JP2024075506A - コンジュゲートさせた莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用 - Google Patents
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Abstract
【課題】肺炎連鎖球菌血清型３に対してより頑強な免疫応答を生じることができる免疫原性組成物を提供する。【解決手段】（ａ）非プロトン溶媒中で、肺炎連鎖球菌血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップと、（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップと、（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップとを含む方法によって生成した肺炎連鎖球菌血清型３複合糖質を含む、免疫原性組成物である。【選択図】図２
Description
本発明は、新規のコンジュゲートさせた莢膜糖抗原（複合糖質）、前記複合糖質を含む免疫原性組成物、およびその使用に関する。本発明の免疫原性組成物は、複合糖質を典型的には含み、糖は肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型に由来する。本発明はまた、前記複合糖質を使用した、肺炎球菌感染症に対するヒト対象、特に乳児および高齢者のワクチン接種にも関する。
免疫原性が乏しい分子の免疫原性を、これらの分子を「担体」分子とコンジュゲートさせることによって増加させる手法は、何十年もの間、首尾よく利用されている（たとえばＧｏｅｂｅｌら（１９３９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．６９：５３を参照）。たとえば、多くの免疫原性組成物が記載されており、この「担体効果」を活用することによって、精製莢膜ポリマーを担体タンパク質とコンジュゲートさせてより有効な免疫原性組成物が作製されている（Ｓｃｈｎｅｅｒｓｏｎら（１９８４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．４５：５８２～５９１）。コンジュゲーションはまた、遊離多糖を用いて免疫化した場合に乳児において通常観察される、乏しい抗体応答を迂回することも示されている（Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９８５）Ｊ．Ｐｅｄｉａｔｒ．１０７：３４６、Ｉｎｓｅｌら（１９８６）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１５８：２９４）。
コンジュゲートは、ホモ二官能性、ヘテロ二官能性、またはゼロ長架橋結合剤などの様々な架橋結合またはカップリング試薬を使用して、作製が成功している。糖、タンパク質、およびペプチドなどの免疫原性分子をペプチドまたはタンパク質担体とカップリングさせるために、多くの方法が現在利用可能である。ほとんどの方法は、アミン、アミド、ウレタン、イソチオ尿素、もしくはジスルフィド結合、または一部の事例ではチオエーテルを生じる。反応性部位を担体および／または免疫原性分子上の反応性アミノ酸分子の側鎖内に導入する架橋結合またはカップリング試薬の使用の不利の点は、反応性部位が、中和されない場合、ｉｎ ｖｉｔｒｏ（したがって、コンジュゲートの機能性もしくは安定性に、潜在的に有害に影響を与える）またはｉｎ ｖｉｖｏ（したがって、調製物で免疫化したヒトもしくは動物において、有害事象の潜在的な危険性をもたらす）のいずれかで、任意の所望しない分子と自由に反応することである。そのような過剰な反応性部位は、これらの部位を不活性化させるために、様々な既知の化学反応を利用して、反応させるまたは「キャッピングする」ことができるが、これらの反応は、それ以外の点ではコンジュゲートの機能性に対して破壊的であり得る。
したがって、機能性が保存され、コンジュゲートが所望の免疫応答を誘発する能力を保持するように、適切にキャッピングされた新規複合糖質、および前記コンジュゲート（ｃｏｎｕｇａｔｅ）を調製する方法の必要性が依然として存在する。
肺炎球菌多糖、特に莢膜多糖は、細菌の表面上に見つかる重要な免疫原である。これにより、これらは肺炎球菌ワクチンの設計における重要な構成要素となることとなった。これらは、特に担体タンパク質と連結された場合に免疫応答を誘発するのに有用であることが証明されている。
一部の血清型、特に肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３は、大きく粘稠な多糖鎖を生じる（たとえば、３型では２～３百万ダルトンのグルコース／グルクロン酸の鎖）。その粘度により、その取り扱いが困難となっている。
さらに、血清型３多糖に関して、顕著な免疫原性は得ることが困難である。たとえば、１１価の肺炎球菌タンパク質Ｄ結合ワクチン（１１－Ｐｎ－ＰＤ）の免疫原性および安全性の研究では、３回用量のワクチン、続いてブースター用量の同じワクチンまたは肺炎球菌多糖ワクチンのいずれかを受けた乳児において、血清型３についてプライミング効果は観察されなかった（Ｎｕｒｋｋａら（２００４）Ｐｅｄ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．Ｊ．、２３：１００８～１０１４）。別の研究では、１１－Ｐｎ－ＰＤの用量を受けた乳児からのオプソニン化貪食作用アッセイ（ＯＰＡ）結果は、他の試験した血清型に匹敵するレベルで血清型３について抗体応答を示すことができなかった（Ｇａｔｃｈａｌｉａｎら、Ｅｕｒ．Ｓｏｃ．Ｐａｅｄ．Ｉｎｆ．Ｄｉｓ．（ＥＳＰＩＤ）の第１７回年次総会、ポスター番号４、ＰＩＡポスターセッション１、トルコＩｓｔａｎｂｕｌ、２００１年３月２７日）。急性中耳炎の防止における１１－Ｐｎ－ＰＤの有効性を評価したさらに別の研究では、ワクチンは、血清型３によって引き起こされたエピソードに対して保護をもたらさなかった（Ｐｒｙｍｕｌａら、Ｔｈｅ Ｌａｎｃｅｔ、第３６７巻：７４０～７４８（２００６年３月４日））。
したがって、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に対してより頑強な免疫応答を生じることができる抗原の必要性が存在する。
本発明は、具体的には、改善された免疫原性を示す肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を提供する。本発明はまた、改善されたコンジュゲーション収率で肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を生じるプロセス（作製する方法）も提供する。
発明の要約
一態様では、本発明は、
（ａ）非プロトン溶媒中で、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップと、
（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップと、
（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップと
を含む、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を作製する方法に関する。
一態様では、本発明は、
（ａ）非プロトン溶媒中で、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップと、
（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップと、
（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップと
を含む、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を作製する方法に関する。
特定の態様では、単離した多糖は、活性化ステップ（ａ）の前に重量平均分子量１００ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする。
一態様では、炭酸誘導体は１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。
一態様では、本発明は、前記方法に従って生成した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質に関する。
一態様では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）：
Ｘ’は、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏ、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏからなる群から選択され、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］
を有する肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質に関する。
さらなる態様では、本発明は、前記肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。
１．本発明の複合糖質
本発明は、コンジュゲートさせた莢膜糖抗原（複合糖質とも呼ばれる）を部分的に対象としており、糖は肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型、特に血清型３に由来する。本発明の目的のために、用語「複合糖質」は、担体タンパク質と共有的に連結された莢膜糖を示す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質と直接連結している。第２の実施形態では、細菌糖はスペーサー／リンカーを通じてタンパク質と連結している。
本発明は、コンジュゲートさせた莢膜糖抗原（複合糖質とも呼ばれる）を部分的に対象としており、糖は肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の血清型、特に血清型３に由来する。本発明の目的のために、用語「複合糖質」は、担体タンパク質と共有的に連結された莢膜糖を示す。一実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質と直接連結している。第２の実施形態では、細菌糖はスペーサー／リンカーを通じてタンパク質と連結している。
１．１ 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの肺炎球菌糖
図１に示すように、血清型３の多糖反復単位は、１個のグルコピラノース（Ｇｌｃｐ）および１個のグルクロン酸（ＧｌｃｐＡ）を有する直鎖状二糖単位からなる（たとえばＧｅｎｏ Ｋら（２０１５）Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ 第２８巻：３、８７１～８９９ページを参照）。
図１に示すように、血清型３の多糖反復単位は、１個のグルコピラノース（Ｇｌｃｐ）および１個のグルクロン酸（ＧｌｃｐＡ）を有する直鎖状二糖単位からなる（たとえばＧｅｎｏ Ｋら（２０１５）Ｃｌｉｎ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｒｅｖ 第２８巻：３、８７１～８９９ページを参照）。
一実施形態では、本発明において使用する莢膜肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖は、合成炭水化物である。合成肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）３型莢膜糖の調製は、たとえば、ＷＯ２０１７１７８６６４号中に開示されているように実施することができる。
しかし、好ましい実施形態では、本発明による細菌多糖の供給源は、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３細菌細胞あり得る。肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３多糖の供給源として使用することができる細菌株は、確立されている培養物保存機関（たとえばＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（疾病予防管理センター（Ｃｅｎｔｅｒｓ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ）、米国ジョージア州Ａｔｌａｎｔａ）などから）または臨床検体から得られ得る。
血清型３多糖は、当業者に知られている単離手順を使用して、細菌から直接得ることができる（たとえば、ＵＳ２００６／０２２８３８０号、ＵＳ２００６／０２２８３８１号、ＵＳ２００７／０１８４０７１号、ＵＳ２００７／０１８４０７２号、ＵＳ２００７／０２３１３４０号、およびＵＳ２００８／０１０２４９８号、ならびにＷＯ２００８／１１８７５２号中に開示されている方法を参照）。これらはまた、当業者に知られている合成プロトコルを使用して生成することもできる。これらはまた、購入することもできる（たとえばアメリカ培養細胞系統保存機関（ＡＴＣＣ、米国バージニア州Ｍａｎａｓｓａｓ）などから（たとえば参照番号ＡＴＣＣ１７２－ＸまたはＡＴＣＣ３３－Ｘ））。
血清型３多糖を細菌から直接得る場合、細菌細胞を培地中、好ましくはダイズ系の培地中で成長させることができる。肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖を産生する細菌細胞の発酵に後に、細菌細胞を溶解して細胞溶解液を生成することができる。その後、遠心分離、デプス濾過、沈殿、限外濾過、活性炭（ａｃｔｉｖａｔｅ ｃａｒｂｏｎ）を用いた処理、ダイアフィルトレーション、および／または
カラムクロマトグラフィーの使用を含めた、当分野で知られている精製技法を使用して（たとえば、ＵＳ２００６／０２２８３８０号、ＵＳ２００６／０２２８３８１号、およびＷＯ２００８／１１８７５２号を参照）、血清型３多糖を細胞溶解液から単離し得る。その後、精製血清型３莢膜多糖を免疫原性コンジュゲートの調製に使用することができる。
カラムクロマトグラフィーの使用を含めた、当分野で知られている精製技法を使用して（たとえば、ＵＳ２００６／０２２８３８０号、ＵＳ２００６／０２２８３８１号、およびＷＯ２００８／１１８７５２号を参照）、血清型３多糖を細胞溶解液から単離し得る。その後、精製血清型３莢膜多糖を免疫原性コンジュゲートの調製に使用することができる。
肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）溶解物からの血清型３多糖の精製、および精製多糖の任意選択のサイジングによって得られた、単離した血清型３莢膜多糖は、たとえば重量平均分子量（Ｍｗ）を含めた様々なパラメータによって特徴づけることができる。
多糖の分子量は、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定することができる。
好ましい実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖（すなわち、さらなる処理の前に精製したもの）は、重量平均分子量５ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～１００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～１００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～２００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～３００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～４００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～５００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７５０ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７５０ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７５０ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７５０ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７５０ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７５０ｋＤａ～１０００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１０００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１０００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１０００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１０００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１０００ｋＤａ～１５００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５００ｋＤａ～２０００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２０００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２０００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２０００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５００ｋＤａ～５０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５００ｋＤａ～４０００ｋＤａを有する。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５００ｋＤａ～３０００ｋＤａを有する。
上記範囲のうちの任意のものの内の任意の整数が、本開示の一実施形態として企図される。
好ましくは、有利な濾過性特徴、免疫原性、および／または収率を有する血清型３コンジュゲートを作製するために、標的分子量範囲への多糖のサイジングを、担体タンパク質とのコンジュゲーションの前に行う。有利には、多糖構造の重大な特徴を保存しつつ、精製血清型３多糖の大きさを低下させる。機械的または化学的サイジングを用い得る。一実施形態では、精製血清型３多糖の大きさは、化学的加水分解によって低下させる。化学的加水分解は、緩酸（たとえば、酢酸、ギ酸、プロパン酸）を使用して実施し得る。一実施形態（ｅｍｂｏｄｉｅｍｅｎｔ）では、化学的加水分解は、ギ酸を使用して実施する。一実施形態では、化学的加水分解は、プロパン酸を使用して実施する。好ましい一実施形態では、化学的加水分解は、酢酸を使用して実施する。化学的加水分解はまた、希釈強酸（希塩酸、希硫酸、希リン酸、希硝酸、または希過塩素酸など）を使用しても実施し得る。一実施形態では、化学的加水分解は、希塩酸を使用して実施する。一実施形態では、化学的加水分解は、希硫酸を使用して実施する。一実施形態では、化学的加水分解は、希リン酸を使用して実施する。一実施形態では、化学的加水分解は、希硝酸を使用して実施する。一実施形態では、化学的加水分解は、希過塩素酸を使用して実施する。精製血清型３多糖の大きさはまた、機械的ホモジナイゼーションによって低下させることもできる。一実施形態では、精製血清型３多糖の大きさは、高圧ホモジナイゼーションによって低下させる。高圧ホモジナイゼーションは、プロセス流を、十分に小さな寸法を有する流路を通ってポンピングすることによって、高い剪断速度を達成する。剪断速度は、より大きなホモジナイゼーション加圧を使用することによって増加させ、曝露時間は、供給流をホモジナイザーを通して再循環させることによって、増加させることができる。
高圧ホモジナイゼーションプロセスは、多糖の構造的特徴を保存しつつ、精製血清型３多糖の大きさを低下させるために適切な場合がある。
好ましい実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～３００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～２５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～１００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５ｋＤａ～５０ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～３００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～２５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５０ｋＤａ～１００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～３００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～２５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１００ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１１０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１２０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１１０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１３０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１２０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１２０ｋＤａ～１４０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１２０ｋＤａ～１３０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１３０ｋＤａ～１５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１３０ｋＤａ～１４０ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～３００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～２５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量１５０ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～３００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２００ｋＤａ～２５０ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量２５０ｋＤａ～３００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３００ｋＤａ～３５０ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量３５０ｋＤａ～４００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４００ｋＤａ～４５０ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４５０ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４５０ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４５０ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４５０ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４５０ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量４５０ｋＤａ～５００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量５００ｋＤａ～６００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量６００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量６００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量６００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量６００ｋＤａ～７００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量７００ｋＤａ～８００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量８００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量８００ｋＤａ～９００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、重量平均分子量９００ｋＤａ～１０００ｋＤａまでサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約５ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約５０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１１０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１２０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１３０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１４０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１５０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１６０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１７０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１８０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１９０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約２００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約２５０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約３００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約３５０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約４００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約４５０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約５００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約５５０ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約６００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約７００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約８００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約９００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖は、約１０００ｋＤａの重量平均分子量までサイジングする。
一実施形態では、単離した血清型３莢膜多糖はサイジングしない。
以下にさらに記述するように、上述の単離した血清型３莢膜多糖は、これらが反応（たとえばリンカーを用いてまたは担体タンパク質と直接）し、その後、複合糖質内に取り込まれることを可能にするために、活性化（たとえば化学的に活性化）させ得る。
本発明の目的のために、用語「複合糖質」とは、担体タンパク質と共有的に連結された糖を示す。一実施形態では、糖は、担体タンパク質と直接連結している。第２の実施形態では、糖は、スペーサー／リンカーを通じて担体タンパク質と連結している。
一般に、糖の担体との共有的コンジュゲーションは、これらをＴ非依存性抗原からＴ依存性抗原へと変換させ、したがって免疫記憶のためのプライミングを可能にするため、糖の免疫原性を増強させる。コンジュゲーションは、小児ワクチンのために特に有用である。
１．２ 本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
一部の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａである。
一部の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａである。
コンジュゲーション前の糖の重量平均分子量（Ｍｗ）とは、多糖の活性化の前（すなわち、最終的なサイジングステップの後であるが、多糖を活性化剤と反応させる前）のＭｗをいう。本発明の状況下では、多糖のＭｗは、活性化ステップによって実質的に改変されず、コンジュゲート内に取り込まれた多糖のＭｗは、活性化の前に測定した多糖のＭｗに類似している。一実施形態では、多糖は、炭酸誘導体（たとえばＣＤＩまたはＣＤＴ）をアジドリンカーと組み合わせて用いて活性化する（以下のセクション１．３を参照）。一実施形態では、多糖は、ＣＤＩをアジドリンカーと組み合わせて用いて活性化する（以下のセクション１．３を参照）。一実施形態では、多糖は、ＣＤＴをアジドリンカーと組み合わせて用いて活性化する（以下のセクション１．３を参照）。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～２００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～１５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～１４０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～１３０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～１２０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５０ｋＤａ～１１０ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７５ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～２００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～１５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～１４０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～１３０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～１２０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７５ｋＤａ～１１０ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～２００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～１５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～１４０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～１３０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～１２０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１００ｋＤａ～１１０ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２５ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～２００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～１５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～１４０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１２５ｋＤａ～１３０ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１３０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～２００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～１５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１３０ｋＤａ～１４０ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、１５０ｋＤａ～２００ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が２００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａ～４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、２００ｋＤａ～３００ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が３００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａ～５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、３００ｋＤａ～４００ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が４００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａ～６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、４００ｋＤａ～５００ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５００ｋＤａ～７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、５００ｋＤａ～６００ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が６００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、６００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、６００ｋＤａ～７００ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７００ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、７００ｋＤａ～７５０ｋＤａである。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａである。
上記範囲のうちの任意のものの内の任意の整数が、本開示の一実施形態として企図される。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約１，０００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約７５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約７００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約６００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約５００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約４００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約３００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約２００ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１５０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１４０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１３０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１２０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１１０ｋＤａである。一実施形態では、重量平均分子量（Ｍｗ）は、約１００ｋＤａである。
一部のそのような実施形態では、血清型３複合糖質は、クリックケミストリーを使用して調製する（セクション１．３を参照）。
一部の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～１５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～７５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～６００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２５０ｋＤａ～４００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～１，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～１，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～７５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５００ｋＤａ～６００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～１，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７５０ｋＤａ～１，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、１，０００ｋＤａ～１，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，０００ｋＤａ～３，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、２，２５０ｋＤａ～３，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、３，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、４，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、４，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、４，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、４，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、４，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、４，０００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、５，０００ｋＤａ～６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、６，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、６，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、６，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、６，０００ｋＤａ～７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、７，０００ｋＤａ～８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、８，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、８，０００ｋＤａ～９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、９，０００ｋＤａ～１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
