JP2582327B2 - 哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易除去法 - Google Patents
哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易除去法Info
- Publication number
- JP2582327B2 JP2582327B2 JP31402992A JP31402992A JP2582327B2 JP 2582327 B2 JP2582327 B2 JP 2582327B2 JP 31402992 A JP31402992 A JP 31402992A JP 31402992 A JP31402992 A JP 31402992A JP 2582327 B2 JP2582327 B2 JP 2582327B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- layer
- straw
- liquid layer
- air
- liquid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、凍結胚の移植に際し
て、融解後、直接移植できるようにした哺乳動物胚の凍
結保護物質の簡易除去法に関するものである。
て、融解後、直接移植できるようにした哺乳動物胚の凍
結保護物質の簡易除去法に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】胚の凍結保存時には、従来より凍結保護
物質（グリセリン等）が添加されており、融解移植時に
は、この凍結保護物質を除去して移植する方法がとられ
ている。この保護物質除去には、浸透圧の関係等により
段階的に希釈する方法が一般的に行われている。
物質（グリセリン等）が添加されており、融解移植時に
は、この凍結保護物質を除去して移植する方法がとられ
ている。この保護物質除去には、浸透圧の関係等により
段階的に希釈する方法が一般的に行われている。
【０００３】また一方、細胞外保護物質であるシューク
ロースを用いて１ステップ（ストロ一内）で、保護物質
を除去する方法も行われている。その結果、凍結、融解
胚からの保護物質除去は、著しく簡単になり、融解後に
直接胚を子宮内に移植することが可能となった。
ロースを用いて１ステップ（ストロ一内）で、保護物質
を除去する方法も行われている。その結果、凍結、融解
胚からの保護物質除去は、著しく簡単になり、融解後に
直接胚を子宮内に移植することが可能となった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、上記の
１ステップ法では、 融解後、ストローを指ではじいて（振って）空気層
を除去し、グリセリン層とシュークロース層を混合させ
るという人為的作業が必要である。 上記での作業において、ストロ一内での空気層の
上昇に伴って、時として胚がー緒に上部についていくこ
とがあり、手技の違いによって個人差が出現しやすい。 上記の予防策として、肉眼または拡大鏡によりス
トロ一内の胚の確認作業を行っているところもある。 などの問題点が存在し、これらの問題点のすべてを解決
できる方法は、現在のところまだ開発されていない。
１ステップ法では、 融解後、ストローを指ではじいて（振って）空気層
を除去し、グリセリン層とシュークロース層を混合させ
るという人為的作業が必要である。 上記での作業において、ストロ一内での空気層の
上昇に伴って、時として胚がー緒に上部についていくこ
とがあり、手技の違いによって個人差が出現しやすい。 上記の予防策として、肉眼または拡大鏡によりス
トロ一内の胚の確認作業を行っているところもある。 などの問題点が存在し、これらの問題点のすべてを解決
できる方法は、現在のところまだ開発されていない。
【０００５】本発明は、上記の各問題点を解決するため
の方策で、凍結処理時に胚を含む凍結保護物質液（グリ
セリン）層と希釈液（シュークロース）層の間の空気層
を除去するようにした哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易
除去法を提供することを目的とする。
の方策で、凍結処理時に胚を含む凍結保護物質液（グリ
セリン）層と希釈液（シュークロース）層の間の空気層
を除去するようにした哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易
