JP2638541B2 - Method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【産業上の利用分野】本発明は、除草活性を有して除草
剤として有用であるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシ
メチルホスフィニル）−酪酸（特公昭61-56210号公報又
は米国特許第 4,265,654号明細書参照）の製法に関する
ものである。The present invention relates to L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid which has herbicidal activity and is useful as a herbicide (JP-B-61-56210 or US Pat. Patent No. 4,265,654).

【０００２】[0002]

【従来の技術】次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸（以下、L-AMPBと略称する）の製造
法としては、L-AMPBを分子中の構成成分として含み且つ
除草活性を有する SF-1293物質（別名ビアラホス)(特公
昭51-639号公報及び米国特許第 4,309,208号明細書参
照）、すなわちＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチ
ルホスフィニル）−ブチリル−Ｌ−アラニル−Ｌ−アラ
ニンを酸分解する方法（特開昭48-85538号公報参照）、
あるいは SF-1293物質を微生物酵素で分解する方法（特
開昭49-31890号公報参照）がある。このほか、化学的合
成法（特開昭48-91019号および特開昭54-84529号公報参
照）により先づラセミ体の形でAMPBを得、これを微生物
酵素で光学分割してL-AMPBを収得する方法等が知られて
いる。更に近年、本発明者らによってストレプトミセス
属に属するL-AMPB生産菌を培養し、その培養液から直接
にL-AMPBを採取する方法が報告されている（特開昭57-4
7485号公報参照）。2. Description of the Related Art As a method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid (hereinafter abbreviated as L-AMPB), L-AMPB is contained as a component in the molecule and herbicidal activity is (Also referred to as JP-B-51-639 and U.S. Pat. No. 4,309,208), namely L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyryl-L- A method of acid-decomposing alanyl-L-alanine (see JP-A-48-85538);
Alternatively, there is a method of decomposing SF-1293 substance with a microbial enzyme (see JP-A-49-31890). In addition, AMPB was first obtained in racemic form by a chemical synthesis method (see JP-A-48-91019 and JP-A-54-84529), which was optically resolved with a microbial enzyme to obtain L-AMPB. And the like are known. More recently, the present inventors have reported a method of culturing L-AMPB-producing bacteria belonging to the genus Streptomyces and directly collecting L-AMPB from the culture solution (Japanese Patent Application Laid-Open No. Sho 57-4).
No. 7485).

【０００３】L-AMPBのような除草活性を有する物質が除
草剤として開発、製造され、これが商品として実用化さ
れていくためには、その物質の安全性と除草効力の強化
の開発研究にあわせ、低価格でしかも大量に生産するた
めの工業化に適する製造法の改良を行う研究が不可欠で
ある。上記の化学的合成法で製造されたAMPBは、L-AMPB
とD-AMPBとの混合物であるが、D-AMPBはそれ自体に殆ど
除草活性がなく、また非天然型の物質であることから、
土壌に施用した場合、土壌細菌による分解が遅くて土壌
に残留し易いので環境汚染の原因となる場合が有り得
る。またL-AMPBを合成法で製造するべき場合には、ラセ
ミ体の形のAMPBが先づ得られて終うから、このラセミ体
から光学分割、等により別々にD-AMPBとL-AMPBを単離す
ることが必要となるので、煩雑であり且つL-AMPBの収率
は低い。しかるに微生物あるいは酵素を用いるL-AMPBの
製造法では、天然型物質であるL-AMPBのみを収得でき
る。天然型のL-AMPBは、除草作用に関与しないで土壌中
に残留した分が土壌細菌により容易に分解、代謝される
ので土壌に残留することがなく、環境汚染の恐れの無い
理想的な除草剤と考えられる。[0003] In order for a substance having herbicidal activity, such as L-AMPB, to be developed and manufactured as a herbicide, and to be put into practical use as a commercial product, it must be developed in accordance with the research on the development of the safety and herbicidal efficacy of the substance. Research is needed to improve the production method suitable for industrialization for mass production at low cost. AMPB produced by the above chemical synthesis method is L-AMPB
And D-AMPB, but D-AMPB itself has almost no herbicidal activity and is a non-natural substance,
When applied to soil, decomposition by soil bacteria is slow and easily remains in the soil, which may cause environmental pollution. When L-AMPB is to be produced by a synthetic method, racemic AMPB is obtained first, and then D-AMPB and L-AMPB are separately separated from this racemic form by optical resolution or the like. Separation is required, which is complicated and the yield of L-AMPB is low. However, in the method for producing L-AMPB using a microorganism or an enzyme, only L-AMPB, which is a natural substance, can be obtained. Natural type L-AMPB is ideal for weeding that does not contribute to the herbicidal action and remains in the soil without being involved in the herbicidal action. It is considered an agent.

【０００４】本発明者らは、以上のような問題点に着目
して、大量に製造できると言うAMPB合成法の利点と、L-
AMPBのみが選択的に生成し得るという微生物使用のL-AM
PB製造法の利点を組み合わせることを試み、大量で選択
的にL-AMPBを製造することのできるL-AMPBの改良製造方
法を確立する研究を重ねてきた。The present inventors have paid attention to the above problems, and have an advantage of the AMPB synthesis method that it can be produced in large quantities.
L-AM using microorganisms that only AMPB can selectively produce
Attempts have been made to combine the advantages of the PB production method, and studies have been conducted to establish an improved production method of L-AMPB capable of selectively producing L-AMPB in large quantities.

【０００５】[0005]

【問題を解決するための手段】L-AMPBはα−アミノ酸の
一種の誘導体と見なすことができる。他方、一般に、蛋
白質を構成する通常の天然産のα−アミノ酸について
は、α−アミノ酸がトランスアミナーゼの作用で対応す
る２−オキソ酸からアミノ基転移によって生成されるこ
とが知られている。そこで本発明者らはL-AMPBに対応す
る２−オキソ酸に注目し鋭意検討したところ、次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸（以下、OMPBと略称する）を、アミノ基
供与体としてのグルタミン酸又はその塩とアスパラギン
酸又はその塩との両者の存在下に、若しくはグルタミン
酸あるいはアスパラギン酸又はその塩の単独の存在下に
トランスアミナーゼを産生する能力を有するある種の微
生物で、あるいはある種のトランスアミナーゼで処理す
ることによって非光学活性のOMPBから適当に短かい反応
時間で実質的な収率で光学活性のL-AMPBが生成できると
いう驚くべき事実を見出した。[Means for Solving the Problems] L-AMPB can be regarded as a kind of derivative of α-amino acid. On the other hand, in general, it is known that α-amino acids are usually produced by transamination from the corresponding 2-oxo acids by the action of transaminase with respect to normal naturally occurring α-amino acids constituting proteins. Thus, the present inventors have focused on 2-oxo acid corresponding to L-AMPB and conducted intensive studies. 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
-Oxo-butyric acid (hereinafter abbreviated as OMPB) in the presence of both glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof as an amino group donor, or glutamic acid or aspartic acid or a salt thereof alone Optically active L-AMPB can be obtained from non-optically active OMPB in a substantially short reaction time with a substantial yield by treating with a certain microorganism having an ability to produce a transaminase or a certain transaminase. Have found the surprising fact that can be generated.

【０００６】更に、アミノ基供与体としてグルタミン酸
とアスパラギン酸（又はこれらの塩）とを併用してこれ
ら両者の共存下にOMPBに前記のトランスアミナーゼ産生
微生物を、又はトランスアミナーゼを作用させる場合に
は、グルタミン酸又はアスパラギン酸又はそれの塩の単
独を存在させる場合に比べて、目的のL-AMPBの生成率が
著るしく改善されることも見い出した。Further, when glutamic acid and aspartic acid (or a salt thereof) are used in combination as amino group donors and the above-mentioned transaminase-producing microorganism or transaminase is allowed to act on OMPB in the presence of both of them, glutamic acid Also, it has been found that the production rate of the target L-AMPB is remarkably improved as compared with the case where aspartic acid or a salt thereof alone is present.

【０００７】従って、第１の本発明によると、次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸を、アミノ基供与体としてのグルタミン
酸又はその塩とアスパラギン酸又はその塩との存在下に
１つ又はそれ以上のトランスアミナーゼを産生する能力
をもつ微生物で処理することを特徴とする、次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸の製造法が提供される。Therefore, according to the first aspect of the present invention, 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
Treating oxo-butyric acid with a microorganism capable of producing one or more transaminases in the presence of glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof as amino group donors, Next formula And a method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid represented by the formula:

【０００８】第１の本発明の方法を実施する場合、OMPB
とアミノ基供与体として作用するグルタミン酸又はその
塩とアスパラギン酸又はその塩とを溶解、含有する水性
の液体反応媒質(medium)中で、OMPBと前記の２種のアミ
ノ基供与体アミノ酸とにトランスアミナーゼ生産能を有
する微生物を作用させる。In carrying out the first method of the present invention, OMPB
Transaminase between OMPB and the two amino group donor amino acids in an aqueous liquid reaction medium containing glutamic acid or a salt thereof acting as an amino group donor and aspartic acid or a salt thereof. A microorganism having a production ability is caused to act.

【０００９】第１の本発明の方法においては、一般に、
OMPBからL-AMPBへの変換のトランスアミノ化反応は、反
応媒質液が pH7.5以上、好ましくは pH8.0〜9.0 の範囲
のアルカリ性ｐＨ値を示すように行うのが好ましい。ｐ
Ｈの調整は水酸化ナトリウム又は適当な緩衝液の添加に
より行われる。トランスアミノ化の反応条件は、反応に
関与するトランスアミナーゼ産生微生物の作用至適温度
及び作用至適ｐＨの範囲であるのがよい。通常は、反応
は室温〜60℃、好ましくは20〜50℃の範囲で行うのがよ
い。In the first method of the present invention, generally,
The transamination reaction for conversion of OMPB to L-AMPB is preferably carried out so that the reaction medium has an alkaline pH value of pH 7.5 or higher, preferably in the range of pH 8.0 to 9.0. p
Adjustment of H is performed by adding sodium hydroxide or an appropriate buffer. The transamination reaction conditions are preferably in the range of the optimal temperature and the optimal pH for the action of the transaminase-producing microorganism involved in the reaction. Usually, the reaction is carried out at room temperature to 60 ° C, preferably 20 to 50 ° C.

【００１０】上記の原料として用いられるOMPBは公知の
物質であって、その製造法や物理化学的性状は例えば特
開昭56-92897号公報又は米国特許第 4,399,287号明細書
に記載されてある。第１の本発明の方法において、反応
の開始の時点で、通常は、反応媒質に溶解された原料基
質であるOMPBの初発濃度は 0.1〜100mg/mlの範囲である
のが適当である。OMPB used as the raw material is a known substance, and its production method and physicochemical properties are described, for example, in JP-A-56-92897 or US Pat. No. 4,399,287. In the first method of the present invention, at the start of the reaction, it is usually appropriate that the initial concentration of the starting substrate OMPB dissolved in the reaction medium is in the range of 0.1 to 100 mg / ml.

【００１１】第１の本発明に用いられる微生物は放線
菌、バクテリア、酵母、カビを包含する。その使用され
る微生物は、ストレプトミセス属、ストレプトバーチシ
リウム属、ノカルディア属、ノカルディオプシス属、サ
ッカロポリスポラ属、ミクロモノスポラ属及びストレプ
トスポランギウム属から選ばれる放線菌；あるいはバチ
ルス属、ミクロコッカス属、スタフィロコッカス属、エ
シェリヒア属、シュードモナス属、セラチア属及びコリ
ネバクテリウム属から選ばれるバクテリア；あるいはサ
ッカロミセス属、キャンディダ属、クリプトコッカス
属、デバリオミセス属、トリゴノプシス属及びハンセヌ
ラ属から選ばれる酵母；あるいはアスペルギルス属、ム
コール属、オーレオバシディウム属、カエトミウム属、
ペニシリウム属及びグリオクラジウム属から選ばれるカ
ビであることができる。The microorganism used in the first invention includes actinomycetes, bacteria, yeasts and molds. The microorganism used is Streptomyces, Streptomyces Birch shea genus, Nocardia genus, Nocardioides Opsys genus Sakkaropori Supora genus actinomycete selected from Mi Kuromonosupora genus and Streptomyces spot Rangi um spp; or Bacillus, micro A bacterium selected from the genus Coccus, Staphylococcus, Escherichia, Pseudomonas, Serratia and Corynebacterium; or a yeast selected from Saccharomyces, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Trigonopsis and Hansenula; Or Aspergillus, Mucor, Aureobasidium, Chaetomium,
It can be a mold selected from the genus Penicillium and the genus Gliocladium.

