it is expected to have effects such as ulcers, morbidity, impotence, hair growth or hair growth.
【0003】[0003]
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、VIP
は生体内における含量が低く、抽出して大量に得ること
は困難であり、C末端がアミド化されているため遺伝子
組換えによる製造も困難である。また、液相法や固相法
によるペプチド合成による製造も高価なものとなってい
る。SUMMARY OF THE INVENTION However, VIP
Is low in the body, difficult to obtain in large quantities by extraction, and difficult to produce by genetic recombination because the C-terminal is amidated. Production by peptide synthesis using a liquid phase method or a solid phase method is also expensive.
【0004】一方、気管支拡張作用・降圧作用又は育毛
作用を有する29〜31個のアミノ酸残基からなるVI
P誘導体が知られている(特開昭62−246595号
及び特開昭64−83012号)。On the other hand, VI consisting of 29 to 31 amino acid residues having bronchodilating, hypotensive or hair-growth effects
P derivatives are known (JP-A-62-246595 and JP-A-64-83012).
【0005】本発明は、公知のVIPの特定の作用を増
強又は低減することを目的とする。[0005] The present invention aims to enhance or reduce the specific action of known VIPs.
【0006】[0006]
【課題を解決するための手段】本発明は、式His Ser As
p Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg LeuArg A G
lnB Ala Val C D Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn
(式中 A、C及びDはLys 又はArg を示すが、いずれ
か1つ以上はArg を示し、BはMet 又はLeu を示す)で
表されるペプチド又はその塩からなるVIP誘導体を提
供するものであり、VIPは15、20及び21番目の
アミノ酸がLysであるのに対し、本発明のVIP誘導体
はこれら対応する位置のアミノ酸のいずれか1つ以上が
Arg であることを特徴とする。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention provides a compound of the formula His Ser As
p Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg LeuArg AG
lnB Ala Val CD Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn
(Wherein A, C and D represent Lys or Arg, at least one of which represents Arg and B represents Met or Leu) or a VIP derivative comprising a salt thereof. In VIP, the amino acids at positions 15, 20, and 21 are Lys, whereas the VIP derivative of the present invention has at least one of the amino acids at the corresponding positions.
Arg.
【0007】本明細書中において、保護基、溶媒、その
他に関し次の略号で表示する。 Aoc ;t−アミルオキシカルボニル Boc ;t−ブトキシカルボニル Bzl ;ベンジル OBzl ;ベンジルエステル Tos ;p−トルエンスルホニル Z ;カルボベンゾキシ DCC ;ジシクロヘキシルカルボジイミド DCM ;ジクロロメタン DIEA;ジイソプロピルエチルアミン DMF ;ジメチルホルムアミド DMSO;ジメチルスルホキシド HMPA;ヘキサメチルリン酸トリアミド HOBt;1−ヒドロキシベンゾトリアゾール HOSu;N−ヒドロキシコハク酸イミド MBHA;ベンズヒドリルアミン TFA ;トルフルオロ酢酸 THF ;テトラヒドロフランIn the present specification, the following abbreviations are used for protecting groups, solvents and the like. Aoc; t-amyloxycarbonyl Boc; t-butoxycarbonyl Bzl; benzyl OBzl; benzyl ester Tos; p-toluenesulfonyl Z; carbobenzoxy DCC; dicyclohexylcarbodiimide DCM; dichloromethane DIEA; diisopropylethylamine DMF; dimethylformamide DMSO; HMPA; hexamethylphosphoric triamide HOBt; 1-hydroxybenzotriazole HOSu; N-hydroxysuccinimide MBHA; benzhydrylamine TFA; trifluoroacetic acid THF; tetrahydrofuran
【0008】本発明のペプチドは、公知のペプチドの合
成の常法手段に従って合成できる。例えば「ザ.ペプチ
ド(The Peptides)」第1巻(1966年)[Schreder
andLuhke著、Academic Press, New York, U.S.A.]、
あるいは「ペプチド合成」[泉屋ら著、丸善株式会社
(1975年)]に記載されている方法に従い、例えば
アジド法、酸クロライド法、酸無水物法、混合酸無水物
法、DCC法、活性エステル法(p−ニトロフェニルエ
ステル法、N−ヒドロキシコハク酸イミドエステル法、
シアノメチルエステル法等)ウッドワード試薬Kを用い
る方法、カルボイミダゾール法、酸化還元法、DCC−
アデイテイブ(HOBt、HOSu)法等を例示でき
る。上記においては、固相合成法及び液相合成法のいず
れも適用できる。本発明においては、上記した一般のポ
リペプチドの合成法に従い、例えば末端アミノ酸に順次
1個ずつアミノ酸を縮合させるいわゆるステップワイズ
法によって、または数個のフラグメントに分けてカップ
リングさせていく方法によって製造される。[0008] The peptide of the present invention can be synthesized according to a conventional method for synthesizing a known peptide. For example, "The Peptides", Vol. 1 (1966) [Schreder
andLuhke, Academic Press, New York, USA],
Alternatively, according to the method described in “Peptide Synthesis” [Izumiya et al., Maruzen Co., Ltd. (1975)], for example, azide method, acid chloride method, acid anhydride method, mixed acid anhydride method, DCC method, active ester Method (p-nitrophenyl ester method, N-hydroxysuccinimide ester method,
Cyanomethyl ester method) method using Woodward's reagent K, carboimidazole method, redox method, DCC-
The additive (HOBt, HOSu) method can be exemplified. In the above, both the solid phase synthesis method and the liquid phase synthesis method can be applied. In the present invention, according to the above-described general polypeptide synthesis method, for example, a so-called stepwise method in which amino acids are sequentially condensed one by one with terminal amino acids, or a method in which a fragment is coupled into several fragments for coupling. Is done.
