JP2986764B2 - Method for preparing high-fischer-ratio peptide with low bitter amino acid composition close to human milk - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、高フィッシャー比
ペプチドの調製に関するものであり、複数の蛋白質を原
料として用い、これらの原料をそれぞれ別個に処理した
後、特定の割合でブレンドするものである。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to the preparation of a peptide having a high Fisher's ratio, in which a plurality of proteins are used as raw materials, and these raw materials are separately treated and then blended at a specific ratio. .

【０００２】更に詳細には、本発明は、牛乳蛋白質であ
るカゼイン及び乳清蛋白質を原料として用い、これらの
原料を各々個別に特定の条件で酵素加水分解して芳香族
アミノ酸のみを特異的に選択除去し、次いでこのように
して得られた両蛋白質を特定の割合で混合することによ
って、苦味が少なく、アミノ酸バランスが人乳に近似
し、また、フィッシャー比が高いペプチド混合物および
その製造方法に関するものである。また本発明は、この
ようにして得られたフィッシャー比の高いペプチド混合
物を含有する組成物、特に肝疾患病患者用の栄養補給組
成物にも関するものである。More specifically, the present invention uses casein and whey protein, which are milk proteins, as raw materials, and these raw materials are individually enzymatically hydrolyzed under specific conditions to specifically only aromatic amino acids. By selectively removing and then mixing both proteins thus obtained in a specific ratio, a peptide mixture having a low bitterness, an amino acid balance close to human milk, and a high Fisher ratio, and a method for producing the same are provided. Things. The present invention also relates to a composition containing the peptide mixture having a high Fischer ratio thus obtained, particularly a nutritional supplement composition for patients with liver disease.

【０００３】[0003]

【従来の技術】肝障害時、とくに肝硬変非代償期に体内
アミノ酸が異常を示すことは古くから知られている。Ｉ
ｂｅｒら（Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｌａｂ．Ｍｅｄ．，５０：４
１７−４２５，１９５７）は、肝不全時に、芳香族アミ
ノ酸ＡＡＡ（Ｔｙｒ、Ｐｈｅ）、メチオニン（Ｍｅｔ）
などが増加すると報告した。一方、Ｚｉｎｎｅｍａｎら
（Ａｍｅｒ．Ｊ．Ｄｉｇ．Ｄｉｓ．，１４：１１８−１
２６，１９６９）は、肝硬変非代償期に分岐鎖アミノ酸
ＢＣＡＡ（Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ）の低下を報告して
いる。１９７４年、Ｆｉｓｃｈｅｒら（Ａｍｅｒ．Ｊ．
Ｓｕｒｇ．，１２７：４０−４７，１９７４）は、ＢＣ
ＡＡの減少とＡＡＡの増加すなわちＢＣＡＡ／ＡＡＡモ
ル比の低下というアミノ酸インバランスを肝性脳症の発
現と積極的に結び付け、アミノ酸インバランスを是正す
ることによって、すなわち、栄養摂取源としてＢＣＡＡ
含量が高く、ＡＡＡおよびＭｅｔ含量が低く、ＢＣＡＡ
／ＡＡＡモル比（フィッシャー比）の高い窒素源を与え
ることによって肝性脳症が改善されることを報告してい
る。2. Description of the Related Art It has long been known that amino acids in the body show abnormalities during liver damage, especially during the decompensation of cirrhosis. I
ber et al. ( J. Clin . Lab . Med ., 50 : 4.
17-425, 1957) can be used to produce aromatic amino acids AAA (Tyr, Phe) and methionine (Met) during liver failure.
Etc. reported increasing. On the other hand, Zinman et al. ( Amer . J. Dig . Dis ., 14 : 118-1).
26, 1969) report a decrease in the branched chain amino acid BCAA (Val, Leu, Ile) during the decompensation of cirrhosis. In 1974, Fischer et al. (Amer. J.
Surg . , 127 : 40-47, 1974) is a BC
By positively linking the amino acid imbalance of reduced AA and increased AAA, ie, reduced BCAA / AAA molar ratio, to the development of hepatic encephalopathy and correcting the amino acid imbalance, ie, BCAA as a nutritional source
High content, low AAA and Met content, BCAA
It is reported that hepatic encephalopathy is improved by providing a nitrogen source having a high / AAA molar ratio (Fisher ratio).

【０００４】このため、Ｖａｌ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅを主と
する精製アミノ酸を混合し、ＢＣＡＡ／ＡＡＡモル比を
高く調製したアミノ酸製剤が知られている。すなわち、
元来蛋白質は生体内で蛋白質分解酵素などの働きにより
遊離アミノ酸にまで分解されて利用される。したがっ
て、遊離アミノ酸は生体内での吸収が容易であり、特に
消化吸収能の劣っている術後患者において栄養効果が良
好であるとされている。特開昭６４−８３０１７、特開
平３−２２３６６には肝不全患者用アミノ酸製剤が開示
されている。[0004] For this reason, amino acid preparations in which purified amino acids mainly Val, Leu and Ile are mixed to prepare a high BCAA / AAA molar ratio are known. That is,
Originally, proteins are used after being decomposed into free amino acids by the action of proteases in vivo. Therefore, it is considered that free amino acids can be easily absorbed in vivo, and have a good nutritional effect especially in postoperative patients having poor digestive absorption ability. JP-A-64-83017 and JP-A-3-22366 disclose amino acid preparations for patients with liver failure.

