JP2543606B2 - 多発性硬化症の判定方法 - Google Patents
多発性硬化症の判定方法Info
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- JP2543606B2 JP2543606B2 JP2008047A JP804790A JP2543606B2 JP 2543606 B2 JP2543606 B2 JP 2543606B2 JP 2008047 A JP2008047 A JP 2008047A JP 804790 A JP804790 A JP 804790A JP 2543606 B2 JP2543606 B2 JP 2543606B2
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- Japan
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- multiple sclerosis
- cerebrospinal fluid
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Description
【発明の詳細な説明】 a.産業上の利用分野 本発明は、ヒト腫瘍壊死因子（Tumor Necrosis Facto
r−alpha以下これを“TNF−α”と略称することがあ
る）の定量的測定方法を用いてヒト髄液中のTNF−αの
量を特異的に測定することによって、多発性硬化症診断
及び病態の判定の一助とするための方法に関するもので
ある。
r−alpha以下これを“TNF−α”と略称することがあ
る）の定量的測定方法を用いてヒト髄液中のTNF−αの
量を特異的に測定することによって、多発性硬化症診断
及び病態の判定の一助とするための方法に関するもので
ある。
b.発明の背景 多発性硬化症（multiple sclerosis）は15〜50才まで
の年令層に好発する脱髄性疾患の代表的なものである。
臨床症状は中枢神経系の多発性病巣に起因するもであ
り、多彩である。多く手足のしびれなどの運動麻痺及び
視力障害をともなうが、これらに限定されるものではな
い。日本での罹患率は人口10万につき３〜４で少ない
が、欧米ではこの数10倍に達し、遺伝的要因が本症の発
症にからむと考えられている。しかしながら本症の原因
は不明である。本症の病巣では脱髄が生じ、マクロファ
ージなどの細胞の浸潤，ミエリンの破壊などが認められ
る。このため、MRI（magenetic recovance imaging）を
用いて本症の診断を行なうことは可能である。ところが
本症には根本的な治療薬がないためにひとたび発症する
と、寛解期と増悪期を繰り返しながら、本症が進行し続
けることが多い。本症の発症及び病態の推移をモニタリ
ングしうる特異的かつ簡便な検査法は今だに存在せず、
その開発が強く求められていた。
の年令層に好発する脱髄性疾患の代表的なものである。
臨床症状は中枢神経系の多発性病巣に起因するもであ
り、多彩である。多く手足のしびれなどの運動麻痺及び
視力障害をともなうが、これらに限定されるものではな
い。日本での罹患率は人口10万につき３〜４で少ない
が、欧米ではこの数10倍に達し、遺伝的要因が本症の発
症にからむと考えられている。しかしながら本症の原因
は不明である。本症の病巣では脱髄が生じ、マクロファ
ージなどの細胞の浸潤，ミエリンの破壊などが認められ
る。このため、MRI（magenetic recovance imaging）を
用いて本症の診断を行なうことは可能である。ところが
本症には根本的な治療薬がないためにひとたび発症する
と、寛解期と増悪期を繰り返しながら、本症が進行し続
けることが多い。本症の発症及び病態の推移をモニタリ
ングしうる特異的かつ簡便な検査法は今だに存在せず、
その開発が強く求められていた。
一方、TNF−αはマクロファージが産生するサイトカ
インの一種で、カケクチンとも呼ばれ、極めて多様の生
物学的活性を有する蛋白質である。その活性は、広く体
内の免疫系の活性化に作用する。
インの一種で、カケクチンとも呼ばれ、極めて多様の生
物学的活性を有する蛋白質である。その活性は、広く体
内の免疫系の活性化に作用する。
TNF−αの産生は、マクロファージにエンドトキシン
や細菌菌体などが作用し１）、誘導されるが、インター
リウキン１やガンマ・インタフェロンなどサイトカイン
により調節されている２）。TNF−αはクラスＩ主要組
織適合性抗原の特異的発現を促し３）、グラニュロサイ
トマクロファージコロニー刺激因子４）,IL−15）の産
生を誘導し、リポ蛋白リパーゼ活性を減少させ６）、腫
瘍細胞７）及び血管内皮細胞８）を障害し、内因性の発
熱因子９）として働くなど多くの活性を有している。
や細菌菌体などが作用し１）、誘導されるが、インター
リウキン１やガンマ・インタフェロンなどサイトカイン
