JP2522970B2 - Test piece for determination of creatinine in body fluid and method for producing the same - Google Patents
Test piece for determination of creatinine in body fluid and method for producing the sameInfo
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Description
【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、尿や血清等の体液中に存在するクレアチン
を定量するための試験片及びその製法に関するものであ
る。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a test piece for quantifying creatine present in body fluids such as urine and serum, and a method for producing the same.
［従来技術］ クレアチニンは、クレアチンの脱水物でクレアチンが
クレアチンリン酸となり筋収縮のエネルギー源として利
用される際の最終代謝物である。生成されたクレアチニ
ンは、腎糸球体で過された後、再吸収されることなく
尿中に***される。[Prior Art] Creatinine is a final metabolite when creatine becomes a creatine phosphate in a dehydrated product of creatine and is used as an energy source for muscle contraction. The produced creatinine is excreted in the urine without being reabsorbed after being passed through the renal glomerulus.
体液中クレアチニンの定量は、重度の筋疾患、あるい
は腎炎、腎不全等の各種腎疾患の診断に有用である。The quantification of creatinine in body fluids is useful for diagnosing severe muscle diseases or various renal diseases such as nephritis and renal failure.
更に、１日当りの尿中へのクレアチニン***量は、食
事内容、運動量、尿量等による影響を受けにくいことが
知られている。したがって随時尿（１日のうち任意の時
間に１回だけ採取した尿）中のクレアチニン量を定量す
ることによって、その随時尿の１日の総尿量に対する割
合の推測が可能となる。尿中クレアチニンのこのような
特性を利用することにより、繁雑で被検者に大きな負担
を強いる蓄尿が必要となる蛋白質、電解質、ホルモン、
薬物等の１日当りの尿中総***量を、随時尿を試料とし
て推測することができる。Further, it is known that the amount of creatinine excreted into urine per day is not easily influenced by the dietary content, exercise amount, urine volume and the like. Therefore, by quantifying the amount of creatinine in the urine at any time (the urine collected only once at an arbitrary time during the day), it is possible to estimate the ratio of the occasional urine to the total urine amount per day. By utilizing such characteristics of creatinine in urine, proteins, electrolytes, hormones, which require complicated urine accumulation that puts a heavy burden on the subject,
The total daily urinary excretion of drugs and the like can be estimated using urine as a sample at any time.
クレアチニンの定量方法に関しては、米国特許第3,55
7,018号、並びに同第3,705,013号明細書にいくつかの従
来技術が開示されている。中でもアルカリ性ピクリン酸
とクレアチニンの結合によって生じる赤−黄橙色のクレ
アチニンピクレートを比色定量するいわゆるヤッフェ法
［ツァイトシュリフトフェア フィジカリシェ ケミエ
（Z.Physol.Chem.）41;223,1904］は、操作が簡便で充
分な感度を有するため現在も繁用されている。Regarding the method for quantifying creatinine, see US Pat.
Some prior arts are disclosed in 7,018, as well as in 3,705,013. Among them caused by the binding of the alkaline picrate and creatinine red - so-called Jaffe method for colorimetric creatinine pixels rate of yellow-orange [Zeit Gerhard lift Fair Fijikarishe Chemie 41 (Z.Physol.Chem.); 223,1904], the operation However, it is still widely used because it is simple and has sufficient sensitivity.
その他にも比色定量法として3,5−ジニトロ安息香酸
を用いるベネジクト−ベウア（Benedict-Behre）法［ジ
ャーナル オブ バイオロジカル ケミストリイ（J.Bi
ol.Chem.）114;515,1936］、1,4−ナフトキノン−２−
スルホネート法［ジャーナル オブ バイオロジカルケ
ミストリイ（J.Biol.Chem.）233;530,1958］やクレアチ
ナーゼを利用した酵素法［クリニカル ケミストリー
（Clin.Chem.）19;632,1973］等が挙げられるが、いず
れもヤッフェ法に比較して感度、操作性、経済性等の点
に問題を有するめに普及していないのが現状である。こ
れらクレアチニンの定量法については、「臨床検査技術
全書・臨床化学検査II」（石井暢編集・医学書院発行、
1975）57頁に詳しいので参照されたい。In addition, the Benedict-Behre method using 3,5-dinitrobenzoic acid as a colorimetric method [J. Biological Chemistry (J. Bi
ol.Chem.) 114 ; 515,1936], 1,4-naphthoquinone-2-
The sulfonate method [Journal of Biological Chemistry (J.Biol.Chem.) 233 ; 530,1958] and the enzyme method using creatinase [Clinical Chemistry (Clin.Chem.) 19 ; 632,1973] are examples. However, none of them is in widespread use because they have problems in sensitivity, operability, economy, etc. as compared with the Jaffe method. For the quantification method of these creatinines, see "Complete Clinical Laboratory Techniques / Chemical Chemistry II" (edited by Nobu Ishii, published by Ikusho Shoin,
1975) See page 57 for details.
