JP2748415B2 - Hydroxamic acid derivative - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、細胞増殖抑制作用，血管新生抑制作用を有
し、癌または自己免疫疾患の治療および予防作用を有す
る新規なヒドロキム酸誘導体に関するものである。Description: TECHNICAL FIELD The present invention relates to a novel hydrokimic acid derivative having a cell growth inhibitory action, an angiogenesis inhibitory action, and a therapeutic and preventive action for cancer or autoimmune diseases. It is.

［従来技術］ 細胞増殖は生物が成長あるいは生命を維持していくう
えで欠くことの出来ない機能である。高等動物では多く
の組織や臓器が各々独自の増殖機構を有しており、それ
らは様々な制御機構によって調節されている。近年、生
体内から数10種類の細胞増殖を正に制御する物質、即ち
“細胞増殖因子”が分離、精製されつつあり、個体の形
成、維持に重要な役割を果たしていることが明らかにさ
れている。一方、細胞増殖の異常、特に制御を外れた無
制限の増殖が各種の疾患と関係しているとの報告も多
い。例えば、ガンはその典型といえる。またガン細胞は
増殖を維持していくために、血管の新生を促進させる物
質を放出して、ガン組織周辺やその内部に脈管を形成さ
せることが分かってきているが、この因子（血管新生因
子）が血管内皮細胞に対して強力な増殖促進活性を持つ
ことが明らかにされつつある。またこのような血管新生
は慢性炎症、糖尿病性網膜症、乾せん、リウマチ性関節
炎等の病態時にも認められ、これらの疾患の進展に対す
る関与が示唆されている。[Prior Art] Cell proliferation is an essential function for an organism to grow or sustain life. In higher animals, many tissues and organs each have their own proliferative mechanisms, which are regulated by various regulatory mechanisms. In recent years, several tens of types of substances that positively control cell growth, namely "cell growth factors", are being separated and purified from living organisms, and have been revealed to play an important role in the formation and maintenance of individuals. I have. On the other hand, there are many reports that abnormalities in cell proliferation, particularly uncontrolled, uncontrolled proliferation, are associated with various diseases. For example, a gun is a typical example. In addition, it has been known that cancer cells release substances that promote the formation of blood vessels in order to maintain proliferation, thereby forming blood vessels around and inside cancer tissues. Factor) has a strong growth promoting activity on vascular endothelial cells. Such angiogenesis is also observed in pathological conditions such as chronic inflammation, diabetic retinopathy, psoriasis, rheumatoid arthritis and the like, and it is suggested to be involved in the progress of these diseases.

また、免疫担当細胞特にリンパ球の活性化にも種々の
細胞増殖因子が関与していることが分かってきており、
自己免疫疾患あるいはアレルギー疾患の憎悪因子の一つ
といて、これら細胞増殖因子の過剰産生や過剰応答が考
えられている。従って、上記疾患に関与している細胞増
殖因子に対して選択的に阻害したり、応答を抑制する薬
物が開発されれば、これらの疾患に対して有効な予防、
治療手段となりうるし、臓器移植時の拒否反応の抑制に
も有効と思われる。In addition, it has been found that various cell growth factors are involved in the activation of immunocompetent cells, particularly lymphocytes,
As one of the aggravating factors for autoimmune diseases or allergic diseases, overproduction and overresponse of these cell growth factors are considered. Therefore, if a drug that selectively inhibits the cell growth factors involved in the above-mentioned diseases or suppresses the response is developed, effective prevention for these diseases,
It may be a therapeutic measure and may be effective in suppressing rejection during organ transplantation.

［発明が解決しようとする課題］ 本発明は細胞増殖抑制作用を有する新規なヒドロキサ
ム酸誘導体を提供するものである。[Problems to be Solved by the Invention] The present invention provides a novel hydroxamic acid derivative having a cell growth inhibitory action.

［課題を解決するための手段］ 本発明は、 （１）一般式 （式中、R³は（１）フェニル基、（２）ナフチル基、
（３）インダニル基、（４）チエニル基、（５）フリー
ル基、（６）ピリジル基、（７）キノリル基または
（８）イソキノリル基であって、これらの基はハロゲ
ン原子、炭素数１〜３のアルキル基および炭素数１
〜３のアルコキシ基から選ばれた置換基を１〜３個有し
ていてもよく、ｎは５または６を示す。）で表されるヒ
ドロキサム酸誘導体、 （２）一般式（Ｉ）中、ｎが５である上記（１）記載の
ヒドロキサム酸誘導体、 （３）一般式 （式中、ｎは前記と同意義であり、R⁴は水素原子、メチ
ル基、メトキシ基、塩素原子またはフッ素原子を示
す。）で表される上記（１）記載のヒドロキサム酸誘導
体、および （４）R⁴が水素原子である上記（３）記載のヒドロキサ
ム酸誘導体 である。[Means for Solving the Problems] The present invention provides: (Wherein R ³ represents (1) a phenyl group, (2) a naphthyl group,
(3) indanyl group, (4) thienyl group, (5) freel group, (6) pyridyl group, (7) quinolyl group or (8) isoquinolyl group, wherein these groups are a halogen atom, a carbon number of 1 to 1. 3 alkyl groups and 1 carbon atom
It may have from 1 to 3 substituents selected from alkoxy groups of from 1 to 3, and n represents 5 or 6. (2) a hydroxamic acid derivative according to the above (1), wherein in the general formula (I), n is 5; (In the formula, n is as defined above, and R ⁴ represents a hydrogen atom, a methyl group, a methoxy group, a chlorine atom or a fluorine atom.) The hydroxamic acid derivative according to the above (1), and 4) The hydroxamic acid derivative according to the above (3), wherein R ⁴ is a hydrogen atom.

