JP2986551B2 - Bone formation implant - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 技術分野 本発明は、骨誘導因子を含有する骨形成用移植体、及
び骨誘導因子の担体として用いることのできる複合多孔
質体に関する。Description: TECHNICAL FIELD The present invention relates to an osteogenic implant containing an osteoinductive factor, and a composite porous body that can be used as a carrier for the osteoinductive factor.

更に詳しくは、生体吸収性親水性材料からなる多孔性
構造体の表面に生体吸収性高分子材料を付与してなる複
合多孔質体に骨誘導因子を担持することを特徴とする骨
形成用移植体、及び骨誘導因子の担体として有用な当該
複合多孔質体に関する。More specifically, an osteogenic implant characterized in that an osteoinductive factor is carried on a composite porous body obtained by providing a bioabsorbable polymer material on the surface of a porous structure made of a bioabsorbable hydrophilic material. And a composite porous body useful as a carrier for osteoinductive factors.

背景技術 骨誘導因子（bone morphogenetic protein:BMP）は、
皮下組織又は筋組織内の未分化間葉系細胞に作用して、
これを軟骨芽細胞又は骨芽細胞に分化させ、軟骨又は骨
を形成させる活性タンパク質である。BMPは、ウシ脱灰
骨基質中に存在する異所性骨誘導活性を示す物質として
発見されたが、純粋に単離されず、具体的な構造は未解
明のままであった。しかし、遺伝子工学の技術により、
ヒトBMPをコードする遺伝子がクローニングされ、アミ
ノ酸配列が明らかになった。また、ヒトBMPは、アミノ
酸配列が相同性を有する複数の近縁タンパク質からなる
一群のファミリーを構成することも判明し、多数の種類
の組換えヒト骨誘導因子（rhBMP）が創製されてきた〔S
cience Vol.242,pp.1528−1534（1988）;Proc.Natl.Ac
ad.Sci.USA Vol.87,pp.2220−2224（1990）;Progress
in Growth Factor Research,Vol.1,pp.267−280
（1989）；特表平−２−500241号、特表平３−503649
号、特表平３−505098号、WO91/18098、WO92/05199、WO
93/09229の各公報〕。また、形質転換体による生産も行
われている。Background Art Bone morphogenetic protein (BMP)
Acting on undifferentiated mesenchymal cells in subcutaneous tissue or muscle tissue,
It is an active protein that differentiates into chondroblasts or osteoblasts and forms cartilage or bone. BMP was discovered as a substance exhibiting ectopic osteoinductive activity present in bovine demineralized bone matrix, but was not isolated purely and the specific structure remained unclear. However, with the technology of genetic engineering,
The gene encoding human BMP has been cloned and the amino acid sequence has been determined. It has also been found that human BMPs constitute a group of families consisting of a plurality of closely related proteins having homologous amino acid sequences, and many types of recombinant human osteoinductive factors (rhBMPs) have been created [ S
cience Vol. 242, pp. 1528-1534 (1988); Proc. Natl. Ac
ad.Sci.USA Vol.87, pp.2220-2224 (1990); Progress
in Growth Factor Research, Vol. 1, pp. 267-280
(1989); Japanese Patent Publication No. Hei 2-500241, Japanese Patent Publication No. Hei 3-503649
No., JP-T-3-505098, WO91 / 18098, WO92 / 05199, WO
Publications 93/09229]. Production by transformants has also been performed.

前記のBMPを利用して、骨又は軟骨の損傷、欠損ある
いは形成不全等の治療を行う方法は、そのBMPの構造が
未解明であった頃から種々提案されており、組換えヒト
BMPの生産に伴って更に盛んになっている。BMPを利用す
る際には、BMPを単独で局所に埋植して骨形成を誘導さ
せることが極めて困難であるので、一般的には、BMPを
担体に担持させた形で局所に埋植する。これは、BMPに
よる局所での骨誘導には数日ないし数週間が必要であ
り、少なくともその間にBMPを拡散させずにその局所に
留めることが主要な目的である。このように、BMP用担
体はBMPと共に生体内に埋植されるので、BMP活性を損な
わずに、低毒性、低発癌性及び低抗原性等の特性を有す
ることが要求され、更に入手容易性や、場合により生分
解性を有することも望まれる。Various methods have been proposed for treating bone, cartilage damage, defect or dysplasia, etc., using the above-mentioned BMP since the structure of the BMP had not been elucidated.
It has become even more active with the production of BMP. When using BMP, it is extremely difficult to induce bone formation by implanting BMP alone locally, so in general, BMP is locally implanted in a form supported by a carrier. . This requires several days or weeks for local osteoinduction by BMPs, and the main goal is to keep the BMPs local at least during that time without spreading. As described above, since the carrier for BMP is implanted in the living body together with BMP, it is required to have properties such as low toxicity, low carcinogenicity and low antigenicity without impairing the BMP activity, and furthermore, it is easily available. Also, in some cases, it is also desired to have biodegradability.

既に提案されている技術としては、例えば、アテロコ
ラーゲンからなる担体にBMPを担持させた移植体（特開
昭62−89629号公報）、セラミックス材料支持体にBMPと
コラーゲン担体とを含浸させた移植体（特開昭60−2534
55号公報）や、rhBMPと多孔性生体分解性ポリマーと自
家血とからなる組成物（米国特許第5,171,579号明細
書）等がある。Examples of the techniques already proposed include, for example, an implant in which BMP is supported on a carrier composed of atelocollagen (Japanese Patent Application Laid-Open No. 62-89629) and an implant in which BMP and a collagen carrier are impregnated in a ceramic material support. (Japanese Patent Laid-Open No. 60-2534
No. 55) and a composition comprising rhBMP, a porous biodegradable polymer and autologous blood (US Pat. No. 5,171,579).

しかし、BMPとコラーゲン担体のみからなる移植体で
は成形性が不十分で強度がなく、しかも生体での分解が
速いので、生体内での形状維持も不十分で、骨形成が必
ずしも充分ではなかった。また、成形性及び生体内部で
の形状維持を向上させるためにセラミック材料等の非分
解性あるいは分解の遅い物質を支持体として又は担体に
混合して用いた場合は、これらの物質が生体に吸収され
ずに残留し、均一な骨組織の形成を阻害する、あるいは
残留担体が骨のリモデリング等による骨吸収の原因とな
る可能性を有する等の問題点があった。更に、多孔性生
体分解性ポリマーと自家血とからなる組成物には、手術
時の操作性や成形性の点で更に改善が望まれていた。However, implants consisting only of BMP and collagen carrier have insufficient moldability and lack of strength, and are rapidly degraded in vivo, so their shape maintenance in vivo is also insufficient, and bone formation is not always sufficient . In addition, when non-degradable or slowly decomposing substances such as ceramic materials are used as a support or mixed with a carrier in order to improve moldability and shape maintenance inside the living body, these substances are absorbed by the living body. However, there is a problem in that it remains without being retained and inhibits the formation of uniform bone tissue, or that the residual carrier may cause bone resorption due to bone remodeling or the like. Further, a composition comprising a porous biodegradable polymer and autologous blood has been desired to be further improved in terms of operability during operation and moldability.

その上、コラーゲンや生体分解性ポリマーを用いた従
来公知の移植体を生体内に移植した場合には、まず新生
骨が移植体周囲に形成され、その後移植体の分解に伴っ
て徐々に内部にも骨形成が進むことが知られている。例
えば、不溶性骨基質やコラーゲン膜を担体とする移植体
では、新生骨が移植体周囲から徐々に内部に形成される
ことが観察されたとする報告がある（THEBONE,1993.12,
Vol.7,No.4,pp97−104）。In addition, when a conventionally known implant using collagen or a biodegradable polymer is implanted into a living body, new bone is first formed around the implant, and then gradually embedded inside as the implant degrades. It is also known that bone formation proceeds. For example, it has been reported that in a transplant using an insoluble bone matrix or a collagen membrane as a carrier, it is observed that new bone is gradually formed from around the transplant to the inside (THEBONE, 1993.12,
Vol.7, No.4, pp97-104).

また、特開平１−232967号公報には、相互に連結した
空隙部を有するポリ乳酸（PLA）を空隙部にヒアルロン
酸のベロアが充填され、更にこれらにBMP等の活性物質
を担持した移植骨片代用組成体が開示されている。但
し、具体的な製造例、試験例の記載は無く、その骨形成
能は不明である。当該技術は、構造を維持する骨格製造
がPLAであり、その空隙部にヒアルロン酸ゲルが充填さ
れたものである点において、本発明とは異なる。当該公
報に記載された組成体の骨格構造をなす「相互に連結し
た空隙部を有するポリ乳酸」は、移植後少なくとも90日
間に渡り残存し物理的な性質を維持することが記載され
ており、生体内に長期間残存するものであることが明ら
かである。また、当該公報記載の組成体はPLAスポンジ
を用いていることから、堅く脆い性状を有し、可塑性、
弾性が低く、埋植時の成形性・操作性が不充分である。Japanese Patent Application Laid-Open No. 1-232967 discloses a transplanted bone graft in which a polylactic acid (PLA) having interconnected voids is filled with velours of hyaluronic acid in the voids, and these are further loaded with an active substance such as BMP. Displacement compositions are disclosed. However, there is no description of specific production examples and test examples, and its osteogenic ability is unknown. This technique is different from the present invention in that the skeleton production for maintaining the structure is PLA, and the pores are filled with a hyaluronic acid gel. `` Polylactic acid having interconnected voids '' forming the skeletal structure of the composition described in the publication is described as remaining for at least 90 days after transplantation and maintaining physical properties, It is clear that it remains in the living body for a long time. Further, since the composition described in the publication uses PLA sponge, it has a hard and brittle property, plasticity,
Poor elasticity and poor moldability and operability during implantation.

更に、特開平３−23864号公報には生体組織用充填材
として有用な、ポリ乳酸系を埋入したコラーゲンスポン
ジが、又、ドイツ特許第3,841,397号には、コラーゲン
スポンジをポリエステルで被覆した徐放性医薬担体が開
示されている。しかしながらこれらの担体にBMPを適用
して骨形成用移植体として使用することは何等開示が無
い。Further, JP-A-3-23864 discloses a collagen sponge having a polylactic acid system embedded therein useful as a filler for living tissue, and German Patent No. 3,841,397 discloses a sustained release in which a collagen sponge is coated with polyester. An active pharmaceutical carrier is disclosed. However, there is no disclosure of applying BMP to these carriers and using them as an osteogenic implant.

従って、成形性や生体内での形状維持に優れ、手術時
の操作性が優れており、且つ、新生骨形成に優れたBMP
を適用した骨形成用移植体が切望されていた。Therefore, BMP that is excellent in moldability and shape maintenance in the living body, excellent in operability during surgery, and excellent in new bone formation
There has been a long-awaited need for an osteogenic implant to which is applied.

発明の開示 本発明者等は、成形性や生体内での形状維持が良好で
手術時の操作性に優れ、且つ、新生骨形成に優れた、BM
Pを適用した骨形成用移植体の創製を目的として、鋭意
研究した結果、生体吸収性親水性材料からなる多孔性構
造体の表面に生体吸収性高分子材料からなる表面層を有
する複合多孔質体に、骨誘導因子を担持することを特徴
とする骨形成用移植体が、前記目的を達成することを見
出し本発明を完成した。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present inventors have proposed a BM having excellent moldability and shape maintenance in a living body, excellent operability at the time of surgery, and excellent new bone formation.
As a result of intensive research for the purpose of creating an osteogenic implant using P, a composite porous material having a surface layer made of a bioabsorbable polymer material on the surface of a porous structure made of a bioabsorbable hydrophilic material The present inventors have found that an osteogenic implant characterized by carrying an osteoinductive factor on the body achieves the above object, and completed the present invention.

また、本発明は、ゼラチン、ヒアルロン酸、ヒアルロ
ン酸誘導体からなる群から選択される１種又は２種以上
の化合物からなる生体吸収性親水性材料からなる多孔性
構造体の表面に、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸
共重合体及びポリ〔ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）
プロパン〕無水物とセバシン酸との共重合体からなる群
から選択される１種または２種以上の生体吸収性高分子
材料を付与してなる複合多孔質体にも関する。Further, the present invention provides, on the surface of a porous structure made of a bioabsorbable hydrophilic material composed of one or more compounds selected from the group consisting of gelatin, hyaluronic acid, and a hyaluronic acid derivative, polylactic acid, Polylactic acid / polyglycolic acid copolymer and poly [bis (p-carboxyphenoxy)
Propane] The present invention also relates to a composite porous body provided with one or more bioabsorbable polymer materials selected from the group consisting of a copolymer of anhydride and sebacic acid.

以下、本発明を詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in detail.

本発明による骨形成用移植体の代表的な実施態様にお
ける部分断面図を図１に模式的に示す。すなわち、本発
明の骨形成用移植体１は、 （１）生体吸収性親水性材料からなる多孔性構造体２
と、その表面に形成された生体吸収性高分子材料からな
る表面層３とからなる複合多孔質体４と、 （２）前記複合多孔質体４の表面及び内部（すなわち、
多孔性構造体２及び／又は表面層３内部、及び／又は孔
内部）に分散して担持された骨誘導因子（BMP）５とか
らなる。また、骨形成用移植体１には多数の孔６が含ま
れる。これらの孔６は連続性を有し外部に開放されてい
る。なお、図１に示す部分断面図は模式的なものであ
り、各構成部分の形状や大きさ等は図示した態様に何ら
限定されるものではない。A partial cross-sectional view of an exemplary embodiment of an osteogenic implant according to the present invention is schematically shown in FIG. That is, the bone forming implant 1 of the present invention comprises: (1) a porous structure 2 made of a bioabsorbable hydrophilic material;
And a composite porous body 4 comprising a surface layer 3 made of a bioabsorbable polymer material formed on the surface thereof; and (2) a surface and an inside of the composite porous body 4 (that is,
Osteoinductive factor (BMP) 5 dispersed and supported in the porous structure 2 and / or the surface layer 3 and / or the pores). The bone forming implant 1 includes a large number of holes 6. These holes 6 are continuous and open to the outside. The partial cross-sectional view shown in FIG. 1 is a schematic view, and the shape, size, and the like of each component are not limited to the illustrated embodiment.

本発明の移植体は、主に生体内で骨（軟骨を含む）を
形成すべき部位に移動して使用する。本発明の移植体を
生体内に移植すると、埋植した局所でBMPが作用して骨
形成を誘発する。複合多孔質体は、このBMPを局所に留
め、望ましい形態の骨を形成させるデリバリー・システ
ムの役割を果たしながら、それ自体も徐々に生体内で吸
収を受け、新生骨に置換される。The implant of the present invention is mainly used by moving to a site where bone (including cartilage) is to be formed in a living body. When the implant of the present invention is implanted in a living body, BMP acts on the implanted site to induce bone formation. The composite porous body itself gradually absorbs in vivo and is replaced by new bone, while retaining the BMP locally and serving as a delivery system for forming a desired form of bone.

