JP2023552829A - 免疫細胞機能を調節するための変異インターロイキン－１０ポリペプチドの抗原結合分子との融合物 - Google Patents

免疫細胞機能を調節するための変異インターロイキン－１０ポリペプチドの抗原結合分子との融合物 Download PDF

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Abstract

変異インターロイキン－１０ポリペプチド、ならびに変異インターロイキン－１０ポリペプチド及び抗原結合分子を含む融合ポリペプチドが本明細書で提供される。本開示は、免疫細胞を本開示の融合ポリペプチドと接触させることによって免疫細胞機能を調節する方法を提供する。さらに、本開示はまた、本開示の融合分子をコードするポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞も提供する。本開示は、融合分子を生成するための方法、それを含む医薬組成物、及びその使用をさらに提供する。

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年１２月９日に出願された米国仮特許出願第６３／１２３，３８７号、及び２０２１年４月１日に出願された第６３／１６９，６０４号の優先権の利益を主張するものであり、これらそれぞれの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの配列表の提出
ＡＳＣＩＩテキストファイルでの以下の提出物の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる；コンピュータ可読形式（ＣＲＦ）の配列表（ファイル名：１８２８４２０００５４０ＳＥＱＬＩＳＴ．ＴＸＴ、記録日：２０２１年１２月８日、サイズ：５６５，５６０バイト）。
分野
本開示は、変異インターロイキン－１０ポリペプチド、ならびに変異インターロイキン－１０ポリペプチド及び抗原結合分子を含む融合ポリペプチドを提供する。本開示は、免疫細胞を本開示の融合ポリペプチドと接触させることによって免疫細胞機能を調節する方法を提供する。さらに、本開示はまた、本開示の融合分子をコードするポリヌクレオチド、ならびにそのようなポリヌクレオチドを含むベクター及び宿主細胞も提供する。本開示は、融合分子を生成するための方法、それを含む医薬組成物、及びその使用をさらに提供する。
インターロイキン－１０（ＩＬ－１０）は、単球、マクロファージ、樹状細胞、Ｂ細胞、Ｔ細胞、ＮＫ細胞などを含む多くの免疫細胞サブセットを調節するサイトカインである。ＩＬ－１０は、ヘテロ二量体受容体（ＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１０Ｒ）と結合し、この受容体は、ＩＬ－１０に対して特異的で、主に免疫細胞上に発現するＩＬ－１０ＲＡと、他のサイトカインと共有され、さらに広く発現するＩＬ－１０ＲＢとの２つのサブユニットからなる。ＩＬ－１０のその受容体との結合は、受容体関連ヤヌスキナーゼＪＡＫ１、及びチロシンキナーゼＴＹＫ２のリン酸化を誘導し、これがリンパ球において多くの遺伝子の転写を制御するＳＴＡＴ３転写因子（ｐＳＴＡＴ３）のリン酸化を促進する。
ＩＬ－１０シグナル伝達は、標的細胞に応じて多様な効果を誘導する（Ｇｅｇｉｎａｔ ｅｔ ａｌ，ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２０１６ Ａｕｇ；３０：８７－９３で概説される）。マクロファージ及び樹状細胞などの抗原提示細胞との結合が炎症性サイトカインの産生及びＴ細胞を刺激する能力を阻害するため、ＩＬ－１０は免疫抑制性サイトカインであると考えられる。例えば、ＩＬ－１０／ＩＬ－１０Ｒ経路に遺伝子欠陥を有するマウス及び患者は、自然に大腸炎を発症し、このことは、腸の免疫細胞の恒常性を促進し、自己免疫を妨げるためにＩＬ－１０が必要とされることを示唆する。しかしながら、ＩＬ－１０は、Ｂ細胞に対する成長分化因子としての作用により全身性エリテマトーデスなどの自己免疫疾患の発症にも関わっている。さらに、ＩＬ－１０は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞機能を促進することができ、このＩＬ－１０の免疫刺激活性（Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．２０１５ Ｄｅｃ；３５（１２）：９４８－５５；Ｎｉｚｚｏｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６ Ｊｕｌ；４６（７）：１６２２－３２）は、マウスにおける強力な抗腫瘍免疫応答を誘発する能力（Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｄｅｃ １３；２０（６）：７８１－９６；Ｅｍｍｅｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊｕｌ １５；７２（１４）：３５７０－８１）、及びがん患者におけるＣＤ８＋ Ｔ細胞を活性化する能力（Ｎａｉｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１８ Ｎｏｖ １２；３４（５）：７７５－７９１ ）に関連している可能性がある。
免疫応答を調節する際の多面的作用から、ＩＬ－１０サイトカインは、自己免疫及びがんの両方の治療薬として使用されてきた。しかしながら、前臨床モデルにおける強力な免疫抑制効果にもかかわらず、クローン病、乾癬、及び関節リウマチにおけるＩＬ－１０投与の臨床的有用性は限定されたものであった（Ｏ’Ｇａｒｒａ Ａ，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｒｅｖ．２００８；２２３：１１４－１３１）。同様に、ＩＬ－１０の治療効果は複数の進行固形腫瘍にわたり評価され、臨床活性は示されたが、臨床的有用性はあまり大きくなく、最も有望であったのも少数の適応症であった（Ａｕｔｉｏ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ．２０１９ Ｆｅｂ ２１；２１（２）：１９）。
ＩＬ－１０のこの一見矛盾したように見える効果は、所与の状況で免疫応答を抑制も活性化もすることができる免疫細胞上のその受容体の存在によって説明可能である。例えば、がんの状況において、マクロファージ、樹状細胞、及び制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ）のＩＬ－１０による刺激は免疫抑制をもたらし、ＩＬ－１０によるＣＤ８＋ Ｔ細胞の刺激は免疫活性化をもたらすであろう。これは、ＩＬ－１０活性を特定の免疫細胞サブセットに制限することが、がんの治療効果を高めるのに有益であろうことを示唆する。さらに、ＩＬ－１０療法は、特定の患者に輸血が必要とされ得る重症貧血及び高フェリチン血症と関連づけられた（Ｔｉｌｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２ Ａｕｇ １５；１６９（４）：２２０４－９）。ＩＬ－１０は、活性化単核球細胞においてフェリチン翻訳を直接刺激することが示され（Ｔｉｌｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２ Ａｕｇ １５；１６９（４）：２２０４－９）、これは赤血球形成に必要とされる鉄の隔離につながる可能性がある。単球におけるフェリチンの誘導に加えて、ＩＬ－１０は、赤血球形成を直接抑制する可能性もあるであろう（Ｏｅｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ．１９９９ Ｆｅｂ；２７（２）：２１７－２３；Ｍｕｌｌａｒｋｙ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００７ Ｍａｙ；７５（５）：２６３０－３）。
ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、多くの前臨床がんモデルにおいてＩＬ－１０を含む免疫治療剤の効果を媒介することが示されてきており（Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｄｅｃ １３；２０（６）：７８１－９６；Ｅｍｍｅｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊｕｌ １５；７２（１４）：３５７０－８１）、それらは患者における免疫療法に対する応答とも相関している（Ｓａｄｅ－Ｆｅｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ．２０１８ Ｎｏｖ １；１７５（４）：９９８－１０１３）。ＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＣＤ８アルファ（ＣＤ８ａ）ホモ二量体及びＣＤ８アルファ・ＣＤ８ベータ（ＣＤ８ｂ）ヘテロ二量体として細胞表面上に見られるＩ型膜貫通糖タンパク質であるＣＤ８を発現する。アルファベータＣＤ８＋ Ｔ細胞は、ＣＤ８ａａ及びＣＤ８ａｂ二量体の両方を発現することができ、同時に、低いレベルではあるが、ＮＫ、ＮＫ Ｔ、及び上皮内Ｔγδ細胞などの一部の自然リンパ球上にもＣＤ８ａａホモ二量体が発現する場合がある（Ｂａｕｍｅ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０ Ｄｅｃ；１３１（２）：３５２－６５；Ｋａｄｉｖａｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１６；１９７：４５８４－４５９２；Ｍａｙａｓｓｉ ＆ Ｊａｂｒｉ，Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１，１２８１－１２８９，２０１８）。ＣＤ８二量体は、標的細胞上の主要組織適合性（ＭＨＣ）クラスＩ分子と相互作用し、この相互作用がＣＤ８＋ Ｔ細胞活性化の間、ＴＣＲをＭＨＣとしっかり結合し続ける。ＣＤ８ａの細胞質側末端は、Ｔ細胞活性化中にＴＣＲの下流でシグナル伝達を開始するＴ細胞キナーゼ（Ｌｃｋ）に対する結合部位を含む一方、ＣＤ８ｂは、ＭＨＣクラスＩと結合するＣＤ８のアビディティーを高め、ＣＤ８／ＭＨＣ／ＴＣＲ相互作用の特異性に影響を与えると考えられる（Ｂｏｓｓｅｌｕｔ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０００ Ａｐｒ；１２（４）：４０９－１８）。
前臨床がんモデル及びがん患者において効果と関連づけられたＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む、Ｔ細胞における活性を増大させ、単球、マクロファージ、樹状細胞、及びＴｒｅｇを含む、ＩＬ－１０の毒性及び望ましくない影響と関連づけられた他の細胞における活性を低減することによってＩＬ－１０の毒性を低下させ、効果を向上させる必要がある。
特許出願、特許公報、及びＵｎｉＰｒｏｔＫＢ／Ｓｗｉｓｓ－Ｐｒｏｔ受託番号を含む、本明細書において引用される全ての参考文献は、各個々の参考文献が、参照によって組み込まれることを具体的かつ個々に示されているかのように、それらの全体が参照により本明細書に組み込まれる。
Ｇｅｇｉｎａｔ ｅｔ ａｌ，ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｇｒｏｗｔｈ Ｆａｃｔｏｒ Ｒｅｖ．２０１６ Ａｕｇ；３０：８７－９３ Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ Ｃｙｔｏｋｉｎｅ Ｒｅｓ．２０１５ Ｄｅｃ；３５（１２）：９４８－５５ Ｎｉｚｚｏｌｉ ｅｔ ａｌ，Ｅｕｒ Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０１６ Ｊｕｌ；４６（７）：１６２２－３２ Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｄｅｃ １３；２０（６）：７８１－９６ Ｅｍｍｅｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊｕｌ １５；７２（１４）：３５７０－８１ Ｎａｉｎｇ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１８ Ｎｏｖ １２；３４（５）：７７５－７９１ Ａｕｔｉｏ ｅｔ ａｌ，Ｃｕｒｒ Ｏｎｃｏｌ Ｒｅｐ．２０１９ Ｆｅｂ ２１；２１（２）：１９ Ｔｉｌｇ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００２ Ａｕｇ １５；１６９（４）：２２０４－９ Ｏｅｈｌｅｒ ｅｔ ａｌ，Ｅｘｐ Ｈｅｍａｔｏｌ．１９９９ Ｆｅｂ；２７（２）：２１７－２３ Ｍｕｌｌａｒｋｙ ｅｔ ａｌ，Ｉｎｆｅｃｔ Ｉｍｍｕｎ．２００７ Ｍａｙ；７５（５）：２６３０－３ Ｓａｄｅ－Ｆｅｌｄｍａｎ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ．２０１８ Ｎｏｖ １；１７５（４）：９９８－１０１３ Ｂａｕｍｅ ｅｔ ａｌ，Ｃｅｌｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０ Ｄｅｃ；１３１（２）：３５２－６５ Ｋａｄｉｖａｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２０１６；１９７：４５８４－４５９２ Ｍａｙａｓｓｉ ＆ Ｊａｂｒｉ，Ｍｕｃｏｓａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １１，１２８１－１２８９，２０１８ Ｂｏｓｓｅｌｕｔ ｅｔ ａｌ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．２０００ Ａｐｒ；１２（４）：４０９－１８
ＩＬ－１０ＲＢに対する結合親和性を増大させ、ＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性を低下させ、及び／またはヘパリンとの結合を低減する置換を含む変異ＩＬ－１０ポリペプチドが本明細書において提供される。そのような変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む融合タンパク質が本明細書においてさらに提供される。本開示は、変異ＩＬ－１０ポリペプチドを目的の細胞種に特異的に導く能力など、特定の融合タンパク質に関連する著しい利点を実証する。例えば、特定の融合タンパク質は、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化することが本明細書において示される。
いくつかの態様において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドが本明細書で提供され、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示す。ＩＬ－１０ＲＡに対する親和性の低下は、野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの配列にアミノ酸置換を導入して、図２及び図３に示されるとおりの本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドを生成することによって得られる。本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ａに示される野生型ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８の群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態において、本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して５０％以上低下した、１５０％以上低下した、２分の１以下に低下した、または１０分の１以下に低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号８７～８９、１８８～２０１、及び３１０～３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、表４Ａ、表８、表１１、または表１３に示されるアミノ酸配列を含む。
他の実施形態において、本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、ｉ）図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示し、ｉｉ）図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１の群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有してもよい。さらに別の実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して１５０％以上増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、Ｎ１８Ｙ、Ｄ２８Ｑ、Ｄ２８Ｒ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｙ、Ｋ９９Ｎ、Ｌ１０３Ｎ、及びＬ１０３Ｑからなる群から選択される。
いくつかの態様において、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示し、例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、または図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有する変異ＩＬ－１０ポリペプチドが本明細書において提供される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に従う野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を含み、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、Ｎ１８Ｙ、Ｄ２８Ｑ、Ｄ２８Ｒ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｙ、Ｋ９９Ｎ、Ｌ１０３Ｎ、及びＬ１０３Ｑからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して５０％以上、１００％以上、または１５０％以上増加した結合親和性を示し、例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含むか、または図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０のアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示し、例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、または図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に従う野生型ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換をさらに含み、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むか、または図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して５０％以上低下した、１００％以上低下した、１５０％以上低下した、２分の１以下に低下した、または１０分の１以下に低下した結合親和性を示す。
