JP2024059028A - Inspection kit and inspection method - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、血液や体液中の抗体量や薬剤の濃度を簡易かつ迅速に定量する方法に関する。 The present invention relates to a method for easily and quickly quantifying the amount of antibodies and drug concentrations in blood and body fluids.
例えば、ウィルスや子宮頸癌等に関しては、ワクチンの接種により抗体が産生されることにより免疫を獲得し、予防の効果が期待されるが、十分な免疫を獲得しているか又はワクチンの効果が持続しているかを知ることで、ワクチンを再度摂取するか否かの判断を簡易に行うことが期待されている。また、例えば、癌の治療として抗癌剤治療が行われるが、血中の抗癌剤濃度を知ることで、抗癌剤の投与のタイミングや投与量等の調整を行うことが期待されている。 For example, when it comes to viruses, cervical cancer, etc., vaccination produces antibodies that are expected to acquire immunity and provide preventive effects, but it is expected that knowing whether sufficient immunity has been acquired or whether the vaccine's effectiveness is still sustained will make it easier to decide whether or not to re-take the vaccine. Also, for example, anticancer drug therapy is used to treat cancer, and it is expected that knowing the concentration of the anticancer drug in the blood will allow adjustments to be made to the timing and dosage of the anticancer drug.
従来、免疫測定を行う検査キットとして、イムノクロマトグラフィー法を応用した検査キットが知られている。 Conventionally, test kits that apply immunochromatography are known as test kits that perform immunoassays.
イムノクロマトグラフィー法は、セルロース膜などの多孔質の検査片上を被検体が試薬を熔解しながらゆっくりと流れる性質(採血管現象)を応用した免疫測定法であり、この性質を利用して妊娠診断、インフルエンザ等で応用されている。また、イムノクロマトグラフィー法による検査キットの一例として検体の滴下窓と検査片の状態を目視する検出窓を有する矩形状のケースに、予め標識抗体と補足抗体を固定化させた検査片を封入され、被検体中の細菌が検出されると検出部において呈色し細菌の有無を判定する検査キットが知られている(特許文献1)。 Immunochromatography is an immunoassay that utilizes the property of a specimen slowly flowing over a porous test strip such as a cellulose membrane while dissolving the reagent (blood collection tube phenomenon), and this property is used in pregnancy diagnosis, influenza, etc. One example of a test kit using immunochromatography is a test kit in which a test strip with a labeled antibody and a capture antibody immobilized thereon is enclosed in a rectangular case with a sample drop window and a detection window for visually observing the condition of the test strip, and when bacteria are detected in the specimen, the detection part changes color to determine the presence or absence of bacteria (Patent Document 1).
また、新型コロナウィルス感染症(COVID-19)を引き起こすウィルス(SARS-CoV-2)のヌクレオカプシドたんぱく質とスパイクたんぱく質に対して特異的に反応する血中の免疫グロブリンの一種であるIgG抗体やIgM抗体を検出する方法が確立されており、さらにワクチンによる産生された抗体であるか自然感染により産生された抗体であるかを判別することができる検査キットが知られている(特許文献2)。
さらに、安価かつ簡易的にイムノクロマトテストストリプを用いて全血中の血漿タンパクを測定する方法が知られているが、発色による定性的な測定のみが記載されている。好適には定量的に測定されることで、検体中の目的物質の測定が行われる旨の記載があるが、具体的に定量的に測定される方法は記載されていない(特許文献3)。
In addition, a method has been established to detect IgG antibodies and IgM antibodies, which are types of immunoglobulins in the blood that specifically react to the nucleocapsid protein and spike protein of the virus (SARS-CoV-2) that causes the novel coronavirus infection (COVID-19), and a test kit is known that can distinguish whether an antibody has been produced by a vaccine or by natural infection (Patent Document 2).
Furthermore, a method for measuring plasma proteins in whole blood using an immunochromatographic test strip is known, which is inexpensive and simple, but only describes a qualitative measurement based on color development. It is described that the target substance in a sample is preferably measured quantitatively, but does not specifically describe a method for quantitative measurement (Patent Document 3).
しかしながら、従来の検査キットは、例えば、妊娠の有無、細菌への感染の有無、及び大腸癌への罹患の有無を判定する等、定性的に判定することはできるが、例えば、ワクチンにより免疫を獲得し、予防効果があるかを定量的に判定することはできなかった。そのためこのような定量的な判定ができる簡易なキットが期待されている。 However, while conventional test kits can make qualitative determinations, such as determining whether or not a person is pregnant, whether or not a person has a bacterial infection, and whether or not a person has colon cancer, they cannot quantitatively determine, for example, whether a vaccine has provided immunity and has a preventive effect. For this reason, there is a demand for a simple kit that can make such quantitative determinations.
