JP2553180B2 - 乳清からのラクトペルオキシダーゼおよびラクトフェリンの純粋な画分の抽出法 - Google Patents
乳清からのラクトペルオキシダーゼおよびラクトフェリンの純粋な画分の抽出法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 発明は、乳清からのラクトペルオキシダーゼおよびラク
トフェリンの純粋な画分の抽出法に関する。乳清とはス
キムミルクとホエーの両者を意味する。
トフェリンの純粋な画分の抽出法に関する。乳清とはス
キムミルクとホエーの両者を意味する。
チーズの製造では、多量のホエーが副生成物として得
られる。ホエーの乾燥固形物含有は約６％であり、ほぼ
下記のようなものから構成されている。
られる。ホエーの乾燥固形物含有は約６％であり、ほぼ
下記のようなものから構成されている。
重量％ ラクトース 4.6 タン白質 0.6、その中の ラクトペルオキシダーゼ 0.0020 ラクトフェリン 0.0030 脂肪 0.05（分離後） 塩 0.7 固形物含量 約6.0 乾燥固形物含量の約10〜12％を構成するタン白質画分
は、多数の異なるタン白質成分から成っている。最大の
ものは、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン
およびウシ血清アルブミンである。多数の生物活性成分
も、タン白質画分に属し、例えば免疫グロブリン、ラク
トペルオキシダーゼ、ラクトフェリンおよびリゾチーム
である。
は、多数の異なるタン白質成分から成っている。最大の
ものは、β−ラクトグロブリン、α−ラクトアルブミン
およびウシ血清アルブミンである。多数の生物活性成分
も、タン白質画分に属し、例えば免疫グロブリン、ラク
トペルオキシダーゼ、ラクトフェリンおよびリゾチーム
である。
ラクトペルオキシダーゼとラクトフェリンは、抗菌活
性を有する。食品技術における新たな情況においておよ
び化学技術や医学の分野で用いられる天然の抗菌性物質
の抽出に大きな関心が持たれている。
性を有する。食品技術における新たな情況においておよ
び化学技術や医学の分野で用いられる天然の抗菌性物質
の抽出に大きな関心が持たれている。
スキムミルクとホエーでは（および元のミルクでは）
これらの物質の含量は低い。ラクトペルオキシダーゼと
ラクトフェリンの含量は、ウシの授乳状態によって変わ
るが、15〜50mg/リットルで含まれる。したがって、こ
れらの生物活性成分をキログラムの量で抽出し易くする
には、多量のホエー（ミルク）を濾過しなければならな
い。
これらの物質の含量は低い。ラクトペルオキシダーゼと
ラクトフェリンの含量は、ウシの授乳状態によって変わ
るが、15〜50mg/リットルで含まれる。したがって、こ
れらの生物活性成分をキログラムの量で抽出し易くする
には、多量のホエー（ミルク）を濾過しなければならな
い。
ミルク／ホエーからラクトペルオキシダーゼとラクト
フェリンをそれぞれ単離するためのプロセス光学条件
は、これら２種類のタン白質の等電点（pI）が約9.5で
あるが、ホエータン白質の主要部分の等電点は約5.1〜
5.4であり、カゼインの等電点は約4.6であるという事実
に基づいている。それ故、ラクトペルオキシダーゼとラ
クトフェリンを分離するのに基本的に好適な方法は、ミ
ルク／ホエーをpH＜６で陽イオン交換体と接触させて選
択的に吸着させることであり、この場合に、ラクトペル
オキシダーゼとラクトフェリンとの真の正電荷を用いて
このpHで陰電荷を有する他のミルクタン白質と区別する
のである。
フェリンをそれぞれ単離するためのプロセス光学条件
は、これら２種類のタン白質の等電点（pI）が約9.5で
あるが、ホエータン白質の主要部分の等電点は約5.1〜
5.4であり、カゼインの等電点は約4.6であるという事実
に基づいている。それ故、ラクトペルオキシダーゼとラ
クトフェリンを分離するのに基本的に好適な方法は、ミ
ルク／ホエーをpH＜６で陽イオン交換体と接触させて選
択的に吸着させることであり、この場合に、ラクトペル
オキシダーゼとラクトフェリンとの真の正電荷を用いて
このpHで陰電荷を有する他のミルクタン白質と区別する
のである。
研究のために少量でラクトペルオキシダーゼとラクト
フェリンを単離する伝統的な方法は、しばしばゲル濾過
と組み合わせて使用される沈降法およびイオン交換クロ
マトグラフィを用いる方法であり、モリソン、エム（Mo
rrison,M）、ハミルトン、エイチ・ビー（Hamilton,H−
B.）、シュトッツ、イー（Stotz,E）、J.Biol.Chem.,22
8:767（1957）；モリソン、エム（Morrison,M）、フル
トクィスト、ピー・イー（Hultquist,P−Ｅ）、J.Biol.
