JP2985158B2 - Recovery method of highly active lactenin fraction - Google Patents
Recovery method of highly active lactenin fractionInfo
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Description
【０００１】[0001]
【産業上の利用分野】本発明は、乳中に含有される抗菌
性画分であるラクテニン画分を回収する方法に関する。
本発明の方法で得ることのできるラクテニン画分は食
品、医薬品、飼料等広範な利用が可能である。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a method for recovering a lactenin fraction which is an antibacterial fraction contained in milk.
The lactenin fraction obtainable by the method of the present invention can be widely used in foods, pharmaceuticals, feeds and the like.
【０００２】[0002]
【従来の技術】牛乳または乳清によってストレプトコッ
カス パイロゲネシス(Streptococcuspyrogenesis）の
生育が阻害されることが知られており、この阻害物質に
対しラクテニンと命名された( 祐川金次郎著, 乳タンパ
ク質,118頁, 酪農技術普及学会刊, 1971年) 。しかし乳
中に存在する抗菌性物質は、単一のものではなく、現在
は牛乳中の抗菌性物質として、ラクトフェリン、免疫グ
ロブリン、リゾチーム、ラクトパーオキシダーゼ(LPO)
などが確認されている。なかでも免疫グロブリン、ラク
トフェリン、LPO は乳中の含有量も多く、相互作用を有
している。これらの牛乳より得られた抗菌性物質を含有
する画分をラクテニン画分と呼んでいる。The Background of the Invention Milk or whey is known to grow Streptococcus Pairogeneshisu (Streptococcuspyrogenesis) is inhibited, the inhibitor against was named Rakutenin (Author Kinjiro Sukegawa, milk protein, 118 pp., Dairy Published by Japan Society for Technology Promotion, 1971). However, the antibacterial substance present in milk is not a single substance, and currently, as antibacterial substances in milk, lactoferrin, immunoglobulin, lysozyme, lactoperoxidase (LPO)
Etc. have been confirmed. Above all, immunoglobulin, lactoferrin and LPO have a high content in milk and have an interaction. The fraction containing the antibacterial substance obtained from these milks is called a lactenin fraction.
【０００３】従来、免疫グロブリン、ラクトフェリン、
LPO をそれぞれ回収する方法が提案されている。例え
ば、特開昭58-28233号公報には吸着担体にラクトフェリ
ンを結合させたのち酸性溶液により溶出させる方法が開
示されている。特開昭61-246198 号公報にはアルギン酸
やカラギーナンゲルを用いてラクトフェリンとLPO を精
製する方法が開示されている。特開平1-86839 号公報に
はカルボキシル基またはスルフォン基を導入したデキス
トランで被覆したシリカ粒子を用い、塩濃度勾配によっ
てLPO とラクトフェリンを溶出する方法が開示されてい
る。特表平3-502921号公報にはラクトフェリンとLPO
を、乳清を原料として強陽イオン交換体に吸着させたの
ち、異なる濃度の塩溶液で連続して溶出して回収する方
法が開示されている。これらの方法はそれぞれラクトフ
ェリンの回収方法としては優れているものの、さらに免
疫グロブリン及び LPOをあわせて回収する方法ではな
い。Conventionally, immunoglobulins, lactoferrin,
A method for collecting each LPO has been proposed. For example, JP-A-58-28233 discloses a method in which lactoferrin is bound to an adsorption carrier and then eluted with an acidic solution. JP-A-61-246198 discloses a method for purifying lactoferrin and LPO using alginic acid or carrageenan gel. JP-A-1-86839 discloses a method in which silica particles coated with dextran having a carboxyl group or a sulfone group introduced therein are used to elute LPO and lactoferrin with a salt concentration gradient. Japanese Patent Publication No. Hei 3-502921 discloses lactoferrin and LPO
Is adsorbed on a strong cation exchanger using whey as a raw material, and then continuously eluted with salt solutions having different concentrations to recover the same. Although each of these methods is excellent as a method for recovering lactoferrin, it is not a method for collectively collecting immunoglobulin and LPO.
