JP2958346B2 - 抗HIV―2モノクローナル抗体およびそれを用いた抗HIV―2gp41抗体の検出方法 - Google Patents
抗HIV―2モノクローナル抗体およびそれを用いた抗HIV―2gp41抗体の検出方法Info
- Publication number
- JP2958346B2 JP2958346B2 JP2025000A JP2500090A JP2958346B2 JP 2958346 B2 JP2958346 B2 JP 2958346B2 JP 2025000 A JP2025000 A JP 2025000A JP 2500090 A JP2500090 A JP 2500090A JP 2958346 B2 JP2958346 B2 JP 2958346B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- hiv
- antibody
- amino acid
- monoclonal antibody
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 title claims abstract description 90
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 title claims abstract description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 34
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 claims abstract description 76
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 claims abstract description 40
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 40
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 30
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 18
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 14
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 13
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 claims description 10
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 10
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 8
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 claims description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 3
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 3
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 claims description 3
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 3
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 abstract description 2
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 41
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 20
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 20
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 18
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 17
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 17
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 17
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 15
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 11
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 11
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 8
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 8
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 8
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 8
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 8
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 8
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 7
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N Dimethyl sulfide Chemical compound CSC QMMFVYPAHWMCMS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 6
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N Indole Chemical compound C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 6
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 6
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 6
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 6
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 6
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N pristane Chemical compound CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C XOJVVFBFDXDTEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 5
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 5
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 4
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N p-cresol Chemical compound CC1=CC=C(O)C=C1 IWDCLRJOBJJRNH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 4
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000010814 radioimmunoprecipitation assay Methods 0.000 description 4
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 4
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 4
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 108010073443 Ribi adjuvant Proteins 0.000 description 3
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 3
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N n-(2,4-dichloro-5-propan-2-yloxyphenyl)acetamide Chemical compound CC(C)OC1=CC(NC(C)=O)=C(Cl)C=C1Cl QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N N,N-diisopropylethylamine Substances CCN(C(C)C)C(C)C JGFZNNIVVJXRND-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 2
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N (2s,3r)-2-azaniumyl-3-phenylmethoxybutanoate Chemical compound [O-]C(=O)[C@@H]([NH3+])[C@@H](C)OCC1=CC=CC=C1 ONOURAAVVKGJNM-SCZZXKLOSA-N 0.000 description 1
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 1,1-ethanedithiol Chemical compound CC(S)S DHBXNPKRAUYBTH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxybenzothiazole Chemical compound C1=CC=C2SC(O)=NC2=C1 YEDUAINPPJYDJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLHCBQAPPJAULW-UHFFFAOYSA-N 4-methylbenzenethiol Chemical compound CC1=CC=C(S)C=C1 WLHCBQAPPJAULW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 108010039627 Aprotinin Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 241001622557 Hesperia Species 0.000 description 1
- 101000914496 Homo sapiens T-cell antigen CD7 Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102000001399 Kallikrein Human genes 0.000 description 1
