【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は新規な抗炎症剤、更に詳しくは乳由来のシア
ル酸結合オリゴ糖と乳由来のシアル酸結合タン白とを有
効成分とする抗炎症剤に関する。
〔従来の技術〕
従来から抗炎症剤として広汎に使用されているステロ
イド、非ステロイド系抗炎症剤は、経口適用するとその
多くが副作用として胃腸障害、腎臓障害等をおこすこ
と、及び外用適用では連続使用による皮膚の非薄化、皮
膚萎縮、感作、光感作、アレルギー等の副作用が知られ
ている。
その対策としてこれまで製剤方法や投与方法の変更及
び化合物の構造修飾等が試みられてきたが、満足する結
果は得られていない。
〔本発明が解決しようとする問題点〕
本発明者等は、上記事情に鑑み、安全性が高く、長期
連用に耐える抗炎症効果に優れた薬剤を得るべく鋭意研
究を重ねた結果、本発明に係る乳由来のシアル酸並びに
シアル酸誘導体が、安全性が高く、且つ長期連用でも副
作用の生じない優れた抗炎症効果を有するという事実を
見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至っ
た。
〔問題点を解決するための手段〕
即ち、本発明は、乳由来のシアル酸誘導体のシアル酸
結合オリゴ糖とシアル酸結合タン白とを併用し、これを
有効成分として含有してなる抗炎症剤である。
シアル酸は公知物質であり、ポリヒドロキシモノアミ
ノカルボン酸（ノイラミン酸）のＮ−アシル及びＮ−ア
シル、Ｏ−アシル誘導体の総称で、シアリン酸とも云わ
れる。
シアル酸は、各種の生物に含まれ、通常細胞表層糖質
を構成して糖タン白質や糖脂質の末端にグリコシド結合
して存在する。特に脳、神経、血液、顎下腺、ムチン
質、初乳に多くは存在するが遊離して血清や体液、尿中
にも存在する。生物界にいちばん多く見出される代表的
なシアル酸はＮ−アセチルノイラミン酸（NANA:分子量3
09）で、融点185〜187℃、▲〔α〕20 D▼−32゜±２゜
の白色粉末である。
シアル酸並びにシアル酸誘導体の生物学的薬理作用は
細胞表面の陰性荷電への寄与、細胞の特異的認識機構へ
の関与、ウイルスによる赤血球凝集反応や血液タン白質
のホーミング現象等に関することが知られている。最近
では、シアル酸について去痰活性（特開昭61−6841
8）、抗炎症効果（特開昭62−145015）並びにシアル酸
結合オリゴ糖の栄養効果（特開昭61−152233）等の報告
がなされている。
また、ウシプラセンサに由来するシアル酸の抗炎症作
用及び皮膚に対する有用性については知られてはいるが
（特開昭62−145015号公報）、本発明者らの実験による
とその作用は、インドメタシンの抗炎症作用にくらべて
弱く、またグリチルリチン酸の皮膚に対する作用と同程
度の効果しか得られるものではなかった。本発明者ら
は、さらに乳由来のシアル酸及びその誘導体の抗炎症作
用、特に皮膚に対する抗炎症作用を検討したところ乳由
来シアル酸及びシアル酸誘導体は、プラセンタエキス由
来のシアル酸より抗炎症効果がいちじるしく優れている
ことを見出した。具体的には、乳由来シアル酸及びシア
ル酸誘導体が皮膚に対して消炎効果（ニキビ、フケ、か
みそり負け、日やけ後のほてり等の抑制、創傷治療等）
を有すること及び特定のシアル酸及びシアル酸誘導体の
２種以上を含有することによって相乗的な抗炎症効果が
得られることを見出した。特に、この効果は、シアル酸
結合オリゴ糖とシアル酸結合タン白とを併用することに
よっていちじるしく高まった。このような効果はまだ知
られていない。
シアル酸並びにシアル酸誘導体の製造法は、合成法、
天然抽出法（原料；卵白、顎下腺ムチン、胎盤エキス、
大腸菌から得られるコロミン酸等）等が挙げられるが、
乳原料抽出法（特許第1191212号明細書、特許第1253988
号明細書、特開昭59−184197号公報等）の応用が特に好
ましい。
次に本発明あるいは参考例で使用される化合物の乳抽
出法による製造例を示めす、乳抽出法で用いる乳は、牛
乳、羊乳、母乳（人）その他、適宜選択できる。又、精
製の度合いによりシアル酸含有濃度を自由にコントロー
ルできるので用法、用途、剤型、その他目的に応じて精
製すれば良い。尚、製造法はこれにより限定されるもの
ではない。
（製造例１）シアル酸
チーズホエー10tに塩酸28kgを添加してPHを２に調製
した後、92℃で60分間加熱して加水分解を行った。得ら
れたホエーの加水分解液をスクリューデカンターを用い
て加熱により凝固したタンパク質を除去してシアル酸含
有液を得た。次いで、シアル酸含有液を電気透析装置の
脱塩槽に入れて伝導度2mS/cmまで脱塩した後、一旦透析
を中止して濃縮槽液を廃棄した。次いで濃縮槽に蒸留水
30を入れて再び伝導度50μS/cmまで透析を行った。透
析終了後、濃縮槽液を濃縮・乾燥して白色粉末600gを得
た。このようにして得られた粉末の遊離シアル酸純度は
約97％であった。
（製造例２）シアル酸塩
前述の遊離シアル酸を苛性ソーダで調整し、シアル酸
Naを得る。この他、目的に応じてMg塩、Ca塩、Ｋ塩、リ
ン酸塩、アミノ酸塩、アミン塩等自由に製造することが
できる。
（製造例３）シアル酸結合オリゴ糖
牛乳或いはチーズホエーを限外濾過して調整した濾液
を、全固形20％まで減圧濃縮した。この液25kgを電気伝
導度が20μS/cmになる迄電気透析した後、ダウエックス
１×２（2kg）を充填したカラムを通じてオリゴ糖を吸
着させた。次いで、このカラムに20kgの水を通じて中性
糖を除去した後、0.5M塩酸を通じてカラムに吸着したオ
リゴ糖を溶出させた。得られた溶出液のpHを30％苛性ソ
ーダでpH7.0に調整後、再び電気伝導度が150μS/cmにな
る迄電気透析した。得られた透析液を濃縮・乾燥して白
色粉末100gを得た。このようにして得た粉末のシアル酸
結合オリゴ糖純度は90％であった。
（製造例４）シアル酸結合タン白質
レンネットカゼインカード廃液300をフォードラタ
ンクで75℃・30分間加熱殺菌した後に、40℃まで冷却
し、濃塩酸でpHを4.6に調整した。約30分間静置し沈殿
を生成させた液をクラリファイヤーに通しpHを7.0に戻
した後、清澄液をRO膜で濃縮・脱塩した。10倍まで濃縮
した後、濃縮液に水を加えて再び10倍まで濃縮した。得
られた濃縮液を乾燥して白色粉末1.3Kgを得た。このよ
うにして得た粉末のシアル酸結合タン白質の純度は約80
％であった。
（製造例５）シアル酸結合脂質
バターミルク粉15kgにクロロホルム−メタノール混液
（1:1）を100加え室温で30分間攪拌し抽出した。次に
クロロホルム−メタノール混液を回収しイオン交換樹脂
（DEAE−Toyopearlアセテート型）１に通じてシアル
酸結合脂質を吸着させ、次いでクロロホルム−メタノー
ル混液（1:1）２で樹脂を洗浄した後、0.5M酢酸ナト
リウム−メタノール溶液４でシアル酸結合脂質を溶出
した。溶出液を濃縮したメタノールを除去した後、水５
を加えて限外濾過で脱塩とシアル酸結合脂質の濃縮を
行った。シアル酸結合脂質を含む濃縮液をエバポレータ