さらに、近年、TDM(therapeutic drug monitoring)すなわち「薬物治療モニタリング」あるいは「薬物血中濃度モニタリング」が注目されている。薬の作用は、血中濃度に依存する考え方があるが、迅速かつ簡易にモニタリングできる検査キットは知られていない。特に、抗癌剤治療における血中の抗癌剤濃度や、てんかん、多発性骨髄腫、急性白血病、髄腔内播種等に対する血中の薬物濃度を簡易かつ迅速に判定できる方法が求められている。 Furthermore, in recent years, attention has been focused on TDM (therapeutic drug monitoring), i.e. "drug therapy monitoring" or "blood drug concentration monitoring." It is believed that the action of a drug depends on the blood concentration, but no test kit that allows for rapid and simple monitoring is known. In particular, there is a demand for a method that can easily and quickly determine the blood concentration of anticancer drugs in anticancer drug treatment, as well as the blood concentration of drugs for epilepsy, multiple myeloma, acute leukemia, intrathecal dissemination, etc.
従来、血液中の抗体を定量するには、病院等で血液を採血し、採取した血液を遠心分離処理して血清・血漿を得て分析を行うため、抗体量の結果が判明するまで数日必要であっる。また、血液、尿、汗及び涙等に含まれる薬物の濃度を簡易かつ迅速に定量する方法は知られていない。血液、尿、汗及び涙等に含まれる抗体量や薬物量を簡易かつ迅速に定量的に判定できるようになれば、ワクチン接種のタイミングを即時に判断でき、薬剤の効果的な投与タイミングを判断できるようになるため、血液、尿、汗及び涙等に含まれる抗体や薬物量を簡易かつ迅速に定量できる方法が求められていた。 Conventionally, to quantify antibodies in blood, blood is drawn at a hospital or the like, centrifuged to obtain serum and plasma, which are then analyzed, and it takes several days to determine the antibody amount. In addition, no simple and rapid method is known for quantifying the concentration of drugs in blood, urine, sweat, tears, etc. If it were possible to quantitatively determine the amount of antibodies and drugs in blood, urine, sweat, tears, etc. easily and quickly, it would be possible to immediately determine the timing of vaccination and the effective timing of drug administration. Therefore, there has been a demand for a simple and rapid method for quantifying the amount of antibodies and drugs in blood, urine, sweat, tears, etc.
本発明の目的は、血液又は体液中のたんぱくと結合することで検出可能な抗体、抗原又は遺伝子、及び血液又は体液中の薬剤の濃度を簡易かつ迅速に測定することができる検査キットを提供することにある。 The object of the present invention is to provide a test kit that can easily and quickly measure the concentration of an antibody, antigen, or gene that can be detected by binding to a protein in blood or a body fluid, and the concentration of a drug in blood or a body fluid.
本発明者は、上記課題を解決するべく鋭意検討した結果、種々クロマトグラフィーにより検査を行うに際し、採集した体液とクロマトグラフィーの呈色との間に定量的な関係を見出し、かかる関係についてさらに検討を行い、本発明を完成するに至った。
本発明は以下を提供する。
(構成1)呈色判定による定性分析検査キットを含み、 呈色判定による定性分析検査キットを含み、抗体量を定量的に算出できる検査キットであって、
血液又は体液を採集する管と、検査に使用する血液又は体液の量を目視で測定するためのスケールAと、検出対象が検出された判定部分の呈色を目視で判定するスケールBと、定量換算シートと
を含むことを特徴とする検査キット。
(構成2)
前記呈色判定による定性分析検査キットがイムノクロマトグラフィー法を用いた検査キットであること
を特徴とする構成1に記載の検査キット。
(構成3)
前記検出対象が、前記採取された血液又は体液中のタンパクと結合することで検出可能な抗体、抗原又は遺伝子、及び血液又は体液中の薬剤である
ことを特徴とする構成1又は2に記載の検査キット。
(構成4)
前記定量換算シートは、縦軸にスケールAで読み取られる血液又は体液の量の数値が記載された縦軸と、スケールBで読み取られる呈色を示す数値が記載された横軸とからなり、両者の交点に抗体量が記載されたマトリックスシートであって、
上記の交点に記載された抗体量は、検量線により求めた抗体量の算出式に、所定の縦軸の数値における横軸の数値を代入して得られた基本抗体量と、該基本抗体量との比に基いて算出される比抗体量とであること
を特徴とする構成1に記載の検査キット。
As a result of intensive research into solving the above problems, the inventors have found a quantitative relationship between the collected body fluid and the color produced by chromatography when performing tests using various types of chromatography, and have further investigated this relationship, which has led to the completion of the present invention.