- 108060005987 Kallikrein Proteins 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N L-aspartic acid beta-benzyl ester Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 VGALFAWDSNRXJK-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100027208 T-cell antigen CD7 Human genes 0.000 description 1
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 1
- 230000036436 anti-hiv Effects 0.000 description 1
- 230000003302 anti-idiotype Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 229960004405 aprotinin Drugs 0.000 description 1
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000001175 cerebrospinal fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000012916 chromogenic reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000003113 dilution method Methods 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000010419 fine particle Substances 0.000 description 1
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000004754 hybrid cell Anatomy 0.000 description 1
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N iniprol Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@H]2CSSC[C@H]3C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC=4C=CC(O)=CC=4)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CC=4C=CC=CC=4)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC2=O)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@H](CC=2C=CC=CC=2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H]2N(CCC2)C(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N2[C@@H](CCC2)C(=O)N3)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC=2C=CC=CC=2)C(=O)N[C@H](C(=O)N1)C(C)C)[C@@H](C)O)[C@@H](C)CC)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 ZPNFWUPYTFPOJU-LPYSRVMUSA-N 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 1
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 1
- 230000011278 mitosis Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 229920002113 octoxynol Polymers 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000008057 potassium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- HIGSLXSBYYMVKI-UHFFFAOYSA-N pralidoxime chloride Chemical compound [Cl-].C[N+]1=CC=CC=C1\C=N\O HIGSLXSBYYMVKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000730 protein immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 1
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 1
- 239000012064 sodium phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010532 solid phase synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 description 1
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- -1 strips Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001360 synchronised effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N trehalose 6,6'-dimycolate Chemical compound C([C@@H]1[C@H]([C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COC(=O)C(CCCCCCCCCCC3C(C3)CCCCCCCCCCCCCCCCCC)C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)O2)O)O1)O)OC(=O)C(C(O)CCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCCC)CCCCCCCCCCC1CC1CCCCCCCCCCCCCCCCCC XETCRXVKJHBPMK-MJSODCSWSA-N 0.000 description 1
- 239000003656 tris buffered saline Substances 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 238000010396 two-hybrid screening Methods 0.000 description 1
- 239000013026 undiluted sample Substances 0.000 description 1
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1063—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV env, e.g. gp41, gp110/120, gp160, V3, PND, CD4 binding site
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
- Y10S930/221—Retrovirus related, or human immunodeficiency virus related, or simian immunodeficiency virus related
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hematology (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
るHIV(ヒト免疫不全ウイルス)に対する暴露の検出に
関する。さらに詳しくは、本発明は、マウスモノクロー
ナル抗体H37c97、HIV−2 gp41内のそのエピトープに関
し、これらは、HIV−1ウイルスに暴露した患者からHIV
−2ウイルスに暴露した患者を識別するのに用いるため
のイムノアッセイの基礎を提供する。
クレオチド配列が決定されている。それらHIV単離物と
しては、HIV−1株であるHTLN−III[ラットナー(Ratn
er)ら、Nature(1985)313:277];ARV−2[サンチェ
ス−ペスカドール(Sanchez−Pescador)ら、Science
(1985)227:484];LAV[ウエイン−ホブソン(Wain−H
obson)ら、Cell(1985)40:9];およびCDC−451[デ
サイ(Desai)ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1986)83:
8380]が挙げられる。HIV−2 ROD単離物のヌクレオチド
配列は、ガイアダー(Guyader)らによって報告されて
いる[Nature(1987)326:662]。HIV−2 NIHZ単離物
は、ツァガリー(Zagury)らによって報告されている
[PNAS(1988)85:5941〜5945]。さらに別のHIV配列が
マイヤーズ(Meyers)らにより見出されている[ヒュー
マン・レトロバイラスイズ・アンド・AIDS(Human Retr
oviruses and AIDS)1988、ア・コンピレーション・ア
ンド・アナリシス・オブ・ニュークレイック・アシッド
・アンド・アミノ・アシッド・シークエンシイズ(A Co
mpilation and Analysis of Nucleic Acid and Amino A
cid Sequences)(ロスアラモス・ナショナル・ラボラ
トリー(Los Alamos National Laboratory)、ロスアラ
モス、NM)]。
つに、膜透過性タンパク質(TMP)であるgr41がある。
このタンパク質に対する抗体は血清変換に際して最初に
出現するものの一つであり、抗gr41抗体がAIDSの無症候
および他の臨床段階においてほぼ全般的に存在すること
から明示されるように、gr41に対する免疫応答は該疾患
の進行を通じて比較的強く保持されているものと思われ
る。該タンパク質に対する抗体応答の大部分は、よく特
徴付けられた免疫優性(immunodominant)領域に向けら
れており[チャング(Chang)ら、Bio/Technology(198
5)3:905〜909]、アミノ酸578〜613として大まかに定
められている(番号付けはHXB2単離物についてマイヤー
ズらによる)。重要な免疫原配列を形成するものとして
免疫優性領域内の特定の小さな配列が同定されてきてい
る。そのような配列の例としては、RILAVERYLKDQQLLGIW
GCS(ペプチドの免疫原性を保持するのにarg−1、ile
−2およびlys−10がそれぞれ重要な役割を担ってい
る)[ワング(Wang)ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA(19
86)83:6159〜6163]、LGLWGCSGKLIC(ペプチドの免疫
原性を保持するのに両cys残基が重要な役割を担ってい
ると思われる)[グナン(Gnann)ら、J.Virology(198
7)61:2639〜2641]およびSGKLICTTAVPWNAS(天然ウイ
ルスでは隠されているが疾患の進行の間は暴露され免疫
原性となるエピトープからなる)[ナーバネン(Narvan
en)ら、AIDS(1988)2:119〜123]が挙げられる。配列
GIWGCSGKLICをマッピングするヒトモノクローナル抗体
が産生されており、この配列が免疫原としての中心的な
役割を担っていることがさらに支持された[バナポー
(Banapour)ら、J.Immunol.(1987)139:4027〜403
3]。
担っているとしても二次的な役割しか担っていないと思
われ[グナンら、J.Infect.Diseases(1987)156:261〜
