JP2679739B2 - アルデヒド類の製造方法 - Google Patents
アルデヒド類の製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、アルデヒド類の製造方法に関する。更に詳
しくは、本発明は、スチレン誘導体をシユードモナス
（Pseudomonas）属に属する或る特定の菌の産生する酵
素を用いて、そのスチレン誘導体中のベンゼン環に共役
するエチレン結合を選択的且つ酸化的に分解し、アルデ
ヒド類を製造する方法に関する。
しくは、本発明は、スチレン誘導体をシユードモナス
（Pseudomonas）属に属する或る特定の菌の産生する酵
素を用いて、そのスチレン誘導体中のベンゼン環に共役
するエチレン結合を選択的且つ酸化的に分解し、アルデ
ヒド類を製造する方法に関する。
〈従来技術〉 従来酵素を用いてスチレン誘導体中のベンゼン環に共
役するエチレン結合を選択的且つ酸化的に分解し、アル
デヒド類を製造することは本発明者の知る限り、知られ
ていない。
役するエチレン結合を選択的且つ酸化的に分解し、アル
デヒド類を製造することは本発明者の知る限り、知られ
ていない。
〈発明の目的〉 本発明の目的は、スチレン誘導体中のベンゼン環に共
役するエチレン結合を酵素を用いて選択的且つ酸化的に
分解し、アルデヒド類を製造し得る方法を提供すること
にある。
役するエチレン結合を酵素を用いて選択的且つ酸化的に
分解し、アルデヒド類を製造し得る方法を提供すること
にある。
本発明の他の目的は、シユードモナス属に属する菌株
が産生する酵素を用いて、スチレン誘導体中のベンゼン
環に共役するエチレン結合を酸化的に分解し、アルデヒ
ド類を製造し得る方法を提供することにある。
が産生する酵素を用いて、スチレン誘導体中のベンゼン
環に共役するエチレン結合を酸化的に分解し、アルデヒ
ド類を製造し得る方法を提供することにある。
本発明者の研究によれば、上記本発明の目的は、 下記一般式［Ｉ］ 式中R1は炭素数１〜10の直鎖もしくは分岐状アルキル
基、炭素数６〜10のアリール基、炭素数５〜15のシクロ
アルキル基、基−COOR1（ここでR1は水素原子または炭
素数１〜10のアルキル基）、ホルミル基または を示す。但し、上記アルキル基、シクロアルキル基およ
びアリール基は置換基を有していてもよい。
基、炭素数６〜10のアリール基、炭素数５〜15のシクロ
アルキル基、基−COOR1（ここでR1は水素原子または炭
素数１〜10のアルキル基）、ホルミル基または を示す。但し、上記アルキル基、シクロアルキル基およ
びアリール基は置換基を有していてもよい。
R2、R3、R4、R5およびR6は、互いに同一もしくは異な
り、水素原子、水酸基もしくはその配糖体、炭素数１〜
10の直鎖もしくは分岐状アルキル基、または炭素数１〜
10のアルコキシ基を示すか或いはこれらのうち互いに隣
接する２つの基は一緒になってCH2 ｎ、−ＯCH2
ｎまたは−ＯCH2 nO−を形成していてもよい（ここ
でｎは１〜４の整数を示す）。
り、水素原子、水酸基もしくはその配糖体、炭素数１〜
10の直鎖もしくは分岐状アルキル基、または炭素数１〜
10のアルコキシ基を示すか或いはこれらのうち互いに隣
接する２つの基は一緒になってCH2 ｎ、−ＯCH2
ｎまたは−ＯCH2 nO−を形成していてもよい（ここ
でｎは１〜４の整数を示す）。
で表わされるスチレン誘導体を、シユードモナス属に属
し且つスチレン誘導体に対するジオキシゲナーゼ活性酵
素を産生し得る菌株が生産した酵素と好気的条件下に接
触せしめることを特徴とするアルデヒド類の製造方法に
より達成される。
し且つスチレン誘導体に対するジオキシゲナーゼ活性酵
素を産生し得る菌株が生産した酵素と好気的条件下に接
触せしめることを特徴とするアルデヒド類の製造方法に
より達成される。
本発明によれば、上記スチレン誘導体［Ｉ］にシユー
ドモナス属し且つスチレン誘導体中のベンゼン環の共役
エチレン結合に対するジオキシゲナーゼ活性を有する酵
