JP2641742B2 - New peptides and antibacterial agents - Google Patents
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Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、北米産カブトガニ（Limulus polyphemus）
から抽出、単離した抗菌作用を有する新規ペプチド及び
その塩、並びにこれらを含有して成る抗菌剤に関するも
のである。DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION INDUSTRIAL APPLICATION The present invention relates to a North American horseshoe crab (Limulus polyphemus).
The present invention relates to a novel peptide having an antibacterial activity and a salt thereof, extracted and isolated from the same, and an antibacterial agent comprising these.
近年、有用な生理活性物質としてペプチド類が注目さ
れている。プロテインエンジニアリングの発展に伴っ
て、従来の天然型のペプチド類のみならず、合成タイプ
のペプチド類の開発研究も積極的に進められており、有
用なペプチド類の開発は、これまで医薬の分野を中心に
かなりの実績をあげている。In recent years, peptides have been attracting attention as useful physiologically active substances. With the development of protein engineering, research and development of not only conventional natural peptides but also synthetic peptides has been actively promoted, and the development of useful peptides has Has achieved considerable achievements in the center.
抗菌作用を有するペプチド類の開発も、従来かなり積
極的に行われており、これまで、比較的低分子のオリゴ
ペプチド類を中心として数多くの報告がなされている。
例えば、グラム陽性菌及びグラム陰性菌に対して抗菌作
用を有するホスホノトリペプチド類（特開昭57−10668
9）、ホスホノジペプチド誘導体（特開昭58−13594）、
環状ペプチド誘導体（特開昭58−213744）、抗菌剤及び
抗ウィルス剤として有用な10個のアミノ酸配列から成る
新規ペプチド（特開昭59−51247）、酵母類に対する抗
菌剤として有用なポリペプチド（特開昭60−130599）、
グラム陽性菌に対する抗菌剤として有用な糖ペプチド誘
導体（特開昭60−172998）、新規グリコペプチド誘導体
（特開昭61−251699、特開昭63−44598）、グラム陽性
菌に対して有用なオリゴペプチド（特開昭62−2279
8）、ペプチド系抗生物質（特開昭62−51697、特開昭63
−17897）等、多数報告されている。The development of peptides having an antibacterial action has also been carried out quite aggressively, and many reports have been made so far, mainly on relatively low molecular weight oligopeptides.
For example, phosphonotripeptides having antibacterial activity against Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria (Japanese Patent Laid-Open No. 57-10668).
9), phosphonodipeptide derivatives (JP-A-58-13594),
Cyclic peptide derivatives (JP-A-58-213744), novel peptides consisting of 10 amino acid sequences useful as antibacterial agents and antiviral agents (JP-A-59-51247), polypeptides useful as antibacterial agents against yeasts ( JP-A-60-130599),
Glycopeptide derivatives useful as antibacterial agents against Gram-positive bacteria (JP-A-60-172998), novel glycopeptide derivatives (JP-A-61-251699, JP-A-63-44598), oligos useful for Gram-positive bacteria Peptides (JP-A-62-2279)
8), peptide antibiotics (JP-A-62-51697, JP-A-63
−17897).
しかしながら、従来技術の中には、必ずしも実用化に
到らず、基礎研究の域を出ないものも少なからず散見さ
れ、ペプチド系の抗菌剤の開発がいまだ発展途上にある
ことが理解されるが、いずれにしても、優れた抗菌作用
を有し、抗菌剤として実用化し得る新規ペプチド類を開
発することは、ペプチド類の新し応用領域を確立する上
できわめて重要なことと思われる。However, some of the conventional technologies have not always been put to practical use and have not been out of the scope of basic research, and it is understood that the development of peptide-based antibacterial agents is still under development. In any case, developing new peptides that have excellent antibacterial activity and can be practically used as antibacterial agents seems to be extremely important in establishing a new application field of peptides.
このような見地から、本発明者は、有用な新規ペプチ
ド類を種々探索した結果、北米産カブトガニ（Limulus
polyphemus）の血球中より抽出、単離したペプチドが、
強力な抗菌作用を有することを見い出して本発明を完成
するに至った。From such a point of view, the present inventor has conducted various searches for useful novel peptides and, as a result, found that the horseshoe crab (Limulus
polyphemus), extracted and isolated from the blood cells,
The inventors have found that the present invention has a strong antibacterial action, and have completed the present invention.