前記一般式（Ｉ）中、R³としてはたとえば（１）フェ
ニル基、（２）ナフチル基、（３）インダニル基、
（４）チエニル基、（５）フリール基、（６）ピリジル
基、（７）キノリル基または（８）イソキノリル基など
（なかでもフェニル基またはチエニル基などが好まし
い）があげられ、これらの基はハロゲン原子、炭素
数１〜３のアルキル基および炭素数１〜３のアルコキ
シ基から選ばれた置換基を１〜３個有していてもよい。In the general formula (I), R ³ is, for example, (1) a phenyl group, (2) a naphthyl group, (3) an indanyl group,
(4) thienyl group, (5) freel group, (6) pyridyl group, (7) quinolyl group or (8) isoquinolyl group and the like (phenyl group or thienyl group is preferable). It may have 1 to 3 substituents selected from a halogen atom, an alkyl group having 1 to 3 carbon atoms and an alkoxy group having 1 to 3 carbon atoms.

一般式（Ｉ）で表わされる化合物は 一般式 （式中、各記号は前記と同意義である）と表わされる化
合物にカルボン酸活性化剤を反応させてカルボキシル基
における反応性誘導体に導びきついでこれにヒドロキシ
ルアミンを反応させることによって製造することができ
る。The compound represented by the general formula (I) (Wherein each symbol is as defined above) by reacting a compound represented by the formula (1) with a carboxylic acid activator, leading to a reactive derivative at the carboxyl group, and then reacting it with hydroxylamine. Can be.

化合物（II）とカルボン酸活性化剤の反応において、
カルボン酸活性化剤としてはたとえばチオニルクロライ
ド，五塩化リン，クロル炭酸エステル（クロル炭酸メチ
ル，クロル炭酸エチル），オキザリルクロライド，カル
ボジイミド類（例、N,N−ジシクロヘキシルカルボジイ
ミド（DCC））などがあげられるが、カルボジイミド類
とパラニトロフェノールまたはヒドロキシコハク酸イミ
ドを併用してもよい。この反応は通常たとえば塩化メチ
レン，クロロホルムなどのハロゲン化炭化水素類，テト
ラヒドロフラン（THF），ジオキサン，ジメチルエーテ
ル，ジエチルエーテル，イソプロピルエーテルなどのエ
ーテル類,N,N−ジメチルホルムアミドまたはこれらの混
合溶媒などの存在下におこなわれる。反応温度は通常−
10℃〜50℃である。In the reaction between the compound (II) and the carboxylic acid activator,
Examples of the carboxylic acid activator include thionyl chloride, phosphorus pentachloride, chlorocarbonate (methyl chlorocarbonate, ethyl chlorocarbonate), oxalyl chloride, carbodiimides (eg, N, N-dicyclohexylcarbodiimide (DCC)) and the like. However, carbodiimides may be used in combination with paranitrophenol or hydroxysuccinimide. This reaction is usually carried out in the presence of, for example, halogenated hydrocarbons such as methylene chloride and chloroform, ethers such as tetrahydrofuran (THF), dioxane, dimethyl ether, diethyl ether and isopropyl ether, N, N-dimethylformamide or a mixed solvent thereof. It is done below. The reaction temperature is usually
10 ° C to 50 ° C.

この反応において、カルボン酸活性化剤として塩化チ
オニル，オキザリルクロライドまたは五塩化リンを用い
た場合は反応性誘導体として酸ハライドが得られ、カル
ボン酸活性化剤としてクロル炭酸エステルを用いた場合
には反応性誘導体として混合酸無水物が得られ、またカ
ルボン酸活性化剤としてカルボジイミド類を用いた場合
には反応性誘導体として活性エステルが得られる。In this reaction, when thionyl chloride, oxalyl chloride or phosphorus pentachloride is used as a carboxylic acid activator, an acid halide is obtained as a reactive derivative, and when chlorocarbonate is used as a carboxylic acid activator, A mixed acid anhydride is obtained as a reactive derivative, and an active ester is obtained as a reactive derivative when carbodiimides are used as a carboxylic acid activator.