一方、近年体液中成分の測定法として試薬成分や紙
や多孔性フィルム等の吸収性担体に担持させてなる試験
片を利用する方法が、試薬の安定性や操作性に優れるた
め注目されている。クレアチニン測定用試験片について
もベネジクト−ベウア法を応用したもの［クリニカル
ケミストリイ（Clin.Chem.）27;1034,1981］や酵素的反
応系を利用したもの［日本臨床検査自動化学会会誌10;5
6,1985、及び臨床検査・機器・試薬５;1158,1985］が知
られている。On the other hand, in recent years, a method of using a test piece supported by an absorbent carrier such as a reagent component or paper or a porous film as a method for measuring a component in a body fluid has attracted attention because of excellent stability and operability of the reagent. . The test piece for creatinine measurement is also applied to the Benedict-Beuer method [Clinical
Chemistry (Clin.Chem.) 27 ; 1034,1981] or using an enzymatic reaction system [Journal of the Japan Society for Clinical Laboratory Automation 10 ; 5
6,1985, and clinical tests / equipment / reagents 5 ; 1158,1985] are known.
［発明が解決しようとする問題点］ 前述のクレアチニン測定用試験片は、血中クレアチニ
ン濃度測定用として市販されているものであるが、原理
的には尿中クレアチニンの測定に応用することも不可能
ではない。しかしながら、尿中クレアチニン濃度は血中
濃度の数十倍から高いときには数百倍にまで及ぶことが
有り、更に尿のpHは血液のpHとちがって大きく変動する
ので、反応系に好適なpHを確保するために測定に先だっ
て尿の希釈が必要とされている［クリニカル ケミスト
リイ（Clin.Chem.）５;1900,1985］。[Problems to be Solved by the Invention] The above-mentioned test piece for measuring creatinine is commercially available for measuring blood creatinine concentration, but in principle, it cannot be applied to measurement of creatinine in urine. Not possible. However, the urinary creatinine concentration may range from several tens of times higher than the blood concentration to several hundred times higher, and the pH of urine varies greatly unlike the pH of blood, so a pH suitable for the reaction system should be adjusted. Urine dilution is required prior to measurement to ensure [Clinical Chemistry 5 ; 1900,1985].
被検尿を希釈しないでクレアチニンを測定する手段の
一つとして、予め試薬組成中にアルカリ成分を混入し反
応に好適なpHを確保することが考えられる。しかし実際
にはこれら反応系に必要なアルカリ成分は試験片に常用
される吸収性担体を変性させてしまうため、それを吸収
性担体に含浸させてクレアチニン定量用試験片を製造す
ることは困難であった。As one of the means for measuring creatinine without diluting the urine to be tested, it is conceivable to mix an alkaline component in the reagent composition in advance to ensure a pH suitable for the reaction. However, in reality, the alkaline components necessary for these reaction systems modify the absorbent carrier that is commonly used for test pieces, so it is difficult to impregnate it with the absorbent carrier to produce creatinine quantitative test pieces. there were.