いくつかの態様において、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％アミノ酸、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する、変異ＩＬ－１０ポリペプチドが本明細書において提供され、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、Ｎ１８Ｙ、Ｄ２８Ｑ、Ｄ２８Ｒ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｙ、Ｋ９９Ｎ、Ｌ１０３Ｎ、及びＬ１０３Ｑからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して５０％以上、１００％以上、または１５０％以上増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含み、１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含み、１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して５０％以上低下した、１００％以上低下した、１５０％以上低下した、２分の１以下に低下した、または１０分の１以下に低下した結合親和性を示す。本明細書に記載される実施形態のいずれかによるいくつかの実施形態において、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含む、例えば、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する増加した結合親和性をもたらす）１つ以上のアミノ酸置換を含む変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、１、２、３、４、または５つ以上のアミノ酸置換を含む。本明細書に記載される実施形態のいずれかによるいくつかの実施形態において、（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む、例えば、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する低下した結合親和性をもたらす）１つ以上のアミノ酸置換を含む変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、１、２、３、４、または５つ以上のアミノ酸置換を含む。本明細書に記載される実施形態のいずれかによるいくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する増加した結合親和性と関連する１つ以上のアミノ酸置換（例えば、１または２つのアミノ酸置換）及びＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する低下した結合親和性と関連する１つ以上のアミノ酸置換（例えば、１または２つのアミノ酸置換）を含む。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｒ２４にアミノ酸置換、例えば、Ｒ２４Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｒ２７にアミノ酸置換、例えば、Ｒ２７Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｋ３４にアミノ酸置換、例えば、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、またはＫ３４Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｑ３８にアミノ酸置換、例えば、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、またはＱ３８Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｄ４４にアミノ酸置換、例えば、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、またはＤ４４Ｑを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｉ８７にアミノ酸置換、例えば、Ｉ８７Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｋ１３８にアミノ酸置換、例えば、Ｋ１３８Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｅ１４２にアミノ酸置換、例えば、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、またはＥ１４２Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｄ１４４にアミノ酸置換、例えば、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、またはＤ１４４Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｎ１４８にアミノ酸置換、例えば、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、またはＮ１４８Ｆを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｅ１５１にアミノ酸置換、例えば、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、またはＥ１５１Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｎ１８にアミノ酸置換、例えば、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、またはＮ１８Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｄ２８にアミノ酸置換、例えば、Ｄ２８ＱまたはＤ２８Ｒを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｎ９２にアミノ酸置換、例えば、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、またはＮ９２Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｋ９９にアミノ酸置換、例えば、Ｋ９９Ｎを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対する位置Ｌ１０３にアミノ酸置換、例えば、Ｌ１０３ＮまたはＬ１０３Ｑを含む。
いくつかの態様において、配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％アミノ酸、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を有する、変異ＩＬ－１０ポリペプチドが本明細書において提供され、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、Ｅ１５１Ａ及びＫ１３８Ａ、Ｅ１５１Ａ及びＤ１４４Ａ、Ｅ１５１Ａ及びＲ２７Ａ、Ｑ３８Ａ及びＲ２７Ａ、Ｒ２４Ａ及びＱ３８Ａ、Ｒ２４Ａ及びＥ１５１Ａ、Ｑ３８Ａ及びＥ１４２Ａ、Ｅ１３８Ａ及びＥ１４２Ａ、Ｒ２７Ａ及びＫ１３８Ａ、Ｒ２４Ａ及びＫ１３８Ａ、ならびにＲ２４Ａ及びＲ２７Ａからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、（例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号２のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、５０％以上低下した、１００％以上低下した、１５０％以上低下した、２分の１以下に低下した、または１０分の１以下に低下した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含み、１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される位置（複数可）にある。いくつかの実施形態において、１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、Ｎ１８Ｙ、Ｄ２８Ｑ、Ｄ２８Ｒ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｙ、Ｋ９９Ｎ、Ｌ１０３Ｎ、及びＬ１０３Ｑからなる群から選択される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号３のアミノ酸配列 を含む、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して）例えば、配列番号３のアミノ酸配列を含む、ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して５０％以上、１００％以上、または１５０％以上増加した結合親和性を示す。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号８７～８９、１８８～２０１、及び３１０～３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１のアミノ酸配列に対して位置Ｒ１０７にアミノ酸置換をさらに含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に従うナンバリングで、Ｒ１０７Ａ変異をさらに含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号４２２～４２８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表１１に示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号８７～８９、１８８～２０１、３１０～３１８、及び４２２～４２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、二量体、例えば、ホモ二量体またはヘテロ二量体である。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、例えば、Ｎ１１６とＫ１１７の間に単量体としてのフォールディング及び発現を可能にするアミノ酸またはペプチド挿入を含む、単量体である（例えば、図１Ｄに示されるとおり）。いくつかの実施形態において、挿入は、１～１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、挿入は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸長である。特定の実施形態において、挿入は、６アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、残基Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、またはＡ１２０の直後に１つのアミノ酸、または１から１５個の間のアミノ酸のペプチド挿入を有する配列番号１のアミノ酸配列を含む。挿入の例としては、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（配列番号８０）、ＧＧＧＳＧ（配列番号８１）、ＧＧＧＧＧ（配列番号８２）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号８３）、及びＧＧＧＳＧＧ（配列番号８４）を挙げることができるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１８７のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を有し、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８の群から選択される（またはＲ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１の群から選択される）アミノ酸置換を有し、アミノ酸のナンバリングは６リンカー挿入を含まない野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの対応するアミノ酸を指す。いくつかの実施形態において、本開示の変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を有し、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１の群から選択される（またはＮ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される）アミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで位置Ｎ９２にアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ａ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｍ、Ｎ９２Ｙ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｈ、またはＮ９２Ｑを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、またはＮ９２Ｙを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌのうちの１つ以上をさらに含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌをさらに含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１８８の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含み、配列番号１に基づくナンバリングで、位置（複数可）Ｒ２４、Ｒ２７、Ｑ３８、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、及び／またはＥ１５１に１つ以上のさらなるアミノ酸置換をさらに含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号８７～８９、１８８～２０１、３１０～３１８、及び４２２～４２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。
本明細書で開示される変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ＩＬ－１０Ｒ複合体に対する低下した結合親和性のため、前臨床がんモデルにおいてＩＬ－１０の有益な効果に関係することが示されたＣＤ８＋ Ｔ細胞を含む、ＩＬ－１０Ｒ発現細胞を刺激する能力が低下していた（Ｍｕｍｍ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｅｌｌ．２０１１ Ｄｅｃ １３；２０（６）：７８１－９６；Ｅｍｍｅｒｉｃｈ ｅｔ ａｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．２０１２ Ｊｕｌ １５；７２（１４）：３５７０－８１）。変異ＩＬ－１０ポリペプチドをがん及び特定の感染症などの他の免疫関連疾患の処置に対してより安全で、より有効であり得る治療薬にするために、開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチド及びＣＤ８などのＣＤ８＋ Ｔ細胞上に存在する抗原に対する抗原結合分子、例えば、抗体を含む融合タンパク質が生成された。変異ＩＬ－１０ポリペプチド及び特定の抗原と結合する抗体から構成されるそのような融合タンパク質は、融合物の抗原結合分子によって認識された抗原と結合するため「標的化」融合タンパク質とも呼ばれる。これは、それらを変異ＩＬ－１０ポリペプチド及び任意の特定の抗原と結合しない対照抗体（すなわち、ＩＬ－１０ポリペプチドとのＦｃ 融合物または対照抗体融合物；Ｐｏｕｔａｈｉｄｉｓ ｅｔ ａｌ，Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ．２００７ Ｄｅｃ；２８（１２）：２６１４－２３）を含む「非標的化」融合タンパク質と区別する。
理論に縛られることを望まないが、図４Ａは、ＣＤ８＋ Ｔ細胞上の抗原と結合する抗原結合分子が、変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む開示の標的化融合タンパク質との関連で、変異ＩＬ－１０ポリペプチドによるＣＤ８＋ Ｔ細胞との結合及び／またはその刺激を増加させるためにどのように働くであろうかに関する概括的なメカニズムを示す。特定の抗原結合分子は、変異ＩＬ－１０ポリペプチドに融合されると、融合物の抗原結合分子に対する抗原を発現する細胞上でのみ変異ＩＬ－１０ポリペプチドの結合及び／または活性を実質的に増加させる能力を有し、結果として抗原非発現細胞よりも抗原発現細胞を優先的に活性化させる（図４Ａ）。標的化融合タンパク質とは異なり、同じ変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む非標的化融合タンパク質は、抗原発現細胞と優先的に結合せず、及び／またはそれを活性化しない（図４Ａ）。図４Ｂは、変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドに関する概括的なメカニズムを示す。
理論に縛られることを望まないが、標的化融合タンパク質による抗原非発現細胞に対する抗原発現細胞の活性化の違い、及び標的化融合タンパク質と非標的化融合タンパク質による抗原発現細胞の活性化の違いが治療薬としての標的化融合タンパク質の有効性に対して重要だと考えられる。毒性または効力に対する望ましくない影響と関連づけられる他の細胞よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞などの効果と関連づけられる細胞に対して選択的な融合タンパク質は、より大きな治療係数を有する可能性がある。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、単球の活性化と比較して、ＣＤ８＋ Ｔ細胞を１０倍以上の効力、または５０倍以上の効力で活性化する。いくつかの実施形態において、前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１の配列を含み、配列番号１に対して１つ以上のアミノ酸置換を有し、置換は、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８からなる群から選択される（またはＲ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される）配列番号１の位置にある。他の実施形態において、前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１からなる群から選択される（またはＮ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される）配列番号１の１つ以上の位置に１つ以上の変異を含む。
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるＩＬ－１０融合タンパク質は、単球などの抗原非発現ＩＬ－１０Ｒ＋細胞よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞などの抗原発現ＩＬ－１０Ｒ＋細胞を少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍活性化する。いくつかの実施形態では、融合タンパク質は、例えば、ＩＬ－１０変異ポリペプチド及び前記細胞上に発現する任意の抗原と結合しない対照抗体を含む融合分子と比較して、抗原発現ＩＬ－１０Ｒ＋細胞を少なくとも５０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍活性化する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１０融合タンパク質による前記細胞活性化は、前記ＩＬ－１０融合タンパク質による処置後の前記細胞におけるｐＳＴＡＴ３の発現を測定することによって判断される。
いくつかの態様において、本明細書で開示される融合タンパク質は、目的の特定の免疫細胞サブセット、例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞に対するＩＬ－１０の効果を低減することによって、ＩＬ－１０Ｒ複合体を発現する免疫細胞に対するＩＬ－１０の多面的作用を一部の効果に低減する場合もある。そのような低減は、治療薬として投与された場合、腫瘍抗原特異的なＣＤ８＋ Ｔ細胞またはウイルス抗原特異的なＣＤ８＋ Ｔ細胞を含むＴ細胞のサブセットに作用を誘導し、それにより、１）効力に寄与しない可能性のあるＴ細胞、または２）ＩＬ－１０Ｒを発現し、シンクとして毒性または作用に寄与する可能性のある全身に分布する骨髄細胞、３）効力に対して負に寄与する可能性のある樹状細胞及びＴｒｅｇなどの他の免疫細胞を免れさせることによってＩＬ－１０ポリペプチドの効力を増加させ、毒性を低下させることができる。
本明細書に記載される実施形態のいずれかによるいくつかの実施形態において、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ８＋ Ｔ細胞）は、ヒトＴ細胞である。いくつかの実施形態において、単球／他の免疫細胞は、ヒト細胞である。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド及びＴ細胞上の抗原と結合する抗原結合分子、例えば、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８ａｂ、ＣＤ８ａ、もしくはＣＤ８ａａ；またはＣＤ８ｂ及び／またはＣＤ８ａｂ）、ＣＤ４、またはＰＤ－１を含む。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ８ポリペプチド、抗原、または二量体（例えば、ＣＤ８ａ、ＣＤ８ｂ、ＣＤ８ａａ、及び／またはＣＤ８ａｂ）は、ヒト ＣＤ８ポリペプチド、抗原、または二量体である。いくつかの実施形態において、本開示のＣＤ４ポリペプチド、抗原、または二量体は、ヒトＣＤ４ポリペプチドである。いくつかの実施形態において、本開示のＰＤ－１ポリペプチド、抗原、または二量体は、ヒトＰＤ－１ポリペプチドである。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含む抗原結合分子を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、Ｘ１がＳ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ２がＹ、Ｌ、Ｈ、またはＦである、Ｘ１Ｘ２ＡＩＳのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２５９）と、Ｘ１がＧまたはＨであり、Ｘ２がＩまたはＦであり、Ｘ３がＩ、Ｎ、またはＭであり、Ｘ４がＧ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ５がＡ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ６がＡ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ７がＴ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、Ｑ、またはＡであり、Ｘ８がＡまたはＴであり、Ｘ９がＮまたはＫであり、Ｘ１０がＡまたはＮであり、Ｘ１１がＱまたはＴである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＸ１１Ｇのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６０）と、Ｘ１がＤまたはＡであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ３がＡ、Ｌ、Ｐ、またはＹであり、Ｘ４がＩまたはＬであり、Ｘ５がＲ、Ａ、Ｑ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＤであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、Ａ、またはＳである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＬＦＸ６Ｘ７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２６１）とを含み、ＶＬドメインは、Ｘ１がＲまたはＧであり、Ｘ２がＡまたはＴであり、Ｘ３がＱまたはＥであり、Ｘ４がＥ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ５がＹ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＶである、Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５ＧＸ６ＬＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（配列番号２６２）と、Ｘ１がＡまたはＳであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｑ、またはＤであり、Ｘ３がＮ、Ｒ、Ａ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ４がＱまたはＡであり、Ｘ５がＳまたはＤである、ＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２（配列番号２６３）と、Ｘ１がＳ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ａ、またはＥであり、Ｘ２がＴ、Ｉ、またはＳであり、Ｘ３がＹ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ４がＤ、Ｇ、Ｔ、Ｅ、Ｑ、Ａ、またはＹであり、Ｘ５がＡ、Ｔ、Ｒ、Ｓ、Ｋ、またはＹである、ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＷＴのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３（配列番号２６４）とを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、Ｘ１がＳ、Ｄ、Ｅ、Ａ、またはＱであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、またはＴである、Ｘ１ＹＸ２ＭＳのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２６８）と、Ｘ１がＴ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、またはＡであり、Ｘ２がＹ、Ｗ、Ｆ、またはＨであり、Ｘ３がＡ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、またはＴであり、Ｘ４がＧまたはＥであり、Ｘ５がＳまたはＩであり、Ｘ６がＡまたはＧである、ＤＩＸ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＴＸ６ＹＡＤＳＶＫＧのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６９）と、Ｘ１がＳまたはＡであり、Ｘ２がＮ、Ｈ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、Ｙ、またはＲであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ４がＡ、Ｖ、Ｒ、Ｅ、またはＳであり、Ｘ５がＤまたはＳであり、Ｘ６がＤ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７がＬ、Ｆ、またはＭであり、Ｘ８がＩ、Ｙ、またはＶである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ４ＷＸ５Ｘ６ＡＸ７ＤＸ８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２７０）とを含み、ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、ＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含む
ＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、Ｘ１がＧ、Ｙ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｎ、またはＨであり、Ｘ３がＳ、Ｔ、Ｒ、Ｈ、Ｙ、Ｇ、またはＰであり、Ｘ４がＳ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ５がＹ、Ｌ、Ｈ、またはＦである、ＧＸ１Ｘ２ＦＸ３Ｘ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２６５）と、Ｘ１がＩ、Ｎ、またはＭであり、Ｘ２がＧ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ４がＡ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ５がＴ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、Ｑ、またはＡである、Ｘ１ＰＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６６）と、Ｘ１がＤまたはＡであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ３がＡ、Ｌ、Ｐ、またはＹであり、Ｘ４がＩまたはＬであり、Ｘ５がＲ、Ａ、Ｑ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＤであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、Ａ、またはＳである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＬＦＸ６Ｘ７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２６７）とを含み、ＶＬドメインは、Ｘ１がＲまたはＧであり、Ｘ２がＡまたはＴであり、Ｘ３がＱまたはＥであり、Ｘ４がＥ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ５がＹまたはＳであり、Ｘ６がＡまたはＶである、Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５ＧＸ６ＬＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（配列番号２６２）と、Ｘ１がＡまたはＳであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｑ、またはＤであり、Ｘ３がＮ、Ｒ、Ａ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ４がＱまたはＡであり、Ｘ５がＳまたはＤである、ＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２（配列番号２６３）と、Ｘ１がＳ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ａ、またはＥであり、Ｘ２がＴ、Ｉ、またはＳであり、Ｘ３がＹ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ４がＤ、Ｇ、Ｔ、Ｅ、Ｑ、Ａ、またはＹであり、Ｘ５がＡ、Ｔ、Ｒ、Ｓ、Ｋ、またはＹである、ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＷＴを含むアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３（配列番号２６４）とを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、Ｘ１がＳ、Ｄ、Ｅ、Ｑ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ２がＳ、Ｄ、Ｅ、Ａ、またはＱである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｙのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２７１）と、Ｘ１がＴ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、ＲまたはＡであり、Ｘ２がＹ、Ｗ、Ｆ、またはＨであり、Ｘ３がＡ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、またはＴであり、Ｘ４がＧまたはＥであり、Ｘ５がＳまたはＩである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２７２）と、Ｘ１がＳまたはＡであり、Ｘ２がＮ、Ｈ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、Ｙ、またはＲであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ４がＡ、Ｖ、Ｒ、Ｅ、またはＳであり、Ｘ５がＤまたはＳであり、Ｘ６がＤ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７がＬ、Ｆ、またはＭであり、Ｘ８がＩ、Ｙ、またはＶである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ４ＷＸ５Ｘ６ＡＸ７ＤＸ８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２７３）とを含み、ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、ＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６２の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６３の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６４の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６５の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６６の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６７の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６８の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号６９の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号７０の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号７１の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号７０の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号７１の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号７２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号７３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号７２の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号７３の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４５の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４６の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５１の
配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５１の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５３の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５４の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４７の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２４８の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４９の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５５の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５６の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５７の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５８の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号５９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号５８の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号５９の配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１８５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１８６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号１８５の配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号１８６の配列を含む。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、（１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む；（２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む；（３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む；（４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む；（５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む；（６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む；（７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む；（８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む；（９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む；（１０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む；（１１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む；（１２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む；（１３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む；（１４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む；（１５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む；（１６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む；（１７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む；（１８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む；（１９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む；（２０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む；（２１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む；（２２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む；（２３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む；または（２４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの二量体を含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方は、抗原結合分子に融合される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、それぞれが抗原結合部位を含む、２つのポリペプチドを含み、変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方は、ポリペプチドのそれぞれに融合される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、抗原結合分子に融合される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、直接またはリンカーを介して抗原結合分子に融合される。
いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む、２つの抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む２つの抗体軽鎖ポリペプチドとを含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、ＶＨ／ＶＬは、抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインの第１のＣ末端に融合され、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインの第２のＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、１つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合される。
いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］、
に従う構造を含む第１の抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］、
に従う構造を含む抗体軽鎖ポリペプチドと、式［ＩＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］、
に従う構造を含む第２の抗体重鎖ポリペプチドとを含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、ＶＨ／ＶＬは、抗原結合部位を形成する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端または第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端のうちの一方に融合される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、直接またはリンカーを介して第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合され、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、直接またはリンカーを介して第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合される。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、１つの変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端または第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端のうちの一方に融合される。
いくつかの実施形態において、抗体重鎖ポリペプチドの一方または両方は、ＥＵインデックスによるナンバリングで、以下のアミノ酸置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含む。いくつかの実施形態において、ＥＵインデックスによるナンバリングで、２つのＦｃドメインの第１は、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、２つのＦｃドメインの第２は、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７４）、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７５）、（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７６）、Ｓ（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８６）、Ｓ（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８７）、またはＳ（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８８）を含み、ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり、ｎ＝０、１、２または３である。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９）、ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７７）、またはＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号７８）を含む。いくつかの実施形態において、抗体重鎖ポリペプチドは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域を含む。
上記の実施形態のいずれか１つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードする１つ以上の単離ポリヌクレオチドが本明細書でさらに提供される。上記の実施形態のいずれか１つの１つ以上のポリヌクレオチドを含む１つ以上のベクターが本明細書でさらに提供される。上記の実施形態のいずれか１つの１つ以上のポリヌクレオチドまたはベクターを含む宿主細胞（例えば、単離及び／または組み換え宿主細胞）が本明細書でさらに提供される。変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質を生成する方法であって、上記の実施形態のいずれか１つの宿主細胞をポリペプチドまたは融合タンパク質の生成に適した条件下で培養することを含む、方法が本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態において、方法は、ポリペプチドまたは融合タンパク質を宿主細胞から回収することをさらに含む。
