JP3100785B2 - 新規エバーメクチン誘導体、その製造方法ならびにその生産微生物 - Google Patents
新規エバーメクチン誘導体、その製造方法ならびにその生産微生物Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、新規エバーメクチン誘
導体、その製造方法ならびにその生産微生物に関する。
導体、その製造方法ならびにその生産微生物に関する。
【０００２】
【従来の技術】エバーメクチン（ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ
ｓ）はストレプトミセス・エバーミチリスの培養物から
得られる１６員環マクロライド系抗寄生虫性抗生物質と
して既に知られている。
ｓ）はストレプトミセス・エバーミチリスの培養物から
得られる１６員環マクロライド系抗寄生虫性抗生物質と
して既に知られている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】エバーメクチンは、抗
寄生虫性抗生物質として、広く利用されている。このよ
うなことから、新しいエバーメクチン化合物を見出すこ
とはきわめて意義のあることである。
寄生虫性抗生物質として、広く利用されている。このよ
うなことから、新しいエバーメクチン化合物を見出すこ
とはきわめて意義のあることである。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明の新規エバーメク
チン誘導体の化合物群は、ストレプトミセス・エバーミ
チリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉ
ｌｉｓ）の１菌株の培養液から単離される一連のマクロ
ライドである。新規エバーメクチン誘導体は、１あるい
は２糖によって置換された１６員環の骨格を有するこ
と、及びその骨格上に融合した２環性のスピロケタール
を有することにより特徴づけられる。
チン誘導体の化合物群は、ストレプトミセス・エバーミ
チリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉ
ｌｉｓ）の１菌株の培養液から単離される一連のマクロ
ライドである。新規エバーメクチン誘導体は、１あるい
は２糖によって置換された１６員環の骨格を有するこ
と、及びその骨格上に融合した２環性のスピロケタール
を有することにより特徴づけられる。
【０００５】本発明は、新規エバーメクチン誘導体、及
びストレプトミセス エバーミチリスのエバーメクチン
誘導体生産突然変異体の培養液からの新規エバーメクチ
ン誘導体の製造方法、ならびに新規エバーメクチン誘導
体生産能を有するストレプトミセス・エバーミチリスに
属する微生物である。
びストレプトミセス エバーミチリスのエバーメクチン
誘導体生産突然変異体の培養液からの新規エバーメクチ
ン誘導体の製造方法、ならびに新規エバーメクチン誘導
体生産能を有するストレプトミセス・エバーミチリスに
属する微生物である。
【０００６】従って、本発明の目的はそのような新規エ
バーメクチン誘導体を得ることであり、他の目的はスト
レプトミセス・エバーミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）の突然変異株、Ｋ２０５
７及びその形質転換体Ｋ２０５７／ｐＫＵ１０９：：ａ
ｖｅＤ１を得ることであり、更に他の目的は、培養液か
らの新規エバーメクチン誘導体の製造方法ならびにその
生産微生物を得ることである。
バーメクチン誘導体を得ることであり、他の目的はスト
レプトミセス・エバーミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）の突然変異株、Ｋ２０５
７及びその形質転換体Ｋ２０５７／ｐＫＵ１０９：：ａ
ｖｅＤ１を得ることであり、更に他の目的は、培養液か
らの新規エバーメクチン誘導体の製造方法ならびにその
生産微生物を得ることである。
【０００７】本発明の新規化合物である新規エバーメク
チン誘導体は以下の５つの構造式である式〔Ｉ〕、式
〔II〕、式〔III 〕、式〔IV〕および式〔Ｖ〕によって
表される。
チン誘導体は以下の５つの構造式である式〔Ｉ〕、式
〔II〕、式〔III 〕、式〔IV〕および式〔Ｖ〕によって
表される。
【０００８】
【化１１】
【０００９】
【化１２】
【００１０】
【化１３】
【００１１】
【化１４】
【００１２】
【化１５】 上述の新規化合物である新規エバーメクチン誘導体
〔Ｉ〕、〔II〕、〔III 〕および〔VI〕を生産する微生
物は、ストレプトミセス・エバーミチリス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）Ｋ２０３８
（ＦＥＲＭ ＢＰ−２７７５）の突然変異株であって、
本菌株は親株ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０
３８（ＦＥＲＭ ＢＰ−２７７５）の胞子懸濁液をＮ−
メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで処理
し、次いで寒天培地上で生育させ、無作為にコロニーを
選択することによって得られたものである。
〔Ｉ〕、〔II〕、〔III 〕および〔VI〕を生産する微生
物は、ストレプトミセス・エバーミチリス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）Ｋ２０３８
（ＦＥＲＭ ＢＰ−２７７５）の突然変異株であって、
本菌株は親株ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０
３８（ＦＥＲＭ ＢＰ−２７７５）の胞子懸濁液をＮ−
メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジンで処理
し、次いで寒天培地上で生育させ、無作為にコロニーを
選択することによって得られたものである。
【００１３】上記変異株は、ストレプトミセス・エバー
ミチリスＫ２０５７として工業技術院微生物工業技術研
究所に「微工研菌寄第１２８２９号（ＦＥＲＭ Ｐ−１
