JP3026594B2 - Separation material and separator - Google Patents
Separation material and separatorInfo
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Description
【発明の詳細な説明】 「利用分野」 本発明は、様々な物質の液体クロマトグラフィー分
離、動植物細胞やウイルスの分離などに利用しうる分離
材及び分離器に関する。The present invention relates to a separation material and a separator which can be used for liquid chromatography separation of various substances, separation of animal and plant cells and viruses, and the like.
「従来技術及びその問題点」 従来、液体クロマトグラフィー用充填剤や動植物細胞
やウイルスの分離剤として、様々な分離吸着剤が提案さ
れてきたが、分離吸着剤のほとんどは、微細な粒子から
成る。これらの分離吸着剤粒子の多数を、カラム等の容
器に積層して用いている。そのため、振動、その他の力
学的な衝撃により、粒子層が乱れ、分離能が低下すると
いう問題点があった。"Prior art and its problems" Conventionally, various separation adsorbents have been proposed as packing materials for liquid chromatography and as separation agents for animal and plant cells and viruses, but most of separation adsorbents consist of fine particles. . Many of these separated adsorbent particles are used by being laminated on a container such as a column. Therefore, there has been a problem that the particle layer is disturbed by vibration or other mechanical shocks, and the separation ability is reduced.
また、送液によって、特に、溶媒流入口部分の粒子層
が乱れたり、圧密化して空隙が生じたりするため、分離
能が低下してしまう。In addition, the liquid sending disturbs the particle layer, particularly at the solvent inlet portion, and causes voids due to compaction, so that the separation ability is reduced.
さらに、シリンジ等の容器に平均粒径100〜2000μｍ
の顆粒を充填して、細胞の分離に用いるカラムも提案さ
れているが、液体クロマトグラフィー用と同様に振動な
どの衝撃により、顆粒の充填状態に乱れが生じることが
あり、その結果、分離性能が低下する。Furthermore, the average particle size of 100 to 2000 μm
A column that is packed with granules and used for cell separation has also been proposed. However, as in the case of liquid chromatography, shock such as vibration may cause disturbance in the packed state of granules, resulting in separation performance. Decrease.
「発明の目的」 本発明は、振動、その他の衝撃や送液によって物質、
動植物細胞及びウイルスに対する分離能が低下しない分
離材及び分離器を提供することを目的とする。"Objects of the Invention" The present invention relates to substances,
An object of the present invention is to provide a separation material and a separator that do not decrease the ability to separate animal and plant cells and viruses.
「発明の構成」 本発明は、三次元連通孔を有する一体形状の多孔体を
分離吸着材として用い、この多孔体の側面を合成樹脂で
包囲することによって上記目的を達成したものである。"Constitution of the Invention" The present invention has achieved the above object by using an integrally formed porous body having three-dimensional communication holes as a separation adsorbent, and surrounding the side surface of the porous body with a synthetic resin.
すなわち、本発明による分離材は、三次元連通孔を有
する一体形状のリン酸カルシウム系セラミックス、シリ
カセラミックス、チタニアセラミックス又はジルコニア
セラミックス多孔体から成ることを特徴とする。That is, the separation material according to the present invention is characterized in that it is formed of a porous calcium phosphate-based ceramic, silica ceramic, titania ceramic, or zirconia ceramic having three-dimensional communication holes.
また、本発明の分離器は、三次元連通孔を有する一体
形状のセラミックス多孔体又は樹脂多孔体の側面が合成
樹脂層で包囲固定されていることを特徴とする。Further, the separator according to the present invention is characterized in that the side surface of the integrally formed porous ceramic or resin body having three-dimensional communication holes is surrounded and fixed by a synthetic resin layer.
本発明の分離材は、上記のように、粒子の積層物では
なく、１個の多孔体から成るものであり、三次元連通孔
を有するリン酸カルシウム系セラミックス、シリカセラ
ミックス、チタニアセラミックス又はジルコニアセラミ
ックス多孔体から成るものである。リン酸カルシウムと
しては、Ca/P比が1.4〜1.8のものであれば各種のものを
使用することができるが、焼結性などの点を考慮する
と、1.5〜1.67であるものが好ましい。さらに具体的に
は、ハイドロキシアパタイト、フッ素アパタイト等の各
種のアパタイト、リン酸三カルシウム、リン酸四カルシ
ウム及びこれらの混合物を使用することができる。As described above, the separating material of the present invention is not a laminate of particles but a single porous body, and has a calcium phosphate-based ceramic, a silica ceramic, a titania ceramic, or a zirconia ceramic porous body having three-dimensional communication holes. It consists of. Various calcium phosphates can be used as long as the Ca / P ratio is 1.4 to 1.8, but preferably 1.5 to 1.67 in consideration of sinterability and the like. More specifically, various apatites such as hydroxyapatite and fluorapatite, tricalcium phosphate, tetracalcium phosphate, and mixtures thereof can be used.