上記の実施形態のいずれか１つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質及び薬学的に許容される担体を含む医薬組成物が本明細書でさらに提供される。
がんを処置する方法であって、がんを有する個体に有効量の上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書でさらに提供される。医薬として使用するための上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物が本明細書でさらに提供される。がんの処置を必要とする個体においてがんを処置する方法に使用するための上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物が本明細書でさらに提供される。がんの処置を必要とする個体においてがんを処置するための医薬を製造する際に使用するための、上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物が本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態において、方法は、個体にＴ細胞療法、がんワクチン、化学療法剤、ＩＬ－２ ポリペプチド、または免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）を施すことをさらに含む。いくつかの実施形態において、ＩＣＩは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ－４の阻害剤である。いくつかの実施形態において、Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ベースのＴ細胞療法、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）ベースの療法、または形質導入ＴＣＲを有するＴ細胞を用いた療法を含む。
感染症（例えば、慢性及び／またはウイルス感染症）を処置する方法であって、それを必要とする個体に有効量の上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物を投与することを含む、方法が本明細書でさらに提供される。医薬として使用するための上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物が本明細書でさらに提供される。感染症の処置を必要とする個体において感染症（例えば、慢性及び／またはウイルス感染症）を処置する方法に使用するための上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物が本明細書でさらに提供される。感染症の処置を必要とする個体において感染症を処置するための医薬を製造する際に使用するための上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物が本明細書でさらに提供される。
Ｔ細胞を（例えば、エクスビボで）増殖させる方法であって、１つ以上のＴ細胞を（例えば、エクスビボで）有効量の上記の実施形態のいずれか１つによる変異ＩＬ－１０ポリペプチド、融合タンパク質、またはその組成物と接触させることを含む、方法が本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態において、１つ以上のＴ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。
本明細書に記載の種々の実施形態の特性のうちの１つ、一部、または全てを組み合わせて、本開示の他の実施形態が形成され得るということが理解されるものとする。本開示のこれらの及び他の態様は、当業者に明らかになるであろう。本開示のこれらの及び他の実施形態は、後続の発明を実施するための形態によってさらに説明される。
成熟ＩＬ－１０（配列番号１）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す。 ＩＬ－１０ＲＡ（配列番号２）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す。 ＩＬ－１０ＲＢ（配列番号３）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す。 成熟単量体ＩＬ－１０（配列番号１８７）のポリペプチドのアミノ酸配列を示す。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（配列番号１）のアミノ酸配列を示す。「Ｘ」は、本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドを生成するために野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において別のアミノ酸で置換されるアミノ酸を指す。 成熟単量体ＩＬ－１０（配列番号１８７）のアミノ酸配列を示す。「Ｘ」は、本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドを生成するために野生型ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において別のアミノ酸で置換されるアミノ酸を指す。 野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチド（配列番号１）のアミノ酸配列を示す。白枠は、ＩＬ－１０ＲＡに対するＩＬ－１０の親和性を改変するために置換された残基を示し、グレーの影付き枠は、ＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０の親和性を改変するために置換された残基を示す。各位置に対して野生型残基の代わりに置換されたアミノ酸を示す。 成熟単量体ＩＬ－１０（配列番号１８７）のアミノ酸配列を示す。白枠は、ＩＬ－１０ＲＡに対するＩＬ－１０の親和性を改変するために置換された残基を示し、グレーの影付き枠は、ＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０の親和性を改変するために置換された残基を示す。各位置に対して野生型残基の代わりに置換されたアミノ酸を示す。 変異ＩＬ－１０ポリペプチドのＣＤ８抗原結合分子との標的化融合物及び変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む非標的化融合物がＣＤ８抗原を発現する細胞またはＣＤ８抗原を発現しない細胞を刺激するためにどのように働くかに関する概括的なメカニズムを示す。 変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのＣＤ８抗原結合分子との標的化融合物及び変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドを含む非標的化融合物がＣＤ８抗原を発現する細胞またはＣＤ８抗原を発現しない細胞を刺激するためにどのように働くかに関する概括的なメカニズムを示す。 ヒトＰＢＭＣ（図５Ａ）及びヒト全血（図５Ｂ）における野生型ＩＬ－１０二量体によるＳＴＡＴ３の活性化を示す。ＳＴＡＴ３は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞（黒四角）及び単球（黒丸）に関して示される。ＳＴＡＴ３活性化は、フローサイトメトリーによって測定した。ヒトＰＢＭＣを使用したＣＤ８ Ｔ細胞及び単球の両方におけるＳＴＡＴ３活性化（ＣＤ１４＋ＣＤ３－としてゲート）は、全血を使用したものと非常に類似していた。単球は、ＣＤ８＋ Ｔ細胞よりもＩＬ－１０に対して感受性が高いことがわかった。 いくつかの実施形態による８つの異なる融合タンパク質形式（形式Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、及びＨ）を示す。 野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びマウスＣＤ８を標的とする対照抗体を含む形式Ａの融合タンパク質ｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（ｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ、図７Ａ）または野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びヒトＣＤ８を標的とする抗体を含む形式Ａの融合タンパク質ｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（図７Ｂ）によるヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞（黒四角）及び単球（黒丸）におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。抗マウスＣＤ８抗体、ｘｍＣＤ８ａ及び抗ヒトＣＤ８抗体、ｘｈＣＤ８ａは、以前に公開された（それぞれ、２．４３クローン及びＯＫＴ８クローン）。抗マウスＣＤ８抗体（ｘｍＣＤ８ａ）は、ヒトＣＤ８Ｔ細胞と結合せず、非結合対照の役割を果たす。ヒトＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化は、フローサイトメトリーによって測定した。ヒトＣＤ８と特異的に結合する抗体を含む形式ＡのＩＬ－１０融合タンパク質ｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化したが、対照抗体を含む形式ＡのＩＬ－１０融合タンパク質であるｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球を優先的に活性化した。 野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びｘｍＣＤ８ａ抗体を含む形式Ｃの融合タンパク質ｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（図８Ａ）、または野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びｘｈＣＤ８ａ抗体を含む形式ＣのｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（図８Ｂ）によるヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞（黒四角）及び単球（黒丸）におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。高濃度ではＣＤ８＋ Ｔ細胞においてＳＴＡＴ３を完全には活性化しなかったため、低濃度（最大０．０１ｎＭ）を除いて、形式Ｃは、ヒトＣＤ８と結合する抗体を含むＩＬ－１０融合タンパク質に最適ではなかった（図８Ｂ） 野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びｘｍＣＤ８ａ抗体を含む形式Ｄの融合タンパク質ｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（図９Ａ）、または野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びｘｈＣＤ８ａ抗体を含む形式ＤのｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（図９Ｂ）によるヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞（黒四角）及び単球（黒丸）におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。ヒトＣＤ８と特異的に結合する抗体を含む形式ＤのＩＬ－１０融合タンパク質ｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化したが、対照抗体を含む形式ＤのＩＬ－１０融合タンパク質であるｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球を優先的に活性化した。 様々な融合タンパク質によるヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞（黒四角）、単球（黒丸）、及びＣＤ４＋ Ｔ細胞（黒三角）におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１０Ａは、成熟単量体ＩＬ－１０ポリペプチド（配列番号１８７）及びｘｈＣＤ８ｂ抗体を含む形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏによるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１０Ｂは、ＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する単量体ＩＬ－１０ポリペプチド及びｘｈＣＤ８ｂ抗体を含む形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈによるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１０Ｃは、ＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるための別のアミノ酸置換を有する単量体ＩＬ－１０ポリペプチド及びｘｈＣＤ８ｂ抗体を含む形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２によるＳＴＡＴ３活性化を示す。ヒトＣＤ８に対する抗体を含む野生型単量体ＩＬ－１０融合タンパク質は、１ｎＭ未満の濃度で単球及びＣＤ４ Ｔ細胞よりもＣＤ８ Ｔ細胞を優先的に活性化したが、活性化の程度が最適ではなかった。ヒトＣＤ８に対する抗体を含むＩＬ－１０ＲＢ親和性が増強された単量体ＩＬ－１０融合タンパク質は、単球及びＣＤ４ Ｔ細胞よりもＣＤ８ Ｔ細胞を優先的かつ効果的に活性化した。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体及びＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質（ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＃）によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１１Ａは、ヒトＰＢＭＣにおける選択されたセットの変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体及びＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質（ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＃）によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１１Ｂは、ヒトＰＢＭＣにおける選択されたセットの変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体及びＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質（ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＃）によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１１Ｃは、ヒトＰＢＭＣにおけるさらなるセットの変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体及びＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質（ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＃）によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１１Ｄは、ヒトＰＢＭＣにおけるさらなるセットの変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体及びＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質（ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＃）によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１１Ｅは、全血における３セットの変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体及びＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質（ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＃）によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１１Ｆは、全血における３セットの変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ａは、ヒトＰＢＭＣにおける５つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｂは、ヒトＰＢＭＣにおける５つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｃは、ヒトＰＢＭＣにおける別の５つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｄは、ヒトＰＢＭＣにおける別の５つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｅは、ヒトＰＢＭＣにおける５つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｆは、ヒトＰＢＭＣにおける５つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｇは、全血における６つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 ｘｈＣＤ８ｂ抗体ならびにＩＬ－１０ＲＢ結合親和性を増加させるため、及びＩＬ－１０ＲＡ結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換を有する様々なＩＬ－１０ポリペプチドの形式Ｆの融合タンパク質によるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｈは、全血における６つの選択された変異タンパク質に関するＣＤ８＋ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。 それぞれ、ｘｈＣＤ８ｂ及びＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２またはＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２＿ｍ１１７のいずれかの融合タンパク質によるＣＤ８ Ｔ細胞及び単球のＳＴＡＴ３活性化を示す。これらのＳＴＡＴ３活性化データは、ヒト全血において測定されている。
定義
本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、別途内容が明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。したがって、例えば、「分子」への言及は、２つ以上のそのような分子の組み合わせなどを任意に含む。
本開示の態様及び実施形態は、態様及び実施形態「を含む」、「からなる」、及び「から本質的になる」を含むことが理解される。
本明細書で使用される「約」という用語は、当業者であれば容易に理解するそれぞれの値の通常の誤差範囲を指す。本明細書における、「約」値またはパラメータへの言及は、その値またはパラメータ自体を対象とする実施形態を含む（及び記載している）。
「免疫細胞」は、本明細書において使用される場合、微生物、または宿主の免疫系に対して異物と考えられる他の要素と反応する免疫系の細胞である。これらは、外来性の病原体、微生物及び疾患から宿主を保護する。白血球とも呼ばれる免疫細胞は、病原体と戦う自然免疫応答及び適応免疫応答の両方に関与する。自然免疫応答は、さらなるプライミングまたは学習プロセスを伴わず、病原体に曝露されるとすぐに生じる。適応免疫プロセスは、最初のプライミングを必要とし、その後、メモリーを作り出し、それが、その後、同じ病原体に遭遇しているときに結果として増強された応答性をもたらす。自然免疫細胞としては、単球、マクロファージ、樹状細胞、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含む自然リンパ球細胞（ＩＬＣ）、好中球、巨核球、好酸球及び好塩基球が挙げられるが、これらに限定されない。適応免疫細胞としては、Ｂ及びＴリンパ球／細胞が挙げられる。Ｔ細胞サブセットとしては、アルファベータＣＤ４＋ Ｔ（ナイーブＣＤ４＋、メモリーＣＤ４＋、エフェクターメモリーＣＤ４＋、エフェクターＣＤ４＋、制御性ＣＤ４＋）、及びアルファベータＣＤ８＋ Ｔ（ナイーブＣＤ８＋、メモリーＣＤ８＋、エフェクターメモリーＣＤ８＋、エフェクターＣＤ８＋）が挙げられるが、これらに限定されない。Ｂ細胞サブセットとしては、ナイーブＢ、メモリーＢ、及び形質細胞が挙げられるが、これらに限定されない。ＮＫ Ｔ細胞及びＴガンマデルタ（Ｔγδ）細胞は、自然リンパ球及び適応リンパ球の両方の特性を示す。いくつかの実施形態において、本明細書中の任意の免疫細胞は、ヒト細胞である。
「Ｔ細胞」または「Ｔリンパ球」は、健康及び疾患における免疫応答の編成において重要な役割を果たす免疫細胞である。特有の機能及び特性を有する２つの主要なＴ細胞サブセットが存在し、ＣＤ８抗原を発現するＴ細胞（ＣＤ８＋Ｔ細胞）は、グランザイム及びパーフォリンなどの細胞傷害性タンパク質を使用して標的細胞を溶解させることができる細胞傷害性またはキラーＴ細胞であり、ＣＤ４抗原を発現するＴ細胞（ＣＤ４＋ Ｔ細胞）は、ＣＤ８＋Ｔ細胞、Ｂ細胞、マクロファージなどの機能を含む、多くの他の免疫細胞種の機能を制御することができるヘルパーＴ細胞である。さらに、ＣＤ４＋ Ｔ細胞は、免疫応答を抑制することができる制御性Ｔ（Ｔｒｅｇ）細胞、ならびにサイトカインなどの免疫調節タンパク質を分泌することによって様々な種類の免疫応答を制御するＴヘルパー１（Ｔｈ１）、Ｔヘルパー２（Ｔｈ２）、及びＴヘルパー１７（Ｔｈ１７）細胞などのいくつかのサブセットにさらに細分される。Ｔ細胞は、固有の抗原特異的なモチーフと結合するアルファベータＴ細胞受容体を介して標的を認識し、この認識メカニズムは、一般に細胞傷害機能及びサイトカイン分泌機能を誘発するために必要とされる。「自然リンパ球」はまた、細胞傷害活性またはＴｈ１、Ｔｈ２、及びＴｈ１７サイトカインの分泌などのＣＤ８＋及びＣＤ４＋ Ｔ細胞の特性を示す場合がある。これらの自然リンパ球サブセットのいくつかは、ＮＫ細胞、ならびにＩＬＣ１、ＩＬＣ２、及びＩＬＣ３細胞；ならびに自然様Ｔ細胞、例えば、Ｔγδ細胞；ならびにＮＫ Ｔ細胞を含む。一般に、これらの細胞は、免疫調節性サイトカインなどの、感染または損傷組織からの炎症性刺激に速やかに応答することができるが、アルファベータＴ細胞とは異なり、これらは、抗原特異的なパターンを認識する必要なく応答することができる。