で乾固した後、シリカゲルカラム（4.0×50cm）に通じ
シアル酸結合脂質を吸着させ、次いでクロロホルム１
、クロロホルム−メタノール混液（4:1）１で順次
洗浄した後、クロロホルム−メタノール（2:8）の混液
２でシアル酸結合脂質を溶出した。溶出液をエバポレ
ータで蒸発乾固し白色粉末15gを得た。
このようにして得られた粉末のシアル酸結合脂質の純
度は薄層クロマトグラフィーで90％以上（レゾルシノー
ル法）であった。
次にシアル酸及びシアル酸誘導体の安全性試験を実施
したので、その結果を示めす。
急性毒性試験
製造例１〜５で製造したシアル酸、シアル酸Na、シア
ル酸結合オリゴ糖、シアル酸結合タン白、シアル酸結合
脂質各々を被験物質としてICR系雌性マウス（６週齢、
１群５匹）を用い、腹腔内投与は0.5％カルボキシメチ
ルセルロースナトリウム／生理食塩液に各被験物質２重
量％となるように懸濁させたものを22 1/2 Gの注射針を
使用して、また経口投与はオリーブ油に各被験物質５重
量％となるように懸濁させたものを経口針を使用して、
腹腔内投与（60ml/kg）、経口投与（30ml/kg）を与え
た。その結果、全部の被験物質について７日間の観察期
間中に死亡例、体重の減少および特記すべき中毒症状は
認められず、また７日目に行った剖検においても何等異
常は認められなかった。
この結果から明らかなように、シアル酸及びシアル酸
誘導体の急性毒性置（LD50）は、腹腔内投与で1200mg/k
g以上、経口投与で1500mg/kg以上であり、安全性が高い
ことが判明した。
次に前述で使用した被験物質の薬理試験を実施したの
でその結果を示めす。
（抗炎症作用試験）
薬物の抗炎症作用を測定するのに一般に用いられてい
るのはカラゲニン足蹠浮腫法であり、ヒトにおける抗炎
症作用と高い相関関係が認められることから、標準試験
法とされている。ウィンター等の方法（Proceedings of
Society for Experimental Biology ＆ Medicine、111
巻、554頁、1962）に従い、ウィスター系雄性ラット
（体重110〜130g、１群８匹）に0.5％カルボキシメチル
セルロース水溶液に懸濁させた被験物質並びにインドメ
タシンを経口投与（100mg/kg）した。１時間後に起炎物
質として１％λ−カラゲニン／生理食塩液を当該ラット
片側後肢足蹠に0.1ml皮下投与して浮腫を惹起させた。
起炎物質投与前および投与後の一定時間にそれぞれの足
蹠体積を測定し、足蹠容量の増加率（V1）を求めた。対
象群として、被験物質を含有しない0.5％カルボキシメ
チルセルロース水溶液を投与したラットに同様にλ−カ
ラゲニンを注入した際の足容量の増加率（V0）を測定
し、（V0−V1）×100/V0の計算式によりカラゲニン浮腫
抑制率（％）を算出し、被験物資の抗炎症活性とした。
この値が大きい程、抗炎症活性が高いことを示す。λ−
カラゲニン注入後５時間後の測定値を表−１に示す。
表−１から明らかなように、本発明に係る被験物質は
インドメタシンより強い浮腫抑制率を示した。この効果
は、シアル酸及びシアル酸誘導体単独の場合よりも高
く、シアル酸結合オリゴ糖及びシアル酸結合タン白を組
合せて使用することにより相乗的抗炎症作用を有するこ
と、及び胎盤エキス由来シアル酸に比較し乳由来シアル
酸は効果が高いことが判明した。
次にシアル酸並びにシアル酸誘導体を抗炎症剤として
適用するための製剤化について述べる。
本発明の抗炎症剤は、シアル酸、シアル酸誘導体の他
に製薬上、許容することのできる添加剤及び他の薬剤を
加えた混合物の形で使用できる。但し、安定性の点か
ら、シアル酸は酸、アルカリ、光に対する安全性に問題
があり、長期保存には適さないため、安定化の点からシ
アル酸誘導体として使用することが望ましい。
本発明の抗炎症剤には上記した必須成分の他に通常、
化粧品や医薬品等に用いられる他の成分、例えばアボガ
ド油、パーム油、ピーナッツ油、牛脂、コメヌカ油、ホ
ホバ油、カルナバロウ、ラノリン、流動パラフィン、オ
キシステアリン酸、パルミチン酸イソステアリル、イソ
ステアリルアルコール等の油分、グリセリン、ソルビト
ール、ポリエチレングリコール、コラーゲン、ヒアルロ
ン酸、コンドロイチン硫酸等の保湿剤、パラジメチルア
ミノ安息香酸アミル、ウロカニン酸、ジイソプロピルケ
イヒ酸エチル等の紫外線吸収剤、エリソルビン酸ナトリ
ウム、セージエキス、ビタミンＥ、パラヒドロキシアニ
ソール等の酸化防止剤、ステアリル硫酸ナトリウム、セ
チル硫酸ジエタノールアミン、セチルトリメチルアンモ
ニウムサッカリン、イソステアリン酸ポリエチレングリ
コール、アルギン酸グリセリン等の界面活性剤、エチル
パラベン、ブチルパラベン等の防腐剤、オウバク、オウ
レン、シコン、シャクヤク、センブリ、バーチ、ビワ等
の抽出物、グリチルリチン酸誘導体、グリチルレチン酸
誘導体、サリチル酸誘導体、ヒノキチオール、酸化亜
鉛、アラントイン等の抗炎症剤、胎盤抽出物、グルタチ
オン、ユキノシタ抽出物、アルコルビン酸誘導体等の美
白剤、ニンジン、アロエ、ゼニアオイ、アイリス、ブド
ウ、ヨクイニン、ヘチマ、ユリ等の抽出物、ローヤルゼ
リー、感光素、コレステロール誘導体、各種アミノ酸
類、ビオチン、パントテン酸誘導体等の賦活剤、サフラ
ン、センキュウ、ショウキョウ、オトギリソウ、オノニ
ス、ローズマリー、ニンニク等の抽出物、γ−オリザノ
ール、デキストラン硫酸ナトリウム、ビタミンＥ誘導
体、ニコチン酸誘導体等の血行促進剤、硫黄、チアント
ール等の抗脂漏剤、香料、水、アルコール、カルボキシ
ビニルポリマー等の増粘剤、チタンイエロー、カーサミ
ン、ベニバナ赤等の色剤等を必要に応じて適宜配合する
ことができる。
本発明の剤型は、薬効を得るに適したものであれば、
任意の形で使用でき、例えば外用剤、粉末、顆粒、散
剤、カプセル剤、シロップ剤、坐剤、注射剤等が挙げら
れる。この中では外用剤が用法上簡便で、予防治療処置
の面で好ましく、外用できるものであれば任意の形態で
よい。例えば、ローション、リニメント、乳液等の外用
液剤、クリーム、軟膏、パスター、パップ、ゼリー、ス
プレー等の外用半固型剤等を挙げることができ、皮膚に
直接塗布又は散布する経皮投与による投与方法をとる。
又、乳由来のシアル酸結合オリゴ糖及び乳由来のシア
ル酸結合タン白の配合濃度及び目的とする効果の度合い
により、医薬品、医薬部外品、化粧品類に利用できる。
本発明の抗炎症剤には、有効成分である乳由来のシア
ル酸結合オリゴ糖及び乳由来のシアル酸結合タン白の配
合量は、組成物全重量に対して0.001〜50重量％、好ま
しくは0.001〜５重量％である。0.0001重量％未満で
は、効果が乏しくなる傾向にあり、逆に50重量％を超え
て配合しても効果の大きな増大を望むことは難しい。
本発明の抗炎症剤の投与量は、年齢、個人差、病状等
によって下記範囲外の量を投与することもあり得るの
で、明確には規定できないが、一般に乳由来のシアル酸
結合オリゴ糖及び乳由来のシアル酸結合タン白の内服及
び経皮投与量は体重1kg及び１日あたり0.001〜2,000m
