JP2506370B2 - 増殖性濾過性病原体の不活化法 - Google Patents
増殖性濾過性病原体の不活化法Info
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Description
【発明の詳細な説明】 本発明は、治療または予防的に使用される免疫グログ
リンＧ含有血液画分中の増殖性濾過性病原体を、場合に
より温度を高めることにより不活化する方法に関するも
のである。
リンＧ含有血液画分中の増殖性濾過性病原体を、場合に
より温度を高めることにより不活化する方法に関するも
のである。
血液製剤中の増殖性濾過性病原体の不活化について
は、広範な文献を入手することができる。この様な種々
の方法は、 −場合により安定化物質を添加して、血液製剤水溶液を
加熱すること、 −血液製剤を有機溶媒で処理すること、 −血液製剤を乾燥状態で加熱すること を包含する。
は、広範な文献を入手することができる。この様な種々
の方法は、 −場合により安定化物質を添加して、血液製剤水溶液を
加熱すること、 −血液製剤を有機溶媒で処理すること、 −血液製剤を乾燥状態で加熱すること を包含する。
不活化のこれらの方法では、製剤の感染が中和され、
一方その生物学的活性は大部分維持されることが望まれ
る。この目標はこれまで満足な程度に達成されていなか
った。第１に、これらの方法は免疫グロブリンを含有し
ている溶液に使用し得ないか、またはわずかに使用し得
るだけである。
一方その生物学的活性は大部分維持されることが望まれ
る。この目標はこれまで満足な程度に達成されていなか
った。第１に、これらの方法は免疫グロブリンを含有し
ている溶液に使用し得ないか、またはわずかに使用し得
るだけである。
詳細には、先行技術の一部として以下の文献を挙げる
ことができる： ヨーロッパ特許出願第0,139,975号は、血漿溶液をカ
ルシウムイオンおよびスクロースの存在下、70℃までの
温度に加熱するヒト血漿のパスツール殺菌法に関する。
ことができる： ヨーロッパ特許出願第0,139,975号は、血漿溶液をカ
ルシウムイオンおよびスクロースの存在下、70℃までの
温度に加熱するヒト血漿のパスツール殺菌法に関する。
ヨーロッパ特許第0,053,338号は、血液製剤の水溶液
をカルシウムイオン、および所望によりアミノ酸および
／または糖類または糖アルコールの存在下、100℃まで
の温度で加熱する第IXおよび第Ｘ因子を含有している製
剤中の肝炎ウイルスの不活化法を記載している。
をカルシウムイオン、および所望によりアミノ酸および
／または糖類または糖アルコールの存在下、100℃まで
の温度で加熱する第IXおよび第Ｘ因子を含有している製
剤中の肝炎ウイルスの不活化法を記載している。
ヨーロッパ特許出願第0,035,204号には、第VIII因
子、フィブロネクチン、グロブリン、フィブリノーゲン
およびその他のタンパク質を含有していることもある水
性タンパク質溶液の不活化法が記載されており、ここで
は、その組成物をポリオールと混合し、60〜75℃に加熱
している。
子、フィブロネクチン、グロブリン、フィブリノーゲン
およびその他のタンパク質を含有していることもある水
性タンパク質溶液の不活化法が記載されており、ここで
は、その組成物をポリオールと混合し、60〜75℃に加熱
している。
ヨーロッパ特許出願第0,077,870号には、第VIII因子
を含有している水溶液をアミノ酸、単糖類、少糖類、糖
アルコール類および炭素原子数３〜10の炭化水素カルボ
ン酸類またはオキシ炭化水素カルボン酸と一緒に50〜80
℃に加熱する不活化法が開示されている。
を含有している水溶液をアミノ酸、単糖類、少糖類、糖
アルコール類および炭素原子数３〜10の炭化水素カルボ
ン酸類またはオキシ炭化水素カルボン酸と一緒に50〜80