上記範囲のうちの任意のものの内の任意の整数が、本開示の一実施形態として企図される。
他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約１０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約９，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約８，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約７，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約６，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約３，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約３，２５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約３，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約２，５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約２，２５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約１，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約７５０ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約６００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約５００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。さらに他の実施形態では、血清型３複合糖質は、約４００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する。
多糖の分子量は、多角度レーザー光散乱検出器（ＭＡＬＬＳ）と組み合わせたサイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）によって測定することができる。
本発明の血清型３複合糖質を特徴づけるための別の方法は、担体タンパク質（たとえばＣＲＭ１９７またはＳＣＰ）中の、糖とコンジュゲートされるリシン残基の数によるものであり、これは、コンジュゲートされたリシンの範囲（コンジュゲーション度合）として特徴づけることができる。多糖との共有結合が原因の、担体タンパク質のリシン修飾の証拠は、当業者に知られているルーチン的方法を使用したアミノ酸分析によって得ることができる。コンジュゲーションは、コンジュゲート材料を作製するために使用した担体タンパク質出発物質と比較して、回収されるリシン残基数の低下をもたらす。好ましい実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～１５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～１３である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～１０である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～８である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～６である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、２～４である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～１５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～１３である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～１０である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～８である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～６である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、３～４である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、５～１５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、５～１０である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、８～１５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、８～１２である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、１０～１５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、１０～１２である。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約２である。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約３である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約４である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約５である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約６である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約７である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約８である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約９である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約１０、約１１である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約１２である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約１３である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約１４である。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、約１５である。好ましい実施形態では、本発明の血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合は、４～７である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＳＣＰである。
本発明の血清型３複合糖質はまた、糖対担体タンパク質の比（重量／重量）によっても特徴づけられ得る。一部の実施形態では、複合糖質中の血清型３多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、０．５～３．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、０．５～２．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、０．５～１．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、０．５～１．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、１．０～１．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、１．０～２．０である。さらなる実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、０．８～１．２である。好ましい実施形態では、コンジュゲート中の血清型３莢膜多糖対担体タンパク質の比は、０．９～１．１である。
一実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約０．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約０．６である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約０．７である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約０．８である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約０．９である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．１である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．２である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．３である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．４である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．６である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．７である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．８である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約１．９である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約２．０である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約２．１である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約２．２である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約２．５である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約２．８である。他の実施形態では、糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）は、約３．０である。一部のそのような実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。他のそのような実施形態では、担体タンパク質はＳＣＰである。
本発明の血清型３複合糖質はまた、糖の反復単位の関数としての、担体タンパク質と糖との間の共有結合の数によっても特徴づけられ得る。一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の４個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。別の実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１０個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。別の実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１５個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。さらなる実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の２５個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。さらなる実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の５０個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。さらなる実施形態では、担体タンパク質と多糖との間の共有結合は、多糖の１００個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。
他の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の５～１０個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。
他の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の２～７個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。
他の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の６～１１個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。
他の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の９～１４個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。
他の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の１０～２０個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。
他の実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、多糖の４～２５個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む。
頻繁な実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。頻繁な実施形態では、担体タンパク質はＳＣＰである。
一部の実施形態では、担体タンパク質はＣＲＭ１９７であり、ＣＲＭ１９７と多糖との間の共有結合は、多糖の４、１０、１５、または２５個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。頻繁な実施形態では、担体タンパク質はＳＣＰであり、ＳＣＰと多糖との間の共有結合は、多糖の４、１０、１５、または２５個の糖反復単位毎に少なくとも１回起こる。
本発明の血清型３複合糖質および免疫原性組成物は、担体タンパク質と共有的にコンジュゲートされていないが、それでも複合糖質組成物中に存在する、遊離糖を含有し得る。遊離糖は、複合糖質と非共有的に会合（すなわち、それと非共有的に結合、それと吸着、またはそれ中もしくはそれを用いて封入される）していてよい。
好ましい実施形態では、血清型３複合糖質は、血清型３多糖の総量と比較して約５０％未満の遊離血清型３多糖を含む。好ましい実施形態では、血清型３複合糖質は、血清型３多糖の総量と比較して約４０％未満の遊離血清型３多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、血清型３複合糖質は、血清型３多糖の総量と比較して約２５％未満の遊離血清型３多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、血清型３複合糖質は、血清型３多糖の総量と比較して約２０％未満の遊離血清型３多糖を含む。さらに好ましい実施形態では、血清型３複合糖質は、血清型３多糖の総量と比較して約１５％未満の遊離血清型３多糖を含む。
血清型３複合糖質はまた、その分子の大きさの分布（Ｋｄ）によっても特徴づけられ得る。サイズ排除クロマトグラフィー媒体（ＣＬ－４Ｂ）を使用して、コンジュゲートの相対的な分子の大きさの分布を決定することができる。サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）は、重力供給カラムにおいて、コンジュゲートの分子の大きさの分布をプロファイリングするために使用される。孔から排除された媒体中の大分子は、小分子よりも早く溶出される。画分収集器を使用してカラム溶出液を収集する。画分を糖アッセイによって比色試験する。Ｋｄの決定には、カラムを較正して、分子が完全に排除される画分（Ｖ０）、（Ｋｄ＝０）、および最大保持を表す画分（Ｖｉ）、（Ｋｄ＝１）を確立する。指定した試料の特質に到達する画分（Ｖｅ）は、式、Ｋｄ＝（Ｖｅ－Ｖ０）／（Ｖｉ－Ｖ０）によって、Ｋｄに関連する。
好ましい実施形態では、血清型３複合糖質の少なくとも３０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、複合糖質の少なくとも４０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３複合糖質の少なくとも４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、または８５％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３複合糖質の少なくとも６０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３複合糖質の５０％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫｄを有する。好ましい実施形態では、血清型３複合糖質の６５％～８０％が、ＣＬ－４Ｂカラム中において０．３以下のＫｄを有する。
１．３ クリックケミストリーを使用して調製した本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、クリックケミストリーを使用して調製する。
一実施形態では、本発明の血清型３複合糖質は、クリックケミストリーを使用して調製する。
本発明（ｉｎｖｎｅｔｉｏｎ）はまた、本明細書中に開示するように、血清型３複合糖質を作製する方法にも関する。
本発明によれば、クリックケミストリーは、３つのステップ、すなわち、（ａ）非プロトン溶媒中で、単離した血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップ（多糖の活性化）と、（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップ（担体タンパク質の活性化）と、（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップとを含む。
ステップ（ａ）の後、多糖は活性化されたと言われ、本明細書中で「活性化多糖」または「活性化アジド多糖」と呼ぶ。
ステップ（ｂ）の後、担体は活性化されたと言われ、「活性化担体」と呼ぶ。
上述のように、活性化（ａ）の前に、標的分子量（ＭＷ）範囲への多糖のサイジングを行うことができる。
したがって、一実施形態では、単離した多糖は、炭酸誘導体およびアジドリンカーを用いた活性化の前にサイジングする。
一実施形態では、単離した多糖は、上記定義した標的分子量（ＭＷ）範囲のうちの任意のものにサイジングする。
一実施形態では、前記炭酸誘導体は、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）、炭酸ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、およびクロロギ酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルからなる群から選択される。
一実施形態では、前記炭酸誘導体は１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。一実施形態では、前記炭酸誘導体は１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）である。別の実施形態では、前記炭酸誘導体は炭酸ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）である。さらなる実施形態では、前記炭酸誘導体はクロロギ酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルである。
一実施形態では、前記炭酸誘導体は、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）または１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）である。好ましくは、前記炭酸誘導体は１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）：
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）［式中、ＸはＣＨ２（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、１～１０から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｎは、１～５から選択される。一実施形態では、ｎは、１～４から選択される。一実施形態では、ｎは、１～３から選択される。一実施形態では、ｎは、１～２から選択される。特定の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、ｎは２である。さらに別の実施形態では、ｎは３である。さらなる実施形態では、ｎは４である。さらなる実施形態では、ｎは５である。さらなる実施形態では、ｎは６である。さらなる実施形態では、ｎは７である。さらなる実施形態では、ｎは８である。さらなる実施形態では、ｎは９である。さらなる実施形態では、ｎは１０である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）［式中、Ｘは（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｍは、１～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１である。別の実施形態では、ｍは２である。さらに別の実施形態では、ｍは３である。さらなる実施形態では、ｍは４である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）［式中（ｗｈｅｒｅｉｎｉｎ）、ＸはＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、１～１０から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｎは、１～５から選択される。一実施形態では、ｎは、１～４から選択される。一実施形態では、ｎは、１～３から選択される。一実施形態では、ｎは、１～２から選択される。特定の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、ｎは２である。さらに別の実施形態では、ｎは３である。さらなる実施形態では、ｎは４である。さらなる実施形態では、ｎは５である。さらなる実施形態では、ｎは６である。さらなる実施形態では、ｎは７である。さらなる実施形態では、ｎは８である。さらなる実施形態では、ｎは９である。さらなる実施形態では、ｎは１０である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）［式中、ＸはＮＨＣＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｍは、１～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１である。別の実施形態では、ｍは２である。さらに別の実施形態では、ｍは３である。さらなる実施形態では、ｍは４である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）［式中、ＸはＯＣＨ２（ＣＨ２）ｎであり、ｎは、１～１０から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｎは、１～５から選択される。一実施形態では、ｎは、１～４から選択される。一実施形態では、ｎは、１～３から選択される。一実施形態では、ｎは、１～２から選択される。特定の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、ｎは２である。さらに別の実施形態では、ｎは３である。さらなる実施形態では、ｎは４である。さらなる実施形態では、ｎは５である。さらなる実施形態では、ｎは６である。さらなる実施形態では、ｎは７である。さらなる実施形態では、ｎは８である。さらなる実施形態では、ｎは９である。さらなる実施形態では、ｎは１０である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（Ｉ）［式中、ＸはＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｍは、１～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１である。別の実施形態では、ｍは２である。さらに別の実施形態では、ｍは３である。さらなる実施形態では、ｍは４である。
一実施形態では、前記アジドリンカーは式（ＩＩ）
一実施形態では、前記アジドリンカーは３－アジド－プロピルアミンである。
一実施形態では、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分および末端アルキンを有する薬剤である。
一実施形態では、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびシクロアルキンを有する薬剤である。
一実施形態では、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤は、式（ＩＩＩ）：
一実施形態では、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤は式（ＩＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎは、０～１０から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｎは、０～５から選択される。一実施形態では、ｎは、０～４から選択される。一実施形態では、ｎは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｎは０である。特定の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、ｎは２である。さらに別の実施形態では、ｎは３である。さらなる実施形態では、ｎは４である。さらなる実施形態では、ｎは５である。さらなる実施形態では、ｎは６である。さらなる実施形態では、ｎは７である。さらなる実施形態では、ｎは８である。さらなる実施形態では、ｎは９である。さらなる実施形態では、ｎは１０である。
一実施形態では、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤は式（ＩＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ（ＣＨ２）ｎＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎは、０～１０から選択され、ｍは、０～４から選択される］の化合物である。一実施形態では、ｎは、０～５から選択される。一実施形態では、ｎは、０～４から選択される。一実施形態では、ｎは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｎは０である。特定の実施形態では、ｎは１である。別の実施形態では、ｎは２である。さらに別の実施形態では、ｎは３である。さらなる実施形態では、ｎは４である。さらなる実施形態では、ｎは５である。さらなる実施形態では、ｎは６である。さらなる実施形態では、ｎは７である。さらなる実施形態では、ｎは８である。さらなる実施形態では、ｎは９である。さらなる実施形態では、ｎは１０である。一実施形態では、ｍは、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１である。特定の実施形態では、ｍは１である。別の実施形態では、ｍは２である。さらに別の実施形態では、ｍは３である。さらなる実施形態では、ｍは４である。
一実施形態では、ｎは、０～５から選択され、ｍは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～５から選択され、ｍは、０～２から選択される。
一実施形態では、ｎは、０～４から選択され、ｍは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～４から選択され、ｍは、０～２から選択される。
一実施形態では、ｎは、０～３から選択され、ｍは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～３から選択され、ｍは、０～２から選択される。
一実施形態では、ｎは、０～２から選択され、ｍは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～２から選択され、ｍは、０～２から選択される。
一実施形態では、ｎは、０～１から選択され、ｍは、０～３から選択される。一実施形態では、ｎは、０～１から選択され、ｍは、０～２から選択される。
一実施形態では、ｎは０であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは１であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは２であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは３であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは４であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは５であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは６であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは７であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは８であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは９であり、ｍは０である。一実施形態では、ｎは１０であり、ｍは０である。
一実施形態では、ｎは０であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは１であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは２であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは３であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは４であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは５であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは６であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは７であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは８であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは９であり、ｍは１である。一実施形態では、ｎは１０であり、ｍは１である。
一実施形態では、ｎは０であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは１であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは２であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは３であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは４であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは５であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは６であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは７であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは８であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは９であり、ｍは２である。一実施形態では、ｎは１０であり、ｍは２である。
一実施形態では、ｎは０であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは１であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは２であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは３であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは４であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは５であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは６であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは７であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは８であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは９であり、ｍは３である。一実施形態では、ｎは１０であり、ｍは３である。
一実施形態では、ｎは０であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは１であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは２であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは３であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは４であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは５であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは６であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは７であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは８であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは９であり、ｍは４である。一実施形態では、ｎは１０であり、ｍは４である。
一実施形態では、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤は、式（ＩＶ）
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を炭酸誘導体と反応させること、続いて、非プロトン溶媒中で、炭酸誘導体で活性化させた多糖をアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成することを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．４～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．８～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して３～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して５～１０モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．４～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．８～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して３～５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．４～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．８～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して２～３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．４～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．８～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して１～２モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．４～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．５～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．８～１モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～０．５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～０．５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～０．５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～０．５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～０．５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．４～０．５モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～０．４モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～０．４モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～０．４モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～０．４モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．３～０．４モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０１～０．３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．０５～０．３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．１～０．３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して０．２～０．３モル当量である炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０１モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０５モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．０８モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．１モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．２モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．３モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．４モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約０．５モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約２モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約３モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約４モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約５モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約８モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）は、多糖を、反応混合物中に存在する血清型３莢膜多糖の量に対して約１０モル当量の炭酸誘導体の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップａ）で、非プロトン溶媒中で、単離した多糖を炭酸誘導体と反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）から本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルアセトアミドから本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、Ｎ－メチル－２－ピロリドンから本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）から本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。