セラミックス多孔体の平均孔径は、通常、0.1〜1000
μｍであるが、１〜500μｍであるのが好ましい。孔径
が0.1μｍ未満であると、目詰まりが起こりやすく、100
0μｍを超えると、分離吸着性能が低下する。The average pore size of the ceramic porous body is usually 0.1 to 1000
μm, but preferably 1 to 500 μm. If the pore size is less than 0.1 μm, clogging is likely to occur,
If it exceeds 0 μm, the separation and adsorption performance will decrease.
さらに、セラミックス多孔体の気孔率は、20〜70％で
あることが好ましく、30〜75％であることがより好まし
い。気孔率が20％未満では圧力が極めて高くなったり、
充分に流量を上げることができなかったりする。また、
分離吸着する面積が小さくなり、サンプルの投入量、回
収量が少なくなる。気孔率75％を超えると、サンプルを
投入した時、吸着することなく流出してしまう率が高く
なり、分離能が低下する。Further, the porosity of the porous ceramic body is preferably 20 to 70%, more preferably 30 to 75%. If the porosity is less than 20%, the pressure will be extremely high,
In some cases, the flow rate cannot be increased sufficiently. Also,
The area for separation and adsorption is reduced, and the amount of sample input and recovery is reduced. If the porosity exceeds 75%, when the sample is introduced, the rate at which the sample flows out without being adsorbed is increased, and the separation ability is reduced.
セラミックス多孔体は、公知の方法により製造するこ
とができ、例えば、過酸化水素等の発泡剤を用いる発泡
法、ウレタンフォームにセラミックススラリーを含浸さ
せ、ウレタンフォームを熱分解するウレタンフォーム
法、樹脂ビーズ、昇華性物質などの熱消失性物質を湿式
又は乾式で混合し、これを加熱消失させる方法などによ
って製造することができる。The ceramic porous body can be produced by a known method, for example, a foaming method using a foaming agent such as hydrogen peroxide, a urethane foam method in which a ceramic slurry is impregnated with urethane foam, and a urethane foam is thermally decomposed, a resin bead. And a heat-dissipating substance such as a sublimable substance, which is mixed in a wet or dry manner, and then heat-dissipated.
さらに、セラミックススラリーを脱水・乾燥して得た
乾燥体を比較的低温で焼成し、セラミックスのほぼ球状
の二次粒子同士がその接触部分だけで結合しており、粒
子間隙だけで三次元連通孔を形成している多孔体を製造
することもできる。このような粒子間隙だけに基づく三
次元連通孔を有する多孔体は、極めて微細で、孔径及び
分布が均一な連通孔を有し、高い分離性能を発揮するた
め、本発明に使用するのに好適である。このような多孔
体を製造するのに好適な焼成温度は、セラミックスの種
類によって変動し、例えば、ハイドロキシアパタイトの
場合には、500〜1200℃である。この分離材を液体クロ
マトグラフィーに用いる場合には、平均粒径１〜100μ
ｍの二次粒子を用いることが好ましい。また、細胞の分
離に用いるには、平均粒径2000μｍ以下の二次粒子を用
いればよい。2000μｍを超えると、分離能が低下する。Furthermore, the dried body obtained by dehydrating and drying the ceramic slurry is fired at a relatively low temperature, and the substantially spherical secondary particles of the ceramics are bonded only at the contact portion, and the three-dimensional communication hole is formed only by the particle gap. Can also be produced. A porous body having three-dimensional communication holes based only on such particle gaps is extremely fine, has communication holes with uniform pore diameters and distributions, and exhibits high separation performance, and is therefore suitable for use in the present invention. It is. The firing temperature suitable for producing such a porous body varies depending on the type of ceramics, and is, for example, 500 to 1200 ° C. in the case of hydroxyapatite. When this separation material is used for liquid chromatography, the average particle size is 1 to 100 μm.
Preferably, m secondary particles are used. For use in cell separation, secondary particles having an average particle diameter of 2000 μm or less may be used. If it exceeds 2000 μm, the resolution will decrease.
次に、本発明の分離器について説明する。 Next, the separator of the present invention will be described.