【０００４】なお、上記特開昭61-246198 号公報ラクト
フェリンとLPO が得られることが記載されているが、免
疫グロブリンの回収ができることは開示されていない。
また、特開平3-218318号公報にはロタウイルス感染症治
療剤の製法として牛初乳のホエーを分子量10万の限外濾
過処理を行い、ついで凍結乾燥処理を行い、免疫グロブ
リンとラクトフェリンに富む粉末を得る方法が開示され
ている。この方法で得られた粉末は免疫グロブリンが65
％、ラクトフェリン5.7 ％を含んでいる。しかしLPO を
どれくらい含有しているか記載されていない。Japanese Patent Application Laid-Open No. 61-246198 describes that lactoferrin and LPO can be obtained, but does not disclose that immunoglobulin can be recovered.
JP-A-3-218318 discloses a method for producing a rotavirus infectious disease therapeutic agent, in which bovine colostrum whey is subjected to ultrafiltration treatment with a molecular weight of 100,000, followed by lyophilization treatment, which is rich in immunoglobulin and lactoferrin. A method for obtaining a powder is disclosed. The powder obtained by this method contains 65 immunoglobulins.
%, 5.7% lactoferrin. However, it does not describe how much LPO is contained.
【０００５】ラクテニン画分の抗菌性にはLPO の活性が
重要であることは広く知られている。特開平3-193708号
公報にはラクトフェリンがLPO の抗菌活性を増強するこ
とが開示されている。さらにZina Moldoveanu らは免疫
グロブリンとLPO 、ラクトフェリンが抗菌活性を示すた
めに、相互に作用しあっていることを報告している〔An
n.N.Y.Acad.Sci.,409,848-850,(1983)〕。LPO はさらに
消化管内のチオシアン酸や過酸化水素と反応することに
より、強い抗菌活性を示すことが知られており、ラクテ
ニン活性を維持するためには必須な成分である。しかし
これまでに、免疫グロブリン、ラクトフェリン及びLPO
３成分の活性を保持したラクテニン画分は得られていな
い。It is widely known that the activity of LPO is important for the antibacterial activity of the lactenin fraction. JP-A-3-193708 discloses that lactoferrin enhances the antibacterial activity of LPO. In addition, Zina Moldoveanu et al. Reported that immunoglobulins interact with LPO and lactoferrin to exhibit antibacterial activity [An
nNYAcad. Sci., 409, 848-850, (1983)]. LPO is known to exhibit strong antibacterial activity by further reacting with thiocyanic acid and hydrogen peroxide in the digestive tract, and is an essential component for maintaining lactenin activity. However, to date, immunoglobulins, lactoferrin and LPO
No lactenin fraction retaining the activity of the three components was obtained.
【０００６】[0006]
【発明が解決しようとする課題】本発明はラクテニン画
分の回収方法について検討を進めた結果、従来報告され
ていたラクテニン画分と異なり、免疫グロブリン、ラク
トフェリン及びLPO をそれぞれが生物学的に活性な状態
で含まれているラクテニン画分を回収する方法を見出し
た。乳中のラクトフェリンとLPO は類似の精製方法を用
いて回収できるが、免疫グロブリン画分はこの2 成分と
は異なった挙動を示すため、それぞれ別々に回収されて
いた。本発明者らはラクテニン画分の研究を進める過程
において、これらの3 成分を簡単な操作により、同一原
料から容易に、しかも活性を保持したまま回収する方法
をみいだした。従って本発明は、免疫グロブリン、ラク
トフェリン及びLPO が活性な形で多量に含有するラクテ
ニン画分を回収する方法を提供することを課題とする。SUMMARY OF THE INVENTION The present invention has been studied on a method for recovering a lactenin fraction. As a result, unlike the previously reported lactenin fraction, immunoglobulin, lactoferrin and LPO are each biologically active. A method for recovering the lactenin fraction contained in a suitable state was found. Lactoferrin and LPO in milk can be recovered using a similar purification method, but the immunoglobulin fraction behaves differently from the two components and was therefore recovered separately. In the course of researching the lactenin fraction, the present inventors have found a method for easily recovering these three components from the same raw material while maintaining the activity by a simple operation. Accordingly, an object of the present invention is to provide a method for recovering a lactenin fraction containing a large amount of immunoglobulin, lactoferrin and LPO in an active form.