好ましい実施形態では、単離した多糖は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）またはジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で、炭酸誘導体と反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、ジメチルアセトアミド中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、Ｎ－メチル－２－ピロリドン中で、炭酸誘導体と反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、ヘキサメチルホスホルアミド（ＨＭＰＡ）中で、炭酸誘導体と反応させる。
好ましい実施形態では、単離した多糖は、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、無水ＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。
驚くべきことに、約０．１％～１％（ｖ／ｖ）の水分レベルを有する環境下で、単離した多糖をＣＤＩと反応させることで、副反応の回避が可能となることが見出された。したがって、一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～１％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．８％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．５％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．４％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．３％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．２％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～１％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．８％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる．一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．５％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．４％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．３％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、０．３％～０．８％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．３％～０．５％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．３％～０．４％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、約０．１％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．２％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．３％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．４％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．５％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．６％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．７％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．８％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．９％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～１％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．８％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる．一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．５％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．４％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．３％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．１％～０．２％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～１％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．８％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる．一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．５％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．４％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．２％～０．３％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、０．３％～０．８％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．３％～０．５％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、０．３％～０．４％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、単離した多糖は、約０．１％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．２％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．３％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．４％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．５％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．６％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．７％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．８％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。一実施形態では、単離した多糖は、約０．９％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる。
一実施形態では、その後、アジドリンカーを加える前に水を加えることによって、遊離炭酸誘導体をクエンチングする。水は遊離ＣＤＩを不活性化することができる。
したがって、一実施形態では、炭酸誘導体の活性化に、水の添加が続く。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１％～約１０％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．２％～約８％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．５％～約５％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．５％～約３％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．５％～約２．５％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．２％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．４％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１．５％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約２％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約２．５％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約３％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約５％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約７％（ｖ／ｖ）にする。一実施形態では、水を加えて、混合物中の全含水量を約１０％（ｖ／ｖ）にする。
多糖を炭酸誘導体と反応させた後、水を用いた炭酸誘導体の最終的なクエンチングの後、炭酸誘導体で活性化させた多糖をアジドリンカーと反応させる。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量（ＲＵのモル当量）に対して０．０１～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～２モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～０．５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～０．１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～２モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～０．５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～０．１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～２モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～０．５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～２モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～２モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して２～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して２～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して２～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して２～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して２～３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して３～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して３～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して３～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して３～４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して４～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して４～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して４～５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して５～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して５～８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して８～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約０．０１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約０．０５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約０．１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約０．５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約１モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約２モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約３モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約４モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約５モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約８モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
一実施形態では、ステップａ）は、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む。
上記実施形態では、前記炭酸誘導体は好ましくはＣＤＩである。別の実施形態では、前記炭酸誘導体はＣＤＴである。
一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、０．５～５０％である。アジド多糖の活性化度合は、アジドリンカーと連結された反復単位の百分率として定義される。
一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、１～３０％である。別の実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、２～２５％である。別の実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、３～２０％である。
別の実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、３～１５％である。別の実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、４～１５％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、１～６％である。
一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、３～６％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、１０～１５％である。
一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約２％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約３％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約４％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約５％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約６％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約７％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約８％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約９％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１０％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１１％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１２％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１３％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１４％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１５％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１６％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１７％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１８％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約１９％である。一実施形態では、ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合は、約２０％である。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１．５～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２．５～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して３～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して５～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して７．５～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１．５～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２．５～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して３～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して５～７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１．５～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２．５～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して３～５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１．５～３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２～３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２．５～３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～２．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～２．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～２．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１．５～２．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して２～２．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～２モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～２モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～２モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１．５～２モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～１．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～１．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して１～１．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～１モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．５～１モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～０．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約７．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約３モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約２．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約２モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約１．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約１モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約０．５モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）は、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して約０．１モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む。
一実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体の活性化度合は、１～５０である。活性化担体の活性化度合は、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と連結される担体タンパク質中のリシン残基の数として定義される。
一実施形態では、担体タンパク質は、３９個のリシン残基を含有するＣＲＭ１９７である。前記実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体の活性化度合は、１～３０であり得る。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、５～２０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、９～１８である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、８～１１である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、１５～２０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約６である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約７である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約８である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約９である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１１である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１２である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１３である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１４である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１６である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１７である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１８である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約１９である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約２０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約２１である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約２２である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約２３である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約２４である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＣＲＭ１９７）の活性化度合は、約２５である。
一実施形態では、担体タンパク質はＳＣＰまたはその断片である。前記実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体の活性化度合は、１～５０であり得る。
別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、５～５０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、７～４５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、５～１５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、２０～３０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、３０～５０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、３０～４０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、１０～４０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約７である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約１０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約１３である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約１５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約２０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約２６である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約３０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約３５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約３７である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約４０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約４５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＳＣＰ）の活性化度合は、約５０である。
一実施形態では、担体タンパク質はＴＴまたはその断片である。前記実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体の活性化度合は、１～３０であり得る。
別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、５～２５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、７～２５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、１０～２０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約７である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約１０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約１２である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約１５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約２０である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約２５である。別の実施形態では、ステップｂ）の後の活性化担体（ＴＴ）の活性化度合は、約３０である。
一実施形態では、コンジュゲーション反応ｃ）は、水性緩衝液中で実施する。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｃ）は、水性緩衝液中、触媒としての銅（Ｉ）の存在下で実施する。一実施形態では、コンジュゲーション反応ｃ）は、水性緩衝液中、酸化剤および触媒としての銅（Ｉ）の存在下で実施する。好ましい実施形態では、コンジュゲーション反応ｃ）は、水性緩衝液中、触媒としての銅（Ｉ）および酸化剤としてのアスコルベートの存在下で実施する。一実施形態では、タンパク質を副反応から保護するために、ＴＨＰＴＡ（トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン）およびアミノグアニジンをさらに加え得る。したがって、好ましい実施形態では、コンジュゲーション反応ｃ）は、水性緩衝液中、触媒としての銅（Ｉ）および酸化剤としてのアスコルベートの存在下で実施し、反応混合物は、ＴＨＰＴＡ（トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン）およびアミノグアニジンをさらに含む。
一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、０．１～３である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、０．５～２である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、０．６～１．５である。好ましい実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、０．８～１である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約０．５である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約０．６である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約０．７である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約０．８である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約０．９である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．１である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．２である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．３である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．４である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．５である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．６である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．７である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．８である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約１．９である。一実施形態では、ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）は、約２である。
クリックコンジュゲーション反応の後、コンジュゲート中に未反応のアジド基が残っている場合があり、これらは、適切なアジド基キャッピング剤を使用してキャッピングし得る。したがって、一実施形態では、ステップｃ）の後、コンジュゲート中の未反応のアジド基を、適切なアジド基キャッピング剤を使用してキャッピングする。一実施形態では、このアジド基キャッピング剤は、アルキン基を有する薬剤である。一実施形態では、このアジド基キャッピング剤は、末端アルキンを有する薬剤である。一実施形態では、このアジド基キャッピング剤は、シクロアルキンを有する薬剤である。
一実施形態では、前記アジド基キャッピング剤は式（Ｖ）：
一実施形態では、このアジド基キャッピング剤はプロパルギルアルコールである。
したがって、一実施形態では、ステップ（ｃ）の後、プロセスは、コンジュゲート中に残った未反応のアジド基を、アジド基キャッピング剤でキャッピングするステップをさらに含む。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～２０モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～１５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～１０モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～２モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～１モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～２モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．７５～１．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約１モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約１．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約０．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアジド基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約２モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
クリックコンジュゲーション反応の後、コンジュゲート中に未反応のアルキン基が残って存在する場合があり、これらは、適切なアルキン基キャッピング剤を使用してキャッピングし得る。一実施形態では、このアルキン基キャッピング剤は、アジド基を有する薬剤である。
一実施形態では、前記アルキン基キャッピング剤は式（ＶＩ）：
一実施形態では、このアルキン基キャッピング剤は３－アジド－１－プロパノールである。
したがって、一実施形態では、ステップ（ｃ）の後、プロセスは、コンジュゲート中に残った未反応のアルキン基を、アルキン基キャッピング剤でキャンピングするステップをさらに含む。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～２０モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．１～１５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～１０モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～２モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．５～１モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１～２モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して１．５～２．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約０．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約１モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約１．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約２モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約２．５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
一実施形態では、未反応のアルキン基のキャッピングは、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して約５モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う。
担体タンパク質とのコンジュゲーションの後、当業者に知られている様々な技法によって、複合糖質を精製する（糖－タンパク質コンジュゲートの量に関して富化する）ことができる。これらの技法としては、透析、濃縮／ダイアフィルトレーション操作、接線流濾過沈殿／溶出、カラムクロマトグラフィー（ＤＥＡＥまたは疎水性相互作用クロマトグラフィー）、およびデプス濾過が挙げられる。したがって、一実施形態では、本発明の複合糖質を生成するためのプロセスは、複合糖質が生成された後にそれを精製するステップを含む。
一態様では、本発明は、本明細書中に開示した方法のうちの任意のものに従って生成した血清型３複合糖質を提供する。
一態様では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）：