「サイトカイン」は、始原／初代細胞と標的／エフェクター細胞の間のクロストークを媒介する免疫調節性ポリペプチドの一形態である。これは、可溶型または細胞表面結合として機能し、標的免疫細胞上の「サイトカイン受容体」と結合してシグナル伝達を活性化することができる。「サイトカイン受容体」（すなわち、ＩＬ－１０ＲＡ及びＩＬ－１０ＲＢの２つのサブユニットから構成されるＩＬ－１０受容体、ＩＬ－１０Ｒ）は、本明細書で使用される場合、細胞外細胞表面上のサイトカインとの結合時に細胞内シグナル伝達を活性化する細胞表面上のポリペプチドである。サイトカインとしては、ケモカイン、インターフェロン、インターロイキン、リンホカイン、及び腫瘍壊死因子が挙げられるが、これらに限定されない。サイトカインは、免疫細胞、内皮細胞、線維芽細胞、及び間質細胞を含む、幅広い細胞により産生される。所与のサイトカインが、２つ以上の細胞種によって産生される場合もある。サイトカインは多面的であり、受容体が複数の免疫細胞サブセット上で発現するため、１つのサイトカインが複数の細胞においてシグナル伝達経路を活性化することができる。ただし、細胞種に応じて、サイトカインに対するシグナル伝達事象は、活性化、増殖、生存、アポトーシス、エフェクター機能及び他の免疫調節タンパク質の分泌などの異なる下流の細胞事象をもたらす可能性がある。
「アミノ酸」とは、本明細書で使用される場合、アラニン（３文字コード：ａｌａ、１文字コード：Ａ）、アルギニン（ａｒｇ、Ｒ）、アスパラギン（ａｓｎ、Ｎ）、アスパラギン酸（ａｓｐ、Ｄ）、システイン（ｃｙｓ、Ｃ）、グルタミン（ｇｌｎ、Ｑ）、グルタミン酸（ｇｌｕ、Ｅ）、グリシン（ｇｌｙ、Ｇ）、ヒスチジン（ｈｉｓ、Ｈ）、イソロイシン（ｉｌｅ、Ｉ）、ロイシン（ｌｅｕ、Ｌ）、リジン（ｌｙｓ、Ｋ）、メチオニン（ｍｅｔ、Ｍ）、フェニルアラニン（ｐｈｅ、Ｆ）、プロリン（ｐｒｏ、Ｐ）、セリン（ｓｅｒ、Ｓ）、トレオニン（ｔｈｒ、Ｔ）、トリプトファン（ｔｒｐ、Ｗ）、チロシン（ｔｙｒ、Ｙ）、及びバリン（ｖａｌ、Ｖ）を含む、天然に存在するカルボキシα－アミノ酸を指す。
「ポリペプチド」または「タンパク質」は、本明細書で使用される場合、単量体（アミノ酸）が（アミド結合としても知られている）ペプチド結合によって互いに直線的に連結された分子を指す。「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸の任意の鎖を指し、特定の長さの生成物を指すものではない。したがって、ペプチド、ジペプチド、トリペプチド、オリゴペプチド、「タンパク質」、「アミノ酸鎖」、または２つ以上のアミノ酸の鎖を言及するために使用される任意の他の用語は、「ポリペプチド」の定義の範囲内に含まれ、「ポリペプチド」という用語は、これらの任意の用語の代わりに、またはそれらと区別なく使用され得る。「ポリペプチド」という用語はまた、天然の生物学的原料由来であっても、または組み換え技術によって生成されてもよいが、必ずしも指定された核酸配列から翻訳されるとは限らないポリペプチドの生成物を指すことが意図される。それは、化学合成を含む任意の様式で生成されてもよい。ポリペプチドは、通常、規定の三次元構造を有するが、それらは、必ずしもそのような構造を有する訳ではない。本開示のポリペプチドは、約３個以上、５個以上、１０個以上、２０個以上、２５個以上、５０個以上、７５個以上、１００個以上、２００個以上、５００個以上、１，０００個以上、または２，０００個以上のアミノ酸のサイズであってもよい。規定の三次元構造を有するポリペプチドはフォールディングと呼ばれ、規定の三次元構造を持たず、むしろ多くの異なる立体構造をとることができるポリペプチドはアンフォールディングと呼ばれる。ポリペプチドは、多量体、すなわち、２つ以上のポリペプチド分子からなる多量体、例えば、二量体、三量体及びさらに多くのオリゴマーをさらに形成する場合もある。二量体、三量体などを形成するポリペプチド分子は、同一であっても、または同一でなくてもよい。したがって、そのような多量体の対応するさらに高次の構造は、ホモまたはヘテロ二量体、ホモまたはヘテロ三量体などと呼ばれる。「ポリペプチド」及び「タンパク質」という用語はまた、修飾ポリペプチド／タンパク質も指し、以下に限定されないが、グリコシル化、アセチル化、リン酸化、アミド化、既知の保護／ブロッキング基による誘導体化、タンパク質分解切断、または天然に存在しないアミノ酸による修飾を含む発現後修飾が影響を受ける。
「残基」は、本明細書で使用される場合、タンパク質中の位置及びその関連づけられるアミノ酸の正体を意味する。例えば、（Ｌｅｕ２３４またはＬ２３４とも言及される）Ｌｅｕ ２３４は、ヒト抗体ＩｇＧ１の位置２３４にある残基である。
「野生型」は、本明細書中では、対立遺伝子変異を含む、自然界で見られるアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を意味する。野生型タンパク質は、意図的に改変されていないアミノ酸配列またはヌクレオチド配列を有する。
「置換」または「変異」とは、ポリペプチドの野生型配列に生じるアミノ酸が前記ポリペプチドの同じ位置で別のアミノ酸に置換されるポリペプチド骨格の変化を指す。いくつかの実施形態において、受容体に対するポリペプチドの親和性を改変するために、変異（複数可）が導入され、それによって野生型同種ポリペプチドの親和性及び活性とは異なるようになるよう活性を変える。変異は、ポリペプチドの生物物理学的特性を改善する場合もある。アミノ酸変異は、当該技術分野において周知の遺伝学的または化学的方法を使用して生じさせることができる。遺伝学的方法としては、部位特異的変異誘発、ＰＣＲ、遺伝子合成などを挙げることができる。化学修飾などの遺伝子操作以外の方法によってアミノ酸の側鎖基を改変する方法も有用であり得ることが予想される。
「インターロイキン－１０」または「ＩＬ－１０」という用語は、本明細書で使用される場合、別途指定されない限り、霊長類（例えば、ヒト）及び齧歯動物（例えば、マウス及びラット）などの哺乳動物を含む任意の脊椎動物源由来の任意の天然ＩＬ－１０を指す。ＩＬ－１０は、通常、ホモ二量体として存在する。「ＩＬ－１０」は、未プロセシングのＩＬ－１０ならびに細胞におけるプロセシングの結果生じるＩＬ－１０の形態である「成熟ＩＬ－１０」を包含する。「成熟ＩＬ－１０」の配列を図１Ａに示す。未プロセシングのヒトＩＬ－１０の一例示的形態は、成熟ＩＬ－１０に結合した付加的なＮ末端アミノ酸シグナルペプチドを含む。「ＩＬ－１０」は、以下に限定されないが、天然に存在するＩＬ－１０のバリアント、例えば、対立遺伝子またはスプライスバリアントまたはバリアントも含む。例示的なヒトＩＬ－１０のアミノ酸配列は、ＵｎｉＰｒｏｔ Ｐ２２３０１（ＩＬ１０＿ＨＵＭＡＮ）として示されている。
「ＩＬ－１０ホモ二量体」または「ＩＬ－１０二量体」は、ＩＬ－１０Ｒ α鎖（ＩＬ－１０ＲＡ）の２つの分子及びＩＬ－１０Ｒ β鎖（ＩＬ－１０ＲＢ）の２つの分子からなる、細胞上の四量体ＩＬ－１０受容体（ＩＬ－１０Ｒ）複合体と結合するもともと対称のホモ二量体型の野生型ＩＬ－１０ポリペプチドを指す。各ＩＬ－１０ポリペプチド鎖のα－ヘリックスは、一方の鎖の最初の４つのヘリックス（Ａ～Ｄ）が他方の最後の２つのヘリックス（Ｅ及びＦ）と会合するように絡み合い、これによって二量体化したときに各ドメインの構造的完全性を維持する（Ｗａｌｔｅｒ ＆ Ｎａｇａｂｈｕｓｈａｎ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．１９９５ Ｓｅｐ ２６；３４（３８）：１２１１８－２５）。「ＩＬ－１０単量体」とは、交換された二次構造要素を接続するループを延長することによって形成され得る単量体型のＩＬ－１０を指す。Ｊｏｓｅｐｈｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ １９９５ Ｓｅｐ ２６；３４（３８）：１２１１８－２５に記載されているとおり、二量体形成を妨げ、ＩＬ－１０単量体形成を誘導するのには、前記ループへの６アミノ酸の挿入で十分であった。得られたＩＬ－１０単量体は、生物学的に活性であり、単一のＩＬ－１０ＲＡ分子と結合し、単一のＩＬ－１０ＲＢ分子をシグナル伝達複合体にリクルートして、ＩＬ－１０が関係する細胞の応答を誘発することができた。したがって、ループＤ（残基Ｃ１１４で終わる）とループＥ（残基Ｖ１２１で始まる）の間のＩＬ－１０ポリペプチド（すなわち、野生型ＩＬ－１０または本開示の任意の変異ＩＬ－１０ポリペプチド）の配列への短いアミノ酸配列または短いリンカーの挿入は、前記ＩＬ－１０ポリペプチドの「単量体の異性体」を生じる。この付加したアミノ酸配列またはリンカーは、Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、またはＡ１２０の直後に挿入することができる。本明細書に記載されるとおり、ＩＬ－１０単量体ポリペプチドに関するアミノ酸のナンバリングは、リンカー配列／アミノ酸（複数可）がカウントされないよう、配列番号１（すなわち、ＩＬ－１０二量体ポリペプチド）の数に基づくものである。例えば、図２Ｂ及び３Ｂを参照。
「親和性」または「結合親和性」は、分子（例えば、抗体）の単一の結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の、合計の非共有性相互作用の強さを指す。別途指定されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対の要素（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する、固有の結合親和性を指す。親和性は、一般に、解離速度定数と結合速度定数（それぞれ、ｋｏｆｆ及びｋｏｎ）の比である解離定数（ＫＤ）によって表すことができる。したがって、速度定数の比が同じままである限り、等価の親和性は、異なる速度定数を含んでもよい。親和性は、酵素結合免疫吸着測定（ＥＬＩＳＡ）、表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）技術（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）、バイオレイヤー干渉（ＢＬＩ）技術（例えば、Ｏｃｔｅｔ）及びその他の従来の結合アッセイなどの当該技術分野において既知の一般的な方法によって測定することができる（Ｈｅｅｌｅｙ，Ｅｎｄｏｃｒ Ｒｅｓ ２８，２１７－２２９（２００２）。
「結合」または「特異的結合」は、本明細書で使用される場合、それぞれ、ポリペプチドに対する受容体または標的抗原と選択的に相互作用するポリペプチドまたは抗原結合分子の能力を指し、この特異的な相互作用は、非標的または望ましくないまたは非特異的な相互作用と区別され得る。
「変異ＩＬ－１０ポリペプチド」とは、野生型ＩＬ－１０とは異なるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ポリペプチドを指す。例えば、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、アミノ酸置換、欠失、及び挿入を有する場合もある。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、受容体に対する親和性が低下しており、そのような低下した親和性は、変異体の低下した生物学的活性をもたらす。親和性の低下及びそれによる活性の低下は、少数のアミノ酸変異または置換を導入することによって得ることができる。変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、所望の特性、例えば、ＩＬ－１０Ｒに対する低下した親和性を有する最終構築物を形成する、以下に限定されないが、ポリペプチドのアミノ酸欠失、置換、環化、ジスルフィド結合、もしくは翻訳後修飾（例えば、グリコシル化または改変された炭水化物）、ポリペプチドに対する化学的もしくは酵素的改変（例えば、ポリペプチド骨格へのＰＥＧの結合）、ペプチドタグもしくは標識の付加、またはタンパク質もしくはタンパク質ドメインとの融合を含む、他の改変をペプチド骨格に有する場合もある。所望の活性はまた、野生型ＩＬ－１０ポリペプチドと比較して改善された生物物理学的特性を含む場合もある。複数の改変を組み合わせて、親和性の低下または改善された生物物理学的特性などの所望の活性改変を達成することができる。非限定例として、グリコシル化を可能にするために、コンセンサスＮ－結合型グリコシル化のためのアミノ酸配列がポリペプチドに組み込まれてもよい。別の非限定例は、ペグ化を可能にするために、リジンがポリペプチドに組み込まれてもよいことである。いくつかの実施形態において、受容体に対する親和性を低下させることによって活性を改変するために、ポリペプチドに変異（複数可）が導入される。
「標的化部分」及び「抗原結合分子」は、本明細書で使用される場合、最も広い意味で抗原決定基と特異的に結合する分子を指す。標的化部分または抗原結合分子は、タンパク質、炭水化物、脂質、またはその他の化合物であり得る。これらとしては、抗体、抗体フラグメント（Ｃｈａｍｅｓ ｅｔ ａｌ，２００９；Ｃｈａｎ ＆ Ｃａｒｔｅｒ，２０１０；Ｌｅａｖｙ，２０１０；Ｈｏｌｌｉｇｅｒ ＆ Ｈｕｄｓｏｎ，２００５）、足場抗原結合タンパク質（Ｇｅｂａｕｅｒ ａｎｄ Ｓｋｅｒｒａ，２００９；Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ， ２００８）、シングルドメイン抗体（ｓｄＡｂ）、ミニボディ（Ｔｒａｍｏｎｔａｎｏ ｅｔ ａｌ，１９９４）、重鎖抗体の可変ドメイン（ナノボディ、ＶＨＨ）、新規抗原受容体の可変ドメイン（ＶＮＡＲ）、炭水化物結合ドメイン（ＣＢＤ）（Ｂｌａｋｅ ｅｔ ａｌ，２００６）、コラーゲン結合ドメイン（Ｋｎｉｇｈｔ ｅｔ ａｌ，２０００）、レクチン結合タンパク質 （テトラネクチン）、コラーゲン結合タンパク質、アドネクチン／フィブロネクチン（Ｌｉｐｏｖｓｅｋ，２０１１）、血清トランスフェリン（トランスボディ）、エヴィボディ、プロテインＡ由来の分子、例えば、プロテインＡのＺ－ドメイン（アフィボディ）（Ｎｙｇｒｅｎ ｅｔ ａｌ，２００８）、Ａ－ドメイン（アヴィマー／マキシボディ）、アルファボディ（ＷＯ２０１００６６７４０）、アヴィマー／マキシボディ、設計アンキリンリピートドメイン（ＤＡＲＰｉｎ）（Ｓｔｕｍｐｐ ｅｔ ａｌ，２００８）、アンチカリン（Ｓｋｅｒｒａ ｅｔ ａｌ，２００８）、ヒトガンマ－クリスタリンまたはユビキチン（アフィリン分子）、ヒトプロテアーゼインヒビターのクニッツ型ドメイン、ノッチン（Ｋｏｌｍａｒ ｅｔ ａｌ，２００８）、半減期を延長するための融合物を伴うか、または伴わない直鎖状または制限されたペプチド、例えば、（Ｆｃ融合物－ペプチボディ）（Ｒｅｎｔｅｒｏ Ｒｅｂｏｌｌｏ ＆ Ｈｅｉｎｉｓ，２０１３；ＥＰ１１４４４５４Ｂ２；Ｓｈｉｍａｍｏｔｏ ｅｔ ａｌ，２０１２；ＵＳ７２０５２７５Ｂ２）、制限された二環式ペプチド（ＵＳ２０１８／０２００３７８Ａ１）、アプタマー、操作されたＣＨ２ドメイン（ナノ抗体；Ｄｉｍｉｔｒｏｖ，２００９））及び操作されたＣＨ３ドメイン「Ｆｃａｂ」ドメイン（Ｗｏｚｎｉａｋ－Ｋｎｏｐｐ ｅｔ ａｌ，２０１０）が挙げられるが、これらに限定されない。
「抗体」及び「免疫グロブリン」という用語は、同義に使用され、本明細書では最も広い意味で使用され、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体（例えば、完全長または完全なモノクローナル抗体）、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、抗体フラグメント、及びシングルドメイン抗体（本明細書でさらに詳細に記載される）を含むが、これらに限定されない、様々な抗体構造を包含する。
いくつかの実施形態において、抗体（免疫グロブリン）は、天然の抗体構造と実質的に同様の構造を有するタンパク質を指す。「天然抗体」とは、様々な構造を有する天然に存在する免疫グロブリン分子を指す。例えば、天然免疫グロブリンのＩｇＧクラスは、ジスルフィド結合した２つの軽鎖及び２つの重鎖から構成される、約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖タンパク質である。Ｎ末端からＣ末端へ、各重鎖は、可変重ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｈｅａｖｙ ｄｏｍａｉｎ）または重鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＨ）と、それに続く重鎖定常領域とも呼ばれる３つの定常ドメイン（ＣＨ１、ＣＨ２、及びＣＨ３）を有する。同様に、Ｎ末端からＣ末端へ、各軽鎖は、可変軽ドメイン（ｖａｒｉａｂｌｅ ｌｉｇｈｔ ｄｏｍａｉｎ）または軽鎖可変ドメインとも呼ばれる可変領域（ＶＬ）と、それに続く軽鎖定常領域とも呼ばれる定常軽（ＣＬ）ドメインを有する。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニット構造及び三次元立体配置は周知であり、例えば、Ａｂｂａｓ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃｅｌｌｕｌａｒ ａｎｄ Ｍｏｌ，ａｎｄ Ｋｉｎｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｋｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）に一般的に記載されている。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、抗体（免疫グロブリン）は、異なるクラスに割り当てられる。抗体には、α（ＩｇＡ）、δ（ＩｇＤ）、ε（ＩｇＥ）、γ（ＩｇＧ）、またはμ（ＩｇＭ）の５つの主要なクラスがあり、その一部はさらにサブタイプ、例えば、γ１（ＩｇＧ１）、γ２（ＩｇＧ２）、γ３（ＩｇＧ３）、γ４（ＩｇＧ４）、α１（ＩｇＡ１）、及びα２（ＩｇＡ２）に分類され得る。免疫グロブリンの軽鎖には、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２つのタイプうちの１つが割り当てられ得る。免疫グロブリンは、免疫グロブリンのヒンジ領域を介して連結された２つのＦａｂ分子と１つのＦｃドメインから基本的になる。
「Ｆｃ」、「Ｆｃ領域」、または「Ｆｃドメイン」は、本明細書で使用される場合、定常領域の少なくとも一部を含む抗体重鎖のＣ末端領域を指す。この用語は、天然配列Ｆｃ領域及びバリアントＦｃ領域を含む。Ｆｃは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、及びＩｇＧの最後の２つの定常領域免疫グロブリンドメイン（例えば、ＣＨ２及びＣＨ３）、ＩｇＥ及びＩｇＭの最後の３つの定常領域免疫グロブリンドメイン、ならびに場合によりこれらのドメインのＮ末端側にあるフレキシブルヒンジの全てまたは一部を指すことができる。ＩｇＡ及びＩｇＭの場合、ＦｃにはＪ鎖が含まれる場合がある。ＩｇＧ Ｆｃ領域は、ＩｇＧ ＣＨ２及びＩｇＧ ＣＨ３ドメインを含み、場合によってはヒンジを含む。本明細書において別段明記されない限り、Ｆｃ領域または定常領域内のアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれるＥＵナンバリングシステムに従う。「ヒンジ」領域は、通常、およそ位置２１６のアミノ酸残基からおよそ位置２３０のアミノ酸残基まで延びる。ヒンジ領域は、本明細書では天然のヒンジドメインまたは変異ヒンジドメインであってもよい。ヒトＩｇＧ Ｆｃ領域の「ＣＨ２ドメイン」は、通常、およそ位置２３１のアミノ酸残基からおよそ位置３４０のアミノ酸残基まで延びる。ＣＨ２ドメインは、本明細書では天然配列ＣＨ２ドメインまたは変異ＣＨ２ドメインであってもよい。「ＣＨ３ドメイン」は、ＩｇＧのおよそ位置３４１のアミノ酸残基からおよそ位置４４７のアミノ酸残基まで、Ｆｃ領域におけるＣ末端からＣＨ２ドメインまでの一続きの残基を含む。ＣＨ３領域は、本明細書では、天然配列ＣＨ３ドメインまたは変異ＣＨ３ドメインであってもよい（例えば、その一方の鎖に組み込まれた「突起」（「ノブ」）及びその他方の鎖に組み込まれた対応する「空所」（「ホール」）を有するＣＨ３ドメイン；明確に参照によって本明細書に組み込まれる米国特許第５，８２１，３３３号を参照）。したがって、「Ｆｃドメイン」の定義には、アミノ酸２３１～４４７（ＣＨ２－ＣＨ３）もしくは２１６～４４７（ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３）の両方、またはそれらのフラグメントが含まれる。「Ｆｃフラグメント」は、この文脈において、Ｎ末端及びＣ末端のいずれか、またはその両方の少数のアミノ酸を含む場合もあるが、依然として別のＦｃドメインまたはＦｃフラグメントと二量体を形成する能力を保持し、これも一般にサイズに基づく標準的な方法（例えば、非変性クロマトグラフィー、サイズ排除クロマトグラフィーなど）を使用して検出可能である。ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインは、本開示において特に有用であり、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２またはＩｇＧ４由来のＦｃドメインであり得る。
「変異Ｆｃドメイン」または「Ｆｃバリアント」または「変異Ｆｃ」は、親Ｆｃドメインと比較して、アミノ酸改変（例えば、置換、付加、及び欠失）を含む。この用語は、免疫グロブリンのＦｃ領域の天然に存在する対立遺伝子バリアントも含む。一般に、変異Ｆｃドメインは、対応する親ヒトＩｇＧ Ｆｃドメインと少なくとも約８０、８５、９０、９５、９７、９８または９９の同一性パーセントを有する（後述の同一性アルゴリズムを使用、一実施形態は、デフォルトパラメータを使用した当該技術分野において既知のＢＬＡＳＴアルゴリズムを利用した）。あるいは、変異Ｆｃドメインは、親Ｆｃドメインと比較して１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個のアミノ酸改変を有することがある。例えば、生物学的機能を実質的に喪失することなく免疫グロブリンのＦｃ領域のＮ末端またはＣ末端から１つ以上のアミノ酸を欠失させることができる。さらに、本明細書で述べられているとおり、変異Ｆｃドメインは、本明細書では、非変性ゲル電気泳動などの本明細書に記載の既知の技術を使用して測定した場合、別のＦｃドメインと二量体を形成する能力を依然として保持している。