により調節されている２）。TNF−αはクラスＩ主要組
織適合性抗原の特異的発現を促し３）、グラニュロサイ
トマクロファージコロニー刺激因子４）,IL−15）の産
生を誘導し、リポ蛋白リパーゼ活性を減少させ６）、腫
瘍細胞７）及び血管内皮細胞８）を障害し、内因性の発
熱因子９）として働くなど多くの活性を有している。
１）［E.A.Carswellら,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,72,36
66（1975）］ ２）［R.Philipら,Nature,323,86（1986）］ ３）［T.Collinら,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,83,446（1
986）］ ４）［L.Luら,J.Immunol.,141,201（1988）］ ５）［Nawrothら,J.Exp,Med.163,1383（1986）］ ６）［B.Beutlerら,Nature 320,584（1987）］ ７）［L.Helsonら,Nature 258,731（1975）］ ８）［N.Satoら,J.Natl.Cancer Inst.76,1113（198
6）］ ９）［Dinarelloら,J.Exp.Med.163,1433（1986）］ このように多様な活性を有するTNF−αは、感染に対
する生体防御機構そして各種疾患における免疫系の作動
において中心的役割を果たしている可能性が考えられ、
その血液等体液中の量の測定に大きな関心が寄せられて
いた。
66（1975）］ ２）［R.Philipら,Nature,323,86（1986）］ ３）［T.Collinら,Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,83,446（1
986）］ ４）［L.Luら,J.Immunol.,141,201（1988）］ ５）［Nawrothら,J.Exp,Med.163,1383（1986）］ ６）［B.Beutlerら,Nature 320,584（1987）］ ７）［L.Helsonら,Nature 258,731（1975）］ ８）［N.Satoら,J.Natl.Cancer Inst.76,1113（198
6）］ ９）［Dinarelloら,J.Exp.Med.163,1433（1986）］ このように多様な活性を有するTNF−αは、感染に対
する生体防御機構そして各種疾患における免疫系の作動
において中心的役割を果たしている可能性が考えられ、
その血液等体液中の量の測定に大きな関心が寄せられて
いた。
ある種の病態において血液等体液中のTNF−α量が増
加しているということは既に報告されはじめている。古
川らは、川崎病において血清中TNF−α量が増加してい
るのを認め10）、BeutlerらはTNF−αがエンドトキシン
ショックのメディエーターであると報告した11）。また
Scuderiらは原虫感染12）、Mauryらは腎移植における拒
絶反応13）、Waageらは髄膜炎14）、Balkwillらは悪性
腫瘍15）で、TNF−αの血中レベルが上昇していること
を報告した。
加しているということは既に報告されはじめている。古
川らは、川崎病において血清中TNF−α量が増加してい
るのを認め10）、BeutlerらはTNF−αがエンドトキシン
ショックのメディエーターであると報告した11）。また
Scuderiらは原虫感染12）、Mauryらは腎移植における拒
絶反応13）、Waageらは髄膜炎14）、Balkwillらは悪性
腫瘍15）で、TNF−αの血中レベルが上昇していること
を報告した。
10）［S.Furukawaら,Clin.Immun.Immnopathol.48,247
（1988）］ 11）［B.Beutlerら,Nature,320,584（1986）］ 12）P.Scuderiら,The Lancet,December 13，（1986）p.
1364］ 13）［P.J.Mauryら,J.Exp.Med.,166,1137（1987）］ 14）［A.Waageら,The Lancet,February 14,（1987）p.3
55］ 15）［F.R.Balkwillら,The Lancet,（1987）ii,1229］ このようなTNF−αの生物活性にかんがみ、本発明者
らは多発性硬化症におけるTNF−αの関与の可能性につ
いて検討した。本症病変部では、マクロファージの浸潤
が認められること、また炎症像を呈すること、本症発症
に免疫系の関与が示唆される事実が多くあることなどの
理由から、本症病変局所を含んで貯留される髄液中にTN
F−αが存在する可能性が高いと考えるに至った。
（1988）］ 11）［B.Beutlerら,Nature,320,584（1986）］ 12）P.Scuderiら,The Lancet,December 13，（1986）p.
