JP3080784B2 - Mass propagation method of Fuerosou - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、フウロソウ植物の大量
増殖方法に関するものであり、さらに詳しくは、フウロ
ソウ植物の植物体の組織の切片を、特定のカルス誘導固
体培地、***カルス増殖液体培地、分化培地、幼植物体
の誘導及び成長固体培地を用いて、特定の培養プロセス
により培養することにより、従来、種子ができにくく、
同系統のものを大量に増殖することが難しく、優良交配
種を広く普及させることが困難であったフウロソウ植物
を、安定、かつ高収率で大量増殖することが可能な組織
培養によるフウロソウ植物の大量増殖方法に関するもの
である。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for mass-producing a spinach plant. More specifically, the present invention relates to a method for cutting a tissue section of a plant of a spinach plant into a specific callus-inducing solid medium, a split callus growth liquid medium, By culturing by a specific culture process using a differentiation medium, a seedling-induction and growth solid medium, conventionally, seeds are hardly formed,
It was difficult to grow large amounts of the same lineage, and it was difficult to widely spread excellent hybrids. It relates to a mass propagation method.

【０００２】[0002]

【従来の技術】従来、植物体の組織の切片を培地上で無
菌的に培養することにより、不定芽、不定根、花芽、カ
ルス等を誘導し、形成させ、成長させることにより当該
植物を増殖させる、植物の組織培養による増殖方法が、
種々の植物を対象に研究され、これまでに、種々の技術
が開発されている。2. Description of the Related Art Conventionally, adventitious buds, adventitious roots, flower buds, calli, and the like are induced, formed, and grown by aseptically cultivating a tissue section of a plant body on a medium, and the plant is proliferated. , The method of propagation of plant tissue culture
Various plants have been studied, and various techniques have been developed so far.

【０００３】このような植物の組織培養技術の進展に伴
い、当該技術を用いた各種植物の作出方法、増殖方法が
開発され、各々の植物に好適な培地組成、培養条件等が
具体的なものとして確立され、すでに、ウイルスフリー
株の生産、大量繁殖方法等として実用化されているもの
もあり、例えば、ダリア、ジャガイモの茎頂組織培養
（生長点培養）による無病固体の再生、ラン（シンビジ
ウム属）の茎頂組織培養によるプロトコームライクボデ
ィ（原塊体様組織塊ＰＬＢ）の再生、また、分割増殖に
よって遺伝的に均一な苗の大量増殖技術等、様々な技術
が開発され、実用化されている。With the progress of such plant tissue culture technology, methods for producing and growing various plants using the technology have been developed, and the medium composition, culture conditions, etc., suitable for each plant are specific. Some have already been put into practical use as a method for producing virus-free strains, mass propagation, and the like. For example, regeneration of disease-free solids by cultivating the shoot tip tissue of dahlia and potato (growth point culture), orchid (cymbidium) A variety of technologies have been developed and put into practical use, such as regeneration of protocomb-like bodies (PLB) by shoot apex tissue culture of the genus) and mass propagation of genetically uniform seedlings by split propagation. ing.

【０００４】そして、現在では、このような組織培養技
術は、草花、野菜等の草木類から、果樹、花木、樹木等
の木本類に至るまで、様々な分野で応用されつつあり、
特に、我国では、ラン、カーネーション、キク、ユリ、
シュツコンカスミソウ、セントポーリア、ガーベラ、シ
クラメン、イチゴ等のような栄養繁殖される園芸作物の
苗生産技術を中心として定着化しつつある。At present, such a tissue culture technique is being applied in various fields from plants such as flowers and vegetables to woody plants such as fruit trees, flowers and trees.
Especially in Japan, orchids, carnations, chrysanthemums, lilies,
The seedling production technology for vegetatively propagated horticultural crops such as Gypsophila paniculata, Saintpaulia, gerbera, cyclamen, strawberries, etc. is becoming established.

【０００５】しかしながら、このような植物の組織培養
技術は、いまだ完成された技術ではなく、未知の分野も
多く、むしろ今後の研究に待つべきところも多い技術で
あって、例えば、ラン科植物の栄養繁殖についても、研
究の進んでいるシンビジウム以外は、培地組成や培養技
術がまだ一般化する程には完成されておらず、また、東
洋系と呼ばれるカンラン、シュンラン等の一群のもの
は、いまだ組織培養による増殖体系は確立されていない
状況にある。[0005] However, such a plant tissue culture technique is not a completed technique, but has many unknown fields, and rather has much to wait for future research. Regarding vegetative propagation, except for Cymbidium, for which research is progressing, the culture medium composition and culture technology have not yet been completed to the point of generalization, and a group of orients such as perilla or perilla has not yet been developed. The growth system by tissue culture has not been established yet.

【０００６】一般の草花や観葉植物についても、増殖組
織の液体震盪培養による多芽体の形成、ホルモン剤添加
培地での多芽体の誘発、苗の大量増殖等の研究、開発が
活発に行われているが、変異発生の危険性が非常に高い
など今後解決すべき問題は多く残されている。[0006] With respect to general flowers and houseplants, active research and development are being carried out on the formation of polyblasts by liquid shaking culture of proliferating tissues, induction of polyblasts in a medium supplemented with hormonal agents, and mass propagation of seedlings. However, there are many problems to be solved in the future, such as the extremely high risk of mutation.

【０００７】また、球根類や多年草で、種子繁殖によっ
て育苗されるシクラメンやプリムラ類などは、遺伝的な
分離で成品に均一性の欠けることや、採取量が少なく、
優良系の種子不足の問題などがあることから、優良固体
を組織培養によって増殖する試みがなされている。[0007] Cyclamen and primula, which are grown in seeds by breeding seeds, such as bulbs and perennials, have a lack of uniformity in their products due to genetic separation and have a small amount of collection.
Due to problems such as lack of seeds in excellent systems, attempts have been made to propagate excellent solids by tissue culture.

【０００８】また、採種用母株の保存維持や、種子繁殖
により生産性の高い野菜のＦ₁ 固体や、草花のＦ₁ 固体
を、組織培養によって増殖し、栄養繁殖系の苗として供
給することも試みられているが、このような従来の種子
繁殖系を栄養増殖とする技術は、一部実用化されている
程度に過ぎない。このように、植物の組織培養技術が、
各種植物の誘導、作出、増殖方法として、広く検討され
る中で、各種観賞用植物の組織培養による誘導、増殖技
術等が提案されている。Further, storage maintenance and the seed for the mother strains, that the seed propagation and F ₁ solid productive vegetables, F ₁ solid flowers, grown by tissue culture, supplied as seedlings vegetative propagation system However, such a technique of vegetatively growing such a conventional seed propagation system is only partially used. Thus, plant tissue culture technology
As a method of inducing, producing, and growing various plants, which has been widely studied, techniques for inducing and growing various ornamental plants by tissue culture have been proposed.

【０００９】すなわち、例えば、有用一年生植物の茎頂
部を摘出し、これを無機塩類組成物及び植物生長ホルモ
ンを含む人工培地に移植し、これを０．５〜１０ｒｐｍ
の回転数にて回転培養して苗条原基を増殖し、得られた
苗条原基を静置培養して苗化することからなる有用一年
生植物の大量増殖方法が提案されている（特開昭５９−
１３２８２３号公報）。しかしながら、この方法は、主
として苗条原基（Sho-ot primordia）を利用して色素
体、液胞、油体、貯蔵物質等の二次代謝産物からなる有
用物質を人工的に大量生産するものであり、観賞用植物
の増殖については、ペチュニア、アサガオ等に言及して
いるに過ぎない。That is, for example, the shoot apex of a useful annual plant is excised, transplanted into an artificial medium containing an inorganic salt composition and a plant growth hormone, and then 0.5 to 10 rpm.
A method for mass-producing useful annual plants, comprising spinning the shoot primordia at a rotation speed of 1 to multiply the shoot primordia and statically culturing the obtained shoot primordia to produce seedlings (Japanese Patent Laid-Open No. 59-
132823). However, this method mainly uses Sho-ot primordia to artificially mass-produce useful substances composed of secondary metabolites such as plastids, vacuoles, oil bodies, and stored substances. Yes, about the growth of ornamental plants, it only refers to petunia, morning glory and the like.

