JP2584245B2 - Production method of ultraviolet absorbing material by tissue culture of lavender plant cells - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 ＜産業上の利用分野＞ この発明は、ラベンダー属植物の組織培養による紫外
線吸収物質の生産方法に関し、殊にこの発明にかかる前
記紫外線吸収物質は、ラベンダー属植物の培養細胞中に
存在し,290〜320nmの中波長紫外線（UV−Ｂ）および320
〜400nmの長波長紫外線（UV−Ａ）を有効に吸収するす
ぐれた紫外線吸収特性を有する物質で、サンケア化粧料
および医薬品に有効で広範囲な用途を有する物質であ
り、この発明は季節的制約その他のラベンダー植物栽培
上の制約等なしに当該紫外線吸収物質を高収率で，しか
も多量且つ効率よく安定生産する方法に関するものであ
る。Description: TECHNICAL FIELD The present invention relates to a method for producing an ultraviolet absorbing substance by tissue culture of a lavender plant, and in particular, the ultraviolet absorbing substance according to the present invention is used for cultivating a lavender plant. Present in cells, 290-320 nm medium wavelength ultraviolet (UV-B) and 320
It is a substance having excellent ultraviolet absorption properties that effectively absorbs long wavelength ultraviolet (UV-A) of up to 400 nm, and is a substance that is effective for sun care cosmetics and pharmaceuticals and has a wide range of uses. The present invention relates to a method for stably producing the ultraviolet absorbing substance in a high yield, in a large amount, and efficiently, without restriction on cultivation of lavender plants.

＜発明の背景および従来の技術＞ 従来の紫外線吸収剤としては、ベンゾフェノン系，安
息香酸系，ニトリル系，桂皮酸系等の合成品や植物成分
由来の抽出物が利用されてきている。しかし、前記合成
品にかかる紫外線吸収物質は特に安全性の面において問
題が生ずる場合が多い。一方、植物成分由来の抽出物が
有する紫外線吸収特性は、300nm以下のUV−Ｂ領域に極
大吸収を持つものが多く、UV−Ａ領域の波長を吸収でき
るものはいままでに殆ど認められていない。（フレグラ
ンス ジャーナル No.75,p52,1985） 従来、ラベンダー属植物はシソ科の植物であり、全草
に芳香があることから香料，浴湯料，ポプリ等に古くか
ら用いられてきた。また、ラベンダーの若い花冠（花
弁）から蒸留して得られるラベンダー油は、その主成分
にリナロール，酢酸リナリル，ゲラニオール，クマリ
ン，フルフラールおよびボルネオール等が含まれてお
り、香水のほか興奮剤のような医薬品に利用されてい
る。しかし、従来には前記ラベンダー属植物に紫外線吸
収物質が含有されているという報告はない。<Background of the Invention and Conventional Technology> As a conventional ultraviolet absorber, benzophenone-based, benzoic acid-based, nitrile-based, cinnamic-acid-based synthetic products, and extracts derived from plant components have been used. However, there are many cases where the ultraviolet absorbing material according to the synthetic product has a problem particularly in terms of safety. On the other hand, the ultraviolet absorption properties of extracts derived from plant components often have a maximum absorption in the UV-B region of 300 nm or less, and those that can absorb wavelengths in the UV-A region have hardly been recognized so far. . (Fragrance Journal No. 75, p52, 1985) Conventionally, lavender plants are plants of the Labiatae family, and have been used for a long time in fragrances, baths, potpourri, and the like because the whole plant has an aroma. In addition, lavender oil obtained by distilling from young lavender corolla (petals) contains linalool, linalyl acetate, geraniol, coumarin, furfural, borneol, and the like as its main components. Used in pharmaceutical products. However, there is no report that the lavender plant contains an ultraviolet absorbing substance.

しかも、ラベンダー属植物は播種から植物体までの成
長に時間がかかり，広大な栽培面積が必要となるうえ、
自生または栽培にかかるラベンダー属植物は，その収穫
時期および栽培条件等により当該植物体に含有される有
効成分の特性および含有量が変動するという問題があ
る。Moreover, lavender plants take a long time to grow from sowing to plants, and require a large cultivation area.
Lavender plants that grow or grow naturally have the problem that the characteristics and content of the active ingredient contained in the plant vary depending on the harvest time and cultivation conditions.

＜発明が解決しようとする問題点＞ この発明は、ラベンダー植物の培養細胞およびラベン
ダーの植物体からの抽出物（ハーブエキス）中に優れた
紫外線吸収物質が存在することを発見したことに端を発
し、ラベンダー属植物の組織を組織培養して前記紫外線
吸収物質を高収率で生産する方法を確立したことに基づ
き完成されたものである。<Problems to be Solved by the Invention> The present invention ends with the discovery that excellent ultraviolet absorbing substances are present in cultured cells of lavender plants and extracts (herbal extracts) from lavender plants. The present invention has been completed based on the establishment of a method for producing the above-mentioned UV-absorbing substance in high yield by tissue-culturing the tissue of a lavender plant.

すなわち、この発明にかかるラベンダー属植物からの
抽出物に含まれる前記紫外線吸収物質の特性は、330nm
の極大吸収および280〜320nmのショルダーピーク（以上
ラベンダーの培養細胞およびラベンダー属植物の植物体
の生のままの各生物体からの抽出物），もしくは300〜3
20nmにショルダーピークおよび278nm付近の極大吸収
（以上ラベンダーの培養細胞およびラベンダー植物体の
各乾燥体からの抽出物）を有し，つまりいずれも280〜3
30nmに優れた吸収効果を有し，サンバーンを引き起こす
とされるUV−Ｂ領域の紫外線とサンタンを引き起こすと
されるUV−Ａ領域の紫外線の両者を有効に吸収できるも
のである。That is, the characteristics of the ultraviolet absorbing material contained in the extract from the lavender plant according to the present invention, 330nm
Absorption and shoulder peak at 280-320nm (extract from cultured lavender cells and intact lavender plants), or 300-3
It has a shoulder peak at 20 nm and a maximum absorption at around 278 nm (above, extracts from cultured lavender cells and dried lavender plants).
It has an excellent absorption effect at 30 nm, and can effectively absorb both ultraviolet rays in the UV-B region that causes sunburn and ultraviolet rays in the UV-A region that causes suntan.

したがって、この発明にかかる紫外線吸収物質は、ラ
ベンダー属植物からの抽出物（ハーブエキス）であっ
て、いわゆる天然物から抽出された紫外線吸収物質であ
るから従来の合成品系の各種紫外線吸収物質のような毒
性がなく安全な紫外線吸収物質を提供することができる
ものである。Therefore, the ultraviolet absorbing substance according to the present invention is an extract (herb extract) from a plant of the genus Lavender, and is an ultraviolet absorbing substance extracted from a so-called natural product. It is possible to provide a safe ultraviolet absorbing substance without any toxicity.

さらに、この発明は、ラベンダー属植物細胞の組織培
養により、ラベンダー培養細胞中の前記紫外線吸収物質
の生産性つまりラベンダー培養細胞単位生重量当たりの
紫外線吸収物質の生産量を高める方法を確立するもので
ある。Furthermore, the present invention establishes a method for increasing the productivity of the ultraviolet absorbing substance in the lavender cultured cells, that is, the production amount of the ultraviolet absorbing substance per unit raw weight of the lavender cultured cells, by tissue culture of lavender plant cells. is there.

かくして、この発明は、従来の前記諸問題点を解決す
るものであって、サンタンを引き起こすとされるUV−Ａ
領域の紫外線およびサンバーンを引き起こすとされるUV
−Ｂ領域の紫外線の両領域の紫外線を有効に吸収し，し
かもラベンダーの培養細胞という天然物から抽出されて
いるので安全であり，さらにサンケア化粧料・医薬品に
好適な紫外線吸収物質を，ラベンダー植物のように収穫
時期等の季節的制約や栽培条件等に影響を受けないで効
率良く，しかも一定の品質のものを安定供給生産する方
法を提供することを目的とするものである。Thus, the present invention solves the above-mentioned problems of the prior art, and it is considered that UV-A
UV radiation in the area and UV which is said to cause sunburn
-A UV-absorbing substance that absorbs both UV rays in the B-region effectively and is extracted from a natural product called cultured lavender cells, and is suitable for sun care cosmetics and pharmaceuticals. It is an object of the present invention to provide a method for efficiently supplying a product of constant quality without being affected by seasonal restrictions such as harvest time and cultivation conditions.

