JP2784941B2 - 2'-methylidenepyrimidine nucleoside compound and pharmaceutical use thereof - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、すぐれた抗腫瘍作用を有する新規な２′−
メチリデンピリミジンヌクレオシド化合物およびその医
薬用途に関する。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial field of application] The present invention relates to a novel 2'-
The present invention relates to a methylidenepyrimidine nucleoside compound and its pharmaceutical use.

〔従来の技術および発明が解決すべき課題〕[Problems to be solved by conventional technology and invention]

がんによる死亡が増加している状況下、外科療法にあ
わせて化学療法および免疫療法が広く行われている。こ
こで、化学療法においては代謝拮抗性抗悪性腫瘍剤とし
てシトシンアラビノシドや５−フルオロウラシルなどが
急性白血病などに有効であるとして臨床上使用されてい
る。しかしながら、従来の制がん剤ではいまだに十分満
足しうる治癒効果が得られず、しかも副作用をもたらす
など、様々な問題があり、各方面からすぐれた制がん剤
の開発が求められている。In the context of increasing cancer deaths, chemotherapy and immunotherapy are widely used in conjunction with surgery. Here, in chemotherapy, cytosine arabinoside, 5-fluorouracil and the like are used clinically as antimetabolic antineoplastic agents as being effective for acute leukemia and the like. However, conventional anticancer agents still have various problems, such as not being able to obtain a satisfactory healing effect and causing side effects, and the development of excellent anticancer agents has been demanded from various fields.

このような状況下、本発明者らは２′−デオキシ−
２′−メチリデンシチジンまたはその薬学的に許容され
うる塩を発明した。Under these circumstances, the present inventors have determined that 2'-deoxy-
2'-methylidene cytidine or a pharmaceutically acceptable salt thereof has been invented.

しかしながら、２′−デオキシ−２′−メチリデンシ
チジンは溶解性が悪く、その酸付加塩は不安定な為、そ
れらは製剤上満足しうるものではなかった。However, 2'-deoxy-2'-methylidene cytidine was poorly soluble and its acid addition salts were unstable, so that they were not satisfactory in terms of formulation.

本発明は、すぐれた抗腫瘍作用を有する新規な化合物
およびその医薬用途を提供することを目的とする。An object of the present invention is to provide a novel compound having an excellent antitumor effect and a pharmaceutical use thereof.

〔課題を解決するための手段〕[Means for solving the problem]

本発明者らは、製剤上の問題がなく、制がん剤として
有用な新規化合物を開発すべく研究を重ねた結果、２′
−メチリデンピリミジンヌクレオシド化合物がすぐれた
抗腫瘍作用を有することを見出し、本発明を完成させ
た。The present inventors have conducted studies to develop a novel compound which is free from formulation problems and is useful as an anticancer agent.
-It has been found that a methylidenepyrimidine nucleoside compound has an excellent antitumor effect, and the present invention has been completed.

本発明は、一般式 （式中、R³は水素またはリン酸残基を示す。） により表される２′−メチリデンピリミジンヌクレオシ
ド化合物またはその塩に関する。The present invention has the general formula (Wherein R ³ represents a hydrogen or phosphate residue). Or a salt thereof.

さらに、本発明は有効成分として一般式（Ｉ）の化合
物またはその塩、および薬理学的に許容されうる担体を
含有することを特徴とする制がん剤に関する。Furthermore, the present invention relates to an anticancer agent comprising as an active ingredient a compound of the general formula (I) or a salt thereof, and a pharmacologically acceptable carrier.

一般式（Ｉ）の化合物の塩としては、R³が水素である
場合には塩酸塩、硫酸塩、臭化水素酸塩、リン酸塩、マ
レイン酸塩、フマール酸塩、酒石酸塩、コハク酸塩、ク
エン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩などの酸付加物
が、R³がリン酸残基の場合にはナトリウム塩、カリウム
塩、リチウム塩、カルシウム塩などの金属塩もしくはア
ンモニウム塩などがあげられる。また、本発明には一般
式（Ｉ）の化合物またはその塩の水和物（１水和物、1/
2水和物、1/4水和物、3/2水和物）または溶媒和物も含
まれる。As the salt of the compound of the general formula (I), when R ³ is hydrogen, hydrochloride, sulfate, hydrobromide, phosphate, maleate, fumarate, tartrate, succinic acid Salts, citrates, acid adducts such as p-toluenesulfonate, and when R ³ is a phosphate residue, sodium salts, potassium salts, lithium salts, metal salts such as calcium salts or ammonium salts. can give. In the present invention, hydrates of the compound of the general formula (I) or a salt thereof (monohydrate, 1 /
Dihydrate, 1/4 hydrate, 3/2 hydrate) or solvates.