【００１０】また、植物の組織片より光照射下でカルス
から発芽、発根させて増殖する植物の再分化方法、及び
そのための増殖用培地として、植物ホルモンであるサイ
トカイニン類０．１〜１０ｐｐｍ、及びオーキシン類
０．０１〜１０ｐｐｍを加えたＭＳ培地が提案されてい
る（特開平３−１３９２２４号公報）。しかしながら、
これは、キク科植物を短期間に大量に得るために好適な
キク科植物用の特定の培地組成、培養条件等を検討した
ものである。[0010] Further, a method for regenerating a plant that germinates and grows from callus under irradiation of light from a tissue piece of a plant to proliferate, and a growth medium for the same, for example, 0.1-10 ppm of cytokinins as plant hormones, And an MS medium containing 0.01 to 10 ppm of auxins has been proposed (JP-A-3-139224). However,
This study examined a specific medium composition, culture conditions, and the like for asteraceae plants suitable for obtaining a large amount of asteraceae plants in a short period of time.

【００１１】また、植物の組織片よりカルスを誘導せし
め、次いで、当該カルスを培養して不定芽を分化せしめ
た後、当該不定芽を培養して幼植物体を得ることからな
る植物の再生方法、及びその種苗の増殖方法が提案され
ている（特開平４−４５７３０号公報）。しかしなが
ら、この方法は、分化させた不定芽を利用するものであ
り、キキョウ属植物を対象としたものである。Further, a method for regenerating a plant, comprising inducing callus from a tissue piece of a plant, culturing the callus to differentiate adventitious buds, and then culturing the adventitious bud to obtain a young plant. And a method of multiplying the seedling have been proposed (JP-A-4-45730). However, this method utilizes differentiated adventitious buds, and is intended for a plant of the genus Pleurotus.

【００１２】さらに、顕花植物体の組織切片又はこれを
培養して得られる再生植物体の組織切片を培地にて培養
して再分化せしめて再生植物体を得、次いで当該再生植
物体を再分化時とは異なる組成を有する培地で培養して
開花せしめる顕花植物の培養方法が提案されている（特
開平４−３０７３３号公報）。しかしながら、この方法
は、再分化培養に用いる培地、及び開花培養に用いる培
地の培地組成について検討したものであり、対象とする
植物も、ウマノスグサ科、ナデシコ科、ナス科に属する
植物、特にトレニア属植物が例示されているに過ぎな
い。[0012] Furthermore, a tissue section of a flowering plant or a tissue section of a regenerated plant obtained by culturing the flowered plant is cultured and re-differentiated in a medium to obtain a regenerated plant. A method for culturing flowering plants, which is cultured in a medium having a composition different from that at the time of differentiation to cause flowering, has been proposed (JP-A-4-30733). However, this method examines the medium composition of the medium used for the regeneration culture and the medium used for the flowering culture, and the target plant is also a plant belonging to the family Echinacea, Nadesicoceae, and Solanaceae, particularly the genus Torenia. Plants are merely examples.

【００１３】しかして、最近、密閉容器中で植物を栽培
して開花させ、そのまま観賞可能とする容器内開花に関
する技術も提案されている。このような提案の例とし
て、例えば、植物体の茎切片を１次基本培地で無菌的に
培養して不定芽を形成させた後、これを特定の無機塩濃
度にし、かつ矮化剤を加えた２次基本培地に置床して天
然昼光色蛍光灯を短日照射し密閉培養することからなる
栽培方法が提案されている（特開昭６０−２２１０２０
号公報）。しかしながら、この方法は、不定芽を利用す
るものであり、対象とする植物もトレニア（和名ハナウ
リクサ）に限られるものである。[0013] Recently, there has also been proposed a technique relating to flowering in a container that allows plants to be cultivated and flowered in a closed container so that they can be viewed as they are. As an example of such a proposal, for example, a stem section of a plant body is aseptically cultured in a primary basal medium to form adventitious buds, which are then brought to a specific inorganic salt concentration, and a stunting agent is added. A cultivation method has been proposed which comprises laying on a secondary basal medium, irradiating a natural daylight fluorescent lamp for a short day, and culturing in a closed state (Japanese Patent Laid-Open No. 60-22210).
No.). However, this method utilizes adventitious buds, and the target plant is also limited to Torenia (Japanese name Hanaurixa).

【００１４】また、無菌の幼植物体の全草を透視可能な
容器中の矮化剤として特定の成分を添加したＭＳ培地に
植え付け、光を断続的に長期間照射し無菌的に密閉培養
することからなる栽培方法が提案されている（特開平２
−２００１２１号公報）。しかしながら、この方法は、
幼植物体の全草を用いるものであり、ユリ科に属するセ
ンニチコウの矮化条件を検討したものである。[0014] In addition, the whole plant of aseptic seedlings is planted in an MS medium to which a specific component is added as a dwarfing agent in a see-through container, irradiated intermittently with light for a long time, and aseptically sealed. A cultivation method comprising
-200121). However, this method
In this study, we used the whole plant of a young plant, and examined the dwarfing conditions of Senichiko, which belongs to the lily family.

【００１５】このように、植物を密閉容器中で栽培し
て、そのまま観賞可能とする容器内栽培技術を確立する
には、植物を密閉容器内で、安定、かつ高収率で増殖さ
せる技術、密閉容器中で適正に育成させるための矮化技
術、花芽を分化させ、開花させる開花技術等を開発し、
確立することが前提とされるが、そもそも、密閉容器中
で植物を栽培し、開花させることは大変困難であり、こ
れまで、前記のような、矮化トレニアの密閉容器中での
開花、センニチコウの密閉容器中での開花等の報告があ
るものの、現在、密閉容器中で矮化植物を育成し、観賞
用に供されているものは花をつけない観葉植物がほとん
どである。As described above, in order to establish an in-container cultivation technique in which plants can be cultivated in a closed container so that they can be enjoyed as they are, a technique for growing plants stably and in a high yield in a closed container can be achieved by: Developed dwarfing technology for properly growing in a closed container, flowering technology for differentiating flower buds and flowering,
It is presupposed that it is established, but in the first place, it is very difficult to grow and flower plants in a closed container, and until now, flowering in a closed container of dwarf torenia, Although there are reports of flowering in closed containers, most of the plants currently growing dwarf plants in closed containers and used for ornamental purposes do not have flowers.

【００１６】このように、一般に、各種植物を組織培養
により増殖させる技術が開発され、広く普及するに伴
い、各種植物に好適な個有の培養条件等が研究、開発さ
れ、確立されつつあるものの、実用化レベルに至ってい
るものはそれほど多くはなく、まして、植物を密閉容器
もしくは通気性容器中で栽培して花芽を分化させて開花
させ、そのまま観賞することが可能な植物の容器内育成
技術については、その研究例も少なく、ほとんど実用化
されていない状況にある。As described above, in general, with the development and widespread use of technology for growing various plants by tissue culture, research and development and establishment of proprietary culture conditions suitable for various plants have been carried out. Few have reached the level of practical use, much more, plant cultivation technology that allows plants to be cultivated in closed containers or air-permeable containers to differentiate flower buds and bloom, and to be viewed as they are. As for, there are few research examples, and it is in a situation where it has hardly been put to practical use.

【００１７】[0017]

【発明が解決しようとする課題】このような状況の中
で、本発明者らは、容器中で植物を栽培して花芽を分化
させ、開花させ、そのまま観賞することが可能な植物の
容器内育成技術を確立することを目標として、その技術
上のベースとなる基礎的技術、すなわち植物を、安定、
かつ高収率で増殖させる方法、安定に矮化させるための
矮化条件、安定に花芽を分化させ、かつ長期にわたって
開花させるための栽培条件等について種々検討するため
にその基礎的研究に着手した。In such a situation, the present inventors cultivated a plant in a container to differentiate flower buds, caused the flower to blossom, and allowed the plant to be viewed as it was. With the goal of establishing breeding technology, the basic technology that is the basis of that technology,
Basic research was undertaken to investigate various methods such as growth methods with high yield, dwarfing conditions for stably dwarfing, stably differentiated flower buds, and cultivation conditions for long-term flowering. .