【０００５】しかし、かかるアミノ酸製剤は薬品的な味
が強いために食べにくいうえ、高価であることから、製
品自体の値段も高価であるなどの欠点を有している。特
開昭５６−６８３７４には精製アミノ酸を果汁または寒
天に添加して摂取を容易にした例が示されている。また
アミノ酸混合物は電解質であるので浸透圧が高くなり、
高濃度での調合は非常に困難である。[0005] However, such amino acid preparations have drawbacks such as being difficult to eat due to their strong chemical taste and being expensive, so that the price of the product itself is expensive. JP-A-56-68374 discloses an example in which a purified amino acid is added to fruit juice or agar to facilitate ingestion. Also, since the amino acid mixture is an electrolyte, the osmotic pressure increases,
Formulation at high concentrations is very difficult.

【０００６】一方、蛋白質の加水分解物であるオリゴペ
プチドは小腸腸管内において細胞内に取り込まれ、細胞
内において遊離アミノ酸に分解され吸収されることが知
られている。そして、卵白、カゼインなどの動植物性蛋
白質を酵素分解してペプチド含量の高い加水分解物と
し、これを窒素源として利用することが、一応は可能で
ある。On the other hand, it is known that oligopeptides, which are hydrolysates of proteins, are taken into cells in the small intestinal tract, decomposed into free amino acids in the cells and absorbed. Then, it is possible to enzymatically decompose animal and plant proteins such as egg white and casein into a hydrolyzate having a high peptide content and use this as a nitrogen source.

【０００７】しかしながら、この場合、蛋白質を酵素で
分解し、ペプチド、オリゴペプチドの状態にするのであ
るから、このペプチド混合物のＢＣＡＡ／ＡＡＡモル比
は蛋白質自体の構成アミノ酸のモル比に依存することと
なる。換言すると、窒素源としての栄養価は原料蛋白質
に大きく依存するといえる。However, in this case, the protein is decomposed with an enzyme to form a peptide or an oligopeptide. Therefore, the BCAA / AAA molar ratio of this peptide mixture depends on the molar ratio of the constituent amino acids of the protein itself. Become. In other words, it can be said that the nutritional value as a nitrogen source largely depends on the raw protein.

【０００８】さらに、もともとＡＡＡ含量の少ない、す
なわち、ＢＣＡＡ／ＡＡＡモル比の高い蛋白質を用いれ
ば、その蛋白質源は肝疾患患者用の窒素源として適した
ものであり、またそれを酵素で分解すれば、ペプチド態
となるので消化吸収性がさらに優れることになる。した
がって、ＢＣＡＡ／ＡＡＡモル比の高い蛋白質を酵素で
分解して得られるペプチド混合物はＢＣＡＡ／ＡＡＡモ
ル比も高く、消化吸収性がよいので、肝疾患患者用の窒
素源としてふさわしいと考えられる。しかしながら、日
常入手可能な食品、あるいは食品原料において、そのＢ
ＣＡＡ／ＡＡＡモル比はそれ程高いものはない。ＪＪＰ
ＥＮ ３（２）１０９−１１７（１９８１）に示される
ように、植物性蛋白質においては、ＢＣＡＡ／ＡＡＡモ
ル比は、ほぼ０．８〜３．０、動物性蛋白質においても
２．１〜３．４程度である。Furthermore, if a protein having a low AAA content, ie, a high BCAA / AAA molar ratio, is used, the protein source is suitable as a nitrogen source for patients with liver disease, and it can be decomposed with enzymes. In this case, the peptide is in the form of a peptide, so that the digestibility is further improved. Therefore, a peptide mixture obtained by enzymatically decomposing a protein having a high BCAA / AAA molar ratio has a high BCAA / AAA molar ratio and has good digestibility and absorbability, and thus is considered to be suitable as a nitrogen source for liver disease patients. However, in daily available foods or food ingredients, the B
The CAA / AAA molar ratio is not very high. JJP
As shown in EN 3 (2) 109-117 (1981), the BCAA / AAA molar ratio is approximately 0.8-3.0 for plant proteins, and 2.1-3.0 for animal proteins. It is about 4.

【０００９】[0009]

【発明が解決しようとする課題】本発明は、このような
技術の現状に鑑み、苦味が少なく、フィッシャー比の高
いペプチド混合物を効率的に創製する目的でなされたも
のである。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention has been made in view of the state of the art in order to efficiently create a peptide mixture having a low bitterness and a high Fisher ratio.

【００１０】[0010]

【課題を解決するための手段】本発明は、上記目的を達
成するためになされたものであって、上記したように、
現時点において、フィッシャー比の高い天然由来の食品
は見当らないし、また、アミノ酸製剤は、高価であるだ
けでなく、本来、食品というべきものではない点、及
び、食品安全上の観点から、安全性の高い天然物指向が
高い現状に鑑みてなされたものである。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been made to achieve the above object, and as described above,
At this time, there is no naturally derived food with a high Fisher ratio, and amino acid preparations are not only expensive, but they are not originally foods. It was made in view of the high natural product orientation.

【００１１】このような現状に鑑み、本発明者らは、天
然物ないし食品由来であって、しかも苦味のないきわめ
てすぐれた高フィッシャー比ペプチドを安全且つ低コス
トで調製することとし、各方面から検討を行ったが、成
功するには至らなかった。In view of this situation, the present inventors decided to prepare a safe and low-cost peptide having a high Fischer ratio, which is derived from natural products or foods and has no bitterness. After some consideration, it did not succeed.

【００１２】そこで本発明者らは、発想の転換を行い、
単一の原料を使用するのではなく、複数のもののブレン
ドにはじめて着目した。そして、本発明者らは、使用原
料の選択、各原料の処理方法等について検討を行い、ア
レルゲンや苦味の除去を確認し、最適混合比率をつきと
め、これらの研究結果を総合して、遂に、目的とする高
フィッシャー比ペプチド混合物の創製にはじめて成功
し、本発明をなすに至った。Therefore, the present inventors made a change in idea,
Instead of using a single raw material, we first focused on blending multiple things. Then, the present inventors studied the selection of the raw materials used, the processing method of each raw material, etc., confirmed the removal of allergens and bitterness, determined the optimal mixing ratio, integrated these research results, and finally The first successful creation of the desired high Fischer ratio peptide mixture has led to the present invention.

