JP2024520616A - Compositions and methods for treatment with a combination of alternating electric fields and trastuzumab - Patent Application 20070233333 - Google Patents
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Abstract
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含む、それを必要とする対象を処置する方法が開示される。交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、交流電場を印加することなく標的部位にトラスツズマブを投与する場合と比較して、トラスツズマブの蓄積が標的部位で増加する、それを必要とする対象の標的部位でトラスツズマブの蓄積を増加させる方法が開示される。交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、がん細胞の増殖が阻害される、又はがん細胞のアポトーシスを増加させる、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞の増殖を阻害する、又はがん細胞のアポトーシスを増加させる方法が開示される。A method of treating a subject in need thereof is disclosed, comprising applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof.A method of increasing the accumulation of trastuzumab at a target site in a subject in need thereof is disclosed, comprising applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof, whereby the accumulation of trastuzumab is increased at the target site compared to when trastuzumab is administered to the target site without applying an alternating electric field.A method of inhibiting the proliferation of cancer cells or increasing apoptosis of cancer cells at a target site in a subject in need thereof is disclosed, comprising applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof, whereby the proliferation of cancer cells is inhibited or apoptosis of cancer cells is increased.
Description
本発明は、交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含む、それを必要とする対象を処置する方法に関する。また、本発明は、交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、交流電場を印加することなく標的部位にトラスツズマブを投与する場合と比較して、トラスツズマブの蓄積が標的部位で増加する、それを必要とする対象の標的部位でトラスツズマブの蓄積を増加させる方法に関する。更には、本発明は、交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、がん細胞の増殖が阻害される、又はがん細胞のアポトーシスを増加させる、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞の増殖を阻害する、又はがん細胞のアポトーシスを増加させる方法に関する。 The present invention relates to a method for treating a subject in need thereof, comprising the steps of: applying an alternating electric field at a certain frequency for a certain period of time to a target site of a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site of the subject in need thereof. The present invention also relates to a method for increasing accumulation of trastuzumab at a target site of a subject in need thereof, comprising the steps of: applying an alternating electric field at a certain frequency for a certain period of time to a target site of a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site of a subject in need thereof, whereby accumulation of trastuzumab is increased at the target site compared to administration of trastuzumab to the target site without application of an alternating electric field. Furthermore, the present invention relates to a method for inhibiting proliferation of cancer cells or increasing apoptosis of cancer cells at a target site of a subject in need thereof, comprising the steps of: applying an alternating electric field at a certain frequency for a certain period of time to a target site of a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site of a subject in need thereof, whereby proliferation of cancer cells is inhibited or apoptosis of cancer cells is increased.
米国女性における死亡率増加の理由の1つは、乳がん症例が増え続けていることである。米国がん協会の2015年人口調査によれば、約60,290例の乳癌症例(非浸潤性)が確認されていると推定された。更に、すべての悪性腫瘍のうち、乳がんは7～10%を占めており、中国では毎年約3～4%増加している。また、ヒト上皮成長因子受容体2(HER2)チロシンキナーゼ受容体遺伝子の活性化の増加は、早期リンパ節陽性乳がんの原因となるマイナスの予後因子であることが確認されている。したがって、HER2遺伝子の機序及び作用の解明が進むと、この疾患の分類、予後、並びに処置の再構築につながる可能性がある。更に、細胞の生存、増殖、血管新生、浸潤及び転移を含む様々な細胞プロセスをモジュレートする傾向がある様々な乳がんで15～20%高発現されたHER2遺伝子が確認されている。最近、早期及び進行性HER2陽性乳がんの臨床転帰を有意に改善する、トラスツズマブ(ハーセプチン)として知られるヒト化モノクローナル抗ERBB2抗体が発見された。トラスツズマブは、HER2の二量体化を阻害することによりHER2に影響を及ぼし、その結果、成長シグナルに影響を与えて、最終的にHER2受容体遺伝子の発現を遮断する。この薬物はまた、ホスファチジルイノシトール3-キナーゼ(PI3K)/AKT/mTOR経路及びRAS/RAF/MEK/MAPキナーゼ(MAPK)経路を標的とする。この他に、トラスツズマブのFc部分は、抗体依存性細胞傷害(ADCC)機能に関与している。この抗体は高い初期有効率を示したが、転移性乳がんのステージに罹患している患者は、抗体に対する一次耐性を生じた。したがって、この処置は、この症例では効果がなかった。このため、この欠点がHER2陽性乳がん患者の処置において、より大きな課題となっている。 One of the reasons for the increased mortality rate in US women is the ever-increasing number of breast cancer cases. According to the 2015 population survey by the American Cancer Society, it was estimated that approximately 60,290 cases of breast cancer (non-invasive) were confirmed. Furthermore, among all malignant tumors, breast cancer accounts for 7-10% and is increasing by approximately 3-4% annually in China. Also, increased activation of the human epidermal growth factor receptor 2 (HER2) tyrosine kinase receptor gene has been identified as a negative prognostic factor responsible for early-stage lymph node-positive breast cancer. Therefore, better elucidation of the mechanism and action of HER2 gene may lead to restructuring the classification, prognosis, and treatment of this disease. Furthermore, 15-20% highly expressed HER2 gene has been identified in various breast cancers, which tends to modulate various cellular processes including cell survival, proliferation, angiogenesis, invasion, and metastasis. Recently, a humanized monoclonal anti-ERBB2 antibody known as trastuzumab (Herceptin) has been discovered, which significantly improves the clinical outcomes of early-stage and advanced HER2-positive breast cancer. Trastuzumab affects HER2 by inhibiting its dimerization, which in turn affects growth signals and ultimately blocks the expression of the HER2 receptor gene. This drug also targets the phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K)/AKT/mTOR pathway and the RAS/RAF/MEK/MAP kinase (MAPK) pathway. In addition, the Fc portion of trastuzumab is involved in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC) function. Although this antibody showed a high initial efficacy rate, patients suffering from metastatic breast cancer stage developed primary resistance to the antibody. Therefore, this treatment was ineffective in this case. Therefore, this drawback poses a greater challenge in the treatment of HER2-positive breast cancer patients.
腫瘍治療電場(TTFields又はTTFと適切には略される)は、体内のがん細胞の増殖を抑制するために低強度電場とともに用いられる交流電場を含む治療である。この治療は、ヒト体内に電場を誘導し、がん性細胞の増殖及び浸潤を抑制することを目的としている。この処置はアポトーシスを誘導することにより、がん性細胞を死滅させる能力を示す。FDAは、再発性多形神経膠芽腫又はGBMに罹患している患者の処置にTTFieldsを印加することを承認した。この技術は、患者の平均寿命を延ばすことが判明している。新たに診断されたGBMの症例の場合、この技術は、手術前にテモゾロミドを組み合わせることができる(www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfpma/pma.cfm?id=P100034)(www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfpma/pma.cfm?id=P100034S013)。米国臨床腫瘍学会(ASCO)は、この処置を、その斬新なアプローチ、有効性、低毒性プロファイルから、がん処置における進歩であるとみなしている。全米総合がんネットワーク(National Comprehensive Cancer Network (NCCN))は、新たにGBMと診断され、パフォーマンス状態が良好な患者に対するカテゴリー2Aの処置として、TTFieldsを推奨している(www.nccn.org/professionals/physician_gls/f_guidelines.asp)。典型的に用いられている方法(化学療法及び放射線治療)とは対照的に、TTFは、痛み、吐き気、疲労、又は下痢等の副作用を引き起こさない。それでもなお、この技術には、長期間の電極使用により引き起こされる局所的皮膚発疹を含む、試験で指摘されたいくつかの欠点を伴う。しかし、TTFの有効性は、化学療法又は放射線治療と同程度であると考えられている。その後、HER2陽性乳がんの代表的細胞株に対するTTFとトラスツズマブの組合せ抗腫瘍効果が、腫瘍異種移植片モデルと並んで研究された。その結果は、TTF治療がトラスツズマブによって誘発される成長阻害を有意に増強できることを示した。 Tumor Treating Electric Fields (TTFields or TTF as appropriate) is a treatment that includes alternating electric fields used in conjunction with low-intensity electric fields to inhibit the growth of cancer cells in the body. The treatment aims to induce electric fields in the human body and inhibit the growth and invasion of cancerous cells. The treatment has demonstrated the ability to kill cancerous cells by inducing apoptosis. The FDA has approved the application of TTFields for the treatment of patients suffering from recurrent glioblastoma multiforme or GBM. The technique has been found to increase the average lifespan of patients. For newly diagnosed cases of GBM, the technique can be combined with temozolomide prior to surgery (www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfpma/pma.cfm?id=P100034) (www.accessdata.fda.gov/scripts/cdrh/cfdocs/cfpma/pma.cfm?id=P100034S013). The American Society of Clinical Oncology (ASCO) considers this procedure an advancement in cancer treatment due to its novel approach, efficacy, and low toxicity profile. The National Comprehensive Cancer Network (NCCN) recommends TTFields as a category 2A procedure for patients with newly diagnosed GBM and good performance status (www.nccn.org/professionals/physician_gls/f_guidelines.asp). In contrast to the typically used methods (chemotherapy and radiation therapy), TTF does not cause side effects such as pain, nausea, fatigue, or diarrhea. Nevertheless, this technology is accompanied by some drawbacks that were noted in the study, including localized skin rash caused by prolonged electrode use. However, the efficacy of TTF is considered to be comparable to chemotherapy or radiation therapy. The combined antitumor effect of TTF and trastuzumab against representative cell lines of HER2-positive breast cancer was then studied alongside tumor xenograft models. The results showed that TTF treatment could significantly enhance the growth inhibition induced by trastuzumab.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含む、それを必要とする対象を処置する方法が開示される。 A method of treating a subject in need thereof is disclosed, comprising applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in the subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、交流電場を印加することなく標的部位にトラスツズマブを投与する場合と比較して、トラスツズマブの蓄積が標的部位で増加する、それを必要とする対象の標的部位でトラスツズマブの蓄積を増加させる方法が開示される。 A method for increasing accumulation of trastuzumab at a target site in a subject in need thereof is disclosed, comprising the steps of: applying an alternating electric field at a certain frequency for a certain period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof, whereby accumulation of trastuzumab is increased at the target site compared to administration of trastuzumab to the target site without application of an alternating electric field.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、がん細胞の増殖が阻害される、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞の増殖を阻害する方法が開示される。 A method is disclosed for inhibiting the proliferation of cancer cells at a target site in a subject in need thereof, comprising the steps of: applying an alternating electric field at a certain frequency for a certain period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof, whereby the proliferation of the cancer cells is inhibited.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、がん細胞のアポトーシスが増加される、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞のアポトーシスを増加させる方法が開示される。 A method for increasing apoptosis of cancer cells at a target site in a subject in need thereof is disclosed, comprising the steps of: applying an alternating electric field at a certain frequency for a certain period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof, thereby increasing apoptosis of the cancer cells.
開示される方法及び組成物の追加的有利点は、続く記載に一部記載され、一部は記載から理解される又は開示される方法及び組成物の実行によって得ることができる。開示される方法及び組成物の有利点は、添付の特許請求の範囲に特に示される要素及び組合せの手段によって理解され、達成される。前述の概要及び続く詳細な記載の両方は例示であり、説明のためのみであり、特許請求される本発明の限定ではないことは理解される。 Additional advantages of the disclosed methods and compositions will be set forth in part in the description which follows and in part will be understood from the description or may be obtained by the practice of the disclosed methods and compositions. The advantages of the disclosed methods and compositions will be realized and attained by means of the elements and combinations particularly pointed out in the appended claims. It is understood that both the foregoing summary and the following detailed description are exemplary and explanatory only and are not limitations of the invention as claimed.
本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図は、開示される方法及び組成物のいくつかの実施形態を例示し、開示される方法及び組成物の原理を記載と共に説明する役割を果たす。 The accompanying drawings, which are incorporated in and constitute a part of this specification, illustrate several embodiments of the disclosed methods and compositions and, together with the description, serve to explain the principles of the disclosed methods and compositions.
開示される方法及び組成物は、本明細書に含まれる具体的な実施形態及び実施例の続く詳細な記載、並びに図面及びそれらに先行する及び続く記載の参照によって更に容易に理解される。 The disclosed methods and compositions will be more readily understood by reference to the following detailed description of specific embodiments and examples contained herein, as well as the drawings and their preceding and following description.
開示される方法及び組成物が、他に別段の規定のない限り、具体的な合成方法、具体的な分析技術又は特定の試薬に、それらが変更する場合があることから限定されないことは理解される。本明細書において使用される用語は、具体的な実施形態を記載するのみの目的のためであり、限定することを意図しないことも理解される。 It is understood that the disclosed methods and compositions are not limited to specific synthetic methods, specific analytical techniques, or particular reagents, as these may vary, unless otherwise specified. It is also understood that the terminology used herein is for the purpose of describing specific embodiments only, and is not intended to be limiting.
本開示の方法及び組成物のために使用され得る、それと併せて使用され得る、その調製において使用され得る又はその産生物である材料、組成物及び成分が開示される。これら及び他の材料は本明細書において開示され、これらの材料の組合せ、サブセット、相互作用、群等が開示される場合に、これらの化合物それぞれの種々の個々の及び集合的な組合せ及び並べ替えの具体的な言及が明確に開示されない場合があるが、それぞれが具体的に検討され、本明細書に記載されることは理解される。それにより、分子A、B及びCのクラスが分子D、E及びFのクラスと共に開示され、分子A～Dの組合せの例が開示される場合に、それぞれが個々に列挙されていなくても、それぞれは個々に及び集合的に検討される。それによりこの例では、組合せA～E、A～F、B～D、B～E、B～F、C～D、C～E及びC～Fのそれぞれは、具体的に検討され、A、B及びC; D、E、及びF;並びに組合せ例A～Dの開示から開示されるとみなされるべきである。同様にこれらの任意のサブセット又は組合せも具体的に検討され、開示される。それにより例えばA～E、B～F、及びC～Eのサブグループは、具体的に検討されA、B及びC; D、E及びF;並びに組合せ例A～Dの開示から開示されるとみなされるべきである。この概念は、これだけに限らないが、開示される組成物を作製する及び使用する方法における工程を含む本出願のすべての態様に適用される。それにより、実施され得る種々の追加的工程がある場合、これらの追加的工程それぞれが開示された方法の任意の具体的な実施形態又は実施形態の組合せと共に実施され得る、及びそのような組合せのそれぞれが具体的に検討され、開示されたとみなされるべきであることは理解される。 Disclosed are materials, compositions and components that may be used for, used in conjunction with, used in preparation for, or are products of the disclosed methods and compositions. These and other materials are disclosed herein, and it is understood that when combinations, subsets, interactions, groups, etc. of these materials are disclosed, specific references to the various individual and collective combinations and permutations of each of these compounds may not be expressly disclosed, but each is specifically contemplated and described herein. Thus, when a class of molecules A, B and C is disclosed along with a class of molecules D, E and F, and an example of a combination of molecules A-D is disclosed, each is individually and collectively contemplated, even if each is not individually listed. Thus, in this example, each of the combinations A-E, A-F, B-D, B-E, B-F, C-D, C-E and C-F should be specifically contemplated and considered disclosed from the disclosure of A, B and C; D, E, and F; and example combinations A-D. Similarly, any subset or combination of these is specifically contemplated and disclosed. Thus, for example, subgroups A-E, B-F, and C-E should be considered specifically contemplated and disclosed from the disclosure of A, B, and C; D, E, and F; and combination examples A-D. This concept applies to all aspects of this application, including, but not limited to, steps in methods of making and using the disclosed compositions. Thus, if there are various additional steps that may be performed, it is understood that each of these additional steps may be performed with any specific embodiment or combination of embodiments of the disclosed method, and each such combination should be considered specifically contemplated and disclosed.
A.定義
開示される方法及び組成物は、それらが変化する場合があることから、記載される特定の方法、プロトコル及び試薬に限定されないことは理解される。本明細書において使用される用語が特定の実施形態を記載するのみの目的のためであり、添付の特許請求の範囲によってのみ限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解される。
A. Definitions It is understood that the disclosed methods and compositions are not limited to the particular methodology, protocols, and reagents described, as these may vary. It is also understood that the terminology used herein is for the purpose of describing particular embodiments only, and is not intended to limit the scope of the present invention, which is limited only by the appended claims.