【００１８】本発明者らの研究及びこれまでの知見によ
ると、このような植物の育成技術を確立するには、その
技術上のベースとなる前記のような各種植物の増殖技
術、矮化技術、開花技術等の基礎的技術の開発が大前提
となることはいうまでもないが、これらの各技術は、実
際上、個々の植物の種類によって全く相違するものであ
り、例えば、前記のトレニア、センニチコウについて
も、その栽培方法、栽培条件を、そのまま他の植物の場
合に転用しても、所期の目的を達成することはほとんど
不可能であり、各植物の種類に応じて、それぞれ個有の
栽培方法、栽培条件を開発し、確立することが必要であ
る。According to the research of the present inventors and the findings so far, in order to establish such a plant cultivation technique, the above-mentioned various plant growth techniques and dwarfing techniques, which are technical bases, are established. Needless to say, the development of basic technologies such as flowering technology is a major premise. However, each of these technologies is actually completely different depending on the type of individual plant. Even if the cultivation method and cultivation conditions of Senichiko are diverted to other plants as they are, it is almost impossible to achieve the intended purpose, and depending on the type of each plant, It is necessary to develop and establish effective cultivation methods and conditions.

【００１９】このような知見を前提として、本発明者ら
は、各種植物のうちでも、従来の交配種では第２代目以
降種子ができにくくてその増殖が難しく、また、交配種
においては外観や色にバラツキが出て均一な植物体を作
出することが難しく、従って、優良品種を広く普及させ
ることが難しいことから、これらの点を解決できる新し
い増殖技術の開発が強く要請されていたフウロソウ植物
に着目し、これを安定、かつ高収率で増殖させるための
方法を開発することを目標として鋭意研究を積み重ねた
結果、特定の培養プロセスと特定の培地組成、培養条件
を組み合わせることによって、所期の目的を達成し得る
ことを見い出し、本発明を完成するに至った。Based on such knowledge, the present inventors have found that among the various plants, the conventional hybrids are difficult to produce seeds from the second generation onward, and it is difficult to multiply the seeds. It is difficult to produce a uniform plant due to variation in color, and it is difficult to spread excellent varieties widely. Therefore, development of a new breeding technique that can solve these points has been strongly demanded. And focused on developing a method for stable and high-yielding growth, the results of intensive research have shown that combining specific culture processes with specific medium compositions and culture conditions has It has been found that the objective of the present invention can be achieved, and the present invention has been completed.

【００２０】すなわち、本発明は、従来、交配により作
出した優良品種の増殖が難しいとされていたフウロソウ
植物を、大量に増殖する方法を提供することを目的とす
るものである。[0020] That is, an object of the present invention is to provide a method for proliferating a large amount of an aneurysm plant that has conventionally been considered difficult to proliferate excellent varieties produced by crossing.

【００２１】また、本発明は、フウロソウ植物の無菌状
態の植物体の組織の切片を利用した組織培養により、当
該植物を、安定、かつ高収率に増殖する方法を提供する
ことを目的とするものである。[0021] Another object of the present invention is to provide a method for stably growing a plant at a high yield by tissue culture using a section of a tissue of a plant of Aspergillus aseptic. Things.

【００２２】さらに、本発明は、フウロソウ植物を容器
中で無菌的に培養して花芽を分化させ、開花させ、その
まま当該容器中で観賞することが可能な当該植物の大量
増殖方法を提供することを目的とするものである。Further, the present invention provides a method for mass-producing a plant that can be aseptically cultured in a container to differentiate flower buds, bloom, and be directly viewed in the container. It is intended for.

【００２３】さらに、また、本発明は、特定の培養プロ
セス、特定の培地組成、及び特定の培養条件下で形成さ
せたフウロソウ植物の***カルスを利用して、当該植物
を、安定、かつ高収率で大量に増殖させ、容器内で成長
させる方法を提供することを目的とするものである。Furthermore, the present invention provides a stable and high-yielding plant by utilizing the split callus of a Fusarium plant formed under a specific culture process, a specific medium composition, and a specific culture condition. It is an object of the present invention to provide a method of growing a large amount at a high rate and growing in a container.

【００２４】[0024]

【課題を解決するための手段】このような本発明の目的
を達成するための構成は、以下の（１）〜（８）の技術
的手段から成る。（１）フウロソウ植物（ゼラニウム
属、エロディウム属の植物）を容器内で育成して花芽を
分化させ、開花させ、そのまま鑑賞することができる当
該植物の容器内大量増殖方法であって、１）フウロソウ
植物の植物体の組織の切片を、炭素源を含有し、ｐＨ調
整された合成培地を基本培地（Ａ）とし、これにオーキ
シン類とサイトカイニン類とからなる植物ホルモンを加
えたカルス誘導固体培地に植えて培養し、２）得られた
カルスを、前記基本培地（Ａ）にオーキシン類とサイト
カイニン類とからなる植物ホルモンを加えた液体培地中
で、震盪回転数１００ｒｐｍ以上の条件で培養し、***
したカルスを増殖させ、３）増殖したカルスを、前記基
本培地（Ａ）にオーキシン類とサイトカイニン類とから
なる植物ホルモンを加えた分化用固体培地に移して培養
し、４）カルスから分化した芽を根と一緒に、炭素源を
含有し、ｐＨ調整され、無機塩濃度を低減させた合成培
地を基本培地（Ｂ）とした幼植物体の誘導及び成長固体
培地に移植し、通気性のある条件で容器中で培養し、増
殖させることを特徴とするフウロソウ植物の大量増殖方
法。The structure for achieving the above object of the present invention comprises the following technical means (1) to (8). (1) Fusarium plant (Geranium
Genus, plant of the genus Erodium) in a container to grow flower buds
Differentiation, flowering, and appreciation
A method for mass-producing a plant in a container of the plant, wherein 1) a section of a tissue of a plant of a plant of the anthracnose plant is a synthetic medium containing a carbon source and having a pH adjusted as a basic medium (A), and an auxin and Planting and culturing in a callus-derived solid medium to which a plant hormone consisting of cytokinins is added; 2) a liquid medium obtained by adding the obtained callus to the basic medium (A) to which a plant hormone consisting of auxins and cytokinins is added; In the medium, the cultured callus was grown under the condition of a shaking rotation speed of 100 rpm or more to grow the divided callus. 3) The grown callus was differentiated by adding a plant hormone consisting of auxins and cytokinins to the basic medium (A). and cultured were transferred to solid medium, 4) together buds differentiated from callus and root, contains a carbon source, pH adjusted, basal medium synthetic medium with reduced mineral salt concentration ( ) And were transplanted to the induction and growth solid media of plantlets were cultured in a vessel under conditions breathable, mass propagation method Fuurosou plant characterized by growing.

【００２５】（２）ナフタレン酢酸０．１〜２．０ｍｇ
／ｌ、ベンジルアデニン０．１〜６．０ｍｇ／ｌを加え
たカルス誘導固体培地を用いることを特徴とする前記
（１）記載のフウロソウ植物の大量増殖方法。(2) 0.1 to 2.0 mg of naphthaleneacetic acid
/ 1 and a callus-derived solid medium to which 0.1 to 6.0 mg / l of benzyladenine has been added, wherein the method for mass-proliferation of the Anthracnose plant according to the above (1), is used.

【００２６】（３）ナフタレン酢酸０．１〜５．０ｍｇ
／ｌ、ベンジルアデニン０．５〜６．０ｍｇ／ｌを加え
た液体培地を用いることを特徴とする前記（１）記載の
フウロソウ植物の大量増殖方法。(3) 0.1-5.0 mg of naphthaleneacetic acid
/ 1 and a method for mass-producing a spinach plant according to the above (1), wherein a liquid medium containing 0.5 to 6.0 mg / l of benzyladenine is used.

【００２７】（４）ナフタレン酢酸０．１〜５．０ｍｇ
／ｌ、ベンジルアデニン０〜１．０ｍｇ／ｌを加えた分
化用固体培地を用いることを特徴とする前記（１）記載
のフウロソウ植物の大量増殖方法。(4) Naphthalene acetic acid 0.1 to 5.0 mg
/ 1 and a solid medium for differentiation supplemented with 0 to 1.0 mg / l of benzyladenine, wherein the method for mass-proliferation of the Antelope plant according to (1) above is used.

【００２８】（５）炭素源としてショ糖を含有し、ｐＨ
５．０〜６．０に調整され、無機塩濃度が１／２〜１／
５に調整された合成培地を基本培地（Ｂ）とした幼植物
体の誘導及び成長固体培地を用いることを特徴とする前
記（１）記載のフウロソウ植物の大量増殖方法。(5) It contains sucrose as a carbon source and has a pH
It is adjusted to 5.0 to 6.0, and the inorganic salt concentration is 1/2 to 1 /
5. The method according to (1) above, wherein a solid medium for inducing and growing young plants is used as a basic medium (B) using the synthetic medium adjusted to 5.