g、好ましくは0.01〜1,000mgであり、この量を１日に１
回又は数回に分けて投与することができる。
適応は医薬品用途では消炎鎮痛剤として、急性湿疹、
慢性湿疹、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、帯状疱疹、
及び種々の原因による湿疹皮膚炎や各種創傷、火傷、急
性慢性関節炎、関節周囲炎、腰痛、筋肉痛等に有効と判
断される。
化粧品、医薬部外品用途では、消炎剤としてニキビ、
フケ、カユミ、あせも、ただれ、肌あれ、かみそり負
け、日やけ後等のほてり等に有効と判断される。
以下に本発明の実施例を示し、本発明を具体的に説明
する。尚、本発明はこれにより限定されるものではな
い。
（実使用試験）
試験方法
顔面にニキビ（尋常性ざ瘡）をもつ10代〜20代の男女
計30名を被験者とし、１群５名の６群に分け、本発明に
かかる被験物質含有ローション実施例１、その他のシア
ル酸あるいはシアル酸誘導体含有ローション参考例１〜
３、並びに比較例１としてグリチルリチン酸含有ローシ
ョン及び比較例２として胎盤（プラセンタ）エキス由来
のシアル酸含有ローションを１群ずつ使用させた。使用
法は、化粧石鹸を用いて顔面をよく洗浄後、皮疹の上に
のみ、各試験ローションを１日に１〜３回、３週間連続
塗布使用させた。
判定
面皰、丘疹、膿疱の３症状について試験ローションの
使用前に比較して、使用後の症状の改善度を５段階（著
しく軽快、かなり軽快、やや軽快、不変、悪化）にて評
価し、有用性を判断した。
結果
表−３の結果から本発明に係る被験物質がニキビに有
効でかつ副作用のない安全性の高い抗炎症剤であるこ
と、及び同じ被験物質でも、乳由来品の方が、プラセン
タ由来品より効果が高いこと並びに、被験物質を二種以
上組合せると相乗効果が得られることを認めた。
次に各種実施態様について例を示す。以下、配合量は
重量％とする。
参考例４ 錠剤
シアル酸結合オリゴ糖100mgと微結晶セルロース100mg
とを含有する錠剤を常法に従って調製し、シロップゼラ
チン沈降性炭酸カルシウムで糖衣をほどこした。この錠
剤は１回の投与量１〜10錠で使用される。
参考例５ 顆粒剤
シアル酸Na20gと乳糖80g、水10g及び微結晶セルロー
ス90gと均一混合し、破砕造粒し、乾燥、篩別して顆粒
剤を得た。この顆粒剤は１回の投与量0.5〜10gで使用さ
れる。
参考例６ カプセル剤
シアル酸結合タン白100mg、微結晶セルロース100mgお
よび乳糖200mgを均一混合。このカプセル剤は１回の投
与量１〜10カプセルで使用される。
参考例７ 軟膏
流動パラフィン（95％）とポリエチレン（５％）より
成るプスチベース50W、47.5gにシアル酸結合脂質2.5gを
練合し、減圧脱気して50.0gの軟膏を得た。この軟膏は
１日４〜５回患部に塗布する。
参考例８ クリーム
次の処方に従い、常法によりクリームを製造した。
（重量％）
シアル酸結合オリゴ糖 1.0
セトステアリルアルコール 4.0
流動パラフィン 40.0
ラノリン 7.0
ステアリン酸モノグリセリド 2.2
ポリオキシエチレン（20）ソルビタン
モノステアレート 2.8
1,3−ブチレングリコール 6.8
エチルパラベン 0.2
精製水 36.0
参考例９ ローション
次の処方に従い、常法によりローションを製造した。
（重量％）
シアル酸結合タン白 0.1
グリセリン 4.0
1,3−ブチレングリコール 4.0
エタノール 7.0
ポリオキシエチレンオレイルアルコール 0.5
メチルパラベン 0.05
クエン酸 0.01
クエン酸ソーダ 0.1
精製水 84.24
本ローションを日やけ後、ほてりを生じている女子５
名の被験者に２日間、１日数回使用させた結果、ほてり
が抑制され、ほてり抑制に対する有用性が認められた。
参考例10 パスタ剤
次の処方に従い、常法によりパスタ剤を製造した。
（重量％）
シアル酸結合タン白 20.0
酸化亜鉛 24.0
デンプン 24.0
白色ワセリン 32.0
参考例11 乳液
次の処方に従い、常法により乳液を製造した。
（重量％）
ステアリン酸 2.0
セタノール 1.0
ワセリン 3.0
ラノリンアルコール 2.0
流動パラフィン 8.0
スクワラン 3.0
エスカロール507 2.0
シアル酸Ca塩 5.0
POE（10）モノオレート 2.5
トリエタノールアミン 1.0
プロピレングリコール 5.0
防腐剤 適量
香料 適量
蒸留水 残余
かみそり負けに悩む男性５名の被験者に、１カ月間か
みそり後に本乳液を使用させた所、５名中４名はかみそ
り負けが起こらなくなり、残り１名にも、改善効果が認
められ、本乳液のかみそり負けに対する有用性が認めら
れた。
実施例２ 栄養クリーム
次の処方に従い、常法により栄養クリームを製造し
た。
（重量％）
ステアリン酸 2.0
ステアリルアルコール 7.0
還元ラノリン 2.0
スクワラン 5.0
オクチルドテカノール 6.0
POE（25）セチルエーテル 3.0
グリセリルモノステアレート 2.0
プロピレングリコール 5.0
シアル酸結合オリゴ糖 1.0
シアル酸結合タン白 1.0
香料・防腐剤 適量
蒸留水 残余
参考例12 パック
次の処方に従い、常法によりパックを製造した。
（重量％）
カオリン 65.0
タルク 19.0
プロピレングリコール 15.0
酢酸カルシウム 0.01
尿素 0.5
シアル酸結合脂質 0.01
香料 0.48
実施例３ リップトリートメント
常法に従って以下の処方のリップトリートメントを製
造した。
（重量％）
キャンデリラロウ 9.0
固形パラフィン 8.0
ミツロウ 5.0
カルナバロウ 5.0
ラノリン 11.0
シアル酸結合オリゴ糖 0.2
シアル酸結合タン白 0.2
イソプロピルミリステート 10.0
香料・酸化防止剤 適量
ヒマシ油 残余
参考例13 ヘアトニック
次の処方に従って、常法によりヘアトニックを製造し
た。
（重量％）
エタノール 55.0
ヒノキチオール 0.1
メフェナム酸 0.1
メントール 0.1
ニッコールHCO−60 1.0
シャクヤクエキス 0.7
グリセリン 1.0
シアル酸リン酸Mg 2.0
色素・香料 適量
精製水 残余
フケ症の男性５名の被験者に、本ヘアトニックを１日
２回、１カ月間使用させたところ、全員に優れたフケ、
カユミを抑制する効果が認められた。
なお、実施例及び参考例のシアル酸Na、シアル酸結合
オリゴ糖、シアル酸結合タン白及びシアル酸結合脂質は
製造例２〜５の製造法で製造されたものである。
〔発明の効果〕
本発明の抗炎症剤は、抗炎症効果に優れ、安全性、使
用性に優れたものである。更に外用適応の場合、皮膚に
よく浸透し、刺激やホルモン様副作用を全く与えず、皮
