JP3045172B2 - Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット - Google Patents
Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキットInfo
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- JP3045172B2 JP3045172B2 JP2128150A JP12815090A JP3045172B2 JP 3045172 B2 JP3045172 B2 JP 3045172B2 JP 2128150 A JP2128150 A JP 2128150A JP 12815090 A JP12815090 A JP 12815090A JP 3045172 B2 JP3045172 B2 JP 3045172B2
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はヒトIL−６の化学的測定方法及びそのための
キットに関するものである。
キットに関するものである。
インターロイキン−６（BSF2/以下IL−６と略す）
は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖分化
に関与しているタンパク質である。さらにIL−６の異常
産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能性が報
告されている（岸本、Blood,74,pl,1989年参照）。
は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖分化
に関与しているタンパク質である。さらにIL−６の異常
産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能性が報
告されている（岸本、Blood,74,pl,1989年参照）。
生体内で多様な生理活性を強く発揮するIL−６の生理
的濃度を知ることは、各種疾患の新しい診断マーカーと
して期待されている。IL−６の生物活性測定法として
は、100fg/mlのIL−６が測定可能な高感度のものが報告
されている（T.Matsudaら、Eur.J.Immnunol.,18,p951,1
988年参照）。しかしながらこの方法は、多数の検体を
迅速、かつ簡単に測定することができないという欠点を
有する。一方、これまで報告されたIL−６の免疫化学的
測定では、組換え体（リコンビナント）IL−６を各種動
物に免疫して得た抗体を用いている。従って、血液中の
IL−６がα２−マクログロブリンと結合して存在してい
るという報告（T.Matsudaら、J.Immnunol.,142,p148）
にあるようにリコンビナントIL−６と異なる形状で存在
すると予想される生体試料中のIL−６の濃度を高い精度
で測定できない危険性がある。
的濃度を知ることは、各種疾患の新しい診断マーカーと
して期待されている。IL−６の生物活性測定法として
は、100fg/mlのIL−６が測定可能な高感度のものが報告
されている（T.Matsudaら、Eur.J.Immnunol.,18,p951,1
988年参照）。しかしながらこの方法は、多数の検体を
迅速、かつ簡単に測定することができないという欠点を
有する。一方、これまで報告されたIL−６の免疫化学的
測定では、組換え体（リコンビナント）IL−６を各種動
物に免疫して得た抗体を用いている。従って、血液中の
IL−６がα２−マクログロブリンと結合して存在してい
るという報告（T.Matsudaら、J.Immnunol.,142,p148）
にあるようにリコンビナントIL−６と異なる形状で存在
すると予想される生体試料中のIL−６の濃度を高い精度
で測定できない危険性がある。
従って本発明は、生物活性を有する限り、すなわちIL
−６レセプターと結合する性質を有する限り、いかなる
形状のIL−６にも適用できるIL−６の化学的測定法、及
びその方法に使用するためのキットを提供しようとする
ものである。
−６レセプターと結合する性質を有する限り、いかなる
形状のIL−６にも適用できるIL−６の化学的測定法、及
びその方法に使用するためのキットを提供しようとする
ものである。
本発明者らは前記の課題を解決すべく種々検討した結
果、IL−６レセプターを用いることにより、リコンビナ
ントIL−６を動物に免疫して得た抗体を用いずに、数百
pg/mlの濃度のヒトIL−６を測定することができるとい
う新しい知見を得、これに基いて本発明を完成した。
果、IL−６レセプターを用いることにより、リコンビナ
ントIL−６を動物に免疫して得た抗体を用いずに、数百
pg/mlの濃度のヒトIL−６を測定することができるとい
う新しい知見を得、これに基いて本発明を完成した。
従って本発明は、ヒトIL−６レセプターを固定した固
体支持体を標識されたヒトIL−６及び分析検体と接触せ
しめ、そして該ヒトIL−６レセプターを介して固体支持
体に結合した標識されたヒトIL−６の量又は固体支持体
に結合しなかった標識されたIL−６の量を測定し、この
測定値に基いて検体中のIL−６の存否又は量を決定する
ことを特徴とする検体中のIL−６の検出又は測定方法を
提供する。
体支持体を標識されたヒトIL−６及び分析検体と接触せ