267;およびウインドホイザー(Windheuser)およびウッ
ド(Wood)、Gene(1988)64:107〜119]、診断上有用
なものとしては同定されていない。
下、「HIV−2 gp41」という)に関してははるかに知ら
れておらず、この分野の研究は、HIV−1に対する暴露
からHIV−2に対する暴露を識別するための血清学的標
的として該タンパク質の免疫優性領域を使用することに
主として向けられている。グナンら[Science(1987)2
37:1346〜1349]は、HIV−2に対する抗体を検出しこれ
をHIV−1に対する抗体から識別するために、合成ペプ
チドNSWGCAFRQVC中にHIV−2 ROD免疫優性領域の一部を
用いた。加えて、コット(Cot)ら[AIDS Research and
Human Retroviruses(1988)4:239〜241]もまた、HIV
−1 gp41に対するヒト抗体からHIV−2 gp41に対するヒ
ト抗体を識別するために免疫優性領域ペプチドを用い
た。用いたHIV−2ペプチドは、配列RVTAIEKYLQDQARLNS
WGCAFRQVCであった。両研究において、利用した領域は
第二のシステイン残基で終わっていた。両研究において
も、また他のいかなる報告にも、HIV−2配列HTTVPWが
血清学的標的として、またはモノクローナル抗体の抗原
として診断的価値を有することは示されていない。
るHIV−2 gp41上のエピトープに対する特異性を特徴と
するモノクローナル抗体; 上記モノクローナル抗体を産生する哺乳動物抗体産生
細胞株; マウス由来ハイブリドーマ細胞株ATCC HB10012; ハイブリドーマ細胞株ATCC HB10012により産生された
モノクローナル抗体; 患者のHIV−1に対する暴露からHIV−2に対する暴露
を識別する方法であって、 (i)該患者からの生物学的試料を、実質的にHIV−2
のアミノ酸578からアミノ酸603の領域からなるアミノ酸
配列に結合した、アミノ酸配列HTTVPWを実質的に有する
エピトープを含む抗原、および該エピトープに特異的な
抗体と接触させて抗原抗体複合体を生成させ、ついで (ii)生成した該複合体の量を測定してHIV−2に対す
る暴露を決定する ことを特徴とする方法;および 生物学的試料中のHIV−2 gp41に対する抗体の存在ま
たは量を検出する方法であって、 (i)該試料を、実質的にHIV−2のアミノ酸578からア
ミノ酸603の領域からなるアミノ酸配列に結合した、ア
ミノ酸配列HTTVPWを実質的に有するエピトープを含む抗
原、および該エピトープに特異的な抗体と接触させて抗
原抗体複合体を生成させ、ついで (ii)生成した該複合体の量を測定して試料中のHIV−2
gp41に対する抗体の存在または量を決定する ことを特徴とする方法を提供することにある。
るHIV−2 gp41上のエピトープに対する特異的を特徴と
するモノクローナル抗体を提供する。本発明はまた、該
モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を
も提供する。好ましい態様において、マウス由来ハイブ
リドーマ細胞株ATCC HB10012はモノクローナル抗体H37c
94を産生する。
2に対する暴露を識別する方法をも提供する。該方法
は、該患者からの生物学的試料を、実質的にHIV−2の
アミノ酸578からアミノ酸603の領域からなるアミノ酸配
列に結合した、アミノ酸配列HTTVPWを実質的に有するエ
ピトープを含む抗原、および該エピトープに特異的な抗
体と接触させて抗原抗体複合体を生成させ、ついで、生
成した該複合体の量を測定してHIV−2に対する暴露を
決定する、ことを特徴とする。
生物学的試料中の抗HIV−2抗体を検出するためのプロ
ーブとして用いることができる。
−2 gp41上のエピトープに対する特異性を特徴とするモ
ノクローナル抗体を提供する。ここで、「実質的」なる
後は、保存されたまたは保存されないアミノ酸変化を含
みながら、なお該モノクローナル抗体により認識される
あらゆる関連配列を包含することを意味する。
ル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株を提供する。好
ましい態様において、マウス由来ハイブリドーマ細胞株
ATCC HB10012はモノクローナル抗体H37c94を産生する。
2に対する暴露を識別する方法をも提供する。該方法
は、該患者からの生物学的試料を、実質的にHIV−2の
アミノ酸578からアミノ酸603の領域からなるアミノ酸配
列に結合した、アミノ酸配列HTTVPWを実質的に有するエ
ピトープを含む抗原、および該エピトープに特異的な抗
体と接触させて抗原抗体複合体を生成させ、ついで、生
成した該複合体の量を測定してHIV−2に対する暴露を
決定する、ことを特徴とする。
は部分的に精製した天然の、合成の、もしくは組換えに
より製造したHIV−2 gp41が含まれる。該エピトープに
結合した該アミノ酸において用いた[実質的」なる語
は、保存されたまたは保存されないアミノ酸変化および
アミノ酸の付加もしくは欠失を含みながら、なおHIV−2
gp41ヒト抗体を認識するあらゆる配列を包含すること
を意味する。
列HTTVPWを実質的に有するエピトープに特異的な抗体と
してH37c94を用いる。このモノクローナル抗体H37c94
は、該抗原に対する結合に関し、試料中に含まれる抗HI
V−2 gp41抗体と競合する。
94は、生物学的試料中の抗HIV−2 gp41抗体を検出する
ためのプローブとして用いることができる。好ましい態
様では、試験試料を標識H37c94と混合し、ついで固体支
持体に固定した組換えHIV−2 gp41を加える。結合した
標識H37c94が存在しないと吸光度は減少し、試験試料中
に抗HIV−2 gp41抗体が存在したことを示す。H37c94を
ヒト抗HIV−2抗体と競合させる他のアッセイの態様
は、当業者には知られている。
しては、全血、血清、血漿、脳脊髄液およびリンパ球な
どのヒトおよび動物体液または細胞培養上清などが挙げ
られる。
は、反応トレイのウエル、試験管、ポリスチレンビー
ズ、ストリップ、膜、微細粒子、および当業者に知られ
た他の固体マトリックスなどが挙げられる。
標識または酵素増幅システムを本発明のイムノアッセイ
に用いることができる。代表的な標識としては、酵素標
識、放射性同位体標識、蛍光標識および化学発光標識が
挙げられる。または特異的結合成分のペアを用いること
もでき、その際、一方の成分を本発明アッセイの抗体に
結合させ、もう一方の成分を検出可能な標識に結合させ
る。たとえば、ビオチン/標識抗ビオチン系のようなハ
プテン/標識抗ハプテン系を用いることができる。加え
て、該抗体に対する標識特異的結合タンパク質を用いる
こともでき、該タンパク質は、標識した第二の抗体また
は標識したプロテインAであってよい。上記モノクロー
ナル抗体がマウスに由来するときは、該モノクローナル
抗体に特異的な標識抗マウス免疫グロブリンを用いるこ
とができる。本明細書に記載のモノクローナル抗体を検
出するために、標識した抗イディオタイプ抗体を用いる
こともできる。
のに理想的に適している。そのようなキットは、密に区
域内に収容するために区画化されたキャリヤ手段、およ
びバイアル、びん、試験管などの1または2以上のコン
テナー手段からなる。各コンテナー手段は、本発明のイ
ムノアッセイに用いる別々の要素の一つを含んでいる。
にてアメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション
(American Type Culture Collection)(ロックビル、
メリーランド)に受託した。
ーナル抗体H37c94の調製および特徴付け、並びに患者の
HIV−1への暴露からHIV−2への暴露を識別するための
その臨床学的有用性を詳述するものである。
ld)により記載された一般的な方法[グロス&マイネホ
ーファー(Gross & Meinehofer)編、The Peptides、V
ol.2(アカデミックプレス、ニューヨーク、1980)]に
従い、HIV−2エンベロープタンパク質の配列604〜636
に対応するペプチドを樹脂支持体上で段階固相合成法
(カルボキシ末端残基から合成開始)により組み立て
た。BOC−L−Asn−OCH2−Pam樹脂をアプライド・バイ
オシステムズ・シンセサイザー(Applied Biosystems s
ynthesizer)、モデル430Aの反応容器に移した。アルギ
ニン、アスパラギンおよびグルタミン付加の場合にコー
ニッヒ(Konig)およびガイガー(Geiger)により記載
されたDOC/HOBTプロトコール[Chem.Ber.(1970)103:7
88〜798]を用いた他は、既存の対称無水物法(preform
ed symmetric anhydride chemistry)により保護アミノ
酸を樹脂支持体に段階的に二重結合させた。すべてのα
−アミノ末端残基はt−フチルオキシカルボニル(t−
BOC)結合により保護し、種々のアミノ酸残基の側鎖は
下記基により保護した:Thr(Bzl)、His(Tos)、Cys
(4MeBzl)、Arg(Tos)、Ser(Bzl)、Asp(OBzl)、T
yr(2−Br−Z)、Lyr(2−Cl−Z)、Glu(OBzl)。
アミノ酸のトリプトファンおよびメチオニンは、側鎖保
護基を用いることなく使用した。トリプトファン導入
後、その後のすべてのNα−保護(BOC)基を除去する
ため、インドールを1%(w/v)の濃度にてトリフルオ
ロ酢酸に加えた。メチオニン導入後、エタンジチオール
もまた0.25%(v/v)の濃度にてトリフルオロ酢酸に加
えた。
2)中で5分間膨張させた。Nα−BOC保護基の除去は、
インドールおよびエタンジオールを含有する60%トリフ
ルオロ酢酸(TFA/CH2Cl2)を用い、CH2Cl2で洗浄し、10
%N,N−ジイソプロピルエチルアミン(DIEA/CH2Cl2)で
中和し、最後にCH2Cl2で洗浄することにより行った。こ
の樹脂を真空乾燥させた。こうして得られたペプチド−
樹脂を無水フッ化水素酸(HF、10ml)で処理し、これに
0℃にてp−クレゾール(1ml)およびジメチルスルフ
ィド(1ml)を60分間かけて加えた。HFを0℃にて真空
留去した。開裂した遊離のペプチドおよび樹脂をジエチ
ルエーテルのアリコート(15ml)で3回洗浄した。つい
で、このペプチドを40%酢酸水溶液のアリコート(10m
l)で6回抽出した。水性抽出物を集めて凍結乾燥して
粗製のペプチドを得、精製に付した。
54、ビダック・セパレーション・グループ(Vydac Sepa
ration Group)、ヘスペリア、カリフォルニア]におい
ては1ml/分の流速、セミプレパラティブカラム(Vydac
−214−TP1022)においては12ml/分の流速にて、溶媒系
として0.1%TFA/水(A)および100%アセトニトリル
(B)の勾配を用いたC4カラム上の逆相HPLCにより精製
した。上記勾配は、30%Bで開始した。3分後、20分の
間にこの勾配を40%Bまで一次的に増加させ、ついて1
分で30%Bに戻した。
た。ペプチドの組成は、6N塩酸/0.3%フェノール中、15
0℃にて2時間真空下に加水分解し、引き続きベックマ
ン6300アミノ酸分析機で分析することにより確認した。
チドを上記のようにして組み立てた。トリプトファン導
入後、その後のすべてのNα−保護基(t−BOC)を除
去するため、インドール1mg/mlの濃度にてトリフルオロ
酢酸に加えた。320mgの保護ペプチド−樹脂を8.5mlの無
水フッ化水素酸(HF)で処理し、これにp−クレゾール
(0.5ml)、p−チオクレゾール(0.5g)およびジメチ
ルスルフィド(0.5ml)を加えた。この粗製のペプチド
を、28%Bの勾配から始め、3分後に23分間かけて45%
Bまで一次的に増加させて精製した。ついで、1分間か
けて28%Bまで戻した。
免疫した。500mgのp604〜636を、解毒した内毒素(500
μg)およびトレハロースダイマイコレート(500μ
g)を含有するRIBIアジュバント[RIBIイムノケム・リ
サーチ(RIBI Immunochem.Research Inc.)](製造業
者により記載されたようにしてクロロホルム/メタノー
ル中で再溶解させたもの)と混合した。スクアレン(20
μ)を加え、この混合物をホモジナイズし、ついで0.