Ｘ’は、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏ、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏからなる群から選択され、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］
を有する血清型３複合糖質を提供する。
式（ＶＩＩ）は、本発明の血清型３複合糖質の略図である。連結が糖のすべての反復単位で存在すると理解されるべきではない。むしろ、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖反復単位の大多数は未修飾のままに保たれ、担体タンパク質と糖との間の共有結合は糖反復単位のうちの少数についてである。さらに、単個の担体タンパク質（ＣＰ）分子が複数の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖分子と連結していてよく、単個の肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖分子が単個より多くの担体タンパク質（ＣＰ）分子と連結することができる。
好ましい実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は２であり、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は１である］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は、１～１０から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～３から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～２から選択され、ｎ”は、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は０である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は６である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は６である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は６である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は、１～１０から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～３から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～１から選択される。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、Ｘは（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｎ”は、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は０である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は６である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は６である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は６である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、Ｘは（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～１から選択される。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は、１～１０から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～３から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～２から選択され、ｎ”は、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は０である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は６である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は６である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は６である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は、１～１０から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～３から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～１から選択される。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＮＨＣＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｎ”は、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は０である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は６である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は６である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は６である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＮＨＣＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～１から選択される。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＯＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は、１～１０から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～３から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～２から選択され、ｎ”は、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は０である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｎ”は６である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｎ”は６である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｎ’は６であり、ｎ”は６である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＯＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は、１～１０から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～５から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～３から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｎ’は、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～１から選択される。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｎ’は１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｎ’は２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｎ’は３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｎ’は５であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｎ”は、０～２から選択される。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は０である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｎ”は６である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｎ”は６である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｎ”は６である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｎ”は６である。
一実施形態では、本発明は、スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＯ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍＣＨ２ＣＨ２であり、ｍは、１～４から選択され、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］を有する血清型３複合糖質を提供する。
一実施形態では、ｍは、１～３から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～１０から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～４から選択され、ｎ”は、０～５から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～３から選択される。一実施形態では、ｍは、１～２から選択され、ｍ’は、０～２から選択され、ｎ”は、０～１から選択される。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は０である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は０である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は１である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は１である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は２である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は２である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は３である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は３である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は４である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は４である。
特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。特定の実施形態では、ｍは１であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。別の実施形態では、ｍは２であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらに別の実施形態では、ｍは３であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は０であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は１であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は２であり、ｎ”は５である。さらなる実施形態では、ｍは４であり、ｍ’は３であり、ｎ”は５である。
１．６ 本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質の担体タンパク質
複合糖質の１つの構成要素は、精製多糖がコンジュゲートされる担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書中で互換性があるように使用され得る。担体タンパク質は、標準のコンジュゲーション手順に従順であるべきである。
複合糖質の１つの構成要素は、精製多糖がコンジュゲートされる担体タンパク質である。用語「タンパク質担体」または「担体タンパク質」または「担体」は、本明細書中で互換性があるように使用され得る。担体タンパク質は、標準のコンジュゲーション手順に従順であるべきである。
好ましい実施形態では、血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＤＴ（ジフテリアトキソイド）、ＴＴ（破傷風トキソイド）、またはＴＴの断片Ｃ、ＣＲＭ１９７（ジフテリア毒素の無毒性であるが抗原的に同一である変異体）、他のＤＴ突然変異体（たとえば、ＣＲＭ１７６、ＣＲＭ２２８、ＣＲＭ４５（Ｕｃｈｉｄａら（１９７３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２１８：３８３８～３８４４）、ＣＲＭ９、ＣＲＭ１０２、ＣＲＭ１０３、またはＣＲＭ１０７；ならびにＮｉｃｈｏｌｌｓおよびＹｏｕｌｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ Ｔｏｘｉｎｓ、Ｆｒａｎｋｅｌ編、Ｍａｅｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ Ｉｎｃ．、（１９９２）によって記載されている他の突然変異；Ｇｌｕ－１４８の欠失またはＡｓｐ、Ｇｌｎ、もしくはＳｅｒへの突然変異および／あるいはＡｌａ１５８の欠失またはＧｌｙへの突然変異ならびに米国特許第４，７０９，０１７号および第４，９５０，７４０号中に開示されている他の突然変異；少なくとも１つまたは複数の残基Ｌｙｓ ５１６、Ｌｙｓ ５２６、Ｐｈｅ ５３０、および／またはＬｙｓ ５３４の突然変異ならびに米国特許第５，９１７，０１７号および第６，４５５，６７３号中に開示されている他の突然変異；または米国特許第５，８４３，７１１号中に開示されている断片）、何らかの様式で解毒されたｐｌｙ、たとえば、ｄＰＬＹ－ＧＭＢＳ（ＷＯ２００４／０８１５１５号、ＷＯ２００６／０３２４９９号）またはｄＰＬＹ－ホルモルを含めた肺炎球菌ニューモリシン（ｐｌｙ）（Ｋｕｏら（１９９５）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ、６３：２７０６～２７１３）、ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＥ（ＰｈｔＡ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＤまたはＰｈｔＥの配列はＷＯ００／３７１０５号およびＷＯ００／３９２９９号中に開示されている）を含めたＰｈｔＸ、ならびにタンパク質の融合物、たとえば、ＰｈｔＤＥ融合物、ＰｈｔＢＥ融合物、Ｐｈｔ Ａ～Ｅ（ＷＯ０１／９８３３４号、ＷＯ０３／０５４００７号、ＷＯ２００９／０００８２６号）、通常は髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｂから抽出されるＯＭＰＣ（髄膜炎菌外膜タンパク質）（ＥＰ０３７２５０１号）、ＰｏｒＢ（髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）由来）、ＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、たとえばＥＰ０５９４６１０ Ｂ号を参照）、またはその免疫学的に機能的な等価物、合成ペプチド（ＥＰ０３７８８８１号、ＥＰ０４２７３４７号）、熱ショックタンパク質（ＷＯ９３／１７７１２号、ＷＯ９４／０３２０８号）、百日咳タンパク質（ＷＯ９８／５８６６８号、ＥＰ０４７１１７７号）、サイトカイン、リンホカイン、成長因子、またはホルモン（ＷＯ９１／０１１４６号）、様々な病原体由来の抗原からの複数のヒトＣＤ４＋ Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質（Ｆａｌｕｇｉら（２００１）Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ、３１：３８１６～３８２４）、たとえばＮ１９タンパク質（Ｂａｒａｌｄｏｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ ｌｍｍｕｎ、７２：４８８４～４８８７）、肺炎球菌表面タンパク質ＰｓｐＡ（ＷＯ０２／０９１９９８号）、鉄取り込みタンパク質（ＷＯ０１／７２３３７号）、クロストリジウム・ディフィシル（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ）の毒素ＡまたはＢ（ＷＯ００／６１７６１号）、トランスフェリン結合タンパク質、肺炎球菌接着タンパク質（ＰｓａＡ）、組換え緑膿菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａ（特にその無毒性突然変異体（グルタミン酸５５３での置換（ｓｕｂｓｔｕｔｉｏｎ）を有する外毒素Ａなど（Ｄｏｕｇｌａｓら（１９８７）Ｊ．Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ．、１６９（１１）：４９６７～４９７１））からなる群から選択される。卵白アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、またはツベルクリンの精製タンパク質誘導体（ＰＰＤ）などの他のタンパク質も、担体タンパク質として使用することができる。他の適切な担体タンパク質としては、コレラトキソイド（たとえばＷＯ２００４／０８３２５１号に記載）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）ＬＴ、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）ＳＴ、および緑膿菌（Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）からの外毒素Ａなどの、不活性化した細菌毒素が挙げられる。別の適切な担体タンパク質は、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である。
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＴＴ、ＤＴ、ＤＴ突然変異体（ＣＲＭ１９７など）、および連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）からなる群から選択される。
一実施形態では、血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＤＴ（ジフテリアトキソイド）である。別の実施形態では、血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＴＴ（破傷風トキソイド）である。
別の実施形態では、血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＰＤ（インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、たとえばＥＰ０５９４６１０ Ｂ号を参照）である。
好ましい実施形態では、血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７または連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）からのＣ５ａペプチダーゼ（ＳＣＰ）である。
好ましい実施形態では、血清型３莢膜多糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートしている。ＣＲＭ１９７タンパク質は、ジフテリア毒素の無毒性形態であるが、ジフテリア毒素から免疫学的に識別不可能である。ＣＲＭ１９７は、毒素産生性コリネファージベータのニトロソグアニジン突然変異誘発によって作製された毒素非産生性ファージβ１９７ｔｏｘ－によって感染したジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）によって産生される（Ｕｃｈｉｄａら（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ Ｎｅｗ Ｂｉｏｌｏｇｙ、２３３：８～１１）。ＣＲＭ１９７タンパク質はジフテリア毒素と同じ分子量を有するが、構造遺伝子中の単一塩基変化（グアニンからアデニン）によって、それとは異なる。この単一塩基変化が成熟タンパク質中におけるアミノ酸置換（グルタミン酸からグリシン）を引き起こし、ジフテリア毒素の毒性特性を排除する。ＣＲＭ１９７タンパク質は、糖のための安全かつ有効なＴ細胞依存性担体である。ＣＲＭ１９７およびその生成に関するさらなる詳細は、たとえば米国特許第５，６１４，３８２号中に見つけることができる。
一実施形態では、血清型３莢膜多糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質とコンジュゲートしている。一実施形態では、血清型３莢膜多糖は、ＣＲＭ１９７タンパク質またはＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートしている（ＣＮ１０３４９５１６１号を参照）。一実施形態では、血清型３莢膜多糖は、遺伝学子組換え大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）による発現を介して得られたＣＲＭ１９７のＡ鎖とコンジュゲートしている（ＣＮ１０３４９５１６１号を参照）。
他の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＳＣＰ（連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ）である。
軽度の咽頭炎および膿痂疹から壊死性筋膜炎（ＧＡＳ）および新生児敗血症（ＧＢＳ）などの重篤な浸潤性疾患に及ぶ、様々な重篤なヒト感染症を引き起こす、β－溶血性連鎖球菌の２つの重要な種、すなわち、化膿性連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ＧＡＳ）およびストレプトコッカス・アガラクチア（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、ＧＢＳ）は、この免疫応答を打ち破る方法を発生している。ＧＡＳおよびＧＢＳを含めたβ－溶血性連鎖球菌のすべてのヒト単離物は、Ｃ５ａを特異的に不活性化させる、高度に保存された細胞壁タンパク質ＳＣＰ（連鎖球菌Ｃ５ａペプチダーゼ）を生じる。ＧＡＳおよびＧＢＳからのｓｃｐ遺伝子は、１，１３４～１，１８１個のアミノ酸を含有するポリペプチドをコードする（Ｂｒｏｗｎら、ＰＮＡＳ、２００５、第１０２巻、第５１号、ページ１８３９１～１８３９６）。最初の３１個の残基は輸出シグナルのプレ配列であり、細胞質膜を通過した際に除去される。次の６８個の残基はプロ配列として役割を果たし、活性ＳＣＰを生じるために除去しなければならない。次の１０個の残基は、プロテアーゼ活性の損失なしに除去することができる。他方の末端には、Ｌｙｓ－１０３４から開始して、４つの連続した１７残基のモチーフ、続いて細胞選別および細胞壁付着シグナルが存在する。この組み合わせたシグナルは、ＬＰＴＴＮＤ配列を含有する２０残基の親水性配列、１７残基の疎水性配列、および短い塩基性カルボキシル末端から構成される。
ＳＣＰはドメインに分けることができる（Ｂｒｏｗｎら、ＰＮＡＳ、２００５、第１０２巻、第５１号、ページ１８３９１～１８３９６の図１Ｂを参照）。これらのドメインは、プレ／プロドメイン（輸出シグナルのプレ配列（一般的に最初の３１個の残基）およびプロ配列（一般的に次の６８個の残基）を含む）、プロテアーゼドメイン（２つのパートに分割される（プロテアーゼパート１は一般的に残基８９～３３３／３３４であり、プロテアーゼドメインパート２は一般的に残基４６７／４６８～５８３／５８４である）、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）（一般的に残基３３３／３３４～４６７／４６８）、３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメイン（Ｆｎ１、一般的に残基５８３／５８４～７１２／７１３、Ｆｎ２、一般的に残基７１２／７１３～９２８／９２９／９３０、一般的にＦｎ３、残基９２９／９３０～１０２９／１０３０／１０３１）、ならびに細胞壁アンカードメイン（一般的にＣ末端の残基（ｒｅｄｉｓｕｅ）１０２９／１０３０／１０３１）である。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＧＢＳからのＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である。ＳＣＰＢの例（ｅｘｅｍｐｌｅ）は、ＷＯ９７／２６００８号の配列番号３で提供される。ＷＯ００／３４４８７号の配列番号３も参照されたい。
別の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＧＡＳからのＳＣＰ（ＳＣＰＡ）である。
ＳＣＰＡの例は、ＷＯ９７／２６００８号の配列番号１および配列番号２で見つけることができる。ＷＯ００／３４４８７号の配列番号１、２、および２３も参照されたい。
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰである。
他の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＧＢＳからの酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である。
別の好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＧＡＳからの酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＡ）である。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＳＣＰの断片である。一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＳＣＰＡの断片である。好ましくは、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質はＳＣＰＢの断片である。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインのうちの２つを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。一実施形態では、前記ＳＣＰの酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片である。一実施形態では、前記ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない。
好ましい実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片である。好ましくは、前記ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない。
一実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって不活性化される。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。数字は、ＷＯ００／３４４８７号の配列番号１の付番に従った、ペプチダーゼ中のアミノ酸残基位置を示す。
したがって、一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記置換えはＤ１３０Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＨ１９３Ａである。別の実施形態では、前記置換えはＮ２９５Ａである。さらに別の実施形態では、前記置換えはＳ５１２Ａである。
一実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって不活性化される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
したがって、一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＨ１９３Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＮ２９５Ａである。好ましくは、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３ＡおよびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えは、Ｎ２９５ＡおよびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって不活性化される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
したがって、一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも３つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択される。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＮ２９５Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。一実施形態では、前記少なくとも３つのアミノ酸の置換えは、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、ＳＣＰの酵素活性は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって不活性化される。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
したがって、一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＡであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、酵素的に不活性なＳＣＰＢであり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＡの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも１つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
一実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰＢの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化は、野生型配列の少なくとも４つのアミノ酸を置き換えることによって達成される。好ましくは、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメイン中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート１中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、プロテアーゼドメインのパート２中にある。一実施形態では、前記少なくとも４つのアミノ酸の置換えは、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａである。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
配列番号４１：
ＭＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
ＭＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
配列番号４１は９５０個のアミノ酸の長さである。
配列番号４２：
ＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
ＡＫＴＡＤＴＰＡＴＳＫＡＴＩＲＤＬＮＤＰＳＱＶＫＴＬＱＥＫＡＧＫＧＡＧＴＶＶＡＶＩＡＡＧＦＤＫＮＨＥＡＷＲＬＴＤＫＡＫＡＲＹＱＳＫＥＤＬＥＫＡＫＫＥＨＧＩＴＹＧＥＷＶＮＤＫＶＡＹＹＨＤＹＳＫＤＧＫＴＡＶＤＱＥＨＧＴＨＶＳＧＩＬＳＧＮＡＰＳＥＴＫＥＰＹＲＬＥＧＡＭＰＥＡＱＬＬＬＭＲＶＥＩＶＮＧＬＡＤＹＡＲＮＹＡＱＡＩＲＤＡＩＮＬＧＡＫＶＩＮＭＳＦＧＮＡＡＬＡＹＡＮＬＰＤＥＴＫＫＡＦＤＹＡＫＳＫＧＶＳＩＶＴＳＡＧＮＤＳＳＦＧＧＫＴＲＬＰＬＡＤＨＰＤＹＧＶＶＧＴＰＡＡＡＤＳＴＬＴＶＡＳＹＳＰＤＫＱＬＴＥＴＶＴＶＫＴＡＤＱＱＤＫＥＭＰＶＬＳＴＮＲＦＥＰＮＫＡＹＤＹＡＹＡＮＲＧＴＫＥＤＤＦＫＤＶＫＧＫＩＡＬＩＥＲＧＤＩＤＦＫＤＫＩＡＫＡＫＫＡＧＡＶＧＶＬＩＹＤＮＱＤＫＧＦＰＩＥＬＰＮＶＤＱＭＰＡＡＦＩＳＲＫＤＧＬＬＬＫＤＮＰＱＫＴＩＴＦＮＡＴＰＫＶＬＰＴＡＳＧＴＫＬＳＲＦＳＳＷＧＬＴＡＤＧＮＩＫＰＤＩＡＡＰＧＱＤＩＬＳＳＶＡＮＮＫＹＡＫＬＳＧＴＡＭＳＡＰＬＶＡＧＩＭＧＬＬＱＥＱＹＥＴＱＹＰＤＭＴＰＳＥＲＬＤＬＡＫＫＶＬＭＳＳＡＴＡＬＹＤＥＤＥＫＡＹＦＳＰＲＱＱＧＡＧＡＶＤＡＫＫＡＳＡＡＴＭＹＶＴＤＫＤＮＴＳＳＫＶＨＬＮＮＶＳＤＫＦＥＶＴＶＴＶＨＮＫＳＤＫＰＱＥＬＹＹＱＡＴＶＱＴＤＫＶＤＧＫＨＦＡＬＡＰＫＡＬＹＥＴＳＷＱＫＩＴＩＰＡＮＳＳＫＱＶＴＶＰＩＤＡＳＲＦＳＫＤＬＬＡＱＭＫＮＧＹＦＬＥＧＦＶＲＦＫＱＤＰＫＫＥＥＬＭＳＩＰＹＩＧＦＲＧＤＦＧＮＬＳＡＬＥＫＰＩＹＤＳＫＤＧＳＳＹＹＨＥＡＮＳＤＡＫＤＱＬＤＧＤＧＬＱＦＹＡＬＫＮＮＦＴＡＬＴＴＥＳＮＰＷＴＩＩＫＡＶＫＥＧＶＥＮＩＥＤＩＥＳＳＥＩＴＥＴＩＦＡＧＴＦＡＫＱＤＤＤＳＨＹＹＩＨＲＨＡＮＧＫＰＹＡＡＩＳＰＮＧＤＧＮＲＤＹＶＱＦＱＧＴＦＬＲＮＡＫＮＬＶＡＥＶＬＤＫＥＧＮＶＶＷＴＳＥＶＴＥＱＶＶＫＮＹＮＮＤＬＡＳＴＬＧＳＴＲＦＥＫＴＲＷＤＧＫＤＫＤＧＫＶＶＡＮＧＴＹＴＹＲＶＲＹＴＰＩＳＳＧＡＫＥＱＨＴＤＦＤＶＩＶＤＮＴＴＰＥＶＡＴＳＡＴＦＳＴＥＤＲＲＬＴＬＡＳＫＰＫＴＳＱＰＶＹＲＥＲＩＡＹＴＹＭＤＥＤＬＰＴＴＥＹＩＳＰＮＥＤＧＴＦＴＬＰＥＥＡＥＴＭＥＧＡＴＶＰＬＫＭＳＤＦＴＹＶＶＥＤＭＡＧＮＩＴＹＴＰＶＴＫＬＬＥＧＨＳＮＫＰＥＱ
配列番号４２は９４９個のアミノ酸の長さである。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９．５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９．８％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４１と少なくとも９９．８５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９０％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９．５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９．８％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
特定の実施形態では、本発明の血清型３莢膜多糖複合糖質の担体タンパク質は、配列番号４２と少なくとも９９．８５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である。
２ 免疫原性組成物
２．１ 本発明の複合糖質の組合せ
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。
２．１ 本発明の複合糖質の組合せ
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、１～２５個の異なる複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型からの１～２５個の複合糖質（１～２５個の肺炎球菌のコンジュゲート）を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、本発明は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の異なる血清型からの複合糖質を含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の１６または２０個の異なる血清型からの複合糖質を含む。一実施形態では、免疫原性組成物は、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、または２０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１４、１５、１６、１７、１８、または１９価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１６価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、１９価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、免疫原性組成物は、２１、２２、２３、２４、または２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。一実施形態では、免疫原性組成物は、２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。
一実施形態では、前記免疫原性組成物はさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、および１９Ａからの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、および１５Ｂからの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２からの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型９Ｎからの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１７Ｆからの複合糖質を含む。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものはさらに、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２０からの複合糖質を含む。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、８価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、２、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、９Ｎ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質からなる群から選択される少なくとも１つの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質からなる群から選択される２０個の複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２１価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質からなる群から選択される２１個の複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質からなる群から選択される少なくとも１つの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質からなる群から選択される２２個の複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質からなる群から選択される２３個の複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２４価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、９Ｎ、１５Ａ、１７Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、９Ｎ、１５Ａ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、１２価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
一実施形態では、本発明は、本発明の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質をさらに含む免疫原性組成物に関する。一実施形態では、免疫原性組成物は、２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である。