しめ、そして該ヒトIL−６レセプターを介して固体支持
体に結合した標識されたヒトIL−６の量又は固体支持体
に結合しなかった標識されたIL−６の量を測定し、この
測定値に基いて検体中のIL−６の存否又は量を決定する
ことを特徴とする検体中のIL−６の検出又は測定方法を
提供する。
本発明はさらに、ヒトIL−６レセプターを固定した固
体支持体を分析検体と接触せしめることにより該分析検
体中のヒトIL−６を該IL−６レセプターを介して固体支
持体に結合せしめ、そして固体支持体に結合したIL−６
を測定することを特徴とするヒトIL−６の検出又は測定
方法を提供する。
体支持体を分析検体と接触せしめることにより該分析検
体中のヒトIL−６を該IL−６レセプターを介して固体支
持体に結合せしめ、そして固体支持体に結合したIL−６
を測定することを特徴とするヒトIL−６の検出又は測定
方法を提供する。
本発明はまた、前記第一の方法を実施するためのキッ
トであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体及び標識されたヒトIL−６を含むことを特徴とするキ
ットを提供する。
トであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体及び標識されたヒトIL−６を含むことを特徴とするキ
ットを提供する。
本発明はさらに、前記第二の方法を実施するためのキ
ットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒトIL−６抗体を含むことを特徴とするキッ
トを提供する。
ットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒトIL−６抗体を含むことを特徴とするキッ
トを提供する。
1. IL−６の化学的測定法 IL−６の化学的測定法は、ヒト血清、尿、その他例え
ば関節液等中に含まれるIL−６の生理的濃度、ヒト細胞
を培養したときの培養上清中のIL−６濃度を正確かつ迅
速に測定することを目的としている。
ば関節液等中に含まれるIL−６の生理的濃度、ヒト細胞
を培養したときの培養上清中のIL−６濃度を正確かつ迅
速に測定することを目的としている。
本発明の測定方法には、固体支持体に固定されたIL−
６レセプターと、IL−６との特異的結合反応を用いる種
々の方法が含まれる。その第一の態様においては、固体
支持体に固定されたIL−６レセプターに、標識されたIL
−６と分析検体中のIL−６とを競争的に結合せしめ、固
体支持体にIL−６レセプターを介して結合した標識化IL
−６の量又は結合しないで反応溶液中に残った標識化IL
−６の量を測定し、この測定値に基いて検体中のIL−６
の量（又は濃度）を決定する。第二の態様によれば、固
体支持体に固定されたIL−６レセプターに分析検体中の
IL−６を結合せしめ、この結合したIL−６の量を常法に
より測定する。
６レセプターと、IL−６との特異的結合反応を用いる種
々の方法が含まれる。その第一の態様においては、固体
支持体に固定されたIL−６レセプターに、標識されたIL
−６と分析検体中のIL−６とを競争的に結合せしめ、固
体支持体にIL−６レセプターを介して結合した標識化IL
−６の量又は結合しないで反応溶液中に残った標識化IL
−６の量を測定し、この測定値に基いて検体中のIL−６
の量（又は濃度）を決定する。第二の態様によれば、固
体支持体に固定されたIL−６レセプターに分析検体中の
IL−６を結合せしめ、この結合したIL−６の量を常法に
より測定する。
いずれの態様においても、まずIL−６レセプターを固
体支持体に固定する。この固体支持体としては、マイク
ロタイタープレート、各種のビーズ状の例えばポリスチ
レン、ポリプロピレン等のプラスチック製、金属セラミ
ックス等の無機物質製等の免疫測定法において常用され
ている支持体を用いることができる。IL−６レセプター
の固体支持体への固定に際しては、IL−６レセプターを
直接固定してもよいし、IL−６レセプターと結合する物
質、例えばIL−６レセプターに対する抗体をまず固定
し、それからIL−６レセプターを結合させてもよい。IL
−６レセプターやIL−６レセプターに対する抗体の固定
は常法に従って行うことができる。例えば、PBS溶液に
これらの蛋白質を例えば２μg/mlの濃度で溶解し、プレ
ートのウエルに100μずつ加え、一晩静置しておけば
よい。
体支持体に固定する。この固体支持体としては、マイク
ロタイタープレート、各種のビーズ状の例えばポリスチ
レン、ポリプロピレン等のプラスチック製、金属セラミ
ックス等の無機物質製等の免疫測定法において常用され
ている支持体を用いることができる。IL−６レセプター
の固体支持体への固定に際しては、IL−６レセプターを
直接固定してもよいし、IL−６レセプターと結合する物
質、例えばIL−６レセプターに対する抗体をまず固定
し、それからIL−６レセプターを結合させてもよい。IL
−６レセプターやIL−６レセプターに対する抗体の固定
は常法に従って行うことができる。例えば、PBS溶液に
これらの蛋白質を例えば２μg/mlの濃度で溶解し、プレ
ートのウエルに100μずつ加え、一晩静置しておけば
よい。
次に、前記第一の態様によればこの固定されたIL−６
レセプターに、分析検体と標識されたIL−６とを一定の