「Ｆｃガンマ受容体」、「ＦｃγＲ」または「ＦｃガンマＲ」は、本明細書で使用される場合、ＩｇＧ抗体 Ｆｃ領域と結合し、ＦｃγＲ遺伝子によってコードされるタンパク質ファミリーのあらゆるメンバーを意味する。ヒトでのこのファミリーは、アイソフォームＦｃγＲＩａ、ＦｃγＲＩｂ、及びＦｃγＲＩｃを含む、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）；アイソフォームＦｃγＲＩＩａ（アロタイプＨ１３１及びＲ１３１を含む）、ＦｃγＲＩＩｂ（ＦｃγＲＩＩｂ－１及びＦｃγＲＩＩｂ－２を含む）、及びＦｃγＲＩＩｃを含む、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）；ならびにアイソフォームＦｃγＲＩＩＩａ（アロタイプＶ１５８及びＦ１５８を含む）及びＦｃγＲＩＩＩｂ（アロタイプＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ１及びＦｃγＲＩＩｂ－ＮＡ２を含む）を含む、ＦｃγＲＩＩＩ （ＣＤ１６）（Ｊｅｆｆｅｒｉｓ ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ ８２：５７－６５、参照により全体が組み込まれる）、ならびにあらゆる未発見のヒトＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプを含むが、これらに限定されない。ＦｃγＲは、以下に限定されないがヒト、マウス、ラット、ウサギ、及びサルを含む、任意の生物由来であってもよい。マウスＦｃγＲとしては、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）、ＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６）、及びＦｃγＲＩＩＩ－２（ＣＤ１６－２）、ならびに任意の未発見のマウスＦｃγＲまたはＦｃγＲアイソフォームもしくはアロタイプが挙げられるが、これらに限定されない。
「エフェクター機能」とは、本明細書で使用される場合、抗体Ｆｃ領域のＦｃレセプターまたはリガンドとの相互作用の結果として生じる生化学的事象を意味し、これは、抗体アイソタイプにより変化する。エフェクター機能としては、抗体依存性細胞媒介細胞傷害（ＡＤＣＣ）、抗体依存性細胞貪食（ＡＤＣＰ）、補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）、サイトカイン分泌、抗原提示細胞による免疫複合体が関係する抗原取り込み、細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）のダウンレギュレーション、及びＢ細胞活性化が挙げられるが、これらに限定されない。「抗体依存性細胞媒介細胞傷害」または「ＡＤＣＣ」とは、ＦｃＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、及びマクロファージ）が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす、細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣは、ＦｃγＲＩＩＩａとの結合と相関しており、ＦｃγＲＩＩＩａとの結合を増加させるとＡＤＣＣ活性の増加につながる。対象とする分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、例えば、米国特許第５，５００，３６２号または同第５，８２１，３３７号に記載されるものなどのインビトロＡＤＣＣアッセイが実施されてもよい。「ＡＤＣＰ」または抗体依存性細胞貪食とは、本明細書で使用される場合、ＦｃγＲを発現する非特異的細胞傷害性細胞が、標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の貪食を引き起こす細胞媒介性反応を意味する。
「Ｆｃヌル」及び「Ｆｃヌルバリアント」は、同義に使用され、本明細書ではエフェクター機能が低下したか、または破壊された改変型Ｆｃを示すために使用される。そのようなＦｃヌルまたはＦｃヌルバリアントは、ＦｃγＲ及び／または補体受容体が減少しているか、または破壊されている。いくつかの実施形態において、そのようなＦｃヌルまたはＦｃヌルバリアントは、エフェクター機能が破壊されている。改変のための例示的な方法としては、化学的改変、アミノ酸残基置換、挿入及び欠失が挙げられるが、これらに限定されない。得られるバリアントのエフェクター機能を低下させるために１つ以上の改変が組み込まれたＦｃ分子の例示的なアミノ酸位置（ＥＵナンバリング方式に基づくナンバリング）は、位置ｉ）ＩｇＧ１：Ｃ２２０、Ｃ２２６、Ｃ２２９、Ｅ２３３、Ｌ２３４、Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｐ２３８、Ｓ２３９、Ｄ２６５、Ｓ２６７、Ｎ２９７、Ｌ３２８、Ｐ３３１、Ｋ３２２、Ａ３２７及びＰ３２９、ｉｉ）ＩｇＧ２：Ｖ２３４、Ｇ２３７、Ｄ２６５、Ｈ２６８、Ｎ２９７、Ｖ３０９、Ａ３３０、Ａ３３１、Ｋ３２２ならびにｉｉｉ）ＩｇＧ４：Ｌ２３５、Ｇ２３７、Ｄ２６５及びＥ３１８である。エフェクター機能が低下した例示的なＦｃ分子は、以下の置換の１つ以上を有するものを含む：ｉ）ＩｇＧ１：Ｎ２９７Ａ、Ｎ２９７Ｑ、Ｎ２９７Ｇ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ｎ２９７Ｑ、Ｃ２２０Ｓ／Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｐ２３８Ｓ、Ｓ２６７Ｅ／Ｌ３２８Ｆ、Ｃ２２６Ｓ／Ｃ２２９Ｓ／Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ｆ／Ｌ２３５Ｅ／Ｐ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｋ３２２Ａ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｐ３２９Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２３９Ｋ／Ａ３２７Ｇ、Ｅ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ／Ｓ２６７Ｋ／Ａ３２７Ｇ及びＥ２３３Ｐ／Ｌ２３４Ｖ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３６ｄｅｌ、Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７欠失；ｉｉ）ＩｇＧ２：Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ、Ｄ２６５Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、Ｖ２３４Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ、及びＨ２６８Ｑ／Ｖ３０９Ｌ／Ａ３３０Ｓ／Ａ３３１Ｓ；ｉｉｉ）ＩｇＧ４：Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｅ３１８Ａ、Ｄ２６５Ａ、Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ及びＬ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ／Ｄ２６５Ａ／Ｅ３１８Ａ。
「エピトープ」は、本明細書で使用される場合、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域と特異的に結合することができる決定基を指す。エピトープは、アミノ酸または糖側鎖などの分子の集まりであり、通常、特定の構造的特性、ならびに特定の電荷特性を有する。単一の抗原が２つ以上のエピトープを有する場合もある。エピトープは、結合に直接関与するアミノ酸残基及び結合に直接関与しない他のアミノ酸残基、例えば、抗原結合ペプチドによって効果的にブロックされるアミノ酸残基（言い換えると、アミノ酸残基が抗原結合ペプチドのフットプリント内にある）を含む場合もある。エピトープは、高次構造または直鎖のいずれかであり得る。エピトープは、一般に、少なくとも３個、より通常は、少なくとも５個または８～１０個のアミノ酸を含む。同じエピトープを認識する抗体は、別の抗体の標的抗原との結合をブロックする抗体の能力を示す単純なイムノアッセイ、例えば、「ビニング」で確認することができる。
「リンカー」は、本明細書で使用される場合、２つのポリペプチド鎖を接続する分子を指す。リンカーは、ポリペプチドリンカーまたは合成化学リンカーであり得る（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，９（３），２９９－３０５，１９９６で開示されているものを参照）。ポリペプチドリンカーの長さ及び配列は、特に限定されず、当業者が目的に応じて選択することができる。ポリペプチドリンカーは、１つ以上のアミノ酸を含む。いくつかの実施形態において、ポリペプチドリンカーは、少なくとも５アミノ酸長、いくつかの実施形態では、５から１００、または１０から５０アミノ酸長のペプチドである。一実施形態において、前記ペプチドリンカーは、Ｇ、Ｓ、ＧＳ、ＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＳ、及びＧＳＧ（Ｇ＝グリシン及びＳ＝セリン）である。別の実施形態において、前記ペプチドリンカーは、（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７４）、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７５）、（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７６）、Ｓ（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８６）、Ｓ（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８７）、またはＳ（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８８）であり、ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２及びｎ＝０、１、２または３である。いくつかの実施形態において、前記リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎであり、ｘ＝２、３、または４であり、ｎ＝０であり（配列番号８５）、いくつかの実施形態において、前記リンカーは、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎであり、ｘ＝３であり、ｎ＝０である（配列番号８６）。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９）、ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７７）、またはＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号７８）を含む。合成化学リンカーとしては、ペプチドを架橋するために通常使用される架橋薬剤、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、ビス（スクシンイミジル）スベラート（ＢＳ３）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオナート）（ＤＳＰ）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオナート）（ＤＴＳＳＰ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシナート）（ＥＧＳ）、エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシナート）（スルホ－ＥＧＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホ－ＤＳＴ）、ビス［２－（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、及びビス［２－（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（スルホ－ＢＳＯＣＯＥＳ）が挙げられる。
タンパク質配列に関する「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、配列を整列させ、必要に応じてギャップを導入して、最大配列同一性パーセントを達成した後の、いかなる保存的置換も配列同一性の一部と見なさない、特定の（親）配列中のアミノ酸残基と同一の候補配列中のアミノ酸残基の百分率と定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当該技術分野における技術の範囲内である種々の方式で、例えばＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、ＡＬＩＧＮ、またはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア等の、公的に利用可能なコンピュータソフトウェアを使用して、達成することができる。当業者は、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを測定するための適切なパラメータを決定することができる。１つの特定のプログラムは、参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願公開第２０１６０２４４５２５号の段落［０２７９］から［０２８０］に概要が示されるＡＬＩＧＮ－２プログラムである。
「ポリヌクレオチド」という用語は、本開示のポリペプチドをコードする単離核酸分子または構築物、例えば、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ウイルス由来のＲＮＡ、またはプラスミドＤＮＡ（ｐＤＮＡ）を指す。ポリヌクレオチドは、従来的なリン酸ジエステル結合または非従来的な結合（例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）において見られるものなどのアミド結合）を含んでもよい。「核酸分子」という用語は、ポリヌクレオチドに存在する任意の１つ以上の核酸セグメント、例えば、ＤＮＡまたはＲＮＡフラグメントを指す。いくつかの態様において、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（特に発現ベクター）が提供される。一態様において、本開示のポリペプチドを生成するための方法であって、ポリペプチドをコードする核酸を含む宿主細胞をポリペプチドの発現に適した条件下で培養すること及びポリペプチドを宿主細胞から回収することを含む、方法が提供される。「組み換え」とは、タンパク質が組み換え核酸技術を使用して外来宿主細胞において生成されることを意味する。宿主細胞で発現させた組み換え生成タンパク質は、任意の適切な技術によって、分離、分画または部分的もしくは実質的に精製された天然のタンパク質または組み換えタンパク質と同様に、本発明の目的においては、単離されているものと見なされる。
本明細書で開示されている様々なポリペプチドについて記載するために使用される場合、「単離された」という用語は、発現した細胞または細胞培養物から特定され、分離及び／または回収されたポリペプチドを意味する。一般に、単離ポリペプチドは、少なくとも１つの精製ステップにより精製されることになる。純度のレベルは必要とされず、「精製」または「精製された」とは、出発材料と比較して組成物中の夾雑物の濃度に対して標的タンパク質濃度を増加させることを指す。「単離タンパク質」は、本明細書で使用される場合、異なる結合特異性を有するその他のタンパク質を実質的に含まない標的タンパク質を指す。
「がん」という用語は、一般に体の他の部分に浸潤するか、または広がる可能性のある未制御で異常な細胞増殖を特徴とする哺乳動物における生理的状態を指す。がんの例としては、がん腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、及び白血病が挙げられるがこれらに限定されない。そのようながんのさらに具体的な例としては、下記のがんのいずれかの難治性の種類、または１つ以上の下記のがんの組み合わせを含む、肺癌、小細胞肺癌、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）癌、細気管支肺胞癌、扁平上皮癌、肺の腺癌、肺の扁平上皮がん腫、腹膜のがん、頭頸部癌、骨癌、膵癌、皮膚癌、頭または頸部のがん、皮膚または眼球内黒色腫、甲状腺癌、子宮癌、胃腸癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域のがん、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ ｃａｎｃｅｒ、ｇａｓｔｒｉｃ ｃａｎｃｅｒ）、結腸癌、乳癌、子宮内膜癌、子宮癌、卵管癌、子宮頸部のがん腫、膣のがん腫、外陰癌、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系のがん、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、膀胱のがん、腎臓または輸尿管のがん、腎細胞癌、腎盂癌、中皮腫、膀胱癌、肝癌、ヘパトーマ、肝細胞癌、子宮頸癌、唾液腺癌、胆管癌、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、多形神経膠芽腫、星細胞腫、シュワン細胞腫、上衣腫、髄芽腫、髄膜腫、扁平上皮癌、下垂体腺腫及びユーイング肉腫が挙げられる。
変異ＩＬ－１０ポリペプチド
いくつかの実施形態において、本開示は、変異ＩＬ－１０ポリペプチド、及びその融合タンパク質に関する。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号３の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する結合親和性を増加させる（例えば、配列番号１に対して）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号２の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する結合親和性を低下させる（例えば、配列番号１に対して）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、（例えば、配列番号３の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する結合親和性を増加させる（例えば、配列番号１に対して）１つ以上の変異を含み、（例えば、配列番号２の配列を含む）ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する結合親和性を低下させる（例えば、配列番号１に対して）１つ以上の変異を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０、または図１Ｄに示される成熟単量体ＩＬ－１０のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０、または図１Ｄに示される成熟単量体ＩＬ－１０のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ｉ）図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示し、ｉｉ）図２Ａ～３Ｂに示されるとおり、図１Ａに示される野生型ＩＬ－１０ポリペプチドまたは図１Ｄに示される成熟単量体ＩＬ－１０のアミノ酸配列に対して、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８の群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有する。いくつかの実施形態において、本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｂに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す。ＩＬ－１０ＲＡに対する野生型及び変異ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性の差は、当業者に周知のタンパク質間相互作用の親和性を測定する標準的なＳＰＲアッセイで測定される。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０、または図１Ｄに示される成熟単量体ＩＬ－１０のいずれかのアミノ酸配列と少なくとも８０％、少なくとも８１％、少なくとも８２％、少なくとも８３％、少なくとも８４％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ｉ）図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示し、ｉｉ）図１Ａに示される野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列に対して、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１の群から選択される１つ以上のアミノ酸置換を有してもよい（図２Ａ～３Ｂ）。さらに別の実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、図１Ｃに示されるアミノ酸配列を有するＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して１５０％以上増加した結合親和性を示す。