すなわち、本発明は、以下の（１）〜（２）に記載す
る記述的事項を含有するものとして認識される。That is, the present invention is recognized as including the descriptive matters described in the following (1) and (2).
１）次の構造式（Ｉ） （式中、と、とは、それぞれ直接に結合してい
る。Arg−NH2は、アルギニンのカルボキシル基がアミド
であることを示す。） で表わされるペプチド、及びその塩。1) The following structural formula (I) (Wherein, and are directly bonded to each other. Arg-NH 2 indicates that the carboxyl group of arginine is an amide.) And a salt thereof.
２）次の構造式（Ｉ） （式中、と、とは、それぞれ直接に結合してい
る。Arg−NH2は、アルギニンのカルボキシル基がアミド
であることを示す。） で表されるペプチド、及びその塩を有効成分とする抗菌
剤。2) The following structural formula (I) (Wherein, and are directly bonded to each other. Arg-NH 2 indicates that the carboxyl group of arginine is an amide.) And a salt thereof as an active ingredient Antibacterial agent.
このように、本発明は、強力な抗菌作用を有する新規
ペプチド、及びその塩を提供すると共に、それらを有効
成分とする抗菌剤を提供することを目的とするものであ
る。Thus, an object of the present invention is to provide a novel peptide having a strong antibacterial action, and a salt thereof, and an antibacterial agent containing them as an active ingredient.
なお、この明細書においてこの新規ペプチドをポリフ
ェムシンＩ（Polyphemusin I）と称する。また、この明
細書において、アミノ酸につき、IUPACIUB commission
on Biological Nomenclatureに基づく略号で表示する場
合があるが、それらを例示すると次の通りである。In this specification, this novel peptide is referred to as Polyphemusin I. In addition, in this specification, the IUPACIUB commission
Abbreviations based on on Biological Nomenclature may be displayed, but examples are as follows.
Arg:アルギニン、Trp:トリプトファン、Cys:1/2シスチ
ン、Phe:フェニルアラニン、Val:バリン、Tyr:チロシ
ン、Gly:グリシン、Lys:リジン 本発明の新規ポリフェムシンＩは、18個のアミノ酸よ
り構成され、その第４位と第17位、及び第８位と第13位
に存在する各システイン分子対間のジスルフィド結合に
より架橋された二環構造を有する。また、Ｃ末端に存在
するアルギニンは、そのカルボキシル基がアミド化（−
CONH2）され、アルギニンアミドとして存在している。
本発明のポリフェムシンＩは、塩の形をとることがで
き、例えば、アルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩アン
モニウム塩、有機アミン塩等の無機塩基、有機塩基との
塩、及び、トリフルオロ酢酸、メタンスルホン酸、塩
酸、硫酸、硝酸、燐酸等の有機酸又は無機酸の付加塩が
含まれる。Arg: arginine, Trp: tryptophan, Cys: 1/2 cystine, Phe: phenylalanine, Val: valine, Tyr: tyrosine, Gly: glycine, Lys: lysine The novel polyfemcine I of the present invention is composed of 18 amino acids, It has a bicyclic structure bridged by disulfide bonds between each pair of cysteine molecules present at positions 4 and 17 and at positions 8 and 13. In addition, arginine present at the C-terminal has its carboxyl group amidated (−
CONH 2 ) is present as argininamide.
The polyfemsin I of the present invention can be in the form of a salt, for example, an inorganic base such as an alkali metal salt, an alkaline earth metal salt ammonium salt, an organic amine salt, a salt with an organic base, and trifluoroacetic acid. Addition salts of organic or inorganic acids such as methanesulfonic acid, hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid and the like are included.
本発明の新規ポリフェムシンＩ及びその塩は、以下の
方法によって製造することができる。The novel polyphemsin I of the present invention and a salt thereof can be produced by the following method.