The present invention provides the following:
(Configuration 1) A test kit including a qualitative analysis test kit by color determination, and capable of quantitatively calculating the amount of antibody,
A test kit comprising: a tube for collecting blood or body fluid; a scale A for visually measuring the amount of blood or body fluid used in the test; a scale B for visually determining the color of the determination portion where the target substance is detected; and a quantitative conversion sheet.
(Configuration 2)
The test kit according to the above-mentioned embodiment 1, wherein the qualitative analysis test kit based on color determination is a test kit using an immunochromatography method.
(Configuration 3)
The test kit according to configuration 1 or 2, characterized in that the detection target is an antibody, an antigen, or a gene that can be detected by binding to a protein in the collected blood or body fluid, and a drug in the blood or body fluid.
(Configuration 4)
The quantitative conversion sheet is a matrix sheet including a vertical axis on which the amount of blood or body fluid is indicated by a value read on scale A, and a horizontal axis on which the amount of color is indicated by a value read on scale B, and the amount of antibody is indicated at the intersection of the two lines,
The antibody amount indicated at the intersection is a basic antibody amount obtained by substituting the horizontal axis value at a predetermined vertical axis value into a calculation formula for the antibody amount obtained from the calibration curve, and a specific antibody amount calculated based on the ratio of the basic antibody amount to the basic antibody amount.
呈色判定による上記定性分析検査キットは、例えば、市販されているイムノクロマトグラフィー法を用いた定性分析検査キットを用いてもよい。また、呈色判定には、蛍光、発光なども含まれる。 The qualitative analysis test kit using color determination may be, for example, a commercially available qualitative analysis test kit using immunochromatography. Color determination also includes fluorescence, luminescence, and the like.
血液は全血であってもよいし、血清又は血漿を用いることができる。
また、体液としては、唾液、尿、涙、又は汗等が挙げられるが、これらに限られない。
The blood may be whole blood, or serum or plasma may be used.
In addition, examples of body fluids include, but are not limited to, saliva, urine, tears, sweat, and the like.
血液又は体液を採取するに際しては採取器を用いることができる。かかる採取器は、血液であれば穿刺針等を用いることができる。穿刺針等を指先に刺すことで血液を採取することが可能である。
また、体液であれば、紙コップ、検査用チューブ、綿棒等を用いて採取してもよい。
When collecting blood or a body fluid, a collector can be used. For blood, a puncture needle or the like can be used as the collector. Blood can be collected by inserting the puncture needle into a fingertip.
Body fluids may also be collected using paper cups, test tubes, cotton swabs, etc.
血液又は体液を採集する管は、空気が入りにくい透明又は半透明の管が望ましい。また、採集する部分の直径が変化しない管であることが望ましいが、後で述べる検量線が引ければ、直径が変化する管であっても使用することができる。すなわち、上記管は、その内径等は特に制限されず、採集した血液又は体液を適量使用してイムノクロマトグラフィー法を用いた定性分析キットで検出できればよい。通常は、上記管に採集した血液又は体液の全量を用いて定性分析キットで検出するので、後述するように管に採取された血液又は体液の量と分析に用いる血液又は体液の量とが同じとなる。また、管の壁面にメモリを付して採集量を読み取ることができるようにしてもよい。さらに、毛細管現象で液体等が吸引される毛細管、例えばヘマトクリット管を用いることが望ましい。また、液体等を採取できれば、スポイト等を用いることもできる。さらに、血液を採集する場合は、菅の壁面にヘパリンが付されている官を用いると血液が固まることを防ぐことができる。 The tube for collecting blood or body fluid is preferably a transparent or semi-transparent tube that does not easily allow air to enter. It is also preferable that the diameter of the collected part does not change, but if a calibration curve, which will be described later, can be drawn, a tube whose diameter changes can also be used. In other words, the inner diameter of the tube is not particularly limited, and it is sufficient that an appropriate amount of collected blood or body fluid can be used for detection with a qualitative analysis kit using an immunochromatography method. Usually, the entire amount of blood or body fluid collected in the tube is used for detection with a qualitative analysis kit, so that the amount of blood or body fluid collected in the tube and the amount of blood or body fluid used for analysis, as will be described later, are the same. Also, a scale may be attached to the wall of the tube so that the collected amount can be read. Furthermore, it is preferable to use a capillary tube in which liquids, etc. are sucked in by capillary action, such as a hematocrit tube. Also, if liquids, etc. can be collected, a dropper, etc. can be used. Furthermore, when collecting blood, using a tube with heparin attached to the wall of the tube can prevent blood from clotting.