1364］ 13）［P.J.Mauryら,J.Exp.Med.,166,1137（1987）］ 14）［A.Waageら,The Lancet,February 14,（1987）p.3
55］ 15）［F.R.Balkwillら,The Lancet,（1987）ii,1229］ このようなTNF−αの生物活性にかんがみ、本発明者
らは多発性硬化症におけるTNF−αの関与の可能性につ
いて検討した。本症病変部では、マクロファージの浸潤
が認められること、また炎症像を呈すること、本症発症
に免疫系の関与が示唆される事実が多くあることなどの
理由から、本症病変局所を含んで貯留される髄液中にTN
F−αが存在する可能性が高いと考えるに至った。
c.発明の目的 以上のように、本発明は多発性硬化症の判定方法及び
その重篤度の判定方法を提供することにある。
その重篤度の判定方法を提供することにある。
d.発明の構成 そこで本発明者らは多発性硬化症の種々の病態にある
患者より髄液を採取し、他の神経疾患患者より採取した
髄液と併せてTNF−αの高感度定量的測定を行なったと
ころ、多発性硬化症患者髄液中に他の神経疾患に比し高
値にTNF−αが存在すること、さらに寛解期に比べ増悪
期でTNFが増加することを認め本症の病態の変化をモニ
タリングしうることを見出し、本発明に至った。
患者より髄液を採取し、他の神経疾患患者より採取した
髄液と併せてTNF−αの高感度定量的測定を行なったと
ころ、多発性硬化症患者髄液中に他の神経疾患に比し高
値にTNF−αが存在すること、さらに寛解期に比べ増悪
期でTNFが増加することを認め本症の病態の変化をモニ
タリングしうることを見出し、本発明に至った。
すなわち本発明は下記の発明を包含する。
（１）ヒト髄液中のヒト腫瘍壊死因子を測定することに
よる多発性硬化症の判定方法。
よる多発性硬化症の判定方法。
（２）ヒト髄液中のヒト腫瘍壊死因子を測定することに
よる多発性硬化症の重篤度の判定方法。
よる多発性硬化症の重篤度の判定方法。
以下、本発明について更に詳細に説明する。
＜髄液検体の調製＞ 通常行なわれる腰椎穿刺により採取された髄液をその
まま測定に用いればよい。もし測定までに時間を要する
場合には、採取後できるだけ速やかに凍結し、−20℃以
下、保存が長期に及ぶ場合、望ましくは−70℃以下に保
存し、融解後測定に用いればよい。検体の凍結融解は繰
り返さない方が望ましい。
まま測定に用いればよい。もし測定までに時間を要する
場合には、採取後できるだけ速やかに凍結し、−20℃以
下、保存が長期に及ぶ場合、望ましくは−70℃以下に保
存し、融解後測定に用いればよい。検体の凍結融解は繰
り返さない方が望ましい。
＜TNF−αの測定＞ TNF−αを特異的かつ高感度に定量できるものであれ
ば、TNF−αの測定は特に方法を選ばない。ただし１〜1
00pg/ml程度の濃度のTNFが定量的に測定できる方法であ
ることが、本症の病態を判定するためにTNF−αを測定
する上において望ましい。またバイオアッセイを用いる
場合においては、活性がTNF−αによるものであること
を抗TNF抗体による中和実験等で確認しておくことが望
ましい。
ば、TNF−αの測定は特に方法を選ばない。ただし１〜1
00pg/ml程度の濃度のTNFが定量的に測定できる方法であ
ることが、本症の病態を判定するためにTNF−αを測定
する上において望ましい。またバイオアッセイを用いる
場合においては、活性がTNF−αによるものであること
を抗TNF抗体による中和実験等で確認しておくことが望
ましい。
望ましくは、先に出願された特許出願（特開平３−13
864号：平成１年６月12日出願：発明の名称“TNF−αの
測定方法、キット及び診断方法”）に記載の方法によっ
て測定するのがよいが、この方法と同等もしくはそれ以
上の感度及び特異性を有する方法であればよい。
864号：平成１年６月12日出願：発明の名称“TNF−αの
測定方法、キット及び診断方法”）に記載の方法によっ
て測定するのがよいが、この方法と同等もしくはそれ以
上の感度及び特異性を有する方法であればよい。
＜多発性硬化症の判定＞ 本症の判定は、髄液中のTNF−αの濃度を測定するこ
とによりその一助とすることができる。すなわち本症で
は他の神経疾患と比較して高濃度にTNF−αが検出さ
れ、また、TNF−α濃度が高い程、本症の病態が増悪し
ている傾向がある。
とによりその一助とすることができる。すなわち本症で
は他の神経疾患と比較して高濃度にTNF−αが検出さ
れ、また、TNF−α濃度が高い程、本症の病態が増悪し
ている傾向がある。
e.発明の効果 本発明によれば、多発性硬化症の病態のモニタリング
が可能となり、免疫抑制剤，抗炎症剤などで本症におい
て用いられる薬剤投与の目安及び同薬剤の治療効果の判
定の一助とすることができるようになった。
が可能となり、免疫抑制剤，抗炎症剤などで本症におい
て用いられる薬剤投与の目安及び同薬剤の治療効果の判
定の一助とすることができるようになった。
f.実施例 以下、実施例を掲げて、本発明について詳細に説明す
るのが、本発明は以下の実施例に限定されるものではな
い。
るのが、本発明は以下の実施例に限定されるものではな
い。
（多発性硬化症及び他の神経疾患患者髄液中のTNF−α
濃度の測定） 多発性硬化症患者26例、うち再発型18例（増悪期12
例、寛解期６例）、慢性進行型８例、他の神経疾患患者
12例（ポリニューロパシー７例、脳血管障害５例）につ
き、髄液を採取し、すみやかに凍結保存した。