素を産生し得る菌株が生産した酵素を作用せしめること
により、該スチレン誘導体［Ｉ］におけるエチレン結合
が酸化的に分解されアルデヒド基に転換される。これを
模式的に反応式で表わすと下記の通りとなる。
ドモナス属し且つスチレン誘導体中のベンゼン環の共役
エチレン結合に対するジオキシゲナーゼ活性を有する酵
素を産生し得る菌株が生産した酵素を作用せしめること
により、該スチレン誘導体［Ｉ］におけるエチレン結合
が酸化的に分解されアルデヒド基に転換される。これを
模式的に反応式で表わすと下記の通りとなる。
かくして本発明において、ジオキシゲナーゼ活性と
は、スチレン誘導対中のベンゼン環に共役するエチレン
結合が、上記反応式の如く選択的に酸素添加反応によっ
て分解され２つのアルデヒド基に転換される作用を意味
する。
は、スチレン誘導対中のベンゼン環に共役するエチレン
結合が、上記反応式の如く選択的に酸素添加反応によっ
て分解され２つのアルデヒド基に転換される作用を意味
する。
本発明者が知る限り、スチレン誘導体におけるエチレ
ン結合が、シユードモナス属の或る菌株の産生する酵素
によって上記ジオキシゲナーゼ活性を受けることは全く
新しい知見である。
ン結合が、シユードモナス属の或る菌株の産生する酵素
によって上記ジオキシゲナーゼ活性を受けることは全く
新しい知見である。
かくして本発明によれば上記スチレン誘導体［Ｉ］は
上記した酵素のジオキシゲナーゼ活性の作用を受け、ア
ルデヒドが得られる。
上記した酵素のジオキシゲナーゼ活性の作用を受け、ア
ルデヒドが得られる。
その反応例のいくつかを下記に示す。
なお本発明方法によれば前記反応例（２）に示される
ように、原料スチレン誘導体中に基−OGluが含まれてい
る場合、生成したアルデヒド類中の基−OGluは、菌株の
培養生成物から分離された酵素中にグリコシダーゼが含
まれているとこの基OGluはその作用に起因すると思われ
る水酸基に転換された形として得られる場合がある。
ように、原料スチレン誘導体中に基−OGluが含まれてい
る場合、生成したアルデヒド類中の基−OGluは、菌株の
培養生成物から分離された酵素中にグリコシダーゼが含
まれているとこの基OGluはその作用に起因すると思われ
る水酸基に転換された形として得られる場合がある。
本発明の上記一般式［Ｉ］で表わされるスチレン誘導
体として、好ましいR1、R2、R3、R4、R5およびR6は以下
に説明する通りである。
体として、好ましいR1、R2、R3、R4、R5およびR6は以下
に説明する通りである。
R1としては、炭素数１〜６の直鎖もしくは分岐状アル
キル基；炭素数６〜８のアリール基、特にフエニル基；
炭素数５〜10のシクロアルキル基、特にシクロヘキシル
基；基−COOR1（ここでR1は水素原子または炭素数１〜
４のアルキル基）；ホルミル基または であるのが好ましい。また上記アルキル基、およびアリ
ール基には、水酸基もしくはその配糖体または炭素数１
〜４のアルコキシ基で置換されていてもよい。
キル基；炭素数６〜８のアリール基、特にフエニル基；
炭素数５〜10のシクロアルキル基、特にシクロヘキシル
基；基−COOR1（ここでR1は水素原子または炭素数１〜
４のアルキル基）；ホルミル基または であるのが好ましい。また上記アルキル基、およびアリ
ール基には、水酸基もしくはその配糖体または炭素数１
〜４のアルコキシ基で置換されていてもよい。
一方R2、R3、R4、R5およびR6としては、同一もしくは
異なり、水素原子；水酸基もしくはその配糖体；炭素数
１〜６、特に１〜３のアルキル基；炭素数１〜６、特に
１〜３のアルコキシ基;R3とR4またはR4とR5は、互いに
結合して−OCH2O−を形成する環であるものが好まし
い。
異なり、水素原子；水酸基もしくはその配糖体；炭素数
１〜６、特に１〜３のアルキル基；炭素数１〜６、特に
１〜３のアルコキシ基;R3とR4またはR4とR5は、互いに
結合して−OCH2O−を形成する環であるものが好まし
い。
上記式［Ｉ］の化合物はR2〜R6のうち、１〜２個が水