野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において可能性のあるアミノ酸置換の位置が図２に示される。いくつかの実施形態において、野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの配列において示されたアミノ酸は、図３に示されるとおりアラニンまたは別のアミノ酸で置換された。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドはまた、改善された生物物理学的特性などの付加的な利点を提供する、変異及び欠失を含むが、これらに限定されない他の改変も含む。改善された生物物理学的特性としては、改善された熱安定性、凝集傾向、酸可逆性、粘度、及び哺乳動物または細菌または酵母菌細胞における産生が挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、例えば、本明細書に記載されるとおりの、単量体である。例えば、図１Ｄ、２Ｂ、及び３Ｂに示される配列番号１８７を参照。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含み、例えば、下記表４Ａに配列番号１８８として示される。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表４Ａに列挙されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１８８～２０１からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌならびに１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、位置（複数可）Ｒ２４、Ｒ２７、Ｑ３８、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、及び／またはＥ１５１にある。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｑ３８Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１８９の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｒ２４Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９０の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｒ２４Ａ、Ｑ３８Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９１の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ及びＥ１５１Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９２の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｒ２４Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ及びＥ１５１Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９３の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｉ８７Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９４の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ及びＫ１３８Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９５の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｒ２７Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９６の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ及びＥ１４２Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９７の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ及びＤ１４４Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９８の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｑ３８Ａ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ及びＥ１４２Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１９９の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ、Ｆ１１１Ｌ、Ｅ１４２Ａ及びＫ１３８Ａを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号２００の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ９２Ｉを含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号２０１の配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号８７～８９及び１８８～２０１からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表４Ａに示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表４Ａに示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸置換及び／またはアミノ酸挿入配列を含む。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号３１０～３１８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表８に示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表８に示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸置換及び／またはアミノ酸挿入配列を含む。
いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号４２２～４２８からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表１１に示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表１１に示される変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸置換及び／またはアミノ酸挿入配列を含む。
表４Ｂは、本開示のＩＬ－１０単量体ポリペプチドに関する例示的なアミノ酸挿入及び挿入位置を示す（挿入には下線を付す）。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表４Ｂに列挙されているアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号９１～１０１からなる群から選択される配列を含む。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、表４Ｂに列挙されているアミノ酸挿入を、及び／または表４Ｂに列挙されている位置に含む。いくつかの実施形態において、挿入は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５アミノ酸長である。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、残基Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、またはＡ１２０の直後に１つのアミノ酸、または１から１５個の間のアミノ酸のペプチド挿入を有する本開示の変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのアミノ酸配列を含む。挿入の例としては、Ｇ、ＧＧ、ＧＧＧ、ＧＧＧＧ（配列番号８０）、ＧＧＧＳＧ（配列番号８１）、ＧＧＧＧＧ（配列番号８２）、ＧＧＧＧＧＧ（配列番号８３）、及びＧＧＧＳＧＧ（配列番号８４）を挙げることができるが、これらに限定されない。
融合タンパク質
本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドのいずれか１つ及びＴ細胞上の抗原と結合する抗原結合分子を含む融合タンパク質が本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態において、前記融合タンパク質は、単球よりもＴ細胞を優先的に刺激する。いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、変異ＩＬ－１０ポリペプチド及びＣＤ８＋ Ｔ細胞と結合する抗原結合分子を含み、前記融合タンパク質は、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に刺激する。いくつかの実施形態において、抗原結合分子は、ＣＤ８（例えば、ＣＤ８ａｂ、ＣＤ８ａ、もしくはＣＤ８ａａ）、ＣＤ４、またはＰＤ－１、例えば、ヒトＣＤ８（例えば、ヒトＣＤ８ａｂ、ヒトＣＤ８ａ、もしくはヒトＣＤ８ａａ）、ヒトＣＤ４、またはヒトＰＤ－１と結合する。ヒトＣＤ８、ＣＤ４、及びＰＤ－１配列は、当該技術分野において知られており、例えば、ヒトＣＤ８ａについてはＮＰ＿００１１３９３４５、ヒトＣＤ８ｂについてはＮＰ＿００１１７１５７１、ヒトＣＤ４についてはＮＰ＿０００６０７、及びヒトＰＤ－１についてはＮＰ＿００５００９を参照。
他の実施形態において、融合タンパク質は、変異ＩＬ－１０ポリペプチド及びＣＤ８ａｂ及び／またはＣＤ８ａ抗原と結合する抗原結合分子を含み、前記融合タンパク質は、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に刺激する。
抗原発現細胞に対する本開示の標的化ＩＬ－１０融合タンパク質の優先的な活性は、ＩＬ－１０Ｒも発現する抗原発現細胞及び抗原非発現細胞を含むアッセイにおいて実証される。そのようなアッセイの１つは、ＩＬ－１０ポリペプチドへの曝露時のヒト末梢血などのヒト免疫細胞及び／または腫瘍浸潤免疫細胞におけるＳＴＡＴ３リン酸化（ｐＳＴＡＴ３）を測定するインビトロアッセイである。アッセイの一様式では、抗原発現細胞に対する選択性を実証するために、抗原発現細胞及び抗原非発現細胞に対する標的化ＩＬ－１０融合タンパク質の活性が測定される。アッセイの別の様式では、抗原結合分子と融合された場合の変異ＩＬ－１０ポリペプチドのシグナル伝達におけるレスキューの規模を実証するために、変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む標的化ＩＬ－１０融合タンパク質の抗原発現細胞に対する活性が、同じ変異ＩＬ－１０ポリペプチド及び抗原発現細胞上のいかなる抗原も認識しない対照抗体を含む非標的化ＩＬ－１０融合タンパク質の活性と比較される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８ａｂ抗原結合分子を含む本開示の融合タンパク質は、ＣＤ８ａｂ－ ＩＬ－１０Ｒ＋細胞よりもＣＤ８ａｂ＋ ＩＬ－１０Ｒ＋細胞を少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍活性化する。いくつかの実施形態において、前記融合タンパク質は、前記ＩＬ－１０変異ポリペプチド及び前記細胞上に発現する任意の抗原と結合しない対照抗体を含む融合分子と比較してＣＤ８ａｂ＋ ＩＬ－１０Ｒ＋細胞を５０倍超、またはより望ましくは、少なくとも１００倍、またはさらにより望ましくは、少なくとも２００倍活性化する。ＩＬ－１０融合タンパク質による前記細胞活性化は、前記ＩＬ－１０融合タンパク質による処置後の前記細胞におけるｐＳＴＡＴ３の発現を測定することによって判定される。
いくつかの実施形態において、ＣＤ８ａ抗原結合分子を含む本開示の融合タンパク質は、ＣＤ８ａ－ ＩＬ－１０Ｒ＋細胞よりもＣＤ８ａ＋ ＩＬ－１０Ｒ＋細胞を少なくとも５倍、少なくとも１０倍、少なくとも５０倍、または少なくとも１００倍活性化する。いくつかの実施形態において、前記融合タンパク質は、前記ＩＬ－１０変異ポリペプチド及び前記細胞上に発現する任意の抗原と結合しない対照抗体を含む融合分子と比較してＣＤ８ａ＋ ＩＬ－１０Ｒ＋細胞を５０倍超、またはより望ましくは、少なくとも１００倍、またはさらにより望ましくは、少なくとも２００倍活性化する。ＩＬ－１０融合タンパク質による前記細胞活性化は、前記ＩＬ－１０融合タンパク質による処置後の前記細胞におけるｐＳＴＡＴ３の発現を測定することによって判定される。
融合タンパク質形式
本開示は、とりわけ、抗原結合分子（例えば、抗体またはその他の抗原結合タンパク質）及び本開示の変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む融合タンパク質に関する。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１０融合タンパク質は、例えば、図６に示されるとおりの、様々な形式を有する。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの二量体を含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方は、抗原結合分子に融合される （例えば、ＩＬ－１０の二量体が単一の結合により抗原結合分子に融合される）。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、抗原結合分子に融合された単一の変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、２つの抗原結合分子を含み１つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、２つの抗原結合分子のそれぞれに融合される（例えば、抗原結合分子は、それぞれが単一の変異ＩＬ－１０ポリペプチドに融合される、２つのポリペプチド鎖を含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、融合タンパク質の構築時に二量体として結合する）。いくつかの実施形態において、変異ＩＬ－１０ポリペプチド及び抗原結合分子は、リンカーを介して（例えば、共有結合的に）融合される。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む、２つの抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む２つの抗体軽鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインである。例えば、図６のＡ、Ｄ、及びＦを参照。いくつかの実施形態において、ＶＨ／ＶＬは、抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合され、例えば、図６のＡに示されるとおりである。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインの第１のＣ末端に融合され、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインの第２のＣ末端に融合され、例えば、図６のＤに示されるとおりである。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、１つの変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのＮ末端は、直接またはリンカーを介して２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合され、例えば、図６のＦに示されるとおりである。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］、
に従う構造を含む第１の抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］、
に従う構造を含む抗体軽鎖ポリペプチドと、式［ＩＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］、
に従う構造を含む第２の抗体重鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインである。例えば、図６のＢ、Ｃ、Ｅ、Ｇ、及びＨを参照。いくつかの実施形態において、ＶＨ／ＶＬは、抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端または第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端のうちの一方に融合され、例えば、図６のＢに示されるとおりである。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第２の抗体重鎖ポリペプチドのヒンジ領域のＮ末端に融合され、例えば、図６のＣに示されるとおりである。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合され、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合され、例えば、図６のＥに示されるとおりである。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、１つの変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのＮ末端は、直接またはリンカーを介して、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端または第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端のうちの一方に融合され、例えば、図６のＧ及びＨに示されるとおりである。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、図６のＡに示されるとおりである。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む、２つの抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む２つの抗体軽鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合される（例えば、本開示のリンカーを介して共有結合的に融合される）。いくつかの実施形態において、各重鎖は、軽鎖と対になる。いくつかの実施形態において、各重鎖のＶＨドメインは、それぞれ対をなす軽鎖のＶＬドメインと抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、図６のＢに示されるとおりである。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む第１の抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む抗体軽鎖ポリペプチドと、式［ＩＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］、
に従う構造を含む第２の抗体重鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含む。いくつかの実施形態において、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合される（例えば、本開示のリンカーを介して共有結合的に融合される）。いくつかの実施形態において、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合される（例えば、本開示のリンカーを介して共有結合的に融合される）。いくつかの実施形態において、第１の重鎖は、軽鎖と対になる。いくつかの実施形態において、第１の重鎖のＶＨドメインは、軽鎖のＶＬドメインと抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、図６のＤに示されるとおりである。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む、２つの抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む２つの抗体軽鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２－ＣＨ３は、抗体Ｆｃドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、２つのＣＨ３ドメインの第１のＣ末端に融合され、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、２つのＣＨ３ドメインの第２のＣ末端に融合される（例えば、本開示のリンカーを介して共有結合的に融合される）。いくつかの実施形態において、各重鎖は、軽鎖と対になる。いくつかの実施形態において、各重鎖のＶＨドメインは、それぞれ対をなす軽鎖のＶＬドメインと抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、図６のＥに示されるとおりである。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む第１の抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む抗体軽鎖ポリペプチドと、式［ＩＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］、
に従う構造を含む第２の抗体重鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、第１の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合され、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、第２の抗体重鎖ポリペプチドのＣＨ３ドメインのＣ末端に融合される（例えば、本開示のリンカーを介して共有結合的に融合される）。いくつかの実施形態において、第１の重鎖は、軽鎖と対になる。いくつかの実施形態において、第１の重鎖のＶＨドメインは、軽鎖のＶＬドメインと抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、図６のＦに示されるとおりである。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
に従う構造を含む、２つの抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