化合物（II）のカルボキシル基における反応性誘導体
とヒドロキシルアミンとの反応は、該反応性誘導体が酸
ハライドである場合はたとえばジクロルメタン，テトラ
ヒドロフラン，アセトンなどの溶媒中、脱酸剤（ピリジ
ン，トリエチルアミン，炭酸カリウム，炭酸ナトリウ
ム，炭酸水素カリウム，炭酸水素ナトリウムなど）の存
在下に無水または含水条件下に行なわれる。反応温度は
−10℃〜30℃程度である。該反応性誘導体が活性エステ
ルまたは混合酸無水物である場合は化合物（II）とカル
ボン酸活性化剤との反応で用いた溶媒と同様な溶媒中で
行なうことができる。この場合の反応温度は通常０〜30
℃で反応時間は１〜５時間である。When the reactive derivative at the carboxyl group of the compound (II) is reacted with hydroxylamine, the reactive derivative is an acid halide in a solvent such as dichloromethane, tetrahydrofuran or acetone. Potassium, sodium carbonate, potassium bicarbonate, sodium bicarbonate, etc.) under anhydrous or hydrous conditions. The reaction temperature is about -10C to 30C. When the reactive derivative is an active ester or a mixed acid anhydride, the reaction can be carried out in the same solvent as used in the reaction of compound (II) with the carboxylic acid activator. The reaction temperature in this case is usually 0 to 30.
The reaction time at 1 ° C. is 1 to 5 hours.

かくして製造されるヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、
自体公知の分離，精製手段（例、クロマトグラフィー，
結晶化法）などにより単離採取することができる。The hydroxamic acid derivative (I) thus produced is
Separation and purification means known per se (eg, chromatography,
Crystallization method) and the like.

ヒドロキサム酸誘導体（Ｉ）は、構造上キノン核側鎖
アルファ（α）炭素において不斉中心をもつため光学活
性を有する化合物が存在する。従って本発明化合物
（Ｉ）は光学活性化合物およびラセミ化合物のいずれも
含むことを意味する。The hydroxamic acid derivative (I) has an optically active compound because it has an asymmetric center at the alpha (α) carbon of the quinone nucleus side chain in its structure. Therefore, the compound (I) of the present invention is meant to include both optically active compounds and racemic compounds.

本発明の化合物は各種細胞（内皮細胞，リンパ球，ガ
ン細胞など）の増殖抑制作用を有し、そのため、血管新
生抑制作用，免疫抑制作用，ガン細胞増殖抑制作用を有
する。しかも毒性，副作用は極めて低い。したがって本
発明の化合物（Ｉ）は哺乳動物（マウス，ラット，ウサ
ギ，サル，馬，人など）に対して糖尿病性網膜症，乾せ
ん，リウマチ，慢性炎症，自己免疫疾患，癌などの諸疾
患の治療および予防剤として有用である。また臓器移植
時における拒否反応の抑制剤としても有用である。The compound of the present invention has an inhibitory action on the proliferation of various cells (endothelial cells, lymphocytes, cancer cells, etc.), and therefore has an angiogenesis inhibitory action, an immunosuppressive action, and a cancer cell growth inhibitory action. Moreover, toxicity and side effects are extremely low. Therefore, the compound (I) of the present invention is useful in mammals (mouse, rat, rabbit, monkey, horse, human, etc.) for various diseases such as diabetic retinopathy, psoriasis, rheumatism, chronic inflammation, autoimmune disease, and cancer. Useful as therapeutic and prophylactic agents. It is also useful as an inhibitor of rejection during organ transplantation.

さらに、本発明化合物（Ｉ）は、多価不飽和脂肪酸
（リノール酸，γ−リノレン酸，α−リノレン酸，アラ
キドン酸，ジホモ−γ−リノレン酸，エイコサペンタエ
ン酸）の代謝改善、特に過酸化脂肪酸の生成抑制作用
（抗酸化作用）あるいは５−リポキシゲナーゼ系代謝産
物（例、ロイコトリエン類,5−ヒドロキシエイコサテト
ラエン酸,5−パーオキシエイコサテトラエン酸，リポキ
シン類など）の生成抑制作用も有しており、哺乳動物に
対して気管支喘息，炎症，即時性アレルギー，動脈硬
化，アテローム変性動脈硬化，脂肪肝，肝炎，肝硬変，
過敏症肺臓炎などの諸疾患に対して治療および予防効果
が期待され、たとえば抗喘息剤，抗アレルギー剤，脳循
環器系改善剤，冠状動脈硬化予防剤，免疫調整剤，プロ
スタグランジン−トロンボキサン代謝改善剤，脂肪肝，
肝炎，肝硬変，過敏症肺臓炎治療剤などの医薬として有
用である。Furthermore, the compound (I) of the present invention can improve the metabolism of polyunsaturated fatty acids (linoleic acid, γ-linolenic acid, α-linolenic acid, arachidonic acid, dihomo-γ-linolenic acid, eicosapentaenoic acid), particularly, peroxidation. Inhibition of fatty acid production (antioxidant activity) or production of 5-lipoxygenase metabolites (eg, leukotrienes, 5-hydroxyeicosatetraenoic acid, 5-peroxyeicosatetraenoic acid, lipoxins) In mammals, bronchial asthma, inflammation, immediate allergy, atherosclerosis, atherosclerotic atherosclerosis, fatty liver, hepatitis, cirrhosis,
It is expected to have therapeutic and prophylactic effects on various diseases such as hypersensitivity pneumonitis, for example, anti-asthmatic agents, anti-allergic agents, cerebral circulatory system improving agents, coronary atherosclerosis preventive agents, immunomodulators, prostaglandin-thrombotic agents. Xan metabolism improver, fatty liver,
It is useful as a medicament such as a therapeutic agent for hepatitis, cirrhosis, and hypersensitivity pneumonitis.

