JP3128147B2 - 免疫系活性物質とその製造方法 - Google Patents
免疫系活性物質とその製造方法Info
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- JP3128147B2 JP3128147B2 JP03209633A JP20963391A JP3128147B2 JP 3128147 B2 JP3128147 B2 JP 3128147B2 JP 03209633 A JP03209633 A JP 03209633A JP 20963391 A JP20963391 A JP 20963391A JP 3128147 B2 JP3128147 B2 JP 3128147B2
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、免疫系活性物質とそ
の製造方法に関するものである。さらに詳しくは、この
発明は、マクロファージ貧食活性やＮＫ細胞活性等に優
れた特徴を有する霊芝抽出処理物質からなる新しい免疫
系活性物質とその製造方法に関するものである。
の製造方法に関するものである。さらに詳しくは、この
発明は、マクロファージ貧食活性やＮＫ細胞活性等に優
れた特徴を有する霊芝抽出処理物質からなる新しい免疫
系活性物質とその製造方法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術とその課題】生体には異物（非自己）に対
する自己防衛の機構として免疫系が存在し、この免疫系
は神経系とともに外部からの刺激に対して大きな柔軟性
を持つ巧みなネットワークをもって対処することで生体
の恒常性を保っている。この恒常性が何らかの原因によ
りくずれると、人は様々な疾病におちいることになる。
する自己防衛の機構として免疫系が存在し、この免疫系
は神経系とともに外部からの刺激に対して大きな柔軟性
を持つ巧みなネットワークをもって対処することで生体
の恒常性を保っている。この恒常性が何らかの原因によ
りくずれると、人は様々な疾病におちいることになる。
【０００３】薬物がある種の疾患に対して作用を及ぼす
場合、その原因に直接作用する場合と、生体側の自己防
衛機能を高めることによって間接的に作用する場合とが
考えられる。これまでに開発され使用されてきている化
学合成によって製造された多くの薬物は、そのほとんど
が前者の直接作用を目的としていたのに対し、東洋医学
の伝統に沿った生薬は、主として後者の間接的作用、す
なわち免疫系等の賦活、活性化にその作用機序のねらい
がおかれていた。
場合、その原因に直接作用する場合と、生体側の自己防
衛機能を高めることによって間接的に作用する場合とが
考えられる。これまでに開発され使用されてきている化
学合成によって製造された多くの薬物は、そのほとんど
が前者の直接作用を目的としていたのに対し、東洋医学
の伝統に沿った生薬は、主として後者の間接的作用、す
なわち免疫系等の賦活、活性化にその作用機序のねらい
がおかれていた。
【０００４】しかしながら、この生薬の作用機序につい
ては長い間不明とされていた。たとえば、霊芝はサルノ
コシカケ科マンネンタケに属する菌苔類であって、天然
生薬として慢性気管支炎、冠状動脈硬化性心臓病、不製
脈等の治療に使用されてきたが、担子菌や食用菌の水溶
性多糖類として抗腫瘍活性が認められている他の天然物
等と同様に、その作用機序については結果としての因果
性が認められても実態は全く不明な状況にあった。
ては長い間不明とされていた。たとえば、霊芝はサルノ
コシカケ科マンネンタケに属する菌苔類であって、天然
生薬として慢性気管支炎、冠状動脈硬化性心臓病、不製
脈等の治療に使用されてきたが、担子菌や食用菌の水溶
性多糖類として抗腫瘍活性が認められている他の天然物
等と同様に、その作用機序については結果としての因果
性が認められても実態は全く不明な状況にあった。
【０００５】このため、その特徴的な作用効果が経験的
は認められていた霊芝の場合にも、これをさらに生体の