【００２９】（６）各工程の培養を、２２〜２７℃の温
度条件、１２〜１８時間日長の光照射条件下で行うこと
を特徴とする前記（１）記載のフウロソウ植物の大量増
殖方法。(6) The method according to (1) above, wherein the cultivation in each step is carried out under a temperature condition of 22 to 27 ° C. and a light irradiation condition of 12 to 18 hours of light. .

【００３０】（７）植物体組織の切片が、葉、又は葉柄
の組織切片であることを特徴とする前記（１）記載のフ
ウロソウ植物の大量増殖方法。(7) The method according to (1) above, wherein the plant tissue section is a leaf or petiole tissue section.

【００３１】（８）合成培地が、ＭＳ改変培地であるこ
とを特徴とする前記（１）記載のフウロソウ植物の大量
増殖方法。(8) The method according to (1) above, wherein the synthetic medium is a modified MS medium.

【００３２】続いて、本発明の構成について詳細に説明
する。一般に、フウロソウ（風露草）というと、フウロ
ソウ科の中のゼラニウム属、エロディウム属の植物の総
称を意味しており、学名は、それぞれゼラニウム（G-er
anium)、エロディウム（Erodium)という。また、ヨーロ
ッパ原産のフウロソウ科の一種を、オランダフウロ、イ
ブキフウロの如く、単にこの名で呼ぶことがある。山地
の草原に自生し、葉は、掌状裂、紅葉色、五弁の花をつ
ける。本発明は、このようなフウロソウ植物を対象とす
るものであり、ハクサンフウロ、アサマフウロなどのゼ
ラニウム属、オランダフウロなどのエロディウム属、の
植物を対象とする。 Next, the configuration of the present invention will be described in detail. In general, Fuerosou (wind dew grass) means a general term for plants of the genus Geranium and Erodium in the family Anthracidae, and their scientific names are Geranium (G-er
anium), called Erodium. In addition, a kind of the Anthracaceae native to Europe is sometimes simply referred to by this name, as in the case of Dutch furo and Ibuki furo. It grows naturally in the grasslands of the mountains, and its leaves have palmar fissures, autumn leaves, and five-petaled flowers. The present invention is intended to target such Fuurosou plants, Ha Kusanfuuro, geranium genus such Asamafuuro, Erodiumu genus and Holland Fuuro, the
For plants.

【００３３】これらのフウロソウ植物の無菌状態の植物
体の組織の切片としては、通常の植物体の適宜の器官の
組織切片を滅菌処理したもの、あるいは、消毒種子を無
菌的に播種して発芽させた無菌幼苗、当該幼苗を生育さ
せた植物体の葉、又は葉柄の切片等が、好適に利用され
る。As a section of a tissue of a plant body of these angiosperm aseptic plants, a tissue section of an appropriate organ of a normal plant body is sterilized, or a sterilized seed is aseptically sowed and germinated. Aseptic seedlings, leaves of the plant body in which the seedlings have been grown, or sections of petiole are preferably used.

【００３４】このようなフウロソウ植物の無菌状態の植
物体の組織切片を、合成培地であるＭＳ培地（ムラシゲ
とスクーグの基本無機塩培地）をベースとして、炭素源
を含有し、ｐＨ調整されたＭＳ改変培地を基本培地
（Ａ）とし、これにオーキシン類とサイトカイニン類と
からなる植物ホルモンを添加し、含有せしめたカルス誘
導固体培地に置床し、特定の培養条件下で培養してカル
スを誘導させる。A tissue section of such an aseptic plant body of the anthracnose plant is prepared by synthesizing an MS medium (a basic inorganic salt medium of Murashige and Skoog) which is a synthetic medium and containing a carbon source and adjusting the pH of the MS. The modified medium is a basic medium (A), to which a plant hormone consisting of auxins and cytokinins is added, placed on a callus-inducing solid medium containing the medium, and cultured under specific culture conditions to induce callus. .

【００３５】前記ＭＳ改変培地は、通常のＭＳ培地をベ
ースとして、葉酸約０．５重量％、ビオチン約０．０５
重量％添加したものが好適に使用され、これに炭素源と
して、例えば、ショ糖を２重量％添加し、ｐＨ５．０〜
６．０、好ましくはｐＨ５．８、に調整し、これを基本
培地（Ａ）とする。The modified MS medium is based on a normal MS medium and contains about 0.5% by weight of folic acid and about 0.05% of biotin.
% Is preferably used, and as a carbon source, for example, 2% by weight of sucrose is added, and pH 5.0 to 5.0 is added.
The pH is adjusted to 6.0, preferably pH 5.8, and this is used as a basal medium (A).

【００３６】このように、当該基本培地（Ａ）は、前記
ＭＳ改変培地、炭素源としてのショ糖が、好適なものと
して使用されるが、これに限らず、これと同等の組成、
もしくは成分のものであれば他の同効の合成培地が同様
に利用できることはいうまでもない。他の同効の合成培
地としては、具体的には、ＭＳ培地、Ｂ５培地、Nit-sc
h の培地（１９６５年）が挙げられる。As described above, in the basic medium (A), the above-mentioned MS modified medium and sucrose as a carbon source are preferably used. However, the present invention is not limited thereto.
Alternatively, it is needless to say that another synthetic medium of the same effect can be similarly used as long as it is a component. Specific examples of other synthetic media having the same effect include MS medium, B5 medium, and Nit-sc medium.
h medium (1965).

【００３７】当該基本培地（Ａ）に添加される植物ホル
モンとしては、ナフタレン酢酸０．１〜２．０ｍｇ／
ｌ、好ましくは１．０ｍｇ／ｌ、ベンジルアデニン０．
１〜６．０ｍｇ／ｌ、好ましくは１．０〜５．０ｍｇ／
ｌが、好適に使用されるが、これに限らず、これらと同
効の生理活性を有する他のオーキシン類、サイトカイニ
ン類も、同様に組合せて利用できる。他のオーキシン類
としては、インドール酢酸、インドール酪酸、２，４−
ジクロロフェノキシ酢酸等が、サイトカイニン類として
は、カイネチン、ゼアチン、２−イソペンテニルアミノ
プリン等が、それぞれ挙げられる。The plant hormone to be added to the basic medium (A) is naphthalene acetic acid 0.1 to 2.0 mg /
1, preferably 1.0 mg / l, benzyl adenine 0.1.
1-6.0 mg / l, preferably 1.0-5.0 mg / l
1 is preferably used, but not limited thereto, and other auxins and cytokinins having the same physiological activity can be used in combination in the same manner. Other auxins include indoleacetic acid, indolebutyric acid, 2,4-
Examples include dichlorophenoxyacetic acid, and examples of cytokinins include kinetin, zeatin, and 2-isopentenylaminopurine.

【００３８】このような成分を含有せしめた培地に、支
持材料として、例えば、寒天約０．７〜０．９重量％を
添加し、ｐＨを前記範囲に調整し、常法により殺菌処理
した後、適宜の容器中に無菌的に分注し、固形化させて
カルス誘導固体培地を調製する。前記支持材料として
は、寒天に限らず、それと同効の成分であれば、ジェラ
ンガム等、適宜のものが利用できる。As a supporting material, for example, about 0.7 to 0.9% by weight of agar is added to a medium containing such components, the pH is adjusted to the above range, and the medium is sterilized by a conventional method. Is aseptically dispensed into an appropriate container and solidified to prepare a callus-derived solid medium. The support material is not limited to agar, and any suitable component such as gellan gum can be used as long as it has the same effect.

【００３９】前記のフウロソウ植物の無菌状態の植物体
の組織の切片を、当該カルス誘導固体培地に置床し、培
養することにより、カルスを誘導させるが、この場合、
２２〜２７℃、好適には２５℃±１℃の温度条件、及び
１２〜１８時間日長、好適には１６時間日長の光照射条
件下で約１ヶ月間培養することにより、安定、かつ高収
率でカルスを誘導することができる。The callus is induced by placing a section of the tissue of the aseptic plant of the anthracnose plant on the callus-inducing solid medium and culturing it.
By culturing for about one month under a temperature condition of 22 to 27 ° C., preferably 25 ° C. ± 1 ° C., and a light irradiation condition of 12 to 18 hours, and preferably 16 hours, photoperiod, it is stable and Callus can be induced with high yield.