Chem.,238:2847（1963）を参照されたい。これらの方法
は、経済的に擁護し得る程度に前記の生物活性を有する
成分を多量に調製するのには適さない、 米国特許第4,436,658号明細書（ペヴロスセット（Pev
rosuset））には、シリカカラムによるカゼイン不含乳
清（ホエー）からのラクトフェリンの吸着が開示されて
いる。乳清のpHを7.7〜8.2に調製した後、カラムに吸着
させるのである。免疫グロブリン、ラクトフェリンおよ
びラクトペルオキシダーゼがカラムに付着する。吸着工
程の後に、pH＜４の希釈した塩溶液で溶出を行う。吸着
したタン白質は、特にラクトペルオキシダーゼに関して
も選択的には溶出しない。約5gのシリカを保持するカラ
ムでは、ホエー１リットルを処理することができる。こ
の先行技術による方法は、工業的規模での適用には適さ
ないものと考えねばならない。
フェリンを単離する伝統的な方法は、しばしばゲル濾過
と組み合わせて使用される沈降法およびイオン交換クロ
マトグラフィを用いる方法であり、モリソン、エム（Mo
rrison,M）、ハミルトン、エイチ・ビー（Hamilton,H−
B.）、シュトッツ、イー（Stotz,E）、J.Biol.Chem.,22
8:767（1957）；モリソン、エム（Morrison,M）、フル
トクィスト、ピー・イー（Hultquist,P−Ｅ）、J.Biol.
Chem.,238:2847（1963）を参照されたい。これらの方法
は、経済的に擁護し得る程度に前記の生物活性を有する
成分を多量に調製するのには適さない、 米国特許第4,436,658号明細書（ペヴロスセット（Pev
rosuset））には、シリカカラムによるカゼイン不含乳
清（ホエー）からのラクトフェリンの吸着が開示されて
いる。乳清のpHを7.7〜8.2に調製した後、カラムに吸着
させるのである。免疫グロブリン、ラクトフェリンおよ
びラクトペルオキシダーゼがカラムに付着する。吸着工
程の後に、pH＜４の希釈した塩溶液で溶出を行う。吸着
したタン白質は、特にラクトペルオキシダーゼに関して
も選択的には溶出しない。約5gのシリカを保持するカラ
ムでは、ホエー１リットルを処理することができる。こ
の先行技術による方法は、工業的規模での適用には適さ
ないものと考えねばならない。
ザグルスキイ（Zagulski）らは、Prace in materialy
Zootechniczne,20,（1979）,87〜103頁にラクトフェリ
ンを得るバッチ法であって、弱陽イオン交換体を用いて
これをミルクと混合する方法を記載している。平衡に達
したならば、イオン交換体をカラムに入れて、吸着した
タン白質を塩溶液で溶出させるのである。したがって、
この方法はバッチ法に基づいており、高純度のラクトフ
ェリンを得るには第二のイオン交換工程で更に精製を行
わなければならない。
Zootechniczne,20,（1979）,87〜103頁にラクトフェリ
ンを得るバッチ法であって、弱陽イオン交換体を用いて
これをミルクと混合する方法を記載している。平衡に達
したならば、イオン交換体をカラムに入れて、吸着した
タン白質を塩溶液で溶出させるのである。したがって、
この方法はバッチ法に基づいており、高純度のラクトフ
ェリンを得るには第二のイオン交換工程で更に精製を行
わなければならない。
同様な方法はベルギー国特許第901,672号明細書（ジ
ェイ・ピー・プリールス（J.P.Prieels）とアール・パ
イパー（R.Peipper）、オレフィナ・エス・エイ（Olefi
na S.A））に記載されている。この方法では、アルギン