【００１２】第１の本発明で使用できる放線菌の一例と
してはストレプトミセス・アルバス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍ
ｙｃｅｓ ａｌｂｕｓ）、ストレプトミセス・グリゼウ
ス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｇｒｉｓｅｕｓ）、ス
トレプトミセス・ハイグロスコピカス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）、ストレプ
トミセス・リビダンス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｌ
ｉｖｉｄａｎｓ）、ストレプトミセス・ビリドクロモゲ
ネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｖｉｒｉｄｏｃｈｒ
ｏｍｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトミセス・ピロサス（Ｓ
ｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ ｐｉｌｏｓｕｓ）、ストレプ
トバーチシリウム・シンナモニウム（Ｓｔｒｅｐｔｏｖ
ｅｒｔｉｃｉｌｌｉｕｍ ｃｉｎｎａｍｏｎｅｕｍ）、
ストレプトミセス・モロオカエンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏ
ｍｙｃｅｓ ｍｏｒｏｏｋａｅｎｓｉｓ）、ノカルディ
ア・メジテラニ（Ｎｏｃａｒｄｉａ ｍｅｄｉｔｅｒｒ
ａｎｅｉ）、ノカルディオプシス・ダソンビレイ（Ｎｏ
ｃａｒｄｏｐｓｉｓ ｄａｓｓｏｎｖｉｌｌｅｉ）、サ
ロポリスポラ・ヒルスタ（Ｓａｃｃｈａｒｏｐｏｌｙｓ
ｐｏｒａ ｈｉｒｓｕｔａ）、ミクロモノスポラ・カル
ボナシー（Ｍｉｃｒｏｍｏｎｏｓｐｏｒａ ｃａｒｂｏ
ｎａｃａｅ）、ストレプトスポランギウム・シュードブ
ルガリ（Ｓｔｒｅｐｔｏｓｐｏｒａｎｇｉｕｍ ｐｓｅ
ｕｄｏｖｕｌｇａｒｅ）などがあげられる。An example of an actinomycete that can be used in the present invention is Streptomyces albus ( Streptom).
yces albus) , Streptomyces griseus , Streptomyces hygroscopicus ( Strepto)
myces hygroscopicus , Streptomyces lividans ( Streptomyces l)
ividans ), Streptomyces viridochromogenes ( Streptomyces viridochr)
omogenes) , Streptomyces pirosus ( S
treptomyces pilosus), Streptomyces Birch Shi helium-Shin'namoniumu (Streptov
ericillium cinnamoneum) ,
Streptomyces morokaensis ( Strepto)
myces moorokaensis ), Nocardia mediterrani
anei ), Nocardiopsis Dassonbelay (No
cardopsis dassonvillei , Saccharopolys
pora hirsuta) , Micromonospora carbono ( Micromonospora carbo)
nacae ), Streptosporangium pseudobulgari (Streptosporangium pse)
uvulgare) and the like.

【００１３】第１の本発明で使用できるバクテリアの一
例としては、バチルス・ズブチリス(Bacillus subtili
s) 、ミクロコッカス・ルテウス(Micrococcus luteus)
、スタフィロコッカス・アウレウス (Staphylococcus
aureus) 、エシェリヒア・コリ(Escherichia coli)
、シュードモナス・エルギノーサ(Pseudomonas aeru g
inosa) 、シュードモナス・セパシア(Pseudomonas cep
acia)、セラチア・マルセセンス(Seratia marcescens)
、コリネバクテリウム・グルタミカム(Coryneb acteriu
m glutamicum) などがあげられる。One example of a bacterium which can be used in the present invention is Bacillus subtili.
s ), Micrococcus luteus
, Staphylococcus aureus
aureus), Escherichia coli (Escherichia coli)
, Pseudomonas aeruginosa (Pseudomonas aeru g
inosa ), Pseudomonas cep
acia) , Seratia marcescens
, Corynebacterium glutamicum (Coryneb acteriu
m glutamicum ).

【００１４】第１の本発明で使用される酵母の例として
は、サッカロミセス、セリビシイ(Saccharomyces cere
visiae) 、キャンディダ・アルビカンス(Candida albi
ca ns) 、クリプトコッカス・ネオフォルマンス (Crypto
coccus neoformans) 、デバリオミセス・ハンセニ (De
baryomyces hansenii) 、トリゴノプシス・バリアビリ
ス(Trigonopsis variabilis) 、ハンセヌラ・シュネジ
(Hansenula schneg gi) などがあげられる。[0014] Examples of the yeast used in the first present invention, Saccharomyces, Seribishii (Saccharomyces cere
visiae ), Candida albi
ca ns ), Cryptococcus neoformans ( Crypto
coccus neoformans ), Debaryomyces Hanseni ( De
baryomyces hansenii ), Trigonopsis variabilis , Hansenula schneji
(Hansenula schneg gi ) and the like.

【００１５】第１の本発明で使用できるカビの例として
は、アスペルギルス・フラバス(Asp ergillus flavus)
、アスペルギルス・テレウス(Aspergillus terreus)
、ムコール・スピネセンス(Mucor spinescens) 、オ
ーレバシディウム・プルランス(Aureobasidium pullul
ans)、カエトミウム・グロボサム (Chaetomium globos
um) 、ペニシリウム・フニクロサム(Penicillium funi
culosum)、グリオクラジウム・ビレンス(Gliocladium
virens) などがあげられる。[0015] Examples of fungi that can be used in the first present invention, Aspergillus flavus (Asp ergillus flavus)
, Aspergillus terreus
, Mucor spinescens , Aureobasidium pullul
ans) , Chaetomium globos
um ), Penicillium funiclosum
culosum) , Gliocladium
virens ).

【００１６】前記の放線菌、細菌、カビ及び酵母の各菌
種は公知の微生物保存機関に寄託されてあるタイプ・カ
ルチュア(Type Culture)であることができ、そこから購
入できる。The above-mentioned actinomycetes, bacteria, molds, and yeasts can be a type culture deposited at a known microorganism preservation institution, and can be purchased therefrom.

【００１７】更に、第１の本発明の方法に使用される微
生物の好ましい例としては、ストレプトミセス属に属す
る SF-1293物質生産菌として公知であるストレプトミセ
ス・ハイグロスコピカス (Streptomyces hygroscopicu
s) SF-1293 株（FERM BP-130 又はATCC 21705）、特公
昭51-639号公報又は米国特許第 3,832,394号明細書参
照）あるいはその変異株であるストレプトミセス・ハイ
グロスコピカス SF-1293 NP-50株（FERM P-7804 又はFE
RM BP-1368）（特開昭61-58589号公報又は欧州特許出願
公開第 0173327号公報参照）あるいはストレプトミセス
・リビダンス66株（FERM BP-737 ；特開昭59−175889号
公報又は欧州特許出願公開第 0196375号公報参照）があ
る。その他、アミノ基供与体としてのグルタミン酸又は
その塩の存在下にOMPBをL-AMPBに変換するトランスアミ
ナーゼ活性を持つ酵素を産生する微生物であれば、どの
ような微生物でも、使用できる。なお、上記のストレプ
トミセス・ハイグロスコピカス SF-1293株の菌学的性質
は特開昭51-639号公報又は米国特許第 3,832,394号明細
書に記載されてある。また、ストレプトミセス・ハイグ
ロスコピカス SF-1293 NP-50株(FERM P-7804) の菌学的
性質は上記のSF-1293株と同じであるが、 SF-1293物質
の生合成能を欠損している点で遺伝形質が異なる（特開
昭61-58589号公報又は欧州特許出願公開第 0173327号公
報参照）。更に、ハイグロスコピカス・リビダンス66株
(FERM BP-737) の菌学的性質は特開昭59−175889号公報
に記載されてある。これらの菌のうち、FERM BP-番号を
付された菌種はブタペスト条約の規定で工業技術院微生
物工業技術研究所に寄託してある。Preferred examples of the microorganism used in the first method of the present invention include Streptomyces hygroscopicus, which is known as a SF-1293 substance producing bacterium belonging to the genus Streptomyces.
s) SF-1293 strain (FERM BP-130 or ATCC 21705), JP-B-51-639 or U.S. Pat. No. 3,832,394) or a mutant thereof, Streptomyces hygroscopicus SF-1293 NP- 50 strains (FERM P-7804 or FE
RM BP-1368) (see JP-A-61-58589 or EP-A-0173327) or Streptomyces lividans 66 strain (FERM BP-737; JP-A-59-175889 or European patent application) Publication No. 0196375). In addition, any microorganism that produces an enzyme having a transaminase activity that converts OMPB to L-AMPB in the presence of glutamic acid or a salt thereof as an amino group donor can be used. The bacteriological properties of the above Streptomyces hygroscopicus SF-1293 strain are described in JP-A-51-639 or US Pat. No. 3,832,394. Although bacteriological properties of Strep preparative Mrs. hygroscopicus SF-1293 NP-50 strain (FERM P-7804) is as defined above for SF-1293 strain, deficient in the biosynthesis ability of SF-1293 substance (See Japanese Patent Application Laid-Open No. 61-58589 or European Patent Application Publication No. 0173327). In addition, 66 Hygroscopicus lividans
The bacteriological properties of (FERM BP-737) are described in JP-A-59-175889. Of these fungi, those strains with FERM BP-numbers have been deposited with the Institute of Microbial Industry and Technology under the terms of the Budapest Treaty.

【００１８】第２の本発明によると、次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸を、アミノ基供与体としてのグルタミン
酸又はその塩とアスパラギン酸又はその塩との存在下に
１つ又はそれ以上のトランスアミナーゼで処理すること
を特徴とする、次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸の製造法が提供される。According to a second aspect of the present invention, 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
Treating oxo-butyric acid with one or more transaminases in the presence of glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof as amino group donors, And a method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid represented by the formula:

【００１９】第２の本発明の方法に用いられる酵素、す
なわちトランスアミナーゼはアミノ基供与体としてのグ
ルタミン酸又はその塩とアスパラギン酸又はその塩との
存在下にOMPBをL-AMPBに変換できるトランスアミナーゼ
活性をもつ酵素であれば、どのようなトランスアミナー
ゼでもよい。The enzyme used in the second method of the present invention, ie, transaminase, has a transaminase activity capable of converting OMPB to L-AMPB in the presence of glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof as amino group donors. Any transaminase may be used as long as it has an enzyme.

【００２０】第２の本発明の方法で用いられるトランス
アミナーゼの適当な例には、市販のグルタミン酸−オキ
サロ 酢酸−トランスアミナーゼ（ＧＯＴと略称され
る)(酵素国際分類番号ＥＣ ２，６，１，１）、あるい
はグルタミン酸−ピルビン酸−トランスアミナーゼ（Ｇ
ＰＴと略称される）（酵素国際分類番号ＥＣ ２，６，
１，２）、あるいはアミノ基供与体としてのＬ−グルタ
ミン酸の存在下にOMPBをL-AMPBに変換するトランスアミ
ナーゼ活性をもつ酵素がある。これらのトランスアミナ
ーゼを単独にあるいは二種又はそれ以上を組み合わせて
使用できる。Suitable examples of the transaminase used in the second method of the present invention include commercially available glutamate-oxaloacetate-transaminase (abbreviated as GOT) (enzyme international classification number EC 2,6,1,1). Or glutamate-pyruvate-transaminase (G
(Abbreviated as PT) (International Enzyme Classification Number EC 2,6
1,2) or an enzyme having a transaminase activity that converts OMPB to L-AMPB in the presence of L-glutamic acid as an amino group donor. These transaminases can be used alone or in combination of two or more.