【００４０】前記工程により得られたカルスを、前記基
本培地（Ａ）をベースとする液体培地中に加え、震盪回
転数１００ｒｐｍ以上、好ましくは１３０〜１５０ｒｐ
ｍの条件下で培養して、***したカルスを増殖させる。
このような***したカルスを、例えば、１週間ごとにピ
ペット等で採取し、約１ヶ月継代培養する。The callus obtained in the above step is added to a liquid medium based on the basic medium (A), and the number of shaking rotations is 100 rpm or more, preferably 130 to 150 rpm.
The cultured calli are grown under the conditions of m.
Such divided calli are collected, for example, with a pipette every week and subcultured for about one month.

【００４１】当該液体培地としては、前記基本培地
（Ａ）に、ナフタレン酢酸０．１〜５．０ｍｇ／ｌ、好
ましくは１．０ｍｇ／ｌ、ベンジルアデニン０．５〜
６．０ｍｇ／ｌ、好ましくは１．０〜５．０ｍｇ／ｌを
添加した液体培地が、好適に使用されるが、添加する植
物ホルモンは、これに限定されず、前記と同様にこれら
と同効の生理活性を有する他のオーキシン類、サイトカ
イニン類も、同様に組合せて利用することができる。培
養の温度条件、及び光照射条件は、前記工程と同様に設
定する。As the liquid medium, naphthalene acetic acid 0.1 to 5.0 mg / l, preferably 1.0 mg / l, benzyl adenine 0.5 to
A liquid medium supplemented with 6.0 mg / l, preferably 1.0 to 5.0 mg / l, is suitably used, but the plant hormone to be added is not limited thereto, and may be the same as described above. Other auxins and cytokinins having effective physiological activity can also be used in combination in the same manner. Culture temperature conditions and light irradiation conditions are set in the same manner as in the above steps.

【００４２】当該工程においては、通常の培養方法で
は、前記***したカルスの増殖は行われないが、このよ
うな高速の回転条件を付与することにより、はじめて前
記***したカルスを増殖させることが可能である。従っ
て、このような高速の回転条件を付与することは、本工
程における***したカルスの増殖手段として必須の要件
である。In this step, the divided callus is not propagated by a normal culture method, but it is possible to grow the divided callus only by applying such a high-speed rotation condition. It is. Therefore, providing such a high-speed rotation condition is an essential requirement as a means for growing the divided callus in this step.

【００４３】次に、前記工程により得られた***増殖し
たカルスを、前記基本培地（Ａ）をベースとする分化用
固体培地に置床して培養することにより、***したカル
スから芽と根を分化させる。当該分化用固体培地として
は、前記基本培地（Ａ）に、ナフタレン酢酸０．１〜
５．０ｍｇ／ｌ、好ましくは１．０ｍｇ／ｌ、ベンジル
アデニン０〜１．０ｍｇ／ｌ、好ましくは０〜０．１ｍ
ｇ／ｌを添加した固体培地が好適に使用されるが、添加
する植物ホルモンは、これに限定されず、前記と同様に
これらと同効の生理活性を有する他のオーキシン類、サ
イトカイニン類も同様に組合せて利用することができ
る。培養の温度条件、及び光照射条件は、前記工程と同
様に設定する。フウロソウ植物について、このような分
裂、増殖したカルスから芽と根を分化させる方法は、本
発明者らによって開発されたものである。Next, the callus that has undergone division and proliferation obtained in the above step is placed on a solid medium for differentiation based on the basic medium (A) and cultured to differentiate shoots and roots from the divided callus. Let it. As the solid medium for differentiation, naphthaleneacetic acid 0.1 to 0.1 is added to the basic medium (A).
5.0 mg / l, preferably 1.0 mg / l, benzyladenine 0-1.0 mg / l, preferably 0-0.1 m
The solid medium to which g / l is added is preferably used, but the plant hormone to be added is not limited thereto, and other auxins and cytokinins having the same physiological activity as those described above are also used. Can be used in combination. Culture temperature conditions and light irradiation conditions are set in the same manner as in the above steps. The method of differentiating shoots and roots from such split and proliferated callus of a Flourium plant has been developed by the present inventors.

【００４４】次いで、前記工程により得られた***した
カルスから分化した芽を根と一緒に、炭素源を含有し、
ｐＨ調整され、無機塩濃度が１／１以下、好ましくは、
１／２〜１／５に調整され、低減されたＭＳ改変培地を
基本培地（Ｂ）とした幼植物体誘導及び成長固体培地を
用いて培養する。Next, the sprouts differentiated from the split callus obtained by the above-mentioned step are combined with a root, and contain a carbon source,
pH is adjusted and the inorganic salt concentration is 1/1 or less, preferably,
Culture is performed using a seedling-induction and growth solid medium using the MS modified medium adjusted to 1/2 to 1/5 and reduced as the basic medium (B).

【００４５】当該幼植物体誘導及び成長固体培地として
は、例えば、炭素源としてショ糖１重量％を使用し、ｐ
Ｈ５．８に調整し、無機塩濃度を１／２に調整したＭＳ
改変培地を基本培地（Ｂ）としたものが、好適に使用さ
れる。当該基本培地（Ｂ）は、これに限らず、前述のよ
うなこれと同効の合成培地、であれば同様に利用できる
こはいうまでもない。As the solid medium for inducing and growing seedlings, for example, 1% by weight of sucrose is used as a carbon source.
MS adjusted to H5.8 and the inorganic salt concentration adjusted to 1/2
The modified medium used as the basic medium (B) is suitably used. The basic medium (B) is not limited to this, and it goes without saying that the same basic medium as described above can be used as well.

【００４６】前記***したカルスから分化した芽を、適
宜の容器中に無菌的に分注した前記固体培地に移植し、
無菌フィルターで封をして、通気性条件下で、例えば、
約２５℃で１６時間日長の光照射条件下で培養する。The shoots differentiated from the divided callus are transplanted to the solid medium aseptically dispensed into an appropriate container,
Sealed with a sterile filter, under breathable conditions, for example,
Incubate at about 25 ° C. for 16 hours under light irradiation conditions.

【００４７】この場合の容器としては、試験管、三角フ
ラスコ、ガラスビン、プラスチック容器等が好適に利用
されるが、充分な光透過性を有するものであれば適宜の
ものが利用可能である。培養は、光を断続的に長期間照
射する条件下すなわち、１２〜１８時間日長、好ましく
は１６時間日長、の光照射条件下で行い、温度条件は、
２２〜２７℃、特に、２５℃±１℃、が好ましい。As the container in this case, a test tube, an Erlenmeyer flask, a glass bottle, a plastic container and the like are suitably used, but any suitable container having sufficient light transmittance can be used. The culture is performed under conditions of intermittently irradiating light for a long period of time, that is, under light irradiation conditions of a day length of 12 to 18 hours, and preferably a day length of 16 hours.
A temperature of 22 to 27 ° C., particularly 25 ° C. ± 1 ° C., is preferred.

【００４８】これらの温度、日照時間等の培養環境を正
確に制御することにより、高い再現性で植物体を増殖さ
せることができるが、特に、培養の温度条件は、重要な
要件であり、２５℃±１℃の温度条件が、植物体を、均
一、かつ、安定に再生増殖させることができることか
ら、特に好ましい。そして、培養の温度条件を、例え
ば、２０℃以下に低下させると、成長が遅くなることが
確認された。さらに、この場合、通気性条件が必須の要
件であり、密栓した密閉容器を用いると、成長が遅くな
り、植物体が徒長してしまう。By precisely controlling the culture environment such as temperature and sunshine duration, the plant can be grown with high reproducibility. In particular, the temperature condition of culture is an important requirement. The temperature condition of ° C. ± 1 ° C. is particularly preferable since the plant can be uniformly and stably regenerated and propagated. Then, it was confirmed that when the temperature condition of the culture was reduced to, for example, 20 ° C. or less, the growth was slowed down. Furthermore, in this case, the ventilation condition is an essential requirement, and if a hermetically sealed container is used, the growth will be slowed down and the plant will become prolonged.