本発明で使用することのできる骨誘導因子（BMP）
は、未分化の間葉系細胞に作用して、これを軟骨細胞や
骨芽細胞へ分化させ、軟骨又は骨を形成させる活性を有
するタンパク質であれば特に限定されず、その調製方法
も限定されない。しかし、免疫性等の臨床上の安全性及
び品質の安定した材料を大量に入手することができる点
で遺伝子組換え技術により製造されたヒトBMPが好まし
い。すなわち、ヒト骨誘導因子をコードする塩基配列を
含む組換えDNAを含有する形質転換体（細胞又は微生
物）を培養し、それら形質転換体によって産生された組
換えヒト骨誘導因子を単離、精製して調製した組換えヒ
ト骨誘導因子（rhBMP）である。これらのヒト骨誘導因
子（rhBMP）としては、例えば、rhBMP−２、rhBMP−
３、rhBMP−４（rhBMP−2Bともいう）、rhBMP−５、rhB
MP−６、rhBMP−７、rhBMP−８、rhBMP−９、rhBMPのヘ
テロダイマー又はこれらの改変体や一部損体を挙げるこ
とができる。これらのタンパク質を単独で又は２種以上
の混合物として用いることができる。好ましくはrhBMP
−２である。Osteoinductive factor (BMP) that can be used in the present invention
Is not particularly limited as long as it acts on undifferentiated mesenchymal cells to differentiate it into chondrocytes and osteoblasts and has the activity of forming cartilage or bone, and its preparation method is not limited. . However, human BMP produced by genetic recombination technology is preferred in that a large amount of clinically stable material such as immunity and stable quality can be obtained. That is, a transformant (cell or microorganism) containing a recombinant DNA containing a nucleotide sequence encoding a human osteoinductive factor is cultured, and the recombinant human osteoinductive factor produced by the transformant is isolated and purified. And a recombinant human osteoinductive factor (rhBMP). These human osteoinductive factors (rhBMP) include, for example, rhBMP-2, rhBMP-
3, rhBMP-4 (also called rhBMP-2B), rhBMP-5, rhB
Examples include MP-6, rhBMP-7, rhBMP-8, rhBMP-9, and a heterodimer of rhBMP, or a modified or partially impaired form thereof. These proteins can be used alone or as a mixture of two or more. Preferably rhBMP
-2.

これらのrhBMPは、哺乳動物細胞（例えば、CHO細
胞）、微生物（例えば、大腸菌）又は酵母細胞等で発現
したものであることができる。既に大量生産法及び精製
法が確立しているrhBMPとしてはrhBMP−２があるが、そ
の他のrhBMPを同様に製造し、精製して用いることがで
きる〔Progress in Growth Factor Research,Vol.
1,pp.267−280（1989）〕。既に知られている精製rhBMP
−２は、分子量約30,000の二量体タンパク質である。そ
れぞれの単量体は、Asn⁵⁶残基にハイ・マンノース型の
糖鎖を有している〔Abstract Sixth Interraction S
ymposium of the Protein Society,San Diego,CA
（1992）〕。These rhBMPs can be those expressed in mammalian cells (eg, CHO cells), microorganisms (eg, E. coli), yeast cells, and the like. Although rhBMP-2 has already been established as a mass production method and a purification method, rhBMP-2 can be used.Other rhBMPs can be similarly produced, purified and used (Progress in Growth Factor Research, Vol.
1, pp. 267-280 (1989)]. Already known purified rhBMP
-2 is a dimeric protein with a molecular weight of about 30,000. Each monomer has a high mannose-type sugar chain at Asn ⁵⁶ residue [Abstract Sixth Interraction S
ymposium of the Protein Society, San Diego, CA
(1992)].

本発明による骨形成用移植体の支持体を構成する複合
多孔質体は、前記のとおり多孔性構造体と表面層とから
なる。多孔性構造体は、本発明の移植体の多孔質構造の
基礎となる骨格を有する製造体である。この多孔性構造
体の具体的構造は特に限定されず、その多孔性構造体を
用いて製造した移植体が、例えば、スポンジ状、網目状
又は繊維状等の任意の多孔質構造を構成することのでき
る基礎構造を有していればよい。また、表面層は、前記
の多孔性構造体の少なくとも一部の表面に付与された層
であって、多孔性構造体と一体となって複合多孔質体を
形成する。好ましい表面層は、多孔性構造体の多孔質構
造に沿ってその全表面に一様に膜状に付与されるもので
ある。更に、表面層自体がより微細な多孔質構造を有し
ていることがより好ましい。The composite porous body constituting the support of the bone formation implant according to the present invention comprises a porous structure and a surface layer as described above. The porous structure is a product having a skeleton that is the basis of the porous structure of the implant of the present invention. The specific structure of the porous structure is not particularly limited, and the implant manufactured using the porous structure may have an arbitrary porous structure such as a sponge, a mesh, or a fiber. What is necessary is just to have the basic structure which can be performed. The surface layer is a layer provided on at least a part of the surface of the porous structure, and forms a composite porous body integrally with the porous structure. The preferred surface layer is one that is uniformly applied to the entire surface of the porous structure in the form of a film along the porous structure. Further, it is more preferable that the surface layer itself has a finer porous structure.

本発明による骨形成用移植体は、前記の多孔質構造を
有するので、移植された後に、速やかに血液や生体内の
細胞が多孔質体の孔内に入りこみ、骨形成に適した微小
環境が移植体全体に（すなわち、移植体外部表面のみで
なく移植体内部の孔内にも）形成されると共に、移植体
表面及び／又は孔内に担持されたBMPが速やかに放出さ
れ、更にその後も多孔性構造体及び／又は表面層内に担
持されたBMPが、それらの多孔性構造体及び／又は表面
層の吸収に伴い徐々に放出される。従って、移植体表面
のみばかりでなく、移植体内部の孔内、更には移植体の
吸収された部分に骨が形成される。Since the bone formation implant according to the present invention has the above-described porous structure, blood and cells in a living body quickly enter the pores of the porous body after transplantation, and a microenvironment suitable for bone formation is formed. The BMP formed on the entire implant (that is, not only on the outer surface of the implant but also in the pores inside the implant) and the BMP carried on the implant surface and / or the pores are rapidly released, and thereafter, The BMP carried in the porous structure and / or the surface layer is gradually released with the absorption of the porous structure and / or the surface layer. Therefore, bone is formed not only on the surface of the implant, but also in the pores inside the implant, and furthermore, in the absorbed part of the implant.

本発明における生体吸収性親水性材料とは、生体親和
性（すなわち、低毒性で、生体内での異物反応が低く、
そして生体組織との親和性が良好であり）、生体吸収性
（すなわち、生分解性があり）を有し、親水性である
が、水溶性が低いか又は水不溶性であり、しかも常温で
固体状であって成形性を有する物質である。この様な性
状を有する材料で有れば特に制限は無い。具体的には、
ゼラチン、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸誘導体〔例え
ば、ヒアルロン酸と、キトサン、ポリアミノガラクトサ
ミン、アルギン酸トリエタノールアミン、ゼラチン、カ
ゼイン、ケラチン、コラーゲン、ミオシン及び／又はフ
ィブロイン等とのポリイオン複合体（例えば、特開平６
−73103号公報参照）〕、コラーゲン、コラーゲン誘導
体（例えば、サクシニル化コラーゲン、メチル化コラー
ゲン）、キトサン、キトサン誘導体（例えば、メチルピ
ロリドンキトサン）、ポリアミノガラクトサミン、アル
ギン酸トリエタノールアミン、カゼイン、ケラチン、ミ
オシン、又はフィブロイン等を挙げることができる。好
ましくは生体由来物質である、ゼラチン、ヒアルロン
酸、ヒアルロン酸誘導体（特にゼラチン／ヒアルロン酸
ポリイオン複合体）、コラーゲン、コラーゲン誘導体、
キトサン、キトサン誘導体、又はアルギン酸トリエタノ
ールアミン、より好ましくはゼラチン、ゼラチン／ヒア
ルロン酸ポリイオン複合体又はコラーゲンを用いる。前
記の生体吸収性親水性材料を単独で又は２種以上を組み
合わせて用いることができる。The bioabsorbable hydrophilic material in the present invention refers to a biocompatibility (ie, low toxicity, low foreign body reaction in a living body,
It has good affinity for living tissues), has bioabsorbability (that is, has biodegradability), is hydrophilic, but has low water solubility or is insoluble in water, and is solid at room temperature. It is a substance that is in a shape and has moldability. There is no particular limitation as long as the material has such properties. In particular,
Gelatin, hyaluronic acid, hyaluronic acid derivatives [for example, polyion complex of hyaluronic acid with chitosan, polyaminogalactosamine, triethanolamine alginate, gelatin, casein, keratin, collagen, myosin and / or fibroin (for example, JP-A-6
-73103)], collagen, collagen derivatives (eg, succinylated collagen, methylated collagen), chitosan, chitosan derivatives (eg, methylpyrrolidone chitosan), polyaminogalactosamine, triethanolamine alginate, casein, keratin, myosin, Or fibroin. Gelatin, hyaluronic acid, hyaluronic acid derivatives (especially gelatin / hyaluronic acid polyion complex), collagen, collagen derivatives, which are preferably biological substances
Chitosan, chitosan derivatives or triethanolamine alginate, more preferably gelatin, gelatin / hyaluronate polyion complex or collagen is used. The above-mentioned bioabsorbable hydrophilic materials can be used alone or in combination of two or more.

生体吸収性親水性材料からなる多孔性構造体として
は、従来公知の任意の多孔質体を用いることができる。
例えば、ゼラチン多孔質体としては、ゼラチンを水に溶
解し、泡立てた後に凍結乾燥してスポンジ状として調製
した多孔質体を用いることが好ましい。特に、孔径約50
〜500μｍ、密度10〜100mg/ml、及び気孔率90％以上の
ゼラチン多孔質体〔例えば、スポンゼル（商品名：山之
内製薬製）〕は、それ自体の重量の約30倍以上の水を吸
収することができることから、止血剤として実際に用い
られており、更に組織内で容易に吸収されるので体内に
包埋してもよく、抗原性を有さない安全な材料であるこ
とが知られているので最も好ましい。As the porous structure made of the bioabsorbable hydrophilic material, any conventionally known porous body can be used.
For example, as the gelatinous porous body, it is preferable to use a porous body prepared by dissolving gelatin in water, bubbling and freeze-drying to prepare a sponge. In particular, a hole diameter of about 50
A porous gelatin body (eg, Sponzel (trade name: manufactured by Yamanouchi Pharmaceutical Co.)) having a thickness of about 500 μm, a density of 10 to 100 mg / ml, and a porosity of 90% or more absorbs about 30 times or more its own weight of water. It is known that it is a safe material without antigenicity because it is actually used as a hemostatic agent and can be embedded in the body because it is easily absorbed in tissues. Most preferred.

多孔性構造体として用いるコラーゲン多孔質体は、公
知の方法でスポンジ状に成形された低抗原性のアテロコ
ラーゲン由来の多孔質体〔例えば、Helistat（商品名:M
arion Laboratories,Inc.製）〕が好ましい。また、ヒ
アルロン酸誘導体の多孔質体としては、例えば、ゼラチ
ン／ヒアルロン酸ポリイオン複合体からなるスポンジ
（特開平６−73103号公報）、ヒアルロン酸多孔質体と
しては、例えば、ヒアルロン酸を公知の手法により固化
成形したヒアルロン酸多孔質体、キトサン誘導体多孔質
体としては、例えば、Carbohydrate Polymers,20,99−
106（1993）に記載のキトサン誘導体からなる多孔質体
をそれぞれ用いることができる。The collagen porous material used as the porous structure is a porous material derived from low antigenic atelocollagen formed into a sponge shape by a known method [for example, Helistat (trade name: M
arion Laboratories, Inc.)]. Further, as the porous body of the hyaluronic acid derivative, for example, a sponge composed of a gelatin / hyaluronic acid polyion complex (JP-A-6-73103), and as the hyaluronic acid porous body, for example, hyaluronic acid is prepared by a known method. Examples of the hyaluronic acid porous body and the chitosan derivative porous body which are solidified and formed by, for example, Carbohydrate Polymers, 20, 99-
106 (1993) can be used.

多孔性構造体は、任意の形状（例えば、スポンジ状、
網目状、又は繊維状）であることができ、平均孔径が好
ましくは10〜1000μｍ、より好ましくは50〜500μｍ
で、気孔率が好ましくは50％以上、より好ましくは70％
以上、更に好ましくは90％以上の多孔質体である。The porous structure may have any shape (eg, sponge-like,
(Mesh-like, or fibrous), and the average pore size is preferably 10 to 1000 μm, more preferably 50 to 500 μm.
The porosity is preferably 50% or more, more preferably 70%
Above, more preferably 90% or more of the porous body.

本発明の生体吸収性高分子材料とは、生体親和性（す
なわち、低毒性で、生体内での異物反応が低く、そして
生体組織との親和性が良好であり）、生体吸収性（すな
わち、生成分解性があり）を有し、しかも常温で固体状
で成形性並びに一定の強度を有する高分子材料である。
この様な性状を有するポリマーであれば特に制限は無
い。具体的には、人工的に製造され、生体親和性及び生
分解性を有し、更に生体吸収性を有する疎水性のポリマ
ー、例えば、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸共重
合体、ポリ〔ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパ
ン〕無水物（PCPP）とセバシン酸の共重合体〔J.Neuros
urg.,80:283−290（1994）〕、又はポリヒドロキシ酪酸
（PHB）、ポリヒドロキシプロピオン酸（PHP）、ポリリ
ンゴ酸若しくはこれらの共重合体等を用いることができ
る。好ましくは、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸
共重合体、又はポリ〔ビス（ｐ−カルボキシフェノキ
シ）プロパン〕無水物（PCPP）とセバシン酸の共重合体
である。平均分子量5000〜1500000のポリ乳酸又は平均
分子量5000〜1500000でポリ乳酸／ポリグリコール酸の
含有率（モル比）が40％以上であるポリ乳酸ポリグリコ
ール酸共重合体を用いるのが特に好ましい。前記の生体
吸収性高分子材料を単独で又は２種以上を組み合わせて
用いることができる。The bioabsorbable polymer material of the present invention includes biocompatibility (ie, low toxicity, low foreign body reaction in vivo, and good affinity with living tissue), bioabsorbability (ie, It is a polymer material which is solid at room temperature and has moldability and constant strength.
There is no particular limitation as long as the polymer has such properties. Specifically, a hydrophobic polymer which is artificially produced, has biocompatibility and biodegradability, and further has bioabsorbability, for example, polylactic acid, polylactic acid-polyglycolic acid copolymer, poly [bis (P-carboxyphenoxy) propane] Copolymer of anhydride (PCPP) and sebacic acid [J. Neuros
urg., 80: 283-290 (1994)], or polyhydroxybutyric acid (PHB), polyhydroxypropionic acid (PHP), polymalic acid, or a copolymer thereof. Preferably, it is a polylactic acid, a polylactic acid-polyglycolic acid copolymer, or a copolymer of poly [bis (p-carboxyphenoxy) propane] anhydride (PCPP) and sebacic acid. It is particularly preferable to use polylactic acid having an average molecular weight of 5,000 to 1,500,000 or a polylactic acid-polyglycolic acid copolymer having an average molecular weight of 5,000 to 1,500,000 and a polylactic acid / polyglycolic acid content (molar ratio) of 40% or more. The above-mentioned bioabsorbable polymer materials can be used alone or in combination of two or more.

