JP2603452B2 - 鉄を測定する方法及びその試薬 - Google Patents
鉄を測定する方法及びその試薬Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、タンパク質変性剤の添
加、遊離した鉄のＦｅ2+への還元、発色試薬溶液の添加
及び生成する発色コンプレックスの光度測定による、結
合した鉄を遊離させて血清中の鉄を測定する方法、並び
に澄明化用界面活性剤混合物を添加しないでも高脂肪血
清を測定するのに適する試薬の組み合わせに関する。
加、遊離した鉄のＦｅ2+への還元、発色試薬溶液の添加
及び生成する発色コンプレックスの光度測定による、結
合した鉄を遊離させて血清中の鉄を測定する方法、並び
に澄明化用界面活性剤混合物を添加しないでも高脂肪血
清を測定するのに適する試薬の組み合わせに関する。
【０００２】
【従来の技術】鉄代謝の障害、特に鉄欠乏症及び鉄吸収
障害は、とりわけ女性に広がっている。従って、体液
中、特に血清中の鉄の検出は、医学分析における標準的
測定の１つである。鉄は食物で供給されて腸粘膜から吸
収される。３価の状態でトランスフェリンに結合する
と、それは骨髄に輸送され、そこで主としてヘモグロビ
ンの中に取り込まれる。鉄が殆ど吸収されないと貧血症
状が起こる。
障害は、とりわけ女性に広がっている。従って、体液
中、特に血清中の鉄の検出は、医学分析における標準的
測定の１つである。鉄は食物で供給されて腸粘膜から吸
収される。３価の状態でトランスフェリンに結合する
と、それは骨髄に輸送され、そこで主としてヘモグロビ
ンの中に取り込まれる。鉄が殆ど吸収されないと貧血症
状が起こる。
【０００３】血清中の鉄の測定は、臨床診断において最
も頻繁に行われる微量元素分析の１つである。これに関
して種々の方法が知られている。かくして、炭酸コンプ
レックスの形でトランスフェリンに結合した３価の鉄を
強酸性環境下で遊離させる方法が、Clin. Chem. 26 (19
80) 327-331 に記載されている。この方法の欠点は、そ
の強酸性試薬が焼灼性かつ腐蝕性の性質を有しているこ
とである。この欠点を取り除くために、例えば、Clin.
Chem. 23 (1977) 237-240 及び Z. Clin. Chem. 3 (196
5) 96-99 から、高濃度の塩化グアニジニウム又はアニ
オン性界面活性剤の如きタンパク質変性剤を用いて鉄を
遊離させることが知られている。
も頻繁に行われる微量元素分析の１つである。これに関
して種々の方法が知られている。かくして、炭酸コンプ
レックスの形でトランスフェリンに結合した３価の鉄を
強酸性環境下で遊離させる方法が、Clin. Chem. 26 (19
80) 327-331 に記載されている。この方法の欠点は、そ
の強酸性試薬が焼灼性かつ腐蝕性の性質を有しているこ
とである。この欠点を取り除くために、例えば、Clin.
Chem. 23 (1977) 237-240 及び Z. Clin. Chem. 3 (196
5) 96-99 から、高濃度の塩化グアニジニウム又はアニ
オン性界面活性剤の如きタンパク質変性剤を用いて鉄を
遊離させることが知られている。
【０００４】これら方法の既知の態様では、濁った高脂
肪血清中の鉄を測定する際に誤測定が生じる。塩化グア
ニジニウムもアニオン性界面活性剤も、濁りを完全に排
除するほど十分な澄明化能力を有していない。
肪血清中の鉄を測定する際に誤測定が生じる。塩化グア
ニジニウムもアニオン性界面活性剤も、濁りを完全に排
除するほど十分な澄明化能力を有していない。
【０００５】この問題を解決するために、ＥＰ−Ａ−０
１３０５３７で、非イオン性及びアニオン性界面活性剤
の混合物を用いて弱酸性媒質中で鉄を遊離させることが
提案された。しかしながら、これら界面活性剤を用いる
と、高脂肪血清は実に速やかにかつ完全に澄明になる
が、高いイムノグロブリン含有量を有する血清（高ガン
マグロブリン血清）の場合には、濁りが増して測定結果
を誤ったものにすることが認められることが分かった。
加えて、強溶血性血清中での回収は、完全に満足のゆく
ものではない。
１３０５３７で、非イオン性及びアニオン性界面活性剤
の混合物を用いて弱酸性媒質中で鉄を遊離させることが
提案された。しかしながら、これら界面活性剤を用いる
と、高脂肪血清は実に速やかにかつ完全に澄明になる
が、高いイムノグロブリン含有量を有する血清（高ガン
マグロブリン血清）の場合には、濁りが増して測定結果
を誤ったものにすることが認められることが分かった。
加えて、強溶血性血清中での回収は、完全に満足のゆく
ものではない。
【０００６】ＥＰ−Ａ−０３４３５９２には、この問題
を解決するために、１〜８モル／ｌの濃度の変性剤の第
１溶液を血清に添加し、この第１溶液の添加後に濁度測
定を行い、続いて発色剤とやはり１〜８モル／ｌの濃度
の変性剤を含有する第２溶液を添加し、その後に発色コ
ンプレックスを測定し、そして鉄の量を決定するため
に、濁度の測定値をその発色コンプレックス溶液の測定
値から差し引くことが提案されている。この方法の欠点
は、おそらく色素と変性剤のコンプレックスから構成さ
れると考えられる沈殿物が第２溶液中に発生することで
ある。従って、この溶液中の色素の濃度を低くしなけれ
ばならないが、そうするとＥＤＴＡ汚染のために干渉が
起こって、鉄の含有量が低いサンプルでは非一次反応の
ために測定を誤ることになる。
を解決するために、１〜８モル／ｌの濃度の変性剤の第
