JP2814027B2 - Biosensor - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、グルコースセンサ等の
バイオセンサに関し、医薬品製造業、食品工業、化学工
業等の工程管理、医療診断・計測及び環境計測等に利用
される。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a biosensor such as a glucose sensor, and is used for process management, medical diagnosis / measurement, environmental measurement, etc. in a pharmaceutical manufacturing industry, a food industry, a chemical industry and the like.

【０００２】[0002]

【従来の技術】一般に過酸化水素型酵素電極では、酵素
を高分子等の固定用膜に担持させ、この固定化膜中に拡
散してくる基質と酵素との酵素反応により生じた過酸化
水素を白金及び金等の電極上にて酸化し、電流として検
出することにより、基質の濃度を定量する。ここで、酵
素固定化膜は、酵素の保持・活性の維持、基質及び反応
生成物の拡散、妨害物質の阻止等の機能を要求され、酵
素電極の性能を決定する最も重要な部分である。2. Description of the Related Art Generally, in a hydrogen peroxide type enzyme electrode, an enzyme is carried on a fixing membrane such as a polymer, and hydrogen peroxide generated by an enzyme reaction between the substrate and the enzyme diffused into the immobilizing membrane. Is oxidized on an electrode such as platinum and gold, and detected as a current to quantify the concentration of the substrate. Here, the enzyme-immobilized membrane is required to have functions such as retention and activity of the enzyme, diffusion of substrates and reaction products, and inhibition of interfering substances, and is the most important part for determining the performance of the enzyme electrode.

【０００３】多孔質のセルロースアセテート膜、ニトロ
セルロース膜、ポリカーボネート膜等に酵素を固定化
し、電極にＯ−リング、スペーサ等で密着させる方法、
アニリン、ピロール等の電気化学重合膜を利用して酵素
を固定化する方法、感光性樹脂に酵素を含ませ、光硬化
して酵素を固定化する方法（特開昭５９−１６６８５２
号公報、特開昭５９−１６４９５３号公報、特開昭６２
−１１５２８５号公報、特開昭６３−７５５５２号公
報）等が知られている。[0003] A method in which an enzyme is immobilized on a porous cellulose acetate membrane, nitrocellulose membrane, polycarbonate membrane, or the like, and adhered to an electrode with an O-ring, a spacer, or the like;
A method of immobilizing an enzyme using an electrochemical polymerized film such as aniline or pyrrole, and a method of immobilizing the enzyme by incorporating the enzyme into a photosensitive resin and photo-curing (JP-A-59-166852).
JP, JP-A-59-164953, JP-A-62
-115285, JP-A-63-75552) and the like.

【０００４】[0004]

【発明が解決しようとする課題】しかし、この酵素固定
化膜の一層の性能の向上を企図し、酵素保護膜、選択膜
等を装着した場合には、応答時間が遅延する等の問題を
生ずることとなる。この様に、応答性、選択性及び経日
安定性等、本来バイオセンサに必要とされるすべての性
能を十分に満足したバイオセンサは、得られていないの
が実情である。酵素固定化膜を電極上にＯ−リング、ス
ペーサ等で後から固定する方法では、酵素膜と電極を完
全に密着させることは困難であり、長時間の使用により
酵素固定化膜と電極の間に隙間が生じ、応答時間、安定
性に悪影響を与える。また、電気化学重合膜を利用して
固定する方法では、電解装置、電解液等が必要で、大量
に均一の品質を得ることは困難である。更に、感光性樹
脂により酵素を固定化する方法では、樹脂が光により架
橋され、網目構造が進行する時に、酵素の失活が大き
く、安定したセンサは得られていなかった。However, when the performance of this enzyme-immobilized membrane is intended to be further improved and an enzyme protective membrane, a selective membrane, or the like is mounted, a problem such as a delay in response time occurs. It will be. As described above, a biosensor that sufficiently satisfies all the performances originally required for a biosensor such as responsiveness, selectivity, and stability over time has not been obtained. In the method in which the enzyme-immobilized membrane is fixed on the electrode later with an O-ring, a spacer, etc., it is difficult to completely adhere the enzyme membrane to the electrode. Gaps are formed, which adversely affects response time and stability. In addition, in the method of fixing using an electrochemical polymerization film, an electrolytic device, an electrolytic solution, and the like are required, and it is difficult to obtain a large amount of uniform quality. Furthermore, in the method of immobilizing an enzyme with a photosensitive resin, when the resin is cross-linked by light and the network structure progresses, the enzyme is largely deactivated, and a stable sensor has not been obtained.

【０００５】また、有機高分子膜は、長時間の使用、乾
燥、湿潤の繰り返し等により、膨潤、収縮等の微妙な変
形が生じ、電極と酵素膜との密着性、安定性に悪影響を
与えていた。更に、固定用膜と電極の滅菌方法も、この
固定用膜の強度、性質上の点から、かなり制限されてい
た。このように酵素固定化膜等の安定性及び強度、並び
に酵素固定化膜若しくは固定用膜と電極との密着性が悪
いため、バイオセンサの特性が悪くなっている。Further, the organic polymer film undergoes subtle deformation such as swelling and shrinkage due to long-term use, repeated drying and wetting, and adversely affects the adhesion and stability between the electrode and the enzyme film. I was Further, the method of sterilizing the fixing membrane and the electrode has been considerably restricted in view of the strength and properties of the fixing membrane. As described above, the stability and strength of the enzyme-immobilized membrane and the like, and the adhesion between the enzyme-immobilized membrane or the immobilization membrane and the electrode are poor, so that the characteristics of the biosensor are deteriorated.

【０００６】本発明は、上記観点に鑑みなされたもので
あり、応答性、選択性及び経日安定性等に優れたバイオ
センサを提供することを目的とする。[0006] The present invention has been made in view of the above viewpoints, and has as its object to provide a biosensor excellent in responsiveness, selectivity, stability over time, and the like.

【０００７】[0007]

【課題を解決するための手段】本発明者らは、過酸化水
素電極をデバイスとした酵素電極について、鋭意研究し
た結果、酵素固定化膜として、多孔質セラミック膜を用
い、且つ膜の平均孔径を調整し、また酵素固定化膜に、
牛血清アルブミンを含ませることにより上記問題点を解
決したものである。Means for Solving the Problems The present inventors have conducted intensive studies on an enzyme electrode using a hydrogen peroxide electrode as a device. As a result, a porous ceramic membrane was used as an enzyme-immobilized membrane, and the average pore size of the membrane was determined. To the enzyme-immobilized membrane,
The above problem has been solved by including bovine serum albumin.