生体吸収性高分子材料からなる表面層を形成するに
は、生体吸収性高分子材料を適当な溶媒に溶解し、これ
を前記多孔性構造体の表面及び内部に任意の方法で添付
・乾燥すればよい。例えば、ポリ乳酸（PLA）又はポリ
乳酸ポリグリコール酸共重合体（PLGA）、特に平均分子
量5000〜1500000のポリ乳酸又は平均分子量5000〜15000
00でポリ乳酸の含有率（モル比）が40％以上であるポリ
乳酸ポリグリコール酸共重合体を0.2〜20％（w/w）、好
ましくは１〜16％（w/w）の濃度で有機溶媒に溶解し、
前記の生体吸収性高分子材料からなる層を多孔性構造体
の表面及び内部の各孔の表面にまで形成することのでき
る任意の方法（例えば、噴霧又は塗布、好ましくは含
浸）で、前記の溶液を多孔性構造体に付与し、更に乾燥
（例えば、通風乾燥、好ましくは凍結乾燥）することに
よって行うことができる。生体吸収性高分子材料溶液を
調製するための有機溶媒としては、例えば、ジオキサ
ン、アセトン、酢酸エチル、ジメチルホルムアミド又は
氷酢酸を用いることができる。In order to form a surface layer made of a bioabsorbable polymer material, the bioabsorbable polymer material is dissolved in an appropriate solvent, and the solution is attached and dried on the surface and the inside of the porous structure by any method. I just need. For example, polylactic acid (PLA) or polylactic acid-polyglycolic acid copolymer (PLGA), particularly polylactic acid having an average molecular weight of 5,000 to 150,000 or an average molecular weight of 5,000 to 15,000
The polylactic acid-polyglycolic acid copolymer having a polylactic acid content (molar ratio) of 40% or more at a concentration of 0.2 to 20% (w / w), preferably 1 to 16% (w / w) Dissolved in organic solvent,
The above-mentioned layer made of a bioabsorbable polymer material can be formed by any method (for example, spraying or coating, preferably impregnating) capable of forming a layer on the surface of the porous structure and the surface of each pore in the inside. It can be performed by applying the solution to the porous structure and further drying (for example, ventilation drying, preferably freeze drying). As an organic solvent for preparing the bioabsorbable polymer material solution, for example, dioxane, acetone, ethyl acetate, dimethylformamide or glacial acetic acid can be used.

多孔性構造体と表面層とから前記の方法によって得ら
れた複合多孔質体へのBMPの担持を良好にする等の目的
で、所望により、他の添加剤、例えば、ゲル化剤、界面
活性剤、安定化剤、及び／又はpH調整剤を適宜用いるこ
とができる。ゲル化剤としては、例えば、ヒアルロン
酸、カルボキシメチルセルロース（ナトリウム）、ゼラ
チン、コラーゲン、ゲル状ポリ乳酸／ポリエチレングリ
コール共重合体、又は自家血液等を挙げることができ、
これらの１種又はそれ以上を、BMP添加時又は、BMP添加
の前に加えることができる。For the purpose of improving the loading of BMP on the composite porous body obtained by the above method from the porous structure and the surface layer, if necessary, other additives, for example, a gelling agent, surface activity Agents, stabilizers, and / or pH adjusters can be used as appropriate. Examples of the gelling agent include hyaluronic acid, carboxymethylcellulose (sodium), gelatin, collagen, gelled polylactic acid / polyethylene glycol copolymer, and autologous blood.
One or more of these can be added at the time of BMP addition or before BMP addition.

また、界面活性剤も、多孔性構造体及び／又は表面層
に添加することができ、好ましくは生体吸収性高分子材
料からなる表面層に添加する。表面層に添加する場合に
は、生体吸収性高分子材料を付与する際に添加するか、
あるいは生体吸収性高分子材料の付与後に添加（もしく
は洗浄処理）を行うことができる。多孔性構造体に添加
する場合は、構造体の調製時に添加するか、あるいは表
面層の付与前に添加することができる。界面活性剤とし
ては、好ましくは非イオン性界面活性剤、より好ましく
はポリオキシエチレンソルビタンアルキルエステル類、
例えば、ポリソルベート80やポリソルベート20等が好ま
しい。Also, a surfactant can be added to the porous structure and / or the surface layer, and is preferably added to the surface layer made of a bioabsorbable polymer material. When added to the surface layer, when adding the bioabsorbable polymer material,
Alternatively, the addition (or washing treatment) can be performed after the application of the bioabsorbable polymer material. When it is added to the porous structure, it can be added at the time of preparation of the structure or before the surface layer is applied. As the surfactant, preferably a nonionic surfactant, more preferably polyoxyethylene sorbitan alkyl esters,
For example, polysorbate 80 and polysorbate 20 are preferable.

生体吸収性高分子材料からなる表面層に界面活性剤
（特に、ポリソルベート80）を添加すると、親水性が改
善され、更に移植体に対する血液や細胞の吸収性・侵入
性が向上するので好ましい。これらの場合には、界面活
性剤0.01〜10重量％、好ましくは0.05〜２重量％を、表
面層の表面に添加するか若しくは界面活性剤を含む溶液
で洗浄処理をしてもよい。It is preferable to add a surfactant (especially, polysorbate 80) to the surface layer made of a bioabsorbable polymer material because the hydrophilicity is improved, and the absorbability and penetration of blood and cells into the transplant are further improved. In these cases, 0.01 to 10% by weight, preferably 0.05 to 2% by weight, of a surfactant may be added to the surface of the surface layer, or may be washed with a solution containing the surfactant.

なお、安定化剤としては、例えば、グリシン等のアミ
ノ酸類や糖類、pH調整剤としては、例えば、クエン酸等
の製剤学的に許容される有機酸及び鉱酸を用いることが
でき、いずれも前記のゲル化剤や界面活性剤と同様の方
法で添加することができる。In addition, as a stabilizer, for example, amino acids and saccharides such as glycine, and as a pH adjuster, for example, a pharmaceutically acceptable organic acid and a mineral acid such as citric acid can be used. It can be added in the same manner as the above-mentioned gelling agent and surfactant.

生体吸収性親水性材料からなる多孔性構造体の表面に
生体吸収性高分子材料からなる表面層を有する複合多孔
質体は、平均孔径が好ましくは10〜1,000μｍ、より好
ましくは40〜600μｍであり、気孔率が好ましくは40％
以上、より好ましくは60％以上、更に好ましくは80％以
上である。The composite porous body having a surface layer made of a bioabsorbable polymer material on the surface of a porous structure made of a bioabsorbable hydrophilic material has an average pore size of preferably 10 to 1,000 μm, more preferably 40 to 600 μm. Yes, porosity is preferably 40%
It is more preferably at least 60%, further preferably at least 80%.

当該複合多孔質体は、生体内において一定期間多孔質
構造を維持し、細胞の進入を許し、骨形成の場を提供す
るものであり、且つ、徐々に分割吸収され完全に消失す
るものである。The composite porous body maintains a porous structure in a living body for a certain period of time, allows cells to enter, provides a site for bone formation, and is gradually absorbed and completely disappears. .

本発明の複合多孔質体は、BMPを担持させる前に、必
要に応じて滅菌処理を施しても良い。滅菌方法は医療上
許容される方法であればいずれでもよく、例えば、放射
線滅菌、エチレンオキサイドガス滅菌や乾熱滅菌が挙げ
られる。Before carrying the BMP, the composite porous body of the present invention may be subjected to a sterilization treatment as necessary. The sterilization method may be any method that is medically acceptable, and examples include radiation sterilization, ethylene oxide gas sterilization, and dry heat sterilization.

本発明の骨形成用移植体では、BMPが前記のとおり、
複合多孔質体の少なくとも一部、すなわち、複合多孔質
体の表面、複合多孔質体内部（言い換えれば、多孔性構
造体内部及び／又は表面層内部）及び／又は複合多孔質
体の孔空間内に担持される。特に生体吸収性親水性材料
はBMP水溶液の吸収性が良好であり、またBMPの吸収性も
良好であるため、BMPの担持性に優れる。生体吸収性高
分子材料は疎水性であるが、特に界面活性剤を含有する
か又は界面活性剤で表面処理された場合にはBMPの吸収
性及び吸着性が向上する。複合多孔質体の表面における
BMPの担持性を高めるためにBMPの添加前あるいは添加と
同時にゲル化剤等の基剤を付与してもよい。In the bone formation implant of the present invention, BMP is as described above,
At least a portion of the composite porous body, that is, the surface of the composite porous body, the inside of the composite porous body (in other words, the inside of the porous structure and / or the inside of the surface layer) and / or the pore space of the composite porous body It is carried on. In particular, a bioabsorbable hydrophilic material has good absorbability of an aqueous solution of BMP, and also has good absorbability of BMP. Although the bioabsorbable polymer material is hydrophobic, the absorbability and adsorptivity of BMP are improved, particularly when the material contains a surfactant or is surface-treated with a surfactant. On the surface of the composite porous body
A base such as a gelling agent may be added before or simultaneously with the addition of BMP in order to enhance the supportability of BMP.

本発明の複合多孔質体にBMPを担持させる方法も、BMP
を好ましくは複合多孔質体全体に担持させることのでき
る方法であれば特に限定されるものではない。また、複
合多孔質体の製造工程の任意の段階でBMPを加えること
ができる。例えば、多孔性構造体の製造工程の途中でBM
Pを添加するか、多孔性構造体の完成時にその表面にBMP
を添加するか、又は表面層付与時にBMPを一緒に添加す
ることができる。また、ゲル化剤や界面活性剤等で複合
多孔質体を処理する際にBMPを添加することもできる。The method of supporting BMP on the composite porous body of the present invention is also described in BMP
Is not particularly limited as long as it is a method that can be preferably carried on the entire composite porous body. In addition, BMP can be added at any stage of the production process of the composite porous body. For example, during the manufacturing process of a porous structure, BM
Add P or add BMP to the surface of the porous structure when it is completed.
Or BMP can be added together when the surface layer is applied. BMP can also be added when treating the composite porous body with a gelling agent, a surfactant, or the like.

BMPの添加は、BMP溶液を含浸してそのまま移植体とし
てもよく、含浸体を凍結乾燥等で乾燥して用いてもよ
い。乾燥移植体を用いる場合は、使用時（移植時）に注
射用水や生理塩水で湿潤して使用するか、又は乾燥体の
まま移植しても速やかに血液で湿潤するのでさしつかえ
ない。The BMP may be added by impregnating the BMP solution to obtain an implant as it is, or by drying the impregnated body by freeze-drying or the like. When a dry transplant is used, it can be used wet (injection) with water for injection or physiological saline at the time of use (at the time of transplantation), or even if it is transplanted as it is dry, it can be quickly moistened with blood.

本発明による骨形成用移植体において、移植体1ml当
りの各構成成分の含有量は特に限定するものではない
が、例えば、多孔性構造体を形成する生体吸収性親水性
材料は、通常は500mg以下、好ましくは300mg以下、より
好ましくは５〜100mgであり、表面層を形成する生体吸
収性高分子材料は、通常は500mg以下、好ましくは300mg
以下、より好ましくは５〜200mgであり、そしてBMPは、
骨誘導作用を発現する濃度であればいずれでもよいが、
rhBMP−２を用いる場合は、通常は0.01mg以上、好まし
くは0.01〜20mg、より好ましくは0.1〜5.0mgである。In the osteogenic implant according to the present invention, the content of each component per ml of the implant is not particularly limited, for example, a bioabsorbable hydrophilic material forming a porous structure is usually 500 mg Below, preferably 300 mg or less, more preferably 5 to 100 mg, the bioabsorbable polymer material forming the surface layer is usually 500 mg or less, preferably 300 mg
Below, more preferably 5-200 mg, and BMP is
Any concentration may be used as long as it has an osteoinductive effect.
When rhBMP-2 is used, it is usually 0.01 mg or more, preferably 0.01 to 20 mg, more preferably 0.1 to 5.0 mg.

本発明による骨形成用移植体の好ましい態様の一例を
示せば、以下のとおりである。すなわち、ゼラチン多孔
質体からなる多孔性構造体と、ポリ乳酸ポリグリコール
酸共重合体（PLGA）の表面層とからなる複合多孔質体
に、BMP水溶液を含浸させると、BMP溶液の一部はPLGA表
面層の微小孔を通過してPLGA内部に吸着し、更にその内
部のゼラチン多孔質体基質に吸着する。必要により、凍
結乾燥などによって乾燥する。こうして、複合多孔質全
体にBMPを担持する本発明の骨形成用移植体を得ること
ができる。An example of a preferred embodiment of the implant for bone formation according to the present invention is as follows. That is, when a composite porous body composed of a porous structure composed of a gelatin porous body and a surface layer of a polylactic acid-polyglycolic acid copolymer (PLGA) is impregnated with a BMP aqueous solution, a part of the BMP solution becomes It passes through the micropores in the PLGA surface layer and is adsorbed inside the PLGA, and is further adsorbed on the gelatin porous material substrate inside. If necessary, dry by freeze-drying or the like. In this way, an osteogenic implant of the present invention carrying BMP on the entire composite porous body can be obtained.

こうして得られた本発明の骨形成用移植体を生体内に
移植すると、移植体の表面からBMPが生体内に放出さ
れ、更に、PLGAの吸収やゼラチン多孔質体の吸収に伴
い、内部のBMPも徐々に放出される。When the osteogenic implant of the present invention thus obtained is implanted in a living body, BMP is released into the living body from the surface of the implant, and further, with the absorption of PLGA and the porous gelatin, the internal BMP is absorbed. Is also gradually released.

本発明の移植体は、使用時にBMPを担持させ調製され
てもよく、あるいはBMPを担持させた後使用時まで適切
な条件下で保存されてもよい。本発明の移植体は、各種
の骨又は軟骨の欠損を修復するために、当該分野に知ら
れた方法で、患部に移植することができる。すなわち、
従来知られている移植体と同様に、生体に適用すること
ができ、その目的、用途、適応部位、患者の状態等に応
じて、当業者の常法に従って適宜適用することができ
る。The implant of the present invention may be prepared by supporting BMP at the time of use, or may be stored under appropriate conditions until the time of use after supporting BMP. The implant of the present invention can be implanted into an affected area by a method known in the art in order to repair various bone or cartilage defects. That is,
It can be applied to a living body in the same manner as a conventionally known implant, and can be appropriately applied in accordance with a routine method of those skilled in the art according to the purpose, application, site of application, condition of a patient, and the like.