［問題点を解決するための手段］ 本発明はアルカリ成分の吸収性担体への適用を可能と
するものである。すなわち本発明は、少なくともアルカ
リ性下クレアチニンと反応して呈色する試薬成分、アル
カリ成分、及びアルカリ可溶性カルボン酸誘導体ポリマ
ーを含んでなることを特徴とする体液中のクレアチニン
定量用試験片、並びに吸収性担体を少なくともアルカリ
成分とアルカリ可溶性カルボン酸誘導体ポリマーを含む
水系溶媒に浸漬し乾燥後、少なくともアルカリ性下クレ
アチニンと反応して呈色する試薬成分を含む有機溶媒に
浸漬し乾燥することを特徴とする体液中のクレアチニン
定量用試験片の製法である。[Means for Solving Problems] The present invention enables application of an alkaline component to an absorbent carrier. That is, the present invention is a test piece for creatinine quantification in a body fluid, which comprises at least a reagent component that is colored by reacting with creatinine under alkaline, an alkali component, and an alkali-soluble carboxylic acid derivative polymer, and absorbability. Body fluid characterized by immersing the carrier in an aqueous solvent containing at least an alkali component and an alkali-soluble carboxylic acid derivative polymer and drying it, and then immersing it in an organic solvent containing a reagent component that reacts with creatinine under alkaline to develop color It is a method for producing a test piece for quantitative determination of creatinine.
本発明におけるアルカリ性下クレアチニンと反応して
呈色する試薬成分としては、ヤッフェ法におけるピクリ
ン酸やベネジクト−ベウア法における3,5−ジヒドロキ
シ安息香酸、並びにこれらの誘導体等が挙げられる。こ
の他試薬成分には必要に応じて後に詳述するような湿潤
剤や安定剤等を添加することもできる。Examples of the reagent component in the present invention which develops color by reacting with alkaline creatinine include picric acid in the Jaffe method, 3,5-dihydroxybenzoic acid in the Benedicto-Beuer method, and derivatives thereof. In addition to these, if necessary, wetting agents, stabilizers and the like, which will be described in detail later, can be added to the reagent components.
本発明のアルカリ成分は、クレアチニンと前記試薬成
分との反応に好適なpH範囲の提供を目的として用いられ
るものである。好適なpHとは、12から13である。このよ
うなpH範囲を提供しうる物質としては、水酸化ナトリウ
ム、水酸化カリウム、水酸化リチウム等従来の液体状態
の反応系に用いられていた種々の強アルカリ等をはじめ
とするアルカリ物質を使用することができる。The alkaline component of the present invention is used for the purpose of providing a pH range suitable for the reaction between creatinine and the reagent component. A suitable pH is 12 to 13. As a substance capable of providing such a pH range, an alkali substance such as sodium hydroxide, potassium hydroxide or lithium hydroxide, which has been used in a conventional liquid-state reaction system, is used. can do.
本発明において前記アルカリ成分と組み合わせて用い
られるカルボン酸誘導体ポリマーは、前述の強アルカリ
による吸収性担体のアルカリ変性防止を一つの目的とし
て用いられるものである。本発明で使用しうるカルボン
酸誘導体ポリマーは、アルカリ可溶性のものであれば特
に限定されるものではない。具体的には無水マレイン−
イソブチレン共重合体、無水マレイン酸−スチレン共重
合体、無水マレイン酸−酢酸ビニル共重合体、無水マレ
イン酸−ブタジエン共重合体、無水マレイン酸−塩化ビ
ニル共重合体、無水マレイン酸−イソプレン共重合体、
及び無水マレイン酸−塩化ビニルデン共重合体等が挙げ
られる。In the present invention, the carboxylic acid derivative polymer used in combination with the alkali component is used for one purpose to prevent the alkali denaturation of the absorbent carrier due to the strong alkali described above. The carboxylic acid derivative polymer usable in the present invention is not particularly limited as long as it is alkali-soluble. Specifically, anhydrous malein-
Isobutylene copolymer, maleic anhydride-styrene copolymer, maleic anhydride-vinyl acetate copolymer, maleic anhydride-butadiene copolymer, maleic anhydride-vinyl chloride copolymer, maleic anhydride-isoprene copolymer Coalescing,
And maleic anhydride-vinyldene chloride copolymer and the like.