【0009】より詳細には、例えば固相合成法はメリフ
ィールド(Merrifield. R.B.)の方法[Solid phasepep
tide synthesis. J. Amer. Chem. Soc., 85,2149 〜215
9 (1963)]に従い、以下のようにして行うことができ
る。すなわち、C末端アミノ酸(アミノ基を保護したも
の)をそのカルボキシル基によって、不溶性担体に結合
させ、次いでアミノ保護基を除去した後、一般式で表さ
れるアミノ酸配列に従い順次アミノ基保護アミノ酸を、
その反応性アミノ基及び反応性カルボキシル基との縮合
反応により結合させ、一段階ずつ合成し、全配列を合成
した後、ペプチドを不溶性担体からはずすことにより製
造される。ここで用いられる不溶性担体は、反応性カル
ボキシル基との結合性を有する各種のもののいずれでも
よく、例えばMBHA系樹脂等を用いることができる。More specifically, for example, the solid phase synthesis method is a method of Merrifield (RB) [Solid phasepep
tide synthesis. J. Amer. Chem. Soc., 85,2149-215
9 (1963)] as follows. That is, a C-terminal amino acid (an amino-protected one) is bound to an insoluble carrier by its carboxyl group, and after removing the amino-protecting group, the amino-protected amino acid is successively added according to the amino acid sequence represented by the general formula.
It is produced by coupling by a condensation reaction with the reactive amino group and the reactive carboxyl group, synthesizing step by step, synthesizing the entire sequence, and removing the peptide from the insoluble carrier. The insoluble carrier used here may be any of various types having a binding property with a reactive carboxyl group, and for example, an MBHA-based resin or the like can be used.
【0010】上記各種方法において側鎖官能基を有する
各アミノ酸、例えばHis、Tyr、Thr、Lys、
Asp、Arg及びSerは、その側鎖官能基は保護し
ておくのが望ましく、これは通常の保護基により保護さ
れ、反応終了後該保護基は脱離される。又、反応に関与
する官能基は通常活性化される。これら各反応方法は公
知であり、それに用いられる試薬等も公知のものから適
宜選択し得る。In the above various methods, each amino acid having a side chain functional group such as His, Tyr, Thr, Lys,
Asp, Arg and Ser preferably have their side-chain functional groups protected, which are protected by usual protecting groups, and after the reaction is completed, the protecting groups are eliminated. Also, the functional groups involved in the reaction are usually activated. Each of these reaction methods is known, and the reagents and the like used therefor can be appropriately selected from known ones.
【0011】アミノ酸の保護基としては、例えばZ、B
oc、Aoc、イソボニルオキシカルボニル、p−メト
キシベンジルオキシカルボニル、2−クロル−ベンジル
オキシカルボニル、アダマンチルオキシカルボニル、ト
リフルオロアセチル、フタリル、ホルミル、o−ニトロ
フェニルスルフェニル、ジフェニルホスフィノチオイル
などが挙げられる。The protecting groups for amino acids include, for example, Z, B
oc, Aoc, isobonyloxycarbonyl, p-methoxybenzyloxycarbonyl, 2-chloro-benzyloxycarbonyl, adamantyloxycarbonyl, trifluoroacetyl, phthalyl, formyl, o-nitrophenylsulfenyl, diphenylphosphinothioyl, etc. No.
【0012】Hisのイミノ基の保護基としては、例え
ばTos、Bzl、Z、トリチル等が挙げられる。Se
r及びThrの水酸基は、例えばエステル化又はエーテ
ル化によって保護することができるが、必ずしも保護す
る必要はない。このエステル化に適する基としては、ア
セチル等の低級アルカノイル基、ベンゾイル等のアロイ
ル基、ベンゾイルオキシカルボニル、エチルオキシカル
ボニル等の炭酸から誘導される基等が挙げられる。また
エーテル化に適する基としては、Bzl、テトラヒドロ
ピラニル、tert−ブチル基等を例示できる。Examples of the protecting group for the imino group of His include Tos, Bzl, Z, and trityl. Se
The hydroxyl groups of r and Thr can be protected, for example, by esterification or etherification, but need not be. Suitable groups for this esterification include lower alkanoyl groups such as acetyl, aroyl groups such as benzoyl, and groups derived from carbonic acid such as benzoyloxycarbonyl and ethyloxycarbonyl. Examples of a group suitable for etherification include Bzl, tetrahydropyranyl, tert-butyl group and the like.