好ましい実施形態では、糖はそれぞれ、タンパク質担体の異なる分子と個々にコンジュゲートしている（タンパク質担体のそれぞれの分子は、１種類のみの糖がそれとコンジュゲートしている）。前記実施形態では、莢膜糖は、担体タンパク質と個々にコンジュゲートしていると言われる。好ましくは、上記免疫原性組成物のすべての複合糖質は、担体タンパク質と個々にコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３３Ｆからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１５Ｂからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１２Ｆからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１０Ａからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１１Ａからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８からの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、および１９Ａからの複合糖質は、ＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆからの複合糖質は、ＰＤと個々にコンジュゲートしている。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃからの複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしている。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆからの複合糖質は、ＤＴとコンジュゲートしている。
一実施形態では、上記免疫原性組成物のうちの任意のものの肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、および／または２３Ｆからの複合糖質は、ＰＤと個々にコンジュゲートしており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１８Ｃからの複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１９Ｆからの複合糖質は、ＤＴとコンジュゲートしている。
一実施形態では、上記免疫原性組成物は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の８～２０個の異なる血清型を含む。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも１つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、１つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも２つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、２つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも３つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、３つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも４つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、４つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも５つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、５つの他の複合糖質は、ＴＴとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも１つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、１つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも２つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、２つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも３つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、３つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも４つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、４つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、少なくとも５つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
上記免疫原性組成物のうちの任意のものの一実施形態では、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３からの複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしている、５つの他の複合糖質は、ＳＣＰとコンジュゲートしており、他の複合糖質は、すべてＣＲＭ１９７とコンジュゲートしている。
本発明の組成物は、少量の遊離担体を含み得る。所定の担体タンパク質が、本発明の組成物中で遊離およびコンジュゲート形態の両方で存在する場合、非コンジュゲート形態は、好ましくは、組成物全体中の担体タンパク質の総量の５％を超えない、より好ましくは２重量％未満で存在する。
２．２ 本発明の免疫原性組成物の投与量
それぞれの用量中の複合糖質の量は、典型的なワクチン中において、顕著な有害な副作用なしに免疫保護応答を誘導する量として選択される。そのような量は、どの具体的な免疫原が用いられるか、およびそれがどのように提示されるかに応じて変動する。
それぞれの用量中の複合糖質の量は、典型的なワクチン中において、顕著な有害な副作用なしに免疫保護応答を誘導する量として選択される。そのような量は、どの具体的な免疫原が用いられるか、およびそれがどのように提示されるかに応じて変動する。
免疫原性組成物中の特定の複合糖質の量は、そのコンジュゲートの全多糖（コンジュゲートしたおよびコンジュゲートしていない）に基づいて計算することができる。たとえば、２０％の遊離多糖を有する複合糖質は、１００μｇの多糖用量中、約８０μｇのコンジュゲートした多糖および約２０μｇのコンジュゲートしていない多糖を有する。複合糖質の量は、肺炎球菌の血清型に応じて変動する場合がある。糖濃度はウロン酸アッセイによって決定することができる。
免疫原性組成物中の様々な多糖構成要素の「免疫原性量」は分岐する場合があり、それぞれは、約０．５μｇ、約０．７５μｇ、約１μｇ、約２μｇ、約３μｇ、約４μｇ、約５μｇ、約６μｇ、約７μｇ、約８μｇ、約９μｇ、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約３０μｇ、約４０μｇ、約５０μｇ、約６０μｇ、約７０μｇ、約８０μｇ、約９０μｇ、または約１００μｇの任意の特定の多糖抗原を含み得る。
一般に、それぞれの用量は、０．１μｇ～１００μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、０．１μｇ～１００μｇの血清型３多糖を含む。好ましい実施形態では、それぞれの用量は、０．５μｇ～２０μｇを含む。好ましい実施形態では、それぞれの用量は、１．０μｇ～１０μｇを含む。さらに好ましい実施形態では、それぞれの用量は、２．０μｇ～５．０μｇの血清型３多糖を含む。上記範囲のうちの任意のものの内の任意の整数が、本開示の一実施形態として企図される。
一実施形態では、それぞれの用量は、約０．５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約０．５５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約０．７５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約１．０μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約１．１μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約１．５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約２．０μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約２．２μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約２．５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約３．０μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約３．５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４．０μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４．４μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約５．０μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約５．５μｇの血清型３多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約６．０μｇの血清型３多糖を含む。
一般に、それぞれの用量は、所定の血清型について０．１μｇ～１００μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、所定の血清型について０．１μｇ～１００μｇの多糖を含む。好ましい実施形態では、それぞれの用量は、０．５μｇ～２０μｇを含む。好ましい実施形態では、それぞれの用量は、１．０μｇ～１０μｇを含む。さらに好ましい実施形態では、それぞれの用量は、所定の血清型について２．０μｇ～５．０μｇの多糖を含む。上記範囲のうちの任意のものの内の任意の整数が、本開示の一実施形態として企図される。
一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約０．５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約０．５５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約０．７５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約１．０μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約１．１μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約１．５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約２．０μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約２．２μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約２．５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約３．０μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約３．５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約４．０μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約４．４μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約５．０μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約５．５μｇの多糖を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、それぞれの特定の複合糖質について約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆからの複合糖質について、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆからの複合糖質について、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇ、または約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆからの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および／または３３Ｆからの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ、約１．１μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇ、または約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．４μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約３μｇ～約６μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質から、約２．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．４μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．４μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．４μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および／または３５Ｂからの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および／または３５Ｂからの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ、約１．１μｇ、約２．０μｇ、約２．２μｇ、約２．４μｇ、約２．６μｇ、約２．８μｇ、約３．０μｇ、約３．２μｇ、約３．４μｇ、約３．６μｇ、約３．８μｇ、約４．０μｇ、約４．２μｇ、約４．４μｇ、約４．６μｇ、約４．８μｇ、約５．０、約５．２μｇ、約５．４μｇ、約５．６μｇ、約５．８μｇ、または約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、３、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．４μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約１．０μｇ～約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約３．０μｇ～約６．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．０μｇ～約４．８μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含み、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ｂからの複合糖質について、約４．４μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８からの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８からの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および／または３８からの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質について、約０．５μｇ、約０．５５μｇ、約０．７５μｇ、約１．１μｇ、約１．２μｇ、約１．３μｇ、約１．４μｇ、約１．５μｇ、約１．６μｇ、約１．７μｇ、約１．８μｇ、約１．９μｇ、約２．０μｇ、約２．１μｇ、約２．２μｇ、約２．３μｇ、約２．４μｇ、約２．５μｇ、約２．６μｇ、約２．７μｇ、約２．８μｇ、約２．９μｇ、または約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質から、約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質から、約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約０．５μｇ～約１．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約１．５μｇ～約３．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質について、約２．０μｇ～約２．５μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質から、約２．０μｇの多糖を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、３、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からのそれぞれの複合糖質から、約２．２μｇの多糖を含む。
２．３ 担体量
一般に、それぞれの用量は、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質、詳細には１５μｇ～１００μｇの担体タンパク質、より詳細には２５μｇ～７５μｇの担体タンパク質、さらにより詳細には４０μｇ～６０μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。一実施形態では、前記担体タンパク質はＳＣＰである。
一般に、それぞれの用量は、１０μｇ～１５０μｇの担体タンパク質、詳細には１５μｇ～１００μｇの担体タンパク質、より詳細には２５μｇ～７５μｇの担体タンパク質、さらにより詳細には４０μｇ～６０μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。一実施形態では、前記担体タンパク質はＳＣＰである。
一実施形態では、それぞれの用量は、約１０μｇ、約１５μｇ、約２０μｇ、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、約６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇ、または約７５μｇの担体タンパク質を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、約２５μｇ、約２６μｇ、約２７μｇ、約２８μｇ、約２９μｇ、約３０μｇ、約３１μｇ、約３２μｇ、約３３μｇ、約３４μｇ、約３５μｇ、約３６μｇ、約３７μｇ、約３８μｇ、約３９μｇ、約４０μｇ、約４１μｇ、約４２μｇ、約４３μｇ、約４４μｇ、約４５μｇ、約４６μｇ、約４７μｇ、約４８μｇ、約４９μｇ、約５０μｇ、約５１μｇ、約５２μｇ、約５３μｇ、約５４μｇ、約５５μｇ、約５６μｇ、約５７μｇ、約５８μｇ、約５９μｇ、約６０μｇ、約６１μｇ、約６２μｇ、約６３μｇ、約６４μｇ、約６５μｇ、約６６μｇ、約６７μｇ、約６８μｇ、約６９μｇ、約７０μｇ、約７１μｇ、約７２μｇ、約７３μｇ、約７４μｇ、または約７５μｇの担体タンパク質を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、約３０μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約３１μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約３２μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約３３μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約３４μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４５μｇの担体タンパク質を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、約４０μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４１μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４２μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４３μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４４μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４５μｇの担体タンパク質を含む。
一実施形態では、それぞれの用量は、約４８μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約４９μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約５０μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約５１μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約５２μｇの担体タンパク質を含む。一実施形態では、それぞれの用量は、約５３μｇの担体タンパク質を含む。
一実施形態では、前記担体タンパク質はＣＲＭ１９７である。
一実施形態では、前記担体タンパク質はＳＣＰである。
２．４ さらなる抗原
本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖抗原（複合糖質）を含む。これらはまた、他の病原体から、特に細菌および／またはウイルスからの抗原もさらに含み得る。好ましいさらなる抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、百日咳抗原（Ｐ）（典型的には無細胞性（Ｐａ）である）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲートしたインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される。
本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）糖抗原（複合糖質）を含む。これらはまた、他の病原体から、特に細菌および／またはウイルスからの抗原もさらに含み得る。好ましいさらなる抗原は、ジフテリアトキソイド（Ｄ）、破傷風トキソイド（Ｔ）、百日咳抗原（Ｐ）（典型的には無細胞性（Ｐａ）である）、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（ＨＢｓＡｇ）、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）抗原、コンジュゲートしたインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型莢膜糖（Ｈｉｂ）、不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）から選択される。
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物はＤ－Ｔ－Ｐａを含む。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－Ｈｉｂ、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＩＰＶ、またはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇを含む。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、Ｄ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶまたはＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－Ｈｉｂを含む。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物はＤ－Ｔ－Ｐａ－ＨＢｓＡｇ－ＩＰＶ－Ｈｉｂを含む。
百日咳抗原：百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）は、百日咳を引き起こす。ワクチン中の百日咳抗原は、細胞性（不活性化百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）細胞の形態の全細胞）または無細胞性のいずれかである。細胞性百日咳抗原の調製は十分に文書化されている（たとえば、これは百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の第Ｉ期培養物の熱不活性化によって得られ得る）。しかし、好ましくは、本発明は無細胞性抗原を使用する。無細胞性抗原を使用する場合は、以下の抗原のうちの１つ、２つ、または（好ましくは）３つを使用することが好ましい：（１）解毒百日咳毒素（百日咳トキソイドまたはＰＴ）、（２）繊維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、（３）ペルタクチン（６９キロダルトンの外膜タンパク質としても知られる）。ＦＨＡおよびペルタクチンは、本発明による使用の前にホルムアルデヒドで処理し得る。ＰＴは、好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドを用いた処理によって解毒する。無細胞百日咳抗原は、好ましくは、１つまたは複数のアルミニウム塩アジュバント上に吸着されている。代替方法として、これらを未吸着状態で加え得る。ペルタクチンを加える場合、これは、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバント上に既に吸着している。ＰＴおよびＦＨＡは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウム上に吸着していてよい。ＰＴ、ＦＨＡ、およびペルタクチンのすべての、水酸化アルミニウムへの吸着が最も好ましい。
不活性化ポリオウイルスワクチン：ポリオウイルスは灰白髄炎を引き起こす。経口ポリオウイルスワクチンを使用するよりも、本発明の好ましい実施形態はＩＰＶを使用する。患者への投与の前に、ポリオウイルスを不活性化させなければならず、これは、ホルムアルデヒドを用いた処理によって達成することができる。灰白髄炎は、３種類のポリオウイルスのうちの１種によって引き起こされる場合がある。３つの種類は類似であり、同一の症状を引き起こすが、これらは抗原的に異なっており、１つの種類による感染は、他のものによる感染に対して保護しない。したがって、本発明において３つのポリオウイルス抗原を使用することが好ましい：ポリオウイルス１型（たとえばマホニー（Ｍａｈｏｎｅｙ）株）、ポリオウイルス２型（たとえばＭＥＦ－１株）、およびポリオウイルス３型（たとえばソーケット（Ｓａｕｋｅｔｔ）株）。ウイルスは、好ましくは個々に成長、精製、および不活性化し、その後、一緒に合わせて、本発明で使用するためのバルクの三価混合物が得られる。
ジフテリアトキソイド：ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）はジフテリアを引き起こす。ジフテリア毒素は、注射後に特異的抗毒素抗体を誘導する能力を保持しつつ、毒性を除去するために、（たとえばホルマリンまたはホルムアルデヒドを使用して）処理することができる。これらのジフテリアトキソイドは、ジフテリアワクチンにおいて使用される。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。ジフテリアトキソイドは、ジフテリア菌（Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）を成長培地中で成長させ、続いて、ホルムアルデヒド処理、限外濾過、および沈殿によって、得ることができる。その後、トキソイド化された材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理し得る。ジフテリアトキソイドは、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着している。
破傷風トキソイド：破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉ）は破傷風を引き起こす。破傷風毒素を処理して、保護的トキソイドを得ることができる。トキソイドは破傷風ワクチンにおいて使用される。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。破傷風トキソイドは、破傷風菌（Ｃ．ｔｅｔａｎｉ）を成長培地中で成長させ、続いて、ホルムアルデヒド処理、限外濾過、および沈殿によって、得ることができる。その後、材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理し得る。
Ａ型肝炎ウイルス抗原：Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす既知の因子のうちの１つである。好ましいＨＡＶ構成要素は不活性化ウイルスに基づいており、不活性化はホルマリン処理によって達成することができる。
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす既知の因子のうちの１つである。カプシドの主要な構成要素は、ＨＢＶ表面抗原、またはより一般的にはＨＢｓＡｇとして知られるタンパク質であり、これは典型的には、約２４ｋＤａの分子量を有する２２６個のアミノ酸のポリペプチドである。すべての既存のＢ型肝炎ワクチンはＨＢｓＡｇを含有しており、この抗原を正常なワクチンに投与した際、これは、ＨＢＶ感染に対して保護する抗ＨＢｓＡｇ抗体の産生を刺激する。
ワクチンの製造には、ＨＢｓＡｇは２つの方法で作製されている：慢性Ｂ型肝炎保因者の血漿からの、抗原の粒子状形態での精製、または組換えＤＮＡ方法によるタンパク質の発現（たとえば酵母細胞中での組換え発現）。ネイティブＨＢｓＡｇ（すなわち血漿精製した生成物）とは異なり、酵母発現させたＨＢｓＡｇは一般にグリコシル化されておらず、これが本発明で使用するためのＨＢｓＡｇの最も好ましい形態である。
コンジュゲートしたインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型抗原：インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）は細菌性髄膜炎を引き起こす。Ｈｉｂワクチンは、典型的には莢膜糖抗原に基づき、その調製は十分に文書化されている。Ｈｉｂ糖は、その免疫原性を、特に小児において増強させるために、担体タンパク質とコンジュゲートさせることができる。典型的な担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ＣＲＭ１９７、インフルエンザ菌（Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）タンパク質Ｄ、および血清型Ｂ髄膜炎菌からの外膜タンパク質複合体である。コンジュゲートの糖部分は、Ｈｉｂ細菌から調製された完全長ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）、および／または完全長ＰＲＰの断片を含み得る。Ｈｉｂコンジュゲートは、アルミニウム塩アジュバントに吸着していても、していなくてもよい。
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）および／またはコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ａ莢膜糖（ＭｅｎＡ）、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｗ１３５莢膜糖（ＭｅｎＷ１３５）、コンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｙ莢膜糖（ＭｅｎＹ）、および／またはコンジュゲートした髄膜炎菌（Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｃ莢膜糖（ＭｅｎＣ）をさらに含む。
２．５ アジュバント
一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、少なくとも１つ、２つ、または３つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、少なくとも１つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、１つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、２つのアジュバントをさらに含み得る。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物をいう。抗原は。主に送達系として作用する、主に免疫調節剤として作用する、または両方の強力な特長を有する場合がある。適切なアジュバントとしては、ヒトを含めた哺乳動物における使用に適切なものが挙げられる。
一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、少なくとも１つ、２つ、または３つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、少なくとも１つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、１つのアジュバントをさらに含み得る。一部の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、２つのアジュバントをさらに含み得る。用語「アジュバント」とは、抗原に対する免疫応答を増強させる化合物または混合物をいう。抗原は。主に送達系として作用する、主に免疫調節剤として作用する、または両方の強力な特長を有する場合がある。適切なアジュバントとしては、ヒトを含めた哺乳動物における使用に適切なものが挙げられる。
ヒトにおいて使用することができる、既知の適切な送達系型のアジュバントの例としては、それだけには限定されないが、ミョウバン（たとえば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）、リン酸カルシウム、リポソーム、ＭＦ５９（４．３％ｗ／ｖのスクアレン、０．５％ｗ／ｖのポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ ８０）、０．５％ｗ／ｖのトリオレイン酸ソルビタン（Ｓｐａｎ ８５））などの水中油乳濁液、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅなどの油中水乳濁液、およびポリ（Ｄ，Ｌ－ラクチド－コ－グリコリド）（ＰＬＧ）微粒子またはナノ粒子が挙げられる。
一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、アルミニウム塩（ミョウバン）をアジュバントとして含む（たとえば、リン酸アルミニウム、硫酸アルミニウム、または水酸化アルミニウム）。好ましい実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムまたは水酸化アルミニウムをアジュバントとして含む。好ましい実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、リン酸アルミニウムをアジュバントとして含む。
本明細書中に開示した免疫原性組成物の有効性を増強させるためのさらなる例示的なアジュバントとしては、それだけには限定されないが：（１）水中油乳濁液配合物（ムラミルペプチド（以下を参照）または細菌細胞壁構成要素などの他の特異的免疫賦活剤を含むまたは含まない）、たとえば、（ａ）サブミクロン乳濁液へと微小流動化したまたは渦攪拌してより大きな粒径の乳濁液を作製したのいずれかの、１０％のスクアレン、０．４％のＴｗｅｅｎ ８０、５％のプルロニック（登録商標）ブロックド（ｂｌｏｃｋｅｄ）ポリマーＬ１２１、およびｔｈｒ－ＭＤＰを含有するＳＡＦ、（ｂ）２％のスクアレン、０．２％のＴｗｅｅｎ ８０、ならびに１つまたは複数の細菌細胞壁構成要素、たとえば、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）、および細胞壁骨格（ＣＷＳ）、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（ＤＥＴＯＸ（商標））を含有する、ＲＩＢＩ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ、モンタナ州Ｈａｍｉｌｔｏｎ）、（２）ＱＳ２１、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（商標）（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、マサチューセッツ州Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒ）、ＡＢＩＳＣＯ（登録商標）（スウェーデンＩｓｃｏｎｏｖａ）、もしくはＩＳＣＯＭＡＴＲＩＸ（登録商標）（Ｃｏｍｍｏｎｗｅａｌｔｈ Ｓｅｒｕｍ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、オーストラリア）などのサポニンアジュバントを使用し得る、またはＩＳＣＯＭ（免疫刺激複合体）などのそれらから作製した粒子（ＩＳＣＯＭＳは追加の洗剤を欠いている）（たとえばＷＯ００／０７６２１号）、（３）完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）および不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）、（４）サイトカイン、たとえば、インターロイキン（たとえば、ＩＬ－１、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－５、ＩＬ－６、ＩＬ－７、ＩＬ－１２（たとえばＷＯ９９／４４６３６号））、インターフェロン（たとえばガンマインターフェロン）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ－ＣＳＦ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）など、（５）モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）または３－Ｏ－脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）（たとえばＧＢ－２２２０２２１号、ＥＰ０６８９４５４号を参照）、任意選択で、肺炎球菌の糖と共に使用した場合はミョウバンの実質的な非存在下で（たとえばＷＯ００／５６３５８号を参照）、（６）３ｄＭＰＬと、たとえばＱＳ２１および／または水中油乳濁液との組合せ（たとえば、ＥＰ０８３５３１８号、ＥＰ０７３５８９８号、ＥＰ０７６１２３１号を参照）、（７）ポリオキシエチレンエーテルまたはポリオキシエチレンエステル（たとえばＷＯ９９／５２５４９号を参照）、（８）ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤とオクトキシノールとの組合せ（たとえばＷＯ０１／２１２０７号）、またはポリオキシエチレンアルキルエーテルもしくはエステル界面活性剤と、オクトキシノールなどの少なくとも１つの追加の非イオン性界面活性剤との組合せ（たとえばＷＯ０１／２１１５２号）、（９）サポニンおよび免疫賦活性オリゴヌクレオチド（たとえばＣｐＧオリゴヌクレオチド）（たとえばＷＯ００／６２８００号）、（１０）免疫賦活剤および金属塩粒子（たとえばＷＯ００／２３１０５号を参照）、（１１）サポニンおよび水中油乳濁液（たとえばＷＯ９９／１１２４１号）、（１２）サポニン（たとえばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＭ２（任意選択で＋ステロール）（たとえばＷＯ９８／５７６５９号）、（１３）組成物の有効性を増強させるための免疫賦活剤として作用する他の物質 が挙げられる。ムラミルペプチドとしては、Ｎ－アセチル－ムラミル－Ｌ－スレオニル－Ｄ－イソグルタミン（ｔｈｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－２５アセチル－ノルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミン（ｎｏｒ－ＭＤＰ）、Ｎ－アセチルムラミル－Ｌ－アラニル－Ｄ－イソグルタミニル－Ｌ－アラニン－２－（１’－２’－ジパルミトイル－ｓｎ－グリセロ－３－ヒドロキシホスホリルオキシ）－エチルアミン ＭＴＰ－ＰＥ）などが挙げられる。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドをアジュバントとして含む。本明細書中で使用するＣｐＧオリゴヌクレオチドとは、免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチド（ＣｐＧ ＯＤＮ）をいい、したがって、これらの用語は、別段に指定しない限りは互換性があるように使用される。免疫賦活性ＣｐＧオリゴデオキシヌクレオチドは、非メチル化シトシン－グアニンジヌクレオチドである１つまたは複数の免疫賦活性ＣｐＧモチーフを含有し、任意選択で特定の好ましい塩基コンテキスト内である。ＣｐＧ免疫賦活性モチーフのメチル化状態とは、一般に、ジヌクレオチド中のシトシン残基をいう。少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有する免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、リン酸結合によって３’グアニンに連結された５’非メチル化シトシンを含有し、トール様受容体９（ＴＬＲ－９）と結合することを通じて免疫系を活性化する、オリゴヌクレオチドである。別の実施形態では、免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数のメチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有してよく、これは、ＴＬＲ９を通じて免疫系を活性化するが、ＣｐＧモチーフが非メチル化である場合ほど強力にではない。ＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、１つまたは複数の回文構造を含有してよく、これらが立ち代ってＣｐＧジヌクレオチドを包含し得る。ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、米国特許第６，１９４，３８８号、第６，２０７，６４６号、第６，２１４，８０６号、第６，２１８，３７１号、第６，２３９，１１６号、および第６，３３９，０６８号を含めた、いくつかの発行された特許、公開特許出願、および他の刊行物中に記載されている。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の３ページ、２２行目から１２ページ、３６行目に記載されているＣｐＧオリゴヌクレオチドのうちの任意のものを含む。