２８２９）として寄託されている。
ミチリスＫ２０５７として工業技術院微生物工業技術研
究所に「微工研菌寄第１２８２９号（ＦＥＲＭ Ｐ−１
２８２９）として寄託されている。
【００１４】新規エバーメクチン誘導体〔Ｖ〕を生産す
る微生物は、ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０
５７株にエバーメクチン生合成に関与する遺伝子（エバ
ーメクチンＢ ５−Ｏ−メチルトランスフエラーゼ遺伝
子）を導入したものである。上記の形質転換体はストレ
プトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ１０
９：：ａｖｅＤ１として工業技術院微生物工業技術研究
所に「微工研菌寄第１２８３０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２
８３０）として寄託されている。
る微生物は、ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０
５７株にエバーメクチン生合成に関与する遺伝子（エバ
ーメクチンＢ ５−Ｏ−メチルトランスフエラーゼ遺伝
子）を導入したものである。上記の形質転換体はストレ
プトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ１０
９：：ａｖｅＤ１として工業技術院微生物工業技術研究
所に「微工研菌寄第１２８３０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１２
８３０）として寄託されている。
【００１５】変異の誘導そのものは、通常の微生物変異
処理方法によって比較的容易に行うことができる。すな
わち、親株を紫外線、Ｘ線あるいはガンマ線照射する
か、あるいは変異誘発剤、例えばＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、Ｎ−ニトロソウレア、
エチルメタンスルホン酸、ナイトロジェンマスタード、
亜硝酸、ヒドロキシルアミン、２−アミノプリン等で処
理した後、得られたコロニーをそれぞれ適当な生産培地
中で培養し、培養終了後、培養液を有機溶剤で抽出す
る。抽出した培養物を薄層クロマトグラフイーあるいは
高速液体クロマトグラフイー等で分析し、新規なエバー
メクチン化合物を生産している変異株を取得すれば良
い。
処理方法によって比較的容易に行うことができる。すな
わち、親株を紫外線、Ｘ線あるいはガンマ線照射する
か、あるいは変異誘発剤、例えばＮ−メチル−Ｎ′−ニ
トロ−Ｎ−ニトロソグアニジン、Ｎ−ニトロソウレア、
エチルメタンスルホン酸、ナイトロジェンマスタード、
亜硝酸、ヒドロキシルアミン、２−アミノプリン等で処
理した後、得られたコロニーをそれぞれ適当な生産培地
中で培養し、培養終了後、培養液を有機溶剤で抽出す
る。抽出した培養物を薄層クロマトグラフイーあるいは
高速液体クロマトグラフイー等で分析し、新規なエバー
メクチン化合物を生産している変異株を取得すれば良
い。
【００１６】本発明の新規エバーメクチン誘導体生産変
異株ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７は、
ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０３８の突然変
異体ではあるが、それが由来した親株と同一の形態学上
の特徴を有しており、親株の形態学的性質は、米国特許
４３１０５１９号明細書に記載されている。
異株ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７は、
ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０３８の突然変
異体ではあるが、それが由来した親株と同一の形態学上
の特徴を有しており、親株の形態学的性質は、米国特許
４３１０５１９号明細書に記載されている。
【００１７】さらに、ストレプトミセス・エバーミチリ
スＫ２０５７株にエバーメクチン生合成に関与する遺伝
子（エバーメクチンＢ ５−Ｏ−メチルトランスフエラ
ーゼ遺伝子）を導入した形質転換体Ｋ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株は式〔Ｉ〕で示した化合物の５
位メチル化体を蓄積させることができる。
スＫ２０５７株にエバーメクチン生合成に関与する遺伝
子（エバーメクチンＢ ５−Ｏ−メチルトランスフエラ
ーゼ遺伝子）を導入した形質転換体Ｋ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株は式〔Ｉ〕で示した化合物の５
位メチル化体を蓄積させることができる。
【００１８】従って、本発明のストレプトミセス・エバ
ーミチリスＫ２０５７およびＫ２０５７／ｐＫＵ１０
９：：ａｖｅＤ１は、前記式〔Ｉ〕、式〔II〕、〔III
〕、〔IV〕および式〔Ｖ〕で表される新規エバーメク
チン誘導体生産能を有する点で、従前のストレプトミセ
ス・エバーミチリスＫ２０３８、その他の同種菌株と性
質を異にするものである。
ーミチリスＫ２０５７およびＫ２０５７／ｐＫＵ１０
９：：ａｖｅＤ１は、前記式〔Ｉ〕、式〔II〕、〔III
〕、〔IV〕および式〔Ｖ〕で表される新規エバーメク
チン誘導体生産能を有する点で、従前のストレプトミセ
ス・エバーミチリスＫ２０３８、その他の同種菌株と性
質を異にするものである。
【００１９】本発明の新規エバーメクチン誘導体は、ス
トレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株及びＫ２
０５７／ｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１株を以下に説明す
る条件下、適当な液体栄養培地中で好気的に発酵させる
ことによって生産される。多くの抗生物質の生産に使用
されているのと同様な液体培地がこれら新規エバーメク
チン誘導体の生産過程での使用に適している。
トレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株及びＫ２