一般式（Ｉ）の化合物としては、２′−デオキシ−
２′−メチリデン−５−フルオロシチジン、または２′
−デオキシ−２′−メチリデン−５−フルオロシチジン
−５′−リン酸があげられる。As the compound of the general formula (I), 2'-deoxy-
2'-methylidene-5-fluorocytidine, or 2 '
-Deoxy-2'-methylidene-5-fluorocytidine-5'-phosphate.

本発明の一般式（Ｉ）の化合物は、塩基部４位の水酸
基をアミノ基に変換する通常のアミノ化反応に付するこ
とにより取得することができる。たとえば、一般式 （式中、Ｒはハロゲン、アルキル、ハロアルキルまたは
炭素数２〜４個のアルキニルを示す。）により表わされ
る化合物の糖部３′位、５′位の水酸基が保護された糖
部２′位がメチリデンである化合物と1,2,4−トリアゾ
ールとをオキシ塩化リンおよびトリエチルアミンの存在
下に反応させて、４−（1,2,4−トリアゾール−１−イ
ル）体とし、ついでアンモニアガスを通じて４−アミノ
体とし、最後に水酸基の保護基除去反応を行い、必要に
よりリン酸化することにより得られる。The compound of the general formula (I) of the present invention can be obtained by subjecting it to a usual amination reaction for converting the hydroxyl group at the 4-position of the base to an amino group. For example, the general formula Wherein R represents a halogen, an alkyl, a haloalkyl or an alkynyl having 2 to 4 carbon atoms. The methylidene compound is reacted with 1,2,4-triazole in the presence of phosphorus oxychloride and triethylamine to form a 4- (1,2,4-triazol-1-yl) form, which is then reacted with ammonia gas. -An amino compound, and finally, a reaction for removing a protecting group for a hydroxyl group, followed by phosphorylation if necessary.

糖部３′位、５′位の水酸基が保護された糖部２′位
がメチリデンである化合物は、糖部３′位、５′位の水
酸基を保護した後、糖部２′位水酸基を酸化し、ついで
ウィッティヒ（Wittig）試薬を反応させて糖部２′位メ
チリデン体とする。A compound in which the sugar moiety 2'-position is methylidene in which the sugar moiety 3'-position or the 5'-position hydroxyl group is protected is protected by protecting the sugar moiety 3'-position or 5'-position hydroxyl group, and then converting the sugar moiety 2'-position hydroxyl group. It is oxidized and then reacted with a Wittig reagent to give a methylidene compound at the sugar moiety 2'-position.

上記において、糖部３′位および５′位水酸基の保護
基としては、水酸基の保護基として常用されているもの
であればよく、たとえば、アセチル、プロピオニル、ブ
チリル、ベンゾイル、ナフトイルなどのアシル基、エチ
リデン、プロピリデン、イソプロピリデン、ベンジリデ
ン、シクロヘキシリデン、シクロペンチリデン、メトキ
シメチリデン、エトキシメチリデン、ジメトキシメチリ
デンなどのアセタールまたはケタール型保護基、ベンジ
ル、ｐ−メトキシベンジル、3,4−ジメトキシベンジ
ル、ジフェニルメチル、トリフェニルメチル、αもしく
はβ−ナフチルメチル、α−ナフチルジフェニルメチル
などのアルアルキル基、トリメチルシリル、ｔ−ブチル
ジメチルシリル、メチルジイソプロピルシリル、トリイ
ソプロピルシリル、テトライソプロピルジシロキシル
（TIPDS）などのシリル基を例示することができる。In the above, the protecting group for the hydroxyl group at the 3′-position and the 5′-position of the sugar moiety may be any one that is commonly used as a protecting group for a hydroxyl group, for example, an acyl group such as acetyl, propionyl, butyryl, benzoyl, and naphthoyl; Acetal or ketal type protecting groups such as ethylidene, propylidene, isopropylidene, benzylidene, cyclohexylidene, cyclopentylidene, methoxymethylidene, ethoxymethylidene, dimethoxymethylidene, etc., benzyl, p-methoxybenzyl, 3,4-dimethoxybenzyl Aralkyl groups such as diphenylmethyl, triphenylmethyl, α or β-naphthylmethyl, α-naphthyldiphenylmethyl, trimethylsilyl, t-butyldimethylsilyl, methyldiisopropylsilyl, triisopropylsilyl, tetra It can be exemplified isopropyl di White silyl groups such as cyclohexyl (TIPDS).