酸カルシウムを基剤とするイオン交換体であって、イオ
ン交換官能価をジルコニウム、チタン、石英またはアル
ミニウムの酸化物の添加によって得たものが用いられ
る。ミルク／ホエーを充填カラム中でイオン交換体と接
触させ、またはタンク中で混合することによって、等電
点が7.5より高いタン白質を吸着させる。平衡に達した
ならば、ゲルを機械的に分離して洗浄装置に供給し、塩
化カルシウム溶液で溶出させる。アルギン酸カルシウム
と接触する総ての流体は少なくとも0.1％のCaCl2を含
み、ゲルが溶解するのを防止するものでなければならな
い。ラクトペルオキシダーゼとラクトフェリンはこの溶
出では分別されないが、別の精製工程で分別を行わなけ
ればならない。
ェイ・ピー・プリールス（J.P.Prieels）とアール・パ
イパー（R.Peipper）、オレフィナ・エス・エイ（Olefi
na S.A））に記載されている。この方法では、アルギン
酸カルシウムを基剤とするイオン交換体であって、イオ
ン交換官能価をジルコニウム、チタン、石英またはアル
ミニウムの酸化物の添加によって得たものが用いられ
る。ミルク／ホエーを充填カラム中でイオン交換体と接
触させ、またはタンク中で混合することによって、等電
点が7.5より高いタン白質を吸着させる。平衡に達した
ならば、ゲルを機械的に分離して洗浄装置に供給し、塩
化カルシウム溶液で溶出させる。アルギン酸カルシウム
と接触する総ての流体は少なくとも0.1％のCaCl2を含
み、ゲルが溶解するのを防止するものでなければならな
い。ラクトペルオキシダーゼとラクトフェリンはこの溶
出では分別されないが、別の精製工程で分別を行わなけ
ればならない。
カラム法で商業的に確立されたイオン交換法で処理さ
れない理由として、前記のベルギー国特許明細書は、媒
質中に球状の脂肪とタン白質の凝集体の粒子が発生する
ことによってイオン交換体の目詰りを生じるという克服
し難い問題点を挙げている。
れない理由として、前記のベルギー国特許明細書は、媒
質中に球状の脂肪とタン白質の凝集体の粒子が発生する
ことによってイオン交換体の目詰りを生じるという克服
し難い問題点を挙げている。
英国特許第2,179,947号明細書には、ミルクからのラ
クトトランスフェリン抽出法が開示されている。この方
法を行って、ホエーに限外濾過を施すことによって（ラ
クトトランスフェリンを含有する）ホエーのタン白質含
量を約５倍に濃縮した後、そのpHとイオン強度を調製す
るようにする。こうして処理された乳清を非常に低速度
（約0.03床容積／分）でイオン交換カラム、好ましくは
弱陽イオン交換体を通過させる。このカラムを、ラクト
フェリンが溶出されるときに0.4Mまで増加するイオン強
度勾配を有する溶液で低速度で溶出させる。これは小規
模法であり、ラクトフェリンを工業的な製造には適さな
い。弱陽イオン交換体を使用することによって、容積が
低くなる。天然の乾燥固形物含量に転換された100床容
積の量のホエーを、それぞれの溶出の間にイオン交換カ
ラムを通過させることができる。脂肪とタン白質粒子に
よって生じるイオン交換フィルターの目詰りの問題は、
この先行技術によっては解決されてはいない。
クトトランスフェリン抽出法が開示されている。この方
法を行って、ホエーに限外濾過を施すことによって（ラ
クトトランスフェリンを含有する）ホエーのタン白質含
量を約５倍に濃縮した後、そのpHとイオン強度を調製す
るようにする。こうして処理された乳清を非常に低速度
（約0.03床容積／分）でイオン交換カラム、好ましくは