℃に加熱する不活化法が開示されている。
PCT出願WO83/04371号には、ウイルスを含有している
製剤を４〜40℃の温度においてハロゲン化炭化水素、特
にクロロホルムで処理する肝炎ウイルスの不活化法が記
載されている。
製剤を４〜40℃の温度においてハロゲン化炭化水素、特
にクロロホルムで処理する肝炎ウイルスの不活化法が記
載されている。
PCT出願（公開）WO82/03871号は、血液凝固酵素組成
物に含まれている感染性ウイルスを不活化するために、
該組成物を乾燥条件下、即ち５重量％（0.05）以下の水
分で定義される様な乾燥状態で、場合により例えばアミ
ノ酸および／または糖類の様な安定化剤を添加して加熱
する該組成物の処理方法を記載している。
物に含まれている感染性ウイルスを不活化するために、
該組成物を乾燥条件下、即ち５重量％（0.05）以下の水
分で定義される様な乾燥状態で、場合により例えばアミ
ノ酸および／または糖類の様な安定化剤を添加して加熱
する該組成物の処理方法を記載している。
日本出願51−118825号には、免疫グロブリン含有溶液
を中性アミノ酸および単糖類の存在下、60℃で熱処理し
て肝炎ウイルスを不活化するIgA（免疫グロブリンＡ）
およびIgM（免疫グロブリンＭ）の熱的安定化法が記載
されている。
を中性アミノ酸および単糖類の存在下、60℃で熱処理し
て肝炎ウイルスを不活化するIgA（免疫グロブリンＡ）
およびIgM（免疫グロブリンＭ）の熱的安定化法が記載
されている。
最後に、免疫グロブリンＧを含有している静脈内投与
用画分の製造方法が記載されているヨーロッパ特許出願
第0,122,909号について述べる。この方法では、血管作
用またはロイコペニン作用、即ち不適合反応の原因とな
る不純物を除去するために、免疫グロブリンＧ含有画分
を水不溶性担体と結合した膵臓酵素で処理する。この文
献では、病原体の作用を不活化することについては何ら
述べられていない。
用画分の製造方法が記載されているヨーロッパ特許出願
第0,122,909号について述べる。この方法では、血管作
用またはロイコペニン作用、即ち不適合反応の原因とな
る不純物を除去するために、免疫グロブリンＧ含有画分
を水不溶性担体と結合した膵臓酵素で処理する。この文
献では、病原体の作用を不活化することについては何ら
述べられていない。
上述の先行技術から明らかなように多数の不活化法が
試みられてきたが、これらの方法は全て収量が不満足で
あり、そして／または生物学的有効性が低下したり、ま
たは問題のウイルスの全てが完全に不活化されなかった
りする等のある種の不都合を有しており、これらの不都
合を１つも伴わずに、上記先行技術を液相の免疫グロブ
リンＧ含有製剤に使用することはできない。
試みられてきたが、これらの方法は全て収量が不満足で
あり、そして／または生物学的有効性が低下したり、ま
たは問題のウイルスの全てが完全に不活化されなかった
りする等のある種の不都合を有しており、これらの不都
合を１つも伴わずに、上記先行技術を液相の免疫グロブ
リンＧ含有製剤に使用することはできない。
本発明は、これらの不都合および困難を克服しようと
するものであり、使用時に病原性ウイルスが存在しない
安全な、血液製剤の活性が十分保たれている免疫グロブ
リンＧ含有製剤を得るための不活化法を提供することを
目的とするものである。
するものであり、使用時に病原性ウイルスが存在しない
安全な、血液製剤の活性が十分保たれている免疫グロブ
リンＧ含有製剤を得るための不活化法を提供することを
目的とするものである。
本発明は、ヒトの血液から得た免疫グロブリンＧ含有
画分の水溶液を温度４〜50℃、pH5.5〜9.5に於いて、中
性水解酵素で処理することからなる方法によりこの目的
を達成するものである。