２′位水酸基の酸化方法としては、クロム酸−ピリジ
ン−無水酢酸の複合体などを用いるクロム酸酸化（Ａ
法）もしくは、塩化オキサリル−ジメチルスルホキシド
などにより生じる活性化ジメチルスルホキシドを用いる
活性化ジメチルスルホキシド酸化（Ｂ法）などを採用す
ることができる。As a method for oxidizing the hydroxyl group at the 2'-position, chromic acid oxidation using a complex of chromic acid-pyridine-acetic anhydride (A
Method) or activated dimethylsulfoxide oxidation (method B) using activated dimethylsulfoxide generated by oxalyl chloride-dimethylsulfoxide or the like.

酸化反応は、化合物１モルに対して１〜10倍モルの酸
化剤の存在下、Ａ法の場合には−10℃〜室温、Ｂ法の場
合には−10〜−80℃で１〜10時間反応させることにより
実施することができる。The oxidation reaction is carried out in the presence of an oxidizing agent in an amount of 1 to 10 moles per 1 mole of the compound at -10 ° C to room temperature in the case of Method A, and at -10 to -80 ° C in the case of Method B. It can be carried out by reacting for a time.

メチリデン化反応に使用するウィッティヒ試薬は、具
体的にはトリフェニルホスフィンメチレンがあげられ、
使用直前に、トリフェニルホスホニウム化合物（臭化メ
チルトリフェニルホスホニウム、ヨウ化メチルトリフェ
ニルホスホニウムなど）と強アルカリ（水素化カリウ
ム、水素化ナトリウム、ｎ−ブチルリチウム、ナトリウ
ムメトキシド、カリウム−ｔ−ブトキシド、ナトリウム
アミドなど）から常法に従って調製したものを使用する
のが好ましい。ウィッティヒ試薬の使用量は化合物１モ
ルに対して１〜３倍モルから適宜選択できる。The Wittig reagent used for the methylidene-forming reaction is specifically triphenylphosphine methylene,
Immediately before use, a triphenylphosphonium compound (methyltriphenylphosphonium bromide, methyltriphenylphosphonium iodide, etc.) and a strong alkali (potassium hydride, sodium hydride, n-butyllithium, sodium methoxide, potassium-t-butoxide) , Sodium amide, etc.) according to a conventional method. The amount of the Wittig reagent used can be appropriately selected from 1 to 3 moles per 1 mole of the compound.

このようなウィッティヒ試薬を用いるメチリデン化反
応は、溶媒（テトラヒドロフラン、ジオキサン、エーテ
ル、ベンゼン、ジメチルスルホキシドなどの単独もしく
は混合溶媒）中、−30〜30℃で0.5〜20時間反応させる
ことにより実施することができる。The methylidene-forming reaction using such a Wittig reagent is carried out by reacting in a solvent (single or mixed solvent such as tetrahydrofuran, dioxane, ether, benzene, dimethylsulfoxide, etc.) at -30 to 30 ° C for 0.5 to 20 hours. Can be.

1,2,4−トリアゾールとの反応はアセトニトリルなど
の溶媒中、アルゴンなどの不活性ガス気流下に０℃から
室温付近、30分から５時間程度で進行する。アミノ化反
応に使用するアンモニアガスは水酸化ナトリウムを予め
通しておくとよい。アンモニアガスによるアミノ化反応
は通常１〜５時間程度行うのがよい。The reaction with 1,2,4-triazole proceeds in a solvent such as acetonitrile under a flow of an inert gas such as argon from 0 ° C. to around room temperature in about 30 minutes to 5 hours. The ammonia gas used for the amination reaction is preferably passed through sodium hydroxide in advance. The amination reaction with ammonia gas is usually preferably performed for about 1 to 5 hours.

糖部水酸基の保護基除去反応は、使用した保護基に応
じた酸性加水分解、アルカリ性加水分解、フッ化アンモ
ニウム処理、接触還元などの通常の処理を適宜選択して
行えばよい。たとえば、水酸基の保護基としてシリル基
を用いた場合には、フッ化アンモニウム処理、酸性もし
くはアルカリ性加水分解によりシリル基を除去すること
ができる。The protective group removal reaction of the hydroxyl group of the sugar moiety may be carried out by appropriately selecting a usual treatment such as acidic hydrolysis, alkaline hydrolysis, ammonium fluoride treatment, and catalytic reduction according to the protective group used. For example, when a silyl group is used as a protecting group for a hydroxyl group, the silyl group can be removed by ammonium fluoride treatment or acidic or alkaline hydrolysis.