本発明の分離器は、上記のような三次元連通孔を有す
るセラミックス多孔体又は樹脂多孔体の側面が、必要に
応じて接着剤層又はプラスチックフィルム層を介して、
合成樹脂層で包囲・固定されているものである。The separator of the present invention, the side surface of the ceramic porous body or the resin porous body having the three-dimensional communication hole as described above, via an adhesive layer or a plastic film layer as necessary,
It is surrounded and fixed by a synthetic resin layer.
この分離器に用いる樹脂多孔体としては、例えば、平
均孔径１〜1000μｍの三次元連通孔を有するポリビニル
アセタール樹脂多孔体などが挙げられる。このような樹
脂多孔体は、公知の方法により製造することができ、例
えば、モノマー混合物に発泡剤を添加して重合を行うこ
とによって製造することができる。ポリビニルアセター
ル樹脂としては、アセタール化率50〜100％のものが好
ましく、例えばポリビニルホルマール、ポリビニルブチ
ラール等が挙げられる（特願平１−48000号明細書参
照）。平均孔径は、１μｍ未満では目詰まりを起こす虞
があり、1000μｍを超えると、吸着表面積の低下によ
り、分離能が低下する。Examples of the resin porous body used in the separator include a polyvinyl acetal resin porous body having three-dimensional communication holes having an average pore diameter of 1 to 1000 μm. Such a resin porous body can be manufactured by a known method, and for example, can be manufactured by adding a blowing agent to a monomer mixture and performing polymerization. As the polyvinyl acetal resin, those having an acetalization ratio of 50 to 100% are preferred, and examples thereof include polyvinyl formal and polyvinyl butyral (see Japanese Patent Application No. 1-48000). If the average pore size is less than 1 μm, clogging may occur. If the average pore size exceeds 1000 μm, the separation ability is reduced due to a decrease in adsorption surface area.
本発明の分離器は、上記のような各種の多孔体の側面
が合成樹脂層で包囲・固定されているものである。上記
のような一体形状の多孔体をカラム等に充填すると、充
填時に多孔体の側面とカラム壁との摩擦によって多孔体
側面の構造が破壊する虞があり、また、スムースに充填
できる寸法にすると、カラム壁に沿って試料液や溶離溶
媒が流れ、分離能が著しく低下する虞がある。そこで、
本発明においては、多孔体の側面を合成樹脂で固め、多
孔体側面と合成樹脂とが結合し、多孔体と分離容器とが
結合した形態とするが、硬化前の合成樹脂組成物は粘度
が低いので、多孔体の気孔内に侵入する虞がある。した
がって、粘度の高い速乾性接着剤をを合成樹脂組成物と
して使用し、これを塗り重ねることによって合成樹脂層
を形成するのが好ましい。In the separator of the present invention, the side surfaces of the various porous bodies as described above are surrounded and fixed by a synthetic resin layer. When a column or the like is filled with a porous body having an integral shape as described above, the structure of the side face of the porous body may be destroyed due to friction between the side face of the porous body and the column wall at the time of filling. In addition, the sample solution and the eluting solvent flow along the column wall, and there is a possibility that the resolving power is significantly reduced. Therefore,
In the present invention, the side surface of the porous body is solidified with a synthetic resin, the side surface of the porous body is combined with the synthetic resin, and the porous body and the separation container are combined, but the synthetic resin composition before curing has a viscosity. Since it is low, there is a risk of intrusion into the pores of the porous body. Therefore, it is preferable to use a high-viscosity quick-drying adhesive as the synthetic resin composition, and form the synthetic resin layer by applying the same repeatedly.
また、本発明の一実施態様として、多孔体の側面に粘
度の高い速乾性接着剤を塗布して接着剤層を形成し、そ
の上に別種の合成樹脂層を設けて多孔体を包囲・固定す
ることもできる。Further, as one embodiment of the present invention, a high-viscosity quick-drying adhesive is applied to the side surface of the porous body to form an adhesive layer, and another type of synthetic resin layer is provided thereon to surround and fix the porous body. You can also.
接着剤層の厚さは、その上に塗布される合成樹脂が多
孔体の気孔内に侵入するのを防止できる程度であればよ
い。また、合成樹脂層の厚さは、分離器の使用目的など
によって異なり、高圧液体クロマトグラフィーに用いる
場合には、耐圧性を備えるため、比較的厚くする必要が
ある。The thickness of the adhesive layer may be such that the synthetic resin applied thereon can be prevented from entering the pores of the porous body. The thickness of the synthetic resin layer varies depending on the purpose of use of the separator and the like, and when used for high pressure liquid chromatography, it must be relatively thick because it has pressure resistance.
