JP2613664B2 - マイクロバクテリウム突然変異株８５１ｒ、及び該株の利用による８５１栄養溶液の製造方法 - Google Patents
マイクロバクテリウム突然変異株８５１ｒ、及び該株の利用による８５１栄養溶液の製造方法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はマイクロバクテリウム突然変異株、特に株85
1Rと、単細胞タンパク質栄養溶液を生産するために該株
を産生株として使用する工業的発酵方法と栄養溶液の製
造方法とに係る。
1Rと、単細胞タンパク質栄養溶液を生産するために該株
を産生株として使用する工業的発酵方法と栄養溶液の製
造方法とに係る。
発明の背景 今日、人体により吸収され易い単細胞タンパク質を生
産するために工業的発酵で採用可能な微生物を選択する
べく多くの方法が試みられている。本発明者はSeに富む
単細胞タンパク質とビタミンＥ栄養溶液とアンモニア耐
性アゾトバクターを含む細菌肥料とを製造するための方
法を公表した。この方法は従来の工業的発酵方法により
Zn、Se及びビタミンに富む単細胞タンパク質溶液を生産
するために、アンモニア耐性と大気窒素を使用すること
が可能な窒素固定能力とを有する培養アゾトバクターを
提供する。
産するために工業的発酵で採用可能な微生物を選択する
べく多くの方法が試みられている。本発明者はSeに富む
単細胞タンパク質とビタミンＥ栄養溶液とアンモニア耐
性アゾトバクターを含む細菌肥料とを製造するための方
法を公表した。この方法は従来の工業的発酵方法により
Zn、Se及びビタミンに富む単細胞タンパク質溶液を生産
するために、アンモニア耐性と大気窒素を使用すること
が可能な窒素固定能力とを有する培養アゾトバクターを
提供する。
発明の目的及び要約 本発明の目的は、株851Rを産生株として使用し、株85
1Rの培養と株851Rの増殖に適切な培地の設計とを実施す
ることにより、ダイズを主材料とする851栄養溶液を生
産するための簡便な工業的発酵方法を提供することであ
る。
1Rの培養と株851Rの増殖に適切な培地の設計とを実施す
ることにより、ダイズを主材料とする851栄養溶液を生
産するための簡便な工業的発酵方法を提供することであ
る。
ダイズはタンパク質に富む植物の一種である。ダイズ
はプロテイナーゼインヒビターを含有するので、ダイズ
タンパク質を人体による完全に消化することは困難であ
る。しかしながら、株851Rの細菌により消化後、ダイズ
タンパク質は単細胞タンパク質栄養溶液に転換される。
該栄養溶液は人体により容易に消化されるタンパク質源
であるのみならず、中枢神経系を健康にし、生物の免疫
増強、内分泌機能調節、老化防止、ある種の癌細胞の増
殖阻止の効果を有する一種の栄養溶液を構成する。
はプロテイナーゼインヒビターを含有するので、ダイズ
タンパク質を人体による完全に消化することは困難であ
る。しかしながら、株851Rの細菌により消化後、ダイズ
タンパク質は単細胞タンパク質栄養溶液に転換される。
該栄養溶液は人体により容易に消化されるタンパク質源
であるのみならず、中枢神経系を健康にし、生物の免疫
増強、内分泌機能調節、老化防止、ある種の癌細胞の増
殖阻止の効果を有する一種の栄養溶液を構成する。
本発明の微生物は微生物突然変異株851Rである。この
株の主特徴がグラム陽性菌であり、非運動性であり、硝
酸塩還元能力を有しており、H2Sを生成することが可能
であり、30分間63℃又は15分間72℃に加熱した乳汁中で
生存するという点にある。その葉状体（微生物）は赤又
は橙赤色である。しかしながら、その葉状体の色は約38
℃でピンクに変わり、40℃で無色に変わる。特に、この
株のDNAは特定のＲフラグメントDNAプローブで検出可能
なＲフラグメントを含む。
株の主特徴がグラム陽性菌であり、非運動性であり、硝
酸塩還元能力を有しており、H2Sを生成することが可能
であり、30分間63℃又は15分間72℃に加熱した乳汁中で
生存するという点にある。その葉状体（微生物）は赤又
は橙赤色である。しかしながら、その葉状体の色は約38
℃でピンクに変わり、40℃で無色に変わる。特に、この
株のDNAは特定のＲフラグメントDNAプローブで検出可能
なＲフラグメントを含む。
本発明は更に、単細胞タンパク質栄養溶液を生産する
ために細菌を使用する工業的方法に係る。この方法で
は、本発明で培養した微生物株851Rを産生株として使用
し、ダイズ培地又は澱粉培地を産生培地として使用す
る。
ために細菌を使用する工業的方法に係る。この方法で
は、本発明で培養した微生物株851Rを産生株として使用
し、ダイズ培地又は澱粉培地を産生培地として使用す
る。
詳細な説明 本発明の微生物はマイクロバクテリウム851Rと呼称さ
れる微生物突然変異株である。主な特徴はグラム陽性の
桿体であり、非運動性であり、グリセロールラフィノー
ス同化能力をもち、硝酸塩還元能力をもち、H2S生成能
力をもち、30分間63℃又は15分間72℃に加熱した乳汁中
で生存することである。この葉状体は赤又は橙赤色であ
り、葉状体の色は38℃で薄くなり、40℃で無色になる。
特に、株のDNAは特定のＲフラグメントDNAプローブで検
出可能なＲフラグメントを含む。
れる微生物突然変異株である。主な特徴はグラム陽性の
桿体であり、非運動性であり、グリセロールラフィノー
ス同化能力をもち、硝酸塩還元能力をもち、H2S生成能
力をもち、30分間63℃又は15分間72℃に加熱した乳汁中
で生存することである。この葉状体は赤又は橙赤色であ
り、葉状体の色は38℃で薄くなり、40℃で無色になる。
特に、株のDNAは特定のＲフラグメントDNAプローブで検
出可能なＲフラグメントを含む。
マイクロバクテリウム突然変異株851Rは、米国、1230