濃度の測定） 多発性硬化症患者26例、うち再発型18例（増悪期12
例、寛解期６例）、慢性進行型８例、他の神経疾患患者
12例（ポリニューロパシー７例、脳血管障害５例）につ
き、髄液を採取し、すみやかに凍結保存した。
TNF−αの定量測定直前に融解し、先に出願された特
許出願（特開平３−13864号に平成１年６月12日出願：
発明の名称“TNF−αの測定方法、キット及び診断方
法”）に記載された方法に従ってTNF−αの定量的測定
を行なった。
許出願（特開平３−13864号に平成１年６月12日出願：
発明の名称“TNF−αの測定方法、キット及び診断方
法”）に記載された方法に従ってTNF−αの定量的測定
を行なった。
すなわち、髄液検体50μｌを用いて、蛍光基質を用い
た二抗体法によるTNF−αの酵素免疫測定方法（感度限
界3.4pg/ml）によりTNF−αの定量測定を行なった。結
果をまとめて下記表に示す。
た二抗体法によるTNF−αの酵素免疫測定方法（感度限
界3.4pg/ml）によりTNF−αの定量測定を行なった。結
果をまとめて下記表に示す。
＜患者髄液中のTNF−α量の測定＞ 上記表により、多発性硬化症患者髄液中のTNF−α濃
度は、他の神経疾患に比して危険率１％以内で、有意に
高値を示し、また本症のうち再発型では、寛解期に比べ
増悪期にTNF−αが危険率0.1％以内で有意に増加してい
たことがわかった。
度は、他の神経疾患に比して危険率１％以内で、有意に
高値を示し、また本症のうち再発型では、寛解期に比べ
増悪期にTNF−αが危険率0.1％以内で有意に増加してい
たことがわかった。
したがって本発明による髄液中のTNF−αの測定によ
り、多発性硬化症の判定及び重篤度の判定、病態のモニ
タリングに極めて有効である。
り、多発性硬化症の判定及び重篤度の判定、病態のモニ
タリングに極めて有効である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 平２−1552（ＪＰ，Ａ) 特表 平１−503331（ＪＰ，Ａ) Ｃｌｉｍｉｃａｌ ＆ Ｅｘｐｅｒｉ ｍｅｎｔａｌ Ｔｍｍｕｎｏｌｏｇｙ, 79（１），Ｐ15−20，（1990)
Claims (2)
- 【請求項１】ヒト髄液中のヒト腫瘍壊死因子を測定する
ことによる多発性硬化症の判定方法。 - 【請求項２】ヒト髄液中のヒト腫瘍壊死因子を測定する
ことによる多発性硬化症の重篤度の判定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2008047A JP2543606B2 (ja) | 1990-01-17 | 1990-01-17 | 多発性硬化症の判定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2008047A JP2543606B2 (ja) | 1990-01-17 | 1990-01-17 | 多発性硬化症の判定方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03211461A JPH03211461A (ja) | 1991-09-17 |
| JP2543606B2 true JP2543606B2 (ja) | 1996-10-16 |
Family
ID=11682429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2008047A Expired - Lifetime JP2543606B2 (ja) | 1990-01-17 | 1990-01-17 | 多発性硬化症の判定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2543606B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP5117336B2 (ja) * | 2008-09-18 | 2013-01-16 | 国立大学法人 千葉大学 | 多発性硬化症またはｎｍｏの検査マーカーの測定方法 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0288088B1 (en) * | 1987-04-24 | 1994-03-09 | Teijin Limited | Detection of tumor necrosis factor; monoclonal antibody and kit |
-
1990
- 1990-01-17 JP JP2008047A patent/JP2543606B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Ｃｌｉｍｉｃａｌ＆ＥｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌＴｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，７９（１），Ｐ１５−２０，（１９９０） |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH03211461A (ja) | 1991-09-17 |
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Legal Events
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