接着剤としては、粘度が高く、速乾性のものであれ
ば、特に制限はなく、例えば、長瀬チバ（製）製アラル
ダイト等のエポキシ樹脂系接着剤などが挙げられる。ま
た、合成樹脂としては、特に制限はないが、アクリル系
樹脂、エポキシ樹脂など、常温硬化型のものを使用すれ
ば、分離器の製造が容易となり、好ましい。The adhesive is not particularly limited as long as it has a high viscosity and is quick-drying, and examples thereof include an epoxy resin-based adhesive such as Araldite manufactured by Chise Nagase (product). Although there is no particular limitation on the synthetic resin, it is preferable to use a room-temperature-curable resin such as an acrylic resin or an epoxy resin because the separator can be easily manufactured.
さらに、孔径の大きい多孔体を用いる場合には、粘度
の高い接着剤でも、多孔体の気孔内に入り込む危険があ
るので、このような場合には、液体を透過しない、伸張
性のあるフィルムで多孔体を包囲した後、合成樹脂層を
設けるのが好ましい。ここで用いる合成樹脂の種類に
は、特に制限はないが、粘着性を有するものであるのが
好ましい。Further, when a porous material having a large pore size is used, even with an adhesive having a high viscosity, there is a risk of entering the pores of the porous material. In such a case, a liquid-permeable, stretchable film is used. After surrounding the porous body, it is preferable to provide a synthetic resin layer. The type of the synthetic resin used here is not particularly limited, but is preferably one having tackiness.
本発明の分離器は、開放型あるいは閉鎖型である。液
体通路としては、注射針やチューブを利用することがで
き、多孔体に接着剤で装着してもよいが、カラムジョイ
ントやカラムエンドにチューブを装着してもよい。The separator of the present invention is an open type or a closed type. As the liquid passage, an injection needle or a tube can be used. The liquid passage may be attached to a porous body with an adhesive, or a tube may be attached to a column joint or a column end.
「発明の実施例」 次に、図面に基づいて本発明の実施例を示す分離器を
詳述するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。"Embodiment of the invention" Next, a separator showing an embodiment of the present invention will be described in detail with reference to the drawings, but the present invention is not limited thereto.
第１図は、本発明の一実施例を示す分離器の断面図で
ある。この分離器は、開放型で、一方の端面に液体通路
を有する形式のものであり、多孔体１の側面及び底面に
接着剤層２及び合成樹脂層３が設けられ、多孔体１の底
面には、液体通路としてのチューブ４が接着剤層２及び
合成樹脂層３によって固定されている。ここで、多孔体
１の孔径が大きい場合には、接着剤層２の代わりにプラ
スチックフィルム層を設けてもよい。また、合成樹脂層
３を接着剤層２を形成するのに用いた接着剤を用いて形
成し、合成樹脂層と接着剤層とを同一の層として形成す
ることもできる。FIG. 1 is a sectional view of a separator showing an embodiment of the present invention. This separator is of an open type and has a liquid passage at one end face. An adhesive layer 2 and a synthetic resin layer 3 are provided on the side and bottom of the porous body 1, and the bottom of the porous body 1 is provided on the bottom of the porous body 1. In FIG. 1, a tube 4 as a liquid passage is fixed by an adhesive layer 2 and a synthetic resin layer 3. Here, when the pore diameter of the porous body 1 is large, a plastic film layer may be provided instead of the adhesive layer 2. Alternatively, the synthetic resin layer 3 may be formed using the adhesive used to form the adhesive layer 2, and the synthetic resin layer and the adhesive layer may be formed as the same layer.
第１図に示した分離器を用いて、物質、動植物細胞又
はウイルスを分離する場合には、開放端から試料液及び
溶離溶媒を注入し、チューブ４から流出させる。When separating substances, animal and plant cells or viruses using the separator shown in FIG. 1, a sample solution and an elution solvent are injected from the open end and flow out of the tube 4.
第２図は、閉鎖型で、多孔体の両端面に接触して液体
通路が設けられている分離器の断面図である。この分離
器においては、多孔体１の両端面には液体通路としての
チューブ４の外周断面が後述する接着剤により接着され
ると共にその補強のためチューブ４に挿通されたカラム
エンド５が同じく接着剤により多孔体の両端部及びチュ
ーブに接着され、固定されている。さらに、多孔体１の
側面と両端面には、この接着剤による接着剤層２が設け
られ、この接着剤層２を覆うように合成樹脂層３が形成
されている。この形式ではデッドボリュームが全くな
く、高い分離能を達成することができる。FIG. 2 is a sectional view of a closed type separator provided with a liquid passage in contact with both end surfaces of a porous body. In this separator, the outer peripheral section of the tube 4 as a liquid passage is adhered to both end surfaces of the porous body 1 with an adhesive described later, and a column end 5 inserted into the tube 4 for reinforcement is also attached to the adhesive. By this, it is bonded and fixed to both ends of the porous body and the tube. Further, an adhesive layer 2 of this adhesive is provided on the side surfaces and both end surfaces of the porous body 1, and a synthetic resin layer 3 is formed so as to cover the adhesive layer 2. This form has no dead volume and can achieve high resolution.