【００２１】上記の中でも、好ましい組合せのトランス
アミナーゼは、アスパラギン酸をアミノ基供与体として
用いて２−ケトグルタール酸をグルタミン酸に変換する
酵素活性、すなわちいわゆるＧＯＴ活性を合わせもつ第
１のトランスアミナーゼと、アミノ基供与体としてグル
タミン酸の存在下にOMPBをL-AMPBに変換するトランスア
ミナーゼ活性を持つ第２のトランスアミナーゼとの組み
合わせである。たとえば、上記のようなＧＯＴ活性を合
わせもつトランスアミナーゼとしては、市販のグルタミ
ン酸−オキサロ酢酸−トランスアミナーゼ（酵素国際分
類番号ＥＣ ２，６，１，１）を用いることができる。
あるいはＧＯＴ活性をもつ微生物、たとえばストレプト
ミセス・ハイグロスコピカス SF-1293株（特開昭57-474
85号公報参照； FERM BP-130；ATCC 21705）より公知の
方法で抽出して得られたＧＯＴ活性を合わせもつトラン
スアミナーゼを用いることができる。これらのＧＯＴ活
性を合わせもつトランスアミナーゼは、これらも単独に
あるいは組み合わせて使用できる。また、上記のＧＯＴ
活性を合わせもつトランスアミナーゼに組み合せて用い
る前記の第２のトランスアミナーゼとしては、グルタミ
ン酸の存在下にOMPBをL-AMPBに変換できるトランスアミ
ナーゼであれば、どのようなものでもよい。Among the above, a preferred combination of transaminases is an enzyme activity for converting 2-ketoglutaric acid to glutamic acid using aspartic acid as an amino group donor, that is, a first transaminase having combined GOT activity, and an amino group. This is a combination with a second transaminase having a transaminase activity for converting OMPB to L-AMPB in the presence of glutamic acid as a donor. For example, a commercially available glutamic acid-oxaloacetic acid-transaminase (enzyme international classification number EC 2, 6, 1, 1) can be used as the transaminase having the above-mentioned GOT activity.
Alternatively, a microorganism having GOT activity, for example, Streptomyces hygroscopicus SF-1293 strain (JP-A-57-474)
No. 85; FERM BP-130; ATCC 21705). A transaminase having GOT activity and obtained by extraction by a known method can be used. These transaminases having the same GOT activity can be used alone or in combination. In addition, the above GOT
As the second transaminase used in combination with the transaminase having the same activity, any transaminase capable of converting OMPB to L-AMPB in the presence of glutamic acid may be used.

【００２２】第１又は第２の本発明に用いる一方のアミ
ノ基供与体としてのグルタミン酸又はその塩の適当な例
には、Ｌ−グルタミン酸又はその塩があり、また他方の
アミノ基供与体としてのアスパラギン酸又はその塩の適
当な例にはＬ−アスパラギン酸又はその塩がある。これ
らのアミノ酸の塩の適当な例には、それらアミノ酸のア
ルカリ金属塩がある。また、これらのＬ−アミノ酸に対
応するＤ−アミノ酸も、アミノ基供与体として利用でき
る。反応開始時での反応媒質中のアミノ基供与体として
のグルタミン酸とアスパラギン酸との合計量と基質のOM
PBの量とのモル比は、一般的には10：１〜１：10の範囲
であることができる。Suitable examples of glutamic acid or a salt thereof as one amino group donor used in the first or second invention include L-glutamic acid or a salt thereof, and glutamic acid or a salt thereof as the other amino group donor. A suitable example of aspartic acid or a salt thereof is L-aspartic acid or a salt thereof. Suitable examples of salts of these amino acids include alkali metal salts of the amino acids. D-amino acids corresponding to these L-amino acids can also be used as amino group donors. Total amount of glutamic acid and aspartic acid as amino group donor in the reaction medium at the start of the reaction and OM of the substrate
The molar ratio to the amount of PB can generally range from 10: 1 to 1:10.

【００２３】第１又は第２の本発明の方法において、ア
ミノ基供与体として併用されるグルタミン酸及びアスパ
ラギン酸について、これらアミノ酸の各々は市販品でよ
く、一般にＤ−体とＬ−体との混合物であることができ
るが、Ｌ−体のみから成るものであるのが好ましい。グ
ルタミン酸およびアスパラギン酸の各々の塩としては、
アルカリ金属塩、特にナトリウム塩またはカリウム塩が
使用できる。In the first or second method of the present invention, with respect to glutamic acid and aspartic acid used together as an amino group donor, each of these amino acids may be a commercially available product, and is generally a mixture of D-form and L-form. , But is preferably composed of only the L-form. As each salt of glutamic acid and aspartic acid,
Alkali metal salts, especially sodium or potassium salts, can be used.

【００２４】第１又は第２の本発明の方法においては、
アミノ基供与体としてグルタミン酸（又はその塩）とア
スパラギン酸（又はその塩）とを組み合わせて用いる
が、この場合に、これらアミノ基供与体アミノ酸のそれ
ぞれの濃度と、OMPBの濃度との比率について説明する
に、反応開始時における反応媒質中のこれらアミノ基供
与体の各々がOMPBより多く存在する高いモル比率にすれ
ば、反応速度及びOMPBからL-AMPBへの変換率が高まる。In the first or second method of the present invention,
Glutamic acid (or its salt) and aspartic acid (or its salt) are used in combination as amino group donors. In this case, the ratio between the concentration of each of these amino group donor amino acids and the concentration of OMPB is explained. If the molar ratio of each of these amino group donors in the reaction medium at the start of the reaction is higher than that of OMPB, the reaction rate and the conversion from OMPB to L-AMPB are increased.

【００２５】しかし、経済的な観点から、適当なモル比
率が設定される。通常は、反応開始時における反応媒質
中のグルタミン酸（又はその塩）の濃度（添加量）とOM
PB濃度（添加量）とのモル比は 0.2：１〜 3.0：１の範
囲であるのが好ましく、またアスパラギン酸（またはそ
の塩）の濃度（添加量）とOMPBの濃度（添加量）とのモ
ル比は 1.0：１〜 3.0：１の範囲であるのが好ましい。However, from an economic viewpoint, an appropriate molar ratio is set. Usually, the concentration (addition amount) of glutamic acid (or its salt) in the reaction medium at the start of the reaction and the OM
The molar ratio to the PB concentration (addition amount) is preferably in the range of 0.2: 1 to 3.0: 1, and the ratio of the concentration (addition amount) of aspartic acid (or a salt thereof) to the concentration (addition amount) of OMPB is preferable. Preferably, the molar ratio ranges from 1.0: 1 to 3.0: 1.

【００２６】さらにまた、第１又は第２の本発明の方法
を実施するに当っては、反応開始時に反応媒質に添加さ
れたグルタミン酸又はその塩の濃度が式（II）の基質化
合物の１モル当りに 0.2〜 3.0モルに相当する濃度であ
り、かつ添加されたアスパラギン酸又はその塩の濃度が
式（II）の基質化合物の１モル当りに 1.0〜3.0 モルに
相当する濃度であり、しかも上記の反応媒質のｐＨは
8.0〜9.0 のアルカリ性ｐＨ値に維持されることが好ま
しい。Furthermore, in carrying out the first or second method of the present invention, the concentration of glutamic acid or a salt thereof added to the reaction medium at the start of the reaction is 1 mol of the substrate compound of the formula (II). And the concentration of the added aspartic acid or a salt thereof is a concentration corresponding to 1.0 to 3.0 mol per mol of the substrate compound of the formula (II). The pH of the reaction medium is
It is preferred that the alkaline pH be maintained between 8.0 and 9.0.

【００２７】第１の本発明の方法において、微生物を式
（II）のOMPB基質、ならびにアミノ基供与体としてのグ
ルタミン酸及びアスパラギン酸（又はこれらの塩）に作
用させるのは、次の方式で行われる。すなわち、先づ、
前記の微生物を通常の微生物培養に使用される栄養物を
含有する培地で培養する。栄養源としては、通常の微生
物の培養に利用されている公知のものが使用される。例
えば炭素源としては、グルコース、澱粉、グリセリン、
シュークロス、水飴、糖蜜等があげられる。これらは単
独にあるいは組み合わせて用いられる。また窒素源とし
ては、大豆粉、小麦はい芽、肉エキス、ペプトン、乾燥
酵母、コーンスティープリカー、硫酸アンモニウム、等
が単独にあるいは組み合わせて用いられる。その他必要
に応じて炭酸カルシウム、食塩、塩化カリウム、燐酸塩
等の無機塩類を添加することが出来る。培養法としては
液体培養法、特に深部培養法が最も適している。培養は
好気的条件下で行われ、培養に適した温度は25〜40℃で
ある。培養日数は放線菌の場合は１〜４日、細菌の場合
には１〜２日、酵母の場合は１〜２日、カビの場合は１
〜４日が適当である。In the first method of the present invention, the microorganism is allowed to act on the OMPB substrate of the formula (II) and glutamic acid and aspartic acid (or salts thereof) as amino group donors in the following manner. Will be That is, first,
The microorganism is cultured in a medium containing nutrients used for ordinary microorganism culture. As the nutrient source, a known nutrient used for culturing a normal microorganism is used. For example, as a carbon source, glucose, starch, glycerin,
Examples include shoe cloth, syrup, molasses and the like. These may be used alone or in combination. As the nitrogen source, soybean flour, wheat germ, meat extract, peptone, dried yeast, corn steep liquor, ammonium sulfate and the like are used alone or in combination. In addition, if necessary, inorganic salts such as calcium carbonate, salt, potassium chloride, and phosphate can be added. The most suitable culture method is a liquid culture method, particularly a submerged culture method. The cultivation is performed under aerobic conditions, and a suitable temperature for culturing is 25 to 40 ° C. The cultivation days are 1 to 4 days for actinomycetes, 1 to 2 days for bacteria, 1 to 2 days for yeast, and 1 for mold.
~ 4 days is appropriate.

【００２８】この微生物の培養液自体を用いるか、ある
いは所望ならば、培養液から菌体を分離、洗浄した生菌
体を、一定の濃度で水又は生理食塩水又は適当な緩衝液
中に懸濁した菌体懸濁液を用いることもできる。使用微
生物の菌体を含む培養液又はその他の菌体懸濁液に、OM
PB（第１の基質として反応する）をアミノ基供与体とし
てグルタミン酸及びアスパラギン酸又はこれらの塩（夫
々に第２の基質として反応する）と同時に又は順次に添
加する。その後に、微生物がOMPB及び前記の２種のアミ
ノ基供与体に作用して、OMPBのトランスアミノ化変換反
応を進めるように液を保つ。このようにOMPB及び２種の
アミノ基供与体を微生物で処理してL-AMPBに変換する水
性の反応媒質液中の菌体濃度ならびにOMPBの濃度及び２
種のアミノ基供与体の総濃度、並びに反応温度、ｐＨ条
件は、OMPBからL-AMPBへの変換反応が効率良く進み且つ
微生物が微生物の機能を発揮する状態を保つ範囲で適宜
に調整される。反応時間も、実質量のL-AMPBが反応液中
に生産、蓄積されるように調整される。The culture solution of the microorganism itself may be used, or if desired, the living cells separated from the culture solution and washed may be suspended at a certain concentration in water or physiological saline or a suitable buffer. A cloudy cell suspension can also be used. Add OM to the culture solution or other cell suspension containing the cells of the microorganism used.
PB (reacting as a first substrate) is added simultaneously or sequentially with glutamic acid and aspartic acid or their salts (reacting respectively as a second substrate) as amino group donors. Thereafter, the liquid is kept so that the microorganism acts on OMPB and the two amino group donors to advance the transamination conversion reaction of OMPB. As described above, the concentration of the bacterial cells in the aqueous reaction medium solution for converting OMPB and the two amino group donors to L-AMPB by treating them with microorganisms,
The total concentration of the species amino group donors, as well as the reaction temperature and pH conditions are appropriately adjusted within a range in which the conversion reaction from OMPB to L-AMPB proceeds efficiently and the microorganisms maintain a state in which the microorganisms exert their functions. . The reaction time is also adjusted so that a substantial amount of L-AMPB is produced and accumulated in the reaction solution.

【００２９】また、第２の本発明の方法においてOMPBな
らびにアミノ基供与体としてグルタミン酸及びアスパラ
ギン酸又はこれらの塩をトランスアミナーゼで処理する
場合には、適当なトランスアミナーゼの水溶液、又は緩
衝液にとかした酵素溶液にOMPB及び前記２種のアミノ基
供与体を添加して溶解させて、OMPBの酵素的トランスア
ミノ化反応を行う。反応系中の酵素、OMPB及び２種のア
ミノ基供与体の夫々の濃度、並びに反応温度、ｐＨ条件
はOMPBからL-AMPBへの変換反応が効率良く進む適正な範
囲で適宜に調整される。In the second method of the present invention, when OMPB and glutamic acid and aspartic acid or a salt thereof as an amino group donor are treated with a transaminase, the enzyme may be dissolved in a suitable aqueous solution of a transaminase or a buffer. OMPB and the two amino group donors are added to and dissolved in the solution, and an enzymatic transamination reaction of OMPB is performed. The concentrations of the enzyme, OMPB and the two amino group donors in the reaction system, as well as the reaction temperature and pH conditions are appropriately adjusted within an appropriate range in which the conversion reaction from OMPB to L-AMPB proceeds efficiently.