1Parklawn Drive,Rockville,Maryland20852に所在のAme
rican Type Culture CollectionにA.T.C.C.寄託番号539
81で寄託されたサンプルの本質的特徴を有する。
1Parklawn Drive,Rockville,Maryland20852に所在のAme
rican Type Culture CollectionにA.T.C.C.寄託番号539
81で寄託されたサンプルの本質的特徴を有する。
851R株は微生物属の他の種から区別される明白な特徴
を有する。株851Rを産生株として適用し、本発明で設計
及び使用される窒素源含有培地を適用すると、ペプチ
ド、種々の微量元素及びビタミン（培養液の分析報告中
に列挙）に富む単細胞タンパク質溶液を生産することが
できる。培養液中には20種を越えるアミノ酸が含まれ
る。この培養液100mlはアミノ酸593〜4172mg、ビタミン
E0.3〜1.0mg、ビタミンB0.1〜0.3mg、ビタミンPP0.5〜
1.0mg、Se1.0〜5.0ppm、Zn10〜20ppm、Mo5.0〜10ppm、C
o5.0〜10ppm、Mn5〜15ppm及びCu3.0〜10ppmを含有す
る。
を有する。株851Rを産生株として適用し、本発明で設計
及び使用される窒素源含有培地を適用すると、ペプチ
ド、種々の微量元素及びビタミン（培養液の分析報告中
に列挙）に富む単細胞タンパク質溶液を生産することが
できる。培養液中には20種を越えるアミノ酸が含まれ
る。この培養液100mlはアミノ酸593〜4172mg、ビタミン
E0.3〜1.0mg、ビタミンB0.1〜0.3mg、ビタミンPP0.5〜
1.0mg、Se1.0〜5.0ppm、Zn10〜20ppm、Mo5.0〜10ppm、C
o5.0〜10ppm、Mn5〜15ppm及びCu3.0〜10ppmを含有す
る。
本発明で調合及び使用される培地の重量組成を以下に
示す。
示す。
1.ダイズ培地 ダイズ粉末 ５〜10％ 又はダイズ乳 （ダイズ重量として計算） ５〜20％ 又は種々の豆類ケーキ、 ヒマワリ種子ケーキ ５〜10％ 酵母エキス又は酵母粉末 0.02〜0.5％ CaCO3 0.05〜0.5％ K2HPO4 0.02〜0.2％ MgSO4 0.01〜0.08％ NaCl 0.01〜0.08％ Na2MoO4 5.0〜50ppm Na2SeO3 1.5〜10ppm ZnSO4 2.5〜50ppm CoCl2 2.5〜20ppm 2.澱粉培地 澱粉を含む生材料 （サツマイモ、ジャガイモ等） 10〜20％ 又は澱粉を含む乾燥材料 （トウモロコシ粉末等） １〜10％ 酵母エキス 0.04〜0.08％ K2HPO4 0.05〜0.1％ MgSO4 0.02〜0.04％ CaCO3 0.05〜0.5％ NaCl 0.02〜0.04％ Na2MoO4 10〜20ppm Na2SeO2 1.5〜20ppm ZnSO4 ５〜20ppm CoCl2 ５〜20ppm 人体に必要な適量の他の微量元素を上記培地に加えて
もよい。元素の量は1.5〜100ppmの範囲である。
もよい。元素の量は1.5〜100ppmの範囲である。
株851Rの利用により栄養溶液を生産するための方法
は、攪拌器及びガストランスファーを備える慣用の槽型
発酵器で曝気培養する段階を含み、必要に応じて発酵器
は培養物を均質化するために培養物を振盪するように構
成してもよく、更に、培養期間中に細菌及び他の微生物
の酸素要求に応えるために過済無菌空気で培養物を曝
気するようにしてもよい。産生株として使用される851R
株は本発明で調製される培地で増殖する。３段階培養
（第１、第２及び第３種子培養）後、その葉状体を予め
加圧滅菌した産生培地に接種し、36〜64時間インキュベ
ートする。培養期間中、無菌空気を培地に通し、曝気速
度1:0.5〜1.0vvm、攪拌速度180〜260rpm、培養温度28〜
40℃とする。インキュベーションの終了後、培養ブロス
を加圧滅菌し、採取する。次に、培養液を直接パッケー
ジングして製品とするが、種々の必要に応じ、異なる処
理方法により種々の製品が得られる。沈殿及び15000rp
m、圧力−0.2〜−0.4kg/cm2で遠心分離後、培養液から
コーラ型の飲料を製造することができる。濃縮後、培養
液は濃縮栄養物になる。オーブン乾燥又はスプレー乾燥
後、培養液は粉末形態となり、これを更に処理してカプ
セル又はタブレットとすることもできる。スプレー乾燥
の場合、入口温度は80℃〜300℃、出口温度は60℃〜120
℃である。培養液を水及び卵の代わりに小麦粉に加え、
パン及びケーキ又は他の食品を焼くことができる。培養
液を化粧品の製造に使用することもできる。
は、攪拌器及びガストランスファーを備える慣用の槽型
発酵器で曝気培養する段階を含み、必要に応じて発酵器
は培養物を均質化するために培養物を振盪するように構
成してもよく、更に、培養期間中に細菌及び他の微生物
の酸素要求に応えるために過済無菌空気で培養物を曝
気するようにしてもよい。産生株として使用される851R
株は本発明で調製される培地で増殖する。３段階培養
（第１、第２及び第３種子培養）後、その葉状体を予め
加圧滅菌した産生培地に接種し、36〜64時間インキュベ
ートする。培養期間中、無菌空気を培地に通し、曝気速
度1:0.5〜1.0vvm、攪拌速度180〜260rpm、培養温度28〜
40℃とする。インキュベーションの終了後、培養ブロス
を加圧滅菌し、採取する。次に、培養液を直接パッケー
ジングして製品とするが、種々の必要に応じ、異なる処
理方法により種々の製品が得られる。沈殿及び15000rp
m、圧力−0.2〜−0.4kg/cm2で遠心分離後、培養液から
コーラ型の飲料を製造することができる。濃縮後、培養