割合で混合したものを接触せしめる。IL−６の標識とし
ては、125I,35S等が例示できる。分析検体中のIL−６と
標識されたIL−６は競争的にIL−６レセプターに結合す
るので、IL−６レセプターに結合した標識化IL−６の量
又は結合しなかった標識化IL−６の量を測定することに
より、分析検体中のIL−６濃度を測定するのが本発明の
特徴である。上記標識IL−６の測定方法としては、125I
標識IL−６の場合は、一定時間のIL−６とIL−６レセプ
ターの結合反応後に支持体を通常の溶液で洗浄し、支持
体の放射能をγカウンターで測定することが例示でき
る。35S標識IL−６の場合も同様に測定することができ
る。
レセプターに、分析検体と標識されたIL−６とを一定の
割合で混合したものを接触せしめる。IL−６の標識とし
ては、125I,35S等が例示できる。分析検体中のIL−６と
標識されたIL−６は競争的にIL−６レセプターに結合す
るので、IL−６レセプターに結合した標識化IL−６の量
又は結合しなかった標識化IL−６の量を測定することに
より、分析検体中のIL−６濃度を測定するのが本発明の
特徴である。上記標識IL−６の測定方法としては、125I
標識IL−６の場合は、一定時間のIL−６とIL−６レセプ
ターの結合反応後に支持体を通常の溶液で洗浄し、支持
体の放射能をγカウンターで測定することが例示でき
る。35S標識IL−６の場合も同様に測定することができ
る。
第二の態様においては、IL−６レセプターを固定した
固体支持体を分析検体と共にインキュベートし、検体中
に存在するIL−６を固体支持体上のIL−６レセプターに
結合させる。次に固体支持体に結合したIL−６の量を常
法に従って測定する。この測定は種々の方法により行う
ことができる。例えばIL−６に対するウサギ由来抗体
を、固体支持体に結合したIL−６に結合せしめ、次に、
ウサギイムノグロブリンに対するヒツジ由来抗体であっ
て標識されているものを、固体支持体に結合したウサギ
由来抗体IL−６抗体と結合せしめる。ヒツジ由来抗体を
標識する物質としては、例えばアルカリホスファター
ゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ等の酵素、ビチオン等を用いることができ、これ
らの標識の検出のためには標識の種類に応じて既知の検
出方法を用いることができる。これらの標識物質をその
検出方法としては、例えば免疫測定法において知られて
いる任意の手段を用いることができる。
固体支持体を分析検体と共にインキュベートし、検体中
に存在するIL−６を固体支持体上のIL−６レセプターに
結合させる。次に固体支持体に結合したIL−６の量を常
法に従って測定する。この測定は種々の方法により行う
ことができる。例えばIL−６に対するウサギ由来抗体
を、固体支持体に結合したIL−６に結合せしめ、次に、
ウサギイムノグロブリンに対するヒツジ由来抗体であっ
て標識されているものを、固体支持体に結合したウサギ
由来抗体IL−６抗体と結合せしめる。ヒツジ由来抗体を
標識する物質としては、例えばアルカリホスファター
ゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ等の酵素、ビチオン等を用いることができ、これ
らの標識の検出のためには標識の種類に応じて既知の検
出方法を用いることができる。これらの標識物質をその
検出方法としては、例えば免疫測定法において知られて
いる任意の手段を用いることができる。
2. IL−６レセプター IL−６レセプターは、生体内でIL−６と特異的に結合
し、IL−６のシグナル伝達に関与する細胞膜上のタンパ
ク質である。本発明に適当なIL−６レセプターは、ヒト
由来の細胞等から生化学的方法で精製してもよいし、遺
伝子工学的に製作することもできる。該タンパク質は、
IL−６との結合に寄与するアミノ酸配列部分以外のアミ
ノ酸配列部分が置換、欠損、挿入により変化を受けたも
のであってもよい。このようなIL−６レセプターとし
て、細胞膜から離脱した可溶性IL−６レセプター、すな
わちIL−６レセプター細胞外部分が例示できる。なお、
IL−６レセプターについては特願平１−9774号明細書に
そのアミノ酸一次構造、DNA等が詳細に開示されてお
り、さらにその具体的な製造方法についても特願平１−
271862号明細書に詳細に開示されている。
し、IL−６のシグナル伝達に関与する細胞膜上のタンパ
ク質である。本発明に適当なIL−６レセプターは、ヒト
由来の細胞等から生化学的方法で精製してもよいし、遺
伝子工学的に製作することもできる。該タンパク質は、
IL−６との結合に寄与するアミノ酸配列部分以外のアミ
ノ酸配列部分が置換、欠損、挿入により変化を受けたも
のであってもよい。このようなIL−６レセプターとし
て、細胞膜から離脱した可溶性IL−６レセプター、すな
わちIL−６レセプター細胞外部分が例示できる。なお、
IL−６レセプターについては特願平１−9774号明細書に
そのアミノ酸一次構造、DNA等が詳細に開示されてお
り、さらにその具体的な製造方法についても特願平１−
271862号明細書に詳細に開示されている。
3. 測定キット 本発明の第一の態様の方法を実施するためのキットは
適当な方法でIL−６が固定された固体支持体及び標識さ
れたIL−６を含む。このキットはさらに検体稀釈用緩衝