第３図に示した分離器は、閉鎖式であり、多孔体１の
両端面から間隔をおいて液体通路を設けた形式のもので
ある。この分離器においては、市販のフィルタ付きパッ
クドカラムエンドの分離剤が配置される側の端部を切断
加工してカラムエンド７として用いた。このカラムエン
ド７のフィルター側端部と多孔体１とは密着された状態
で、カラムエンド７及び多孔体１の側面が接着剤により
覆われ、接着剤層２が形成されている。また、この接着
剤層２をさらに覆うように合成樹脂層３が形成されてい
る。カラムエンド７には、雌ネジ部８が形成され、図示
しないジョイントを介してチューブなどと接続され、液
体通路が形成される。第３図に示した吸着分離器におい
ては、試料液及び溶離溶媒はフィルター６を介して注入
・流出される。The separator shown in FIG. 3 is of a closed type, in which a liquid passage is provided at an interval from both end faces of the porous body 1. In this separator, an end of a commercially available packed column end with a filter on the side where the separating agent is arranged was cut and used as a column end 7. With the filter end of the column end 7 and the porous body 1 in close contact with each other, the side surfaces of the column end 7 and the porous body 1 are covered with an adhesive, and the adhesive layer 2 is formed. Further, a synthetic resin layer 3 is formed so as to further cover the adhesive layer 2. A female thread 8 is formed in the column end 7 and connected to a tube or the like via a joint (not shown) to form a liquid passage. In the adsorption separator shown in FIG. 3, a sample solution and an elution solvent are injected and discharged through a filter 6.
第２図及び第３図に示した分離器においては、一方の
液体通路から試料液及び溶離溶媒を注入し、他方の液体
通路から流出させることができる。また、これらの分離
器は、閉鎖式であるから、高圧液体クロマトグラフィー
を行うのに好適である。In the separator shown in FIGS. 2 and 3, the sample liquid and the elution solvent can be injected from one liquid passage and discharged from the other liquid passage. Further, since these separators are of a closed type, they are suitable for performing high pressure liquid chromatography.
次に、本発明の分離器を用いて分離を行った実施例を
示す。Next, an example in which separation is performed using the separator of the present invention will be described.
実施例１ 公知の方法で湿式合成してハイドロキシアパタイトの
スラリーを得た。このスラリーを噴霧乾燥し、平均粒径
10μｍの粉末を得た。この粉末をイオン交換水とメチル
セルロース（信越化学工業（製）製、商品名：メトロー
ズ）を用いてメチルセルロースの１重量％水溶液150gを
調製した。これに上記ハイドロキシアパタイト粉末70g
を加え、スラリーとし、その後、乾燥して成形物を作製
し、950℃で熱処理し、10×10×23mmのハイドロキシア
パタイトセラミックス多孔体を得た。この多孔体は、気
孔率70％で、５〜10μｍの気孔径の連通気孔を有してい
た。なお、この連通気孔は、粒子間隙に基づくものであ
る。Example 1 A slurry of hydroxyapatite was obtained by wet synthesis using a known method. This slurry is spray-dried and the average particle size
A 10 μm powder was obtained. 150 g of a 1% by weight aqueous solution of methylcellulose was prepared from this powder using ion-exchanged water and methylcellulose (manufactured by Shin-Etsu Chemical Co., Ltd., trade name: Metroose). 70 g of the above hydroxyapatite powder
Was added to form a slurry, and then dried to form a molded article, which was then heat-treated at 950 ° C. to obtain a 10 × 10 × 23 mm porous hydroxyapatite ceramic body. The porous body had a porosity of 70% and had continuous pores having a pore diameter of 5 to 10 μm. In addition, this continuous vent is based on a particle gap.