本発明の移植体は、形成される新生骨の形状を実質的
に規定する。すなわち、その移植体の形状に対応して骨
形成が生じる。従って、骨形成を期待する形状に沿っ
て、本発明の移植体を成形することが望ましい。また、
本発明の移植体は、移植手術後の取り出し手術の必要が
ない。The implant of the present invention substantially defines the shape of the new bone to be formed. That is, bone formation occurs according to the shape of the implant. Therefore, it is desirable to shape the implant of the present invention according to the shape expected for bone formation. Also,
The implant of the present invention does not require a removal operation after the transplant operation.

本発明による各種の骨形成用移植体は、それらを単独
で用いるだけでなく、複数個あるいは複数種を任意に組
み合わせて用いてもよい。また、本発明移植体と別の公
知移植体とを組み合わせて用いてもよい。本発明移植体
の局所への固定、形状の維持を目的として、あるいは強
度が十分でない場合には、他の公知の補強材を併用する
こともできる。補強材は、例えば、移植体を固定するた
めの生体適合性の膜、例えばコラーゲン膜やGTR法に用
いるゴアテックス膜又はポリ乳酸膜等、あるいは本発明
移植体と生体内組織（特に骨）との固定具、例えば金属
プレート、骨結合用ピン又は固定釘等であり、これらの
補強材は、必要があれば、骨形成後に、外科的に取り徐
くこともできる。また、他の公知の移植体と併用して用
いてもよい。Various osteogenic implants according to the present invention may be used alone or in combination of two or more. Further, the transplant of the present invention and another known transplant may be used in combination. For the purpose of fixing the implant of the present invention locally and maintaining its shape, or when the strength is not sufficient, other known reinforcing materials can be used in combination. The reinforcing material is, for example, a biocompatible membrane for fixing the implant, such as a collagen membrane or a Gore-Tex membrane or a polylactic acid membrane used for the GTR method, or the implant of the present invention and an in-vivo tissue (particularly bone). Such as metal plates, osteosynthesis pins or fixation nails, and these reinforcements can be removed surgically after bone formation, if necessary. It may be used in combination with other known transplants.

また、本発明は、ゼラチン、ヒアルロン酸、ヒアルロ
ン酸誘導体からなる群から選択される１種又は２種以上
の化合物からなる生体吸収性親水性材料からなる多孔性
構造体の表面に、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸
共重合体及びポリ〔ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）
プロパン〕無水物とセバシン酸との共重合体からなる群
から選択される１種または２種以上の生体吸収性高分子
材料を付与してなる複合多孔質体にも関する。Further, the present invention provides, on the surface of a porous structure made of a bioabsorbable hydrophilic material composed of one or more compounds selected from the group consisting of gelatin, hyaluronic acid, and a hyaluronic acid derivative, polylactic acid, Polylactic acid / polyglycolic acid copolymer and poly [bis (p-carboxyphenoxy)
Propane] The present invention also relates to a composite porous body provided with one or more bioabsorbable polymer materials selected from the group consisting of a copolymer of anhydride and sebacic acid.

生体吸収性親水性材料として、ゼラチン、及びゼラチ
ン／ヒアルロン酸ポリイオン複合体、生体吸収性高分子
材料として、平均分子量5000〜1500000のポリ乳酸、及
び平均分子量5000〜1500000のポリ乳酸の含有率（モル
比）が40％以上であるポリ乳酸ポリグリコール酸共重合
体からなる群から選択される１種または２種以上の化合
物からなる複合体孔質体が好ましい。また、複合多孔質
体の表面層に更に界面活性剤を添加したものがより好ま
しい。特に好ましくは、多孔性構造体が平均孔径50〜50
0μｍで気孔率90％以上のゼラチンスポンジからなる複
合体孔質体である。Gelatin and gelatin / hyaluronic acid polyion complex as a bioabsorbable hydrophilic material, and polylactic acid with an average molecular weight of 5,000 to 150,000 and polylactic acid with an average molecular weight of 5,000 to 1,500,000 as a bioabsorbable polymer material Ratio) is preferably 40% or more. A composite porous body composed of one or more compounds selected from the group consisting of polylactic acid-polyglycolic acid copolymers is preferred. Further, it is more preferable that a surfactant is further added to the surface layer of the composite porous body. Particularly preferably, the porous structure has an average pore size of 50 to 50.
It is a composite porous body composed of a gelatin sponge having a porosity of 90% or more at 0 μm.

産業上の利用可能性 本発明による骨形成用移植体では、多孔質基質及び表
面層がそれぞれ生体吸収性親水性材料及び生体吸収性高
分子材料から構成される。これらの各材料は、いずれも
それぞれ単独でBMPの担体となり得ることが従来から知
られている。しかし、ゼラチンやコラーゲン等のような
生体吸収性親水性材料は柔らかく変形しやすく、また生
体内での分解性が速く１〜２週間で分解吸収されてしま
う。そのため、生体内で一定期間形状を維持する移植体
を得ることができず、望ましい形状の骨を得ることが困
難なケースもある。一方、生体吸収性高分子材料は疎水
性であるため、BMPの担持性に劣る。また、生体親和性
を有するが、その程度もコラーゲン等の生体親和性より
も弱い。更に、ある程度の堅さを有するが、可塑性が低
く、脆くて成形性が不十分であるとともに、埋植後の湿
潤した状態においても脆く崩れやすい欠点があった。INDUSTRIAL APPLICABILITY In the osteogenic implant according to the present invention, the porous substrate and the surface layer are composed of a bioabsorbable hydrophilic material and a bioabsorbable polymer material, respectively. It has been conventionally known that each of these materials can be used alone as a BMP carrier. However, a bioabsorbable hydrophilic material such as gelatin or collagen is soft and easily deformed, and is rapidly degradable in a living body and is decomposed and absorbed in one to two weeks. Therefore, it is not possible to obtain an implant that maintains its shape in a living body for a certain period of time, and in some cases, it is difficult to obtain a bone having a desired shape. On the other hand, since the bioabsorbable polymer material is hydrophobic, it has poor BMP supportability. In addition, although it has biocompatibility, its degree is weaker than biocompatibility such as collagen. Furthermore, although it has a certain degree of hardness, it has low plasticity, is brittle and has insufficient moldability, and has the disadvantage that it is brittle and easily breaks even in a wet state after implantation.

これらの点より、多孔性に成形した生体吸収性高分子
材料を生体親和性に優れるコラーゲン等で被覆すること
により、生体親和性と強度を併せ持つ担体を得ることが
容易に考えられる。しかし、実際には、この様な担体は
可塑性に劣り、脆くて成形性、操作性が不充分であり、
満足できるものではなかった。From these points, it is easy to obtain a carrier having both biocompatibility and strength by coating a porous bioabsorbable polymer material with collagen or the like having excellent biocompatibility. However, in practice, such a carrier is inferior in plasticity, brittle, and has insufficient moldability and operability.
It was not satisfactory.

本発明者等は、意外にも、生体親和性に劣る生体吸収
性高分子材料をゼラチンスポンジ等の表面に被覆した複
合多孔質体に、BMPを担持した本発明骨形成用移植体
が、生体親和性、親水性が良好で、BMPの担持性にも優
れることを見出した。しかも、本発明移植体は、高分子
材料をコラーゲン等で被覆した場合とは異なり、弾性に
富み手術時の操作性・適応性に優れるものであった。そ
の上、本発明移植体は移植体の周辺部のみならず中心部
においても早期に良好な骨形成が得られ、優れた骨形成
能を有する事を見出した。The present inventors have surprisingly found that the bone forming implant of the present invention, in which BMP is supported on a composite porous body in which a bioabsorbable polymer material having poor biocompatibility is coated on the surface of a gelatin sponge, etc. It has been found that the affinity and the hydrophilicity are good and the BMP supportability is also excellent. Moreover, unlike the case where the polymer material is coated with collagen or the like, the implant of the present invention is rich in elasticity and excellent in operability and adaptability at the time of surgery. In addition, it has been found that the implant of the present invention can obtain good bone formation at an early stage not only in the peripheral part but also in the central part of the implant, and has excellent bone formation ability.

即ち、本発明骨形成用移植体は、以下のように従来の
BMPを担持した移植体には無い、優れた特徴を示す。That is, the implant for bone formation of the present invention is a conventional implant as follows.
It shows excellent features not found in BMP-loaded implants.

本発明の骨形成用移植体は、適当な弾性を有する柔軟
性のある担体であって、成形が容易であり、脆く崩れる
ことがなく、任意の形状に成形することができるばかり
でなく、シート状に成形して巻きつけたり、特定形状の
穴の中に詰め込むことも可能であり、骨欠損部の形状に
容易にフィットし、操作性、適応性に優れるものであ
る。The implant for bone formation of the present invention is a flexible carrier having appropriate elasticity, is easy to mold, is not brittle and does not collapse, and can be molded into any shape, and can be formed into a sheet. It can be formed into a shape and wound, or can be packed into a hole of a specific shape, easily fits the shape of the bone defect, and has excellent operability and adaptability.

また、本発明の移植体は、適当な強度と弾性を有し、
生体外で貯蔵中に長期間にわたり、また生体内に移植後
の必要な期間にわたり、一定の形状を維持することがで
き、骨のできるスペースを確保し望ましい形状の骨を形
成させることが可能である。また、親水性に優れ、移植
体全体に体液（細胞や血液など）の浸透が良好であり、
更に埋植後一定期間多孔質の形状が安定に保持されるの
で、骨細胞の成長に必要な安定な微小環境を提供するこ
とができる。BMPの吸着性が良好でありBMPの担持性に優
れ、生体内でBMPを徐放化することができ、また、BMPの
担体から漏れ出す事もないので、形成される骨が移植体
の形状通りの形となる。更に、骨形成の進行と相まって
一定期間後に、徐々に生体に吸収され、新生骨に置換さ
れるため、移植体それ自体は長期間生体内に残存するこ
となく、良好な骨組織が形成される。移植部位における
刺激性も弱く、PLGA担体に見られる血液性シストの形成
等も無い。Further, the implant of the present invention has appropriate strength and elasticity,
It is possible to maintain a constant shape over a long period of time during storage in vitro and for a required period after implantation in a living body, to secure a space for bone and to form a bone having a desired shape. is there. In addition, it has excellent hydrophilicity and good penetration of body fluids (cells, blood, etc.) throughout the transplant,
Furthermore, since the porous shape is stably maintained for a certain period after implantation, a stable microenvironment necessary for the growth of bone cells can be provided. It has good BMP adsorption and BMP loading properties, can release BMP in vivo in a sustained manner, and does not leak out of the BMP carrier, so the bone formed is the shape of the implant. It takes the shape of a street. Furthermore, after a certain period of time in conjunction with the progression of bone formation, the bone is gradually absorbed into the living body and replaced with new bone, so that a good bone tissue is formed without the implant itself remaining in the living body for a long period of time. . The irritation at the transplant site is weak, and there is no formation of bloody cysts seen in the PLGA carrier.

本発明移植体の生体内での吸収は、その大きさ、形
状、適応部位、ポリマーの種類、濃度等によっても異な
るが、おおよそ３〜12週間で生体内で殆ど吸収される。The absorption of the implant of the present invention in a living body varies depending on the size, shape, site of application, type of polymer, concentration, etc., but is almost completely absorbed in the living body in about 3 to 12 weeks.

これらの性質より、本発明の移植体を用いれば、良好
な新生骨の形成が可能となる。すなわち、後記試験例に
示されるように本発明移植体による新生骨の形成は移植
体周辺部のみならず、移植体中心部においても早期に生
じることが確認された。このことは、本発明移植体がそ
の内部においても骨形成に適した良好な環境を有してい
るものであることを示唆するものである。Due to these properties, the use of the implant of the present invention enables favorable new bone formation. That is, as shown in the test examples described below, it was confirmed that the formation of new bone by the implant of the present invention occurs not only in the peripheral portion of the implant but also in the central portion of the implant at an early stage. This suggests that the implant of the present invention has a favorable environment suitable for bone formation even inside the implant.

また、本発明の複合多孔質体は前記のように生体親和
性、親水性が良好で、BMP等の活性物質の担持性にも優
れ、しかも、適当な弾性を有する柔軟性のある担体であ
って、成形が容易であり、脆く崩れることがなく、任意
の形状に成形することができるばかりでなく、シート状
に成形して巻きつけたり、特定形状の穴の中に詰め込む
ことも可能であり、骨等の組織の欠損部の形状に容易に
フィットし、操作性、適応性に優れるものである。In addition, the composite porous body of the present invention is a flexible carrier having good biocompatibility and hydrophilicity as described above, excellent supportability of an active substance such as BMP, and suitable elasticity. In addition, it is easy to mold, it is not brittle and does not collapse, it can be molded into any shape, it can also be molded into a sheet and wound or packed into a hole of a specific shape, It easily fits the shape of a defect of a tissue such as a bone, and has excellent operability and adaptability.

本発明の複合多孔質体は、生体外での貯蔵中に長期間
にわたり、また生体内に移植後の必要な期間にわたり、
一定の形状及び強度を維持することができる。更に、一
定時間後に、徐々に生体に吸収されそれ自体は長期間生
体内に残存することは無い。移植部位における刺激性も
弱く、生体材料として有用である。The composite porous body of the present invention can be used for a long period of time during storage in vitro, and for a necessary period after implantation into a living body,
A constant shape and strength can be maintained. Furthermore, after a certain period of time, it is gradually absorbed by the living body and does not itself remain in the living body for a long period of time. The irritation at the transplant site is also weak, and it is useful as a biomaterial.

従って、例えばポリペプチド等の活性物質の徐放化担
体として、骨、軟骨等の生体組織の一時的な代用物とし
て、又は骨、軟骨等の生体組織形成用移植体の担体とし
て有用である。特にはBMPを担持した前記骨形成用移植
体の担体として有用である。Accordingly, it is useful, for example, as a sustained-release carrier for active substances such as polypeptides, as a temporary substitute for living tissues such as bone and cartilage, or as a carrier for implants for forming living tissues such as bone and cartilage. In particular, it is useful as a carrier for the bone formation implant carrying BMP.

以下に本発明の骨形成用移植体の優れた効果を証明す
るための試験及び結果を示す。Tests and results for proving the excellent effect of the osteogenic implant of the present invention are shown below.

移植試験例 １ （１）試験方法 雄性ラット（５週齢:Long Evans）の左右の胸部皮下
にエーテル麻酔下にて本発明移植体を移植し、異所性骨
誘導活性を検討した（ｎ＝６〜８）。Transplantation Test Example 1 (1) Test Method The transplant of the present invention was transplanted under right and left subcutaneous thoracic regions of male rats (5 weeks old: Long Evans) under ether anesthesia, and the ectopic osteoinductive activity was examined (n = 6-8).