【００３０】第２の本発明の方法で用いる上記のトラン
スアミナーゼとしては、市販された酵素製品の形のもの
を使用してもよく、あるいは第１の本発明に使用できる
微生物としての放線菌、細菌、カビ又は酵母の培養液中
で、その菌体を破砕して直接に作られる粗酵素の水溶
液、あるいは粗酵素を水にとかした水溶液を使用するこ
とができる。また菌体の破砕液の形の粗酵素液を使用し
てもよい。As the above-mentioned transaminase used in the method of the second invention, those in the form of a commercially available enzyme product may be used, or actinomycetes or bacteria as microorganisms usable in the first invention may be used. An aqueous solution of a crude enzyme produced directly by crushing the cells in a culture of mold, yeast or yeast, or an aqueous solution of a crude enzyme dissolved in water can be used. Further, a crude enzyme solution in the form of a disrupted cell solution may be used.

【００３１】また、前記の微生物又はこれの培養液より
超音波処理やリゾチーム処理等の公知の方法で抽出した
粗酵素液であっても、この粗酵素液が前記の２種のアミ
ノ基供与体すなわちグルタミン酸とアスパラギン酸又は
これらの塩の存在下にOMPBからL-AMPBを生産する能力を
有すれば第２の本発明の方法に使用できる。また、精製
された酵素の水溶液を使用できることは当然である。In addition, even when a crude enzyme solution is extracted from the microorganism or a culture thereof by a known method such as ultrasonic treatment or lysozyme treatment, the crude enzyme solution may be a mixture of the two amino group donors. That is, if it has the ability to produce L-AMPB from OMPB in the presence of glutamic acid and aspartic acid or a salt thereof, it can be used in the second method of the present invention. In addition, it is natural that an aqueous solution of the purified enzyme can be used.

【００３２】酵素や微生物を有機溶剤、架橋剤、担体等
で固定化することによって、その安定性や操作性が高ま
る事が知られているが、この様な公知の固定化方法で処
理した固定化微生物あるいは固定化酵素も、OMPBからL-
AMPBを生産する能力があれば、第１又は第２の本発明の
方法に使用できる。It is known that the stability and the operability are enhanced by immobilizing an enzyme or a microorganism with an organic solvent, a cross-linking agent, a carrier, or the like. Immobilized microorganisms or immobilized enzymes can also be converted from OMPB to L-
The ability to produce AMPB can be used in the first or second method of the present invention.

【００３３】例えば、第２の本発明の方法において、ト
ランスアミナーゼを用いて、OMPBからL-AMPBへ変換する
酵素反応は、 pH7.5以上、好ましくは pH8.0〜9.0 のア
ルカリ性ｐＨ値の範囲で行うのが好ましい。反応条件は
反応に関与する酵素の作用至適温度及び作用至適ｐＨの
範囲であるのがよい。For example, in the second method of the present invention, the enzymatic reaction for converting OMPB to L-AMPB using transaminase is carried out at an alkaline pH value of pH 7.5 or higher, preferably pH 8.0 to 9.0. It is preferred to do so. The reaction conditions are preferably in the range of the optimal temperature and the optimal pH of the enzyme involved in the reaction.

【００３４】第２の本発明の方法の好ましい実施法の場
合には、４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２−
オキソ−酪酸すなわちOMPBを、アミノ基供与体としての
Ｌ−グルタミン酸またはその塩と、Ｌ−アスパラギン酸
またはその塩との両者の存在下に二種又はそれ以上のト
ランスアミナーゼで処理する。この場合に用いるトラン
スアミナーゼは、Ｌ−アスパラギン酸をアミノ基供与体
として用いて２−ケトグルタール酸をグルタミン酸に変
換するトランスアミナーゼ活性、すなわち、いわゆるＧ
ＯＴ活性の範ちゅうに入る活性を合せもつトランスアミ
ナーゼ活性のある第１のトランスアミナーゼと、アミノ
基供与体としてのＬ−グルタミン酸の存在下にOMPBをL-
AMPBに変換するトランスアミナーゼ活性を持つ第２のト
ランスアミナーゼとの組み合わせ系であるのが好まし
い。In a second preferred embodiment of the process according to the invention, 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2-
Oxo-butyric acid or OMPB is treated with two or more transaminases in the presence of both L-glutamic acid or a salt thereof as an amino group donor and L-aspartic acid or a salt thereof. The transaminase used in this case is a transaminase activity for converting 2-ketoglutaric acid to glutamic acid using L-aspartic acid as an amino group donor, that is, a so-called G
A first transaminase having a transaminase activity having an activity falling within the range of the OT activity; and OMPB in the presence of L-glutamic acid as an amino group donor.
It is preferably a combination system with a second transaminase having a transaminase activity that converts to AMPB.

【００３５】また、第１の本発明の方法の好ましい実施
法においては、アミノ基供与体としてＬ−アスパラギン
酸の存在下に２−ケトグルタール酸をグルタミン酸に変
換する活性、いわゆるＧＯＴ活性と、アミノ基供与体と
してＬ−グルタミン酸の存在下にOMPBをL-AMPBに変換す
るトランスアミナーゼ活性とを合わせて持つ酵素系を産
生する微生物、例えばストレプトミセス・ハイグロスコ
ピカス (Streptomyces hygroscopicus) SF-1293株(FERM
BP-130又はATCC 21705) 、あるいはその変異株であるス
トレプトミセス・ハイグロスコピカス SF-1293 NP-50株
（特開昭61−58589号公報参照； FERM P-7804又はFERM
BP-1368）又はストレプトミセス・リビダンス66株(TERM
BP-737) を用いるのが好ましい。In a preferred embodiment of the first method of the present invention, the activity of converting 2-ketoglutaric acid to glutamic acid in the presence of L-aspartic acid as an amino group donor, so-called GOT activity, Microorganisms that produce an enzyme system having a transaminase activity that converts OMPB to L-AMPB in the presence of L-glutamic acid as a donor, such as Streptomyces hygroscopicus SF-1293 strain (FERM
BP-130 or ATCC 21705) or a mutant thereof, Streptomyces hygroscopicus SF-1293 NP-50 strain (see JP-A-61-58589; FERM P-7804 or FERM).
BP-1368) or Streptomyces lividans 66 strains (TERM
BP-737) is preferably used.

【００３６】第１又は第２の本発明の方法においては、
上記のトランスアミナーゼ系を産生する上記の微生物の
作用により、あるいは上記のトランスアミナーゼ系の作
用により、アミノ基供与体としてのＬ−グルタミン酸
（又はその塩）からアミノ基をOMPBが供与された結果OM
PBはL-AMPBになり、アミノ基を与えたグルタミン酸は２
−ケトグルタール酸になり、また他方、アミノ基供与体
としてのＬ−アスパラギン酸（又はその塩）はＧＯＴ活
性を合わせもつトランスアミナーゼの作用により前記の
２−ケトグルタル酸にアミノ基を供与してこれをグルタ
ミン酸に再生させ且つアスパラギン酸それ自体がオキサ
ロ酢酸を経てピルビン酸になると推定される。In the first or second method of the present invention,
As a result of the provision of OMPB with an amino group from L-glutamic acid (or a salt thereof) as an amino group donor by the action of the above-mentioned microorganism producing the above transaminase system or by the action of the above transaminase system, OM
PB becomes L-AMPB, and glutamic acid with amino group is 2
L-aspartic acid (or a salt thereof) as an amino group donor provides an amino group to 2-ketoglutaric acid by the action of a transaminase having GOT activity to convert it into glutamic acid. And aspartic acid itself is presumed to become pyruvate via oxaloacetate.

【００３７】第１又は第２の本発明の方法で生成された
L-AMPBを含有する反応液からのL-AMPBの採取と精製は、
通常のL-AMPB醗酵製造法の菌培養液からのL-AMPBの採取
法及び精製法と同一の要領で行うことができる。その詳
細については特開昭57−47485 号公報の記載を参照され
たい。即ち、ダウエックス50Ｗ（ロームアンドハース社
製）などの陽イオン交換樹脂にL-AMPBを吸着せしめ、水
あるいは希アンモニア水で展開溶出する方法が利用でき
る。本発明の方法で得られたL-AMPBは、その除草効力を
試験したところ、特開昭57-47485号公報の醗酵的方法で
得られたL-AMPBと同等の除草効力を示すことが認められ
た。The first or second method of the present invention
Collection and purification of L-AMPB from a reaction solution containing L-AMPB,
It can be carried out in the same manner as the method for collecting and purifying L-AMPB from the bacterial culture in the usual L-AMPB fermentation production method. For details, refer to the description of JP-A-57-47485. That is, a method can be used in which L-AMPB is adsorbed on a cation exchange resin such as Dowex 50W (manufactured by Rohm and Haas Co.) and developed and eluted with water or dilute ammonia water. L-AMPB obtained by the method of the present invention was tested for its herbicidal efficacy, and it was found that the herbicidal efficacy was equivalent to that of L-AMPB obtained by the fermentation method of JP-A-57-47485. Was done.

【００３８】更にまた、第１又は第２の本発明の方法で
アミノ基供与体として併用されるグルタミン酸又はその
塩とアスパラギン酸又はその塩のうち、グルタミン酸又
はその塩を省略してアスパラギン酸（又はその塩）を単
独にアミノ基供与体として用いてアミノ基供与体として
単独にアスパラギン酸又はその塩の存在下に式（II）の
OMPBに或る種のトランスアミナーゼ産生微生物、あるい
は或る種のトランスアミナーゼを作用させた場合にも、
有意な生成量で目的の式（Ｉ）のL-AMPBが製造できるこ
とが見い出されている。Furthermore, of glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof used as an amino group donor in the first or second method of the present invention, glutamic acid or a salt thereof is omitted and aspartic acid (or Salt) alone as an amino group donor, alone as an amino group donor in the presence of aspartic acid or a salt thereof of the formula (II)
When a certain transaminase-producing microorganism or a certain transaminase is allowed to act on OMPB,
It has been found that the desired L-AMPB of formula (I) can be produced with a significant amount of production.

【００３９】従って、第３の本発明によると、次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸を、アミノ基供与体としてのアスパラギ
ン酸又はその塩の存在下に、トランスアミナーゼを産生
する能力を有して且つストレプトミセス属、ストレプト
バーチシリウム属、ノカルディア属、ノカルディオプシ
ス属、サッカロポリスポラ属、ミクロモノスポラ属及び
ストレプトスポランギウム属から選ばれる放線菌、ある
いはバチリス属、ミクロコッカス属、スタフィロコッカ
ス属、シュードモナス属、セラチア属及びコリネバクテ
リウム属から選ばれるバクテリア、あるいはサッカロミ
セス属、キャンディダ属、クリプトコッカス属、デバリ
オミセス属、トリゴノプシス属及びハンセヌラ属から選
ばれる酵母、あるいはアスペルギルス属、ムコール属、
オーレオバシディウム属、カエトミウム属、ペニシリウ
ム属及びグリオクラジウム属から選ばれるカビで処理す
るか、若しくは前記の微生物の菌体の破砕物から得られ
る粗酵素液で処理するか、若しくは１種又はそれ以上の
トランスアミナーゼ、特にグルタミン酸−オキサロ酢酸
−トランスアミナーゼ又はグルタミン酸−ピルビン酸−
トランスアミナーゼ、あるいはこれら酵素の組み合せで
処理することを特徴とする、次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸の製造法が提供される。Therefore, according to the third aspect of the present invention, 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
Oxo-butyric acid, which has the ability to produce transaminase in the presence of aspartic acid or a salt thereof as an amino group donor and has the ability to produce Streptomyces, Streptoverticillium, Nocardia, Nocardiopsis , Sakkaropori Supora genus, Mi Kuromonosupora genus and actinomycetes selected from Streptomyces spot Rangi um genus or Bachirisu genus Micrococcus, Staphylococcus, Pseudomonas, bacteria selected from the genus Serratia and Corynebacterium or Saccharomyces, Genus, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Yeast selected from Trigonopsis and Hansenula, or Aspergillus, Mucor,
Aureobasidium, Caetium, Penicillium and Glyocladium treated with mold, or treated with a crude enzyme solution obtained from a crushed cell of the microorganism, or one or Further transaminases, in particular glutamate-oxaloacetate-transaminase or glutamate-pyruvate-
Characterized in that it is treated with transaminase or a combination of these enzymes, And a method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid represented by the formula:

【００４０】第３の本発明の方法においても、一般に、
OMPBからL-AMPBへの変換のトランスアミノ化反応は、反
応媒質液が pH7.5以上、好ましくは pH8.0〜9.0 の範囲
のアルカリ性ｐＨ値を示すように行うのが好ましい。ｐ
Ｈの調整は水酸化ナトリウム又は適当な緩衝液の添加に
より行われる。トランスアミノ化の反応条件は、反応に
使用されるトランスアミナーゼ産生微生物又はトランス
アミナーゼの作用至適温度及び作用至適ｐＨの範囲であ
るのがよい。通常は、反応は室温〜60℃、好ましくは20
〜50℃の範囲で行うのがよい。In the third method of the present invention, generally,
The transamination reaction for conversion of OMPB to L-AMPB is preferably carried out so that the reaction medium has an alkaline pH value of pH 7.5 or higher, preferably in the range of pH 8.0 to 9.0. p
Adjustment of H is performed by adding sodium hydroxide or an appropriate buffer. The transamination reaction conditions are preferably in the range of the optimal temperature and the optimal pH of the transaminase-producing microorganism or transaminase used in the reaction. Usually, the reaction is carried out at room temperature to 60 ° C., preferably 20 ° C.
It is good to carry out in the range of ~ 50 ° C.