【０００８】即ち、本第１発明に係わるバイオセンサ
は、絶縁基板上に適当な間隔をもって形成された作用極
及び対極よりなる金属電極と、牛血清アルブミンを含み
少なくとも該金属電極上及び該両極間に積層された酵素
固定化膜と、からなる酵素電極を有するバイオセンサに
おいて、前記酵素固定化膜は、多孔質セラミック膜と該
多孔質セラミック膜に固定化された酵素とを有し、該多
孔質セラミック膜の平均孔径は０．０５〜０．５μｍで
あり、 センサ製作直後の応答電流値に対する３０日後の
応答電流値が９０％以上であり、かつ、被測定物質を所
定濃度で含む試験液の応答電流値（ａ）を１００とした
とき、該試験液と同濃度の被測定物質および該被測定物
質の１／２０濃度の妨害物質を含む妨害物質含有試験液
の応答電流値（ｂ）が１０５未満であることを特徴とす
る。That is, the biosensor according to the first aspect of the present invention comprises a metal electrode comprising a working electrode and a counter electrode formed at appropriate intervals on an insulating substrate, and bovine serum albumin. And a biosensor having an enzyme electrode comprising an enzyme-immobilized film laminated between the two electrodes, wherein the enzyme-immobilized film has a porous ceramic film and an enzyme immobilized on the porous ceramic film. and an average pore diameter of the porous ceramic film is Ri <br/> Ah at 0.05 to 0.5 [mu] m, 30 days after on the response current value immediately after the sensor fabrication
If the response current value is 90% or more and the
The response current value (a) of the test solution containing a constant concentration was set to 100.
The substance to be measured and the substance to be measured having the same concentration as the test solution
Test solution containing interfering substance at 1/20 concentration
The response current value (b) is characterized in der Rukoto less than 105.

【０００９】前記「多孔質セラミック膜」の材質は、特
に限定されることはなく、バイオセンサの使用目的等に
応じて種々選択することができる。例えば、通常用いら
れているアルミナの他に、チタニア、シリカ等のセラミ
ックを使用することもできる。また、この多孔質セラミ
ック膜の気孔率は、通常は、約１０〜５０％程度であ
る。この場合は、酵素の多くを固定化でき、且つ膜の強
度維持及び基質の拡散等が良好となるからである。The material of the "porous ceramic membrane" is not particularly limited, and can be variously selected according to the purpose of use of the biosensor. For example, ceramics such as titania and silica can be used in addition to alumina which is usually used. The porosity of the porous ceramic membrane is usually about 10 to 50%. In this case, most of the enzyme can be immobilized, and the maintenance of the strength of the membrane and the diffusion of the substrate are improved.

【００１０】更に、この「多孔質セラミック膜の平均孔
径」を０．０５〜０．５μｍ（ＳＥＭ観察及び水銀圧入
法にて測定）とするのは、以下の理由による。即ち、平
均孔径がこの範囲内にあるセラミックス微粒子が多数結
合して多孔膜を形成しているという特殊な構造の下で
は、該孔内に酵素を高密度にて、効率良く固定化でき、
この為、酵素活性を長期間、高い状態で維持でき、更に
は、膜内での基質の拡散も迅速となり、バイオセンサの
応答時間も短くなるからである。尚、この多孔質セラミ
ック膜は、使用するセラミック微粒子の粒子径、焼成温
度及びペーストの粘度等を調整することにより、気孔
率、平均孔径、膜厚等を調整することができる。この気
孔率は、第４発明のように、１０〜５０％（より好まし
くは３０〜４０％）であることが好ましい。 The reason why the "average pore diameter of the porous ceramic membrane" is set to 0.05 to 0.5 μm (measured by SEM observation and mercury intrusion method) is as follows. That is, under a special structure in which a large number of ceramic fine particles having an average pore diameter in this range are bonded to form a porous film, enzymes can be efficiently immobilized in the pores at a high density,
For this reason, the enzyme activity can be maintained in a high state for a long period of time, and further, the diffusion of the substrate in the membrane becomes quick, and the response time of the biosensor also becomes short. The porosity, average pore size, film thickness, and the like of the porous ceramic film can be adjusted by adjusting the particle size of the ceramic fine particles used, the firing temperature, the viscosity of the paste, and the like. This feeling
The porosity is 10 to 50% (more preferable) as in the fourth invention.
Or 30 to 40%).

【００１１】前記「電極」の形状は特に問わず、例え
ば、長方形状、リング状等とすることができる。また、
作用極及び対極の両極間の間隔も特に問わない。尚、通
常は、０．５〜５ｍｍの間隔のものが用いられが、この
間隔を小さくすることによりセンサの小型化をはかるこ
とができる。The shape of the "electrode" is not particularly limited, and may be, for example, a rectangular shape, a ring shape, or the like. Also,
The space between the working electrode and the counter electrode is not particularly limited. In addition, usually, a sensor having an interval of 0.5 to 5 mm is used, but the sensor can be miniaturized by reducing the interval.