【0013】Tyrの水酸基の保護基としては、例えば
Bzl、Cl2 −Bzl、Z、アセチル、Tos基等が
挙げられる。Lysのアミノ基の保護基としては、たと
えばZ、Cl−Z、Cl2 −Bzl、Boc、Tos基
等が挙げられる。Argのグアニジノ基の保護基として
は、例えばTos、ニトロ、Z、Aoc基等が挙げられ
る。Examples of the hydroxyl-protecting group of Tyr include Bzl, Cl 2 -Bzl, Z, acetyl, Tos group and the like. The protecting group of the amino groups of Lys, for example Z, Cl-Z, Cl 2 -Bzl, Boc, etc. Tos group. Examples of the protecting group for the guanidino group of Arg include Tos, nitro, Z, and Aoc groups.
【0014】カルボキシル基の保護基としては、例えば
アルキルエステル(メチル、エチル、プロピル、ブチ
ル、tert−ブチル等)、ベンジルエステル、p−ニトロ
ベンジルエステル、メチルベンジルエステル、p−クロ
ルベンジルエステル、ベンズヒドリルエステル、カルボ
ベンゾキシヒドラジド、tert−ブチルオキシカルボニル
ヒドラジド、トリチルヒドラジド等が挙げられる。As
pのカルボキシル基の保護は、例えばベンジルアルコー
ル、メタノール、エタノール、tert−ブタノール等によ
るエステル化により行われる。Examples of the carboxyl-protecting group include alkyl esters (eg, methyl, ethyl, propyl, butyl, tert-butyl), benzyl esters, p-nitrobenzyl esters, methylbenzyl esters, p-chlorobenzyl esters, and benzhydrido. Ester, carbobenzoxyhydrazide, tert-butyloxycarbonylhydrazide, tritylhydrazide and the like. As
The protection of the carboxyl group of p is performed, for example, by esterification with benzyl alcohol, methanol, ethanol, tert-butanol and the like.
【0015】カルボキシル基が活性化されたものとして
は、例えば対応する酸クロライド、酸無水物又は混合酸
無水物、アジド、活性エステル(ペンタクロロフェノー
ル、p−ニトロフェノール、N−ヒドロキシコハク酸イ
ミド、N−ヒドロキシベンズトリアゾール、N−ヒドロ
キシ−5−ノルボルネン−2,3−ジカルボキシイミド
等とのエステル)等が挙げられる。なお、ペプチド結合
形式反応は、縮合剤、例えばDCC、カルボジイミダゾ
ール等のカルボジイミド試薬やテトラエチルピロホスフ
ェイト等の存在下に実施し得る場合もある。Examples of the activated carboxyl group include, for example, corresponding acid chlorides, acid anhydrides or mixed acid anhydrides, azides, active esters (pentachlorophenol, p-nitrophenol, N-hydroxysuccinimide, N-hydroxybenztriazole, ester with N-hydroxy-5-norbornene-2,3-dicarboximide) and the like. In some cases, the peptide bond type reaction can be carried out in the presence of a condensing agent, for example, a carbodiimide reagent such as DCC or carbodiimidazole, or tetraethylpyrophosphate.
【0016】上記方法において反応性アミノ基と反応性
カルボキシル基との縮合反応(ペプチド結合形成反応)
は、溶媒の存在下に行い得る。溶媒としては、ペプチド
結合形成に使用し得ることが知られている各種のもの、
例えば無水または含水のDMF、DMSO、ピリジン、
クロロホルム、ジオキサン、DCM、THF、酢酸エチ
ル、N−メチルピロリドン、HMPAあるいはこれらの
混合溶媒等を用いることができる。In the above method, a condensation reaction between a reactive amino group and a reactive carboxyl group (peptide bond forming reaction)
Can be performed in the presence of a solvent. Various solvents known to be usable for peptide bond formation,
For example, anhydrous or hydrous DMF, DMSO, pyridine,
Chloroform, dioxane, DCM, THF, ethyl acetate, N-methylpyrrolidone, HMPA or a mixed solvent thereof can be used.
【0017】本発明のペプチド及びその塩は、例えばこ
れを血流改善剤として用いるに当たり、通常製剤的担体
とともに製剤組成の形態に加工されるが、中でも注射剤
の形態に加工され使用されるのが好ましい。The peptide of the present invention and a salt thereof are usually processed into a pharmaceutical composition together with a pharmaceutical carrier when used as a blood flow improving agent. Is preferred.
