JP3042015B2 - Fluorescent Pseudomonas test medium - Google Patents
Fluorescent Pseudomonas test mediumInfo
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Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、螢光性シュードモナス
を簡易迅速に検出判定することができる培地に関するも
のである。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a culture medium capable of detecting and judging fluorescent Pseudomonas simply and quickly.
【０００２】[0002]
【従来の技術】螢光性シュードモナスとは、シュードモ
ナスアルギノーサ（緑膿菌）、シュードモナスフルオレ
ッセンス（螢光菌）などをいい、これらはグラム陰性桿
菌である。この中特に、シュードモナスアルギノーサ
（緑膿菌）は感染症の主役となる場合が多く、最も重要
な螢光性シュードモナスである。2. Description of the Related Art Fluorescent Pseudomonas refers to Pseudomonas arginosa (Pseudomonas aeruginosa), Pseudomonas fluorescens (Fluorescent bacteria) and the like, which are gram-negative rods. Among them, Pseudomonas alginosa (Pseudomonas aeruginosa) is often the main cause of infectious diseases, and is the most important fluorescent Pseudomonas.
【０００３】現在知られている螢光性シュードモナス検
査用培地としては、ＮＡＣブイヨン培地、ＮＡＣ寒天培
地、キングＡ培地、キングＢ培地などを挙げることがで
きる。[0003] Examples of the currently known medium for fluorescent pseudomonas test include NAC broth medium, NAC agar medium, King A medium, King B medium and the like.
【０００４】これら従来の螢光性シュードモナス検査用
培地に共通していることは、ペプトンや牛心臓浸出液を
必須構成成分としていることである。What is common to these conventional fluorescent Pseudomonas test media is that peptone and bovine heart exudate are essential components.
【０００５】[0005]
【発明が解決しようとする課題】ペプトンや牛心臓浸出
液は、栄養源として螢光性シュードモナスの発育やそれ
が発育すると共に代謝される螢光色素（ピオベルジン、
ピオシアニンなど）の産生に不可欠であると考えられて
いる。Peptone and bovine heart leachate are used as a nutrient source for the development of fluorescent Pseudomonas and a fluorescent dye (Piobergine,
(Eg, pyocyanin).
【０００６】しかしながら、ペプトンや牛心臓浸出液を
含有する培地では、培地自身が黄褐色を呈しているた
め、螢光性シュードモナスが産生する黄緑色や青色の螢
光色素を鋭敏に検出判定することが困難である。However, in a medium containing peptone or bovine heart leachate, since the medium itself has a yellow-brown color, it is necessary to detect and determine the yellow-green and blue fluorescent dyes produced by the fluorescent Pseudomonas sharply. Have difficulty.
【０００７】従って、本発明の目的は、被検体中に存在
する螢光性シュードモナスを迅速且つ鋭敏に検出判定す
ることができる簡易な培地を提供することにある。Accordingly, an object of the present invention is to provide a simple culture medium capable of rapidly and sharply detecting and judging fluorescent Pseudomonas present in a subject.
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】本発明者らは、偶然にも
ペプトンや牛心臓浸出液を含有しない培地において、螢
光性シュードモナスが螢光色素を短時間で産生すること
を見出し、種々検討を重ねた結果ようやく本発明を完成
するに到った。Means for Solving the Problems The present inventors accidentally found that fluorescent Pseudomonas produces a fluorescent dye in a medium containing no peptone or bovine heart exudate in a short time, and made various studies. Finally, the present invention has been completed.
【０００９】以下、本発明について詳しく説明する。Hereinafter, the present invention will be described in detail.
【００１０】本発明は、螢光性シュードモナス検査用培
地において必須構成成分とされているペプトンや牛浸出
液を用いずに、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、
L-オルニチン塩、又はカザミノ酸、リン酸塩、マグ
ネシウム塩、硫酸塩、のからを必須構成成分と
し、かつ実質的に無色透明であることを特徴とする螢光
性シュードモナス検査用培地を要旨とするものである。[0010] The present invention provides glutamate, aspartate, and peptone, which are essential components in a fluorescent Pseudomonas test medium.