【００１２】前記酵素固定化膜には牛血清アルブミンを
含ませた構成とする。この牛血清アルブミンは通常、多
孔質セラミック膜の孔内表面等を覆う膜状物等として含
まれる。また、この牛血清アルブミンは、酵素と共に形
成、配置されてもよいし、酵素が固定化された後、その
上にこの牛血清アルブミン膜を形成してもよい。この
「牛血清アルブミン」は、前記酵素固定化膜の選択性を
向上させるためのものである。即ち、通常の過酸化水素
電極の場合には、アスコルビン酸、尿酸等の電極活性物
質にも応答して、測定誤差の原因となる。これに対し
て、この牛血清アルブミンを用いた場合には、セラミッ
ク膜の微細な貫通孔（連通孔）と高分子との相互作用に
より、良い選択性が得られるからである。また、この牛
血清アルブミンは酵素活性の保護作用をも有する。 更
に、前記多孔質セラミック膜の平均孔径を０．０５〜
０．５μｍとすることにより、密着性に起因する経日安
定性のみならず応答性及び選択性にも優れたバイオセン
サ、具体的には、実用十分な応答性を有するとともに、
「センサ製作直後の応答電流値に対する３０日後の応答
電流値が９０％以上である」という優れた経日安定性
と、「被測定物質を所定濃度で含む試験液の応答電流値
（ａ）を１００としたとき、該試験液と同濃度の被測定
物質および該被測定物質の１／２０濃度の妨害物質を含
む妨害物質含有試験液の応答電流値（ｂ）が１０５未満
である」という優れた選択性とを兼ね備えたバイオセン
サとすることができる。 なお、このバイオセンサは、本
第２発明のように、上記被測定物質がグルコースであ
り、上記妨害物質がアスコルビン酸および尿酸から選択
される少なくとも一種である場合において、特に優れた
応答性、選択性および経日安定性を発揮する。 The enzyme-immobilized membrane is configured to contain bovine serum albumin. This bovine serum albumin is usually contained as a film or the like covering the inner surface of the pores of the porous ceramic membrane. The bovine serum albumin may be formed and arranged together with the enzyme, or after the enzyme is immobilized, the bovine serum albumin film may be formed thereon. This "bovine serum albumin" is for improving the selectivity of the enzyme-immobilized membrane. That is, in the case of a normal hydrogen peroxide electrode, a measurement error is caused in response to an electrode active substance such as ascorbic acid or uric acid. On the other hand, when this bovine serum albumin is used, good selectivity can be obtained due to the interaction between the fine through-holes (communication holes) of the ceramic membrane and the polymer. Also this cow
Serum albumin also has a protective effect on enzyme activity. Change
The average pore diameter of the porous ceramic membrane is 0.05 to
By setting the thickness to 0.5 μm, the daily life caused by adhesion
Biosensor not only qualitative but also responsive and selective
In particular, while having sufficient practical response,
"Response after 30 days to response current value immediately after sensor production
The current value is 90% or more. "
And "Response current value of a test solution containing the analyte at a predetermined concentration.
When (a) is taken as 100, the measured concentration is the same as that of the test solution.
Substances and interfering substances at 1/20 concentration of the analyte
Response current value (b) of the test solution containing interfering substances is less than 105
Biosen with excellent selectivity
Can be. Note that this biosensor is
As in the second invention, the substance to be measured is glucose.
The interfering substance is selected from ascorbic acid and uric acid
At least one type that is particularly good
Exhibits responsiveness, selectivity and stability over time.

【００１３】本発明者らは、酵素固定化膜（若しくは多
孔質セラミック膜）の安定性、密着性をさらに向上させ
るためには、多孔質セラミック膜と電極とを一体形成し
た薄膜とすることが有効であることを見いだした。即
ち、本第３発明に係わるバイオセンサは、第１発明また
は第２発明のバイオセンサにおいて、該多孔質セラミッ
ク膜は、前記金属電極上に記金属電極と一体焼成により
密着形成されていることを特徴とする。[0013] The present inventors have found that stability of the enzyme immobilized membrane (or porous ceramic membrane), in order to further improve the adhesion, be a thin film formed by integrally forming a porous ceramic membrane and electrode Found to be effective . That is, the biosensor according to the third aspect of the present invention is different from the first aspect of the present invention.
In the biosensor of the second invention, the porous ceramic film is formed in close contact with the metal electrode by integral firing on the metal electrode.

【００１４】この酵素固定化膜を構成する多孔質セラミ
ック膜（酵素を固定化しようとする膜）は、通常、スク
リーン印刷、蒸着等により、電極を構成することとなる
各塗膜上に、焼成後に多孔質セラミック膜となるセラミ
ック塗膜を印刷し、これらを一体的に焼成して形成され
る。また、この多孔質セラミック膜が強固であるため、
この多孔質セラミック膜及び電極を滅菌若しくは殺菌処
理する場合、オートクレーブ、乾熱滅菌、放射線滅菌、
薬剤滅菌、アルコール滅菌等のほとんどの滅菌処理を施
すことができる。The porous ceramic membrane (membrane on which the enzyme is to be immobilized) constituting the enzyme-immobilized membrane is usually fired by screen printing, vapor deposition or the like on each of the coating films constituting the electrodes. It is formed by printing a ceramic coating film to be a porous ceramic film later and firing them integrally. In addition, because this porous ceramic membrane is strong,
When sterilizing or sterilizing the porous ceramic membrane and the electrode, autoclave, dry heat sterilization, radiation sterilization,
Most sterilization processes such as drug sterilization and alcohol sterilization can be performed.

【００１５】尚、本発明のバイオセンサにおいては、目
的，用途により種々の種類の酵素を用いることができ、
その種類により、種々の用途のバイオセンサ（例えばグ
ルコースセンサ等）とすることができる。In the biosensor of the present invention, various kinds of enzymes can be used depending on the purpose and application.
Depending on the type, biosensors (for example, glucose sensors, etc.) for various uses can be obtained.

【００１６】[0016]

【実施例】以下、実施例により本発明を具体的に説明す
る。 実施例１ 本実施例は、酵素固定化膜の平均孔径の大きさ及び該酵
素固定化膜に含まれる牛血清アルブミンが、センサ性能
に与える影響を検討したものである。 （１）グルコースセンサの作製 アルミナよりなる絶縁基板（２０ｍｍ×１３ｍｍ×０．
６ｍｍ）１上に、ペーストを用いて、焼成後、作用極
（白金電極）となる塗膜（３ｍｍ×０．５ｍｍ×５μ
ｍ）及び対極（白金電極）となる塗膜（３ｍｍ×２ｍｍ
×５μｍ）を印刷した。但し、この両極は、焼成後、
０．５ｍｍの間隔になるように並置されている。The present invention will be described below in detail with reference to examples. Example 1 In this example, the influence of the average pore size of the enzyme-immobilized membrane and bovine serum albumin contained in the enzyme-immobilized membrane on the sensor performance was examined. (1) Production of glucose sensor An insulating substrate made of alumina (20 mm × 13 mm × 0.1 mm).
6 mm) A coating film (3 mm × 0.5 mm × 5 μ) serving as a working electrode (platinum electrode) after firing using a paste on 1
m) and the coating film (3 mm x 2 mm) to be the counter electrode (platinum electrode)
× 5 μm) was printed. However, after firing,
They are juxtaposed so as to have an interval of 0.5 mm.