酸基もしくはその配糖体または炭素数１〜３のアルコキ
シ基で置換されたものが特に好ましい。
酸基もしくはその配糖体または炭素数１〜３のアルコキ
シ基で置換されたものが特に好ましい。
以下本発明において前記ジオキシゲナーゼ活性を有す
る酵素を用いて分解することができる前記スチレン誘導
体［Ｉ］の具体例としては下記のものを例示することが
できる。
る酵素を用いて分解することができる前記スチレン誘導
体［Ｉ］の具体例としては下記のものを例示することが
できる。
なお下記式においてMeはメチル基、基OGluはグルコシ
ル基を表すものとする。
ル基を表すものとする。
次に本発明方法において、前記一般式［Ｉ］で表わさ
れるスチレン誘導の酸化分解に用いられる前記ジオキシ
ゲナーゼ活性を有する酵素、その酵素を産生するシユー
ドモナス属の菌株および該酵素の取得方法について説明
する。
れるスチレン誘導の酸化分解に用いられる前記ジオキシ
ゲナーゼ活性を有する酵素、その酵素を産生するシユー
ドモナス属の菌株および該酵素の取得方法について説明
する。
本発明方法において用いられるジオキシゲナーゼ活性
を有する酵素は、シユードモナス属に属する細菌より産
生され且つ下記理化学性質を有している。
を有する酵素は、シユードモナス属に属する細菌より産
生され且つ下記理化学性質を有している。
（ａ） 作用および基質特異性； 本ジオキシゲナーゼは上記一般式［Ｉ」で表わされる
スチレン誘導体中のベンゼン環に共役したエチレン結合
に選択的に作用しアルデヒド類に転換せしめる作用を有
する。
スチレン誘導体中のベンゼン環に共役したエチレン結合
に選択的に作用しアルデヒド類に転換せしめる作用を有
する。
（ｂ） 至適pHおよび安定pHの範囲； 至適pH6〜10 安定pHの範囲6.5〜9.5 （ｃ） 作用適温の範囲； pH8.0で20〜50℃ （ｄ） 失活条件； pH;5以下或いは12以上 温度;60℃以上 （ｅ） 力価の測定 後述する実施例２のａに記載 （ｆ） 分子量； SDS−PAGE電気泳動法によって測定された分子量は約5
2,000であり、また、ゲル濾過法で求められた分子量は
約94,000であり、本ジオキシゲナーゼは分子量が約52,0
00の同一サブユニツトからなるホモのダイマーを形成し
ていると推定される。
2,000であり、また、ゲル濾過法で求められた分子量は
約94,000であり、本ジオキシゲナーゼは分子量が約52,0
00の同一サブユニツトからなるホモのダイマーを形成し
ていると推定される。
（ｇ） 精製方法； 粗酵素液をヒドロキシルアパタイド処理し、イオン交
換クロマトグラフイー（DEAE、トヨパール）および疎水
クロマトグラフイー（ブチルトヨパール）を組合せるこ
とにより精製される。
換クロマトグラフイー（DEAE、トヨパール）および疎水
クロマトグラフイー（ブチルトヨパール）を組合せるこ
とにより精製される。
（ｈ） 阻害、活性化および安定化； 酵素反応液に下記各阻害剤を加えて酵素活性に与える
影響を調べた。酵素反応条件はpH8.0、50℃で10分間、
阻害剤を加えない場合を100とした相対活性で阻害を評
価した。
影響を調べた。酵素反応条件はpH8.0、50℃で10分間、
阻害剤を加えない場合を100とした相対活性で阻害を評
価した。
本発明において、上記ジオキシゲナーゼは、上記活性
を有し且つシユードモナス属に属する菌株より産生され
るが、特に好ましくは、シユードモナス属に属する細菌
TMY1009株が産生する酵素である。
を有し且つシユードモナス属に属する菌株より産生され
るが、特に好ましくは、シユードモナス属に属する細菌
TMY1009株が産生する酵素である。
このシユードモナス属の細菌TMY1009株は、微工研へ
微工研菌寄第10362号として寄託されている。
微工研菌寄第10362号として寄託されている。
かゝる細菌TMY1009株は、下記菌学的性質を有してい
る。
る。