本発明化合物は毒性が低く、そのままもしくは自体公
知の薬学的に許容される担体，賦形剤などと混合した医
薬組成物［例、錠剤，カプセル剤（ソフトカプセル，マ
イクロカプセルを含む），液剤，注射剤，坐剤］として
経口的もしくは非経口的に安全に投与することができ
る。投与量は投与対象，投与ルート，症状などによって
も異なるが、たとえば、成人には１日当り通常約0.1mg/
kg〜40mg/kg体重程度，好ましくは0.2mg/kg〜20mg/kg体
重程度である。The compound of the present invention has low toxicity, and it is a pharmaceutical composition as it is or mixed with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient known per se [eg, tablets, capsules (including soft capsules and microcapsules), liquids, injections] Or suppository] can be safely administered orally or parenterally. The dosage varies depending on the administration subject, administration route, symptoms, etc. For example, for adults, about 0.1 mg / day is usually used.
It is about kg to 40 mg / kg body weight, preferably about 0.2 mg / kg to 20 mg / kg body weight.

化合物（II）はたとえば特開昭61−44840に記載の方
法によって製造することができる。Compound (II) can be produced, for example, by the method described in JP-A-61-44840.

［発明の効果］ 本発明に係る新規ヒドロキサム酸誘導体は細胞増殖抑
制作用を有し、血管の新生を阻止し、癌細胞の増殖を抑
制し、免疫を抑制するため、制癌剤として用いられるほ
か、臓器移植時における拒否反応を抑制するために用い
ることができる。[Effects of the Invention] The novel hydroxamic acid derivative according to the present invention has a cell growth inhibitory effect, and is used as an anticancer agent in order to inhibit the formation of blood vessels, suppress the growth of cancer cells, and suppress immunity. It can be used to suppress rejection during transplantation.

［実施例］ 実施例１ ７−（４−メトキシフェニル）−７−（3,5,6−トリ
メチル−1,4−ベンゾキノン−２−イル）−ヘプタン酸
（1.3g,3.3mmol）をジクロルメタン（20ml）に溶かし、
オキザリルクロライド（1ml）を室温にて加えた。反応
液を50℃で１時間攪拌した後、減圧下に溶媒を留去し
た。得られた残留物をTHF（5ml）に溶かし、ヒドロキシ
ルアミン塩酸塩（1g,14mmol）のTHF（10ml）と飽和重曹
水（10ml）の混合液に室温下で滴下した。室温にて１時
間攪拌後反応液に酢酸エチル（20ml）を加えた。有機層
を水洗、乾燥後、減圧濃縮して７−（４−メトキシフェ
ニル）−７−（3,5,6−トリメチル−1,4−ベンゾキノン
−２−イル）−ヘプタノヒドロキサム酸（0.6g,42％）
を得た。物性は第１表に化合物No.4として記載した。同
様にして第１表中の化合物No.6,7,8,9,10,11,12,13,14,
15,16および17を製造した。[Example] Example 1 7- (4-methoxyphenyl) -7- (3,5,6-trimethyl-1,4-benzoquinone-2-yl) -heptanoic acid (1.3 g, 3.3 mmol) was added to dichloromethane ( 20ml)
Oxalyl chloride (1 ml) was added at room temperature. After stirring the reaction solution at 50 ° C. for 1 hour, the solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained residue was dissolved in THF (5 ml), and added dropwise to a mixture of hydroxylamine hydrochloride (1 g, 14 mmol) in THF (10 ml) and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (10 ml) at room temperature. After stirring at room temperature for 1 hour, ethyl acetate (20 ml) was added to the reaction solution. The organic layer was washed with water, dried, and concentrated under reduced pressure to give 7- (4-methoxyphenyl) -7- (3,5,6-trimethyl-1,4-benzoquinone-2-yl) -heptanohydroxamic acid (0.6 g). , 42%)
I got The physical properties are shown in Table 1 as compound No. 4. Similarly, Compound Nos. 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 14 in Table 1
15, 16 and 17 were manufactured.