除去法を提供することを目的とする。
【０００６】
【課題を解決するための手段】上記の目的を達成するた
めに本発明は、保管容器であるストロー内に、シール側
から順に、希釈液、除去用空気層、胚の入った凍結保護
物質液層、空気層、保存液層、空気層、保存液層を充填
して綿栓を施し、これを凍結する過程で、まずストロー
を横置きのままで植氷作業を行い、ついでストロー内の
全液層を凍結した後、綿栓部を下にしてストローを立
て、希釈液層のみを空気中に出して融解し、アルコール
バス内から外に取り出さずに、除去用空気層を指ではじ
いて気泡としてストローの先端部に移動させ、胚の入っ
た凍結保護物質液層と希釈液層の間の空気層を人為的に
除去してのち凍結保存するようにし、融解後における凍
結保護物質の人為的除去作業を省略するようにしたこと
を特徴としている。
めに本発明は、保管容器であるストロー内に、シール側
から順に、希釈液、除去用空気層、胚の入った凍結保護
物質液層、空気層、保存液層、空気層、保存液層を充填
して綿栓を施し、これを凍結する過程で、まずストロー
を横置きのままで植氷作業を行い、ついでストロー内の
全液層を凍結した後、綿栓部を下にしてストローを立
て、希釈液層のみを空気中に出して融解し、アルコール
バス内から外に取り出さずに、除去用空気層を指ではじ
いて気泡としてストローの先端部に移動させ、胚の入っ
た凍結保護物質液層と希釈液層の間の空気層を人為的に
除去してのち凍結保存するようにし、融解後における凍
結保護物質の人為的除去作業を省略するようにしたこと
を特徴としている。
【０００７】
【作用】上記の手段により本発明の哺乳動物胚の凍結保
護物質の簡易除去法は、液体窒素中に保存した家畜等の
哺乳動物胚を農家の庭先等において融解後、直ちに受胚
動物に移植でき、融解後の処理等（指ではじく等）の必
要がないため、移植者による個人差も出現しにくい。
護物質の簡易除去法は、液体窒素中に保存した家畜等の
哺乳動物胚を農家の庭先等において融解後、直ちに受胚
動物に移植でき、融解後の処理等（指ではじく等）の必
要がないため、移植者による個人差も出現しにくい。
【０００８】
【実施例】本発明の方法の原埋として、溶解している物
質はその種類と濃度によって氷晶点が異なることを利用
して、氷晶の形成している層と未だ氷晶形成に至ってい
ない層の作成を行った。すなわち、図１のシュークロー
ス液層２は、−３℃で植氷作業（液体窒素中で過冷却し
たピンセットでストローをはさむ等の作業）を実施すれ
ば氷晶を形成するが、グリセリン液層３は未だその温度
では液体の状態にある。−３℃で綿栓部８を下にしてス
トローを立て、指でストローをはじぎ空気層６を除去し
た後、−４．８℃まで下げるとグリセリン液層３の氷晶
形成が行われる。
質はその種類と濃度によって氷晶点が異なることを利用
して、氷晶の形成している層と未だ氷晶形成に至ってい
ない層の作成を行った。すなわち、図１のシュークロー
ス液層２は、−３℃で植氷作業（液体窒素中で過冷却し
たピンセットでストローをはさむ等の作業）を実施すれ
ば氷晶を形成するが、グリセリン液層３は未だその温度
では液体の状態にある。−３℃で綿栓部８を下にしてス
トローを立て、指でストローをはじぎ空気層６を除去し
た後、−４．８℃まで下げるとグリセリン液層３の氷晶
形成が行われる。
【０００９】なお、これらの作業を実施するにあたって
は、凍結機（プロダラムフリーザー）は、凍結媒体が液
体（メタノール）であって、チャンバー（庫内）がある
程度大きく、かつ、ストローの縦置き、横置きが自由に
できるストロ一架台が必要である。
は、凍結機（プロダラムフリーザー）は、凍結媒体が液
体（メタノール）であって、チャンバー（庫内）がある
程度大きく、かつ、ストローの縦置き、横置きが自由に
できるストロ一架台が必要である。
【００１０】前段（ストローを立ててはじく前まで）の
作業は、ストロ一内の胚５が移動しないように横置きで
行い、また空気層６の除去も含めてすべての作業を凍結
溶媒中で行う。しかしこの方法では、空気層６の除去は
できるものの、胚５を含んだグリセリン液層３を気泡が
通過することによる胚の移動（上昇）の可能性が考えら
れる。
作業は、ストロ一内の胚５が移動しないように横置きで
行い、また空気層６の除去も含めてすべての作業を凍結
溶媒中で行う。しかしこの方法では、空気層６の除去は
できるものの、胚５を含んだグリセリン液層３を気泡が