本明細書において及び添付の特許請求の範囲において使用される場合、単数形「a」、「an」及び「the」は、文脈上明確に示されていない限り複数の参照物も含むことは注目されるべきである。それにより、例えば「抗体(an antibody)」に言及することは、複数のそのような抗体を含み、「細胞(the cell)」に言及することは1つ又は複数の細胞及び当業者に周知のその等価物に言及することである等。 It should be noted that as used herein and in the appended claims, the singular forms "a," "an," and "the" include plural references unless the context clearly indicates otherwise. Thus, for example, a reference to "an antibody" includes a plurality of such antibodies, a reference to "the cell" is a reference to one or more cells and equivalents thereof known to those skilled in the art, and so forth.
本明細書において使用される場合「標的部位」は、対象又は患者内にある又は存在する特定の部位又は位置である。例えば「標的部位」は、これだけに限らないが、細胞(例えば、がん細胞)、細胞の集団、器官、組織又は腫瘍を指し得る。したがって、句「標的細胞」は、標的部位を指して使用されてよく、ここで標的部位は細胞である。一部の態様では、「標的細胞」はがん細胞であり得る。一部の態様では、標的部位であり得る器官として、これだけに限らないが、腹部器官(例えば、胃、腸)又は***が挙げられる。一部の態様では、標的部位又は標的細胞であり得る細胞又は細胞の集団として、これだけに限らないが、***組織細胞又は腹部の細胞が挙げられる。一部の態様では、「標的部位」は、腫瘍標的部位であり得る。 As used herein, a "target site" is a specific site or location within or present in a subject or patient. For example, a "target site" may refer to, but is not limited to, a cell (e.g., a cancer cell), a population of cells, an organ, a tissue, or a tumor. Thus, the phrase "target cell" may be used to refer to a target site, where the target site is a cell. In some aspects, a "target cell" may be a cancer cell. In some aspects, organs that may be target sites include, but are not limited to, abdominal organs (e.g., stomach, intestines) or the breast. In some aspects, cells or populations of cells that may be target sites or target cells include, but are not limited to, breast tissue cells or abdominal cells. In some aspects, a "target site" may be a tumor target site.
「腫瘍標的部位」は、1つ若しくは複数のがん細胞を含む若しくはそれに隣接する、1つ若しくは複数の腫瘍細胞を以前含んだ、又は1つ若しくは複数の腫瘍細胞を含むと疑われる対象又は患者内にある又は存在する部位又は位置である。例えば、腫瘍標的部位は、転移する傾向がある対象又は患者内にある又は存在する部位又は位置を指し得る。追加的に標的部位又は腫瘍標的部位は、対象又は患者内にある又は存在する原発腫瘍の切除の部位又は位置を指し得る。追加的に標的部位又は腫瘍標的部位は、対象又は患者内にある又は存在する原発腫瘍の切除に隣接する部位又は位置を指し得る。 A "tumor target site" is a site or location within or present in a subject or patient that contains or is adjacent to one or more cancer cells, previously contained one or more tumor cells, or is suspected of containing one or more tumor cells. For example, a tumor target site may refer to a site or location within or present in a subject or patient that is prone to metastasis. Additionally, a target site or tumor target site may refer to a site or location of a resection of a primary tumor within or present in a subject or patient. Additionally, a target site or tumor target site may refer to a site or location adjacent to a resection of a primary tumor within or present in a subject or patient.
本明細書において使用される場合、1つ又は複数の「交流電場」は、対象、対象から得られた試料又は対象若しくは患者内の特定の位置(例えば、細胞等の標的部位)に送達される非常に低い強度の方向性(directional)中間周波数交流電場を指す。一部の態様では、交流電場は、単一方向性又は複数方向性であってよい。一部の態様では、交流電場は、標的部位内に垂直場を発生させる2対のトランスデューサーアレイを通じて送達され得る。例えばOptune(商標)システム(交流電場送達システム)について、1対の電極は標的部位の左及び右(LR)に配置され、他方の対の電極は標的部位の前側及び後側(AP)に配置されるこれらの2方向(すなわち、LR及びAP)で場を循環させることは、最大範囲の細胞方向を標的化することを確実にする。 As used herein, one or more "alternating electric fields" refer to a very low intensity, directional, mid-frequency alternating electric field delivered to a subject, a sample obtained from a subject, or a specific location (e.g., a target site, such as a cell) within a subject or patient. In some embodiments, the alternating electric field may be unidirectional or multidirectional. In some embodiments, the alternating electric field may be delivered through two pairs of transducer arrays that generate perpendicular fields within the target site. For example, for the Optune™ system (alternating electric field delivery system), one pair of electrodes is placed on the left and right (LR) of the target site, and the other pair of electrodes is placed on the anterior and posterior (AP) of the target site. Cycling the field in these two directions (i.e., LR and AP) ensures that the widest range of cell orientations is targeted.
本明細書において使用される場合、腫瘍標的部位に印加される「交流電場」は、「腫瘍治療電場」又は「TTField」と称され得る。TTFieldsは、***中期の際に正確な微小管アセンブリを妨害し、***終期、細胞質***又は続く静止期に細胞を最終的に破壊することから、抗有糸***がん処置様式として確立されている。TTFieldsは、固形腫瘍を標的化し、TTFieldsの教示についてその全体が参照により本明細書に組み込まれる米国特許第7,565,205号に記載されている。 As used herein, an "alternating electric field" applied to a tumor target site may be referred to as a "tumor treating electric field" or "TTFields." TTFields are established as an anti-mitotic cancer treatment modality because they disrupt correct microtubule assembly during metaphase, ultimately destroying cells in telophase, cytokinesis, or subsequent quiescence. TTFields target solid tumors and are described in U.S. Pat. No. 7,565,205, the teachings of which are incorporated herein by reference in their entirety.
in-vivo及びin-vitro研究は、TTFields治療の有効性は、電場の強度が増加するにつれて増加することを示している。したがって、標的部位又は標的細胞における強度を増加させるために対象のアレイ配置を最適化することは、Optuneシステムのための標準的技法である。アレイ配置の最適化は、「経験則」(例えば、できるだけ標的部位又は標的細胞の近くで対象にアレイを置くこと)、患者の身体の形状、標的部位の大きさ及び/又は標的部位若しくは細胞位置を表す測定によって実施され得る。インプットとして使用される測定値は、画像データ由来であってよい。画像データは、例えば、単一光子放射断層撮影(SPECT)画像データ、X-線コンピュータ断層撮影(X線CT)データ、磁気共鳴画像法(MRI)データ、ポジトロン断層撮影(PET)データ、光学機器(例えば、写真用カメラ、電荷結合素子(CCD)カメラ、赤外線カメラ等)によって取り込まれ得るデータ等の任意の種類の映像データを含むことが意図される。ある特定の実行では、画像データは、3Dスキャナー(例えば、点群データ)から得られた又はそれによって生成された3Dデータを含み得る。最適化は、アレイの位置の関数として電場が標的部位又は標的細胞内でどのように分布しているかの理解に依存する場合があり、一部の態様では、様々な患者の頭部内での電気的特性の分布における多様性を考慮する。 In-vivo and in-vitro studies have shown that the efficacy of TTFields treatment increases as the strength of the electric field increases. Therefore, optimizing the array placement on a subject to increase the intensity at the target site or target cells is standard practice for the Optune system. Optimization of the array placement can be performed by "rules of thumb" (e.g., placing the array on the subject as close to the target site or target cells as possible), measurements representative of the patient's body shape, the size of the target site, and/or the target site or cell location. The measurements used as inputs can be from imaging data. The imaging data is intended to include any type of imaging data, such as, for example, single photon emission computed tomography (SPECT) imaging data, X-ray computed tomography (X-ray CT) data, magnetic resonance imaging (MRI) data, positron emission tomography (PET) data, data that can be captured by an optical instrument (e.g., a photographic camera, a charge-coupled device (CCD) camera, an infrared camera, etc.). In certain implementations, the imaging data can include 3D data obtained from or generated by a 3D scanner (e.g., point cloud data). Optimization may depend on understanding how the electric field is distributed within a target site or cell as a function of array location, and in some embodiments takes into account the variability in the distribution of electrical properties within different patient heads.
用語「対象」は、投与の標的、例えば動物を指す。それにより、開示される方法の対象は、哺乳動物等の脊椎動物であってよい。例えば対象は、ヒトであり得る。用語は、特定の年齢又は性別を意味しない。対象は、「個体」又は「患者」と互換的に使用され得る。例えば、投与の対象は、交流電場のレシピエントを意味する場合がある。例えば、投与の対象は、早期及び進行性HER2陽性乳がんを有する対象であり得る。 The term "subject" refers to the target of administration, e.g., an animal. Thus, the subject of the disclosed methods can be a vertebrate, such as a mammal. For example, the subject can be a human. The term does not denote a particular age or sex. Subject can be used interchangeably with "individual" or "patient." For example, the subject of administration can refer to the recipient of an alternating electric field. For example, the subject of administration can be a subject with early and advanced HER2-positive breast cancer.
「処置」によって、乳がん若しくは胃がんを有する、又は乳がん若しくは胃がんを発症する易罹患性が増加しているヒト又は他の哺乳動物(例えば、動物モデル)等の対象に、疾患若しくは感染の影響を予防する若しくはその悪化を遅らせる、又は乳がん若しくは胃がんの影響を部分的に若しくは完全に元に戻すために、交流電場及びベクター等の治療を投与する又は印加することが意味される。例えば、乳がん又は胃がんを有する対象を処置することは、対象の細胞に治療を送達することを含み得る。 By "treatment" is meant administering or applying a therapy, such as alternating electric fields and vectors, to a subject, such as a human or other mammal (e.g., an animal model) having breast or gastric cancer or having an increased susceptibility to developing breast or gastric cancer, to prevent or slow the effects of a disease or infection, or to partially or completely reverse the effects of breast or gastric cancer. For example, treating a subject with breast or gastric cancer can include delivering a therapy to the subject's cells.
「予防」によって、対象が乳がん又は胃がんを発症する機会を最小化又は減少させることが意味される。 By "prevention" is meant minimizing or reducing the chance that a subject will develop breast cancer or gastric cancer.
本明細書において使用される場合、用語「投与する」及び「投与」は、標的部位又は対象にトラスツズマブを提供するための任意の方法を指す。そのような方法は、当業者に十分周知であり、これだけに限らないが:経口投与、経皮投与、吸入による投与、鼻腔投与、局所投与、腟内投与、点眼、耳内投与、脳内投与、直腸投与、舌下投与、頬側投与、並びに静脈内投与、動脈内投与、筋肉内投与及び皮下投与等の注射剤を含む非経口投与が挙げられる。投与は、継続的又は断続的であってよい。種々の態様では、調製物は治療的に投与されてよい;すなわち、乳がん又は胃がんを処置するために投与される。更に種々の態様では、調製物は予防的に投与;すなわち、乳がん又は胃がんの予防のために投与されてよい。一態様では、当業者は対象を処置するために投与の有効な用量、有効なスケジュール又は有効な経路を決定できる。一部の態様では、投与することは曝露すること又は印加することを含む。したがって、一部の態様では、標的部位若しくは対象を交流電場(alternating electrical field)に曝露すること、又は標的部位若しくは対象に交流電場を印加することは、標的部位又は対象に交流電場を投与することを意味する。 As used herein, the terms "administer" and "administration" refer to any method for providing trastuzumab to a target site or subject. Such methods are well known to those of skill in the art and include, but are not limited to: oral administration, transdermal administration, administration by inhalation, nasal administration, topical administration, intravaginal administration, ophthalmic administration, intraaural administration, intracerebral administration, rectal administration, sublingual administration, buccal administration, and parenteral administration, including injections such as intravenous, intraarterial, intramuscular, and subcutaneous administration. Administration may be continuous or intermittent. In various embodiments, the preparation may be administered therapeutically; i.e., administered to treat breast cancer or gastric cancer. In yet various embodiments, the preparation may be administered prophylactically; i.e., administered for the prevention of breast cancer or gastric cancer. In one embodiment, one of skill in the art can determine an effective dose, an effective schedule, or an effective route of administration to treat a subject. In some embodiments, administering includes exposing or applying. Thus, in some aspects, exposing a target site or subject to an alternating electrical field or applying an alternating electrical field to a target site or subject refers to administering an alternating electrical field to the target site or subject.
本明細書において使用される場合、「治療有効量」とは、個体又は対象に、治療上の利益を提供する組成物、又はトラスツズマブの量である。例えば、トラスツズマブの治療有効量は、乳がん又は胃がんの症状の処置、緩和、改善、軽減、緩和、発症の予防、遅延、進行の抑制、重症度を軽減、及び/又は発生率の軽減を行う量である。一実施形態では、治療有効量のトラスツズマブは、本明細書に記載されるもの等、乳がん又は胃がんの1つ又は複数の指標若しくは症状の改善をもたらす、又は悪化を予防若しくは遅延させる。本明細書において使用される場合、乳がん又は胃がんを有する対象を「処置する」ことは、治療有効量のトラスツズマブを投与することを含む。 As used herein, a "therapeutically effective amount" is an amount of a composition or trastuzumab that provides a therapeutic benefit to an individual or subject. For example, a therapeutically effective amount of trastuzumab is an amount that treats, alleviates, improves, relieves, alleviates, prevents, delays, inhibits progression, reduces severity, and/or reduces incidence of symptoms of breast cancer or gastric cancer. In one embodiment, a therapeutically effective amount of trastuzumab results in improvement or prevents or delays the worsening of one or more indicators or symptoms of breast cancer or gastric cancer, such as those described herein. As used herein, "treating" a subject with breast cancer or gastric cancer includes administering a therapeutically effective amount of trastuzumab.
「任意選択」又は「任意選択で」は、続いて記載される事象、環境又は材料が、生じる又は存在する場合としない場合があり、記載が事象、環境又は材料が生じる又は存在する場合及びそれが生じない又は存在しない場合を含むことを意味する。 "Optionally" or "optionally" means that the subsequently described event, circumstance, or material may or may not occur or be present, and that the description includes cases where the event, circumstance, or material occurs or is present and cases where it does not occur or is not present.
範囲は、本明細書において「約」ある特定の値から及び/又は「約」別の特定の値として表される場合がある。そのような範囲が表される場合、ある特定の値から及び/又は他の特定の値までの範囲が、文脈上特に明記されていない限り、同様に具体的に検討され、開示されたとみなされる。同様に、先行する「約」の使用によって値がおよそとして表される場合、文脈上特に明記されていない限り、開示されるとみなされるべきである別の具体的に検討される実施形態を特定の値が形成することは理解される。範囲の各端点は、文脈上特に明記されていない限り、他方の端点との関連において及び他方の端点とは独立に、の両方で重要であることは更に理解される。最終的に、明確に開示された範囲内のすべての個々の値及びそれに含まれる値の部分的な範囲も、文脈上特に明記されていない限り、具体的に検討され、開示されているとみなされるべきであることは理解されるべきである。特定の場合においてこれらの実施形態の一部又はすべてが明確に開示されているかどうかに関わらず、前述のことは適用される。 Ranges may be expressed herein as "about" one particular value and/or "about" another particular value. When such ranges are expressed, the range from one particular value and/or to the other particular value is also considered to be specifically contemplated and disclosed, unless the context clearly indicates otherwise. Similarly, when values are expressed as approximately by use of the antecedent "about," it is understood that the particular value forms another specifically contemplated embodiment that is to be considered disclosed, unless the context clearly indicates otherwise. It is further understood that each endpoint of the range is significant both in relation to the other endpoint and independently of the other endpoint, unless the context clearly indicates otherwise. Finally, it is to be understood that all individual values and subranges of values within an expressly disclosed range are also to be considered to be specifically contemplated and disclosed, unless the context clearly indicates otherwise. The foregoing applies regardless of whether some or all of these embodiments are expressly disclosed in a particular instance.