【００４９】以上のように、本発明は、前記第〜の
工程の培養プロセス、及び各工程における培地組成、培
養条件を必須の要件とするものであり、これらのいずれ
を欠いてもフウロソウ植物を容器内で正常に成長させる
ことはできず、本発明の所期の目的を達成することはで
きない。そして、このような培養プロセス、及び各工程
における培地組成、培養条件は、フウロソウ植物に特有
のものであって、これらは、各種植物の組織培養技術、
あるいは、前記トレニア、センニチコウ等の密閉容器内
栽培技術等の従来公知の事項をもってしても到底予期す
ることはできないものである。As described above, the present invention requires the culturing process of the first to third steps, the medium composition in each step and the culturing conditions as essential requirements. It cannot grow normally in the container and cannot achieve the intended purpose of the present invention. And such a culture process, the medium composition in each step, the culture conditions are specific to the Anthraciana plant, these are tissue culture techniques of various plants,
Alternatively, it cannot be expected at all even with conventionally known matters such as the above-mentioned cultivation technique in a closed container such as Torenia or Sennichiko.

【００５０】次に、試験例を示して本発明の特有の効果
について検証する。 試験例１ （カルスの誘導試験）フウロソウ植物として、オランダ
ヒメフウロソウ（Erodium chamaedryoides）を使用して
カルス誘導試験を行った。常法により無菌的に培養して
得た無菌植物体の葉柄組織から５ｍｍ〜１０ｍｍ程度の
材料を採取し、切片を調製した。Next, test examples will be shown to verify the specific effects of the present invention. Test Example 1 (Callus Induction Test) A callus induction test was carried out using a dung beetle (Erodium chamaedryoides) as a flies plant. A material of about 5 mm to 10 mm was collected from a petiole tissue of a germ-free plant obtained by aseptically culturing by a conventional method, and a section was prepared.

【００５１】培地としては、ＭＳ改変培地を基本培地
（Ａ）とし、これに、ナフタレン酢酸、及びベンジルア
デニンを所定濃度添加した培地を使用した。なお、基本
培地（Ａ）としては、ＭＳ培地に、ビオチン０．０５重
量％、葉酸０．５重量％添加して改変したＭＳ改変培地
を使用し、これに、ショ糖２重量％、寒天０．７重量％
を加え、ｐＨを５．８に調整したものを培地として使用
した。常法により加圧蒸気殺菌した基本培地を、直径２
５ｍｍの試験管に２０ｍｌ分注した。As a medium, a modified MS medium was used as a basic medium (A), and a medium to which naphthaleneacetic acid and benzyladenine were added at predetermined concentrations was used. As the basic medium (A), an MS modified medium modified by adding 0.05% by weight of biotin and 0.5% by weight of folic acid to an MS medium was used, and 2% by weight of sucrose and 0% of agar were added. 0.7% by weight
Was added, and the pH of the mixture adjusted to 5.8 was used as a medium. A basic medium sterilized by pressurized steam using a conventional method is used to remove
20 ml was dispensed into a 5 mm test tube.

【００５２】次いで、前記オランダヒメフウロソウの葉
柄の切片を前記試験管内の基本培地上に置床し、室温２
５℃、照度４，０００Ｌｕｘの天然昼光色蛍光灯による
１６時間日長の照射条件下で３０日間培養してカルスを
誘導させた。その結果を表１に示す。表１から明らかな
ように、ナフタレン酢酸０．１〜２．０ｍｇ／ｌ、ベン
ジルアデニン０．１〜６．０ｍｇ／ｌを添加した場合、
安定、かつ高収率でカルスが形成されることが確認され
た。Next, the petiole slices of the above-mentioned Hollandia americana were placed on a basal medium in the above-mentioned test tube, and were placed at room temperature for 2 hours.
The callus was induced by culturing for 30 days under irradiation conditions of a natural daylight fluorescent lamp having an illuminance of 4,000 Lux at 5 ° C. for 16 hours. Table 1 shows the results. As is clear from Table 1, when naphthalene acetic acid 0.1-2.0 mg / l and benzyladenine 0.1-6.0 mg / l are added,
It was confirmed that calli were formed in a stable and high yield.

【００５３】[0053]

【表１】 [Table 1]

【００５４】試験例２ （***したカルス増殖試験）前記試験例１で誘導したカ
ルス７．０ｇを、前記基本培地（Ａ）に、ナフタレン酢
酸１．０ｍｇ／ｌ、ベンジルアデニン１．０ｍｇ／ｌを
添加した液体培地５０ｍｌを収納した容積３００ｍｌの
三角フラスコ中に加え、２５℃で４，０００Ｌｕｘの天
然昼光色蛍光灯で１６時間日長照射条件下で、震盪回転
数を変えた条件で、培養を行って、***したカルスの増
殖試験を行った。その結果を表２に示す。Test Example 2 (Split Callus Proliferation Test) 7.0 g of the callus induced in Test Example 1 was added to the above-mentioned basic medium (A) by adding 1.0 mg / l of naphthaleneacetic acid and 1.0 mg / l of benzyladenine. The culture was carried out in a 300-ml Erlenmeyer flask containing 50 ml of the added liquid medium and irradiating with a 4,000 Lux natural daylight fluorescent lamp at 25 ° C. for 16 hours under daylight irradiation conditions, while changing the shaking rotation speed. Then, the proliferation test of the divided callus was performed. Table 2 shows the results.

【００５５】[0055]

【表２】 [Table 2]

【００５６】表２から明らかなように、震盪回転数１０
０ｒｐｍ以上の高速回転条件の場合に、***したカルス
が増殖することが分った。As is clear from Table 2, the shaking rotation speed was 10
It was found that the divided callus proliferated under the high-speed rotation condition of 0 rpm or more.

【００５７】また、ナフタレン酢酸、ベンジルアデニン
を所定濃度添加し、震盪回転数を１３０ｒｐｍに設定し
て試験した結果を表３に示す。表３から明らかなよう
に、ナフタレン酢酸１．０ｍｇ／ｌ、ベンジルアデニン
１．０〜５．０ｍｇ／ｌの濃度の場合に、***したカル
スが高収率で増殖することが分った。Table 3 shows the results of tests conducted by adding predetermined concentrations of naphthaleneacetic acid and benzyladenine, and setting the shaking speed to 130 rpm. As is clear from Table 3, it was found that the split callus proliferated at a high yield when the concentration of naphthalene acetic acid was 1.0 mg / l and benzyladenine was 1.0 to 5.0 mg / l.

【００５８】[0058]

【表３】 [Table 3]

【００５９】試験例３ （容器内育苗試験）前記試験例２で形成させた***した
カルスをピペットで採取した。一方、前記基本培地
（Ａ）に、ナフタレン酢酸０．１〜５．０ｍｇ／ｌ、ベ
ンジルアデニン０〜１．０ｍｇ／ｌを添加し、寒天０．
７重量％加え、ｐＨ５．８になるように調整した後、容
積２００ｍｌのガラス容器に５０ｍｌ分注して固形培地
を形成した。次いで、前記***したカルスを、このガラ
ス容器内の培地に置床して、室温２５±１℃、天然昼光
色蛍光灯により照度４，０００Ｌｕｘ、１６時間日長の
照射条件下で３０〜４０日間静置培養して、***したカ
ルスから芽と根を分化させた。Test Example 3 (Incubation Test in Containers) The split callus formed in Test Example 2 was collected with a pipette. On the other hand, 0.1 to 5.0 mg / l of naphthalene acetic acid and 0 to 1.0 mg / l of benzyladenine were added to the basic medium (A), and the agar was added at 0.
After adding 7% by weight and adjusting the pH to 5.8, 50 ml was dispensed into a 200 ml glass container to form a solid medium. Next, the divided callus is placed on a culture medium in this glass container, and left standing for 30 to 40 days at room temperature of 25 ± 1 ° C., irradiance of 4,000 Lux by natural daylight fluorescent lamp, and irradiation condition of 16 hours day length. After culturing, shoots and roots were differentiated from the divided calli.

【００６０】次いで、ショ糖１重量％、寒天０．７重量
％添加し、ｐＨ５．８に調整し、無機塩濃度を１／２に
調整したＭＳ改変培地に、常法により加圧蒸気殺菌した
培地を、容積２００ｍｌの耐熱ガラス製フラスコ容器に
５０ｍｌ分注した。Next, 1% by weight of sucrose and 0.7% by weight of agar were added, the pH was adjusted to 5.8, and the MS modified medium in which the inorganic salt concentration was adjusted to 1/2 was subjected to pressurized steam sterilization by a conventional method. The medium was dispensed in a volume of 50 ml into a heat-resistant glass flask container having a volume of 200 ml.