液は濃縮栄養物になる。オーブン乾燥又はスプレー乾燥
後、培養液は粉末形態となり、これを更に処理してカプ
セル又はタブレットとすることもできる。スプレー乾燥
の場合、入口温度は80℃〜300℃、出口温度は60℃〜120
℃である。培養液を水及び卵の代わりに小麦粉に加え、
パン及びケーキ又は他の食品を焼くことができる。培養
液を化粧品の製造に使用することもできる。
851栄養溶液は老化防止効果、体質改善、肝臓及び胃
を良好な状態に維持する効果を有する。以下、実験によ
り発明を詳細に説明する。
を良好な状態に維持する効果を有する。以下、実験によ
り発明を詳細に説明する。
実験１ 抗過酸化脂質効果 体重17.8±1.75gのオスKunming産マウスを使用し、体
重にしたがって数群に分けた。各群を10匹から構成し
た。試験マウスに13日間連続して水道水の代わりに851
栄養溶液（851NSと省略）を与え、14日目に絶食させ
た。次に、これらの試験マウスの半数に851NSでなく水
道水を与えた。試験マウスの残りの半数には引き続き85
1栄養溶液を飲用させ、午後４時にCCl4を腹腔内投与し
た。
重にしたがって数群に分けた。各群を10匹から構成し
た。試験マウスに13日間連続して水道水の代わりに851
栄養溶液（851NSと省略）を与え、14日目に絶食させ
た。次に、これらの試験マウスの半数に851NSでなく水
道水を与えた。試験マウスの残りの半数には引き続き85
1栄養溶液を飲用させ、午後４時にCCl4を腹腔内投与し
た。
対照群のマウスには851NSでなく水道水を与え且つ14
日目にパラフィン油（CCl4溶剤）を腹腔内投与した以外
は、試験群と同一の飼料を与えた。
日目にパラフィン油（CCl4溶剤）を腹腔内投与した以外
は、試験群と同一の飼料を与えた。
CCl4対照群のマウスに同一飼料を与え且つ水道水を飲
用させた。それらの動物を絶食させ、午後にCCl4（1.87
mmol/kg）を腹腔内投与した。
用させた。それらの動物を絶食させ、午後にCCl4（1.87
mmol/kg）を腹腔内投与した。
15日目に動物を殺し、肝臓サンプルを調製した。Hiro
shi Ohakawa（Hiroshi Ohakawa et al.Aual.Biochem.9
5:351−358,1979）の方法にしたがって肝臓のMDAを検出
し、1,1,3,3−テトラメトキシプロパン（日本TCI製品、
E.P.グレード）を過酸化脂質の検出用標準サンプルとし
て使用し、スペクトロフォトメーターを使用してMDAの
吸光度を検出した。MDA含有量を肝臓ｇ当たりnmolとし
て表す。データを統計的に分析した。結果は次の通りで
あった。
shi Ohakawa（Hiroshi Ohakawa et al.Aual.Biochem.9
5:351−358,1979）の方法にしたがって肝臓のMDAを検出
し、1,1,3,3−テトラメトキシプロパン（日本TCI製品、
E.P.グレード）を過酸化脂質の検出用標準サンプルとし
て使用し、スペクトロフォトメーターを使用してMDAの
吸光度を検出した。MDA含有量を肝臓ｇ当たりnmolとし
て表す。データを統計的に分析した。結果は次の通りで
あった。
この結果、851栄養溶液は所定の条件で老化防止に有
用な強い抗過酸化脂質活性を有することが判明した。
用な強い抗過酸化脂質活性を有することが判明した。
実験２ 遊泳試験 体重15〜24gのオスKunming産マウスを使用し、数群に
分けた。マウスに水、チョウセンニンジン、Nestle粉ミ
ルク及び851NSを夫々与えた。
分けた。マウスに水、チョウセンニンジン、Nestle粉ミ
ルク及び851NSを夫々与えた。
851NS群のマウスは水道水の代わりに851NS（５〜6ml/
日）を４日間与えた。
日）を４日間与えた。
対照群のマウスには水道水を４日間与えた。
Nestle粉ミルク群のマウスには水道水の代わりに0.01
％Nestle粉ミルクを４日間与えた。
％Nestle粉ミルクを４日間与えた。
天然のチョウセンニンジンをスライス状に細分し、沸
騰水に約３時間浸漬し、その後、弱く加熱しながら15分
間に２回沸騰させて濃度0.001％とし、これを水道水の
代わりにマウスに４日間与えた。Wang Yun−muo（Journ
al of Shanghai Medicine2:46−48,1985）の方法に従っ
て遊泳試験を実施した。結果を以下に示す。
騰水に約３時間浸漬し、その後、弱く加熱しながら15分
間に２回沸騰させて濃度0.001％とし、これを水道水の
代わりにマウスに４日間与えた。Wang Yun−muo（Journ
al of Shanghai Medicine2:46−48,1985）の方法に従っ
て遊泳試験を実施した。結果を以下に示す。
この結果、851栄養溶液はマウスの遊泳時間を大幅に
延ばし、マウスの体格を改善することが判明した。
延ばし、マウスの体格を改善することが判明した。
実験３ 胃癌細胞（（FGC）に対する抑制効果 使用済み培養液の廃棄後、良好な繁殖状態の胃癌細胞
（FGC）を0.02％EDTAで消化し、15％ウシ血清を含有す
る1640培地で洗浄した。生存細胞をトリプトファンブル
ーで計数し、総容量1ml（１×10-5/ml）中で37℃で24時
間培養した。次に細胞を洗浄し、851NS（0.2ml/ml）を
含有する同一培地で培養した。対照群の細胞を容量1ml
の培地（15％ウシ血清を含有する1640培地10ml及び851N
S2ml）で37℃で24時間培養した。各群のウェルは２つず
つ用意した。次に、使用済み培地を廃棄した。0.02％ED
TA0.9ml及びトリプトファンブルー0.1mlを加え、生存細
胞を計数した。
（FGC）を0.02％EDTAで消化し、15％ウシ血清を含有す