他に定義されない限り、本明細書で使用するすべての技術的及び科学的用語は、開示される方法及び組成物が属する分野の当業者によって一般に理解されるものと同じ意味を有する。本明細書に記載されるものと類似の又は等価の任意の方法及び材料は、本方法及び組成物の実行又は検査において使用され得るが、特に有用な方法、デバイス及び材料が記載される。本明細書において引用される刊行物及びそれらが引用する材料は、本明細書に参照により具体的に組み込まれる。本明細書の記載は、先行する発明を理由に本発明が、そのような開示に先行する権利がないことの承認として解釈されない。いかなる参考文献も先行技術を構成すると承認されない。参考文献の考察はそれらの著者が主張することを述べており、出願人は引用された文献の正確性及び妥当性を検証する権利を保持している。多数の刊行物が本明細書において参照されているが、これらの文献のいずれかが当技術分野における共通の一般的知識の一部を形成することの承認をそのような参考文献が構成しないことは明白に理解される。 Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the disclosed methods and compositions belong. Although any methods and materials similar or equivalent to those described herein can be used in the practice or testing of the present methods and compositions, particularly useful methods, devices and materials are described. Publications cited herein and the materials for which they are cited are specifically incorporated herein by reference. Nothing herein should be construed as an admission that the invention is not entitled to antedate such disclosure by virtue of prior invention. No admission is made that any reference constitutes prior art. The discussion of the references states what their authors assert, and applicants reserve the right to verify the accuracy and pertinence of the cited documents. Although a number of publications have been referenced herein, it is expressly understood that such references do not constitute an admission that any of these documents form part of the common general knowledge in the art.
本明細書の記載及び特許請求の範囲の全体を通じて、語「含む(comprise)」及び「含んでいる(comprising)」及び「含む(comprises)」等の語の変化形は、「これだけに限らないが含む」を意味し、例えば他の添加物、成分、整数又は工程を除外することを意図しない。特に、1つ若しくは複数の工程又は操作を含んでいるとして述べられている方法において、各工程が列挙されているものを含む(工程が「から構成される(consisting of)」等の限定する用語を含まない限り)ことが具体的に検討され、各工程が工程において列挙されていない、例えば他の添加物、成分、整数又は工程を除外することを意図しないことを意味する。 Throughout the description and claims of this specification, the words "comprise" and variations of words such as "comprising" and "comprises" mean "including but not limited to" and are not intended to exclude, for example, other additives, ingredients, integers, or steps. In particular, in a method described as including one or more steps or operations, it is specifically contemplated that each step is inclusive of what is recited (unless the step includes a limiting term such as "consisting of") and each step is not intended to exclude, for example, other additives, ingredients, integers, or steps not recited in the step.
B.交流電場
本明細書において開示される方法は、交流電場を含む。一部の態様では、本明細書において開示される方法において使用される交流電場は、腫瘍治療電場である。一部の態様では、交流電場は、交流電場が印加される細胞又は状態の種類に応じて変動し得る。一部の態様では、交流電場は、対象の身体に置かれた1つ又は複数の電極を通じて印加され得る。一部の態様では、2対以上の電極がある場合もある。例えば、アレイは、患者の全面/背面及び側面に置かれてよく、本明細書において開示されるシステム及び方法を用いて使用され得る。一部の態様では、2対の電極が使用される場合、交流電場は対の電極の間で交流であってよい。例えば、第1の対の電極は対象の前面及び背面に置かれてよく、第2の対の電極は対象のいずれかの側面に置かれてよく、次いで交流電場は印加されてよく、前面及び背面の電極の間に、次いで側面から側面の電極の間で交替してよい。
B. Alternating Electric Field The methods disclosed herein include an alternating electric field. In some embodiments, the alternating electric field used in the methods disclosed herein is a tumor treatment electric field. In some embodiments, the alternating electric field can vary depending on the type of cell or condition to which the alternating electric field is applied. In some embodiments, the alternating electric field can be applied through one or more electrodes placed on the subject's body. In some embodiments, there may be more than one pair of electrodes. For example, arrays can be placed on the front/back and sides of the patient and used with the systems and methods disclosed herein. In some embodiments, when two pairs of electrodes are used, the alternating electric field can be alternating between the pair of electrodes. For example, a first pair of electrodes can be placed on the front and back of the subject, and a second pair of electrodes can be placed on either side of the subject, and then the alternating electric field can be applied, alternating between the front and back electrodes, and then side to side electrodes.
一部の態様では、交流電場の周波数は、100kHzから1MHzの間である。一部の態様では、交流電場の周波数は、100から500kHzの間である。交流電場の周波数は、これだけに限らないが50から500kHzの間、100から500kHzの間、25kHzから1MHzの間、50から190kHzの間、25から190kHzの間、180から220kHzの間又は210から400kHzの間であり得る。一部の態様では、交流電場の周波数は、50kHz、100kHz、150kHz、200kHz、250kHz、300kHz、350kHz、400kHz、450kHz、500kHz又はこれらの間の任意の周波数での電場であり得る。一部の態様では、交流電場の周波数は、約200kHzから約400kHz、約250kHzから約350kHzであり、約300kHzであり得る。 In some embodiments, the frequency of the AC electric field is between 100 kHz and 1 MHz. In some embodiments, the frequency of the AC electric field is between 100 and 500 kHz. The frequency of the AC electric field can be, but is not limited to, between 50 and 500 kHz, between 100 and 500 kHz, between 25 kHz and 1 MHz, between 50 and 190 kHz, between 25 and 190 kHz, between 180 and 220 kHz, or between 210 and 400 kHz. In some embodiments, the frequency of the AC electric field can be 50 kHz, 100 kHz, 150 kHz, 200 kHz, 250 kHz, 300 kHz, 350 kHz, 400 kHz, 450 kHz, 500 kHz, or any frequency therebetween. In some embodiments, the frequency of the AC electric field can be about 200 kHz to about 400 kHz, about 250 kHz to about 350 kHz, or about 300 kHz.
一部の態様では、交流電場の場の強度は、0.5から4V/cm RMSの間であり得る。一部の態様では、交流電場の場の強度は1から4V/cm RMSであり得る。一部の態様では、様々な場の強度が使用され得る(例えば、0.1から10V/cmの間)。一部の態様では、場の強度は1.75V/cm RMSであり得る。一部の実施形態では、場の強度は少なくとも1V/cm RMSである。一部の態様では、場の強度は、少なくとも0.9V/cm RMSであり得る。他の実施形態では、例えば、2つ以上の周波数を同時に組み合わせて、及び/又は2つ以上の周波数を異なる時期に印加して、場の強度の組合せが印加される。 In some aspects, the field strength of the alternating electric field can be between 0.5 and 4 V/cm RMS. In some aspects, the field strength of the alternating electric field can be between 1 and 4 V/cm RMS. In some aspects, a range of field strengths can be used (e.g., between 0.1 and 10 V/cm). In some aspects, the field strength can be 1.75 V/cm RMS. In some embodiments, the field strength is at least 1 V/cm RMS. In some aspects, the field strength can be at least 0.9 V/cm RMS. In other embodiments, a combination of field strengths is applied, e.g., combining two or more frequencies simultaneously and/or applying two or more frequencies at different times.
一部の態様では、交流電場は、0.5時間から72時間の範囲の様々な間隔で印加され得る。一部の態様では、様々な持続時間が使用され得る(例えば、0.5時間から14日間の間)。一部の態様では、交流電場の印加は、定期的に反復され得る。例えば、交流電場は、2時間の持続時間で毎日印加され得る。 In some embodiments, the AC field may be applied for various intervals ranging from 0.5 hours to 72 hours. In some embodiments, various durations may be used (e.g., between 0.5 hours and 14 days). In some embodiments, the application of the AC field may be repeated periodically. For example, the AC field may be applied daily for a duration of 2 hours.
一部の態様では、曝露は、少なくとも6時間、少なくとも12時間、少なくとも24時間、少なくとも36時間、少なくとも48時間又は少なくとも72時間又はそれ以上持続し得る。 In some embodiments, the exposure may last for at least 6 hours, at least 12 hours, at least 24 hours, at least 36 hours, at least 48 hours, or at least 72 hours or more.
本開示の方法は、1つ又は複数の交流電場を細胞に又は対象に印加することを含む。一部の態様では、交流電場は、標的部位又は腫瘍標的部位に印加される。交流電場を細胞に印加する場合、これは、細胞を含む対象に交流電場を印加することをしばしば指し得る。したがって、対象の標的部位に交流電場を印加することは、細胞に交流電場を印加することを生じる。 The methods of the present disclosure include applying one or more alternating electric fields to a cell or to a subject. In some embodiments, the alternating electric field is applied to a target site or a tumor target site. When applying an alternating electric field to a cell, this can often refer to applying the alternating electric field to a subject that includes the cell. Thus, applying an alternating electric field to a target site of a subject results in applying an alternating electric field to the cell.
C.トラスツズマブ
それを必要とする対象の標的部位に投与されるトラスツズマブ抗体が開示される。一部の態様では、トラスツズマブは、交流電場を用いた組合せ治療又は処置として投与される。
C. Trastuzumab Disclosed are trastuzumab antibodies administered to a target site in a subject in need thereof. In some embodiments, the trastuzumab is administered as a combination therapy or treatment with an alternating electric field.
1つ又は複数のトラスツズマブ抗体を含む組成物が開示される。 Compositions are disclosed that include one or more trastuzumab antibodies.
一部の態様では、本組成物は、有効成分として、本明細書に記載のトラスツズマブ、及び薬学的に許容される担体、希釈剤、又は賦形剤を含む、又はそれらから本質的になる、又はそれらからなる医薬組成物(例えば、製剤、調製物、医薬)であり得る。 In some aspects, the composition may be a pharmaceutical composition (e.g., formulation, preparation, medicament) comprising, consisting essentially of, or consisting of, as an active ingredient, trastuzumab as described herein, and a pharma- ceutically acceptable carrier, diluent, or excipient.
薬学的に許容される担体又は希釈剤を含むトラスツズマブの組成物及び製剤が開示される。例えば、トラスツズマブ及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が開示される。 Compositions and formulations of trastuzumab that include a pharma- ceutically acceptable carrier or diluent are disclosed. For example, pharmaceutical compositions that include trastuzumab and a pharma- ceutically acceptable carrier are disclosed.
例えば、本明細書に記載の組成物は、薬学的に許容される担体を含み得る。「薬学的に許容される」によって、活性成分のいかなる分解も最小化しかつ対象におけるいかなる有害な副作用も最小化するように選択される、当業者に周知である材料又は担体が意味される。担体の例として、ジミリストイルホスファチジル(DMPC)、リン酸緩衝生理食塩水又は多胞性リポソームが挙げられる。例えば、PG:PC:コレステロール:ペプチド又はPC:ペプチドは、本発明において担体として使用され得る。他の好適な薬学的に許容される担体及びそれらの配合物は、Remington: The Science and Practice of Pharmacy (19th ed.) ed. A.R. Gennaro、Mack Publishing Company、Easton、PA 1995に記載されている。典型的には、適切な量の薬学的に許容される塩は、配合物において配合物を等張にするために使用される。薬学的に許容される担体の他の例として、これだけに限らないが、生理食塩水、リンゲル溶液及びブドウ糖溶液が挙げられる。溶液のpHは、約5から約8又は約7から約7.5であり得る。さらなる担体として、組成物を含有する固形疎水性ポリマーの半透性マトリックス等の徐放調製物が挙げられ、そのマトリックスは、成型品の形態、例えば、フィルム、ステント(血管再建術手順の際に血管に埋入される)、リポソーム又は微小粒子の形態である。ある特定の担体が、例えば投与の経路及び投与される組成物の濃度に応じて更に好ましい場合があることは当業者に明らかである。最も典型的にはこれらは、滅菌水、生理食塩水及び生理学的pHの緩衝液等の溶液が挙げられる、ヒトへの薬物の投与のための標準的担体である。 For example, the compositions described herein may include a pharma- ceutically acceptable carrier. By "pharmaceutically acceptable" is meant a material or carrier well known to one of skill in the art that is selected to minimize any degradation of the active ingredient and to minimize any adverse side effects in the subject. Examples of carriers include dimyristoyl phosphatidylcholine (DMPC), phosphate buffered saline, or multivesicular liposomes. For example, PG:PC:cholesterol:peptide or PC:peptide may be used as a carrier in the present invention. Other suitable pharma- ceutically acceptable carriers and their formulations are described in Remington: The Science and Practice of Pharmacy (19th ed.) ed. A.R. Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, PA 1995. Typically, an appropriate amount of a pharma- ceutically acceptable salt is used in the formulation to make the formulation isotonic. Other examples of pharma- ceutically acceptable carriers include, but are not limited to, saline, Ringer's solution, and dextrose solution. The pH of the solution may be from about 5 to about 8 or from about 7 to about 7.5. Further carriers include sustained release preparations such as semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the composition, which matrices are in the form of shaped articles, e.g., films, stents (implanted in blood vessels during revascularization procedures), liposomes, or microparticles. It will be apparent to those skilled in the art that certain carriers may be more preferable depending, for example, on the route of administration and concentration of the composition being administered. Most typically these will be standard carriers for administration of drugs to humans, including solutions such as sterile water, saline, and buffered solutions at physiological pH.
医薬組成物は、本発明のポリペプチド、ペプチド、核酸、ベクターの意図する活性が損なわれない限り、担体、増粘剤、希釈剤、緩衝液、保存剤等も含み得る。医薬組成物は、抗菌剤、抗炎症剤、麻酔剤等の1つ又は複数の活性成分も(本発明の組成物に加えて)含み得る。本明細書に記載される方法において、本開示の組成物の細胞への送達は、種々の機序を介してであってよい。医薬組成物は、局所又は全身性処置が望ましいかどうか、及び処置される領域に応じて多数の方法で投与され得る。 Pharmaceutical compositions may also include carriers, thickeners, diluents, buffers, preservatives, and the like, so long as the intended activity of the polypeptides, peptides, nucleic acids, and vectors of the invention is not impaired. Pharmaceutical compositions may also include one or more active ingredients (in addition to the compositions of the invention), such as antibacterial agents, anti-inflammatory agents, anesthetic agents, and the like. In the methods described herein, delivery of the compositions of the present disclosure to cells may be via a variety of mechanisms. Pharmaceutical compositions may be administered in a number of ways, depending on whether local or systemic treatment is desired and the area to be treated.
1.組成物の送達
非経口投与の調製物として、滅菌水性又は非水性溶液、懸濁剤及び乳剤が挙げられる。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油等の植物油及びオレイン酸エチル等の注射可能な有機エステルである。水性担体として、生理食塩水及び緩衝媒体を含む、水、アルコール性/水性溶液、乳剤又は懸濁剤が挙げられる。非経口ビヒクルとして、塩化ナトリウム溶液、リンゲルブドウ糖、ブドウ糖及び塩化ナトリウム、乳酸リンゲル又は固定油が挙げられる。静脈内ビヒクルとして、補充液及び栄養補充薬、電解質補充薬(リンゲルブドウ糖に基づくもの等)等が挙げられる。例えば抗菌剤、抗酸化剤、キレート薬剤及び不活性ガス等の保存剤及び他の添加物も存在してよい。
1. Delivery of the Composition Preparations for parenteral administration include sterile aqueous or non-aqueous solutions, suspensions and emulsions. Examples of non-aqueous solvents are propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oils such as olive oil, and injectable organic esters such as ethyl oleate. Aqueous carriers include water, alcoholic/aqueous solutions, emulsions or suspensions, including saline and buffered media. Parenteral vehicles include sodium chloride solution, Ringer's dextrose, dextrose and sodium chloride, lactated Ringer's or fixed oils. Intravenous vehicles include fluid and nutrient replenishers, electrolyte replenishers (such as those based on Ringer's dextrose), and the like. Preservatives and other additives may also be present, such as antibacterial agents, antioxidants, chelating agents, and inert gases.
最適な投与のための配合物として、軟膏、ローション剤、クリーム剤、ゲル剤、滴下剤、座薬、スプレー剤、液剤及び粉剤が挙げられる。従来の医薬用担体、水性の、粉末の又は油性の基材、増粘剤等が必要である又は望ましい場合がある。 Formulations for optimal administration include ointments, lotions, creams, gels, drops, suppositories, sprays, liquids and powders. Conventional pharmaceutical carriers, aqueous, powder or oily bases, thickeners and the like may be necessary or desirable.