【0018】注射剤として調製される場合、得られる製
剤は殺菌されかつ血液と等張であるのが好ましい。注射
剤の形態に成形するに際しては、希釈剤としてこの分野
において慣用されているものを使用することができる。
例えば、水、生理食塩水等を挙げることができる。な
お、この場合の等張性の溶液を調製するのに充分な量の
食塩、あるいはグリセリンを注射剤の形態の製剤中に含
有させてもよい。また上記製剤には通常の緩衝液、無痛
化剤、保存剤等、更に必要に応じて着色剤、保存剤、香
料、風味剤、甘味剤等や他の医薬品をも含有させること
ができる。また上記有効成分は使用時に注射用蒸留水に
溶解し、用事に溶解剤に溶解しても使用できる。When prepared as an injection, the resulting preparation is preferably sterile and isotonic with blood. When molding into an injection form, a diluent commonly used in this field can be used.
For example, water, physiological saline and the like can be mentioned. In this case, a sufficient amount of salt or glycerin for preparing an isotonic solution may be contained in the preparation in the form of an injection. The above-mentioned preparations can also contain ordinary buffers, soothing agents, preservatives and the like, and if necessary, coloring agents, preservatives, flavors, flavors, sweeteners and other pharmaceuticals. The above-mentioned active ingredient can be used by dissolving it in distilled water for injection at the time of use and dissolving it in a solubilizer for business use.
【0019】上記の如くして調製される製剤は、その形
態に応じた方法で投与される。注射剤の場合には単独で
あるいはアミノ酸等の通常の補液と混合して静脈内投与
される。The preparations prepared as described above are administered by a method according to the form. In the case of an injection, it is administered intravenously either alone or as a mixture with a normal replacement fluid such as amino acids.
【0020】有効成分の投与量は使用目的、症状等によ
り適宜決定されるが、通常1人1日当たり1ng〜1mg/
Kg程度の範囲で使用するのが好ましく、1日に2〜4回
分割投与するのが好ましい。The dose of the active ingredient is appropriately determined depending on the purpose of use, symptoms, etc., but is usually 1 ng to 1 mg / day per person.
It is preferably used in the range of about Kg, and is preferably administered in divided doses 2 to 4 times a day.
【0021】[0021]
【実施例】以下に実施例、参考例により本発明をより具
体的に説明するが、これらは本発明を限定するものでは
ない。The present invention will be described in more detail with reference to the following Examples and Reference Examples, which do not limit the present invention.
【0022】(1) 保護ペプチド:(Boc) His(Tos) S
er(Bzl) Asp(OBzl) Ala Val Phe Thr(Bzl) Asp(OBzl) Asn Tyr(Bzl) Thr(Bzl) Arg(Tos)
Leu Arg(Tos) Arg(Tos) Gln Met Ala Val Arg(Tos) Arg(Tos) Tyr(Bzl) Leu Asn
Ser(Bzl) Ile Leu Asn −MBHA樹脂の製造(1) Protected peptide: (Boc) His (Tos) S
er (Bzl) Asp (OBzl) Ala Val Phe Thr (Bzl) Asp (OBzl) Asn Tyr (Bzl) Thr (Bzl) Arg (Tos)
Leu Arg (Tos) Arg (Tos) Gln Met Ala Val Arg (Tos) Arg (Tos) Tyr (Bzl) Leu Asn
Production of Ser (Bzl) Ile Leu Asn-MBHA resin
【0023】固相合成装置としてApplied Biosystems社
製430−Aペプチドシンセサイザーを用いて固相合成
を行った。まず、MBHA樹脂(Applied Biosystems社
製、アミノ基0.72mmol/g)0.694mgをペプチド
固相合成用反応容器に入れ、DCM8ml(4回、各1
分)、60%TFA含有DCM容器8ml(20分)、D
CM4ml(3回、各15秒)、DIEA1ml含有DMF
溶液3ml(2回、各1分)、DMF8ml(6回、各40
秒)の順にアルゴンガス気流中撹拌下処理し、各々の処
理後濾過した。Solid phase synthesis was performed using a 430-A peptide synthesizer manufactured by Applied Biosystems as a solid phase synthesizer. First, 0.694 mg of MBHA resin (manufactured by Applied Biosystems, amino group 0.72 mmol / g) was placed in a reaction vessel for peptide solid phase synthesis, and 8 ml of DCM (4 times, 1 for each)
Min), 8 ml DCM container containing 60% TFA (20 min), D
DMF containing 4 ml of CM (3 times, 15 seconds each) and 1 ml of DIEA
3 ml of solution (2 times, 1 minute each), 8 ml of DMF (6 times, 40 minutes each)
Seconds) in the order of the argon gas stream while stirring, and after each treatment, filtration was performed.