すなわち、北米産カブトガニ（Limulus polyphemus）
の血球に、塩化ナトリウム及びベンズアミジン塩酸塩を
含むトリス塩酸緩衝液を加え粉砕し、これを遠心して沈
澱物を得る。これに塩酸溶液を加え粉砕し、遠心し上澄
を得る。これをSephadex Ｇ−50に添加して、塩酸溶液
で溶出する。280nmにおける吸光度を測定して集めた溶
出区分を、コスモシール 5C18に添加しアセトニトリル
の濃度を変化させたトリフルオロ酢酸溶液で溶出するこ
とにより、目的のポリフェムシンＩ画分を得る。 That is, horseshoe crab (Limulus polyphemus) from North America
Blood cells with sodium chloride and benzamidine hydrochloride
Tris-HCl buffer solution was added and crushed.
Obtain a sediment. Add hydrochloric acid solution to this, pulverize, centrifuge and supernatant
Get. This is Sephadex Hydrochloric acid solution added to G-50
Elute at The solution collected by measuring the absorbance at 280 nm
Cosmoseal Acetonitrile added to 5C18
Elution with trifluoroacetic acid solutions with varying concentrations of
As a result, a desired polyphemsin I fraction is obtained.
また、本発明のポリフェムシンＩは、固相法による合
成も可能である。この方法を本発明に適用する場合、α
−アミノ基はいずれのアミノ酸についてもtert−ブチル
オキシカルボニル基（Boc基）で保護し、チロシンの水
酸基は、2,6−ジクロロベンジル基（Cl2−Bzl基）で、
アルギニンのグアニジノ基はトシル基（Tos基）で、そ
れぞれ保護するのが好適である。まず、Ｃ末端アミノ酸
のアルギニンの保護誘導体をクロロメチル樹脂に導入
し、以後順次アミノ酸鎖を延長し、保護ペプチド樹脂を
合成し、これをフッ化水素で処理することにより保護ペ
プチドを樹脂から切断し、同時に脱保護し、これを還元
し、以下、常法に従って合成ペプチドを得る。得られた
粗合成ペプチドは、ゲル濾過、逆相HPLC等ペプチドの精
製に常用される手段により精製し高純度のポリフェムシ
ンＩを得る。なお、ペプチド合成に常用される固相法に
ついては、例えば、日本生化学会編、「生化学実験講座
（Ｉ）」蛋白質の化学、４巻、208〜495頁、（株）東京
化学同人発行（1977）、及び、泉屋信夫ほか著、「ペプ
チド合成」丸善（株）発行（1975）に記載されているメ
リフィールド（Merrifield）等の方法に準じて行うこと
ができる。In addition, the polyfemsin I of the present invention can be synthesized by a solid phase method. When this method is applied to the present invention, α
The amino group is protected with a tert-butyloxycarbonyl group (Boc group) for any amino acid, the tyrosine hydroxyl group is a 2,6-dichlorobenzyl group (Cl 2 -Bzl group),
The guanidino group of arginine is preferably a tosyl group (Tos group), which is preferably protected. First, a protected derivative of arginine at the C-terminal amino acid is introduced into a chloromethyl resin. Thereafter, the amino acid chain is extended to synthesize a protected peptide resin, which is treated with hydrogen fluoride to cleave the protected peptide from the resin. And deprotection at the same time and reducing the same to obtain a synthetic peptide according to a conventional method. The obtained crude synthetic peptide is purified by means commonly used for peptide purification such as gel filtration and reverse phase HPLC to obtain high-purity polyphemsin I. The solid phase method commonly used for peptide synthesis is described in, for example, “Biochemical Experiment Course (I)” edited by The Biochemical Society of Japan, Protein Chemistry, Vol. 4, pp. 208-495, published by Tokyo Kagaku Dojin ( 1977) and Nobuo Izumiya et al., "Peptide Synthesis", published by Maruzen Co., Ltd. (1975), according to the method of Merrifield and the like.