本発明によるクレアチニン定量用試験片は、試験片上
での呈色を均一化させるための浸潤剤、あるいは試薬成
分を安定化させる安定剤等を必要に応じて利用すること
ができる。このような湿潤剤としては、アニオン性、ノ
ニオン性の界面活性剤が特に適している。The creatinine quantification test strip according to the present invention may utilize a wetting agent for uniformizing the coloration on the test strip, a stabilizer for stabilizing the reagent components, or the like, if necessary. Anionic and nonionic surfactants are particularly suitable as such wetting agents.
本発明によるクレアチニン定量用試験片は、吸収性担
体のみならずフィルム形成剤を利用することによって調
製することもできる。すなわちフィルム形成剤をアルカ
リ成分、カルボン酸誘導体ポリマー及びクレアチニンと
反応して呈色する試薬成分と混合し、適当な支持体上に
塗布した後固化させるのである。The test piece for creatinine quantification according to the present invention can be prepared by utilizing not only an absorbent carrier but also a film forming agent. That is, a film-forming agent is mixed with an alkali component, a carboxylic acid derivative polymer and a reagent component that reacts with creatinine to develop a color, and the mixture is coated on a suitable support and then solidified.
本発明によるクレアチニン定量用試験片は、その呈色
の程度を反射率測定によって読み取り予め作成しておい
た検量線と比較してクレアチニンの定量を行なうことが
できる。また呈色程度を予め作成しておいたカラーチャ
ートと肉眼的に比較することによって、半定量を行なう
こともできる。つづいて本発明による試験片の製法につ
いて述べる。The creatinine quantification test piece according to the present invention can quantify creatinine by reading the degree of coloration by reflectance measurement and comparing it with a calibration curve prepared in advance. It is also possible to perform semi-quantitative determination by visually comparing the degree of color development with a color chart created in advance. Next, a method for producing the test piece according to the present invention will be described.
本発明による体液中のクレアチニン定量用試験片の製
法における溶媒中の各種成分は、カルボン酸誘導体ポリ
マー５〜20重量％、アルカリ成分は使用したカルボン酸
誘導体ポリマーのカルボン酸残基に対して1.0〜1.5倍モ
ル程度、又クレアチニンと反応して呈色する試薬成分は
0.5〜５重量％を使用するとよい。Various components in the solvent in the method for producing a test piece for quantifying creatinine in body fluid according to the present invention are 5 to 20% by weight of a carboxylic acid derivative polymer, and an alkali component is 1.0 to carboxylic acid residue of the carboxylic acid derivative polymer used About 1.5 times the molar amount, and the reagent component that reacts with creatinine to develop color
It is advisable to use 0.5-5% by weight.
上記吸収性担体としては、紙、不織布、綿、ガラス
繊維等が挙げられるが、特に紙が好ましい。これら吸
収性担体を利用した本発明のクレアチニン定量用試験片
の製法の一例を、更に具体的に述べると以下のとおりで
ある。Examples of the absorbent carrier include paper, non-woven fabric, cotton, glass fiber and the like, and paper is particularly preferable. An example of the method for producing the test piece for creatinine quantification of the present invention using these absorptive carriers will be described in more detail below.
すなわち、まずアルカリ成分とカルボン酸誘導体を含
む水溶液に吸収性担体を浸漬後50〜80℃で乾燥させ、次
いで得られた吸収性担体をクレアチニンと反応して呈色
する試薬成分のアルコール溶液に再度浸漬した後40〜50
℃で乾燥させるのである。That is, first, the absorbent carrier is immersed in an aqueous solution containing an alkali component and a carboxylic acid derivative and then dried at 50 to 80 ° C., and then the resulting absorbent carrier is re-converted into an alcohol solution of a reagent component that reacts with creatinine to develop a color. 40-50 after soaking
It is dried at ℃.
このようにして得られた試験片は、適当な支持体上に
貼着すると取り扱いが容易な形態とすることができる。The test piece thus obtained can be made into a form that can be easily handled by sticking it on a suitable support.
［発明の作用］ 本発明におけるアルカリ成分とカルボン酸誘導体ポリ
マーの組み合わせは、アルカリ成分による吸収性担体の
変性を防止することによってアルカリ成分の利用を可能
とし、非希釈尿を試料とする場合にも反応に好適なpH範
囲を提供する作用を有する。[Operation of the Invention] The combination of the alkali component and the carboxylic acid derivative polymer in the present invention enables the alkali component to be used by preventing the absorbent carrier from being modified by the alkali component, and also when undiluted urine is used as a sample. It has the function of providing a pH range suitable for the reaction.