2%ツイーン20を含有する水を最終容量1.2mlまで加え
た。
投与し、p604〜636を合計で約100μg投与するようにし
た。8週間後、上記のようにして250μgのp604〜636を
250μgのRIBIアジュバントと混合することにより調製
したp604〜636(50μg)を各マウスに投与して2回目
の免疫を行った。3回目、4回目および5回目の免疫に
関しては、それぞれ最初の免疫から20週、23週および29
週後に、RIBIアジュバント中の約34μg、25μgおよび
25μgのp604〜636で腹腔内および皮下投与によりマウ
スを免疫した。4回目の免疫の5日後にマウスを出血さ
せた。免疫マウスの免疫応答は、下記で述べる酵素結合
イムノアッセイにより、抗HIV−2抗体について血清を
アッセイすることにより評価した。4週間後、1匹の特
定のマウスを滅菌水(150μ)中のp604〜636(1mg/m
l、100μ)を尾静脈に注射して免疫した。3日後、こ
のマウスを融合のため屠殺した。
〜636の溶液を、炭酸水素塩バッファー(pH9.6)を用い
て調製した。ウエル当たり100μのp577〜607溶液かま
たはp604〜636溶液を用い、マイクロタイタープレート
を室温にて一夜コーティングした。このプレートを炭酸
水素塩バッファーで洗浄し、ついで室温にてウエル当た
り200μの炭酸水素塩バッファー中の1%ウシ血清ア
ルブミン(BSA)で3時間かけてコーティングした。こ
のプレートを、0.05%ツイーン20および0.01%ドデシル
硫酸ナトリウム(SDS)を含有するリン酸緩衝食塩水(P
BS)で3回洗浄した。
NaCl、10%ウシ胎仔血清(FCS)、10%正常ヤギ血清(N
GS)および0.5%トリトンX−100を含有する20mMリン酸
カリウムバッファー(pH7.4)で系列希釈した。この希
釈血清を、上記で調製しp577〜607かまたはp604〜636を
コーティングしたマイクロタイタープレートのウエルに
加えた。この血清を含むプレートを40℃にて30分間、つ
いで4℃にて一夜インキュエートした。このプレートを
0.0%ツイーン20を含有するPBSで10回洗浄し、ついでNG
S中で1:1000に希釈したヤギ抗マウスIgG(H+L)西洋
ワサビペルオキシダーゼ(HRPO)結合抗体[ジャクソン
・ラボラトリーズ(Jackson Laboratories)]を加え
た。このプレートを40℃にて1時間インキュベートし、
上記のようにして10回洗浄し、o−フェニレンジアミ
ン:2HCl(OPD)発色試薬を加えた。30分後に1N H2SO4を
加えてこの反応を停止させ、492nmにおける吸光度を測
定した。吸光度はウエルに結合したマウス抗体の量に正
比例した。これらのアッセイは、免疫マウスの血清中に
HIV−2 p604〜636に対する抗体が存在することを示して
いた。p604〜636で免疫したマウスは、p604〜636に対し
て1:10,000よりも大きな力価を示した。p604〜636に特
異的な抗血清は、p577〜607に対して交差反応性を示さ
なかった。
を、ワイヤースクリーンを通して2.0mM L−グルタミン
および50μg/mlのゲンタマイシンを含有するダルベッコ
変性イーグル培地(Dulbecco's Modified Eagle's Medi
um:DMEM)中へどろどろにつぶす(mashing)ことにより
単一細胞に破砕した。この単一細胞懸濁液を0.83%塩化
アンモニウム−10mMトリス(トリス[ヒドロキシメチ
ル]アミノメタン)で処理して赤血球を溶解し、ついで
SP2/0細胞と1:1の比で混合した。この混合細胞を遠心分
離にかけ、血清不含培地で1回洗浄し、ついで再び遠心
分離にかけた。融合剤としてポリエチレングリコール
(PEG)を用い、免疫供与脾臓細胞とミエローマ細胞株S
P2/0とのハイブリッドを生成させた[コーラー(G.Kohl
er)およびミルシュタイン(C.Milstein)のNature(19
75)256:494参照、モノクローナル・ハイブリドーマ・
アンチボディーズ:テクニークス・アンド・アプリケー
ションズ(Monoclonal Hybridoma Antibodies:Techniqu
es and Applications)、ハレル(J.G.R.Hurrell)編、
CRCプレス、1982中で論評されている]。簡単に説明す
ると、脾臓細胞とSP2/0細胞との融合は、上記ペレット
を血清不含DMEM中の50%PEG(シグマ、MW1000)に2分
間さらすことにより行った。このPEGに血清不含DMEM(1
ml)を加え、1分間待ち、ついでさらに20mlの血清不含
DMEMを5分間かけてゆっくり加えることにより希釈し
た。この細胞を遠心分離により回収した。上清をデカン
トし、HAT(ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチ
ミジン)添加20%FCSを含むDMEM(20ml)で置き換えて
ハイブリドーマを選択した。この細胞を約1×106細胞/
mlに希釈し、24マルチウエルプレート中に1ml/ウエルで
入れた。非免疫Balb/cマウスからの脾臓細胞もまたフィ
ーダー層として加えた。隔日毎に1mlの培地をHAT添加20
%FCSを含む新たなDMEMで置き換え、ハイブリッドをさ
らに7〜14日増殖させた。ハイブリッドの幾つかは、SP
2/0細胞に融合した抗HIV−2抗体産生脾臓細胞からなっ
ていた。簡単に説明すると、融合剤は脾臓細胞膜とSP2/
0細胞膜との間の融合を促進し、両細胞の核を含むヘテ
ロカリオンを生成させる。その結果、異なる核は融合し
て同調有糸***を行うことのできる単一核を生成する。
この融合細胞が***すると、ハイブリッドは各核の染色
体を失うことにより安定する。この融合細胞をウエル当
たり105〜106細胞にて複数の24ウエルプレート中に入れ
る。SP2/0:脾臓細胞融合により生成した融合細胞は、HA
T培地中で培養することにより選択的に増殖される。す
べての未融合SP2/0またはSP2/0:SP2/0融合細胞はアミノ
プテリンにより増殖が妨げられ、また未融合脾臓細胞ま
たは脾臓:脾臓融合細胞は培養中で死滅する。SP2/0:脾
臓ハイブリッドのみがHAT選択培地中で増殖するであろ
う。
が、本発明はこれらに限られるものではない。
よび特徴付け: 上記方法を用い、HIV−2に対する抗体についてハイ
ブリッドをスクリーニングした。10〜14日後、プロトコ
ールにおいて下記のような変化はあったが上記方法の説
明で記載したEIA法により、ハイブリドーマ細胞培養を
含むウエルからの培養液をスクリーニングした。このプ
レートを培養液とともに40℃にて3〜4時間インキュベ
ートし、ついで0.05%ツイーン20および0.1%SDSを含む
PBSでプレートを洗浄した。選択したすべてのハイブリ
ドーマはp604〜636と強く反応したがp577〜607に対して
は陰性であった。
g−p41)融合タンパク質およびCKS−HIV−2 TMP断片(C
KS−TMP;HIV−2 TMPの最初の108アミノ酸を含有)融合
タンパク質を用い、ハイブリッドのウエスタンブロット
を試験した。これらのタンパク質は、米国特許出願第27
5309号および同第276263号各明細書(1988年11月23日出
願)に開示されているようにして調製した。簡単に説明
すると、500μのgag−p41をSDSおよび2−メルカプト
エタノールで95℃にて処理し、10%ポリアクリルアミド
−SDSゲル中で電気泳動にかけた[ラムリ(Laemmli)
ら、Nature(1970)227:680〜685]。同様に、部分精製
CKS−TMPの2mg/ml溶液(250μ)をSDSおよび2−メル
カプトエタノールで95℃にて処理し、12%ポリアクリル
アミド−SDSゲル中で電気泳動にかけた。タンパク質
を、25mMトリス、192mMグリシンおよび2.0%メタノール
からなる標準移動バッファー(pH8.3)中、ゲルからニ
トロセルロースに100mamPの電気泳動により一夜かけて
移すか、または1.0ampにて1〜2時間かけて移した[タ
ウビン(Towbin)ら、Proc.Natl.Acad.Sci(1979)76:4
350〜4354]。上記組換えタンパク質を移し、0.15M NaC
lを含有する10mMトリス(pH8.0)中の20%FCSでニトロ
セルロースをブロッキングした後、このニトロセルロー
スをストリップにカッティングし、これを用いて抗HIV
−2抗体の存在を決定した。
リップ、選択ハイブリッド(02ml)およびバッファー
(20mMトリス、1mM EDTA、0.2M NaCl、0.3%トリトンX
−100および2mg/mlBSA、pH7.5)(1.8ml)からなる反応