１溶液を血清に添加し、この第１溶液の添加後に濁度測
定を行い、続いて発色剤とやはり１〜８モル／ｌの濃度
の変性剤を含有する第２溶液を添加し、その後に発色コ
ンプレックスを測定し、そして鉄の量を決定するため
に、濁度の測定値をその発色コンプレックス溶液の測定
値から差し引くことが提案されている。この方法の欠点
は、おそらく色素と変性剤のコンプレックスから構成さ
れると考えられる沈殿物が第２溶液中に発生することで
ある。従って、この溶液中の色素の濃度を低くしなけれ
ばならないが、そうするとＥＤＴＡ汚染のために干渉が
起こって、鉄の含有量が低いサンプルでは非一次反応の
ために測定を誤ることになる。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、一方では、攻撃性の成分を用いないでもよく、他方
では、測定が溶血性サンプル又は高い含有量のイムノグ
ロブリンを有する血清で干渉されることなく、高脂肪血
清による干渉を回避することができる、血清中の鉄を測
定するための方法及び試薬を創作することにある。自動
化及び合理化の理由から、サンプルを前もって除タンパ
クする必要がないことが更に望ましい。
は、一方では、攻撃性の成分を用いないでもよく、他方
では、測定が溶血性サンプル又は高い含有量のイムノグ
ロブリンを有する血清で干渉されることなく、高脂肪血
清による干渉を回避することができる、血清中の鉄を測
定するための方法及び試薬を創作することにある。自動
化及び合理化の理由から、サンプルを前もって除タンパ
クする必要がないことが更に望ましい。
【０００８】
【課題を解決するための手段】この目的は、本発明に従
い、タンパク質変性剤の添加、遊離した鉄のＦｅ2+への
還元、発色試薬溶液の添加及び生成する発色コンプレッ
クスの光度測定による、結合した鉄を遊離させて血清中
の鉄を測定する方法であって、尿素又は尿素誘導体を含
有する変性剤及び脂肪族アルコールポリグリコールエー
テルを血清中に添加することを特徴とする方法により達
成される。
い、タンパク質変性剤の添加、遊離した鉄のＦｅ2+への
還元、発色試薬溶液の添加及び生成する発色コンプレッ
クスの光度測定による、結合した鉄を遊離させて血清中
の鉄を測定する方法であって、尿素又は尿素誘導体を含
有する変性剤及び脂肪族アルコールポリグリコールエー
テルを血清中に添加することを特徴とする方法により達
成される。
【０００９】本発明は、尿素又は尿素誘導体を含有する
変性剤と、１種類の非常に限定的な界面活性剤、つまり
脂肪族アルコールポリグリコールエーテルとの組み合わ
せにより、発色剤を添加したときの濁りを回避できると
いう知見に基づいている。これは、高脂肪血清並びに高
ガンマグロブリン血清の干渉のない測定を可能にする。
高脂肪血清中に発生する濁りを回避するために、ＥＰ−
Ａ−０１３０５３７やＤＥ−Ａ−２７２４７５７又はＤ
Ｅ−Ａ−３７２９５０２に記載されたような界面活性剤
の組み合わせを用いることはもはや必要ではない。
変性剤と、１種類の非常に限定的な界面活性剤、つまり
脂肪族アルコールポリグリコールエーテルとの組み合わ
せにより、発色剤を添加したときの濁りを回避できると
いう知見に基づいている。これは、高脂肪血清並びに高
ガンマグロブリン血清の干渉のない測定を可能にする。
高脂肪血清中に発生する濁りを回避するために、ＥＰ−
Ａ−０１３０５３７やＤＥ−Ａ−２７２４７５７又はＤ
Ｅ−Ａ−３７２９５０２に記載されたような界面活性剤
の組み合わせを用いることはもはや必要ではない。
【００１０】種々のタンパク質変性剤を添加して結合タ
ンパク質、特にフェリチンから鉄を引き離せることは知
られている。例えば、尿素又はグアニジニウムカチオン
の塩の如き尿素誘導体が、本発明の範囲内のタンパク質
変性剤に適しており、塩化グアニジニウム、酢酸グアニ
ジニウム、チオシアン酸グアニジニウム又は硫酸グアニ
ジニウムが特に好ましい。
ンパク質、特にフェリチンから鉄を引き離せることは知
られている。例えば、尿素又はグアニジニウムカチオン
の塩の如き尿素誘導体が、本発明の範囲内のタンパク質
変性剤に適しており、塩化グアニジニウム、酢酸グアニ
ジニウム、チオシアン酸グアニジニウム又は硫酸グアニ
ジニウムが特に好ましい。
【００１１】この変性剤は、本発明による鉄試験法の第
１溶液に脂肪族アルコールポリグリコールエーテルと組
み合わせて用いられる。本発明による鉄試験法における
第１溶液中の変性剤の濃度は比較的高くなければならず
１〜８モル／ｌである。４〜６モル／ｌの濃度で最良の
結果が得られる。１モル／ｌ未満の濃度では、トランス
フェリンからの鉄の引き離しが次第に遅くなる。特に好
ましい塩化グアニジニウムについての好ましい濃度範囲
は１〜６モル／ｌであり、特に好ましくは４〜５モル／
ｌである。
１溶液に脂肪族アルコールポリグリコールエーテルと組
み合わせて用いられる。本発明による鉄試験法における
第１溶液中の変性剤の濃度は比較的高くなければならず
１〜８モル／ｌである。４〜６モル／ｌの濃度で最良の
結果が得られる。１モル／ｌ未満の濃度では、トランス
フェリンからの鉄の引き離しが次第に遅くなる。特に好
ましい塩化グアニジニウムについての好ましい濃度範囲
は１〜６モル／ｌであり、特に好ましくは４〜５モル／
ｌである。
【００１２】用いる脂肪族アルコールポリグリコールエ
ーテルは、エトキシレート化度が４を超えて７までのエ
トキシ単位（ＥＯ）であってその製造に分枝状又は非分
枝状脂肪族アルコールが用いられたものである。平均で
９〜１１の炭素原子を有する脂肪族アルコールが好まし
く用いられる。特に好ましい脂肪族アルコールポリグリ
コールエーテルは、例えば、ルテンゾル (LutensolR )(
R : 登録商標）ＯＮ５０、ルテンゾルR ＯＮ６０、イン
ベンチン (Imbentin) −Ｃ／９１／３５、インベンチン
−ＡＧ／１００／０５０である。エトキシレート化度
は、バッチの平均エトキシレート化度と理解される。と
いうのは、脂肪族アルコールポリグリコールエーテル
は、通常はエトキシレート化度が僅かに異なる物質の混
合物だからである。
ーテルは、エトキシレート化度が４を超えて７までのエ
トキシ単位（ＥＯ）であってその製造に分枝状又は非分
枝状脂肪族アルコールが用いられたものである。平均で
９〜１１の炭素原子を有する脂肪族アルコールが好まし
く用いられる。特に好ましい脂肪族アルコールポリグリ
コールエーテルは、例えば、ルテンゾル (LutensolR )(
R : 登録商標）ＯＮ５０、ルテンゾルR ＯＮ６０、イン
ベンチン (Imbentin) −Ｃ／９１／３５、インベンチン
−ＡＧ／１００／０５０である。エトキシレート化度
は、バッチの平均エトキシレート化度と理解される。と
いうのは、脂肪族アルコールポリグリコールエーテル
は、通常はエトキシレート化度が僅かに異なる物質の混
合物だからである。
【００１３】本発明による鉄試験法の第１溶液中の脂肪
族アルコールポリグリコールエーテルの濃度は、少なく
とも１０ｇ／ｌでなければならない。この濃度は好まし
くは少なくとも３０ｇ／ｌである。というのは、この場
合に高脂肪サンプルのより速やかな澄明化が起こるから
である。脂肪族アルコールポリグリコールエーテルの濃
度の上限は、技術的な上限、即ち、この界面活性剤がも
はや完全に溶解しなくなる濃度から生ずる。５０〜１０
０ｇ／ｌの界面活性剤濃度が特に好ましい。前記脂肪族
アルコールポリグリコールエーテルを用いると、２，３
分以内に高脂肪サンプルの完全な澄明化が可能になる。
澄明化には、通常５分間をかけるのが適当である。この
ことから、この試薬は、自動分析装置で速やかに測定す
るのにも用いることができる。
族アルコールポリグリコールエーテルの濃度は、少なく
とも１０ｇ／ｌでなければならない。この濃度は好まし
くは少なくとも３０ｇ／ｌである。というのは、この場
合に高脂肪サンプルのより速やかな澄明化が起こるから
である。脂肪族アルコールポリグリコールエーテルの濃
度の上限は、技術的な上限、即ち、この界面活性剤がも
はや完全に溶解しなくなる濃度から生ずる。５０〜１０
０ｇ／ｌの界面活性剤濃度が特に好ましい。前記脂肪族
アルコールポリグリコールエーテルを用いると、２，３
分以内に高脂肪サンプルの完全な澄明化が可能になる。
澄明化には、通常５分間をかけるのが適当である。この
ことから、この試薬は、自動分析装置で速やかに測定す
るのにも用いることができる。
【００１４】ツィーンR ２０、ゲナポール(Genapol) Ｘ
−０８０、オキセタール (Oxetal)ＩＤ１０４、セシッ
ト (ThesitR ) 、ルテンゾルR ＯＮ３０、トリトンR Ｘ
−１００の如き本発明により用いられる脂肪族アルコー
ルポリグリコールエーテルよりも低いか又は高いエトキ
シレート化度を有する界面活性剤は、尿素又は尿素誘導
体を含有する試薬中で高脂肪サンプルを澄明化するには
適さない。
−０８０、オキセタール (Oxetal)ＩＤ１０４、セシッ
ト (ThesitR ) 、ルテンゾルR ＯＮ３０、トリトンR Ｘ
−１００の如き本発明により用いられる脂肪族アルコー
ルポリグリコールエーテルよりも低いか又は高いエトキ
シレート化度を有する界面活性剤は、尿素又は尿素誘導
体を含有する試薬中で高脂肪サンプルを澄明化するには
適さない。
【００１５】本発明による方法を実施するには、サンプ
ル溶液を好ましくは弱酸性域に、特に好ましくは、ｐＨ
3.５〜ｐＨ６の範囲内に緩衝する。3.５〜６のｐＫ値を
有しかつ鉄と錯化しない化合物が緩衝物質として適す
る。例えば、酢酸、リン酸又はコハク酸緩衝剤が適す
る。更に好ましい態様は、最初に酸性ｐＨ値、特に好ま
しくはｐＨ２〜６に調節して鉄を遊離させ、続いて鉄の
検出用に選択された発色系で最高の発色量が得られるｐ
Ｈに再緩衝することからなる。このために必要なｐＨ値
は、例えば、フィールディング (Fieilding), Methods
in Hematology 1(Iron), 15-49 (1980) から当業者に既
知である。
ル溶液を好ましくは弱酸性域に、特に好ましくは、ｐＨ
3.５〜ｐＨ６の範囲内に緩衝する。3.５〜６のｐＫ値を
有しかつ鉄と錯化しない化合物が緩衝物質として適す
る。例えば、酢酸、リン酸又はコハク酸緩衝剤が適す
る。更に好ましい態様は、最初に酸性ｐＨ値、特に好ま
しくはｐＨ２〜６に調節して鉄を遊離させ、続いて鉄の
検出用に選択された発色系で最高の発色量が得られるｐ
Ｈに再緩衝することからなる。このために必要なｐＨ値
は、例えば、フィールディング (Fieilding), Methods
in Hematology 1(Iron), 15-49 (1980) から当業者に既
知である。
【００１６】酢酸緩衝剤が緩衝物質として好ましく用い
られる。この緩衝剤は、好ましくは２０〜５００ミリモ
ル／ｌ、特に好ましくは５０〜１５０ミリモル／ｌの濃
度で用いられる。この緩衝物質は、変性剤と脂肪族アル
コールポリグリコールエーテルを含有する本発明による
鉄試験法の第１溶液に含めることができる。加えて、本
発明による鉄試験法の他の１又は複数の溶液を緩衝して
もよい。
られる。この緩衝剤は、好ましくは２０〜５００ミリモ
ル／ｌ、特に好ましくは５０〜１５０ミリモル／ｌの濃
度で用いられる。この緩衝物質は、変性剤と脂肪族アル
コールポリグリコールエーテルを含有する本発明による
鉄試験法の第１溶液に含めることができる。加えて、本
発明による鉄試験法の他の１又は複数の溶液を緩衝して
もよい。
【００１７】鉄を測定するために、アスコルビン酸、亜
二チオン酸塩又はヒドロキシルアミンの如き還元剤をサ
ンプル溶液に既知のやり方で添加して、３価型で存在す
る遊離鉄を２価型に還元する。還元剤は、第１溶液に変
性剤と一緒に添加しても鉄の検出に適する発色系を更に
含有する第２溶液に添加してもよい。還元剤は好ましく
は第２溶液に添加する。
二チオン酸塩又はヒドロキシルアミンの如き還元剤をサ
ンプル溶液に既知のやり方で添加して、３価型で存在す
る遊離鉄を２価型に還元する。還元剤は、第１溶液に変
性剤と一緒に添加しても鉄の検出に適する発色系を更に
含有する第２溶液に添加してもよい。還元剤は好ましく
は第２溶液に添加する。
【００１８】鉄を検出するための発色系は、例えば、Ｅ
Ｐ−Ａ−０２２８０６０、Clin. Biochem. 14 (1981),
311-315 及び Clin. Chem. 23 (1979) 237-240に記載さ
れている。鉄と共に色素を生成するフェロイン型の錯化
剤であって光度を測定して検定され得る錯化剤が特に適
している。適する物質は、例えば、バソフェナントロリ
ン、フェレン（３−（２−ピリジル）−5,６−ビス（２
−〔フリルスルホン酸〕）−1,2,４−トリアジン・二ナ
トリウム塩）及びフェロジン（3'（2'−ピリジル）−5,
６−ジフェニル−1,2,４−トリアジン−スルホン酸・二
ナトリウム塩）である。この方法では、色素生成は、サ
ンプルの鉄含有量に比例するので、周知の方法で光度を
測定して検定することができる。
Ｐ−Ａ−０２２８０６０、Clin. Biochem. 14 (1981),
311-315 及び Clin. Chem. 23 (1979) 237-240に記載さ
れている。鉄と共に色素を生成するフェロイン型の錯化
剤であって光度を測定して検定され得る錯化剤が特に適
している。適する物質は、例えば、バソフェナントロリ
ン、フェレン（３−（２−ピリジル）−5,６−ビス（２
−〔フリルスルホン酸〕）−1,2,４−トリアジン・二ナ
トリウム塩）及びフェロジン（3'（2'−ピリジル）−5,
６−ジフェニル−1,2,４−トリアジン−スルホン酸・二
ナトリウム塩）である。この方法では、色素生成は、サ
ンプルの鉄含有量に比例するので、周知の方法で光度を
測定して検定することができる。
【００１９】この発明は、さし当たり非常に高脂肪の生
体サンプル中でも鉄の光度定量に適する試薬の製造を可
能にする。これは、完全な界面活性剤系を省いて唯ひと
つだけの界面活性剤を用いる。
体サンプル中でも鉄の光度定量に適する試薬の製造を可
能にする。これは、完全な界面活性剤系を省いて唯ひと
つだけの界面活性剤を用いる。
【００２０】従って、本発明は、更に、サンプル中の鉄
の光度定量における高脂肪及び高ガンマグロブリンによ
る干渉を防ぐための、尿素又は尿素誘導体を含有する変
性剤と脂肪族アルコールポリグリコールエーテルとの混
合物の使用に関する。
の光度定量における高脂肪及び高ガンマグロブリンによ
る干渉を防ぐための、尿素又は尿素誘導体を含有する変
性剤と脂肪族アルコールポリグリコールエーテルとの混
合物の使用に関する。
【００２１】この試薬の高脂肪サンプルを澄明にする効
果は、１：５〜１：２５、好ましくは１：１０〜１：１
５のサンプル／試薬比で光度を測定して検査することが
できる。この場合、完全な澄明化は、大豆に基づく脂肪
エマルジョンであって水で更に１：２０の比率に希釈さ
れたイントラリピッドR (Intralipid)２０％（カビ (Ka
bi) ・ファルマシア社，ドイツ）の溶液が、３７℃で５
分経過した後に、ブランク値としてのこの試薬溶液に対
して５７８ｎｍの波長及び１ｃｍの光路長において５ｍ
Ａの極大吸収を示すときとして定義される。
果は、１：５〜１：２５、好ましくは１：１０〜１：１
５のサンプル／試薬比で光度を測定して検査することが
できる。この場合、完全な澄明化は、大豆に基づく脂肪
エマルジョンであって水で更に１：２０の比率に希釈さ
れたイントラリピッドR (Intralipid)２０％（カビ (Ka
bi) ・ファルマシア社，ドイツ）の溶液が、３７℃で５
分経過した後に、ブランク値としてのこの試薬溶液に対
して５７８ｎｍの波長及び１ｃｍの光路長において５ｍ
Ａの極大吸収を示すときとして定義される。
【００２２】しかしながら、澄明化は、吸光度／経過時
間（Ａ／ｔ）を測定することによって高脂肪生体サンプ
ルに関して検査することもでき、その場合には、それ
は、５分経過した後に測定した吸光度が、１０分経過し
た後に測定した吸光度と５ｍＡ未満だけ、好ましくは２
ｍＡ未満だけ差があるときが完全であるとして定義され
る。
間（Ａ／ｔ）を測定することによって高脂肪生体サンプ
ルに関して検査することもでき、その場合には、それ
は、５分経過した後に測定した吸光度が、１０分経過し
た後に測定した吸光度と５ｍＡ未満だけ、好ましくは２
ｍＡ未満だけ差があるときが完全であるとして定義され
る。
【００２３】高脂肪による干渉を評価するために、イン
トラリピッドR ２０％を補充した生体サンプルの鉄含有
量を、同じサンプルであるが水を混合した（グリック
(Glick), Clin. Chem. 32 (1986), 470-475と類似の）
サンプルと比較する。１容量部のイントラリピッドR ２
０％と１９容量部の血清との混合物の鉄含有量測定値と
１容量部の水と１９容量部の同じ血清との混合物の鉄含
有量測定値に５μｇ／ｄｌを超える差があるときは、高
脂肪による干渉が存在する。
トラリピッドR ２０％を補充した生体サンプルの鉄含有
量を、同じサンプルであるが水を混合した（グリック
(Glick), Clin. Chem. 32 (1986), 470-475と類似の）
サンプルと比較する。１容量部のイントラリピッドR ２
０％と１９容量部の血清との混合物の鉄含有量測定値と
１容量部の水と１９容量部の同じ血清との混合物の鉄含
有量測定値に５μｇ／ｄｌを超える差があるときは、高
脂肪による干渉が存在する。
【００２４】本発明は、更に、血清中の鉄の測定のため
の試薬の組み合わせであって、水溶液又はそれらの製造
に適した乾燥混合物の形態にある、１〜８モル／ｌの変
性剤と少なくとも１０ｇ／ｌの脂肪族アルコールポリグ
リコールエーテルを含有する第１試薬とそれとは分離し
た0.５〜５０ミリモル／ｌの色素を含有する第２試薬に
より特徴付けられる試薬の組み合わせに関する。両方の
試薬が又は第１試薬だけが、更に２０〜５００ミリモル
／ｌの緩衝物質を含有してもよい。
の試薬の組み合わせであって、水溶液又はそれらの製造
に適した乾燥混合物の形態にある、１〜８モル／ｌの変
性剤と少なくとも１０ｇ／ｌの脂肪族アルコールポリグ
リコールエーテルを含有する第１試薬とそれとは分離し
た0.５〜５０ミリモル／ｌの色素を含有する第２試薬に
より特徴付けられる試薬の組み合わせに関する。両方の
試薬が又は第１試薬だけが、更に２０〜５００ミリモル
／ｌの緩衝物質を含有してもよい。
【００２５】第２試薬は、更に、アスコルビン酸、亜二
チオン酸塩又はヒドロキシルアミンの如き還元剤を４０
〜２００ミリモル／ｌの濃度で含有していてもよい。還
元剤は、より高い濃度（例えば、１０００ミリモル／
ｌ）で存在することもできる。しかしながら、そうする
と、ほんの僅かな溶解性しか持たない分解物（例えば、
アスコルビン酸からのオキサレート）が長期間の保存で
生成してその試薬を濁らせる危険性がある。驚いたこと
に、第２試薬中の還元剤は、水溶液の形で安定であるこ
とが明らかになった。血清中の鉄を測定するこれまでの
普通の試薬の組み合わせでは、還元剤は、通常は液体試
薬を用いるすぐ前に添加されてきた。以下の実施例によ
り本発明をより詳細に説明する。
チオン酸塩又はヒドロキシルアミンの如き還元剤を４０
〜２００ミリモル／ｌの濃度で含有していてもよい。還
元剤は、より高い濃度（例えば、１０００ミリモル／
ｌ）で存在することもできる。しかしながら、そうする
と、ほんの僅かな溶解性しか持たない分解物（例えば、
アスコルビン酸からのオキサレート）が長期間の保存で
生成してその試薬を濁らせる危険性がある。驚いたこと
に、第２試薬中の還元剤は、水溶液の形で安定であるこ
とが明らかになった。血清中の鉄を測定するこれまでの
普通の試薬の組み合わせでは、還元剤は、通常は液体試
薬を用いるすぐ前に添加されてきた。以下の実施例によ
り本発明をより詳細に説明する。
【００２６】
【実施例】実施例１ 血清中の鉄を測定するために次の試薬を用いた。 試薬１： ４モル／ｌ 塩酸グアニジニウム 0.１５モル／ｌ 酢酸緩衝液ｐＨ5.０ 0.１００モル／ｌ チオ尿素 以下に示したそれぞれの濃度の脂肪族アルコールポリグ
リコールエーテル 試薬２： １５ミリモル／ｌ フェロジン 0.１モル／ｌ アスコルビン酸 実験は、日立７１７（ベーリンガー・マンハイム社）で
行った。
リコールエーテル 試薬２： １５ミリモル／ｌ フェロジン 0.１モル／ｌ アスコルビン酸 実験は、日立７１７（ベーリンガー・マンハイム社）で
行った。
【００２７】２０μｌのサンプルを２５０μｌの試薬１
と混合した。３７℃で4.６分間インキュベーションした
後に５０μｌの試薬２を添加した。試薬２を添加するす
ぐ前に吸光度１を測定した。６分後に吸光度２を測定し
た。吸光度の差ΔＡ＝Ａ２−Ａ１をこれから得ることが
できる。代わりに、澄明化のよりよい説明のためＡ／ｔ
ダイヤグラムをプロットした。
と混合した。３７℃で4.６分間インキュベーションした
後に５０μｌの試薬２を添加した。試薬２を添加するす
ぐ前に吸光度１を測定した。６分後に吸光度２を測定し
た。吸光度の差ΔＡ＝Ａ２−Ａ１をこれから得ることが
できる。代わりに、澄明化のよりよい説明のためＡ／ｔ
ダイヤグラムをプロットした。
【００２８】最初の例では、種々の界面活性剤を試薬１
に用い、イントラリピッドR ２０％を補充したヒト血清
により例示されるＡ／ｔダイヤグラムに基づき澄明化を
測定した。この脂肪添加ヒト血清サンプルのトリグリセ
ライド含有量は、約２０００ｍｇ／ｄｌであった。３エ
トキシ単位（ルテンゾルR ＯＮ３０）、５エトキシ単位
（ルテンゾルR ＯＮ５０）及び８エトキシ単位（ゲナポ
ールＸ−０８０）を有する脂肪族アルコールポリグリコ
ールエーテルを界面活性剤として用いた。界面活性剤な
しの試薬１をコントロールとして用いた。その結果を図
１に示す。５エトキシ単位の脂肪族アルコールポリグリ
コールエーテルでの本発明による試薬だけが高脂肪サン
プルを澄明にしたことが明瞭に理解できる。その吸光度
は約２分後には０の値に低下している。８エトキシ単位
を有する脂肪族アルコールポリグリコールエーテルは、
サンプルを澄明にしない。３エトキシ単位を有する脂肪
族アルコールポリグリコールエーテルに至っては、サン
プルの濁度を増やしさえする。
に用い、イントラリピッドR ２０％を補充したヒト血清
により例示されるＡ／ｔダイヤグラムに基づき澄明化を
測定した。この脂肪添加ヒト血清サンプルのトリグリセ
ライド含有量は、約２０００ｍｇ／ｄｌであった。３エ
トキシ単位（ルテンゾルR ＯＮ３０）、５エトキシ単位
（ルテンゾルR ＯＮ５０）及び８エトキシ単位（ゲナポ
ールＸ−０８０）を有する脂肪族アルコールポリグリコ
ールエーテルを界面活性剤として用いた。界面活性剤な
しの試薬１をコントロールとして用いた。その結果を図
１に示す。５エトキシ単位の脂肪族アルコールポリグリ
コールエーテルでの本発明による試薬だけが高脂肪サン
プルを澄明にしたことが明瞭に理解できる。その吸光度
は約２分後には０の値に低下している。８エトキシ単位
を有する脂肪族アルコールポリグリコールエーテルは、
サンプルを澄明にしない。３エトキシ単位を有する脂肪
族アルコールポリグリコールエーテルに至っては、サン
プルの濁度を増やしさえする。
【００２９】実施例２ この実験は実施例１と同じように行った。4.５〜６エト
キシ単位を有する本発明による種々の脂肪族アルコール
ポリグリコールエーテルを用いた（インベンチン−Ｅ／
Ｖ−１７７：4.５エトキシ単位；ルテンゾルR ＯＮ５
０：５エトキシ単位；インベンチン−ＡＧ／１００／５
０：５エトキシ単位；インベンチン−Ｃ／９１／３５：
５エトキシ単位；ルテンゾルR ＯＮ６０：６エトキシ単
位）。
キシ単位を有する本発明による種々の脂肪族アルコール
ポリグリコールエーテルを用いた（インベンチン−Ｅ／
Ｖ−１７７：4.５エトキシ単位；ルテンゾルR ＯＮ５
０：５エトキシ単位；インベンチン−ＡＧ／１００／５
０：５エトキシ単位；インベンチン−Ｃ／９１／３５：
５エトキシ単位；ルテンゾルR ＯＮ６０：６エトキシ単
位）。
【００３０】その結果を図２に示す。明瞭に理解できる
ように、本発明による全ての脂肪族アルコールポリグリ
コールエーテルは、イントラリピッド（トリグリセライ
ド含有量約２０００ｍｇ／ｄｌ）を補充したヒト血清の
場合に、サンプルを速やかに澄明にする。全てのサンプ
ルは約２分後には澄明になった。インベンチン−Ｅ／Ｖ
−１７７及びインベンチン−ＡＧ／１００／５０は、１
分後にはサンプルを完全に澄明にしていた。
ように、本発明による全ての脂肪族アルコールポリグリ
コールエーテルは、イントラリピッド（トリグリセライ
ド含有量約２０００ｍｇ／ｄｌ）を補充したヒト血清の
場合に、サンプルを速やかに澄明にする。全てのサンプ
ルは約２分後には澄明になった。インベンチン−Ｅ／Ｖ
−１７７及びインベンチン−ＡＧ／１００／５０は、１
分後にはサンプルを完全に澄明にしていた。
【００３１】実施例３ ルテンゾルR ＯＮ５０を例として用いて、イントラリピ
ッドを約２０００ｍｇ／ｄｌのトリグリセライド含有量
まで補充したヒト血清の澄明化への界面活性剤の濃度の
影響を見た。その結果を図３に示す。４％濃度のルテン
ゾルR ＯＮ５０は約３分後にはサンプルを完全に澄明に
し、５％ルテンゾルR ＯＮ５０は約２分後にはサンプル
を完全に澄明にし、そして１０％ルテンゾルR ＯＮ５０
は約１分後にはサンプルを完全に澄明にしていた。
ッドを約２０００ｍｇ／ｄｌのトリグリセライド含有量
まで補充したヒト血清の澄明化への界面活性剤の濃度の
影響を見た。その結果を図３に示す。４％濃度のルテン
ゾルR ＯＮ５０は約３分後にはサンプルを完全に澄明に
し、５％ルテンゾルR ＯＮ５０は約２分後にはサンプル
を完全に澄明にし、そして１０％ルテンゾルR ＯＮ５０
は約１分後にはサンプルを完全に澄明にしていた。
【００３２】明瞭に理解できるように、１０％の非常に
高い濃度でも試薬２を添加した後の発色に影響を与えな
い。この実験は、実施例１と同じように行った。
高い濃度でも試薬２を添加した後の発色に影響を与えな
い。この実験は、実施例１と同じように行った。
【００３３】実施例４ イントラリピッドを人工的に補充したサンプルだけでな
く天然に存在する高脂肪ヒト血清サンプルでも、本発明
による試薬で澄明になり得ることを証明するためにこの
実施例を用いた。この実施例では、約１０００ｍｇ／ｄ
ｌのトリグリセライド含有量を有する高脂肪ヒト血清を
用いた。この実験は、実施例１と同じように行った。５
％ルテンゾルR ＯＮ５０を試薬１中の界面活性剤として
存在させた。
く天然に存在する高脂肪ヒト血清サンプルでも、本発明
による試薬で澄明になり得ることを証明するためにこの
実施例を用いた。この実施例では、約１０００ｍｇ／ｄ
ｌのトリグリセライド含有量を有する高脂肪ヒト血清を
用いた。この実験は、実施例１と同じように行った。５
％ルテンゾルR ＯＮ５０を試薬１中の界面活性剤として
存在させた。
【００３４】図４において明瞭に理解できるように、試
薬１の添加は、２分後にはこの高脂肪ヒト血清を完全に
澄明にしていた。
薬１の添加は、２分後にはこの高脂肪ヒト血清を完全に
澄明にしていた。
【図１】実施例１で得られた吸光度／経過時間（Ａ／
ｔ）ダイヤグラムである。縦軸は吸光度を表し横軸は経
過時間を表す。
ｔ）ダイヤグラムである。縦軸は吸光度を表し横軸は経
過時間を表す。
【図２】実施例２で得られたＡ／ｔダイヤグラムであ
る。縦軸は吸光度を表し横軸は経過時間を表す。
る。縦軸は吸光度を表し横軸は経過時間を表す。
【図３】実施例３で得られたＡ／ｔダイヤグラムであ
る。縦軸は吸光度を表し横軸は経過時間を表す。
る。縦軸は吸光度を表し横軸は経過時間を表す。
【図４】実施例４で得られたＡ／ｔダイヤグラムであ
る。縦軸は吸光度を表し横軸は経過時間を表す。
る。縦軸は吸光度を表し横軸は経過時間を表す。
Claims (2)
- 【請求項１】 タンパク質変性剤の添加、遊離した鉄の
Ｆｅ2+への還元、発色試薬溶液の添加及び生成する発色
コンプレックスの光度測定による、結合した鉄を遊離さ
せて血清中の鉄を測定する方法であって、尿素又は尿素
誘導体を含有する変性剤及び４より多いが７より少ない
エトキシ単位を含有する脂肪族アルコールポリグリコー
ルエーテルの一種類の単独の界面活性剤を血清に添加す
る方法。 - 【請求項２】 脂肪族アルコールポリグリコールエーテ
ルの界面活性剤が５〜６のエトキシ単位を含有する、請
求項１記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE4401754:5 | 1994-01-21 | ||
| DE4401754A DE4401754A1 (de) | 1994-01-21 | 1994-01-21 | Verfahren und Reagenz zur Bestimmung von Eisen |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH07218511A JPH07218511A (ja) | 1995-08-18 |
| JP2603452B2 true JP2603452B2 (ja) | 1997-04-23 |
Family
ID=6508418
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP7007533A Expired - Lifetime JP2603452B2 (ja) | 1994-01-21 | 1995-01-20 | 鉄を測定する方法及びその試薬 |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5763281A (ja) |
| EP (2) | EP1052512B1 (ja) |
| JP (1) | JP2603452B2 (ja) |
| AT (2) | ATE200354T1 (ja) |
| CA (1) | CA2140738A1 (ja) |
| DE (3) | DE4401754A1 (ja) |
| ES (2) | ES2157267T3 (ja) |
| NO (1) | NO950222L (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5925318A (en) * | 1993-08-26 | 1999-07-20 | Ferro Sensor, Inc. | Iron detecting sensors |
| DE19622089A1 (de) * | 1996-05-31 | 1997-12-04 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Analyse Hämoglobin enthaltender medizinischer Proben |
| US6177260B1 (en) * | 1997-07-11 | 2001-01-23 | The Hong Kong Polytechnic University | Measurement of antioxidant (reducing) power and/or antioxidant concentration |
| DE19817963A1 (de) * | 1998-04-22 | 1999-10-28 | Roche Diagnostics Gmbh | Verfahren und Reagenz zur störungsfreien Bestimmung von Eisen |
| US20060270050A1 (en) * | 2005-05-24 | 2006-11-30 | Texaco Development Corporation | Method and test kit for the determination of iron content of in-use lubricants |
| JP4655969B2 (ja) * | 2006-03-10 | 2011-03-23 | 三浦工業株式会社 | 鉄の定量方法 |
| WO2007105322A1 (ja) * | 2006-03-10 | 2007-09-20 | Miura Co., Ltd. | 鉄の定量方法 |
| CN101629960A (zh) * | 2008-07-18 | 2010-01-20 | 中生北控生物科技股份有限公司 | 铁测定试剂组合、试剂盒及其应用 |
| CN107748161B (zh) * | 2017-08-23 | 2020-02-18 | 曲阜师范大学 | 一种多波长比色区分痕量Fe2+和Fe3+的方法 |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3943954A (en) * | 1974-04-29 | 1976-03-16 | Texaco Inc. | Pipeline transportation of viscous hydrocarbons |
| DE3323949A1 (de) * | 1983-07-02 | 1985-01-03 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Verfahren und mittel zur raschen und vollstaendigen beseitigung einer truebung in einer biologischen fluessigkeit |
| DE3567280D1 (en) * | 1984-04-27 | 1989-02-09 | Lawrence Kass | Identification of myeloblasts and other immature granulocytic cells |
| JPS6195247A (ja) * | 1984-10-16 | 1986-05-14 | Yatoron:Kk | 血液試料の濁りを減らす方法 |
| DE3729502A1 (de) * | 1987-09-03 | 1989-03-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von eisen |
| DE3732688A1 (de) * | 1987-09-29 | 1989-04-13 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur spezifischen bestimmung des serumfructosamingehalts sowie hierfuer geeignetes reagenzgemisch |
| DE3817907A1 (de) * | 1988-05-26 | 1989-11-30 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren und reagenz zur bestimmung von eisen |
| US5219760A (en) * | 1988-05-26 | 1993-06-15 | Boehringer Mannheim Gmbh | Process for the determination of iron |
| DE3920364A1 (de) * | 1989-06-22 | 1991-01-10 | Technicon Gmbh | Verfahren und reagenz zur verhinderung von truebungen |
| JPH06195247A (ja) * | 1992-12-24 | 1994-07-15 | Nec Corp | ファイル差分出力方式 |
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- 1994-01-21 DE DE4401754A patent/DE4401754A1/de not_active Withdrawn
-
1995
- 1995-01-17 EP EP00115514A patent/EP1052512B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-17 EP EP95100521A patent/EP0664454B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-17 ES ES95100521T patent/ES2157267T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-17 AT AT95100521T patent/ATE200354T1/de active
- 1995-01-17 ES ES00115514T patent/ES2253163T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-17 AT AT00115514T patent/ATE313080T1/de active
- 1995-01-17 DE DE59509139T patent/DE59509139D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-17 DE DE59511030T patent/DE59511030D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-20 CA CA002140738A patent/CA2140738A1/en not_active Abandoned
- 1995-01-20 JP JP7007533A patent/JP2603452B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1995-01-20 NO NO950222A patent/NO950222L/no not_active Application Discontinuation
-
1996
- 1996-07-11 US US08/680,255 patent/US5763281A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
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| CA2140738A1 (en) | 1995-07-22 |
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