【００４１】第３の本発明の方法においても、反応の開
始の時点で、通常は、反応媒質に溶解された原料基質で
あるOMPBの初発濃度は 0.1〜100mg/mlの範囲であるのが
適当である。反応開始時での反応媒質中のアミノ基供与
体としてのアスパラギン酸の量と基質のOMPBの量とのモ
ル比は、一般的には10：１〜１：10の範囲であることが
できる。その他、第３の本発明の方法は第１又は第２の
本発明の方法に準じて実施できる。アスパラギン酸に代
えてＬ−アラニンを用いることも可能である。In the third method of the present invention as well, at the start of the reaction, the initial concentration of the starting material OMPB dissolved in the reaction medium is usually in the range of 0.1 to 100 mg / ml. It is. At the start of the reaction, the molar ratio of the amount of aspartic acid as the amino group donor in the reaction medium to the amount of OMPB as the substrate can generally be in the range of 10: 1 to 1:10. In addition, the third method of the present invention can be carried out according to the first or second method of the present invention. It is also possible to use L-alanine instead of aspartic acid.

【００４２】また、第３の本発明の方法で用い得る微生
物は、第１の本発明の方法で利用できると例示された放
線菌、細菌、酵母、カビのうち、第３の本発明で上記の
とおり特定された「属」に属して例示される微生物であ
る。また、第３の本発明の方法で用い得るトランスアミ
ナーゼは第２の本発明で例示されたトランスアミナーゼ
である。The microorganisms that can be used in the third method of the present invention include, among actinomycetes, bacteria, yeasts, and molds exemplified as usable in the first method of the present invention, those described above in the third present invention. And microorganisms belonging to the “genus” specified as described above. The transaminase that can be used in the third method of the present invention is the transaminase exemplified in the second present invention.

【００４３】以下に、本発明を実施例により具体的に説
明するが、本発明はこれに限定するものではない。Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to Examples, but the present invention is not limited to these Examples.

【００４４】実施例１ (1) ストレプトミセス・ハイグロスコピカス (Streptom
yces hygroscopicus)SF-1293 NP-50株(FERM- BP-1368)
を前培養培地（可溶性澱粉 2.0％、ポリペプトン 1.0
％、肉エキス 0.3％、燐酸水素二カリウム0.05％； pH
7.0）の10mlに接種した。これを28℃で24時間振盪培養
して得られた培養液を種母として用い、これを２％の接
種量で生産培地（グルコース 7.0％、小麦はい芽 3.9
％、可溶性の植物プロテイン 2.5％、リン酸一カリウム
0.3％、塩化コバルト0.0001％；pH6.8 ）に植菌した。
更に、28℃で通気攪拌培養を行った。[0044] Example 1 (1) Streptomyces hygroscopicus (Streptom
yces hygroscopicus) SF-1293 NP-50 strain (FERM-BP-1368)
The pre-culture medium (soluble starch 2.0%, polypeptone 1.0
%, Meat extract 0.3%, dipotassium hydrogen phosphate 0.05%; pH
7.0). The resulting culture was shake-cultured at 28 ° C. for 24 hours, and the resulting culture was used as a seed medium. This was used at a 2% inoculum in a production medium (glucose 7.0%, wheat germ 3.9).
%, Soluble plant protein 2.5%, monopotassium phosphate
0.3%, cobalt chloride 0.0001%; pH 6.8).
Further, aeration and stirring culture was performed at 28 ° C.

【００４５】(2) 上記生産培地で３日間培養し得たスト
レプトミセス・ハイグロスコピカスSF-1293 NP-50株の
菌体を含む培養液20ml毎に対して、OMPBと、アミノ基供
与体としてのＬ−グルタミン酸ナトリウムと、Ｌ−アス
パラギン酸ナトリウムとをアミノ基転移反応の開始時点
で次の表１の濃度になるような量で添加し、更に１Ｍト
リス−塩酸バッファー(pH8.5) の10mlを加えてpH8.5 に
調整後、液量 100mlとした。すなわち、上記の培養液は
５倍に希釈されたことになる。(2) OMPB and amino group donor were added to each 20 ml of a culture solution containing cells of Streptomyces hygroscopicus SF-1293 NP-50 strain obtained by culturing in the above production medium for 3 days. Of sodium L-glutamate and sodium L-aspartate at the beginning of the transamination reaction in such an amount as to give the concentration shown in Table 1 below. Further, 10 ml of 1 M Tris-HCl buffer (pH 8.5) was added. Was added to adjust the pH to 8.5, and the liquid volume was adjusted to 100 ml. That is, the above culture solution was diluted 5-fold.

【００４６】OMPBのアミノ化反応は、37℃で、菌体を含
み且つOMPBとアミノ基供与体としての２種のアミノ酸と
を含む溶液を弱く振盪しつつ24時間行った。The amination reaction of OMPB was carried out at 37 ° C. for 24 hours while weakly shaking a solution containing the cells and containing OMPB and two amino acids as amino group donors.

【００４７】その後、得られた反応液の 100mlを加熱処
理（滅菌と酵素不活化）して、反応を終了させた。反応
液を濾過して菌体を除去し、その濾液中のL-AMPBをアミ
ノ酸分析器（アトー社製 MLC-703、保持時間12分）で分
析し定量した。結果を表１に示す。Thereafter, 100 ml of the obtained reaction solution was heated (sterilization and enzyme inactivation) to terminate the reaction. The reaction solution was filtered to remove bacterial cells, and L-AMPB in the filtrate was analyzed and quantified by an amino acid analyzer (MLC-703, manufactured by ATTO, retention time: 12 minutes). Table 1 shows the results.

【００４８】 [0048]

【００４９】表１の結果より、アミノ基供与体としてＬ
−グルタミン酸ナトリウムとＬ−アスパラギン酸ナトリ
ウムとの両者を併存させてOMPBのアミノ化反応を実施す
ると、Ｌ−グルタミン酸ナトリウム又はＬ−アスパラギ
ン酸の何れか一方を存在させて反応を行う場合に比べ
て、OMPBからのL-AMPBの生成収率が著しく高まることが
明らかに認められた。From the results in Table 1, it is found that L as an amino group donor
-When performing the amination reaction of OMPB in the presence of both sodium glutamate and sodium L-aspartate, compared to the case where the reaction is performed in the presence of either sodium L-glutamate or L-aspartic acid, It was clearly observed that the production yield of L-AMPB from OMPB was significantly increased.

【００５０】実施例２ 実施例１と同じ前培養条件で培養したストレプトミセス
・ハイグロスコピカスSF-1293 NP-50株の培養液を種母
として用いて、３Ｌ容量のジャーファーメンター中で、
実施例１と同じ生産培地に接種し、次いで28℃で３日
間、通気攪拌培養を行った。 Example 2 A culture solution of Streptomyces hygroscopicus SF-1293 NP-50 strain cultured under the same preculture conditions as in Example 1 was used as a seed mother in a 3 L jar fermenter.
The same production medium as in Example 1 was inoculated, and then aerated and stirred at 28 ° C. for 3 days.

【００５１】得られた培養液の２Ｌを反応槽に移し、OM
PBの 300ｇを添加した。またＬ−グルタミン酸ナトリウ
ム（和光純薬製）の 310ｇと、Ｌ−アスパラギン酸ナト
リウム（半井化学製）の 290ｇとを添加、溶解し、NaOH
水溶液で pH8.5に調整後、水を加えて液量を10Ｌとし
た。すなわち、反応開始時点で、得られた混合液のOMPB
濃度は 30000μｇ/ml であり、この時点でＬ−グルタミ
ン酸ナトリウム及びＬ−アスパラギン酸ナトリウムのモ
ル濃度はそれぞれにOMPBのモル濃度（１／６モル）と等
しくなっている。OMPBのアミノ化の反応は37℃で、菌体
とOMPBと２種のアミノ基供与体化合物とを含む溶液をゆ
っくり攪拌しながらｐＨを 8.5に調整して24時間行っ
た。その後、反応液を50％硫酸で pH3.0に調整した後、
濾過助剤を加えて濾過して、菌体を除去したところ、９
Ｌの濾液が得られた。Transfer 2 L of the obtained culture solution to a reaction tank,
300 g of PB were added. Also, 310 g of sodium L-glutamate (manufactured by Wako Pure Chemical Industries) and 290 g of sodium L-aspartate (manufactured by Hanoi Chemical) were added and dissolved, and NaOH was dissolved.
After adjusting the pH to 8.5 with an aqueous solution, water was added to adjust the liquid volume to 10 L. That is, at the start of the reaction, the OMPB
The concentration is 30,000 μg / ml, at which point the molar concentrations of sodium L-glutamate and sodium L-aspartate are each equal to the molar concentration of OMPB (1/6 mol). The reaction for amination of OMPB was carried out at 37 ° C. for 24 hours by adjusting the pH to 8.5 while slowly stirring a solution containing the cells, OMPB and two amino group donor compounds. Then, after adjusting the reaction solution to pH 3.0 with 50% sulfuric acid,
After adding a filter aid and filtering to remove the cells, 9
L of filtrate was obtained.

【００５２】このとき、濾液中のL-AMPBの濃度を実施例
１と同様に定量したところ、 29000μｇ/ml であった。
ついでこの濾液をダウエックス50Ｗ（Ｈ⁺ 型）の陽イオ
ン交換樹脂５Ｌのカラムに通した後、水で展開した。得
られたL-AMPBを含む画分を、更にダウエックス１×２
（ＣＨ₃ ＣＯＯ^- 型）の陰イオン交換樹脂のカラムにか
けた後、水洗し、 0.3Ｎの酢酸水溶液で溶離した。溶離
液のL-AMPBを含む画分を濃縮乾固後、得られたL-AMPBの
白色粉末をメタノールから結晶化した。L-AMPBの結晶の
183ｇを得た。収率は約70％であった。At this time, the concentration of L-AMPB in the filtrate was determined in the same manner as in Example 1, and it was 29000 μg / ml.
Then, the filtrate was passed through a column of 5 L of a cation exchange resin of Dowex 50 W (H ⁺ type) and developed with water. The obtained fraction containing L-AMPB was further added to Dowex 1 × 2
After being subjected to a column of anion exchange resin ^- (CH ₃ COO form), washed with water and eluted with aqueous acetic acid 0.3 N. The fraction containing L-AMPB as an eluent was concentrated to dryness, and the obtained white powder of L-AMPB was crystallized from methanol. L-AMPB crystal
183 g were obtained. The yield was about 70%.

【００５３】得られた結晶について常法により元素分
析、比旋光度、融点、赤外線吸収スペクトル、核磁気共
鳴スペクトル、質量分析法で分析したところ、L-AMPBの
標品と完全に一致することが確認された。The obtained crystals were analyzed by a conventional method using elemental analysis, specific rotation, melting point, infrared absorption spectrum, nuclear magnetic resonance spectrum, and mass spectrometry. As a result, it was found that the crystals completely agreed with the standard sample of L-AMPB. confirmed.

【００５４】実施例３ 本例では、市販のトランスアミナーゼをOMPBに50mM燐酸
バッファー液（pH６）中で作用させてL-AMPBの生産を行
った。 Example 3 In this example, L-AMPB was produced by causing a commercially available transaminase to act on OMPB in a 50 mM phosphate buffer solution (pH 6).