（ｉ） 形態 1.細胞の形と大きさ：桿菌、0.8×1.1μｍ 2.運動性の有無と鞭毛の着生状態有り、極鞭毛１本 3.グラム染色性；陰性 （ii） 各種培地における生育状態 LB培地平板培養 円形でなめらかなコロニー形成、黄褐色 肉汁寒天板培養 コロニーは円形、表面はスムーズ、色はうすい黄色、
光沢あり 肉汁寒天斜面培養 表面はスムーズ、色はうすい黄色、光沢あり、色素拡
散は見られなかった。
光沢あり 肉汁寒天斜面培養 表面はスムーズ、色はうすい黄色、光沢あり、色素拡
散は見られなかった。
肉汁液体培養 液表面での生育は認められなかった。液全体がやゝ濁
っていた。底部に菌体が沈降していた。
っていた。底部に菌体が沈降していた。
肉汁ゼラチン穿刺培養 全体に小さな菌塊、ゼラチン液化は認められなかっ
た。
た。
リトマスミルク 底部に菌体沈降、ミルクの凝固、液化、pHの変化な
し。
し。
（iii） 生理学的性質 （１） 硝酸塩の還元：陰性 （２） 色素の生成：カロチノイド極大吸収479、450
（425）nm （３） オキシダーゼ：陽性 （４） カタラーゼ：陽性 （５） 酵素に対する態度：好気的 （６） Ｏ−Ｆテスト：酸化的条件で有機酸生成 （７） 脱窒反応：陰性 （８） MRテスト：陰性 （９） VPテスト：陰性 （10）インドールの生成：陰性 （11）硫化水素の生成：陰性 （12）デンプンの加水分解：陽性 （13）クエン酸の利用 Koserの培地：陰性 Chvistensenの培地：陽性 （14）無機窒素源の利用 硝酸塩：陰性 アンモニウム塩：陽性 （15）ウレアーゼ：陰性 （16）糖類から酸及びガスの生成 酸生成 ガス生成 Ｌ−アラビノース ＋ − Ｄ−キシロース ＋ − Ｄ−グルコース ＋ − Ｄ−マンノース ＋ − Ｄ−フラクトース ＋ − Ｄ−ガラクトース ＋ − 麦芽糖 ＋ − ショ糖 ＋ − 乳 糖 ＋ − トレハロース ＋ − Ｄ−ソルビット − − Ｄ−マンニット − − イノシット − − グリセリン − − デンプン − − （17）その他の特徴 グルコン酸の酸化：陰性 アルギニンの分会：陰性 リジンの脱炭酸反応：陰性 オルニチンの脱炭酸反応：陰性 プロトカテキン酸の分解：メタ開裂 （18）その他 Tweenの分解 Tween40:陰性 Tween60:陰性 Tween80:陰性 DNase:陽性 ３−ケト乳酸の生成：陰性 （iv） 生育範囲 温度 20〜33℃ pH 5.5〜10 Doubling Time 27℃LB培地（pH7.4）で2.5hrs （ｖ） 炭素化合物の資化性 カテコール− ベンゼン− 安息香酸− フエルラ酸＋ ｐ−クマル酸＋ プロトカテキン酸＋ パラハイドロキシ安息香酸＋ バニリン酸＋ グルタミン酸ナトリウム＋ 本発明におけるシユードモナス属に属し且つ前記ジオ
キシゲナーゼ活性を有する酵素を酸生し得る菌株、殊に
菌株TMY1009株から、目的とする前記酵素を得るには、
それ自体公知のシユードモナス属の菌株が生育する培地
中で菌体を培養し、得られた培養物から酵素を分離すれ
ばよい。
（425）nm （３） オキシダーゼ：陽性 （４） カタラーゼ：陽性 （５） 酵素に対する態度：好気的 （６） Ｏ−Ｆテスト：酸化的条件で有機酸生成 （７） 脱窒反応：陰性 （８） MRテスト：陰性 （９） VPテスト：陰性 （10）インドールの生成：陰性 （11）硫化水素の生成：陰性 （12）デンプンの加水分解：陽性 （13）クエン酸の利用 Koserの培地：陰性 Chvistensenの培地：陽性 （14）無機窒素源の利用 硝酸塩：陰性 アンモニウム塩：陽性 （15）ウレアーゼ：陰性 （16）糖類から酸及びガスの生成 酸生成 ガス生成 Ｌ−アラビノース ＋ − Ｄ−キシロース ＋ − Ｄ−グルコース ＋ − Ｄ−マンノース ＋ − Ｄ−フラクトース ＋ − Ｄ−ガラクトース ＋ − 麦芽糖 ＋ − ショ糖 ＋ − 乳 糖 ＋ − トレハロース ＋ − Ｄ−ソルビット − − Ｄ−マンニット − − イノシット − − グリセリン − − デンプン − − （17）その他の特徴 グルコン酸の酸化：陰性 