０５７／ｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１株を以下に説明す
る条件下、適当な液体栄養培地中で好気的に発酵させる
ことによって生産される。多くの抗生物質の生産に使用
されているのと同様な液体培地がこれら新規エバーメク
チン誘導体の生産過程での使用に適している。
【００２０】そのような栄養液体培地は、本微生物によ
って資化される炭素および窒素源、そして一般に低レベ
ルの無機塩を含有する。更に、発酵培地は本微生物の生
育に必須な微量の金属を含有することが可能である。こ
れらの微量金属は一般に栄養源として使用される複雑な
炭素および窒素源中に十分量存在するが、必要ならば培
地に別々に添加することも可能である。
って資化される炭素および窒素源、そして一般に低レベ
ルの無機塩を含有する。更に、発酵培地は本微生物の生
育に必須な微量の金属を含有することが可能である。こ
れらの微量金属は一般に栄養源として使用される複雑な
炭素および窒素源中に十分量存在するが、必要ならば培
地に別々に添加することも可能である。
【００２１】一般に、糖のような炭水化物たとえばブド
ウ糖、ショ糖、マルトース、ラクトース、デキストリ
ン、澱粉、セルロース等が栄養培地中の適した資化し得
る炭素源である。培地中に使用する炭素源の正確な量
は、培地中の他の成分に依存するが、培地重量の０．５
％ないし５％の炭水化物が満足すべき結果が通常見出さ
れている。これらの炭素源は、同一培地中で併用するこ
とが可能である。
ウ糖、ショ糖、マルトース、ラクトース、デキストリ
ン、澱粉、セルロース等が栄養培地中の適した資化し得
る炭素源である。培地中に使用する炭素源の正確な量
は、培地中の他の成分に依存するが、培地重量の０．５
％ないし５％の炭水化物が満足すべき結果が通常見出さ
れている。これらの炭素源は、同一培地中で併用するこ
とが可能である。
【００２２】酵母の加水分解物、酵母自己消化物、大豆
粉、カゼイン水解物、酵母抽出物、大豆水解物、コーン
スチープリカー、デイステイラーズソルブル、綿実粉、
肉エキス等の窒素源が新規エバーメクチン誘導体の生産
において、ストレプトミセス・エバーミチリスによって
容易に資化される。種々の窒素源を単独で、あるいは併
用して培地重量の０．２％から６％の範囲内で使用する
ことが可能である。
粉、カゼイン水解物、酵母抽出物、大豆水解物、コーン
スチープリカー、デイステイラーズソルブル、綿実粉、
肉エキス等の窒素源が新規エバーメクチン誘導体の生産
において、ストレプトミセス・エバーミチリスによって
容易に資化される。種々の窒素源を単独で、あるいは併
用して培地重量の０．２％から６％の範囲内で使用する
ことが可能である。
【００２３】培地中に添加し得る栄養無機塩として、ナ
トリウム、カリウム、マグネシム、アンモニウム、カル
シウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩等のイオン
を放出し得る通常の塩が挙げられる。更に、含有しても
よいものは、コバルト、マンガン、鉄等の微量金属であ
る。
トリウム、カリウム、マグネシム、アンモニウム、カル
シウム、リン酸塩、硫酸塩、塩化物、炭酸塩等のイオン
を放出し得る通常の塩が挙げられる。更に、含有しても
よいものは、コバルト、マンガン、鉄等の微量金属であ
る。
【００２４】培養は好気的条件下で行われる。培養の
間、培地のpHは５から９に、温度は２５から３５℃に調
節され、１２０から２４０時間振とうまたは通気培養す
れば好ましい結果が得られる。上記の培養において新規
化合物を採取することが目的であるならば、培地中に少
なくとも新規エバーメクチン誘導体が生成蓄積されるよ
うな生産株及び生産培地を用いることはいうまでもな
い。
間、培地のpHは５から９に、温度は２５から３５℃に調
節され、１２０から２４０時間振とうまたは通気培養す
れば好ましい結果が得られる。上記の培養において新規
化合物を採取することが目的であるならば、培地中に少
なくとも新規エバーメクチン誘導体が生成蓄積されるよ
うな生産株及び生産培地を用いることはいうまでもな
い。
【００２５】本発明の新規エバーメクチン誘導体は、人
間および動物の健康および農業において駆虫薬、殺虫剤
および殺ダニ剤としての重要な殺寄生虫活性を有してい
る。
間および動物の健康および農業において駆虫薬、殺虫剤
および殺ダニ剤としての重要な殺寄生虫活性を有してい
る。
【００２６】本発明の化合物の単離には、周知の標準的
な抽出、精製技術が採用される。溶媒抽出、カラムクロ
マトグラフイー、薄層クロマトグラフイー、分取薄層ク
ロマトグラフイー、高速液体クロマトグラフイー等の技
術が、本発明の化合物の単離、精製に有用である。
な抽出、精製技術が採用される。溶媒抽出、カラムクロ
マトグラフイー、薄層クロマトグラフイー、分取薄層ク
ロマトグラフイー、高速液体クロマトグラフイー等の技
術が、本発明の化合物の単離、精製に有用である。
【００２７】実施例 １ ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株の取
得：ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０３８株の
胞子を常法によりＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン処理（１mg／ml、pH９．０で３０℃９０
分間）した後、この胞子を平板あたり２００個のコロニ
ーが生育するように滅菌水で希釈し、ＹＭＳ平板に塗り
広げ、３０℃５日間培養した。
得：ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０３８株の
胞子を常法によりＮ−メチル−Ｎ′−ニトロ−Ｎ−ニト
ロソグアニジン処理（１mg／ml、pH９．０で３０℃９０
分間）した後、この胞子を平板あたり２００個のコロニ
ーが生育するように滅菌水で希釈し、ＹＭＳ平板に塗り
広げ、３０℃５日間培養した。
【００２８】生じたコロニーを釣菌分離し、ＹＭＳ平板
に１cm2 のパッチ状に移植し、これをマスター平板とし
た。マスター平板を生産寒天培地にレプリカし、３０℃