本発明移植体としては、（Ａ）実施例１にて、D,L−
乳酸／グリコール酸共重合体２重量％含有溶液を吸収さ
せたゼラチンスポンジを用いて調製した移植体〔以下、
移植体（Ａ）とする〕、（Ｂ）実施例１にて、D,L−乳
酸／グリコール酸共重合体４重量％含有溶液を吸収させ
たゼラチンスポンジを用いて調製した移植体〔以下、移
植体（Ｂ）とする〕、及び（Ｃ）実施例２にて、D,L−
乳酸／グリコール酸共重合体４重量％含有溶液を吸収さ
せたゼラチンスポンジを用いて調整した移植体〔以下、
移植体（Ｃ）とする〕であって、それぞれrhBMP−２を
約20μg/100μｌ又は約80μg/10μｌ含有する移植体を
用いた。また、対照として、前記の各移植体（Ａ）、
（Ｂ）及び（Ｃ）であって、rhBMP−２を含有しない移
植体を調製して同様に移植した。組織摘出は移植から１
週間、２週間、３週間及び４週間経過後に行った。摘出
組織について、カルシウム含量測定（原子吸光法）、軟
Ｘ線撮影、pQCT（末梢骨用定量コンピュータ連動断層撮
影）、及び組織学的観察を行ない、骨形成の程度を評価
した。(A) In Example 1, D, L-
An implant prepared using a gelatin sponge having absorbed a solution containing 2% by weight of a lactic acid / glycolic acid copolymer
Transplant (A)], (B) a transplant prepared in Example 1 using a gelatin sponge having absorbed a solution containing 4% by weight of a D, L-lactic acid / glycolic acid copolymer [hereinafter, referred to as “transplant (A)”; Transplant (B)] and (C) In Example 2, D, L-
Implants prepared using a gelatin sponge having absorbed a solution containing 4% by weight of a lactic acid / glycolic acid copolymer
Transplant (C)], which contains about 20 μg / 100 μl or about 80 μg / 10 μl of rhBMP-2, respectively. In addition, as a control, each of the above transplants (A),
(B) and (C) transplants containing no rhBMP-2 were prepared and similarly transplanted. Tissue extraction is 1 from transplant
Weeks, 2, 3, and 4 weeks later. The extirpated tissue was subjected to calcium content measurement (atomic absorption method), soft X-ray photography, pQCT (quantitative computer-assisted tomography for peripheral bone), and histological observation to evaluate the degree of bone formation.

（２）カルシウム含量測定（原子吸光法）結果 摘出組織を２規定塩酸に２日以上浸漬させ、カルシウ
ムを抽出しカルシウム含量を原子吸光法で測定した。(2) Results of Calcium Content Measurement (Atomic Absorption Spectroscopy) The extracted tissue was immersed in 2N hydrochloric acid for 2 days or more to extract calcium, and the calcium content was measured by atomic absorption spectrometry.

移植体のカルシウム含量の経時的変化を図２に示す。
rhBMP−２含有しない対照群（図２中で０μｇで示され
る）では、いずれの移植体（Ａ）、（Ｂ）及び（Ｃ）に
おいても、ほどんどカルシウムは検出されなかったのに
対し、rhBMP−２の20μg/100μｌ含有群（図２中で20μ
ｇで示される）及び80μg/100μｌ含有群（図２中で80
μｇで示される）では、いずれの移植体（Ａ）、（Ｂ）
及び（Ｃ）においても、カルシウム含量は移植から１週
間経過以降、経時的に増加し、ほとんどの群で３週間も
しくは４週間経過後に最大値を示した。また、その値は
rhBMP−２の用量に依存して多くなっていた。なお、図
２にてwkは移植後の経過時間（週）である。FIG. 2 shows the time course of the calcium content of the transplant.
In the control group without rhBMP-2 (indicated by 0 μg in FIG. 2), almost no calcium was detected in any of the transplants (A), (B) and (C), whereas rhBMP-2 was not detected. 2 containing 20 μg / 100 μl (20 μg / 100 μl in FIG. 2)
g) and a group containing 80 μg / 100 μl (80 μg in FIG. 2).
(indicated in μg)), for any of the transplants (A) and (B)
In (C) and also in (C), the calcium content increased over time after one week from the transplantation, and showed the maximum value in most groups after three or four weeks. Also, its value is
Increased depending on the dose of rhBMP-2. In FIG. 2, wk is the elapsed time (week) after transplantation.

（３）軟Ｘ線所見 抽出組織の軟Ｘ線所見によれば、rhBMP−２を含有し
ない対照群では、観察全週間において軟組織様の微弱な
Ｘ線吸収のみが見られ、骨組織の形成は観察されなかっ
た。この微弱なＸ線吸収は、移植体に起因すると考えら
れ、経時的に縮小していることから、移植体が徐々に吸
収されていることが、また、４週間経過後においてもそ
のＸ線吸収が観察されることから、４週間経過後におい
ても移植体の一部が残存していることが示唆された。(3) Soft X-ray findings According to the soft X-ray findings of the extracted tissues, in the control group containing no rhBMP-2, only soft tissue-like weak X-ray absorption was observed in all observation weeks, and the formation of bone tissue was not observed. Not observed. It is considered that this weak X-ray absorption is caused by the transplant, and since it has been reduced with time, it is understood that the transplant is gradually absorbed, and that the X-ray absorption even after 4 weeks has passed. Was observed, suggesting that a part of the transplant remains even after 4 weeks.

一方、rhBMP−２を20μg/100μｌ含有する群では、移
植から１週間経過後より、誘導された骨組織によるＸ酸
吸収像が観察され、これは移植から２週間経過後以降
に、より顕著となった。移植から３週間経過後における
軟Ｘ線写真を図３（rhBMP−２を20μg/100μｌ含有する
移植体（Ａ）〕、図４（rhBMP−２を20μg/100μｌ含有
する移植体（Ｂ）〕、及び図５（rhBMP−２を20μg/100
μｌ含有する移植体（Ｃ）〕に示す。On the other hand, in the group containing rhBMP-2 at 20 μg / 100 μl, an X-acid absorption image by the induced bone tissue was observed one week after the transplantation, and this was more remarkable two weeks after the transplantation. became. Three weeks after the transplantation, soft radiographs are shown in FIG. 3 (transplant (A) containing 20 μg / 100 μl of rhBMP-2), and FIG. 4 (transplant (B) containing 20 μg / 100 μl of rhBMP-2). And FIG. 5 (rhBMP-2 at 20 μg / 100
transplant (C) containing μl).

これらの軟Ｘ線像より、ほぼ移植体の形状に沿って骨
組織が形成していることが示唆された。These soft X-ray images suggested that bone tissue was formed substantially along the shape of the implant.

（４）pQCT（末梢骨用定量CT）によるカルシウム分布検
索結果 pQCTを用いて摘出組織のカルシウム分布の検索を行っ
た。摘出組織の垂直方向断面のカルシウム分布の検索結
果によれば、移植体の表層部のみならず、移植体の内部
においてもまだらなカルシウムの分布が観察され、移植
体の孔部分に沿った骨組織の形成が示唆された。(4) Search Results of Calcium Distribution by pQCT (Quantitative CT for Peripheral Bone) Calcium distribution of the extracted tissue was searched using pQCT. According to the search results of the calcium distribution in the vertical section of the excised tissue, scattered calcium distribution was observed not only in the surface layer of the implant but also inside the implant, and bone tissue along the hole of the implant was observed. Formation was suggested.

（５）組織学的観察結果 摘出組織をギ酸−クエン酸により脱灰操作した後、パ
ラフィン包埋して薄切切片を作製し、ヘマトキシリン＆
エオジン（HE）染色を施し、光学顕微鏡下で観察した。
移植から３週間経過後における移植体（Ｃ）（rhBMP−
２を20μg/100μｌ含有する群）の組織像を図６〜８に
示す。図６は、摘出組織中央部を垂直方向に切断した断
片の組織像（80倍）であり、図７は、水平方向に切断し
た断片の組織像（66倍）である。それらのいずれにおい
ても移植体全体にHEにより赤く染色された骨組織（図６
及び図７の黒い部分）が観察され、移植体の孔に沿って
移植体内部にまで骨組織が形成されていた。図８は、図
７を更に拡大した図である（330倍）。この拡大図で
は、骨基質間隙に毛細血管、骨髄細胞、脂肪組織からな
る骨髄組織も観察された。また、移植体の残存を経時的
に観察した結果、移植から１週間経過後では、多孔質状
の移植体がほぼ残存していたが、一部のゼラチンが吸収
されはじめている像が見られた。移植から２週間経過後
においては、更にゼラチン部分の吸収が進んでいる像が
認められ、移植から３週間経過後ではゼラチン部分のほ
どんどが吸収されていた。(5) Histological Observation Results The extirpated tissue was decalcified with formic acid-citric acid, and then embedded in paraffin to prepare a thin section.
The cells were stained with eosin (HE) and observed under an optical microscope.
3 weeks after transplantation, transplant (C) (rhBMP-
2 to 20 μg / 100 μl) are shown in FIGS. FIG. 6 is a tissue image (80 times) of a section obtained by cutting the central portion of the extracted tissue in the vertical direction, and FIG. 7 is a tissue image (66 times) of the section cut in the horizontal direction. In all of them, the bone tissue was stained red by HE throughout the transplant (FIG. 6).
And black portions in FIG. 7), and bone tissue was formed along the hole of the implant and inside the implant. FIG. 8 is an enlarged view of FIG. 7 (× 330). In this enlarged view, a bone marrow tissue composed of capillaries, bone marrow cells, and adipose tissue was also observed in the bone matrix gap. In addition, as a result of observing the remaining of the transplant over time, almost one week after the transplant, the porous transplant almost remained, but an image in which some gelatin had begun to be absorbed was observed. . Two weeks after the transplantation, an image in which the gelatin part was further absorbed was observed, and three weeks after the transplantation, most of the gelatin part was absorbed.

一方、PLGAは薄い層として移植体内部に残存し、４週
間経過後においても残存を示す大小の孔を内張りする無
色透明の薄い層の像が観察された。On the other hand, PLGA remained as a thin layer inside the implant, and even after 4 weeks, an image of a colorless and transparent thin layer lining large and small holes showing the remaining was observed.

更に、本発明移植体の周囲組織には出血、壊死、浮腫
等の変化は観察されず、本移植体は局所刺激性が弱いこ
とが示された。Furthermore, no changes such as hemorrhage, necrosis, and edema were observed in the tissues surrounding the implant of the present invention, indicating that the implant has weak local irritation.

（６）考察 以上の結果より、本発明移植体ラット異所性骨誘導の
モデルにおいて、rhBMP−２による骨誘導を移植から３
週間経過後もしくはそれ以降に最大とし、更に、移植体
内部においても良好な骨組織を誘導することのできる、
優れた骨誘導能を有するものであることが確認された。
本発明移植体は生体内で徐々に吸収されて縮小し、その
局所刺激性も低いのであることも認められた。(6) Discussion From the above results, in the rat model of ectopic bone induction of the transplanted rat of the present invention, osteoinduction by rhBMP-2
After the lapse of a week or later, it is possible to induce a good bone tissue even inside the implant,
It was confirmed that it had excellent osteoinductive ability.
It was also recognized that the implant of the present invention was gradually absorbed and shrunk in vivo, and had low local irritation.

移植試験例 ２ （１）試験方法 前記移植試験例１と同様にして、本発明移植体として
実施例23で製造した多孔性移植体であって、rhBMP−２
を0.1mg/ml又は0.4mg/ml含有する移植体を用いて試験を
行った。対照として、同様にrhBMP−２を0.1mg/ml又は
0.4mg/ml含有する以下の移植体を調製して移植した。Transplant Test Example 2 (1) Test Method In the same manner as in the above-mentioned transplant test example 1, the porous implant produced in Example 23 as the implant of the present invention was rhBMP-2.
The test was performed using an implant containing 0.1 mg / ml or 0.4 mg / ml. As a control, rhBMP-2 was similarly added at 0.1 mg / ml or
The following transplant containing 0.4 mg / ml was prepared and transplanted.

比較移植体A:米国特許第5,171,579号明細書に記載され
た方法で調整した、PLGAの多孔性マイクロスフェア（平
均粒子径約250μm,平均細孔径約30μｍ）をrhBMP−２溶
液と血液を1:9に混和した溶液に添加し固化させペース
ト状とした移植体。Comparative implant A: PLGA porous microspheres (average particle diameter of about 250 μm, average pore diameter of about 30 μm) prepared by the method described in US Pat. No. 5,171,579 were prepared by adding rhBMP-2 solution and blood to: An implant that is added to the solution mixed in 9 and solidified to form a paste.

比較移植体B:PLGA（モル比＝50:50、分子量＝40,000:ベ
ーリンガーインゲルハイム社製）を16重量％含有するジ
オキサンに塩化ナトリウム顆粒を添加し凍結乾燥後、水
で洗浄し塩化ナトリウムを溶解除去し乾燥して製造した
PLGAスポンジ（孔径100〜500μｍ、気孔率90％）に、rh
BMP−２溶液と血液を1:9に混和した溶液を滴下吸収させ
た移植体。Comparative implant B: PLGA (molar ratio = 50:50, molecular weight = 40,000: manufactured by Boehringer Ingelheim) Add sodium chloride granules to dioxane containing 16% by weight, freeze-dry, wash with water and dissolve sodium chloride Manufactured by removing and drying
PLGA sponge (pore diameter 100-500μm, porosity 90%), rh
A transplant in which a solution obtained by mixing a BMP-2 solution and blood at a ratio of 1: 9 is dropped and absorbed.

尚、BMP未添加の本発明移植体、即ち複合多孔質体の
電子顕微鏡写真を図９に、同じくBMP未添加の本発明移
植体Ａ及びＢに用いた担体の電子顕微鏡写真を図10及び
図11に示す。FIG. 9 is an electron micrograph of the implant of the present invention without BMP added, that is, the composite porous body, and FIGS. 10 and 10 are electron micrographs of the carriers used for the implants A and B of the present invention without BMP. See Figure 11.

組織摘出は移植から１週間、２週間、３週間及び４週
間経過後に行った。摘出組織について、湿重量を測定
後、カルシウム含量測定（原子吸光法）、及び組織学的
観察を行ない、骨形成の程度を評価した。Tissue extraction was performed one week, two weeks, three weeks, and four weeks after the transplantation. After measuring the wet weight of the excised tissue, calcium content measurement (atomic absorption method) and histological observation were performed to evaluate the degree of bone formation.

（２）結果 電子顕微鏡による担体の比較より、本発明移植体に用
いる複合多孔質体は比較担体とは異なり、連続性を有す
る多くの気孔を有し、体液や細胞の進入を受けやすい構
造であることがわかる。(2) Results From the comparison of the carriers by an electron microscope, the composite porous body used for the implant of the present invention, unlike the comparative carrier, has many pores with continuity, and has a structure that is easy to enter body fluids and cells. You can see that there is.