【０００７】[0007]
【課題を解決するための手段】本発明は、次の工程〜
よりなる、免疫グロブリン、ラクトフェリン及びLPO
がそれぞれ活性な状態で含まれているラクテニン画分を
回収する方法である。 工程 脱脂乳を硫酸化多糖体に接触させ、ついで吸着
画分を塩溶液により溶出させ、ラクトフェリン及びラク
トパーオキシダーゼを含有する画分を回収する工程、 工程 前記工程の非吸着画分を酸またはレンネット
で凝固させ、ホエー画分を得て、このホエー画分を塩析
処理し、免疫グロブリン含有画分を回収する工程、 工程 工程及び工程で回収された画分をあわせ、
脱塩および低分子画分を除去する工程。Means for Solving the Problems The present invention comprises the following steps:
Consisting of immunoglobulin, lactoferrin and LPO
Is a method for recovering a lactenin fraction contained in an active state. Contacting the skim milk with the sulfated polysaccharide, then eluting the adsorbed fraction with a salt solution, and collecting a fraction containing lactoferrin and lactoperoxidase; Coagulating in a net to obtain a whey fraction, subjecting the whey fraction to salting-out treatment, and collecting an immunoglobulin-containing fraction;
Desalting and removing low molecular fractions.
【０００８】本発明においては、哺乳動物の分娩後早期
の乳、特に、免疫グロブリン、ラクトフェリン及びLPO
を高濃度に含有する原料として初乳を用いることが望ま
しい。免疫グロブリン、ラクトフェリン、LPO を高濃度
に含有する乳としては、ヒト、ウシ、ヤギ、ヒツジなど
分娩後１〜７日以内、特に好ましくは、分娩後１〜５日
以内の初乳がラクテニン画分の含量も高いため適してい
る。しかし、本発明では、これら以外の哺乳動物の初乳
あるいは通常の泌乳期の乳であっても原料として使用可
能である。In the present invention, the milk of a mammal in the early postpartum period, particularly, immunoglobulin, lactoferrin and LPO
It is desirable to use colostrum as a raw material containing a high concentration of. As milk containing high concentrations of immunoglobulin, lactoferrin and LPO, colostrum within 1 to 7 days after delivery, particularly preferably within 1 to 5 days after delivery, such as humans, cows, goats and sheep, is a lactenin fraction. Is also suitable because of its high content. However, in the present invention, other colostrums of mammals or milk of a normal lactation period can be used as a raw material.
【０００９】本発明では、まずこれらの乳を脱脂処理
後、ラクトフェリン及びLPO を選択的に吸着する作用を
有する硫酸化多糖体と接触させ、ラクトフェリン及びLP
O を硫酸化多糖体に吸着させる。硫酸化多糖体としては
スルフォン化アルギネート、スルフォン化セルロース、
スルフォン化デキストラン、スルフォン化キトサンなど
を例示できるが、本発明においてはスルフォン化キトサ
ンが吸着効率の面からみて特に好ましい。スルフォン化
キトサンはスルフォン化キトパールの名称で富士紡績か
ら市販されており容易に入手可能である。スルフォン化
キトパールに導入されたスルフォン基の量は、担体1ml
当たり10〜50μeqに調整されたものが本発明では好まし
い。特に好ましくは担体1ml 当たり27〜40μeqに調整さ
れたものである。担体ゲルは、脱脂乳容量の約0.5 〜5
％を用いて吸着操作を行う。吸着操作は、バッチ処理や
担体を充填したカラムに脱脂初乳を通液する方法など種
々の方法を採用できるが、特開平3-109400号公報に開示
された回転型カラムを用いた循環法により吸着操作を行
うことが吸着効率も高く好ましい。In the present invention, these milks are first defatted and then brought into contact with a sulfated polysaccharide having an action of selectively adsorbing lactoferrin and LPO, thereby obtaining lactoferrin and LP.