【００１７】次いで、これを酸化雰囲気炉で、１０００
℃にて、１時間焼成し、作用極２１及び対極２２を形成
した。更に、この面上に、アルミナペーストを塗布し、
酸化雰囲気炉で、１０００℃にて、６時間焼成し、多孔
質セラミック膜４１〔平均孔径０．０６μｍ（ＳＥＭ観
察及び水銀圧入法にて測定）、気孔率３０％、膜厚１５
μｍ〕を形成した。その後、リード部、感応部以外を、
絶縁層４にて絶縁被覆し、リード線５を接続した。次い
で、グルコースオキシダーゼ１０００ユニットと牛血清
アルブミン２５ｍｇを純水０．５ｍｌに溶解し、前記多
孔質セラミック膜上に５μｌ滴下し、多孔質膜３１の孔
内に酵素３２を保持させた。更に、風乾後、グルタルア
ルデヒドで架橋処理をし、酵素固定化膜３を形成して、
第１図及び第２図に示す試験品Ｎｏ．２のグルコースセ
ンサを作製した。尚、牛血清アルブミン３２は、セラミ
ック膜３１の孔内表面等を覆う膜状として存在してい
る。Next, this is placed in an oxidizing atmosphere furnace at 1000
It baked at 1 degreeC for 1 hour, and formed the working electrode 21 and the counter electrode 22. Further, on this surface, apply an alumina paste,
Baking in an oxidizing atmosphere furnace at 1000 ° C. for 6 hours, the porous ceramic film 41 [average pore diameter 0.06 μm (measured by SEM observation and mercury porosimetry), porosity 30%, film thickness 15
μm]. After that, except for the lead and sensitive parts,
Insulating coating was performed with the insulating layer 4 and the lead wire 5 was connected. Next, 1000 units of glucose oxidase and 25 mg of bovine serum albumin were dissolved in 0.5 ml of pure water, and 5 μl of the solution was dropped on the porous ceramic membrane to hold the enzyme 32 in the pores of the porous membrane 31. Furthermore, after air-drying, it is cross-linked with glutaraldehyde to form an enzyme-immobilized membrane 3,
The test article No. shown in FIGS. 2 glucose sensors were produced. The bovine serum albumin 32 exists as a film covering the inner surface of the pores of the ceramic film 31 and the like.

【００１８】また、表１に示す種々の平均孔径を有する
多孔質セラミック膜を形成させたこと以外は、試験品Ｎ
ｏ．２と同様にして、試験品Ｎｏ．１及びＮｏ．３〜Ｎ
ｏ．６のグルコースセンサを作製した。更に、牛血清ア
ルブミン水溶液を用いないこと以外は、試験品Ｎｏ．３
と同様の方法にて、試験品Ｎｏ．７のグルコースセンサ
を作製した。また、多孔質セラミック膜を用いないこと
以外は、試験品Ｎｏ．２と同様の方法にて、試験品Ｎ
ｏ．８のグルコースセンサを作製した。尚、いずれの試
験品も、その気孔率は、３０〜４０％の範囲内であっ
た。In addition, except that porous ceramic membranes having various average pore diameters shown in Table 1 were formed, test pieces N
o. In the same manner as in Test Item No. 2, 1 and No. 1 3 to N
o. No. 6 glucose sensors were produced. Further, except that the aqueous solution of bovine serum albumin was not used, the test product No. 3
Specimen No. 7 glucose sensors were produced. In addition, except that the porous ceramic membrane was not used, the test sample No. In the same manner as in 2, test sample N
o. 8 glucose sensors were produced. In addition, the porosity of all the test articles was in the range of 30 to 40%.

【００１９】（２）性能試験 性能試験１ 試験品Ｎｏ．１〜８のグルコースセンサに対して、
（ａ）一定濃度（１００ｍｇ／ｄｌ）のグルコースに対
する初期応答電流値（μＡ）、（ｂ）グルコースセンサ
の酵素活性維持率（％）、（ｃ）応答時間（秒）、
（ｄ）選択性の各評価を行った。この結果を表１に示
す。 但し、この場合の各数値は、対極に対し、作用極
に＋６００ｍＶ印加し、バッチ法にて測定したものであ
る。また、前記活性維持率は、センサ作製直後の初期応
答電流値（μＡ）に対する３０日経過後の応答電流値
（μＡ）の割合を百分率にて示したものである。また、
表中の「膜の平均孔径」とは、多孔質セラミック膜の平
均孔径を示す。(2) Performance test Performance test 1 For 1 to 8 glucose sensors,
(A) initial response current value (μA) for glucose at a constant concentration (100 mg / dl), (b) retention rate of enzyme activity of glucose sensor (%), (c) response time (second),
(D) Each evaluation of selectivity was performed. Table 1 shows the results. However, each numerical value in this case is a value measured by a batch method by applying +600 mV to the working electrode with respect to the counter electrode. The activity retention rate is a percentage of the response current value (μA) after 30 days has elapsed with respect to the initial response current value (μA) immediately after the production of the sensor. Also,
The “average pore size of the membrane” in the table indicates the average pore size of the porous ceramic membrane.

【００２０】更に、選択性の評価は、グルコース溶液
（２００ｍｇ／ｄｌ）の応答電流値と、同濃度のグルコ
ース溶液（２００ｍｇ／ｄｌ）にアスコルビン酸及び尿
酸を所定濃度（１０ｍｇ／ｄｌ）になるように添加した
場合の応答電流値の差が大きいか否かで行った。また、
その場合の応答時間の遅れについても評価した。そし
て、表１中の「○」は選択性に優れることを、「×」は
選択性に劣ることをそれぞれ示す。ここで、○は応答電
流値の増加が５％未満の場合を、×はそれ以上の場合を
意味する。尚、応答時間は、いずれの場合も変化はなか
った。Furthermore, the selectivity was evaluated so that the response current value of the glucose solution (200 mg / dl) and the concentration of ascorbic acid and uric acid in the glucose solution (200 mg / dl) of the same concentration became a predetermined concentration (10 mg / dl). Was determined based on whether or not the difference in the response current value was large. Also,
The response time delay in that case was also evaluated. In Table 1, “○” indicates that the selectivity is excellent, and “x” indicates that the selectivity is poor. Here, ○ means that the increase in the response current value is less than 5%, and × means that the increase is more than 5%. The response time did not change in any case.