スケールAは、管に採集された血液又は体液の量を目視で簡易に測定できればよい。例えば、図2に示すような目盛を付したスケールである。図2においては、メモリの単位をcmとしている。これは検査キットに用いられる管が決まっているので、管における血液等の量を高さで示すことで採集量(分析の使用量と採集量とは同じ)が判明するためである。管の内径が当該管において一定であれば、後述するように検量線を引くことができるので、図2に示すようなメモリを付したスケールをスケールAとして用いることができる。一方、管の内径が場所によって異なる場合には内容量に応じた態様でメモリを付したスケールとなる。このように検査キットに含まれる血液又は体液を採集する管に合わせて、あらかじめ目盛を付したスケールを検査キットに組み込むことで、採集された血液又は体液の量を目視で簡易に測定することが可能である。 Scale A may be any scale that allows the amount of blood or body fluid collected in the tube to be easily measured visually. For example, it may be a scale marked with a scale as shown in FIG. 2. In FIG. 2, the scale is in cm. This is because the tube used in the test kit is fixed, and the collected amount (the amount used for analysis and the collected amount are the same) can be determined by indicating the amount of blood or the like in the tube by the height. If the inner diameter of the tube is constant, a calibration curve can be drawn as described later, so a scale marked with a scale as shown in FIG. 2 can be used as scale A. On the other hand, if the inner diameter of the tube varies depending on the location, the scale should be marked in a manner according to the content volume. In this way, by incorporating a scale marked in advance in accordance with the tube for collecting blood or body fluid contained in the test kit into the test kit, the amount of collected blood or body fluid can be easily measured visually.
スケールBは、定性分析検査キットのテストライン(Tライン)の呈色度合いを測定できるスケールである。通常、定性分析検査キットは、検出したい検出対象の有無をTラインが呈色することで判断する。Tラインが呈色すれば検出対象が血液又は体液中に存在することを示す。
しかしながら、検出対象の量が多いほど定性分析検査キットのテストラインの呈色の程度(色の濃淡)が高いことが想定される。上記スケールBは、このような検出対象の量と呈色の濃度との関係を利用して、Tラインの呈色レベルを簡易に目視で判定できる。スケールBは、例えば、図3に示すような呈色される色の濃淡をレベル毎に数値を付したスケールとすることができる。そして、実際の検査における呈色をこのスケールと見比べて検査における呈色の示す色味に相当するスケールの色を示す数値を読み取ることで使用する。
Scale B is a scale that can measure the degree of coloring of the test line (T line) of a qualitative analysis test kit. Usually, a qualitative analysis test kit judges the presence or absence of a target substance to be detected by the coloring of the T line. The coloring of the T line indicates the presence of the target substance in blood or body fluid.
However, it is expected that the greater the amount of the detection target, the greater the degree of coloring (shade of color) of the test line of the qualitative analysis test kit. The above-mentioned scale B can easily determine the coloring level of the T line by visually checking the relationship between the amount of the detection target and the coloring concentration. For example, scale B can be a scale in which the shade of the coloring is assigned a numerical value for each level, as shown in FIG. 3. Then, the scale is used by comparing the coloring in the actual test with this scale and reading the numerical value indicating the color of the scale that corresponds to the coloring in the test.
定量換算シートは、前記定量換算シートは、縦軸にスケールAで読み取られる血液又は体液の量の数値が記載された縦軸と、スケールBで読み取られる呈色を示す数値が記載された横軸とからなり、両者の交点に抗体量が記載されたマトリックスシートであって、
上記の交点に記載された抗体量は、検量線により求めた抗体量の算出式に、所定の縦軸の数値における横軸の数値を代入して得られた基本抗体量と、該基本抗体量との比に基いて算出される比抗体量とである。
具体的には、例えば図1に示すように、縦軸にスケールAで読み取られる血液量(検査に用いた血液の管における高さ)を、横軸にスケールBで読み取られる呈色の数値を入れる。そして、スケールA及びスケールBの交点に記載されている数値を読み取ることで定量的に抗体量を判定することができる。この定量判定するための数値は、後述する検量線により求められるものである。なお、図1においては便宜上縦軸について「血液」と記載しているが、体液であっても同様に適用可能である。
スケールA及びスケールBによって測定された指標を、図1に示す定量換算シートを用いて簡易に定量判定することが可能である。定性分析検査キットに滴下された血液又は体液の絶対量が多ければTラインの呈色のレベルは高くなり、滴下された血液又は体液の絶対量が少なければTラインの呈色のレベルは低くなる。すなわち、単位体積当たりの検出対象濃度を算出するには、あらかじめ滴下する血液又は体液の量をスケールAで測定しておき、Tラインの呈色レベルをスケールBで判定し、定量換算シートのスケールAとスケールBの交差した部分を読み取ることで、検出対象の血中又は体液中の濃度を知ることができる。
また、定量換算シートは、検出対象を一般的な定量分析を行い、検量線を作成して数値を算出することで作成される。
さらに、スケールA、スケールB及び定量換算シートが別々のシートでもよいし、一つのシートにまとまっていてもよい。
The quantitative conversion sheet is a matrix sheet including a vertical axis on which the amount of blood or body fluid read on scale A is recorded, and a horizontal axis on which the coloration is recorded on scale B, and the antibody amount is recorded at the intersection of the two axes,
The antibody amount shown at the intersection is the basic antibody amount obtained by substituting the horizontal axis value at a given vertical axis value into the calculation formula for the antibody amount determined from the calibration curve, and the specific antibody amount calculated based on the ratio to the basic antibody amount.