アルギニンの分会：陰性 リジンの脱炭酸反応：陰性 オルニチンの脱炭酸反応：陰性 プロトカテキン酸の分解：メタ開裂 （18）その他 Tweenの分解 Tween40:陰性 Tween60:陰性 Tween80:陰性 DNase:陽性 ３−ケト乳酸の生成：陰性 （iv） 生育範囲 温度 20〜33℃ pH 5.5〜10 Doubling Time 27℃LB培地（pH7.4）で2.5hrs （ｖ） 炭素化合物の資化性 カテコール− ベンゼン− 安息香酸− フエルラ酸＋ ｐ−クマル酸＋ プロトカテキン酸＋ パラハイドロキシ安息香酸＋ バニリン酸＋ グルタミン酸ナトリウム＋ 本発明におけるシユードモナス属に属し且つ前記ジオ
キシゲナーゼ活性を有する酵素を酸生し得る菌株、殊に
菌株TMY1009株から、目的とする前記酵素を得るには、
それ自体公知のシユードモナス属の菌株が生育する培地
中で菌体を培養し、得られた培養物から酵素を分離すれ
ばよい。
以下、上記菌株を生育および酵素を酸生するために使
用しうる培地の組成と酵素の抽出法について説明するが
これは単に説明のためであつて、本発明はこの組成の培
地および酵素の抽出法に限定されるわけではない。
用しうる培地の組成と酵素の抽出法について説明するが
これは単に説明のためであつて、本発明はこの組成の培
地および酵素の抽出法に限定されるわけではない。
炭素源としては、たとえばグルコース、フラクトース
などの炭水化物、エタノールのごとき有機化合物、コハ
ク酸などのごとき有機酸があげられ、これらは本発明の
菌株が利用できる１種または２種以上の炭素化合物を任
意に炭素源として利用できる。
などの炭水化物、エタノールのごとき有機化合物、コハ
ク酸などのごとき有機酸があげられ、これらは本発明の
菌株が利用できる１種または２種以上の炭素化合物を任
意に炭素源として利用できる。
また、窒素源としては、特に限定されないが例えば、
硫酸アンモニウム、硫酸アンモニウムなどの無機窒素化
合物、およびペプトンなどの有機窒素源が利用できる。
硫酸アンモニウム、硫酸アンモニウムなどの無機窒素化
合物、およびペプトンなどの有機窒素源が利用できる。
また、無機塩類としては、各種のリン酸塩、硫酸マグ
ネシウムなどが使用できる。さらに、微量の金属（鉄
塩、カルシウム塩など）を培地に含有させてもよい。
ネシウムなどが使用できる。さらに、微量の金属（鉄
塩、カルシウム塩など）を培地に含有させてもよい。
培養方法としては、振とう培養法、深部通気撹拌培養
法などの方法により行うことができる。培養温度は、例
えば20℃〜33℃、pHは６〜10程度の範囲が好ましくあげ
られる。また培養日数は、特に限定されないがたとえ
ば、通常は１〜７日の範囲で行われる。
法などの方法により行うことができる。培養温度は、例
えば20℃〜33℃、pHは６〜10程度の範囲が好ましくあげ
られる。また培養日数は、特に限定されないがたとえ
ば、通常は１〜７日の範囲で行われる。
このようにして酵素が生産蓄積された培養物中の菌体
を超音波処理により破壊して得られる無細胞抽出液を分
離し、得られた無細胞抽出液中の低分子物を除くために
リン酸ナトリウム緩衝液で透析処理することにより酵素
液が得られる。
を超音波処理により破壊して得られる無細胞抽出液を分
離し、得られた無細胞抽出液中の低分子物を除くために
リン酸ナトリウム緩衝液で透析処理することにより酵素
液が得られる。
かくして本発明方法においては、前記酵素液自体或い
は、その酵素液から精製された酵素を前記一般式［Ｉ］
のスチレン誘導体と好気的条件下で接触せしめ、かくし
て目的とするアルデヒド類を得ることが可能となる。
は、その酵素液から精製された酵素を前記一般式［Ｉ］
のスチレン誘導体と好気的条件下で接触せしめ、かくし
て目的とするアルデヒド類を得ることが可能となる。
その際の温度は20〜50℃、好ましくは30〜40℃の範囲
が有利でありpHは６〜10、好ましくは6.5〜9.5範囲が望
ましい。
が有利でありpHは６〜10、好ましくは6.5〜9.5範囲が望