他方前記アルカリ成分は、保存期間中に大気中の二酸
化炭素を吸着して炭酸を生じ、結果としてpHの低下を引
き起こすという現象が観察される。前述のように反応に
好適なpH範囲は狭いので、このような現象は試薬成分の
性能劣化につながるものである。ところが予想外なこと
に、本発明で用いられるカルボン酸誘導体ポリマーは、
アルカリ成分による二酸化炭素の吸着を効果的に抑制す
ることが確認された。すなわち本発明におけるカルボン
酸誘導体ポリマーは、担体保護のみならず試験片自体の
保存安定性の向上にも寄与しているのである。On the other hand, it is observed that the alkaline component adsorbs carbon dioxide in the atmosphere during the storage period to generate carbonic acid, resulting in a decrease in pH. Since the pH range suitable for the reaction is narrow as described above, such a phenomenon leads to deterioration of the performance of the reagent components. However, unexpectedly, the carboxylic acid derivative polymer used in the present invention is
It was confirmed that the adsorption of carbon dioxide by the alkaline component was effectively suppressed. That is, the carboxylic acid derivative polymer in the present invention not only protects the carrier but also contributes to the improvement of the storage stability of the test piece itself.
アルカリ成分の二酸化炭素吸着によるpH低下防止につ
いては、ナトリウムイオンを含まない塩基性成分とアル
カリ保護ポリマーの使用が開示されている（特公昭61-6
340）。しかし本発明のカルボン酸誘導体ポリマーとア
ルカリ成分の組み合わせによる高いpH値の保持は、カル
ボン酸残基とアルカリ成分の間に生じる緩衝能によるも
のである。したがってアルカリ成分中のナトリウムの有
無は無関係である。Regarding the prevention of pH decrease due to the adsorption of carbon dioxide by the alkali component, the use of a basic component containing no sodium ion and an alkali protective polymer has been disclosed (Japanese Patent Publication No. 61-6).
340). However, the retention of a high pH value by the combination of the carboxylic acid derivative polymer of the present invention and the alkaline component is due to the buffering capacity generated between the carboxylic acid residue and the alkaline component. Therefore, the presence or absence of sodium in the alkaline component is irrelevant.
以下実施例により、本発明を更に詳細に説明する。 Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.
［実施例］ 実施例1. 下記の第１含浸液にクロマトグラフィー用紙（ワッ
トマン社製、3MM）を浸漬後、60℃で60分間乾燥し、次
いで得られた紙を下記の第２含浸液に浸漬し50℃で20
分間乾燥させてカルボン酸誘導体として無水マレイン酸
−イソブチレン共重合体を含むクレアチニン定量用試験
紙を得た。この試験紙をプラスチック製の板に両面テー
プで貼着した後、短冊状に裁断して巾5mm長さ80mmのプ
ラスチック片よりなる支持体の一端に５×5mmの試験紙
が貼着された形態の本発明によるクレアチニン定量用試
験片（以下試験片１とする）とした。[Examples] Example 1. Chromatography paper (manufactured by Whatman, 3MM) was immersed in the following first impregnating solution, dried at 60 ° C for 60 minutes, and then the obtained paper was changed to the following second impregnating solution. 20 at 50 ℃
After drying for a minute, a test paper for quantitative determination of creatinine containing a maleic anhydride-isobutylene copolymer as a carboxylic acid derivative was obtained. This test paper is attached to a plastic plate with double-sided tape, cut into strips, and a 5 x 5 mm test paper is attached to one end of a support made of a plastic piece with a width of 5 mm and a length of 80 mm. The test piece for creatinine determination according to the present invention (hereinafter referred to as test piece 1).
−第１含浸液− 無水マレイン −イソブチレン共重合体＊ 15.2g 水酸化ナトリウム 7.5g を蒸留水100mlで溶解する。-First Impregnation Solution- Maleic Anhydrous-Isobutylene Copolymer * 15.2 g Dissolve 7.5 g of sodium hydroxide in 100 ml of distilled water.