作用機序との関係において高度技術として利用し、その
応用面の発展を図ることは困難であった。この発明は、
このような事情に鑑みてなされたものであり、従来より
知られている霊芝の生理活性をより高度な技術として展
開することを目的としてなされたものであり、さらに詳
しくは、近年長足の進歩を遂げてきた遺伝子工学、細胞
工学、分子生物学の技術知識を踏まえて、見出された生
薬としての霊芝成分の免疫系活性物質としての提供と、
そのための製造方法の提供を目的としている。
は認められていた霊芝の場合にも、これをさらに生体の
作用機序との関係において高度技術として利用し、その
応用面の発展を図ることは困難であった。この発明は、
このような事情に鑑みてなされたものであり、従来より
知られている霊芝の生理活性をより高度な技術として展
開することを目的としてなされたものであり、さらに詳
しくは、近年長足の進歩を遂げてきた遺伝子工学、細胞
工学、分子生物学の技術知識を踏まえて、見出された生
薬としての霊芝成分の免疫系活性物質としての提供と、
そのための製造方法の提供を目的としている。
【０００６】
【課題を解決するための手段】この発明は、上記の課題
を解決するものとして、非極性溶媒によって霊芝を抽出
処理した後の抽出残渣を熱水またはアルコール水溶液に
よって抽出してなることや、さらに必要に応じてこれを
分画精製してなることを特徴とする免疫系活性物質を提
供する。そしてまた、この発明は、上記の手段に沿って
の免疫系活性物質の製造方法をも提供する。
を解決するものとして、非極性溶媒によって霊芝を抽出
処理した後の抽出残渣を熱水またはアルコール水溶液に
よって抽出してなることや、さらに必要に応じてこれを
分画精製してなることを特徴とする免疫系活性物質を提
供する。そしてまた、この発明は、上記の手段に沿って
の免疫系活性物質の製造方法をも提供する。
【０００７】より具体的に説明すると、この発明の免疫
系活性物質は、まず水洗等によって霊芝に付着した土砂
を取り除き、６０℃前後の温度において乾燥しておく。
次いで、ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ｎ−
ヘキサン、ｎ−ヘプタン等の非極性溶媒に浸漬し、この
非極性溶媒可溶分を抽出する。この抽出は、すでに提案
されている霊芝の苦味成分を除去する操作に相当するも
のであり、内容的にはトリテルペン類を含む非極性溶媒
可溶分の除去工程としての意味を有している。この抽出
は、溶媒の還流温度程度において行うのが好ましく、通
常は、２〜６時間程度の処理とする。
系活性物質は、まず水洗等によって霊芝に付着した土砂
を取り除き、６０℃前後の温度において乾燥しておく。
次いで、ジエチルエーテル、ジプロピルエーテル、ｎ−
ヘキサン、ｎ−ヘプタン等の非極性溶媒に浸漬し、この
非極性溶媒可溶分を抽出する。この抽出は、すでに提案
されている霊芝の苦味成分を除去する操作に相当するも
のであり、内容的にはトリテルペン類を含む非極性溶媒
可溶分の除去工程としての意味を有している。この抽出
は、溶媒の還流温度程度において行うのが好ましく、通
常は、２〜６時間程度の処理とする。
【０００８】次いで、この発明においては、その抽出残
渣を、９０〜１００℃の熱水によって、あるいはまた５
０〜６０％濃度程度のアルコール水溶液によって抽出す
る。このアルコール水溶液としては、エタノール、プロ
パノール、イソプロパノール、ブタノール、あるいはグ
リコール等の水溶液、なかでもエタール水溶液を用いる
のが好ましく、抽出は、４０〜７０℃程度の温度におい
て行うが好ましい。
渣を、９０〜１００℃の熱水によって、あるいはまた５
０〜６０％濃度程度のアルコール水溶液によって抽出す
る。このアルコール水溶液としては、エタノール、プロ
パノール、イソプロパノール、ブタノール、あるいはグ
リコール等の水溶液、なかでもエタール水溶液を用いる
のが好ましく、抽出は、４０〜７０℃程度の温度におい
て行うが好ましい。