ましい。
また反応は、バツチ方式または連続方式いずれで行な
ってもよく、さらに酵素は、固定化して使用しても差支
えない。
ってもよく、さらに酵素は、固定化して使用しても差支
えない。
以下実施例を挙げて本発明を詳述する。
実施例（１） 酵素液の調製 １の栄養培地（LB）でTMY1009株を約22時間好気的
に27℃で振とう培養することにより湿菌体約3.5gが得ら
れた。菌体を集菌、洗浄後15mlの50mMリン酸ナトリウム
緩衝液に懸濁した後、超音波処理することにより菌体を
破壊し、遠心分離処理した（10,000×ｇ、20min）。得
られた無細胞抽出液中の低分子物を除くために20mMリン
酸ナトリウム緩衝液（pH7.5）で透析を行ない粗酵素液
とした（タンパク濃度:15.4mg/ml）。
に27℃で振とう培養することにより湿菌体約3.5gが得ら
れた。菌体を集菌、洗浄後15mlの50mMリン酸ナトリウム
緩衝液に懸濁した後、超音波処理することにより菌体を
破壊し、遠心分離処理した（10,000×ｇ、20min）。得
られた無細胞抽出液中の低分子物を除くために20mMリン
酸ナトリウム緩衝液（pH7.5）で透析を行ない粗酵素液
とした（タンパク濃度:15.4mg/ml）。
実施例（２） バニリンの製法 a.イソオイゲノール１μmolを含む450μの緩衝液（pH
7.5）に酵素液（15.4mg/ml）を50μ加え26℃で30分間
インキユベートする。50μの1N HClを加え酸性にし
たのち、500μの酢酸エチルで抽出する。抽出液をHPL
Cで定量分析した結果、0.16μmolのバニリンを認めた。
この結果から本酵素の力価を計算すると0.11ユニツトで
あった。ここで１ユニツトは１分間に１μmolのバニリ
ンを生成する酵素の量をいう。
7.5）に酵素液（15.4mg/ml）を50μ加え26℃で30分間
インキユベートする。50μの1N HClを加え酸性にし
たのち、500μの酢酸エチルで抽出する。抽出液をHPL
Cで定量分析した結果、0.16μmolのバニリンを認めた。
この結果から本酵素の力価を計算すると0.11ユニツトで
あった。ここで１ユニツトは１分間に１μmolのバニリ
ンを生成する酵素の量をいう。
HPLCの測定条件 機 種;Shimadzu LC−6A カラム;LiChrosorb RP−18（4.6×250mm） 溶 出;0.05％リン酸水（Ａ）／アセトニトリル（Ｂ）
＝70/30…（５分間）…（Ａ）／（Ｂ）＝70/30…（incr
easing 5％ per min）…（Ａ）／（Ｂ）＝0/100 上記におけるバニリンの保持時間は6.1分 b.実施例ａと同じ条件下に基質としてイソラボテン１μ
molを用いて行った結果、0.16μmolのバニリンを認め
た。また3,5−ジヒドロキシベンズアルデヒドも認めら
れた。
＝70/30…（５分間）…（Ａ）／（Ｂ）＝70/30…（incr
easing 5％ per min）…（Ａ）／（Ｂ）＝0/100 上記におけるバニリンの保持時間は6.1分 b.実施例ａと同じ条件下に基質としてイソラボテン１μ
molを用いて行った結果、0.16μmolのバニリンを認め
た。また3,5−ジヒドロキシベンズアルデヒドも認めら
れた。
実施例（３） バニリンの製法 a.5−［２′−（４″−ヒドロキシ−３″−メトキシフ
エニル）ビニル］フエルラ酸1.2μmolを含む950μの
リン酸ナトリウム緩衝液（pH7.5）に酵素液（15.4mg/m
l）50μ加え27℃で30分間インキユベートした。酵素
１μmolが消費された時点で反応を止めた。この反応生
成物を1000μの酢酸エチルで抽出し、HPLCで定量分析
した結果、１μmolのバニリンと１μmolの５−ホルミル
フエルラ酸を認めた。HPLCの測定条件は、実施例（２）
のａと同条件で測定。
エニル）ビニル］フエルラ酸1.2μmolを含む950μの
リン酸ナトリウム緩衝液（pH7.5）に酵素液（15.4mg/m
l）50μ加え27℃で30分間インキユベートした。酵素