Specifically, for example, as shown in Figure 1, the vertical axis represents the amount of blood (the height of the blood in the tube used in the test) as read on scale A, and the horizontal axis represents the color value as read on scale B. The amount of antibody can be quantitatively determined by reading the value written at the intersection of scale A and scale B. The value for this quantitative determination is determined from a calibration curve, which will be described later. Note that, for convenience, "blood" is written on the vertical axis in Figure 1, but the same can be applied to body fluids.
The indicators measured by scale A and scale B can be easily quantitatively determined using the quantitative conversion sheet shown in Figure 1. If the absolute amount of blood or body fluid dropped on the qualitative analysis test kit is large, the color level of the T line will be high, and if the absolute amount of blood or body fluid dropped is small, the color level of the T line will be low. In other words, to calculate the concentration of the target substance per unit volume, the amount of blood or body fluid to be dropped is measured in advance using scale A, the color level of the T line is determined using scale B, and the intersection of scale A and scale B on the quantitative conversion sheet is read, thereby knowing the concentration of the target substance in the blood or body fluid.
The quantitative conversion sheet is prepared by carrying out a general quantitative analysis of the detection target, creating a calibration curve, and calculating values.
Furthermore, scale A, scale B and the quantitative conversion sheet may be separate sheets or may be integrated into one sheet.
検出対象は、採取された血液又は体液中のタンパクと結合することで検出可能な抗体、抗原、遺伝子又はタンパク、及び血液又は体液中の薬剤である。薬剤としては、例えば、抗癌剤、抗てんかん薬、酵素(遺伝病で欠損している酵素量)、及びビタミン等が挙げられる。 The detection targets are antibodies, antigens, genes, or proteins that can be detected by binding to proteins in the collected blood or body fluids, and drugs in the blood or body fluids. Examples of drugs include anticancer drugs, antiepileptic drugs, enzymes (enzyme levels that are deficient due to genetic diseases), and vitamins.
本発明の検査キットは、血液又は体液を採集する管と、採取された血液又は体液の量を目視で測定するためのスケールAと、検出対象が検出された判定部分の呈色を目視で判定するスケールBと、定量換算シートを含む。 The test kit of the present invention includes a tube for collecting blood or body fluid, scale A for visually measuring the amount of collected blood or body fluid, scale B for visually determining the color of the determination portion where the detection target is detected, and a quantitative conversion sheet.
本発明によれば、簡易かつ迅速に血液又は体液中のたんぱくと結合することで検出可能な抗体、抗原又は遺伝子、及び血液又は体液中の薬剤の濃度を定量判定することができる。簡易かつ迅速に定量判定することができることで、ワクチン接種のタイミングを迅速に判断できるとともに、抗癌剤等の治療薬剤を投与するタイミングを迅速に判断することができる。 According to the present invention, it is possible to easily and quickly quantitatively determine the concentration of an antibody, antigen, or gene that can be detected by binding to a protein in blood or body fluid, and a drug in blood or body fluid. By being able to easily and quickly quantitatively determine the concentration, it is possible to quickly determine the timing of vaccination and the timing of administration of a therapeutic drug such as an anticancer drug.
以下、本発明の検査キット及び検査方法の実施形態および実施例について詳細に説明するが、本発明は以下の実施形態および実施例に何ら限定されるものではなく、本発明の目的の範囲内において、適宜変更を加えて実施することができる。 The following provides a detailed explanation of embodiments and examples of the test kit and test method of the present invention, but the present invention is not limited to the following embodiments and examples, and can be modified as appropriate within the scope of the object of the present invention.