【００５５】トランスアミナーゼとしてグルタミン酸−
オキサロ酢酸−トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）（ベーリ
ンガー・マンハイム社製）を使用した場合には、Ｌ−ア
スパラギン酸（Ａｓｐ）又はＬ−グルタミン酸（Ｇｌ
ｕ）をアミノ基供与体（アミノ基供与の基質として反応
する）として反応媒質に添加、溶解した。Glutamic acid as a transaminase
When oxaloacetic acid-transaminase (GOT) (Boehringer Mannheim) is used, L-aspartic acid (Asp) or L-glutamic acid (Gl
u) was added and dissolved in the reaction medium as an amino group donor (reacts as a substrate for amino group donation).

【００５６】またグルタミン酸−ピルビン酸−トランス
アミナーゼ（ＧＰＴ）（ベーリンガー・マンハイム社
製）を使用した場合には、参考例として、アミノ基供与
体としてＬ−アラニン（Ａｌａ）を添加した。また、別
の参考例として、グルタミン酸デヒドロゲナーゼ（GLD
H）（ベーリンガー・マンハイム社製）を使用した場合
にはアミノ基供与体てして塩化アンモニウム及びNADHを
それぞれ添加、溶解した。なお、比較のため、アミノ化
反応の対照基質として２−ケトグルタール酸（２−KG）
を用いた場合についてグルタミン酸（Ｇｌｕ）の生成を
観察した。When glutamate-pyruvate-transaminase (GPT) (Boehringer Mannheim) was used, L-alanine (Ala) was added as an amino group donor as a reference example. As another reference example, glutamate dehydrogenase (GLD
When H) (Boehringer Mannheim) was used, ammonium chloride and NADH were added and dissolved as amino group donors, respectively. For comparison, 2-ketoglutaric acid (2-KG) was used as a control substrate for the amination reaction.
The production of glutamic acid (Glu) was observed in the case where was used.

【００５７】上記のようにして30℃で50分間酵素反応を
行った後、３分間、 100℃で反応液を加熱して反応を止
めた。反応液を希硫酸の添加によりpH２に調整した後、
遠心分離によって上清液を得た。上清液中のL-AMPB又は
グルタミン酸の生成量はアミノ酸分析器を用いて定量し
た。その結果を表２に示した。After conducting the enzyme reaction at 30 ° C. for 50 minutes as described above, the reaction was stopped by heating the reaction solution at 100 ° C. for 3 minutes. After adjusting the reaction solution to pH 2 by adding diluted sulfuric acid,
The supernatant was obtained by centrifugation. The amount of L-AMPB or glutamic acid produced in the supernatant was quantified using an amino acid analyzer. The results are shown in Table 2.

【００５８】 [0058]

【００５９】表２の結果から、２−ケトグルタール酸か
らのグルタミン酸の生成量に比べて低い収率であるけれ
ども、酵素反応によりOMPBからL-AMPBが有意な収率で生
成したことが明らかである。From the results in Table 2, it is clear that L-AMPB was produced from OMPB in a significant yield by enzymatic reaction, although the yield was lower than the amount of glutamic acid produced from 2-ketoglutaric acid. .

【００６０】実施例４ 後記の表３に示した試験細菌菌株を、40mlのニュートリ
エントブロス（ディフコ社製）よりなる培地に接種し６
時間増殖培養を行った後に得られた培養液を、種母とし
て用い、これを２％の接種量で40mlの同じ組成の培地に
植菌した。28℃で一夜培養後、菌体を含む培養液に、OM
PBを 100μｇ/ml の濃度になるように添加した。また、
アミノ基供与体としてＬ−アスパラギン酸ナトリウムを
100μｇ/ml の濃度になるように添加した。こうして得
られた混合液を28℃に24時間保ち、OMPBの変換反応を行
った。 Example 4 The test bacterial strains shown in Table 3 below were inoculated into a medium consisting of 40 ml of nutrient broth (manufactured by Difco).
The culture solution obtained after the time-growing culture was used as a seed mother, and this was inoculated into 40 ml of a medium having the same composition at a 2% inoculum. After overnight culture at 28 ° C, add OM
PB was added to a concentration of 100 μg / ml. Also,
Sodium L-aspartate as an amino group donor
It was added to a concentration of 100 μg / ml. The mixture thus obtained was kept at 28 ° C. for 24 hours to carry out an OMPB conversion reaction.

【００６１】その後に、25％の硫酸で反応液をpH２に調
整して反応を止めた。遠心分離によって菌体を除去し
た。得られた上清液中のL-AMPBの生成量はアミノ酸分析
器を用いて定量した。その結果を表３に示した。Thereafter, the reaction solution was adjusted to pH 2 with 25% sulfuric acid to stop the reaction. The cells were removed by centrifugation. The amount of L-AMPB produced in the obtained supernatant was quantified using an amino acid analyzer. Table 3 shows the results.

【００６２】 [0062]

【００６３】表３から、OMPBからL-AMPBが生成されたこ
とは明らかである。From Table 3, it is clear that L-AMPB was produced from OMPB.

【００６４】また、参考値として、前記の一夜培養後の
菌体を含む培養液を超音波処理して得た菌体破砕液を遠
心分離して粗酵素液を収得し、この粗酵素液のＧＯＴ活
性を測定した結果も表３に示した。表３に示すようにL-
AMPBの生成量と粗酵素液のＧＯＴ活性の測定値との間に
は、かなりの相関関係が認められる。また、表３に示さ
れた酵素のＧＯＴ比活性は、粗酵素液中の蛋白質の量を
バイオ−ラッド−プロティン分析法で測定して評価した
値である。As a reference value, a lysate obtained by sonicating the culture solution containing the cells after overnight culture was centrifuged to obtain a crude enzyme solution. Table 3 also shows the results of measuring the GOT activity. As shown in Table 3, L-
There is a considerable correlation between the amount of AMPB produced and the measured GOT activity of the crude enzyme solution. The GOT specific activities of the enzymes shown in Table 3 are values obtained by measuring the amount of protein in the crude enzyme solution by a bio-rad-protein analysis method.

【００６５】実施例５ ストレプトミセス・ハイグロスコピカス (Streptomyces
hygroscopicus) SF-1293株(FERM BP-13O) を前培養培
地（可溶性澱粉 2.0％，ポリペプトン 1.0％，肉エキス
0.3％，燐酸水素二カリウム0.05％； pH7.0）の10mlに
接種した。これを28℃で24時間振盪培養したものを種母
として用い、これを２％の接種量で生産培地〔グルコー
ス 7.0％，バクトソイトン 4.4％，燐酸一カリウム 0.3
27％，燐酸二ナトリウム0.0852％，Ｎ−トリス（ヒドロ
キシメチル）メチル−２−アミノエタンスルホン酸（す
なわちdotite TES）1.15％、塩化コバルト0.0001％； p
H6.0 〕に植菌し28℃で通気攪拌しながら培養を行っ
た。４日間培養後に、遠心分離により菌体を集めて50mM
燐酸バッファー液(pH6.0) で洗浄後、超音波破砕器（KU
BOTA INSONATOR 1.5Ａ）で１分間処理して菌体を破砕
し、菌体破砕物を遠心分離して上澄液として粗酵素液を
得た。[0065] Example 5 Streptomyces hygroscopicus (Streptomyces
hygroscopicus) SF-1293 strain (FERM BP-13O) in preculture medium (soluble starch 2.0%, polypeptone 1.0%, meat extract)
0.3%, 0.05% dipotassium hydrogen phosphate; pH 7.0). This was shake-cultured at 28 ° C. for 24 hours and used as a seed mother. This was used at a 2% inoculum in a production medium [glucose 7.0%, bactosoytone 4.4%, monopotassium phosphate 0.3%).
27%, disodium phosphate 0.0852%, N-tris (hydroxymethyl) methyl-2-aminoethanesulfonic acid (ie dotite TES) 1.15%, cobalt chloride 0.0001%; p
H6.0] and cultured at 28 ° C. with aeration and agitation. After cultivation for 4 days, the cells were collected by centrifugation and 50 mM
After washing with phosphate buffer solution (pH 6.0), sonicator (KU
The cells were treated with a BOTA INSONATOR 1.5A) for 1 minute to disrupt the cells, and the disrupted cells were centrifuged to obtain a crude enzyme solution as a supernatant.

【００６６】OMPBを 100μｇ/ml の濃度に、またＬ−ア
スパラギン酸を 200μｇ/ml の濃度になるように該粗酵
素液に添加した。また、参考のため、アミノ化反応の対
照基質として２−ケトグルタール酸（２−KG）を用いた
反応も行った。OMPB was added to the crude enzyme solution to a concentration of 100 μg / ml and L-aspartic acid to a concentration of 200 μg / ml. For reference, a reaction using 2-ketoglutaric acid (2-KG) as a control substrate for the amination reaction was also performed.

【００６７】30℃で２時間酵素反応を行い、その後、３
分間 100℃で加熱して反応を止めた。反応液を希硫酸の
添加でpH２に調整後、遠心分離によって上清液を得た。
上清液中のL-AMPBと、２−KGから生成されたグルタミン
酸はアミノ酸分析器を用いて定量した。その結果を表４
に示した。The enzyme reaction was carried out at 30 ° C. for 2 hours.
The reaction was stopped by heating at 100 ° C. for minutes. After adjusting the pH of the reaction solution to 2 by adding dilute sulfuric acid, a supernatant was obtained by centrifugation.
Glutamate produced from L-AMPB and 2-KG in the supernatant was quantified using an amino acid analyzer. Table 4 shows the results.
It was shown to.

【００６８】 [0068]

【００６９】実施例６ (1) ストレプトミセス・ハイグロスコピカス (Streptom
yces hygroscopicus)SF-1293 NP-50株(FERM P-7804又
は FERM BP-1368)を前培養培地（可溶性澱粉2.0 ％，ポ
リペプトン 1.0％，肉エキス 0.3％，燐酸水素二カリウ
ム0.05％； pH7.0）の10mlに接種した。これを28℃で24
時間振盪培養し培養液を種母として用い、これを２％の
接種量で生産培地（グルコース 7.0％、バクト ソイト
ン 4.4％、燐酸一カリウム 0.327％、燐酸二ナトリウム
0.0852％、ドータイトのTES 1.15％、塩化コバルト0.00
01％； pH6.0）に植菌し、さらに28℃で通気攪拌しなが
ら培養を行った。[0069] Example 6 (1) Streptomyces hygroscopicus (Streptom
yces hygroscopicus) SF-1293 NP-50 strain (FERM P-7804 or FERM BP-1368) was cultured in a preculture medium (soluble starch 2.0%, polypeptone 1.0%, meat extract 0.3%, dipotassium hydrogen phosphate 0.05%; pH 7.0) 10) was inoculated. 24 at 28 ° C
The culture was shake-cultured for a period of time, and the culture broth was used as a seed. The culture medium was used as an inoculum at 2% in a production medium (7.0% glucose, 4.4% bactosoytone, 0.327% monopotassium phosphate, 0.327% disodium phosphate).
0.0852%, TES 1.15% of dootite, 0.001 cobalt chloride
01%; pH 6.0), and cultivated at 28 ° C. with aeration and agitation.

【００７０】(2) 上記のように生産培地で３日間培養し
たストレプトミセス・ハイグロスコピカス SF-1293 NP-
50株の培養液の20mlと、OMPB水溶液（OMPB濃度87mg/ml
、あらかじめ pH7.0に調整したもの）の30mlと、市販
のＬ−アスパラギン酸ナトリウム水溶液（Ｌ−アスパラ
ギン酸ナトリウム濃度170mg/ml）の40mlと、１Ｍトリス
−塩酸バッファー(pH8.5) の10mlとを 250ml容の三角フ
ラスコ内で合併した（この場合、合併された液中のOMPB
濃度は約26mg/ml になる）。フラスコ内の混合液を37℃
で弱く振盪しつつ24時間反応を行った。(2) Streptomyces hygroscopicus SF-1293 NP-cultured in a production medium for 3 days as described above
20 ml of a culture of 50 strains and an OMPB aqueous solution (OMPB concentration 87 mg / ml
30 ml of an aqueous L-aspartate solution (sodium L-aspartate concentration: 170 mg / ml) and 10 ml of a 1 M Tris-HCl buffer (pH 8.5). Were combined in a 250 ml Erlenmeyer flask (in this case, OMPB in the combined solution)
The concentration will be about 26 mg / ml). 37 ℃ of the mixture in the flask
For 24 hours with gentle shaking.