る1640培地で洗浄した。生存細胞をトリプトファンブル
ーで計数し、総容量1ml（１×10-5/ml）中で37℃で24時
間培養した。次に細胞を洗浄し、851NS（0.2ml/ml）を
含有する同一培地で培養した。対照群の細胞を容量1ml
の培地（15％ウシ血清を含有する1640培地10ml及び851N
S2ml）で37℃で24時間培養した。各群のウェルは２つず
つ用意した。次に、使用済み培地を廃棄した。0.02％ED
TA0.9ml及びトリプトファンブルー0.1mlを加え、生存細
胞を計数した。
n1及びn2は夫々対照群及び試験群における生存細胞の数
である。
である。
この結果、胃癌細胞に対する851NSの平均抑制率は30
％であることが判明した。
％であることが判明した。
実験４ Euplotes crassus）細胞***に及ぼす効果 Euplotes crassusは海水中で生存する単細胞生物であ
る。細胞齢は無性生殖世代により表され、1000〜1500の
範囲である。
る。細胞齢は無性生殖世代により表され、1000〜1500の
範囲である。
Euplotes crassus細胞の老化はある種の代謝変化に関
係する。これらの変化のうちで細胞***速度の低下は細
胞老化の最も顕著な特徴のひとつである。10％の851NS
を含有する海水中で細胞を培養すると、Euplotes crass
us細胞の***速度は著しく増加した。培養期間中の５日
間の細胞***速度（世代／日）を以下に示す。
係する。これらの変化のうちで細胞***速度の低下は細
胞老化の最も顕著な特徴のひとつである。10％の851NS
を含有する海水中で細胞を培養すると、Euplotes crass
us細胞の***速度は著しく増加した。培養期間中の５日
間の細胞***速度（世代／日）を以下に示す。
上表から明らかなように、Euplotes crassus細胞の分
裂速度は海水培地が10％の851NSを含有するとき1.11〜
1.67倍増加した。851NSを細胞に食菌すると細胞代謝は
改善された。
裂速度は海水培地が10％の851NSを含有するとき1.11〜
1.67倍増加した。851NSを細胞に食菌すると細胞代謝は
改善された。
培地が10％の851栄養溶液を含有するとき、老化したE
uplotes crassus細胞（200世代齢）の***速度は1.4倍
（0.33〜0.79世代／日）増加した。
uplotes crassus細胞（200世代齢）の***速度は1.4倍
（0.33〜0.79世代／日）増加した。
この結果、851栄養溶液は老化した細胞の代謝を改善
できることが判明した。
できることが判明した。
実験５ 新生マウスの体重、ヘモグロビン及び白血球分
化に及ぼす851NSの効果 1.材料： Kunming産マウスをFujian Medical Collegeの動物セ
ンターから入手した。851栄養溶液のバッチ番号は06で
ある。
化に及ぼす851NSの効果 1.材料： Kunming産マウスをFujian Medical Collegeの動物セ
ンターから入手した。851栄養溶液のバッチ番号は06で
ある。
2.方法： 12匹の妊娠中のKunming産マウスに標準飼料及び水道
水を別々に与えた。分娩後、12匹のマウスを対照群と85
1NS群とにランダムに分けた。吸乳時に同産（同じ親か
ら産まれた）の新生マスを計量した。対照及び851NS群
の母親及び新生マウスに吸乳期間中及び離乳から15日後
に夫々標準飼料又は851NSを含有する飼料を与えた。次
に、同産の新生マウスを計量した。新生マウスの眼球か
ら血液サンプルを採取した。新生マウスの体重増加及び
白血球分類は次の通りであった。
水を別々に与えた。分娩後、12匹のマウスを対照群と85
1NS群とにランダムに分けた。吸乳時に同産（同じ親か
ら産まれた）の新生マスを計量した。対照及び851NS群
の母親及び新生マウスに吸乳期間中及び離乳から15日後
に夫々標準飼料又は851NSを含有する飼料を与えた。次
に、同産の新生マウスを計量した。新生マウスの眼球か
ら血液サンプルを採取した。新生マウスの体重増加及び
白血球分類は次の通りであった。
結果及び考察 1.結果： 1.1第１表は新生マウスの体重変化を示す。
1.2第２表は新生マウスの白血球分化に及ぼす851NSの効
果を示す。
果を示す。
2.考察 851栄養溶液は20種を越えるアミノ酸、数種のビタミ
ン及び微量元素を含有する生物工学産物であった。結果
から明らかなように、851栄養溶液は新生マウスのリン
パ球の値を著しく増加させ、従って、851NSは新生マウ
スの増血機能を刺激及び改善し得ることが判明した。
ン及び微量元素を含有する生物工学産物であった。結果
から明らかなように、851栄養溶液は新生マウスのリン
パ球の値を著しく増加させ、従って、851NSは新生マウ
スの増血機能を刺激及び改善し得ることが判明した。
更に結果として、851NSは新生マウスの体重を増加す
ることができ、851NSは新生マウスの発育を増進する成
分を含むことが判明した。
ることができ、851NSは新生マウスの発育を増進する成
分を含むことが判明した。
実験６ マウスの胃粘膜の亜慢性損傷に対する851NSの
治療効果 1.材料 体重42〜44gの雌雄のKunming産マウスをFujian Medic
al Collegeの動物センターから入手した。851NS、4N HC
l及び0.1％インドメタシンを使用した。
治療効果 1.材料 体重42〜44gの雌雄のKunming産マウスをFujian Medic
al Collegeの動物センターから入手した。851NS、4N HC
l及び0.1％インドメタシンを使用した。
2.方法 2.1マウスの胃粘膜の亜慢性損傷モデルの作成 ８匹のマウスをランダムに２群に分けた。対照群のマ