＜問題点を解決するための手段＞ 上記目的を達成するために、この発明では、 ラベンダー属植物細胞の組織培養により紫外線吸収物
質を生産するに際して、 ラベンダー属植物の組織から誘導したカルスを、カル
ス増殖用基準培地若しくは当該カルス増殖用基準培地に
アミノ酸を添加したアミノ酸添加培地または当該カルス
増殖用基準培地の無機塩態総和窒素量を40mM以下とした
改変培地を用いて組織培養してラベンダー培養細胞を得
るラベンダー細胞増殖工程と、 前記ラベンダー培養細胞から有機溶剤，有機溶剤と水
との混合液または酸性溶剤を用いて紫外線吸収物質を抽
出する紫外線吸収物質抽出工程とから構成することとし
た。<Means for Solving the Problems> In order to achieve the above object, according to the present invention, when producing an ultraviolet absorbing material by tissue culture of lavender plant cells, callus derived from the tissue of the lavender plant is transformed into callus. Lavender cultured cells by tissue culture using an amino acid-added medium obtained by adding an amino acid to the growth medium or the callus growth reference medium, or a modified medium in which the total amount of inorganic salts in the callus growth reference medium is 40 mM or less. And a UV-absorbing substance extracting step of extracting a UV-absorbing substance from the cultured lavender cells using an organic solvent, a mixed solution of an organic solvent and water or an acidic solvent.

この発明にかかる紫外線吸収物質の抽出原料として使
用されるラベンダー培養細胞は、ラベンダー属植物の各
組織（根，茎，葉，花などから由来する組織）からオー
キシン類およびサイトカイニン類などの植物生長調節物
質を必要に応じて添加した通常のカルス誘導用培地（寒
天培地）を用いてカルスを誘導し、このカルスをカルス
増殖用基準培地若しくは当該カルス増殖用基準培地に各
種アミノ酸を添加したアミノ酸添加培地または当該カル
ス増殖用基準培地の無機塩態総和窒素量を40mM以下とし
た改変培地を用いて増殖することにより得ることができ
る。The lavender cultivated cells used as a raw material for extracting the ultraviolet absorbing substance according to the present invention are plant growth regulators such as auxins and cytokinins from tissues of lavender plants (tissues derived from roots, stems, leaves, flowers, etc.). A callus is induced using a normal callus-inducing medium (agar medium) to which substances are added as necessary, and the callus is cultured in a reference medium for callus growth or an amino acid-supplemented medium in which various amino acids are added to the reference medium for callus growth. Alternatively, it can be obtained by growing using a modified medium in which the total amount of inorganic nitrogen in the salt medium of the callus growth reference medium is 40 mM or less.

すなわち、ラベンダーの各組織（根，茎，葉，花など
の組織）の一部を切り取り、殺菌後植物生長調節物質を
添加したカルス誘導用培地（寒天培地）（ａ）で10〜35
℃，好ましくは20〜25℃，明所または暗所の条件下で約
20〜30日間培養し、ラベンダー植物組織のカルスを得
る。カルスは必要に応じて継代培養を繰り返して安定化
を図ると好適である。That is, a part of each tissue of lavender (tissue such as roots, stems, leaves, flowers, etc.) is cut off, and after sterilization, a callus induction medium (agar medium) to which a plant growth regulator is added is 10 to 35%.
° C, preferably 20 to 25 ° C, under light or dark conditions.
Culture for 20 to 30 days to obtain callus of lavender plant tissue. It is preferable that the callus is stabilized by repeating subculture if necessary.

つぎに、誘導された前記ラベンダー植物の組織由来の
カルスは、植物生長調節物質を必要に応じて添加した増
殖用基準培地（通常液体培地）（ｂ）に移し、10〜35
℃，好ましくは20〜25℃，明所または暗所の条件下で約
７日間（指数増殖期の後期または定常期の初期に相当す
る期間）振盪培養を継続し、当該ラベンダーカルスを増
殖させてラベンダー培養細胞を得る。Next, the induced callus derived from the tissue of the lavender plant was transferred to a standard growth medium (usually a liquid medium) (b) to which a plant growth regulator was added as necessary, and 10-35.
C., preferably at 20 to 25.degree. C., under light or dark conditions for about 7 days (a period corresponding to the late exponential phase or the early stationary phase), and the lavender callus is grown. Obtain lavender cultured cells.

前記カルス誘導用の基準培地としては、特に限定され
ることなく、通常カルス誘導用培地として用いられるも
のが利用できる。たとえば、ムラシゲ・アンド・スクー
グ（Murashige ＆ Skoog）氏の培地（以下「MS培地」と
いう），リンスマイヤー・アンド・スクーグ（Linsmaie
r ＆ Skoog）氏の培地（以下「LS培地」という），ホワ
イト（White）氏の培地（以下「Ｗ培地」という），ガ
ンボルグ（Gamborg）氏の培地（以下「Ｇ培地」とい
う），ヘラー（Heller）氏の培地（以下「Ｈ培地」とい
う），ニッチ（Nitsch）氏の培地（以下「Ｎ培地」とい
う）等およびこれらの改変培地等が利用できる。また、
前記カルス誘導を促進するために各種植物生長調節物質
が前記培地に添加される。前記カルス誘導用培地中に必
要に応じて添加する植物生長調節物質に、オーキシン類
として例えば2,4−ジクロロフェノキシ酢酸（以下「2,4
−Ｄ」という」，ナフタレン酢酸（以下「NAA」とい
う），インドール酢酸（以下「IAA」という），インド
ール酪酸（以下「IBA」という）が利用でき、サイトカ
イニン類として例えばカイネチン，ゼアチン，ベンジル
アデニン等が単独または適宜複数組み合わせて利用する
ことができる。前記植物生長調節物質の使用濃度は、通
常10^-7M〜10^-4M（Ｍ＝mol/）の割合で添加して使用さ
れる。The reference medium for callus induction is not particularly limited, and those usually used as a callus induction medium can be used. For example, Murashige &Skoog's medium (hereinafter referred to as “MS medium”), Linsmeyer & Skoog (Linsmaie & Skoog)
r &Skoog's medium (hereinafter referred to as "LS medium"), White's medium (hereinafter referred to as "W medium"), Gamborg's medium (hereinafter referred to as "G medium"), Heller ( Heller's medium (hereinafter referred to as "H medium"), Nitsch's medium (hereinafter referred to as "N medium"), and modified media thereof can be used. Also,
Various plant growth regulators are added to the medium to promote callus induction. The plant growth regulator added as necessary to the callus induction medium may be, for example, 2,4-dichlorophenoxyacetic acid (hereinafter referred to as "2,4
-D ”, naphthaleneacetic acid (hereinafter“ NAA ”), indoleacetic acid (hereinafter“ IAA ”), indolebutyric acid (hereinafter“ IBA ”), and cytokinins such as kinetin, zeatin, benzyladenine, etc. Can be used alone or in appropriate combination of two or more. The plant growth regulator is usually used at a concentration of 10 ⁻⁷ M to 10 ⁻⁴ M (M = mol /).