O is adsorbed on the sulfated polysaccharide. Sulfonated alginate, sulfonated cellulose,
Sulfonated dextran, sulfonated chitosan and the like can be exemplified. In the present invention, sulfonated chitosan is particularly preferable from the viewpoint of adsorption efficiency. Sulfonated chitosan is commercially available from Fuji Boseki under the name of sulfonated chitopearl and is readily available. The amount of sulfone groups introduced into the sulfonated chitopearl was 1 ml of carrier.
In the present invention, those adjusted to 10 to 50 μeq per one are preferred. Particularly preferably, the concentration is adjusted to 27 to 40 μeq per 1 ml of the carrier. The carrier gel has a capacity of about 0.5 to 5
% To perform the adsorption operation. The adsorption operation can employ various methods such as a method of passing defatted colostrum through a batch treatment or a column filled with a carrier, but by a circulation method using a rotary column disclosed in JP-A-3-109400. It is preferable to perform the adsorption operation because the adsorption efficiency is high.
【００１０】担体はその後イオン強度0.2 以下、pH5 以
下の水溶液もしくは緩衝液を用いて洗浄し、担体の間に
つまった不純物を洗浄する。洗浄後、担体をイオン強度
0.5以上、pH 5以上、好ましくはイオン強度0.7 〜2.0
でpH6 〜8 の水溶液または緩衝液で吸着画分の溶出を行
う。このような緩衝液には、炭酸水素ナトリウム緩衝液
等が用いられる。The carrier is then washed with an aqueous solution or buffer having an ionic strength of 0.2 or less and a pH of 5 or less to remove impurities clogged between the carriers. After washing, the carrier is ionic strength
0.5 or more, pH 5 or more, preferably ionic strength 0.7 to 2.0
Elution of the adsorbed fraction is carried out with an aqueous solution or a buffer solution having a pH of 6 to 8. As such a buffer, a sodium bicarbonate buffer or the like is used.
【００１１】一方、硫酸化多糖と接触させた後の非吸着
画分は、酸もしくはレンネット処理により、カゼイン画
分を凝固させ、濾過もしくは遠心分離してホエー画分を
回収する。酸処理は、乳酸、塩酸等の酸を用いpH4.6 に
調整することにより、またレンネット処理は酵素力価10
万U/g 程度のレンネットを非吸着画分に添加することに
より行われる。このような処理によってカゼイン画分を
凝固沈澱させ、ホエー画分を採取する。ホエー画分から
は塩析により免疫グロブリンを含む画分を分離する。免
疫グロブリンは約40％飽和硫安で沈殿することが知られ
ており、この方法により回収することができる。沈殿画
分を濾過により回収し、再度水に溶解し、不溶解物質を
濾過により除いた後、上記の硫酸化多糖体吸着画分とあ
わせる。On the other hand, the non-adsorbed fraction after the contact with the sulfated polysaccharide is treated with an acid or rennet to coagulate the casein fraction, followed by filtration or centrifugation to collect a whey fraction. The acid treatment is performed by adjusting the pH to 4.6 using an acid such as lactic acid or hydrochloric acid.
This is performed by adding about 10,000 U / g of rennet to the non-adsorbed fraction. By such treatment, the casein fraction is coagulated and precipitated, and the whey fraction is collected. The fraction containing immunoglobulin is separated from the whey fraction by salting out. Immunoglobulins are known to precipitate with about 40% saturated ammonium sulfate and can be recovered by this method. The precipitate fraction is collected by filtration, dissolved again in water, and the insoluble substance is removed by filtration, and then combined with the sulfated polysaccharide-adsorbed fraction.