本発明のポリフェムシンＩの毒性は、極めて低いか又
は非毒性である。このポリフェムシンＩを医療用抗菌剤
として投与する場合は経口投与法又は非経口的投与方
法、すなわち静脈内投与、筋肉内投与、皮下投与等が好
ましい。そして、１投与単位当りのポリフェムシンＩの
使用量は100〜1000mg程度である。更に、本発明のポリ
フェムシンＩは医療用抗菌剤以外に防腐剤、抗生物質、
塗料用防腐剤として有効に使用することができる。The toxicity of the polyfemsin I of the present invention is extremely low or non-toxic. In the case of administering this polyfemsin I as a medical antibacterial agent, an oral administration method or a parenteral administration method, that is, an intravenous administration, an intramuscular administration, a subcutaneous administration and the like are preferable. The amount of polyfemsin I used per administration unit is about 100 to 1000 mg. Further, the polyphemsin I of the present invention may contain preservatives, antibiotics,
It can be effectively used as a preservative for paint.
本発明のポリフェムシンＩは、後記参考例に示すよう
に、例えば、グラム陽性細菌、グラム陰性細菌及び真菌
類に対して強い抗菌作用を示し、これら細菌の抑制剤と
して有用である。具体的には、医療用抗菌剤、防腐剤、
抗生物質、塗料用防腐剤等、広汎な分野で利用すること
が可能であり、これらは、いずれも本発明の抗菌剤の範
囲に包含されることはいうまでもない。As shown in Reference Examples below, the polyphemsin I of the present invention exhibits strong antibacterial activity against, for example, Gram-positive bacteria, Gram-negative bacteria, and fungi, and is useful as an inhibitor for these bacteria. Specifically, medical antimicrobial agents, preservatives,
It can be used in a wide variety of fields such as antibiotics and preservatives for paints, and it goes without saying that all of them are included in the scope of the antibacterial agent of the present invention.
以下、本発明の実施例を記載して、さらに本発明を詳
細に説明する。Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples of the present invention.
実施例１ （１） ポリフェムシンＩの製造 北米産カブトガニ（Limulus polyphemus）血球37gに5
0mM塩化ナトリウム及び5mMベンズアミジン塩酸塩を含む
20mMトリス塩酸緩衝液（pH8.0）100mlを加え粉砕し、４
℃で遠心（7500rpm、40分）して沈澱を得た。さらにこ
の操作を２回くりかえし沈澱を得た。得られた沈澱に20
mM塩酸溶液100mlを加え粉砕する。４℃で遠心（7500rpm
40分）して上澄を得た。沈澱には20mM塩酸溶液100mlを
加え再度粉砕し、４℃で遠心（7500rpm40分）して上澄
を得た。さらに２回同様の操作を行い上澄を得た。得ら
れた上澄は集め凍結乾燥した。Example 1 (1) Production of polyphemsin I 5 g of 37 g of Limulus polyphemus blood cells from North America
Contains 0 mM sodium chloride and 5 mM benzamidine hydrochloride
Add 100 ml of 20 mM Tris-HCl buffer (pH 8.0) and pulverize.
The precipitate was obtained by centrifugation at 7,500 rpm (40 minutes). This operation was repeated twice to obtain a precipitate. 20 in the resulting precipitate
Add 100 ml of mM hydrochloric acid solution and pulverize. Centrifuge at 4 ° C (7500rpm
40 minutes) to obtain a supernatant. To the precipitate, 100 ml of a 20 mM hydrochloric acid solution was added, and the mixture was pulverized again and centrifuged at 4 ° C. (7500 rpm for 40 minutes) to obtain a supernatant. The same operation was further performed twice to obtain a supernatant. The obtained supernatant was collected and freeze-dried.
上記の凍結乾燥物を20mM塩酸溶液に溶解し、４℃で遠
心（12,000rpm15分）して上澄を得た。これをSephadex
Ｇ−50（ファルマシア社製）カラム（３×85cm）に添
加し、20mM塩酸溶液で溶出した。これを10mlづつ分画し
ながら同時に280nmにおける吸光度を測り、分画番号66
−87の画分を集め、これを凍結乾燥した。（第１図参
照）。この凍結乾燥物を20mM塩酸溶液10mlに溶解しコス
モシール 5C18（半井化学薬品社製）カラム（10×250m
m）に添加し、アセトニトリルの濃度を22〜30％に変化
させた0.1％トリフルオロ酢酸溶液で溶出した。この溶
出溶液を第２図に示す。このカラムを28〜30％アセトニ
トリルで溶出し、得られる溶出区分を集め凍結乾燥する
ことにより本発明のポリフィムシンＩを得た。収量は20
mgであった。 Dissolve the above lyophilized product in 20 mM hydrochloric acid solution and centrifuge at 4 ° C.
The supernatant was obtained with the heart (12,000 rpm for 15 minutes). This is Sephadex
G-50 (Pharmacia) column (3 x 85cm)
And eluted with a 20 mM hydrochloric acid solution. This is fractionated by 10ml
While simultaneously measuring the absorbance at 280 nm, fraction number 66
The -87 fraction was collected and lyophilized. (See Figure 1
See). This lyophilized product is dissolved in 10 ml of 20 mM hydrochloric acid solution and
Moshir 5C18(Hansui Chemicals) column (10 × 250m
m) and change the concentration of acetonitrile to 22-30%
Elution was performed with a 0.1% trifluoroacetic acid solution. This solution
The eluate is shown in FIG. Use this column with 28-30% acetonitrile.
Eluting with trill, collecting the resulting elution fractions and freeze-drying
As a result, polyfimsin I of the present invention was obtained. Yield 20
mg.
このポリフェムシンＩの赤外線吸収スペクトルは第３
図の通りであり、3,300、1650、1540、1420、1240、及
び740cm-1に吸収がある。また、紫外吸収スペクトルは
第４図の通りである。このポリフェムシンＩのアミノ酸
組成は第１表の通りである。The infrared absorption spectrum of this polyphemsin I is the third
As shown, there are absorptions at 3,300, 1650, 1540, 1420, 1240, and 740 cm -1 . The ultraviolet absorption spectrum is as shown in FIG. Table 1 shows the amino acid composition of this polyfemsin I.
（２）構造決定 本物質の構造は以下の如くして決定された。即ち、ジ
チオトレイトールを用いジスルフィド結合を切断し、４
−ビニルピリジンでピリジルエチル化したサンプルを6N
塩酸を用い加水分解しアミノ酸組成を決定した。また、
このサンプルを気相シークエンサーを用いて17回のエド
マン分解に附し、Ｎ末端のアルギニンから17番目のシス
テインに至るアミノ酸の種類と結合の順序を決定した。
また、アミノエチル化したサンプルをリシルエンドペプ
チダーゼ処理してＣ末端残基を遊離させて得られた生成
物のフェニルチオカルバミル誘導体の逆相高速液体クロ
マトグラフィー上での溶出時間は、別に合成したフェニ
ルチオカルバミルアルギニンアミドのそれと一致した。
さらに質量分析結果もＣ末端をアルギニンとアミドとし
た質量数を示したのでＣ末端はアルギニンアミドである
と決定した。 (2) Structure determination The structure of this substance was determined as follows. That is, the disulfide bond is cleaved using dithiothreitol, and 4
-6N of pyridylethylated sample with vinylpyridine
Hydrolysis was performed using hydrochloric acid to determine the amino acid composition. Also,
This sample was subjected to 17 times of Edman degradation using a gas-phase sequencer to determine the types of amino acids from the N-terminal arginine to the 17th cysteine and the binding order.
The aminoethylated sample was treated with lysyl endopeptidase to release the C-terminal residue. The elution time of the phenylthiocarbamyl derivative obtained on reversed-phase high performance liquid chromatography was separately synthesized. Consistent with that of phenylthiocarbamylargininamide.
Furthermore, the mass spectrometry results also showed the mass number where the C-terminal was defined as arginine and amide, so it was determined that the C-terminal was arginine amide.
実施例２ ポリフェムシンＩの製剤化 本発明のポリフェムシンＩ活性成分を含む経口又は非
経口投与用の製剤例を以下に示す。Example 2 Formulation of Polyfemcin I Formulation Examples of a formulation for oral or parenteral administration containing the active ingredient of polyfemsin I of the present invention are shown below.
（１）200mg錠剤 ポリフェムシンＩ 200mg コーンスターチ 40mg ラクトース 98mg ステアリン酸マグネシウム 8mg タルク 4mg （２）100mg注射用アンプル（q.s.pアンプル） ポリフェムシンＩ 100mg 注射用蒸留水 適量 （３）500mgカプセル ポリフェムシンＩ 500mg ラクトース 50mg ステアリン酸マグネシウム 5mg （４）500mg錠剤 ポリフェムシンＩ 500mg コーンスターチ 70mg ポリビニルピロリドン 35mg ラクトース 74mg ステアリン酸マグネシウム 14mg タルク 7mg 以下に、本発明のペプチドポリフェムシンＩの抗菌活
性について検討した結果を参考例として示す。(1) 200 mg tablet polyfemosine I 200 mg corn starch 40 mg lactose 98 mg magnesium stearate 8 mg talc 4 mg (2) 100 mg injectable ampoule (qsp ampoule) polyfemsin I 100 mg distilled water for injection qs (3) 500 mg capsule polyfemsin I 500 mg lactose 50 mg magnesium stearate 5 mg (4) 500 mg tablet Polyfemsin I 500 mg Corn starch 70 mg Polyvinylpyrrolidone 35 mg Lactose 74 mg Magnesium stearate 14 mg Talc 7 mg The results of the antimicrobial activity of the peptide polyfemsin I of the present invention are shown below as reference examples.
参考例 （１）グラム陽性細菌、グラム陰性細菌に対する抗菌性
試験 実験材料 供試菌:Escherichia coli ATCC 11775 Salmonela typhimurium Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bicillus subtilis IAM 1069 培地 ：牛心臓侵出液 250g カザミノ酸 15 ｇ L−トリプトファン 0.05g 精製水 1000ml 実験方法 各菌をNutrient Broth （Difico社製）培地で20時間
振とう培養後、菌の濃度を660nmの吸光度が約0.3になる
ように調整し、その0.1mlを上記培地に加えたものを供
試菌液とした。本物質凍結乾燥品300μｇを精製水12ml
に溶解し250μg/mlの溶液を得る。これを原液として２
倍階段希釈を行い12.5、6.25、3.13、1.56μg/mlの試料
液を得た。Reference example (1) Antibacterial activity against Gram-positive bacteria and Gram-negative bacteria
Test Experimental material Test organism: Escherichia coli ATCC 11775 Salmonela typhimurium Staphylococcus aureus ATCC 25923 Bicillus subtilis IAM 1069 Medium: Bovine heart exudate 250 g Casamino acid 15 g L-tryptophan 0.05 g Purified water 1000 ml Experimental method Nutrient Broth 20 hours in medium (Difico)
After shaking culture, the concentration of the bacteria is reduced to about 0.3 at 660 nm.
And add 0.1 ml to the above medium.
A test solution was used. 300 μg of this substance freeze-dried product in 12 ml of purified water
To give a 250 μg / ml solution. Use this as a stock solution 2
12.5, 6.25, 3.13, 1.56 μg / ml samples after performing serial dilution
A liquid was obtained.
減菌した試験管に各濃度の試料液を1mlずつ分注しこ
れに各菌液1mlずつを加え混合し37℃で20時間培養し、6
60nmの吸光度を測定した。対照は試料液のかわりに精製
水を用い、本物質の各菌に対する最小生成育阻害濃度を
決定した。その結果を第２表に示す。Dispense 1 ml of each concentration of the sample solution into a sterilized test tube, add 1 ml of each bacterial solution thereto, mix, and incubate at 37 ° C for 20 hours.
The absorbance at 60 nm was measured. As a control, purified water was used in place of the sample solution, and the minimum production-inhibitory concentration of this substance for each bacterium was determined. Table 2 shows the results.
（２）真菌類に対する抗菌生試験 実験材料 供試菌:Aspergillus nigar Psnicillium funiculosum 培地 ：ポリペプトン 1g 麦芽エキス 20g ブドウ糖 20g 寒天 20g 精製水 1000ml 実験方法 本物質の凍結乾燥品500μｇを2mlの精製水に溶き250
μg/mlの試料液を得た。これを二倍階段希釈し125、62.
5、31.3μg/mlの試料液を作成した。 (2) Antibacterial test against fungi Experimental materials Test bacteria: Aspergillus nigar Psnicillium funiculosum Medium: polypeptone 1 g malt extract 20 g dextrose 20 g agar 20 g purified water 1000 ml Experimental method Dissolve 500 μg of the lyophilized product of this substance in 2 ml purified water 250
A sample solution of μg / ml was obtained. This was serially diluted twice, and 125 and 62.
5, a sample solution of 31.3 μg / ml was prepared.
上記培地9mlに各濃度の試料液を1mlずつ加え、これを
5mlずつ減菌した試験管に分注し斜面培地を作成した。
この斜面培地上に上記菌の分生子を付着させた白金耳で
直線をひき、30℃で48時間培養し、その生育を調べた。
その結果を第２表に示す。Add 1 ml of each concentration of sample solution to 9 ml of the above medium, and add
Each 5 ml was dispensed into a sterilized test tube to prepare a slant medium.
A straight line was drawn with a platinum loop on which the conidia of the above bacterium was adhered on the slant medium, and cultured at 30 ° C. for 48 hours, and the growth was examined.
Table 2 shows the results.
上記の結果が示す様に、本物質は、グラム陽性菌、グ
ラム陰性菌及び真菌類までに至る広範囲の微生物に対し
て強い抗菌活性を示す特異な物質であることが判明し
た。 As the above results indicate, this substance was found to be a unique substance showing strong antibacterial activity against a wide range of microorganisms ranging from gram-positive bacteria, gram-negative bacteria and fungi.
第１図は、Sephadex Ｇ−50カラムにおける20mM塩酸溶
液抽出物の溶出曲線を示す図、第２図はコスモシール
5C18カラムにおける0.1％トリフルオロ酢酸溶液の溶出
曲線を示す図、第３図はポリフェムシンＩの赤外吸収ス
ペクトルの図、第４図はポリフェムシンＩの紫外吸収ス
ペクトルを示す図である。 Fig. 1 shows Sephadex 20 mM hydrochloric acid dissolved in G-50 column
FIG. 2 shows the elution curve of the liquid extract.
5C18Elution of 0.1% trifluoroacetic acid solution on column
FIG. 3 shows the infrared absorption spectrum of polyphemsin I.
Fig. 4 shows the ultraviolet absorption spectrum of polyphemsin I.
It is a figure showing a spectrum.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，106，663− 668（1989) Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ，Ｂｕｌｌ．, 37（10），2661−2664（1989) ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of front page (56) References Biochem. , 106, 663-668 (1989) Chem. Pharm, Bull. , 37 (10), 261-2664 (1989)
Claims (2)
る。Arg−NH2は、アルギニンのカルボキシル基がアミド
であることを示す。） で表されるペプチド及びその塩。(1) The following structural formula (I) (Wherein, and are directly bonded to each other. Arg-NH 2 indicates that the carboxyl group of arginine is an amide.) And a salt thereof.
る。Arg−NH2は、アルギニンのカルボキシル基がアミド
であることを示す。） で表されるペプチド又はその塩を有効成分とする抗菌
剤。2. The following structural formula (I) (Wherein, and are directly bonded to each other. Arg-NH 2 indicates that the carboxyl group of arginine is an amide.) Agent.
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|---|---|---|---|
| JP63203724A JP2641742B2 (en) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | New peptides and antibacterial agents |
Applications Claiming Priority (1)
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|---|---|---|---|
| JP63203724A JP2641742B2 (en) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | New peptides and antibacterial agents |
Publications (2)
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|---|---|
| JPH0253799A JPH0253799A (en) | 1990-02-22 |
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ID=16478801
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63203724A Expired - Lifetime JP2641742B2 (en) | 1988-08-18 | 1988-08-18 | New peptides and antibacterial agents |
Country Status (1)
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|---|---|
| JP (1) | JP2641742B2 (en) |
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|---|---|---|---|---|
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-
1988
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Non-Patent Citations (2)
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|---|
| Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ，Ｂｕｌｌ．，３７（１０），２６６１−２６６４（１９８９） |
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Also Published As
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