Abstract: A fluorescent Pseudomonas test medium characterized in that L-ornithine salt or casamino acid, phosphate, magnesium salt, or sulfate is an essential component, and is substantially colorless and transparent. Is what you do.
【００１１】のグルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、
L-オルニチン塩又はカザミノ酸は、各単独で用いること
もできるが、２種以上を混合して用いることもできる。Glutamate, aspartate,
The L-ornithine salt or the casamino acid can be used alone or in combination of two or more.
【００１２】ここにグルタミン酸塩の塩としては、カリ
ウム塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩などを挙げるこ
とができる。アスパラギン酸塩の塩としては、カリウム
塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩などを挙げることが
できる。L-オルニチン塩の塩としては、塩酸塩、硝酸
塩、リン酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩等の無機酸塩、及
びコハク酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸
塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、グルタミン酸塩、アスパラ
ギン酸塩、オルニチン酸塩等の有機酸塩を挙げることが
できる。Here, as the salt of glutamate, potassium salt, sodium salt, ammonium salt and the like can be mentioned. Examples of aspartate salts include potassium salts, sodium salts, and ammonium salts. Examples of L-ornithine salts include inorganic salts such as hydrochloride, nitrate, phosphate, sulfate, hydrobromide, and succinate, malate, maleate, fumarate, and oxalate. Organic acid salts such as acid salts, tartrate salts, glutamates, aspartates, ornithates and the like can be mentioned.
【００１３】成分の濃度は、他の成分によって異なる
が、培地中0.05％から 5.0％が適当である。0.05％未満
では螢光性シュードモナスの発育、螢光色素の産生が充
分でなく、 5.0％より多い場合は、配合することもでき
るが実用的ではない。The concentration of the component varies depending on the other components, but is suitably from 0.05% to 5.0% in the medium. If it is less than 0.05%, the growth of fluorescent Pseudomonas and the production of fluorescent dye are not sufficient. If it is more than 5.0%, it can be blended, but it is not practical.
【００１４】のリン酸塩、のマグネシウム塩、の
硫酸塩の各成分は培地中微量存在すればよく、いずれも
１％以下でよい。いずれもそれ以上配合することもでき
るが、例えばマグネシウム塩の場合、多くなるに従って
螢光色素の産生が悪くなる傾向にあり、好ましくない。Each component of the phosphate, the magnesium salt, and the sulfate may be present in a trace amount in the medium, and may be 1% or less. Any of them can be added in a larger amount. However, for example, in the case of a magnesium salt, the production of a fluorescent dye tends to deteriorate as the amount increases, which is not preferable.
【００１５】ここにリン酸塩の塩としては、カリウム
塩、ナトリウム塩、アンモニウム塩、などを挙げること
ができる。マグネシウム塩の塩としては、塩酸塩、硝酸
塩、リン酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩等の無機酸塩、及
びコハク酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、フマル酸
塩、シュウ酸塩、酒石酸塩、グルタミン酸塩、アスパラ
ギン酸塩、オルニチン酸塩等の有機酸塩を挙げることが
できる。硫酸塩の塩としては、カリウム塩、ナトリウム
塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩等を挙げることが
できる。The salts of the phosphates include potassium salts, sodium salts, ammonium salts and the like. Examples of the magnesium salt include inorganic salts such as hydrochloride, nitrate, phosphate, sulfate and hydrobromide, and succinate, malate, maleate, fumarate and oxalate. And organic acid salts such as tartrate, glutamate, aspartate and ornithate. Examples of the sulfate salt include a potassium salt, a sodium salt, a magnesium salt, and an ammonium salt.