【００１２】この画分はラクトフェリン、LPO 及び免疫
グロブリンの他溶出に用いた塩、塩析に使用した硫安が
高濃度に含有されているため脱塩処理を行う。脱塩処理
としては、透析、イオン交換、分子篩による脱塩などの
方法を用いることが出来る。特に、本発明においては、
50KD以下の分子量画分を限外濾過膜により除去する工程
を採用することにより、脱塩、濃縮及びラクテニン画分
の精製を同時に行うことができる。この限外濾過は電気
伝導度あるいは硫酸イオン濃度を指標とすることによ
り、脱塩効果を判定できる。電気伝導度 400μS/cmおよ
び硫酸イオン濃度0.29％( 全固形分当たり) 以下となっ
た段階で限外濾過を終了させる。This fraction is desalted because it contains high concentrations of lactoferrin, LPO and immunoglobulin as well as salts used for elution and ammonium sulfate used for salting out. As the desalting treatment, methods such as dialysis, ion exchange, and desalting by molecular sieve can be used. In particular, in the present invention,
By employing the step of removing the molecular weight fraction of 50 KD or less by an ultrafiltration membrane, desalting, concentration and purification of the lactenin fraction can be performed simultaneously. In this ultrafiltration, the desalination effect can be determined by using the electric conductivity or the sulfate ion concentration as an index. The ultrafiltration is terminated when the electric conductivity is 400 μS / cm and the sulfate ion concentration is 0.29% or less (per total solid content).
【００１３】以上の操作により、免疫グロブリン、ラク
トフェリン及びLPO を含有するラクテニン画分を容易に
回収することができる。この画分は乾燥処理により粉末
化することができる。しかしラクテニン活性の失活をふ
せぐためには可能な限り低温条件での乾燥、例えば凍結
乾燥等の処理を行うことが望ましい。[0013] By the above operation, the lactenin fraction containing immunoglobulin, lactoferrin and LPO can be easily recovered. This fraction can be powdered by a drying treatment. However, in order to prevent the deactivation of lactenin activity, it is desirable to carry out drying under the lowest possible temperature conditions, such as freeze-drying.
【００１４】以下に本発明を実施例によりさらに詳細に
説明する。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.
【実施例１】ウシ初乳からのラクテニン画分の回収 工程 分娩後1 〜5 日経過のウシより搾乳し集めた初
乳を遠心分離により脱脂乳とした。この脱脂初乳100kg
(14℃に冷却) を、スルフォン基導入量38.9μeq/ml ・
ゲルのスルフォン化キトパールSU-3（富士紡績製) を88
2ml 充填した内容積1474mlの回転型吸着装置（東京理化
製) に通液した。通液速度は25kg/ 時間として通液し
た。回転型反応装置の回転数は30rpm に調整した。Example 1 Step of Recovering Lactenin Fraction from Bovine Colostrum Colostrum extracted from cows 1-5 days after calving and collected was centrifuged to obtain skim milk. 100 kg of this skim milk
(Cooled to 14 ° C) with a sulfone group introduction amount of 38.9 μeq / ml
Gel sulfonated Chitopearl SU-3 (Fuji Boseki) 88
The solution was passed through a rotary adsorber (manufactured by Tokyo Rika) having a capacity of 1474 ml and filled with 2 ml. The liquid flow rate was 25 kg / hour. The rotation speed of the rotary reactor was adjusted to 30 rpm.
【００１５】工程 次いで30〜35℃の温湯40l を工程
と同様に通液し、洗浄を行った。洗浄は280nm の吸光
度を測定し、吸光度が光路長1cm のセルを用いて測定し
た場合、0.01以下になることを確認し、洗浄を終了させ
た。Step Next, 40 l of hot water at 30 to 35 ° C. were passed in the same manner as in the step to wash. Washing was performed by measuring the absorbance at 280 nm, and it was confirmed that the absorbance was 0.01 or less when measured using a cell having an optical path length of 1 cm.