様々なクラスのＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドが同定されている。これらはＡ、Ｂ、Ｃ、およびＰクラスと呼ばれ、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の３ページ、２２行目から１２ページ、３６行目により詳細に記載されている。本発明の方法は、これらの様々なクラスのＣｐＧ免疫賦活性オリゴヌクレオチドの使用を包含する。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＡクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは、本発明の「Ａクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：５’ＧＧＧＧＡＣＧＡＣＧＴＣＧＴＧＧＧＧＧＧＧ ３’（配列番号１）。Ａクラスオリゴヌクレオチドの一部の非限定的な例としては、５’Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ａ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｃ＿Ｇ＿Ｔ＿Ｇ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｇ ３’（配列番号２）［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］が挙げられる。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、本発明において使用するためのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも以下の式によって表されるＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドである：
５’Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はヌクレオチドである］。一実施形態では、Ｘ２は、アデニン、グアニン、またはチミンである。別の実施形態では、Ｘ３は、シトシン、アデニン、またはチミンである。
５’Ｘ１Ｘ２ＣＧＸ３Ｘ４ ３’［式中、Ｘ１、Ｘ２、Ｘ３、およびＸ４はヌクレオチドである］。一実施形態では、Ｘ２は、アデニン、グアニン、またはチミンである。別の実施形態では、Ｘ３は、シトシン、アデニン、またはチミンである。
本発明のＢクラスＣｐＧオリゴヌクレオチド配列は、上記に広く記載したもの、ならびにＷＯ９６／０２５５５号、ＷＯ９８／１８８１０号、ならびに米国特許第６，１９４，３８８号、第６，２０７，６４６号、第６，２１４，８０６号、第６，２１８，３７１号、第６，２３９，１１６号、および第６，３３９，０６８号中に開示されているものである。例示的な配列としては、それだけには限定されないが、これらの後者の出願および特許中に開示されているものが挙げられる。
一実施形態では、本発明の「Ｂクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ ３’（配列番号３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ ３’（配列番号４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ ３’（配列番号５）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ ３’（配列番号６）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ ３’（配列番号７）。
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＧＣＴＴＴＴ ３’（配列番号３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＴＣＧＧＴＣＧＴＴＴＴ ３’（配列番号４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ ３’（配列番号５）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴ ３’（配列番号６）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＧＴＣＧＴＴＴＴＴＴＴＣＧＡ ３’（配列番号７）。
これらの配列のうちの任意のものにおいて、すべての連結は、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、これらの配列のうちの任意のものにおいて、連結のうちの１つまたは複数はリン酸ジエステルであってよく、好ましくは
ＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間であり、セミソフトなＣｐＧオリゴヌクレオチドが作製される。これらの配列のうちの任意のものにおいて、エチルウリジンまたはハロゲンで５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモウリジンまたはヨードウリジン置換が挙げられる。
ＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間であり、セミソフトなＣｐＧオリゴヌクレオチドが作製される。これらの配列のうちの任意のものにおいて、エチルウリジンまたはハロゲンで５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモウリジンまたはヨードウリジン置換が挙げられる。
Ｂクラスオリゴヌクレオチドの一部の非限定的な例としては、
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号１０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号１１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ ３’（配列番号１２）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指す］が挙げられる。
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号１０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ ３’（配列番号１１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ａ ３’（配列番号１２）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指す］が挙げられる。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＣクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、本発明の「Ｃクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１４）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１５）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１６）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１７）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１８）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１９）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２０）、または
５’ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２１）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２２）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ ３’（配列番号２４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ ３’（配列番号２５）。
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１４）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１５）、または
５’ＴＣＧＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１６）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１７）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１８）、または
５’ＴＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号１９）、または
５’ＴＣＧＣＧＴＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２０）、または
５’ＴＣＧＣＧＡＣＧＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２１）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２２）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＧＣＣＧＣＣＧ ３’（配列番号２３）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＡＣＧＧＣＧＣＣＧＴＧＣＣＧ ３’（配列番号２４）、または
５’ＴＣＧＴＣＧＴＴＴＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧＴ ３’（配列番号２５）。
これらの配列のうちの任意のものにおいて、すべての連結は、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、これらの配列のうちの任意のものにおいて、連結のうちの１つまたは複数はリン酸ジエステルであってよく、好ましくは
ＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間であり、セミソフトなＣｐＧオリゴヌクレオチドが作製される。
ＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間であり、セミソフトなＣｐＧオリゴヌクレオチドが作製される。
Ｃクラスオリゴヌクレオチドの一部の非限定的な例としては、
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３２）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３３）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３４）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３５）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ ３’（配列番号３８）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］が挙げられる。
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２８）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号２９）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３０）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３１）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３２）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３３）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３４）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３５）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３６）、または
５’Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号３７）、または
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｔ ３’（配列番号３８）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］が挙げられる。
これらの配列のうちの任意のものにおいて、エチルウリジンまたはハロゲンで５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモウリジンまたはヨードウリジン置換が挙げられる。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。一実施形態では、本発明において使用するためのＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’ＴＬＲ活性化ドメインと少なくとも２つの回文構造領域とを含有するＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドであり、ここで、１つの回文構造領域は、少なくとも６個のヌクレオチドの長さの５’回文構造領域であり、直接またはスペーサーを通じて少なくとも８個のヌクレオチドの長さの３’回文構造領域と接続されており、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つのＹｐＲジヌクレオチドを含む。一実施形態では、前記オリゴヌクレオチドは、Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ（配列番号２７）ではない。一実施形態では、ＰクラスＣｐＧオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含む。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、ＴＣＧ、ＴＴＣＧ、ＴＴＴＣＧ、ＴＹｐＲ、ＴＴＹｐＲ、ＴＴＴＹｐＲ、ＵＣＧ、ＵＵＣＧ、ＵＵＵＣＧ、ＴＴＴ、またはＴＴＴＴである。さらに別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは５’回文構造領域内である。別の実施形態では、ＴＬＲ活性化ドメインは、５’回文構造領域のすぐ５’側である。
一実施形態では、本発明の「Ｐクラス」ＣｐＧオリゴヌクレオチドは以下の核酸配列を有する：５’ＴＣＧＴＣＧＡＣＧＡＴＣＧＧＣＧＣＧＣＧＣＣＧ ３’（配列番号３９）。
前記配列中において、すべての連結は、すべてホスホロチオエート結合であり得る。別の実施形態では、連結のうちの１つまたは複数はリン酸ジエステルであってよく、好ましくは
ＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間であり、セミソフトなＣｐＧオリゴヌクレオチドが作製される。これらの配列のうちの任意のものにおいて、エチルウリジンまたはハロゲンで５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモウリジンまたはヨードウリジン置換が挙げられる。
ＣｐＧモチーフの「Ｃ」と「Ｇ」の間であり、セミソフトなＣｐＧオリゴヌクレオチドが作製される。これらの配列のうちの任意のものにおいて、エチルウリジンまたはハロゲンで５’Ｔを置換し得る。ハロゲン置換の例としては、それだけには限定されないが、ブロモウリジンまたはヨードウリジン置換が挙げられる。
Ｐクラスオリゴヌクレオチドの非限定的な例としては、
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号４０）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］が挙げられる。
５’Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｃ＿Ｇ＊Ａ＊Ｔ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＿Ｇ＊Ｃ＊Ｇ＊Ｃ＊Ｃ＊Ｇ ３’（配列番号４０）
［式中、「＊」はホスホロチオエート結合を指し、「＿」はリン酸ジエステル結合を指す］が挙げられる。
一実施形態では、オリゴヌクレオチドは少なくとも１つのホスホロチオエート連結を含む。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間連結はホスホロチオエート連結である。別の実施形態では、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのリン酸ジエステル様連結を含む。別の実施形態では、リン酸ジエステル様連結はリン酸ジエステル連結である。別の実施形態では、親油性基は、オリゴヌクレオチドとコンジュゲートしている。一実施形態では、親油性基はコレステロールである。
一実施形態では、本明細書中に開示するＣｐＧオリゴヌクレオチドのすべてのヌクレオチド間連結は、リン酸ジエステル結合である（ＷＯ２００７／０２６１９０号に記載の「ソフト」なオリゴヌクレオチド）。別の実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、分解に対して耐性が与えられている（たとえば安定化されている）。「安定化されたオリゴヌクレオチド」とは、ｉｎ ｖｉｖｏ分解（たとえばエクソ－またはエンド－ヌクレアーゼを介するもの）に対して比較的耐性であるオリゴヌクレオチドをいう。核酸の安定化は、主鎖の修飾を介して達成することができる。ホスホロチオエート連結を有するオリゴヌクレオチドが最大の活性を提供し、オリゴヌクレオチドを細胞内エクソ－およびエンド－ヌクレアーゼによる分解から保護する。
免疫賦活性オリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステルおよびホスホロチオエート連結の組合せを有するキメラ主鎖を有し得る。本発明の目的のために、キメラ主鎖とは、部分的に安定化された主鎖をいい、少なくとも１つのヌクレオチド間連結はリン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様であり、少なくとも１つの他のヌクレオチド間連結は安定化されたヌクレオチド間連結であり、少なくとも１つのリン酸ジエステルまたはリン酸ジエステル様連結と少なくとも１つの安定化された連結とは異なる。リン酸ジエステル連結がＣｐＧモチーフ内に優先的に位置する場合、そのような分子は、ＷＯ２００７／０２６１９０号に記載のように「セミソフト」と呼ばれる。
他の修飾オリゴヌクレオチドとしては、リン酸ジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、メチルホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、および／またはｐ－エトキシ連結の組合せが挙げられる。
混合主鎖修飾ＯＤＮは、ＷＯ２００７／０２６１９０号に記載のように合成し得る。
ＣｐＧオリゴヌクレオチドの大きさ（すなわち、オリゴヌクレオチドの長さに沿ったヌクレオチド残基の数）はまた、オリゴヌクレオチドの刺激性活性にも寄与し得る。細胞内への取り込みを容易にするために、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは、好ましくは、６個のヌクレオチド残基の最小長である。より大きなオリゴヌクレオチドは細胞内で分解されるため、十分な免疫賦活性モチーフが存在する場合は、６個ヌクレオチドより大きい任意の大きさ（多数ｋｂの長さでさえ）のオリゴヌクレオチドが、免疫応答を誘導することができる。ある特定の実施形態では、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、６～１００個のヌクレオチドの長さ、優先的には８～３０個のヌクレオチドの長さである。重要な実施形態では、本発明の核酸およびオリゴヌクレオチドはプラスミドまたは発現ベクターではない。
一実施形態では、本明細書中に開示したＣｐＧオリゴヌクレオチドは、ＷＯ２００７／０２６１９０号の段落１３４～１４７に記載されているように、塩基および／または糖など中に置換または修飾を含む。
一実施形態では、本発明のＣｐＧオリゴヌクレオチドは化学修飾されている。化学修飾の例は当業者に知られており、たとえば、Ｕｈｌｍａｎｎら（１９９０）Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．、９０：５４３、Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ編、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ、米国Ｔｏｔｏｗａ、１９９３、Ｃｒｏｏｋｅら（１９９６）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．、３６：１０７～１２９、およびＨｕｎｚｉｋｅｒら（１９９５）Ｍｏｄ．Ｓｙｎｔｈ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、７：３３１～４１７中に記載されている。本発明によるオリゴヌクレオチドは１つまたは複数の修飾を有していてよく、それぞれの修飾は、特定のリン酸ジエステルヌクレオシド間橋、および／または特定のβ－Ｄ－リボース単位、および／または天然のＤＮＡもしくはＲＮＡから構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して特定の天然ヌクレオシド塩基位置に位置する。
本発明の一部の実施形態では、ＣｐＧ含有核酸は、当業者に知られている方法に従って、免疫原性担体と単純に混合し得る（たとえばＷＯ０３／０２４４８０号を参照）。
本発明の特定の実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物のうちの任意のものは、２μｇ～１００ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本発明の特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、０．１ｍｇ～５０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、好ましくは０．２ｍｇ～１０ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチド、より好ましくは０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。本発明の特定の実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、０．３ｍｇ～５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含む。さらに好ましくは、本発明の免疫原性組成物は、０．５～２ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み得る。最も好ましくは、本発明の免疫原性組成物は、０．７５～１．５ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み得る。好ましい実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物のうちの任意のものは、約１ｍｇのＣｐＧオリゴヌクレオチドを含み得る。
３ 配合物
本発明の免疫原性組成物は、液体形態（すなわち溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で配合し得る。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は液体形態で配合する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は凍結乾燥形態で配合する。液体配合物は、そのパッケージングされた形態から直接投与してよく、したがって、そうでなければ本発明の凍結乾燥組成物で必要である、水性媒体中での復元を必要しない注射に理想的である。
本発明の免疫原性組成物は、液体形態（すなわち溶液もしくは懸濁液）または凍結乾燥形態で配合し得る。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は液体形態で配合する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は凍結乾燥形態で配合する。液体配合物は、そのパッケージングされた形態から直接投与してよく、したがって、そうでなければ本発明の凍結乾燥組成物で必要である、水性媒体中での復元を必要しない注射に理想的である。
本開示の免疫原性組成物の配合物は、当分野で理解されている方法を使用して達成することができる。たとえば、個々の多糖および／またはコンジュゲートを、生理的に許容されるビヒクルを用いて配合して、組成物を調製することができる。そのようなビヒクルの例としては、それだけには限定されないが、水、緩衝生理食塩水、ポリオール（たとえば、グリセロール、プロピレングリコール、液体ポリエチレングリコール）、およびデキストロース溶液が挙げられる。
本開示は、本明細書中に開示した複合糖質と薬学的に許容できる賦形剤、担体、または希釈剤との組合せのうちの任意の物を含む免疫原性組成物を提供する。
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、液体形態、好ましくは水性液体形態である。
本開示の免疫原性組成物は、緩衝液、塩、二価陽イオン、非イオン性洗剤、糖などの凍結保護剤、およびフリーラジカル捕捉剤もしくはキレート化剤などの抗酸化剤、またはその任意の複数の組合せのうちの、１つまたは複数を含み得る。
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は緩衝液を含む。一実施形態では、前記緩衝液は約３．５～約７．５のｐＫａを有する。一部の実施形態では、緩衝液は、リン酸、コハク酸、ヒスチジン、またはクエン酸緩衝液である。一部の実施形態では、緩衝液はコハク酸緩衝液である。一部の実施形態では、緩衝液はヒスチジンである。ある特定の実施形態では、緩衝液は、１ｍＭ～１０ｍＭの最終濃度のコハク酸緩衝液である。特定の一実施形態では、コハク酸緩衝液の最終濃度は約５ｍＭである。
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は塩を含む。一部の実施形態では、塩は、塩化マグネシウム、塩化カリウム、塩化ナトリウム、およびその組合せからなる群から選択される。特定の一実施形態では、塩は塩化ナトリウムである。特定の一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は塩化ナトリウムを１５０ｍＭで含む。
一実施形態では、本開示の免疫原性組成物は界面活性剤を含む。一実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ（商標）２０）、ポリソルベート４０（ＴＷＥＥＮ（商標）４０）、ポリソルベート６０（ＴＷＥＥＮ（商標）６０）、ポリソルベート６５（ＴＷＥＥＮ（商標）６５）、ポリソルベート８０（ＴＷＥＥＮ（商標）８０）、ポリソルベート８５（ＴＷＥＥＮ（商標）８５）、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｎ－１０１、ＴＲＩＴＯＮ（商標）Ｘ－１００、オクトキシノール４０、ノノキシノール－９、トリエタノールアミン、オレイン酸トリエタノールアミンポリペプチド、ポリオキシエチレン－６６０ヒドロキシステアレート（ＰＥＧ－１５、Ｓｏｌｕｔｏｌ Ｈ１５）、ポリオキシエチレン－３５－リシノレート（ＣＲＥＭＯＰＨＯＲ（登録商標）ＥＬ）、ダイズレシチン、およびポロキサマーからなる群から選択される。特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート８０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０２％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０３％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、０．０５％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８０の最終濃度は、１％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。
特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート２０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート２０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート２０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート２０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０２％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０３％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０４％のポリソルベート８０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、０．０５％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート２０の最終濃度は、１％のポリソルベート２０（ｗ／ｗ）である。
特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート４０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート４０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート４０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート４０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート４０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート４０の最終濃度は、１％のポリソルベート４０（ｗ／ｗ）である。
特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート６０である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート６０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート６０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート６０の重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート６０（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート６０の最終濃度は、１％のポリソルベート６０（ｗ／ｗ）である。
特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート６５である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート６５
重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート６５ 重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート６５
重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート６５
（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、１％のポリソルベート６５ （ｗ／ｗ）である。
重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート６５ 重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート６５
重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート６５
（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート６５の最終濃度は、１％のポリソルベート６５ （ｗ／ｗ）である。
特定の一実施形態では、界面活性剤はポリソルベート８５である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０００１％～１０％のポリソルベート８５
重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８５ 重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８５
重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート８５
（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、１％のポリソルベート８５ （ｗ／ｗ）である。
重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．００１％～１％のポリソルベート８５ 重量対重量（ｗ／ｗ）である。一部の前記実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、少なくとも０．０１％～１％のポリソルベート８５
重量対重量（ｗ／ｗ）である。他の実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、０．０１％、０．０２％、０．０３％、０．０４％、０．０５％、０．０６％、０．０７％、０．０８％、０．０９％、または０．１％のポリソルベート８５
（ｗ／ｗ）である。別の実施形態では、配合物中のポリソルベート８５の最終濃度は、１％のポリソルベート８５ （ｗ／ｗ）である。
ある特定の実施形態では、本開示の免疫原性組成物は、５．５～７．５のｐＨ、より好ましくは５．６～７．０ｐＨ、さらにより好ましくは５．８～６．０のｐＨを有する。
一実施形態では、本開示は、本明細書中に開示した免疫原性組成物のうちの任意のものを満たした容器を提供する。一実施形態では、容器は、バイアル、シリンジ、フラスコ、発酵槽、バイオリアクター、バッグ、ジャー、アンプル、カートリッジ、および使い捨ての
ペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理されている。
ペンからなる群から選択される。ある特定の実施形態では、容器はシリコン処理されている。
一実施形態では、本開示の容器は、ガラス、金属（たとえば、鋼、ステンレス鋼、アルミニウムなど）および／またはポリマー（たとえば、熱可塑性樹脂、エラストマー、熱可塑性エラストマー）から作製される。一実施形態では、本開示の容器はガラスから作製される。
一実施形態では、本開示は、本明細書中に開示した免疫原性組成物のうちの任意のものを満たしたシリンジを提供する。ある特定の実施形態では、シリンジは、シリコン処理されている、および／またはガラスから作製されている。
注射のための本発明の免疫原性組成物の典型的な用量は、０．１ｍＬ～２ｍＬの体積を有する。一実施形態では、注射用の本発明の免疫原性組成物は、０．２ｍＬ～１ｍＬの体積、さらにより好ましくは約０．５ｍＬの体積を有する。
４ 本発明の複合糖質および免疫原性組成物の使用
本明細書中に開示した複合糖質は、抗原として使用し得る。たとえば、これらはワクチンの一部であり得る。
本明細書中に開示した複合糖質は、抗原として使用し得る。たとえば、これらはワクチンの一部であり得る。
したがって、一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、医薬品として使用するためのものである。
一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。
したがって、一実施形態では、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において免疫応答を生じるさせることに使用するためのものである。一態様では、対象は、ヒト、非ヒト霊長類、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。
本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において細菌性の感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または軽快させるための、治療的または予防的方法において使用し得る。特に、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３の感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または軽快させるために使用し得る。
したがって、一態様では、本開示は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に関連する感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または軽快させる方法であって、対象に、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。
一部のそのような実施形態では、感染症、疾患、または状態は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。
一実施形態では、本開示は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３に対する免疫応答を誘導する方法であって、対象に、免疫学的に有効な量の本発明の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。
一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。そのような実施形態では、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３感染症を防止するために使用し得る。したがって、一態様では、本発明は、対象において肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３による感染症を防止する方法であって、対象に、免疫学的に有効な量の本開示の免疫原性組成物を投与することを含む方法を提供する。一部のそのような実施形態では、感染症は、肺炎、副鼻腔炎、中耳炎、急性中耳炎、髄膜炎、菌血症、敗血症、胸腔蓄膿、結膜炎、骨髄炎、敗血症性関節炎、心内膜炎、腹膜炎、心膜炎、乳様突起炎、蜂窩織炎、軟組織感染症、および脳膿瘍からなる群から選択される。一態様では、対象は、ヒト、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、またはイヌなどの哺乳動物である。一態様では、対象はヒトである。