ラベンダー細胞増殖工程において使用されるラベンダ
ーカルス増殖用基準培地としては、カルス誘導培地と同
様に特に限定されることはなく、通常細胞増殖用培地と
して用いられるものが利用できる。前記カルス誘導用に
用いたMS培地,LS培地,W培地,G培地,H培地,N培地等およ
びこれらの改変培地等も利用することができるのは勿
論、さらには、チュレッケ（Tulecke）氏の培地（以下
「Ｔ培地」という，ブラウン・アンド・ウッド（Braun
＆ Wood）氏の培地（以下「BW培地」という）等のよう
にその培地組成中に１または複数のアミノ酸をある程度
量すでに含有する培地も増殖用基準培地として利用する
ことができる。ラベンダーカルス増殖用基準培地中に必
要に応じて添加される植物生長調節物質の種類およびそ
の添加量についても前記カルス誘導の場合と同様であ
る。なお、ちなみにラベンダーのカルス誘導およびラベ
ンダーカルスの増殖における各種植物生長調節物質の作
用効果を第１表に示す。第１表により、ラベンダー植物
のカルス誘導には前記オーキシン類およびサイトカイニ
ン類の内の少なくとも１つの植物生長調節物質が必要で
あるといえる。また、ラベンダーカルスの増殖培養に
は、前記オーキシン類およびサイトカイニン類は必ずし
も必要ではないことが判明した。（第１表参照） このようにして得られたラベンダー培養細胞（生細
胞）は、濾集されてつぎの紫外線吸収物質抽出工程にお
ける供試原料とされる。なお、当該抽出工程で供される
ラベンダー培養細胞は、培養後濾集時そのままの生物体
原料でもよいし、これらを一旦乾燥して得られる乾燥体
原料でもよい。乾燥体原料は紫外線吸収物質の抽出用原
料の長期保存を可能とし有利である。この場合、生体原
料の乾燥条件として，例えば風乾,60℃以下の温度で乾
燥することが好ましい。The reference medium for lavender callus growth used in the lavender cell growth step is not particularly limited as in the case of the callus induction medium, and those usually used as a cell growth medium can be used. The MS medium, LS medium, W medium, G medium, H medium, N medium, etc. used for the callus induction and the modified mediums thereof can be used, and further, Tulecke's Medium (hereinafter referred to as "T medium", Braun and Wood)
& Wood) 's medium (hereinafter referred to as "BW medium") or the like, which already contains a certain amount of one or more amino acids in the medium composition, can also be used as a reference medium for growth. The type and amount of the plant growth regulator added as necessary to the lavender callus growth reference medium are the same as in the case of the callus induction. Table 1 shows the effects of various plant growth regulators on lavender callus induction and lavender callus growth. According to Table 1, it can be said that callus induction of lavender plants requires at least one plant growth regulator among the auxins and cytokinins. It was also found that the auxins and cytokinins were not necessarily required for lavender callus growth culture. (See Table 1) The cultured lavender cells (live cells) thus obtained are collected by filtration and used as test materials in the next step of extracting an ultraviolet absorbing substance. The lavender cultured cells provided in the extraction step may be raw biological materials at the time of filtration after culture, or may be dried raw materials obtained by drying these once. The dried raw material is advantageous because it allows long-term storage of the raw material for extracting the ultraviolet absorbing substance. In this case, it is preferable to dry the biological material at a temperature of, for example, air drying at a temperature of 60 ° C. or less.

ラベンダー属植物の培養細胞（ラベンダー培養細胞）
から紫外線吸収物質を抽出するために用いる溶剤として
は、低級アルコール類，脂肪族エーテル類，ケトン類，
低級ハロゲンアルカン類等の各種有機溶剤が利用でき
る。殊に、前記抽出溶剤には親水性の有機溶剤が好まし
い。さらには前記各種有機溶剤単独のほか２種類以上の
有機溶剤の混合液が利用できる。また、前記各種有機溶
剤と水との混合液も利用できる。すなわち、水と任意に
溶解し得る親水性の有機溶剤は水との混合液，たとえば
任意の混合率を有するエタノール水溶液等，を用いるこ
とができるのは勿論である。さらには、抽出用溶剤とし
て、水若しくは有機溶剤またはこれらの混合溶剤に少量
の各種酸を含有させて酸性を呈するようにした酸性溶
剤，たとえば１％塩酸水溶液または１％塩酸エタノール
溶液等，も利用できる。ここで利用できる酸は、塩酸，
炭酸，硫酸等の各種無機酸のほか，酢酸，クエン酸等の
各種有機酸も利用できる。そして、前記水，有機溶剤ま
たはこれらの混合溶剤に各種酸を含有させる態様として
は、前記各種酸自体のほか各種酸の水溶液を前記各種溶
剤に混合することにより達成できる。Cultured cells of lavender plants (lavender cultured cells)
Solvents used to extract ultraviolet absorbing substances from water include lower alcohols, aliphatic ethers, ketones,
Various organic solvents such as lower halogen alkanes can be used. Particularly, the extraction solvent is preferably a hydrophilic organic solvent. Further, a mixture of two or more organic solvents can be used in addition to the various organic solvents described above. Further, a mixed solution of the above various organic solvents and water can also be used. That is, as a hydrophilic organic solvent which can be arbitrarily dissolved in water, a mixed solution with water, for example, an aqueous ethanol solution having an arbitrary mixing ratio can be used. Further, an acidic solvent obtained by adding a small amount of various acids to water or an organic solvent or a mixed solvent thereof so as to exhibit acidity, such as a 1% aqueous hydrochloric acid solution or a 1% ethanolic hydrochloric acid solution, may be used as a solvent for extraction. it can. The acids available here are hydrochloric acid,
In addition to various inorganic acids such as carbonic acid and sulfuric acid, various organic acids such as acetic acid and citric acid can be used. The embodiment in which the water, the organic solvent, or the mixed solvent thereof contains various acids can be achieved by mixing the various acids with an aqueous solution of various acids in addition to the various acids themselves.

前記有機溶剤の好適な例としては、たとえば低級アル
コール類ではメタノール，エタノール,n−プロパノー
ル,n−ブタノール等が、脂肪族エーテル類ではジエチル
エーテル，メチルエチルエーテル等が、ケトン類ではア
セトン，メチルエチルケトン等が、低級ハロゲンアルカ
ン類ではクロロホルム，ジクロルエタン等がそれぞれ利
用できる。なお、抽出用に利用できる有機溶剤は、前記
例示溶剤に限定されないのは勿論である。また、抽出に
使用される溶剤の量は、特に限定されることなく適宜選
択決定されるが、通常抽出原料の等倍量ないし数十倍
量，好ましくは数倍量ないし30倍量が利用される。Preferable examples of the organic solvent include lower alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol and n-butanol, aliphatic ethers such as diethyl ether and methyl ethyl ether, and ketones such as acetone and methyl ethyl ketone. However, for lower halogen alkanes, chloroform, dichloroethane and the like can be used, respectively. Note that the organic solvent that can be used for extraction is not limited to the above-described solvents. In addition, the amount of the solvent used for the extraction is appropriately selected and determined without any particular limitation. Usually, the same amount to several tens times, preferably several times to 30 times the amount of the extraction raw material is used. You.

この発明にかかる紫外線吸収物質は、前記ラベンダー
培養細胞から前記有機溶剤，有機溶剤と水との混合物ま
たは酸性溶剤による抽出工程を経て得られる。この紫外
線吸収物質の抽出用原料には、組織培養により得られた
そのままの前記ラベンダー培養細胞の生物体のほか当該
生物体を一旦乾燥させて得られるラベンダー培養細胞の
乾燥体が利用できる。前記抽出用原料が生物体の場合と
乾燥体の場合とで紫外線吸収物質の紫外線吸収特性にお
いて若干の差異が認められる。生体原料から得られた紫
外線吸収物質には、330nmの極大吸収および280〜320nm
のショルダーピークが認められる。（第１図参照）一
方、乾燥原料から得られた紫外線吸収物質には、300〜3
20nmにショルダーピークおよび278nm付近の極大吸収が
認められる。（第２図参照）抽出用原料が生物体または
乾燥体のいずれの場合にも280〜330nmに優れた吸収効果
を有し，サンバーンを引き起こすとされるUV−Ｂ領域の
紫外線とサンタンを引き起こすとされるUV−Ａ領域の紫
外線の両者を有効に吸収できるものである。The ultraviolet absorbing substance according to the present invention is obtained from the lavender cultured cells through an extraction step using the organic solvent, a mixture of the organic solvent and water, or an acidic solvent. As the raw material for extracting the ultraviolet absorbing substance, not only a living organism of the lavender cultured cell as it is obtained by tissue culture but also a dried lavender cultured cell obtained by once drying the organism. There is a slight difference in the ultraviolet absorbing properties of the ultraviolet absorbing substance between the case where the raw material for extraction is a living body and the case where the raw material is a dried body. Ultraviolet absorbing materials obtained from biological materials have a maximum absorption of 330 nm and 280-320 nm
Is observed. (See Fig. 1) On the other hand, the ultraviolet absorbing material obtained from
A shoulder peak at 20 nm and a maximum absorption near 278 nm are observed. (See Fig. 2) When the raw material for extraction has an excellent absorption effect at 280-330nm, whether it is a living organism or a dried product, it causes ultraviolet rays and suntan in the UV-B region, which is considered to cause sunburn. It can effectively absorb both ultraviolet rays in the UV-A region.