１μmolが消費された時点で反応を止めた。この反応生
成物を1000μの酢酸エチルで抽出し、HPLCで定量分析
した結果、１μmolのバニリンと１μmolの５−ホルミル
フエルラ酸を認めた。HPLCの測定条件は、実施例（２）
のａと同条件で測定。
b.実施例（２）のａと同じ条件下に1,2−ビス−（４−
ヒドロキシ−３−メトキシフエニル）エチレン１μmol
を用いて反応し、酵素0.54μmolが消費された時点で反
応を止めた。この反応生成物を1000μの酢酸エチルで
抽出し、HPLCで定量分析した結果、1.1μmolのバニリン
を認めた。
ヒドロキシ−３−メトキシフエニル）エチレン１μmol
を用いて反応し、酵素0.54μmolが消費された時点で反
応を止めた。この反応生成物を1000μの酢酸エチルで
抽出し、HPLCで定量分析した結果、1.1μmolのバニリン
を認めた。
実施例（４） ｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドの製造 実施例（２）のａと同じ条件下に基質としてピソイド
１μmolを用いて行つた。HPLCで定量分析した結果、0.1
6μmolのｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドを認めた。
１μmolを用いて行つた。HPLCで定量分析した結果、0.1
6μmolのｐ−ヒドロキシベンズアルデヒドを認めた。
HPLCの測定条件は、実施例（２）のａと同じ条件で行
つた。
つた。
実施例（５） ジヒドロキシベンズアルデヒドの製造 実施例（２）のａと同じ条件下に基質としてアストリ
ジン１μmolを用いて行つた。HPLCで定量分析した結
果、0.026μmolのジヒドロキシベンズアルデヒドを認め
た。HPLCの測定条件は、実施例（２）のａと同じ条件で
行つた。
ジン１μmolを用いて行つた。HPLCで定量分析した結
果、0.026μmolのジヒドロキシベンズアルデヒドを認め
た。HPLCの測定条件は、実施例（２）のａと同じ条件で
行つた。
Claims (2)
- 【請求項１】下記一般式［Ｉ］ 式中、 R1は炭素数１〜10の直鎖もしくは分岐状アルキル基、炭
素数６〜10のアリール基、炭素数５〜15のシクロアルキ
ル基、基−COOR1（ここでR1は水素原子または炭素数１
〜10のアルキル基を示す）、ホルミル基または を示し、 但し、上記アルキル基、シクロアルキル基およびアリー
ル基は置換基を有していてもよく、 R2、R3、R4、R5およびR6は同一もしくは異なり、それぞ
れ水素原子、水酸基もしくはその配糖体、炭素数１〜10
の直鎖もしくは分岐状アルキル基または炭素数１〜10の
アルコキシ基を示すか、或いはこれらのうちの互いに隣
接する２つの基は一緒になってCH2 ｎ、−ＯCH2
ｎまたは−ＯCH2 nO−（ここでｎは１〜４の整数を
示す）を形成していてもよい、 で表わされるスチレン誘導体を、シユードモナス属に属
する細菌により産生され且つ以下の理化学的性質： （ａ） 作用および基質特異性 上記一般式［Ｉ］で表わされるスチレン誘導体中のベン
ゼン環に共役したエチレン結合に選択的に作用しアルデ
ヒド類に転換せしめる作用を有する。 （ｂ） 至適pHおよび安定pHの範囲 至適pH:6〜10 安定pHの範囲:6.5〜9.5 （ｃ） 作用適温の範囲 pH8.0で20〜50℃ （ｄ） 失活条件 pH5以下または12以上で失活 温度60℃以上で失活 （ｅ） 分子量 SDS−PAGE電気泳動法によって測定された分子量は52,00
0であり、また、ゲル濾過法で求められた分子量は94,00
0である （ｆ） 阻害、活性化および安定化 酵素反応液に各阻害剤を加えてpH8.0、50℃で10分間反
応させた後の酵素活性を、阻害剤を加えない場合の酵素
活性を100とした相対活性で示すと次のとおりである を有するジオキシゲナーゼと好気的条件下に接触せしめ
ることを特徴とするアルデヒド類の製造方法。 - 【請求項２】該菌株がTMY1009株である特許請求の範囲