膚疾患の予防、治療、処置に有効に働くものである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION [Industrial application] The present invention relates to a novel anti-inflammatory agent, more specifically, an anti-inflammatory agent comprising a milk-derived sialic acid-binding oligosaccharide and a milk-derived sialic acid-binding protein as active ingredients. Regarding inflammatory agents. [Prior Art] Many steroids and non-steroidal anti-inflammatory agents that have been widely used as anti-inflammatory agents have been known to cause gastrointestinal disorders, renal disorders, etc. as side effects when they are applied orally, and continuously when applied externally. Side effects such as skin thinning, skin atrophy, sensitization, photosensitization, and allergies due to use are known. As measures against this, attempts have been made so far to change the formulation method and administration method and to modify the structure of the compound, but satisfactory results have not been obtained. [Problems to be Solved by the Present Invention] In view of the above circumstances, the present inventors have earnestly studied to obtain a drug that is highly safe and has an excellent anti-inflammatory effect that can withstand long-term continuous use. The fact that the milk-derived sialic acid and the sialic acid derivative according to the present invention have a high safety and have an excellent anti-inflammatory effect without causing side effects even after long-term continuous use, and have completed the present invention based on this finding. It was [Means for Solving Problems] That is, the present invention provides an anti-inflammatory agent comprising a combination of a sialic acid-binding oligosaccharide of a milk-derived sialic acid derivative and a sialic acid-binding protein, which is contained as an active ingredient. It is an agent. Sialic acid is a known substance, and is a general term for N-acyl and N-acyl, O-acyl derivatives of polyhydroxymonoaminocarboxylic acid (neuraminic acid), and is also called sialic acid. Sialic acid is contained in various organisms, and normally constitutes a cell surface saccharide and is present in a glycoside bond with the ends of sugar proteins and glycolipids. In particular, it is mainly present in the brain, nerves, blood, submandibular gland, mucinous substance, and colostrum, but is liberated and also present in serum, body fluids, and urine. The most representative sialic acid found in the living world is N-acetylneuraminic acid (NANA: molecular weight 3
In 09), it is a white powder having a melting point of 185 to 187 ° C. and a [α] 20 D ▼ −32 ° ± 2 °. The biological pharmacological actions of sialic acid and sialic acid derivatives are known to contribute to the negative charge on the cell surface, involve in the specific recognition mechanism of cells, hemagglutination reaction by viruses, homing phenomenon of blood proteins, etc. ing. Recently, expectorant activity on sialic acid has been disclosed (Japanese Patent Application Laid-Open No. 61-6841).