移植試験の結果、比較移植体Ａは骨形成は良好であっ
たが、中央部に血液性シストの形成及び膨化が観察さ
れ、また、比較移植体Ｂでは埋入時強度が不足し脆く操
作性に劣り、また埋植後も強度不足から担体が***し血
液性シストの形成および膨化が認められた。これに対
し、本発明移植体は柔軟性を有し、埋入時の操作性も良
好であった。また、埋植後は移植体の形状とほぼ同一の
形及び大きさの骨組織が誘導され、膨化や血液性シスト
の形成も殆ど認められなかった。また、摘出組織のカル
シウム含量／湿重量比は他の担体に比べて最も高かっ
た。As a result of the transplantation test, the comparative graft A had good osteogenesis, but blood cyst formation and swelling were observed in the center, and the comparative graft B had insufficient strength at the time of implantation and was brittle and operable. In addition, after implantation, the carrier was split due to insufficient strength, and formation and swelling of bloody cysts were observed. On the other hand, the implant of the present invention had flexibility and good operability at the time of implantation. After implantation, bone tissue having almost the same shape and size as the transplant was induced, and almost no swelling or blood cyst formation was observed. In addition, the calcium content / wet weight ratio of the excised tissue was the highest as compared with other carriers.

移植試験例 ３ （１）試験方法 骨欠損部における骨形成能を評価するため、麻酔下に
おいて日本白色種ウサギ（16〜20週齢、雄性）の右尺骨
に1.5cm長の全層欠損を作製し、欠損部に本発明移植体
として実施例３にてゼラチンスポンジにD,L−乳酸／グ
リコール酸共重合体４重量％含有溶液を吸収させた複合
多孔質体にrhBMP−２を約0.1mg/ml又は0.4mg/ml含有す
る移植体を埋入した。術後単純Ｘ線撮影に及びpQCTによ
る欠損部のCT撮影を経時的に実施しカルシウムの分布を
観察した。12週経過後に屠殺し、ホルマリン固定及び脱
灰後パラフィン切片を作成し、組織学的に検討した。Transplantation Test Example 3 (1) Test Method To evaluate the bone formation ability at the bone defect site, a 1.5 cm long full thickness defect was created in the right ulna of a Japanese white rabbit (16-20 weeks old, male) under anesthesia. Then, about 0.1 mg of rhBMP-2 was added to the composite porous body obtained by absorbing a solution containing 4% by weight of a D, L-lactic acid / glycolic acid copolymer in a gelatin sponge in Example 3 as a transplant of the present invention in the defective part. Implants containing / ml or 0.4 mg / ml were implanted. Post-operative plain X-rays and CT scans of the defect with pQCT were performed over time to observe calcium distribution. After 12 weeks, they were sacrificed, and paraffin sections were prepared after formalin fixation and decalcification, and histologically examined.

（２）結果 本発明移植体は変形に対する復元性に優れ、骨欠損部
に容易に埋入でき、操作性に優れていた。また、術後２
週においてＸ線不透過像が認められ、３〜４週になると
断端間の癒合が認められた。pQCTによる観察においては
術後３〜６週までに担体の内部方向へと骨形成が進行
し、その後再び中心部の骨が吸収される像が認められ
た。これはリモデリングに伴う皮質骨ならびに骨髄腔の
形成を示唆する所見と考えられ、組織所見においてもこ
の様な構造を有する骨が形成されることが確認された。
また、癒合速度ならびに骨形成量には用量依存性がみら
れた。(2) Results The implant of the present invention was excellent in resilience to deformation, easily implanted in a bone defect, and excellent in operability. In addition, postoperative 2
An X-ray opaque image was observed at week, and fusion between stumps was observed at 3 to 4 weeks. Observation by pQCT showed that bone formation progressed toward the inside of the carrier by 3 to 6 weeks after the operation, and thereafter, an image in which the bone at the central portion was absorbed again was observed. This is considered to be a finding suggesting the formation of cortical bone and bone marrow cavity due to remodeling, and histological findings confirmed that bone having such a structure was formed.
The rate of fusion and the amount of bone formation were dose-dependent.

4.移植体の単位体積当たりのBMP吸着量、ならびに吸着
率 （１）試験方法 10×10×5mmに成形した各種担体（実施例３にてゼラ
チンスポンジD,L−乳酸／グリコール酸共重合体４重量
％含有溶液を吸収させた複合多孔質体、PLAスポンジ
（商品名「DRILAC CUBE」;THM BIOMEDICAL INC.
製）、ならびにゼラチンスポンジ（商品名「スポンゼ
ル」；山之内製薬（株）製））に濃度0.4mg/mlの¹²⁵I−
rhBMP−２溶液をそれ以上吸収出来なくなるまで滴下・
湿潤させ,60分間室温で放置する．次にrhBMP−２を含む
各種担体を150μｍのステンレスメッシュを底面に備え
た5mlのシリンジに入れ，更にこのシリンジを14mlのポ
リプロピレン製遠心チューブに挿入後,2500RPM、20分間
（ゼラチンスポンジは2000RPM、10分間）室温で遠心
し，担体の放射活性を測定し、当初に添加した放射活性
との比を求めた。4. Amount of BMP adsorbed per unit volume of graft and adsorption rate (1) Test method Various carriers molded into 10 × 10 × 5 mm (gelatin sponge D, L-lactic acid / glycolic acid copolymer in Example 3) PLA sponge (trade name "DRILAC CUBE"; THM BIOMEDICAL INC.)
) And gelatin sponge (trade name “Sponzel”; manufactured by Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd.)) at a concentration of 0.4 mg / ml ¹²⁵ I-
Drop the rhBMP-2 solution until it can no longer be absorbed.
Wet and leave for 60 minutes at room temperature. Next, various carriers containing rhBMP-2 were placed in a 5 ml syringe having a 150 μm stainless steel mesh provided on the bottom surface, and the syringe was inserted into a 14 ml polypropylene centrifuge tube. After that, 2500 RPM for 20 minutes (gelatin sponge was 2000 RPM, 10 rpm). After centrifugation at room temperature, the radioactivity of the carrier was measured, and the ratio to the radioactivity added initially was determined.

（２）結果 同一体積当たりのBMP吸着量は、本発明移植体が最も
多く、PLAスポンジ及びゼラチンスポンジの約1.5倍の量
を吸着していた。また、総添加量に対する吸着率も約70
％であり、PLAスポンジの50％、及びゼラチンスポンジ
の60％より優れるものであった。(2) Results The implant of the present invention had the largest amount of BMP adsorbed per the same volume, adsorbing about 1.5 times the amount of PLA sponge and gelatin sponge. In addition, the adsorption rate with respect to the total
%, Which is better than 50% of PLA sponge and 60% of gelatin sponge.

以上の様に、本発明移植体は、生体内で速やかに骨形
成を誘導し、しかも移植体全体が新生骨に徐々に置換
し、移植体の残存を完全に無くし、良好な骨組織を形成
することができ、しかも適応時の操作性及び成形性にも
優れている。従って、外傷、疾病又は先天性の欠陥等に
よって引き起こされた各種の骨又は軟骨の欠損を修復す
るために、当該分野に知られた方法で患部に適用するこ
とができる。本発明移植体は生体内に移植された際に、
起炎性が低く生体適合性に優れており、自然に近い状態
で骨又は軟骨の修復が可能になる。As described above, the implant of the present invention rapidly induces bone formation in a living body, and gradually replaces the entire implant with new bone, completely eliminates the remaining implant, and forms good bone tissue. It is excellent in operability and moldability at the time of adaptation. Thus, it can be applied to affected areas in a manner known in the art to repair various bone or cartilage defects caused by trauma, disease or congenital defects and the like. When the implant of the present invention is implanted in a living body,
It is low inflammability and excellent in biocompatibility, and can repair bone or cartilage in a state close to nature.

本発明移植体は、各種の分野に適用することができ、
例えば、骨折等の外傷、腫瘍あるいは炎症性、変形ない
し壊死性骨疾患等の疾患、脳外科あるいは整形外科手術
等の手術に伴う採骨等による骨又は軟骨の欠損部位の修
復、各種骨折の治癒促進、人工関節、人工骨若しくは人
骨歯根等の人工インプラント周囲での骨の形成、人工イ
ンプラント使用時の固着促進、脊椎固定促進、脚延長等
の整形外科分野における骨の補填、軟骨の再生、関節の
再建、形成外科分野での骨又は軟骨の補填、あるいは歯
科領域での骨、軟骨又はセメント質の修復やインプラン
ト使用のための骨の増大等に好適である。The implant of the present invention can be applied to various fields,
For example, trauma such as a fracture, a disease such as a tumor or an inflammatory, deformed or necrotic bone disease, repair of a bone or cartilage defect site by bone extraction or the like associated with surgery such as brain surgery or orthopedic surgery, and promotion of healing of various fractures Bone formation around artificial implants such as artificial joints, artificial bones or human bone roots, promotion of fixation when using artificial implants, promotion of spinal fixation, bone supplementation in orthopedic fields such as leg extension, regeneration of cartilage, joint regeneration It is suitable for bone or cartilage replacement in the field of reconstruction, plastic surgery, or bone augmentation for restoration of bone, cartilage or cementum or use of implants in the dental field.

図面の簡単な説明 図１は、本発明移植体の代表的な実施態様の部分断面
構造を模式的に示す説明図である。BRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS FIG. 1 is an explanatory view schematically showing a partial cross-sectional structure of a typical embodiment of the implant of the present invention.

符号の説明 １……移植体;2……多孔性構造体;3……表面層;4……
複合多孔質体;5……BMP;6……孔 図２は、本発明移植体を移植した場合のカルシウム含
量の経時的変化を示すグラフである。DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 ... transplant; 2 ... porous structure; 3 ... surface layer; 4 ...
... BMP; 6,... Pores FIG. 2 is a graph showing the time-dependent change in calcium content when the implant of the present invention is implanted.

図３は、rhBMP−２（20μg/100μｌ）を含有する本発
明移植体（Ａ）の、移植から３週間経過後における軟Ｘ
線写真である。FIG. 3 shows that the transplant (A) of the present invention containing rhBMP-2 (20 μg / 100 μl) was soft X three weeks after transplantation.
It is a line photograph.

図４は、rhBMP−２（20μg/100μｌ）を含有する本発
明移植体（Ｂ）の、移植から３週間経過後における軟Ｘ
線写真である。FIG. 4 shows the soft X of the transplant (B) of the present invention containing rhBMP-2 (20 μg / 100 μl) three weeks after transplantation.
It is a line photograph.

図５は、rhBMP−２（20μg/100μｌ）を含有する本発
明移植体（Ｃ）の、移植から３週間経過後における軟Ｘ
線写真である。FIG. 5 shows the soft X of the transplant (C) of the present invention containing rhBMP-2 (20 μg / 100 μl) three weeks after transplantation.
It is a line photograph.

図６は、移植から３週間経過後における本発明移植体
（Ｃ）（rhBMP−２を20μg/100μｌ含有）の垂直方向に
切断した摘出組織の組織像（80倍）の断面図である。FIG. 6 is a cross-sectional view of a tissue image (× 80) of a vertically cut extirpated tissue of the transplant (C) of the present invention (containing 20 μg / 100 μl of rhBMP-2) three weeks after transplantation.

図７は、移植から３週間経過後における本発明移植体
（Ｃ）（rhBMP−２を20μg/100μｌ含有）の水平方向に
切断した摘出組織の組織像（66倍）の断面図である。FIG. 7 is a cross-sectional view of a tissue image (66 times) of an extirpated tissue of the transplant (C) of the present invention (containing 20 μg / 100 μl of rhBMP-2) cut horizontally after three weeks from the transplantation.

図８は、図７の部分拡大図（330倍）である。 FIG. 8 is a partially enlarged view (330 times) of FIG.

図９は、本発明複合多孔質体の電子顕微鏡写真（35
倍）である。FIG. 9 is an electron micrograph (35) of the composite porous body of the present invention.
Times).

図10は、比較移植体Ａに用いた担体の電子顕微鏡写真
（50倍）である。FIG. 10 is an electron micrograph (× 50) of the carrier used for comparative implant A.

図11は、比較移植体Ｂに用いた担体の電子顕微鏡写真
（35倍）である。FIG. 11 is an electron micrograph (35 times) of the carrier used for the comparative implant B.

発明を実施するための最良の形態 以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、
これらは本発明の範囲を限定するものではない。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to Examples.
They do not limit the scope of the invention.

実施例１ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80〔関東化学
（株）製試薬〕を0.1重量％となるように加えた1,4−ジ
オキサン〔関東化学（株）製試薬〕に加えて加熱溶解し
100mlとした。このポリマー溶液を室温まで冷却後、7cm
×10cm×1cmの止血用ゼラチンスポンジ〔商品名「スポ
ンゼル」；山之内製薬（株）製〕にポリマー溶液を吸収
できなくなるまで滴下して湿潤させた（約70ml）。次に
このポリマー溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃
で凍結後、0.1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次
に、これを7mm×7mm×4mmに切断後、rhBMP−２〔Geneti
cs Institute製（以下の実施例でも使用）〕〔2mg/ml
〜8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウ
ム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕
溶液と血液を1:9に混和した溶液約200μｌを滴下して吸
収させ、rhBMP−２（20μg/100μｌ〜80μg/100μｌ）
を含有する本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 1 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 [a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] was previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating.
It was 100 ml. After cooling this polymer solution to room temperature, 7 cm
The polymer solution was dropped onto a × 10 cm × 1 cm gelatin sponge for hemostasis (trade name “Sponzel”; manufactured by Yamanouchi Pharmaceutical Co., Ltd.) until the polymer solution could not be absorbed, and wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge that absorbed the polymer solution was cooled to -30 ° C.
, And dried at 0.1 mbar to obtain a composite porous body. Next, after cutting this into 7 mm x 7 mm x 4 mm, rhBMP-2 [Geneti
cs Institute (also used in the following examples)] [2 mg / ml
~ 8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5]
About 200 μl of a 1: 9 mixture of solution and blood is dropped and absorbed, and rhBMP-2 (20 μg / 100 μl-80 μg / 100 μl)
Was obtained.

実施例２ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次にこれに鶏冠由
来ヒアルロン酸ナトリウム〔和光純薬（株）製〕を0.25
重量％とした溶液を滴下して湿潤させた後、公知の方法
で凍結乾燥した。更に7mm×7mm×4mmに切断後、rhBMP−
２〔2mg/ml〜8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化
ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;
pH4.5〕溶液と血液を1:9に混和した溶液約200μｌを滴
下して吸収させ、rhBMP−２（20μg/100μｌ〜80μg/10
0μｌ）を含有する本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 2 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Next, sodium hyaluronate derived from cockscomb [manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.]
The solution was wetted by dropping the solution to a weight% and freeze-dried by a known method. After cutting to 7mm x 7mm x 4mm, rhBMP-
2 [2 mg / ml to 8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80;
pH 4.5] About 200 μl of a 1: 9 mixture of solution and blood is dropped and absorbed, and rhBMP-2 (20 μg / 100 μl to 80 μg / 10
0 μl) was obtained.