【００１３】すなわち本発明は、数多くの天然系原料の
内、牛乳蛋白質に着目し、更にその内からカゼインと乳
清蛋白質を選択して、これら双方を原料として使用する
こととし、これらをそれぞれ別個に酵素加水分解して、
蛋白質を分解するとともに抗原性を消失せしめ、次い
で、フィッシャー比を高めることを阻害するとともに苦
味の１要因ともなる疎水性成分、特に芳香族アミノ酸を
特異的に吸着・除去した後、両者を特定比率にて混合す
ることにより、苦味が少なく、アミノ酸バランスが人乳
に近似し、フィッシャー比が高いペプチド混合物を調製
する方法に関するものである。[0013] That is, the present invention focuses on milk proteins from among many natural raw materials, further selects casein and whey protein from among them, uses both of them as raw materials, and separately uses them. Enzymatic hydrolysis into
It decomposes proteins and loses antigenicity, then specifically adsorbs and removes hydrophobic components, especially aromatic amino acids, which inhibit the increase of Fisher ratio and also contributes to bitterness. The present invention relates to a method for preparing a peptide mixture having a low bitterness, an amino acid balance close to that of human milk, and a high Fisher ratio by mixing the same.

【００１４】[0014]

【発明の実施の形態】本発明においては、従来のように
単一の原料ではなく、特に、カゼインと乳清蛋白質とい
う複数の原料を使用する。カゼインとしては、α、β、
κ等の各種カゼインのほか、カゼインカルシウム、カゼ
インナトリウム、カゼインカリウム、カゼインマグネシ
ウム等が適宜使用される。また、カゼインのトリプシン
分解物から得られるカゼインホスホペプチド（以下、Ｃ
ＰＰということもある）は、カゼインに比してフィッシ
ャー比が１０以上と高くかつ苦味がないので、カゼイン
の一部として又は全部を置き換えて、有利に使用するこ
とができる。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION In the present invention, a plurality of raw materials, namely, casein and whey protein, are used instead of a single raw material as in the prior art. Casein includes α, β,
In addition to various caseins such as κ, calcium caseinate, sodium caseinate, potassium caseinate, magnesium caseinate and the like are appropriately used. In addition, casein phosphopeptide (hereinafter referred to as C) obtained from trypsin digest of casein
PP may be used as a part or whole of casein, since it has a higher Fischer ratio of 10 or more than casein and has no bitterness.

【００１５】乳清蛋白質（ホエイ蛋白質ということもあ
る）としては、牛乳からカゼインやチーズを製造する際
に副生する酸ホエイ、スイートホエイを原料とし、これ
を精製したものがすべてホエイ蛋白質として使用され
る。例えば、ホエイ蛋白質としては、ホエイ蛋白質精製
物、ホエイ蛋白質分画物、そ（れら）の処理物（濃縮、
希釈、ペースト化、乾燥等の処理をおこなったもの）が
挙げられる。そして、ホエイ（乳清）蛋白質精製物とし
ては、ホエイ（乳清）蛋白質濃縮物、ホエイ（乳清）蛋
白質分離物が挙げられる。As whey protein (sometimes called whey protein), acid whey and sweet whey, which are by-products when producing casein and cheese from milk, are used as raw materials, and all purified whey proteins are used as whey protein. Is done. For example, whey protein includes purified whey protein, fractionated whey protein, and processed products thereof (concentration,
Which have been subjected to processes such as dilution, pasting, and drying). The purified whey (whey) protein includes whey (whey) protein concentrate and whey (whey) protein isolate.

【００１６】ホエイ蛋白質濃縮物（Ｗｈｅｙ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅ、以下「ＷＰＣ」とい
うこともある）は、チーズやカゼインを製造する際に副
生してくるホエイを濃縮し、結晶する乳糖を分離した液
の乾燥処理物を指称している。そしてこのＷＰＣはその
含有物の３５〜８０％が蛋白質で、そのうち約６０％が
β−ラクトグロブリンで、約２０％がα−ラクトアルブ
ミンであり、更に約１３％が免疫グロブリンからなって
おり、通常は中性である。Whey protein concentrate (Whey Prot)
Ein Concentrate (hereinafter sometimes referred to as “WPC”) refers to a dried product obtained by concentrating whey produced as a by-product when producing cheese or casein and separating lactose that crystallizes. In this WPC, 35-80% of its content is protein, of which about 60% is β-lactoglobulin, about 20% is α-lactalbumin, and about 13% is immunoglobulin, Usually neutral.

【００１７】ホエイ蛋白質分離物（Ｗｈｅｙ Ｐｒｏｔ
ｅｉｎ Ｉｓｏｌａｔｅ、以下「ＷＰＩ」ということも
ある）は、ＷＰＣとは区別されるものであって、陰イオ
ン交換カラムにホエイ蛋白質を吸着させ、ｐＨ調整によ
り溶出させた後、限外濾過膜により蛋白質を濃縮した
後、乾燥したもので、高純度に分離された未変性ホエイ
蛋白質であり、灰分、脂肪、炭水化物がずっと少なくな
っている。特に脂肪分は１％以下と少なくなっている。Whey protein isolate (Whey Prot)
ein Isolate (hereinafter sometimes referred to as “WPI”) is distinguished from WPC, in which whey protein is adsorbed on an anion exchange column, eluted by pH adjustment, and then protein is passed through an ultrafiltration membrane. Is a native whey protein that has been dried after being concentrated, and has a much lower level of ash, fat and carbohydrates. In particular, the fat content is as low as 1% or less.