得られたセラミックス多孔体の下端にエポキシ樹脂系
接着剤（長瀬チバ（製）製アラルダイト）を用いてシリ
コーンチューブを装着し、多孔体の側面及び底面に同じ
接着剤を用いて厚さ1mmの接着剤層を設け、さらにアク
リル系の包埋用樹脂（丸元工業（製）製）を用いて厚さ
3mmの合成樹脂層を設けて第１図に示した分離器を作製
した。上記シリコンチューブの途中にペリスタポンプを
接続し、液体の流速を調整できるようにした。A silicone tube was attached to the lower end of the obtained porous ceramic body using an epoxy resin-based adhesive (Araldite made by Nagase Chiba (product)), and a 1 mm thick adhesive was attached to the side and bottom surfaces of the porous body using the same adhesive. Agent layer, and using an acrylic embedding resin (manufactured by Marumoto Industry Co., Ltd.)
The separator shown in FIG. 1 was prepared by providing a 3 mm synthetic resin layer. A peristaltic pump was connected in the middle of the silicon tube so that the flow rate of the liquid could be adjusted.
作製した分離器の開放端から10mMリン酸ナトリウム緩
衝液（pH6.8）を入れ、1ml/分の流速に調整し、分離器
及びチューブ内を同緩衝液で満たした後、10mg/mlの濃
度のチトクロームｃを含む水溶液400μを上記開放端
から注入し、多孔体に吸着させる。次いで、10mMリン酸
ナトリウム緩衝液（pH6.8）5mlを流し、ポンプ出口より
流出した液を分取した。次に、400mMリン酸ナトリウム
緩衝液（pH6.8）5mlを流し、同様にポンプ出口より流出
した液を分取した。分取した液について蛋白質染色法に
よりチトクロームｃの回収量を測定した。得られた結果
を、下記の第１表に示す。From the open end of the prepared separator, 10 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8) was added, the flow rate was adjusted to 1 ml / min, the inside of the separator and the tube were filled with the same buffer, and the concentration was 10 mg / ml. 400 μm of an aqueous solution containing cytochrome c is injected from the open end and adsorbed on the porous body. Next, 5 ml of 10 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8) was flowed, and the liquid flowing out from the pump outlet was collected. Next, 5 ml of a 400 mM sodium phosphate buffer (pH 6.8) was flowed, and the liquid flowing out from the pump outlet was similarly collected. The recovered amount of cytochrome c was measured for the separated liquid by a protein staining method. The results obtained are shown in Table 1 below.
実施例２ 実施例１と同様にして直径7.5×17mmの円柱状セラミ
ックス多孔体を作製した。この多孔体は気孔径10〜20μ
ｍの連通気孔を有していた。得られた多孔体及び実施例
１に用いたものと同じ接着剤及び合成樹脂と市販のフィ
ルター付きステンレスカラムエンドを用いて第３図に示
した吸着分離器を作製した。 Example 2 In the same manner as in Example 1, a columnar ceramic porous body having a diameter of 7.5 × 17 mm was produced. This porous body has a pore diameter of 10-20μ
m of continuous ventilation holes. Using the obtained porous body, the same adhesive and synthetic resin as those used in Example 1, and a commercially available stainless steel column end with a filter, an adsorption separator shown in FIG. 3 was produced.
この分離器の一方の液体通路を入口側とし、蒸留水に
ウシ血清アルブミン（以下、BSAと略称する）10μg/ml
及びリゾチーム10μg/mlを溶解した試料溶液を10μ注
入し、リン酸ナトリウム緩衝液（pH6.8）を移動相と
し、10mMから400mMの30分グラジエントクロマトグラフ
ィーを行った。得られたクロマトグラムを第４図に示
す。第４図においてａはBSAのピーク、ｂはリゾチーム
のピークである。One of the liquid passages of this separator was used as the inlet side, and 10 μg / ml of bovine serum albumin (hereinafter abbreviated as BSA) was added to distilled water.
10 μg of a sample solution in which lysozyme and 10 μg / ml were dissolved was injected, and a 30-minute gradient chromatography from 10 mM to 400 mM was performed using a sodium phosphate buffer (pH 6.8) as a mobile phase. The obtained chromatogram is shown in FIG. In FIG. 4, a is the BSA peak, and b is the lysozyme peak.
実施例３ 実施例１と同様にして直径7.5×19.5mmの円柱状セラ
ミックス多孔体を作製した。この多孔体は気孔径10〜20
μｍの連通気孔を有していた。得られた多孔体及び実施
例１に用いたものと同じ接着剤及び合成樹脂とシリコン
チューブを用いて第２図に示した分離器を作製した。Example 3 In the same manner as in Example 1, a columnar ceramic porous body having a diameter of 7.5 × 19.5 mm was produced. This porous body has a pore size of 10-20
It had a continuous pore of μm. The separator shown in FIG. 2 was produced using the obtained porous body, the same adhesive and the same synthetic resin as those used in Example 1, and a silicon tube.