8), anti-inflammatory effect (JP-A-62-145015) and nutritional effect of sialic acid-linked oligosaccharide (JP-A-61-152233). Further, although the anti-inflammatory effect of sialic acid derived from a bovine plasensor and its usefulness on the skin are known (Japanese Patent Laid-Open No. 62-145015), according to the experiments by the present inventors, the effect is that of indomethacin. It was weaker than the anti-inflammatory action, and was only as effective as the action of glycyrrhizic acid on the skin. The present inventors have further examined the anti-inflammatory effect of milk-derived sialic acid and its derivatives, especially the anti-inflammatory effect on the skin. As a result, milk-derived sialic acid and sialic acid derivatives are more effective than placenta extract-derived sialic acid. Was found to be extremely good. Specifically, milk-derived sialic acid and sialic acid derivatives have an anti-inflammatory effect on the skin (acne, dandruff, razor loss, suppression of hot flashes after sunburn, wound treatment, etc.)
It was found that a synergistic anti-inflammatory effect can be obtained by having at least one of the specific sialic acid and the specific sialic acid derivative. In particular, this effect was markedly enhanced by the combined use of the sialic acid-bound oligosaccharide and the sialic acid-bound protein. Such effects are not yet known. The production method of sialic acid and sialic acid derivatives is a synthetic method,
Natural extraction method (raw material; egg white, submandibular gland mucin, placenta extract,
Colominic acid and the like obtained from E. coli)
Milk material extraction method (Patent No. 1191212, Patent No. 1253988)
The application of the specification, JP-A-59-184197, etc.) is particularly preferable. Next, production examples of the compound used in the present invention or the reference examples by the milk extraction method will be shown. The milk used in the milk extraction method can be appropriately selected from milk, sheep milk, breast milk (human) and others. Further, since the sialic acid content concentration can be freely controlled depending on the degree of purification, it may be purified according to the usage, application, dosage form and other purposes. The manufacturing method is not limited to this. (Production Example 1) Sialic acid To 10 t of cheese whey, 28 kg of hydrochloric acid was added to adjust pH to 2, and then the mixture was heated at 92 ° C for 60 minutes for hydrolysis. The obtained whey hydrolyzate was heated with a screw decanter to remove proteins coagulated by heating to obtain a sialic acid-containing liquid. Then, the sialic acid-containing liquid was placed in a desalting tank of an electrodialysis device to desalt to a conductivity of 2 mS / cm, and then dialysis was stopped once and the concentration tank liquid was discarded. Then distilled water in the concentration tank
30 was added and the dialysis was performed again to a conductivity of 50 μS / cm. After the completion of dialysis, the concentration tank liquid was concentrated and dried to obtain 600 g of a white powder. The free sialic acid purity of the powder thus obtained was about 97%. (Production Example 2) sialic acid salt The above-mentioned free sialic acid was adjusted with caustic soda to prepare sialic acid.