通過することによる胚の移動（上昇）の可能性が考えら
れる。
【００１１】そこで図３に示すように、胚５の入ったグ
リセリン液層３とシュークロース液層２の充填の順序を
入れ替え、ストローは横置きのまま−４．８℃で植氷作
業を行い、ストロ一内の全液層を凍結した後、綿栓部８
を下にしてストローを立て、シュークロース液層２のみ
を空気中に出して再度融解する。次いで、シュークロー
ス液層２とグリセリン液層３の間の空気層６を指ではじ
いて除去し、気泡が先端部に達したことを確認した後、
再度シュークロース液層２も凍結溶媒中に沈め凍結す
る。
リセリン液層３とシュークロース液層２の充填の順序を
入れ替え、ストローは横置きのまま−４．８℃で植氷作
業を行い、ストロ一内の全液層を凍結した後、綿栓部８
を下にしてストローを立て、シュークロース液層２のみ
を空気中に出して再度融解する。次いで、シュークロー
ス液層２とグリセリン液層３の間の空気層６を指ではじ
いて除去し、気泡が先端部に達したことを確認した後、
再度シュークロース液層２も凍結溶媒中に沈め凍結す
る。
【００１２】この凍結胚の融解は、液体窒素中に保存し
てあるストローを取り出し、透明帯の破損を少なくする
ため空気中に５〜１０秒間保持した後、約３０℃の温湯
中に５〜１０分間ストローを横置きで静置する。この横
置きで静置する理由は、胚５が空気層７等に移動しない
ようにすることと、シュークロース液層２とグリセリン
液層３の溶液を徐々にかつ完全に混合させるためであ
る。このようにして融解したストローを胚移植器にセッ
トして移植を行うのである。
てあるストローを取り出し、透明帯の破損を少なくする
ため空気中に５〜１０秒間保持した後、約３０℃の温湯
中に５〜１０分間ストローを横置きで静置する。この横
置きで静置する理由は、胚５が空気層７等に移動しない
ようにすることと、シュークロース液層２とグリセリン
液層３の溶液を徐々にかつ完全に混合させるためであ
る。このようにして融解したストローを胚移植器にセッ
トして移植を行うのである。
【００１３】上記のプロセスをさらに詳しく，具体的に
説明する。まずはじめに、図１の充填方法により凍結，
融解後の胚の生存性について検討した。この試験の状況
を図１，図２，第１表を参照して説明する。
説明する。まずはじめに、図１の充填方法により凍結，
融解後の胚の生存性について検討した。この試験の状況
を図１，図２，第１表を参照して説明する。
【００１４】この試験には、黒毛和種雌牛から採取した
Ｂ′〜Ｃランクの胚を供試した。凍結容器には、現在、
胚の凍結保存に広く使われているプラスチックス卜ロー
を用い、このストロ一内に保存液層１（０．３％ウシ血
清アルブミンを含む修正リン酸緩衝液）、保存液１に１
０％シュークロースを添加したシュークロース液層２、
保存液１に１０％グリセリンを添加し胚の入ったグリセ
リン液層３の順に、それぞれ５：２：１の割合で各液層
間を空気層６，７により隔てて充填し、凍結はプログラ
ムフリーザーを用い、０℃から−３℃まで１℃／分で冷
却後、−３℃の５分間にシュークロース液層２を手動で
植氷し、シュークロース液層２の凍結終了後、綿栓部８
を下にしてストローを立て、シュークロース液層２とグ
リセリン液層３の間の空気層６を除去した。その後、−
３℃から−４．８℃まで１℃／分で冷却、−４．８℃で
１０分間保持し、この間にグリセリン液層３は自動的に
植氷された後、−３２℃まで０．５℃／分で冷却し、−
３２℃で液体窒素中に浸潰保存した。
Ｂ′〜Ｃランクの胚を供試した。凍結容器には、現在、
胚の凍結保存に広く使われているプラスチックス卜ロー
を用い、このストロ一内に保存液層１（０．３％ウシ血
清アルブミンを含む修正リン酸緩衝液）、保存液１に１
０％シュークロースを添加したシュークロース液層２、
保存液１に１０％グリセリンを添加し胚の入ったグリセ
リン液層３の順に、それぞれ５：２：１の割合で各液層
間を空気層６，７により隔てて充填し、凍結はプログラ
ムフリーザーを用い、０℃から−３℃まで１℃／分で冷
却後、−３℃の５分間にシュークロース液層２を手動で
植氷し、シュークロース液層２の凍結終了後、綿栓部８
を下にしてストローを立て、シュークロース液層２とグ
リセリン液層３の間の空気層６を除去した。その後、−
３℃から−４．８℃まで１℃／分で冷却、−４．８℃で
１０分間保持し、この間にグリセリン液層３は自動的に
植氷された後、−３２℃まで０．５℃／分で冷却し、−
３２℃で液体窒素中に浸潰保存した。
【００１５】このストローを空気中に約５〜１０秒間保