経口投与のための組成物として、粉剤若しくは顆粒剤、水若しくは非水性媒体中の懸濁剤若しくは溶液、カプセル、サシェ(sachet)又は錠剤が挙げられる。増粘剤、香味剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤(dispersing aid)又は結合剤は望ましい場合がある。一部の組成物は、塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸及びリン酸等の無機酸、並びにギ酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸及びフマル酸等の有機酸との反応によって、又は水酸化ナトリウム、水酸化アンモニウム、水酸化カリウム等の無機塩基並びにモノ-、ジ-、トリアルキル及びアリールアミン及び置換エタノールアミン等の有機塩基との反応によって形成された薬学的に許容される酸又は塩付加塩として投与される可能性もある。 Compositions for oral administration include powders or granules, suspensions or solutions in water or non-aqueous media, capsules, sachets, or tablets. Thickeners, flavorings, diluents, emulsifiers, dispersing aids, or binders may be desirable. Some compositions may also be administered as pharma- ceutically acceptable acid or salt addition salts formed by reaction with inorganic acids such as hydrochloric acid, hydrobromic acid, perchloric acid, nitric acid, thiocyanic acid, sulfuric acid, and phosphoric acid, and organic acids such as formic acid, acetic acid, propionic acid, glycolic acid, lactic acid, pyruvic acid, oxalic acid, malonic acid, succinic acid, maleic acid, and fumaric acid, or by reaction with inorganic bases such as sodium hydroxide, ammonium hydroxide, potassium hydroxide, and organic bases such as mono-, di-, trialkyl, and aryl amines, and substituted ethanol amines.
D.処置方法
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含む、それを必要とする対象を処置する方法が開示される。
D. Methods of Treatment Disclosed are methods of treating a subject in need thereof comprising applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof.
一部の態様では、標的部位は細胞を含む。例えば、細胞は、これだけに限らないが、がん細胞であり得る。一部の態様では、がん細胞は、これだけに限らないが、乳がん細胞又は胃がん細胞であり得る。 In some aspects, the target site comprises a cell. For example, the cell can be, but is not limited to, a cancer cell. In some aspects, the cancer cell can be, but is not limited to, a breast cancer cell or a gastric cancer cell.
一部の態様では、交流電場は、トラスツズマブの投与前、投与後、又は投与と同時に印加される。一部の態様では、トラスツズマブは、交流電場の印加前、印加と同時、又は印加後に投与される。トラスツズマブを投与する前の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒前、数分前、又は数時間前を含み得る。トラスツズマブの投与後の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒後、数分後、数時間後、又は数日後を含み得る。トラスツズマブの投与と同時の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与前又は投与後の数秒又は数分を含み得る。一部の態様では、交流電場とトラスツズマブを同時に印加することは、交流電場が印加されている間にトラスツズマブを投与することを含み得る。一部の態様では、交流電場を印加する工程は、所与の時期の少なくとも1時間前に開始する。 In some aspects, the alternating electric field is applied before, after, or simultaneously with administration of trastuzumab. In some aspects, trastuzumab is administered before, simultaneously, or after application of the alternating electric field. Application of the alternating electric field before administration of trastuzumab can include seconds, minutes, or hours before administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field after administration of trastuzumab can include seconds, minutes, hours, or days after administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field simultaneously with administration of trastuzumab can include seconds or minutes before or after administration of trastuzumab. In some aspects, applying the alternating electric field and trastuzumab simultaneously can include administering trastuzumab while the alternating electric field is being applied. In some aspects, applying the alternating electric field begins at least one hour before the given time.
一部の態様では、トラスツズマブは検出可能な薬剤を含む。本明細書において使用される場合、検出可能な薬剤又は標識は、トラスツズマブと直接的又は間接的に結合することが可能であり、直接的又は間接的に測定可能で検出可能なシグナルをもたらす任意の分子である。抗体にコンジュゲート又はカップリングするための多くのこうした標識は、当業者に周知である。検出剤の例は、これだけに限らないが、放射性同位体、蛍光分子(フルオロフォア)、リン光分子、酵素、抗体、及びリガンドであり得る。 In some aspects, trastuzumab includes a detectable agent. As used herein, a detectable agent or label is any molecule that can be directly or indirectly bound to trastuzumab and that directly or indirectly provides a measurable detectable signal. Many such labels for conjugating or coupling to antibodies are known to those of skill in the art. Examples of detection agents can be, but are not limited to, radioisotopes, fluorescent molecules (fluorophores), phosphorescent molecules, enzymes, antibodies, and ligands.
場合によっては、標識は、これだけに限らないが、同位体マーカー、比色バイオセンサー、又は蛍光標識であり得る。例えば、蛍光マーカーは、これだけに限らないが、緑色蛍光タンパク質(GFP)又はローダミン蛍光タンパク質(RFP)であり得る。他の標識は、ビオチン、ストレプトアビジン、西洋ワサビペルオキシダーゼ、又はルシフェラーゼを含み得る。適切な蛍光標識の他の例は、これだけに限らないが、フルオレセイン(FITC)、5,6-カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル(NBD)、クマリン、塩化ダンシル、ローダミン、4'-6-ジアミジノ-2-フェニリノドール(DAPI)、並びにシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7を含む。好ましい蛍光標識は、フルオレセイン(5-カルボキシフルオレセイン-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)及びローダミン(5,6-テトラメチルローダミン)である。コンビナトリアル・マルチカラーコーディング(combinatorial multicolor coding)に好ましい蛍光標識は、FITC及びシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7である。これらの蛍光の吸収極大及び発光極大は、それぞれ、FITC(490nm;520nm)、Cy3(554nm;568nm)、Cy3.5(581nm;588nm)、Cy5(652nm;672nm)、Cy5.5(682nm;703nm)及びCy7(755nm;778nm)であるため、それらを同時に検出することができる。蛍光標識は、オレゴン州ユージーンのMolecular Probes社及びオハイオ州クリーブランドのResearch Organics社を含む、様々な発売元から入手することができる。 In some cases, the label may be, but is not limited to, an isotopic marker, a colorimetric biosensor, or a fluorescent label. For example, the fluorescent marker may be, but is not limited to, green fluorescent protein (GFP) or rhodamine fluorescent protein (RFP). Other labels may include biotin, streptavidin, horseradish peroxidase, or luciferase. Other examples of suitable fluorescent labels include, but are not limited to, fluorescein (FITC), 5,6-carboxymethylfluorescein, Texas Red, nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol-4-yl (NBD), coumarin, dansyl chloride, rhodamine, 4'-6-diamidino-2-phenylinodol (DAPI), and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, and Cy7. Preferred fluorescent labels are fluorescein (5-carboxyfluorescein-N-hydroxysuccinimide ester) and rhodamine (5,6-tetramethylrhodamine). Preferred fluorescent labels for combinatorial multicolor coding are FITC and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5 and Cy7. These have absorption and emission maxima of FITC (490 nm; 520 nm), Cy3 (554 nm; 568 nm), Cy3.5 (581 nm; 588 nm), Cy5 (652 nm; 672 nm), Cy5.5 (682 nm; 703 nm) and Cy7 (755 nm; 778 nm), respectively, allowing for simultaneous detection. Fluorescent labels are available from a variety of sources, including Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregon, and Research Organics, Inc., Cleveland, Ohio.
一部の態様では、交流電場の周波数は、本明細書に記載のいずれかの周波数である。一部の態様では、交流電場の周波数は、100から500kHzの間である。例えば、一部の態様では、交流電場の周波数150kHzである。 In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is any of the frequencies described herein. In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is between 100 and 500 kHz. For example, in some embodiments, the frequency of the alternating electric field is 150 kHz.
一部の態様では、交流電場は、本明細書に記載されるもののいずれかの場の強度を有する。一部の態様では、交流電場は、0.5から4V/cm RMSの間の場の強度を有する。例えば、一部の態様では、交流電場は、0.9V/cm RMSの場の強度を有する。 In some embodiments, the alternating electric field has a field strength of any of those described herein. In some embodiments, the alternating electric field has a field strength between 0.5 and 4 V/cm RMS. For example, in some embodiments, the alternating electric field has a field strength of 0.9 V/cm RMS.
一部の態様では、トラスツズマブは、腫瘍内に、頭蓋内に、脳室内に、くも膜下腔内に、硬膜外に、硬膜内に、血管内に、静脈内に(標的化若しくは非標的化)、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腹腔内に、経口で、鼻腔内に、腫瘍内注射(例えば、手術若しくは生検の際のコンピュータ断層撮影ガイド下)を介して又は吸入を介して、投与される。一部の態様では、トラスツズマブは、医薬組成物中で投与される。例えば、医薬組成物は、本明細書に記載されるもののいずれかであり得る。 In some aspects, trastuzumab is administered intratumorally, intracranially, intraventricularly, intrathecally, epidurally, intradurally, intravascularly, intravenously (targeted or non-targeted), intraarterially, intramuscularly, subcutaneously, intraperitoneally, orally, intranasally, via intratumoral injection (e.g., computed tomography-guided during surgery or biopsy), or via inhalation. In some aspects, trastuzumab is administered in a pharmaceutical composition. For example, the pharmaceutical composition can be any of those described herein.
一部の態様では、それを必要とする対象は、がんを有する。一部の態様では、がんは、乳がん又は胃がんであり得る。例えば、がんは、HER2陽性がんであり得る。 In some embodiments, the subject in need thereof has cancer. In some embodiments, the cancer can be breast cancer or gastric cancer. For example, the cancer can be a HER2-positive cancer.
一部の態様では、pAKT、pERK、及びpHER2発現のうちの1つ又は複数は、交流電場とトラスツズマブを用いた処置の結果として低減される。 In some aspects, one or more of pAKT, pERK, and pHER2 expression is reduced as a result of treatment with an alternating electric field and trastuzumab.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、第2の治療剤を対象に投与する工程を更に含む、それを必要とする対象を処置する方法が開示される。例えば、第2の治療剤は、化学療法剤であり得る。化学療法剤は、これだけに限らないが、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍性抗生物質、モノクローナル抗体、白金、又は植物アルカロイドであり得る。 A method of treating a subject in need thereof is disclosed that includes applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in the subject in need thereof; administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof, and further includes administering a second therapeutic agent to the subject. For example, the second therapeutic agent can be a chemotherapeutic agent. The chemotherapeutic agent can be, but is not limited to, an alkylating agent, an antimetabolite, an anthracycline, an antitumor antibiotic, a monoclonal antibody, platinum, or a plant alkaloid.
一部の態様では、トラスツズマブは、治療有効量で投与される。 In some embodiments, trastuzumab is administered in a therapeutically effective amount.
E.抗体の蓄積を増加させる方法
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、交流電場を印加することなく標的部位にトラスツズマブを投与する場合と比較して、トラスツズマブの蓄積が標的部位で増加する、それを必要とする対象の標的部位でトラスツズマブの蓄積を増加させる方法が開示される。
E. Methods of Increasing Antibody Accumulation Disclosed are methods of increasing accumulation of trastuzumab at a target site in a subject in need thereof, comprising: applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof, whereby accumulation of trastuzumab is increased at the target site compared to administering trastuzumab to the target site without application of an alternating electric field.
一部の態様では、トラスツズマブの蓄積の増加は、交流電場を印加しない標的部位でのトラスツズマブの量よりも多い任意の量である。一部の態様では、トラスツズマブの蓄積の増加は、交流電場を印加しない標的部位でのトラスツズマブの量よりも1倍、2倍、3倍、又はそれ以上の量である。 In some embodiments, the increase in accumulation of trastuzumab is any amount greater than the amount of trastuzumab at the target site without application of the alternating electric field. In some embodiments, the increase in accumulation of trastuzumab is 1-fold, 2-fold, 3-fold, or more than the amount of trastuzumab at the target site without application of the alternating electric field.
一部の態様では、標的部位は細胞を含む。例えば、細胞はがん細胞であり得る。一部の態様では、がん細胞は、これだけに限らないが、乳がん細胞若しくは胃がん細胞、又は任意のHer2陽性細胞であり得る。 In some embodiments, the target site comprises a cell. For example, the cell can be a cancer cell. In some embodiments, the cancer cell can be, but is not limited to, a breast cancer cell or a gastric cancer cell, or any Her2 positive cell.
一部の態様では、交流電場は、トラスツズマブの投与前、投与後、又は投与と同時に印加される。一部の態様では、トラスツズマブは、交流電場の印加前、印加と同時、又は印加後に投与される。トラスツズマブを投与する前の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒前、数分前、又は数時間前を含み得る。トラスツズマブの投与後の交流電場の印加は、抗体の投与の数秒後、数分後、数時間後、又は数日後を含み得る。トラスツズマブの投与と同時の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与前又は投与後の数秒又は数分を含み得る。一部の態様では、交流電場とトラスツズマブを同時に印加することは、交流電場が印加されている間にトラスツズマブを投与することを含み得る。一部の態様では、交流電場を印加する工程は、所与の時期の少なくとも1時間前に開始する。 In some aspects, the alternating electric field is applied before, after, or simultaneously with administration of trastuzumab. In some aspects, trastuzumab is administered before, simultaneously, or after application of the alternating electric field. Application of the alternating electric field before administration of trastuzumab can include seconds, minutes, or hours before administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field after administration of trastuzumab can include seconds, minutes, hours, or days after administration of the antibody. Application of the alternating electric field simultaneously with administration of trastuzumab can include seconds or minutes before or after administration of trastuzumab. In some aspects, applying the alternating electric field and trastuzumab simultaneously can include administering trastuzumab while the alternating electric field is being applied. In some aspects, applying the alternating electric field begins at least one hour before the given time.
一部の態様では、トラスツズマブは検出可能な薬剤を含む。本明細書において使用される場合、検出可能な薬剤又は標識は、トラスツズマブと直接的又は間接的に結合することが可能であり、直接的又は間接的に測定可能で検出可能なシグナルをもたらす任意の分子である。抗体にコンジュゲート又はカップリングするための多くのこうした標識は、当業者に周知である。検出剤の例は、これだけに限らないが、放射性同位体、蛍光分子(フルオロフォア)、リン光分子、酵素、抗体、及びリガンドであり得る。 In some aspects, trastuzumab includes a detectable agent. As used herein, a detectable agent or label is any molecule that can be directly or indirectly bound to trastuzumab and that directly or indirectly provides a measurable detectable signal. Many such labels for conjugating or coupling to antibodies are known to those of skill in the art. Examples of detection agents can be, but are not limited to, radioisotopes, fluorescent molecules (fluorophores), phosphorescent molecules, enzymes, antibodies, and ligands.
場合によっては、標識は、これだけに限らないが、同位体マーカー、比色バイオセンサー、又は蛍光標識であり得る。例えば、蛍光マーカーは、これだけに限らないが、緑色蛍光タンパク質(GFP)又はローダミン蛍光タンパク質(RFP)であり得る。他の標識は、ビオチン、ストレプトアビジン、西洋ワサビペルオキシダーゼ、又はルシフェラーゼを含み得る。適切な蛍光標識の他の例は、これだけに限らないが、フルオレセイン(FITC)、5,6-カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル(NBD)、クマリン、塩化ダンシル、ローダミン、4'-6-ジアミジノ-2-フェニリノドール(DAPI)、並びにシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7を含む。好ましい蛍光標識は、フルオレセイン(5-カルボキシフルオレセイン-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)及びローダミン(5,6-テトラメチルローダミン)である。コンビナトリアル・マルチカラーコーディングに好ましい蛍光標識は、FITC及びシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7である。これらの蛍光の吸収極大及び発光極大は、それぞれ、FITC(490nm;520nm)、Cy3(554nm;568nm)、Cy3.5(581nm;588nm)、Cy5(652nm;672nm)、Cy5.5(682nm;703nm)及びCy7(755nm;778nm)であるため、それらを同時に検出することができる。蛍光標識は、オレゴン州ユージーンのMolecular Probes社及びオハイオ州クリーブランドのResearch Organics社を含む、様々な発売元から入手することができる。 In some cases, the label may be, but is not limited to, an isotopic marker, a colorimetric biosensor, or a fluorescent label. For example, the fluorescent marker may be, but is not limited to, green fluorescent protein (GFP) or rhodamine fluorescent protein (RFP). Other labels may include biotin, streptavidin, horseradish peroxidase, or luciferase. Other examples of suitable fluorescent labels include, but are not limited to, fluorescein (FITC), 5,6-carboxymethylfluorescein, Texas Red, nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol-4-yl (NBD), coumarin, dansyl chloride, rhodamine, 4'-6-diamidino-2-phenylinodol (DAPI), and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, and Cy7. Preferred fluorescent labels are fluorescein (5-carboxyfluorescein-N-hydroxysuccinimide ester) and rhodamine (5,6-tetramethylrhodamine). Preferred fluorescent labels for combinatorial multicolor coding are FITC and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5 and Cy7. These have absorption and emission maxima of FITC (490 nm; 520 nm), Cy3 (554 nm; 568 nm), Cy3.5 (581 nm; 588 nm), Cy5 (652 nm; 672 nm), Cy5.5 (682 nm; 703 nm) and Cy7 (755 nm; 778 nm), respectively, allowing for simultaneous detection. Fluorescent labels are available from a variety of sources, including Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregon, and Research Organics, Inc., Cleveland, Ohio.