本開示の免疫原性組成物は、全身性または粘膜の経路を介して免疫原性組成物を投与することによって、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３感染症に対して感受性のあるヒトを保護または処置するために使用することができる。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下の経路によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内、腹腔内、皮内、または皮下の注射によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、筋肉内または皮下の注射によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は筋肉内注射によって投与する。一実施形態では、本発明の免疫原性組成物は皮下注射によって投与する。
５ 本発明の免疫原性組成物で処置する対象
本明細書中に開示するように、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において細菌性の感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または軽快させるための、様々な治療的または予防的方法において使用し得る。
本明細書中に開示するように、本明細書中に記載の免疫原性組成物は、対象において細菌性の感染症、疾患、または状態を防止する、処置する、または軽快させるための、様々な治療的または予防的方法において使用し得る。
好ましい実施形態では、前記対象はヒトである。最も好ましい実施形態では、前記対象は、新生児（すなわち３カ月齢未満）、乳児（すなわち３カ月～１歳）、または幼児（すなわち１歳～４歳）である。
一実施形態では、本明細書中に開示した免疫原性組成物は、ワクチンとして使用するためのものである。
そのような実施形態では、ワクチン接種する対象は１歳未満であり得る。たとえば、ワクチン接種する対象は、約１、約２、約３、約４、約５、約６、約７、約８、約９、約１０、約１１、または約１２カ月齢あり得る。一実施形態では、ワクチン接種する対象は、約２、約４、または約６カ月齢である。別の実施形態では、ワクチン接種する対象は２歳未満である。たとえば、ワクチン接種する対象は、約１２～約１５カ月齢あり得る。一部の事例では、１回用量と少ない本発明による免疫原性組成物のみが必要であるが、一部の状況下では、２回目、３回目、または４回目の用量を与え得る（以下のセクション８を参照）。
本発明の一実施形態では、ワクチン接種する対象は、５０歳以上の成人、より好ましくは５５歳以上の成人である。一実施形態では、ワクチン接種する対象は、６５歳以上、７０歳以上、７５歳以上、または８０歳以上の成人である。
一実施形態では、ワクチン接種する対象は免疫無防備状態の個体、特にヒトである。免疫無防備状態の個体は、一般に、感染性因子によるチャレンジに対して、正常な液性または細胞性の防御を開始する能力の減弱または低下を示すヒトとして、定義される。
本発明の一実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、免疫系を損なわせ、肺炎球菌疾患に対して保護するまたはそれを処置するためには不十分な抗体応答をもたらす、疾患または状態を患っている。
一実施形態では、前記疾患は原発性免疫不全障害である。好ましくは、前記原発性免疫不全障害は、混合ＴおよびＢ細胞免疫不全、抗体欠損、明確に定義された症候群、免疫調節不全疾患、食細胞障害、先天性免疫不全、自己炎症性障害、および補体欠損病からなる群から選択される。一実施形態では、前記原発性免疫不全障害は、ＷＯ２０１０／１２５４８０号のページ２４、１１行目からページ２５、１９行目に開示されているものから選択される。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、ＨＩＶ感染症、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、癌、慢性心臓または肺障害、鬱血性心不全、真性糖尿病、慢性肝疾患、アルコール依存症、硬変、髄液漏、心筋症、慢性気管支炎、気腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、脾臓機能不全（鎌状赤血球病など）、脾臓機能欠如（無脾症）、血液悪性腫瘍、白血病、多発性骨髄腫、ホジキン病、リンパ腫、腎不全、ネフローゼ症候群、および喘息からなる群から選択される疾患を患っている。
本発明の一実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は栄養失調を患っている。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、感染症に対する身体の耐性を低下させる薬物または処置を受けている。一実施形態では、前記薬物は、ＷＯ２０１０／１２５４８０号の２６ページ、３３行目から２６ページ、４行目に開示されているものから選択される。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は喫煙者である。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、５×１０９個未満の細胞／リットル、または４×１０９個未満の細胞／リットル、または３×１０９個未満の細胞／リットル、または２×１０９個未満の細胞／リットル、または１×１０９個未満の細胞／リットル、または０．５×１０９個未満の細胞／リットル、または０．３×１０９個未満の細胞／リットル、または０．１×１０９個未満の細胞／リットルの白血球数（白血球計数）を有する。
白血球数（白血球計数）：血液中の白血球（ＷＢＣ）の数。ＷＢＣは通常、ＣＢＣ（全血球数）の一部として測定される。白血球は、血液中の感染と闘う細胞であり、赤血球として知られる赤い（酸素を運ぶ）血液細胞とは明確に異なる。様々な種類の白血球が存在し、好中球（多形核白血球、ＰＭＮ）、桿状核細胞（わずかに未成熟の好中球）、Ｔ型リンパ球（Ｔ細胞）、Ｂ型リンパ球（Ｂ細胞）、単球、好酸球、および好塩基球が含まれる。すべての種類の白血球が白血球数中に反映される。白血球数の正常範囲は、通常は４，３００～１０，８００個の細胞／立方ミリメートルの血液である。これは白血球計数とも呼ぶことができ、国際単位で４．３～１０．８×１０９個の細胞／リットルとして表すことができる。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、好中球減少症を患っている。本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、２×１０９個未満の細胞／リットル、または１×１０９個未満の細胞／リットル、または０．５×１０９個未満の細胞／リットル、または０．１×１０９個未満の細胞／リットル、または０．０５×１０９個未満の細胞／リットルの好中球計数を有する。
低い白血球数または「好中球減少症」は、循環血液中の異常に低いレベルの好中球によって特徴づけられる状態である。好中球は、感染症を防止してそれと闘うことを助ける、特定の種類の白血球である。癌患者が好中球減少症を経験する最も一般的な理由は、化学療法の副作用としてである。化学療法誘導性好中球減少症は患者の感染症のリスクを増加させ、癌の処置を乱す。
本発明の特定の実施形態では、ワクチン接種する免疫無防備状態の対象は、５００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞計数、または３００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞計数、または２００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞計数、１００／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞計数、７５／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞計数、または５０／ｍｍ３未満のＣＤ４＋細胞計数を有する。
ＣＤ４細胞試験は、通常、細胞の数としてｍｍ３で報告される。正常なＣＤ４計数は５００～１，６００であり、ＣＤ８計数は３７５～１，１００である。ＣＤ４計数は、ＨＩＶを有するヒトにおいて劇的に下落する。
本発明の一実施形態では、本明細書中に開示する免疫無防備状態の対象のうちの任意のものは、男性のヒトまたは女性のヒトである。
６ レジメン
一部の事例では、１回用量と少ない本発明による免疫原性組成物のみが必要であるが、より高い免疫不全の状態などの一部の状況下では、２回目、３回目、または４回目の用量を与え得る。初回ワクチン接種の後、対象は、十分に間隔を空けた１回または数回のブースター免疫化を受けることができる。
一部の事例では、１回用量と少ない本発明による免疫原性組成物のみが必要であるが、より高い免疫不全の状態などの一部の状況下では、２回目、３回目、または４回目の用量を与え得る。初回ワクチン接種の後、対象は、十分に間隔を空けた１回または数回のブースター免疫化を受けることができる。
一実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは単一用量である。特定の実施形態では、前記単一用量スケジュールは、少なくとも２歳の健康なヒトのためのものである。
一実施形態では、本発明による免疫原性組成物のワクチン接種のスケジュールは複数用量スケジュールである。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられた２回の一連の用量からなる。特定の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられた２回の一連の用量、または２カ月の間隔によって隔てられた２回の一連の用量からなる。
別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられた３回の一連の用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられた３回の一連の用量、または約２カ月の間隔によって隔てられた３回の一連の用量からなる。
別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられた３回の一連の用量、続いて、最初の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、約１カ月の間隔によって隔てられた３回の一連の用量、続いて、最初の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量、または約２カ月の間隔によって隔てられた３回の一連の用量、続いて、最初の用量の約１０カ月～約１３カ月後の４回目の用量からなる。
一実施形態では、複数用量スケジュールは、１歳までの少なくとも１回の用量（たとえば、１、２、または３回の用量）、続いて少なくとも１回の幼児用量からなる。
一実施形態では、複数用量スケジュールは、２カ月齢に開始する、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられた（たとえば用量間が２８～５６日の）２回または３回の一連の用量、続いて、１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。一実施形態では、前記複数用量スケジュールは、２カ月齢に開始する、約１カ月～約２カ月の間隔によって隔てられた（たとえば用量間が２８～５６日の）３回の一連の用量、続いて、１２～１５カ月齢での幼児用量からなる。別の実施形態では、前記複数用量スケジュールは、２カ月齢に開始する、約２カ月の間隔によって隔てられた２回の一連の用量、続いて、１２～１８カ月齢での幼児用量からなる。
一実施形態では、複数用量スケジュールは、２、４、６、および１２～１５カ月齢でのワクチンの４回の一連の用量からなる。
一実施形態では、プライミング用量を０日目に与え、１つまたは複数のブーストを、約２～約２４週間の範囲の間隔、好ましくは４～８週間の投薬間隔で与える。
一実施形態では、プライミング用量を０日目に与え、ブーストを約３カ月後に与える。
７．本発明はまた、以下の付番した段落１～８４中に定義する以下の実施形態も提供する
１．
（ａ）非プロトン溶媒中で、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップと、
（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップと、
（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップと
を含む、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を作製する方法。
１．
（ａ）非プロトン溶媒中で、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップと、
（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップと、
（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップと
を含む、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を作製する方法。
２．単離した多糖を活性化ステップ（ａ）の前にサイジングする、段落１に記載の方法。
３．単離した血清型３莢膜多糖を重量平均分子量１００ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする、段落２に記載の方法。
４．前記炭酸誘導体が、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）、炭酸ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、およびクロロギ酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルからなる群から選択される、段落１から３のいずれか一項に記載の方法。
５．前記炭酸誘導体が１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）である、段落１から３のいずれか一項に記載の方法。
６．前記炭酸誘導体が１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）である、段落１から３のいずれか一項に記載の方法。
７．前記アジドリンカーが式（Ｉ）：
８．前記アジドリンカーが式（ＩＩ）：
９．Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分および末端アルキンを有する薬剤である、段落１から８のいずれか一項に記載の方法。
１０．Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびシクロアルキンを有する薬剤である、段落１から８のいずれか一項に記載の方法。
１１．Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が式（ＩＩＩ）：
１２．Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が式（ＩＶ）：
１３．ステップａ）が、多糖を炭酸誘導体と反応させること、続いて、非プロトン溶媒中で、炭酸誘導体で活性化させた多糖をアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成することを含む、段落１から１２のいずれか一項に記載の方法。
１４．ステップａ）で、非プロトン溶媒中で、単離した多糖を前記炭酸誘導体と反応させる、段落１から１３のいずれか一項に記載の方法。
１５．ステップａ）で、単離した多糖を、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）から本質的になる溶液中で、炭酸誘導体と反応させる、段落１から１３のいずれか一項に記載の方法。
１６．ステップａ）で、単離した多糖を、０．１％～１％（ｖ／ｖ）の水を含む非プロトン溶媒中で、ＣＤＩと反応させる、段落１から１４のいずれか一項に記載の方法。
１７．ステップａ）で、単離した多糖を、０．１％～１％（ｖ／ｖ）の水を含むＤＭＳＯ中で、ＣＤＩと反応させる、段落１から１４のいずれか一項に記載の方法。
１８．ステップａ）で、炭酸誘導体の活性化に、水の添加が続く、段落１から１７のいずれか一項に記載の方法。
１９．水を加えて、混合物中の全含水量を約１％～約１０％（ｖ／ｖ）にする、段落１８に記載の方法。
２０．ステップａ）が、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む、段落１から１９のいずれか一項に記載の方法。
２１．ステップａ）の後の活性化多糖の活性化度合が０．５～５０％である、段落１から２０のいずれか一項に記載の方法。
２２．ステップｂ）が、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む、段落１から２１のいずれか一項に記載の方法。
２３．ステップｂ）の後の活性化担体の活性化度合が１～５０である、段落１から２２のいずれか一項に記載の方法。
２４．コンジュゲーション反応ｃ）を、水性緩衝液中、触媒としての銅（Ｉ）の存在下で実施する、段落１から２３のいずれか一項に記載の方法。
２５．コンジュゲーション反応ｃ）を、水性緩衝液中、酸化剤および触媒としての銅（Ｉ）の存在下で実施する、段落１から２３のいずれか一項に記載の方法。
２６．コンジュゲーション反応ｃ）を、水性緩衝液中、触媒としての銅（Ｉ）および酸化剤としてのアスコルベートの存在下で実施し、反応混合物が、ＴＨＰＴＡ（トリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン）およびアミノグアニジンをさらに含む、段落１から２３のいずれか一項に記載の方法。
２７．ステップｃ）での、活性化アジド多糖対活性化アルキン担体の初期インプット比（重量対重量）が０．１～３である、段落１から２６のいずれか一項に記載の方法。
２８．ステップｃ）の後に、コンジュゲート中に残った未反応のアジド基を、アジド基キャッピング剤でキャッピングするステップをさらに含む、段落１から２７のいずれか一項に記載の方法。
２９．前記アジド基キャッピング剤が式（Ｖ）：
３０．前記アジド基キャッピング剤がプロパルギルアルコールである、段落２８に記載の方法。
３１．未反応のアジド基のキャッピングを、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～２０モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う、段落２８から３０のいずれか一項に記載の方法。
３２．ステップｃ）の後に、コンジュゲート中に残った未反応のアルキン基を、アルキン基キャッピング剤でキャンピングするステップをさらに含む、段落１から３１のいずれか一項に記載の方法。
３３．前記アルキン基キャッピング剤がアジド基を有する薬剤である、段落３２に記載の方法。
３４．前記アルキン基キャッピング剤が式（ＶＩ）：
３５．前記アルキン基キャッピング剤が３－アジド－１－プロパノールである、段落３２に記載の方法。
３６．未反応のアルキン基のキャッピングを、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０５～２０モル当量であるキャッピング剤の量を用いて行う、段落３２から３５のいずれか一項に記載の方法。
３７．複合糖質が生成された後にそれを精製するステップをさらに含む、段落１から３６のいずれか一項に記載の方法。
３８．段落１から３７のいずれか一項に記載の方法に従って生成した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質。
３９．スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）：
Ｘ’は、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏ、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏからなる群から選択され、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］
を有する肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質。
４０．スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は２であり、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は１である］を有する肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質。
４１．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１０ｋＤａ～２，０００ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４２．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が５０ｋＤａ～３００ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４３．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７５ｋＤａ～２００ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４４．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１００ｋＤａ～２００ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４５．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が１２５ｋＤａ～２００ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４６．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約２００ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４７．血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が約１５０ｋＤａである、段落３８から４０のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４８．２５０ｋＤａ～２０，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落３８から４７のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
４９．５００ｋＤａ～５，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落３８から４７のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５０．７５０ｋＤａ～２，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落３８から４７のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５１．１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、段落３８から４７のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５２．血清型３複合糖質のコンジュゲーション度合が２～１５である、段落３８から５１のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５３．複合糖質中の血清型３多糖対担体タンパク質の比（ｗ／ｗ）が０．５～３．０である、段落３８から５２のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５４．前記血清型３複合糖質が、多糖の４個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む、段落３８から５２のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５５．前記血清型３複合糖質が、多糖の２５個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む、段落３８から５２のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５６．前記血清型３複合糖質が、多糖の５～１０個の糖反復単位毎に、担体タンパク質と多糖との間に少なくとも１つの共有結合を含む、段落３８から５２のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５７．前記担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５８．前記担体タンパク質がＳＣＰである、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
５９．前記担体タンパク質が、酵素的に不活性なＳＣＰである、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６０．前記担体タンパク質が、ＧＢＳからの酵素的に不活性なＳＣＰ（ＳＣＰＢ）である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６１．前記担体タンパク質がＳＣＰＢの断片である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６２．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの断片である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６３．前記担体タンパク質が、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記ＳＣＰの酵素的に不活性な断片が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６４．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化が、野生型配列の少なくとも１つのアミノ酸を置き換えることによって達成され、前記置換えが、Ｄ１３０Ａ、Ｈ１９３Ａ、Ｎ２９５Ａ、およびＳ５１２Ａからなる群から選択され、数字が、ＷＯ００／３４４８７号の配列番号１の付番に従った、ペプチダーゼ中のアミノ酸残基位置を示す、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６５．前記担体タンパク質が、プロテアーゼドメイン、プロテアーゼ関連ドメイン（ＰＡドメイン）、および３つのフィブロネクチンＩＩＩ型（Ｆｎ）ドメインを含むが、輸出シグナルのプレ配列、プロ配列、および細胞壁アンカードメインを含まない、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片であり、前記不活性化が、野生型配列の少なくとも２つのアミノ酸を置き換えることによって達成され、前記少なくとも２つのアミノ酸の置換えが、Ｄ１３０ＡおよびＳ５１２Ａであり、数字が、ＷＯ００／３４４８７号の配列番号１の付番に従った、ペプチダーゼ中のアミノ酸残基位置を示す、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６６．前記担体タンパク質が、配列番号４１と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６７．前記担体タンパク質が、配列番号４２と少なくとも９５％の同一性を有するポリペプチドからなる、ＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６８．前記担体タンパク質が、配列番号４１からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
６９．前記担体タンパク質が、配列番号４２からなるＳＣＰの酵素的に不活性な断片である、段落３８から５６のいずれか一項に記載の血清型３複合糖質。
７０．段落３８から６９のいずれか一項に記載の肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物。
７１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型からの１～２５個の複合糖質を含む、段落７０に記載の免疫原性組成物。
７２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、または２５個の異なる血清型からの複合糖質を含む、段落７０に記載の免疫原性組成物。
７３．１５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
７４．２０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
７５．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質を含む、段落７０から７４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物
７６．さらに肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、５、および７Ｆからの複合糖質を含む、段落７５に記載の免疫原性組成物。
７７．さらに肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型６Ａ、および１９Ａからの複合糖質を含む、段落７６に記載の免疫原性組成物。
７８．さらに肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２２Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質を含む、段落７７に記載の免疫原性組成物。
７９．さらに肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型８、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、および１５Ｂからの複合糖質を含む、段落７８に記載の免疫原性組成物。
８０．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、および２３Ｆからの複合糖質をさらに含み、１３価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
８１．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含み、１５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
８２．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含み、２０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
８３．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含み、２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
８４．肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型２、７Ｃ、９Ｎ、１０Ｂ、１５Ａ、１６Ｆ、１７Ｆ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２１、２２Ａ、２３Ａ、２３Ｂ、２４Ｂ、２４Ｆ、２７、２９、３１、３３Ｂ、３４、３５Ｂ、３５Ｆ、および３８からの複合糖質をさらに含み、２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、段落７０に記載の免疫原性組成物。
本明細書中で使用する、用語「約」とは、記述した濃度範囲、タイムフレーム、分子量、温度、またはｐＨなどの、統計的に有意義な値の範囲内を意味する。そのような範囲は、所定の値または範囲の一桁以内、典型的には２０％以内、より典型的には１０％以内、さらにより典型的には５％以内、または１％以内あり得る。場合によっては、そのような範囲は、所定の値または範囲の測定および／または決定に使用される標準方法に典型的な実験誤差以内あり得る。用語「約」によって包含される許容される変動は、研究下にある特定の系に依存し、当業者によって容易に理解することができる。本出願内で範囲が列挙されている場合はいつでも、その範囲内のすべての数字も、本開示の一実施形態として企図される。
本明細書中における用語「含むこと（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」は、すべての事例において、それぞれ用語「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｅｓｓｅｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔ ｏｆ）」、および「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｓ ｏ）」で置換されていてもよいことが、本発明者らによって意図される。
そのそれぞれが本明細書中で互換性があるように使用される、「免疫原性量」、「免疫学的に有効な量」、「治療上有効な量」、「予防上有効な量」、または「用量」とは、一般に、当業者に知られている標準アッセイによって測定して、細胞性（Ｔ細胞）または液性（Ｂ細胞もしくは抗体）応答、あるいは両方の免疫応答を誘発するために十分な、抗原または免疫原性組成物の量をいう。
本文書の範囲のうちの任意のもの内の任意の整数が、本開示の一実施形態として企図される。
本特許明細書内に引用されるすべての参考文献または特許出願が、本明細書中に参考として組み込まれている。
本発明を、添付の実施例中に例示する。以下の実施例は、そうでないと詳述しない限りは、当業者に周知かつルーチン的である標準技法を使用して実施する。実施例は例示的であるが、本発明を限定しない。
（実施例１）
水性緩衝液中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／水性）を使用した血清型３複合糖質の調製
１．加水分解
活性化の前に、ネイティブ多糖を加水分解して分子量を低下させた。計算した体積の２Ｍの酢酸を多糖溶液に加えて、２．０±０．２ｇ／Ｌの最終多糖濃度および０．２Ｍの最終酢酸濃度を達成した。希釈した多糖溶液を８５±５℃まで加熱した。加水分解反応を、標的多糖Ｍｗに応じて一定時間の間維持した。反応の終わりに、混合物を２３±２℃まで冷却した。
水性緩衝液中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／水性）を使用した血清型３複合糖質の調製
１．加水分解
活性化の前に、ネイティブ多糖を加水分解して分子量を低下させた。計算した体積の２Ｍの酢酸を多糖溶液に加えて、２．０±０．２ｇ／Ｌの最終多糖濃度および０．２Ｍの最終酢酸濃度を達成した。希釈した多糖溶液を８５±５℃まで加熱した。加水分解反応を、標的多糖Ｍｗに応じて一定時間の間維持した。反応の終わりに、混合物を２３±２℃まで冷却した。
２．酸化
酸化反応には、１Ｍの塩化マグネシウムを反応溶液に、０．１０Ｍの最終濃度まで加えた。その後、過ヨウ素酸を多糖溶液に加えて酸化反応を開始させた（ＷＦＩ中に５０ｍｇ／ｍＬの溶液として加えた）。過ヨウ素酸の所要のモル当量は、標的酸化度合（ＤＯ）に基づいて選択した。ＤＯの標的範囲は５．０±３．０であった。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間であった。
酸化反応には、１Ｍの塩化マグネシウムを反応溶液に、０．１０Ｍの最終濃度まで加えた。その後、過ヨウ素酸を多糖溶液に加えて酸化反応を開始させた（ＷＦＩ中に５０ｍｇ／ｍＬの溶液として加えた）。過ヨウ素酸の所要のモル当量は、標的酸化度合（ＤＯ）に基づいて選択した。ＤＯの標的範囲は５．０±３．０であった。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間であった。
３．活性化多糖の精製
活性化多糖は、ＷＦＩに対する接線流濾過によって精製した。ダイアフィルトレーションは、１００ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フラットシート膜を使用して行った。ダイアフィルトレーションが完了した後、活性化多糖を、（ｉ）比色アッセイによる糖濃度、（ｉｉ）比色アッセイによるアルデヒド濃度、（ｉｉｉ）酸化度合、および（ｉｖ）ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによる分子量によって特徴づけた。精製した糖のｐＨを６．３±０．３に調節した。その後、タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴ、またはＳＣＰ）を事前に決定された比まで加えた。その後、混合物をシェル凍結させ、乾燥するまで凍結乾燥させた。
活性化多糖は、ＷＦＩに対する接線流濾過によって精製した。ダイアフィルトレーションは、１００ｋＤａの分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有するポリエーテルスルホン（ＰＥＳ）フラットシート膜を使用して行った。ダイアフィルトレーションが完了した後、活性化多糖を、（ｉ）比色アッセイによる糖濃度、（ｉｉ）比色アッセイによるアルデヒド濃度、（ｉｉｉ）酸化度合、および（ｉｖ）ＳＥＣ－ＭＡＬＬＳによる分子量によって特徴づけた。精製した糖のｐＨを６．３±０．３に調節した。その後、タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴ、またはＳＣＰ）を事前に決定された比まで加えた。その後、混合物をシェル凍結させ、乾燥するまで凍結乾燥させた。
４．コンジュゲーション反応
凍結乾燥させた活性化多糖およびタンパク質を、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝剤中で復元した。復元が完了した後、１Ｎの塩酸または１Ｎの水酸化ナトリウムを使用して、ｐＨを６．５±０．２の最終ｐＨまでに調節した。コンジュゲーション反応を開始させるために、事前に決定されたモル当量のシアノボロ水素化ナトリウムを反応混合物に加えた。コンジュゲーションは、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、４０±４時間の間、３０±２℃で進行させた。
凍結乾燥させた活性化多糖およびタンパク質を、０．１Ｍのリン酸ナトリウム緩衝剤中で復元した。復元が完了した後、１Ｎの塩酸または１Ｎの水酸化ナトリウムを使用して、ｐＨを６．５±０．２の最終ｐＨまでに調節した。コンジュゲーション反応を開始させるために、事前に決定されたモル当量のシアノボロ水素化ナトリウムを反応混合物に加えた。コンジュゲーションは、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、４０±４時間の間、３０±２℃で進行させた。
５．希釈およびキャッピング反応
コンジュゲーション反応時間が完了した後、反応溶液を２３±２℃まで冷却し、０．９％のＮａＣｌ緩衝液を用いて反応体積の０．５～１．０倍まで希釈し、その後、１モル当量の水素化ホウ素ナトリウムを混合物に加えた。キャッピング反応は、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、３～６時間の間、２３±２℃で進行させた。
コンジュゲーション反応時間が完了した後、反応溶液を２３±２℃まで冷却し、０．９％のＮａＣｌ緩衝液を用いて反応体積の０．５～１．０倍まで希釈し、その後、１モル当量の水素化ホウ素ナトリウムを混合物に加えた。キャッピング反応は、１００±１０ｒｐｍで連続的に混合しながら、３～６時間の間、２３±２℃で進行させた。
６．コンジュゲートの精製
希釈したコンジュゲート溶液を５μｍのフィルターに通し、ダイアフィルトレーションは、５ｍＭのシトレート／０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．０）を媒体として使用して行った。ダイアフィルトレーションが完了した後、コンジュゲート濃縮水を、０．４５ｕｍ／０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。
希釈したコンジュゲート溶液を５μｍのフィルターに通し、ダイアフィルトレーションは、５ｍＭのシトレート／０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．０）を媒体として使用して行った。ダイアフィルトレーションが完了した後、コンジュゲート濃縮水を、０．４５ｕｍ／０．２２μｍのフィルターを通して濾過した。
（実施例２）
ジメチルスルホキシド中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した血清型３複合糖質の調製
１．加水分解および酸化
多糖の加水分解、活性化、およびダイアフィルトレーションは、上記水性に基づくコンジュゲーションについて記載したものと同じ様式で行った。過ヨウ素酸ナトリウムの所要のモル当量は、標的ＤＯに基づいて選択した。ＤＯの標的範囲は１５．０±４．０である。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間である。
ジメチルスルホキシド中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した血清型３複合糖質の調製
１．加水分解および酸化
多糖の加水分解、活性化、およびダイアフィルトレーションは、上記水性に基づくコンジュゲーションについて記載したものと同じ様式で行った。過ヨウ素酸ナトリウムの所要のモル当量は、標的ＤＯに基づいて選択した。ＤＯの標的範囲は１５．０±４．０である。酸化反応時間は、２３±２℃で２０±４時間である。
２．複合化および凍結乾燥
活性化多糖１グラムあたり２５～１００グラムのスクロースの比、好ましくは活性化多糖１グラムあたり４０～６０グラムのスクロースの比で、活性化多糖をスクロースと複合化した。その後、複合化した混合物を凍結乾燥させた。計算した量の担体タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴ、またはＳＣＰ）を別々にシェル凍結し、凍結乾燥させた。