【００１８】また、ホエイ（乳清）蛋白質分画物は、酸
ホエイ、スイートホエイを脱乳糖して分画されるものを
すべて指し、例えばα−ラクトアルブミン、β−ラクト
グロブリン等が例示される。[0018] The whey (whey) protein fraction refers to all fractions obtained by de-lactating acid whey and sweet whey, and examples thereof include α-lactalbumin and β-lactoglobulin. .

【００１９】本発明のＢＣＡＡ／ＡＡＡのモル比の高い
ペプチド混合物は、このＢＣＡＡ／ＡＡＡのモル比の高
い蛋白質を酵素分解し、ＡＡＡおよび、ＡＡＡを含むペ
プチド部分を遊離させ、除去することによって得ること
ができる。The peptide mixture having a high molar ratio of BCAA / AAA of the present invention can be obtained by enzymatically decomposing the protein having a high molar ratio of BCAA / AAA to liberate and remove AAA and the peptide portion containing AAA. be able to.

【００２０】本発明においてはこれらの蛋白質は後述す
るように酵素による加水分解を受けやすくし、ＡＡＡお
よび、ＡＡＡを含むペプチド部分を遊離させやすくする
ために、水溶系において加熱し、あるいは酸、アルカリ
条件下におくことによって、変性させておくことが好適
である。このことによって蛋白質に対して酵素が作用し
やすくなり、したがってＡＡＡまたはＡＡＡを含むペプ
チド部分を遊離させやすくなる。In the present invention, these proteins are heated in an aqueous system, or acid or alkaline, in order to facilitate hydrolysis by an enzyme as described later and to facilitate release of AAA and a peptide portion containing AAA. It is preferable that the denatured product be denatured by being placed under conditions. This facilitates the action of the enzyme on the protein, and thus facilitates the release of AAA or the peptide portion containing AAA.

【００２１】蛋白質を加水分解する酵素としてはエンド
プロテアーゼおよびエキソプロテアーゼを用いる。エン
ドプロテアーゼのみではＡＡＡまたはＡＡＡを含むペプ
チド部分を遊離させることが困難であり、またエキソプ
ロテアーゼのみでは蛋白質の低分子化を図ることができ
ず、目的とするペプチド混合物を得ることができない。[0021] Endoproteases and exoproteases are used as enzymes for hydrolyzing proteins. It is difficult to release AAA or a peptide portion containing AAA using only the endoprotease, and it is not possible to reduce the molecular weight of the protein using only the exoprotease, and it is not possible to obtain a desired peptide mixture.

【００２２】本発明に示されるようにエンドプロテアー
ゼおよびエキソプロテアーゼを組み合わせて作用させ、
さらに後述の吸着剤処理をすることにより、本発明のペ
プチド混合物を得ることができる。このようにして得ら
れたペプチド混合物は苦みや渋み、あるいはアミノ酸臭
などほとんど無く、肝疾患患者用の窒素源としてふさわ
しいものである。As shown in the present invention, an endoprotease and an exoprotease are allowed to act in combination,
Further, the peptide mixture of the present invention can be obtained by performing the adsorbent treatment described below. The peptide mixture thus obtained has little bitterness, astringency, or smell of amino acids, and is suitable as a nitrogen source for liver disease patients.

【００２３】本発明に用いられるエンドプロテアーゼと
しては、ＡＡＡまたはＡＡＡを含むペプチド部分のＣ末
端あるいはＮ末端のペプチド結合に作用する酵素であれ
ば、動物由来、植物由来、あるいは微生物由来のどんな
酵素でも構わない。たとえば豚あるいは牛の内臓から製
造されるペプシン、あるいはキモトリプシンは蛋白質中
のＡＡＡのＣ末端側のペプチド結合を主に切断するた
め、本発明に使用する酵素としてふさわしいものであ
る。The endoprotease used in the present invention may be any enzyme derived from animals, plants, or microorganisms, as long as it acts on the C-terminal or N-terminal peptide bond of AAA or a peptide portion containing AAA. I do not care. For example, pepsin or chymotrypsin produced from pig or bovine offal is suitable for use in the present invention because it mainly cleaves the peptide bond at the C-terminal side of AAA in protein.

【００２４】本発明においてはエンドプロテアーゼとし
て１ないし２種類以上を組み合わせて用いることができ
る。エンドプロテアーゼ１種類のみでは必ずしも蛋白質
に含まれるすべてのＡＡＡまたはＡＡＡを含むペプチド
部分のＣ末端あるいはＮ末端のペプチド結合に作用する
とは限らないため、種類のことなるエンドプロテアーゼ
を組み合わせて用いることが望ましい。In the present invention, one or more endoproteases can be used in combination. Since only one type of endoprotease does not necessarily act on the C-terminal or N-terminal peptide bonds of all AAAs or peptide portions containing AAA contained in a protein, it is preferable to use a combination of different types of endoproteases. .

【００２５】本発明に用いられるエキソプロテアーゼと
しては、ＡＡＡまたはＡＡＡを含むペプチド部分のＣ末
端あるいはＮ末端のペプチド結合に順次作用する酵素で
あれば、動物由来、植物由来、あるいは微生物由来のど
んな酵素でも構わない。The exoprotease used in the present invention may be any enzyme derived from animals, plants, or microorganisms, as long as it acts sequentially on the C-terminal or N-terminal peptide bond of AAA or a peptide portion containing AAA. But it doesn't matter.

【００２６】酵素分解の程度は、酵素分解された後のペ
プチド混合物溶液の平均分子量が５０００以下、好まし
くは２００〜３０００となるように作用温度、作用時
間、基質／酵素量比を調整する。The degree of enzymatic degradation is adjusted by adjusting the working temperature, the working time, and the substrate / enzyme ratio so that the average molecular weight of the peptide mixture solution after the enzymatic decomposition is 5,000 or less, preferably 200 to 3,000.