実施例３ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次に、rhBMP−２
〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩
化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート8
0;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、本発明の多
孔性骨移植体を得た。Example 3 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Next, rhBMP-2
[0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 8
0; pH 4.5] about 70 ml of the solution was dropped and absorbed to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例４ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。更にこれにrhBMP−
２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM
塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベー
ト80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して吸収させた後、公知
の方法で凍結乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 4 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Furthermore, rhBMP-
2 [0.1mg / ml-0.8mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5mM
About 70 ml of a solution of sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] was dropped and absorbed, and then lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例５ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次に、これに、ゼ
ラチン〔バイオラッド（株）製試薬〕を0.2重量％とし
た水溶液を滴下して湿潤させた後、公知の方法で凍結乾
燥し、rhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,
0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％
ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して吸収さ
せ、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 5 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Next, an aqueous solution containing 0.2% by weight of gelatin (reagent manufactured by Bio-Rad Co., Ltd.) was added dropwise and wetted, followed by freeze-drying by a known method, and rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8%]. mg / ml; 2.5% glycine,
0.5% sucrose, 5mM sodium chloride, 5mM glutamic acid, 0.01%
[Polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例６ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次にこれに、ゼラ
チン〔バイオラッド（株）製試薬〕を0.2重量％含むrhB
MP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白
糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソ
ルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、公
知の方法で凍結乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得
た。Example 6 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Next, rhB containing 0.2% by weight of gelatin (a reagent manufactured by Bio-Rad Co., Ltd.)
About 70 ml of MP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; It was freeze-dried by the method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例７ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次にこれに、鶏冠
由来ヒアルロン酸ナトリウム〔和光純薬（株）製〕を0.
2重量％含むrhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリ
シン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,
0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して
吸収させ、公知の方法で凍結乾燥し、本発明の多孔性骨
移植体を得た。Example 7 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Next, sodium hyaluronate derived from cockscomb [manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] was added to this.
RhBMP-2 containing 2% by weight [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid,
About 70 ml of a 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例８ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。次にこれに、鶏冠
由来ヒアルロン酸ナトリウム〔和光純薬（株）製〕を0.
2重量％とした水溶液を滴下して湿潤させた後、公知の
方法で凍結乾燥し、rhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.
5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタ
ミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを
滴下して吸収させ、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 8 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Drying was performed at 1 mbar to obtain a composite porous body. Next, sodium hyaluronate derived from cockscomb [manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.] was added to this.
After 2% by weight of an aqueous solution was dropped and wetted, the solution was freeze-dried by a known method, and rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.
About 70 ml of a 5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例９ D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた氷酢酸〔関東化学（株）製試薬〕に加
えて加熱溶解し100mlとした。このポリマー溶液を室温
まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポンジ（スポ
ンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなるまで滴下し
て湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー溶液を吸収
したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.1mbarで乾
燥した。この凍結乾燥体を、冷却した水200mlに２回浸
漬して氷酢酸を抽出後、凍結乾燥し、7mm×7mm×4mmに
切断し、rhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシ
ン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.0
1％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約200μｌを滴下して
吸収させ、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 9 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to glacial acetic acid (a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) to which polysorbate 80 had been added in advance to 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C. and dried at 0.1 mbar. The freeze-dried body was immersed twice in 200 ml of cooled water to extract glacial acetic acid, freeze-dried, cut into 7 mm x 7 mm x 4 mm, and rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5 % Glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.0
About 200 μl of a 1% polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例10 7cm×10cm×1cmのゼラチンスポンジ（スポンゼル）に
rhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％
白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリ
ソルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、
公知の方法により凍結乾燥してrhBMP−2/ゼラチンスポ
ンジを得た後、D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体
（モル比＝75:25,分子量＝50,000:ベーリンガーインゲ
ルハイム社製）2.0gを、予めポリソルベート80を0.1重
量％となるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学
（株）製試薬〕に加えて加熱溶解して100mlとした溶液
を室温まで冷却後、溶液を吸収できなくなるまで滴下し
て湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー溶液を吸収
したrhBMP−２ゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.1
mbarで乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 10 A 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel)
rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5%
Sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5
After freeze-drying by a known method to obtain rhBMP-2 / gelatin sponge, a copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 75:25, molecular weight = 50,000: manufactured by Boehringer Ingelheim) 2.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 was previously added to a concentration of 0.1% by weight, and dissolved by heating to 100 ml. After cooling to room temperature, the solution was cooled. The solution was wetted by dropping until it could not be absorbed (about 70 ml). Next, the rhBMP-2 gelatin sponge which absorbed the polymer solution was frozen at -30 ° C,
After drying at mbar, a porous bone graft of the present invention was obtained.

実施例11 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0g又は4.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％と
なるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製
試薬〕に加えて溶解し100mlとした。このポリマー溶液
を室温まで冷却した。別に、公知の方法で調製したrhBM
P−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,
5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベ
ート80;pH4.5〕溶液の凍結乾燥粉末を、rhBMP−２とし
て20mg〜80mgの量でポリマー溶液に添加して撹拌し、rh
BMP−２懸濁液を調製した。このrhBMP−２懸濁液を7cm
×10cm×1cmのゼラチンスポンジ（スポンゼル）に懸濁
液が吸収できなくなるまで滴下して湿潤させた（約70m
l）。次にこのポリマー溶液を吸収したゼラチンスポン
ジを−30℃で凍結後、0.1mbarで乾燥し、本発明の多孔
性骨移植体を得た。Example 11 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
2.0 g or 4.0 g was added to 1,4-dioxane [a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 had been previously added to be 0.1% by weight, and dissolved to make 100 ml. The polymer solution was cooled to room temperature. Separately, rhBM prepared by a known method
P-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose,
Lyophilized powder of 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] solution was added to the polymer solution in an amount of 20 mg to 80 mg as rhBMP-2, and the mixture was stirred with rh
A BMP-2 suspension was prepared. 7 cm of this rhBMP-2 suspension
The suspension was dripped onto a gelatin sponge (× 10 cm × 1 cm) until the suspension could not be absorbed (about 70 m).
l). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C. and dried at 0.1 mbar to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例12 7cm×10cm×1cmのゼラチンスポンジ（スポンゼル）に
rhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％
白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリ
ソルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、
公知の方法により凍結乾燥してrhBMP−2/ゼラチンスポ
ンジを得た後、D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体
（モル比＝75:25,分子量＝50,000:ベーリンガーインゲ
ルハイム社製）2.0gを、予めポリソルベート80を0.1重
量％となるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学
（株）製試薬〕に加えて加熱溶解し100mlとした溶液を
室温まで冷却後、溶液を吸収できなくなるまで滴下して
湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー溶液を吸収し
たrhBMP−2/ゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.1mb
arで乾燥した。rhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％
グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン
酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約70mlを滴下
／吸収させ、公知の方法で凍結乾燥し、rhBMP−２（0.2
mg/ml〜1.6mg/ml）を含有する本発明の多孔性骨移植体
を得た。Example 12 A 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel)
rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5%
Sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5
After freeze-drying by a known method to obtain rhBMP-2 / gelatin sponge, a copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 75:25, molecular weight = 50,000: manufactured by Boehringer Ingelheim) 2.0 g was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 was added in advance to a concentration of 0.1% by weight, and dissolved by heating. The solution was cooled to room temperature, and the solution was absorbed. Wet dropwise until no longer possible (ca. 70 ml). Next, the rhBMP-2 / gelatin sponge which absorbed this polymer solution was frozen at -30 ° C, and then 0.1 mb.
Dried in ar. rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5%
Glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5], about 70 ml of a solution was dropped / absorbed, freeze-dried by a known method, and rhBMP-2 (0.2%
(mg / ml to 1.6 mg / ml).

実施例13 ポリD,L−乳酸〔分子量＝50,000;三井東圧化学（株）
製〕1.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％となる
ように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製試
薬〕に加えて溶解し100mlとした。このポリマー溶液を
室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポンジ
（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなるまで
滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー溶液
を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.1mba
rで乾燥し複合多孔質体を得た。更にrhBMP−２〔0.1mg/
ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリ
ウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.
5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、公知の方法で凍結
乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 13 Poly D, L-lactic acid [Molecular weight = 50,000; Mitsui Toatsu Chemicals, Inc.
1.0 g of polysorbate 80 was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which 0.1% by weight of polysorbate 80 had been previously added, and dissolved to make 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C., and then 0.1 mba
Drying was performed under r to obtain a composite porous body. Further, rhBMP-2 [0.1 mg /
ml-0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.
5] About 70 ml of the solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例14 ポリD,L−乳酸〔分子量50,000;三井東圧化学（株）
製〕1.0gを、予めポリソルベート80を1.0重量％となる
ように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製試
薬〕に加えて溶解し100mlとした。このポリマー溶液を
室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポンジ
（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなるまで
滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー溶液
を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.1mba
rで乾燥し複合多孔質体を得た。更にrhBMP−２〔0.1mg/
ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリ
ウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.
5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、公知の方法で凍結
乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 14 Poly D, L-lactic acid [molecular weight 50,000; Mitsui Toatsu Chemicals, Inc.
1.0 g) was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which polysorbate 80 was previously added to be 1.0% by weight, and dissolved to make 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C., and then 0.1 mba
Drying was performed under r to obtain a composite porous body. Further, rhBMP-2 [0.1 mg /
ml-0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.
5] About 70 ml of the solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例15 ポリＬ−乳酸（分子量＝60,000:ベーリンガーインゲ
ルハイム社製）1.0gを、予めポリソルベート80を1.0％
となるように加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）
製試薬〕に加えて溶解し100mlとした。このポリマー溶
液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポン
ジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなるま
で滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー溶
液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.1m
barで乾燥し複合多孔質体を得た。更にrhBMP−２〔0.1m
g/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナト
リウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.
5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、公知の方法で凍結
乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 15 1.0 g of poly L-lactic acid (molecular weight = 60,000: manufactured by Boehringer Ingelheim) was previously added with 1.0% of polysorbate 80.
1,4-dioxane [Kanto Chemical Co., Ltd.]
Reagent) and dissolved to make 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge which absorbed this polymer solution was frozen at -30 ° C, and then 0.1m
Drying with a bar gave a composite porous body. Furthermore, rhBMP-2 [0.1m
g / ml-0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.
5] About 70 ml of the solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例16 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝75:
25,分子量＝50,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0gを、予めポリソルベート80を0.1重量％となるよう
に加えた1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製試薬〕に
加えて溶解し100mlとした。このポリマー溶液を室温ま
で冷却後、7.5cm×10cm×0.3cmのコラーゲンスポンジ
（Helistat）（Marion Laboratories,Inc.製）にポリ
マー溶液を吸収できなくなるまで滴下して湿潤させた。
次にこのポリマー溶液を吸収したゼラチンスポンジを−
30℃で凍結後、0.1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。
更にrhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.
5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポ
リソルベート80;pH4.5〕溶液約22.5mlを滴下して吸収さ
せ、公知の方法で凍結乾燥し、本発明の多孔性骨移植体
を得た。Example 16 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 75:
25, molecular weight = 50,000: Boehringer Ingelheim)
2.0 g of polysorbate 80 was added to 1,4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] to which 0.1% by weight of polysorbate 80 had been previously added and dissolved to make 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7.5 cm × 10 cm × 0.3 cm collagen sponge (Helistat) (manufactured by Marion Laboratories, Inc.) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted.
Next, the gelatin sponge that absorbed the polymer solution was
After freezing at 30 ° C., it was dried at 0.1 mbar to obtain a composite porous body.
Further, rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.
About 22.5 ml of a 5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention. .

実施例17 ヒアルロン酸ナトリウム（分子量＝800,000;紀文フー
ドケミカル）2.1gを注射用蒸留水300ml溶解した。別
に、ゼラチン（Ｇ−785P及びG786P;新田ゼラチン製）9g
を1N−酢酸水溶液300mlに溶解した。前記ヒアルロン酸
溶液に前記ゼラチン溶液を加え、T.K.ホモミキサーによ
り9000rpmで５分間攪拌した。その時生じた泡を集め、
−80℃のフリーザーで凍結した。凍結乾燥機で乾燥しス
ポンジを得た。Example 17 Sodium hyaluronate (molecular weight = 800,000; Kibun Food Chemical) (2.1 g) was dissolved in 300 ml of distilled water for injection. Separately, 9 g of gelatin (G-785P and G786P; manufactured by Nitta Gelatin)
Was dissolved in 300 ml of a 1N aqueous solution of acetic acid. The gelatin solution was added to the hyaluronic acid solution, and the mixture was stirred with a TK homomixer at 9000 rpm for 5 minutes. Collect the bubbles generated at that time,
Frozen in a -80 ° C freezer. It was dried with a freeze dryer to obtain a sponge.

次にポリD,L−乳酸〔分子量＝50,000;三井東圧化学
（株）製〕1.0gを、ポリソルベート80の0.1重量％を含
む1.4−ジオキサン〔関東化学（株）製試薬〕に加えて
溶解し100mlとした。このポリマー溶液を室温まで冷却
後、3cm×3cm×1cmの前記スポンジにポリマー溶液を吸
収できなくなるまで滴下しして湿潤させた。次にこのポ
リマー溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結
後、0.1mbarで乾燥し複合多孔質体を得た。更にrhBMP−
２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM
塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベー
ト80;pH4.5〕溶液約9mlを滴下して吸収させ、公知の方
法で凍結乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Then, 1.0 g of poly D, L-lactic acid (molecular weight = 50,000; manufactured by Mitsui Toatsu Chemicals, Inc.) was added to and dissolved in 1.4-dioxane [reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.] containing 0.1% by weight of polysorbate 80. To 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was added dropwise to the sponge of 3 cm × 3 cm × 1 cm until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted. Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C. and dried at 0.1 mbar to obtain a composite porous body. Furthermore, rhBMP−
2 [0.1mg / ml-0.8mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5mM
About 9 ml of a solution of sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例18 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝75:
25,分子量＝50,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0gを酢酸エチル〔関東化学（株）製試薬〕に加えて溶
解し100mlとし、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポンジ
（スポンゼル）を浸漬させた後、室温にて通風乾燥して
複合多孔質体を得た。次にこれにrhBMP−２〔0.1mg/ml
〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウ
ム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕
溶液約70mlを滴下して吸収させ、公知の方法で凍結乾燥
し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 18 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 75:
25, molecular weight = 50,000: Boehringer Ingelheim)
2.0 g was added to ethyl acetate (Kanto Chemical Co., Ltd. reagent) and dissolved to make 100 ml. A 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) was immersed and then air-dried at room temperature to form a composite porous body. I got Next, rhBMP-2 [0.1 mg / ml
0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5]
About 70 ml of the solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例19 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝75:
25,分子量＝50,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0gを酢酸エチル〔関東化学（株）製試薬〕に加えて溶
解し100mlとし、7.5cm×10cm×0.3cmのコラーゲンスポ
ンジ（Helistat）（Marion Laboratories,Inc.製）に
浸漬させた後、室温にて減圧乾燥し複合多孔質体を得
た。次にこれにrhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％
グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン
酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約22.5mlを滴
下して吸収させ、公知の方法で凍結乾燥し、本発明の多
孔性骨移植体を得た。Example 19 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 75:
25, molecular weight = 50,000: Boehringer Ingelheim)
2.0 g was added to ethyl acetate (a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) and dissolved to make 100 ml, immersed in a 7.5 cm × 10 cm × 0.3 cm collagen sponge (Helistat) (manufactured by Marion Laboratories, Inc.), and then cooled to room temperature. And dried under reduced pressure to obtain a composite porous body. Next, rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5%
Glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5], about 22.5 ml of a solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention. Obtained.