R³がリン酸残基である化合物は、オキシ塩化リン、テ
トラクロロピロリン酸などの通常のヌクレオシドの５′
位の選択的リン酸化に使用するリン酸化剤と反応させて
得ることができる。Compounds in which R ³ is a phosphate residue are 5 ′ of ordinary nucleosides such as phosphorus oxychloride and tetrachloropyrophosphate.
By reacting with a phosphorylating agent used for selective phosphorylation of the position.

本発明の目的化合物および合成中間体は通常の単離精
製法（たとえば、イオン交換、吸着などの各種クロマト
グラフィー法、再結晶法など）を適宜組合わせて単離精
製することができる。具体的には、たとえばヌクレオシ
ド体の場合溶媒を留去後、必要に応じカラムクロマトグ
ラフィーに付し、適当な有機溶媒にて結晶化すればよ
く、また、ヌクレオチド体（R³がリン酸残基）の場合に
はイオン交換樹脂などのイオン交換カラムクロマトグラ
フィー、活性炭などの吸着カラムクロマトグラフィーな
どにより精製し、凍結乾燥または結晶化により遊離酸型
を得ることができ、必要に応じて塩型として得ることも
できる。The target compound and the synthetic intermediate of the present invention can be isolated and purified by appropriately combining ordinary isolation and purification methods (for example, various chromatography methods such as ion exchange and adsorption, and recrystallization methods). Specifically, for example, after distilling off the case of nucleoside where the solvent, subjected to column chromatography if necessary, may be crystallized from a suitable organic solvent, Nucleotide body (R ³ is a phosphoric acid residue In the case of), it can be purified by ion exchange column chromatography such as ion exchange resin, adsorption column chromatography such as activated carbon, etc., and the free acid form can be obtained by lyophilization or crystallization. You can also get.

このようにして得られる一般式（Ｉ）の化合物は常法
により前記した酸付加塩、金属塩またはアンモニウム塩
とすることができる。The compound of the general formula (I) thus obtained can be converted into the above-mentioned acid addition salt, metal salt or ammonium salt by a conventional method.

〔作用〕[Action]

本発明の化合物は、各種培養腫瘍細胞株に対し顕著な
増殖抑制効果を示し、かつ低毒性であることから、これ
らを有効成分とする本発明医薬は制がん剤として有用で
ある。本発明の制がん剤は、有効量の化合物（Ｉ）と医
薬上許容しうる担体、賦形剤、希釈剤などと混合して、
散剤、顆粒、錠剤、糖衣錠、カプセル剤、シロップ剤、
坐剤、外用剤、注射剤、点滴用剤などの形態をとり得
る。Since the compound of the present invention exhibits a remarkable growth inhibitory effect on various cultured tumor cell lines and has low toxicity, the medicament of the present invention containing these as an active ingredient is useful as an anticancer agent. The anticancer agent of the present invention is obtained by mixing an effective amount of compound (I) with a pharmaceutically acceptable carrier, excipient, diluent, and the like.
Powders, granules, tablets, dragees, capsules, syrups,
It can take the form of suppositories, external preparations, injections, infusions, and the like.

２′−デオキシ−２′−メチリデンシチジンは、室温
で生理食塩水には25mg/mlの濃度で溶解しないのに対し
て、実施例１の化合物（２′−デオキシ−２′−メチリ
デン−５−フルオロシチジン）は同様の条件下で易溶で
ある。2'-deoxy-2'-methylidene cytidine is insoluble in physiological saline at room temperature at a concentration of 25 mg / ml, whereas the compound of Example 1 (2'-deoxy-2'-methylidene-5 -Fluorocytidine) is readily soluble under similar conditions.

本発明の制がん剤は、ヒトを含む哺乳動物に対し、経
口的または非経口的に投与されるが、特に経口投与が好
ましい。投与量は、対象がんを有効に阻止する量であれ
ばよく、治療対象動物、がんの種類、投与経路、剤型な
どにより変動し得るが、一般に経口剤の場合、１日10〜
400mg/kg体重、好ましくは50〜200mg/kg体重であり、注
射剤では１日１〜20mg/kg体重、好ましくは１〜5mg/kg
体重である。投与回数は１日１〜４回の範囲で適宜選択
し得る。The anticancer agent of the present invention is orally or parenterally administered to mammals including humans, and oral administration is particularly preferred. The dose may be an amount that effectively inhibits the target cancer, and may vary depending on the animal to be treated, the type of cancer, the administration route, the dosage form, and the like.
400 mg / kg body weight, preferably 50 to 200 mg / kg body weight, and 1 to 20 mg / kg body weight per day for injections, preferably 1 to 5 mg / kg.
Weight. The frequency of administration can be appropriately selected in the range of 1 to 4 times a day.