画分の水溶液を温度４〜50℃、pH5.5〜9.5に於いて、中
性水解酵素で処理することからなる方法によりこの目的
を達成するものである。
中性水解酵素としては、トリプシン、キモトリプシ、
カルボキシペプチダーゼ類の様なペプチド水解酵素群の
１または数種の酵素を使用することができる。
カルボキシペプチダーゼ類の様なペプチド水解酵素群の
１または数種の酵素を使用することができる。
本発明を使用して免疫グロブリンＧ製剤を製造する場
合、不活化後に溶液から酵素（類）を分離し、この処理
産物を更に精製および濃縮するのが好ましい。
合、不活化後に溶液から酵素（類）を分離し、この処理
産物を更に精製および濃縮するのが好ましい。
本発明の１態様では、免疫グロブリンＧ含有画分の水
溶液をpH6.0〜8.0、好ましくは7.0±0.4にて可溶性水解
酵素で処理する。
溶液をpH6.0〜8.0、好ましくは7.0±0.4にて可溶性水解
酵素で処理する。
本発明の別の態様では、免疫グロブリンＧ含有画分の
水溶液をpH5.5〜8.5で、水不溶性担体と結合した（固定
化）中性水解酵素で処理する。
水溶液をpH5.5〜8.5で、水不溶性担体と結合した（固定
化）中性水解酵素で処理する。
好適な態様では、免疫グロブリンＧ含有画分を高めら
れた温度で１時間〜36日間処理する。
れた温度で１時間〜36日間処理する。
免疫グロブリンＧ含有画分のタンパク質濃度は、0.1
〜18重量％とすることができる。
〜18重量％とすることができる。
本発明の方法により確実に不活化される増殖性濾過性
病原体の内では、肝炎ウイルスまたはHTLV−III/LAVウ
イルス（ヒトＴリンパ向性ウイルス）が重要視されるべ
きである。
病原体の内では、肝炎ウイルスまたはHTLV−III/LAVウ
イルス（ヒトＴリンパ向性ウイルス）が重要視されるべ
きである。
血液製剤中の肝炎ウイルス不活化に関して必要な分析
は直接ヒトで行なうことができず、また十分な数のチン
パンジーを使用することができないので、本発明による
不活化効率の評価はモデルウイルスを用いて行なった。
は直接ヒトで行なうことができず、また十分な数のチン
パンジーを使用することができないので、本発明による
不活化効率の評価はモデルウイルスを用いて行なった。
本発明の不活化法、およびこの方法を使用することに
よる免疫グロブリンＧ含有製剤の製造、得られた効果、
および本方法が既知の方法と比べてどの様に優れている
かを、以下の実施例および表で、より詳細に説明する。
よる免疫グロブリンＧ含有製剤の製造、得られた効果、
および本方法が既知の方法と比べてどの様に優れている
かを、以下の実施例および表で、より詳細に説明する。
実施例１ ａ）免疫グロブリンＧ含有画分の製造 ヒト血漿をpH7.2、温度−２℃で８％エタノールと混
合する。沈澱を分離し、エタノール濃度を25％に上げる
と同時に温度を−６℃に下げる。免疫グロブリンＧを含
有する沈澱をホスフェートアセテートバッファーで抽出
して更に精製し、次いで、pH5.4、温度−２℃で12％エ
タノールと混合する。沈澱を捨てる。上清のエタノール
濃度をpH7.2、温度−８℃で25％に上げる。ペースト状
の免疫グロブリン沈澱を集め、透析、凍結乾燥または超
遠心によりエタノールを除去する。
合する。沈澱を分離し、エタノール濃度を25％に上げる
と同時に温度を−６℃に下げる。免疫グロブリンＧを含
有する沈澱をホスフェートアセテートバッファーで抽出
して更に精製し、次いで、pH5.4、温度−２℃で12％エ
タノールと混合する。沈澱を捨てる。上清のエタノール
濃度をpH7.2、温度−８℃で25％に上げる。ペースト状
の免疫グロブリン沈澱を集め、透析、凍結乾燥または超
遠心によりエタノールを除去する。
免疫グロブリンＧ含有画分を10％のタンパク質含有量
に調節し、濾過滅菌する。
に調節し、濾過滅菌する。