組成物を4℃にて一夜インキュベートした。このストリ
ップを緩衝界面活性剤(0.1%SDSおよび0.5%トリトン
X−100を含む10mM PBS、pH7.5、0.5M NaClおよび0.5%
トリトンX−100を含むPBSと交替で用いる)で洗浄し、
ついでHRPOに結合したヤギ抗マウスIgG抗体を加えた。
このストリップを室温にて1〜2時間インキュベート
し、ついで緩衝界面活性剤で洗浄した、最後に、新たに
調製したHRP発色試薬(バイオラド;120mgを40mlの氷冷
メタノール中に溶解し、ついで120μの30%過酸化水
素を含む200mlのトリス緩衝食塩水(pH7.8)中に希釈し
たもの)を加えることにより組換えタンパク質に結合し
た抗体を視覚化した。このアッセイにより、HIV−2タ
ンパク質に特異的な抗体が存在することが示された。H3
7を含む2つのハイブリッドがgag−p41およびCKS−TMP
の両方に対しブロット反応性を示した。残りのハイブリ
ッドはgag−p41に対してのみ反応性であった。
よる「モノクローナル・アンチボディーズ:プリンシプ
ルズ・アンド・プラクティス(Monoclonal Antibodies:
Principles and Practice)(アカデミックプレス、N.
Y.1983)」中に略述されている指針を用いた限界希釈法
により展開した。簡単に説明すると、このハイブリッド
を1細胞/ウエルにて2−96マルチウエルプレート中に
展開し、約2週間増殖させた。単一のハイブリッドH37
から、細胞増殖およびコロニー生成を含む46のウエルが
同定された。各ウエルからの培養液をEIAおよびウエス
タンブロットによりスクリーニングした。これら46ウエ
ルのうち3つウエルが抗HIV−2抗体に関し陽性である
と同定された。これら3つのウエルのそれぞれからの細
胞を24マルチウエルプレート中に展開し、ついで、さら
に25cm2フラスコ、ついで75cm2フラスコ中に展開した。
これら3つの展開したクローンのうちの一つをH37c94と
称した。
あると決定された。EIAアイソタイプ手順にはヤギ抗マ
ウスIgG免疫グロブリンをコーティングしたマイクロタ
イタープレートを用い、これを該クローンの培養液とと
もにインキィベートすることにより分泌マウス抗体を捕
捉した。2時間後、このプレートを洗浄し、ついでウサ
ジ抗マウスアイソタイプをさらに2時間適用した。この
プレートを再び洗浄し、HRPO結合ヤギ抗マウスIgGを1
時間適用した。過剰の結合体を洗浄により除去し、つい
でOPD基質を加えた。マウス免疫グロブリンに結合した
ウサジ抗マウスアイソタイプの量は492nmで測定した吸
光度と正比例した。マウス腹水からのH37c94抗体を用い
てさらに特徴付けを行った。
H37c94クローンをマウス中で増幅させた。0.5mlのプリ
スタン(2,6,10,14−テトラメチルペンタデカン)で前
以て腹腔内処理したBalb/cマウスに1〜2×107個のク
ローン化H37c94細胞を接種した(方法は上掲ハレルの文
献に略述されている)。プリスタン処理によりマウスミ
エローマハイブリッドのマウス腹腔内での増殖が促進さ
れ、生成する腹水は該ハイブリッド細胞により分泌され
たモノクローナル抗体に富んでいる。モノクローナル抗
体に富んだ腹水が生成した後、これらマウスを屠殺し、
腹腔から採取した腹水を遠心分離により清澄化した。以
下に記載する特徴付け手順は、プロテインA−セファロ
ース(ハレルの上掲文献参照)を含む当該技術分野で公
知の精製法を用い、上記清澄腹水または該腹水からの精
製抗体を用いて行った。
また該モノクローナル抗体の特異性を評価するためにア
ッセイを行った。上記手順を用いたEIAにより、腹水中
のモノクローナル抗体を滴定した。上記プレートを腹水
とともに40℃にて1時間インキュベートした。モノクロ
ーナル抗体に富んだ腹水は、合成ペプチドp604〜636に
対して1:500,000以上の高い力価を示した。この腹水はp
577〜607に対しては反応性を示さなかった。
免疫沈降アッセイ(RIPA)により確認した。ウイルスタ
ンパク質の免疫沈降アッセイについてはすでに記載され
ている[デバレ(Devare)ら、Proc.Natl.Acad.Sci.USA
(1986)、83:5718〜5722]。これらの研究に用いた細
胞株は、非感染H9細胞またはHIV−2感染H9細胞であっ
た。細胞を培養液から回収し、メチオニンおよびシステ
インを欠くRPMI1640(ギブコ・ラボラトリーズ)で1回
洗浄し、ついで同じ培地中に1〜2.5×106細胞/mlにて
懸濁した。洗浄細胞を6%CO2下、37℃にて30〜45分間
インキュベートし、ついで各50〜100μCiの[35S]メチ
オニンおよび[35S]システイン(アマーシャム)を培
地に加えた。細胞を37℃にて4〜8時間放射性標識し、
遠心分離により回収し、1mM PMSF、アプロチニン(バッ
ファー1ml当たり100カリクレイン不活性単位)、1.0%
トリトンX−100、0.1%SDSおよび0.5%デオキシコール
酸ナトリウム(すべての試薬はシグマから入手)を含む
PBS(pH7.4)中溶解させた。この溶解物を100,000×g
にて40分間遠心分離にかけることにより清澄化し、−70
℃にて貯蔵した。
ーナル抗体に富んだ腹水または100μの組織培養液と
ともに4℃にて30〜60分間インキュベートすることによ
り免疫沈降を行った。抗体−抗原複合体を、BSA(1mg/m
l)を含む溶解バッファー中で前以て洗浄した200μの
前膨張プロテインA−セファロース(ファルマシア、Ig
G結合能:50〜200μg/200μのプロテインA)を加える
ことにより回収した。この反応混合物を4℃にて1時間
激しく振盪し、ついで溶解バッファーを用いてこのプロ
テインA−セファロースを3回洗浄した。ついでプロテ
インA−セファロースを遠心分離により回収し、つい
で、2−メルカプトエタノールを含有するSDSゲル試料
バッファー中、95℃にて加熱することにより免疫複合体
を解離させた(ラムリらの上掲文献参照)。この試料を
SDS−10%ポリアクリルアミドゲル電気泳動に供した。
このゲルをエンハンス(Enhance)(デュポン)中で30
分間インキュベートし、乾燥し、免疫沈降放射性標識タ
ンパク質のオートラジオグラフィーのためにX線フィル
ムに暴露した。HIV−2 gp41内のエピトープに対するH37
c94抗体の特異性は、HIV−2感染H9細胞溶解液からの[
35S]メチオニン/[35S]システイン生合成標識ウイル
ス糖タンパク質gp160(未開裂エンベロース前駆体)お
よびgp41の免疫沈降により確認された。その結果、上記
モノクローナル抗体によりHIV−2感染細胞溶解液からg
p160およびgp41は沈降したがgp120は沈降せず、また放
射性標識細胞タンパク質の非特異的免疫沈降は検出され
ないことが示された。それゆえ、このモノクローナル抗
体H37c94はHIV−2 gp160/41に特異的に結合した。バン
ドパターンは、HIV−2血清陽性血清での沈降に対応す
るgp160、gp41および小バンド(gp41の可能な断片)の
沈降を示し、他の研究者による他のHIV−2経膜タンパ
ク質に関する報告を確認した。H37c94は、HIV−2血清
陽性の患者に見られるのと洞じタンパク質を認識する。
のマッピングおよび特徴付け: ハイブリッドのEIAスクリーニグにより、H37c94はp57
7〜607を認識しないことが確立された。さらに、H37c94
腹水は、ウエスタンブロッティングにおいてCKS−HIV−
2 TMP断片融合タンパク質を認識した。免疫ペプチドの
アミノ酸配列は以下の通りである。
の通りである。
は以下の通りである。
コードを示す) モノクローナル抗体H37c94は、アミノ酸配列HTTVPWを
有するエピトープを認識するが、このアミノ酸配列は上
記免疫ペプチドと上記融合タンパク質の両方に共通して
いる。上記免疫ペプチドと上記融合タンパク質との間に
6個のアミノ酸がオーバーラップしていることにより、
H37c94が認識するエピトープが提供される。p577〜607
の配列HTTVは、H37c94の認識するエピトープを生成する
には不充分である。
ろ、6個のアミノ酸のうち2個が異なることがわかっ
た。この変化は、H37c94がHIV−1 gp41を認識させなく
するのに充分である。
出のための競合プローブとして有用であることが示され
た。さらに本発明に従って、H37c94は患者のHIV−1へ
の暴露からHIV−2への暴露を識別するのに利用するこ
とができる。というのは、H37c94はHIV−2 gp41に対す
る抗体を含有する試料とは競合するが、HIV−1 gp41に