−第２含浸液− ピクリン酸 1.0g ラウリル硫酸ナトリウム 0.3g ポリビニルピロリドンK-30 0.5g をエタノール100mlで溶解する。＊ クラレイソプレンケミカル（株）製、イソバン（商品
名） 比較対象例として、上記実施例中の第１含浸液から無
水マレイン酸−イソブチレン共重合体を除いたものに
紙を浸漬しクレアチニン定量用試験紙を調製しようとし
たところ、乾燥工程においてアルカリ成分の作用で紙
繊維の変性が起こり、もはや使用に耐えないものになっ
てしまった。-Second Impregnation Solution- Picric acid 1.0 g Sodium lauryl sulfate 0.3 g Polyvinylpyrrolidone K-30 0.5 g is dissolved in 100 ml of ethanol. * Isoban (trade name) manufactured by Kuraray Isoprene Chemical Co., Ltd. As a comparative example, a test for quantitative determination of creatinine by immersing paper in a solution obtained by removing the maleic anhydride-isobutylene copolymer from the first impregnation liquid in the above example When trying to prepare the paper, the paper fiber was denatured by the action of the alkaline component in the drying process, and it was no longer usable.
試験片１を利用し、クレアチニン標準液により第１図
に示す検量線を作成した。なお測定操作は次のとおりで
ある。すなわち試験片１の試験紙上にクレアチニン標準
液を10μｌ滴下し、37℃で２分間放置した後色差計を用
いて495nmでの呈色を反射率（Ｒ∞）測定し、クベルカ
−ムンク（Kuberuka-Munk）式と呼ばれるK/S＝（１−Ｒ
∞）２/2R∞で反射率をK/S値換算する。Using the test piece 1, a calibration curve shown in FIG. 1 was created using a creatinine standard solution. The measurement operation is as follows. That is, 10 μl of the creatinine standard solution was dropped on the test paper of the test piece 1, left at 37 ° C. for 2 minutes, and then the color development at 495 nm was measured using a color difference meter to measure the reflectance (R∞), and the Kuberuka-Munk Munk) formula called K / S = (1-R
∞) Convert the reflectance into K / S value at 2 / 2R∞.
更に実際に尿を試料として、ヤッフェ法を応用した自
動分析用試薬705CRE栄研（栄研化学（株）製、商品名）
と試験片１によるクレアチニン定量値の相関をとると、 γ＝0.982 Ｙ＝1.008X−11.65 （Ｘ＝自動分析用試薬、Ｙ＝試験片１） と良好な相関を示した。なお自動分析用試薬は指定の方
法に従って、又試験片１は尿を試料とする他は検量線作
成時と同様の操作により測定を行なった。In addition, 705CRE Eiken (Eiken Chemical Co., Ltd., trade name) for automated analysis using the Jaffe method using urine as a sample
And the creatinine quantitative value by the test piece 1 were correlated with γ = 0.982 Y = 1.008X-11.65 (X = automatic analysis reagent, Y = test piece 1). The automatic analysis reagent was measured according to the designated method, and the test piece 1 was measured by the same operation as that for preparing the calibration curve except that urine was used as a sample.
実施例2. 各含浸液の組成を下記のように変更した他は実施例１
と同様の操作により、カルボン酸誘導体ポリマーとして
無水マレイン酸−イソブチレン共重合体を含む本発明に
よるクレアチニン定量用試験片（以下試験片２とする）
を得た。Example 2 Example 1 except that the composition of each impregnating liquid was changed as follows.
By the same operation as described above, a test piece for creatinine determination according to the present invention containing a maleic anhydride-isobutylene copolymer as a carboxylic acid derivative polymer (hereinafter referred to as test piece 2)
I got
−第１含浸液− 無水マレイン酸 −イソブチレン共重合体＊ 15.2g 水酸化ナトリウム 7.5g を蒸留水100mlで溶解する。-First impregnation liquid-Maleic anhydride-isobutylene copolymer * 15.2 g Dissolve 7.5 g of sodium hydroxide in 100 ml of distilled water.