【００１６】上記からの必須成分の他、目的に応じ
て、水溶性で、且つ配合しても培地自身が実質的に無色
透明を保つことができる物質を配合することもできる。In addition to the essential components described above, a substance which is water-soluble and can maintain the medium itself substantially colorless and transparent even when it is mixed may be added according to the purpose.
【００１７】例えば、ラクトース、マンニット、トレハ
ロース、ソルビット、シュークロース、グリセリン、キ
シロース、ラムノース、フルクトース、マルトース、ア
ドニット、イノシット、ラフィノースなどの炭素源、ナ
リジクス酸、クロラムフェニコールなどの抗菌剤、及び
セトリマイドなどの界面活性剤等を挙げることができ
る。For example, carbon sources such as lactose, mannitol, trehalose, sorbitol, sucrose, glycerin, xylose, rhamnose, fructose, maltose, adnit, inosit and raffinose; antibacterial agents such as nalidixic acid and chloramphenicol; A surfactant such as cetramide can be used.
【００１８】ラクトースなどの炭素源は、螢光性シュー
ドモナスの発育及び螢光色素の産生を促進する場合があ
る。その濃度は、特に限定されないが、 5.0％以下で充
分である。それ以上配合することもできるが、実用的で
はない。A carbon source such as lactose may promote the growth of fluorescent Pseudomonas and the production of fluorescent dyes. The concentration is not particularly limited, but 5.0% or less is sufficient. More can be blended, but it is not practical.
【００１９】ナリジクス酸などの抗菌剤やセトリマイド
などの界面活性剤は、螢光性シュードモナスの選択増殖
を高めるために適当量配合することができるが、本発明
に係る培地（以下「本発明培地」という）においては、
これら抗菌剤等を配合しなくても充分に螢光性シュード
モナスを検出判定することができる。Antibacterial agents such as nalidixic acid and surfactants such as cetramide can be added in appropriate amounts to enhance the selective growth of fluorescent Pseudomonas. )
Fluorescent Pseudomonas can be sufficiently detected and determined without adding these antibacterial agents and the like.
【００２０】また、海洋性由来の螢光性シュードモナス
の増殖を高めるためなどに、塩化ナトリウムを配合する
こともできる。Further, sodium chloride may be added to enhance the growth of marine fluorescent Pseudomonas.
【００２１】更に、本発明培地は、液体培地のみでな
く、寒天などを適当量配合することにより平板培地とす
ることもできる。Further, the medium of the present invention can be made into a plate medium by mixing not only a liquid medium but also an appropriate amount of agar or the like.
【００２２】培地の液性(pH)は、pH 6.5からpH 7.8の範
囲内が好ましく、pH 7.4付近が特に好ましい。液性の調
整は、のリン酸塩、のマグネシウム塩、の硫酸塩
で行うことができる他、塩酸や水酸化ナトリウム等の第
三物質を添加することによっても行うことができる。The liquid property (pH) of the medium is preferably in the range of pH 6.5 to pH 7.8, particularly preferably around pH 7.4. Adjustment of the liquid property can be performed by using a phosphate, a magnesium salt, or a sulfate, or by adding a third substance such as hydrochloric acid or sodium hydroxide.
【００２３】以上の物質を常法により蒸留水に溶解し、
滅菌冷却することによって本発明培地を作成することが
できる。The above substances are dissolved in distilled water by a conventional method,
The medium of the present invention can be prepared by sterile cooling.
【００２４】培養温度は、20℃から35℃の範囲が好まし
く、30℃付近が最も好ましい。20℃以下の培養温度では
増殖が遅くなり、また35℃以上の培養温度でも発育、螢
光色素の産生が抑制される。The culture temperature is preferably in the range of 20 ° C. to 35 ° C., and most preferably around 30 ° C. At a culture temperature of 20 ° C or lower, the growth slows down, and at a culture temperature of 35 ° C or higher, the growth and the production of the fluorescent dye are suppressed.