【0024】一方、アミノ酸順序28番目の(Boc)
−Asn−OH2mmole をDCM4mlに溶解し、アミノ
酸活性化容器中でDCC(0.5M −DCM溶液)3ml
及びHOBt(0.5M −DCM溶液)4mlを加え、3
0分間反応させた。反応液を濾過して濃縮容器に移し、
これにDMF3mlを加え、アルゴンガス気流下DCMを
留去した。これにDMF3mlを加え、前記の反応容器に
移して30分間反応させた。ついでDCM8ml(6回、
各20秒)で洗浄した。さらに(Boc)−Asn−O
H2mmole をDCM4mlに溶解し、アミノ酸活性化容器
中で同様の操作を繰り返したいわゆるダブルカップリン
グ法を行った後、濾過して(Boc)−Asn−MBH
A樹脂を得た。On the other hand, the 28th amino acid sequence (Boc)
Dissolve 2 mmol of Asn-OH in 4 ml of DCM and add 3 ml of DCC (0.5M-DCM solution) in the amino acid activation vessel.
And 4 ml of HOBt (0.5M-DCM solution)
The reaction was performed for 0 minutes. Filter the reaction and transfer to a concentration vessel,
To this was added 3 ml of DMF, and DCM was distilled off under a stream of argon gas. To this, 3 ml of DMF was added, transferred to the above-mentioned reaction vessel and reacted for 30 minutes. Then 8 ml of DCM (6 times,
(20 seconds each). Further, (Boc) -Asn-O
H2 mmol was dissolved in 4 ml of DCM, and the so-called double coupling method in which the same operation was repeated in an amino acid activation vessel was carried out, followed by filtration and (Boc) -Asn-MBH
A resin was obtained.
【0025】次に、得られたBoc−Asn−MBHA
樹脂を反応容器中DCM8ml(4回、各1分)で洗浄
し、濾過した。これに、60%TFA含有DCM溶液8
ml(20分)、DCM4ml(3回、各15秒)、DIE
A1ml含有DMF溶液3ml(2回、各1分)、DMF8
ml(6回、各40秒)の順にアルゴンガス気流中撹拌下
処理し、各々の処理後濾過した。Next, the obtained Boc-Asn-MBHA
The resin was washed in a reaction vessel with 8 ml of DCM (4 times, 1 minute each) and filtered. To this, a DCM solution 8 containing 60% TFA was added.
ml (20 minutes), 4 ml of DCM (3 times, 15 seconds each), DIE
A1 ml DMF solution 3 ml (2 times, 1 minute each), DMF8
In the order of ml (6 times, 40 seconds each), the mixture was stirred and treated in an argon gas stream, and filtered after each treatment.
【0026】さらに、アミノ酸順序27番目の(Bo
c)−Leu−OH2mmole をDCM4mlに溶解し、ア
ミノ酸活性化容器中でDCC(0.5M −DCM溶液)
1.5mlを加え、7分間反応させた。反応液を濾過して
濃縮容器に移し、これにDMF3mlを加え、アルゴンガ
ス気流下DCMを留去した。これにDMF3mlを加え、
前記の反応容器に移して30分間反応させた。ついでD
CM8ml(6回、各20秒)で洗浄し、濾過して(Bo
c)−Leu−Asn−MBHA樹脂を得た。Further, the amino acid sequence of the 27th amino acid sequence (Bo)
c) 2 mmole of -Leu-OH is dissolved in 4 ml of DCM and DCC (0.5M-DCM solution) in an amino acid activation vessel
1.5 ml was added and reacted for 7 minutes. The reaction solution was filtered and transferred to a concentration vessel, to which 3 ml of DMF was added, and DCM was distilled off under a stream of argon gas. To this was added 3 ml of DMF,
It was transferred to the reaction vessel and reacted for 30 minutes. Then D
Wash with 8 ml of CM (6 times, 20 seconds each), filter (Bo
c) -Leu-Asn-MBHA resin was obtained.