−第２含浸液− 3.5−ジニトロ安息香酸 1.5g トゥイーン80 0.2g ヒドロキシプロピルセルロース 1.0g をエタノール100mlで溶解する。-Second impregnation solution-3.5-Dinitrobenzoic acid 1.5 g Tween 80 0.2 g Hydroxypropyl cellulose 1.0 g is dissolved in 100 ml of ethanol.
測定波長を560nmとする他は実施例１と同様の操作に
より検量線を作成したところ、試験片２は300mg/dlまで
直線性を有する検量線を与えた。また自動分析用試薬と
の相関についても、 γ＝0.958 Ｙ＝0.952X＋8.5 （Ｘ＝自動分析用試薬、Ｙ＝試験片２） と良好な相関を示した。A calibration curve was prepared in the same manner as in Example 1 except that the measurement wavelength was 560 nm. Test piece 2 gave a calibration curve having linearity up to 300 mg / dl. Also, regarding the correlation with the automatic analysis reagent, a good correlation was shown with γ = 0.958 Y = 0.952X + 8.5 (X = automatic analysis reagent, Y = test piece 2).
実施例3. 各含浸液の組成を下記のように変更した他は実施例１
と同様の操作により、カルボン酸誘導体ポリマーとして
無水マレイン酸−スチレン共重合体を含む本発明による
クレアチニン定量用試験片（以下試験片３とする）を得
た。Example 3 Example 1 except that the composition of each impregnating liquid was changed as follows.
By the same operation as above, a test piece for creatinine quantification (hereinafter referred to as test piece 3) according to the present invention containing a maleic anhydride-styrene copolymer as a carboxylic acid derivative polymer was obtained.
−第１含浸液− 無水マレイン酸 −スチレン共重合体＊ 16.0g 水酸化ナトリウム 8.8g を蒸留水100mlで溶解する。-First impregnation liquid-Maleic anhydride-Styrene copolymer * 16.0 g Dissolve 8.8 g of sodium hydroxide in 100 ml of distilled water.
−第２含浸液− ピクリン酸 1.0g トゥイーン80 0.2g ヒドロキシプロピルセルロース 1.0g をエタノール100mlで溶解する。＊ クラレインプレンケミカル（株）製、SMA−レジン
（商品名） 測定波長を490nmとする他は実施例１と同様の操作に
より検量線を作成したところ、試験片３は300mg/dlまで
直線性を有する検量線を与えた。また自動分析用試薬と
の相関についても、 γ＝0.972 Ｙ＝0.964X＋17.8 （Ｘ＝自動分析用試薬、Ｙ＝試験片３） と良好な相関を示した。-Second Impregnation Solution- Picric acid 1.0 g Tween 80 0.2 g Hydroxypropyl cellulose 1.0 g is dissolved in 100 ml of ethanol. * Clarrain Prene Chemical Co., Ltd., SMA-Resin (trade name) A calibration curve was prepared in the same manner as in Example 1 except that the measurement wavelength was 490 nm. Test piece 3 showed linearity up to 300 mg / dl. A calibration curve with is given. Regarding the correlation with the automatic analysis reagent, a good correlation was shown with γ = 0.972 Y = 0.964X + 17.8 (X = automatic analysis reagent, Y = test piece 3).
＊安定性試験 本発明による試験片の保存安定性を調べるために、次
の３つの条件下に試験片１を放置し、反応性の変化を調
査した。反応性の変化は、試料としてクレアチニン水溶
液（200mg/dl）10μｌを用いる他は実施例１における測
定操作と同様の操作により行なった。結果は第１表に示
すとおりである。* Stability test In order to investigate the storage stability of the test piece according to the present invention, the test piece 1 was allowed to stand under the following three conditions and the change in reactivity was investigated. The reactivity was changed by the same operation as that in Example 1 except that 10 μl of an aqueous creatinine solution (200 mg / dl) was used as a sample. The results are shown in Table 1.