【０００９】抽出時間は、一般的には、数時間〜２０時
間程度とし、熱水抽出の場合はより短い時間とすること
ができる。もちろん、前記の非極性溶媒による抽出も、
その抽出残渣の熱水もしくはアルコール水溶液による抽
出も、抽出媒体の使用量との関係で、抽出時間は適宜に
選択する。
間程度とし、熱水抽出の場合はより短い時間とすること
ができる。もちろん、前記の非極性溶媒による抽出も、
その抽出残渣の熱水もしくはアルコール水溶液による抽
出も、抽出媒体の使用量との関係で、抽出時間は適宜に
選択する。
【００１０】この熱水およびアルコール水溶液の抽出に
よって霊芝エキスを取得することができ、この霊芝エキ
スそのものが免疫系活性作用を有し、マクロファージ増
殖、マクロファージ貧食能の増大、さらには、ＮＫ細胞
の活性化能を示す。そしてまた、この発明においては、
前記抽出分を分画精製することができる。この分画精製
は、たとえば公知のゲル炉過法等の適宜な手段が採用さ
れる。
よって霊芝エキスを取得することができ、この霊芝エキ
スそのものが免疫系活性作用を有し、マクロファージ増
殖、マクロファージ貧食能の増大、さらには、ＮＫ細胞
の活性化能を示す。そしてまた、この発明においては、
前記抽出分を分画精製することができる。この分画精製
は、たとえば公知のゲル炉過法等の適宜な手段が採用さ
れる。
【００１１】この分画精製された活性物質のフラクショ
ンは、より選択的で大きな免疫系活性を示す。以下、実
施例を示し、さらに詳しくこの発明の免疫系活性物質と
その製造法について説明する。
ンは、より選択的で大きな免疫系活性を示す。以下、実
施例を示し、さらに詳しくこの発明の免疫系活性物質と
その製造法について説明する。
【００１２】
実施例１ ＜ａ＞抽出エキスの製造 水洗して土砂を取り除いた霊芝を細断し、約６０℃の温
度において乾燥した。この霊芝５００ｇをジエチルエー
テルによって抽出した。エーテル可溶成分を除去した後
の抽出残渣に５ｌの水を加え、９０〜１００℃の温度で
５時間抽出した。抽出液を炉過した後に、残渣に５ｌの
水を加え、さらに同様にして２回抽出した。
度において乾燥した。この霊芝５００ｇをジエチルエー
テルによって抽出した。エーテル可溶成分を除去した後
の抽出残渣に５ｌの水を加え、９０〜１００℃の温度で
５時間抽出した。抽出液を炉過した後に、残渣に５ｌの
水を加え、さらに同様にして２回抽出した。
【００１３】抽出液を濃縮し、凍結乾燥して、霊芝熱水
抽出エキスとして取得した。 ＜ｂ＞マクロファージ増殖能（マイトジェン活性）の評
価 ８週令雄性マウスとして、ｄｄＹ，Ｃ３Ｈ／Ｈｅ，ＤＢ
Ａ／２，Ｃ５７ＢＬ／６，Ｂ１０，Ｂ１０Ａ，ＤＢＡ／
１Ｊ，ＢＡＬＢ／ｃの系統のマウスを、三協ラボサービ
スより購入後、恒温恒湿飼育室にて市販されている固形
試料及び水道水を自由に摂取させて飼育し、使用した。
抽出エキスとして取得した。 ＜ｂ＞マクロファージ増殖能（マイトジェン活性）の評
価 ８週令雄性マウスとして、ｄｄＹ，Ｃ３Ｈ／Ｈｅ，ＤＢ
Ａ／２，Ｃ５７ＢＬ／６，Ｂ１０，Ｂ１０Ａ，ＤＢＡ／
１Ｊ，ＢＡＬＢ／ｃの系統のマウスを、三協ラボサービ
スより購入後、恒温恒湿飼育室にて市販されている固形
試料及び水道水を自由に摂取させて飼育し、使用した。
【００１４】このうちのＣ３Ｈ／Ｈｅ及びＤＢＡ／２マ
ウス脾臓よりFicoll-coray方を用いてリンパ球を回収
し、霊芝エキスを１，２，５，１０，２５，５０，１０
０μｇ／mlの濃度になるように加えた１０％ＦＣＳを含
むＲＰＭ１１６４０に懸濁させ、１×１０6cells／mlに
なるように調整した。これを５％ＣＯ2 インキュベーー
で２４時間培養した後、0.5 μＣｉの 3Ｈ−ＴＴＰを加
え更に３時間培養した。培養終了後、イムノドットブロ
ッター（アットー社）を用いてガラスフィルター（ＧＦ
−Ｃ：ワットマン社）上に細胞を吸引定着させ、生理食
塩水１ml，５％ＴＣＡ５００μｌ，７０％エタノール、
５００μｌでフィルターを洗浄し、液体シンチケーショ
ンカウンター（アロカ社）を用いて細胞に取り込まれた
トリチウムの量を測定し、細胞増殖を調べた。
ウス脾臓よりFicoll-coray方を用いてリンパ球を回収
し、霊芝エキスを１，２，５，１０，２５，５０，１０
０μｇ／mlの濃度になるように加えた１０％ＦＣＳを含
むＲＰＭ１１６４０に懸濁させ、１×１０6cells／mlに
なるように調整した。これを５％ＣＯ2 インキュベーー
で２４時間培養した後、0.5 μＣｉの 3Ｈ−ＴＴＰを加
え更に３時間培養した。培養終了後、イムノドットブロ
ッター（アットー社）を用いてガラスフィルター（ＧＦ
−Ｃ：ワットマン社）上に細胞を吸引定着させ、生理食
塩水１ml，５％ＴＣＡ５００μｌ，７０％エタノール、
５００μｌでフィルターを洗浄し、液体シンチケーショ
ンカウンター（アロカ社）を用いて細胞に取り込まれた
トリチウムの量を測定し、細胞増殖を調べた。
【００１５】このようにして、Ｃ３Ｈ／Ｈｅ、ＤＢＡ／
２両系統のマウス脾臓細胞を、霊芝エキス添加培養液中
で２４時間培養後 3Ｈ−ＴＴＰの取り込みを見たとこ
ろ、図１に示したように、１μｇ／mlの濃度からマイト
ジェン活性がみられ、１０〜１５μｇ／mlで最大となっ
た。そして２０μｇ／mlを超えると次第にマイトジェン
活性は低下し、５０μｇ／mlを超えると著しい低下がみ
られた。なお、Ｃ３Ｈ／Ｈｅ，ＤＢＡ／２の両系統にお
ける霊芝エキスによるマイトジェン活性には、有意な差
は見られなかった。
２両系統のマウス脾臓細胞を、霊芝エキス添加培養液中
で２４時間培養後 3Ｈ−ＴＴＰの取り込みを見たとこ
ろ、図１に示したように、１μｇ／mlの濃度からマイト
ジェン活性がみられ、１０〜１５μｇ／mlで最大となっ
た。そして２０μｇ／mlを超えると次第にマイトジェン
活性は低下し、５０μｇ／mlを超えると著しい低下がみ
られた。なお、Ｃ３Ｈ／Ｈｅ，ＤＢＡ／２の両系統にお
ける霊芝エキスによるマイトジェン活性には、有意な差
は見られなかった。
【００１６】この図１から明らかなように、in vitroで
霊芝熱水抽出エキスはリンパ球に対しマイトジェン活性
を有していることがわかる。このことは、霊芝エキスの
免疫系に対する作用点のひとつがリンパ球にあることを
示唆している。 ＜ｃ＞マクロファージ貧食能の評価 マウス腹腔内に減菌した流動パラフィン２mlを投与し、
３日後腹腔内に滲出した細胞を回収した。これをＰＲＭ
Ｉ１６４０で３回洗浄した後、得られた細胞を１０％Ｆ
ＣＳを加えたＰＲＭＩ１６４０にサスペンドし、１０cm
プラスチック皿に（１０５８ペトリ皿：アルコン社）で
１時間培養した。培養皿をＰＲＭＩ１６４０で３回洗浄
し浮遊細胞を除去したものをマクロファージとした。霊
芝エキスの濃度が１，２，５，１０，２５，５０，１０
０μｇ／mlの濃度になるように加えた１０％ＦＣＳを含
むＲＰＭＩ１６４０に溶解させ、回収したマクロファー
ジの濃度が１×１０6cells／mlになるように調整した。
これを５％Ｃ2、３７℃で２４時間培養した後、ラテッ
クスビーズ（dimater １μｍ）を最終濃度が0.01％にな
るようにサスペンドし、さらに１５分間培養した。次に
皿をＲＰＭＩ１６４０で良く洗浄し、細胞を２％ホルマ
リン液で固定下後エチジウムブロマイドで染色し、螢光
顕微鏡でラテックスビーズ（セキスイ）を貧食している
マクロファージの比率を測定した。
霊芝熱水抽出エキスはリンパ球に対しマイトジェン活性
を有していることがわかる。このことは、霊芝エキスの
免疫系に対する作用点のひとつがリンパ球にあることを
示唆している。 ＜ｃ＞マクロファージ貧食能の評価 マウス腹腔内に減菌した流動パラフィン２mlを投与し、
３日後腹腔内に滲出した細胞を回収した。これをＰＲＭ
Ｉ１６４０で３回洗浄した後、得られた細胞を１０％Ｆ
ＣＳを加えたＰＲＭＩ１６４０にサスペンドし、１０cm
プラスチック皿に（１０５８ペトリ皿：アルコン社）で
１時間培養した。培養皿をＰＲＭＩ１６４０で３回洗浄
し浮遊細胞を除去したものをマクロファージとした。霊
芝エキスの濃度が１，２，５，１０，２５，５０，１０
０μｇ／mlの濃度になるように加えた１０％ＦＣＳを含
むＲＰＭＩ１６４０に溶解させ、回収したマクロファー
ジの濃度が１×１０6cells／mlになるように調整した。
これを５％Ｃ2、３７℃で２４時間培養した後、ラテッ
クスビーズ（dimater １μｍ）を最終濃度が0.01％にな
るようにサスペンドし、さらに１５分間培養した。次に
皿をＲＰＭＩ１６４０で良く洗浄し、細胞を２％ホルマ
リン液で固定下後エチジウムブロマイドで染色し、螢光
顕微鏡でラテックスビーズ（セキスイ）を貧食している
マクロファージの比率を測定した。
【００１７】次の表１に示したように、霊芝エキスはマ
クロファージの貧食能を増大させた。
クロファージの貧食能を増大させた。
【００１８】
【表１】
【００１９】実施例２ ＜ａ＞抽出エキスの分画精製 霊芝５００ｇをエーテルで抽出を行い、エーテル可溶成
分を除去した後、これに５ｌの水を加え、９０〜１００
℃で５時間抽出した。抽出液を濾過した後、残渣に５ｌ
の水を加え更に２回抽出を繰り返した。次に濾液を集め
減圧濃縮を行い約1.5 ｌまで濃縮したのち、酢酸３０ml
と酢酸エチル５００mlを加えて濾液の洗浄を行い、つい
でｎ−ブタノールで洗浄を行った。この様にして得られ
た水層２００mlをセファデックスＧ−７５（６５×５０
０mm）にのせ、２％酢酸で溶出した。溶出液は１６mlづ
つ分取し、凍結乾燥を行った。各フラクション名及び１
６ml当たりの収量は、表２のとおりである。
分を除去した後、これに５ｌの水を加え、９０〜１００
℃で５時間抽出した。抽出液を濾過した後、残渣に５ｌ
の水を加え更に２回抽出を繰り返した。次に濾液を集め
減圧濃縮を行い約1.5 ｌまで濃縮したのち、酢酸３０ml
と酢酸エチル５００mlを加えて濾液の洗浄を行い、つい
でｎ−ブタノールで洗浄を行った。この様にして得られ
た水層２００mlをセファデックスＧ−７５（６５×５０
０mm）にのせ、２％酢酸で溶出した。溶出液は１６mlづ
つ分取し、凍結乾燥を行った。各フラクション名及び１
６ml当たりの収量は、表２のとおりである。
【００２０】
【表２】
【００２１】＜ｂ＞マイトジェン活性の評価 ８週令雄、Ｃ３Ｈ／Ｈｅ又はＤＢＡ／２の両系統のマウ
スの脾臓よりFicoll-conray 法を用いてリンパ球のみを
回収した。次に霊芝エキスの各分画を１０μｇ／mlの濃
度になるように、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭ１１６４０
に溶解させ、回収したリンパ球が１×１０6 cells ／ml
になるように調整した。これを５％ＣＯ2 のインキュベ
ーターで２４時間培養した後、0.5 μＣｉの 3Ｈ−ＴＴ
Ｐを加え、更に３時間培養した。培養終了後イムノドッ
トプロッターをもちいてガラスフィルター上に細胞を吸
引定着させ、生理食塩水１ml、５％ＴＣＡ５００μｌ、
７０％エタノール５００μｌを用いてフィルターを洗浄
し、液体シンチレーションカウンターを用いて細胞に取
り込まれたトリチウムの量を測定し細胞増殖を評価し
た。
スの脾臓よりFicoll-conray 法を用いてリンパ球のみを
回収した。次に霊芝エキスの各分画を１０μｇ／mlの濃
度になるように、１０％ＦＣＳを含むＲＰＭ１１６４０
に溶解させ、回収したリンパ球が１×１０6 cells ／ml
になるように調整した。これを５％ＣＯ2 のインキュベ
ーターで２４時間培養した後、0.5 μＣｉの 3Ｈ−ＴＴ
Ｐを加え、更に３時間培養した。培養終了後イムノドッ
トプロッターをもちいてガラスフィルター上に細胞を吸
引定着させ、生理食塩水１ml、５％ＴＣＡ５００μｌ、
７０％エタノール５００μｌを用いてフィルターを洗浄
し、液体シンチレーションカウンターを用いて細胞に取
り込まれたトリチウムの量を測定し細胞増殖を評価し
た。
【００２２】図２に示したように、最も分子量が大きい
と思われる分画であるFr. １に高い活性がみられた。な
お、図２のCon Ａは、コンカナバリンＡの１０μｇ／ml
をポジティブコントロールとして加えたものを示してい
る。分画化に用いたSephade ×Ｇ−７５は粒子直径が４
０〜１２０μｍであり分別領域が分子量で1,000 〜50,0
00程度であると考えると、マイトジェン活性を示す成分
は分子量が数万〜数十万であり、そのためにFr. １とし
て溶出してきたと考えられる。
と思われる分画であるFr. １に高い活性がみられた。な
お、図２のCon Ａは、コンカナバリンＡの１０μｇ／ml
をポジティブコントロールとして加えたものを示してい
る。分画化に用いたSephade ×Ｇ−７５は粒子直径が４
０〜１２０μｍであり分別領域が分子量で1,000 〜50,0
00程度であると考えると、マイトジェン活性を示す成分
は分子量が数万〜数十万であり、そのためにFr. １とし
て溶出してきたと考えられる。
【００２３】そしてこのFr. １はマクロファージ貧食能
を増強した。 ＜ｃ＞ マクロファージによるサイトカイン産生の評価 ８週令雄のＣ３ｈ／Ｈｅ又はＤＢＡ／２マウスの腹腔内
に流動パラフィン２mlを注入し、３日後腹腔内滲出した
マクロファージを回収した。つぎにＬＰＳ１００ngと霊
芝熱水抽出エキスフラクションを１０μｇ／mlになる様
に１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０に加え、回収し
たマクロファージを１×１０6 cells ／mlになる様に調
整した。これを５％ＣＯ2 ３７℃インキュベーターで２
４時間培養した後、0.2 μｍのメンブランフィルターを
用いて浮遊物を除去し、これを活性測定サンプルとし
た。次にｄｄｙ系５週令マウスよりFicoll-conray 法に
より胸腺由来のリンパ球を回収した。次に活性測定サン
プルを１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０を用いて２
段階希釈し、リンパ球が１×１０6 cells ／mlになるよ
うに調整した。これを５％ＣＯ2 ３７℃インキュベータ
ーで２４時間培養した後、0.5 μＣｉの 3Ｈ−ＴＴＰを
加え更に３時間培養した。培養後イムノドットブロッタ
ーを用いてガラスフィルター上に細胞を吸引定着させ、
生理食塩水１ml、５％ＴＣＡ５００μｌ、７０％エタノ
ール５００μｌを用いてフィルターを洗浄し、液体シン
チレーションカウンターを用いて細胞に取り込まれたト
リチウムの量を測定し細胞増殖を調べた。
を増強した。 ＜ｃ＞ マクロファージによるサイトカイン産生の評価 ８週令雄のＣ３ｈ／Ｈｅ又はＤＢＡ／２マウスの腹腔内
に流動パラフィン２mlを注入し、３日後腹腔内滲出した
マクロファージを回収した。つぎにＬＰＳ１００ngと霊
芝熱水抽出エキスフラクションを１０μｇ／mlになる様
に１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０に加え、回収し
たマクロファージを１×１０6 cells ／mlになる様に調
整した。これを５％ＣＯ2 ３７℃インキュベーターで２
４時間培養した後、0.2 μｍのメンブランフィルターを
用いて浮遊物を除去し、これを活性測定サンプルとし
た。次にｄｄｙ系５週令マウスよりFicoll-conray 法に
より胸腺由来のリンパ球を回収した。次に活性測定サン
プルを１０％ＦＣＳを含むＲＰＭＩ１６４０を用いて２
段階希釈し、リンパ球が１×１０6 cells ／mlになるよ
うに調整した。これを５％ＣＯ2 ３７℃インキュベータ
ーで２４時間培養した後、0.5 μＣｉの 3Ｈ−ＴＴＰを
加え更に３時間培養した。培養後イムノドットブロッタ
ーを用いてガラスフィルター上に細胞を吸引定着させ、
生理食塩水１ml、５％ＴＣＡ５００μｌ、７０％エタノ
ール５００μｌを用いてフィルターを洗浄し、液体シン
チレーションカウンターを用いて細胞に取り込まれたト
リチウムの量を測定し細胞増殖を調べた。
【００２４】サイトカイン産生量を評価したところ、図
３に示したように、Fr. １に高い活性があり、またFr.
４にも、マウス系統による差があるものの高い活性が認
められた。マクロファージは抗原提示によってＴ細胞を
活性化すると同時に、それ自身が自然免疫における重要
なエフェクター細胞であって、現在抗腫瘍活性物質とし
て認められているビシバニール（ＯＫ−４３２）やクレ
スチン（Ｐ−ＳＫ）もマクロファージに作用し抗腫瘍活
性を示すことがしられている。また活性化されたマクロ
ファージはサイトカインやエイコサノイドおよび活性酸
素などを放出し免疫系を調節していると考えられてい
る。これらのうちマクロファージの産生するおもなサイ
トカインにはＩＬ−１やＴＮＦ−αがしられている。Ｉ
Ｌ−１は多様な生物活性を持ち、Ｔ細胞やＮＫ細胞に作
用しＩＬ−２レセプター発現を促進する。またＴＮＦ−
αはＢＣＧ注射しその後エンドトキシンを注射したマウ
ス血清より得られた因子であり、in vivo である種の腫
瘍を壊死させる。またＴＮＦ−αはin vitroで多くの癌
細胞に対し細胞障害生を示す。
３に示したように、Fr. １に高い活性があり、またFr.
４にも、マウス系統による差があるものの高い活性が認
められた。マクロファージは抗原提示によってＴ細胞を
活性化すると同時に、それ自身が自然免疫における重要
なエフェクター細胞であって、現在抗腫瘍活性物質とし
て認められているビシバニール（ＯＫ−４３２）やクレ
スチン（Ｐ−ＳＫ）もマクロファージに作用し抗腫瘍活
性を示すことがしられている。また活性化されたマクロ
ファージはサイトカインやエイコサノイドおよび活性酸
素などを放出し免疫系を調節していると考えられてい
る。これらのうちマクロファージの産生するおもなサイ
トカインにはＩＬ−１やＴＮＦ−αがしられている。Ｉ
Ｌ−１は多様な生物活性を持ち、Ｔ細胞やＮＫ細胞に作
用しＩＬ−２レセプター発現を促進する。またＴＮＦ−
αはＢＣＧ注射しその後エンドトキシンを注射したマウ
ス血清より得られた因子であり、in vivo である種の腫
瘍を壊死させる。またＴＮＦ−αはin vitroで多くの癌
細胞に対し細胞障害生を示す。
【００２５】このような観点から、前記の通りのサイト
カイン産生能をみると、Fr. １については、すでにみた
ように、高いマイトジェン活性を示すことから、この影
響で高い活性を示しているものと思われる。一方、Fr.
４の場合には、マイトジェン活性が低いことから、さら
に検討を行ったところ、このFr. ４はサイトカインの高
い産生能によって、ＮＫ（NaturalKiller）細胞の活性
化に寄与していることが確認された。
カイン産生能をみると、Fr. １については、すでにみた
ように、高いマイトジェン活性を示すことから、この影
響で高い活性を示しているものと思われる。一方、Fr.
４の場合には、マイトジェン活性が低いことから、さら
に検討を行ったところ、このFr. ４はサイトカインの高
い産生能によって、ＮＫ（NaturalKiller）細胞の活性
化に寄与していることが確認された。
【００２６】そして、この分子量10,000〜20,000程度の
Fr. ４には、白血球減少を抑える作用があることも認め
られた。
Fr. ４には、白血球減少を抑える作用があることも認め
られた。
【００２７】
【発明の効果】この発明により、以上詳しく説明した通
り、霊芝抽出物として、マクロファージ増殖、マクロフ
ァージ貧食能の増強、サイトカイン産生能の活性による
ＮＫ細胞の活性化、さらには白血球減少抑制等の免疫系
活性作用を有する新規物質が提供される。
り、霊芝抽出物として、マクロファージ増殖、マクロフ
ァージ貧食能の増強、サイトカイン産生能の活性による
ＮＫ細胞の活性化、さらには白血球減少抑制等の免疫系
活性作用を有する新規物質が提供される。
【図１】この発明の霊芝抽出エキスのマイトジェン活性
の測定図である。
の測定図である。
【図２】霊芝抽出エキスの分画精製フラクションについ
てのマイトジェン活性の測定図である。
てのマイトジェン活性の測定図である。
【図３】マクロファージによるサイトカイン産生能の測
定図である。
定図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) A61K 35/84 A61P 37/04 C07G 17/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＣＡ（ＳＴＮ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ)
Claims (3)
- 【請求項１】 非極性溶媒によって霊芝を抽出処理した
後の抽出残渣を熱水またはアルコール水溶液によって抽
出してなることを特徴とする免疫系活性物質。 - 【請求項２】 非極性溶媒によって霊芝を抽出処理した
後の抽出残渣を熱水またはアルコール水溶液によって抽
出し、さらに分画精製してなることを特徴とする免疫系
活性物質。 - 【請求項３】 非極性溶媒によって霊芝を抽出処理し、
得られた抽出残渣を熱水またはアルコール水溶液によっ
て抽出し、さらに必要に応じて分画精製することを特徴
とする免疫系活性物質の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03209633A JP3128147B2 (ja) | 1991-08-21 | 1991-08-21 | 免疫系活性物質とその製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP03209633A JP3128147B2 (ja) | 1991-08-21 | 1991-08-21 | 免疫系活性物質とその製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0551324A JPH0551324A (ja) | 1993-03-02 |
| JP3128147B2 true JP3128147B2 (ja) | 2001-01-29 |
Family
ID=16576027
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP03209633A Expired - Fee Related JP3128147B2 (ja) | 1991-08-21 | 1991-08-21 | 免疫系活性物質とその製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3128147B2 (ja) |
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|---|---|---|---|---|
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| JP2001131083A (ja) * | 1999-11-01 | 2001-05-15 | Sakamoto Bio:Kk | 鹿角霊芝抽出物活性物質及びそれを含む医薬、健康食品、化粧料 |
| US6511790B2 (en) | 2000-08-25 | 2003-01-28 | Fuji Photo Film Co., Ltd. | Alkaline liquid developer for lithographic printing plate and method for preparing lithographic printing plate |
| JP2003313139A (ja) * | 2002-04-19 | 2003-11-06 | Noji Kumiai Hojin Zenkoku Shintake Seisan Kumiai | 免疫担当細胞の活性の増強方法 |
| WO2009157409A1 (ja) * | 2008-06-24 | 2009-12-30 | 株式会社ゲノム創薬研究所 | 植物体由来の自然免疫活性化作用が増強された自然免疫活性化組成物 |
| JP5491082B2 (ja) * | 2008-07-02 | 2014-05-14 | 株式会社ゲノム創薬研究所 | 自然免疫機能活性化組成物の製造方法及び自然免疫機能活性化組成物 |
| JP7317358B2 (ja) * | 2019-07-16 | 2023-07-31 | 日本メナード化粧品株式会社 | 造血幹細胞の分化促進剤 |
| JP7372659B2 (ja) * | 2019-09-05 | 2023-11-01 | 日本メナード化粧品株式会社 | 免疫賦活剤 |
-
1991
- 1991-08-21 JP JP03209633A patent/JP3128147B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0551324A (ja) | 1993-03-02 |
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