ｂ）固定化トリプシンを用いるワクシニアウイルスの不
活化 本実施例で使用する固定化トリプシンを以下の方法で
調製した： ４の蒸留水で洗浄したセファロース4Bゲル（ファル
マシア社製）１をpH11.0でアセトニトリル100mlに溶
解した臭化シアン200gと混合した。反応混合物を氷浴に
より冷却した。水相を除去し、ゲルを0.2モルNaHCO31リ
ットルに溶解したトリプシン（シグマ社製）800mgと混
合した。濾過により、ゲルと結合したトリプシンから非
結合トリプシンを分離した。
活化 本実施例で使用する固定化トリプシンを以下の方法で
調製した： ４の蒸留水で洗浄したセファロース4Bゲル（ファル
マシア社製）１をpH11.0でアセトニトリル100mlに溶
解した臭化シアン200gと混合した。反応混合物を氷浴に
より冷却した。水相を除去し、ゲルを0.2モルNaHCO31リ
ットルに溶解したトリプシン（シグマ社製）800mgと混
合した。濾過により、ゲルと結合したトリプシンから非
結合トリプシンを分離した。
この固定化トリプシンを１モルグリシン溶液１と混
合した後、0.2モルNaHCO3溶液で十分洗浄してタンパク
質を除いた。最後にこれを0.9％NaCl溶液１に懸濁し
た。これは、免疫グロブリン画分と一緒にインキュベー
トするためにそのまま使用することができる。
合した後、0.2モルNaHCO3溶液で十分洗浄してタンパク
質を除いた。最後にこれを0.9％NaCl溶液１に懸濁し
た。これは、免疫グロブリン画分と一緒にインキュベー
トするためにそのまま使用することができる。
ａ）の記載に従って得た免疫グロブリン溶液10mlを上
記の固定化トリプシン1mlおよびワクシニアウイルス懸
濁液（ワクシニアウイルス、ATCC VR−862、エルスト
リー（Elstree）ウイルス株、アメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション）0.5mlと混合し、滅菌条件
下、37℃で撹拌することにより処理した。
記の固定化トリプシン1mlおよびワクシニアウイルス懸
濁液（ワクシニアウイルス、ATCC VR−862、エルスト
リー（Elstree）ウイルス株、アメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション）0.5mlと混合し、滅菌条件
下、37℃で撹拌することにより処理した。
IgGモノマーおよび生物学的活性を調べるために、
ａ）による免疫グロブリン溶液10ml、固定化トリプシン
1mlおよびウイルス不含の培地0.5mlからなる比較溶液を
調製し、ウイルス含有溶液と同様にして（同温度、同撹
拌時間）処理した。
ａ）による免疫グロブリン溶液10ml、固定化トリプシン
1mlおよびウイルス不含の培地0.5mlからなる比較溶液を
調製し、ウイルス含有溶液と同様にして（同温度、同撹
拌時間）処理した。
ウイルス含有溶液の試料を採取し、開始時および種々
の時間の後、即ち24時間、48時間および75時間後にウイ
ルス力価を調べた。これは、以下の方法で行なわれた。
の時間の後、即ち24時間、48時間および75時間後にウイ
ルス力価を調べた。これは、以下の方法で行なわれた。
ウイルス含有溶液を等張塩溶液を用いて1:10の比で順
次希釈した。微量滴定プレートに入れた感受性ベロ細胞
に対する細胞異常作用の評価により、ウイルスの力価を
求めた。結果をリードおよびミュエンチの式（Reed J.
L.およびH.Muench;Amer.J.Hyg.27、493−497、（193
8））に従い、評価の統計的処理に基づいてTCID50の対
数として表した。
次希釈した。微量滴定プレートに入れた感受性ベロ細胞
に対する細胞異常作用の評価により、ウイルスの力価を
求めた。結果をリードおよびミュエンチの式（Reed J.