で８日間培養した。培養終了後、生産寒天培地上のそれ
ぞれのパッチ状の菌体を寒天培地ごと切り出し、プラス
チックチューブに入れ、０．５mlのアセトンを加え、室
温で１５分間放置して培養物を抽出した。
に１cm2 のパッチ状に移植し、これをマスター平板とし
た。マスター平板を生産寒天培地にレプリカし、３０℃
で８日間培養した。培養終了後、生産寒天培地上のそれ
ぞれのパッチ状の菌体を寒天培地ごと切り出し、プラス
チックチューブに入れ、０．５mlのアセトンを加え、室
温で１５分間放置して培養物を抽出した。
【００２９】菌体および寒天片を除き、抽出液を濃縮乾
固した。得られた抽出物を０．０２５mlのアセトンに溶
解し、その０．００５mlをシリカゲル薄層板（Ｍｅｒｋ
Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅl ６０Ｆ254 ）にスポットし、１
５％ｖ／ｖイソプロパノール／ヘキサンで展開した。展
開終了後、クロマトグラフイーを紫外線２５４ｎｍ下で
培養物の成分を観察し、新規化合物を生産しているスト
レプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株を取得し
た。
固した。得られた抽出物を０．０２５mlのアセトンに溶
解し、その０．００５mlをシリカゲル薄層板（Ｍｅｒｋ
Ｋｉｅｓｅｌ ｇｅl ６０Ｆ254 ）にスポットし、１
５％ｖ／ｖイソプロパノール／ヘキサンで展開した。展
開終了後、クロマトグラフイーを紫外線２５４ｎｍ下で
培養物の成分を観察し、新規化合物を生産しているスト
レプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株を取得し
た。
【００３０】実施例 ２ ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株の発酵 ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株の胞子
懸濁液０．１mlを１００mlの種培地を含有する５００ml
容三角フラスコに接種し、フラスコをロータリーシェー
カー上、２８℃２日間、２００ｒｐｍで培養した。この
種培養液２mlづつを１００mlの生産培地を含有する５０
０ml容三角フラスコ６５本に移植し、フラスコをロータ
リーシェーカー上、２８℃８日間、１８０ｒｐｍで培養
した。
懸濁液０．１mlを１００mlの種培地を含有する５００ml
容三角フラスコに接種し、フラスコをロータリーシェー
カー上、２８℃２日間、２００ｒｐｍで培養した。この
種培養液２mlづつを１００mlの生産培地を含有する５０
０ml容三角フラスコ６５本に移植し、フラスコをロータ
リーシェーカー上、２８℃８日間、１８０ｒｐｍで培養
した。
【００３１】実施例 ３ ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７株培養液
からの新規化合物の製造 実施例２で得た発酵終了後の培養液６０００mlを濾過
し、濾液を除去した。菌体を１０００mlのイオン交換水
に懸濁した後、再び濾過し菌体を集めた。洗浄した菌体
を１０００mlのアセトンで１時間攪拌して抽出した。抽
出後濾過を行い、濾液を集め、再度菌体を１０００mlの
アセトンを加え十分洗浄した後、濾過を行い濾液と合わ
せ、アセトン抽出物とした。
からの新規化合物の製造 実施例２で得た発酵終了後の培養液６０００mlを濾過
し、濾液を除去した。菌体を１０００mlのイオン交換水
に懸濁した後、再び濾過し菌体を集めた。洗浄した菌体
を１０００mlのアセトンで１時間攪拌して抽出した。抽
出後濾過を行い、濾液を集め、再度菌体を１０００mlの
アセトンを加え十分洗浄した後、濾過を行い濾液と合わ
せ、アセトン抽出物とした。
【００３２】アセトン抽出物２０００mlを減圧下濃縮
し、５００mlとし、イオン交換水を５００ml加え、５０
０mlの塩化メチレンで２回抽出した。塩化メチレン抽出
物を合わせ、１００ｇの無水硫酸ナトリウムで処理して
濾過し脱水した。この溶液を減圧下濃縮した。
し、５００mlとし、イオン交換水を５００ml加え、５０
０mlの塩化メチレンで２回抽出した。塩化メチレン抽出
物を合わせ、１００ｇの無水硫酸ナトリウムで処理して
濾過し脱水した。この溶液を減圧下濃縮した。
【００３３】濃縮抽出物を５mlの酢酸エチルに溶解し、
２５ｇのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、さらに
５０mlの酢酸エチルを流した。通過液を集め、減圧濃縮
し式〔Ｉ〕、式〔II〕および式〔III 〕で示す化合物を
含む粘張な油状物２．４３ｇを得た。
２５ｇのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、さらに
５０mlの酢酸エチルを流した。通過液を集め、減圧濃縮
し式〔Ｉ〕、式〔II〕および式〔III 〕で示す化合物を
含む粘張な油状物２．４３ｇを得た。
【００３４】実施例 ４ 式〔Ｉ〕で示した化合物の単離 実施例３で得られた油状物２．４３ｇを５mlのヘキサン
／塩化メチレン／メタノール（１０：１０：１）に溶解
し、予め同混合溶媒で平衡化しておいたセファデックス
ＬＨ−２０（１２０ｇ）カラムに通塔した。上記混合溶
媒で溶出し、４mlづつ分画した。画分４１−５４を集
め、減圧濃縮し、１．１５ｇの抽出物を得た。
／塩化メチレン／メタノール（１０：１０：１）に溶解
し、予め同混合溶媒で平衡化しておいたセファデックス
ＬＨ−２０（１２０ｇ）カラムに通塔した。上記混合溶
媒で溶出し、４mlづつ分画した。画分４１−５４を集
め、減圧濃縮し、１．１５ｇの抽出物を得た。
【００３５】得られた抽出物１．１５ｇを２mlのヘキサ
ン／イソプロパノール（８５：１５）に溶解し、予め同
混合溶媒で平衡化した中圧シリカゲルカラム（３５φ×
３００mm）に通塔した。ヘキサン／イソプロパノール
（８５：１５）で溶出し、１４mlづつ分画した。画分４
３−７０を集め、減圧濃縮乾固し４６mgの淡黄色粉末を
得た。
ン／イソプロパノール（８５：１５）に溶解し、予め同
混合溶媒で平衡化した中圧シリカゲルカラム（３５φ×