ウスには正規食塩水を１日１回経口投与した。試験群の
マウスには4N HCl又は0.1％インドメタシンを交互に１
日１回２日間（経口）投与した。これらのマウスに通常
の飼料及び水道水を与えた。10日後、マウスを殺した。
胃を取り出し、水洗した。対照群の胃粘膜はつやのある
赤色を示したが、試験群の胃粘膜はつやがなく、色が薄
く、膨張していた。胃腔に固定用の10％中性ホルマリン
を充填し、パラフィンワックスでセクションに分け、HE
染色で染色した。胃粘膜を顕微鏡で検査した処、粘膜の
内皮は薄くなり、腐食したケラチン物質で覆われ、胃腺
には腐食した壊死が散在していることが判明した。対照
群には顕著な変化は認められなかった。上記方法は亜慢
性損傷のモデルとなり得ることが確認された。
ウスには正規食塩水を１日１回経口投与した。試験群の
マウスには4N HCl又は0.1％インドメタシンを交互に１
日１回２日間（経口）投与した。これらのマウスに通常
の飼料及び水道水を与えた。10日後、マウスを殺した。
胃を取り出し、水洗した。対照群の胃粘膜はつやのある
赤色を示したが、試験群の胃粘膜はつやがなく、色が薄
く、膨張していた。胃腔に固定用の10％中性ホルマリン
を充填し、パラフィンワックスでセクションに分け、HE
染色で染色した。胃粘膜を顕微鏡で検査した処、粘膜の
内皮は薄くなり、腐食したケラチン物質で覆われ、胃腺
には腐食した壊死が散在していることが判明した。対照
群には顕著な変化は認められなかった。上記方法は亜慢
性損傷のモデルとなり得ることが確認された。
2.2マウスの胃粘膜の亜慢性損傷に対する851NSの治療効
果 30匹のマウスを対照群と851群とにランダムに分け、
上記方法に従ってHCl又はインドメタシンを交互に10日
間投与した。これらの２群のマウスに夫々標準飼料又は
851を含有する飼料を10日間与え、HCl又はインドメタシ
ンの投与を停止してからも７日間飼料を与え続けた。次
にマウスを殺した。上記方法に従って胃粘膜の変化を試
験した。
果 30匹のマウスを対照群と851群とにランダムに分け、
上記方法に従ってHCl又はインドメタシンを交互に10日
間投与した。これらの２群のマウスに夫々標準飼料又は
851を含有する飼料を10日間与え、HCl又はインドメタシ
ンの投与を停止してからも７日間飼料を与え続けた。次
にマウスを殺した。上記方法に従って胃粘膜の変化を試
験した。
結果及び考察 対照及び851群の間の胃粘膜の形態に顕著な差異は認
められなかった。851群の胃の前部の粘膜は対照群より
もやや薄かった。結果として、851は胃粘膜の損傷の回
復に有益であることが判明した。
められなかった。851群の胃の前部の粘膜は対照群より
もやや薄かった。結果として、851は胃粘膜の損傷の回
復に有益であることが判明した。
実験７ ラットの胃粘膜の出血に対する851の治療効果 材料及び方法 1.方法 ラットを対照及び851群にランダムに分け、夫々標準
飼料及び851を含有する飼料（8ml/ラット）を与えた。
全ラットに十分な水道水を与え。15日後、全ラットを14
日間絶食させ、１日１回の割合で２日間インドメタシン
（2.5mg/ラット）を皮下投与した。２回目の注射から18
時間後、ラットを殺し、胃を試験した。
飼料及び851を含有する飼料（8ml/ラット）を与えた。
全ラットに十分な水道水を与え。15日後、全ラットを14
日間絶食させ、１日１回の割合で２日間インドメタシン
（2.5mg/ラット）を皮下投与した。２回目の注射から18
時間後、ラットを殺し、胃を試験した。
結果及び考察 1.結果 胃粘膜の急性出血の数及び程度：対照群では６匹のマ
ウス、851群では４匹のマウスの胃粘膜の出血が斑状、
縞状又は伸長状態で局所的に制限された。対照群の１匹
のラットに胃粘膜の拡散出血が発生した。胃粘膜の出血
点の株は対照群で６〜12カ所、851群で２〜８カ所であ
った。対照群の胃粘膜の出血の数は851群よりも著しく
多数であった。
ウス、851群では４匹のマウスの胃粘膜の出血が斑状、
縞状又は伸長状態で局所的に制限された。対照群の１匹
のラットに胃粘膜の拡散出血が発生した。胃粘膜の出血
点の株は対照群で６〜12カ所、851群で２〜８カ所であ
った。対照群の胃粘膜の出血の数は851群よりも著しく
多数であった。
2.考察 結果から明らかなように、インドメタシンで誘導した
胃粘膜の出血はラットに851NSを15日間与えた場合に阻
止された。
胃粘膜の出血はラットに851NSを15日間与えた場合に阻
止された。
実験８ CCl4で誘導したラットの亜慢性肝損傷に及ぼす
851NSの効 果 材料及び方法 1.材料 体重140〜220gのWistar産ラット22匹（オス10匹及び
メス12匹）をFujian Medical Collegeの動物センターか
ら入手した。CCl4分析グレードは精製落花生油で濃度40
％に希釈した。851NS、寒天ゲル（Shanghai Chemical A
gent Manufactoryの製品）及びLEB多用途電気泳動装置
を使用した。
851NSの効 果 材料及び方法 1.材料 体重140〜220gのWistar産ラット22匹（オス10匹及び
メス12匹）をFujian Medical Collegeの動物センターか
ら入手した。CCl4分析グレードは精製落花生油で濃度40
％に希釈した。851NS、寒天ゲル（Shanghai Chemical A
gent Manufactoryの製品）及びLEB多用途電気泳動装置
を使用した。
2.方法 22匹のラットをランダムに対照群（ｎ＝６）、CCl4群
（ｍ＝８）及びCCl4＋851群（ｎ＝８）の３群に分け
た。CCl4及びCCl4＋851群のラットにはCCl4（0.1ml/100
g）を１週間に２回（３日おき）の割合で５週間皮下投