Get Na. In addition, Mg salt, Ca salt, K salt, phosphate, amino acid salt, amine salt and the like can be freely produced according to the purpose. (Production Example 3) Sialic acid-bound oligosaccharide The filtrate prepared by ultrafiltration of milk or cheese whey was concentrated under reduced pressure to a total solid content of 20%. 25 kg of this solution was electrodialyzed until the electric conductivity reached 20 μS / cm, and then oligosaccharides were adsorbed through a column packed with Dowex 1 × 2 (2 kg). Next, 20 kg of water was passed through this column to remove the neutral sugar, and then 0.5 M hydrochloric acid was passed through to elute the oligosaccharide adsorbed on the column. The pH of the obtained eluate was adjusted to pH 7.0 with 30% caustic soda, and electrodialysis was performed again until the electric conductivity reached 150 μS / cm. The obtained dialysate was concentrated and dried to obtain 100 g of white powder. The powder thus obtained had a sialic acid-linked oligosaccharide purity of 90%. (Production Example 4) Sialic acid-bonded protein Rennet casein curd waste liquid 300 was sterilized by heating in a Fordora tank at 75 ° C for 30 minutes, then cooled to 40 ° C, and the pH was adjusted to 4.6 with concentrated hydrochloric acid. After allowing the solution to stand for about 30 minutes to form a precipitate and passing the solution through a clarifier to return the pH to 7.0, the clear solution was concentrated and desalted with an RO membrane. After concentrating up to 10 times, water was added to the concentrated solution to concentrate up to 10 times again. The obtained concentrated liquid was dried to obtain 1.3 Kg of white powder. The sialic acid-bound protein of the powder thus obtained has a purity of about 80.
%Met. (Production Example 5) Chloroform-methanol mixed solution (1: 1) was added to 15 kg of sialic acid-bonded lipid buttermilk powder, and the mixture was stirred at room temperature for 30 minutes for extraction. Next, the chloroform-methanol mixed solution was collected and passed through an ion exchange resin (DEAE-Toyopearl acetate type) 1 to adsorb the sialic acid-bound lipid, and then the resin was washed with the chloroform-methanol mixed solution (1: 1) 2 and then 0.5 The sialic acid-bound lipid was eluted with M sodium acetate-methanol solution 4. After removing the concentrated methanol of the eluate, water 5
Was added to carry out desalting and concentration of sialic acid-bound lipid by ultrafiltration. After the concentrated solution containing sialic acid-bonded lipid was evaporated to dryness with an evaporator, it was passed through a silica gel column (4.0 x 50 cm) to adsorb the sialic acid-bonded lipid, and then chloroform 1
Then, the mixture was sequentially washed with a chloroform-methanol mixed solution (4: 1) 1 and then a sialic acid-bonded lipid was eluted with a mixed solution 2 of chloroform-methanol (2: 8). The eluate was evaporated to dryness with an evaporator to obtain 15 g of a white powder. The purity of the sialic acid-bound lipid in the powder thus obtained was 90% or more by thin layer chromatography (resorcinol method). Next, the safety test of sialic acid and sialic acid derivatives was conducted, and the results are shown. Acute toxicity test Each of the sialic acid, Na sialic acid, sialic acid-binding oligosaccharide, sialic acid-binding protein, and sialic acid-binding lipid produced in Production Examples 1 to 5 was used as a test substance, and ICR female mice (6 weeks old,
(1 group 5 animals), intraperitoneal administration was carried out by suspending 0.5% sodium carboxymethylcellulose / physiological saline solution to 2% by weight of each test substance using a 22 1/2 G injection needle. For oral administration, an oral needle was used by suspending olive oil in a concentration of 5% by weight for each test substance.
Intraperitoneal administration (60 ml / kg) and oral administration (30 ml / kg) were given. As a result, no deaths, weight loss, or notable poisoning symptoms were not observed during the 7-day observation period for all test substances, and no abnormality was observed in the autopsy performed on the 7th day. As is clear from these results, the acute toxicity (LD 50 ) of sialic acid and sialic acid derivatives was 1200 mg / k after intraperitoneal administration.
It was proved to be highly safe with g or more and 1500 mg / kg or more by oral administration. Next, the pharmacological test of the test substance used above was carried out, and the results are shown. (Anti-inflammatory effect test) The carrageenin footpad edema method is commonly used to measure the anti-inflammatory effect of a drug, and since it has a high correlation with the anti-inflammatory effect in humans, it is a standard test method. Has been done. Proceedings of winter
Society for Experimental Biology & Medicine, 111
Vol., Pp. 554, 1962), male Wistar rats (body weight 110-130 g, 8 animals per group) were orally administered (100 mg / kg) with the test substance suspended in 0.5% carboxymethylcellulose aqueous solution and indomethacin. One hour later, 0.1 ml of 1% λ-carrageenin / physiological saline as an inflammatory substance was subcutaneously administered to the footpad of one rat hindlimb to induce edema.
The volume of each footpad was measured before and after the administration of the inflammatory substance, and the rate of increase in footpad volume (V1) was determined. As a control group, the rate of increase in paw volume (V0) when λ-carrageenin was similarly injected to rats administered with a 0.5% carboxymethylcellulose aqueous solution containing no test substance was measured, and (V0-V1) × 100 / V0 The carrageenin edema inhibitory rate (%) was calculated by the following formula and used as the anti-inflammatory activity of the test substance.