一部の態様では、交流電場の周波数は、本明細書に記載のいずれかの周波数である。一部の態様では、交流電場の周波数は、100から500kHzの間である。例えば、一部の態様では、交流電場の周波数150kHzである。 In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is any of the frequencies described herein. In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is between 100 and 500 kHz. For example, in some embodiments, the frequency of the alternating electric field is 150 kHz.
一部の態様では、交流電場は、本明細書に記載されるもののいずれかの場の強度を有する。一部の態様では、交流電場は、0.5から4V/cm RMSの間の場の強度を有する。例えば、一部の態様では、交流電場は、0.9V/cm RMSの場の強度を有する。 In some embodiments, the alternating electric field has a field strength of any of those described herein. In some embodiments, the alternating electric field has a field strength between 0.5 and 4 V/cm RMS. For example, in some embodiments, the alternating electric field has a field strength of 0.9 V/cm RMS.
一部の態様では、トラスツズマブは、腫瘍内に、頭蓋内に、脳室内に、くも膜下腔内に、硬膜外に、硬膜内に、血管内に、静脈内に(標的化若しくは非標的化)、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腹腔内に、経口で、鼻腔内に、腫瘍内注射(例えば、手術若しくは生検の際のコンピュータ断層撮影ガイド下)を介して又は吸入を介して、投与される。一部の態様では、トラスツズマブは、医薬組成物中で投与される。例えば、医薬組成物は、本明細書に記載されるもののいずれかであり得る。 In some aspects, trastuzumab is administered intratumorally, intracranially, intraventricularly, intrathecally, epidurally, intradurally, intravascularly, intravenously (targeted or non-targeted), intraarterially, intramuscularly, subcutaneously, intraperitoneally, orally, intranasally, via intratumoral injection (e.g., computed tomography-guided during surgery or biopsy), or via inhalation. In some aspects, trastuzumab is administered in a pharmaceutical composition. For example, the pharmaceutical composition can be any of those described herein.
一部の態様では、それを必要とする対象は、がんを有する。一部の態様では、がんは、乳がん又は胃がんであり得る。例えば、がんは、HER2陽性がんであり得る。 In some embodiments, the subject in need thereof has cancer. In some embodiments, the cancer can be breast cancer or gastric cancer. For example, the cancer can be a HER2-positive cancer.
一部の態様では、pAKT、pERK、及びpHER2発現のうちの1つ又は複数は、標的部位でのトラスツズマブ蓄積の増加の結果として低減される。 In some aspects, one or more of pAKT, pERK, and pHER2 expression is reduced as a result of increased trastuzumab accumulation at the target site.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程であって、交流電場を印加することなく標的部位にトラスツズマブを投与する場合と比較して、トラスツズマブの蓄積が標的部位で増加する工程;及び対象への第2の治療剤を投与する工程を更に含む、それを必要とする対象の標的部位でトラスツズマブの蓄積を増加させる方法が開示される。例えば、第2の治療剤は、化学療法剤であり得る。化学療法剤は、これだけに限らないが、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍性抗生物質、モノクローナル抗体、白金、又は植物アルカロイドであり得る。 A method is disclosed for increasing accumulation of trastuzumab at a target site in a subject in need thereof, further comprising the steps of: applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof, whereby accumulation of trastuzumab is increased at the target site compared to administration of trastuzumab to the target site without application of the alternating electric field; and administering a second therapeutic agent to the subject. For example, the second therapeutic agent can be a chemotherapeutic agent. The chemotherapeutic agent can be, but is not limited to, an alkylating agent, an antimetabolite, an anthracycline, an antitumor antibiotic, a monoclonal antibody, platinum, or a plant alkaloid.
一部の態様では、トラスツズマブは、治療有効量で投与される。 In some embodiments, trastuzumab is administered in a therapeutically effective amount.
F.がん細胞の増殖の阻害方法
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程を含み、がん細胞の増殖が阻害される、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞の増殖を阻害する方法が開示される。
F. Methods for Inhibiting Cancer Cell Growth Disclosed are methods for inhibiting cancer cell growth at a target site in a subject in need thereof, comprising applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to the target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof, whereby cancer cell growth is inhibited.
一部の態様では、がん細胞の増殖の阻害の増加は、交流電場が単独で投与される場合、トラスツズマブが単独で投与される場合、又は処置が対象に施されない場合の標的部位のがん細胞の増殖と比較される。一部の態様では、がん細胞の増殖は、交流電場を印加しない場合のトラスツズマブの投与と比較して、阻害される。一部の態様では、がん細胞の増殖の阻害における増加がある。例えば、がん細胞増殖の阻害における増加は、交流電場を印加せずに標的部位にトラスツズマブを投与した場合と比較される。一部の態様では、がん細胞増殖の阻害における増加は、交流電場を印加しない標的部位でのがん細胞増殖の阻害の量よりも多い任意の量である。一部の態様では、がん細胞増殖の阻害は、交流電場を印加しないがん細胞増殖の阻害の量よりも1倍、2倍、3倍、又はそれ以上の量である。 In some aspects, the increase in inhibition of cancer cell proliferation is compared to proliferation of cancer cells at the target site when the AC electric field is administered alone, when trastuzumab is administered alone, or when no treatment is administered to the subject. In some aspects, the proliferation of cancer cells is inhibited compared to administration of trastuzumab without application of an AC electric field. In some aspects, there is an increase in inhibition of cancer cell proliferation. For example, the increase in inhibition of cancer cell proliferation is compared to administration of trastuzumab to the target site without application of an AC electric field. In some aspects, the increase in inhibition of cancer cell proliferation is any amount greater than the amount of inhibition of cancer cell proliferation at the target site without application of an AC electric field. In some aspects, the inhibition of cancer cell proliferation is 1-fold, 2-fold, 3-fold, or more than the amount of inhibition of cancer cell proliferation without application of an AC electric field.
一部の態様では、標的部位は細胞を含む。例えば、細胞はがん細胞であり得る。一部の態様では、がん細胞は、これだけに限らないが、乳がん細胞又は胃がん細胞であり得る。例えば、一部の態様では、標的部位はがん細胞である。 In some aspects, the target site comprises a cell. For example, the cell can be a cancer cell. In some aspects, the cancer cell can be, but is not limited to, a breast cancer cell or a gastric cancer cell. For example, in some aspects, the target site is a cancer cell.
一部の態様では、交流電場は、トラスツズマブの投与前、投与後、又は投与と同時に印加される。一部の態様では、トラスツズマブは、交流電場の印加前、印加と同時、又は印加後に投与される。トラスツズマブを投与する前の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒前、数分前、又は数時間前を含み得る。トラスツズマブの投与後の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒後、数分後、数時間後、又は数日後を含み得る。トラスツズマブの投与と同時の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与前又は投与後の数秒又は数分を含み得る。一部の態様では、交流電場と抗体を同時に印加することは、交流電場が印加されている間にトラスツズマブを投与することを含み得る。一部の態様では、交流電場を印加する工程は、所与の時期の少なくとも1時間前に開始する。 In some aspects, the alternating electric field is applied before, after, or simultaneously with administration of trastuzumab. In some aspects, trastuzumab is administered before, simultaneously, or after application of the alternating electric field. Application of the alternating electric field before administration of trastuzumab can include seconds, minutes, or hours before administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field after administration of trastuzumab can include seconds, minutes, hours, or days after administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field simultaneously with administration of trastuzumab can include seconds or minutes before or after administration of trastuzumab. In some aspects, applying the alternating electric field and the antibody simultaneously can include administering trastuzumab while the alternating electric field is being applied. In some aspects, applying the alternating electric field begins at least one hour before the given time.
一部の態様では、トラスツズマブは検出可能な薬剤を含む。本明細書において使用される場合、検出可能な薬剤又は標識は、トラスツズマブと直接的又は間接的に結合することが可能であり、直接的又は間接的に測定可能で検出可能なシグナルをもたらす任意の分子である。抗体にコンジュゲート又はカップリングするための多くのこうした標識は、当業者に周知である。検出剤の例は、これだけに限らないが、放射性同位体、蛍光分子(フルオロフォア)、リン光分子、酵素、抗体、及びリガンドであり得る。 In some aspects, trastuzumab includes a detectable agent. As used herein, a detectable agent or label is any molecule that can be directly or indirectly bound to trastuzumab and that directly or indirectly provides a measurable detectable signal. Many such labels for conjugating or coupling to antibodies are known to those of skill in the art. Examples of detection agents can be, but are not limited to, radioisotopes, fluorescent molecules (fluorophores), phosphorescent molecules, enzymes, antibodies, and ligands.
場合によっては、標識は、これだけに限らないが、同位体マーカー、比色バイオセンサー、又は蛍光標識であり得る。例えば、蛍光マーカーは、これだけに限らないが、緑色蛍光タンパク質(GFP)又はローダミン蛍光タンパク質(RFP)であり得る。他の標識は、ビオチン、ストレプトアビジン、西洋ワサビペルオキシダーゼ、又はルシフェラーゼを含み得る。適切な蛍光標識の他の例は、これだけに限らないが、フルオレセイン(FITC)、5,6-カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル(NBD)、クマリン、塩化ダンシル、ローダミン、4'-6-ジアミジノ-2-フェニリノドール(DAPI)、並びにシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7を含む。好ましい蛍光標識は、フルオレセイン(5-カルボキシフルオレセイン-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)及びローダミン(5,6-テトラメチルローダミン)である。コンビナトリアル・マルチカラーコーディングに好ましい蛍光標識は、FITC及びシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7である。これらの蛍光の吸収極大及び発光極大は、それぞれ、FITC(490nm;520nm)、Cy3(554nm;568nm)、Cy3.5(581nm;588nm)、Cy5(652nm;672nm)、Cy5.5(682nm;703nm)及びCy7(755nm;778nm)であるため、それらを同時に検出することができる。蛍光標識は、オレゴン州ユージーンのMolecular Probes社及びオハイオ州クリーブランドのResearch Organics社を含む、様々な発売元から入手することができる。 In some cases, the label may be, but is not limited to, an isotopic marker, a colorimetric biosensor, or a fluorescent label. For example, the fluorescent marker may be, but is not limited to, green fluorescent protein (GFP) or rhodamine fluorescent protein (RFP). Other labels may include biotin, streptavidin, horseradish peroxidase, or luciferase. Other examples of suitable fluorescent labels include, but are not limited to, fluorescein (FITC), 5,6-carboxymethylfluorescein, Texas Red, nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol-4-yl (NBD), coumarin, dansyl chloride, rhodamine, 4'-6-diamidino-2-phenylinodol (DAPI), and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, and Cy7. Preferred fluorescent labels are fluorescein (5-carboxyfluorescein-N-hydroxysuccinimide ester) and rhodamine (5,6-tetramethylrhodamine). Preferred fluorescent labels for combinatorial multicolor coding are FITC and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5 and Cy7. These have absorption and emission maxima of FITC (490 nm; 520 nm), Cy3 (554 nm; 568 nm), Cy3.5 (581 nm; 588 nm), Cy5 (652 nm; 672 nm), Cy5.5 (682 nm; 703 nm) and Cy7 (755 nm; 778 nm), respectively, allowing for simultaneous detection. Fluorescent labels are available from a variety of sources, including Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregon, and Research Organics, Inc., Cleveland, Ohio.
一部の態様では、交流電場の周波数は、本明細書に記載のいずれかの周波数である。一部の態様では、交流電場の周波数は、100から500kHzの間である。例えば、一部の態様では、交流電場の周波数150kHzである。 In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is any of the frequencies described herein. In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is between 100 and 500 kHz. For example, in some embodiments, the frequency of the alternating electric field is 150 kHz.
一部の態様では、交流電場は、本明細書に記載されるもののいずれかの場の強度を有する。一部の態様では、交流電場は、0.5から4V/cm RMSの間の場の強度を有する。例えば、一部の態様では、交流電場は、0.9V/cm RMSの場の強度を有する。 In some embodiments, the alternating electric field has a field strength of any of those described herein. In some embodiments, the alternating electric field has a field strength between 0.5 and 4 V/cm RMS. For example, in some embodiments, the alternating electric field has a field strength of 0.9 V/cm RMS.
一部の態様では、トラスツズマブは、腫瘍内に、頭蓋内に、脳室内に、くも膜下腔内に、硬膜外に、硬膜内に、血管内に、静脈内に(標的化若しくは非標的化)、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腹腔内に、経口で、鼻腔内に、腫瘍内注射(例えば、手術若しくは生検の際のコンピュータ断層撮影ガイド下)を介して又は吸入を介して、投与される。一部の態様では、トラスツズマブは、医薬組成物中で投与される。例えば、医薬組成物は、本明細書に記載されるもののいずれかであり得る。 In some aspects, trastuzumab is administered intratumorally, intracranially, intraventricularly, intrathecally, epidurally, intradurally, intravascularly, intravenously (targeted or non-targeted), intraarterially, intramuscularly, subcutaneously, intraperitoneally, orally, intranasally, via intratumoral injection (e.g., computed tomography-guided during surgery or biopsy), or via inhalation. In some aspects, trastuzumab is administered in a pharmaceutical composition. For example, the pharmaceutical composition can be any of those described herein.
一部の態様では、それを必要とする対象は、がんを有する。一部の態様では、がんは、乳がん又は胃がんであり得る。例えば、がんは、HER2陽性がんであり得る。 In some embodiments, the subject in need thereof has cancer. In some embodiments, the cancer can be breast cancer or gastric cancer. For example, the cancer can be a HER2-positive cancer.
一部の態様では、pAKT、pERK、及びpHER2発現のうちの1つ又は複数は、標的部位でのトラスツズマブ蓄積の増加の結果として低減される。 In some aspects, one or more of pAKT, pERK, and pHER2 expression is reduced as a result of increased trastuzumab accumulation at the target site.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程であって、がん細胞の増殖が阻害される工程;及び第2の治療剤を対象に投与する工程を更に含む、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞の増殖を阻害する方法が開示される。例えば、第2の治療剤は、化学療法剤であり得る。化学療法剤は、これだけに限らないが、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍性抗生物質、モノクローナル抗体、白金、又は植物アルカロイドであり得る。 A method is disclosed for inhibiting cancer cell proliferation at a target site in a subject in need thereof, further comprising the steps of: applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; administering trastuzumab to the target site in the subject in need thereof, whereby proliferation of the cancer cells is inhibited; and administering a second therapeutic agent to the subject. For example, the second therapeutic agent can be a chemotherapeutic agent. The chemotherapeutic agent can be, but is not limited to, an alkylating agent, an antimetabolite, an anthracycline, an antitumor antibiotic, a monoclonal antibody, platinum, or a plant alkaloid.
一部の態様では、トラスツズマブは、治療有効量で投与される。 In some embodiments, trastuzumab is administered in a therapeutically effective amount.
G.がん細胞のアポトーシスを増加させる方法
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;及びトラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程であって、がん細胞のアポトーシスを増加させる工程を含む、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞のアポトーシスを増加させる方法が開示される。
G. Methods for Increasing Apoptosis of Cancer Cells Disclosed are methods for increasing apoptosis of cancer cells at a target site in a subject in need thereof, comprising: applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to the target site in a subject in need thereof; and administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof, thereby increasing apoptosis of cancer cells.