【００１６】工程 洗浄後0.7M食塩水(0.5mMの炭酸水
素ナトリウム NaHCO3 , pH7.0 に溶解して調製する) 約
67.5l を工程と同様な条件で通液し、溶出を行った。
溶出は280nm の吸光度を測定し、吸光度が光路長1cm の
セルを用いて測定した場合、0.015 〜0.020 になること
を確認した。溶出液66.5kgを回収した。この回収液の電
気伝導度は26.5mS/cm であった。Step: After washing, 0.7 M saline solution (prepared by dissolving in 0.5 mM sodium bicarbonate, NaHCO 3 , pH 7.0)
67.5 l was passed under the same conditions as in the step to elute.
The elution was measured by measuring the absorbance at 280 nm, and it was confirmed that the absorbance was 0.015 to 0.020 when measured using a cell having an optical path length of 1 cm. 66.5 kg of eluate was recovered. The electric conductivity of this recovered liquid was 26.5 mS / cm.
【００１７】工程 工程で通液終了した脱脂初乳溶
液104.5kg を回収し、この溶液にレンネットを約 0.006
％濃度になるように添加し、30℃で30分間ゆるやかに攪
拌しながら酵素反応を行わせ、カード形成させた。凝固
したカードを濾過により除き、ホエー画分を回収した。Step 104.5 kg of the defatted colostrum solution passed through in the step is recovered, and rennet is added to this solution for about 0.006 kg.
%, And the mixture was allowed to undergo an enzymatic reaction with gentle stirring at 30 ° C. for 30 minutes to form a curd. The coagulated curd was removed by filtration, and the whey fraction was collected.
【００１８】工程 ホエー溶液に硫安を加え、硫安40
％飽和になるように調整し、10℃の冷蔵庫に一昼夜放置
し、塩析を行った。翌日、0.5 μm の濾過板をセットし
濾過助剤としてセライト(Celite-535) 750ｇを用いて濾
過層を形成させたフィルタープレスを用いて濾過を行っ
た。沈殿画分6.3kg を回収した。Step Ammonium sulfate is added to the whey solution, and ammonium sulfate is added to the solution.
%, And left in a refrigerator at 10 ° C. for 24 hours to carry out salting out. The next day, a 0.5 μm filter plate was set, and filtration was performed using a filter press on which a filtration layer was formed using 750 g of Celite-535 as a filter aid. 6.3 kg of the precipitated fraction was recovered.
【００１９】工程 この沈殿画分に47l の水を加え、
２時間緩やかに攪拌しながら蛋白画分を溶解させ、つい
で 0.2μm の濾過板をセットしたフルタープレスを用い
て濾過を行い、濾過助剤として添加したセライトを除去
し、あわせて除菌をおこなった。濾過液として44.5kgを
回収した。Step 47 l of water are added to the sediment fraction,
The protein fraction was dissolved with gentle stirring for 2 hours, and then filtered using a Fulter press equipped with a 0.2 μm filter plate to remove the celite added as a filter aid and disinfected. . 44.5 kg of the filtrate was recovered.
【００２０】工程 工程と工程で得られた溶液を
合わせ、50KDのUF膜をセットした限外濾過装置を用いて
限外濾過濃縮を行った。濃縮液の電気伝導度及び硫酸イ
オン濃度を測定し、電気伝導度 400μS/cm、硫酸イオン
濃度0.29％（全固形分当たり) になった時点で濃縮操作
を終了し、ラクテニン画分を回収した。ついでこの画分
を凍結乾燥処理を行い、ラクテニン画分の乾燥粉末350
g を得た。Steps The solutions obtained in the steps were combined and subjected to ultrafiltration using an ultrafiltration apparatus equipped with a 50 KD UF membrane. The electric conductivity and the sulfate ion concentration of the concentrated solution were measured, and when the electric conductivity reached 400 μS / cm and the sulfate ion concentration became 0.29% (per the total solid content), the concentration operation was terminated, and the lactenin fraction was collected. This fraction was then freeze-dried to give a dry powder of the lactenin fraction of 350
g.