(検量線の作成)
本発明においては、上記定量換算シートを作成するための検量線を求める。
まず、あらかじめ抗体量(いわゆる新型コロナウイルス「COVID-19原因ウイルスSARS-CoV-2」に対する抗体)が分かっている血清を希釈し、様々な濃度の抗体量の試験体を準備した。各試験体をスケールAで2cmの量を測りとり、定性分析検査キット(Welsign製COVID19Ab)の展開膜に染み込ませた。その後、展開膜に展開液を適量滴下し、そのまま15分程度(血液中の抗体と展開膜に備えられた標識物質とが十分に反応するまで)放置した。Cライン(確認ライン)が呈色していることを確認し、Tラインの呈色の程度をスケールBにて目視で判定を行った。目視判定は3回~4回行い、平均を算出した。その結果を表1に示す。その後、試験体の濃度とスケールBから読み取った呈色の程度の平均を用いて、回帰分析し、検量線を作成した。その結果を図4に示す。そして、この検量線から、スケールBから読み取った呈色度合いにおける抗体量(濃度)を算出する算出式(1)を求めた。かかる算出式はイムノクロマトグラフィー法を用いた定性分析検査キットを用いて呈色を確認する場合には好適に用いることができるものであるが、これ以外のクロマトグラフィー法を用いる場合を排除するものではない。
y=53.594e0.8073x ・・・式(1)
(式中、xは呈色度合い、yは試験体中の抗体量を示す。)
(Creating a calibration curve)
In the present invention, a calibration curve is determined for preparing the quantitative conversion sheet.
First, serum with known antibody levels (antibodies against the SARS-CoV-2 virus that causes COVID-19) was diluted to prepare test specimens with various antibody levels. Each test specimen was measured to a length of 2 cm using scale A and soaked into the spreading membrane of a qualitative analysis test kit (COVID19Ab manufactured by Welsign). An appropriate amount of spreading liquid was then dropped onto the spreading membrane and the specimen was left for about 15 minutes (until the antibodies in the blood reacted sufficiently with the labeling substance provided on the spreading membrane). After confirming that the C line (confirmation line) was colored, the degree of coloring of the T line was visually judged using scale B. The visual judgment was performed three to four times, and the average was calculated. The results are shown in Table 1. After that, a regression analysis was performed using the concentration of the test specimen and the average degree of coloring read from scale B to create a calibration curve. The results are shown in Figure 4. Then, from this calibration curve, a calculation formula (1) was obtained to calculate the antibody amount (concentration) at the degree of coloring read from scale B. This calculation formula can be suitably used when confirming coloration using a qualitative analysis test kit that employs immunochromatography, but does not exclude the use of other chromatographic methods.
y = 53.594e 0.8073x ... Equation (1)
(In the formula, x represents the degree of coloration, and y represents the amount of antibody in the test specimen.)
(定量換算シートの作成)
スケールAが2cmのときのスケールBの各呈色度合いにおける抗体量(基本抗体量)を式(1)から求め、それぞれ表に記載した。更に、スケールAが0.5cm~4cmの際の各呈色度合いにおける抗体量(比抗体量)については、2cmの抗体量とは体積として反比例関係にあるため、例えば、4cmの欄には2cmの抗体量の1/2倍、1cmの欄には2cmの抗体量の2倍の値を記載し、0.5cm~4cmまでの表を埋め、定量換算シートを完成させた。
(Creating a quantitative conversion sheet)
The antibody amount (basic antibody amount) at each degree of coloration of scale B when scale A is 2 cm was calculated from formula (1) and listed in the table. Furthermore, for the antibody amount (specific antibody amount) at each degree of coloration when scale A is 0.5 cm to 4 cm, since it is inversely proportional to the antibody amount at 2 cm in terms of volume, for example, 1/2 the antibody amount at 2 cm was listed in the 4 cm column, and twice the antibody amount at 2 cm was listed in the 1 cm column, and the table was filled in from 0.5 cm to 4 cm to complete the quantitative conversion sheet.
〔定量換算シートを含む本発明の検査キットの製造法〕
本発明の検査キットは、以下の各工程を経て得ることができる。
血液又は体液の採集に使用する管の長さに応じて長さの判定ができる目盛りを付してスケールを作成するスケールA作成工程、
定性分析検査キットの呈色度合いに対応して1~10±3の範囲内で目盛りを付してスケールBを作成するスケールB作成工程、
あらかじめ抗体濃度のわかっている試験体を上記管により採取してスケールAの目盛りを読み取った後、定性分析検査キットを用いて分析を行い、スケールBの目盛りを読み取り、これらの読み取った値を用いて検量線を作成する検量線作成工程、
得られた検量線から呈色度合いを代入して抗体量を算出する算出式を求める式算出工程、
及び
得られた算出式からスケールAの任意の目盛りの値におけるスケールBの各呈色度合いにおける抗体量を算出し、更に得られた抗体量から他のスケールAの目盛りの値における抗体量も計算して、定量換算シートを得る定量換算シート作成工程。
〔本発明の検査キットの使用法〕
本発明の検査キットは、以下のようにして使用することができる。
血液や体液を採取し、所定の管に採集する。採集した血液や体液の量をスケールAにより測定し、所定の定性分析検査キットを用いて、イムノクロマトグラフィー法等によりクロマト分析などを行いTラインの呈色を目視して、スケールBにより呈色度合いの目盛りの値を読み取る。そして、定量換算シートにより、スケールAの値とスケールBの値との交点の抗体量を読み取る。これにより抗体量を定量的に知ることができる。
〔作用効果〕
本発明の検査キットを用いることにより、通常の定性分析検査キットを用いて定量的な抗体量を知ることができるので、単に陰性陽性の判定のみならず、抗体量についても確認できる。抗体量を迅速且つ簡便に判定することができるので、ワクチン接種のタイミングを迅速に判断できるとともに、抗癌剤等の治療薬剤を投与するタイミングを迅速に判断することができる。
[Method for producing the test kit of the present invention including the quantitative conversion sheet]
The test kit of the present invention can be obtained through the following steps.