【００７１】その後、得られた反応混合物を遠心分離し
て菌体を除去し、得られた上清溶液(100ml) をアミノ酸
分析器を用いて分析し、上清溶液中のL-AMPBを検出した
ところ、1.5mg/mlのL-AMPBが生産されたことを確認でき
た。Thereafter, the obtained reaction mixture was centrifuged to remove bacterial cells, and the obtained supernatant solution (100 ml) was analyzed using an amino acid analyzer to detect L-AMPB in the supernatant solution. As a result, it was confirmed that 1.5 mg / ml of L-AMPB was produced.

【００７２】なお、アミノ基供与体として、Ｌ−アスパ
ラギン酸ナトリウムに代えてＬ−アラニン（濃度170mg/
mlで添加）を用いて、同様の実験を実施したが、Ｌ−ア
ラニン使用の場合は2.8mg/mlのL-AMPBが生産された。As an amino group donor, L-alanine (concentration 170 mg / l) was used in place of sodium L-aspartate.
A similar experiment was performed using L-alanine, but 2.8 mg / ml L-AMPB was produced when L-alanine was used.

【００７３】(3) 前項(2) でＬ−アスパラギン酸ナトリ
ウムをアミノ基供与体として使用した場合に得られた上
清溶液(100ml) を 400mlのダウエックス50Ｗ×２（Ｈ⁺
型）の陽イオン交換樹脂塔にかけた後、稀アンモニア水
で展開し、L-AMPBを含む画分を集め、濃縮した。次い
で、これを150 mlのダウエックス１×２（ＣＨ₃ ＣＯＯ
^- 型）の陰イオン交換樹脂塔にかけ、水洗した後、 0.3
Ｎの酢酸水溶液で溶離した。(3) A supernatant solution (100 ml) obtained when sodium L-aspartate was used as the amino group donor in the above item (2) was mixed with 400 ml of Dowex 50W × 2 (H ⁺
After applying to a cation exchange resin tower of type (1), the mixture was developed with dilute aqueous ammonia, and fractions containing L-AMPB were collected and concentrated. This was then mixed with 150 ml of Dowex 1 × 2 (CH ₃ COO).
^- subjected to anion-exchange resin column type), washed with water, 0.3
Elution with an aqueous solution of N acetic acid.

【００７４】溶離液のL-AMPBを含む画分を、減圧下に濃
縮乾固し、更に真空乾燥してL-AMPBの白色粉末を得た。
この白色粉末をメタノールから結晶化させた。得られた
結晶について、常法により元素分析、比旋光度、融点、
赤外線吸収スペクトル、核磁気共鳴スペクトル、質量分
析法で分析したところ、L-AMPBの標品と完全に一致する
ことが確認された。The fraction containing L-AMPB as the eluent was concentrated to dryness under reduced pressure, and further dried under vacuum to obtain a white powder of L-AMPB.
This white powder was crystallized from methanol. For the obtained crystal, elemental analysis, specific rotation, melting point,
Analysis by infrared absorption spectrum, nuclear magnetic resonance spectrum, and mass spectrometry confirmed that it completely matched the L-AMPB sample.

【００７５】実施例７ (1) 培養方法 種培養スラントから後記の表５〜11に示された菌を、液
体培地（グルコース0.5 ％，イーストエキストラクト
0.3％，ミートエキストラクト 1.0％，ペプトン 1.0
％，塩化ナトリウム 0.3％； pH7.0）を10mlづつ入れて
ある大試験管（放線菌の培養の場合にのみステンレス製
コイル入の試験管を用いた）中で前記の液体培地に植菌
し、28℃、24時間（あるいは48時間）、振盪培養した。 Example 7 (1) Cultivation Method The bacteria shown in Tables 5 to 11 below were transformed from a seed culture slant into a liquid medium (glucose 0.5%, yeast extract).
0.3%, meat extract 1.0%, peptone 1.0
%, Sodium chloride 0.3%; pH 7.0) in a large test tube (using a stainless steel coil-containing test tube only for the cultivation of actinomycetes). The cells were cultured at 28 ° C. for 24 hours (or 48 hours) with shaking.

【００７６】(2) 菌体の調製 培養後のブロスを１ml（カビの場合のみ 0.2ml）、ミク
ロテスト・チューブ(micro-test tubes, Eppendorf社
製) に抜取り、 12000rpm.で３分間遠心分離し、上清液
を捨て、残りの菌体を試料として採取した。(2) Preparation of bacterial cells 1 ml of broth after culture (0.2 ml for mold only) was extracted into micro-test tubes (manufactured by Eppendorf), and centrifuged at 12000 rpm for 3 minutes. The supernatant was discarded, and the remaining cells were collected as a sample.

【００７７】(3) アミノ化反応 上記ミクロテスト・チューブにパックされた菌体試料
に、１Ｍ−トリス−塩酸バッファー(pH8.0) の20μｌ
と、OMPB水溶液（OMPB濃度200mg/ml）の20μｌ(pH8.0)
と、アミノ基供与体としてＬ−アスパラギン酸ナトリ
ウム、又はＬ−アラニンの１モル／mlを含有する水溶液
の40μｌと、水の 120μｌとを添加し、37℃、24時間静
置し反応させた。反応後、反応液を 12000rpm.で３分間
遠心分離し、その後に上清液中のL-AMPBの含量をアミノ
酸アナライザーにより、測定した。(3) Amination reaction 20 μl of 1 M Tris-HCl buffer (pH 8.0) was added to the cell sample packed in the microtest tube.
And 20μl of OMPB aqueous solution (OMPB concentration 200mg / ml) (pH 8.0)
Then, 40 μl of an aqueous solution containing 1 mol / ml of sodium L-aspartate or L-alanine as an amino group donor and 120 μl of water were added, and allowed to stand at 37 ° C. for 24 hours to react. After the reaction, the reaction solution was centrifuged at 12000 rpm for 3 minutes, and then the content of L-AMPB in the supernatant was measured by an amino acid analyzer.

【００７８】その結果を次の表５〜11に示す。The results are shown in Tables 5 to 11 below.

【００７９】 表 ５ L-AMPB産生量（mg／ml） 使 用 菌（バクテリア） Asp Ala Bacillus subtilis ATCC 6633 1.9 2.2 Micrococcus luteus ATCC 9341 0.2 0.3 Staphylococcus aureus 209P ATCC 6538P 0.6 0.5 Escherichia coli ATCC 10798 4.2 3.3 Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 3.3 3.8 Pseudomonas cepacia ATCC 17759 2.4 3.0 Serratia marcescens ATCC 13880 1.8 1.6 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 0.3 0.4 Table 5 L-AMPB production amount (mg / ml) Bacteria (bacterium) Asp Ala Bacillus subtilis ATCC 6633 1.9 2.2 Micrococcus luteus ATCC 9341 0.2 0.3 Staphylococcus aureus 209P ATCC 6538P 0.6 0.5 Escherichia coli ATCC 10798 4.2 3.3 Pseudomonas aeruginosa ATCC 10145 3.3 3.8 Pseudomonas cepacia ATCC 17759 2.4 3.0 Serratia marcescens ATCC 13880 1.8 1.6 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 0.3 0.4

【００８０】 [0080]

【００８１】 [0081]

【００８２】 [0082]

【００８３】 表 ９ L-AMPB産生量（mg／ml） 使 用 菌（放線菌） Asp Ala Streptomyces viridochromogenes JCM 4977 * 5.6 3.6 ＊ビアラホス生産菌 Table 9 L-AMPB production amount (mg / ml) Bacteria (actinomycetes) Asp Ala Streptomyces viridochromogenes JCM 4977 * 5.6 3.6 * Bialaphos-producing bacteria

【００８４】 [0084]

【００８５】 表 11 L-AMPB産生量（mg／ml） 使 用 菌（カ ビ） Asp Ala Penicillium funiculosum ATCC 9644 0.4 0.3 Gliocladium virens ATCC 9645 0.4 0.5 ＊培養時間は48時間とした。 Table 11 L-AMPB production amount (mg / ml) Bacteria (mold) used Asp Ala Penicillium funiculosum ATCC 9644 0.4 0.3 Gliocladium virens ATCC 9645 0.4 0.5 * The culture time was 48 hours.

【００８６】本明細書、特に前記の表３及び表５〜表１
１中に示された微生物のうち、ATCC番号を付された菌種
はアメリカン・タイプ・カルチュア・コレクション（米
国、ワシントンD.C.）に寄託されてあり、ＪＣＭ番号を
付された菌種は理化学研究所、微生物系統保存施設(Jap
an Collection of Microoganisms；埼玉県和光市）に寄
託されてあり、ＩＡＭ番号を付された菌種は東京大学応
用微生物研究所(Institute of Applied Microbiology,
University of Tokyo)に寄託されてあり、さらにＩＦＯ
番号を付された菌種は発酵研究所（Institute for Ferm
entation；大阪市）に寄託されてあり、これらの菌種は
夫々の寄託所から分譲、入手できる公知のタイプ・カル
チュア微生物である。In the present specification, in particular, the above-mentioned Table 3 and Tables 5 to 1
Among the microorganisms shown in 1, the ATCC-numbered strains have been deposited with the American Type Culture Collection (Washington, DC, USA), and the JCM-numbered strains have been assigned to RIKEN , Microbial strain preservation facility (Jap
An Collection of Microoganisms (Wako City, Saitama Prefecture), and the IAM numbered bacterial strain is the Institute of Applied Microbiology,
University of Tokyo) and IFO
The numbered bacterial species are from the Institute for Ferm
entation; Osaka City), and these strains are known type culture microorganisms which can be distributed and obtained from the respective depositories.

【００８７】[0087]

【発明の効果】本発明によりOMPBから、アミノ基供与体
としてグルタミン酸とアスパラギン酸との共存下に、も
しくはアスパラギン酸の存在下に、トランスアミラーゼ
生産能をもつ微生物又はトランスアミラーゼの作用によ
りL-AMPBを製造すれば、適正な反応時間で高い又は有意
な収率で安価にL-AMPBを製造できることが明らかとなっ
た。According to the present invention, L-AMPB is produced from OMPB by the action of a microorganism having transamylase-producing ability or transamylase in the presence of glutamic acid and aspartic acid as amino group donors or in the presence of aspartic acid. It has been clarified that L-AMPB can be produced inexpensively at a high or significant yield in an appropriate reaction time by producing.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:625） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:365） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:01） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:29） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:125） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:265） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:445） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:385） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:43） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:15） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:865） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:725） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:645） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:78） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:67） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:66） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:785） (Ｃ１２Ｐ 13/04 Ｃ１２Ｒ 1:80） 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−１３０ 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−１３６８ 微生物の受託番号 ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７ (72)発明者 宮道 慎二 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明治製菓株式会社薬品研究所内 (72)発明者 熊田 要市 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明治製菓株式会社薬品研究所内 (72)発明者 安西 弘行 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明治製菓株式会社薬品研究所内 (72)発明者 高根 信彦 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 吉澤 八千代 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 斉藤 敏則 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 小川 弘 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 武部 英日 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 佐藤 篤行 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 長岡 行蔵 神奈川県横浜市港北区師岡町760番地 明治製菓株式会社薬品研究所内 (72)発明者 深津 俊三 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内 (72)発明者 岡田 明 神奈川県川崎市幸区堀川町580番地 明 治製菓株式会社薬品開発研究所内──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Agency reference number FI Technical indication (C12P 13/04 C12R 1: 625) (C12P 13/04 C12R 1: 365) (C12P 13/04 (C12R 1:01) (C12P 13/04 C12R 1:29) (C12P 13/04 C12R 1: 125) (C12P 13/04 C12R 1: 265) (C12P 13/04 C12R 1: 445) (C12P 13/04 (C12R 1:19) (C12P 13/04 C12R 1: 385) (C12P 13/04 C12R 1:38) (C12P 13/04 C12R 1:43) (C12P 13/04 C12R 1:15) (C12P 13/04 (C12R 1: 865) (C12P 13/04 C12R 1: 725) (C12P 13/04 C12R 1: 645) (C12P 13/04 C12R 1:78) (C12P 13/04 C12R 1:67) (C12P 13/04 C12R 1:66) (C12P 13/04 C12R 1: 785) (C12P 13/04 C12R 1:80) Accession number of microorganism FERM BP-130 Accession number of microorganism FERM BP-1368 Accession number of microorganism FERM BP-737 (72 ) Inventor Shinji Miyamichi 760 Moshioka-cho, Kohoku-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Prefecture Inside the Pharmaceutical Research Laboratories, Meiji Seika Co., Ltd. ) Inventor Hiroyuki Anzai 760 Morioka-cho, Kohoku-ku, Yokohama-shi, Kanagawa Prefecture Inside the Pharmaceutical Research Laboratories, Meiji Seika Co., Ltd. ) Inventor Yachiyo Yoshizawa 580 Horikawa-cho, Saiwai-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa Prefecture Inside the Drug Development Laboratory, Meiji Seika Co., Ltd. (72) Inventor Toshinori Saito 580 Horikawa-cho, Saiwai-ku, Kawasaki City, Kanagawa Prefecture, Japan (72) Inventor Hiroshi Ogawa 580 Horikawa-cho, Saiwai-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa Prefecture Inside the Pharmaceutical Development Laboratory, Meiji Seika Co., Ltd. (72) Inventor Hidebe Takebe 580 Horikawa-cho, Saiwai-ku, Kawasaki-shi, Kanagawa Prefecture Inside the Research Laboratory (72) Inventor Atsuyuki Sato Meiji Seika Co., Ltd. 580, Horikawa-cho, Saiwai-ku, Kawasaki City, Kanagawa Prefecture Inside the Pharmaceutical Development Laboratory (72) Inventor Yukizo Nagaoka 760, Shioka-cho, Kohoku-ku, Yokohama, Kanagawa Prefecture Inside the Pharmaceutical Research Laboratories (72) Inventor Shunzo Fukatsu Meiji Seika Co., Ltd.Meiji Seika Co., Ltd. (580) Horikawacho, Kawasaki-shi, Kanagawa Pref. Inside the company's drug development laboratory