持後、３０℃の温湯中に２０分間静置することにより、
融解並びに約３％までのグリセリン除去を行った。その
後、直ちにシャーレ内のミネラルオイルで覆った１００
μｌの２０％ウシ胎児血清添加２５ｍＭヘペス緩衝ＴＣ
Ｍ−１９９培地に胚を１個ずつ入れ、５％炭酸ガス，９
５％空気の気相からなる３９℃の炭酸ガス培養装置内で
培養した。培養２４〜４８時間後に拡張胚盤胞から脱殻
した胚盤胞まで発育したものを生存胚として判定した。
その結果、表１に示したとおり、１５個中６個（４０
％）が生存していたことからこの方法の有効性が認めら
れた。
持後、３０℃の温湯中に２０分間静置することにより、
融解並びに約３％までのグリセリン除去を行った。その
後、直ちにシャーレ内のミネラルオイルで覆った１００
μｌの２０％ウシ胎児血清添加２５ｍＭヘペス緩衝ＴＣ
Ｍ−１９９培地に胚を１個ずつ入れ、５％炭酸ガス，９
５％空気の気相からなる３９℃の炭酸ガス培養装置内で
培養した。培養２４〜４８時間後に拡張胚盤胞から脱殻
した胚盤胞まで発育したものを生存胚として判定した。
その結果、表１に示したとおり、１５個中６個（４０
％）が生存していたことからこの方法の有効性が認めら
れた。
【００１６】
【表１】 注）Ａ法：１０％シュークロースを用いた従来の４ステ
ップ除去法 Ｂ法：１０％シュークロースを用いたシャーレ内１ステ
ップ除去法 Ｃ法：初期の方法による除去法
ップ除去法 Ｂ法：１０％シュークロースを用いたシャーレ内１ステ
ップ除去法 Ｃ法：初期の方法による除去法
【００１７】しかしながら、この方法では、前述のとお
りシュークロース液層２とグリセリン液層３の間の空気
層６を除去する際に、時として胚が上昇することが起こ
り得るので、シュークロース液層２とグリセリン液層３
の充填の順序を逆にした図３の方法で封入し、移植試験
を行ったのでその状況を説明する。
りシュークロース液層２とグリセリン液層３の間の空気
層６を除去する際に、時として胚が上昇することが起こ
り得るので、シュークロース液層２とグリセリン液層３
の充填の順序を逆にした図３の方法で封入し、移植試験
を行ったのでその状況を説明する。
【００１８】この方法では、保存液層１，胚の入ったグ
リセリン液層３，１０％または２０％シュークロース添
加のシュークロース液層２の順に、それぞれ４：１：２
の割合で各液層間を空気層６，７により隔ててストロ一
内に充填した。凍結は、前述のプログラムフリーザーを
用い、ストローは横置きで、図４のとおり０℃から−
４．８℃まで１℃／分で冷却して後、保存液層１液を手
動で植氷し、−４．８℃で１０分間保持後−３２℃まで
０．５℃／分で冷却し、液体窒素中に浸漬した。この−
４．８〜−１５℃までの冷却中に、ストローは綿栓部を
下にして立て胚５の入ったグリセリン液層３までは凍結
溶媒中に残し、シュークロース液層２を空気中に出し融
解したら、シュークロース液層２とグリセリン液層３の
間の空気層６を指ではじくことにより除去した後、シュ
ークロース液層２も再度凍結溶媒中に沈め凍結した。
リセリン液層３，１０％または２０％シュークロース添
加のシュークロース液層２の順に、それぞれ４：１：２
の割合で各液層間を空気層６，７により隔ててストロ一
内に充填した。凍結は、前述のプログラムフリーザーを
用い、ストローは横置きで、図４のとおり０℃から−
４．８℃まで１℃／分で冷却して後、保存液層１液を手
動で植氷し、−４．８℃で１０分間保持後−３２℃まで
０．５℃／分で冷却し、液体窒素中に浸漬した。この−
４．８〜−１５℃までの冷却中に、ストローは綿栓部を
下にして立て胚５の入ったグリセリン液層３までは凍結
溶媒中に残し、シュークロース液層２を空気中に出し融
解したら、シュークロース液層２とグリセリン液層３の
間の空気層６を指ではじくことにより除去した後、シュ
ークロース液層２も再度凍結溶媒中に沈め凍結した。
【００１９】
【表２】 注）黒毛和種胚は、Ａランクのみ ホルスタイン種胚は、Ａ，Ｂランク
【００２０】この方法で凍結保存した胚を、空気中に５
〜１０秒間保持後、３０℃の温湯中で５〜１０分間スト
ローを横置きで静置することにより融解並びにグリセリ
ン除去し、直ちに胚移植器にセットして移植した。この
野外移植試験の結果、受胎率は表２のとおり、黒毛和種
胚が４５．３％、ホルスタイン種胚が６０．０％であっ
た。
〜１０秒間保持後、３０℃の温湯中で５〜１０分間スト
ローを横置きで静置することにより融解並びにグリセリ