そして、この発明にかかる紫外線吸収物質は、その具
体的応用に際して、前記抽出工程で得た抽出液を、必要
に応じて酸性度を調整し，溶剤を留去し，または溶剤を
留去した後適切な溶剤等に再度溶解するなどの処理をし
て利用される。The ultraviolet absorbing substance according to the present invention is obtained by, after the solvent is distilled off or after the solvent is distilled off, in the specific application, the extract obtained in the extracting step is adjusted for the acidity as required. It is used after being treated again by dissolving it in an appropriate solvent or the like.

ところで、ラベンダー細胞増殖工程において、前記カ
ルス増殖用基準培地中に各種アミノ酸を0.5mM（Ｍ＝mol
/）以上添加したアミノ酸添加培地を用いて培養した
場合、この発明にかかる紫外線吸収物質は、そのラベン
ダー培養細胞の単位生重量当たりに対する生産性が増加
（無添加に対して108％ないし1080％に増加）すること
が判明した。（第３図参照）前記カルス増殖用基準培地
中に添加される前記各種アミノ酸としては、例えばアラ
ニン，バリン，ロイシン，イソロイシン，プロリン，メ
チオニン，フェニルアラニン，トリプトファン，グリシ
ン，セリン，トレオニン，システイン，チロシン，アス
パラギン，グルタミン，アスパラギン酸，グルタミン
酸，リジン，アルギニン，ヒスチジン，エチオニン，シ
トルリン，ヒドロキシプロリン，クレアチンなどが単独
または複数組み合わせて利用できる。なお、添加できな
いアミノ酸は前記例示に限定されないのは勿論であり、
比較的分子量の小さいペプチドも利用できる。さらにま
た、アミノ酸添加培地でカルス増殖した場合の前記紫外
線吸収物質の生産性の向上という顕著な効果は、前記カ
ルス増殖用基準培地中に元来含まれるアミノ酸の種類，
含有量にかかわらず認められる。つまり、前記例示にか
かるカルス増殖用基準培地を例としていえば、元来当該
基準培地中にアミノ酸を含有しないＨ培地,G培地,LS培
地などの場合でも、また少量（0.02mM〜0.04mM前後）の
アミノ酸を含有するMS培地,W培地,N培地などの場合で
も、さらには，ある程度の量（1.0mM〜2.2mM程度または
それ以上）で且つ１種類または複数種類のアミノ酸を含
有するＴ培地,BW培地などの場合でもいずれもラベンダ
ー培養細胞単位生重量当たりの紫外線吸収物質の生産性
の向上効果が認められる。By the way, in the lavender cell growth step, 0.5 mM (M = mol)
/) When cultured using the amino acid-supplemented medium added above, the ultraviolet absorbing substance according to the present invention increases its productivity per unit fresh weight of lavender cultured cells (from 108% to 1080% relative to no addition). Increased). (See FIG. 3) Examples of the various amino acids added to the callus growth reference medium include alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, methionine, phenylalanine, tryptophan, glycine, serine, threonine, cysteine, tyrosine, and the like. Asparagine, glutamine, aspartic acid, glutamic acid, lysine, arginine, histidine, ethionine, citrulline, hydroxyproline, creatine and the like can be used alone or in combination. The amino acids that cannot be added are, of course, not limited to the above examples,
Peptides of relatively low molecular weight can also be used. Furthermore, the remarkable effect of improving the productivity of the ultraviolet absorbing substance when the callus grows in the amino acid-supplemented medium is based on the types of amino acids originally contained in the callus growth reference medium,
Recognized regardless of content. That is, taking the callus growth reference medium according to the above example as an example, even in the case of an H medium, a G medium, and an LS medium that do not originally contain an amino acid in the reference medium, a small amount (about 0.02 mM to 0.04 mM) is used. ), T medium containing one or more amino acids in a certain amount (about 1.0 mM to 2.2 mM or more) even in the case of MS medium, W medium, N medium, etc. Also, in the case of BW medium, etc., the effect of improving the productivity of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells is observed.

なお、第３表は、前記増殖用基準培地としてMS培地
（培地組成中、グリシンを0.026mM含有）を用い、当該
増殖用基準培地に前記各種アミノ酸を添加したアミノ酸
添加培地を用いてラベンダー培養細胞を培養し，採集し
た場合、各種アミノ酸がラベンダー培養細胞単位生重量
当たりの紫外線吸収物質の生産性（Ａ）（330nmにおけ
る比吸光度による含量）に及ぼす影響例の比較表であ
る。Table 3 shows that a lavender cultured cell was prepared by using an MS medium (0.026 mM glycine in the medium composition) as the reference medium for proliferation, and using an amino acid-supplemented medium obtained by adding the various amino acids to the reference medium for proliferation. Is a comparison table of examples of the effects of various amino acids on the productivity (A) (content based on specific absorbance at 330 nm) of an ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells when cultivation and collection were performed.

さらにまた、ラベンダー属植物のカルスの増殖培養に
用いる前記カルス増殖用基準培地の組成中、無機塩態窒
素たとえばアンモニア態窒素と硝酸態窒素との相対比率
および前記アンモニア態窒素と硝酸態窒素との総和窒素
量とをそれぞれ変化させた改変培地中でラベンダー培養
細胞を培養した結果、アンモニア態窒素と硝酸態窒素と
の相対比率に関係なく無機塩態の総和窒素量が40mM以下
の場合、ラベンダー培養細胞単位生重量当たりの紫外線
吸収物質の生産性（Ａ）の顕著な増加（基準培地組成の
ときを100として，約123ないし2089の増加）が認められ
た。（第６表参照） ＜作用＞ この発明にかかる紫外線吸収物質は、ラベンダー培養
細胞から有機溶剤有機溶剤と水との混合物または酸性溶
剤で抽出され、約280〜330nmに優れた紫外線吸収特性を
有し、サンバーンを引き起こすとされるUV−Ｂおよびサ
ンタンを引き起こすとされるUV−Ａの両者を有効に吸収
するという優れた紫外線吸収作用を有する。Furthermore, in the composition of the callus growth reference medium used for callus growth culture of lavender plants, the relative ratio of inorganic salt nitrogen such as ammonium nitrogen and nitrate nitrogen and the relative ratio of the ammonium nitrogen and nitrate nitrogen As a result of cultivating lavender cultured cells in a modified medium in which the total nitrogen content was changed, if the total nitrogen content of inorganic salts was 40 mM or less regardless of the relative ratio of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen, lavender culture was performed. A remarkable increase in the productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of cells (an increase of about 123 to 2089 with respect to the reference medium composition as 100) was observed. (See Table 6) <Action> The ultraviolet absorbing material according to the present invention is extracted from lavender cultured cells with a mixture of an organic solvent and an organic solvent or water or an acidic solvent, and has excellent ultraviolet absorbing properties at about 280 to 330 nm. In addition, it has an excellent ultraviolet absorbing effect of effectively absorbing both UV-B which causes sunburn and UV-A which causes suntan.