L.およびH.Muench;Amer.J.Hyg.27、493−497、（193
8））に従い、評価の統計的処理に基づいてTCID50の対
数として表した。
得られたウイルス力価を第１表に示す。これから、分
析の開始時に2.6であったウイルス力価が24時間後には
1.0に、48時間後には1.0以下に低下したことがわかる。
析の開始時に2.6であったウイルス力価が24時間後には
1.0に、48時間後には1.0以下に低下したことがわかる。
ｃ）ウイルスを含まない試料中の生物学的活性、即ちテ
タヌス抗体の含有量（IU/ml）およびIgGモノマー量の測
定： エタヌス抗体の測定は、テタヌス毒素の一定量を種々
の量のテタヌス抗毒素含有試料と混合し、予めインキュ
ベートした後にマウスに注射することに基づく。WHO標
準と比較した発生した死の割合に基づいて国際単位/ml
を計算する（Europ.Pharmakopoeia、第２版、II−２
章、pp.91−91−３、1981）。
タヌス抗体の含有量（IU/ml）およびIgGモノマー量の測
定： エタヌス抗体の測定は、テタヌス毒素の一定量を種々
の量のテタヌス抗毒素含有試料と混合し、予めインキュ
ベートした後にマウスに注射することに基づく。WHO標
準と比較した発生した死の割合に基づいて国際単位/ml
を計算する（Europ.Pharmakopoeia、第２版、II−２
章、pp.91−91−３、1981）。
IgGモノマー含有量の測定は、IgG含有比較溶液をHPLC
（高速液体クロマトグラィー）分析にかけることによ
り、HPLCで行なった。分離カラムとして、1,000〜300,0
00の分子量範囲用Bio Sil TSK250カラム、600×7.5mm、
を使用した。溶離剤として、リン酸二水素ナトリウム−
硫酸ナトリウムバッファー、pH6.8を使用した。モノマ
ー含有量としては、1.28−1.67のVe/Vo価を有するピー
クを使用した（トモノ等（T.Tomono et al.）、Analyti
cal Biochemistry,123:394−401、1982）。
（高速液体クロマトグラィー）分析にかけることによ
り、HPLCで行なった。分離カラムとして、1,000〜300,0
00の分子量範囲用Bio Sil TSK250カラム、600×7.5mm、
を使用した。溶離剤として、リン酸二水素ナトリウム−
硫酸ナトリウムバッファー、pH6.8を使用した。モノマ
ー含有量としては、1.28−1.67のVe/Vo価を有するピー
クを使用した（トモノ等（T.Tomono et al.）、Analyti
cal Biochemistry,123:394−401、1982）。
実施例２ 固定化トリプシンによるシンドビス（Sindbis）ウイ
ルスの不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グロブリンＧ含有
溶液10mlを固定化トリプシン1mlおよびシンドビスウイ
ルス懸濁液（ATCC VR−68、ウイルス株AR339、アメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクション）0.5mlと混
合し、滅菌条件下、37℃で撹拌することにより処理し
た。活性評価のための比較溶液として、実施例１と同じ
溶液を使用した。
ルスの不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グロブリンＧ含有
溶液10mlを固定化トリプシン1mlおよびシンドビスウイ
ルス懸濁液（ATCC VR−68、ウイルス株AR339、アメリ
カン・タイプ・カルチャー・コレクション）0.5mlと混
合し、滅菌条件下、37℃で撹拌することにより処理し
た。活性評価のための比較溶液として、実施例１と同じ
溶液を使用した。
開始時および種々の時間後に試料を採取し、ウイルス
力価を求めた。
力価を求めた。
結果を第２表に示す。開始時4.5であったシンドビス
ウイルス力価は、75時間後には1.9へと2.6対数目盛り低
下した。テタヌス抗体およびIgGモノマーの含有量は、
第１表に示した価に対応する。
ウイルス力価は、75時間後には1.9へと2.6対数目盛り低
下した。テタヌス抗体およびIgGモノマーの含有量は、
第１表に示した価に対応する。
実施例３ 固定化トリプシンによるHTLV−IIIB（ヒトＴリンパ向
性ウイルスIIIB）の不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グロブリンＧ含有
溶液10mlを固定化トリプシン1mlおよびHTLV−IIIB懸濁
液（ガロ等（R.C.Gallo et al.）、Science224:500−50
3、1984）0.5mlと混合し、滅菌条件下、37℃で撹拌する
ことにより処理した。開始時および種々の時間後に試料
を採取し、ウイルス活性を測定した。ウイルス活性「感
染単位/0.5ml」の測定は、上のガロ等の文献記載の方法
に従って行なった。生物学的活性の評価のための比較溶