本発明の制がん剤は、他の制がん剤、免疫賦活剤また
はその他の許容し得る薬剤などと併用することができ
る。The anticancer agent of the present invention can be used in combination with other anticancer agents, immunostimulants or other acceptable drugs.

〔実施例〕〔Example〕

以下、実施例により本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらに限定されるものではない。Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to examples, but the present invention is not limited thereto.

実施例１ （１）５−フルオロウリジン2.62gをピリジン30mlに溶
解し、０℃で1,3−ジクロロ−1,1,3,3−テトライソプロ
ピルジシロキサン3.3mlを加え２時間、室温に戻して1.5
時間攪拌した。水を5ml加え、溶媒を減圧留去した。酢
酸エチル100ml、水100mlを加え、分液し、有機層を２回
水洗後硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒を減圧留去した。
残査をシリカゲルカラム（φ2.4×23cm）で分取した。2
5％酢酸エチル／ヘキサンで溶出すると、３′,5′−Ｏ
−テトライソプロピルジシロキサニル−５−フルオロウ
リジンをあめ状物質として得た。収量4.24g、収率83.9
％。Mass（m/z）:504（M⁺）,461（M⁺−イソプロピル） （２）（１）で得られた化合物5gを塩化メチレン10mlに
溶解し、４当量のクロム酸コンプレックス（塩化メチレ
ン100ml中酸化クロム4g、ピリジン6.67ml、無水酢酸4m
l）に混合し、室温で１時間撹拌した。酢酸エチル500ml
に滴下し、φ6.0×1.5cmのシリカゲルで濾過した。濾液
を減圧留去し、残渣を酢酸エチル200ml、水200mlで分液
した。有機層を水洗後、硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒
を減圧留去、残査をシリカゲルカラム（φ2.4×28cm）
で分取し、20％酢酸エチル／ヘキサンで溶出し、ヘキサ
ンから結晶化して、３′,5′−Ｏ−テトライソプロピル
ジシロキサニル−２′−オキソ−５−フルオロウリジン
を得た。収量4.3g、収率86％。融点183〜186℃。Mass
（m/z）:502（M⁺）。Example 1 (1) 2.62 g of 5-fluorouridine was dissolved in 30 ml of pyridine, 3.3 ml of 1,3-dichloro-1,1,3,3-tetraisopropyldisiloxane was added at 0 ° C., and the temperature was returned to room temperature for 2 hours. 1.5
Stirred for hours. 5 ml of water was added, and the solvent was distilled off under reduced pressure. Ethyl acetate (100 ml) and water (100 ml) were added, the layers were separated, and the organic layer was washed twice with water, dried over sodium sulfate, and the solvent was distilled off under reduced pressure.
The residue was fractionated on a silica gel column (φ2.4 × 23 cm). Two
Elution with 5% ethyl acetate / hexane gives 3 ', 5'-O
-Tetraisopropyldisiloxanyl-5-fluorouridine was obtained as a syrup. Yield 4.24 g, yield 83.9
%. Mass (m / z): 504 (M ⁺ ), 461 (M ⁺ -isopropyl) (2) 5 g of the compound obtained in (1) is dissolved in 10 ml of methylene chloride, and 4 equivalents of a chromic acid complex (100 ml of methylene chloride) Medium chromium oxide 4g, pyridine 6.67ml, acetic anhydride 4m
l) and stirred at room temperature for 1 hour. 500 ml of ethyl acetate
And filtered through silica gel of φ6.0 × 1.5 cm. The filtrate was distilled off under reduced pressure, and the residue was separated with 200 ml of ethyl acetate and 200 ml of water. The organic layer was washed with water, dried over sodium sulfate, the solvent was distilled off under reduced pressure, and the residue was subjected to a silica gel column (φ2.4 × 28 cm).
And eluted with 20% ethyl acetate / hexane, and crystallized from hexane to obtain 3 ', 5'-O-tetraisopropyldisiloxanyl-2'-oxo-5-fluorouridine. Yield 4.3 g, 86%. 183-186 ° C. Mass
(M / z): 502 (M ⁺ ).