【００２１】[0021]
【実施例２】ウシ通常乳からのラクテニン画分の回収 分娩後10日以上経過し、通常に搾乳しているウシより集
めた牛乳 100kgを遠心分離により脱脂乳とした。以下操
作は実施例１の工程〜と同様に操作を行い、ラクテ
ニン画分を含む液30kgを得た。この濾過液を工程とし
て工程及び工程で得た溶液を合わせ、50KDのUF膜を
セットした限外濾過装置を用いて限外濾過濃縮を行っ
た。濃縮液の電気伝導度及び硫酸イオン濃度を測定し、
電気伝導度 400μS/cm、硫酸イオン濃度0.29％（全固形
分当たり) になった時点で濃縮操作を終了し、ラクテニ
ン画分を回収した。ついでこの画分を凍結乾燥処理を行
い、乾燥粉末250 g を得た。Example 2 Recovery of the Lactenin Fraction from Bovine Normal Milk 100 kg of milk collected from cows that had been milked more than 10 days after delivery were converted to skim milk by centrifugation. The subsequent operation was performed in the same manner as in Steps 1 to 3 of Example 1, to obtain 30 kg of a liquid containing a lactenin fraction. Using this filtrate as a process, the process and the solution obtained in the process were combined, and ultrafiltration and concentration were performed using an ultrafiltration device equipped with a 50 KD UF membrane. Measure the electric conductivity and sulfate ion concentration of the concentrate,
When the electric conductivity reached 400 μS / cm and the sulfate ion concentration reached 0.29% (per the total solid content), the concentration operation was terminated, and the lactenin fraction was recovered. Subsequently, the fraction was freeze-dried to obtain 250 g of a dry powder.
【００２２】[0022]
【実施例３】ラクテニン画分中の活性成分の分析 実施例１及び実施例２で得たラクテニン含有画分粉末中
の免疫グロブリン、ラクトフェリン及びLPO 含量の測定
を行った。 免疫グロブリン含量 IgG含量として定量を行った。抗ウシIgG 抗体（ヤギ）
を用いたサンドイッチEIA 法により測定を行った。 ラクトフェリン含量 抗ウシラクトフェリン血清（ウサギ) を用いたサンドイ
ッチEIA 法により測定を行った。 LPO 含量 LPO活性を指標としてLPO 含量を測定した。回収したラ
クテニン画分中の活性成分は表 1の通りであった。EXAMPLE 3 Analysis of Active Ingredient in Lactenin Fraction The contents of immunoglobulin, lactoferrin and LPO in the lactenin-containing fraction powder obtained in Examples 1 and 2 were measured. Immunoglobulin content Quantification was performed as IgG content. Anti-bovine IgG antibody (goat)
The measurement was carried out by a sandwich EIA method using a. Lactoferrin content was measured by a sandwich EIA method using anti-bovine lactoferrin serum (rabbit). LPO content LPO content was measured using LPO activity as an index. The active ingredients in the collected lactenin fraction were as shown in Table 1.