【００６１】前記***したカルスから分化した芽を、フ
ラスコ内の固形培地に置床し、無菌フィルターのミリシ
ール（ミリポア社製テフロンフィルター）で封をした通
気性条件のもの、及びポリプロピレン製の栓で密栓した
密閉条件のものの２群に分けて、室温２５±１℃で４，
０００Ｌｕｘ天然昼光色蛍光灯による１６時間日長の照
射条件下で静置培養することにより、植物体の成長及び
発根等の状態を観察した。その結果を表４に示す。The sprouts differentiated from the divided callus are placed on a solid medium in a flask, sealed under a sterile filter Milli-seal (Teflon filter manufactured by Millipore) under air-permeable conditions, and sealed with a polypropylene stopper. At 25 ± 1 ° C. at room temperature.
By static culture under irradiation conditions of 000 Lux natural daylight fluorescent light for 16 hours in a day length, the state of plant growth and rooting was observed. Table 4 shows the results.

【００６２】[0062]

【表４】 [Table 4]

【００６３】表４から明らかなように、無菌フィルター
で封をした通気性のある容器を利用した群は、培養開始
後２０〜４０日間で良好な葉、葉柄の形成、発根が認め
られ、かつ、葉、葉柄の形態が良好な植物体が得られ
た。なお、ポリプロピレン製の栓で密栓した容器を利用
した群は、葉柄が徒長して、正常な植物体に成長させる
ことはできなかった。As is clear from Table 4, in the group using the air-permeable container sealed with a sterile filter, good leaf and petiole formation and rooting were observed 20 to 40 days after the start of culture. In addition, a plant having good leaf and petiole morphology was obtained. In the group using the container sealed with a stopper made of polypropylene, the petiole was prolonged and could not be grown into a normal plant.

【００６４】[0064]

【実施例】次に、実施例に基づいて本発明を具体的に説
明する。 実施例１ オランダヒメフウロソウ（白）（Erodium chamaedryoid
es）の培養 前記フウロソウ植物の植物体の葉柄部分を切り取り、７
％サラシ粉溶液の濾液で１５分間滅菌処理した後、無菌
水で数回洗浄した。次いで、葉柄部分を小さく切断し、
その葉柄切片を、ショ糖２重量％、ビオチン０．０５重
量％、葉酸０．５重量％を含有し、ｐＨ５．８に調整さ
れたＭＳ改変培地を基本培地（Ａ）とし、これに、ナフ
タレン酢酸１．０ｍｇ／ｌ、ベンジルアデニン１．０ｍ
ｇ／ｌを添加し、さらに、寒天０．７重量％を含有する
カルス誘導固体培地に置床し、２５℃で４，０００Ｌｕ
ｘの天然昼光色蛍光灯による１６時間日長の光照射条件
下で１ヶ月培養した。Next, the present invention will be specifically described based on examples. Example 1 Dutch Elephant spinach (white) (Erodium chamaedryoid
es) Cultivation The petiole of the plant of the Anthracnose plant was cut out, and 7
The solution was sterilized for 15 minutes with the filtrate of the solution containing the mashed powder, and washed several times with sterile water. Next, cut the petiole part small,
The petiole slice was used as a basic medium (A) containing an MS-modified medium containing 2% by weight of sucrose, 0.05% by weight of biotin, and 0.5% by weight of folic acid and adjusted to pH 5.8. Acetic acid 1.0 mg / l, benzyl adenine 1.0 m
g / l, further placed on a callus-derived solid medium containing 0.7% by weight of agar, and 4,000 Lu at 25 ° C.
x was cultured for one month under the condition of light irradiation for 16 hours in a natural daylight fluorescent lamp.

【００６５】次に、前記により誘導されたカルス５．５
ｇを、前記基本培地（Ａ）に、ナフタレン酢酸１．０ｍ
ｇ／ｌ、ベンジルアデニン１．０ｍｇ／ｌを添加した液
体培地５０ｍｌ中に加え、２５℃で４，０００Ｌｕｘの
天然昼光色蛍光灯による１６時間日長の光照射条件下
に、震盪回転数１３０ｒｐｍの条件で培養を行った。培
養後１週間ごとに、当該培養液中に形成された***した
カルスをピペットで採取し、継代培養を行った。Next, the callus 5.5 induced as described above was obtained.
g of naphthalene acetic acid 1.0 m in the basic medium (A).
g / l and 1.0 mg / l of benzyladenine in a liquid medium (50 ml), and a shaking rotation speed of 130 rpm at 25 ° C. under a light irradiation condition of 4,000 lux natural daylight fluorescent light for 16 hours. Was performed. Every week after the culture, the divided callus formed in the culture solution was collected with a pipette and subcultured.

【００６６】次に、前記により採取した***したカルス
を、前記基本培地（Ａ）にナフタレン酢酸１．０ｍｇ／
ｌ、ベンジルアデニン１．０ｍｇ／ｌを添加し、寒天
０．７重量％を添加し、ｐＨ５．８に調整して形成した
分化用固体培地に置床し、２５℃で４，０００Ｌｕｘの
天然昼光色蛍光灯の１６時間日長の光照射条件下で培養
して、***したカルスから芽と根を分化させた。Next, the split callus collected as described above was added to the basic medium (A) in an amount of 1.0 mg / ml naphthaleneacetic acid.
l, benzyladenine (1.0 mg / l), 0.7% by weight of agar, pH 5.8, placed on a solid medium for differentiation formed, and 4,000 Lux natural daylight fluorescence at 25 ° C. The shoots and roots were differentiated from the divided calli by culturing under light irradiation for 16 hours in the light.

【００６７】次いで、前記のように***したカルスから
分化させた芽を根と一緒に、容器に無菌的に分注した幼
植物体誘導及び成長固体培地に置床し、２５℃で４，０
００Ｌｕｘの天然昼光色蛍光灯の１６時間日長の光照射
条件下に培養して、幼植物体誘導させ、成長させた。Next, the shoots differentiated from the calli that had been divided as described above are placed together with the roots on a seedling-derived and growing solid medium that has been aseptically dispensed into a container.
Seedlings were grown by culturing under a light irradiation condition of a natural daylight fluorescent lamp of 00Lux for 16 hours.

【００６８】当該幼植物体誘導及び成長固体培地として
は、ショ糖１重量％、寒天０．７重量％添加し、ｐＨ
５．８に調整し、無機塩濃度を１／２に調整したＭＳ改
変培地を基本培地とし、これを常法により殺菌し、容積
２００ｍｌのガラス製フラスコ容器に分注して形成した
ものを使用した。当該フラスコ容器は、無菌フィルター
のミリシール（ミリポア社製テフロンフィルター）で封
をし、通気性条件下に前記培養を行った。培養開始後２
０〜３０日間で、根が伸長し、葉、葉柄が成長し、、発
根状態が良好で、葉、葉柄の形態も良好な植物体が得ら
れた。The seedling-inducing and growing solid medium was supplemented with 1% by weight of sucrose and 0.7% by weight of agar.
The base medium is an MS modified medium adjusted to 5.8 and the inorganic salt concentration adjusted to １ ／, which is sterilized by an ordinary method, and is formed by dispensing into a 200 ml glass flask container. did. The flask container was sealed with a sterile filter Milli-seal (Teflon filter manufactured by Millipore), and the culture was performed under aeration conditions. 2 after start of culture
In 0 to 30 days, the root elongated, the leaves and petiole grew, the rooting condition was good, and a plant with good leaf and petiole morphology was obtained.

【００６９】[0069]

【発明の効果】以上詳述したように、本発明は、フウロ
ソウ植物の植物体の組織切片を特定の培養プロセスで、
特定の培地組成、及び培養条件下に組織培養することに
よって形成される***したカルスを利用して、フウロソ
属植物を、安定、かつ高収率で増殖させるものであり、
これにより、本発明は、従来の交配種にあっては、第２
代目以降種子ができにくく株分けのみで増殖され、その
大量増殖が難しいとされていたフウロソウ植物を、簡便
に、安定、かつ高収率で増殖させることができる効果を
有する。Industrial Applicability As described above in detail, the present invention provides a method for culturing a tissue section of a plant of a Fusarium plant by a specific culture process.
Using a specific medium composition, split callus formed by tissue culture under culture conditions, to grow a plant of the genus Furoso in a stable and high yield,
Thus, the present invention provides a second hybrid in the conventional hybrid.
It has the effect of easily, stably, and growing a high-yield plant of Furonium, which has been difficult to produce seeds since the generation and is propagated only by strain division and difficult to mass-produce.