液等を含むことができる。
適当な方法でIL−６が固定された固体支持体及び標識さ
れたIL−６を含む。このキットはさらに検体稀釈用緩衝
液等を含むことができる。
また、第二の態様の方法を実施するためのキットは適
当な方法でIL−６が固定された固体支持体及びウサギ、
ラット等の動物由来の抗IL−６抗体を含む。このキット
はさらに、該動物抗体に対する第二の抗体であって標識
されたものを含むことができる。しかしながらこの第二
抗体はユニバーサルな標識抗体として別途入手すること
が容易であるから、キットに含める必要はない。このキ
ットにさらに、検体の稀釈用等の緩衝液、標識を検出す
るための試薬等を含むことができる。
当な方法でIL−６が固定された固体支持体及びウサギ、
ラット等の動物由来の抗IL−６抗体を含む。このキット
はさらに、該動物抗体に対する第二の抗体であって標識
されたものを含むことができる。しかしながらこの第二
抗体はユニバーサルな標識抗体として別途入手すること
が容易であるから、キットに含める必要はない。このキ
ットにさらに、検体の稀釈用等の緩衝液、標識を検出す
るための試薬等を含むことができる。
以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
実施例1. ビーズを用いたヒトIL−６の化学的測定法 抗マウスイムノグロブリン抗体の結合した、TBS緩衝
液に懸濁されたSPAビーズ（アマーシャム）500mgに、マ
ウス由来抗ヒトIL−６レセプター・モノクローナル抗体
であるMT18（Y.Hirataら、J.Immunol.,143,p2900,1989
年参照）を20μｇ加えて、２℃で一晩回転させた。翌
日、PBSで洗浄して未結合のMT18を除去した後、ビーズ
を10mlのPBSに懸濁した。次に、20μｇの可溶性IL−６
レセプター（平成１年特願第271865号参照）を加え、２
℃で４時間放置した。続いて、アッセイ用の緩衝液（PB
S/0.1％BSA）でビーズを洗い、未結合の可溶性IL−６レ
セプターを除去した後、10mlの同緩衝液に懸濁した。50
μの125I−IL−６（30000cpm）、50μの濃度既知の
IL−６溶液、100μの上記の処理をしたビーズ、100μ
のアッセイ用緩衝液を混合し、そして125I−IL−６結
合によりSPAビーズより生じた光をβ−シンチレーショ
ンカウンターで測定した。
液に懸濁されたSPAビーズ（アマーシャム）500mgに、マ
ウス由来抗ヒトIL−６レセプター・モノクローナル抗体
であるMT18（Y.Hirataら、J.Immunol.,143,p2900,1989
年参照）を20μｇ加えて、２℃で一晩回転させた。翌
日、PBSで洗浄して未結合のMT18を除去した後、ビーズ
を10mlのPBSに懸濁した。次に、20μｇの可溶性IL−６
レセプター（平成１年特願第271865号参照）を加え、２
℃で４時間放置した。続いて、アッセイ用の緩衝液（PB
S/0.1％BSA）でビーズを洗い、未結合の可溶性IL−６レ
セプターを除去した後、10mlの同緩衝液に懸濁した。50
μの125I−IL−６（30000cpm）、50μの濃度既知の
IL−６溶液、100μの上記の処理をしたビーズ、100μ
のアッセイ用緩衝液を混合し、そして125I−IL−６結
合によりSPAビーズより生じた光をβ−シンチレーショ
ンカウンターで測定した。
第１図は、検体中のIL−６濃度の増加に伴い、結合し
た125I−IL−６が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
た125I−IL−６が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
実施例2. プレートを用いたヒトIL−６の化学的測定法
（抗IL−６抗体を使わない方法） １μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置した。洗浄後、100μの１％BSAを加え、２
時間室温で放置した。BPS/0.05％Tween20により洗浄
後、IL−６レセプターを分泌しているCHO細胞の培養上
清を加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween20
により洗浄後、50μの125I−IL−６（30000cpm）、及
び50μの濃度既知のIL−６溶液を混合したものを各ウ
エルに加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween2
0により洗浄後、各ウエルの放射能をγ−カウンターで
測定した。
（抗IL−６抗体を使わない方法） １μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置した。洗浄後、100μの１％BSAを加え、２
時間室温で放置した。BPS/0.05％Tween20により洗浄
後、IL−６レセプターを分泌しているCHO細胞の培養上
清を加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween20
により洗浄後、50μの125I−IL−６（30000cpm）、及
び50μの濃度既知のIL−６溶液を混合したものを各ウ
エルに加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween2