【0027】以下、次に示す保護アミノ酸を用いて順次
26番目から1番目までのアミノ酸をカップリングさせ
た。 アミノ 保護アミノ酸 使用量 酸順序 (mmol) 26 Boc−Ile−OH 2 25 Boc−Ser(Bzl)−OH 2 24 Boc−Asn−OH 2×2 23 Boc−Leu−OH 2 22 Boc−Try(Bzl)−OH 2 21 Boc−Arg(Tos)−OH 2×2 20 Boc−Arg(Tos)−OH 2×2 19 Boc−Val−OH 2 18 Boc−Ala−OH 2 17 Boc−Leu−OH 2 16 Boc−Gln−OH 2×2 15 Boc−Arg(Tos)−OH 2×2 14 Boc−Arg(Tos)−OH 2×2 13 Boc−Leu−OH 2 12 Boc−Arg(Tos)−OH 2×2 11 Boc−Thr(Bzl)−OH 2 10 Boc−Thr(Bzl)−OH 2 9 Boc−Asn−OH 2×2 8 Boc−Asp(OBzl)−OH 2 7 Boc−Thr(Bzl)−OH 2 6 Boc−Phe−OH 2 5 Boc−Val−OH 2 4 Boc−Ala−OH 2 3 Boc−Asp(OBzl)−OH 2 2 Boc−Ser(Bzl)−OH 2 1 Boc−His(Tos)−OH 2×2The 26th to 1st amino acids were sequentially coupled using the following protected amino acids. Amino-protected amino acid Amount used Acid order (mmol) 26 Boc-Ile-OH 225 Boc-Ser (Bzl) -OH 224 Boc-Asn-OH 2 × 223 Boc-Leu-OH 222 Boc-Try (Bzl) -OH221Boc-Arg (Tos) -OH2x220 Boc-Arg (Tos) -OH2x219 Boc-Val-OH218 Boc-Ala-OH217 Boc-Leu-OH216Boc -Gln-OH 2x2 15 Boc-Arg (Tos) -OH 2x2 14 Boc-Arg (Tos) -OH 2x2 13 Boc-Leu-OH2 12 Boc-Arg (Tos) -OH 2x2 11 Boc-Thr (Bzl) -OH 2 10 Boc-Thr (Bzl) -OH 29 Boc-Asn-OH 2 × 28 Boc- Asp (OBzl) -OH27Boc-Thr (Bzl) -OH26Boc-Phe-OH25Boc-Val-OH24Boc-Ala-OH23Boc-Asp (OBzl) -OH22Boc -Ser (Bzl) -OH21Boc-His (Tos) -OH2x2
【0028】上記固相合成において、Asn、Arg、
Gln、Hisを用いた場合はダブルカップリングを行
った。この様にして、表記の樹脂2.76g を得た。In the above solid phase synthesis, Asn, Arg,
When Gln and His were used, double coupling was performed. In this way, 2.76 g of the indicated resin was obtained.
【0029】(2)配列表に記載のペプチドの製造 (1)で得られた保護ペプチド−MBHA樹脂2.76
g にDMF50ml及びチオアニソール3mlを加え、室温
で2時間撹拌した後、数回エーテルで洗浄、濾過して乾
燥させた。これにアニソール5mlを加え、さらに無水弗
化水素25mlを加え、0℃で1時間撹拌した。反応後、
無水弗化水素を減圧下留去後、残査をエーテルで洗浄
し、これに0.1M 酢酸100mlを加えペプチド抽出し
た。(2) Production of peptide described in Sequence Listing Protected peptide obtained in (1) -MBHA resin 2.76
50 ml of DMF and 3 ml of thioanisole were added to the resulting mixture, and the mixture was stirred at room temperature for 2 hours, washed several times with ether, filtered and dried. 5 ml of anisole was added thereto, and 25 ml of anhydrous hydrogen fluoride was further added thereto, followed by stirring at 0 ° C. for 1 hour. After the reaction,
After distilling off anhydrous hydrogen fluoride under reduced pressure, the residue was washed with ether, and 100 ml of 0.1 M acetic acid was added thereto to extract the peptide.
【0030】抽出液をアンバーライトIR−410の陰
イオン交換樹脂20mlとともに15分間撹拌した後、不
溶樹脂を濾去した。得られた溶液は、0.22μミリポ
アフィルターにて濾過し凍結乾燥して823mgの白色粉
末を得た。次にCM−セルロースカラム(2.5×30
cm)にかけ0.05M から0.5M の直線勾配をもった
AcONH4(pH7.0)で溶出(10ml/fraction) を
行い、フラクション69〜82を集め目的とするペプチ
ド382mgを得た。これをさらに以下に示す条件にて高
速液体クロマトグラフィーにかけ精製した。After the extract was stirred for 15 minutes with 20 ml of an anion exchange resin of Amberlite IR-410, the insoluble resin was removed by filtration. The obtained solution was filtered through a 0.22 μm Millipore filter and freeze-dried to obtain 823 mg of a white powder. Next, a CM-cellulose column (2.5 × 30
AcONH 4 with a linear gradient of 0.5M from 0.05M subjected to cm), eluting with (pH 7.0) performs (10ml / fraction), to obtain a peptide 382mg of interest Fractions 69-82. This was further purified by high performance liquid chromatography under the following conditions.
【0031】カラム:TSK GEL ODS−120
T(55×300mm) 溶 媒:0.1%TFA−アセトニトリル (アセトニトリルを20%から40%に変化させる直線
勾配グラジェント) 流 速:10ml/min 当該高速液体クロマトグラフィーにより部分精製ペプチ
ド100mgより63mgが得られた。Column: TSK GEL ODS-120
T (55 × 300 mm) Solvent: 0.1% TFA-acetonitrile (linear gradient gradient changing acetonitrile from 20% to 40%) Flow rate: 10 ml / min 63 mg from partially purified peptide 100 mg by the high performance liquid chromatography was gotten.