弱陽イオン交換体を通過させる。このカラムを、ラクト
フェリンが溶出されるときに0.4Mまで増加するイオン強
度勾配を有する溶液で低速度で溶出させる。これは小規
模法であり、ラクトフェリンを工業的な製造には適さな
い。弱陽イオン交換体を使用することによって、容積が
低くなる。天然の乾燥固形物含量に転換された100床容
積の量のホエーを、それぞれの溶出の間にイオン交換カ
ラムを通過させることができる。脂肪とタン白質粒子に
よって生じるイオン交換フィルターの目詰りの問題は、
この先行技術によっては解決されてはいない。
ホエー／スキムミルクからラクトペルオキシダーゼと
ラクトフェリンを経済的に回収するには、工業的に適用
可能な方法に次のような要件を与えることができる。
ラクトフェリンを経済的に回収するには、工業的に適用
可能な方法に次のような要件を与えることができる。
（１） 吸着マスの選択的処理能力が高い。ラクトペル
オキシダーゼ／ラクトフェリンの乳清中での含量は低い
ので、１回の溶出で処理することができる乳清の容積は
大きくなければならない。
オキシダーゼ／ラクトフェリンの乳清中での含量は低い
ので、１回の溶出で処理することができる乳清の容積は
大きくなければならない。
（２） 吸着相における流量が高い。（通常のクロマト
グラフィ法では低速、0.01〜0.10床容積／分で処理する
のが普通である）。この理由は、粒度が小さいため、床
は通常は圧降下が大きく、吸着法の反応速度には流量を
高くする必要があることがしばしばあるからである。
グラフィ法では低速、0.01〜0.10床容積／分で処理する
のが普通である）。この理由は、粒度が小さいため、床
は通常は圧降下が大きく、吸着法の反応速度には流量を
高くする必要があることがしばしばあるからである。
（３） この方法は衛生的でなければならず、これは吸
着マスは少なくともpH13〜14の灰汁で処理しなければな
らないことを意味する。
着マスは少なくともpH13〜14の灰汁で処理しなければな
らないことを意味する。
本発明の目的は、乳清（ホエー）からラクトペルオキ
シダーゼとラクトフェリンの純粋な画分を抽出するため
の前記の要件を満足する方法を得ることである。
シダーゼとラクトフェリンの純粋な画分を抽出するため
の前記の要件を満足する方法を得ることである。
本発明は、乳清からのラクトペルオキシダーゼとラク
トフェリンの純粋な画分を抽出する方法に関し、この方
法は乳清をマイクロ濾過し、これを高流量で強陽イオン
交換体を通過させ、ラクトペルオキシダーゼとラクトフ
ェリンを異なる濃度を有する塩溶液で選択的に連続的に
溶出させることを特徴とする。
トフェリンの純粋な画分を抽出する方法に関し、この方
法は乳清をマイクロ濾過し、これを高流量で強陽イオン
交換体を通過させ、ラクトペルオキシダーゼとラクトフ
ェリンを異なる濃度を有する塩溶液で選択的に連続的に
溶出させることを特徴とする。
本発明によれば、単一のイオン交換工程で２種類の異
なる血清タン白質の純粋な画分を調製する方法が提供さ
れる。これは、以前は工業的規模では行われていなかっ
たものである。先行技術による工業的規模でこれらのタ
ン白質を抽出する方法では、２または３の精製工程を必
要とした。
なる血清タン白質の純粋な画分を調製する方法が提供さ
れる。これは、以前は工業的規模では行われていなかっ
たものである。先行技術による工業的規模でこれらのタ
ン白質を抽出する方法では、２または３の精製工程を必
要とした。
血清またはホエー中で球状脂肪およびタン白質凝集体
のような粒子の生成によって起こるイオン交換体の目詰