また、この発明は、ラベンダー属植物の組織を組織培
養により増殖したラベンダー培養細胞を原料とするか
ら、この発明にかかる紫外線吸収物質は，従来の合成品
にかかる紫外線吸収物質等のような安全面での問題はな
く、しかもラベンダー属植物の栽培上の問題もなく一定
品質のものが安定して得られる。In addition, since the present invention uses a lavender cultured cell obtained by growing a tissue of a lavender plant by tissue culture as a raw material, the ultraviolet absorbing substance according to the present invention is safer than the conventional ultraviolet absorbing substance of a synthetic product. In addition, there is no problem in cultivation of lavender plants, and a product of constant quality can be stably obtained.

さらには、この発明は、ラベンダー培養細胞の培養工
程において、培地中に添加した各種アミノ酸の紫外線吸
収物質の生産性向上作用に基づき、または培地組成中の
無機塩態総和窒素量による紫外線吸収物質の生産性向上
作用に基づき紫外線吸収物質の効率の良い生産を実現で
きる。Furthermore, the present invention provides, in the cultivation step of lavender cultured cells, a UV-absorbing substance based on the activity of improving the productivity of the UV-absorbing substance of various amino acids added to the medium, or by the total amount of inorganic salts in the medium composition. Efficient production of the ultraviolet absorbing material can be realized based on the productivity improving action.

＜実施例＞ （１） ラベンダー培養細胞の調製 ラベンダーカルスの誘導 MS培地にオーキシンとして2,4−Ｄを2.0ppm,サイトカ
イニンとしてカイネチンを1.0ppm,さらに寒天10g/を
添加した寒天培地（ａ）を常法により調製する。<Examples> (1) Preparation of cultured lavender cells Induction of lavender callus An agar medium (a) supplemented with 2.0 ppm of 2,4-D as auxin, 1.0 ppm of kinetin as cytokinin, and 10 g / agar of agar was added to an MS medium. Prepare by the usual method.

つぎに、ラベンダー（Lavendula vera）の種子を８
％サラシ粉濾液で殺菌した後、無菌的に発芽させて生じ
た幼植物を適当な大きさに無菌的に切断し、これを前記
寒天MS培地（ａ）上に置床し、25℃，暗所下に静置す
る。約30日後に前記幼植物の切断面から白色のカルスが
生じる。このカルスを前記寒天培地（ａ）に移植し、継
代培養を数回繰り返してカルスの安定化を図り、このカ
ルスを以後のラベンダー細胞の組織培養の供試ラベンダ
ーカルスとして使用する。Next, 8 seeds of lavender (Lavendula vera)
After sterilization with a filtrate of asparagus powder, the seedlings produced by aseptically germinating were aseptically cut to an appropriate size, placed on the agar MS medium (a), and placed at 25 ° C. in a dark place. Let it rest below. After about 30 days, a white callus forms from the cut surface of the young plant. The callus is transplanted to the agar medium (a), and the subculture is repeated several times to stabilize the callus. The callus is used as a test lavender callus for tissue culture of lavender cells thereafter.

なお、前記MS培地のほかLS培地,W培地,G培地,H培地,N
培地を使用した場合にも同様にラベンダーカルスの誘導
ができる。In addition to the MS medium, LS medium, W medium, G medium, H medium, N medium
Lavender calli can be induced similarly when a medium is used.

基準培地を使用したラベンダー細胞増殖工程の実施
例 ラベンダー培養細胞の増殖用基準培地としMS培地（液
体）を用い、これにオーキシンとして2,4−Ｄを1.0ppm,
サイトカイニンとしてカイネチンを0.5ppmを添加して調
製したMS液体培地（ｂ）を使用する。Example of Lavender Cell Proliferation Step Using Reference Medium An MS medium (liquid) was used as a reference medium for growing lavender cultured cells, and 1.0 ppm of 2,4-D as auxin was added thereto.
An MS liquid medium (b) prepared by adding 0.5 ppm of kinetin as cytokinin is used.

200mlの三角フラスコに前記MS液体培地（ｂ）を約60m
lずつ分注し、これに前記記載のラベンダーの幼植物
から誘導した前記供試ラベンダーカルスを生重量で約1g
ずつ接種し、暗所下,25℃，振幅7cm,回転数100rpmの条
件で約７日間（指数増殖期の後期または定常期の初期に
相当する期間）振盪培養する。ラベンダー培養細胞は濾
集し、生物体そのまま又は乾燥体にして紫外線吸収物質
の抽出に供する。In a 200 ml Erlenmeyer flask, the MS liquid medium (b) is
1 l each, the test lavender callus derived from the lavender seedlings described above is about 1 g fresh weight
The cells are inoculated in a dark place at 25 ° C., an amplitude of 7 cm, and a rotation speed of 100 rpm for about 7 days (a period corresponding to the late exponential growth phase or the early phase of the stationary phase) with shaking culture. The cultured lavender cells are collected by filtration and used as a living body or as a dried body for extraction of an ultraviolet absorbing substance.

なお、前記MS培地のほかLS培地,W培地,G培地,H培地,N
培地,T培地,BW培地を使用した場合にも同様にラベンダ
ー培養細胞の増殖ができる。In addition to the MS medium, LS medium, W medium, G medium, H medium, N medium
When a medium, a T medium, and a BW medium are used, lavender cultured cells can be similarly proliferated.

ラベンダーのカルス誘導およびラベンダーカルスの
増殖に適した植物生長調節物質の検索試験例 前記ラベンダーのカルス誘導およびラベンダーカルス
の増殖に適した植物生長調節物質を検索するために,MS
培地を基準培地とし、オーキシンとして2,4−D,インド
ール酪酸（IBA），ナフタレン酢酸（NAA），インドール
酢酸（IAA），さらに無添加の５種類、サイトカイニン
としてカイネチン，ゼアチン，ベンジルアデニン，さら
に無添加の４種類の合計20種類の組合せ設定した培地を
用い、培養条件は前記カルス誘導工程および前記ラベン
ダー細胞増殖工程のとおりとして、カルス誘導およびカ
ルスの増殖について試験する。その結果を第１表に示
す。これらの結果より、植物生長調節物質としては前記
４種類のオーキシンおよび３種類のサイトカイニンはラ
ベンダーカルスの誘導および増殖に有効であることが判
明する。Example of search test for plant growth regulators suitable for lavender callus induction and lavender callus growth.To search for plant growth regulators suitable for lavender callus induction and lavender callus growth, MS
Using the medium as a reference medium, auxin is 2,4-D, indolebutyric acid (IBA), naphthalene acetic acid (NAA), indole acetic acid (IAA), and five kinds without addition, and kinetin, zeatin, benzyl adenine, and no cysteine as cytokinins. Using the medium in which four kinds of additions are set in total of 20 kinds, the culture conditions are the same as the callus induction step and the lavender cell growth step, and the callus induction and callus growth are tested. Table 1 shows the results. These results indicate that the four auxins and the three cytokinins are effective in inducing and growing lavender callus as plant growth regulators.

そして、第１表は、カルス誘導には少なくとも１つの
植物生長調節物質が必要であること，およびラベンダー
カルスの増殖には植物生長調節物質が必ずしも必要では
ないことを示唆している。Table 1 also suggests that callus induction requires at least one plant growth regulator and that lavender callus growth does not necessarily require a plant growth regulator.