対する抗体を含有する試料とは競合しないからである。
HIV−1血清陽性血清は競合イムノアッセイにおいてH37
c94と容易に競合しないが、HIV−2血清陽性血清は競合
する。
CKS−HIV−2 TMP断片融合タンパク質を固体支持体上に
コーティングし、試験試料およびモノクローナル抗体H3
7c94とともにインキュベートした。試験試料中に存在す
るHIV−2ウイルス特異的抗体は、固体支持体上の組換
えタンパク質への結合に対してH37c94と競合した。組換
えタンパク質に結合したH37c94の量は、HRPOに結合した
ヤギ抗マウス免疫グロブリンを用いることにより定量し
た。
の「両者」)をH37c94競合アッセイ法により試験した。
HIV−1、HIV−2または「両者」(HIV−1およびHIV−
2に対する別々の抗体集団を含む)という血清の分類
は、生合成的に標識したgp120のHIV感染細胞溶解液から
の沈降(RIPA)、またはウエスタンブロットにより評価
されるようにウイルスgp120に対する反応性により、gp1
20に対する抗体の存在に基づいている。
光度と陰性コントロールの吸光度との合計を2で割った
値に等しい吸光度値はカットオフ値と考えた。このカッ
トオフ値よりも高い吸光度値を示す試料はH37c94とは競
合しないものと考えられ、「非HIV−2」と分類した。
カットオフ値よりも低い吸光度値を示す試料はH37c94と
競合すると考えられ、「HIV−2」と分類した。それゆ
え、「非HIV−2」血清の試料/カットオフ吸光度値(S
/CO)が1.0に等しいかまたはそれより大きく、「HIV−
2」血清のS/COは1.0未満である。
いた競合アッセイは、HIV−2血清陽性試料とHIV−1血
清陽性試料とを識別するために有効な方法である。HIV
−2 gp41に対するH37c94の特異性は、それが抗HIV−1
抗体とは競合しないことにより示された。15個のすべて
のHIV−1試料は、H37c94競合アッセイにおいて「非HIV
−2」と同定された。15個のHIV−2試料に関しては、
すべて正しく同定された。両者として分類された試料は
競合アッセイにおいて検出され、「HIV−2」と同定さ
れた。
らの63個の試料をスクリーニングした。このアッセイ
は、平均S/CO値が1.6(SD=0.114、CV=7.2%)を示し
た。
1表からの幾つかの血清試料について(a)組換え経膜
タンパク質に対する反応性、(b)HIV−1およびHIV−
2の経膜タンパク質の免疫優性領域(IDR)を示す合成
ペプチドに対する反応性、および(c)下記に記載する
ペプチド抑制アッセイにおける反応性を分析した。使用
した組換えタンパク質は、HIV−1に関してはHIV−1 gp
41のBal II−Kpn I制限断片、HIV−2に関してはCKS−H
IV−2 TMP断片融合タンパク質であった。使用した合成
ペプチドは、HIV−1に関してはp584〜611(HTLV−III
B)、HIV−2 IDRに関してはp577〜607であった。両EIA
アッセイとも、上記方法の欄で説明したEIA手順と同等
の手順を用いて行った。
ギ酸中に可溶化し、0.5M NaClおよび0.0022%トリトン
X−100を含む0.1Mトリスバッファー中に5μg/mlに希
釈し、pHを8.5に調節した。このペプチドをポリスチレ
ンビーズとともに37℃にて2時間インキュベートした。
このビーズをPBS中の0.1%トリトン(pH7.4)で40℃に
て1時間洗浄した。このビーズをPBSで洗浄し、PBS中の
5%BSAを40℃にて1時間コーティングし、PBSで洗浄
し、PBS中の5%ショ糖で室温にて20〜30分間コーティ
ングした。
適化するために血清を適定した。適当な希釈液(10μ
)を、HIV−1かまたはHIV−2 IDRペプチド(10μg/m
lペプチドを100μ、または100μg/mlペプチドを100μ
)、および0.09M NaCl、0.2%トリトンX−100、20%
NSGおよび10%FCSを含有する11mMリン酸ナトリウムバッ
ファー(300μ)と混合した。40℃にて1時間後、ビ
ーズに結合したペプチドを加え、この混合物を40℃にて
2時間インキュベートした。ビーズはまた単独で血清と
ともにインキュベートし、コントロールとした。これら
ビーズを蒸留水で洗浄し、上記血清に富んだバッファー
中で希釈したヤギ抗ヒトIgG(H+L)−HRPOと反応さ
せ、発色させた。
Aアッセイとも、非希釈試料のS/CO値として終点希釈の
逆数を括弧内に入れて結果を示した。終点希釈とは、血
清が陽性結果を示す最大希釈として定義される。さらに
第1図に示すように、ペプチド抑制アッセイにおける反
応性に従って血清をHIV−1、HIV−2、HIV−1と反応
性のHIV−2(2×1)または両者として分類した。HIV
−2抗体陽性であるがHIV−1 IDRペプチドをも弱く認識
した血清は2×1と分類した。
ータ、および第1表に示したH37c94競合アッセイ結果と
対応するものであった。加えて、直接EIAアッセイにお
いて、抗原標的として組換え経膜タンパク質またはより
短いIDRペプチドのいずれを用いたかにかかわらず、2
×1と分類された試料はHIV−1およびHIV−2標的の両
方と反応した。2×1試料は、H37c94競合アッセイにお
いてH37c94と明らかに競合した。これらのEIAデータ
は、組換えp41タンパク質または免疫優性領域を含むペ
プチドが、HIV−1からHIV−2を必ずしも識別すること
ができるものではないことを明確に示している。これと
は対照的に、H37c94競合アッセイはHIV−1からHIV−2
を識別し、HIV−1と交差反応性のHIV−2試料および両
者感染試料中でHIV−2を検出することができる。それ
ゆえ、H37c94競合アッセイは、組換えタンパク質または
合成ペプチドに比べて識別試薬として優れたものであ
る。
V−1と交差反応性のHIV−2血清(2×1)における、
固体支持体上のHIV−1 IDRおよび固体支持体上のHIV−2
IDRとの競合ペプチド不在、HIV−1 IDRペプチドおよび
HIV−2 IDRペプチドの反応性を吸光度(492nm)で示す
グラフである。
Claims (12)
- 【請求項1】アミノ酸配列HTTVPWを実質的に有するHIV
−2 gp41上のエピトープに対する特異性を特徴とするモ
ノクローナル抗体。 - 【請求項2】請求項(1)に記載のモノクローナル抗体
を産生する哺乳動物抗体産生細胞株。 - 【請求項3】ミエローマ細胞株SP2/0に融合させたマウ
ス脾臓細胞の細胞ハイブリッドからなるハイブリドーマ
である請求項(2)に記載の細胞株。 - 【請求項4】マウス由来ハイブリドーマ細胞株ATCCHB10
012。 - 【請求項5】ハイブリドーマ細胞株ATCC HB10012により
産生されたモノクローナル抗体。 - 【請求項6】患者のHIV−1に対する暴露からHIV−2に
対する暴露を識別する方法であって、 該患者からの生物学的試料を、実質的にHIV−2のアミ
ノ酸578からアミノ酸603の領域からなるアミノ酸配列に
結合した、アミノ酸配列HTTVPWを実質的に有するエピト
ープを含む抗原、および該エピトープに特異的な抗体と
接触させて抗原抗体複合体を生成させ、ついで 生成した該複合体の量を測定してHIV−2に対する暴露
を決定する ことを特徴とする方法。 - 【請求項7】該生物学的試料と該抗原および該抗体との
接触を、該抗原を固体支持体に固定し、ついで該試料を
該固定支持体に固定した該抗原、および該抗体と接触さ
せることにより行う請求項(6)に記載の方法。 - 【請求項8】抗体がモノクローナル抗体である請求項
(6)に記載の方法。 - 【請求項9】モノクローナル抗体が請求項(1)から
(5)のいずれかに記載のモノクローナル抗体である請
求項(8)に記載の方法。 - 【請求項10】モノクローナル抗体を検出可能な標識で
標識してある請求項(9)に記載の方法。 - 【請求項11】標識が、放射性同位体、酵素、蛍光化合
物、化学発光化合物および特異的結合成分のペアよりな
る群から選ばれたものである請求項(10)に記載の方
法。 - 【請求項12】生物学的試料中のHIV−2 gp41に対する
抗体の存在または量を検出する方法であって、 該試料を、実質的にHIV−2のアミノ酸578からアミノ酸
603の領域からなるアミノ酸配列に結合した、アミノ酸
配列HTTVPWを実質的に有するエピトープを含む抗原、お
よび該エピトープに特異的な抗体と接触させて抗原抗体
複合体を生成させ、ついで 生成した該複合体の量を測定して試料中のHIV−2 gp41
に対する抗体の存在または量を決定する ことを特徴とする方法。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US30636689A | 1989-02-03 | 1989-02-03 | |