りの上記の問題は、乳清（ホエー）をマイクロ濾過（例
えばいわゆる十字流濾過法）した後、イオン交換床に接
触させる本発明によって解決される。マイクロフィルタ
ーの好適な細孔度を選択することによって、目詰りを引
き起こす脂肪とタン白質の凝集体粒子を除去することが
できる。好適なマイクロフィルターの細孔直径は0.10〜
２μｍ、好ましくは0.4〜1.5μｍである。
のような粒子の生成によって起こるイオン交換体の目詰
りの上記の問題は、乳清（ホエー）をマイクロ濾過（例
えばいわゆる十字流濾過法）した後、イオン交換床に接
触させる本発明によって解決される。マイクロフィルタ
ーの好適な細孔度を選択することによって、目詰りを引
き起こす脂肪とタン白質の凝集体粒子を除去することが
できる。好適なマイクロフィルターの細孔直径は0.10〜
２μｍ、好ましくは0.4〜1.5μｍである。
本発明による方法の出発材料としては、乳清（ホエ
ー）すなわち脂肪とガゼインを除いたミルクが用いられ
る。乳清を最初にマイクロ濾過によって処理して、脂肪
とタン白質凝集体粒子の残渣をいわゆる十字流法で除去
する。マイクロ濾過を行った乳清を、次に高速（約１〜
1.5床容積／分）で強陽イオン交換体であって、ラクト
ペルオキシダーゼとラクトフェリンを選択的に吸着する
ものを充填したカラムを通過させる。この陽イオン交換
体は、優れた速度および吸着速度特性と、乳清の約1000
床の容量を有する。これは、最も弱く結合しているラク
トペルオキシダーゼが漏出する、すなわちイオン交換マ
スがこれらのタン白質で飽和されるまでに約1000床容積
の乳清が通過することができることを意味する。吸着相
の初めと終りとの間には、圧降下は極僅かしか増加しな
い。
ー）すなわち脂肪とガゼインを除いたミルクが用いられ
る。乳清を最初にマイクロ濾過によって処理して、脂肪
とタン白質凝集体粒子の残渣をいわゆる十字流法で除去
する。マイクロ濾過を行った乳清を、次に高速（約１〜
1.5床容積／分）で強陽イオン交換体であって、ラクト
ペルオキシダーゼとラクトフェリンを選択的に吸着する
ものを充填したカラムを通過させる。この陽イオン交換
体は、優れた速度および吸着速度特性と、乳清の約1000
床の容量を有する。これは、最も弱く結合しているラク
トペルオキシダーゼが漏出する、すなわちイオン交換マ
スがこれらのタン白質で飽和されるまでに約1000床容積
の乳清が通過することができることを意味する。吸着相
の初めと終りとの間には、圧降下は極僅かしか増加しな
い。
イオン交換マスの溶出は、乳清をカラムから緩衝後、
好ましくは乳清のpH6.5のリン酸緩衝液で洗い出すこと
によって開始する。次いで、不純物があるとすればこれ
が、好ましくは無機アルカリ、アルカリ土類またはアン
モニウム塩の弱塩溶液、例えば0.075M NaClを含む緩衝
液で溶出する。
好ましくは乳清のpH6.5のリン酸緩衝液で洗い出すこと
によって開始する。次いで、不純物があるとすればこれ
が、好ましくは無機アルカリ、アルカリ土類またはアン
モニウム塩の弱塩溶液、例えば0.075M NaClを含む緩衝
液で溶出する。
この予備的溶出の後、所望なタン白質を、異なる濃度
で前記の塩から選択される塩溶液を含む緩衝液で選択的
に溶出する。例えば、ラクトペルオキシダーゼの溶出を
0.10〜0.4Mの範囲の塩濃度で行い、ラクトフェリンの溶
出を0.5〜2Mの塩濃度で行う。
で前記の塩から選択される塩溶液を含む緩衝液で選択的
に溶出する。例えば、ラクトペルオキシダーゼの溶出を
0.10〜0.4Mの範囲の塩濃度で行い、ラクトフェリンの溶