（２） ラベンダー培養細胞からの紫外線吸収物質の抽
出用溶剤の検索試験例 ラベンダー培養細胞からの紫外線吸収物質の抽出にあ
たり、ラベンダー培養細胞の生重量に対して約10倍量の
抽出用溶剤〔有機溶剤，有機溶剤と水との混合物（適当
な混合率），または酸性溶剤（以下同じ）〕で抽出す
る。またラベンダー培養細胞の乾燥重量に対して約50倍
量の抽出用溶剤を用いて抽出する。この実施例では、抽
出原料として基準培地（MS培地）で増殖培養したラベン
ダー培養細胞（生物体原料および乾燥体原料）を使用
し、抽出用溶剤の具体例として、低級アルコールにはメ
タノール，エタノールを、脂肪族エーテル類にはジエチ
ルエーテルを、ケトン類にはアセトンを、低級ハロゲン
アルカン類にはクロロホルムを、さらには有機溶剤と水
との混合物には50％エタノール水溶液を、酸性溶剤には
１％塩酸エタノール溶液,1％塩酸水溶液を、それぞれ用
いて抽出する。このときの、紫外線吸収物質の収量（原
料各単位重量当たりの吸収度値）は第２表に示す通りで
ある。第２表より抽出用溶剤には親水性の有機溶剤が有
効であることがわかる。 (2) Example of search test for solvent for extracting UV-absorbing substance from lavender cultured cells In extracting UV-absorbing substance from lavender cultured cells, about 10 times the amount of extraction solvent [organic Solvent, a mixture of an organic solvent and water (appropriate mixing ratio), or an acidic solvent (the same applies hereinafter)]. Extraction is performed using an extraction solvent about 50 times the dry weight of the lavender cultured cells. In this example, lavender cultured cells (raw material and dried material) grown and cultured in a reference medium (MS medium) are used as extraction materials, and methanol and ethanol are used as lower alcohols as specific examples of the extraction solvent. , Diethyl ether for aliphatic ethers, acetone for ketones, chloroform for lower halogen alkanes, 50% aqueous ethanol for a mixture of organic solvent and water, 1% for acidic solvent. Extract with a hydrochloric acid ethanol solution and a 1% hydrochloric acid aqueous solution, respectively. At this time, the yield of the ultraviolet absorbing material (absorbance value per unit weight of each raw material) is as shown in Table 2. Table 2 shows that a hydrophilic organic solvent is effective as the extraction solvent.

（３） ラベンダー培養細胞から抽出された紫外線吸収
物質の特性 第１図および第２図は、ラベンダー培養細胞からエタ
ノールで抽出された紫外線吸収物質の紫外線吸収特性を
示している。前記第１図は、ラベンダー培養細胞を乾燥
処理しない生のままの生物体原料から抽出された紫外線
吸収物質の紫外線吸収スペクトルを示す図であり、330n
mの極大吸収および280〜320nmのショルダーピークが認
められる。第２図は、ラベンダー培養細胞を一旦乾燥さ
せて乾燥原料からエタノールで抽出された紫外線吸収物
質の紫外線吸収スペクトルを示す図であり、300〜320nm
にショルダーピークおよび278nm付近に極大吸収が認め
られる。この各種抽出溶剤により抽出された各紫外線吸
収物質の紫外線吸収特性は、抽出溶剤の差異によっても
変化することなく、抽出溶剤がエタノール以外の有機溶
剤であっても同様の紫外線吸収特性を有する結果が認め
られる。さらに、この発明にかかる紫外線吸収物質の前
記紫外線吸収特性に関しては、ラベンダーカルスの培養
培地の差異によってもその変化は認められない。 (3) Characteristics of Ultraviolet Absorbing Substance Extracted from Lavender Cultured Cells FIGS. 1 and 2 show the ultraviolet absorbing properties of an ultraviolet absorbing substance extracted from lavender cultured cells with ethanol. FIG. 1 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of an ultraviolet absorbing substance extracted from raw living organism raw materials which have not been subjected to a drying treatment of lavender cultured cells.
A maximum absorption at m and a shoulder peak at 280-320 nm are observed. FIG. 2 is a diagram showing an ultraviolet absorption spectrum of an ultraviolet absorbing substance extracted from a dried raw material with ethanol by once drying a lavender cultured cell, and showing 300 to 320 nm.
And a maximum absorption is observed at around 278 nm. The ultraviolet absorption characteristics of the respective ultraviolet absorbing substances extracted by the various extraction solvents do not change due to the difference of the extraction solvents, and even if the extraction solvent is an organic solvent other than ethanol, the results have the same ultraviolet absorption characteristics. Is recognized. Further, regarding the ultraviolet absorbing properties of the ultraviolet absorbing substance according to the present invention, the change is not recognized by the difference in the culture medium of lavender callus.

（４） 基準培地に各種アミノ酸を添加したアミノ酸添
加培地中でラベンダーカルスを増殖培養したときの各種
添加アミノ酸がラベンダー培養細胞単位生重量当たりの
紫外線吸収物質の生産性に対して及ぼす影響に関する検
索試験例 増殖用基準培地としてMS培地（液体培地）を用い，こ
れにオーキシンとして2,4−Ｄを1.0ppm,サイトカイニン
としてカイネチンを0.5ppmを添加したカルス増殖用原培
地（ｃ）を調製する。そして、このカルス増殖用原培地
（ｃ）に各種（24種類）アミノ酸をそれぞれ1.0mM（Ｍ
＝mol/）（効果が発現される最少添加量の約２倍量に
相当する量）ずつの割合で添加した合計24種類のアミノ
酸添加培地（ｄ）中で前記ラベンダーカルスを増殖培養
し、それぞれのラベンダー培養細胞単位生重量当たり
（生重量1g当たり）の紫外線吸収物質の生産性（Ａ）を
330nmの波長における吸光度値により定量測定して求め
て比較する。(4) Retrieval test on the effect of various added amino acids on the productivity of ultraviolet absorbing substances per unit fresh weight of lavender cultured cells when lavender callus is grown and cultured in an amino acid-supplemented medium in which various amino acids are added to a reference medium Example An MS medium (liquid medium) is used as a standard medium for growth, and an original medium for callus growth (c) is prepared by adding 1.0 ppm of 2,4-D as auxin and 0.5 ppm of kinetin as cytokinin. Then, various (24 types) amino acids were added to the callus growth medium (c) at a concentration of 1.0 mM (M
= Mol /) (amount corresponding to about 2 times the minimum addition amount at which the effect is exhibited), and the lavender callus was grown and cultured in a total of 24 types of amino acid-supplemented media (d), each of which was added. The productivity (A) of UV-absorbing substances per lavender cultured cell unit raw weight (per gram of raw weight)
Quantitative measurement based on the absorbance value at a wavelength of 330 nm is obtained and compared.

200mlの三角フラスコに第３表記載の各種アミノ酸を
1.0mMずつの割合で添加した各種アミノ酸添加培地
（ｄ）をそれぞれ60mlずつ分注し、これにラベンダーの
幼植物から誘導された前記ラベンダーカルスを生重量で
約1gずつ接種し、暗所下,25℃，振幅7cm,回転数100rpm,
の条件下で約７日間振盪培養して指数増殖期の末期また
は定常期初期のラベンダー培養細胞を得る。Various amino acids listed in Table 3 were placed in a 200 ml Erlenmeyer flask.
Each amino acid-supplemented medium (d) added at a rate of 1.0 mM was dispensed in 60 ml portions, and the lavender callus derived from lavender seedlings was inoculated in an amount of about 1 g in fresh weight into a dark place. 25 ℃, amplitude 7cm, rotation speed 100rpm,
The cells are cultured with shaking for about 7 days under the conditions described above to obtain lavender cultured cells at the end of the exponential growth phase or at the beginning of the stationary phase.

一方、培養後の各ラベンダー培養細胞の生重量1gを摂
取し、これに１％塩酸エタノール溶液10mlでラベンダー
培養細胞中に含有する紫外線吸収物質を抽出し紫外線吸
収物質の原抽出液を得る。その後、必要に応じて適当量
のエタノールで希釈して330nmにおける吸光度値を測定
後、この吸光度値に前記希釈倍率を乗じて紫外線吸収物
質の原抽出液の吸光度値を算出して当該ラベンダー培養
細胞単位生重量（1g）当たりの紫外線吸収物質の生産性
（Ａ）を測定する。On the other hand, 1 g of the fresh weight of each cultured lavender cell is ingested, and the UV-absorbing substance contained in the lavender cultured cell is extracted with 10 ml of a 1% hydrochloric acid ethanol solution to obtain a raw extract of the UV-absorbing substance. Then, if necessary, after diluting with an appropriate amount of ethanol and measuring the absorbance value at 330 nm, the absorbance value of the original extract of the ultraviolet absorbing substance was calculated by multiplying the absorbance value by the dilution factor, and the lavender cultured cell was used. The productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight (1 g) is measured.