0により洗浄後、各ウエルの放射能をγ−カウンターで
測定した。
第２図は、検体中のIL−６濃度の増加に伴い、プレー
トの残存放射能が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
トの残存放射能が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
実施例3. プレートを用いたヒトIL−６の化学的測定法
（抗IL−６抗体を使う方法） ２μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、100μ
の１％BSAを加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、IL−６レセプターを分泌して
いるCHO細胞の培養上清を加え、２時間室温で放置し
た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、濃度既知のIL−
６溶液を加え、２時間室温で放置した。洗浄後、５μg/
mlのウサギ由来抗IL−６ポリクローナル抗体を１ウエル
あたり100μ加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、1000倍稀釈したアルカリフォ
スフォターゼ結合ヒツジ由来抗ウサギイムノグロブリン
抗体（コスモバイオ）を１ウエルあたり100μ加え、
２時間室温で放置した。洗浄後、1mg/mlのアルカリフォ
スフォターゼ基質（コスモバイオ）を１ウエルあたり10
0μ加え、37℃で約30分間放置した後、405nmの発色を
測定した。
（抗IL−６抗体を使う方法） ２μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、100μ
の１％BSAを加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、IL−６レセプターを分泌して
いるCHO細胞の培養上清を加え、２時間室温で放置し
た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、濃度既知のIL−
６溶液を加え、２時間室温で放置した。洗浄後、５μg/
mlのウサギ由来抗IL−６ポリクローナル抗体を１ウエル
あたり100μ加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、1000倍稀釈したアルカリフォ
スフォターゼ結合ヒツジ由来抗ウサギイムノグロブリン
抗体（コスモバイオ）を１ウエルあたり100μ加え、
２時間室温で放置した。洗浄後、1mg/mlのアルカリフォ
スフォターゼ基質（コスモバイオ）を１ウエルあたり10
0μ加え、37℃で約30分間放置した後、405nmの発色を
測定した。
第３図は、検体中のIL−６濃度の増加に伴い、強く発
色すること、すなわち、本方法により検体中のIL−６濃
度が測定できることを示す。
色すること、すなわち、本方法により検体中のIL−６濃
度が測定できることを示す。
本発明で提供されるIL−６の化学的測定法は、生物活
性を有する限り、すなわちIL−６レセプターと結合する
性質を有する限り、いかなる形状のIL−６をも高感度で
迅速に、しかも多検体を同時に測定することを可能にし
た。この方法は、各疾患でのIL−６の生理的濃度を調べ
たり、IL−６の疾患における役割を解明したり、他の薬
剤の効果を調べるのに有用である。さらにこの方法は、
IL−６とIL−６レセプターの結合を阻害する物質を、高
感度で迅速に探索することに用いることも可能であり、
IL−６の阻害剤開発にも有用である。
性を有する限り、すなわちIL−６レセプターと結合する
性質を有する限り、いかなる形状のIL−６をも高感度で
迅速に、しかも多検体を同時に測定することを可能にし
た。この方法は、各疾患でのIL−６の生理的濃度を調べ
たり、IL−６の疾患における役割を解明したり、他の薬
剤の効果を調べるのに有用である。さらにこの方法は、
IL−６とIL−６レセプターの結合を阻害する物質を、高
感度で迅速に探索することに用いることも可能であり、
IL−６の阻害剤開発にも有用である。
第１図は、IL−６を含まない検体を実施例１に示す方法
で測定したときにSPAビーズに結合した125I−IL−６量
を100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種
濃度で含む検体を同方法で測定したときのSPAビーズに
結合した125I−IL−６量を示す。 第２図は、IL−６を含まない検体を実施例２に示す方法
で測定したときにプレートに残存した125I−IL−６量を
100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃
度で含む検体を同方法で測定したときのプレートに残存
した125I−IL−６量を示す。 第３図は、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃度
で含む検体を実施例３に示す方法で測定したときの、プ
レートの発色を示す。
で測定したときにSPAビーズに結合した125I−IL−６量
を100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種