【００２１】[0021]

【表１】 [Table 1]

【００２２】性能試験２ 前記試験品Ｎｏ．３を用い、グルコースの濃度と応答電
流値の関係を調べた。この結果を第３図に示す。また、
試験品Ｎｏ．３及び７を用い、同センサ作製後の経過日
数と相対電流（初期値を１００％とした場合の電流をい
う。）の関係を調べた。この結果を第４図に示す。尚、
同図中には、比較のため試験品Ｎｏ．５及び８を用いた
場合の結果も併記する。Performance test 2 Using No. 3, the relationship between the glucose concentration and the response current value was examined. The result is shown in FIG. Also,
Test article No. Using 3 and 7, the relationship between the number of days elapsed after the production of the sensor and the relative current (meaning the current when the initial value is 100%) was examined. The result is shown in FIG. still,
In the figure, the test sample No. is shown for comparison. The results when 5 and 8 were used are also shown.

【００２３】更に、試験品Ｎｏ．３及び７を用い、所定
濃度（２００ｍｇ／ｄｌ）のグルコースに添加して調製
したアスコルビン酸の濃度（ｍｇ／ｄｌ）と相対電流の
関係を調べた。この結果を第５図に示す。尚、この場合
も比較のため試験品Ｎｏ．５及び８を用いた場合の結果
も併記する。Further, the test sample No. Using Nos. 3 and 7, the relationship between the concentration (mg / dl) of ascorbic acid prepared by adding it to glucose at a predetermined concentration (200 mg / dl) and the relative current was examined. The result is shown in FIG. In this case, the test sample No. was also used for comparison. The results when 5 and 8 were used are also shown.

【００２４】（３）性能評価 性能試験Ｎｏ．１ 多孔質セラミック膜の平均孔径が０．００５μｍと過小
な場合（試験品Ｎｏ．１）では、その孔中に酵素を効率
良く固定化することはできず、選択性を除くすべての試
験項目で満足できる結果を示さなかった。一方、０．９
μｍ以上の過大な平均孔径を有する場合（試験品Ｎｏ．
５及び６）も、その孔中に酵素を効率良く固定化するこ
とはできず、応答時間を除く各試験項目で満足できる結
果を示さなかった。(3) Performance evaluation Performance test No. 1 When the average pore size of the porous ceramic membrane was too small (0.005 μm) (test sample No. 1), the enzyme could not be efficiently immobilized in the pores, and all test items except selectivity were not used. Did not show satisfactory results. On the other hand, 0.9
In the case of having an excessively large average pore size of at least
Also in 5 and 6), the enzyme could not be efficiently immobilized in the pores, and no satisfactory results were obtained in each test item except the response time.

【００２５】これらに対して、多孔質セラミック膜の平
均孔径が、０．０６〜０．５μｍの間にある場合（試験
品Ｎｏ．２〜４及び７）は、応答電流値、活性維持率及
び応答時間の各評価項目において、良好な結果を示し
た。多孔質セラミック膜の平均孔径がこの範囲にある場
合には、その孔中に酵素を効率良く固定化できる為と考
えられる。尚、これらの場合、高分子膜に酵素を担持さ
せた従来品（試験品Ｎｏ．８）に比べ、特に活性維持率
の向上が著しい。また、牛血清アルブミンを用いた試験
品Ｎｏ．２〜４では、これを用いない試験品Ｎｏ．７に
比べ、特に良好な活性維持率（９０％以上）を示した。On the other hand, when the average pore size of the porous ceramic membrane is between 0.06 and 0.5 μm (test samples Nos. 2 to 4 and 7), the response current value, the activity retention rate and Good results were shown for each evaluation item of the response time. It is considered that when the average pore size of the porous ceramic membrane is in this range, the enzyme can be efficiently immobilized in the pores. Note that, in these cases, the activity retention rate is particularly improved as compared with the conventional product (test product No. 8) in which an enzyme is supported on a polymer membrane. In addition, test article No. using bovine serum albumin was used. In Nos. 2 to 4, the test pieces No. As compared with No. 7, the activity retention rate was particularly good (90% or more).

【００２６】尚、選択性については、試験品Ｎｏ．１〜
４の場合には、電極活性物質であるアスコルビン酸溶液
及び尿酸溶液の各々を用いたか否かにかかわらず良好な
結果を示した。これは、牛血清アルブミンの作用による
ものと考えられる。但し、試験品Ｎｏ．５及びＮｏ．６
は牛血清アルブミンが用いられているにもかかわらず、
応答電流値が増大し、良好な結果を示さないのは、多孔
質セラミック膜の平均孔径が過大であった為と考えられ
る。また、牛血清アルブミンを用いない試験品Ｎｏ．７
では、多孔質セラミック膜の平均孔径が本発明範囲であ
るにもかからわず選択性が不十分であった。 As for the selectivity, the test sample No. 1 to
In the case of No. 4, good results were shown irrespective of whether or not each of the ascorbic acid solution and the uric acid solution as the electrode active substances was used. This is considered to be due to the action of bovine serum albumin. However, test sample No. 5 and No. 5 6
Although bovine serum albumin is used,
It is considered that the reason why the response current value was increased and good results were not shown was that the average pore diameter of the porous ceramic membrane was excessive. In addition, the test article No. using no bovine serum albumin. 7
Then, the average pore size of the porous ceramic membrane falls within the range of the present invention.
Nevertheless, the selectivity was insufficient.

【００２７】以上より、適正な膜平均孔径を有し、かつ
牛血清アルブミンを用いた試験品Ｎｏ．２〜４は、応答
性、選択性および経日安定性（活性維持率）のいずれに
も優れた性能を示した。[0027] As described above, have a proper membrane average pore size, and was used <br/> bovine serum albumin specimen No. 2-4 is the response
In terms of selectivity, selectivity and daily stability (activity retention rate)
Also showed excellent performance.

【００２８】性能試験Ｎｏ．２ 第３図によれば、試験品Ｎｏ．３を用いた場合には、グ
ルコースの濃度と応答電流値について傾きの大きな直線
関係を示した。従って、これを用いれば、グルコース濃
度を正確に、且つ精度良く測定できることとなる。ま
た、第４図によれば、試験品Ｎｏ．３及び７は、試験品
Ｎｏ．５及び８に比べ、センサ作製後６０日を経過して
も、品質の劣化が少ない。更に、試験品Ｎｏ．３と試験
品Ｎｏ．７を比べれば、牛血清アルブミンが用いられて
いる試験品Ｎｏ．３の方が特に、品質の劣化が少ないと
いえる。Performance test No. 2 According to FIG. In the case of using No. 3, a linear relationship having a large slope was shown between the glucose concentration and the response current value. Therefore, if this is used, the glucose concentration can be measured accurately and accurately. Also, according to FIG. 3 and 7 are test sample Nos. Compared to 5 and 8, even after 60 days from the production of the sensor, the deterioration of the quality is small. Further, the test sample No. 3 and the test sample No. 7 was compared with the test sample No. 7 in which bovine serum albumin was used. In particular, it can be said that quality deterioration is smaller in No. 3.