第３表は、ラベンダー培養細胞単位生重量（1g）当た
りの紫外線吸収物質の生産性（Ａ）について、前記24種
類の添加アミノ酸に対して検索した結果を示すものであ
る。この第３表の結果より、各種アミノ酸を増殖用基準
培地に添加（添加量:1.0mM）することにより、ラベンダ
ー培養細胞単位生重量当たりの紫外線吸収物質の生産性
（Ａ）はいずれも増加（約108％ないし1080％に増加）
するのが認められる。Table 3 shows the results of a search for the productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells (1 g) for the above 24 kinds of added amino acids. From the results shown in Table 3, the addition of various amino acids to the growth medium (addition amount: 1.0 mM) increased the productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells (A). About 108% to 1080%)
Is allowed to do so.

第４表は、基準培地にMS培地を用い、各種アミノ酸の
添加量がラベンダー培養細胞単位生重量（1g）当たりの
紫外線吸収物質の生産性（Ａ）に対して及ぼす影響を比
較する検索実施結果例を示す。第４表に示す一実施例で
は、第３表の結果からアミノ酸の添加濃度が1.0mMの濃
度のとき，比較的高い効果を示したフェニルアラニン
と、比較的低い効果しか示さなかったグリシンとを一例
として、それぞれの添加量を0.0mM,0.5mM,1.0mM,1.5mM,
2.0mM,3.0mM,4.0mM,5.0mMの７種類の濃度について検索
した結果例を示すものである。第４表の結果より、各種
アミノ酸の添加量が0.5mM以上であれば、ラベンダー培
養細胞単位生重量当たりの紫外線吸収物質の生産性
（Ａ）が増加することが認められる。Table 4 shows the results of a search comparing the effects of the amounts of various amino acids added on the productivity (A) of ultraviolet absorbing substances per unit fresh weight of lavender cultured cells (1 g) using MS medium as the reference medium. Here is an example. One example shown in Table 4 shows that, when the concentration of amino acid added was 1.0 mM, phenylalanine which showed a relatively high effect and glycine which showed a relatively low effect were shown as an example. As the addition amount of each of 0.0 mM, 0.5 mM, 1.0 mM, 1.5 mM,
It shows an example of a search result for seven concentrations of 2.0 mM, 3.0 mM, 4.0 mM, and 5.0 mM. From the results in Table 4, it can be seen that when the amount of each amino acid added is 0.5 mM or more, the productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells increases.

なお、前記アミノ酸添加培地に用いられる増殖用基準
培地は、前記MS培地のほかLS培地,W培地,G培地,H培地,N
培地,T培地,BW培地等を使用した場合にもMS培地と同様
の傾向が認められる。しかも、各種アミノ酸添加により
紫外線吸収物質の生産性（Ａ）を向上するという顕著な
効果は、増殖用基準培地に元来アミノ酸が含有するが否
かにかかわらず，また前記基準培地自体にたとえアミノ
酸が含有していたとしてもその含有量の多少および含有
アミノ酸の種類および数にかかわらずMS培地の場合と同
様の傾向を示した。The growth reference medium used in the amino acid-added medium is LS medium, W medium, G medium, H medium, N medium in addition to the MS medium.
When a medium, T medium, BW medium, etc. are used, the same tendency as in the MS medium is observed. In addition, the remarkable effect of improving the productivity (A) of the ultraviolet ray absorbing substance by adding various amino acids can be obtained regardless of whether or not the growth reference medium originally contains an amino acid. , The tendency was the same as in the case of the MS medium, regardless of the content and the type and number of amino acids.

（５） カルス増殖用基準培地組成のうち無機塩態窒素
源組成がラベンダー培養細胞単位生重量当たりの紫外線
吸収物質の生産性（Ａ）に及ぼす影響に関する試験例 ラベンダー培養細胞および紫外線吸収物質の生産量
は、培地組成とくに無機塩態窒素源の種類または総量に
影響される傾向があることが判明した。そこで、増殖用
基準培地のアンモニア態窒素と硝酸態窒素との相対的な
モル濃度比率につき数水準、前記アンモニア態窒素と硝
酸態窒素との総和窒素量につき数水準を設定しその他の
成分については基準培地組成および濃度のとおり一定と
し、無機塩態窒素源のみ組成の異なる改変培地を用いて
ラベンダー培養細胞の培養を行う。 (5) Test example of the effect of the inorganic salt nitrogen source composition on the productivity (A) of the ultraviolet absorbent per unit fresh weight of lavender cultured cells in the reference medium composition for callus growth The production of cultured lavender cells and ultraviolet absorbent It was found that the amount tended to be influenced by the medium composition, particularly the type or total amount of the inorganic salt nitrogen source. Therefore, several levels are set for the relative molar concentration ratio of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen in the reference medium for growth, and several levels are set for the total nitrogen amount of the ammonia nitrogen and nitrate nitrogen, and for other components, Lavender cultured cells are cultured using a modified medium having a composition different from that of the inorganic salt nitrogen source only, while keeping the standard medium composition and concentration constant.

この実施例では、基準培地にMS培地を用い、アンモニ
ア態窒素（硝酸アンモニウム）と硝酸態窒素（硝酸アン
モニウムおよび硝酸カリウム）との相対比率につき0.0
0,0.20,0.52,0.80,1.00の各５水準を、前記アンモニア
窒素態と硝酸態窒素との総和窒素量を60mM,40mM,20mM,1
0mM,4.5mM,2.3mMの各６水準を設定し、前記硝酸アンモ
ニウムおよび硝酸カリウムを除く他の成分については基
準培地（MS培地）のとおり一定とする合計30種類の組成
の異なる改変培地を用いて培養試験を行う。この実施例
で用いた前記30種類の培地の窒素成分を構成する硝酸ア
ンモウムおよび硝酸カリウムの各組成・濃度を第５表に
示す。第５表中、上段の数字は培地を構成する硝酸アン
モニウム（NH₄NO₃）成分の濃度（mg/）を、下段の数
字は硝酸カリウム（KNO₃）成分の濃度（mg/）をそれ
ぞれ示す。In this example, an MS medium was used as a reference medium, and the relative ratio between ammonia nitrogen (ammonium nitrate) and nitrate nitrogen (ammonium nitrate and potassium nitrate) was 0.0
Each of the five levels of 0, 0.20, 0.52, 0.80, 1.00 was adjusted to a total nitrogen amount of the ammonia nitrogen state and the nitrate nitrogen of 60 mM, 40 mM, 20 mM, 1
Cultivation is performed using a total of 30 different modified media having a total composition of 0 mM, 4.5 mM, and 2.3 mM, and the other components except for the ammonium nitrate and potassium nitrate are fixed as in the reference medium (MS medium). Perform the test. Table 5 shows the composition and concentration of ammonium nitrate and potassium nitrate constituting the nitrogen component of the 30 types of culture media used in this example. In Table 5, the upper numbers indicate the concentration (mg /) of the ammonium nitrate (NH ₄ NO ₃ ) component constituting the medium, and the lower numbers indicate the concentration (mg /) of the potassium nitrate (KNO ₃ ) component.

第５表に示す合計30種類のMS改変培地（液体培地）に
2,4−Ｄを1.0ppm,カイネチンを0.5ppm添加した液体培地
を窒素組成改変検索試験用培地（ｅ）（以下「検索用試
験培地（ｅ）」という）として使用する。For a total of 30 types of MS modified media (liquid media) shown in Table 5,
A liquid medium supplemented with 1.0 ppm of 2,4-D and 0.5 ppm of kinetin is used as a medium (e) for a nitrogen composition modification search test (hereinafter, referred to as a "test medium for search (e)").

200ml三角フラスコに前記各検索用試験培地（ｅ）を6
0mlずつ分注し、これにラベンダーの幼植物から誘導し
た前記ラベンダーカルスを生重量で約1gずつ接種し、暗
所下,25℃，振幅7cm,回転数100rpmの条件で７日間（指
数増殖期の後期または定常期の初期に相当する期間）振
盪培養する。In a 200 ml Erlenmeyer flask, add the above-mentioned test medium (e)
The lavender callus derived from lavender seedlings was inoculated in an amount of about 1 g each in fresh weight, and inoculated in a dark place at 25 ° C., at an amplitude of 7 cm, and at a rotation speed of 100 rpm for 7 days (exponential growth phase). Shaking culture).