The larger this value, the higher the anti-inflammatory activity. λ-
Table 1 shows the measured values 5 hours after the injection of carrageenin. As is clear from Table-1, the test substance according to the present invention showed a stronger edema inhibition rate than indomethacin. This effect is higher than that of sialic acid and sialic acid derivative alone, and has a synergistic anti-inflammatory effect by using a combination of sialic acid-binding oligosaccharide and sialic acid-binding protein, and placenta extract-derived sialic acid. It was found that milk-derived sialic acid was more effective than that of Next, the formulation for applying sialic acid and sialic acid derivatives as an anti-inflammatory agent will be described. The anti-inflammatory agent of the present invention can be used in the form of a mixture containing pharmaceutically acceptable additives and other agents in addition to sialic acid and sialic acid derivatives. However, from the viewpoint of stability, sialic acid has a problem in safety against acids, alkalis and light and is not suitable for long-term storage. Therefore, it is preferable to use it as a sialic acid derivative from the viewpoint of stability. In addition to the above-mentioned essential components, the anti-inflammatory agent of the present invention is usually
Other ingredients used in cosmetics and pharmaceuticals, such as avocado oil, palm oil, peanut oil, beef tallow, rice bran oil, jojoba oil, carnauba wax, lanolin, liquid paraffin, oxystearic acid, isostearyl palmitate, isostearyl alcohol, etc. Moisturizers such as oil, glycerin, sorbitol, polyethylene glycol, collagen, hyaluronic acid, chondroitin sulfate, UV absorbers such as amyl paradimethylaminobenzoate, urocanic acid, ethyl diisopropyl cinnamate, sodium erysorbate, sage extract, vitamin E , Antioxidants such as para-hydroxyanisole, sodium stearyl sulfate, diethanolamine cetyl sulfate, cetyl trimethyl ammonium saccharin, polyethylene glycol isostearate, algin Surfactants such as glycerin, preservatives such as ethylparaben and butylparaben, extracts of pearl oyster, laurel, sikon, peony, cembly, birch, loquat, glycyrrhizic acid derivative, glycyrrhetinic acid derivative, salicylic acid derivative, hinokitiol, zinc oxide , Anti-inflammatory agents such as allantoin, placenta extract, glutathione, Yukinoshita extract, whitening agents such as ascorbic acid derivative, carrot, aloe, mallow, iris, grape, yochinin, loofah, lily, etc., royal jelly, photosensitizer , Cholesterol derivatives, various amino acids, biotin, activators such as pantothenic acid derivatives, saffron, senkyu, ginseng, Hypericum, extract of Ononis, rosemary, garlic, γ-oryzanol, dextran sulfate sodium, vita Blood circulation promoters such as Min E derivatives and nicotinic acid derivatives, antiseborrheic agents such as sulfur and thiantol, fragrances, water, alcohols, thickeners such as carboxyvinyl polymers, colorants such as titanium yellow, cursamine, safflower red, etc. Can be appropriately blended as necessary. If the dosage form of the present invention is suitable for obtaining a medicinal effect,
It can be used in any form, and examples thereof include external preparations, powders, granules, powders, capsules, syrups, suppositories, injections and the like. Of these, external preparations are convenient in terms of use, preferable in terms of preventive treatment, and may be in any form as long as they can be applied externally. For example, lotions, liniments, external liquids such as emulsions, creams, ointments, pasters, poultices, jellies, external semi-solid preparations such as sprays, and the like can be mentioned, and the administration method by percutaneous administration by directly applying or spraying on the skin. Take Further, depending on the blending concentration of the milk-derived sialic acid-binding oligosaccharide and the milk-derived sialic acid-binding protein and the degree of the desired effect, it can be used for pharmaceuticals, quasi drugs, and cosmetics. In the anti-inflammatory agent of the present invention, the amount of the milk-derived sialic acid-binding oligosaccharide and milk-derived sialic acid-binding protein, which are the active ingredients, is 0.001 to 50% by weight based on the total weight of the composition, preferably It is 0.001 to 5% by weight. If it is less than 0.0001% by weight, the effect tends to be poor, and conversely, if it exceeds 50% by weight, it is difficult to expect a great increase in the effect. The dose of the anti-inflammatory agent of the present invention may be administered in an amount outside the following range depending on age, individual difference, medical condition, etc., so that it cannot be clearly defined, but in general, milk-derived sialic acid-binding oligosaccharide and Oral administration and percutaneous dose of milk-derived sialic acid-binding protein is 1kg body weight and 0.001-2,000m per day
g, preferably 0.01 to 1,000 mg, this amount being 1 per day
It can be administered once or in several divided doses. Indications for medical use include anti-inflammatory analgesics, acute eczema,
Chronic eczema, atopic dermatitis, contact dermatitis, shingles,
It is also considered to be effective for eczema dermatitis due to various causes, various wounds, burns, acute chronic arthritis, periarthritis, low back pain, myalgia and the like. For cosmetics and quasi drugs, acne as an anti-inflammatory agent,
Dandruff, Kayumi, and heat rash are also considered effective for sores, rough skin, razor loss, and hot flashes such as after sunburn. Hereinafter, examples of the present invention will be described, and the present invention will be specifically described. Note that the present invention is not limited by this. (Actual Use Test) Test Method A total of 30 males and females in their teens to 20s who have acne (acne vulgaris) on the face are used as test subjects, and the test substance-containing lotion according to the present invention is divided into 6 groups of 5 persons per group. Example 1, other sialic acid or sialic acid derivative-containing lotion Reference Examples 1 to 1