液として、実施例１と同じ比較溶液を使用した。
性ウイルスIIIB）の不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グロブリンＧ含有
溶液10mlを固定化トリプシン1mlおよびHTLV−IIIB懸濁
液（ガロ等（R.C.Gallo et al.）、Science224:500−50
3、1984）0.5mlと混合し、滅菌条件下、37℃で撹拌する
ことにより処理した。開始時および種々の時間後に試料
を採取し、ウイルス活性を測定した。ウイルス活性「感
染単位/0.5ml」の測定は、上のガロ等の文献記載の方法
に従って行なった。生物学的活性の評価のための比較溶
液として、実施例１と同じ比較溶液を使用した。
溶液中のウイルス活性およびIgGモノマーの量を第３
表に示す。48時間後、ウイルス活性は消失し、IgGモノ
マーの量は最大程度に維持された。
表に示す。48時間後、ウイルス活性は消失し、IgGモノ
マーの量は最大程度に維持された。
実施例４ 可溶性水解酵素によるワクシニアウイルスの不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グログリンＧ含有
溶液1mlを7.5％水解酵素溶液（トリプシン膵臓プロテア
ーゼ、メルク・アーティクル8367）0.1mlおよびワクシ
ニアウイルス懸濁液（ワクシニアウイルス、ATCC VR−8
62、エルストリーウイルス株、アメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション）0.1mlと混合し、滅菌条件
下、37℃で処理した。免疫グロブリン溶液1ml、水解酵
素溶液0.1mlおよびウイルス不含の培地0.1mlからなる比
較溶液を調製し、ウイルス含有溶液と同様に処理した。
種々の時点で試料を採取し、前記の様にしてウイルス力
価、テタヌス抗体を含有量およびIgGモノマーの量を測
定した。結果を第４表に示す。48時間後、ウイルス力価
は１より小さく、一方IgGモノマーの力価は十分であっ
た。
溶液1mlを7.5％水解酵素溶液（トリプシン膵臓プロテア
ーゼ、メルク・アーティクル8367）0.1mlおよびワクシ
ニアウイルス懸濁液（ワクシニアウイルス、ATCC VR−8
62、エルストリーウイルス株、アメリカン・タイプ・カ
ルチャー・コレクション）0.1mlと混合し、滅菌条件
下、37℃で処理した。免疫グロブリン溶液1ml、水解酵
素溶液0.1mlおよびウイルス不含の培地0.1mlからなる比
較溶液を調製し、ウイルス含有溶液と同様に処理した。
種々の時点で試料を採取し、前記の様にしてウイルス力
価、テタヌス抗体を含有量およびIgGモノマーの量を測
定した。結果を第４表に示す。48時間後、ウイルス力価
は１より小さく、一方IgGモノマーの力価は十分であっ
た。
実施例５ 可溶性水解酵素によるシンドビスウイルスの不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グログリンＧ含有
溶液1mlを7.5％水解酵素溶液（トリプシン膵臓プロテア
ーゼ）0.1mlおよびシンドビスウイルス懸濁液（ATCC VR
−68、エルストリーウイルス株、アメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクション）0.1mlと混合し、滅菌条件
下、37℃で処理した。免疫グロブリン溶液1ml、水解酵
素溶液0.1mlおよびウイルス不含の培地0.1mlからなる比
較溶液を調製し、ウイルス含有溶液と同様に処理した。
種々の時点で試料を採取し、前記の様にしてウイルス力
価、テタヌス抗体の含有量およびIgGモノマーの量を測
定した。結果を第５表に示す。48時間後、ウイルス力価
は１より小さく、十分なIgGモノマー量であった。
溶液1mlを7.5％水解酵素溶液（トリプシン膵臓プロテア
ーゼ）0.1mlおよびシンドビスウイルス懸濁液（ATCC VR
−68、エルストリーウイルス株、アメリカン・タイプ・
カルチャー・コレクション）0.1mlと混合し、滅菌条件
下、37℃で処理した。免疫グロブリン溶液1ml、水解酵
素溶液0.1mlおよびウイルス不含の培地0.1mlからなる比
較溶液を調製し、ウイルス含有溶液と同様に処理した。
種々の時点で試料を採取し、前記の様にしてウイルス力
価、テタヌス抗体の含有量およびIgGモノマーの量を測
定した。結果を第５表に示す。48時間後、ウイルス力価
は１より小さく、十分なIgGモノマー量であった。
実施例６ 可溶性水解酵素によるHTLV−IIIBの不活化 実施例１と同様にして調製した免疫グログリンＧ含有
溶液1mlを7.5％水解酵素溶液（トリプシン膵臓プロテア
ーゼ）0.1mlおよびHTLV−IIIBウイルス懸濁液（ガロ
等）0.1mlと混合し、滅菌条件下、37℃で処理した。免
疫グロブリン溶液1ml、水解酵素溶液0.1mlおよびウイル
ス不含の培地0.1mlからなる比較溶液を調製し、ウイル