一部の態様では、がん細胞のアポトーシスの増加は、交流電場が単独で投与される場合、トラスツズマブが単独で投与される場合、又は処置が対象に施されない場合の標的部位の細胞アポトーシスと比較される。 In some aspects, the increase in cancer cell apoptosis is compared to cell apoptosis at the target site when the alternating electric field is administered alone, when trastuzumab is administered alone, or when no treatment is administered to the subject.
一部の態様では、がん細胞のアポトーシスの増加は、交流電場を印加しない場合のトラスツズマブの投与と比較して、阻害される。一部の態様では、がん細胞のアポトーシスの増加がある。例えば、がん細胞のアポトーシスの増加は、交流電場を印加せずに標的部位にトラスツズマブを投与した場合と比較される。一部の態様では、がん細胞アポトーシスの増加は、交流電場を印加しない標的部位でのがん細胞のアポトーシスの増加の量よりも多い任意の量である。一部の態様では、がん細胞のアポトーシスの増加は、交流電場を印加しないがん細胞のアポトーシスの増加の量よりも1倍、2倍、3倍、又はそれ以上の量である。 In some embodiments, the increase in apoptosis of cancer cells is inhibited compared to administration of trastuzumab without application of an AC electric field. In some embodiments, there is an increase in apoptosis of cancer cells. For example, the increase in apoptosis of cancer cells is compared to administration of trastuzumab to a target site without application of an AC electric field. In some embodiments, the increase in apoptosis of cancer cells is any amount greater than the amount of increase in apoptosis of cancer cells at a target site without application of an AC electric field. In some embodiments, the increase in apoptosis of cancer cells is 1-fold, 2-fold, 3-fold, or more than the amount of increase in apoptosis of cancer cells without application of an AC electric field.
一部の態様では、標的部位は細胞を含む。例えば、細胞はがん細胞であり得る。一部の態様では、がん細胞は、乳がん細胞又は胃がん細胞であり得る。例えば、一部の態様では、標的部位はがん細胞である。 In some aspects, the target site comprises a cell. For example, the cell can be a cancer cell. In some aspects, the cancer cell can be a breast cancer cell or a gastric cancer cell. For example, in some aspects, the target site is a cancer cell.
一部の態様では、交流電場は、トラスツズマブの投与前、投与後、又は投与と同時に印加される。一部の態様では、トラスツズマブは、交流電場の印加前、印加と同時、又は印加後に投与される。トラスツズマブを投与する前の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒前、数分前、又は数時間前を含み得る。トラスツズマブの投与後の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与の数秒後、数分後、数時間後、又は数日後を含み得る。トラスツズマブの投与と同時の交流電場の印加は、トラスツズマブの投与前又は投与後の数秒又は数分を含み得る。一部の態様では、交流電場と抗体を同時に印加することは、交流電場が印加されている間にトラスツズマブを投与することを含み得る。一部の態様では、交流電場を印加する工程は、所与の時期の少なくとも1時間前に開始する。 In some aspects, the alternating electric field is applied before, after, or simultaneously with administration of trastuzumab. In some aspects, trastuzumab is administered before, simultaneously, or after application of the alternating electric field. Application of the alternating electric field before administration of trastuzumab can include seconds, minutes, or hours before administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field after administration of trastuzumab can include seconds, minutes, hours, or days after administration of trastuzumab. Application of the alternating electric field simultaneously with administration of trastuzumab can include seconds or minutes before or after administration of trastuzumab. In some aspects, applying the alternating electric field and the antibody simultaneously can include administering trastuzumab while the alternating electric field is being applied. In some aspects, applying the alternating electric field begins at least one hour before the given time.
一部の態様では、トラスツズマブは検出可能な薬剤を含む。本明細書において使用される場合、検出可能な薬剤又は標識は、トラスツズマブと直接的又は間接的に結合することが可能であり、直接的又は間接的に測定可能で検出可能なシグナルをもたらす任意の分子である。抗体にコンジュゲート又はカップリングするための多くのこうした標識は、当業者に周知である。検出剤の例は、これだけに限らないが、放射性同位体、蛍光分子(フルオロフォア)、リン光分子、酵素、抗体、及びリガンドであり得る。 In some aspects, trastuzumab includes a detectable agent. As used herein, a detectable agent or label is any molecule that can be directly or indirectly bound to trastuzumab and that directly or indirectly provides a measurable detectable signal. Many such labels for conjugating or coupling to antibodies are known to those of skill in the art. Examples of detection agents can be, but are not limited to, radioisotopes, fluorescent molecules (fluorophores), phosphorescent molecules, enzymes, antibodies, and ligands.
場合によっては、標識は、これだけに限らないが、同位体マーカー、比色バイオセンサー、又は蛍光標識であり得る。例えば、蛍光マーカーは、これだけに限らないが、緑色蛍光タンパク質(GFP)又はローダミン蛍光タンパク質(RFP)であり得る。他の標識は、ビオチン、ストレプトアビジン、西洋ワサビペルオキシダーゼ、又はルシフェラーゼを含み得る。適切な蛍光標識の他の例は、これだけに限らないが、フルオレセイン(FITC)、5,6-カルボキシメチルフルオレセイン、テキサスレッド、ニトロベンゾ-2-オキサ-1,3-ジアゾール-4-イル(NBD)、クマリン、塩化ダンシル、ローダミン、4'-6-ジアミジノ-2-フェニリノドール(DAPI)、並びにシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7を含む。好ましい蛍光標識は、フルオレセイン(5-カルボキシフルオレセイン-N-ヒドロキシスクシンイミドエステル)及びローダミン(5,6-テトラメチルローダミン)である。コンビナトリアル・マルチカラーコーディングに好ましい蛍光標識は、FITC及びシアニン色素Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5及びCy7である。これらの蛍光の吸収極大及び発光極大は、それぞれ、FITC(490nm;520nm)、Cy3(554nm;568nm)、Cy3.5(581nm;588nm)、Cy5(652nm;672nm)、Cy5.5(682nm;703nm)及びCy7(755nm;778nm)であるため、それらを同時に検出することができる。蛍光標識は、オレゴン州ユージーンのMolecular Probes社及びオハイオ州クリーブランドのResearch Organics社を含む、様々な発売元から入手することができる。 In some cases, the label may be, but is not limited to, an isotopic marker, a colorimetric biosensor, or a fluorescent label. For example, the fluorescent marker may be, but is not limited to, green fluorescent protein (GFP) or rhodamine fluorescent protein (RFP). Other labels may include biotin, streptavidin, horseradish peroxidase, or luciferase. Other examples of suitable fluorescent labels include, but are not limited to, fluorescein (FITC), 5,6-carboxymethylfluorescein, Texas Red, nitrobenzo-2-oxa-1,3-diazol-4-yl (NBD), coumarin, dansyl chloride, rhodamine, 4'-6-diamidino-2-phenylinodol (DAPI), and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5, and Cy7. Preferred fluorescent labels are fluorescein (5-carboxyfluorescein-N-hydroxysuccinimide ester) and rhodamine (5,6-tetramethylrhodamine). Preferred fluorescent labels for combinatorial multicolor coding are FITC and the cyanine dyes Cy3, Cy3.5, Cy5, Cy5.5 and Cy7. These have absorption and emission maxima of FITC (490 nm; 520 nm), Cy3 (554 nm; 568 nm), Cy3.5 (581 nm; 588 nm), Cy5 (652 nm; 672 nm), Cy5.5 (682 nm; 703 nm) and Cy7 (755 nm; 778 nm), respectively, allowing for simultaneous detection. Fluorescent labels are available from a variety of sources, including Molecular Probes, Inc., Eugene, Oregon, and Research Organics, Inc., Cleveland, Ohio.
一部の態様では、交流電場の周波数は、本明細書に記載のいずれかの周波数である。一部の態様では、交流電場の周波数は、100から500kHzの間である。例えば、一部の態様では、交流電場の周波数150kHzである。 In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is any of the frequencies described herein. In some embodiments, the frequency of the alternating electric field is between 100 and 500 kHz. For example, in some embodiments, the frequency of the alternating electric field is 150 kHz.
一部の態様では、交流電場は、本明細書に記載されるもののいずれかの場の強度を有する。一部の態様では、交流電場は、0.5から4V/cm RMSの間の場の強度を有する。例えば、一部の態様では、交流電場は、0.9V/cm RMSの場の強度を有する。 In some embodiments, the alternating electric field has a field strength of any of those described herein. In some embodiments, the alternating electric field has a field strength between 0.5 and 4 V/cm RMS. For example, in some embodiments, the alternating electric field has a field strength of 0.9 V/cm RMS.
一部の態様では、トラスツズマブは、腫瘍内に、頭蓋内に、脳室内に、くも膜下腔内に、硬膜外に、硬膜内に、血管内に、静脈内に(標的化若しくは非標的化)、動脈内に、筋肉内に、皮下に、腹腔内に、経口で、鼻腔内に、腫瘍内注射(例えば、手術若しくは生検の際のコンピュータ断層撮影ガイド下)を介して又は吸入を介して、投与される。一部の態様では、トラスツズマブは、医薬組成物中で投与される。例えば、医薬組成物は、本明細書に記載されるもののいずれかであり得る。 In some aspects, trastuzumab is administered intratumorally, intracranially, intraventricularly, intrathecally, epidurally, intradurally, intravascularly, intravenously (targeted or non-targeted), intraarterially, intramuscularly, subcutaneously, intraperitoneally, orally, intranasally, via intratumoral injection (e.g., computed tomography-guided during surgery or biopsy), or via inhalation. In some aspects, trastuzumab is administered in a pharmaceutical composition. For example, the pharmaceutical composition can be any of those described herein.
一部の態様では、それを必要とする対象は、乳がん又は胃がんから選択されるがんを有する。例えば、がんは、HER2陽性がんであり得る。 In some embodiments, the subject in need thereof has a cancer selected from breast cancer or gastric cancer. For example, the cancer can be a HER2-positive cancer.
一部の態様では、pAKT、pERK、及びpHER2発現のうちの1つ又は複数は、標的部位でのトラスツズマブの蓄積の増加の結果として低減される。 In some aspects, one or more of pAKT, pERK, and pHER2 expression is reduced as a result of increased accumulation of trastuzumab at the target site.
交流電場を、ある周波数で一定期間、それを必要とする対象の標的部位に印加する工程;トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程であって、がん細胞のアポトーシスを増加させる工程を含み、第2の治療剤を対象に投与する工程を更に含む、それを必要とする対象の標的部位でがん細胞のアポトーシスを増加させる方法が開示される。例えば、第2の治療剤は、化学療法剤であり得る。化学療法剤は、これだけに限らないが、アルキル化剤、代謝拮抗剤、アントラサイクリン、抗腫瘍性抗生物質、モノクローナル抗体、白金、又は植物アルカロイドであり得る。 A method is disclosed for increasing apoptosis of cancer cells at a target site in a subject in need thereof, comprising: applying an alternating electric field at a frequency for a period of time to a target site in a subject in need thereof; administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof, whereby apoptosis of cancer cells is increased; and further comprising administering a second therapeutic agent to the subject. For example, the second therapeutic agent can be a chemotherapeutic agent. The chemotherapeutic agent can be, but is not limited to, an alkylating agent, an antimetabolite, an anthracycline, an antitumor antibiotic, a monoclonal antibody, platinum, or a plant alkaloid.
一部の態様では、トラスツズマブは、治療有効量で投与される。 In some embodiments, trastuzumab is administered in a therapeutically effective amount.
H.キット
上に記載される材料及び他の材料は、本開示の方法を実施する、又は実施を補助するための有用なキットとして任意の好適な組合せで併せて包装され得る。所与のキットにおけるキットの構成要素は、本開示の方法における合わせた使用のために設計され、適合される場合に有用である。例えば、抗体及びOptuneシステム等の交流電場を送達するための1つ又は複数の材料を含むキットが開示される。
H. Kit The above-described materials and other materials can be packaged together in any suitable combination as a useful kit for carrying out or aiding in carrying out the method of the present disclosure. The kit components in a given kit are useful when designed and adapted for combined use in the method of the present disclosure. For example, a kit is disclosed that includes one or more materials for delivering an alternating electric field, such as an antibody and an Optune system.
(A.実施例1)
腫瘍治療電場はトラスツズマブ耐性乳がんの増殖を効果的に克服することができる
ヒト上皮成長受容体2、すなわちHER2は、女性の悪性乳がん性腫瘍の約15～20%を構成する、最も発現された陰性受容体の1つである。HER2の保有率は、乳がん及びその根底のがん性細胞のプロセス、構造及び増殖に対して都合が悪く好ましくない結果をもたらす。トラスツズマブは、比較的最近の根拠に基づいたヒト化抗体であり、HER2陽性乳がんに対する処置の構築において有効であることが判明している。この薬物は、放射線治療又は化学療法と組み合わせて、体内のHER2遺伝子を調節解除する。しかし、がんの進行ステージにある進行腫瘍に罹患している患者は、単独使用されるトラスツズマブ処置に対して相当の耐性を示す。逆に、腫瘍治療電場(TTFields又はTTF)をがん治療に組み入れると、HER2遺伝子を薬物に感作させることにより、トラスツズマブ処置の計画の機能が復活する。その結果、トラスツズマブが処置中のがん性細胞の増殖及び毒性レベルを制限し続けることが促進される。この研究は、BT474細胞を介したin vivoとin vitroの両方で、このペアリングの状況及び効果を評価している。TTFieldsは電磁境界を伝導し、正弦波の放射を発生させてHER2遺伝子構造を操作する。この実施例で従った方法はまた、トリプトファンブルー又はクリスタルバイオレット等の溶液によって遺伝子細胞培養物及びその生存率を検査し、これによってある特定の被験者を実験に送る場合と送らない場合がある。ウェスタンブロット試験及びIHCは、BT474細胞における抗体及び陰性受容体の存在を確認する。これらの手順は、本質的に研究の目的である、腫瘍のトラスツズマブ耐性の性質を克服する処置計画の策定に貢献する。この実施例は、TTFsとラスツズマブの健全な組合せが、危険性のある遺伝子構造の二量体化及び発現を阻害することができることを示している。
A. Example 1
Tumor Treating Fields Can Effectively Overcome Trastuzumab-Resistant Breast Cancer Growth Human
1.材料及び方法
i.電場の実験装置
TTFsは、高電圧の機能的発生装置と増幅器に取り付けられた一対の絶縁ワイヤーを介して生成され、0～800Vの範囲の正弦波信号が発生した[17]。その結果、0.9V/cmの場の強度が印加され、周波数は150kHzであった。場の強度は、臨床現場での使用のため、0.9V/cmに保持した。次に、細胞を100mmの皿にプレーティングし、照射処置の目的のために、湿度及び5% CO2雰囲気下の37℃で、70～80%コンフルエントに達するまでインキュベートした。
1. Materials and Methods
i. Electric field experiment equipment
TTFs were generated via a pair of insulated wires attached to a high voltage functional generator and amplifier, generating a sinusoidal signal ranging from 0 to 800 V [17]. A field strength of 0.9 V/cm was applied with a frequency of 150 kHz. The field strength was kept at 0.9 V/cm for use in clinical settings. Cells were then plated in 100 mm dishes and incubated at 37°C in a humidified and 5% CO2 atmosphere until they reached 70-80% confluence for the purposes of the irradiation treatment.
ii.細胞培養
BT-474乳管がん細胞及びJIMT-1(ACC-589)乳管がん細胞は、American Type Tissue Culture Collectionから入手した。BT-474細胞及びJIMT-1細胞は、10%熱不活化ウシ胎児血清(FBS)、2mmol/L-グルタミン、及び1%ペニシリンG-ストレプトマイシンを補充したDMEM-F12中で維持した。細胞を、5% CO2で37℃の温度に維持した。
ii. Cell culture
BT-474 and JIMT-1 (ACC-589) breast ductal carcinoma cells were obtained from the American Type Tissue Culture Collection. BT-474 and JIMT-1 cells were maintained in DMEM-F12 supplemented with 10% heat-inactivated fetal bovine serum (FBS), 2 mmol/L-glutamine, and 1% penicillin G-streptomycin. Cells were maintained at 37°C with 5% CO2.