US36173989A | 1989-06-02 | 1989-06-02 | |
US361739 | 1989-06-02 | ||
US306366 | 1994-09-15 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPH02268696A JPH02268696A (ja) | 1990-11-02 |
JP2958346B2 true JP2958346B2 (ja) | 1999-10-06 |
Family
ID=26975121
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2025000A Expired - Lifetime JP2958346B2 (ja) | 1989-02-03 | 1990-02-02 | 抗HIV―2モノクローナル抗体およびそれを用いた抗HIV―2gp41抗体の検出方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US5374518A (ja) |
EP (1) | EP0388602B1 (ja) |
JP (1) | JP2958346B2 (ja) |
AT (1) | ATE113989T1 (ja) |
AU (1) | AU4906590A (ja) |
CA (1) | CA2009198C (ja) |
DE (1) | DE69013950T2 (ja) |
ES (1) | ES2066887T3 (ja) |
Families Citing this family (20)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6514691B1 (en) * | 1986-01-22 | 2003-02-04 | Institut Pasteur | Peptides of human immunodeficiency virus type 2 (HIV-2), antibodies against peptides of HIV-2, and methods and kits for detecting HIV-2 |
US4839288A (en) * | 1986-01-22 | 1989-06-13 | Institut Pasteur | Retrovirus capable of causing AIDS, antigens obtained from this retrovirus and corresponding antibodies and their application for diagnostic purposes |
ATE164853T1 (de) * | 1990-01-16 | 1998-04-15 | Orgenics Ltd | Peptide, von virus-hiv-hüllen-glycoproteinen abstammend, deren verwendung zum nachweis einer infektion dieser viren und für die impfung gegen aids |
EP0564460B1 (en) * | 1990-08-16 | 1998-10-21 | Diagnostic Biotechnology, Inc. | An augmented western blot format and immunoassay for detection of viral antibodies |
US5256561A (en) * | 1991-12-20 | 1993-10-26 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibody to HIV-2 and uses thereof |
US6074646A (en) * | 1993-10-26 | 2000-06-13 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Nondenatured HIV envelope antigens for detecting early HIV-specific antibodies |
CA2222994A1 (en) * | 1995-06-07 | 1996-12-19 | Abbott Laboratories | Peptides for hiv-1 detection |
DE19622088A1 (de) * | 1996-05-31 | 1997-12-04 | Boehringer Mannheim Gmbh | Anti-HIV-Antikörper als Kontrollproben |
WO1999045395A1 (en) * | 1998-03-04 | 1999-09-10 | Universal Healthwatch, Inc. | Rapid confirmatory test for microbial infections |
US6852491B2 (en) * | 2001-09-04 | 2005-02-08 | Abbott Laboratories | Amplification and detection reagents for HIV-1 |
AU2003212466A1 (en) * | 2002-02-28 | 2003-09-16 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method and composition for detecting early hiv antibody |
EP2550362B1 (en) | 2010-03-25 | 2017-01-04 | Oregon Health&Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
CA2832109C (en) | 2011-06-10 | 2021-07-06 | Oregon Health & Science University | Cmv glycoproteins and recombinant vectors |
AU2012216792A1 (en) | 2011-09-12 | 2013-03-28 | International Aids Vaccine Initiative | Immunoselection of recombinant vesicular stomatitis virus expressing HIV-1 proteins by broadly neutralizing antibodies |
US9402894B2 (en) | 2011-10-27 | 2016-08-02 | International Aids Vaccine Initiative | Viral particles derived from an enveloped virus |
EP2679596B1 (en) | 2012-06-27 | 2017-04-12 | International Aids Vaccine Initiative | HIV-1 env glycoprotein variant |
US20150065381A1 (en) | 2013-09-05 | 2015-03-05 | International Aids Vaccine Initiative | Methods of identifying novel hiv-1 immunogens |
EP2873423B1 (en) | 2013-10-07 | 2017-05-31 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
EP3069730A3 (en) | 2015-03-20 | 2017-03-15 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
EP3072901A1 (en) | 2015-03-23 | 2016-09-28 | International Aids Vaccine Initiative | Soluble hiv-1 envelope glycoprotein trimers |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CA1341423C (en) * | 1984-10-31 | 2003-03-04 | Paul A. Luciw | Recombinant proteins of viruses associated with lymphadenopathy syndrome and/or acquired immune deficiency syndrome |