【００２７】酵素処理終了後、酵素を失活させる。次い
で直ちに吸着剤処理を行ってもよいが、その前に濾過処
理を行って不要な固形分をあらかじめ除去をしておく
と、更に効率的に処理が行われ、すぐれたペプチドが得
られる。濾過処理としては、各種の濾過処理が適宜行わ
れるが、例えば分画分子量０．０５〜１μｍ、好適には
０．０８〜０．８μｍの精密濾過膜で濾過することがで
きる。After completion of the enzyme treatment, the enzyme is deactivated. Then, the adsorbent treatment may be performed immediately. However, if the unnecessary solid content is removed in advance by performing a filtration treatment before that, the treatment can be performed more efficiently, and an excellent peptide can be obtained. Various filtration treatments are appropriately performed as the filtration treatment. For example, the filtration treatment can be performed with a microfiltration membrane having a molecular weight cut-off of 0.05 to 1 μm, preferably 0.08 to 0.8 μm.

【００２８】ただここで、本発明にしたがって、カゼイ
ン等をエンドプロテアーゼで加水分解すると、得られた
分解物は、分子量が正規分布に近く、平均分子量も小さ
くて抗原性を示すことはないが、苦味が強いという欠点
を有する。Here, according to the present invention, when casein or the like is hydrolyzed with an endoprotease, the resulting decomposed product has a molecular weight close to a normal distribution and a small average molecular weight, and does not show antigenicity. It has the drawback of strong bitterness.

【００２９】そこで、この苦味の除去について検討の結
果、苦味の強いペプチド画分は疎水性の強いペプチドを
多く含む傾向にあること、疎水性の強いペプチドにはＴ
ｙｒ、Ｐｈｅが多い傾向にあることを見出した。そし
て、これら疎水性成分を特異的に選択・吸着して除去
し、苦味を除去する方法について各方面から検討の結
果、吸着剤処理に着目した。Therefore, as a result of examination of the removal of the bitter taste, it was found that the peptide fraction having a strong bitter taste tends to contain a large amount of the peptide having a strong hydrophobicity,
It was found that yr and Phe tended to be large. Then, as a result of various studies on methods for specifically selecting and adsorbing and removing these hydrophobic components to remove bitterness, attention was paid to adsorbent treatment.

【００３０】すなわち本発明においては、上記した酵素
処理物、特に必要あれば濾過処理して得た透過液につい
て、吸着剤を用いて処理する。吸着剤としては、疎水性
成分、例えばＴｙｒ、ＰｈｅといったＡＡＡ等を特異的
に吸着するものであればどのような吸着剤も使用するこ
とができ、合成吸着剤セパビーズＳＰ２０６（三菱化学
製）、ダイヤイオンＨＰ２０（三菱化学製）等が例示さ
れる。That is, in the present invention, the above-mentioned enzyme-treated product, particularly the permeate obtained by filtration if necessary, is treated with an adsorbent. As the adsorbent, any adsorbent capable of specifically adsorbing a hydrophobic component such as AAA such as Tyr and Phe can be used. Synthetic adsorbent Sepabead SP206 (manufactured by Mitsubishi Chemical), diamond Ion HP20 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) and the like are exemplified.

【００３１】本発明においては、このようにして得られ
たカゼイン由来のペプチドと乳清蛋白質由来のペプチド
とをブレンドする。両者の混合比率は、前者１重量部に
対して、後者が０．５〜３重量部、好ましくは１〜２重
量部である。In the present invention, the casein-derived peptide and the whey protein-derived peptide thus obtained are blended. The mixing ratio of the two is 0.5 to 3 parts by weight, preferably 1 to 2 parts by weight, with respect to 1 part by weight of the former.

【００３２】既述した工程によって製造したカゼイン由
来及び乳清蛋白質由来の各ペプチドは、必要に応じ、最
終工程の処理液を濃縮、殺菌あるいは乾燥等の各処理を
行うことができる。上記によって得たペプチド混合物に
ついても同様である。Each of the peptides derived from casein and whey protein produced by the above-mentioned steps can be subjected to various treatments such as concentration, sterilization or drying of the treatment solution in the final step, if necessary. The same applies to the peptide mixture obtained above.

【００３３】このようにして、分岐鎖アミノ酸（ＢＣＡ
Ａ）／芳香族アミノ酸（ＡＡＡ）のモル比、つまりフィ
ッシャー比が８〜２０であるペプチド混合物が得られ
る。しかもこの本発明に係る高フィッシャー比ペプチド
混合物は、苦味が少なく、アミノ酸バランスが人乳に類
似しており、卓越している。Thus, the branched-chain amino acids (BCA
A peptide mixture having a molar ratio of A) / aromatic amino acid (AAA), that is, a Fisher ratio of 8 to 20, is obtained. Moreover, the high Fischer ratio peptide mixture according to the present invention has less bitterness, an amino acid balance similar to human milk, and is excellent.

【００３４】本発明のペプチド混合物は、肝疾患患者の
経口剤や、あるいは食事療法用の治療食の窒素源として
用いることができる。The peptide mixture of the present invention can be used as an oral preparation for patients with liver disease or as a nitrogen source in therapeutic diets for diet.

【００３５】本発明の肝疾患患者用栄養補給組成物は上
記ペプチド混合物を含有するものであり、該ペプチド混
合物からなる窒素源を用いる以外は公知の肝疾患患者用
の経口剤や、あるいは食事療法用の治療食と同様に、必
要に応じて各種の蛋白質源としての窒素化合物、炭水化
物、脂質、ビタミン類、ミネラル類、その他の添加物な
どを添加混合して製造し、あるいはこれらと併用しても
差支えない。The nutritional supplement composition for a liver disease patient of the present invention contains the above-mentioned peptide mixture, except that a known oral preparation for a liver disease patient or diet is used except for using a nitrogen source comprising the peptide mixture. As in the case of therapeutic foods, nitrogen compounds as various protein sources, carbohydrates, lipids, vitamins, minerals, other additives, etc. are added and mixed as necessary, and manufactured or used in combination with these. No problem.