【００２５】また、本発明培地の培養方法は、静置培
養、振とう培養いずれであっても行うことができる。The culture method of the medium of the present invention can be performed by either static culture or shaking culture.
【００２６】[0026]
【発明の効果】本発明培地は、これまでの培地と異なり
実質的に無色透明である。従って、螢光性シュードモナ
スの検出判定が極めて容易であり、検定者の検定誤認や
個体差が少なく、また、紫外線を照射して検定する必要
もほとんどない。即ち、検出感度が優れているといえ
る。The medium of the present invention is substantially colorless and transparent unlike the conventional medium. Therefore, it is extremely easy to detect and judge the fluorescent Pseudomonas, there is little misidentification by the examiner and there is little individual difference, and there is almost no need to perform the assay by irradiating ultraviolet rays. That is, it can be said that the detection sensitivity is excellent.
【００２７】また、螢光色素産生が従来の培地と同等か
又は多少劣っていても本発明培地が透明であることから
検出判定が容易である。Further, even if the production of fluorescent dye is equal to or slightly inferior to that of the conventional medium, the medium of the present invention is transparent, so that it is easy to judge detection.
【００２８】本発明培地は、ペプトンや牛心臓浸出液を
用いないので、調製が極めて簡単で、また安価である。Since the medium of the present invention does not use peptone or bovine heart leachate, its preparation is extremely simple and inexpensive.
【００２９】更に、本発明培地は、他の菌種が存在して
いても、抗菌剤等を配合せずに充分に螢光性シュードモ
ナスを検出判定することができる。Further, even if other bacterial species are present, the medium of the present invention can sufficiently detect and determine fluorescent Pseudomonas without adding an antibacterial agent or the like.
【００３０】[0030]
【実施例】以下に本発明を実施例及び試験例により、更
に詳しく説明する。The present invention will be described in more detail with reference to the following Examples and Test Examples.
【００３１】実施例１ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、マンニット１０．０ｇ
を１Ｌ（Ｌはリットル、以下同じ）の蒸留水に溶解し、
その後滅菌冷却することによりpH 7.4の本発明培地を作
成した。Example 1 5 g of sodium glutamate and 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, mannitol 10.0 g
Is dissolved in 1 L (L is liter, the same applies hereinafter) of distilled water,
Thereafter, the medium of the present invention having a pH of 7.4 was prepared by sterile cooling.
【００３２】実施例２ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、シュークロース１０．
０ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却すること
によりpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 2 5 g of sodium glutamate, 3.2 g of dipotassium phosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, sucrose 10.
0 g was dissolved in 1 L of distilled water and then sterilized and cooled to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３３】実施例３ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、シュークロース１０．
０ｇ、寒天１５．０ｇを１Ｌを蒸留水に溶解し、その後
滅菌冷却することによりpH 7.4の本発明培地を作成し
た。Example 3 5 g of sodium glutamate and 3.2 potassium dipotassium
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, sucrose 10.
1 g of 0 g and 15.0 g of agar was dissolved in distilled water, and then sterilized and cooled to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３４】実施例４ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、ラクトース１０．０ｇ
を１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することによ
りpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 4 5 g of sodium glutamate, 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, lactose 10.0 g
Was dissolved in 1 L of distilled water, followed by sterile cooling to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３５】実施例５ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、トレハロース１０．０
ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することに
よりpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 5 5 g of sodium glutamate and 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, trehalose 10.0
g was dissolved in 1 L of distilled water, and then sterilized and cooled to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３６】実施例６ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、ソルビット１０．０ｇ
を１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することによ
りpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 6 5 g of sodium glutamate, 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, sorbit 10.0 g
Was dissolved in 1 L of distilled water, followed by sterile cooling to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３７】実施例７ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、グリセリン１０．０ｇ
を１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することによ
りpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 7 5 g of sodium glutamate and 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g, magnesium sulfate 0.7 g, glycerin 10.0 g
Was dissolved in 1 L of distilled water, followed by sterile cooling to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３８】実施例８ アスパラギン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．
２ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．
０ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、マンニット１０．０
ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することに
よりpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 8 5 g of sodium aspartate and dipotassium phosphate
2 g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.