出を0.5〜2Mの塩濃度で行う。
この処理の後、関連のタン白質を約500倍に濃縮し
た。
た。
純粋なタン白質画分を集めた後、好ましくは限外濾過
の後に脱塩および凍結乾燥を行うことによって更に濃縮
して、純粋なタン白質画分が約90％である商業製品を得
るようにする。
の後に脱塩および凍結乾燥を行うことによって更に濃縮
して、純粋なタン白質画分が約90％である商業製品を得
るようにする。
1kgのラクトペルオキシダーゼと1kgのラクトフェリン
を製造するためには、それぞれ約65および45m3のホエー
が必要である。抽出した成分の純度は90％を上回る。こ
れはイオン交換体を適当に選択し、pHおよび塩濃度が重
要なパラメーターである吸着および溶出条件を慎重に選
択することによって得られる。
を製造するためには、それぞれ約65および45m3のホエー
が必要である。抽出した成分の純度は90％を上回る。こ
れはイオン交換体を適当に選択し、pHおよび塩濃度が重
要なパラメーターである吸着および溶出条件を慎重に選
択することによって得られる。
本発明を下記の実施例と添付の図面によって詳細に説
明する。
明する。
第１図は、本発明による方法の好ましい態様の模式図
であり、 第２図は、イオン交換カラムからラクトペルオキシダ
ーゼとラクトフェリンを溶出するときの紫外線吸収スペ
クトルを表わし、 第３図は、本発明による分別を行った後のラクトペル
オキシダーゼとラクトフェリンの純度を示すクロマトグ
ラムである。
であり、 第２図は、イオン交換カラムからラクトペルオキシダ
ーゼとラクトフェリンを溶出するときの紫外線吸収スペ
クトルを表わし、 第３図は、本発明による分別を行った後のラクトペル
オキシダーゼとラクトフェリンの純度を示すクロマトグ
ラムである。
実施例 pH6.5で殺菌しスラッジを遠心分離したスイートホエ
ー100リットルを、50℃で十字流法でマイクロ濾過し
た。マイクロ濾過によって、粒状の脂肪の残っている残
渣を、生成するタン白質凝集体と共に除去した。マイク
ロフィルターの細孔度は1.4μｍであった。
ー100リットルを、50℃で十字流法でマイクロ濾過し
た。マイクロ濾過によって、粒状の脂肪の残っている残
渣を、生成するタン白質凝集体と共に除去した。マイク
ロフィルターの細孔度は1.4μｍであった。
冷却した後、ホエーを、アガロースを基剤とする特別
の処理した強陽イオン交換体（Ｓ−セファロース、急
流、ファルマシア（Pharmacia））80mlを充填したイオ
ン交換カラムを通過させた。床の高さ約4.1cmであり、
カラム中の流量は100ml/分であり、1.25床容積／分の流
量に相当した。実験の開始時におけるカラムの前の圧降
下は0.26バールであった。15時間後に、流量は0.28バー
ルの圧降下で100ml/分であった。ホエー約80〜90リット
ルがカラムを通過したときラクトペルオキシダーゼの漏
出が起こり、すなわち約1000床容積であった。
の処理した強陽イオン交換体（Ｓ−セファロース、急
流、ファルマシア（Pharmacia））80mlを充填したイオ
ン交換カラムを通過させた。床の高さ約4.1cmであり、
カラム中の流量は100ml/分であり、1.25床容積／分の流
量に相当した。実験の開始時におけるカラムの前の圧降
下は0.26バールであった。15時間後に、流量は0.28バー
ルの圧降下で100ml/分であった。ホエー約80〜90リット
ルがカラムを通過したときラクトペルオキシダーゼの漏
出が起こり、すなわち約1000床容積であった。
次に、ホエーの流れを遮り、溶出相をリン酸緩衝液0.