濃度で含む検体を同方法で測定したときのSPAビーズに
結合した125I−IL−６量を示す。 第２図は、IL−６を含まない検体を実施例２に示す方法
で測定したときにプレートに残存した125I−IL−６量を
100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃
度で含む検体を同方法で測定したときのプレートに残存
した125I−IL−６量を示す。 第３図は、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃度
で含む検体を実施例３に示す方法で測定したときの、プ
レートの発色を示す。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−3198（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−108959（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−40858（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−103465（ＪＰ，Ａ) Ｓａｅｎｃｅ Ｖｏｌ．241，Ｎｏ. 5867（1988）Ｐ．825−828 Ｊ ＣＬＩＮ ＩＮＶＥＳＴ，Ｖｏ ｌ．84，Ｎｏ．６（1989）Ｐ．2008− 2011 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/53 G01N 33/566
Claims (5)
- 【請求項１】ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体を標識されたヒトIL−６及び分析検体と接触せしめ、
そして該ヒトIL−６レセプターを介して固体支持体に結
合した標識されたヒトIL−６の量又は固体支持体に結合
しなかった標識されたIL−６の量を測定し、この測定値
に基いて検体中のIL−６の存否又は量を決定することを
特徴とする検体中のIL−６の検出又は測定方法。 - 【請求項２】ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体を分析検体と接触せしめることにより該分析検体中の
ヒトIL−６を該IL−６レセプターを介して固体支持体に
結合せしめ、そして固体支持体に結合したIL−６を測定
することを特徴とするヒトIL−６の検出又は測定法。 - 【請求項３】固体支持体に結合したIL−６の測定を抗IL
−６抗体を用いて行うことを特徴とする請求項２に記載
の方法。 - 【請求項４】請求項１に記載の方法を実施するためのキ
ットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支
持体及び標識されたヒトIL−６を含むことを特徴とする
キット。 - 【請求項５】請求項２又は３に記載の方法を実施するた
めのキットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した
固体支持体及び抗ヒトIL−６抗体を含むことを特徴とす
るキット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2128150A JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2128150A JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0424556A JPH0424556A (ja) | 1992-01-28 |
| JP3045172B2 true JP3045172B2 (ja) | 2000-05-29 |
Family
ID=14977625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2128150A Expired - Lifetime JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3045172B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1996012503A1 (fr) * | 1994-10-21 | 1996-05-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Remede contre des maladies provoquees par la production d'il-6 |
-
1990
- 1990-05-19 JP JP2128150A patent/JP3045172B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｊ ＣＬＩＮ ＩＮＶＥＳＴ，Ｖｏｌ．８４，Ｎｏ．６（１９８９）Ｐ．２００８−２０１１ |
| Ｓａｅｎｃｅ Ｖｏｌ．２４１，Ｎｏ．５８６７（１９８８）Ｐ．８２５−８２８ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0424556A (ja) | 1992-01-28 |
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