a scale A preparation step for preparing a scale by marking marks that allow the determination of length according to the length of a tube used for collecting blood or body fluid;
a scale B creating step of creating a scale B by marking the scale within a range of 1 to 10±3 corresponding to the degree of color development of the qualitative analysis test kit;
A calibration curve preparation step of collecting a test sample having a known antibody concentration in advance using the tube, reading the scale A, analyzing the test sample using a qualitative analysis test kit, reading the scale B, and preparing a calibration curve using the values read;
a formula calculation step of obtaining a formula for calculating the amount of antibody by substituting the degree of coloration from the obtained calibration curve;
and a quantitative conversion sheet creation process for calculating the antibody amount at each coloration degree on scale B at any scale value on scale A from the obtained calculation formula, and further calculating the antibody amounts at other scale values on scale A from the obtained antibody amounts, thereby obtaining a quantitative conversion sheet.
[Method of using the test kit of the present invention]
The test kit of the present invention can be used as follows.
Blood or body fluid is sampled and collected in a designated tube. The amount of collected blood or body fluid is measured using Scale A, and a designated qualitative analysis test kit is used to perform chromatographic analysis using an immunochromatography method or the like, visually checking the color of the T-line, and the value of the scale indicating the degree of coloration is read using Scale B. Then, using a quantitative conversion sheet, the antibody amount at the intersection of the value of Scale A and the value of Scale B is read. This allows the antibody amount to be known quantitatively.
[Action and Effect]
By using the test kit of the present invention, the quantitative amount of antibodies can be known using a normal qualitative analysis test kit, so that not only can negative/positive results be judged, but also the amount of antibodies can be confirmed. Since the amount of antibodies can be judged quickly and simply, the timing of vaccination can be quickly determined, and the timing of administration of therapeutic drugs such as anticancer drugs can also be quickly determined.
以下、実施例により本発明をさらに具体的に説明するが、本発明はこれらに何ら制限されるものではない。
(実施例1~4)
(血液の採集)
穿刺針(例えば、ニプロ製ニプロLSランセット28G 1.0mm 11-166)にて指先より採血する血液を指先より出す。指の付け根から指先に向かって指をもむようにすると血液が出やすくなる。十分な血液が出たところで、血液を管(例えば、アズワン社製2-454-21ヘマトクリット毛細管ヘパリン処理)にて採集する。
(血液量の測定)
次に、管に採集された血液量を確認するため、スケールAを用いて採集量の高さ(cm)を目視で測定する。
(検出対象量の判定)
採集された血液を、イムノクロマトグラフィー法による定性分析検査キット(Welsign製COVID19Ab)の展開膜に染み込ませる。その後、展開膜に展開液を適量滴下する。15分程度(血液中の抗体と展開膜に備えられた標識物質とが十分に反応するまで)放置する。
Cラインが呈色していることを確認し、Tラインの呈色の程度をスケールBにて判定する。
(定量換算シートによる定量判定)
あらかじめ作成した検量線を用いて作成した図1に示す定量換算シートを用いて、スケールAで読み取った血液の量とスケールBで読み取った呈色判定の交差部分の数値を読み取ることで、抗体量の定量を行った。その結果を表2に示す。さらに、検証用定量分析結果と定量換算シートから読み取った抗体量のグラフを図5に示す。
The present invention will be described in more detail below with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
(Examples 1 to 4)
(Blood Collection)
Use a puncture needle (e.g., Nipro LS Lancet 28G 1.0 mm 11-166, manufactured by Nipro) to draw blood from the fingertip. Kneading the finger from the base to the tip will help blood come out. When enough blood has come out, collect it in a tube (e.g., 2-454-21 hematocrit capillary tube heparinized, manufactured by AS ONE).
(Blood volume measurement)
Next, to confirm the amount of blood collected in the tube, the height (cm) of the collected volume is visually measured using scale A.
(Determination of the amount to be detected)
The collected blood is soaked into the developing membrane of a qualitative analysis test kit (COVID19 Ab manufactured by Welsign) using the immunochromatography method. An appropriate amount of developing solution is then dripped onto the developing membrane. It is left for about 15 minutes (until the antibodies in the blood and the labeling substance provided on the developing membrane have sufficiently reacted).