実施例20 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝75:
25,分子量＝50,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
2.0gを酢酸エチル〔関東化学（株）製試薬〕に加えて溶
解し100mlとし、7.5cm×10cm×0.3cmのコラーゲンスポ
ンジ（Helistat）（Marion Laboratories,Inc.製）に
浸漬させた後、室温にて通風乾燥し複合多孔質体を得
た。次にこれにrhBMP−２〔0.1mg/ml〜0.8mg/ml;2.5％
グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン
酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約22.5mlを滴
下して吸収させ、公知の方法で凍結乾燥し、本発明の多
孔性骨移植体を得た。Example 20 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 75:
25, molecular weight = 50,000: Boehringer Ingelheim)
2.0 g was added to ethyl acetate (a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) and dissolved to make 100 ml, immersed in a 7.5 cm × 10 cm × 0.3 cm collagen sponge (Helistat) (manufactured by Marion Laboratories, Inc.). To give a composite porous body. Next, rhBMP-2 [0.1 mg / ml to 0.8 mg / ml; 2.5%
Glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5], about 22.5 ml of a solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention. Obtained.

実施例21 ポリＬ−乳酸（分子量＝60,00:ベーリンガーインゲル
ハイム社製）1.0gを、予めポリソルベート80の0.1重量
％を含む1,4−ジオキサン〔関東化学（株）製試薬〕に
加えて溶解し加えて溶解し100mlとした。このポリマー
溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmのゼラチンスポ
ンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収できなくなる
まで滴下して湿潤させた（約70ml）。次にこのポリマー
溶液を吸収したゼラチンスポンジを−30℃で凍結後、0.
1mbarで乾燥した。次にポリソルベート80を１重量％と
した水溶液を滴下して湿潤させた後、公知の方法により
凍結乾燥し複合多孔質体を得た。更にrhBMP−２〔0.1mg
/ml〜0.8mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナト
リウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.
5〕溶液約70mlを滴下して吸収させ、公知の方法で凍結
乾燥し、本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 21 1.0 g of poly L-lactic acid (molecular weight = 60,00: manufactured by Boehringer Ingelheim) was added to 1,4-dioxane (reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) containing 0.1% by weight of polysorbate 80 in advance. Dissolve, add and dissolve to make 100 ml. After the polymer solution was cooled to room temperature, it was dropped on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed, and was wetted (about 70 ml). Next, the gelatin sponge having absorbed the polymer solution was frozen at −30 ° C.
Dried at 1 mbar. Next, an aqueous solution containing 1% by weight of polysorbate 80 was dropped and wetted, and then lyophilized by a known method to obtain a composite porous body. Further, rhBMP-2 (0.1 mg
/ ml to 0.8 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.
5] About 70 ml of the solution was dropped and absorbed, and lyophilized by a known method to obtain a porous bone graft of the present invention.

実施例22 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
8.0gを予めポリソルベート80（関東化学（株）製試薬）
を0.1重量％となるように加えた1,4−ジオキサン（関東
化学（株）製試薬）に加えて加熱溶解し100mlとした。
このポリマー溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmの
ゼラチンスポンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収
できなくなるまで滴下・湿潤させた（約70ml）。次にこ
のポリマー溶液を吸収したスポンゼルを−30℃で凍結
し、0.1mbarで凍結乾燥し複合多孔質体を得た。更にこ
れにrhBMP−２〔0.12mg/ml〜5.9mg/ml;2.5％グリシン,
0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％
ポリソルベート80;pH4.5〕溶液約60mlを滴下・吸収させ
た後，公知の方法で凍結乾燥し,rhBMP−２（0.1mg/ml〜
5.0mg/ml）を含有する本発明の多孔性骨移植体を得た。Example 22 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
8.0 g of Polysorbate 80 (Kanto Chemical Co., Ltd. reagent) in advance
Was added to 0.1% by weight of 1,4-dioxane (a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) and dissolved by heating to make 100 ml.
After cooling the polymer solution to room temperature, it was dropped and wetted on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed (about 70 ml). Next, the spongel that absorbed the polymer solution was frozen at -30 ° C and lyophilized at 0.1 mbar to obtain a composite porous body. Furthermore, rhBMP-2 [0.12 mg / ml-5.9 mg / ml; 2.5% glycine,
0.5% sucrose, 5mM sodium chloride, 5mM glutamic acid, 0.01%
[Polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed, and then freeze-dried by a known method to obtain rhBMP-2 (0.1 mg / ml or less).
5.0 mg / ml) was obtained.

実施例23 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
8.0gを予めポリソルベート80（関東化学（株）製試薬）
を0.1重量％となるように加えた1,4−ジオキサン（関東
化学（株）製試薬）に加えて加熱溶解し100mlとした。
このポリマー溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm×1cmの
ゼラチンスポンジ（スポンゼル）にポリマー溶液を吸収
できなくなるまで滴下・湿潤させた（約70ml）。次にこ
のポリマー溶液を吸収したスポンゼルを−30℃で凍結
し、0.1mbarで凍結乾燥し複合多孔質体を得た。これを7
mm×7mm×4mmに切断後、rhBMP−２〔1.2mg/ml〜59mg/m
l;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグ
ルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液と血
液を1:9に混和した溶液約170μｌを滴下して吸収させ、
rhBMP−２（0.1mg/ml〜5.0mg/ml）を含有する本発明の
多孔性骨移植体を得た。Example 23 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
8.0 g of Polysorbate 80 (Kanto Chemical Co., Ltd. reagent) in advance
Was added to 0.1% by weight of 1,4-dioxane (a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) and dissolved by heating to make 100 ml.
After cooling the polymer solution to room temperature, it was dropped and wetted on a 7 cm × 10 cm × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed (about 70 ml). Next, the spongel that absorbed the polymer solution was frozen at -30 ° C and lyophilized at 0.1 mbar to obtain a composite porous body. This is 7
After cutting into mm x 7 mm x 4 mm, rhBMP-2 (1.2 mg / ml-59 mg / m
l; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5mM sodium chloride, 5mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5] A solution and blood mixed in a ratio of 1: 9 and about 170 μl of the solution were dropped and absorbed.
A porous bone graft of the present invention containing rhBMP-2 (0.1 mg / ml to 5.0 mg / ml) was obtained.

実施例24 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50,分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社製）
12.0gを予めポリソルベート80（関東化学（株）製試
薬）を0.5重量％となるように加えた1,4−ジオキサン
（関東化学（株）製試薬）に加えて加熱溶解し150mlと
した。このポリマー溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm
×1cmのゼラチンスポンジ（スポンゼル）を含浸する。
次にこのポリマー溶液にスポンゼルを浸漬したまま−45
℃で凍結後、0.1mbarで凍結乾燥した。周囲に付着した
ポリマーを剃刀で切除した後、135℃で36分間乾熱滅菌
をした。こうして得られた複合多孔質体にrhBMP−２
〔0.12mg/ml〜5.9mg/ml;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM
塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.01％ポリソルベー
ト80;pH4.5〕溶液を約60mlを滴下して吸収させ、rhBMP
−２（0.1mg/ml〜5.0mg/ml）を含有する本発明の多孔性
骨移植体を得た。Example 24 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: Boehringer Ingelheim
12.0 g was added in advance to 1,4-dioxane (a reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) to which 0.5% by weight of polysorbate 80 (a reagent manufactured by Kanto Kagaku Co., Ltd.) was added, and dissolved by heating to 150 ml. After cooling this polymer solution to room temperature, 7 cm × 10 cm
Impregnate a × 1 cm gelatin sponge (sponzel).
Next, the spongel was immersed in this polymer solution for -45.
After freezing at ℃, it was freeze-dried at 0.1 mbar. After the polymer adhering to the periphery was cut off with a razor, it was subjected to dry heat sterilization at 135 ° C. for 36 minutes. RhBMP-2 was added to the composite porous body thus obtained.
[0.12mg / ml-5.9mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5mM
Sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80; pH 4.5]
A porous bone graft of the present invention containing -2 (0.1 mg / ml to 5.0 mg / ml) was obtained.

実施例25 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50、分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社
製）12.0gを予めポリソルベート80（関東化学（株）製
試薬）を0.5重量％となるように加えた1,4−ジオキサン
（関東化学（株）製試薬）に加えて加熱溶解し150mlと
した。このポリマー溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm
×1cmのゼラチンスポンジ（スポンゼル）を含浸する。
次にこのポリマー溶液をスポンゼルを浸漬したまま−45
℃で凍結後、0.1mbarで凍結乾燥した。周囲に付着した
ままポリマーを剃刀で切除し、複合多孔質体を得た。更
にこれにrhBMP−２〔0.12mg/ml〜5.9mg/ml;2.5％グリシ
ン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグルタミン酸,0.0
1％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液を約60ml滴下して吸
収させた後、公知の方法で凍結乾燥し、rhBMP−２（0.1
mg/ml〜5.0mg/ml）を含有する本発明の多孔性骨移植体
を得た。Example 25 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: 1,4-dioxane (Kanto Chemical Co., Ltd. reagent) obtained by adding 12.0 g of polysorbate 80 (Kanto Chemical Co., Ltd. reagent) to 0.5% by weight in advance to 12.0 g of Boehringer Ingelheim Co., Ltd. ) And heated and dissolved to 150 ml. After cooling this polymer solution to room temperature, 7 cm × 10 cm
Impregnate a × 1 cm gelatin sponge (sponzel).
Next, the polymer solution was dropped to −45 with the spongel immersed.
After freezing at ℃, it was freeze-dried at 0.1 mbar. The polymer was cut off with a razor while remaining attached to the periphery to obtain a composite porous body. Further, rhBMP-2 [0.12 mg / ml to 5.9 mg / ml; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.0%
About 60 ml of a 1% polysorbate 80; pH 4.5] solution was dropped and absorbed, then freeze-dried by a known method, and rhBMP-2 (0.1
(mg / ml to 5.0 mg / ml).

実施例26 D,L−乳酸とグリコール酸との共重合体（モル比＝50:
50、分子量＝40,000:ベーリンガーインゲルハイム社
製）10.0gを予めポリソルベート80（関東化学（株）製
試薬）を0.5重量％となるように加えた1,4−ジオキサン
（関東化学（株）製試薬）に加えて加熱溶解し100mlと
した。このポリマー溶液を室温まで冷却後、7cm×10cm
×1cmのゼラチンスポンジ（スポンゼル）にポリマー溶
液が吸収できなくなるまで滴下・湿潤させた（約70m
l）。次にこれを−30℃で凍結後、0.1mbarで凍結乾燥し
複合多孔質体を得た。rhBMP−２〔0.12mg/ml〜5.9mg/m
l;2.5％グリシン,0.5％白糖,5mM塩化ナトリウム,5mMグ
ルタミン酸,0.01％ポリソルベート80;pH4.5〕溶液を約6
0ml滴下して吸収させた後、公知の方法で凍結乾燥し、r
hBMP−２（0.1mg/ml〜5.0mg/ml）を含有する本発明の多
孔性骨移植体を得た。Example 26 Copolymer of D, L-lactic acid and glycolic acid (molar ratio = 50:
50, molecular weight = 40,000: 1,4-dioxane (reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) to which 10.0 g of polysorbate 80 (reagent manufactured by Kanto Chemical Co., Ltd.) is added in an amount of 0.5% by weight in advance to 10.0 g of Boehringer Ingelheim Co., Ltd. ) And heated and dissolved to make 100 ml. After cooling this polymer solution to room temperature, 7 cm × 10 cm
The polymer solution was dropped and moistened onto a × 1 cm gelatin sponge (sponzel) until the polymer solution could not be absorbed (about 70 m
l). Next, this was frozen at −30 ° C. and freeze-dried at 0.1 mbar to obtain a composite porous body. rhBMP-2 (0.12 mg / ml-5.9 mg / m
l; 2.5% glycine, 0.5% sucrose, 5 mM sodium chloride, 5 mM glutamic acid, 0.01% polysorbate 80;
After being absorbed by dropping 0 ml, freeze-dried by a known method, r
A porous bone graft of the present invention containing hBMP-2 (0.1 mg / ml to 5.0 mg / ml) was obtained.

フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−232967（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−124461（ＪＰ，Ａ) 特開 昭64−34371（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−279520（ＪＰ，Ａ) 独国特許出願公開3841397（ＤＥ，Ａ １) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61L 27/00 Continuation of the front page (56) References JP-A 1-232967 (JP, A) JP-A 1-1124461 (JP, A) JP-A 64-34371 (JP, A) JP-A 4-279520 (JP , A) German Patent Application Publication 3841397 (DE, A1) (58) Fields investigated (Int. Cl. ⁶ , DB name) A61L 27/00

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】生体吸収性親水性材料からなる多孔性構造
体の表面に、人工的に製造され、生体親和性、生分解性
及び生体吸収性を有する疎水性のポリマーである生体吸
収性高分子材料からなる表面層を有する複合多孔質体
に、骨誘導因子を担持することを特徴とする骨形成用移
植体。1. A bioabsorbable polymer, which is a hydrophobic polymer having a biocompatibility, biodegradability and bioabsorbability, which is artificially manufactured on the surface of a porous structure made of a bioabsorbable hydrophilic material. An osteogenic implant, wherein an osteoinductive factor is carried on a composite porous body having a surface layer made of a molecular material. 【請求項２】ゼラチン、ヒアルロン酸、及びヒアルロン
酸誘導体からなる群から選択される１種または２種以上
の生体吸収性親水性材料からなる多孔性製造体を表面
に、ポリ乳酸、ポリ乳酸ポリグリコール酸共重合体、及
びポリ［ビス（ｐ−カルボキシフェノキシ）プロパン］
無水物とセバシン酸とを共重合体からなる群から選択さ
れる１種または２種以上の生体吸収性高分子材料を付与
してなる複合多孔質体であって、平均孔径が40〜600μ
ｍであり、気孔率が80％以上である、骨誘導因子担体用
複合多孔質体。2. A polylactic acid, polylactic acid poly (polylactic acid) or polylactic acid (polylactic acid) having, on its surface, a porous product comprising one or more bioabsorbable hydrophilic materials selected from the group consisting of gelatin, hyaluronic acid, and a hyaluronic acid derivative. Glycolic acid copolymer and poly [bis (p-carboxyphenoxy) propane]
A composite porous body obtained by providing one or more bioabsorbable polymer materials selected from the group consisting of an anhydride and a sebacic acid copolymer, and having an average pore size of 40 to 600 μm.
m, and having a porosity of 80% or more.