-
1990
- 1990-01-31 AT AT90101860T patent/ATE113989T1/de not_active IP Right Cessation
- 1990-01-31 DE DE69013950T patent/DE69013950T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-31 EP EP90101860A patent/EP0388602B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-01-31 ES ES90101860T patent/ES2066887T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-02 JP JP2025000A patent/JP2958346B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-02 CA CA002009198A patent/CA2009198C/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-02-02 AU AU49065/90A patent/AU4906590A/en not_active Abandoned
-
1992
- 1992-09-28 US US07/952,482 patent/US5374518A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2009198C (en) | 2000-02-01 |
AU4906590A (en) | 1990-09-20 |
DE69013950T2 (de) | 1995-03-30 |
ES2066887T3 (es) | 1995-03-16 |
EP0388602B1 (en) | 1994-11-09 |
ATE113989T1 (de) | 1994-11-15 |
CA2009198A1 (en) | 1990-08-03 |
US5374518A (en) | 1994-12-20 |
DE69013950D1 (de) | 1994-12-15 |
EP0388602A1 (en) | 1990-09-26 |
JPH02268696A (ja) | 1990-11-02 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP2958346B2 (ja) | 抗HIV―2モノクローナル抗体およびそれを用いた抗HIV―2gp41抗体の検出方法 | |
Papsidero et al. | Human immunodeficiency virus type 1-neutralizing monoclonal antibodies which react with p17 core protein: characterization and epitope mapping | |
JP2971034B2 (ja) | リンパ節症/後天性免疫不全症候群ウイルスの抗原 | |
JP4489351B2 (ja) | ヒト免疫不全ウイルスに対するモノクローナル抗体およびその用途 | |
US4812556A (en) | Synthetic peptide antigen for the detection of HIV-2 infection | |
JP3102643B2 (ja) | 抗HIV―1p24マウスモノクローナル抗体、その産生細胞株およびそれを用いたイムノアッセイ法 | |
JPH02160800A (ja) | ヒト免疫不全ウイルス(HIV)env‐コードペプチド | |
US5459060A (en) | Human monoclonal antibodies directed against the transmembrane glycoprotein (gp41) of human immunodeficiency virus-1 (HIV-1) | |
US5104790A (en) | Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use | |
EP0317804B1 (en) | HIV peptides and methods for detection of HIV | |
KR19990022114A (ko) | 추출되어 미처리된 폴리펩타이드를 사용하는 양성 스트랜드 rna 바이러스의 진단 및 이에 대한 백신화 방법 | |
US5210181A (en) | T-lymphotropic retrovirus peptide | |
JP2954597B2 (ja) | HIVIgp41に対するモノクローナル抗体およびそれを用いたHIVIgp41に対する抗体の免疫学的検出方法 | |
US5254457A (en) | Monoclonal antibodies and method for identifying different aids-related viruses | |
CA1339363C (en) | Monoclonal antibodies to specific antigenic regions of the human immunodeficiency virus and methods for use | |
WO1994018232A1 (en) | Methods for generating broadly neutralizing anti-hiv antibodies and antigens capable of eliciting same | |
AU642886B2 (en) | T-lymphotropic retrovirus monoclonal antibodies | |
US6039957A (en) | Oligomeric HIV-1 envelope glycoproteins | |
AU646460B2 (en) | Monoclonal antibody for differentiating HIV-2 from HIV-1 seropositive individuals | |
KR100254811B1 (ko) | 인간 면역결핍 바이러스의 덮개 단백질인 p24 에 대한 단일클론항체, 이를 생산하는 융합세포주 및 그의 제조방법 | |
JP2824429B2 (ja) | ヒト免疫不全ウイルス(hiv)のコアタンパク質を認識するモノクローナル抗体および該抗体を産生するハイブリドーマ | |
Bodéus et al. | An anti-HIV-1 gag protein rat monoclonal antibody library | |
KR100250833B1 (ko) | 인간 면역결핍 바이러스-1의 표면 단백질 지피41에 대한 단일클론 항체, 이를 생산하는 융합세포주및 그의 제조방법 | |
Faißt et al. | Generation, characterization and cross-reactivities of monoclonal antibodies against the p24 core protein and the gp130 envelope glycoprotein of HIV-2 ben |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070730 Year of fee payment: 8 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080730 Year of fee payment: 9 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090730 Year of fee payment: 10 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100730 Year of fee payment: 11 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100730 Year of fee payment: 11 |