・条件1:60℃で７日間保存 ・条件2:60℃14日間保存 ・条件3:25℃65％RHで５時間保存 ［発明の効果］ 本発明による体液中のクレアチニン定量用試験片は、
カルボン酸誘導体ポリマーを利用することでこれまで不
可能であった強アルカリ条件下での試験片上における反
応を可能とし、しかも保存性に優れた試験片を提供する
ものである。・ Condition 1: Store at 60 ℃ for 7 days ・ Condition 2: Store at 60 ℃ for 14 days ・ Condition 3: Store at 25 ℃ at 65% RH for 5 hours [Effects of the Invention] The test piece for quantifying creatinine in body fluid according to the present invention comprises:
By using a carboxylic acid derivative polymer, it is possible to perform a reaction on a test piece under a strong alkaline condition, which has been impossible so far, and to provide a test piece having excellent storage stability.
一方随時尿中のクレアチニン濃度は、尿の濃縮度や骨
格筋の発達度合いによって異なるが一般的には300mg/dl
以下である。本発明の試験片によって得られる検量線は
300mg/dlまでほぼ直線性を示しており、尿中クレアチニ
ンの定量に充分利用できるものであった。On the other hand, the creatinine concentration in urine at any time is generally 300 mg / dl, although it varies depending on the concentration of urine and the degree of skeletal muscle development.
It is the following. The calibration curve obtained by the test piece of the present invention is
It showed almost linearity up to 300 mg / dl, which was enough for quantification of creatinine in urine.
以上のように、本発明によれば保存性が高く、しかも
非希釈尿をも試料としうるクレアチニン定量用試験片の
提供が可能となる。As described above, according to the present invention, it is possible to provide a test piece for creatinine quantification, which has high preservability and can use undiluted urine as a sample.
第１図は、試験片１によって得られた検量線を示す。図
中、縦軸はK/S値を、横軸はクレアチニン濃度（mg/dl）
を示す。FIG. 1 shows a calibration curve obtained by the test piece 1. In the figure, the vertical axis is the K / S value and the horizontal axis is the creatinine concentration (mg / dl)
Indicates.
Claims (3)
応して呈色する試薬成分、アルカリ成分、及びアルカリ
可溶性カルボン酸誘導体ポリマーを含んでなることを特
徴とする体液中のクレアチニン定量用試験片1. A test piece for quantifying creatinine in a body fluid, which comprises at least a reagent component which develops color under alkaline reaction with creatinine, an alkali component, and an alkali-soluble carboxylic acid derivative polymer.
が、無水マレイン酸−イソブチレン共重合体、無水マレ
イン酸−スチレン共重合体、無水マレイン酸−酢酸ビニ
ル共重合体、無水マレイン酸−ブタジエン共重合体、無
水マレイン酸−塩化ビニル共重合体、無水マレイン酸−
イソプレン共重合体、及び無水マレイン酸−塩化ビニル
デン共重合体からなる群より選択されることを特徴とす
る特許請求の範囲第１項に記載の体液中のクレアチニン
定量用試験片2. An alkali-soluble carboxylic acid derivative polymer is a maleic anhydride-isobutylene copolymer, a maleic anhydride-styrene copolymer, a maleic anhydride-vinyl acetate copolymer, a maleic anhydride-butadiene copolymer, Maleic anhydride-vinyl chloride copolymer, maleic anhydride-
A test piece for quantifying creatinine in a body fluid according to claim 1, wherein the test piece is selected from the group consisting of an isoprene copolymer and a maleic anhydride-vinylidene chloride copolymer.
ルカリ可溶性カルボン酸誘導体ポリマーを含む水系溶媒
に浸漬し乾燥後、少なくともアルカリ性下クレアチニン
と反応して呈色する試薬成分を含む有機溶媒に浸漬し乾
燥することを特徴とする体液中のクレアチニン定量用試
験片の製法3. An absorbent carrier is dipped in an aqueous solvent containing at least an alkali component and an alkali-soluble carboxylic acid derivative polymer and dried, and then dipped in an organic solvent containing at least an alkaline reagent component that develops color by reacting with creatinine under an alkaline condition and dried. Of a test piece for quantifying creatinine in body fluids characterized by:
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|---|---|---|---|
| JP62287261A JP2522970B2 (en) | 1987-11-16 | 1987-11-16 | Test piece for determination of creatinine in body fluid and method for producing the same |
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