実施例２ ７−（４−フルオロフェニル）−７−（3,5,6−トリ
メチル−1,4−ベンゾキノン−２−イル）−ヘプタン酸
（0.8g,2.2mmol）をジクロルメタン（20ml）に溶かし、
オキザリルクロライド（0.5ml）を室温にて加えた。反
応液を50℃で１時間攪拌した後、減圧下に溶媒を留去し
た。得られた残留物をTHF（5ml）に溶かし、ヒドロキシ
ルアミン塩酸塩（0.5g,7mmol）のTHF（10ml）と飽和重
曹水（10ml）の混合液に室温下で滴下した。室温にて１
時間攪拌後反応液に酢酸エチル（20ml）を加えた。有機
層を水洗、乾燥後、減圧濃縮し、残留物をイソプロピル
エーテルから再結晶して７−（４−フルオロフェニル）
−７−（3,5,6−トリメチル−1,4−ベンゾキノン−２−
イル）−ヘプタノヒドロキサム酸（0.7g,85％）を得
た。物性は第１表に化合物No.2として記載した。同様に
して第１表中の化合物No.1,3および５を製造した。Example 2 7- (4-Fluorophenyl) -7- (3,5,6-trimethyl-1,4-benzoquinone-2-yl) -heptanoic acid (0.8 g, 2.2 mmol) was dissolved in dichloromethane (20 ml). ,
Oxalyl chloride (0.5 ml) was added at room temperature. After stirring the reaction solution at 50 ° C. for 1 hour, the solvent was distilled off under reduced pressure. The obtained residue was dissolved in THF (5 ml), and added dropwise to a mixture of hydroxylamine hydrochloride (0.5 g, 7 mmol) in THF (10 ml) and saturated aqueous sodium hydrogen carbonate (10 ml) at room temperature. 1 at room temperature
After stirring for an hour, ethyl acetate (20 ml) was added to the reaction solution. The organic layer was washed with water, dried, concentrated under reduced pressure, and the residue was recrystallized from isopropyl ether to give 7- (4-fluorophenyl).
-7- (3,5,6-trimethyl-1,4-benzoquinone-2-
Yl) -Heptanohydroxamic acid (0.7 g, 85%) was obtained. The physical properties are shown in Table 1 as compound No. 2. Compounds Nos. 1, 3 and 5 in Table 1 were produced in the same manner.

実施例３ 製剤剤 Ａ） カプセル （１）化合物No.1 50mg （２）微粉末セルロース 30mg （３）ラクトース 37mg （４）ステアリン酸マグネシウム 3mg 計 120mg （１），（２），（３）および（４）を混合してゼラ
チンカプセルに充填した。 Example 3 Formulation A) Capsule (1) Compound No. 1 50 mg (2) Fine powdered cellulose 30 mg (3) Lactose 37 mg (4) Magnesium stearate 3 mg Total 120 mg (1), (2), (3) and (3) 4) was mixed and filled into a gelatin capsule.

Ｂ） 軟カプセル （１）化合物No.7 50mg （２）トウモロコシ油 100mg 計 150mg Ｃ） 錠剤 （１）化合物No.2 50mg （２）ラクトース 34mg （３）トウモロコシ澱粉 10.6mg （４）トウモロコシ澱粉（のり状） 5mg （５）ステアリン酸マグネシウム 0.4mg （６）カルボキシメチルセルロースカルシウム20mg 計 120mg 常法に従ってこれらを混合して錠剤機により打錠し
た。B) Soft capsules (1) Compound No. 7 50 mg (2) Corn oil 100 mg Total 150 mg C) Tablets (1) Compound No. 2 50 mg (2) Lactose 34 mg (3) Corn starch 10.6 mg (4) Corn starch (paste) State) 5 mg (5) Magnesium stearate 0.4 mg (6) Carboxymethylcellulose calcium 20 mg Total 120 mg These were mixed according to a conventional method and tableted with a tablet machine.

実験例１ 〔モルモット外形核白血球由来の５−リポキ
シゲネースに対する阻害作用（10^-5M）〕 ５−リポキシゲネースは、モルモット腹腔白血球より
得た酵素標品を用いた。リポキシゲネース活性測定には
25μＭ［１−¹⁴C］アラキドン酸（５×10⁴cpm）を基質
として、50mMリン酸緩衝液（pH7.4）,2mMCaCl₂,2mM ATP
および酵素を含む反応液（20μ）を用いた。25℃で,2
分間プレインキュベートした後、［１−¹⁴C］アラキド
ン酸（５×10⁴cpm）を添加し、25℃で３分間反応後、そ
の反応液を酸性にし、アラキドン酸および代謝産物をエ
ーテルで抽出した。エーテル酸の放射活性はシリカゲル
薄層クロマトグラフィーで石油エーテル：エチルエーテ
ル：酢酸（15:85:0.1）の展開溶媒を用い、−10℃で展
開した。展開後、薄層プレートのオートラジオグラフィ
ーをとった後、薄層プレートから放射活性部位のシリカ
ゲルをかき取り、生成物の放射活性を計数した。薬物は
反応開始２分前に添加した。Experimental Example 1 [Inhibitory effect on 5-lipoxygenase derived from guinea pig outer nuclear leukocytes (10 ⁻⁵ M)] As 5-lipoxygenase, an enzyme preparation obtained from guinea pig peritoneal leukocytes was used. For measuring lipoxygenase activity
25μM [1- ¹⁴ C] arachidonic acid (5 × 10 ⁴ cpm) as substrate, 50 mM phosphate buffer _{(pH7.4), 2mMCaCl 2, 2mM} ATP
And a reaction solution (20 μ) containing the enzyme. At 25 ° C, 2
After minutes preincubated added [1- ¹⁴ C] arachidonic acid (5 × 10 ⁴ cpm), after 3 minutes reaction at 25 ° C., and the reaction mixture acidified, and extracted with arachidonic acid and metabolites in ether . The radioactivity of the ether acid was developed by silica gel thin layer chromatography using a developing solvent of petroleum ether: ethyl ether: acetic acid (15: 85: 0.1) at -10 ° C. After the development, the thin plate was subjected to autoradiography, the silica gel at the radioactive site was scraped off from the thin plate, and the radioactivity of the product was counted. The drug was added 2 minutes before the start of the reaction.