ン除去し、直ちに胚移植器にセットして移植した。この
野外移植試験の結果、受胎率は表２のとおり、黒毛和種
胚が４５．３％、ホルスタイン種胚が６０．０％であっ
た。
【００２１】本試験で用いたシュークロース液層２とグ
リセリン液層３の充填割合では、ストローを横置きにし
て融解した場合、約１分間で平均的に混和し、グリセリ
ン濃度は約３％に、また、シュークロース濃度はシュー
クロース液層２が１０％の場合約７％に、２０％の場合
約１３％となる。このシュークロース濃度割合別移植成
績を表３に示した。
リセリン液層３の充填割合では、ストローを横置きにし
て融解した場合、約１分間で平均的に混和し、グリセリ
ン濃度は約３％に、また、シュークロース濃度はシュー
クロース液層２が１０％の場合約７％に、２０％の場合
約１３％となる。このシュークロース濃度割合別移植成
績を表３に示した。
【００２２】
【発明の効果】以上説明したように、本発明による哺乳
動物胚の凍結保護物質の簡易除去法によれば、保管容器
であるストロー内に、シール側から順に、希釈液、除去
用空気層、胚の入った凍結保護物質液層、空気層、保存
液層、空気層、保存液層を充填して綿栓を施し、これを
凍結する過程で、まずストローを横置きのままで植氷作
業を行い、ついでストロー内の全液層を凍結した後、綿
栓部を下にしてストローを立て、希釈液層のみを空気中
に出して融解し、アルコールバス内から外に取り出さず
に、除去用空気層を指ではじいて気泡としてストローの
先端部に移動させ、胚の入った凍結保護物質液層と希釈
液層の間の空気層を人為的に除去してのち凍結保存する
ようにし、融解後における凍結保護物質の人為的除去作
業を省略するようにしたので、胚が下方に移動して綿栓
側の空気層等に移動することがなく、凍結時における胚
の損傷を防止することができる。その結果、液体窒素中
に保存した家畜等の哺乳動物胚を農家の庭先等において
融解後、直ちに受胚動物に移植することで受胎率を高め
ることができる。
動物胚の凍結保護物質の簡易除去法によれば、保管容器
であるストロー内に、シール側から順に、希釈液、除去
用空気層、胚の入った凍結保護物質液層、空気層、保存
液層、空気層、保存液層を充填して綿栓を施し、これを
凍結する過程で、まずストローを横置きのままで植氷作
業を行い、ついでストロー内の全液層を凍結した後、綿
栓部を下にしてストローを立て、希釈液層のみを空気中
に出して融解し、アルコールバス内から外に取り出さず
に、除去用空気層を指ではじいて気泡としてストローの
先端部に移動させ、胚の入った凍結保護物質液層と希釈
液層の間の空気層を人為的に除去してのち凍結保存する
ようにし、融解後における凍結保護物質の人為的除去作
業を省略するようにしたので、胚が下方に移動して綿栓
側の空気層等に移動することがなく、凍結時における胚
の損傷を防止することができる。その結果、液体窒素中
に保存した家畜等の哺乳動物胚を農家の庭先等において
融解後、直ちに受胚動物に移植することで受胎率を高め
ることができる。
【００２３】
【表３】
【００２４】これを浸透圧に直して考えると、凍結時、
胚の入った１０％グリセリン液層３は１，９５０〜２，
０００ｍＯｓｍ／ｋｇの状態にあり、融解後、シューク
ロース＋グリセリン液層４中の胚は、１０％シュークロ
ースの場合約１，２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２０％シュー
クロースの場合約１，４００ｍＯｓｍ／ｋｇの状態に５
〜１０分間程度置かれることとなる。その後、胚は子宮
内において約３００ｍＯｓｍ／ｋｇという体液の浸透圧
にさらされることとなる。
胚の入った１０％グリセリン液層３は１，９５０〜２，
０００ｍＯｓｍ／ｋｇの状態にあり、融解後、シューク
ロース＋グリセリン液層４中の胚は、１０％シュークロ
ースの場合約１，２５０ｍＯｓｍ／ｋｇ、２０％シュー
クロースの場合約１，４００ｍＯｓｍ／ｋｇの状態に５
〜１０分間程度置かれることとなる。その後、胚は子宮
内において約３００ｍＯｓｍ／ｋｇという体液の浸透圧
にさらされることとなる。
【００２５】
【発明の効果】以上説明したように、本発明による哺乳
動物胚の凍結保護物質の簡易除去法によれば、液体窒素
中に保存した家畜等の哺乳動物胚を農家の庭先等におい
て融解後、直ちに受胚動物に移植することができる。し
かも、融解後の処理等（指ではじく等）の必要がないた
め、移植者による個人差も出現しにくい利点がある。
動物胚の凍結保護物質の簡易除去法によれば、液体窒素