３００mm）に通塔した。ヘキサン／イソプロパノール
（８５：１５）で溶出し、１４mlづつ分画した。画分４
３−７０を集め、減圧濃縮乾固し４６mgの淡黄色粉末を
得た。
【００３６】更に得られた４６mgの淡黄色粉末を少量の
クロロホルムに溶解し、分取用シリカゲルプレート（２
０×２０cm、厚さ０．２５mm）５枚に帯状にスポット
し、ヘキサン／イソプロパノール（８５：１５）で展開
した。Ｒｆ値０．３１に相当するバンドをかきとり、ク
ロロホルム／メタノール（５：１）で溶出し、溶出液を
減圧濃縮して式〔Ｉ〕で示す１３mgの化合物を得た。
クロロホルムに溶解し、分取用シリカゲルプレート（２
０×２０cm、厚さ０．２５mm）５枚に帯状にスポット
し、ヘキサン／イソプロパノール（８５：１５）で展開
した。Ｒｆ値０．３１に相当するバンドをかきとり、ク
ロロホルム／メタノール（５：１）で溶出し、溶出液を
減圧濃縮して式〔Ｉ〕で示す１３mgの化合物を得た。
【００３７】特徴付けデータ λｍａｘ（ＣＨ3 ＯＨ）２４２ｎｍおよび２３６ｎｍ 〔α〕Ｄ＋５２．８０（ｃ＝１．００メチルアルコール
中） ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｎａ） ＩＲ：図１に示すとおり1 H−ＮＭＲ：図２に示すとおり
中） ｍ／ｚ＝７３７（Ｍ＋Ｎａ） ＩＲ：図１に示すとおり1 H−ＮＭＲ：図２に示すとおり
【００３８】実施例 ５ 式〔II〕で示した化合物の単離 実施例４で行ったセファデックス（Ｓｅｐｈａｄｅｘ）
ＬＨ−２０カラムクロマトグラフイーの画分３６−４０
を集め、減圧下濃縮し、５０mgの淡黄色粉末を得た。得
られた５０mgの淡黄色粉末を少量のクロロホルムに溶解
し、分取用シリカゲルプレート（２０×２０cm、厚さ
０．２５mm）５枚に帯状にスポットし、ヘキサン／イソ
プロパノール（８５：１５）で展開した。Ｒｆ値０．５
１に相当するバンドをかきとり、クロロホルム／メタノ
ール（５：１）で溶出し、溶出液を減圧濃縮して式〔I
I〕で示す１３mgの化合物を得た。
ＬＨ−２０カラムクロマトグラフイーの画分３６−４０
を集め、減圧下濃縮し、５０mgの淡黄色粉末を得た。得
られた５０mgの淡黄色粉末を少量のクロロホルムに溶解
し、分取用シリカゲルプレート（２０×２０cm、厚さ
０．２５mm）５枚に帯状にスポットし、ヘキサン／イソ
プロパノール（８５：１５）で展開した。Ｒｆ値０．５
１に相当するバンドをかきとり、クロロホルム／メタノ
ール（５：１）で溶出し、溶出液を減圧濃縮して式〔I
I〕で示す１３mgの化合物を得た。
【００３９】特徴付けデータ λｍａｘ（ＣＨ3 ＯＨ）２３５ｎｍ 〔α〕Ｄ＋７．００（ｃ＝１．００メチルアルコール
中） ｍ／ｚ＝７３５（Ｍ＋Ｎａ） ＩＲ：図３に示すとおり1H−ＮＭＲ：図４に示すとおり
中） ｍ／ｚ＝７３５（Ｍ＋Ｎａ） ＩＲ：図３に示すとおり1H−ＮＭＲ：図４に示すとおり
【００４０】実施例 ６ 式〔III 〕で示した化合物の単離 実施例４および５で行った分取用シリカゲルプレート上
のＲｆ値０．３６に相当するバンドをかきとり、クロロ
ホルム／メタノール（５：１）で溶出し、溶出液を減圧
濃縮した。実施例４からのプレートより２０mg、実施例
５のプレートより式〔III 〕で示す白色粉末の１４mgの
化合物を得た。
のＲｆ値０．３６に相当するバンドをかきとり、クロロ
ホルム／メタノール（５：１）で溶出し、溶出液を減圧
濃縮した。実施例４からのプレートより２０mg、実施例
５のプレートより式〔III 〕で示す白色粉末の１４mgの
化合物を得た。
【００４１】特徴付けデータ λｍａｘ（ＣＨ3 ＯＨ）２３６ｎｍ 〔α〕Ｄ＋１．００（ｃ＝１．００メチルアルコール
中） ｍ／ｚ＝７５３（Ｍ＋Ｎａ〕 ＩＲ：図５に示すとおり1 H−ＮＭＲ：図６に示すとおり
中） ｍ／ｚ＝７５３（Ｍ＋Ｎａ〕 ＩＲ：図５に示すとおり1 H−ＮＭＲ：図６に示すとおり
【００４２】実施例 ７ 実施例４で行ったセファデックスＬＨ−２０カラムクロ
マトグラフイーの画分２８−３５を集め、減圧濃縮し、
１．０４ｇの淡黄色油状物を得た。得られた１．０４ｇ
の油状物のうち７０ｍｇを少量のクロロホルムに溶解
し、分取用シリカゲルプレート（２０×２０ｃｍ、厚さ
０．２５ｍｍ）４枚に帯状にスポツトし、ヘキサン／イ
ソプロパノール（８５：１５）で展開した。Ｒｆ値０．
３９に相当するバンドをかきとり、クロロホルム／メタ
ノール（５：１）で溶出し、溶出液を減圧濃縮し、８．
２ｍｇの白色粉末を少量のメタノールに溶解し、分取用
ＨＰＬＣ（ＯＤＳ５μｍ、１０φｍｍ×３００ｍｍ、溶
媒：アセトニトリル／メタノール／水（６２：１８：２
０）、流速３ｍｌ／分、検出２４６ｎｍ）に供し、２
８．７分に溶出される画分を集め、減圧濃縮して式〔I
V〕で示す４．０ｍｇの化合物を得た。
マトグラフイーの画分２８−３５を集め、減圧濃縮し、
１．０４ｇの淡黄色油状物を得た。得られた１．０４ｇ
の油状物のうち７０ｍｇを少量のクロロホルムに溶解
し、分取用シリカゲルプレート（２０×２０ｃｍ、厚さ
０．２５ｍｍ）４枚に帯状にスポツトし、ヘキサン／イ
ソプロパノール（８５：１５）で展開した。Ｒｆ値０．
３９に相当するバンドをかきとり、クロロホルム／メタ
ノール（５：１）で溶出し、溶出液を減圧濃縮し、８．
２ｍｇの白色粉末を少量のメタノールに溶解し、分取用
ＨＰＬＣ（ＯＤＳ５μｍ、１０φｍｍ×３００ｍｍ、溶
媒：アセトニトリル／メタノール／水（６２：１８：２
０）、流速３ｍｌ／分、検出２４６ｎｍ）に供し、２
８．７分に溶出される画分を集め、減圧濃縮して式〔I
V〕で示す４．０ｍｇの化合物を得た。
【００４３】特徴付けデータ λｍａｘ（ＣＨ3 ＯＨ）２４９ｎｍ ｍ／ｚ＝８７９（Ｍ＋Ｎａ〕 ＩＲ：図７に示すとおり1 H−ＮＭＲ：図８に示すとおり
【００４４】実施例 ８ ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株の取得 ストレプトミセス・エバーミチリス２０５７株の胞子
を、３０％ショ糖及び５ｍＭ塩化マグネシウムを含むＹ
ＥＭＥ培地５０mlを含む５００ml容三角フラスコに移植
し、ロータリーシェーカー上、２８℃で３日間、２００