iii.細胞生存率アッセイ
細胞生存率は、トリパンブルー排除アッセイによって測定した。等量のトリパンブルー試薬を細胞懸濁液に添加し、生細胞のパーセンテージを顕微鏡によって評価した。アッセイは三連で実施した。
iii. Cell viability assay Cell viability was measured by trypan blue exclusion assay. An equal volume of trypan blue reagent was added to the cell suspension and the percentage of viable cells was assessed by microscopy. The assay was performed in triplicate.
iv.コロニー形成アッセイ(CFA)
細胞を、最終濃度5μmol/Lでのトラスツズマブ曝露の6時間後にTTFieldsに供し、その後、細胞を48時間インキュベートした。14～20日後、コロニーを0.4%クリスタルバイオレット(Sigma社、セントルイス、ミズーリ州、米国)で染色した。プレーティング効率(PE)は、特定の培養条件下でコロニーを形成した特定細胞株の播種細胞のパーセンテージを示す。照射の関数として表される生存率は、以下のように計算した:生存率=カウントしたコロニー/(播種した細胞×PE/100)。
iv. Colony formation assay (CFA)
Cells were subjected to TTFields 6 h after trastuzumab exposure at a final concentration of 5 μmol/L, after which the cells were incubated for 48 h. After 14–20 days, colonies were stained with 0.4% crystal violet (Sigma, St. Louis, MO, USA). Plating efficiency (PE) indicates the percentage of seeded cells of a particular cell line that formed colonies under specific culture conditions. Viability, expressed as a function of irradiation, was calculated as follows: Viability = colonies counted/(cells seeded x PE/100).
v.ウェスタンブロット分析
プロテアーゼ阻害剤(1mM PMSF、1μg/ml アプロチニン、1μg/ml ロイペプチン、及び1mM Na3VO4)を補充したRIPA緩衝液(50mM Tris-Cl、pH7.4、1% NP-40; 150mM NaCl、及び1mM EDTA)を使用してOS細胞から全タンパク質を抽出し、定量にはブラッドフォード法を用いた。SDS/ポリアクリルアミドゲル電気泳動を使用してタンパク質試料(30μg)を単離し、次いでこれをニトロセルロース膜に移した。非特異的抗体結合部位をブロッキングした後、膜をマウスモノクローナル抗体とともに4℃で一晩インキュベートした。ペルオキシダーゼ結合二次抗体とともに37℃で1時間インキュベートした後、タンパク質バンドを、増強化学発光試薬(GE Healthcare Biosciences社、ピッツバーグ、ペンシルバニア州、米国)によって可視化し、Amersham Imager 680(GE Healthcare Biosciences社)を検出に使用した。
v. Western Blot Analysis Total proteins were extracted from OS cells using RIPA buffer (50 mM Tris-Cl, pH 7.4, 1% NP-40; 150 mM NaCl, and 1 mM EDTA) supplemented with protease inhibitors (1 mM PMSF, 1 μg/ml aprotinin, 1 μg/ml leupeptin, and 1 mM Na3VO4), and quantified using the Bradford method. Protein samples (30 μg) were isolated using SDS/polyacrylamide gel electrophoresis and then transferred to nitrocellulose membranes. After blocking nonspecific antibody binding sites, the membranes were incubated with mouse monoclonal antibodies overnight at 4°C. After incubation with peroxidase-conjugated secondary antibodies for 1 h at 37°C, protein bands were visualized by enhanced chemiluminescence reagent (GE Healthcare Biosciences, Pittsburgh, PA, USA), and an Amersham Imager 680 (GE Healthcare Biosciences) was used for detection.
vi.免疫組織化学
免疫組織化学的評価の目的において、パラフィンで包埋した厚さ4μmの***切片を、コーティングしたスライドガラスにマウントし、調査対象のタンパク質を調査し、続いて内因性ペルオキシダーゼのブロッキング、抗原の回収、及び非特異的タンパク質結合を行った。次いで、まず一次抗体(Cell Signaling Technology社[ダンバーズ、マサチューセッツ州、米国]から購入)を使用してスライド切片をインキュベートし、次に西洋ワサビペルオキシダーゼ結合抗体を二次抗体に使用した。すべてのスライドを、3,3'-ジアミノベンジジンを使用して発色させ、ヘマトキシリンで対比染色した後、ブラインド分析を実施した。
For the purpose of immunohistochemical evaluation, paraffin-embedded breast sections with a thickness of 4 μm were mounted on coated glass slides and examined for proteins of interest, followed by blocking of endogenous peroxidase, antigen retrieval, and nonspecific protein binding. Slide sections were then first incubated with primary antibodies (purchased from Cell Signaling Technology, Inc., Danvers, MA, USA), followed by horseradish peroxidase-conjugated antibodies as secondary antibodies. All slides were developed using 3,3'-diaminobenzidine and counterstained with hematoxylin, followed by blind analysis.
vii.Alexa Fluor 488のトラスツズマブへの結合
Alexa 488-NHS Ester(Invitrogen社、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国)の溶液は、DMSOを使用して調製した。これは、pH8.4の1M炭酸水素ナトリウム溶液中の500μL TRZ溶液(10mg/mL)に溶解した1%酢酸を含んでいた。得られた反応物を室温で1時間インキュベートした後、サイズ排除PD-10カラム(GE Healthcare Bio-Sciences AB社、ウプサラ、スウェーデン)に通して精製し、最大波長517nmに設定した紫外/可視検出器に接続した。非結合型のアリコート(100μg/μL、PBS、pH 7.2)を、Nano Drop分光光度計(ThermoFisher Scientific社、ウォルサム、マサチューセッツ州、米国)を使用して、結合型のAlexa 488-TRZとともに測定した。高速液体クロマトグラフィープロファイルを使用し、TRZを取り囲むAlexa 488分子を、結合型のAlexa 488-TRZとAlexa 488非含有溶出溶液の間のピーク強度を比較することにより推定した。
Conjugation of Alexa Fluor 488 to trastuzumab
A solution of Alexa 488-NHS Ester (Invitrogen, Waltham, MA, USA) was prepared using DMSO. It contained 1% acetic acid dissolved in 500 μL TRZ solution (10 mg/mL) in 1 M sodium bicarbonate solution at pH 8.4. The resulting reaction was incubated at room temperature for 1 h and then purified through a size-exclusion PD-10 column (GE Healthcare Bio-Sciences AB, Uppsala, Sweden) and connected to a UV/Vis detector with a maximum wavelength set at 517 nm. An aliquot of unbound (100 μg/μL, PBS, pH 7.2) was measured together with bound Alexa 488-TRZ using a Nano Drop spectrophotometer (ThermoFisher Scientific, Waltham, MA, USA). Using high-performance liquid chromatography profiles, the Alexa 488 molecules surrounding TRZ were estimated by comparing the peak intensities between bound Alexa 488-TRZ and the Alexa 488-free elution solution.
viii. in Vivoでの抗体浸透試験
BT-474細胞(5×106個)をオスBALB/ヌードマウス(各群n=6)に皮下注射により投与した。デジタルノギスを使用して腫瘍のサイズを測定し、体積の計算については、以下の式を適用した:幅2×長さ×0.5。マウス(5～6週齢;体重18～20g)に関連するすべての実験は、韓国放射線医学研究所(Korea Institute of Radiological and Medical Sciences (KIRAMS))の施設内動物実験委員会(Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC))によるプロトコル(KIRAMS番号2018-0016、承認日:2018年5月15日)に従った。
viii. In Vivo Antibody Penetration Test
BT-474 cells (5 × 106 cells) were administered subcutaneously to male BALB/nude mice (n = 6 per group). Tumor size was measured using digital calipers, and the following formula was applied for volume calculation:
腫瘍サイズが約200mm3に達した時点で、150μgのAlexa 488-TRZを静脈内注射し、TTFied(0.9V/cm)を5日間曝露し、その後、マウスを心臓穿刺により失血死させ、解剖した。単離した腫瘍を直ちにパラホルムアルデヒド(4%)で固定し、4℃で一晩保存した。その後、腫瘍組織を最適切断温度(OCT)化合物に包埋し、更に使用するまで-70℃で凍結した。凍結した組織試料をLeica CM 1850クライオスタット(Leica microsystems社、米国)で8μm厚部分に分割し、PBSを使用して再水和し、DAPIで染色し、蛍光顕微鏡(In cell Analyzer 2200、GE Healthcare社、米国)で観察した。TUNEL陽性細胞をClick-iT(登録商標) TUNEL Alexa Fluor(登録商標) 647 Imaging Assayキット(Invitrogen社、カールズバッド、カリフォルニア州、米国)で染色した。更に、アポトーシス細胞をTUNELアッセイにより算出した。 When the tumor size reached approximately 200 mm3, 150 μg of Alexa 488-TRZ was injected intravenously and exposed to TTFied (0.9 V/cm) for 5 days, after which the mice were exsanguinated by cardiac puncture and dissected. The isolated tumors were immediately fixed in paraformaldehyde (4%) and stored at 4°C overnight. The tumor tissues were then embedded in optimal cutting temperature (OCT) compound and frozen at -70°C until further use. The frozen tissue samples were sectioned into 8 μm-thick sections on a Leica CM 1850 cryostat (Leica microsystems, USA), rehydrated using PBS, stained with DAPI, and observed under a fluorescent microscope (In cell Analyzer 2200, GE Healthcare, USA). TUNEL-positive cells were stained with Click-iT® TUNEL Alexa Fluor® 647 Imaging Assay kit (Invitrogen, Carlsbad, CA, USA). Additionally, apoptotic cells were calculated using the TUNEL assay.
ix.組織学的画像の取得
In cell Analyzerは、蛍光顕微鏡及びモザイクステッチング・ソフトウェア(In cell developer toolbox、GE Healthcare社、米国)を備えた特注品であるため、蛍光画像は、3つの独立したチャネルを使用して10×対物レンズで得た。更に、核画像(青色で示す)、Alexa 488-TRZ画像(緑色)にはDAPIを、血管(赤色)画像の検出にはローダミンレクチンを使用した。オフセットは、オートフォーカスによって決定した。
ix. Obtaining histological images
The In cell Analyzer was custom-built with a fluorescence microscope and mosaic stitching software (In cell developer toolbox, GE Healthcare, USA), so that the fluorescence images were acquired with a 10× objective using three independent channels. In addition, DAPI was used for the nuclear images (shown in blue), the Alexa 488-TRZ images (green), and rhodamine lectin was used for the detection of blood vessels (red) images. The offset was determined by autofocus.
x.腫瘍におけるAlexa 488のトラスツズマブ蓄積の画像解析
画像解析には、MATLAB (Math Works社、ナティック、マサチューセッツ州、米国)、ZEN(blue)、及びMIPAV (NIH、米国)で作成された社内プログラムを利用した。個々のチャネルは、ZEN(blue)からTIFFファイルにエクスポートされた。ライン強度対ライン距離を示す派生グラフは、社内のMATLABプログラムとMIPAVアプリケーション(アメリカ国立衛生研究所、ベセスダ、メリーランド州、米国)を使用して読み取った。TRZシグナル強度は、腫瘍血管から60μmと記録された。ラインプロファイリングは、各腫瘍について、末梢領域及び中心領域の血管からの様々なROIの強度を測定することによって腫瘍血管からのTRZ浸透をプロットするために使用した。更に、曲線下の面積は、2つの群のそれぞれについて、3つの腫瘍の10切片から算出した。
x. Image Analysis of Alexa 488 Trastuzumab Accumulation in Tumors Image analysis utilized in-house programs written in MATLAB (Math Works, Natick, MA, USA), ZEN(blue), and MIPAV (NIH, USA). Individual channels were exported to TIFF files from ZEN(blue). Derived graphs showing line intensity versus line distance were read using an in-house MATLAB program and MIPAV application (National Institutes of Health, Bethesda, MD, USA). TRZ signal intensity was recorded 60 μm from tumor vessels. Line profiling was used to plot TRZ penetration from tumor vessels by measuring the intensity of various ROIs from vessels in peripheral and central regions for each tumor. Furthermore, the area under the curve was calculated from 10 sections of three tumors for each of the two groups.
xi.統計分析
統計的有意性は、スチューデントのt検定を使用して決定した。P値が0.05、0.001、又は0.001未満の場合、差は有意であるとみなした。(*p<0.05; **P<0.01; ***P<0.001)。
Statistical analysis Statistical significance was determined using Student's t-test. Differences were considered significant when the P value was 0.05, 0.001, or less than 0.001. ( * p<0.05; ** P<0.01; *** P<0.001).
2.結果
i.TTFによる処置はin vitroでトラスツズマブ耐性BT474細胞株を感作する
トラスツズマブ耐性を制御するTTFの能力を確認するため、2つのHER2陽性細胞株(Jimt1及びBT474)を1～100μg(4倍希釈)で48時間処置した。
2. Results
i. Treatment with TTF sensitizes trastuzumab-resistant BT474 cell lines in vitro To determine the ability of TTF to control trastuzumab resistance, two HER2-positive cell lines (Jimt1 and BT474) were treated with 1-100 μg (4-fold dilutions) for 48 h.
取得したデータは、細胞がトラスツズマブに対して用量依存的に感受性を示すことを示した(図1A)。更に、トラスツズマブを用いた処置は、トラスツズマブ耐性細胞における細胞増殖を有意に阻害し(図1B)、がん細胞株は両方とも、様々な投与量に応じて細胞生存率が低下し、100μgでは約10%の生存率阻害が観察された。 The obtained data showed that the cells were sensitive to trastuzumab in a dose-dependent manner (Figure 1A). Moreover, treatment with trastuzumab significantly inhibited cell proliferation in trastuzumab-resistant cells (Figure 1B), and both cancer cell lines showed a decrease in cell viability at various doses, with approximately 10% inhibition of viability observed at 100 μg.
ii.TTF処置後のin vitroでのトラスツズマブ耐性HER2陽性ヒト乳がん細胞における細胞増殖の阻害
次に、Jimt1細胞を固定用量のトラスツズマブで処置し、細胞形態及び3-(4,5-ジメチルチアゾール-2-イル)-2,5-ジフェニルテトラゾリウムブロミド(MTT)アッセイ及びコロニー形成アッセイにおける乳がん細胞に対するその効果を評価した(図2A～図2C)。Jimt1細胞をTTFs(0.9V/cm)、TRZ、又はこの2つの組合せで処置し、組合せ処置群における形態に関連する変化を、位相差顕微鏡を使用して観察した。また、100μgのトラスツズマブで48時間処置した後、細胞増殖が有意に阻害されることも記録された。これらのデータは、TTFが、トラスツズマブ耐性HER2陽性ヒト乳がん細胞におけるトラスツズマブ感受性を増加させたことを示している。
ii. Inhibition of cell proliferation in trastuzumab-resistant HER2-positive human breast cancer cells in vitro after TTF treatment Next, Jimt1 cells were treated with a fixed dose of trastuzumab and its effect on breast cancer cells in cell morphology and 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) assay and colony formation assay was evaluated (Figure 2A-C). Jimt1 cells were treated with TTFs (0.9 V/cm), TRZ, or a combination of the two, and the morphology-related changes in the combination treatment group were observed using phase contrast microscopy. It was also recorded that cell proliferation was significantly inhibited after treatment with 100 μg of trastuzumab for 48 hours. These data indicate that TTF increased trastuzumab sensitivity in trastuzumab-resistant HER2-positive human breast cancer cells.
iii.トラスツズマブはin vivoでTTFields感受性を促進する
in vivoでの乳がんの増殖に対するTTFとトラスツズマブの組合せ効果を調べるため、マウスにヒトBT474細胞を注射することによって得られた皮下HER2陽性乳がんモデルを利用した。図3Aに示すように、TTFとトラスツズマブを組み合わせて処置した異種移植片は、対照群及びいずれかの処置を受けた群と比較して、増殖の低下を示した。したがって、単剤処置群の腫瘍は、組合せ処置群の腫瘍よりも顕著に大きかった。同時に、腫瘍の体積は、いずれかの処置を受けたマウスの体積と比較して、組合せ処置マウスにおいて減少した(図3A)。
iii. Trastuzumab promotes TTFields sensitivity in vivo
To investigate the combined effect of TTF and trastuzumab on breast cancer growth in vivo, a subcutaneous HER2-positive breast cancer model obtained by injecting mice with human BT474 cells was utilized. As shown in Figure 3A, xenografts treated with the combination of TTF and trastuzumab showed reduced growth compared to the control group and the groups receiving either treatment. Thus, the tumors in the single-agent treatment group were significantly larger than those in the combination treatment group. At the same time, the tumor volume was reduced in the combination-treated mice compared to the volume of mice receiving either treatment (Figure 3A).