実験例２ 〔血小板膜画分とＵ−46619（PGH₂/TXA₂）の
結合阻害反応〕 モルモットの採血および血小板膜画分の調製はエス・
シー・ハング（S.C.Hung）らの方法［Biochim.Biophys
Acta,728,171−178（1983）］に準じて行なった。ハー
トレー（Hartle）系モルモットをエーテル麻酔下、心臓
から採血し、3.15％クエン酸ナトリウム液（最終濃度1m
Mアスピリン含有）に懸濁した（クエン酸ナトリウム
液：全血＝1:9）。クエン酸ナトリウム加血液を3000rp
m,5−６秒間遠心し、platelet rich plasma（PRP）を
分離した。PRPをさらに4800rpm,10分間４℃で遠心し、
血小板ペレットを得た。血小板ペレットは30mlの25mM T
ris−HCl緩衝液（5mM MgCl₂含有,pH7.4）で洗浄し、同
じ緩衝液で懸濁し、血小板はsonicatorを用いて、破壊
した後、10000rpmで1hr遠心し、膜画分を緩衝液で懸濁
した。蛋白定量はBiorad protein assayキットを用いて
行ない、１−1.5mg/ml蛋白に調製した。 Experimental Example 2 [Binding inhibition reaction between platelet membrane fraction and U-46619 (PGH ₂ / TXA ₂ )] Blood collection of guinea pigs and preparation of platelet membrane fraction
SCHung et al. [Biochim. Biophys
Acta, 728 , 171-178 (1983)]. Blood was collected from the heart of a Hartle guinea pig under ether anesthesia, and a 3.15% sodium citrate solution (final concentration 1m)
M aspirin) (sodium citrate solution: whole blood = 1: 9). 3000 rp blood with sodium citrate
After centrifugation at m, 5-6 seconds, platelet rich plasma (PRP) was separated. PRP is further centrifuged at 4800 rpm for 10 minutes at 4 ° C.
A platelet pellet was obtained. Platelet pellet is 30 ml of 25 mM T
The plate was washed with a ris-HCl buffer (containing 5 mM MgCl ₂ , pH 7.4), suspended in the same buffer, and the platelets were disrupted using a sonicator, centrifuged at 10,000 rpm for 1 hour, and the membrane fraction was buffered with the buffer. Suspended. Protein quantification was performed using a Biorad protein assay kit, and adjusted to 1-1.5 mg / ml protein.

Binding assayは次の方法で行なった。［³H］Ｕ−466
19 4nM,薬液10^-9−10^-5Mおよび血小板膜画分100μｇ蛋
白からなる反応液を25℃（室温）で30分インキュベート
した。反応液はグラスフィルター（GF/C）でろ過し、上
記緩衝液で２回洗浄し、グラスフィルターを液体シンチ
レーター（アニオン系）4mlに入れ、放射能活性を測定
した。The binding assay was performed by the following method. ^[3 H] U-466
A reaction solution consisting of 194 nM, 10 ^-9 -10 ^-5 M of the drug solution, and 100 μg of the platelet membrane fraction protein was incubated at 25 ° C. (room temperature) for 30 minutes. The reaction solution was filtered with a glass filter (GF / C), washed twice with the above buffer solution, and the glass filter was placed in 4 ml of a liquid scintillator (anion type), and the radioactivity was measured.

化合物番号 IC₅₀（Ｍ） ４ 6.0 ７ 2.6 実験例３ 〔ヒト臍帯静脈血管内皮細胞の細胞増殖阻害
の検定〕 ヒト血管内皮細胞はヒト臍帯静脈より、トリプシン酵
素溶液による潅流法により得られ、GIT培地（大五栄養
化学）に、2.5％ウシ胎児血清および2.0ng/mlのヒト組
み替え線維芽細胞増殖因子（以下、rFGFと略す。当社生
物工学研究所において作製）を添加した培養液にて継代
維持されたものを使用した。 Compound No. IC ₅₀ (M) 4 6.0 7 2.6 Experimental Example 3 [Assay for Inhibition of Cell Proliferation of Human Umbilical Vein Vascular Endothelial Cells] Human vascular endothelial cells were obtained from human umbilical vein by a perfusion method using a trypsin enzyme solution. (Daigo Nutrition Chemistry) to 2.5% fetal bovine serum and 2.0 ng / ml human recombinant fibroblast growth factor (hereinafter abbreviated as rFGF; produced by our Biotechnology Research Institute). The one that was maintained was used.