第１項記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP5511289A JP2679739B2 (ja) | 1988-10-25 | 1989-03-09 | アルデヒド類の製造方法 |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP63-267285 | 1988-10-25 | ||
| JP26728588 | 1988-10-25 | ||
| JP5511289A JP2679739B2 (ja) | 1988-10-25 | 1989-03-09 | アルデヒド類の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH02200192A JPH02200192A (ja) | 1990-08-08 |
| JP2679739B2 true JP2679739B2 (ja) | 1997-11-19 |
Family
ID=26395965
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP5511289A Expired - Fee Related JP2679739B2 (ja) | 1988-10-25 | 1989-03-09 | アルデヒド類の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2679739B2 (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE4227076A1 (de) * | 1992-08-17 | 1994-02-24 | Haarmann & Reimer Gmbh | Verfahren zur Herstellung substituierter Methoxyphenole und dafür geeignete Mikroorganismen |
| FR2729661B1 (fr) * | 1995-01-19 | 1997-04-04 | Mane Fils V | Procede de preparation de substances aromatiques par voie biochimique |
| GB9606187D0 (en) * | 1996-03-23 | 1996-05-29 | Inst Of Food Research | Production of vanillin |
| WO2008005631A2 (en) | 2006-07-07 | 2008-01-10 | Washington State University | Genes encoding chavicol/eugenol synthase from the creosote bush larrea tridentata |
| DE102010039833A1 (de) | 2010-08-26 | 2012-03-01 | Symrise Ag | Ganzzell-Biotransformation von Fettsäuren zu den um ein Kohlenstoffatom verkürzten Fettaldehyden |
| WO2020223417A1 (en) * | 2019-04-29 | 2020-11-05 | Conagen Inc. | Biosynthesis of vanillin from isoeugenol |
-
1989
- 1989-03-09 JP JP5511289A patent/JP2679739B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH02200192A (ja) | 1990-08-08 |
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