ｒｐｍで培養した。得られた培養液を３０００ｒｐｍ、
１０分間遠心し、菌体を集めた。
１０９：：ａｖｅＤ１株の取得 ストレプトミセス・エバーミチリス２０５７株の胞子
を、３０％ショ糖及び５ｍＭ塩化マグネシウムを含むＹ
ＥＭＥ培地５０mlを含む５００ml容三角フラスコに移植
し、ロータリーシェーカー上、２８℃で３日間、２００
ｒｐｍで培養した。得られた培養液を３０００ｒｐｍ、
１０分間遠心し、菌体を集めた。
【００４５】得られた菌体を２０mlのＰ１０培地に懸濁
し、遠心によつて洗浄菌体を得た。洗浄菌体を１mg/ml
の卵白リゾチームを含むＰ１０培地１０mlに懸濁し、３
７℃６０分間保温して、プロトプラストとした。得られ
たプロトプラストを１０mlのＰ２０培地に加えよく混合
した後、綿栓を通過させ未消化の菌糸を除去した。プロ
トプラストを３０００ｒｐｍ、１０分間遠心して集め、
Ｐ２０培地を加え、１０9 プロトプラス／mlとなるよう
に懸濁した。
し、遠心によつて洗浄菌体を得た。洗浄菌体を１mg/ml
の卵白リゾチームを含むＰ１０培地１０mlに懸濁し、３
７℃６０分間保温して、プロトプラストとした。得られ
たプロトプラストを１０mlのＰ２０培地に加えよく混合
した後、綿栓を通過させ未消化の菌糸を除去した。プロ
トプラストを３０００ｒｐｍ、１０分間遠心して集め、
Ｐ２０培地を加え、１０9 プロトプラス／mlとなるよう
に懸濁した。
【００４６】得られたプロトプラスト５０μl に組換え
プラスミドｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１を１ｎｇを加
え、さらに５００μl のポリエチレングリコール溶液
（２５％ポリエチレングリコールＭＷ１０００、０．１
ｍＭリン酸二水素カリウム、０．１Ｍ塩化カルシウム、
５０ｍＭトリス−マレイン酸緩衝液pH８．０）を加え、
室温で１分間放置した。
プラスミドｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１を１ｎｇを加
え、さらに５００μl のポリエチレングリコール溶液
（２５％ポリエチレングリコールＭＷ１０００、０．１
ｍＭリン酸二水素カリウム、０．１Ｍ塩化カルシウム、
５０ｍＭトリス−マレイン酸緩衝液pH８．０）を加え、
室温で１分間放置した。
【００４７】５００μl のＰ２０培地を加えよく混合し
た後、その１００μl づつをＲＭ１４寒天培地上にの
せ、２．５mlの軟寒天ＲＭ１４培地とともに塗り広げ
た。３０℃で２１時間培養した後、２００μｇ／mlのチ
オストレプトンを含む２．５mlの軟寒天培地を重層し
た。３０℃で１０日間培養し、チオストレプトンに耐性
な形質転換体を得た。
た後、その１００μl づつをＲＭ１４寒天培地上にの
せ、２．５mlの軟寒天ＲＭ１４培地とともに塗り広げ
た。３０℃で２１時間培養した後、２００μｇ／mlのチ
オストレプトンを含む２．５mlの軟寒天培地を重層し
た。３０℃で１０日間培養し、チオストレプトンに耐性
な形質転換体を得た。
【００４８】実施例 ９ ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株の醗酵 ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株の胞子懸濁液０．１mlを５μｇ
／mlのチオストレプトンを含む１００mlの種培地を含有
する５００ml容三角フラスコに接種し、フラスコをロー
タリーシェーカー上、２８℃２日間、２００ｒｐｍで培
養した。この種培養液２mlづつを５μｇ／mlのチオスト
レプトンを含む１００mlの生産培地を含有する５００ml
容三角フラスコ７本に移植し、フラスコをロータリーシ
ェーカー上、２８℃８日間、１８０ｒｐｍで培養した。
１０９：：ａｖｅＤ１株の醗酵 ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株の胞子懸濁液０．１mlを５μｇ
／mlのチオストレプトンを含む１００mlの種培地を含有
する５００ml容三角フラスコに接種し、フラスコをロー
タリーシェーカー上、２８℃２日間、２００ｒｐｍで培
養した。この種培養液２mlづつを５μｇ／mlのチオスト
レプトンを含む１００mlの生産培地を含有する５００ml
容三角フラスコ７本に移植し、フラスコをロータリーシ
ェーカー上、２８℃８日間、１８０ｒｐｍで培養した。
【００４９】実施例 １０ ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５７／ｐＫＵ
１０９：：ａｖｅＤ１株培養液からの化合物の製造 実施例９で得た醗酵終了後の培養液６００mlを濾過し、
濾液を除去した。菌体をイオン交換水５００mlで洗浄し
た後、洗浄菌体を１００mlのアセトンで２回抽出した。
アセトン抽出物を減圧濃縮して５０mlとし、イオン交換
水５０mlを加え、１００mlの塩化メチレンで２回抽出し
た。塩化メチレン抽出物を合わせ、１０ｇの無水硫酸ナ
トリウムで処理して濾過し脱水した。この溶液を減圧濃
縮した。濃縮抽出物を２mlの酢酸エチルに溶解し、１０
ｇのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、さらに２０
mlの酢酸エチルを流した。通過液を集め、減圧濃縮し、
式〔IV〕で示す化合物を含む粘張な油状物７３０mgを得
た。
１０９：：ａｖｅＤ１株培養液からの化合物の製造 実施例９で得た醗酵終了後の培養液６００mlを濾過し、
濾液を除去した。菌体をイオン交換水５００mlで洗浄し
た後、洗浄菌体を１００mlのアセトンで２回抽出した。
アセトン抽出物を減圧濃縮して５０mlとし、イオン交換
水５０mlを加え、１００mlの塩化メチレンで２回抽出し
た。塩化メチレン抽出物を合わせ、１０ｇの無水硫酸ナ
トリウムで処理して濾過し脱水した。この溶液を減圧濃
縮した。濃縮抽出物を２mlの酢酸エチルに溶解し、１０
ｇのシリカゲルを充填したカラムに通塔し、さらに２０
mlの酢酸エチルを流した。通過液を集め、減圧濃縮し、
式〔IV〕で示す化合物を含む粘張な油状物７３０mgを得
た。
【００５０】実施例 １１ 式〔Ｖ〕で示した化合物の単離 実施例１０で得られた油状物７３０mgを少量のクロロホ