ス含有溶液と同様に処理した。種々の時点で試料を採取
し、前記の様にしてウイルス活性、テタヌス抗体および
IgGモノマーの量を測定した。
溶液1mlを7.5％水解酵素溶液（トリプシン膵臓プロテア
ーゼ）0.1mlおよびHTLV−IIIBウイルス懸濁液（ガロ
等）0.1mlと混合し、滅菌条件下、37℃で処理した。免
疫グロブリン溶液1ml、水解酵素溶液0.1mlおよびウイル
ス不含の培地0.1mlからなる比較溶液を調製し、ウイル
ス含有溶液と同様に処理した。種々の時点で試料を採取
し、前記の様にしてウイルス活性、テタヌス抗体および
IgGモノマーの量を測定した。
結果を第６表に示す。72時間後、ウイルス活性は消失
し、十分なIgGモノマー量および満足な抗体含有量であ
った。
し、十分なIgGモノマー量および満足な抗体含有量であ
った。
これらの実施例は特別なモデルウイルスを加えて得た
不活化の結果を示すものであるが、この製造過程で他の
ウイルスが含まれることはない。本方法では、不活化酵
素を分離することが好ましく、この操作は、撹拌工程の
後に、選ばれた方法、即ち例えば固定化酵素を使用する
時は濾過、可溶性酵素を使用する時はイオン交換体また
は水酸化アルミニウムでの脱着によって、本明細書に示
した温度で行なう。
不活化の結果を示すものであるが、この製造過程で他の
ウイルスが含まれることはない。本方法では、不活化酵
素を分離することが好ましく、この操作は、撹拌工程の
後に、選ばれた方法、即ち例えば固定化酵素を使用する
時は濾過、可溶性酵素を使用する時はイオン交換体また
は水酸化アルミニウムでの脱着によって、本明細書に示
した温度で行なう。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (56)参考文献 特開 昭57−206608（ＪＰ，Ａ) 特開 昭51−95125（ＪＰ，Ａ) 特開 昭56−7721（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−1136（ＪＰ，Ａ) Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａ ｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．11，Ｎ ｏ．１（1983），ｐｐ．１−９
Claims (8)
- 【請求項１】治療または予防的に使用される、免疫グロ
ブリンＧモノマーを含む免疫グロブリンＧ含有画分中の
増殖性濾過性病原体の不活化法であって、ヒト血液から
得た免疫グロブリンＧ含有画分の水溶液を調製し、該水
溶液を温度４〜50℃、pH5.5〜9.5に於いて、中性水解酵
素で処理し、それによってIgGモノマーを大部分保存し
ながら、増殖性濾過性病原体を不活化する工程からなる
方法。 - 【請求項２】該中性水解酵素がトリプシン、キモトリプ
シン、カルボキシペプチダーゼの様なペプチド水解酵素
群の少なくとも１種の酵素からなる第１項に記載の方
法。 - 【請求項３】該中性水解酵素がペプチド水解酵素群の少
なくとも１種の酵素からなり、更に、不活化した後該水
溶液から、その少なくとも１種の酵素を分離して処理産
物を得、該処理産物を精製および濃縮する工程からなる
第１項に記載の方法。 - 【請求項４】該免疫グロブリンＧ含有画分の水溶液がpH
6.0〜8.0で可溶性水解酵素により処理される第１項に記
載の方法。 - 【請求項５】該免疫グロブリンＧ含有画分の水溶液がpH
5.5〜8.5で、水不溶性担体と結合した、固定化中性水解
酵素で処理される第１項に記載の方法。 - 【請求項６】該免疫グロブリンＧ含有画分の処理が高め
られた温度で１時間〜36日間行われる第１項に記載の方
法。 - 【請求項７】該免疫グロブリンＧ含有画分が0.1〜18重
量％のタンパク質濃度を有する第１項に記載の方法。 - 【請求項８】該増殖性濾過性病原体が肝炎ウイルスおよ
びHTLV−III/LAVウイルスからなる群から選ばれる第１
項に記載の方法。
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|---|---|
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| JP2506370B2 true JP2506370B2 (ja) | 1996-06-12 |
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| AT404358B (de) | 1997-02-04 | 1998-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur chromatographischen reinigung bzw. fraktionierung von von willebrand-faktor aus einem vwf-hältigen ausgangsmaterial |