Confirm that the C line has changed color, and judge the degree of coloration of the T line using scale B.
(Quantitative determination using a quantitative conversion sheet)
Using the quantitative conversion sheet shown in Figure 1, which was created using a previously prepared calibration curve, the amount of antibody was quantified by reading the numerical value at the intersection between the amount of blood read on scale A and the color determination read on scale B. The results are shown in Table 2. Furthermore, a graph of the verification quantitative analysis results and the amount of antibody read from the quantitative conversion sheet is shown in Figure 5.
(実施例5)
(尿の採集)
紙コップに尿を採集する。採集した尿を管(例えば、アズワン社製2-454-21ヘマトクリット毛細管ヘパリン処理)に採集する。
(採集した尿量の測定)
次に、管に採集された尿量を確認するため、スケールAを用いて採集量の高さ(cm)を目視で測定する。
(検出対象量の判定)
採集された尿を、イムノクロマトグラフィー法による定性分析検査キット(Welsign製COVID19Ab)の展開膜に染み込ませる。その後、展開膜に展開液を適量滴下する。15分程度(尿中の薬剤量と展開膜に備えられた標識物質とが十分に反応するまで)放置する。
Cラインが呈色していることを確認し、Tラインの呈色の程度をスケールBにて判定する。
(定量換算シートによる定量判定)
あらかじめ作成した検量線を用いて作成した図1に示す定量換算シートを用いて、スケールAで読み取った血液の量とスケールBで読み取った呈色判定の交差部分の数値を読み取ることで、抗体量の定量を行った。その結果を表2に示す。さらに、検証用定量分析結果と定量換算シートから読み取った抗体量のグラフを図5に示す。
Example 5
(Urine Collection)
Urine is collected in a paper cup and then collected in a tube (for example, 2-454-21 hematocrit capillary tube, heparinized, manufactured by AS ONE).
(Measurement of collected urine volume)
Next, in order to confirm the amount of urine collected in the tube, the height (cm) of the collected volume is visually measured using scale A.
(Determination of the amount to be detected)
The collected urine is soaked into the developing membrane of a qualitative analysis test kit (COVID19 Ab manufactured by Welsign) using the immunochromatography method. An appropriate amount of developing solution is then dropped onto the developing membrane. The mixture is left for about 15 minutes (until the amount of drug in the urine and the labeling substance provided on the developing membrane have sufficiently reacted).
Confirm that the C line has changed color, and judge the degree of coloration of the T line using scale B.
(Quantitative determination using a quantitative conversion sheet)
Using a quantitative conversion sheet shown in Figure 1 prepared using a previously prepared calibration curve, the amount of antibody was quantified by reading the numerical value at the intersection between the amount of blood read on scale A and the color determination read on scale B. The results are shown in Table 2. Furthermore, a graph of the verification quantitative analysis results and the amount of antibody read from the quantitative conversion sheet is shown in Figure 5.
Claims (4)
血液又は体液を採集する管と、検査に使用する血液又は体液の量を目視で測定するためのスケールAと、検出対象が検出された判定部分の呈色を目視で判定するスケールBと、定量換算シートと
を含むことを特徴とする検査キット。 A test kit that includes a qualitative analysis test kit by color determination and can quantitatively calculate the amount of antibody,
A test kit comprising: a tube for collecting blood or body fluid; a scale A for visually measuring the amount of blood or body fluid used in the test; a scale B for visually determining the color of the determination portion where the target substance is detected; and a quantitative conversion sheet.
を特徴とする請求項1に記載の検査キット。 2. The test kit according to claim 1, wherein the qualitative analysis test kit based on color determination is a test kit using an immunochromatography method.
ことを特徴とする請求項1又は2に記載の検査キット。 3. The test kit according to claim 1 or 2, characterized in that the detection target is an antibody, an antigen, or a gene that can be detected by binding to a protein in the collected blood or body fluid, and a drug in the blood or body fluid.
上記の交点に記載された抗体量は、検量線により求めた抗体量の算出式に、所定の縦軸の数値における横軸の数値を代入して得られた基本抗体量と、該基本抗体量との比に基づいて算出される比抗体量とであること
を特徴とする請求項1に記載の検査キット。
The quantitative conversion sheet is a matrix sheet consisting of a vertical axis on which the amount of blood or body fluid read on scale A is written, and a horizontal axis on which the coloration is written on scale B, and the antibody amount is written at the intersection of the two.
The antibody amount indicated at the intersection above is the basic antibody amount obtained by substituting the horizontal axis value at the specified vertical axis value into the calculation formula for the antibody amount obtained from the calibration curve, and the specific antibody amount calculated based on the ratio of the basic antibody amount to the above.
The test kit described in claim 1, characterized by:
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