ルムに溶解し、分取用シリカゲルプレート（２０×２０
cm、厚さ１．０mm）５枚に帯状にスポツトし、ヘキサン
／イソプロパノール（８５：１５）で展開した。Ｒｆ値
０．６７に相当するバンドをかきとり、クロロホルム／
メタノール（５：１）で溶出した。溶出液を濃縮乾固し
た後、少量のメタノールに溶解し、分取用ＨＰＬＣ（Ｏ
ＤＳ５μｍ、１０φmm×３００mm、溶媒：アセトニトリ
ル／メタノール／水（６２：１８：２０）、流速３ml／
分、検出２４６ｎｍ）に供し、６０．５分に溶出される
画分を集め、減圧濃縮して式〔Ｖ〕で示す２．０３mgの
化合物を得た。
ルムに溶解し、分取用シリカゲルプレート（２０×２０
cm、厚さ１．０mm）５枚に帯状にスポツトし、ヘキサン
／イソプロパノール（８５：１５）で展開した。Ｒｆ値
０．６７に相当するバンドをかきとり、クロロホルム／
メタノール（５：１）で溶出した。溶出液を濃縮乾固し
た後、少量のメタノールに溶解し、分取用ＨＰＬＣ（Ｏ
ＤＳ５μｍ、１０φmm×３００mm、溶媒：アセトニトリ
ル／メタノール／水（６２：１８：２０）、流速３ml／
分、検出２４６ｎｍ）に供し、６０．５分に溶出される
画分を集め、減圧濃縮して式〔Ｖ〕で示す２．０３mgの
化合物を得た。
【００５１】特徴付けデータ λｍａｘ（ＣＨ3 ＯＨ）２４２ｎｍ ｍ／ｚ＝７５１（Ｍ＋Ｎａ） ＩＲ：図９に示すとおり1 H−ＮＭＲ：図１０に示すとおり
【００５２】前記実施例において使用した各種培地の組
成は以下に示すごとくである。 ＹＭＳ培地の組成 麦芽エキス（Ｄｉｆｃｏ） １０ｇ 酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ） ４ｇ 可溶性デンプン（Ｄｉｆｃｏ） ４ｇ 寒天 ２０ｇ 蒸留水 １０００ml ２Ｎ水酸化カリウムでpH７．２とした後、１２１℃１５
分間、高圧蒸気滅菌にかける。滅菌終了後、塩化マグネ
シウム、硝酸カルシウムを１０ｍＭ、８ｍＭとなるよう
に加える。
成は以下に示すごとくである。 ＹＭＳ培地の組成 麦芽エキス（Ｄｉｆｃｏ） １０ｇ 酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ） ４ｇ 可溶性デンプン（Ｄｉｆｃｏ） ４ｇ 寒天 ２０ｇ 蒸留水 １０００ml ２Ｎ水酸化カリウムでpH７．２とした後、１２１℃１５
分間、高圧蒸気滅菌にかける。滅菌終了後、塩化マグネ
シウム、硝酸カルシウムを１０ｍＭ、８ｍＭとなるよう
に加える。
【００５３】 生産寒天培地 グルコース ４６ｇ ペプトン化牛乳（Ｏｘｏｉｄ） ２４ｇ 酵母自己消化物（Ｄｉｆｃｏ） ２．５ｇ 寒天 ２０ｇ 蒸留水 １０００ml ２Ｎ水酸化ナトリウムでpH７．２とした後、１２１℃１
５分間、高圧蒸気滅菌にかける。
５分間、高圧蒸気滅菌にかける。
【００５４】 種培地 ラクトース ２０ｇ ディステイラーズソルブル １５ｇ 酵母自己消化物（Ｄｉｆｃｏ） ２．５ｇ 蒸留水 １０００ml ２Ｎ水酸化カリウムでpH７．２とした後、１２１℃１５
分間、高圧蒸気滅菌にかける。
分間、高圧蒸気滅菌にかける。
【００５５】 生産培地 グルコース ４６ｇ ペプトン化牛乳（Ｏｘｏｉｄ） ２４ｇ 酵母自己消化物（Ｄｉｆｃｏ） ２．５ｇ ポリプロピレングリコール＃２０００ ２．５ml 蒸留水 １０００ml ２Ｎ水酸化カリウムでpH７．２とした後、１２１℃１５
分間、高圧蒸気滅菌にかける。
分間、高圧蒸気滅菌にかける。
【００５６】 微量元素溶液 塩化第二鉄６水和物 ２００mg 塩化亜鉛 ４０mg 塩化第二銅２水和物 １０mg 塩化マンガン４水和物 １０mg ホウ酸ナトリウム１０水和物 １０mg モリブデン酸アンモニウム４水和物 １０mg 蒸留水 １０００ml 上記成分を溶解後、４℃で保存。
【００５７】 ＹＥＭＥ培地 グルコース １０ｇ ペプトン（Ｄｉｆｃｏ） ５ｇ 酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ） ３ｇ 麦芽エキス（Ｏｘｏｉｄ） ３ｇ 蒸留水 １０００ml pH無調整、１２１℃１５分間、高圧蒸気滅菌にかける。
【００５８】 Ｐ１０培地 ショ糖 １０３ｇ 硫酸カリウム ０．２５ｇ 塩化マグネシウム６水和物 ２．０３ｇ 微量元素溶液 ２．０ml 上記成分を蒸留水８００mlに溶解後、１２１℃１５分
間、高圧蒸気滅菌をかけて、下記の成分を加える。
間、高圧蒸気滅菌をかけて、下記の成分を加える。
【００５９】 ０．５％リン酸二水素カリウム １０ml ３．６８％塩化カルシウム２水和物 １００ml ０．２５Ｍ＊ＭＥＳ緩衝液pH６．５ １００ml ＊２−ｍｏｒｐｈｏｌｉｎｏｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｆｏｎｉｃ ａｃｉｄ
【００６０】 Ｐ２０培地 ショ糖 ２０５ｇ 硫酸カリウム ０．２５ｇ 塩化マグネシウム６水和物 ２．０３ｇ 微量元素溶液 ２．０ml 上記成分を蒸留水８００mlに溶解し、１２１℃１５分間
蒸気滅菌をかけ、冷却後下記の成分を加える。
蒸気滅菌をかけ、冷却後下記の成分を加える。
【００６１】 ０．５％リン酸二水素カリウム １０ml ３．６８％塩化カルシウム２水和物 １００ml ０．２５Ｍ ＭＥＳ緩衝液pH６．５ １００ml
【００６２】 ＲＭ１４培地 ショ糖 ２０５ｇ 硫酸カリウム ０．２５ｇ 塩化マグネシウム６水和物 １０．１２ｇ グルコース １０．０ｇ カザミノ酸（Ｄｉｆｃｏ） ０．１ｇ Ｌ−プロリン ３．０ｇ 酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ） ２．０ｇ 微量元素溶液 ２．０ml オートミール寒天培地（Ｄｉｆｃｏ） ３．０ｇ 寒天 ２０．０ｇ 上記成分を蒸留水８７０mlに溶解し、１２１℃１５分
間、高圧蒸気滅菌をかけた後、下記の成分を加える。
間、高圧蒸気滅菌をかけた後、下記の成分を加える。
【００６３】 ０．５％リン酸二水素カリウム １０ml ３．６８％塩化カルシウム２水和物 ８０ml ０．２５Ｍ ＭＥＳ緩衝液pH６．５ ４０ml