活性化多糖１グラムあたり２５～１００グラムのスクロースの比、好ましくは活性化多糖１グラムあたり４０～６０グラムのスクロースの比で、活性化多糖をスクロースと複合化した。その後、複合化した混合物を凍結乾燥させた。計算した量の担体タンパク質（ＣＲＭ１９７、ＴＴ、またはＳＣＰ）を別々にシェル凍結し、凍結乾燥させた。
３．コンジュゲート化およびキャッピング
凍結乾燥させた活性化多糖を無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で復元し、等量の無水ＤＭＳＯを使用して担体タンパク質を復元した。
凍結乾燥させた活性化多糖を無水ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で復元し、等量の無水ＤＭＳＯを使用して担体タンパク質を復元した。
反応器中で復元した活性化多糖を復元した担体タンパク質と合わせ、続いて、しっかりと混合して透明な溶液を得た後、シアノボロ水素化ナトリウムとのコンジュゲーションを開始させた。反応溶液中の最終多糖濃度はおよそ１ｇ／Ｌであった。コンジュゲーションは、．５～２．Ｍ当量のシアノボロ水素化ナトリウムを反応混合物に加え、２３±２℃で２０～４８時間インキュベートすることによって、開始させた。コンジュゲーション反応は、未反応のアルデヒドをキャッピングするために２Ｍ当量の水素化ホウ素ナトリウム（ＮａＢＨ４）を加えることによって、停止させた。このキャッピング反応は２３±２℃で３±１時間続いた。
４．精製
１００～３００ＫのＭＷＣＯ膜を使用した接線流濾過による精製に備えて、コンジュゲート溶液を、冷却した５ｍＭのシトレート－０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．０）で１：１０に希釈した。その後、５ｍＭのシトレート／０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．０）を媒体として使用して、ダイアフィルトレーションを行った。ダイアフィルトレーションが完了した後、ンジュゲート濃縮水を０．２２μｍのフィルターに通した。コンジュゲートを、５ｍＭのシトレート／０．９％の生理食塩水（ｐＨ６）を用いて、およそ０．５ｍｇ／ｍＬの標的糖濃度までさらに希釈した。あるいは、コンジュゲートを、１００～３００ＫのＭＷＣＯ膜を使用した接線流濾過によって、２０ｍＭのヒスチジン－０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．５）を使用して精製した。最終の０．２２μｍの濾過ステップを完了して、免疫原性コンジュゲートが得られた。
１００～３００ＫのＭＷＣＯ膜を使用した接線流濾過による精製に備えて、コンジュゲート溶液を、冷却した５ｍＭのシトレート－０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．０）で１：１０に希釈した。その後、５ｍＭのシトレート／０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．０）を媒体として使用して、ダイアフィルトレーションを行った。ダイアフィルトレーションが完了した後、ンジュゲート濃縮水を０．２２μｍのフィルターに通した。コンジュゲートを、５ｍＭのシトレート／０．９％の生理食塩水（ｐＨ６）を用いて、およそ０．５ｍｇ／ｍＬの標的糖濃度までさらに希釈した。あるいは、コンジュゲートを、１００～３００ＫのＭＷＣＯ膜を使用した接線流濾過によって、２０ｍＭのヒスチジン－０．９％の生理食塩水（ｐＨ６．５）を使用して精製した。最終の０．２２μｍの濾過ステップを完了して、免疫原性コンジュゲートが得られた。
（実施例３）
血清型３複合糖質における多糖の大きさの効果
様々な大きさの多糖を含むマウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
血清型３複合糖質における多糖の大きさの効果
様々な大きさの多糖を含むマウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
ＲＡＣ／水性（実施例１を参照）またはＲＡＣ／ＤＭＳＯ（実施例２を参照）のいずれかの、ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーションを使用してＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた、サイジングした血清型３多糖（約２５、１５０、または２５０ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表２の試験したコンジュゲートの特質を参照）。
２５匹の６～８週齢の雌のスイスウェブスターマウスの群を、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートを用いて、皮下経路を介して０週目に免疫化した（２５０μＬ）。マウスを、同じ用量のコンジュゲートを用いて３週目にブーストし、その後、５週目に出血させた。それぞれのワクチン接種は、１００μｇ／用量のＡｌＰＯ４をアジュバントとして用いて配合した。すべての前臨床免疫原性研究は、２５匹のマウス／群を使用して、ＯＰＡ力価に４～５倍の相違を検出することを動力としていた。２回目のワクチン接種の２週間後（５週目、ＰＤ２）に、全血をマウスから収集し、血清を分析のために使用した。血清型特異的ＯＰＡを５週目の血清試料に対して行った。
オプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）アッセイを使用して、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａ）血清型３に特異的なネズミ血清中の機能的抗体を測定する。試験血清は、莢膜多糖特異的免疫グロブリンの、細菌をオプソニン化し、補体堆積を始動し、それによって、食細胞による細胞の貪食および死滅を容易にする能力を測定するアッセイ反応においてセットアップする。ＯＰＡ力価は、試験血清を有さない対照ウェルに対して細菌計数の５０％の低下をもたらす希釈率の逆数として定義される。ＯＰＡ力価は、この５０％の死滅カットオフを包含する２つの希釈率から内挿する。
ＯＰＡ手順はＨｕら（２００５）Ｃｌｉｎ Ｄｉａｇｎ Ｌａｂ Ｉｍｍｕｎｏｌ、１２（２）：２８７～２９５中に記載の方法に基づいており、以下の改変を用いた。試験血清を２．５倍に連続希釈し、マイクロタイターアッセイプレートに加えた。生きた血清型３標的細菌株をウェルに加え、プレートを２５℃で３０分間振盪した。分化したＨＬ－６０細胞（食細胞）および仔ウサギ血清（３～４週齢、ＰＥＬ－ＦＲＥＥＺ（登録商標）、１２％の最終濃度）をウェルに加え、プレートを３７℃で４５分間振盪した。反応を停止させるために、８０μＬの０．９％のＮａＣｌをすべてのウェルに加え、混合し、１０μＬのアリコートを、２００μＬの水を含有するＭＵＬＴＩＳＣＲＥＥＮ（登録商標）ＨＴＳ ＨＶフィルタープレート（ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ（登録商標））のウェルに移した。液体を、真空下でプレートを通して濾過し、１５０μＬのＨＹＳＯＹ（登録商標）培地をそれぞれのウェルに加え、濾過した。その後、フィルタープレートを３７℃、５％のＣＯ２で終夜インキュベートし、その後、Ｄｅｓｔａｉｎ溶液（Ｂｉｏ－Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．、カリフォルニア州Ｈｅｒｃｕｌｅｓ）を用いて固定した。その後、プレートをクマシーブルーで染色し、１回脱染色した。コロニーをイメージングし、Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｌｉｍｉｔｅｄ （ＣＴＬ）（オハイオ州Ｓｈａｋｅｒ Ｈｅｉｇｈｔｓ）ＩＭＭＵＮＯＳＰＯＴ（登録商標）分析器で数えた。生のコロニー計数を使用して、死滅曲線をプロットし、ＯＰＡ力価を計算した。
５週目の様々な用量のＯＰＡ力価（９５％の信頼区間（ＣＩ）を有する相乗平均力価（ＧＭＴ））を表３に示す。結果を図３に提示する。
表３および図３のデータは、血清型３コンジュゲートが、ネズミ免疫原性モデルにおいて用量依存的なＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表３に示すように、ＲＡＣ／水性ケミストリーを用いた血清型３コンジュゲートは、すべての用量において、多糖の大きさが減少するにつれて、より高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導した。ＲＡＣ／ＤＭＳＯケミストリーでは、小さい多糖の大きさの０．０１μｇの用量で、ノンレスポンダーがより少なかった。
（実施例４）
血清型３複合糖質における多糖の酸化度合（ＤＯ）／活性化度合（ＤｏＡ）の効果
様々な酸化度合を使用して作製したマウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
血清型３複合糖質における多糖の酸化度合（ＤＯ）／活性化度合（ＤｏＡ）の効果
様々な酸化度合を使用して作製したマウスにおける血清型３－ＣＲＭ１９７コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。
ＲＡＣ／水性（実施例１を参照）またはＲＡＣ／ＤＭＳＯ（実施例２を参照）のいずれかの、ＣＲＭ１９７とのコンジュゲーションを使用してＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた、サイジングした血清型３多糖（約１２０～１７０ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表４の試験したコンジュゲートの特質を参照）。
２５匹の６～８週齢の雌のスイスウェブスターマウスの群を、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートを用いて、皮下経路を介して０週目に免疫化した（２５０μＬ）。マウスを、同じ用量のコンジュゲートを用いて３週目にブーストし、その後、５週目に出血させた。血清型特異的ＯＰＡを５週目の血清試料に対して行った。
ＯＰＡは、実施例３に記載のように実施した。結果を表５および図４に提示する。
表５および図４のデータは、血清型３コンジュゲートが、ネズミ免疫原性モデルにおいて用量依存的なＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表５に示すように、ＲＡＣ／水性またはＲＡＣ／ＤＭＳＯケミストリーを用いた血清型３コンジュゲートは、より高いＤＯのすべての用量において、より高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導した。
（実施例５）
クリックケミストリーを使用した血清型３莢膜多糖のコンジュゲーション（図２を参照）
１．アジドリンカーを用いた血清型３莢膜多糖の活性化
血清型３莢膜多糖をイミダゾール（３×、ｗ／ｗ）と混合し、１ＭのＨＣｌを用いてｐＨを３．５に調節し、その後、凍結し、凍結乾燥させた。
クリックケミストリーを使用した血清型３莢膜多糖のコンジュゲーション（図２を参照）
１．アジドリンカーを用いた血清型３莢膜多糖の活性化
血清型３莢膜多糖をイミダゾール（３×、ｗ／ｗ）と混合し、１ＭのＨＣｌを用いてｐＨを３．５に調節し、その後、凍結し、凍結乾燥させた。
３日間の凍結乾燥の後、凍結乾燥させた多糖を無水ＤＭＳＯ（４ｍｇ／ｍＬ）中で復元する。その後、反応混合物を３５℃まで温め、ＣＤＩ（０．２Ｍ当量）を加えた。反応混合物を３５℃で３時間攪拌した。反応混合物を２３℃まで冷却した後、ＷＦＩ（２％ｖ／ｖ）を加えて遊離ＣＤＩをクエンチングし、その後、３０分間、２３℃でさらに攪拌した。反応混合物に３－アジド－プロピルアミン（２Ｍ当量）を加える。２３℃で２０時間の反応の後、反応混合物を、冷却した（５℃）１０ｍＭのＮａＨ２ＰＯ４緩衝液（５×、ｖ／ｖ）で希釈した。その後、希釈した反応混合物を、ＵＦ／ＤＦによって、１０ＫのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、ＷＦＩ（３０×、ｖ／ｖ）に対して精製した。
２．アルキンＮＨＳエステルを用いた、ＣＲＭ１９７のアルキン－ＣＲＭ１９７への活性化
ＣＲＭ１９７溶液（１０００ｍｇ）に、５７ｍＬのＷＦＩおよび５０ｍＬの０．５Ｍのリン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ８．３）を加えた。８℃まで冷却した後、反応温度を８±３℃に維持して、１８ｍＬの３－プロパルギルオキシ－プロパン酸ＮＨＳエステル（ＰＯＰＳ）（ＤＭＳＯ中に２０ｍｇ／ｍＬ）（ＣＲＭ１９７上のリシンに対して２．４Ｍ当量）を反応混合物に滴下した。反応混合物を２時間、８℃で攪拌した後、ＵＦ／ＤＦによって、１０ＫのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ ２ Ｍｉｎｉ）を使用して、生理食塩水（ｐＨ７．０）中の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝剤に対して（３０×ダイアフィルトレーション体積）精製した。ＵＦ／ＤＦの後、２３ｇのスクロース（１５％ｖ／ｖ）を加えた。
ＣＲＭ１９７溶液（１０００ｍｇ）に、５７ｍＬのＷＦＩおよび５０ｍＬの０．５Ｍのリン酸ナトリウム緩衝剤（ｐＨ８．３）を加えた。８℃まで冷却した後、反応温度を８±３℃に維持して、１８ｍＬの３－プロパルギルオキシ－プロパン酸ＮＨＳエステル（ＰＯＰＳ）（ＤＭＳＯ中に２０ｍｇ／ｍＬ）（ＣＲＭ１９７上のリシンに対して２．４Ｍ当量）を反応混合物に滴下した。反応混合物を２時間、８℃で攪拌した後、ＵＦ／ＤＦによって、１０ＫのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ｐｅｌｌｉｃｏｎ ２ Ｍｉｎｉ）を使用して、生理食塩水（ｐＨ７．０）中の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝剤に対して（３０×ダイアフィルトレーション体積）精製した。ＵＦ／ＤＦの後、２３ｇのスクロース（１５％ｖ／ｖ）を加えた。
３．クリックコンジュゲーション：活性化アジドポリおよびアルキンＣＲＭは、「クリック反応」と呼ばれるＣｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によってコンジュゲートされる
５ｍＭの硫酸銅（ＣｕＳＯ４）（１ｍＬ）および２５ｍＭのトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）（１ｍＬ）の混合物を、アジドリンカー（上記ステップ１を参照）およびアルキン－ＣＲＭ１９７（上記ステップ２を参照）で活性化させた血清型３莢膜多糖の混合物に２３℃で加え（生理食塩水中の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝剤（ＳＰＢ）中、ｐＨ７．０）、続いて、１００ｍＭのアミノグアニジン（２ｍＬ）および１００ｍＭのアスコルビン酸ナトリウム（２ｍＬ）を加えた。反応混合物を２時間、２３℃で攪拌した後、未反応のアジド基を、プロパルギルアルコール（１Ｍ当量）によって２時間、２３℃でキャッピングし、最初のキャッピングの後、続いて、未反応のアルキン基を、３－アジド－１－プロパノール（２Ｍ当量）によって２時間、２３℃でキャッピングした。その後、反応混合物を、ＵＦ／ＤＦによって、１００ＫのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、生理食塩水（ｐＨ７．０）中の１０ｍＭのＥＤＴＡ＋１０ｍＭのＳＰＢ（３０×ダイアフィルトレーション体積）、続いて生理食塩水（ｐＨ６．０）中の５ｍＭのシトレート（３０×ダイアフィルトレーション体積）に対して精製した。
５ｍＭの硫酸銅（ＣｕＳＯ４）（１ｍＬ）および２５ｍＭのトリス（３－ヒドロキシプロピルトリアゾリルメチル）アミン（ＴＨＰＴＡ）（１ｍＬ）の混合物を、アジドリンカー（上記ステップ１を参照）およびアルキン－ＣＲＭ１９７（上記ステップ２を参照）で活性化させた血清型３莢膜多糖の混合物に２３℃で加え（生理食塩水中の１００ｍＭのリン酸ナトリウム緩衝剤（ＳＰＢ）中、ｐＨ７．０）、続いて、１００ｍＭのアミノグアニジン（２ｍＬ）および１００ｍＭのアスコルビン酸ナトリウム（２ｍＬ）を加えた。反応混合物を２時間、２３℃で攪拌した後、未反応のアジド基を、プロパルギルアルコール（１Ｍ当量）によって２時間、２３℃でキャッピングし、最初のキャッピングの後、続いて、未反応のアルキン基を、３－アジド－１－プロパノール（２Ｍ当量）によって２時間、２３℃でキャッピングした。その後、反応混合物を、ＵＦ／ＤＦによって、１００ＫのＭＷＣＯ ＰＥＳ膜を使用して、生理食塩水（ｐＨ７．０）中の１０ｍＭのＥＤＴＡ＋１０ｍＭのＳＰＢ（３０×ダイアフィルトレーション体積）、続いて生理食塩水（ｐＨ６．０）中の５ｍＭのシトレート（３０×ダイアフィルトレーション体積）に対して精製した。
（実施例６）
血清型３複合糖質における免疫原性に対する担体タンパク質の効果
マウスにおけるＣＲＭ１９７、ＳＣＰ、または破傷風トキソイドとの血清型３コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した（実施例２を参照）。
血清型３複合糖質における免疫原性に対する担体タンパク質の効果
マウスにおけるＣＲＭ１９７、ＳＣＰ、または破傷風トキソイドとの血清型３コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）を使用した（実施例２を参照）。
様々なタンパク質担体とコンジュゲートさせた、サイジングした血清型３多糖（約１６０～２５０ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表６の試験したコンジュゲートの特質を参照）。
２５匹の６～８週齢の雌のスイスウェブスターマウスの群を、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートを用いて、皮下経路を介して０週目に免疫化した（２５０μＬ）。マウスを、同じ用量のコンジュゲートを用いて３週目にブーストし、その後、５週目に出血させた。血清型特異的ＯＰＡを５週目の血清試料に対して行った。
結果を表７および図５に提示する。
表７および図５のデータは、血清型３コンジュゲートが、ネズミ免疫原性モデルにおいて用量依存的なＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表７に示すように、ＳＣＰとコンジュゲートさせた血清型３は、より高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導し、すべてのマウスが、低い用量においてでさえも、測定可能なＯＰＡ力価（ｔｉｔｉｅｒ）（０％のノンレスポンダー）で応答した。
ここに示すように、ＳＣＰのみが、０．０１ｕｇ／ｍｌの用量でのワクチン接種に応答するマウスの百分率を真に増強させた。ＴＴは、一般にＣＲＭ１９７よりも低い応答を誘発した。
（実施例７）
血清型３複合糖質における免疫原性に対するケミストリーの効果
マウスにおけるＣＲＭ１９７との血清型３コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。様々なケミストリー（水性中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／水性）、実施例１を参照、ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）、実施例２を参照、ｅＴＥＣ連結複合糖質（ｅＴＥＣ）、ＷＯ２０１４／０２７３０２号を参照、またはクリックケミストリー（クリック）、実施例５を参照）を使用して、マウスにおけるＯＰＡ応答の変化を評価した。
血清型３複合糖質における免疫原性に対するケミストリーの効果
マウスにおけるＣＲＭ１９７との血清型３コンジュゲートのオプソニン化貪食作用活性（ＯＰＡ）力価を、標準条件下で決定した。様々なケミストリー（水性中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／水性）、実施例１を参照、ＤＭＳＯ中での還元的アミノ化（ＲＡＣ／ＤＭＳＯ）、実施例２を参照、ｅＴＥＣ連結複合糖質（ｅＴＥＣ）、ＷＯ２０１４／０２７３０２号を参照、またはクリックケミストリー（クリック）、実施例５を参照）を使用して、マウスにおけるＯＰＡ応答の変化を評価した。
様々なケミストリーを使用してＣＲＭ１９７とコンジュゲートさせた、サイジングした血清型３多糖（約１６０～１１００ｋＤａ）を使用して、アジュバントの存在下で動物にワクチン接種した（表８の試験したコンジュゲートの特質を参照）。
２５匹の６～８週齢の雌のスイスウェブスターマウスの群を、０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、または１μｇ／ｍｌの試験コンジュゲートを用いて、皮下経路を介して０週目に免疫化した（２５０μＬ）。マウスを、同じ用量のコンジュゲートを用いて３週目にブーストし、その後、５週目に出血させた。血清型特異的ＯＰＡを５週目の血清試料に対して行った。
結果を表９および図６に提示する。
表９および図６のデータは、すべての血清型３コンジュゲートが、ネズミ免疫原性モデルにおいて用量依存的なＯＰＡ力価を誘発したことを示す。表９および図６に示すように、クリックケミストリーを使用した血清型３は、他のケミストリーと比較してすべてのマウスにおいて、測定可能なＯＰＡ応答の指標であるより高いＯＰＡ ＧＭＴを誘導した。
（実施例８）
クリックケミストリーを使用した、担体タンパク質としてＣＲＭ１９７を有する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
実施例５のものに類似のプロセス（クリックケミストリー）およびＣＲＭ１９７を担体として使用して、様々な特質を有するコンジュゲートを作製した（表１０を参照）。アジドポリ（活性化度合（ＤｏＡ）１２％）およびアルキンＣＲＭ１９７（ＤｏＡ１８）を用いたＰｎ３クリックコンジュゲーションは、コンジュゲート＃１および＃２を作製し、低い収率、低いＭＷ、および低い糖タンパク質比（ＳＰＲ）をもたらした。このプロセスは、ジド多糖およびアルキンＣＲＭ１９７のＤｏＡを下げることによって、コンジュゲート収率および標的コンジュゲートＳＰＲ約１を増加させるように最適化されている。ＳＰＲ１．１およびより高い収率を有するコンジュゲート＃３を、アジド多糖（ＤｏＡ５％）およびアルキンＣＲＭ１９７（ＤｏＡ１１）を用いて生成した。
クリックケミストリーを使用した、担体タンパク質としてＣＲＭ１９７を有する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
実施例５のものに類似のプロセス（クリックケミストリー）およびＣＲＭ１９７を担体として使用して、様々な特質を有するコンジュゲートを作製した（表１０を参照）。アジドポリ（活性化度合（ＤｏＡ）１２％）およびアルキンＣＲＭ１９７（ＤｏＡ１８）を用いたＰｎ３クリックコンジュゲーションは、コンジュゲート＃１および＃２を作製し、低い収率、低いＭＷ、および低い糖タンパク質比（ＳＰＲ）をもたらした。このプロセスは、ジド多糖およびアルキンＣＲＭ１９７のＤｏＡを下げることによって、コンジュゲート収率および標的コンジュゲートＳＰＲ約１を増加させるように最適化されている。ＳＰＲ１．１およびより高い収率を有するコンジュゲート＃３を、アジド多糖（ＤｏＡ５％）およびアルキンＣＲＭ１９７（ＤｏＡ１１）を用いて生成した。
後にこのプロセスを使用し、収率は７６％まで増加した。これらのパラメータのほとんどは、２０％未満の遊離糖のコンジュゲートを生じた。
（実施例９）
クリックケミストリーを使用した、ＳＣＰを担体タンパク質として有する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
実施例５のものに類似のプロセス（クリックケミストリー）およびＳＣＰを担体として使用して、様々な特質を有するコンジュゲートを作製した。アジドポリ（ＤＯＡ５％）およびアルキンＳＣＰ（ＤＯＡ２６）を用いたクリックコンジュゲーションは、中等度の収率およびＳＰＲを有するコンジュゲート＃１を生じた。しかし、最適化中、４および１３％のＤＯＡを有するアジドポリならびにＤＯＡ１３、２６、および３７のアルキンＳＣＰは、コンジュゲート＃２～＃７を生じた。以下の表（表１１）から示されるように、ＤＯＡ２６を有するアルキンＳＣＰは、高い収率、ＳＰＲ約１、およびより高いＭＷを有するコンジュゲート＃２および＃３を生じた。ＤＯＡ１３および３７を有するアルキンＳＣＰを用いて調製したコンジュゲートは、コンジュゲート＃２および３と比較してより低い収率、ＭＷ、およびＳＰＲでコンジュゲート＃４～＃６を生じた。
クリックケミストリーを使用した、ＳＣＰを担体タンパク質として有する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
実施例５のものに類似のプロセス（クリックケミストリー）およびＳＣＰを担体として使用して、様々な特質を有するコンジュゲートを作製した。アジドポリ（ＤＯＡ５％）およびアルキンＳＣＰ（ＤＯＡ２６）を用いたクリックコンジュゲーションは、中等度の収率およびＳＰＲを有するコンジュゲート＃１を生じた。しかし、最適化中、４および１３％のＤＯＡを有するアジドポリならびにＤＯＡ１３、２６、および３７のアルキンＳＣＰは、コンジュゲート＃２～＃７を生じた。以下の表（表１１）から示されるように、ＤＯＡ２６を有するアルキンＳＣＰは、高い収率、ＳＰＲ約１、およびより高いＭＷを有するコンジュゲート＃２および＃３を生じた。ＤＯＡ１３および３７を有するアルキンＳＣＰを用いて調製したコンジュゲートは、コンジュゲート＃２および３と比較してより低い収率、ＭＷ、およびＳＰＲでコンジュゲート＃４～＃６を生じた。
（実施例１０）
クリックケミストリーを使用した、ＴＴを担体タンパク質として有する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
実施例５のものに類似のプロセス（クリックケミストリー）およびＴＴを担体として使用して、様々な特質を有するコンジュゲートを作製した。
クリックケミストリーを使用した、ＴＴを担体タンパク質として有する肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質
実施例５のものに類似のプロセス（クリックケミストリー）およびＴＴを担体として使用して、様々な特質を有するコンジュゲートを作製した。
アジドポリ（ＤＯＡ約５％）ならびにアルキンＴＴ（ＤＯＡ約１０、１５、および２０）を用いたクリックコンジュゲーションは、より高い遊離糖レベルを有するコンジュゲート＃１～４を生じた。しかし、プロセスの最適化中、ＤＯＡ約１０％を有するアジドポリおよびＤＯＡ約２０を有するアルキンＴＴは、低い遊離糖を有するコンジュゲート＃５を生じた（表１２を参照）。
（実施例１１）
様々なケミストリーおよび様々な担体を使用した、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質の免疫原性の評価
アカゲザル乳児に、ＲＡＣ／水性またはクリックケミストリーのいずれかを使用して２つの担体タンパク質のうちのいずれか（ＣＲＭ１９７またはＳＣＰ）とコンジュゲートさせた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３をワクチン接種した。
様々なケミストリーおよび様々な担体を使用した、肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質の免疫原性の評価
アカゲザル乳児に、ＲＡＣ／水性またはクリックケミストリーのいずれかを使用して２つの担体タンパク質のうちのいずれか（ＣＲＭ１９７またはＳＣＰ）とコンジュゲートさせた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３をワクチン接種した。
１．アカゲザル乳児の研究
年齢および性別が一致したアカゲザル乳児（ＩＲＭ）（３～６カ月齢）を３つの群へとランダムに割り当てた（研究設計、表１３を参照）。
年齢および性別が一致したアカゲザル乳児（ＩＲＭ）（３～６カ月齢）を３つの群へとランダムに割り当てた（研究設計、表１３を参照）。
乳児に筋肉内でワクチン接種した（クリック多糖ケミストリー（クリック－ＳＣＰ、クリック－ＣＲＭ、すべて約１３０ｋＤａのポリサイズを有する）またはＳＴ３ ＲＡＣ－水性ＣＲＭコンジュゲート（約２５０ｋＤａのポリサイズ）のいずれかを用いて）。ベースラインＳＴ３特異的血清力価を評価するための事前出血を、一次ワクチン接種（Ｄ０）の１週間前（週数＝－１）に収集した。２回の繰り返しワクチン接種を、一次ワクチン接種の後の８週目および１６週目に投与した。
血清用の全血を、用量１（ＰＤ１）の４および８週間後、ＰＤ２の１、４、および８週間後、ならびにＰＤ３の１、４、１６、および３６週間後に収集した。
２．オプソニン化貪食作用アッセイ
マイクロコロニーオプソニン化貪食作用アッセイ（ｍｃＯＰＡ）を行った。
マイクロコロニーオプソニン化貪食作用アッセイ（ｍｃＯＰＡ）を行った。
Ｐｎ３ ｍｃＯＰＡには、標的細菌細胞および熱不活性化試験血清から構成される反応混合物を、３０分間、２５℃、環境振盪器（ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ ｓｈａｋｅｒ）中でインキュベートした。その後、分化したＨＬ－６０組織培養細胞（エフェクター細胞）および仔ウサギ補体を反応混合物に加え、４５分間、３７℃、環境振盪器中でインキュベートした。機能的抗肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）抗体価は、試験血清を含有するｍｃＯＰＡ反応物中における細菌生存を測定することによって、決定する。アッセイ混合物を蒔き、終夜成長させる。
２日目に、貪食されていない生きた細菌の数を決定する。ｍｃＯＰＡ抗体価は、血清を含有しない細菌－エフェクター細胞－補体対照ウェルと比較した場合に、細菌コロニー数の５０％の低下をもたらす血清希釈率の逆数である。
３．結果
３．１．クリック－ＳＣＰケミストリーは、用量１後のアカゲザル乳児において血清型３特異的ＯＰＡ力価を顕著に改善した：
本発明者らは、ニューモ（ｐｎｅｕｍｏ）血清型３クリックケミストリー（クリック－ＳＣＰ、クリック－ＣＲＭ）を用いたアカゲザル乳児の一次ワクチン接種後のＯＰＡ応答を、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭケミストリーと比較して評価した。すべての構築体は、記載のようにＡｌＰＯ４を用いてアジュバント化した（表１３）。興味深いことに、クリック－ＳＣＰケミストリー／担体の組合せは、血清型３特異的ＯＰＡ（＞８倍）を、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭと比較して有意に改善した（図７、表１４）。
３．１．クリック－ＳＣＰケミストリーは、用量１後のアカゲザル乳児において血清型３特異的ＯＰＡ力価を顕著に改善した：
本発明者らは、ニューモ（ｐｎｅｕｍｏ）血清型３クリックケミストリー（クリック－ＳＣＰ、クリック－ＣＲＭ）を用いたアカゲザル乳児の一次ワクチン接種後のＯＰＡ応答を、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭケミストリーと比較して評価した。すべての構築体は、記載のようにＡｌＰＯ４を用いてアジュバント化した（表１３）。興味深いことに、クリック－ＳＣＰケミストリー／担体の組合せは、血清型３特異的ＯＰＡ（＞８倍）を、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭと比較して有意に改善した（図７、表１４）。
３．２ クリック－ＳＣＰケミストリーは、用量２後（ＰＤ２）のアカゲザル乳児において最も高いＯＰＡ力価を誘導した
本発明者らは、２カ月目での第２の用量２が、アカゲザル乳児においてＯＰＡ力価の増加を誘導したかどうかをさらに試験した。すべての様々なケミストリーのコンジュゲートを用いたワクチン接種が、対応するＰＤ１力価と比較して、より高いＰＤ２のＯＰＡ力価を誘導した（図８）。クリック－ＳＣＰワクチン接種が、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭケミストリーよりも約４．５倍の最も高い相乗平均力価を誘導した（表１５）。さらに、クリック－ＳＣＰで誘導した力価は、より狭い信頼区間を有するものであり、これは、その群のすべてのサルにおいて均一な免疫応答が生じたことを示す（図８）。クリック－ＣＲＭワクチン接種は、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭと比較して、それぞれの用量でのＰＤ２のＯＰＡ力価を改善したが、信頼区間はより広かった（図８）。
本発明者らは、２カ月目での第２の用量２が、アカゲザル乳児においてＯＰＡ力価の増加を誘導したかどうかをさらに試験した。すべての様々なケミストリーのコンジュゲートを用いたワクチン接種が、対応するＰＤ１力価と比較して、より高いＰＤ２のＯＰＡ力価を誘導した（図８）。クリック－ＳＣＰワクチン接種が、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭケミストリーよりも約４．５倍の最も高い相乗平均力価を誘導した（表１５）。さらに、クリック－ＳＣＰで誘導した力価は、より狭い信頼区間を有するものであり、これは、その群のすべてのサルにおいて均一な免疫応答が生じたことを示す（図８）。クリック－ＣＲＭワクチン接種は、ＲＡＣ／水性－ＣＲＭと比較して、それぞれの用量でのＰＤ２のＯＰＡ力価を改善したが、信頼区間はより広かった（図８）。
クリック－ＳＣＰコンジュゲートを用いたワクチン接種は、アカゲザル乳児において、単一用量を用いたＲＡＣ／水性－ＣＲＭコンジュゲートと比較して、有意により高い血清型３特異的ＯＰＡ／ＩｇＧ 力価を誘導し、より応答はＰＤ２に維持されていた。クリック－ＣＲＭワクチン接種は、アカゲザル乳児においてＲＡＣ／水性－ＣＲＭコンジュゲートよりも高い平均力価を誘導した。
本明細書中で言及したすべての刊行物および特許出願は、本発明が属する分野の技術者のレベルの指標である。すべての刊行物および特許出願は、それぞれの個々の刊行物または特許出願が具体的および個々に参考として組み込まれているとして示されている場合と同じ程度に、本明細書中に参考として組み込まれている。
前述の発明は、理解を明白にする目的で、例示および実施例によってある程度詳細に記載したが、特定の変更および改変は、添付の特許請求の範囲の範囲内で実施し得る。
Claims (25)
- （ａ）非プロトン溶媒中で、単離した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３莢膜多糖を炭酸誘導体およびアジドリンカーと反応させて、活性化アジド多糖を生成するステップと、
（ｂ）担体タンパク質を、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤と反応させるステップであって、ＮＨＳ部分がアミノ基と反応してアミド結合を形成し、それによってアルキン官能化担体タンパク質が得られるステップと、
（ｃ）Ｃｕ＋１媒介性アジド－アルキン付加環化反応によって、ステップ（ａ）の活性化アジド多糖をステップ（ｂ）の活性化アルキン担体タンパク質と反応させて、複合糖質を形成するステップと
を含む方法によって生成した肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物。 - 単離した多糖を活性化ステップ（ａ）の前にサイジングする、請求項１に記載の免疫原性組成物。
- 単離した血清型３莢膜多糖を重量平均分子量１００ｋＤａ～２００ｋＤａまでサイジングする、請求項２に記載の免疫原性組成物。
- 前記炭酸誘導体が、１，１’－カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、１，１’－カルボニル－ジ－（１，２，４－トリアゾール）（ＣＤＴ）、炭酸ジスクシンイミジル（ＤＳＣ）、またはクロロギ酸Ｎ－ヒドロキシスクシンイミジルである、請求項１から３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記アジドリンカーが式（Ｉ）：
- 前記アジドリンカーが式（ＩＩ）：
- Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分および末端アルキンを有する薬剤である、請求項１から６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびシクロアルキンを有する薬剤である、請求項１から６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が式（ＩＩＩ）：
の化合物である、請求項１から６のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。 - Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する前記薬剤が式（ＩＶ）：
- ステップａ）が、炭酸誘導体で活性化させた多糖を、活性化多糖の多糖反復単位の量に対して０．０１～１０モル当量であるアジドリンカーの量と反応させることをさらに含む、請求項１から１０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- ステップｂ）が、担体タンパク質を、担体上のリシンに対して０．１～１０モル当量である、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）部分およびアルキン基を有する薬剤の量と反応させることを含む、請求項１から１１のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- コンジュゲーション反応ｃ）を、水性緩衝液中、触媒としての銅（Ｉ）の存在下で実施する、請求項１から１２のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- ステップｃ）の後に、コンジュゲート中に残った未反応のアジド基を、アジド基キャッピング剤でキャッピングするステップをさらに含む、請求項１から１３のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- ステップｃ）の後に、コンジュゲート中に残った未反応のアルキン基を、アルキン基キャッピング剤でキャンピングするステップをさらに含む、請求項１から１４のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 複合糖質が生成された後にそれを精製するステップをさらに含む、請求項１から１５のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）：
Ｘ’は、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏ、ＣＨ２Ｏ（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｍ’（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏからなる群から選択され、ｎ”は、０～１０から選択され、ｍ’は、０～４から選択される］
を有する肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物。 - スペーサーを通じて担体タンパク質（ＣＰ）と共有的にコンジュゲートされた肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３糖を含み、一般式（ＶＩＩ）［式中、ＸはＣＨ２（ＣＨ２）ｎ’であり、ｎ’は２であり、Ｘ’はＣＨ２Ｏ（ＣＨ２）ｎ”ＣＨ２Ｃ＝Ｏであり、ｎ”は１である］を有する肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型３複合糖質を含む免疫原性組成物。
- 血清型３莢膜多糖を含み、コンジュゲーション前の前記多糖の重量平均分子量（Ｍｗ）が７５ｋＤａ～２００ｋＤａである、請求項１から１８のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 血清型３複合糖質が１，０００ｋＤａ～４，０００ｋＤａの重量平均分子量（Ｍｗ）を有する、請求項１から１９のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記担体タンパク質がＣＲＭ１９７である、請求項１から２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 前記担体タンパク質がＳＣＰである、請求項１から２０のいずれか一項に記載の免疫原性組成物。
- 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の様々な血清型からの１～２５個の複合糖質を含む、請求項１から２２に記載の免疫原性組成物。
- 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ｆ、および３３Ｆからの複合糖質をさらに含み、２０価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、請求項１から２２に記載の免疫原性組成物。
- 肺炎連鎖球菌（Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ａ、１５Ｂ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２２Ｆ、２３Ａ、２３Ｂ、２３Ｆ、２４Ｆ、３３Ｆ、および３５Ｂからの複合糖質をさらに含み、２５価の肺炎球菌のコンジュゲート組成物である、請求項１から２２に記載の免疫原性組成物。
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| JP2023196356A Pending JP2024075506A (ja) | 2022-11-22 | 2023-11-20 | コンジュゲートさせた莢膜糖抗原を含む免疫原性組成物およびその使用 |
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2023
- 2023-11-20 JP JP2023196356A patent/JP2024075506A/ja active Pending
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