いずれかの処置を受けたマウスの異種移植片は、組合せ処置マウスよりも強い増殖マーカーKi-67染色を示した(図3B～図3C)。総合すると、これらのデータは、トラスツズマブと組み合わせたTTFがin vivoでの乳がんの増殖を抑制することを示している。 Xenografts from mice receiving either treatment showed stronger staining for the proliferation marker Ki-67 than did combination-treated mice (Figures 3B-C). Taken together, these data indicate that TTF in combination with trastuzumab suppresses breast cancer growth in vivo.
iv.TTFとTRZを用いた処置はin vitroでP-HER2発現を阻害し、アポトーシスマーカーレベルを上昇させる
p-HER2の発現レベル及びアポトーシスマーカーの切断型PARP、並びに抗アポトーシスマーカーのBcl-2を、ウェスタン(又はタンパク質免疫ブロット)ブロッティング技術によって調べた。TTF+TRZで24時間処置した後のJimt1細胞株において、p-HER2及びBcl-2の発現レベルはダウンレギュレートされ、切断型PARPはアップレギュレートされた(図4A)。in vivoでアポトーシスを誘導する組合せ治療の能力を計算するため、アポトーシス率を末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼdUTPニック末端標識(TUNEL)アッセイにより評価した。注目すべきことには、組合せ処置によってアポトーシス細胞の細胞死が増加した(図4B)。TTFは、TUNELアッセイにより算出されたアポトーシス領域を増加させた(図4C)。
iv. Treatment with TTF and TRZ inhibits P-HER2 expression and increases apoptosis marker levels in vitro
The expression levels of p-HER2 and the apoptotic marker cleaved PARP, as well as the anti-apoptotic marker Bcl-2, were examined by Western (or protein immunoblot) blotting technique. The expression levels of p-HER2 and Bcl-2 were downregulated, and cleaved PARP was upregulated in Jimt1 cell line after treatment with TTF+TRZ for 24 hours (Figure 4A). To calculate the ability of the combination treatment to induce apoptosis in vivo, the apoptotic rate was evaluated by terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling (TUNEL) assay. Notably, the combination treatment increased cell death of apoptotic cells (Figure 4B). TTF increased the apoptotic area calculated by TUNEL assay (Figure 4C).
v.TTFを用いた処置はin vivoでP-HER2とその下流メディエーターであるAKT及びMAPKの発現レベルを阻害する
病理組織学的研究により、TTFを用いて処置された腫瘍は、対照群と比較して低レベルのHER2を発現することが示された。更に、トラスツズマブと組み合わせたTTFを使用して処置した腫瘍は、対照群と比較して、低レベルのpAKT、pERK、及びpHER2を発現した(図5)。
v.Treatment with TTF inhibits the expression levels of p-HER2 and its downstream mediators AKT and MAPK in vivo Histopathological studies showed that tumors treated with TTF expressed lower levels of HER2 compared to the control group. Furthermore, tumors treated with TTF in combination with trastuzumab expressed lower levels of pAKT, pERK, and pHER2 compared to the control group (Figure 5).
vi.TTFを用いた処置はin vivoで腫瘍血管からのAlexa 488-トラスツズマブの浸透を増加させる
抗体の蓄積は、腫瘍切片の蛍光強度を分析することによって決定した。結果は、Alexa 488-TRZ(緑色)の蓄積がTTFを用いて改善されたことを示している。全腫瘍切片における腫瘍血管からのTRZの浸透は、TTFを組み合わせて処置した腫瘍において約33%大きかった(p=0.0211)(図6)。TTFは、腫瘍血管から60μm以内でTRZの血管外漏出を有意に改善した。
vi. Treatment with TTF increases penetration of Alexa 488-Trastuzumab from tumor vessels in vivo Antibody accumulation was determined by analyzing the fluorescence intensity of tumor sections. The results show that accumulation of Alexa 488-TRZ (green) was improved with TTF. Penetration of TRZ from tumor vessels in whole tumor sections was approximately 33% greater in tumors treated with TTF in combination (p=0.0211) (Figure 6). TTF significantly improved TRZ extravasation within 60 μm of tumor vessels.
3.考察
本研究は、生命に関わるHER2陽性乳がん性遺伝子を制御するために使用される一般的なトラスツズマブ薬を、腫瘍電場治療を用いてサポートすることにより、そのようなトラスツズマブ耐性細胞の阻害が増幅され得るという仮説を検証する。本研究はまた、関与するトラスツズマブ耐性のHER2陽性乳がん細胞株に対するTTFieldシステムの働きを特定し、解明することも目的としている。そうすることによって今後の研究において使用するためのTTFの価値が高まる。1998年9月、FDAはトラスツズマブの使用と、稀な悪性腫瘍であるGBM又は多形膠芽腫の処置計画の立案においてトラスツズマブを組み込むことを承認した。トラスツズマブの治療への適用が必要とされているのは、HER2チロシンキナーゼ受容体遺伝子の活性が過剰になることによる。増殖に対応して、乳がんが二次ステージに進行する速度は驚くほど速度を増す。したがって、トラスツズマブは、ヒト化抗HER2モノクローナルIgG1抗体として働くと予測された[18]。しかし、この研究及び過去の他の例では、一次ステージを過ぎたHER2遺伝子はトラスツズマブの影響を受けないことが明らかに証明されている。このため、乳がんの処置療法は、トラスツズマブ耐性に直面していることにより非常に不利な境遇にある。トラスツズマブがHER2に作用しないことの一因となる機序は精力的に研究されており、以下の一般的な知見が挙げられる:i)トラスツズマブがHER2に結合する際に障害に直面している;ii)シグナル伝達経路のアップレギュレーションはHER2ダウンストリームを引き起こす;iii)トラスツズマブは代替経路によってシグナル伝達する傾向がある;及びiv)腫瘍細胞を破壊する免疫介在性機序を誘発することができない[6]。
3. Discussion This study tests the hypothesis that the inhibition of such trastuzumab-resistant cells can be amplified by supporting the common trastuzumab drug used to control the vital HER2-positive breast cancer gene with tumor electric field therapy. This study also aims to identify and elucidate the action of the TTFields system on the involved trastuzumab-resistant HER2-positive breast cancer cell lines, thereby enhancing the value of TTF for use in future studies. In September 1998, the FDA approved the use of trastuzumab and its incorporation in the treatment planning of rare malignant tumors GBM or glioblastoma multiforme. The need for the therapeutic application of trastuzumab is due to the excessive activity of the HER2 tyrosine kinase receptor gene. In response to the proliferation, the rate at which breast cancer progresses to the secondary stage increases at an alarming rate. Thus, trastuzumab was predicted to act as a humanized anti-HER2 monoclonal IgG1 antibody [18]. However, this study and others in the past have clearly demonstrated that the HER2 gene is not affected by trastuzumab beyond the primary stage. Thus, breast cancer treatment is severely handicapped by facing trastuzumab resistance. The mechanisms that contribute to trastuzumab's inability to act on HER2 have been intensively investigated, with the following general findings: i) trastuzumab faces obstacles in binding to HER2; ii) upregulation of signaling pathways leads to HER2 downstream; iii) trastuzumab tends to signal through alternative pathways; and iv) it fails to trigger immune-mediated mechanisms to destroy tumor cells [6].
この研究は、がん性遺伝子のトラスツズマブ耐性性質がTTFによって補正され得ることを示している。この研究は、トラスツズマブ抗体を使用し、十分に構築された電磁TTF内で感作させることによってがん性細胞を破壊するという、初めての独自の研究である。この知見により、Alexa 488-TRZトラスツズマブの浸透及び取り込みがTTF処置後に増強されたことが確認された。図4は、TTFieldがTUNELアッセイによって測定されたアポトーシス領域を増加させたことを示す。アポトーシス領域の増加は、間質圧の低下を誘発し得る。Alexa 488-TRZの浸透及び取り込みの増強は、TTF処置後の間質圧の低下によるものと説明することができる。 This study shows that the trastuzumab-resistant nature of oncogenes can be corrected by TTF. This is the first and unique study to use trastuzumab antibody to destroy cancerous cells by sensitizing them within a well-constructed electromagnetic TTF. The findings confirmed that the penetration and uptake of Alexa 488-TRZ trastuzumab was enhanced after TTF treatment. Figure 4 shows that TTFields increased the apoptotic area measured by TUNEL assay. The increase in apoptotic area can induce a decrease in interstitial pressure. The enhanced penetration and uptake of Alexa 488-TRZ can be explained by the decrease in interstitial pressure after TTF treatment.
これらの適用の結果は、HER2受容体細胞を抑制するという成功の可能性が高いものである。この研究は、腫瘍学が、化学療法とトラスツズマブの組合せを腫瘍細胞に対処する最も的確な方法とみなしている現在の状況とは対照的なものである。この公表にも関わらず、HER2過剰発現の乳がん患者の多くは、そのような方法に対して新規耐性又は後天性耐性を発現する。しかし、この研究の結果は、トラスツズマブを用いたTTF統合溶液がHER2療法を促進し得ることを示した。 The results of these applications have a high probability of success in suppressing HER2 receptor cells. This study contrasts with the current situation in oncology, where the combination of chemotherapy and trastuzumab is considered the most accurate way to address tumor cells. Despite this publication, many patients with HER2-overexpressing breast cancer develop de novo or acquired resistance to such methods. However, the results of this study showed that a TTF-integrated solution with trastuzumab could promote HER2 therapy.
この目的は、トラスツズマブ耐性乳がん細胞においてTTFが果たす状況依存的な役割を分析することにより達成される。一般的なコンセンサスは肯定的な結果である。 This aim will be achieved by analyzing the context-dependent role that TTF plays in trastuzumab-resistant breast cancer cells. The general consensus is a positive result.
この目的は、TTFがGBMの停止に関与し、サイクリンに依存するキナーゼ発現を調節解除し、カスパーゼ-3活性化を誘導し、in vitroで細胞死とともに紡錘体形成を誘導するという、これまでの研究により裏付けされている[20、21]。TTFはまた、GBMの増殖及び浸潤を阻害する役割も担っている[3、21]。更に、in vivo実験及びin vitro実験[16]は、がん性細胞を特異的に標的し、従来のがん処置に代わる魅力的な処置として提示される、TTFieldsの理想性に一致している。数多くのin vivo実験により、抗腫瘍活性の遂行におけるTTFの有望な結果が指摘されている。更に、TTFはまた、異種移植モデル及びGBMモデル又はGBM患者由来幹細胞腫瘍担持モデルにおいて実証されたように、ヒト肺腫瘍を阻害し得る[22、23]。 This aim is supported by previous studies showing that TTF is involved in GBM arrest, deregulating cyclin-dependent kinase expression, inducing caspase-3 activation, and inducing spindle formation along with cell death in vitro [20, 21]. TTF also plays a role in inhibiting GBM proliferation and invasion [3, 21]. Furthermore, in vivo and in vitro experiments [16] are consistent with the ideality of TTFields to specifically target cancerous cells and present as an attractive alternative to conventional cancer treatments. Numerous in vivo experiments point to promising results of TTF in carrying out antitumor activity. Furthermore, TTF can also inhibit human lung tumors, as demonstrated in xenograft and GBM models or GBM patient-derived stem cell tumor-bearing models [22, 23].
HER2陽性乳がんにおけるトラスツズマブと組み合わせたTTFの治療可能性を議論するために研究及び試験されなければならない開示されたデータは、TTFにより示される明確な陽性のアウトラインを示している。この研究では、BT474細胞株をin vivo実験及びin vitro実験に用い、それらの結果生じる変化を記録し、分析する。観察から、TTFieldの使用が初代トラスツズマブ耐性細胞株の感作をもたらすことが示された。その結果、これはカスパーゼ3/7アッセイの発現を増加させることによってアポトーシスを促進する。更に、TTFは、HER2陽性BT474細胞におけるHER2、p-AKT、及びp-MAPKの発現レベルのリン酸化を阻害することができる。次に、これは細胞の遊走及び浸潤を抑制し、in vivoモデルにおいて腫瘍細胞の増殖を順調に阻害する。この経路を評価することにより、この研究はまた、トラスツズマブのような抗体による化学療法に耐性のある患者への代替解決策としてのTTF療法を特定している。 The disclosed data, which must be studied and tested to discuss the therapeutic potential of TTF in combination with trastuzumab in HER2-positive breast cancer, show a clear outline of the positives shown by TTF. In this study, the BT474 cell line is used in in vivo and in vitro experiments, and the resulting changes are recorded and analyzed. Observations show that the use of TTFields leads to the sensitization of primary trastuzumab-resistant cell lines. As a result, this promotes apoptosis by increasing the expression of caspase 3/7 assays. Furthermore, TTF is able to inhibit the phosphorylation of HER2, p-AKT, and p-MAPK expression levels in HER2-positive BT474 cells. In turn, this suppresses cell migration and invasion, successfully inhibiting tumor cell proliferation in in vivo models. By evaluating this pathway, the study also identifies TTF therapy as an alternative solution for patients resistant to chemotherapy with antibodies such as trastuzumab.
結論として、本明細書で示したデータは、TTFがin vitro及びin vivoでトラスツズマブ耐性を克服することができることを示している。 In conclusion, the data presented herein demonstrate that TTF can overcome trastuzumab resistance in vitro and in vivo.
当業者は、日常的な実験を使用するだけで、本明細書に記載される方法及び組成物の具体的な実施形態についての多数の等価物を認識する又は確認することができる。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されることが意図される。 Those skilled in the art will recognize, or be able to ascertain using no more than routine experimentation, numerous equivalents to the specific embodiments of the methods and compositions described herein. Such equivalents are intended to be encompassed by the scope of the following claims.
Claims (24)
b)トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程
を含む、それを必要とする対象を処置する方法。 a) applying an alternating electric field at a frequency and for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and
b) A method of treating a subject in need thereof, comprising administering trastuzumab to a target site in a subject in need thereof.
b)トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程
を含む、それを必要とする対象の標的部位でトラスツズマブの蓄積を増加させる方法であって、
交流電場を印加することなく標的部位にトラスツズマブを投与する場合と比較して、トラスツズマブの蓄積が標的部位で増加する、方法。 a) applying an alternating electric field at a frequency and for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and
b) a method of increasing accumulation of trastuzumab at a target site in a subject in need thereof, comprising administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof,
The method, wherein accumulation of trastuzumab is increased at the target site compared to administration of trastuzumab to the target site without application of an alternating electric field.
b)トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程
を含む、それを必要とする対象の標的部位で乳がん細胞又は胃がん細胞の増殖を阻害する方法であって、
乳がん細胞又は胃がん細胞の増殖が阻害される、方法。 a) applying an alternating electric field at a frequency and for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and
b) a method of inhibiting proliferation of breast cancer cells or gastric cancer cells at a target site in a subject in need thereof, comprising administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof,
The method, wherein proliferation of breast cancer cells or gastric cancer cells is inhibited.
b)トラスツズマブを、それを必要とする対象の標的部位に投与する工程
を含む、それを必要とする対象の標的部位で乳がん細胞又は胃がん細胞のアポトーシスを増加させる方法であって、
乳がん細胞又は胃がん細胞のアポトーシスが増加される、方法。 a) applying an alternating electric field at a frequency and for a period of time to a target site in a subject in need thereof; and
b) a method for increasing apoptosis of breast or gastric cancer cells at a target site in a subject in need thereof, comprising administering trastuzumab to the target site in a subject in need thereof,
The method, wherein apoptosis of breast cancer cells or gastric cancer cells is increased.
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