【００２３】[0023]
【表１】 [Table 1]
【００２４】[0024]
【比較例】特開平3-218318号公報にはウシ初乳ホエーを
脱脂、レンネット処理、限外濾過処理、濃縮により蛋白
質含有量が75％を超える粉末の調製方法が開示されてい
る。この粉末には免疫グロブリン、ラクトフェリン、LP
O が豊富に含有されていることが記載されている。この
公報に開示された方法に従い実施例1 に示した初乳100k
g を処理し、500gの粉末を得た。この粉末を実施例２と
同様に活性成分の分析をおこなった。免疫グロブリン2
3.5％、ラクトフェリン1.43％が含有されていたがLPO
は検出されなかった。Comparative Example JP-A-3-218318 discloses a method for preparing a powder having a protein content of more than 75% by defatting bovine colostrum whey, rennet treatment, ultrafiltration treatment and concentration. This powder contains immunoglobulin, lactoferrin, LP
It describes that O is abundantly contained. Colostrum 100k shown in Example 1 according to the method disclosed in this publication
g was processed to obtain 500 g of powder. This powder was analyzed for active ingredients in the same manner as in Example 2. Immunoglobulin 2
LPO contained 3.5% and lactoferrin 1.43%
Was not detected.
【００２５】[0025]
【発明の効果】本発明の実施により活性の高いラクテニ
ン画分を容易に回収することが可能となる。また本発明
操作は、吸着溶出、塩析、限外濾過の簡便な３工
程からなり、大量処理も可能であり、生産コストの低減
も可能である。さらに従来の方法では回収することが困
難であった、免疫グロブリン、ラクトフェリン及びラク
トパーオキシダーゼの３成分を含有する画分として回収
できるため、より活性の高いラクテニン画分を得ること
が可能となる。According to the present invention, a highly active lactenin fraction can be easily recovered. The operation of the present invention comprises three simple steps of adsorption and elution, salting out, and ultrafiltration, so that large-scale treatment is possible and production cost can be reduced. Furthermore, since it can be recovered as a fraction containing three components of immunoglobulin, lactoferrin and lactoperoxidase, which was difficult to recover by the conventional method, it is possible to obtain a more active lactenin fraction.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 阿彦 健吉 北海道札幌市中央区宮の森一条９丁目４ −22 (56)参考文献 特開 昭58−28233（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) A23J 1/20 A23J 3/08 A23L 1/305 ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of the front page (72) Inventor Kenkichi Ahiko 9-4-2, Miyanomori 1-chome, Chuo-ku, Sapporo, Hokkaido (56) References JP-A-58-28233 (JP, A) (58) Fields investigated (Int. Cl. 6 , DB name) A23J 1/20 A23J 3/08 A23L 1/305
Claims (3)
せ、ついで吸着画分を塩溶液により溶出させ、ラクトフ
ェリン、ラクトパーオキシダーゼを含有する画分を回収
する工程、 工程 前記工程の非吸着画分を酸またはレンネット
を用いて凝固させ、ホエー画分を得て、このホエー画分
を塩析処理し、免疫グロブリン含有画分を回収する工
程、 工程 工程及び工程で回収された画分をあわせ、
脱塩および低分子画分を除去する工程からなる、活性な
免疫グロブリン、ラクトフェリン及びラクトパーオキシ
ダーゼを含有するラクテニン画分の回収方法。1. a step of contacting skim milk with a sulfated polysaccharide, and then eluting an adsorbed fraction with a salt solution to collect a fraction containing lactoferrin and lactoperoxidase; Coagulation using an acid or rennet to obtain a whey fraction, subjecting the whey fraction to salting-out treatment, and recovering an immunoglobulin-containing fraction. In addition,
A method for recovering a lactenin fraction containing active immunoglobulin, lactoferrin and lactoperoxidase, comprising a step of desalting and removing a low molecular weight fraction.
程が、50KD以上の限外濾過膜を用いて行うことを特徴と
する請求項1 記載の回収方法。2. The recovery method according to claim 1, wherein the desalting and low molecular weight fraction removing steps in the step are performed using an ultrafiltration membrane of 50 KD or more.
ンを用いる請求項１記載の回収方法。3. The method according to claim 1, wherein sulfonated chitosan is used as the sulfated polysaccharide.
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| JPH05244875A JPH05244875A (en) | 1993-09-24 |
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| US7932069B2 (en) | 2004-02-17 | 2011-04-26 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Process for producing lactoperoxidase |
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