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| JPS5195125A (ja) * | 1975-02-19 | 1976-08-20 | Jomyakuchushayomenekiguroburinno seizoho | |
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| DE3045153A1 (de) * | 1980-11-29 | 1982-07-08 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur herstellung von blutgerinnungsfaktoren und danach hergestellte praeparation der faktoren ix und x |
| US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
| JPS57206608A (en) * | 1981-05-29 | 1982-12-18 | Mochida Pharmaceut Co Ltd | Production of gamma-globulin for intravenous injection |
| FR2507332A1 (fr) * | 1981-06-04 | 1982-12-10 | Roulot Maurice | Source lumineuse polychromatique munie d'un deviateur de rayons lumineux et d'un correcteur d'aberration chromatique |
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| US4511556A (en) * | 1982-06-10 | 1985-04-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Inactivation of a lipid virus |
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| DE3330770A1 (de) * | 1983-08-26 | 1985-03-14 | Behringwerke Ag, 3550 Marburg | Verfahren zur pasteurisierung von humanplasma |
| JPS6049795A (ja) * | 1983-08-31 | 1985-03-19 | Kanai Hiroyuki | 殺菌性繊維シ−ト |
-
1986
- 1986-05-30 AT AT0145786A patent/AT390560B/de not_active IP Right Cessation
-
1987
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- 1987-05-21 DE DE8787890116T patent/DE3786838D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-05-21 EP EP87890116A patent/EP0247998B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-05-21 ES ES87890116T patent/ES2043689T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-05-21 AT AT87890116T patent/ATE92337T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-05-25 CA CA000537826A patent/CA1340062C/en not_active Expired - Fee Related
- 1987-05-27 DK DK272287A patent/DK272287A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-05-29 JP JP62137601A patent/JP2506370B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (1)
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|---|
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| EP0247998B1 (de) | 1993-08-04 |
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