【００２９】また、第５図によれば、試験品Ｎｏ．３及
び７は、試験品Ｎｏ．５及び８に比べ、良い選択性を示
しており、更に試験品Ｎｏ．３と試験品Ｎｏ．７を比べ
れば、牛血清アルブミンが用いられている試験品Ｎｏ．
３の方が特に、良い選択性を示している。尚、アスコル
ビン酸の代わりに、尿酸を添加した場合にも同様な結果
が得られる。Further, according to FIG. 3 and 7 are test sample Nos. 5 shows good selectivity compared to Nos. 5 and 8, and the test sample Nos. 3 and the test sample No. 7 was compared with the test sample No. 7 in which bovine serum albumin was used.
3 shows a particularly good selectivity. Similar results are obtained when uric acid is added instead of ascorbic acid.

【００３０】実施例２ 本実施例は、電極と多孔質セラミック膜とを一体化させ
ることによる経日安定性への影響を検討したものであ
る。 （１）グルコースセンサの製作 本実施例のセンサは、図６及び図７に示すように、絶縁
基板１ａと、この上に形成された作用極２１ａ及び対極
２２ａと、これらの電極の右端部側上に形成された酵素
固定化膜３ａ（この電極と一体的に形成された多孔質セ
ラミック膜とこのセラミック膜内及び上に配設された酵
素及びアルブミンとからなる。）と、この酵素固定化膜
３ａ及び電極端子部分２１１、２２１を除いて被覆、形
成された絶縁層４ａと、を備えている。Example 2 In this example, the effect of integrating the electrode and the porous ceramic membrane on the aging stability was examined. (1) Manufacture of glucose sensor As shown in FIGS. 6 and 7, the sensor of the present embodiment has an insulating substrate 1a, a working electrode 21a and a counter electrode 22a formed thereon, and right end portions of these electrodes. An enzyme-immobilized membrane 3a formed thereon (consisting of a porous ceramic membrane integrally formed with the electrode and an enzyme and albumin disposed in and on the ceramic membrane) and the enzyme-immobilized membrane And an insulating layer 4a covered and formed except for the film 3a and the electrode terminal portions 211 and 221.

【００３１】このセンサは、以下のようにして、製作さ
れる。先ず、絶縁基板１上にスクリーン印刷により、焼
成後に作用極（白金電極）２１ａとなる塗膜及び対極
（白金電極）２２ａとなる塗膜を形成し、１５０℃にて
１０分、乾燥した。尚、この両極は、焼成後、０．５ｍ
ｍの間隔になるように並置されている。This sensor is manufactured as follows. First, a coating film serving as a working electrode (platinum electrode) 21a and a coating film serving as a counter electrode (platinum electrode) 22a after firing were formed on the insulating substrate 1 by screen printing, and dried at 150 ° C. for 10 minutes. In addition, these two poles are 0.5 m
They are juxtaposed so as to have an interval of m.

【００３２】その後、アルミナペーストを用いて、これ
らの乾燥塗膜上にスクリーン印刷によりアルミナ塗膜を
形成し、更に、１５０℃にて１０分、乾燥した。尚、こ
のアルミナペーストは、アルミナ粉末（平均粒子径；
０．５μｍ）５８重量部、「エトセル」（ダウケミカル
社製、エチルセルロース系増粘剤）５．８重量部、「イ
オネット」（三洋化成社製、エステル系非イオン界面活
性剤）３．０重量部、メチルセルソルブ５．８重量部及
びブチルカルビドール２７．４重量部からなる。その
後、これらの積層膜を一体的に、１２００℃にて６時間
焼成して、互いに一体化され且つ密着された電極２１
ａ、２２ａと多孔質セラミック膜を形成した。この多孔
質膜の平均孔径は０．２μｍ、気孔率は３０％及び膜厚
は２０μｍである。次いで、絶縁ペースト（ガラスペー
ストからなる。）で、感応部（多孔質膜）及び各電極の
リード部（２１１、２２１）以外を絶縁層４ａで被覆
し、リード線（図示せず）を接続した。Thereafter, an alumina coating film was formed on these dried coating films by screen printing using an alumina paste, and further dried at 150 ° C. for 10 minutes. The alumina paste was made of alumina powder (average particle diameter;
0.5 μm) 58 parts by weight, “Ethocel” (manufactured by Dow Chemical Company, ethyl cellulose-based thickener) 5.8 parts by weight, “Ionnet” (manufactured by Sanyo Chemical Industries, ester-based nonionic surfactant) 3.0 parts by weight Parts, 5.8 parts by weight of methylcellosolve and 27.4 parts by weight of butyl carbidol. Thereafter, these laminated films are integrally baked at 1200 ° C. for 6 hours, so that the electrodes 21 integrated and adhered to each other are integrated.
a, 22a and a porous ceramic film were formed. This porous membrane has an average pore diameter of 0.2 μm, a porosity of 30%, and a thickness of 20 μm. Next, an insulating paste (consisting of a glass paste) was used to cover portions other than the sensitive portion (porous film) and the lead portions (211 and 221) of the electrodes with an insulating layer 4a, and lead wires (not shown) were connected. .

【００３３】次に、これらの表面の超音波洗浄を行い、
その後エタノールで、電極と多孔質セラミック膜の一体
物全体を殺菌し、乾燥した。次いで、この多孔質セラミ
ック膜上に、実施例１で用いたグルコースオキシダーゼ
と牛血清アルブミンの混合水溶液を５μｌ滴下し、風乾
後、グルタルアルデヒド等の多官能基試薬で架橋処理を
行うという一般的方法により、酵素固定化処理を行っ
て、本実施例２に係わるグルコースセンサを製作した。
ここでアルブミンは、多孔質セラミック膜との相互作用
により、グルコースオキシダーゼの保護効果及び選択性
の向上効果を有している。Next, these surfaces are subjected to ultrasonic cleaning,
Thereafter, the whole of the electrode and the porous ceramic membrane was sterilized with ethanol and dried. Then, 5 μl of a mixed aqueous solution of glucose oxidase and bovine serum albumin used in Example 1 was dropped on the porous ceramic membrane, air-dried, and then subjected to a cross-linking treatment with a polyfunctional reagent such as glutaraldehyde. Thus, the glucose sensor according to the second embodiment was manufactured by performing the enzyme immobilization treatment.
Here, albumin has an effect of protecting glucose oxidase and an effect of improving selectivity by interacting with the porous ceramic membrane.

【００３４】尚、比較例１及び比較例２の各センサを、
比較のため準備した。この比較例１のセンサは、グルコ
ースオキシダーゼを固定化した多孔質ニトロセルロース
膜（平均孔径０．２μｍ、膜厚２０μｍ）を、スペーサ
を介して白金電極に密着固定したものである。そして、
比較例２のセンサは、感光性樹脂（スチルバゾリウム基
含有ポリビニルアルコール）でグルコースオキシダーゼ
を白金電極に固定したものである。The sensors of Comparative Example 1 and Comparative Example 2 were replaced by
Prepared for comparison. In the sensor of Comparative Example 1, a porous nitrocellulose membrane (average pore diameter: 0.2 μm, film thickness: 20 μm) on which glucose oxidase was immobilized was tightly fixed to a platinum electrode via a spacer. And
In the sensor of Comparative Example 2, glucose oxidase was fixed to a platinum electrode with a photosensitive resin (stilbazolium group-containing polyvinyl alcohol).

【００３５】（２）性能試験 以上より構成した各センサを用いて、測定・保存を繰り
返し、その際の出力変化から経日安定性（耐久性）を調
べた。測定法は、リン酸緩衝液（ｐＨ；７）に所定のセ
ンサを浸し、対極に対し作用極に＋６００ｍＶ電圧を印
加し、所定濃度のグルコース（１００ｍｇ／ｄｌ）に対
する応答電流値を測定した。初期特性値を１００％とし
て、百分率で経日変化を示した。結果を表２及び図８に
示す。尚、保存は４℃乾燥で行い、膜の耐久性を調べる
ために、一週間に１０時間は緩衝液中で撹拌した。(2) Performance Test Using the sensors configured as described above, measurement and storage were repeated, and the aging stability (durability) was examined from the output change at that time. In the measurement method, a predetermined sensor was immersed in a phosphate buffer (pH; 7), a voltage of +600 mV was applied to the working electrode with respect to the counter electrode, and a response current value to a predetermined concentration of glucose (100 mg / dl) was measured. Assuming that the initial characteristic value is 100%, the daily change is shown in percentage. The results are shown in Table 2 and FIG. In addition, storage was performed by drying at 4 ° C., and the mixture was stirred in a buffer for 10 hours a week in order to examine the durability of the membrane.

【００３６】[0036]

【表２】 [Table 2]

【００３７】これらの結果によれば、実施例２のセンサ
では、９０日後（１３０時間以上の測定）においても初
期特性値の約９０％の特性を維持し、応答時間も５秒と
初期特性値から変化していない。これは、長時間の測定
においても多孔質セラミック膜が、電極に密着し、酵素
をしっかりと固定している細孔中の立体構造に何の変化
も起きず、非常に安定であるものと考えられる。一方、
比較例１、２のいずれのセンサにおいても、測定ととも
に特性値が低下し、応答時間も長くなり、測定、保存に
より、湿潤、乾燥が繰り返され、酵素固定化膜自身の変
形、軟化及びひび割れが見られ、途中で測定不能となっ
た。また、実施例２のセンサにおいて多孔質セラミック
膜の平均孔径が０．２μｍと適正なものであるので、初
期応答時間が５秒と、比較例のもの（６０秒、３０秒）
と比べて著しく短い。According to these results, the sensor of Example 2 maintains the characteristics of about 90% of the initial characteristic value even after 90 days (measurement of 130 hours or more), and has a response time of 5 seconds, which is the initial characteristic value. Has not changed from. This suggests that the porous ceramic membrane is extremely stable, even during long-term measurements, without any change in the three-dimensional structure in the pores that adhere to the electrodes and firmly fix the enzyme. Can be on the other hand,
In each of the sensors of Comparative Examples 1 and 2, the characteristic value was reduced along with the measurement, the response time was also increased, and the measurement and storage repeated wet and dry, and the enzyme-immobilized membrane itself was deformed, softened, and cracked. It was seen, and it became impossible to measure on the way. In addition, since the average pore diameter of the porous ceramic membrane in the sensor of Example 2 is 0.2 μm, which is appropriate, the initial response time is 5 seconds, and that of the comparative example (60 seconds, 30 seconds).
Significantly shorter than.

【００３８】尚、本発明においては、前記具体的実施例
に示すものに限られず、目的、用途に応じて本発明の範
囲内で種々変更した実施例とすることができる。即ち、
酵素の保護膜として、公知の高分子膜（例えば、セルロ
ースアセテート膜等）を形成させた構成とすることもで
きる。また、前記実施例２においては、多孔質セラミッ
ク膜の平均孔径を０．２μｍとしたが、この孔径はこれ
以外の値とすることができ、この場合は前記のように、
優れた密着性に起因する経日安定性（耐久性）に優れた
ものとすることができる。尚、この孔径を、０．０５〜
０．５μｍとすれば、優れた初期応答性、ひいては劣化
しない安定した応答性を確保できる。The present invention is not limited to the specific embodiments described above, but may be variously modified within the scope of the present invention in accordance with the purpose and application. That is,
A structure in which a known polymer film (for example, a cellulose acetate film or the like) is formed as a protective film for the enzyme can also be used. Further, in Example 2, the average pore size of the porous ceramic membrane was 0.2 μm, but this pore size can be any other value. In this case, as described above,
It can be excellent in aging stability (durability) due to excellent adhesion. In addition, this hole diameter is 0.05 to
When the thickness is 0.5 μm, excellent initial responsiveness and stable responsiveness without deterioration can be secured.

【００３９】[0039]

【発明の効果】酵素固定化膜を構成する多孔質セラミッ
ク膜の平均孔径を適度な大きさにし、かつ酵素固定化膜
に牛血清アルブミンを含ませた本発明のバイオセンサに
おいては、応答性及び経日安定性（酵素の活性の保護作
用）に優れると共に、選択性にも優れるので、適用範囲
が広くなると共に、測定誤差も少なくなる。According to the present invention, the average pore size of the porous ceramic membrane constituting the enzyme-immobilized membrane is adjusted to an appropriate size , and the enzyme-immobilized membrane is formed.
The biosensor of the present invention containing bovine serum albumin has excellent responsiveness and chronological stability ( protective effect of enzyme activity ) and excellent selectivity. Errors are also reduced.

【００４０】電極と多孔質セラミック膜とを一体的に形
成して密着させて酵素固形化膜を形成させた本発明のバ
イオセンサにおいては、酵素固定化膜の耐久性、この固
定化膜（若しくは多孔質セラミック膜）と電極との密着
性が大変優れるので、バイオセンサとしての経日安定
性、応答性の特性が更に向上する。また、多孔質セラミ
ック膜及び電極の滅菌、殺菌を、完全に且つ容易に行う
ことができるため、長期保存しても汚染による変質がな
く安定であり、またオートクレーブ、乾熱滅菌による電
極と多孔質セラミック膜の再生も可能であり、大変経済
的である。In the biosensor of the present invention in which an electrode and a porous ceramic film are integrally formed and adhered to each other to form an enzyme solidified film, the durability of the enzyme-immobilized film and the immobilized film (or Since the adhesion between the porous ceramic membrane) and the electrode is very excellent, the aging stability and responsiveness characteristics of the biosensor are further improved. In addition, the sterilization and sterilization of the porous ceramic membrane and the electrode can be performed completely and easily, so that even if stored for a long period of time, there is no deterioration due to contamination, and it is stable. Regeneration of the ceramic film is also possible, which is very economical.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】実施例１に係わるグルコースセンサの要部縦断
面図である。FIG. 1 is a longitudinal sectional view of a main part of a glucose sensor according to a first embodiment.

【図２】実施例１に係わるグルコースセンサの平面図で
ある。FIG. 2 is a plan view of the glucose sensor according to the first embodiment.

【図３】実施例１においてグルコースの濃度と応答電流
値の関係を示すグラフである。FIG. 3 is a graph showing a relationship between a glucose concentration and a response current value in Example 1.

【図４】実施例１においてグルコースセンサ作製後の経
過日数と相対電流の関係を示すグラフである。FIG. 4 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed after the production of the glucose sensor and the relative current in Example 1.

【図５】実施例１においてアスコルビン酸の濃度と相対
電流の関係を示すグラフである。FIG. 5 is a graph showing the relationship between the concentration of ascorbic acid and the relative current in Example 1.

【図６】実施例２に係わるグルコースセンサの平面図で
ある。FIG. 6 is a plan view of a glucose sensor according to a second embodiment.

【図７】図６に示すグルコースセンサのＸ−Ｘ矢視縦断
面図である。7 is a vertical sectional view of the glucose sensor shown in FIG.

【図８】実施例２においてグルコースセンサ作製後の経
過日数と相対電流の関係を示すグラフである。FIG. 8 is a graph showing the relationship between the number of days elapsed since the production of the glucose sensor and the relative current in Example 2.

【符号の説明】[Explanation of symbols]

１ 絶縁基板 ２１ 作用極 ２２ 対極 ３ 酵素固定化膜 ３１ 多孔質セラミック膜 ３２ グルコースオキシターゼと牛血清アルブミン ４ 絶縁層 ５ リード線 DESCRIPTION OF SYMBOLS 1 Insulating substrate 21 Working electrode 22 Counter electrode 3 Enzyme-immobilized membrane 31 Porous ceramic membrane 32 Glucose oxidase and bovine serum albumin 4 Insulating layer 5 Lead wire

フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭60−173452（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−27255（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−228955（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) G01N 27/327Continuation of the front page (56) References JP-A-60-173452 (JP, A) JP-A-59-27255 (JP, A) JP-A-60-228955 (JP, A) (58) Fields investigated (Int) .Cl. ⁶ , DB name) G01N 27/327

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 絶縁基板上に適当な間隔をもって形成さ
れた作用極及び対極よりなる金属電極と、牛血清アルブ
ミンを含み少なくとも該金属電極上及び該両極間に積層
された酵素固定化膜と、からなる酵素電極を有するバイ
オセンサにおいて、 前記酵素固定化膜は、多孔質セラミック膜と該多孔質セ
ラミック膜に固定化された酵素とを有し、該多孔質セラ
ミック膜の平均孔径は０．０５〜０．５μｍであり、 センサ製作直後の応答電流値に対する３０日後の応答電
流値が９０％以上であり、かつ、被測定物質を所定濃度
で含む試験液の応答電流値（ａ）を１００としたとき、
該試験液と同濃度の被測定物質および該被測定物質の１
／２０濃度の妨害物質を含む妨害物質含有試験液の応答
電流値（ｂ）が１０５未満であ ることを特徴とするバイ
オセンサ。1. A metal electrode made of a working electrode and a counter electrode was formed with appropriate intervals on the insulating substrate, bovine serum Arve
And an enzyme immobilized membrane having at least laminated between the metal electrode and on both said electrode includes a Min, in the biosensor having an enzymatic electrode made of, the enzyme immobilized membrane is a porous ceramic membrane and the porous ceramic membrane and a immobilized enzyme, an average pore diameter of the porous ceramic film is Ri 0.05~0.5μm der, response collector after 30 days on the response current value immediately after the sensor fabrication
The flow rate is 90% or more, and the analyte is
When the response current value (a) of the test solution contained in
A substance to be measured having the same concentration as the test solution and one of the substances to be measured
Of test solution containing / 20 concentration of interfering substance containing interfering substance
Biosensor current value (b) is characterized in der Rukoto less than 105. 【請求項２】 上記被測定物質はグルコースであり、上
記妨害物質はアスコルビン酸および尿酸から選択される
少なくとも一種である請求項１記載のバイオセンサ。2. The method according to claim 1 , wherein the analyte is glucose.
The interfering substance is selected from ascorbic acid and uric acid
The biosensor according to claim 1, which is at least one type . 【請求項３】 該多孔質セラミック膜は、前記金属電極
上に該金属電極と一体焼成により密着形成されているこ
とを特徴とする請求項１または２記載のバイオセンサ。3. The biosensor according to claim 1 , wherein the porous ceramic film is formed in close contact with the metal electrode by firing integrally with the metal electrode. 【請求項４】 前記多孔質セラミック膜の気孔率は１０
〜５０％である請求項１、２または３記載のバイオセン
サ。Wherein the porosity of the porous ceramic film is 10
4. The biosensor according to claim 1, 2 or 3, wherein the biosensor is ５０50% .