【００７０】また、本発明は、従来の交配種においては
外観や色にバラツキが出て、均一な植物体を量産するこ
とが難しかったフウロソウ植物を、その優良株のみを選
択的に安定、かつ高収率で増殖させることができる効果
を有する。Further, the present invention provides a method for producing a hybrid plant which has been difficult to mass-produce a uniform plant body because of its variation in appearance and color in the conventional hybrids. It has the effect of being able to grow at high yield.

【００７１】また、本発明は、フウロソウ植物の交配種
の姫フウロように第２代目以降種子ができにくく、その
増殖が困難とされていたものでも、１つの株から均一な
植物体を安定、かつ高収率で大量に増殖することを可能
にすると共に、通気性のある容器中でフウロソウ植物体
を誘導し、成長させることを可能にしたものであり、容
器中で開花させ、そのまま観賞用とすることができる可
能性を有する。The present invention also provides a method for stabilizing a uniform plant from one strain, even if it is difficult to produce seeds from the second generation and it is difficult to grow the seeds, as in the case of Hime-Furo, a hybrid of Fusarium plants. In addition to being able to grow in large quantities at high yields, it is also possible to induce and grow Fusarium plants in a ventilated container, and to flower in the container and use it for ornamental purposes There is a possibility that can be.

【００７２】さらに、本発明のフウロソウ植物の大量増
殖方法は、材料の採取から植物体の成長に至るまで組織
培養により無菌的に培養するものであることから、親の
植物体と遺伝的に同一の植物体を安定してウイルスフリ
ーの状態で育成させることが可能であり、従来、特に増
殖が困難であった交配優良種を、簡便、かつ大量に増殖
し得ることから、その産業上の有用性はきわめて高いも
のである。Further, the method of the present invention for mass-producing a spinach plant is aseptically cultivated by tissue culture from the collection of the material to the growth of the plant, so that it is genetically identical to the parent plant. Can be stably grown in a virus-free state, and excellent breeding species, which had been particularly difficult to grow in the past, can be easily and mass-proliferated, so that they are industrially useful. Sex is extremely high.

【００７３】さらに、また、本発明は、植物体の生育に
必要な水分、栄養素等は、固体培地中に添加されている
ので、格別に肥料を与えなくても植物体を生育させるこ
とが可能であることから、本発明の培養技術によれば、
格別の管理を必要とすることなく、形態の良好な植物体
が、簡便、かつ大量に得られる効果を有する。Further, according to the present invention, since water, nutrients, and the like necessary for the growth of the plant are added to the solid medium, the plant can be grown without special fertilizer. Therefore, according to the culture technique of the present invention,
The plant having a good form can be obtained easily and in large quantities without requiring special management.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｓｏｃ．Ｈｏｒｔ．Ｓ ｃｉ．，ｖｏｌ．106［１］（1981）, ｐ．114−116 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) A01H 4/00 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of front page (56) References Amer. Soc. Hort. S ci. , Vol. 106 [1] (1981), p. 114-116 (58) Field surveyed (Int. Cl. ⁷ , DB name) A01H 4/00 BIOSIS (DIALOG) JICST file (JOIS)

Claims (8)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 ゼラニウム属又はエロディウム属植物を
容器内で育成して花芽を分化させ、開花させ、そのまま
鑑賞することができる当該植物の容器内大量増殖方法で
あって、(1) 前記ゼラニウム属又はエロディウム属のフ
ウロソウ植物の植物体の組織の切片を、炭素源を含有
し、ｐＨ調整された合成培地を基本培地（Ａ）とし、こ
れにオーキシン類とサイトカイニン類とからなる植物ホ
ルモンを加えたカルス誘導固体培地に植えて培養し、
(2) 得られたカルスを、前記基本培地（Ａ）にオーキシ
ン類とサイトカイニン類とからなる植物ホルモンを加え
た液体培地中で、震盪回転数１００ｒｐｍ以上の条件で
培養し、***したカルスを増殖させ、(3) 増殖したカル
スを、前記基本培地（Ａ）にオーキシン類とサイトカイ
ニン類とからなる植物ホルモンを加えた分化用固体培地
に移して培養し、(4)カルスから分化した芽を根と一緒
に、炭素源を含有し、ｐＨ調整され、無機塩濃度を低減
させた合成培地を基本培地（Ｂ）とした幼植物体の誘導
及び成長固体培地に移植し、通気性のある条件で容器中
で培養し、増殖させることを特徴とする前記フウロソウ
植物の大量増殖方法。We claim: 1. foster zero Raniumu genus or Erodiumu genus plant <br/> vessel to differentiate flower buds, is flowering, a container mass propagation method of the plant as you can appreciate, ( 1) A section of a tissue of a plant of the Geranium or Elodium spp. Plant was used as a basic medium (A) containing a carbon source and a pH-adjusted synthetic medium. Planted and cultured in a callus-derived solid medium to which a plant hormone consisting of cytokinins has been added,
(2) The obtained callus is cultured in a liquid medium obtained by adding a plant hormone consisting of auxins and cytokinins to the basic medium (A) at a shaking rotation speed of 100 rpm or more, and the divided callus is propagated. (3) The grown calli are transferred to a solid medium for differentiation obtained by adding a plant hormone consisting of auxins and cytokinins to the basic medium (A), and cultured. (4) The shoots differentiated from the callus are rooted. And a synthetic medium containing a carbon source, pH-adjusted, and having a reduced inorganic salt concentration, transplanted to a solid medium for the induction and growth of seedlings as a basic medium (B) under aeration conditions. A method for mass-producing the Anthracnose plant, comprising culturing and growing in a container. 【請求項２】 ナフタレン酢酸０．１〜２．０ｍｇ／
ｌ、ベンジルアデニン０．１〜６．０ｍｇ／ｌを加えた
カルス誘導固体培地を用いることを特徴とする請求項１
記載のフウロソウ植物の大量増殖方法。2. Naphthalene acetic acid 0.1 to 2.0 mg /
1. A callus-inducing solid culture medium containing 0.1 to 6.0 mg / l of benzyladenine is used.
A method for mass-producing the Anthracnose plant according to the above. 【請求項３】 ナフタレン酢酸０．１〜５．０ｍｇ／
ｌ、ベンジルアデニン０．５〜６．０ｍｇ／ｌを加えた
液体培地を用いることを特徴とする請求項１記載のフウ
ロソウ植物の大量増殖方法。3. Naphthalene acetic acid 0.1-5.0 mg /
2. The method according to claim 1, wherein a liquid medium containing 0.5 to 6.0 mg / l of benzyladenine is used. 【請求項４】 ナフタレン酢酸０．１〜５．０ｍｇ／
ｌ、ベンジルアデニン０〜１．０ｍｇ／ｌを加えた分化
用固体培地を用いることを特徴とする請求項１記載のフ
ウロソウ植物の大量増殖方法。4. Naphthalene acetic acid 0.1-5.0 mg /
2. The method according to claim 1, wherein a solid medium for differentiation containing 0 to 1.0 mg / l of benzyladenine is used. 【請求項５】 炭素源としてショ糖を含有し、ｐＨ５．
０〜６．０に調整され、無機塩濃度が１／２〜１／５に
調整された合成培地を基本培地（Ｂ）とした幼植物体の
誘導及び成長固体培地を用いることを特徴とする請求項
１記載のフウロソウ植物の大量増殖方法。5. It contains sucrose as a carbon source and has a pH of 5.
It is characterized by using a solid medium for the induction and growth of seedlings, wherein the synthetic medium adjusted to 0 to 6.0 and the inorganic salt concentration adjusted to 1/2 to 1/5 is used as the basic medium (B). A method for mass-producing a spinach plant according to claim 1. 【請求項６】 各工程の培養を、２２〜２７℃の温度条
件、１２〜１８時間日長の光照射条件下で行うことを特
徴とする請求項１記載のフウロソウ植物の大量増殖方
法。6. The method according to claim 1, wherein the cultivation in each step is carried out under a temperature condition of 22 to 27 ° C. and a light irradiation condition of 12 to 18 hours in photoperiod. 【請求項７】 植物体組織の切片が、葉、又は葉柄の組
織切片であることを特徴とする請求項１記載のフウロソ
ウ植物の大量増殖方法。7. The method according to claim 1, wherein the plant tissue section is a leaf or petiole tissue section. 【請求項８】 合成培地が、ＭＳ改変培地であることを
特徴とする請求項１記載のフウロソウ植物の大量増殖方
法。8. The method according to claim 1, wherein the synthetic medium is a modified MS medium.