03MKH2PO4、pH6.5でカラムからのホエーを洗浄し、0.07
5M NaClを含むリン酸緩衝液で不純物をイオン交換体か
ら溶出させることによって開始した（第１図）。ラクト
ペルオキシダーゼを0.3M NaClを含むリン酸緩衝液で溶
出した後、ラクトフェリンを0.9M NaClを含むリン酸緩
衝液で溶出させた（第２図参照）。
03MKH2PO4、pH6.5でカラムからのホエーを洗浄し、0.07
5M NaClを含むリン酸緩衝液で不純物をイオン交換体か
ら溶出させることによって開始した（第１図）。ラクト
ペルオキシダーゼを0.3M NaClを含むリン酸緩衝液で溶
出した後、ラクトフェリンを0.9M NaClを含むリン酸緩
衝液で溶出させた（第２図参照）。
画分を集めた後、集めた画分をセファデックスカラム
中でゲル濾過によって脱塩し最後に凍結乾燥した。
中でゲル濾過によって脱塩し最後に凍結乾燥した。
イオン交換カラムを、最初に2.0M NaClで洗浄した
後、1.0M NaOHで洗浄することによって清掃した後、カ
ラムを再び実験に用いた。
後、1.0M NaOHで洗浄することによって清掃した後、カ
ラムを再び実験に用いた。
イオン交換後のラクトペルオキシターゼの収率:96.5
％、 溶出後に集められた画分の純度:A412 ］ A280＝0.84＊ 活性として計算した凍結乾燥後の方法における総収率:9
0％ 凍結乾燥した調製物の純度:A412 ］ A280＝0.87＊ ＊ 92が100％の純度に対応する最大値である。
％、 溶出後に集められた画分の純度:A412 ］ A280＝0.84＊ 活性として計算した凍結乾燥後の方法における総収率:9
0％ 凍結乾燥した調製物の純度:A412 ］ A280＝0.87＊ ＊ 92が100％の純度に対応する最大値である。
対応する収率と純度をラクトフェリンについて得た（第
３図参照）。
３図参照）。
Claims (8)
- 【請求項１】乳清からのラクトペルオキシダーゼとラク
トフェリンの純粋な画分を抽出する方法であって、乳清
をマイクロ濾過し、これをラクトペルオキシダーゼとラ
クトフェリンを選択的に吸着させるため約１〜1.5床容
積／分の高流量で強陽イオン交換体の床中を通過させた
後、pHが約6.5で濃度が0.10〜0.4Mの塩溶液でラクトペ
ルオキシダーゼを、濃度が0.5〜2Mの塩溶液でラクトフ
ェリンを、連続的且つ選択的に溶出させることを特徴と
する方法。 - 【請求項２】ラクトペルオキシダーゼを溶出する前に、
前記強陽イオン交換体を濃度が0.01〜0.15Mの塩溶液で
溶出する、請求の範囲第１項に記載の方法。 - 【請求項３】前記塩溶液が無機アルカリ、アルカリ土類
またはアンモニウム塩の溶液である、請求の範囲第１項
に記載の方法。 - 【請求項４】乳清のpHを5.9〜9.0に調整した後、陽イオ
ン交換体を通過させる、請求の範囲第１項〜第３項のい
ずれか一項に記載の方法。 - 【請求項５】乳清のpHが約6.5に調整される、請求の範
囲第４項に記載の方法。 - 【請求項６】マイクロ濾過を、細孔直径が0.10〜２μｍ
のマイクロフィルターで行う、請求の範囲第１項〜第４
項のいずれか一項に記載の方法。 - 【請求項７】前記マイクロフィルターの細孔直径が0.4
〜1.5μｍである、請求の範囲第６項記載の方法。 - 【請求項８】塩溶液で溶出したラクトペルオキシダーゼ
とラクトフェリンをそれぞれ濃縮し、脱塩し、凍結乾燥
する、請求の範囲第１項〜第７項のいずれか一項に記載
の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8704719A SE458818B (sv) | 1987-11-27 | 1987-11-27 | Foerfarande foer utvinning av rena fraktioner av laktoperoxidas och laktoferrin ur mjoelkserum |
| SE8704719-7 | 1987-11-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03502921A JPH03502921A (ja) | 1991-07-04 |
| JP2553180B2 true JP2553180B2 (ja) | 1996-11-13 |
Family
ID=20370415
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP63509492A Expired - Fee Related JP2553180B2 (ja) | 1987-11-27 | 1988-11-25 | 乳清からのラクトペルオキシダーゼおよびラクトフェリンの純粋な画分の抽出法 |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5149647A (ja) |