２×10³個のヒト血管内皮細胞の懸濁液、100μを、
96穴培養皿（Nunc,1−67008）に播種し、ガス制御恒温
槽で培養する。翌日、終濃度2ng/mlになるようなrFGF
と、種々の濃度の検体を含む培地、100μを加えた。
検体はジメチルスルホキシド（以下、DMSO）溶液に溶解
し、DMSO終濃度が0.25％以下になるように培養液にて希
釈した。３日間培養の後、検体を含む培養液を吸引除去
し、1mg/mlのMTT溶液（３−（4,5−ジメチル−２−チア
ゾリル）−2,5−ジフェニル−2H−テトラゾリウムブロ
マイドを培養液に溶解）を100μ加え、４時間保温し
た。その後、100μの10％SDS溶液（ソジウムドデシル
スルフェート水溶液）を加えて５−６時間保温して、細
胞およびMTT色素を可溶化し、分光光度計にてOD₅₉₀値を
測定した。検体を加えない対照群のOD値を100％とし、5
0％のOD値を与える化合物濃度、IC₅₀値により各検体
の、内皮細胞増殖阻害活性を比較検討した。100 μl of a suspension of 2 × 10 ³ human vascular endothelial cells
Inoculate into a 96-well culture dish (Nunc, 1-67008) and culture in a gas controlled thermostat. The next day, rFGF to a final concentration of 2ng / ml
And 100 μl of a medium containing various concentrations of specimens.
The sample was dissolved in a dimethyl sulfoxide (hereinafter, DMSO) solution, and diluted with a culture solution such that the final DMSO concentration was 0.25% or less. After culturing for 3 days, the culture medium containing the specimen was removed by suction, and the 1 mg / ml MTT solution (3- (4,5-dimethyl-2-thiazolyl) -2,5-diphenyl-2H-tetrazolium bromide was added to the culture medium. Was added to the mixture, and the mixture was kept warm for 4 hours. Thereafter, 100 μl of a 10% SDS solution (aqueous sodium dodecyl sulfate solution) was added and the mixture was kept warm for 5 to 6 hours to solubilize the cells and the MTT dye, and the OD ₅₉₀ value was measured with a spectrophotometer. The OD value of the control group to which no sample was added was 100%, and
The endothelial cell growth inhibitory activity of each specimen was compared and examined based on the compound concentration giving an OD value of 0% and the IC ₅₀ value.

化合物番号 IC₅₀（μg/ml） １ 0.63 ２ 1.25 ３ 1.25 ４ 0.63 ５ 1.25 ６ 25 ７ ＜0.63 ８ ＜0.63 ９ 1.25 実験例４ 〔IL−２依存性細胞（NKC−３）の細胞増殖
阻害の検定〕 96穴平底マイクロプレートの各穴にNKC−３細胞（４
×10⁵個／穴）を50μ、IL−２溶液（0.067U/ml）を20
μ、更に検体（DMSO溶液）を40μ入れ、37℃で20時
間培養した（培養液:RPMI1640−20％ECS）。各穴にMTT
溶液20μを加え、37℃で４時間保温した。続いて各穴
に10％SDS溶液100μを加え、37℃で一晩放置して、細
胞およびMTT色素を可溶化し、分光光度計にて590nmの吸
光度を測定した。検体を加えない場合の吸光度を100と
して、50％吸光度を与える化合物濃度をIC₅₀値とした。 Compound number IC ₅₀ (μg / ml) 1 0.63 2 1.25 3 1.25 4 0.63 5 1.25 6 257 7 <0.63 8 <0.639 9 1.25 Experimental example 4 [Assay for inhibition of cell growth of IL-2-dependent cells (NKC-3)] ] NKC-3 cells (4
× 10 ⁵ / well) 50μ, IL-2 solution (0.067U / ml)
μ, and further, 40 μl of a sample (DMSO solution) were added and cultured at 37 ° C. for 20 hours (culture solution: RPMI1640-20% ECS). MTT for each hole
20 µ of the solution was added, and the mixture was kept at 37 ° C for 4 hours. Subsequently, 100 μl of a 10% SDS solution was added to each well, and the mixture was allowed to stand overnight at 37 ° C. to solubilize the cells and the MTT dye, and the absorbance at 590 nm was measured with a spectrophotometer. The absorbance when no sample was added was taken as 100, and the concentration of the compound giving 50% absorbance was taken as the IC ₅₀ value.