与した。対照及びCCl4群のラットには標準飼料を与え
た。CCl4＋851群のラットには851NSを含有する飼料（8m
l/ラット,/日）を与えた。全ラットに５週間十分な水道
水及び飼料を与えた。CCl4の最終投与から５日後に、腋
窩静脈から血液を採取した。血清を集め、肝機能を検出
した。LEB電気泳動装置を使用して血清タンパク質の電
気泳動を実施した。肝臓の病理変化を試験した。
（ｍ＝８）及びCCl4＋851群（ｎ＝８）の３群に分け
た。CCl4及びCCl4＋851群のラットにはCCl4（0.1ml/100
g）を１週間に２回（３日おき）の割合で５週間皮下投
与した。対照及びCCl4群のラットには標準飼料を与え
た。CCl4＋851群のラットには851NSを含有する飼料（8m
l/ラット,/日）を与えた。全ラットに５週間十分な水道
水及び飼料を与えた。CCl4の最終投与から５日後に、腋
窩静脈から血液を採取した。血清を集め、肝機能を検出
した。LEB電気泳動装置を使用して血清タンパク質の電
気泳動を実施した。肝臓の病理変化を試験した。
結果及び考察 1.結果： 1.1ラットSGPT 1.2これらの群の間でチモール濁り試験（TTT）及び硫酸
亜鉛濁り試験（ZnTT）に顕著な差異は認められなかっ
た。
亜鉛濁り試験（ZnTT）に顕著な差異は認められなかっ
た。
1.3肉眼による肝臓観察：対照群の肝臓嚢の色及びつや
は正常であった。肝臓嚢はつやがあった。CCl4群のラッ
トの肝臓嚢は水様変性（watery degeneration）を伴う
肝臓の形態変化に従い薄茶色でつやがなかった。CCl4＋
851群のラットの肝臓形態はCCl4群よりも良好であった
が、対照群よりは劣った。
は正常であった。肝臓嚢はつやがあった。CCl4群のラッ
トの肝臓嚢は水様変性（watery degeneration）を伴う
肝臓の形態変化に従い薄茶色でつやがなかった。CCl4＋
851群のラットの肝臓形態はCCl4群よりも良好であった
が、対照群よりは劣った。
1.4顕微鏡による肝臓観察：対照群では弱い水様変性を
示す１匹を除く５匹のラットの肝臓組織構造を正常であ
った。CCl4群の８匹のラットは顕著な肝臓水様変性を示
した。肝小葉の外側部分の血漿は拡散又は集中した網状
アレオシス（areosis）を示した。肝小葉の中心部分の
細胞は正常なものと変性したものがあった。脂肪変性し
た肝細胞は散在又は集中しており、水様変性細胞から区
別することは困難であった。CCl4＋851群の６匹のラッ
トの肝臓はCCl4群のラットよりも水様変性が少なく、他
の２匹のラットはCCl4群と同一程度の水様変性を示し
た。ラットの肝臓組織変化は肝機能SGPTの結果に従っ
た。これは全群のラットSGPTの結果が信頼できることを
意味する。
示す１匹を除く５匹のラットの肝臓組織構造を正常であ
った。CCl4群の８匹のラットは顕著な肝臓水様変性を示
した。肝小葉の外側部分の血漿は拡散又は集中した網状
アレオシス（areosis）を示した。肝小葉の中心部分の
細胞は正常なものと変性したものがあった。脂肪変性し
た肝細胞は散在又は集中しており、水様変性細胞から区
別することは困難であった。CCl4＋851群の６匹のラッ
トの肝臓はCCl4群のラットよりも水様変性が少なく、他
の２匹のラットはCCl4群と同一程度の水様変性を示し
た。ラットの肝臓組織変化は肝機能SGPTの結果に従っ
た。これは全群のラットSGPTの結果が信頼できることを
意味する。
1.5ラット血清タンパク質の電気泳動：各群から２つの
血清サンプルを電気泳動に使用した。結果はこれらの群
に差異がないことを示した。これらの結果から、CCl4で
誘導した肝臓損傷はラットの血清タンパク質に変化をも
たらさないことが判明した。
血清サンプルを電気泳動に使用した。結果はこれらの群
に差異がないことを示した。これらの結果から、CCl4で
誘導した肝臓損傷はラットの血清タンパク質に変化をも
たらさないことが判明した。
1.6体重増加：CCl4＋851群のラットの体重増加は他の群
よりも大きかったが、これらの群の間に統計的に顕著な
差異は認められなかった（ｐ＞0.05）。
よりも大きかったが、これらの群の間に統計的に顕著な
差異は認められなかった（ｐ＞0.05）。
2.考察 肉眼及び顕微鏡によりラット血清SGPT及び形態変化を
検査した結果、851はCCl4で誘導した亜慢性肝臓損傷に
対して予防及び治療効果を示すことが判明した。
検査した結果、851はCCl4で誘導した亜慢性肝臓損傷に
対して予防及び治療効果を示すことが判明した。
実験９ 新生及び吸乳期マウスの体重変化に及ぼす851N
Sの効果 材料及び方法 1.材料 Kunming産マウスをFujian Medical Collegeの動物セ
ンターから入手した。851NS（バッチ番号06）を使用し
た。
Sの効果 材料及び方法 1.材料 Kunming産マウスをFujian Medical Collegeの動物セ
ンターから入手した。851NS（バッチ番号06）を使用し
た。
2.方法 同一種のオスマウスと交尾させ、予め妊娠していると
見なされる（膣血栓を有する）Kunming産メスマウス27
匹を対照群及び851群にランダムに分けた。対照群のマ
ウスには標準飼料を与え、851群のマウスには851を含有
する飼料を与えた。全マウスに水道水を与えた。７匹の
マウスを各群からランダムに抽出し、腹部の肥大から妊
娠していることを確認後、上記方法により別々に飼料を
与えた。同産の新生マウスを出産日及び20日間吸乳後に
計量した。新生及び吸乳中のマウスの体重及び外観を検
査した。
見なされる（膣血栓を有する）Kunming産メスマウス27
匹を対照群及び851群にランダムに分けた。対照群のマ
ウスには標準飼料を与え、851群のマウスには851を含有