【００３６】蛋白質源としては、アミノ酸スコアの高い
牛乳ホエイ蛋白質、卵白アルブミン、卵白グロブリン等
の動物性蛋白質、大豆蛋白質などの植物性蛋白質を用い
ることができる。As a protein source, milk whey proteins having a high amino acid score, animal proteins such as ovalbumin and egg white globulin, and vegetable proteins such as soy protein can be used.

【００３７】炭水化物としては、公知の単糖類、オリゴ
糖類、多糖類、食物繊維などを用いることができる。例
えば、グルコース、マルトース、シュークロース、ラク
トース、イソマルトース、デンプン、デキストリンなど
を例示できる。As the carbohydrate, known monosaccharides, oligosaccharides, polysaccharides, dietary fiber and the like can be used. For example, glucose, maltose, sucrose, lactose, isomaltose, starch, dextrin and the like can be exemplified.

【００３８】脂質としては、公知のココナッツ油、コー
ン油、綿実油、ラード、パーム油、ピーナッツ油、サフ
ラワー油、大豆油、ヒマワリ油、ヤシ油、ＭＣＴ油、魚
油など、あるいは脂肪酸組成を調整するために、上記の
脂肪を各種混合した調整脂肪などが例示できる。As the lipid, known coconut oil, corn oil, cottonseed oil, lard, palm oil, peanut oil, safflower oil, soybean oil, sunflower oil, coconut oil, MCT oil, fish oil, etc., or the fatty acid composition is adjusted. For this purpose, there may be mentioned, for example, an adjusted fat obtained by mixing various kinds of the above fat.

【００３９】本発明に係る組成物は、上記のように肝疾
患患者用に使用されるだけではなく、肝機能が低下して
いる病弱者、乳幼児に対して使用できるほか、飲酒等に
よる一時的肝機能の低下者に対しても使用できるし、肝
機能の低下を予防するために保健的に健常者が使用する
ことももちろん可能である。したがって本発明に係る組
成物は、医薬タイプで使用するほか、飲料、食品、栄養
食品、機能性食品、特定保健用食品、ドリンク剤等飲食
品タイプで使用し、肝臓病患者のみならず、病弱者、病
後の人、また、健常人に対しても広く使用できるもので
ある。The composition according to the present invention can be used not only for patients with liver disease as described above, but also for the sick and babies with impaired liver function, It can be used for people with reduced liver function, and of course, it can be used by healthy people to prevent liver function deterioration. Therefore, the composition according to the present invention is used not only for patients with liver disease but also for those with illness, not only for use in the pharmaceutical type, but also for beverages, foods, nutritional foods, functional foods, foods for specified health uses, and food and drink types such as drinks. It can be widely used for healthy persons, persons after illness, and healthy persons.

【００４０】以下に、本発明を実施例にしたがってさら
に詳細に説明するが、本発明はその趣旨を越えないかぎ
り本実施例に限定されるものではない。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to the examples unless it departs from the gist.

【００４１】[0041]

【実施例１】出発物質として分離乳清蛋白質（ＷＰＩ）
を用い、下記する酵素分解処理を行って、高フィッシャ
ー比ペプチド（ＨＦＰ）を調製した。Example 1 Separated whey protein (WPI) as starting material
Was used to perform the enzymatic degradation treatment described below to prepare a high Fisher ratio peptide (HFP).

【００４２】基質となるＷＰＩを３〜１０（ｗ／ｗ）％
となるように溶解後、ＮａＯＨとＫＯＨを約２：１の割
合に混合した溶液によって、ｐＨ６．０〜８．０に調整
した。これは、最終的に得られるＨＦＰ中のミネラルバ
ランスを考慮し、且つ、脱塩処理の省略を目的とするも
のである。次いで、９０℃、１５分間の加熱処理によっ
て変性した後、プレート式殺菌機により１２０℃、１５
秒間殺菌処理した。The WPI serving as a substrate is 3 to 10 (w / w)%
After dissolution, the pH was adjusted to 6.0 to 8.0 with a solution in which NaOH and KOH were mixed at a ratio of about 2: 1. This aims at considering the mineral balance in the finally obtained HFP and omitting the desalting treatment. Then, after denaturation by heat treatment at 90 ° C. for 15 minutes, the plate was sterilized at 120 ° C. for 15 minutes by a plate-type sterilizer.
Sterilized for 2 seconds.

【００４３】５０℃に冷却した後、中性エンドプロテア
ーゼであるアマノＮ（天野製薬製）を、基質に対し１／
１００とするように添加し、５時間保持した。９０℃、
１５分間の条件で酵素を失活させた後、５０℃に冷却し
た。次いで酸性エキソプロテアーゼであるアマノＭ（天
野製薬製）を、基質に対し１／１００となるように添加
し、５０℃で４時間保持した。アマノＭの至適ｐＨは
３．５〜４．５とされているが、アマノＮ分解後のｐＨ
域であるｐＨ５．０〜７．０でも充分に活性を有するた
め、特にここではｐＨの調整はしなった。After cooling to 50 ° C., Amano N (manufactured by Amano Pharmaceutical), a neutral endoprotease, was added to the substrate in 1 /
100 and kept for 5 hours. 90 ° C,
After inactivating the enzyme for 15 minutes, the mixture was cooled to 50 ° C. Next, Amano M (manufactured by Amano Pharmaceutical Co., Ltd.), which is an acidic exoprotease, was added so as to be 1/100 with respect to the substrate, and kept at 50 ° C. for 4 hours. The optimal pH of Amano M is 3.5 to 4.5, but the pH after Amano N decomposition
Even in the pH range of 5.0 to 7.0, the activity was sufficient, so the pH was not particularly adjusted here.