3, and a glycyrrhizinic acid-containing lotion as Comparative Example 1 and a sialic acid-containing lotion derived from placenta (placenta) extract as Comparative Example 2 were used one group at a time. As for the method of use, after thoroughly washing the face with a soap, each test lotion was applied 1 to 3 times a day for 3 weeks continuously only on the skin rash. Judgment Three types of comedones, papules, and pustules were compared with those before use of the test lotion, and the degree of improvement of the symptoms after use was evaluated on a scale of 5 (remarkably light, fairly light, moderately light, unchanged, worse) and useful. Judged the sex. Results From the results in Table-3, the test substance according to the present invention is an anti-inflammatory agent that is effective against acne and has no side effects and is a highly safe anti-inflammatory agent, and even with the same test substance, a milk-derived product is better than a placenta-derived product. It was confirmed that the effect was high and that a synergistic effect was obtained by combining two or more test substances. Next, examples of various embodiments will be shown. In the following, the blending amount will be% by weight. Reference Example 4 Tablet 100 mg of sialic acid-bound oligosaccharide and 100 mg of microcrystalline cellulose
Tablets containing and were prepared by a conventional method and sugar-coated with syrup gelatin-precipitating calcium carbonate. The tablets are used in a single dose of 1 to 10 tablets. Reference Example 5 Granules 20 g of sialic acid Na, 80 g of lactose, 10 g of water and 90 g of microcrystalline cellulose were uniformly mixed, crushed and granulated, dried and sieved to obtain a granule. This granule is used in a single dose of 0.5-10 g. Reference Example 6 Capsule A sialic acid-binding protein (100 mg), microcrystalline cellulose (100 mg) and lactose (200 mg) were uniformly mixed. This capsule is used in a single dose of 1 to 10 capsules. Reference Example 7 Ointment 2.5 g of sialic acid-bonded lipid was kneaded with 47.5 g of 50 W of Pustibase composed of liquid paraffin (95%) and polyethylene (5%), and deaerated under reduced pressure to obtain 50.0 g of ointment. This ointment is applied to the affected area 4 to 5 times a day. Reference Example 8 Cream A cream was produced by a conventional method according to the following formulation. (Wt%) sialic acid-bound oligosaccharide 1.0 cetostearyl alcohol 4.0 liquid paraffin 40.0 lanolin 7.0 stearic acid monoglyceride 2.2 polyoxyethylene (20) sorbitan monostearate 2.8 1,3-butylene glycol 6.8 ethylparaben 0.2 purified water 36.0 Reference Example 9 Lotion A lotion was produced by a conventional method according to the following formulation. (Wt%) Sialic acid binding protein 0.1 Glycerin 4.0 1,3-butylene glycol 4.0 Ethanol 7.0 Polyoxyethylene oleyl alcohol 0.5 Methylparaben 0.05 Citric acid 0.01 Sodium citrate 0.1 Purified water 84.24 After lotion sunburn, hot flashes occurred. Girls 5
As a result of having several test subjects use it several times a day for 2 days, hot flash was suppressed and the usefulness for hot flash suppression was recognized. Reference Example 10 Pasta Agent A pasta agent was produced by a conventional method according to the following formulation. (Wt%) Sialic acid-bound protein 20.0 Zinc oxide 24.0 Starch 24.0 White petrolatum 32.0 Reference Example 11 Emulsion An emulsion was prepared by a conventional method according to the following formulation. (% By weight) Stearic acid 2.0 Cetanol 1.0 Vaseline 3.0 Lanolin alcohol 2.0 Liquid paraffin 8.0 Squalane 3.0 Escalol 507 2.0 Ca sialic acid salt 5.0 POE (10) Monooleate 2.5 Triethanolamine 1.0 Propylene glycol 5.0 Preservatives Fragrance Percentage Distilled water Residual razor When 5 men suffering from loss were allowed to use this emulsion after razor for 1 month, 4 out of 5 people did not lose the razor, and the remaining 1 person also showed the improvement effect. The usefulness against razor loss was recognized. Example 2 Nutrition cream A nutrition cream was produced by a conventional method according to the following formulation. (% By weight) Stearic acid 2.0 Stearyl alcohol 7.0 Reduced lanolin 2.0 Squalane 5.0 Octyl dodecanol 6.0 POE (25) Cetyl ether 3.0 Glyceryl monostearate 2.0 Propylene glycol 5.0 Sialic acid-binding oligosaccharide 1.0 Sialic acid-binding protein 1.0 Perfume / preservative Agent Appropriate amount Distilled water Residual Reference Example 12 Pack A pack was manufactured by a conventional method according to the following formulation. (Wt%) Kaolin 65.0 Talc 19.0 Propylene glycol 15.0 Calcium acetate 0.01 Urea 0.5 Sialic acid-binding lipid 0.01 Fragrance 0.48 Example 3 Lip Treatment A lip treatment having the following formulation was prepared according to a conventional method. (% By weight) Candelilla wax 9.0 Solid paraffin 8.0 Beeswax 5.0 Carnauba wax 5.0 Lanolin 11.0 Sialic acid-bound oligosaccharides 0.2 Sialic acid-bound protein 0.2 Isopropyl myristate 10.0 Fragrance / Antioxidant Appropriate amount Castor oil Residual reference example 13 Hair tonic Next formulation A hair tonic was manufactured according to the conventional method. (Wt%) Ethanol 55.0 Hinokitiol 0.1 Mefenamic acid 0.1 Menthol 0.1 Nikkor HCO-60 1.0 Peony extract 0.7 Glycerin 1.0 Sialic acid phosphate Mg 2.0 Dye / fragrance Suitable amount Purified water Residual dandruff 5 male subjects were given this hair tonic When I used it twice a day for a month, everyone had excellent dandruff,
The effect of suppressing itching was observed. The sialic acid Na, sialic acid-bound oligosaccharide, sialic acid-bound protein and sialic acid-bound lipid of Examples and Reference Examples were produced by the production methods of Production Examples 2 to 5. [Effects of the Invention] The anti-inflammatory agent of the present invention has excellent anti-inflammatory effect, safety and usability. Further, in the case of external application, it penetrates well into the skin, does not cause irritation or hormonal side effects at all, and works effectively for the prevention, treatment and treatment of skin diseases.
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(72)発明者 十河 幸夫
神奈川県横浜市南区井土ケ谷中町157
ダイヤパレス井土ヶ谷703号
(72)発明者 阿彦 健吉
東京都小平市花小金井２―688―18
(72)発明者 出家 栄記
埼玉県狭山市入間川２丁目23番５号102─────────────────────────────────────────────────── ─── Continuation of the front page (51) Int.Cl. 6 Identification number Internal reference number FI Technical display location A61K 31/70 ADA A61K 31/70 ADA (72) Inventor Yukio Togawa Idigayanaka, Minami-ku, Yokohama-shi, Kanagawa 157 Town 157 Diamond Palace Idogaya 703 (72) Inventor Kenkichi Ahiko 2-688-18 Hanakoganei, Kodaira-shi, Tokyo (72) Inventor Eiji Eike 2-23-5 Irumagawa, Sayama-shi, Saitama Prefecture 102