する飼料を与えた。全マウスに水道水を与えた。７匹の
マウスを各群からランダムに抽出し、腹部の肥大から妊
娠していることを確認後、上記方法により別々に飼料を
与えた。同産の新生マウスを出産日及び20日間吸乳後に
計量した。新生及び吸乳中のマウスの体重及び外観を検
査した。
結果及び考察 1.結果 1.1新制マウス（出産直後）の体重に及ぼす851NSの効果 1.2吸乳期のマウスの体重に及ぼす851NSの効果を第４表
に示す。
に示す。
1.3外観、食事能力及び一般活動に異常な現象は観察さ
れなかった。
れなかった。
2.考察 2.1第３表から明らかなように、メスマウスに妊娠期間
中に851NSを与えると851NSはマウス胎児の体重増加を促
進することができた（ｐ＜0.01）。
中に851NSを与えると851NSはマウス胎児の体重増加を促
進することができた（ｐ＜0.01）。
2.2第４表から明らかなように、メスマウスに授乳期間
中に851NSを与えると851NSは吸乳中のマウスの体重増加
を促進することができた（ｐ＜0.05）。
中に851NSを与えると851NSは吸乳中のマウスの体重増加
を促進することができた（ｐ＜0.05）。
2.3結果から明らかなように、メスマウスに妊娠から授
乳まで40日間851NSを与えたとき、異常発生（例えば胎
児奇形）及び逆効果は観察されなかった。
乳まで40日間851NSを与えたとき、異常発生（例えば胎
児奇形）及び逆効果は観察されなかった。
以下、本発明の実施例を非限定的に説明する。
実施例１ この調製には2.5t容の槽形発酵器を使用した。種子発
酵器は0.5t容とした。粗材料の装入量は40％であり、ダ
イズ粉末５％、酵母エキス0.04％、KH2PO40.05％、MgSO
40.02％、CaCO30.02％、NaCl0.02％、Na2MoO410ppm、Na
2MoO32.5ppm、ZnSO410ppm、CoCl22.5ppm及び水を含有す
る産生培地として５％ダイズ培地を採用した。接種材料
の量は１％であり、種子発酵器は2l、細胞齢は24時間
（第１種子培養−第２種子培養−第３種子培養、24時間
インキュベートした培養物を接種材料として使用）、培
養温度は30℃とし、攪拌速度260rpm、曝気速度1:0.8vvm
とした。培養物のインキュベーションは45時間持続し
た。インキュベーションの終了後、培養物を加圧滅菌
し、アセンブリラインを通してびんに詰め、その後、再
び加圧滅菌して最終製品とした。培養液100mlは乾燥材
料3.7％、タンパク質2.06％、脂質0.23％、炭水化物 0.75％、ビタミン及び無機塩を含有していた（第５
表）。
酵器は0.5t容とした。粗材料の装入量は40％であり、ダ
イズ粉末５％、酵母エキス0.04％、KH2PO40.05％、MgSO
40.02％、CaCO30.02％、NaCl0.02％、Na2MoO410ppm、Na
2MoO32.5ppm、ZnSO410ppm、CoCl22.5ppm及び水を含有す
る産生培地として５％ダイズ培地を採用した。接種材料
の量は１％であり、種子発酵器は2l、細胞齢は24時間
（第１種子培養−第２種子培養−第３種子培養、24時間
インキュベートした培養物を接種材料として使用）、培
養温度は30℃とし、攪拌速度260rpm、曝気速度1:0.8vvm
とした。培養物のインキュベーションは45時間持続し
た。インキュベーションの終了後、培養物を加圧滅菌
し、アセンブリラインを通してびんに詰め、その後、再
び加圧滅菌して最終製品とした。培養液100mlは乾燥材
料3.7％、タンパク質2.06％、脂質0.23％、炭水化物 0.75％、ビタミン及び無機塩を含有していた（第５
表）。
実施例２ この調製には8t容の槽形発酵器を使用した。粗材料の
装入量は40％とした。すなわち、培地の量を3.2tとし
た。10％ダイズ乳を採用した。培地はダイズ320kg、酵
母エキス1.28kg、KH2PO41.6kg、MgSO4640g、CaCO3640
g、NaCl640g、Na2MoO432g、Na2SeO38g、ZnSO432g、CoCl
28g及び水を含有するものとした。接種材料の量は１
％、細胞齢は24時間（第１種子培養、第２種子培養及び
第３種子培養、24時間インキュベートした培養物を接種
材料として使用）とした。培養温度30℃、攪拌速度220r
pm、曝気速度1:0.8vvmとした。種子発酵器でインキュベ
ーションの終了後、接種材料を8t容槽形発酵器に接種
し、培養温度30℃、攪拌速度220rpm、曝気速度1:0.8vvm
とした。48時間後にインキュベーションを終了し、培養
液を加圧滅菌し、アセンブリラインを通してびんに詰
め、再び加圧滅菌して最終製品を得た。培養液100ml
は、アスパラギン酸543mg、グルタミン酸710mg、セリン
160mg、グリシン280mg、ヒスチジン65mg、アルギニン22
6mg、スレオニン232mg、アラニン359mg、プロリン126m
g、チロシン101mg、バリン283mg、メチオニン53mg、イ
ソロイシン262mg、ロイシン309mg、フェニルアラニン14
8mg、リシン212mg、シスチン38mg、合計4172mgを含有し
ていた。
装入量は40％とした。すなわち、培地の量を3.2tとし
た。10％ダイズ乳を採用した。培地はダイズ320kg、酵
母エキス1.28kg、KH2PO41.6kg、MgSO4640g、CaCO3640
g、NaCl640g、Na2MoO432g、Na2SeO38g、ZnSO432g、CoCl
28g及び水を含有するものとした。接種材料の量は１
％、細胞齢は24時間（第１種子培養、第２種子培養及び
第３種子培養、24時間インキュベートした培養物を接種
材料として使用）とした。培養温度30℃、攪拌速度220r