| EP (1) | EP0390821B1 (ja) |
| JP (1) | JP2553180B2 (ja) |
| AT (1) | ATE89454T1 (ja) |
| AU (1) | AU613688B2 (ja) |
| DE (1) | DE3881217T2 (ja) |
| DK (1) | DK173642B1 (ja) |
| FI (1) | FI91032C (ja) |
| NO (1) | NO177268C (ja) |
| NZ (1) | NZ227097A (ja) |
| SE (1) | SE458818B (ja) |
| WO (1) | WO1989004608A1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| EP0497911B1 (en) * | 1989-11-03 | 2000-05-24 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Recombinant production of lactoperoxidase |
| US5756333A (en) * | 1989-11-03 | 1998-05-26 | Incyte Pharmaceuticals, Inc. | Recombinant production of lactoperoxidase |
| JP3035833B2 (ja) * | 1991-01-21 | 2000-04-24 | 雪印乳業株式会社 | シアル酸類含有組成物の製造方法 |
| JP3110078B2 (ja) * | 1991-06-21 | 2000-11-20 | 森永乳業株式会社 | 高純度抗菌性ペプチドの大量製造法 |
| JPH07502016A (ja) * | 1991-07-25 | 1995-03-02 | コモンウェルス・サイエンティフィック・アンド・インダストリアル・リサーチ・オーガニゼイション | 流体からの荷電粒子の単離 |
| WO1993013676A1 (en) * | 1992-01-15 | 1993-07-22 | Campina Melkunie B.V. | Process for isolating lactoferrin and lactoperoxidase from milk and milk products, and products obtained by such process |
| JPH05202098A (ja) * | 1992-01-29 | 1993-08-10 | Snow Brand Milk Prod Co Ltd | 乳質原料から生理活性物質の製造法 |
| SE470375B (sv) * | 1992-05-07 | 1994-02-07 | Alfa Laval Food Eng Ab | Sätt att erhålla högvärdiga proteinprodukter ur vassle |
| US5756680A (en) * | 1994-01-05 | 1998-05-26 | Sepragen Corporation | Sequential separation of whey proteins and formulations thereof |
| US5468844A (en) * | 1994-01-07 | 1995-11-21 | Protose Technologies Inc. | Process for the membrane-filtering of protein solutions |
| NZ330484A (en) * | 1994-02-16 | 1999-11-29 | Pharming Bv | Isolation of lactoferrin especially recombinant lactoferrin from milk |
| WO1996008155A1 (en) * | 1994-09-16 | 1996-03-21 | New Zealand Dairy Board | Physical separation of casein and whey proteins |
| JP3112637B2 (ja) * | 1994-09-30 | 2000-11-27 | 雪印乳業株式会社 | 骨強化剤 |
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