化合物番号 IC₅₀（Ｍ） １ 4.1×10^-5 実験例５ 〔ニワトリ胚漿尿膜法による血管新生抑制活
性アッセイ法〕 培養ニワトリ胚漿尿膜を使用する血管新生抑制活性の
アッセイ法は、テイラーらの方法の変法を用いて評価し
た〔テイラーほか、S.Taylor ＆ J.Folkman,Nature,29
7,307（1982）〕。３日齢の有精卵の殻を除去して培養
し、10（または11）日齢に達した胚を使用した。血管新
生物質であるECGS（endothelial cell growth suppleme
nt、コラボレイチブ リサーチ社）とともに検体（100
μｇ）の水溶液または水懸濁液を透明プラスチック製デ
ィスク上で乾固し、漿尿膜上に付置し、２（または３）
日後に実体顕微鏡下に血管新生の有無をコントロールと
比較して判定した。 Compound No. IC ₅₀ (M) 1 4.1 × 10 ^-5 Experimental Example 5 [Assay of angiogenesis inhibitory activity by chicken embryo chorioallantoic membrane method] The assay method of angiogenesis inhibitory activity using cultured chicken embryo chorioallantoic membrane was described by Taylor. Evaluation was performed using a modification of these methods [Taylor et al., S. Taylor & J. Folkman, Nature, 29
7 , 307 (1982)]. Embryos of 3 days old fertilized eggs were removed and cultured, and embryos that reached 10 (or 11) days of age were used. ECGS (endothelial cell growth suppleme), an angiogenic substance
nt, Collaboration Research, Inc.)
μg) of the aqueous solution or suspension is dried on a transparent plastic disk, placed on the chorioallantoic membrane, and 2 (or 3).
One day later, the presence or absence of angiogenesis was determined by comparison with a control under a stereoscopic microscope.

化合物番号 有 効 性 ４ ＋ ５ ＋ ７ ＋ ８ ＋ 実験例６ 各群５匹ずつの雄性ICRマウス（８週齢）を使用し
た。３日間検体（化合物番号１） 100mg/kg/dayを皮下投与した。投与液は0.5％アラビア
ゴムを含む生理食塩水に溶解し100mg/10ml/kg体重で投
与した。 Compound No. Effectiveness 4 + 5 + 7 + 8 + Experimental Example 6 Five male ICR mice (8 weeks old) were used in each group. A sample (compound No. 1) 100 mg / kg / day was subcutaneously administered for 3 days. The administration solution was dissolved in a physiological saline solution containing 0.5% gum arabic and administered at 100 mg / 10 ml / kg body weight.

［結果］ 薬物投与開始後４日間の観察機関中、死亡例はなく、
体重減少等の異状は観察されなかった。[Results] There were no deaths during the 4 days after the start of drug administration.
No abnormalities such as weight loss were observed.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ Ｃ０７Ｄ 307/54 Ｃ０７Ｄ 307/54 333/24 333/24 // Ａ６１Ｋ 31/34 ＡＢＡ Ａ６１Ｋ 31/34 ＡＢＡ 31/44 ＡＤＵ 31/44 ＡＤＵ ────────────────────────────────────────────────── ─── Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code FI C07D 307/54 C07D 307/54 333/24 333/24 // A61K 31/34 ABA A61K 31/34 ABA 31/44 ADU 31 / 44 ADU

Claims (4)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】一般式 （式中、R³は（１）フェニル基、（２）ナフチル基、
（３）インダニル基、（４）チエニル基、（５）フリー
ル基、（６）ピリジル基、（７）キノリル基または
（８）イソキノリル基であって、これらの基はハロゲ
ン原子、炭素数１〜３のアルキル基および炭素数１
〜３のアルコキシ基から選ばれた置換基を１〜３個有し
ていてもよく、ｎは５または６を示す。）で表わされる
ヒドロキサム酸誘導体。(1) General formula (Wherein R ³ represents (1) a phenyl group, (2) a naphthyl group,
(3) indanyl group, (4) thienyl group, (5) freel group, (6) pyridyl group, (7) quinolyl group or (8) isoquinolyl group, wherein these groups are a halogen atom, a carbon number of 1 to 1. 3 alkyl groups and 1 carbon atom
It may have from 1 to 3 substituents selected from alkoxy groups of from 1 to 3, and n represents 5 or 6. A hydroxamic acid derivative represented by the formula: 【請求項２】一般式（Ｉ）中、ｎが５である請求項１記
載のヒドロキサム酸誘導体。2. The hydroxamic acid derivative according to claim 1, wherein n is 5 in the general formula (I). 【請求項３】一般式 （式中、ｎは前記と同意義であり、R⁴は水素原子、メチ
ル基、メトキシ基、塩素原子またはフッ素原子を示
す。）で表わされる請求項１記載のヒドロキサム酸誘導
体。3. The general formula 2. The hydroxamic acid derivative according to claim 1, wherein n is as defined above, and R ⁴ is a hydrogen atom, a methyl group, a methoxy group, a chlorine atom or a fluorine atom. 【請求項４】R⁴が水素原子である請求項３記載のヒドロ
キサム酸誘導体。4. The hydroxamic acid derivative according to claim 3, wherein R ⁴ is a hydrogen atom.