【００４４】次いで、９０℃、１５分間の条件で酵素を
失活した後、２０〜４０℃まで冷却し、そして、分画粒
子径が０．１〜０．４５μｍの精密濾過膜にて透過液を
分取した。Next, after inactivating the enzyme at 90 ° C. for 15 minutes, the enzyme was cooled to 20 to 40 ° C., and the permeate was passed through a microfiltration membrane having a fraction particle size of 0.1 to 0.45 μm. Was collected.

【００４５】この透過液中の総固形分に対し６倍量以上
の合成吸着剤セパビーズＳＰ２０６（三菱化学製）を添
加し、パス内で３０分間静かに攪拌した（なお、この操
作はカラム内で行うことも可能であった。）。次いでこ
れを濾過し、濾過液を濃縮して、ＨＦＰ濃縮液を得た。
また、これを更に凍結乾燥、噴霧乾燥して、それぞれ粉
末状のＨＦＰを得た。The synthetic adsorbent Sepabeads SP206 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) was added in an amount 6 times or more the total solid content in the permeate, and the mixture was gently stirred for 30 minutes in a path (this operation was performed in a column. It was also possible.) Then, this was filtered, and the filtrate was concentrated to obtain a HFP concentrate.
This was further freeze-dried and spray-dried to obtain powdered HFP.

【００４６】[0046]

【実施例２】出発物質としてカゼイン（Ｎａ−Ｃａｓｅ
ｉｎａｔｅ及びＣａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ）を用い、下
記する酵素分解を行って、苦味の少ない高フィッシャー
比ペプチド（ＨＦＰ）を調製した。Example 2 Casein (Na-Case) was used as a starting material.
Inate and Ca-Caseinate) were subjected to the following enzymatic degradation to prepare a high-Fisher-ratio peptide (HFP) having a low bitterness.

【００４７】基質となるＮａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ ３
重量部とＣａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ７重量部を５〜１５
（ｗ／ｗ）％となるように溶解後、ＮａＯＨとＫＯＨを
約１：４の割合に混合した溶液によってｐＨ６．０〜
８．０に調整した。次いで、プレート式殺菌機により１
２０℃、１５秒間殺菌処理した。Na-Caseinate 3 serving as a substrate
5 parts by weight and 7 parts by weight of Ca-Caseinate
(W / w)%, and then the solution was mixed with NaOH and KOH at a ratio of about 1: 4 to obtain a pH of 6.0 to 6.0.
It was adjusted to 8.0. Then, 1 plate sterilizer
Sterilization treatment was performed at 20 ° C. for 15 seconds.

【００４８】５０℃に冷却した後、中性エンドプロテア
ーゼであるアマノＮ（天野製薬製）を、基質に対し１／
２５０となるように添加し、２４時間保持した。９０
℃、１５分間の条件で酵素を失活させた後、２０〜４０
℃に冷却し、そして、分画粒子径が０．１〜０．４５μ
ｍの精密濾過膜にて透過液を分取した。After cooling to 50 ° C., Amano N (manufactured by Amano Pharmaceutical), a neutral endoprotease, was added to the substrate in 1 /
250 and kept for 24 hours. 90
After inactivating the enzyme under the conditions of 15 ° C. and 15 minutes, 20 to 40
° C, and the fractionated particle size is 0.1-0.45μ
The permeated liquid was collected with a microfiltration membrane of m.

【００４９】この透過液中の総固形分に対し６倍量以上
の合成吸着剤セパビーズＳＰ２０６（三菱化学製）を添
加し、パス内で３０分間静かに攪拌した（なお、この操
作はカラム内で行うことも可能であった。）。次いでこ
れを濾過し、濾過液を濃縮して、ＨＦＰ濃縮液を得た。
また、これを更に凍結乾燥、噴霧乾燥して、それぞれ粉
末状のＨＦＰを得た。The synthetic adsorbent Sepabeads SP206 (manufactured by Mitsubishi Chemical Corporation) was added in an amount 6 times or more the total solid content in the permeate, and the mixture was gently stirred for 30 minutes in a path (this operation was performed in a column. It was also possible.) Then, this was filtered, and the filtrate was concentrated to obtain a HFP concentrate.
This was further freeze-dried and spray-dried to obtain powdered HFP.

【００５０】上記実施例によって処理されたＮａ−Ｃａ
ｓｅｉｎａｔｅ・Ｃａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ及びＷＰＩ
のアミノ酸組成とフィッシャー比を、下記表１に示す。Na-Ca treated according to the above embodiment
seinate / Ca-Caseinate and WPI
Table 1 below shows the amino acid composition and Fisher ratio of

【００５１】[0051]

【表１】 [Table 1]

【００５２】[0052]

【実施例３】上記実施例によって処理された凍結乾燥Ｗ
ＰＩの６Ｋｇと凍結乾燥Ｎａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ・Ｃ
ａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅの４Ｋｇを混合して、苦味の少
ない、アミノ酸バランスが人乳に類似し、フィッシャー
比が９．７のペプチド混合物を得た。Embodiment 3 Lyophilized W treated according to the above embodiment
6 kg of PI and freeze-dried Na-Caseinate C
4 Kg of a-Caseinate was mixed to obtain a peptide mixture having a low bitter taste, an amino acid balance similar to human milk, and a Fisher ratio of 9.7.