実施例２に用いたのと同じ試料溶液を、リン酸ナトリ
ウム緩衝液（pH6.8）を移動相とし、10mMから400mMの20
分のグラジエントクロマトグラフィーを行った。得られ
たクロマトグラムを第５図に示す。第５図においてａは
BSAのピーク、ｂはリゾチームのピークである。The same sample solution as used in Example 2 was prepared by using a sodium phosphate buffer (pH 6.8) as a mobile phase and adding 10 mM to 400 mM
Per minute gradient chromatography. The obtained chromatogram is shown in FIG. In FIG. 5, a is
The BSA peak, b, is the lysozyme peak.
実施例４ 平均粒子径0.8μｍのハイドロキシアパタイト50重量
％及びバインダーとしてポリビニルアルコール２重量％
を水に混合したスラリーをウレタンフォームに含浸させ
た。これを室温で乾燥させた後、1200℃で焼成し、気孔
率75％、平均気孔径300μｍの三次元連通孔を有する多
孔体（８×８×20mm）を作製した。この多孔体の側面
（８×20mmの４面）をパラフィルム〔アメリカン・カン
・カンパニイ（American Can Company）の登録商標〕で
巻いた後、エポキシ樹脂（アラルダイト）で周囲を固着
した。また、端面（８×8mmの面）の一方に26G（ゲー
ジ）の注射針を同じエポキシ樹脂で固定し、細胞分離用
分離器を作製した。Example 4 50% by weight of hydroxyapatite having an average particle diameter of 0.8 μm and 2% by weight of polyvinyl alcohol as a binder
Was mixed with water to impregnate the urethane foam. After drying at room temperature, it was baked at 1200 ° C. to prepare a porous body (8 × 8 × 20 mm) having a three-dimensional communication hole having a porosity of 75% and an average pore diameter of 300 μm. The side surface (4 sides of 8 × 20 mm) of this porous body was wound with parafilm (registered trademark of American Can Company) and the periphery was fixed with epoxy resin (araldite). Further, a 26 G (gauge) injection needle was fixed to one of the end faces (8 × 8 mm face) with the same epoxy resin to prepare a separator for cell separation.
こうして作製した分離器にヒト抹消血リンパ細胞５×
106個を浮遊させたハンクス培地0.2mlを流し、この浮遊
液が多孔体に充分浸透した後、3mlのハンクス培地を流
して非吸着細胞を流出させて回収した。この回収した細
胞に蛍光標識抗体、抗Leu4と抗Leu12をラベルした後、F
ACS（Fluorescence Activated Cell Sorter）を用いて
Ｔ細胞及びＢ細胞の陽性率を調べた。結果を下記の第２
表に示す。The human peripheral blood lymphocytes 5 ×
10 flowed six Hanks medium 0.2ml was suspended, the suspension is After thoroughly penetrate the porous body and recovered unadsorbed cells was drained by flowing a Hanks medium 3 ml. After labeling the collected cells with a fluorescently labeled antibody, anti-Leu4 and anti-Leu12, F
Positive rates of T cells and B cells were examined using ACS (Fluorescence Activated Cell Sorter). The result is the second
It is shown in the table.
実施例５ 平均孔径100μｍでホルマール化率が80〜86％のポリ
ビニルホルマール樹脂シート（スポンヂベルイータ：鐘
紡（製）製）を８×８×20mmに切断した。この樹脂シー
トの側面（８×20mmの面）をパラフィルムで巻いた後、
エポキシ樹脂（アラルダイト）で周囲を固着した。ま
た、端面（８×8mmの面）の一方に26Gの注射針を同じエ
ポキシ樹脂で固定し、細胞分離用分離器を作製した。Example 5 A polyvinyl formal resin sheet having an average pore diameter of 100 μm and a formalization ratio of 80 to 86% (Spond Berita: manufactured by Kanebo Co., Ltd.) was cut into 8 × 8 × 20 mm. After wrapping the side of this resin sheet (8x20mm surface) with parafilm,
The periphery was fixed with an epoxy resin (araldite). In addition, a 26G injection needle was fixed to one of the end faces (8 × 8 mm face) with the same epoxy resin to prepare a separator for cell separation.
実施例４と同様の操作を行って下記の第２表に示すリ
ンパ球の分離結果を得た。By performing the same operation as in Example 4, the results of separating lymphocytes shown in Table 2 below were obtained.
第２表に示した結果から明らかなとおり、Ｂ細胞が分
離材に吸着されたため、相対的にＴ細胞の濃度が高くな
っている。 As is clear from the results shown in Table 2, the concentration of T cells was relatively high because B cells were adsorbed to the separation material.