0 g, magnesium sulfate 0.7 g, mannitol 10.0
g was dissolved in 1 L of distilled water, and then sterilized and cooled to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００３９】実施例９ L-オルニチン塩酸塩５ｇ、リン酸二カリウム３．２ｇ、
リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０ｇ、
硫酸マグネシウム０．７ｇ、マンニット１０．０ｇを１
Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することによりpH
7.4の本発明培地を作成した。Example 9 5 g of L-ornithine hydrochloride, 3.2 g of dipotassium phosphate,
0.6 g of monopotassium phosphate, 1.0 g of sodium chloride,
0.7 g of magnesium sulfate and 10.0 g of mannitol
L of distilled water and then sterilized and cooled.
A 7.4 medium of the present invention was prepared.
【００４０】実施例１０ カザミノ酸５ｇ、リン酸二カリウム３．２ｇ、リン酸一
カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０ｇ、硫酸マグ
ネシウム０．７ｇ、マンニット１０．０ｇを１Ｌの蒸留
水に溶解し、その後滅菌冷却することによりpH 7.4の本
発明培地を作成した。Example 10 5 g of casamino acid, 3.2 g of dipotassium phosphate, 0.6 g of monopotassium phosphate, 1.0 g of sodium chloride, 0.7 g of magnesium sulfate and 10.0 g of mannitol were dissolved in 1 L of distilled water. Then, the medium of the present invention having a pH of 7.4 was prepared by sterile cooling.
【００４１】実施例１１ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、硫酸マグネシウム０．
７ｇ、マンニット１０．０ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、
その後滅菌冷却することによりpH 7.4の本発明培地を作
成した。Example 11 5 g of sodium glutamate and 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, magnesium sulfate 0.1 g.
7 g and 10.0 g of mannitol are dissolved in 1 L of distilled water,
Thereafter, the medium of the present invention having a pH of 7.4 was prepared by sterile cooling.
【００４２】実施例１２ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム０．１
２ｇ、塩化ナトリウム１．０ｇ、硫酸マグネシウム０．
７ｇ、マンニット１０．０ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、
その後滅菌冷却することによりpH 7.4の本発明培地を作
成した。Example 12 5 g of sodium glutamate and 0.1 of dipotassium phosphate
2 g, sodium chloride 1.0 g, magnesium sulfate 0.
7 g and 10.0 g of mannitol are dissolved in 1 L of distilled water,
Thereafter, the medium of the present invention having a pH of 7.4 was prepared by sterile cooling.
【００４３】実施例１３ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム０．１
２ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇ、マンニット１０．０
ｇを１Ｌの蒸留水に溶解し、その後滅菌冷却することに
よりpH 7.4の本発明培地を作成した。Example 13 5 g of sodium glutamate and 0.1 of dipotassium phosphate
2 g, magnesium sulfate 0.7 g, mannit 10.0
g was dissolved in 1 L of distilled water, and then sterilized and cooled to prepare a medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００４４】実施例１４ グルタミン酸ナトリウム５ｇ、リン酸二カリウム３．２
ｇ、リン酸一カリウム０．６ｇ、塩化ナトリウム１．０
ｇ、硫酸マグネシウム０．７ｇを１Ｌの蒸留水に溶解
し、その後滅菌冷却することによりpH 7.4の本発明培地
を作成した。Example 14 5 g of sodium glutamate and 3.2 potassium diphosphate
g, monopotassium phosphate 0.6 g, sodium chloride 1.0
g and 0.7 g of magnesium sulfate were dissolved in 1 L of distilled water, and then sterilized and cooled to prepare a culture medium of the present invention having a pH of 7.4.