元素分析値C₂₁H₃₅N₂O₇FSi₂として： 計算値:C;50.17 H;7.02 N;5.57 実測値:C;50.29 H;7.33 N;5.58 （３）テトラヒドロフラン80ml中、アルゴン気流下臭化
メチルトリフェニルホスホニウム8.57gを懸濁し、０℃
でｎ−ブチルリチウム（1.58mol/l、ヘキサン溶液）15.
1mlを滴下し、室温に戻し１時間撹拌した。（２）で得
られた化合物3.02gのテトラヒドロフラン25ml溶液をア
ルゴン気流下０℃で滴下した。20分後室温に戻し、３時
間撹拌した。1N臭化アンモニウムで中和し、溶液を濃縮
した。酢酸エチル100ml、水100mlを加え分液し、有機層
を水洗後硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧留去した。残査
をシリカゲルカラム（φ3.5×18cm）で分取し、20％酢
酸エチル／ヘキサンで溶出すると、３′,5′−Ｏ−テト
ライソプロピルジシロキサニル−２′−デオキシ−２′
−メチリデン−５−フルオロウリジンを、あめ状物質と
して得た。収量2.43g、収率81％。Mass（m/z）:500
（M⁺）。Elemental analysis: As C ₂₁ H ₃₅ N ₂ O ₇ FSi ₂ : Calculated: C; 50.17 H; 7.02 N; 5.57 Found: C; 50.29 H; 7.33 N; 5.58 (3) Odor in 80 ml of tetrahydrofuran under an argon stream 8.57 g of methyltriphenylphosphonium chloride at 0 ° C
With n-butyllithium (1.58 mol / l, hexane solution) 15.
1 ml was added dropwise, and the mixture was returned to room temperature and stirred for 1 hour. A solution of 3.02 g of the compound obtained in (2) in 25 ml of tetrahydrofuran was added dropwise at 0 ° C. in an argon stream. After 20 minutes, the temperature was returned to room temperature and stirred for 3 hours. Neutralized with 1N ammonium bromide and concentrated the solution. Ethyl acetate (100 ml) and water (100 ml) were added, and the mixture was separated. The organic layer was washed with water, dried over sodium sulfate, and evaporated under reduced pressure. The residue was collected on a silica gel column (φ3.5 × 18 cm) and eluted with 20% ethyl acetate / hexane to give 3 ′, 5′-O-tetraisopropyldisiloxanyl-2′-deoxy-2 ′.
-Methylidene-5-fluorouridine was obtained as a syrup. Yield 2.43 g, 81%. Mass (m / z): 500
(M ⁺ ).

（４）アセトニトリル10mlにトリエチルアミン1.4ml、
1,2,4−トリアゾール684mgを溶解し、アルゴン気流下０
℃に冷却した。オキシ塩化リン280μｌを滴下し室温に
戻し、１時間撹拌した。沈澱を濾去し、濾液に（３）の
化合物500mgのアセトニトリル5ml溶液を滴下した。室温
３時間後、50℃で１時間撹拌し、水酸化ナトリウムを通
したアンモニアガスを４時間通じた。クロロホルム100m
l、水100mlを加え、分液し、水層をクロロホルムで２回
洗い、クロロホルム層をまとめて、硫酸ナトリウムで乾
燥し減圧留去した。残査をシリカゲルカラム（φ3.5×1
4cm）で分取し、５％エタノール／クロロホルムで溶出
すると、３′,5′−Ｏ−テトライソプロピルジシロキサ
ニル−２′−デオキシ−２′−メチリデン−５−フルオ
ロシチジンをあめ状物質として得た。収量435mg、収率8
7％。Mass（m/z）:499（M⁺）。(4) 1.4 ml of triethylamine in 10 ml of acetonitrile,
Dissolve 684 mg of 1,2,4-triazole and add 0
Cooled to ° C. 280 μl of phosphorus oxychloride was added dropwise, and the mixture was returned to room temperature and stirred for 1 hour. The precipitate was removed by filtration, and a solution of the compound (3) (500 mg) in acetonitrile (5 ml) was added dropwise to the filtrate. After 3 hours at room temperature, the mixture was stirred at 50 ° C. for 1 hour, and ammonia gas passed through sodium hydroxide was passed for 4 hours. Chloroform 100m
l, 100 ml of water was added, the layers were separated, the aqueous layer was washed twice with chloroform, and the combined chloroform layers were dried over sodium sulfate and evaporated under reduced pressure. Residue is silica gel column (φ3.5 × 1
4 cm) and eluted with 5% ethanol / chloroform, and 3 ', 5'-O-tetraisopropyldisiloxanyl-2'-deoxy-2'-methylidene-5-fluorocytidine was used as a syrup. Obtained. 435 mg, yield 8
7%. Mass (m / z): 499 (M ⁺ ).