中に保存した家畜等の哺乳動物胚を農家の庭先等におい
て融解後、直ちに受胚動物に移植することができる。し
かも、融解後の処理等（指ではじく等）の必要がないた
め、移植者による個人差も出現しにくい利点がある。
【図１】本発明の初期段階での保管容器ス卜ロ一内充填
及び凍結，融解時の側断面図である。
及び凍結，融解時の側断面図である。
【図２】図１におけるストローの凍結方法を示したグラ
フである。
フである。
【図３】本発明の完成段階での保管容器ス卜ロ一内充填
及び凍結，融解時の側断面図である。
及び凍結，融解時の側断面図である。
【図４】図３におけるストローの凍結方法を示した図で
ある。
ある。
ｌ 保存液（修正ＰＢＳ）層 ２ シュークロース液層 ３ グリセリン液層 ４ シュークロース＋グリセリン液層 ５ 胚 ６ 空気層（除去用） ７ 空気層 ８ 綿栓 ９ シール
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 坊薗 正恒 宮崎県西諸県郡高原町大字広原5066番地 宮崎県優良家畜受精卵総合センター内 (56)参考文献 特開 平３−232441（ＪＰ，Ａ)
Claims (1)
- 【請求項１】 保管容器であるストロー内に、シール側
から順に、希釈液、除去用空気層、胚の入った凍結保護
物質液層、空気層、保存液層、空気層、保存液層を充填
して綿栓を施し、 これを凍結する過程で、まずストローを横置きのままで
植氷作業を行い、ついでストロー内の全液層を凍結した
後、綿栓部を下にしてストローを立て、希釈液層のみを
空気中に出して融解し、アルコールバス内から外に取り
出さずに、除去用空気層を指ではじいて気泡としてスト
ローの先端部に移動させ、 胚の入った凍結保護物質液層
と希釈液層の間の空気層を人為的に除去してのち凍結保
存するようにし、融解後における凍結保護物質の人為的
除去作業を省略するようにしたことを特徴とする哺乳動
物胚の凍結保護物質の簡易除去法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31402992A JP2582327B2 (ja) | 1992-10-29 | 1992-10-29 | 哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易除去法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP31402992A JP2582327B2 (ja) | 1992-10-29 | 1992-10-29 | 哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易除去法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH06133991A JPH06133991A (ja) | 1994-05-17 |
| JP2582327B2 true JP2582327B2 (ja) | 1997-02-19 |
Family
ID=18048360
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP31402992A Expired - Lifetime JP2582327B2 (ja) | 1992-10-29 | 1992-10-29 | 哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易除去法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2582327B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2471359B1 (en) * | 2010-12-30 | 2016-03-30 | Cellulis S.L. | Method of freezing cells |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH03232441A (ja) * | 1990-02-09 | 1991-10-16 | Zenkoku Nogyo Kyodo Kumiai Rengokai | 受胎率を上げた凍結受精卵およびその調製法 |
-
1992