【００４５】試験例１ 従来培地との比較（液体培地） まず、Pseudomonas aeruginosa IFO3080、Pseudomonas
fluorescens IFO3081、Pseudomonas fluorescens biova
r. Ｖ、Pseudomonas fragi IFO3458 、Pseudomonas put
ida K-92 、及びPseudomonas stutzeri K-103の各菌株
を１白金耳接種し、それぞれ３０℃、２４時間の条件で
肉エキス培地（肉エキス１．０％、ポリペプトン１．０
％、塩化ナトリウム０．５％を含むｐＨ７．０の培地）
により２度前培養を行った。Test Example 1 Comparison with Conventional Medium (Liquid Medium) First, Pseudomonas aeruginosa IFO3080, Pseudomonas
fluorescens IFO3081, Pseudomonas fluorescens biova
r. V, Pseudomonas fragi IFO3458, Pseudomonas put
One loopful of each strain of ida K-92 and Pseudomonas stutzeri K-103 was inoculated, and each was subjected to a meat extract medium (meat extract 1.0%, polypeptone 1.0%) at 30 ° C. for 24 hours.
%, PH 7.0 medium containing 0.5% sodium chloride)
Preculture was performed twice.
【００４６】そして、各培養液をＮＡＣブイヨン（栄研
化学（株）製）及び実施例２の本発明培地に１白金耳植
菌して３０℃で振とう培養し、供試菌の生育と黄緑色螢
光色素の産生を観察した。また、同様に静置培養も行っ
た。Then, each of the cultures was inoculated with one platinum loop into NAC bouillon (manufactured by Eiken Chemical Co., Ltd.) and the medium of the present invention of Example 2 and shake-cultured at 30 ° C. to grow the test bacteria. The production of a yellow-green fluorescent dye was observed. In addition, static culture was also performed.
【００４７】その結果を表１に示す。Table 1 shows the results.
【００４８】[0048]
【表１】 [Table 1]
【００４９】表１から明らかなように、本発明培地（実
施例２）は、螢光性シュードモナス検査用培地として現
在最も優れていると言われているＮＡＣブイヨン培地
（培地Ａ）よりも同等か又は早期に螢光性シュードモナ
スを検出判定することができた。As is clear from Table 1, the medium of the present invention (Example 2) is equal to or better than the NAC bouillon medium (medium A), which is currently considered to be the most excellent medium for fluorescent Pseudomonas test. Alternatively, fluorescent Pseudomonas could be detected and determined at an early stage.
【００５０】従って、安価な物質のみで構成されてお
り、また実質的に無色透明であるために検定者の検定誤
認や個体差の少ない本発明培地は、従来の培地よりも優
れていると言うことができる。Therefore, the medium of the present invention, which is composed only of inexpensive substances and is substantially colorless and transparent, has little misidentification by the examiner and has little individual difference, is said to be superior to the conventional medium. be able to.
【００５１】試験例２ 従来培地との比較（平板培地） まず、乳酸菌（Lactobacillus plantarum ATCC8014、La
ctobacillus cellobiosus 、Leuconostoc mesenteroide
s ）については、３０℃、２４時間の条件でＭ．Ｒ．
Ｓ．液体培地（オキソイド（株）製）により２度前培養
を行い、その他の菌株については、試験例１と同様に肉
エキス培地により２度前培養を行った。Test Example 2 Comparison with Conventional Medium (Plate Medium) First, lactic acid bacteria (Lactobacillus plantarum ATCC8014, La
ctobacillus cellobiosus, Leuconostoc mesenteroide
s) was determined at 30 ° C. for 24 hours. R.
S. Preculture was performed twice in a liquid medium (manufactured by Oxoid Co., Ltd.). For other strains, preculture was performed twice in a meat extract medium as in Test Example 1.
【００５２】そして、各培養液をキングＡ培地（日水製
薬（株）製）、キングＢ培地（日水製薬（株）製）、Ｎ
ＡＣ寒天培地（栄研化学（株）製）及び実施例３の本発
明培地に１白金耳画線して３０℃で培養し、供試菌の生
育と黄緑色螢光色素の産生を観察した。Then, each of the culture solutions was subjected to King A medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.), King B medium (Nissui Pharmaceutical Co., Ltd.), N
One platinum loop was streaked on AC agar medium (manufactured by Eiken Chemical Co., Ltd.) and the medium of the present invention of Example 3 and cultured at 30 ° C. to observe the growth of the test bacteria and the production of yellow-green fluorescent dye. .
【００５３】その結果を表２に示す。Table 2 shows the results.
【００５４】[0054]
【表２】 [Table 2]
【００５５】平板培地においても、本発明培地（実施例
３）は、他の市販の培地と比べて同等か又は早期に螢光
性シュードモナスが産生する螢光色素を検出判定するこ
とができた。Also on the plate medium, the medium of the present invention (Example 3) was able to detect and determine the fluorescent dye produced by the fluorescent Pseudomonas at the same time or earlier than the other commercially available medium.
【００５６】従って、本発明培地は、抗菌剤等を配合し
なくても当該菌のみを感度よく鋭敏に短時間で検出判定
することができる。Therefore, the culture medium of the present invention can detect and judge only the relevant bacterium with high sensitivity and in a short time without adding an antibacterial agent or the like.
【００５７】試験例３ 試験例１と同様にP. aeruginosa IFO3080 、P.fluoresc
ens IFO3081、P. fluorescens biovar.Ｖ、P. putida I
FO3738 について、２度前培養行った各培養液を、実施
例１、実施例２、実施例４、実施例５、実施例６、実施
例７、実施例１４の本発明培地にそれぞれ１白金耳づつ
植菌して３０℃で振とう培養及び静置培養し、供試菌の
生育と黄緑色螢光色素の産生を観察した。Test Example 3 P. aeruginosa IFO3080, P. fluoresc
ens IFO3081, P. fluorescens biovar.V, P. putida I
About FO3738, each culture solution obtained by pre-culturing twice was added to each of the culture media of the present invention of Example 1, Example 2, Example 4, Example 5, Example 6, Example 7, and Example 14 by one platinum loop. Each of the cells was inoculated at 30 ° C. with shaking culture and static culture, and the growth of the test microorganism and the production of a yellow-green fluorescent dye were observed.
【００５８】その結果を表３に示す。Table 3 shows the results.
【００５９】[0059]
【表３】 [Table 3]
【００６０】表３から明らかなように、糖などの添加で
菌種によっては、より短時間に検出判定することができ
た。As is evident from Table 3, depending on the type of bacteria, the detection and determination could be made in a shorter time by the addition of sugar and the like.
【００６１】従って、本発明培地は、検出判定時間の短
縮等を目的として糖などの第三物質を配合することもで
きる。Therefore, the medium of the present invention can also contain a third substance such as sugar for the purpose of shortening the detection determination time and the like.
【００６２】また、シュードモナスプチダは螢光色素産
生能があると言われているが、いずれの培地も今回用い
たシュードモナスプチダ（P. putida）IFO3738 につい
ては検出されなかった。Although Pseudomonas putida is said to be capable of producing a fluorescent pigment, none of the culture media detected Pseudomonas putida (P. putida) IFO3738.
【００６３】試験例４ 試験例１と同様にP. aeruginosa IFO3080 、P.fluoresc
ens IFO3081、P. fluorescens biovar.Ｖについて、２
度前培養行った各培養液を、実施例１、実施例８、実施
例９、実施例１０、実施例１１の本発明培地及び実施例
１においてグルタミン酸ナトリウムを除いた培地（培地
Ｂ）にそれぞれ１白金耳づつ植菌して３０℃で振とう培
養し、供試菌の生育と黄緑色螢光色素の産生を観察し
た。Test Example 4 As in Test Example 1, P. aeruginosa IFO3080 and P. fluoresc
ens IFO3081, P. fluorescens biovar.V, 2
Each of the culture solutions which had been pre-cultured was used as the medium of the present invention in Examples 1, 8, 9, 10 and 11, and the medium (medium B) in which sodium glutamate was removed in Example 1, respectively. One platinum loop was inoculated and cultured with shaking at 30 ° C., and the growth of the test bacteria and the production of a yellow-green fluorescent dye were observed.
【００６４】その結果を表４に示す。Table 4 shows the results.
【００６５】[0065]
【表４】 [Table 4]
【００６６】表４から明らかなように、グルタミン酸ナ
トリウムを除いた培地では、螢光色素の産生が認められ
なかった。一方、グルタミン酸ナトリウム等が配合され
た培地（本発明培地）では、螢光性シュードモナスの生
育も螢光色素の産生も認められた。As is evident from Table 4, no production of fluorescent dye was observed in the medium except for sodium glutamate. On the other hand, in the medium containing the sodium glutamate and the like (the medium of the present invention), the growth of fluorescent Pseudomonas and the production of fluorescent dye were both observed.
【００６７】また、塩化ナトリウムを除いた培地（実施
例１１）においても充分早期に螢光性シュードモナスの
生育、螢光色素の産生が認められた。In the medium from which sodium chloride had been removed (Example 11), the growth of fluorescent Pseudomonas and the production of fluorescent dye were recognized sufficiently early.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) C12Q 1/00 - 1/24 C12N 1/00 - 1/20 ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＭＥＤＬＩＮＥ（ＳＴＮ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)────────────────────────────────────────────────── ─── Continued on the front page (58) Fields surveyed (Int. Cl. 7 , DB name) C12Q 1/00-1/24 C12N 1/00-1/20 BIOSIS (DIALOG) MEDLINE (STN) WPI (DIALOG) )
Claims (1)
て必須構成成分とされているペプトンや牛浸出液を用い
ずに、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、L-オルニ
チン塩、又はカザミノ酸、リン酸塩、マグネシウム
塩、硫酸塩、のからを必須構成成分とし、かつ実
質的に無色透明であることを特徴とする螢光性シュード
モナス検査用培地。The present invention relates to a fluorescent Pseudomonas test medium, which does not use peptone or cattle exudate, which is an essential component, and is free from glutamate, aspartate, L-ornithine, casamino acid, phosphate, magnesium. A fluorescent Pseudomonas test medium comprising salt and sulfate as essential components and being substantially colorless and transparent.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12472891A JP3042015B2 (en) | 1991-04-26 | 1991-04-26 | Fluorescent Pseudomonas test medium |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12472891A JP3042015B2 (en) | 1991-04-26 | 1991-04-26 | Fluorescent Pseudomonas test medium |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04325097A JPH04325097A (en) | 1992-11-13 |
| JP3042015B2 true JP3042015B2 (en) | 2000-05-15 |
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ID=14892640
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12472891A Expired - Fee Related JP3042015B2 (en) | 1991-04-26 | 1991-04-26 | Fluorescent Pseudomonas test medium |
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|---|---|
| JP (1) | JP3042015B2 (en) |
Families Citing this family (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN111269862A (en) * | 2020-03-17 | 2020-06-12 | 陈建军 | Fermentation culture medium for high-yield iron carrier of pseudomonas fluorescens and fermentation culture method thereof |
| CN111172206B (en) * | 2020-03-30 | 2023-06-16 | 杭州巴洛特生物科技有限公司 | Method for improving microbial conversion to produce lactobionic acid |
-
1991
- 1991-04-26 JP JP12472891A patent/JP3042015B2/en not_active Expired - Fee Related
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04325097A (en) | 1992-11-13 |
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