培養後、ラベンダー培養細胞は濾集し、培養後の生重
量を測定する。そして、紫外線吸収物質の生産性（Ａ）
は、ラベンダー培養細胞の単位生重量（1g）から１％塩
酸エタノール溶液で抽出した紫外線吸収物質の原抽出液
を必要に応じて希釈して330nmにおける吸光度値を測定
した後、当該吸光度値に希釈倍率を乗じて原抽出液の吸
光度値を算出して求める。After the culture, the cultured lavender cells are collected by filtration, and the fresh weight after the culture is measured. And the productivity of the UV absorbing substance (A)
Diluted the original extract of the ultraviolet absorbing substance extracted with 1% hydrochloric acid ethanol solution from the unit fresh weight of lavender cultured cells (1 g) as necessary, measured the absorbance value at 330 nm, and then diluted to the absorbance value By multiplying by a magnification, the absorbance value of the original extract is calculated and determined.

第６表は、合計30種類の前記MS改変培地について、ラ
ベンダー培養細胞の単位生重量当たりの紫外線吸収物質
の生産性（Ａ）を示す比較表である。Table 6 is a comparison table showing the productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of the lavender cultured cells for a total of 30 kinds of the MS modified media.

第６表の結果から明らかなように、ラベンダー培養細
胞単位生重量当たりの紫外線吸収物質の生産性（Ａ）
は、アンモニア態窒素と硝酸態窒素との相対比率に関係
なく，アンモニア態窒素と硝酸態窒素との総和窒素量が
40mM以下の場合には基準MS培地の123％以上の高収率を
あげることが示唆されている。 As is clear from the results in Table 6, the productivity of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of the cultured lavender cells (A)
Means that the total nitrogen content of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen is independent of the relative ratio of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen.
It is suggested that when the concentration is 40 mM or less, a high yield of 123% or more of the reference MS medium is obtained.

なお、前記カルス増殖用基準培地の無機塩態総和窒素
量を減少させることによりラベンダー培養細胞単位生重
量当たりの紫外線吸収物質の生産性（Ａ）が増加される
という傾向は、前記MS培地のほか、LS培地,G培地,N培
地,T培地,BW培地等を基準培地とした場合においても同
様に認められる。また、基準培地の各組成中，無機塩態
総和窒素量が比較的少ないＷ培地,H培地等にあっても、
基準培地組成よりも無機塩態総和窒素量を減少させるこ
とにより、ラベンダー培養細胞単位生重量当たりの紫外
線吸収物質の生産性（Ａ）が増加される傾向が同様に認
められる。In addition, the tendency that the productivity (A) of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells is increased by reducing the total amount of inorganic salt nitrogen in the reference medium for callus growth, The same is true when LS medium, G medium, N medium, T medium, BW medium or the like is used as a reference medium. In addition, in each composition of the reference medium, even in a W medium, an H medium, etc., which have a relatively small amount of total inorganic salt nitrogen,
The tendency that the productivity (A) of the ultraviolet ray absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells is increased by decreasing the inorganic salt total nitrogen amount from the reference medium composition is also recognized.

＜発明の効果＞ この発明は、ラベンダー属植物組織の組織培養により
得られるラベンダー培養細胞から紫外線吸収物質を生産
する方法を確立し、さらには，ラベンダー培養細胞の培
養に際して，その増殖用基準培地に各種アミノ酸を添加
したアミノ酸添加培地中で培養することにより，ラベン
ダー培養細胞単位生重量当たりの前記紫外線吸収物質の
生産性の108〜1080％増加を（第３表参照）、また前記
増殖用基準培地の無機塩態総和窒素量を40mM以下とした
改変培地中で培養することにより，ラベンダー培養細胞
単位生重量当たりの紫外線吸収物質の生産性の123〜208
9％増加を（第６参照）それぞれ実現した。<Effects of the Invention> The present invention establishes a method for producing an ultraviolet absorbing substance from lavender cultured cells obtained by tissue culture of lavender plant tissue, and furthermore, when cultivating the lavender cultured cells, using a standard medium for growth thereof. By culturing in an amino acid-supplemented medium supplemented with various amino acids, the productivity of the ultraviolet absorbing substance per unit fresh weight of lavender cultured cells can be increased by 108 to 1080% (see Table 3). Cultivation in a modified medium in which the total amount of inorganic nitrogen in the inorganic salt of the lavender was 40 mM or less resulted in a productivity of 123 to 208 UV-absorbing substances per unit fresh weight of lavender cultured cells.
9% increase (see 6) was realized respectively.

したがって、この発明にかかる紫外線吸収物質は、ラ
ベンダー培養細胞から抽出されて得られ、且つ280〜330
nmに優れた紫外線吸収特性を有し，サンバーンを引き起
こすとされるUV−Ｂおよびサンタンを引き起こすとされ
るUV−Ａの両方を有効に吸収するという，従来のハーブ
エキスには認められない傑出した紫外線吸収特性を有し
ているので、安全でしかもサンケア化粧料および医薬品
に好適な紫外線吸収物質であって，ラベンダー属植物の
栽培上の問題もなくまた栽培条件による品質の変動がな
く一定の品質を有する紫外線吸収物質を常に安定供給で
きる等、発明目的を達成する顕著な効果を奏する。Therefore, the ultraviolet-absorbing substance according to the present invention is obtained by being extracted from lavender cultured cells, and 280 to 330
It has excellent UV absorption properties at nm and effectively absorbs both UV-B, which causes sunburn, and UV-A, which causes suntan, an outstanding feature not found in conventional herbal extracts. It is a UV-absorbing substance that is safe and suitable for sun care cosmetics and pharmaceuticals because of its UV-absorbing properties. Thus, the present invention has a remarkable effect of achieving the object of the present invention, such as being able to constantly supply an ultraviolet absorbing substance having the following.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

第１図はラベンダー培養細胞の生物体から抽出される紫
外線吸収物質の紫外線吸収スペクトルを示す図、第２図
はラベンダー培養細胞の乾燥体から抽出される紫外線吸
収物質の紫外線吸収スペクトルを示す図である。FIG. 1 is a view showing an ultraviolet absorption spectrum of an ultraviolet absorbing substance extracted from a living body of cultured lavender cells, and FIG. 2 is a view showing an ultraviolet absorption spectrum of an ultraviolet absorbing substance extracted from a dried body of cultured lavender cells. is there.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ１２Ｒ 1:91） ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁶ Identification code Agency reference number FI Technical display location C12R 1:91)

Claims (1)

(57)【特許請求の範囲】(57) [Claims] 【請求項１】ラベンダー属植物の組織から誘導したカル
スを、カルス増殖用基準培地若しくは当該カルス増殖用
基準培地にアミノ酸を添加したアミノ酸添加培地または
当該カルス増殖用基準培地の無機塩態総和窒素量を40mM
以下とした改変培地を用いて組織培養してラベンダー培
養細胞を得るラベンダー細胞増殖工程と、 前記ラベンダー培養細胞から有機溶剤，有機溶剤と水と
の混合液または酸性溶剤を用いて紫外線吸収物質を抽出
する紫外線吸収物質抽出工程とからなるラベンダー属植
物細胞の組織培養による紫外線吸収物質の生産方法。Claims 1. A callus derived from a tissue of a lavender genus plant, a callus growth reference medium, an amino acid-added medium obtained by adding an amino acid to the callus growth reference medium, or the inorganic salt total nitrogen content of the callus growth reference medium. 40mM
A lavender cell growth step of obtaining lavender cultured cells by tissue culture using a modified medium described below, and extracting an ultraviolet absorbing substance from the lavender cultured cells with an organic solvent, a mixed solution of an organic solvent and water or an acidic solvent. A method for producing an ultraviolet absorbing substance by tissue culture of lavender plant cells, comprising the step of extracting an ultraviolet absorbing substance.