【００６４】 軟寒天ＲＭ１４培地 ショ糖 ２０５ｇ 硫酸カリウム ０．２５ｇ 塩化マグネシウム６水和物 １０．１２ｇ グルコース １０．０ｇ カザミノ酸（Ｄｉｆｃｏ） ０．１ｇ Ｌ−プロリン ３．０ｇ 酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ） ２．０ｇ 微量元素溶液 ２．０ml オートミール寒天培地（Ｄｉｆｃｏ） ３．０ｇ 寒天 ５．０ｇ 上記成分を蒸留水８７０mlに溶解し、１２１℃１５分
間、高圧蒸気滅菌をかけた後、下記の成分を加える。
間、高圧蒸気滅菌をかけた後、下記の成分を加える。
【００６５】 ０．５％リン酸二水素カリウム １０ml ３．６８％塩化カルシウム２水和物 ８０ml ０．２５Ｍ ＭＥＳ緩衝液pH６．５ ４０ml
【図１】式〔Ｉ〕に示した化合物の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図２】式〔Ｉ〕に示した化合物のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。
スペクトルである。
【図３】式〔II〕に示した化合物の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図４】式〔II〕に示した化合物のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。
スペクトルである。
【図５】式〔III 〕に示した化合物の赤外線吸収スペク
トルである。
トルである。
【図６】式〔III 〕に示した化合物のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。
鳴スペクトルである。
【図７】式〔IV〕に示した化合物の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図８】式〔IV〕に示した化合物のプロトン核磁気共鳴
スペクトルである。
スペクトルである。
【図９】式〔Ｖ〕に示した化合物の赤外線吸収スペクト
ルである。
ルである。
【図１０】式〔Ｖ〕に示した化合物のプロトン核磁気共
鳴スペクトルである。
鳴スペクトルである。
【図１１】ストレプトミセス・エバーミチリスＫ２０５
７／ｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１株を作成するために用
いた組み換えプラスミドｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１の
地図である。
７／ｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１株を作成するために用
いた組み換えプラスミドｐＫＵ１０９：：ａｖｅＤ１の
地図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:465） (Ｃ１２Ｐ 19/62 Ｃ１２Ｒ 1:465）
Claims (3)
- 【請求項１】 下記式［Ｉ］、［ＩＩ］、［ＩＩＩ］、
［ＩＶ］または［Ｖ］で表される新規エバーメクチン誘
導体。 【化１】 【化２】 【化３】 【化４】 【化５】 - 【請求項２】 ストレプトミセス属に属する式［Ｉ］、
［ＩＩ］、［ＩＩＩ］、［ＩＶ］または［Ｖ］で表され
るエバーメクチン化合物生産能を有する微生物を培地に
培養し、培養物より式［Ｉ］、［ＩＩ］、［ＩＩＩ］、
［ＩＶ］または［Ｖ］で表されるエバーメクチン化合物
を単離することを特徴とする式［Ｉ］、［ＩＩ］、［Ｉ
ＩＩ］、［ＩＶ］または［Ｖ］で表されるエバーメクチ
ン化合物の製造方法。 【化６】 【化７】 【化８】 【化９】 【化１０】 - 【請求項３】 ストレプトミセス属に属する式［Ｉ］、
［ＩＩ］、［ＩＩＩ］、［ＩＶ］または［Ｖ］で表され
るエバーメクチン化合物生産能を有する微生物が、スト
レプトミセス・エバーミチリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ
ｅｓ ａｖｅｒｍｉｔｉｌｉｓ）Ｋ２０５７（ＦＥＲＭ
Ｐ−１２８２９）あるいはＫ２０５７／ｐＫＵ１０
９：：ａｖｅＤ１（ＦＥＲＭ Ｐ−１２８３０）である
請求項２記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP04295436A JP3100785B2 (ja) | 1992-03-26 | 1992-11-04 | 新規エバーメクチン誘導体、その製造方法ならびにその生産微生物 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4-68704 | 1992-03-26 | ||
| JP6870492 | 1992-03-26 | ||
| JP04295436A JP3100785B2 (ja) | 1992-03-26 | 1992-11-04 | 新規エバーメクチン誘導体、その製造方法ならびにその生産微生物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05320186A JPH05320186A (ja) | 1993-12-03 |
| JP3100785B2 true JP3100785B2 (ja) | 2000-10-23 |
Family
ID=13381430
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP04295436A Expired - Fee Related JP3100785B2 (ja) | 1992-03-26 | 1992-11-04 | 新規エバーメクチン誘導体、その製造方法ならびにその生産微生物 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3100785B2 (ja) |
-
1992
- 1992-11-04 JP JP04295436A patent/JP3100785B2/ja not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05320186A (ja) | 1993-12-03 |
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