【００５３】[0053]

【実施例４】実施例３の凍結乾燥Ｎａ−Ｃａｓｅｉｎａ
ｔｅ・Ｃａ−Ｃａｓｅｉｎａｔｅ４Ｋｇのうちの１Ｋｇ
をＣＰＰ（特公平７−２４５９７の方法により製造した
もの）に置き代えて、他は実施例３と同様の方法で、苦
味の少ない、アミノ酸バランスが人乳に類似し、フィッ
シャー比が１０．８のペプチド混合物を得た。なお、使
用したＣＰＰのアミノ酸組成とフィッシャー比は、下記
表２のとおりであった。Example 4 Lyophilized Na-Caseina of Example 3
1kg of te ・ Ca-Caseinate 4kg
Was replaced with CPP (produced by the method of Japanese Patent Publication No. Hei 7-24597), and the others were the same as in Example 3 except that the amino acid balance was similar to human milk with less bitterness, and the Fisher ratio was 10.8. Was obtained. The amino acid composition and the Fisher ratio of the CPP used were as shown in Table 2 below.

【００５４】[0054]

【表２】 [Table 2]

【００５５】[0055]

【発明の効果】本発明により、肝疾患患者用に適した風
味の良い、窒素源としてのペプチド混合物が製造可能で
ある。該ペプチド混合物は肝疾患患者用に用いられる各
種の治療用製剤、食事療法用の治療食などの窒素源とし
て幅広く使用することが可能である。また、その他肝機
能の低下した人々に対しても広く使用できるし、肝機能
低下を予防する目的で健常者が保健用として広く使用す
ることももちろん可能である。Industrial Applicability According to the present invention, a flavorful peptide mixture as a nitrogen source suitable for patients with liver disease can be produced. The peptide mixture can be widely used as a nitrogen source for various therapeutic preparations used for patients with liver disease, therapeutic diets for diet therapy, and the like. In addition, it can be widely used for people with reduced liver function, and of course, it can be widely used for health by healthy persons for the purpose of preventing liver function deterioration.

【００５６】本発明の肝疾患患者用組成物は、窒素源と
して主としてペプチド混合物を含有するものであるた
め、消化管からの吸収性が良好であると共に、アミノ酸
混合物と比較して浸透圧が低いために下痢などが回避で
き、さらに経口から摂取する場合でも風味が良く、患者
に負担を与えることが少ない。また肝疾患患者の血漿中
のアミノ酸パターンおよびＢＣＡＡ／ＡＡＡモル比を有
意に改善することができる。Since the composition for a patient with liver disease of the present invention mainly contains a peptide mixture as a nitrogen source, it has good absorbability from the gastrointestinal tract and has a lower osmotic pressure than the amino acid mixture. Therefore, diarrhea and the like can be avoided, and even when taken orally, the flavor is good and the burden on the patient is small. In addition, it can significantly improve the amino acid pattern and the BCAA / AAA molar ratio in the plasma of a liver disease patient.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 植田 智子 東京都東村山市栄町１−21−３ 明治乳 業株式会社 栄養科学研究所内 (56)参考文献 特開 平２−300137（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−272694（ＪＰ，Ａ) 特開 平５−276896（ＪＰ，Ａ) 特開 平７−264992（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A23L 1/305 A23J 3/08 - 3/10 A23J 3/34 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (72) Inventor Tomoko Ueda 1-21-3 Sakaecho, Higashimurayama-shi, Tokyo Meiji Dairy Products Co., Ltd. Nutrition Science Research Institute (56) References JP-A-2-300137 (JP, A) JP-A-3-272694 (JP, A) JP-A-5-276896 (JP, A) JP-A-7-264992 (JP, A) (58) Fields investigated (Int. Cl. ⁶ , DB name) A23L 1 / 305 A23J 3/08-3/10 A23J 3/34

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 カゼインと乳清蛋白質を、各々個別に加
水分解し、疎水性成分を吸着・除去した後、前者１に対
して後者を０．５〜３、好ましくは１〜２の割合で混合
すること、を特徴とする苦味が少なく、アミノ酸バラン
スが人乳に類似し、分岐鎖アミノ酸／芳香族アミノ酸の
モル比が８〜２０であるペプチド混合物を調製する方
法。1. After hydrolyzing casein and whey protein individually to adsorb and remove hydrophobic components, the ratio of the former to the former is 0.5 to 3, preferably 1 to 2. A method of preparing a peptide mixture having a low bitterness, an amino acid balance similar to human milk, and a branched chain amino acid / aromatic amino acid molar ratio of 8 to 20, characterized by mixing. 【請求項２】 乳清蛋白質として、乳清蛋白質精製物、
乳清蛋白質分画物、該処理物から選ばれる少なくともひ
とつを使用すること、を特徴とする請求項１に記載の方
法。2. Whey protein purified whey protein,
The method according to claim 1, wherein at least one selected from a whey protein fraction and the processed product is used. 【請求項３】 乳清蛋白質精製物が乳清蛋白質濃縮物
（ＷＰＣ）又は乳清蛋白質分離物（ＷＰＩ）であり、乳
清蛋白質分画物がβ−ラクトグロブリン又はα−ラクト
アルブミンであること、を特徴とする請求項１又は２に
記載の方法。3. The purified whey protein is whey protein concentrate (WPC) or whey protein isolate (WPI), and the whey protein fraction is β-lactoglobulin or α-lactalbumin. The method according to claim 1, wherein: 【請求項４】 請求項１〜３のいずれか１項に記載の方
法で調製してなるペプチド混合物。4. A peptide mixture prepared by the method according to claim 1. 【請求項５】 請求項４に記載のペプチド混合物を含有
してなることを特徴とする組成物。5. A composition comprising the peptide mixture according to claim 4. 【請求項６】 該組成物が肝疾患患者用栄養補給組成物
であることを特徴とする請求項５に記載の組成物。6. The composition according to claim 5, wherein the composition is a nutritional supplement composition for a patient with liver disease.