Claims (11)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】 次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸を、アミノ基供与体としてのグルタミン
酸又はその塩とアスパラギン酸又はその塩との存在下に
１つ又はそれ以上のトランスアミナーゼを産生する能力
をもつ微生物で処理することを特徴とする、次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸の製造法。1. The following equation 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
Treating oxo-butyric acid with a microorganism capable of producing one or more transaminases in the presence of glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof as amino group donors, Next formula A method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid represented by the formula: 【請求項２】 使用される微生物がストレプトミセス
属、ストレプトバーチシリウム属、ノカルディア属、ノ
カルディオプシス属、サッカロポリスポラ属、ミクロモ
ノスポラ属及びストレプトスポランギウム属から選ばれ
る放線菌である請求項１に記載の方法。2. A microorganism used is Streptomyces, Streptomyces Birch shea genus, Nocardia genus, Nocardioides Opsys genus Sakkaropori Supora genus, a actinomycete selected from Mi Kuromonosupora genus and Streptomyces spot Rangi um spp claims Item 1. The method according to Item 1. 【請求項３】 使用される微生物がバチルス属、ミクロ
コッカス属、スタフィロコッカス属、エシェリヒア属、
シュードモナス属、セラチア属及びコリネバクテリウム
属から選ばれるバクテリアである請求項１に記載の方
法。3. The microorganism used is Bacillus, Micrococcus, Staphylococcus, Escherichia,
The method according to claim 1, which is a bacterium selected from the genus Pseudomonas, Serratia and Corynebacterium. 【請求項４】 使用される微生物がサッカロミセス属、
キャンディダ属、クリプトコッカス属、デバリオミセス
属、トリゴノプシス属及びハンセヌラ属から選ばれる酵
母である請求項１に記載の方法。4. The microorganism used is Saccharomyces,
The method according to claim 1, which is a yeast selected from the genus Candida, the genus Cryptococcus, the genus Debaryomyces, the genus Trigonopsis, and the genus Hansenula. 【請求項５】 使用される微生物がアスペルギルス属、
ムコール属、オーレオバシディウム属、カエトミウム
属、ペニシリウム属及びグリオクラジウム属から選ばれ
るカビである請求項１に記載の方法。5. The microorganism used is Aspergillus,
The method according to claim 1, which is a mold selected from the genus Mucor, the genus Aureobasidium, the genus Caetium, the genus Penicillium, and the genus Gliocladium. 【請求項６】 使用される微生物がストレプトミセス・
アルバス、ストレプトミセス・グリゼウス、ストレプト
ミセス・ハイグロスコピカス、ストレプトミセス・リビ
ダンス、ストレプトミセス・ビリドクロモゲネス、スト
レプトミセス・ピロサス、ストレプトバーチシリウム・
シンナモニウム、ストレプトミセス・モロオカエンシ
ス、ノカルディア・メジテラニ、ノカルディオプシス・
ダソンビレイ、サロポリスポラ・ヒルスタ、ミクロモノ
スポラ・カルボナシー及びストレプトスポランギウム・
シュードブルガリから選ばれる放線菌、あるいはバチル
ス・ズブチリス、ミクロコッカス・ルテウス、スタフィ
ロコッカス・アウレウス、エシェリヒア・コリ、シュー
ドモナス・エルギノーサ、シュードモナス・セパシア、
セラチア・マルセセンス及びコリネバクテリウム・グル
タミカムから選ばれる細菌、あるいはサッカロミセス・
セリビシイ、キャンディダ・アルビカンス、クリプトコ
ッカス・ネオフォルマンス、デバリオミセス・ハンセ
ニ、トリゴノプシス・バリアビリス、ハンセヌラ・シュ
ネジから選ばれる酵母、あるいはアスペルギルス・フラ
バス、アスペルギルス・テレウス、ムコール・スピネセ
ンス、オーレバシディウム・プルランス、カエトミウム
・グロボサム、ペニシリウム・フニクロサム及びグリオ
クラジウム・ビレンスから選ばれるカビである請求項１
に記載の方法。6. The microorganism used is Streptomyces.
Albus, Streptomyces griseus, Streptomyces hygroscopicus, Streptomyces lividans, Streptomyces viridrochromogenes, Streptomyces pirosus, Streptovertisium
Cinnamonium, Streptomyces molokaensis, Nocardia Mediterrani, Nocardiopsis
Dassonvillei, Saroporisupora-Hirusu data, Mi Kuromonosupora-Karubonashi and streptavidin spot Rangi Umm
Actinomycetes selected from Pseudobulgari, or Bacillus subtilis, Micrococcus luteus, Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas cepacia,
A bacterium selected from Serratia marcescens and Corynebacterium glutamicum, or Saccharomyces
Yeast selected from Seribicii, Candida albicans, Cryptococcus neoformans, Debaryomyces hanseni, Trigonopsis variabilis, Hansenula schneshi, or Aspergillus flavus, Aspergillus terreus, Mucor spinesens, Aurebasidium purans, Caetum 2. A mold selected from globosam, penicillium funiculosum and gliocladium virens.
The method described in. 【請求項７】 使用される微生物は、アミノ基供与体と
してのＬ−アスパラギン酸の存在下に２−ケトグルター
ル酸をグルタミン酸に変換する活性であるＧＯＴ活性を
合せもつトランスアミナーゼと、アミノ基供与体として
Ｌ−グルタミン酸の存在下に式(II)の化合物を式（Ｉ）
の化合物に変換するトランスアミナーゼ活性をもつトラ
ンスアミナーゼとを産出する微生物であるストレプトミ
セス・ハイグロスコピカス SF-1293株(FERM BP-130) あ
るいはその変異株であるストレプトミセス・ハイグロス
コピカス SF-1293 NP-50株(FERM BP-1368)あるいはスト
レプトミセス・リビダンス66株(FERM BP-737) である請
求項１に記載の方法。7. The microorganism used includes a transaminase having a GOT activity that is an activity of converting 2-ketoglutaric acid to glutamic acid in the presence of L-aspartic acid as an amino group donor, and a transaminase as an amino group donor. Compounds of formula (II) in the presence of L-glutamic acid are converted to compounds of formula (I)
A microorganism that produces a transaminase having a transaminase activity that converts to a compound of Streptomyces hygroscopicus SF-1293 strain (FERM BP-130) or a mutant thereof Streptomyces hygroscopicus SF-1293 NP- The method according to claim 1, which is 50 strains (FERM BP-1368) or 66 strains of Streptomyces lividans (FERM BP-737). 【請求項８】 添加されたグルタミン酸又はその塩の濃
度が式（II）の基質化合物の１モル当たりに 0.2〜 3.0
モルに相当する濃度であり、かつ添加されたアスパラギ
ン酸又はその塩の濃度が式（II）の基質化合物の１モル
当りに 1.0〜3.0モルに相当する濃度であり、しかも反
応媒質のｐＨは 8.0〜 9.0のアルカリ性ｐＨ値に維持さ
れる請求項７に記載の方法。8. The concentration of the added glutamic acid or a salt thereof is from 0.2 to 3.0 per mole of the substrate compound of the formula (II).
And the concentration of the added aspartic acid or a salt thereof is a concentration corresponding to 1.0 to 3.0 mol per 1 mol of the substrate compound of the formula (II), and the pH of the reaction medium is 8.0. The method according to claim 7, wherein the alkaline pH value is maintained at ~ 9.0. 【請求項９】 次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸を、アミノ基供与体としてのグルタミン
酸又はその塩とアスパラギン酸又はその塩との存在下に
１つ又はそれ以上のトランスアミナーゼで処理すること
を特徴とする、次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸の製造法。9. The following equation 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
Treating oxo-butyric acid with one or more transaminases in the presence of glutamic acid or a salt thereof and aspartic acid or a salt thereof as an amino group donor, characterized by the following formula: A method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid represented by the formula: 【請求項１０】 使用される酵素が、グルタミン酸−オ
キサロ酢酸−トランスアミナーゼ、あるいはアミノ基供
与体としてのグルタミン酸の存在下に４−（ヒドロキシ
メチルホスフィニル）−２−オキソ−酪酸をＬ−２−ア
ミノ−４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−酪酸に
変換するトランスアミナーゼのいずれか一つ、あるいは
それらの二つ又はそれ以上の組み合わせである請求項９
に記載の方法。10. An enzyme used in the presence of glutamic acid-oxaloacetic acid-transaminase or 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2-oxo-butyric acid in the presence of glutamic acid as an amino group donor. 10. A transaminase that converts to amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid, or a combination of two or more thereof.
The method described in. 【請求項１１】 次式 で示される４−（ヒドロキシメチルホスフィニル）−２
−オキソ−酪酸を、アミノ基供与体としてのアスパラギ
ン酸又はその塩の存在下に、トランスアミナーゼを産生
する能力を有して且つストレプトミセス属、ストレプト
バーチシリウム属、ノカルディア属、ノカルディオプシ
ス属、サッカロポリスポラ属、ミクロモノスポラ属及び
ストレプトスポランギウム属から選ばれる放線菌、ある
いはバチルス属、ミクロコッカス属、スタフィロコッカ
ス属、シュードモナス属、セラチア属及びコリネバクテ
リウム属から選ばれるバクテリア、あるいはサッカロミ
セス属、キャンディダ属、クリプトコッカス属、デバリ
オミセス属、トリゴノプシス属及びハンセヌラ属から選
ばれる酵母、あるいはアスペルギルス属、ムコール属、
オーレオバシディウム属、カエトミウム属、ペニシリウ
ム属及びグリオクラジウム属から選ばれるカビで処理す
るか、若しくは前記の微生物の菌体の破砕物から得られ
る粗酵素液で処理するか、若しくはグルタミン酸−オキ
サロ酢酸−トランスアミナーゼ又はグルタミン酸−ピル
ビン酸−トランスアミナーゼ、あるいはこれら酵素の組
み合わせで処理することを特徴とする、次式 で示されるＬ−２−アミノ−４−（ヒドロキシメチルホ
スフィニル）−酪酸の製造法。11. The following equation 4- (hydroxymethylphosphinyl) -2 represented by
Oxo-butyric acid having the ability to produce transaminase in the presence of aspartic acid or a salt thereof as an amino group donor, and having the ability to produce Streptomyces, Streptoverticillium, Nocardia, Nocardiopsis , Sakkaropori Supora genus, Mi Kuromonosupora genus and actinomycetes selected from Streptomyces spot Rangi um genus or Bacillus genus, Micrococcus, Staphylococcus, Pseudomonas, bacteria selected from the genus Serratia and Corynebacterium or Saccharomyces, Genus, Candida, Cryptococcus, Debaryomyces, Yeast selected from Trigonopsis and Hansenula, or Aspergillus, Mucor,
Aureobasidium, Caetium, Penicillium and Glyocladium treated with a mold, or treated with a crude enzyme solution obtained from a crushed cell of the microorganism, or glutamate-oxalo A treatment with acetic acid-transaminase or glutamic acid-pyruvate-transaminase, or a combination of these enzymes, characterized by the following formula: A method for producing L-2-amino-4- (hydroxymethylphosphinyl) -butyric acid represented by the formula: