JP2598643B2 - Antiallergic agent - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 （１） 産業上の利用分野 本発明は抗アレルギー剤に関するものである。更に詳
しくは、本発明は３−（1H−テトラゾール−５−イル）
オキサニリックアシッド又はその塩を有効成分として含
有することを特徴とする抗アレルギー剤に関するもので
ある。The present invention relates to an antiallergic agent. More specifically, the present invention relates to 3- (1H-tetrazol-5-yl)
The present invention relates to an antiallergic agent comprising oxanilic acid or a salt thereof as an active ingredient.

３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニリック
アシッド（以下、MTCCという）は文献未載の新規物質で
あり、ヒスタミン及びSRS−Ａに対する優れた遊離抑制
作用を有し、抗アレルギー剤、例えば鼻炎、結膜炎、気
管支喘息、アトピー性皮膚炎等の予防・治療剤として有
用である。3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid (hereinafter referred to as MTCC) is a novel substance which has not been published in the literature, has an excellent release inhibitory effect on histamine and SRS-A, For example, it is useful as a prophylactic / therapeutic agent for rhinitis, conjunctivitis, bronchial asthma, atopic dermatitis and the like.

MTCCは水溶性物質であるため、水性製剤、例えば点鼻
剤、点眼剤、水溶液吸入剤、注射剤等に使用するのに適
しているが、勿論固形剤、例えば粉末剤、錠剤、カプセ
ル剤等にも使用出来る。Since MTCC is a water-soluble substance, it is suitable for use in aqueous preparations such as nasal drops, eye drops, aqueous inhalants, injections, etc., but of course, solid preparations such as powders, tablets, capsules, etc. Can also be used.

（２） 従来の技術 従来より、MTCCのアルキルエステル、例えば、エチル
−３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニレート
及びブチル−３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキ
サニレート（以下MTBという）等は抗アレルギー剤とし
て公知である。（特公昭59−1705号） MTBとMTCCとを比較すれば、いずれもほぼ同様に優れ
たヒスタミン及びSRS−Ａ遊離抑制作用を示し抗アレル
ギー剤又は喘息予防剤として使用出来るが、MTBは親油
性化合物であることから、水性製剤の調製が困難で、通
常経口用固形剤として使用されている。(2) Conventional technology Conventionally, an alkyl ester of MTCC, for example, ethyl-3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilate and butyl-3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilate (hereinafter referred to as MTB). Etc. are known as antiallergic agents. Comparing MTB and MTCC, they all show almost the same excellent histamine and SRS-A release inhibitory action and can be used as an antiallergic or asthma preventive, but MTB is lipophilic. Since it is a compound, it is difficult to prepare an aqueous preparation, and it is usually used as an oral solid preparation.

〔Japanese Journal of Pharmacology 32,689−697（19
82）．〕 （３） 発明が解決しようとする問題点 本発明は、優れたヒスタミン及びSRS−Ａ遊離抑制作
用に基く抗喘息薬で親油性化合物であるMTBの薬効を損
うこと無く、これを親水性の化合物に誘導し、水性製剤
の調製が可能な適用範囲の広い抗アレルギー剤を創製す
ることを目的とし、例えば、油性薬剤よりもはるかに取
扱い易い水性の抗アレルギー用点眼、点鼻剤の提供及び
水溶液状の微細粒子として気管支深部に到達し得るよう
に抗喘息用吸入剤を提供することを目的とするものであ
る。[Japanese Journal of Pharmacology 32 , 689-697 (19
82). (3) Problems to be Solved by the Invention The present invention relates to an anti-asthmatic drug based on excellent histamine and SRS-A release inhibitory action, and to improve the hydrophilicity of MTB, which is a lipophilic compound, without impairing its efficacy. The purpose of the present invention is to provide an antiallergic agent having a wide range of application that can be prepared into an aqueous preparation by deriving a compound of formula (1), for example, providing an aqueous antiallergic eye drop and a nasal drop that are much easier to handle than an oily drug. Another object of the present invention is to provide an anti-asthmatic inhalant so that it can reach the deep bronchi as aqueous solution-like fine particles.

（４） 発明の構成 本発明はMTCC又はその塩を有効成分として含有するこ
とを特徴とする抗アレルギー剤に関するものである。(4) Structure of the Invention The present invention relates to an antiallergic agent containing MTCC or a salt thereof as an active ingredient.

MTCCは例えば次の方法で製造することが出来る。 MTCC can be manufactured, for example, by the following method.

『式〔Ｉ〕 で示される３−（1H−テトラゾール−５−イル）アニリ
ンと 一般式〔II〕 （但し、式中Ａ及びＢは互いに同一又は相異なってハロ
ゲン原子、低級アルコキシ基又はヒドロキシ基を示す） で示されるオキサリックアシッド又はその反応性誘導体
とを反応させ、 一般式〔III〕 （但し、式中Ｂは前記と同じ） で示される３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサ
ニリックアシッド又はその誘導体を生成させ、誘導体が
生成した場合はこれを加水分解することを特徴とする 式〔IV〕 で示される３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサ
ニリックアシッドの製造法』 このMTCCの製造法において、〔Ｉ〕式化合物と〔II〕
式化合物との反応は通常不活性溶媒中で行うことが出来
る。[Formula [I] 3- (1H-tetrazol-5-yl) aniline represented by the general formula [II] Wherein A and B are the same or different from each other and represent a halogen atom, a lower alkoxy group or a hydroxy group, or a reactive derivative thereof; (Wherein B is the same as described above), wherein 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid or a derivative thereof represented by the following formula is produced, and when the derivative is produced, this is hydrolyzed. Equation [IV] Production method of 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid represented by the formula: In the production method of MTCC, the compound of formula [I] and the compound [II]
The reaction with the formula compound can be usually performed in an inert solvent.

不活性溶媒としては、例えば、クロロホルム、メチレ
ンクロライド、ベンゼン、トルエン、アセトン、テトラ
ヒドロフラン、ジメチルホルムアミド、ジメトキシエタ
ン等が挙げられる。Examples of the inert solvent include chloroform, methylene chloride, benzene, toluene, acetone, tetrahydrofuran, dimethylformamide, dimethoxyethane and the like.

反応条件は使用する〔II〕式原料の種類によってかな
り相違し、例えば、酸自体を使用するときはDCCのよう
な脱水縮合剤を共存させて反応を行うのが好ましく、低
級アルキルエステルを使用するときは原料自体を溶媒と
兼用して100〜180℃で反応を行うことが出来、酸ハライ
ドを使用するときは、室温で比較的短時間で反応を完結
させることが出来る。The reaction conditions vary considerably depending on the type of the [II] formula raw material used.For example, when using the acid itself, it is preferable to carry out the reaction in the presence of a dehydrating condensing agent such as DCC, and a lower alkyl ester is used. In some cases, the reaction can be carried out at 100 to 180 ° C. using the raw material itself as a solvent. When an acid halide is used, the reaction can be completed at room temperature in a relatively short time.

この段階の反応で得た〔III〕式化合物が酸の場合は
そのまま目的物として分離出来るが、ハライド又はエス
テルの場合はそれらを加水分解して目的物に変換して分
離する必要がある。When the compound of the formula [III] obtained in the reaction at this stage is an acid, it can be separated as it is, but in the case of a halide or ester, it is necessary to hydrolyze it and convert it to the desired product to separate it.

この加水分解はハライドの場合単に水と接触させるの
みで容易に完結し、エステルの場合もアルカリ加水分解
により容易に行うことが出来る。This hydrolysis is easily completed by simply contacting with water in the case of halides, and can be easily carried out in the case of esters by alkali hydrolysis.

次に製造例によりMTCCの製造法を詳細に説明する。 Next, a method of manufacturing the MTCC will be described in detail with reference to manufacturing examples.

製造例１ ３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサリニシック
アシッドの製造 ３−（1H−テトラゾール−５−イル）アニリン5gに、
N,N′−ジメチルホルムアミド25mlを加え溶解し、トリ
エチルアミン5.68gを加えた。氷水冷却下、エチルオキ
サリルクロライド5.64gを滴下撹拌した。滴下後、徐々
に反応温度を室温まで上昇させ15時間反応させた。反応
終了後、氷水100mlに注加し、析出した結晶をろ取し
て、エチル３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサ
ニレートを得た。収量8.3g（収率94.1％）。アセトン−
ｎ−ヘキサンにより再結晶し融点192〜193℃。Production Example 1 Production of 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxalinic acid 3- (1H-tetrazol-5-yl) aniline
25 ml of N, N'-dimethylformamide was added and dissolved, and 5.68 g of triethylamine was added. Under cooling with ice water, 5.64 g of ethyl oxalyl chloride was dropped and stirred. After the dropwise addition, the reaction temperature was gradually raised to room temperature, and the reaction was performed for 15 hours. After completion of the reaction, the mixture was poured into ice water (100 ml), and the precipitated crystals were collected by filtration to obtain ethyl 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilate. Yield 8.3 g (94.1% yield). Acetone-
Recrystallized from n-hexane, mp 192-193 ° C.

元素分析値C₁₁H₁₁N₅O₃として、 Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 50.57 4.24 26.81 実測値 50.62 4.19 26.98 核磁気共鳴スペクトル（DMSO−d₆,6MHz） δ（ppm）:1.38（t,3H）,4.42（q,2H）， 7.43〜8.20（m,3H）,8.73〜8.80（m,1H） 9.81（ブロードs,1H）,11.21（ブロードs,1H） 赤外線吸収スペクトル（ヌジョール） （cm^-1）:1690（カルボニル基） 上述の方法で得たエチル３−（1H−テトラゾール−５
−イル）オキサニレート5gにエタノール35mlを加え溶解
し、氷冷下0.5N−水酸化ナトリウム100mlを滴下した。
滴下後、徐々に温度を上げ、室温で３時間反応させた。
この溶液を4N−塩酸70ml中に室温にて滴下した。滴下
後、１時間撹拌し、析出した結晶を３取した。結晶を水
洗して、３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニ
リックアシッドを得た。収量3.9g（収率87.4％）。イソ
プロピルアルコール−水により再結晶し、分解点241〜2
43℃。Elemental analysis value: C ₁₁ H ₁₁ N ₅ O ₃ Calculated value of CH N 50.57 4.24 26.81 Observed value 50.62 4.19 26.98 Nuclear magnetic resonance spectrum (DMSO-d ₆ , 6 MHz) δ (ppm): 1.38 (t, 3H), 4.42 (q, 2H), 7.43 to 8.20 (m, 3H), 8.73 to 8.80 (m, 1H) 9.81 (broad s, 1H), 11.21 (broad s, 1H) Infrared absorption spectrum (nujol) (cm ^-1 ) : 1690 (carbonyl group) Ethyl 3- (1H-tetrazole-5 obtained by the above method
35 ml of ethanol was added to and dissolved in 5 g of -yl) oxanilate, and 100 ml of 0.5 N sodium hydroxide was added dropwise under ice cooling.
After the dropwise addition, the temperature was gradually raised, and the reaction was carried out at room temperature for 3 hours.
This solution was added dropwise to 70 ml of 4N hydrochloric acid at room temperature. After the dropwise addition, the mixture was stirred for 1 hour, and three precipitated crystals were collected. The crystals were washed with water to give 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid. Yield 3.9 g (87.4% yield). Recrystallized with isopropyl alcohol-water, decomposition point 241-2
43 ° C.

元素分析値C₉H₇N₅O₃として、 Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 46.35 3.03 30.04 実測値 46.50 2.95 30.16 核共鳴スペクトル（DMSO−d₆,60MHz） δ（ppm）:7.51〜8.27（m,3H）,8.65〜8.96（m,1H） 11.17（ブロードs,1H） 赤外線吸収スペクトル（KBr法） （cm^-1）:1670（カルボニル基） 又緩和な乾燥条件により一水和物を得る事もできる。Elemental analysis value: C ₉ H ₇ N ₅ O ₃ Calculated value of CH N 46.35 3.03 30.04 Observed value 46.50 2.95 30.16 Nuclear resonance spectrum (DMSO-d ₆ , 60 MHz) δ (ppm): 7.51 to 8.27 (m, 3H) , 8.65-8.96 (m, 1H) 11.17 (broad s, 1H) Infrared absorption spectrum (KBr method) (cm ^-1 ): 1670 (carbonyl group) Also, a monohydrate can be obtained under mild drying conditions.

分解点240℃（100℃で結晶水放出） 元素分析値C₉H₇N₅O₃・H₂Oとして、 Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 43.03 3.61 27.88 実測値 43.16 3.59 27.79 核磁気共鳴スペクトル（DMSO−d₆,60MHz） δ（ppm）:7.53〜8.33（m,3H） 8.65〜8.93（m,1H） 8.83〜9.21（ブロードs,2H） 11.16（ブロードs,1H） 赤外線吸収スペクトル（KBr法） （cm^-1）:1680（カルボニル基） 製造例２ ３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニリックア
シッドの製造 オキサリルクロライド12gを乾燥したジメトキシエタ
ン50mlの溶液とし、これに３−（1H−テトラゾール−５
−イル）アニリン5gを乾燥したジメトキシエタン250ml
に溶解した液を、室温撹拌下、３時間かけて滴下した。
不溶物をろ別後、氷冷下反応混合物に水50mlを徐々に加
え室温で１時間撹拌後酢酸エチル500mlを加えて抽出
し、水で洗浄した後、無水硫酸ナトリウムを用いて乾
燥、溶媒を留去して目的とする３−（1H−テトラゾール
−５−イル）オキサニリックアシッド5.4g（収率74.8
％）を得た。この物は製造例１で得た物の物性値、スペ
クトルデータ等が一致した。Decomposition point 240 ° C (water of crystallization released at 100 ° C) Elemental analysis value C ₉ H ₇ N ₅ O ₃ · H ₂ O, calculated CH N 43.03 3.61 27.88 found 43.16 3.59 27.79 Nuclear magnetic resonance spectrum (DMSO-d _{6, 60MHz) δ (ppm)} : 7.53~8.33 (m, 3H) 8.65~8.93 (m, 1H) 8.83~9.21 ( broad s, 2H) 11.16 (broad s, 1H) IR absorption spectrum (KBr method) (cm ^-1 ): 1680 (carbonyl group) Production Example 2 Production of 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid 12 g of oxalyl chloride was made into a solution of 50 ml of dried dimethoxyethane, and this was added to 3- (1H-tetrazole). -5
-Yl) aniline 5g dried dimethoxyethane 250ml
Was added dropwise over 3 hours while stirring at room temperature.
After filtering off the insoluble matter, 50 ml of water was gradually added to the reaction mixture under ice cooling, and the mixture was stirred at room temperature for 1 hour, extracted with 500 ml of ethyl acetate, washed with water, dried with anhydrous sodium sulfate, and the solvent was removed. After distillation, 5.4 g of the desired 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid (yield: 74.8
%). This product had the same physical property values and spectrum data as those of the product obtained in Production Example 1.

製造例３ ３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニリックア
シッドのカリウム塩の製造 水酸化カリウム1.27gをエタノール100mlに溶解し、３
−（1H−テトラゾール）オキサニリックアシッド5gを加
え、室温下４時間撹拌した。析出した結晶をろ過し、50
％エタノール水溶液で洗浄後、五酸化リン存在下、40℃
で減圧乾燥すると目的とする３−（1H−テトラゾール−
５−イル）オキサニリックアシッドのカリウム塩4.65g
（収率85％）を得た。分解点300℃以上。Production Example 3 Production of potassium salt of 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid 1.27 g of potassium hydroxide was dissolved in 100 ml of ethanol.
5 g of-(1H-tetrazole) oxanilic acid was added, and the mixture was stirred at room temperature for 4 hours. The precipitated crystals are filtered and 50
After washing with an aqueous solution of ethanol at 40%
When dried under reduced pressure, the desired 3- (1H-tetrazole-
4.65 g of potassium salt of 5-yl) oxanilic acid
(85% yield). Decomposition point 300 ° C or higher.

元素分析値C₉H₆N₅O₃Kとして、 Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 39.85 2.23 25.82 実測値 39.06 2.50 24.61 赤外線吸収スペクトル（KBr） （cm^-1）:1695（カルボニル基） 同様にしてナトリウム塩も得られた。Elemental analysis value: C ₉ H ₆ N ₅ O ₃ K, calculated value of CH N 39.85 2.23 25.82 Observed value 39.06 2.50 24.61 Infrared absorption spectrum (KBr) (cm ⁻¹ ): 1695 (carbonyl group) Obtained.

元素分析値C₉H₆N₅O₃Naとして、 Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 42.32 2.35 27.43 実測値 42.16 2.47 27.25 赤外線吸収スペクトル（KBr） （cm^-1）:1685（カルボニル基） 製造例４ ３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニリックア
シッドの２ナトリウム塩の製造 水酸化ナトリウム1.72g（43mmol）をメタノール100ml
に溶解し、３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキサ
ニリックアシッド5g（21.5mmol）を加え、室温下、１時
間撹拌した。反応溶液をエチルエーテル300mlに中に室
温で撹拌しながら注加し、析出した結晶をろ過し、五酸
化リン存在下、40℃で減圧乾燥すると、目的とする３−
（1H−テトラゾール−５−イル）オキサニリックアシッ
ドの２ナトリウム塩5g（収率85％）を得た。分解点300
℃以上 元素分析値C₉H₅N₅O₃No₂として、 Ｃ Ｈ Ｎ 計算値 39.01 1.81 25.26 実測値 39.18 1.85 25.10 赤外線吸収スペクトル（KBr） （cm^-1）:1680（カルボニル基） 本発明の抗アレルギー剤はヒスタミン及びSRS−Ａに
対する優れた遊離抑制作用を示し、例えば気管支喘息、
アレルギー性鼻炎・アレルギー性結膜炎、アトピー性皮
膚炎等の予防・治療に利用される。有効成分のMTCCは酸
自体でも使用出来るが、通常そのナトリウム塩又はカリ
ウム塩として使用される。Elemental analysis value: C ₉ H ₆ N ₅ O ₃ Na, calculated as CH N 42.32 2.35 27.43 Actual value 42.16 2.47 27.25 Infrared absorption spectrum (KBr) (cm ⁻¹ ): 1685 (carbonyl group) Production example 4 3- ( Preparation of disodium salt of 1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid 1.72 g (43 mmol) of sodium hydroxide in 100 ml of methanol
, And 5 g (21.5 mmol) of 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid was added thereto, followed by stirring at room temperature for 1 hour. The reaction solution was poured into 300 ml of ethyl ether while stirring at room temperature, and the precipitated crystals were filtered and dried under reduced pressure at 40 ° C. in the presence of phosphorus pentoxide to obtain the desired compound.
5 g (yield 85%) of disodium salt of (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid was obtained. Decomposition point 300
℃ or more Elemental analysis value C ₉ H ₅ N ₅ O ₃ No ₂ Calculated value of CH N 39.01 1.81 25.26 Observed value 39.18 1.85 25.10 Infrared absorption spectrum (KBr) (cm ^-1 ): 1680 (carbonyl group) Antiallergic agents show excellent release inhibitory effect on histamine and SRS-A, for example, bronchial asthma,
It is used for the prevention and treatment of allergic rhinitis, allergic conjunctivitis, atopic dermatitis, etc. The active ingredient MTCC can be used as the acid itself, but is usually used as its sodium salt or potassium salt.

次に、本発明の抗アレルギー剤の製剤例を示す。 Next, preparation examples of the antiallergic agent of the present invention will be described.

製剤例１ 吸入液 精製水約500mlに無水燐酸ナトリウム80gを溶解し、こ
れにMTCC20gを加えて溶解する。この液を水酸化ナトリ
ウム溶液でpH7.4に調整し、等張化剤として塩化ナトリ
ウム及びマンニットを加え、精製水を加えて正確に１
に調整し、常法により濾過、分注を行い２％濃度の吸入
液を得る。本剤は気管支喘息の予防・治療にネブライザ
ーで吸入投与する。Formulation Example 1 Inhalation solution 80 g of anhydrous sodium phosphate is dissolved in about 500 ml of purified water, and 20 g of MTCC is added thereto and dissolved. This solution was adjusted to pH 7.4 with sodium hydroxide solution, sodium chloride and mannitol were added as isotonic agents, and purified water was added to exactly 1 solution.
The mixture is filtered and dispensed by a conventional method to obtain a 2% concentration inhalation liquid. The drug is administered by inhalation with a nebulizer to prevent and treat bronchial asthma.

製剤例２ 注射剤、点鼻剤又は点眼剤 MTCC10gを使用するほかは製剤例１と同様な操作を行
うことにより１％濃度の注射剤、点鼻剤又は点眼剤を得
る。点鼻剤は定量噴霧器で局所投与する。Formulation Example 2 Injection, nasal drop or eye drop A 1% concentration of injection, nasal drop or eye drop is obtained by performing the same operation as in Formulation Example 1 except that 10 g of MTCC is used. Nasal drops are administered topically with a metered dose sprayer.

製剤例３ 粉末吸入剤 粒径10μ以下のMTCC Na塩400gと粒径30〜60μの乳糖6
00gとを均一に混合し、２号カプセルに50mg宛充填し、
粉末吸入剤を得る。本剤は気管支喘息の予防・治療に粉
末吸入器で投与する。Formulation Example 3 Powder Inhalant 400 g of MTCC Na salt having a particle size of 10 μ or less and lactose 6 having a particle size of 30 to 60 μ
00g and uniformly mixed and filled into No. 2 capsule with 50mg,
Obtain a powder inhalant. The drug is administered with a powder inhaler for the prevention and treatment of bronchial asthma.

（５） 発明の効果 本発明は、前述の通り、優れたヒスタミン及びSRS−
Ａ遊離抑制作用を有し、抗アレルギー剤としての適用範
囲の広い新規親水性化合物の創製に成功したことに基く
ものである。(5) Effects of the Invention As described above, the present invention provides excellent histamine and SRS-
It is based on the successful creation of a novel hydrophilic compound having an A release inhibiting effect and a wide range of application as an antiallergic agent.

従来より本出願人は類似化合物のMTBをSRS−Ａ遊離抑
制作用に基く抗喘息剤として特許出願（特願昭60−6332
0号）し、開発中であるが、MTBが親油性化合物であるこ
とから、水性製剤の調製が困難であった。Heretofore, the present applicant has filed a patent application for MTB of a similar compound as an anti-asthmatic agent based on the action of inhibiting SRS-A release (Japanese Patent Application No. 60-6332).
No. 0) and under development, however, it was difficult to prepare an aqueous preparation because MTB is a lipophilic compound.

このような状況の下、本発明によりMTBと同様に優れ
たヒスタミン及びSRS−Ａ遊離抑制作用を示す水性製剤
の調製を始めて可能にし、医薬品として適用範囲の広い
新規な抗アレルギー剤を提供し得たところである。Under such circumstances, the present invention enables, for the first time, the preparation of an aqueous preparation showing excellent histamine and SRS-A release inhibitory action similarly to MTB, and can provide a novel antiallergic agent having a wide range of application as a pharmaceutical. It is just right.

次にMTCCがヒスタミン及びSRS−Ａに対する優れた遊
離抑制作用を示すことを試験例により説明する。Next, a description will be given of a test example showing that MTCC exhibits an excellent release inhibitory effect on histamine and SRS-A.

試験例１ 感作モルモット肺切片からのヒスタミン及びSRS−Ａ遊
離抑制効果試験 ハートレイ系雄性モルモットに抗卵アルブミン血清
（0.5ml/頭）を前肢静脈内に注射し受動的に感作した。Test Example 1 Test for Inhibiting Histamine and SRS-A Release from Sensitized Guinea Pig Lung Sections Hartley male guinea pigs were passively sensitized by injecting anti-ovalbumin serum (0.5 ml / head) into the forelimb vein.

２日後放血致死させ得られた肺を1mm大の切片とした
後、タイロード液を加え肺切片浮遊液とし、0.15モル燐
酸バッファーで所定濃度に稀釈した被検薬液で５分間処
置した後抗原を加え15分間インキュベートし、遊離した
上清中のヒスタミン及びSRS−Ａの量を測定した。ヒス
タミンの測定はMay,C.D.らの方法〔Journaln of Allerg
y 46,12−20（1970）〕に従って行い、SRS−Ａの測定は
ワタナベ（Watanabe）等の方法〔マイクロバイオロジイ
・アンド・イミノロジイ（Microbiology and Immunolog
y）第23巻、1009〜1022頁、1979年〕に従って行った。Two days after exsanguination, the lungs were killed, and the resulting lungs were sectioned into 1 mm-sized sections. Tyrode's solution was added to the lung sections to prepare suspensions, and treated with a test drug solution diluted to a predetermined concentration in 0.15M phosphate buffer for 5 minutes. The mixture was incubated for 15 minutes, and the amounts of histamine and SRS-A in the released supernatant were measured. Histamine is measured by the method of May, CD et al. [Journaln of Allerg
y 46 , 12-20 (1970)], and the measurement of SRS-A was carried out by the method of Watanabe et al. [Microbiology and Immunologi (Microbiology and Immunologi).
y) Volume 23, 1009-1022, 1979].

本試験の結果は第１表に示す。 The results of this test are shown in Table 1.

試験例２ （ラットの実験的アレルギー性鼻炎における鼻汁中易染
性細胞の脱顆粒抑制作用の試験） 試験方法 Wistar系ラットにラット抗日本杉花粉−ブタ・アスカ
リス（Cryphomeria Japonica−As）血清を皮下投与し受
動的に感作した。本ラットをペントバルビタール・ナト
リウムで麻酔後、背位固定、頚部正中切開を行い、気管
切開部より鼻腔内へ外径1mmのポリエチレンチューブを
挿入し、端を潅流ポンプに接続し37℃に加温した滅菌生
理食塩水を0.25ml/minの流速で潅流した。10μg/mlの日
本杉花粉抽出抗原を鼻腔用噴霧器により両鼻腔に1mlを
吸入させ、潅流により鼻腔より流出する液を20分間採取
した。採取した試料中の易染性細胞（metachromatic ce
lls）100個あたりの脱顆粒細胞数をカウントしこれを対
照群の値とした。 Test Example 2 (Test of degranulation inhibitory effect of nasal dye-sensitive cells in experimental allergic rhinitis in rats) Test method Wistar rats were subcutaneously administered with rat anti-Japanese cedar pollen-porcine ascaris (Cryphomeria Japonica-As) serum. And sensitized passively. After anesthetizing this rat with pentobarbital sodium, dorsal fixation and midline cervical incision, insert a polyethylene tube with an outer diameter of 1 mm into the nasal cavity from the tracheal incision, connect the end to a perfusion pump and heat to 37 ° C The sterilized physiological saline was perfused at a flow rate of 0.25 ml / min. 1 ml of the Japanese cedar pollen extracted antigen of 10 μg / ml was inhaled into both nasal cavities using a nasal sprayer, and the liquid flowing out of the nasal cavity by perfusion was collected for 20 minutes. Metachromatic ce cells in the collected samples
lls) The number of degranulated cells per 100 cells was counted and used as the value of the control group.

供試薬剤を0.15モル燐酸バッファーで所定濃度に稀釈
し、抗原吸入５分前に0.5ml/100g体重の割合で両鼻腔へ
吸入投与して、上記と同様な方法で脱顆粒細胞数をカウ
ントし、これを試験群の値とした。下記により脱顆粒抑
制率を求めた。The test agent was diluted to a predetermined concentration with a 0.15M phosphate buffer, and administered into both nasal cavities at a ratio of 0.5 ml / 100 g body weight 5 minutes before inhalation of the antigen, and the number of degranulated cells was counted in the same manner as described above. This was taken as the value of the test group. The degranulation inhibition rate was determined as follows.

試験結果 本試験の試験結果は第２表に示す通りである。各測定
値は５回の平均値で示した。 Test results The test results of this test are as shown in Table 2. Each measurement value was shown as an average value of five measurements.

試験例３ （ラットの実験的アレルギー性鼻炎における鼻汁分泌抑
制作用の試験） 試験方法 Wistar系ラットにラット抗日本杉花粉−ブタ・アスカ
リス（Cryptomeria Japonica−As）血清を皮下投与し受
動的に感作した。本ラットをペントバルビタール・ナト
リウムで麻酔後、背位固定、頚部正中切開を行い、気管
切開部より鼻腔内へ外径1mmのポリエチレンチューブを
挿入し、端を潅流ポンプに接続し37℃に加温した滅菌生
理食塩水を0.25ml/minの流速で潅流した。４％ブリリア
ントブルー1.5ml/100g体重を尾静脈より注入し、10分間
潅流液を採取し色素濃度を測定し、これを対照Ag（−）
の値とした。次いで10μg/mlの日本杉花粉抽出抗原を鼻
腔用噴霧器により両鼻腔に1mlを吸入させ、鼻腔歪の抗
原を生理食塩水で洗浄した後再び30分間潅流液を採取し
色素濃度を測定しこれを対照Ag（＋）の値とした。 Test Example 3 (Test of nasal secretion inhibitory action in experimental allergic rhinitis in rats) Test method Wistar rats were passively sensitized by subcutaneously administering rat anti-Japanese cedar pollen-porcine ascaris (Cryptomeria Japonica-As) serum. . After anesthetizing this rat with pentobarbital sodium, dorsal fixation and midline cervical incision, insert a polyethylene tube with an outer diameter of 1 mm into the nasal cavity from the tracheal incision, connect the end to a perfusion pump and heat to 37 ° C The sterilized physiological saline was perfused at a flow rate of 0.25 ml / min. 4% brilliant blue 1.5 ml / 100 g body weight was injected into the tail vein, and a perfusate was collected for 10 minutes to measure the pigment concentration, which was used as a control Ag (-).
Value. Next, 1 ml of Japanese cedar pollen extracted antigen of 10 μg / ml was inhaled into both nasal cavities using a nasal sprayer, and the nasal strain antigen was washed with physiological saline, and a perfusate was collected again for 30 minutes to measure the pigment concentration. The value of control Ag (+) was used.

供試薬剤を0.15モル燐酸バッファーで所定濃度に稀釈
して抗原吸入５分前に0.5ml/100g体重の割合で両鼻腔へ
吸入投与を行い、上記と同様な方法で各濃度の場合につ
いて色素濃度を測定した。色素濃度はM.Kojima等の方法
〔Allergy 35,180−187（1986）〕により分光光度法で
測定した。The test agent was diluted to a predetermined concentration with a 0.15M phosphate buffer, and inhaled at a rate of 0.5 ml / 100 g body weight 5 minutes before inhalation of the antigen. Was measured. The dye concentration was measured spectrophotometrically by the method of M. Kojima et al. [Allergy 35 , 180-187 (1986)].

試験結果 本試験の試験結果は第３表に示す通りである。各測定
値は５回の平均値で示した。Test results The test results of this test are as shown in Table 3. Each measurement value was shown as an average value of five measurements.

試験例４ （モルモットの実験的アレルギー性結膜炎に対する治療
効果の試験） 試験方法 Hertley系モルモットに抗DNP−As血清を1ml静注して
受動的に感作した。８日後左眼に抗原液（DNP−BSA 2.5
mg/ml）を１分間に１回の間隔で10分間点眼し、その後1
0分間の涙液をろ紙で採取すると共に、その間の眼の炎
症反応を肉眼的に観察した。〔Y.Takeuchi et al;Aller
gy 34，（11）1021−1027（1985），〕抗原液点眼終了
時から10分間経過後、供試薬剤を１分間に１回の間隔で
10分間点眼し、以後同様に涙液の採取および眼の炎症反
応の肉眼的観察を行なった。採取した涙液中のヒスタミ
ン含量を小松の方法（アレルギー27,67〜74,1978）によ
り測定した。 Test Example 4 (Test of therapeutic effect of guinea pig on experimental allergic conjunctivitis) Test method Hertley guinea pig was passively sensitized by intravenously injecting 1 ml of anti-DNP-As serum. Eight days later, the antigen solution (DNP-BSA 2.5
mg / ml) once every minute for 10 minutes.
The tears for 0 minutes were collected with a filter paper, and the inflammatory response of the eye during that time was visually observed. (Y. Takeuchi et al; Aller
gy 34 , (11) 1021-1027 (1985),] After 10 minutes from the end of the instillation of the antigen solution, the test agent is administered at intervals of 1 minute.
The eye was instilled for 10 minutes, and thereafter, the collection of tears and macroscopic observation of the inflammatory reaction of the eye were similarly performed. The histamine content in the collected tears was measured by the method of Komatsu (allergy 27, 67-74, 1978).

なお、供試薬剤はMTCCは10^-3g/ml、DSCGは２×10^-2g/
mlの濃度で使用した。The reagents were 10 ^-3 g / ml for MTCC and 2 × 10 ^-2 g / ml for DSCG.
Used at a concentration of ml.

試験動物は１群５匹を用いた。 Five test animals were used per group.

試験結果 （１） 炎症反応の肉眼的観察 抗原液の点眼によりほぼ全例に眼結膜の腫脹、充血、
流涙が著明に認られた。これらの反応のうち眼結膜の腫
脹と充血については、引き続き行なわれたMTCCの点眼に
より著しい治療効果を認めた。また、対照薬のDSCGの点
眼によっても若干治療効果を認めたが、その作用はMTCC
に比較し明らかに劣るものであった。Test results (1) Macroscopic observation of inflammatory response In almost all cases, instillation of antigen solution caused swelling, congestion of ocular conjunctiva,
Weeping was noticeably noted. Of these reactions, swelling and hyperemia of the conjunctiva of the eye showed a remarkable therapeutic effect by subsequent instillation of MTCC. In addition, a slight therapeutic effect was also observed when the control drug DSCG was instilled.
Was clearly inferior to that of.

（２） ヒスタミン含量の測定 測定値は第４表に示す。(2) Measurement of histamine content The measured values are shown in Table 4.

第４表から明らかなように、涙液中のヒスタミン含量
は、MTCCの点眼により著しく低下した。また、このヒス
タミン含量の低下と眼の炎症の肉眼的観察による治療効
果はほぼ一致していた。 As is evident from Table 4, the histamine content in tears was significantly reduced by instillation of MTCC. In addition, the reduction in histamine content and the therapeutic effect by visual observation of eye inflammation were almost the same.

試験例５ （ラット受身皮膚アナフィラキシ−反応抑制効果の試
験） 試験方法 ウィスター系雄性ラットの背部皮内に希釈した抗血清
を注射し受動的に感作し、48時間経過後に抗原DNP−Asc
（ブタ回虫より精製した蛋白質との結合物）2.5mgおよ
び被検薬物を含む0.5％−エバンスブルー1mlを尾静脈よ
り投与した。30分後に放血致死せしめ、色素漏出部位の
皮膚を剥離し、漏出色素量をKatayamaらの方法（Microb
iol.Immunol,vol 22,89〜101,1978）に従って測定し、
被検物質を与えていない対照動物の値と比較した。その
結果を第５表に示す。Test Example 5 (Test of rat passive cutaneous anaphylaxis-reaction inhibitory effect) Test method Passively sensitized by injecting diluted antiserum into the dorsal skin of male Wistar rats, and after 48 hours, antigen DNP-Asc
(Conjugate to protein purified from roundworm porcine roundworm) 2.5 mg and 1 ml of 0.5% -Evans blue containing a test drug were administered via the tail vein. After 30 minutes, the blood was killed by exsanguination, the skin at the site of pigment leakage was peeled off, and the amount of pigment leakage was determined by the method of Katayama et al. (Microb
iol.Immunol, vol 22,89-101,1978)
The values were compared with those of control animals not receiving the test substance. Table 5 shows the results.

試験例６ （モルモット受身皮膚アナフィラキシ−反応抑制効果の
試験） 試験方法 ハートレイ系雄性モルモット背部皮内に希釈した抗血
清を注射し、受動的に感作し、８日後に抗原DNP−Asc
0.5mgおよび被検薬物を含む0.5％−エバンスブルー1ml
を前肢静脈より投与した。30分後に放血致死せしめ色素
漏出部位の皮膚を剥離し、Katayamaらの方法に従って漏
出色素を測定した。その結果を第６表に示す。 Test Example 6 (Test of guinea pig passive cutaneous anaphylaxis-reaction inhibitory effect) Test method Injected antiserum diluted into the back skin of male Hartley guinea pig, passively sensitized, and 8 days later antigen DNP-Asc
0.5 mg and 0.5% of Evans blue containing test drug 1 ml
Was administered through the forelimb vein. Thirty minutes later, the bleeding was killed, the skin at the site of the dye leakage was peeled off, and the leakage pigment was measured according to the method of Katayama et al. Table 6 shows the results.

試験例７ MTCCの急性毒性試験 試験方法 供試動物 ddy系マウス （20〜23g、雄雌各１群20匹） ウィスターケーラット （110〜130g、雄雌各１群10匹） ビーグル犬 （７ケ月令、雄雌各１群３頭） 急性毒性の評価 供試薬剤投与後14日間の死亡動物数からLD₅₀値を求め
た。 Test Example 7 Acute toxicity test of MTCC Test method Test animal ddy mouse (20 to 23 g, male and female, 20 mice / group) Wistar Keirat (110 to 130 g, male / female, 10 mice / group) Beagle dog (7 months decree were determined LD ₅₀ values from the male and female evaluation test drug deaths number of animals 14 days after administration of each one group 3 animals) acute toxicity.

投与経路及び供試薬剤の調製 マウス及びラットに対しては、MTCCの0.1Mリン酸バッ
ファー溶液による静脈内投与試験とMTCCの0.5％CMC−Na
懸濁液による経口投与試験を行った。Administration Route and Preparation of Reagents For mice and rats, an intravenous administration test using a 0.1 M phosphate buffer solution of MTCC and 0.5% CMC-Na
An oral administration test with the suspension was performed.

イヌに対してはMTCC原末を充填したカプセル剤による
経口投与試験を行った。Oral administration tests were performed on dogs using capsules filled with MTCC bulk powder.

試験結果 本試験の結果は第７表に示す。Test results The results of this test are shown in Table 7.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭63−44570（ＪＰ，Ａ) 特開 昭57−11975（ＪＰ，Ａ) ──────────────────────────────────────────────────続 き Continuation of the front page (56) References JP-A-63-44570 (JP, A) JP-A-57-11975 (JP, A)

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】３−（1H−テトラゾール−５−イル）オキ
サニリックアシッド又はその塩を有効成分として含有す
ることを特徴とする抗アレルギー剤。1. An antiallergic agent comprising 3- (1H-tetrazol-5-yl) oxanilic acid or a salt thereof as an active ingredient.