pm、曝気速度1:0.8vvmとした。種子発酵器でインキュベ
ーションの終了後、接種材料を8t容槽形発酵器に接種
し、培養温度30℃、攪拌速度220rpm、曝気速度1:0.8vvm
とした。48時間後にインキュベーションを終了し、培養
液を加圧滅菌し、アセンブリラインを通してびんに詰
め、再び加圧滅菌して最終製品を得た。培養液100ml
は、アスパラギン酸543mg、グルタミン酸710mg、セリン
160mg、グリシン280mg、ヒスチジン65mg、アルギニン22
6mg、スレオニン232mg、アラニン359mg、プロリン126m
g、チロシン101mg、バリン283mg、メチオニン53mg、イ
ソロイシン262mg、ロイシン309mg、フェニルアラニン14
8mg、リシン212mg、シスチン38mg、合計4172mgを含有し
ていた。
実施例３ 実施例２に記載した方法により調製した栄養溶液を、
乾燥ミルクの製造に通常使用されているスプレードライ
ヤーにより乾燥し、851栄養粉末を得た。スプレードラ
イヤーの入口温度は80℃、出口温度は60℃とした。851
栄養溶液0.8tから乾燥粉末20.4kgを得、これを更に処理
してカプセル状にした。カプセル１包は乾燥粉末0.28g
を含み、又は澱粉80kg及び蜂蜜10kgとから調合して顆粒
調製物とした。
乾燥ミルクの製造に通常使用されているスプレードライ
ヤーにより乾燥し、851栄養粉末を得た。スプレードラ
イヤーの入口温度は80℃、出口温度は60℃とした。851
栄養溶液0.8tから乾燥粉末20.4kgを得、これを更に処理
してカプセル状にした。カプセル１包は乾燥粉末0.28g
を含み、又は澱粉80kg及び蜂蜜10kgとから調合して顆粒
調製物とした。
実施例４ 慣用の発酵方法により調製した851栄養溶液を15000rp
mで遠心分離し、沈澱を得た。こうして、851栄養溶液1t
から上清960kgを得た。果汁500kgを加えることにより85
1果汁コーラを調製し、蜂蜜40kgを加えることにより851
蜂蜜コーラを調製した。上記上清に香味料を加え、必要
に応じて異なる味の種々の851飲料を調製することもで
きる。
mで遠心分離し、沈澱を得た。こうして、851栄養溶液1t
から上清960kgを得た。果汁500kgを加えることにより85
1果汁コーラを調製し、蜂蜜40kgを加えることにより851
蜂蜜コーラを調製した。上記上清に香味料を加え、必要
に応じて異なる味の種々の851飲料を調製することもで
きる。
実施例５ 慣用の発酵方法により調製した851栄養溶液を遠心分
離した。上清を膜蒸発器又は真空回転蒸発器により濃縮
し、851濃縮栄養物を得た。蒸発後、上清0.5tから濃縮
栄養物100kgを得た。蜂蜜10kgを添加後、濃縮栄養物を
開放容易なキャップを有する小びんに充填した。この栄
養物は経口摂取するのに都合よい。
離した。上清を膜蒸発器又は真空回転蒸発器により濃縮
し、851濃縮栄養物を得た。蒸発後、上清0.5tから濃縮
栄養物100kgを得た。蜂蜜10kgを添加後、濃縮栄養物を
開放容易なキャップを有する小びんに充填した。この栄
養物は経口摂取するのに都合よい。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 38/00 ＡＣＬ Ａ６１Ｋ 37/18 ＡＢＹ ＡＣＳ ＡＣＬ ＡＤＵ ＡＣＳ (Ｃ１２Ｎ 1/20 Ｃ１２Ｒ 1:01）
Claims (6)
- 【請求項１】植物タンパク質、特にダイズタンパク質を
単細胞タンパク質に転換する能力を有しており、グラム
陽性菌であり、非運動性であり、H2Sを生成することが
可能であり、硝酸塩還元陽性であり、30分間60℃又は15
分間72℃に加熱時に乳汁中で生存し、赤又は橙赤色の葉
状体であり、該葉状体の色が38℃でピンクに変わり、40
℃で無色に変わる特徴を有するマイクロバクテリウム突
然変異株851R。 - 【請求項２】細菌を使用することにより単細胞タンパク
質栄養溶液を製造するための方法であって、産生株とし
てマイクロバクテリウム突然変異株851Rを使用し、発酵
により851R栄養溶液を生産するための産生培地としてダ
イズ粉末培地又は澱粉培地を使用することを特徴とする
方法。 - 【請求項３】ダイズ粉末培地がダイズ粉末５〜10重量％
又はダイズ乳（ダイズ重量として計算）５〜20重量％又
は種々の豆類ケーキ、ヒマワリ種子ケーキ５〜10重量
％、酵母エキス又は酵母粉末0.02〜0.5重量％、CaCO30.
05〜0.5重量％、K2HPO40.02〜0.2重量％、MgSO40.01〜
0.08重量％、NaCl0.01〜0.08重量％、Na2MoO4５〜50重
量ppm、Na2SeO31.5〜10重量ppm、ZnSO42.5〜50重量ppm
及びCoCl22.5〜50重量ppmを含有することを特徴とする
請求項２に記載の方法。 - 【請求項４】澱粉培地が澱粉を含む生材料（サツマイ
モ、ジャガイモ等）10〜20重量％又は澱粉を含む乾燥材
料（トウモロコシ粉末等）１〜10重量％、酵母エキス0.
04〜0.08重量％、CaCO30.05〜0.5重量％、K2HPO40.05〜
0.1重量％、MgSO40.02〜0.04重量％、NaCl0.02〜0.04重
量％、Na2MoO410〜20重量ppm、Na2SeO31.5〜20重量pp
m、ZnSO4５〜20重量ppm及びCoCl2５〜20重量ppmを含有
することを特徴とする請求項２に記載の方法。 - 【請求項５】窒素源を含む培地でマイクロバクテリウム
突然変異株851Rによる発酵により生産される栄養溶液。 - 【請求項６】株851Rの細菌又は851栄養溶液を含む物。
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