「発明の効果」 本発明の分離材は、粒子の積層物ではなく、一体形状
の多孔体から成るので、分離器内で層の乱れや圧密化を
起こさない。また、本発明の分離材は、様々な物質の分
離ばかりでなく、細胞やウイルスの分離にも使用するこ
とができ、高い分離能を示す。"Effect of the Invention" The separating material of the present invention is not a layered product of particles but a monolithic porous body, so that the layers are not disturbed or compacted in the separator. Further, the separation material of the present invention can be used not only for separation of various substances but also for separation of cells and viruses, and exhibits high separation ability.
さらに、本発明の分離器は、流入口付近にデッドボリ
ュームを作ることなく製造でき、また、送液によっても
デッドボリュームができず、分離材の圧密化が起こら
ず、衝撃に強く、分離材層の乱れが起こらず、高い分離
能を示す。Furthermore, the separator of the present invention can be manufactured without creating a dead volume near the inlet, and does not have a dead volume due to liquid feeding, does not cause the separation material to be compacted, is resistant to impact, and has a strong separation material layer. No disruption occurs and high resolution.
第１図は本発明の一実施例を示す分離器の断面図、第２
図は別の実施例を示す分離器の断面図、第３図はさらに
別の実施例を示す分離器の断面図、第４図は実施例２で
得られたクロマトグラム、第５図は実施例３で得られた
クロマトグラムである。 符号の説明 １……多孔体、２……接着剤層、３……合成樹脂層、４
……チューブ、５及び７……カラムエンド、ａ……BSA
のピーク、ｂ……リゾチームのピークFIG. 1 is a sectional view of a separator showing one embodiment of the present invention, and FIG.
FIG. 3 is a cross-sectional view of a separator showing another embodiment, FIG. 3 is a cross-sectional view of a separator showing still another embodiment, FIG. 4 is a chromatogram obtained in Example 2, and FIG. 6 is a chromatogram obtained in Example 3. DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 ... porous body, 2 ... adhesive layer, 3 ... synthetic resin layer, 4
…… Tube, 5 and 7 …… Column end, a …… BSA
B, lysozyme peak
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｇ０１Ｎ 30/48 Ｃ (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) B01J 20/04,20/06 B01J 20/10,20/28 G01N 30/48 C12M 1/00 ──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 identification code FI G01N 30/48 G01N 30/48 C (58) Investigated field (Int.Cl. 7 , DB name) B01J 20 / 04,20 / 06 B01J 20 / 10,20 / 28 G01N 30/48 C12M 1/00
Claims (8)
ルシウム系セラミックス、シリカセラミックス、チタニ
アセラミックス又はジルコニアセラミックス多孔体から
成ることを特徴とする分離材。1. A separating material comprising a monolithic calcium phosphate ceramic, silica ceramic, titania ceramic or zirconia ceramic porous body having three-dimensional communication holes.
されているものであり、連通孔が粒子間隙に基づくもの
である請求項１記載の分離材。2. The separating material according to claim 1, wherein the skeleton portions are connected to each other at a contact portion of the particles, and the communication holes are based on the particle gap.
2000μｍである請求項２記載の分離材。3. The particles constituting the skeleton have an average particle diameter of 1 to 3.
The separation material according to claim 2, which has a size of 2000 µm.
クス多孔体又は樹脂多孔体の側面が合成樹脂層で包囲・
固定されていることを特徴とする分離器。4. A side surface of an integrally formed porous ceramic or resin body having three-dimensional communication holes is surrounded by a synthetic resin layer.
A separator characterized by being fixed.
又は間隔を置いて液体通路が設けられている請求項４記
載の分離器。5. The separator according to claim 4, wherein a liquid passage is provided in contact with at least one end face of the porous body or at an interval.
設けられ、接着剤層及び樹脂層によって固定された注射
針又はチューブである請求項５記載の分離器。6. The separator according to claim 5, wherein the liquid passage is a needle or a tube provided in contact with one end surface of the porous body and fixed by an adhesive layer and a resin layer.
設けられ、接着剤層及び合成樹脂層で固定されたカラム
ジョイントを介して装着された送液チューブである請求
項５記載の分離器。7. The liquid supply tube according to claim 5, wherein the liquid passage is provided in contact with both end faces of the porous body, and is mounted via a column joint fixed with an adhesive layer and a synthetic resin layer. Separator.
フィルターを介して設けられ、合成樹脂層によって固定
されたカラムエンドである請求項５記載の分離器。8. The separator according to claim 5, wherein the liquid passage is a column end provided through filters disposed on both end surfaces of the porous body and fixed by a synthetic resin layer.
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