（５）（４）で得た化合物400mgをテトラヒドロフラン1
0mlに溶解し、フッ化テトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
1.8mlを加え、室温で30分撹拌した。酢酸で中和し、溶
媒を減圧留去した。残渣をシリカゲルカラム（φ2.4×1
8cm）で分取し、エタノール／クロロホルムで溶出し、
エタノール−酢酸エチルから結晶化すると、２′−デオ
キシ−２′−メチリデン−５−フルオロシチジンを得
た。収量177mg、収率86.2％。融点185〜187℃。Mass（m
/z）:257（M⁺）。(5) 400 mg of the compound obtained in (4) was added to tetrahydrofuran 1
Dissolved in 0 ml and tetra-n-butylammonium fluoride
1.8 ml was added, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes. After neutralization with acetic acid, the solvent was distilled off under reduced pressure. The residue is purified on a silica gel column (φ2.4 × 1
8cm) and eluted with ethanol / chloroform.
Crystallization from ethanol-ethyl acetate gave 2'-deoxy-2'-methylidene-5-fluorocytidine. Yield 177 mg, 86.2%. Mp 185-187 ° C. Mass (m
/ z): 257 (M ⁺ ).

元素分析値C₁₀H₁₂N₃O₄Fとして： 計算値:C;46.70 H;4.70 N;16.34 実測値:C;46.06 H;4.67 N;16.00 実施例２ ２′−デオキシ−２′−メチリデン−５−フルオロシ
チジンとオキシ塩化リンとを用いて常法にしたがって反
応・処理すると、２′−デオキシ−２′−メチリデン−
５−フルオロシチジン−５′−リン酸が得られる。Elemental analysis: as C ₁₀ H ₁₂ N ₃ O ₄ F: Calculated: C; 46.70 H; 4.70 N; 16.34 Found: C; 46.06 H; 4.67 N; 16.00 Example 2 2′-Deoxy-2′-methylidene -5-Fluorocytidine and phosphorus oxychloride are reacted and treated in a conventional manner to give 2'-deoxy-2'-methylidene-
5-Fluorocytidine-5'-phosphate is obtained.

製剤例１ 実施例１の化合物 50.0mg 微粉末セルロース 25.0mg 乳糖 49.5mg スターチ 40.0mg タルク 5.0mg ステアリン酸マグネシウム 0.5mg からなる錠剤。Formulation Example 1 50.0 mg of the compound of Example 1 Fine powdered cellulose 25.0 mg Lactose 49.5 mg Starch 40.0 mg Talc 5.0 mg Tablet comprising 0.5 mg of magnesium stearate.

所望により糖衣処理またはフィルムコート処理を施す
ことによって糖衣錠またはフィルムコート錠とすること
ができる。Sugar-coated tablets or film-coated tablets can be obtained by subjecting them to sugar-coating treatment or film-coating treatment, if desired.

製剤例２ 実施例１の化合物 50.0mg 乳糖 50.0mg スターチ 15.0mg タルク 5.0mg の組成をカプセルに充填してなるカプセル剤。Formulation Example 2 50.0 mg of the compound of Example 1 Lactose 50.0 mg Starch 15.0 mg A capsule prepared by filling a capsule containing 5.0 mg of talc.

製剤例３ 実施例１の化合物 10％ 乳糖 80％ スターチ 10％ からなる細粒剤。Formulation Example 3 Fine granules consisting of the compound of Example 1 10% lactose 80% starch 10%.

製剤例４ 実施例１の化合物 10％ 乳糖 55％ 微粉末セルロース 20％ スターチ 15％ からなる顆粒剤。Formulation Example 4 Granules comprising 10% of the compound of Example 1 lactose 55% fine powdered cellulose 20% starch 15%.

製剤例５ 実施例１の化合物 50.0mg グルコース 100.0mg を精製水に溶かして、全量2mlの注射溶液とする。Formulation Example 5 50.0 mg of the compound of Example 1 and 100.0 mg of glucose are dissolved in purified water to prepare a 2 ml injection solution.

製剤例６ 実施例１の化合物 100mg ウイテプソール H15 950mg ウイテプソール E75 950mg からなる坐剤。ただし、ウイテプソールはヴィッテン社
（西ドイツ）所有の登録商標である。Formulation Example 6 Compound of Example 1 100 mg witepsol H15 950mg witepsol Suppository consisting of 950mg of E75. However, Witepsor is Witten
(West Germany).

製剤例７ 実施例１の化合物 2g パラヒドロキシ安息香酸エチル 0.025g パラヒドロキシ安息香酸プロピル 0.015g ラウリル硫酸ナトリウム 1.5g プロピレングリコール 12.0g ステアリルアルコール 22.0g 白色ワセリン 25.0g の組成を精製水に溶かして、全量100.0gの親水軟膏とす
る。Formulation Example 7 The compound of Example 1 2 g Ethyl parahydroxybenzoate 0.025 g Propyl parahydroxybenzoate 0.015 g Sodium lauryl sulfate 1.5 g Propylene glycol 12.0 g Stearyl alcohol 22.0 g The composition of white petrolatum 25.0 g was dissolved in purified water to give a total amount. Make 100.0 g of hydrophilic ointment.

〔発明の効果〕〔The invention's effect〕

以下の薬理実験により、本発明化合物がすぐれた抗腫
瘍作用を有することを説明する。The following pharmacological experiments explain that the compounds of the present invention have excellent antitumor activity.

薬理実験：各種培養腫瘍細胞のin vitroでの増殖に及ぼ
す影響 各種培養腫瘍細胞（10⁴個）および被検化合物を含む
培養液を96穴プレート（FALCON 3072）の各穴に100μｌ
になるように加え、37℃、５％CO₂、−95％空気下で72
時間培養した。培養後、MTT〔３−（4,5−ジメチル−チ
アゾール−２−イル）−2,5−ジフェニルテトラゾリウ
ムブロマイド〕溶液（5mg/ml）を10μｌずつ各穴に添加
し、さらに４時間37℃、５％CO₂−95％空気下でインキ
ュベートし、10％ドデシル硫酸ナトリウム−0.01N塩酸
溶液の100μｌを各穴に加えた。一晩放置後マイクロプ
レート光度計を用いて570nmにおける吸光度を測定し細
胞数の指標とした。以下の式より抑制率を算出し、50％
抑制する被検化合物の濃度（IC₅₀）を求めた。Pharmacological Experiments: 100 [mu] l to each well of the various cultured tumor effect various cultured tumor cells on in vitro expansion of cells (10 ⁴⁾ and culture 96 well plate containing the test compound (FALCON 3072)
It added to _{a, 37 ℃, 5% CO 2} , 72 under 95% air
Cultured for hours. After the culture, 10 μl of an MTT [3- (4,5-dimethyl-thiazol-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide] solution (5 mg / ml) was added to each well, and further at 37 ° C. for 4 hours. After incubation under 5% CO ₂ -95% air, 100 μl of 10% sodium dodecyl sulfate-0.01N hydrochloric acid solution was added to each well. After standing overnight, the absorbance at 570 nm was measured using a microplate photometer and used as an index of the number of cells. Calculate the suppression rate from the following formula, and
The concentration (IC ₅₀ ) of the test compound to be suppressed was determined.

なお、被検化合物には２′−デオキシ−２′−メチリ
デン−５−フルオロシチジンを蒸留水に溶解して用い
た。また、各種腫瘍細胞株は10％FCSを含むRPMI1640培
地（日水製薬）で培養した。 The test compound used was 2'-deoxy-2'-methylidene-5-fluorocytidine dissolved in distilled water. Various tumor cell lines were cultured in RPMI1640 medium (Nissui Pharmaceutical) containing 10% FCS.

得られたIC₅₀値（μg/ml）を第１表にまとめた。Table 1 summarizes the obtained IC ₅₀ values (μg / ml).

第１表から明らかなように、本発明化合物は各種培養
腫瘍細胞に対し、すぐれた増殖抑制効果を示し、制がん
剤として有用である。 As is clear from Table 1, the compound of the present invention shows an excellent growth inhibitory effect on various cultured tumor cells and is useful as an anticancer agent.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 松田 彰 北海道札幌市北区北23条西13丁目 南新 川公務員宿舎10の501 (72)発明者 山上 圭司 埼玉県入間市大字上藤沢407―14―103 (72)発明者 藤井 明啓 東京都清瀬市上清戸２―12―19 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) C07H 19/06 C07H 19/16 A61K 31/70 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)────────────────────────────────────────────────── ─── Continued on the front page (72) Akira Matsuda, Inventor Akira Matsuda, Kita-ku, Kita-ku, Sapporo-shi, Hokkaido -103 (72) Inventor Akihiro Fujii 2-12-19, Seito, Kiyose-shi, Tokyo (58) Field surveyed (Int.Cl. ⁶ , DB name) C07H 19/06 C07H 19/16 A61K 31/70 CA (STN ) REGISTRY (STN) WPIDS (STN)

Claims (2)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】一般式 （式中、R³は水素またはリン酸残基を示す。） により表わされる２′−メチリデンピリミジンヌクレオ
シド化合物またはその塩。(1) General formula (Wherein R ³ represents a hydrogen or phosphoric acid residue) or a 2′-methylidenepyrimidine nucleoside compound or a salt thereof. 【請求項２】有効成分として請求項（１）の化合物、お
よび薬理学的に許容されうる担体を含有することを特徴
とする制がん剤。2. An anticancer agent comprising the compound of claim (1) as an active ingredient and a pharmacologically acceptable carrier.