- 1992-10-29 JP JP31402992A patent/JP2582327B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH06133991A (ja) | 1994-05-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Hafez | Preservation and cryopreservation of gametes and embryos | |
| Massip | Cryopreservation of bovine oocytes: current status and recent developments | |
| Van Wagtendonk-De Leeuw et al. | Comparison of the efficacy of conventional slow freezing and rapid cryopreservation methods for bovine embryos | |
| Vajta et al. | Factors affecting survival rates of in vitro produced bovine embryos after vitrification and direct in-straw rehydration | |
| CA2799823A1 (en) | A device for manipulating biological materials in a process of cryopreservation and a use of such a device | |
| JP3044323B1 (ja) | 細胞の凍結保存方法 | |
| JP4431754B2 (ja) | 胚のガラス化保存用具及びそれを用いた胚のガラス化保存方法 | |
| JP3672201B2 (ja) | 哺乳動物胚移植用ストロー及びその製造法 | |
| JP2582327B2 (ja) | 哺乳動物胚の凍結保護物質の簡易除去法 | |
| US20080286863A1 (en) | Method and solutions for cryopreserving oocytes, especially fresh human oocytes | |
| JP2006149231A (ja) | 生物学的標本の凍結保存用細管、生物学的標本の凍結保存方法および凍結保存後の融解方法 | |
| Youngs et al. | Embryo cryopreservation in domestic mammalian livestock species. | |
| JP2005261413A (ja) | 動物胚凍結保存液とそれを用いた動物胚凍結保存法 | |
| Bondioli | Cryopreservation of bovine embryos | |
| Nagy et al. | The human embryo: vitrification | |
| Jones | Cryopreservation of bovine embryos | |
| JPH03232441A (ja) | 受胎率を上げた凍結受精卵およびその調製法 | |
| Atiyah et al. | CRYOPRESERVATION OF SHEEP OOCYTES AND EMBRYOS USING LOCAL, MODIFIEID VITRIFICATION TOOL | |
| Chen et al. | B. Vitrification of oocytes: various procedures | |
| Huang et al. | Vitrification of caprine embryos in microdrops | |
| Nagy et al. | The human embryo: Vitrification Vitrification | |
| Milovanov et al. | Vitrification of germinal vesicle and metaphase II swine oocytes | |
| Arav et al. | Preservation of gametes and embryos | |
| JP2999876B2 (ja) | 哺乳動物胚のガラス化低温保存液 | |
| JP2022014684A (ja) | 受精卵凍結用容器および受精卵凍結保存方法 |