【0032】得られた純粋ペプチドにつきペプチドマッ
プ及びアミノ酸値を求め、本発明物質であることを確認
し、さらに物性値として施光度及び高速液体クロマトグ
ラフィーの保持時間を求めた。アミノ酸分析条件は、6
N −HCl(0.1%フェノール含有)中で110℃、
20時間の加水分解反応を行った後に、日立アミノ酸分
析L−8500型によって分析した。 Asp(5) 5.00, Thr(2) 1.72, Ser(2) 1.61, Glu(1) 1.1
0, Ala(2) 2.00,Val(2) 2.00, Ile(1) 1.02, Leu(4) 4.
15, Tyr(2) 1.86, Phe(1) 0.92,His(1) 0.95, Arg(5)
4.75The peptide map and amino acid value of the obtained pure peptide were determined to confirm that the substance was the substance of the present invention, and the physical properties were determined such as the degree of light emission and the retention time of high performance liquid chromatography. Amino acid analysis conditions are 6
110 ° C. in N-HCl (containing 0.1% phenol),
After performing a hydrolysis reaction for 20 hours, analysis was performed using Hitachi Amino Acid Analysis Model L-8500. Asp (5) 5.00, Thr (2) 1.72, Ser (2) 1.61, Glu (1) 1.1
0, Ala (2) 2.00, Val (2) 2.00, Ile (1) 1.02, Leu (4) 4.
15, Tyr (2) 1.86, Phe (1) 0.92, His (1) 0.95, Arg (5)
4.75
【0033】高速液体クロマトグラフィーの条件は以下
によって分析した。 カラム:TSK GEL ODS−120T(4.6×
300mm) 溶 媒:0.1%TFA−アセトニトリル (アセトニトリルを20%から50%に変化させる直線
勾配グラジェント) 流 速:1ml/min 保持時間 26.2分 施光度の測定装置、測定条件は次のごとくである。 装置:SEPA−200(株式会社堀場製作所) 条件:Naランプ589nm 温度20℃ セル 100nm インテグレーションタイム5秒 濃度1%(0.1M −酢酸中) [α]D 52.5The conditions for high performance liquid chromatography were analyzed as follows. Column: TSK GEL ODS-120T (4.6 ×
Solvent: 0.1% TFA-acetonitrile (linear gradient gradient changing acetonitrile from 20% to 50%) Flow rate: 1 ml / min Retention time 26.2 minutes The light intensity measuring device and measuring conditions are as follows. Like. Equipment: SEPA-200 (Horiba, Ltd.) Conditions: Na lamp 589 nm Temperature 20 ° C. Cell 100 nm Integration time 5 seconds Concentration 1% (0.1 M in acetic acid) [α] D 52.5
【0034】試験例 前記実施例に示した本発明のVIP誘導体の血流量なら
びに血圧に及ぼす効果を公知のVIPと比較した。体重
220〜250g のWistar系雄性ラットをペントバルビ
タールの腹腔内投与(25mg/kg)により麻酔し、背位
に固定した。血圧は頸動脈に動脈カニューレを挿入し、
ヘパリン加生理食塩液(10U /ml)を満たしたドーム
キット(SCK−512日本光電)を介して血圧トラン
スデューサー(DX−300日本光電)に接続し、ひず
み圧力用アンプ(AP−601G日本光電)により測定
した。血流量は右大腿動脈に血流測定用プローブ(FR
−030T日本光電)を取り付け、電磁血流計(MFV
−3200日本光電)に接続して測定した。Test Example The effects of the VIP derivative of the present invention shown in the above Examples on blood flow and blood pressure were compared with those of a known VIP. Male Wistar rats weighing 220-250 g were anesthetized by intraperitoneal administration of pentobarbital (25 mg / kg) and fixed in the dorsal position. For blood pressure, insert an artery cannula into the carotid artery,
Connected to a blood pressure transducer (DX-300 Nihon Kohden) via a dome kit (SCK-512 Nihon Kohden) filled with heparinized saline (10 U / ml), and a strain pressure amplifier (AP-601G Nihon Kohden) Was measured by The blood flow was measured by a blood flow measurement probe (FR) in the right femoral artery.
-030T Nihon Kohden) and an electromagnetic blood flow meter (MFV)
-3200 Nihon Kohden).
【0035】[0035]
【表1】 [Table 1]
【0036】[0036]
【発明の効果】上記試験例から明らかなように、本発明
のVIP誘導体は、ペプチドの活性が増強され、低用量
で血流量改善効果を発現することが可能となり、さらに
は副作用の血圧低下作用が少ない特徴を有す。As is clear from the above test examples, the VIP derivative of the present invention enhances the activity of the peptide, enables to exhibit a blood flow improving effect at a low dose, and further has a side effect of lowering blood pressure. Has few features.
【配列表】配列番号:1 配列の長さ:28 配列の型:アミノ酸 トポロジー:直鎖状 配列の種類:ペプチド 配列の特徴 特徴を表す記号:peptide 存在位置:15、20、21 特徴を決定した方法:E 配列 His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Arg Gln 1 5 10 15 Leu Ala Val Arg Arg Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn 20 25 28[Sequence List] SEQ ID NO: 1 Sequence length: 28 Sequence type: amino acid Topology: Linear Sequence type: Peptide Sequence characteristics Characteristic symbol: peptide Location: 15, 20, 21 Characteristic determined Method: E sequence His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn Tyr Thr Arg Leu Arg Arg Gln 1 5 10 15 Leu Ala Val Arg Arg Tyr Leu Asn Ser Ile Leu Asn 20 25 28
フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7,DB名) C07K 7/08 ZNA A61K 38/00 BIOSIS(DIALOG) CA(STN) REGISTRY(STN) WPI(DIALOG)Continued on the front page (58) Fields surveyed (Int. Cl. 7 , DB name) C07K 7/08 ZNA A61K 38/00 BIOSIS (DIALOG) CA (STN) REGISTRY (STN) WPI (DIALOG)
Claims (2)
Tyr Thr Arg Leu Arg Arg Gln Leu Ala Val Arg Arg Ty
r Leu Asn Ser Ile Leu Asn(配列番号1) で表されるペプチド又はその塩。[1] His Ser Asp Ala Val Phe Thr Asp Asn
Tyr Thr Arg Leu Arg Arg Gln Leu Ala Val Arg Arg Ty
r Leu Asn Peptide represented by Ser Ile Leu Asn (SEQ ID NO: 1) or a salt thereof.
有する血流改善剤。2. A blood flow improving agent containing the peptide according to claim 1 or a salt thereof.
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP03085851A JP3137349B2 (en) | 1991-03-27 | 1991-03-27 | Peptide derivative |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP03085851A JP3137349B2 (en) | 1991-03-27 | 1991-03-27 | Peptide derivative |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH04297498A JPH04297498A (en) | 1992-10-21 |
JP3137349B2 true JP3137349B2 (en) | 2001-02-19 |
Family
ID=13870377
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP03085851A Expired - Fee Related JP3137349B2 (en) | 1991-03-27 | 1991-03-27 | Peptide derivative |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JP3137349B2 (en) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101629806B1 (en) | 2014-05-30 | 2016-06-14 | 주식회사 엔에쓰엠테크 | Valve assembly for bidet |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
DE69630583T2 (en) * | 1995-06-09 | 2004-09-30 | Itoham Foods Inc., Kobe | PEPTIDE, BRONCHODILATOR AND AGENT TO IMPROVE THE BLOOD FLOW |
DE19917713A1 (en) * | 1999-04-09 | 2000-10-19 | Diagnostikforschung Inst | Short-chain peptide-dye conjugates as contrast agents for optical diagnostics |
-
1991
- 1991-03-27 JP JP03085851A patent/JP3137349B2/en not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
KR101629806B1 (en) | 2014-05-30 | 2016-06-14 | 주식회사 엔에쓰엠테크 | Valve assembly for bidet |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JPH04297498A (en) | 1992-10-21 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
FI83660B (en) | Process for the preparation of human pancreatic GRF | |
JP3266311B2 (en) | Novel polypeptide and anti-HIV agent using the same | |
CA1247602A (en) | Rcrf and analogs | |
US4415558A (en) | CRF And analogs | |
US4822774A (en) | Physiologically active peptide | |
JPH0689035B2 (en) | GRF analogs | |
JP2001524505A (en) | Method for site-specific preparation of polyethylene glycol-GRF conjugate | |
CZ281507B6 (en) | Synthetic peptides, biologically active fragment and said peptide non-toxic salts | |
EP0270376B1 (en) | Calcitonin gene-related peptide derivatives | |
HU199508B (en) | Process for producing grf analogues and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient | |
US4098777A (en) | Process for the preparation of pyroglutamyl-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Gly-Ser-Asn | |
US5856303A (en) | Peptide, a bronchus-expanding agent, and a blood-flow-improving agent | |
JP2544929B2 (en) | Novel bioactive peptide | |
KR19990082403A (en) | Methods for the synthesis of vasoactive intestinal peptide analogs | |
HUT55803A (en) | Process for producing vip-analogues ii | |
JP3137349B2 (en) | Peptide derivative | |
CA1243301A (en) | Crf and analogs | |
JPS60501861A (en) | insulin enhancing peptide | |
JPH0692991A (en) | New active peptide | |
CA1247599A (en) | Mammalian pgrf | |
CA1340964C (en) | Crf analogs | |
JPS61118399A (en) | Production of peptide hormone | |
JPH05505821A (en) | CRF congeners | |
JPH08337600A (en) | Production of glucagon | |
JPS6120560B2 (en) |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
S531 | Written request for registration of change of domicile |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313531 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20081208 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20091208 Year of fee payment: 9 |
|
LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |