JP3106256B2 - Method for producing kappa-casein glycomacropeptide - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、種々の生理活性をもつ
κ−カゼイングリコマクロペプチドを簡便に製造する方
法に関する。The present invention relates to a method for easily producing κ-casein glycomacropeptide having various physiological activities.

【０００２】[0002]

【従来の技術】κ−カゼイングリコマクロペプチドは、
牛乳のκ−カゼインにレンネット又はペプシンを作用さ
せた時に生成するシアル酸結合ペプチドであって、チー
ズホエー中に含まれることが、従来から知られている。
従来、κ−カゼイングリコマクロペプチドの製造法とし
ては、実験室的には、牛乳から単離したκ−カゼインを
脱イオン水に溶解したものにペプシンを作用させた後、
トリクロル酢酸を加えてパラ−κ−カゼイン画分を沈澱
させ、次いで得られた上清を脱イオン水に対して透析し
て脱塩した後、凍結乾燥することにより調製する方法
（セオ等「ジャーナル オブ フード サイエンス」
（Journal ofFood Science) 53, 80 (1988)）、また
は、上記κ−カゼインを脱イオン水に溶解し、該溶液の
pHを 6.7に調整した後、レンネットを作用させ、次いで
更にpHを4.6 に調整してパラ−κ−カゼインを沈澱させ
て除去し、得られた上清を透析に付して脱塩した後、凍
結乾燥して調製する方法（アカデミックプレス社発行
「ミルクプロテイン」（Milk Protein) pp200)等が行わ
れていた。BACKGROUND OF THE INVENTION κ-Casein glycomacropeptide is
It is conventionally known that sialic acid-binding peptide produced when rennet or pepsin is allowed to act on κ-casein of milk and contained in cheese whey.
Conventionally, as a method for producing κ-casein glycomacropeptide, in a laboratory, after dissolving κ-casein isolated from milk in deionized water, pepsin is allowed to act on the solution.
Trichloroacetic acid is added to precipitate a para-κ-casein fraction, and the resulting supernatant is dialyzed against deionized water, desalted, and then lyophilized to prepare a preparation (Seo et al. Of Food Science "
(Journal of Food Science) 53, 80 (1988)) or dissolving the above κ-casein in deionized water,
After adjusting the pH to 6.7, rennet was allowed to act, and then the pH was further adjusted to 4.6 to precipitate and remove para-κ-casein, and the resulting supernatant was dialyzed and desalted. And a method of preparing by freeze-drying ("Milk Protein" (Milk Protein) pp200, published by Academic Press).

【０００３】しかし、これらの方法は、実験室的なもの
であるから、当然大量生産には適さない。一方、κ−カ
ゼイングリコマクロペプチドの産業上の利用性が従来知
られていなかったため、その大量生産のための方法につ
いても検討されていなかった。ところが、最近になって
κ−カゼイングリコマクロペプチドが犬の食欲を低下さ
せる作用を有すること（スタン等、「ブルティン オブ
エクスペリメンタルバイオロジー アンド メディシ
ン」（Bullutin of Experimental Biologyand Medicin
e) 96, 889 (1983)）が報告されたことから、肥満防止
用食品素材として利用され得ることが判った。[0003] However, these methods are of a laboratory type and are naturally not suitable for mass production. On the other hand, since the industrial utility of the κ-casein glycomacropeptide has not been known, a method for mass production thereof has not been studied. However, recently, the fact that κ-casein glycomacropeptide has an action to reduce appetite in dogs (Stan et al., “Bullutin of Experimental Biology and Medicine”)
e) 96 , 889 (1983)), indicating that it can be used as a food material for preventing obesity.

【０００４】更に、その後、κ−カゼイングリコマクロ
ペプチドには大腸菌の腸管細胞への付着を阻止したり、
インフルエンザウィルスの感染を防御する効果（特開昭
63−284133号）や抗歯垢効果（特開昭63−233911号）、
病原菌付着阻止効果（特願平２−15285 号）、胃潰瘍予
防又は治療効果（特願平２−410695号）のあることが判
明したことから、その工業的規模での生産が強く望まれ
るようになった。[0004] Further, the κ-casein glycomacropeptide has been shown to inhibit the adhesion of Escherichia coli to intestinal cells,
Effect of protecting against influenza virus infection
63-284133) and antiplaque effect (JP-A-63-233911),
It has been found that it has an inhibitory effect on pathogen attachment (Japanese Patent Application No. 2-15285) and a preventive or therapeutic effect on gastric ulcer (Japanese Patent Application No. 2-410695), so that its production on an industrial scale is strongly desired. became.

【０００５】これまでに、κ−カゼイングリコマクロペ
プチドの工業的分離に関する方法が幾つか開示されてい
る。それらを大別すると、イオン交換樹脂を利用する
方法（特開平２−261343号、特願平２−325166号、特願
平３−19112 号) 、限外濾過あるいは逆浸透膜を用い
る方法（特公昭58-23400号、特公昭59-27358号、特開昭
63−284199号、特開平1-168693号、特開平2-276542号、
特願平２-95686号) である。これらの方法のうち、最も
高純度のκ−カゼイングリコマクロペプチドを与える方
法は、特開平2-276542号に開示されている方法であり、
κ−カゼイングリコマクロペプチドを含む原料溶液のpH
を４未満に調整し、分画分子量10kDa 〜50kDa の限外濾
過膜で透過液を得、次いで中性に戻し、50kDa 以下の分
画分子量を有する膜で濃縮する。この方法の利点は、純
度の高いものが得られ、既存のホエー蛋白質濃縮物（Ｗ
ＰＣ）製造用限外濾過膜でκ−カゼイングリコマクロペ
プチドを製造し得ることにあるが、他方で歩留りが低い
という欠点があった。そこでこれらの方法を改良し、原
料溶液のイオン強度との関係を調べ本発明をなすに至っ
た。[0005] A number of methods have been disclosed for industrial separation of kappa-casein glycomacropeptides. These are roughly classified into a method using an ion-exchange resin (Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-261343, Japanese Patent Application No. 2-325166, Japanese Patent Application No. 3-19112), a method using ultrafiltration or a reverse osmosis membrane (Japanese Patent Application No. No.58-23400, No.59-27358, JP
63-284199, JP-A-1-68693, JP-A-2-276542,
(Japanese Patent Application No. 2-95686). Among these methods, the method of giving the highest purity κ-casein glycomacropeptide is the method disclosed in JP-A-2-276542,
pH of raw material solution containing κ-casein glycomacropeptide
Is adjusted to less than 4 and the permeate is obtained on an ultrafiltration membrane with a cut-off molecular weight of 10 kDa to 50 kDa, then returned to neutral and concentrated on a membrane with a cut-off molecular weight of 50 kDa or less. The advantage of this method is that high purity can be obtained and the existing whey protein concentrate (W
PC) It is possible to produce κ-casein glycomacropeptide with an ultrafiltration membrane for production, but on the other hand, it has a drawback of low yield. Therefore, these methods have been improved, and the relationship with the ionic strength of the raw material solution has been investigated, thereby completing the present invention.

【０００６】[0006]

【発明が解決しようとする課題】前記特開平1-168693号
には、10kDa 〜50kDa の限外濾過膜で出発原料を一次限
外濾過する前に、pHを４〜６に調整すると、イオン強度
が上がり、シアル酸類の解離が良くなり、膜透過性が良
くなる旨記載されている。しかし、pHに関して言えば、
特開平2-276542号に記載されているように、pH４未満の
方が歩留りが高い。pH４未満においては、イオン強度を
上げると逆に膜透過性が悪くなることが判明した。The above-mentioned Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-168693 discloses that the pH is adjusted to 4 to 6 before the starting material is subjected to primary ultrafiltration with a 10 kDa to 50 kDa ultrafiltration membrane. Is described, the dissociation of sialic acids is improved, and the membrane permeability is improved. But when it comes to pH,
As described in JP-A-2-276542, the yield is higher when the pH is lower than 4. At a pH of less than 4, it was found that increasing the ionic strength adversely affected the membrane permeability.

【０００７】κ−カゼイングリコマクロペプチドは、pH
依存的な解離−会合を行う性質を有し、その回収には、
溶液の塩濃度が大きく依存している。すなわち、κ−カ
ゼイングリコマクロペプチドは通常pHは４以上で会合
し、オリゴマーとして存在するが、pH４以下では一部解
離する。しかしこのとき、溶液の電気伝導度が４mS/cm
以上であると、κ−カゼイングリコマクロペプチドはpH
４以下でも解離せず、依然としてオリゴマーとして存在
している。このように、電気伝導度が４mS/cm 以上を示
す溶液中では、κ−カゼイングリコマクロペプチドのpH
依存的な解離が起こらず、特開平2-276542号に記載の方
法では、大きな障壁となる。The κ-casein glycomacropeptide has a pH
Has the property of performing dependent dissociation-association.
The salt concentration of the solution is highly dependent. That is, the κ-casein glycomacropeptide usually associates at a pH of 4 or more and exists as an oligomer, but partially dissociates at a pH of 4 or less. However, at this time, the electric conductivity of the solution was 4 mS / cm
Above, κ-casein glycomacropeptide has a pH
It does not dissociate even at 4 or less and still exists as an oligomer. Thus, in a solution having an electric conductivity of 4 mS / cm or more, the pH of κ-casein glycomacropeptide was
Dependent dissociation does not occur, and the method described in Japanese Patent Application Laid-Open No. 2-276542 is a great barrier.

【０００８】実際に、κ−カゼイングリコマクロペプチ
ドの主要な原料の一つであるチーズホエーでは、その電
気伝導度が通常５〜６mS/cm であるため、前記方法でκ
−カゼイングリコマクロペプチドを得ることは理想的で
あるとは言えない。本発明は、前記方法を改良し、感染
防御効果、抗う歯効果、胃酸分泌制御効果等のあるκ−
カゼイングリコマクロペプチドを高純度かつ高い歩留り
で回収する方法を提供することを目的とする。In fact, cheese whey, which is one of the main raw materials of κ-casein glycomacropeptide, usually has an electric conductivity of 5 to 6 mS / cm.
-Obtaining casein glycomacropeptide is less than ideal. The present invention is an improvement of the above-mentioned method, which has a kappa-protective effect, an anti-caries effect, a gastric acid secretion controlling effect, etc.
It is an object of the present invention to provide a method for recovering casein glycomacropeptide with high purity and high yield.

【０００９】[0009]

【課題を解決するための手段】本発明は、κ−カゼイン
グリコマクロペプチドを含有する乳質原料物質を脱塩
し、電気伝導度４mS/cm 以下のものを得て、これをpHを
４未満に調整し、分画分子量10,000〜50,000の膜を用
い、限外濾過処理をして透過液を得、この透過液を分画
分子量50,000以下の膜を用いて濃縮することを特徴とす
るκ−カゼイングリコマクロペプチドの製造法である。According to the present invention, a milk material containing κ-casein glycomacropeptide is desalted to obtain a substance having an electric conductivity of 4 mS / cm or less, and the pH is reduced to less than 4. Adjusted, using a membrane having a molecular weight cut-off of 10,000 to 50,000, performing an ultrafiltration treatment to obtain a permeate, and concentrating the permeate using a membrane having a molecular weight cut-off of 50,000 or less, κ-casein. This is a method for producing glycomacropeptide.

【００１０】κ−カゼイングリコマクロペプチドを含有
する乳質原料物質としては、特に限定されず、例えばチ
ーズホエー、レンネットカゼインホエー、チーズホエー
を限外濾過して製造されたホエー蛋白質濃縮物（ＷＰ
Ｃ）、チーズホエーをイオン交換体と接触させて製造さ
れたホエー蛋白質単離物（ＷＰＩ）、加熱等の方法でホ
エー蛋白質を沈澱除去したチーズホエー、脱塩したチー
ズホエー粉、無脱塩のチーズホエー粉、乳糖母液等が例
示され、ＷＰＣ、ＷＰＩ、各種ホエー粉を原料とする場
合、水で還元したものを出発原料とすることができる。
また、原料中の脂肪分、不溶物等をクリームセパレータ
ー、クラリファイヤー等の前処理を用いて除いておくこ
とは、さらに好ましい。[0010] The dairy raw material containing κ-casein glycomacropeptide is not particularly limited. For example, whey protein concentrate (WP) produced by ultrafiltration of cheese whey, rennet casein whey, and cheese whey.
C), whey protein isolate (WPI) produced by bringing cheese whey into contact with an ion exchanger, cheese whey from which whey protein has been precipitated and removed by heating or the like, desalted cheese whey powder, non-desalted cheese whey. Examples thereof include cheese whey powder and lactose mother liquor. When WPC, WPI, and various whey powders are used as raw materials, those reduced with water can be used as starting materials.
It is more preferable to remove fats, insolubles, and the like in the raw material by using a pretreatment such as a cream separator or a clarifier.

【００１１】また、κ−カゼイングリコマクロペプチド
を含有する乳質原料物質を陽イオン交換体と接触させ、
吸着しなかった画分を原料とすることができる。さら
に、pH４以下のκ−カゼイングリコマクロペプチドを含
有する乳質原料物質を陰イオン交換体と接触させ、陰イ
オン交換体に吸着した画分を溶出したものを原料として
使用してもよい。[0011] Further, a milk material containing κ-casein glycomacropeptide is brought into contact with a cation exchanger,
The fraction not adsorbed can be used as a raw material. Further, a milk material containing a κ-casein glycomacropeptide having a pH of 4 or less may be brought into contact with an anion exchanger, and a fraction adsorbed on the anion exchanger eluted may be used as the material.

【００１２】原料を脱塩し、その電気伝導度を４mS/cm
以下にする工程においては、通常の脱塩方法なら何でも
よいが、実用的には、イオン交換体を用いる脱塩法、ダ
イアフィルトレーションによる方法、電気透析による方
法が例示される。イオン交換体による脱塩の場合、使用
するイオン交換体の種類、運転条件については、特に限
定されない。イオン交換体に吸着したものを回収する必
要がある場合には、特願平３-91121号に開示された方法
を用いてκ−カゼイングリコマクロペプチドを効果的に
回収することができる。また、ダイアフィルトレーショ
ンによる脱塩では、逆浸透（ＲＯ）膜、限外濾過（Ｕ
Ｆ）膜、精密濾過（ＭＦ）膜を使用でき、その材質、孔
径（ＵＦ膜の場合は分画分子量、ＲＯ膜の場合は食塩阻
止率）、運転条件については、特に限定されない。The raw material is desalted and its electric conductivity is 4 mS / cm
In the following steps, any ordinary desalting method may be used, but practically, a desalting method using an ion exchanger, a method using diafiltration, and a method using electrodialysis are exemplified. In the case of desalination using an ion exchanger, the type of ion exchanger used and operating conditions are not particularly limited. When it is necessary to recover the substance adsorbed on the ion exchanger, the κ-casein glycomacropeptide can be effectively recovered using the method disclosed in Japanese Patent Application No. 3-91121. In the case of desalination by diafiltration, reverse osmosis (RO) membrane, ultrafiltration (U
F) Membrane and microfiltration (MF) membrane can be used, and the material, pore size (fraction molecular weight for UF membrane, salt rejection for RO membrane), and operating conditions are not particularly limited.

【００１３】こうして脱塩された原料からκ−カゼイン
グリコマクロペプチドを調製する場合、特に高純度のも
のを得るには、特開平2-276542号に記載された方法を適
用する。すなわち、原料のpHを４未満に調整し、分画分
子量10,000〜50,000のＵＦ膜を用い、限外濾過、ダイア
フィルトレーション、あるいは、それらを組合せること
によって、透過液中にκ−カゼイングリコマクロペプチ
ドを得る方法である。この時、原料の電気伝導度が30mS
/cm を超えるとしばしば収率の低下を招く。一方、原料
の電気伝導度が30mS/cm 以下であればκ−カゼイングリ
コマクロペプチド調製において何ら問題はない。しか
し、その後の脱塩工程を考慮すると、電気伝導度が10mS
/cm 以下であることがさらに好ましい。また分画分子量
50,000より大きな膜（ＵＦ膜、ＭＦ膜）を用い、透過液
中にκ−カゼイングリコマクロペプチドを得ることもで
きるが、この場合、他のホエー蛋白質が混入してくるた
め、純度が低下すると共に濃縮液をＷＰＣとして使用す
る際に回収率が低下することがある。In the case of preparing κ-casein glycomacropeptide from the thus desalted raw material, in order to obtain particularly high purity, the method described in JP-A-2-276542 is applied. That is, by adjusting the pH of the raw material to less than 4, using a UF membrane having a molecular weight cut-off of 10,000 to 50,000, and performing ultrafiltration, diafiltration, or a combination thereof, the κ-casein glycoprotein is contained in the permeate. This is a method for obtaining a macropeptide. At this time, the electric conductivity of the raw material is 30mS
If it exceeds / cm 2, the yield often decreases. On the other hand, if the electric conductivity of the raw material is 30 mS / cm or less, there is no problem in preparing κ-casein glycomacropeptide. However, considering the subsequent desalination process, the electrical conductivity is 10 mS
/ cm 2 or less is more preferable. Also the molecular weight cut off
A κ-casein glycomacropeptide can be obtained in the permeate using a membrane (UF membrane, MF membrane) larger than 50,000, but in this case, the purity is reduced because other whey proteins are mixed. When the concentrate is used as WPC, the recovery rate may decrease.

【００１４】いずれの方法でも、κ−カゼイングリコマ
クロペプチドを透過液中に回収し、またそれを濃縮、脱
塩する工程において使用するＵＦ膜、ＭＦ膜、ＲＯ膜の
材質は特に限定されない。これらの膜の材質としては、
ポリスルフォン、ポリエーテルスルフォン、４フッ化エ
チレン、セラミック等を例示することができ、歩留りを
さらに上げるには、酢酸セルロース、ニトロセルロー
ス、ポリアクリロニトリル、芳香族ポリアミド等の親水
性の膜、あるいは荷電膜を使用することが好ましい。In any method, the material of the UF membrane, MF membrane, and RO membrane used in the step of recovering the κ-casein glycomacropeptide in the permeate and concentrating and desalting it is not particularly limited. Materials for these films include:
Examples thereof include polysulfone, polyethersulfone, tetrafluoroethylene, and ceramics. To further increase the yield, a hydrophilic film such as cellulose acetate, nitrocellulose, polyacrylonitrile, or aromatic polyamide, or a charged film can be used. It is preferred to use

【００１５】次に透過液を濃縮するため、特開平2-2765
42号に記載の方法を用いる。透過液のpHを４以上に戻し
た後に分画分子量50,000以下の膜で限外濾過、ダイアフ
ィルトレーション、又は逆浸透濾過を行う。pHの調整は
アルカリ剤なら何でも良く、例えば水酸化ナトリウム、
重炭酸ナトリウム、アンモニア水等を用いることができ
る。κ−カゼイングリコマクロペプチドはpH４を境とし
て、それ以下ではモノマー（分子量9,000)、それを超え
るとポリマー（分子量45,000）になることから目的に応
じてpH５以上とすることが好ましい。又、用いる膜は分
画分子量50,000以下なら何でも良いが、50,000を超える
膜ではκ−カゼイングリコマクロペプチドが透過してし
まう。一般のホエー蛋白質濃縮物製造工程中で用いられ
ている分画分子量20,000程度の膜を用いるのが最も簡便
である。Next, in order to concentrate the permeate, see JP-A-2-765.
The method described in No. 42 is used. After returning the pH of the permeate to 4 or more, ultrafiltration, diafiltration, or reverse osmosis filtration is performed using a membrane having a molecular weight cut-off of 50,000 or less. The pH can be adjusted by any alkaline agent, such as sodium hydroxide,
Sodium bicarbonate, aqueous ammonia and the like can be used. Since the κ-casein glycomacropeptide becomes a monomer at a pH of 4 or lower and a monomer (molecular weight of 9,000) at a lower level and a polymer at a higher level (molecular weight of 45,000), the pH is preferably 5 or higher according to the purpose. Any membrane may be used as long as the fractional molecular weight is 50,000 or less, but a membrane exceeding 50,000 will allow the permeation of κ-casein glycomacropeptide. It is most convenient to use a membrane having a molecular weight cut off of about 20,000 used in a general whey protein concentrate manufacturing process.

【００１６】透過液のpHを４以上に戻さなかった場合に
は、κ−カゼイングリコマクロペプチドはモノマーで存
在するので第２の方法を用いる。すなわち分子量分画1
0,000以下の膜、好ましくは8,000 以下の膜で限外濾
過、ダイアフィルトレーション、或いは逆浸透濾過を行
い濃縮液を得る。いずれの方法においても、電気透析や
イオン交換樹脂による脱塩工程を組み合わせることには
全く問題がない。If the pH of the permeate has not been returned to 4 or higher, the second method is used since κ-casein glycomacropeptide is present as a monomer. That is, molecular weight fraction 1
Ultrafiltration, diafiltration, or reverse osmosis filtration is performed using a membrane of not more than 000, preferably not more than 8,000 to obtain a concentrated solution. In any method, there is no problem in combining the electrodialysis and the desalting step with an ion exchange resin.

【００１７】こうして得られた濃縮液には本質的にκ−
カゼイングリコマクロペプチドしか含まれていないの
で、噴霧乾燥又は凍結乾燥等の手段によって乾燥する。
尚、κ−カゼイングリコマクロペプチドは熱に対して安
定なために乾燥工程の前に殺菌工程を入れることは更に
望ましい。このように、κ−カゼイングリコマクロペプ
チドを濃縮、脱塩する工程では、脱塩していない原料か
ら調製する場合に比べて、明らかに工程に要する時間が
短縮される。さらに、電気伝導度４mS/cm 以下に調整し
た原料に前述した公知の方法、あるいはそれらを組み合
わせた方法を適用することも可能である。[0017] The concentrated solution thus obtained contains essentially κ-
Since only casein glycomacropeptide is contained, it is dried by means such as spray drying or freeze drying.
Incidentally, since the κ-casein glycomacropeptide is stable against heat, it is more desirable to carry out a sterilization step before the drying step. As described above, in the step of concentrating and desalting the κ-casein glycomacropeptide, the time required for the step is obviously shortened as compared with the case of preparing from a non-desalted raw material. Further, it is also possible to apply the above-mentioned known method to the raw material adjusted to have an electric conductivity of 4 mS / cm or less, or a method combining them.

【００１８】[0018]

【発明の効果】本発明によれば、原料の電気伝導度を４
mS/cm 以下に調整した後、一定の分画分子量の膜濾過を
行ったので、κ−カゼイングリコマクロペプチドの回収
率を大幅に向上させることができ、一層低いコストで生
産された製品を市場に供給することできる。According to the present invention, the electric conductivity of the raw material is 4
After adjusting to mS / cm or less, membrane filtration with a constant molecular weight cut-off was performed, so that the recovery of κ-casein glycomacropeptide could be significantly improved, and products produced at lower cost could be marketed. Can be supplied to

【００１９】[0019]

【実施例】以下、実施例に基づき本発明を具体的に説明
する。 実施例１ 電気伝導度5.6mS/cmのゴーダチーズホエー（雪印乳業
製) 500 リットルをクラリファイヤーにかけ、不溶物を
除去し、これをプレートヒーターで50℃まで加温し、分
画分子量50,000の限外濾過膜（ＤＤＳ社製、GR51pp) を
用い、50℃、圧力0.4MPa、平均流束 52.4 l/m²・h で限
外濾過処理を行い、100 リットルまで濃縮した。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS The present invention will be specifically described below based on embodiments. Example 1 500 liters of Gouda cheese whey having an electric conductivity of 5.6 mS / cm (Snow Brand Milk Products Co., Ltd.) was placed in a clarifier to remove insolubles, which was heated to 50 ° C. with a plate heater, and the molecular weight cut off was limited to 50,000. Ultrafiltration was carried out using an external filtration membrane (manufactured by DDS, GR51pp) at 50 ° C., a pressure of 0.4 MPa and an average flux of 52.4 l / m ² · h, and concentrated to 100 liters.

【００２０】その後、脱イオン水を加えながら、濃縮液
の電気伝導度が１mS/cm となるまでダイヤフィルトレー
ションを行った。この濃縮液に塩酸を加え、pH2.5(電気
伝導度7.9mS/cm) に調整して引き続き、前述の条件で限
外濾過処理を行い、透過液80リットルを得た。この透過
液を25％苛性ソーダにてpH 7.0に調整し、上述の方法で
限外濾過処理を行い濃縮し、さらにダイヤフィルトレー
ションにて脱塩し、この濃縮液を凍結乾燥した。κ−カ
ゼイングリコマクロペプチド粉末98ｇを得た。ウレア−
ＳＤＳ電気泳動法による分析の結果、純度は84％であっ
た。Then, while adding deionized water, the filtration was performed until the electric conductivity of the concentrated solution became 1 mS / cm. Hydrochloric acid was added to the concentrated solution to adjust the pH to 2.5 (electrical conductivity: 7.9 mS / cm), followed by ultrafiltration under the above conditions to obtain 80 liters of permeate. This permeate was adjusted to pH 7.0 with 25% caustic soda, concentrated by ultrafiltration as described above, further desalted by diamond filtration, and the concentrate was freeze-dried. 98 g of κ-casein glycomacropeptide powder was obtained. Urea
As a result of analysis by SDS electrophoresis, the purity was 84%.

【００２１】比較のため、同じゴーダチーズホエー 500
リットルから、ダイヤフィルトレーションを行わない
で、前述の方法でκ−カゼイングリコマクロペプチドを
調製したところ、収量は64ｇ、純度は80％であった。For comparison, the same Gouda cheese whey 500
When κ-casein glycomacropeptide was prepared from the liter by the above-mentioned method without diamond filtration, the yield was 64 g and the purity was 80%.

【００２２】実施例２ 電気伝導度5.4mS/cmのチェダーチーズホエー（雪印乳業
製）10リットルを、アンバーライト(IRA 410) 100g、ア
ンバーライト(IR 120B) 100gをそれぞれ充填したカラム
に通液し、電気伝導度0.4mS/cmの脱塩ホエー 9.8リット
ルを回収した。Example 2 10 liters of cheddar cheese whey (product of Snow Brand Milk Products) having an electric conductivity of 5.4 mS / cm was passed through a column filled with 100 g of Amberlite (IRA 410) and 100 g of Amberlite (IR 120B). Then, 9.8 liters of desalted whey having an electric conductivity of 0.4 mS / cm was recovered.

【００２３】これを塩酸でpH2.5(電気伝導度6.9mS/cm)
に調整し、分画分子量50,000の限外濾過膜（ＤＤＳ社
製、GR51pp) を用い、実施例１と同様に限外濾過処理を
行い、透過液９リットルを得た。さらにこれを脱塩、濃
縮、凍結乾燥を行い、κ−カゼイングリコマクロペプチ
ド2.1gを得た。ウレア−ＳＤＳ電気泳動法にて分析の結
果、純度は79％であった。This is treated with hydrochloric acid at pH 2.5 (electric conductivity 6.9 mS / cm).
Then, ultrafiltration treatment was carried out in the same manner as in Example 1 using an ultrafiltration membrane having a molecular weight cutoff of 50,000 (manufactured by DDS, GR51pp) to obtain 9 liters of permeate. This was further desalted, concentrated and lyophilized to obtain 2.1 g of κ-casein glycomacropeptide. As a result of analysis by urea-SDS electrophoresis, the purity was 79%.

【００２４】比較のため、同じチェダーチーズホエー10
リットルから、脱塩操作なしで、κ−カゼイングリコマ
クロペプチドを調製したところ、収量は1.6g、純度は82
％であった。For comparison, the same cheddar cheese whey 10
When κ-casein glycomacropeptide was prepared from liter without desalting operation, the yield was 1.6 g and the purity was 82
%Met.

【００２５】実施例３ 電気伝導度5.6mS/cmのゴーダチーズホエー（雪印乳業
製）10リットルを、電気透析装置 TS-24 (徳山ソーダ社
製) にかけて、電気伝導度が0.6mS/cmになるまで脱塩を
行い、その後、塩酸でpH2.0(電気伝導度5.6mS/cm) に調
整した。この脱塩ホエーを、分画分子量50,000の限外濾
過膜（ＤＤＳ社製、GR51pp) を用い、実施例１と同様に
限外濾過処理を行い、透過液９リットルを得、これを濃
縮、脱塩、さらにロータリーエバポレーターで 100mlに
なるまで濃縮し、パルビスミニスプレーGA31 (ヤマト社
製) を用い、入口温度 150℃、出口温度85℃にて噴霧乾
燥を行った。κ−カゼイングリコマクロペプチド粉末2.
0gを得た。ウレア−ＳＤＳ電気泳動法による分析の結
果、純度は81％であった。Example 3 10 liters of Gouda cheese whey (product of Snow Brand Milk Products) having an electric conductivity of 5.6 mS / cm was applied to an electrodialyzer TS-24 (manufactured by Tokuyama Soda Co., Ltd.) to obtain an electric conductivity of 0.6 mS / cm. The pH was adjusted to 2.0 (electric conductivity: 5.6 mS / cm) with hydrochloric acid. This desalted whey was subjected to ultrafiltration using an ultrafiltration membrane having a molecular weight cutoff of 50,000 (manufactured by DDS, GR51pp) in the same manner as in Example 1 to obtain 9 liters of permeate. The salt was further concentrated to 100 ml with a rotary evaporator, and spray-dried using a Palvis mini spray GA31 (manufactured by Yamato) at an inlet temperature of 150 ° C and an outlet temperature of 85 ° C. κ-casein glycomacropeptide powder 2.
0 g was obtained. As a result of analysis by urea-SDS electrophoresis, the purity was 81%.

【００２６】比較のため、同じゴーダチーズホエー10リ
ットルから、脱塩操作なしでκ−カゼイングリコマクロ
ペプチドを調製したところ、収量は1.7g、純度は80％で
あった。For comparison, κ-casein glycomacropeptide was prepared from 10 liters of the same Gouda cheese whey without desalting operation. The yield was 1.7 g and the purity was 80%.

【００２７】実施例４ 電気伝導度6.1mS/cmのカマンベールチーズホエー（雪印
乳業製）50リットルをプレートヒーターで40℃まで加温
し、分画分子量50,000の限外濾過膜（ＤＤＳ社製、GR51
pp) を用い、温度40℃、圧力0.4MPa、平均流束52.4 l/m
²h で限外濾過処理を行い、１リットルまで濃縮した。Example 4 50 liters of Camembert cheese whey (manufactured by Snow Brand Milk Products Co., Ltd.) having an electric conductivity of 6.1 mS / cm were heated to 40 ° C. with a plate heater, and an ultrafiltration membrane having a molecular weight cutoff of 50,000 (manufactured by DDS, GR51)
pp), temperature 40 ° C, pressure 0.4MPa, average flux 52.4 l / m
Ultrafiltration was performed for ² h, and the mixture was concentrated to 1 liter.

【００２８】その後、脱イオン水を加えながら、濃縮液
の電気伝導度が１mS/cm となるまでダイアフィルトレー
ションを行った。この濃縮液に塩酸を加え、pH2.5(電気
伝導度5.2mS/cm) に調整して引き続き、脱イオン水を加
えながらダイアフィルトレーションを行い透過液８リッ
トルを得た。この透過液を25％苛性ソーダにてpH7.0に
調整し、上述の方法で限外濾過処理を行い濃縮し、さら
にダイアフィルトレーションにて脱塩し、この濃縮液を
凍結乾燥した。κ−カゼイングリコマクロペプチド粉末
49ｇを得た。ウレア−ＳＤＳ電気泳動法による分析の結
果、純度は86％であった。Thereafter, diafiltration was carried out while adding deionized water until the electric conductivity of the concentrate became 1 mS / cm. Hydrochloric acid was added to the concentrated solution to adjust the pH to 2.5 (electrical conductivity: 5.2 mS / cm), followed by diafiltration while adding deionized water to obtain 8 liters of permeate. The permeate was adjusted to pH 7.0 with 25% caustic soda, concentrated by ultrafiltration as described above, further desalted by diafiltration, and the concentrate was freeze-dried. κ-casein glycomacropeptide powder
49 g were obtained. As a result of analysis by urea-SDS electrophoresis, the purity was 86%.

【００２９】比較のため、同じカマンベールチーズホエ
ー50リットルから、１回目のダイアフィルトレーション
を行わないで、前述の方法でκ−カゼイングリコマクロ
ペプチドを調製したところ、収量は37ｇ、純度は79％で
あった。For comparison, kappa-casein glycomacropeptide was prepared from 50 liters of the same Camembert cheese whey without the first diafiltration by the method described above. The yield was 37 g and the purity was 79%. Met.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C07K 14/47,1/34 A23J 1/20,3/08 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (58) Field surveyed (Int. Cl. ⁷ , DB name) C07K 14 / 47,1 / 34 A23J 1 / 20,3 / 08 BIOSIS (DIALOG) WPI (DIALOG)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 κ−カゼイングリコマクロペプチドを含
有する乳質原料物質を脱塩し、電気伝導度４mS/cm 以下
のものをpH４未満に調整し、分画分子量10,000〜50,000
の膜を用いて限外濾過処理を行い、得られた透過液を分
画分子量50,000以下の膜を用いて濃縮することを特徴と
するκ−カゼイングリコマクロペプチドの製造法。1. A milk material containing κ-casein glycomacropeptide is desalted, a substance having an electric conductivity of 4 mS / cm or less is adjusted to a pH of less than 4, and a molecular weight cut off of 10,000 to 50,000 is obtained.
A method for producing κ-casein glycomacropeptide, comprising performing an ultrafiltration treatment using the membrane of (1) and concentrating the obtained permeate using a membrane having a molecular weight cut-off of 50,000 or less. 【請求項２】 pH４未満に調整したものの電気伝導度が
30mS/cm 以下である請求項１記載のκ−カゼイングリコ
マクロペプチドの製造法。2. The electric conductivity adjusted to pH less than 4
The method for producing a κ-casein glycomacropeptide according to claim 1, which is at most 30 mS / cm.