に従う構造を含む２つの抗体軽鎖ポリペプチドとを含む抗原結合分子を含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、融合タンパク質は、１つの変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのＮ末端は、２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合される（例えば、本開示のリンカーを介して共有結合的に融合される）。いくつかの実施形態において、各重鎖は、軽鎖と対になる。いくつかの実施形態において、各重鎖のＶＨドメインは、それぞれ対をなす軽鎖のＶＬドメインと抗原結合部位を形成する。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質の前記第１及び第２のＦｃドメインは、エフェクター機能を低下させるために、ＥＵナンバリングに従って１つ以上の以下のＦｃ変異：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質の前記第１及び第２のＦｃドメインは、エフェクター機能を低下させるために、ＥＵナンバリングに従って以下のＦｃ変異：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質の前記第１及び第２のＦｃドメインは、エフェクター機能を低下させるために、ＥＵナンバリングに従って以下のＦｃ変異：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、Ｇ２３７Ａ、及びＫ３２２Ａを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質の前記第１及び第２のＦｃドメインは、ヘテロ二量体形成を促進するために以下のアミノ酸置換：Ｙ３４９Ｃ／Ｔ３６６Ｗ（ノブ）ならびにＳ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ（ホール）を含む。いくつかの実施形態において、抗体Ｆｃドメインの一方または両方は、Ｃ末端リジンを有さない。いくつかの実施形態において、第１及び第２のＦｃドメインは、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃドメインである。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、半抗体から生成後構築によって形成することができ、それによって、重鎖と軽鎖の誤対形成の問題を解決する。これらの抗体は、半抗体のヘテロ二量体化を促進するための改変を含む場合が多い。例示的なシステムとしては、ノブ・イントゥ・ホール、ＩｇＧ１（ＥＥＥ－ＲＲＲ）、ＩｇＧ２（ＥＥＥ－ＲＲＲＲ）（Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ（２０１２））及びデュオボディ（Ｆ４０５Ｌ－Ｋ４０９Ｒ）が挙げられるが、これらに限定されない。そのような場合、半抗体は、別々の細胞株で個別に産生され、精製される。次いで、精製された抗体は、後で二重特異性抗体に構築される半抗体を得るために、穏やかな還元に供された。その後、ヘテロ二量体の二重特異性抗体は、従来の精製方法を使用して混合物から精製された。
いくつかの実施形態において、優先的な鎖対形成によらない二重特異性抗体生成に対する戦略も使用できる。これら戦略は、一般にヘテロ二量体がホモ二量体とは異なる生化学的または生物物理学的特性を有することになるような様式で抗体に遺伝子改変を導入することを含み、それにより、構築後または発現ヘテロ二量体をホモ二量体から選択的に精製することができる。一例は、ＩｇＧ１ ＣＨ３ドメインにＨ４３５Ｒ／Ｙ４３６Ｆを導入して、プロテインＡ樹脂とのＦｃの結合を止めた後、Ｈ４３５Ｒ／Ｙ４３６Ｆバリアントを野生型Ｆｃと共発現させることである。２コピーのＨ４３５Ｒ／Ｙ４３６Ｆを含む得られたホモ二量体抗体は、プロテインＡカラムと結合することができないが、１コピーのＨ４３５Ｒ／Ｙ４３６Ｆ変異を含むヘテロ二量体抗体は、ホモ二量体野生型抗体の強い相互作用と比較して、プロテインＡに対して低下した親和性を有することになる（Ｔｕｓｔｉａｎ ｅｔ ａｌ Ｍａｂｓ ２０１６）。その他の例としては、カッパ／ラムダ抗体（Ｆｉｓｃｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ ２０１５）及びそれぞれの鎖への差のある電荷の導入（Ｅ３５７Ｑ、Ｓ２６７Ｋ またはＮ２０８Ｄ／Ｑ２９５Ｅ／Ｎ３８４Ｄ／Ｑ４１８Ｅ／Ｎ４２１Ｄ）（ＵＳ２０１８／０１４２０４０Ａ１；（Ｓｔｒｏｐ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ （２０１２））が挙げられる。
いくつかの実施形態において、二重特異性抗体は、付加的な結合部位を免疫グロブリン重鎖または軽鎖のいずれかに融合することにより生成することができる。付加的な結合部位の例としては、可変領域、ｓｃＦｖ、Ｆａｂ、ＶＨＨ、及びペプチドが挙げられるが、これらに限定されない。
いくつかの実施形態において、ヘテロ二量体変異及び／またはＦｃガンマ受容体結合を改変する変異は、結果としてＦｃ安定性を低下させた。したがって、安定性を高める付加的な変異（複数可）がＦｃ領域に追加された。例えば、Ａ２８７Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｖ２５９Ｃ及びＬ３０６Ｃ、Ｒ２９２Ｃ及びＶ３０２Ｃ、ならびにＶ３２３Ｃ及びＩ３３２Ｃなどの１対以上のジスルフィド結合がＦｃ領域に導入される。別の例は、ヒンジジスルフィドを安定させるために、ＩｇＧ４ベースの二重特異性抗体にＳ２２８Ｐを導入することである。さらなる例としては、Ｆｃ安定性及び凝集抵抗性を向上させるためにＫ３３８Ｉ、Ａ３３９Ｋ、及びＫ３４０Ｓ変異を導入することが挙げられる（Ｇａｏ ｅｔ ａｌ，２０１９ Ｍｏｌ Ｐｈａｒｍ．２０１９；１６：３６４７）。
いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、リンカーを含む。いくつかの実施形態において、リンカーは、化学リンカーであり得る（例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，９（３），２９９－３０５，１９９６で開示されているものを参照）。合成化学リンカーとしては、ペプチドを架橋するために通常使用される架橋薬剤、例えば、Ｎ－ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）、スベリン酸ジスクシンイミジル（ＤＳＳ）、ビス（スクシンイミジル）スベラート（ＢＳ３）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオナート）（ＤＳＰ）、ジチオビス（スクシンイミジルプロピオナート）（ＤＴＳＳＰ）、エチレングリコールビス（スクシンイミジルスクシナート）（ＥＧＳ）、エチレングリコールビス（スルホスクシンイミジルスクシナート）（スルホ－ＥＧＳ）、酒石酸ジスクシンイミジル（ＤＳＴ）、酒石酸ジスルホスクシンイミジル（スルホ－ＤＳＴ）、ビス［２－（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（ＢＳＯＣＯＥＳ）、及びビス［２－（スクシンイミドオキシカルボニルオキシ）エチル］スルホン（スルホ－ＢＳＯＣＯＥＳ）が挙げられる。
いくつかの実施形態において、リンカーは、アミノ酸またはペプチドベースのリンカーである。いくつかの実施形態において、ポリペプチドリンカーは、少なくとも５アミノ酸長のペプチド、または５から１００、もしくは１０から５０アミノ酸長のペプチドである。一実施形態において、前記ペプチドリンカーは、Ｇ、Ｓ、ＧＳ、ＳＧ、ＳＧＧ、ＧＧＳ、及びＧＳＧ（Ｇ＝グリシン及びＳ＝セリン）である。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７４）、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７５）、（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７６）、Ｓ（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８６）、Ｓ（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８７）、またはＳ（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８８）を含み、ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり、ｎ＝０、１、２または３である。いくつかの実施形態において、リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９）、ＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７７）、またはＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧ（配列番号７８）を含む。
抗原結合分子
いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子は、ＣＤ８ａ上のエピトープと結合し、抗原結合分子のＣＤ８ａとの結合は、標的細胞または抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子とＣＤ８ａａまたはＣＤ８ａｂの相互作用を妨げない。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子は、ＣＤ８ｂ上のエピトープと結合し、抗原結合分子のＣＤ８ｂとの結合は、標的細胞または抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子とＣＤ８ａｂの相互作用を妨げない。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ヒトＣＤ８と結合し、融合タンパク質のＣＤ８との結合は、ＭＨＣクラスＩとＣＤ８の相互作用を妨げない。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子は、ＣＤ８ａｂ上のエピトープと結合し、抗原結合分子のＣＤ８ａｂとの結合は、標的細胞または抗原提示細胞上のＭＨＣ クラスＩ分子とＣＤ８ａａまたはＣＤ８ａｂの相互作用を妨げない。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子は、ＣＤ８ａ上のエピトープと結合し、抗原結合分子のＣＤ８ａとの結合は、標的細胞または抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子とＣＤ８ａｂの相互作用を妨げない。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、ヒトＣＤ８と結合し、融合タンパク質のＣＤ８との結合は、ＭＨＣクラスＩとＣＤ８の相互作用を妨げない。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子は、ＣＤ８α上のエピトープと結合し、抗原結合分子のＣＤ８αとの結合は、標的細胞または抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子とＣＤ８ααまたはＣＤ８αβの相互作用を妨げない。いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子は、ＣＤ８β上のエピトープと結合し、抗原結合分子のＣＤ８βとの結合は、標的細胞または抗原提示細胞上のＭＨＣクラスＩ分子とＣＤ８αβの相互作用を妨げない。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質がＭＨＣクラスＩとＣＤ８の相互作用を妨げるか否かは、例えば、抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質の存在下または非存在下においてＣＤ８＋ Ｔ細胞（例えば、抗原刺激時）の活性化状態をアッセイすることによってアッセイすることができる。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＲＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＮＹＹＭＡＷＶＲＱＡＰＴＫＧＬＥＷＶＡＹＩＮＴＧＧＧＴＴＹＹＲＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＤＡＫＳＴＬＹＬＱＭＤＳＬＲＳＥＤＴＡＴＹＹＣＴＴＡＩＧＹＹＦＤＹＷＧＱＧＶＭＶＴＶＳＳ（配列番号１０２）の配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＬＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＥＴＶＳＩＥＣＬＡＳＥＤＩＹＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＫＳＰＱＶＬＩＹＡＡＮＲＬＱＤＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＱＹＳＬＫＩＳＧＭＱＰＥＤＥＧＤＹＦＣＬＱＧＳＫＦＰＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１０３）の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＦＳＬＩＳＤＳＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧＧＩＷＡＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＳＱＧＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＦＣＴＳＮＲＥＳＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１０４）の配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＤＫＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＤＫＹＩＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＲＱＬＩＨＹＴＳＴＬＶＳＧＴＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＲＤＹＳＦＳＩＳＳＶＥＳＥＤＩＡＳＹＹＣＬＱＹＤＴＬＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１０５）の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、ＥＶＫＬＱＥＳＧＰＳＬＶＱＰＳＱＴＬＳＬＴＣＳＶＳＧＦＳＬＩＳＤＳＶＨＷＶＲＱＰＰＧＫＧＬＥＷＭＧＧＩＷＡＤＧＳＴＤＹＮＳＡＬＫＳＲＬＳＩＳＲＤＴＳＫＳＱＧＦＬＫＭＮＳＬＱＴＤＤＴＡＩＹＦＣＴＳＡＲＥＳＹＹＦＤＹＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１０６）の配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＡＳＬＳＡＳＬＧＤＫＶＴＩＴＣＱＡＳＱＮＩＤＫＹＩＡＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＲＱＬＩＨＹＴＳＴＬＶＳＧＴＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＲＤＹＳＦＳＩＳＳＶＥＳＥＤＩＡＳＹＹＣＬＱＹＡＴＬＹＴＦＧＡＧＴＫＬＥＬＫ（配列番号１０７）の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＡＬＶＱＰＧＲＳＬＫＬＳＣＡＡＳＧＬＴＦＳＤＣＹＭＡＷＶＲＱＴＰＴＫＧＬＥＷＶＳＹＩＳＳＤＧＧＳＴＹＹＧＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＳＴＬＹＬＱＭＮＳＬＲＳＥＤＭＡＴＹＹＣＡＣＡＴＤＬＳＳＹＷＳＦＤＦＷＧＰＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号１０８）の配列を含むＶＨドメイン及びＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＰＶＳＬＧＥＲＶＴＩＳＣＲＡＳＱＧＩＳＮＮＬＮＷＹＱＱＫＰＤＧＴＩＫＰＬＩＹＨＴＳＮＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＹＳＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＭＹＹＣＱＱＤＡＴＦＰＬＴＦＧＳＧＴＫＬＥＩＫ（配列番号１０９）の配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号５８の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号５９の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号６２の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６３の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号６４の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６５の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号６６の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６７の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号６８の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号６９の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号７０の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号７１の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号７２の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号７３の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号１８５の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号１８６の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２４５の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２４６の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２４７の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２４８の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２４９の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２５０の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２５１の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２５２の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２５３の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２５４の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２５５の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２５６の配列を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体または融合タンパク質は、配列番号２５７の配列を含むＶＨドメイン及び配列番号２５８の配列を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗原結合分子（及び融合タンパク質）は、ヒトＣＤ８ｂ及び／またはヒトＣＤ８ａｂと特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、ヒト抗体または抗体フラグメントである。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、ヒト化抗体または抗体フラグメントである。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞（例えば、ヒトＮＫ細胞）上に発現する、ヒトＣＤ８ａ及び／またはヒトＣＤ８ａａとの結合よりも少なくとも１０倍、少なくとも２０倍、少なくとも３０倍、少なくとも４０倍、少なくとも５０倍、少なくとも６０倍、少なくとも７０倍、少なくとも８０倍、少なくとも９０倍、少なくとも１００倍、または少なくとも２００倍高い親和性でヒトＣＤ８ｂ及び／またはヒトＣＤ８ａｂと特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上に発現する、ヒトＣＤ８ａ及び／またはヒトＣＤ８ａａとの結合よりも少なくとも１０倍高い親和性でヒトＣＤ８ｂ及び／またはヒトＣＤ８ａｂと特異的に結合する。いくつかの実施形態において、ヒトＣＤ８ｂ及び／またはヒトＣＤ８ａｂは、ヒト細胞、例えば、ヒトＴ細胞の表面上に発現する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、表面上にヒトＣＤ８ａｂヘテロ二量体を発現する細胞（例えば、ヒトＴ細胞）と１０００ｎＭ未満のＥＣ５０で特異的に結合する。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、ヒトＣＤ８＋ Ｔ細胞と特異的に結合する。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または１、２、または３つの抗体ｘｈＣＤ８ｖ１の軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ８の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ８の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号６３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ２の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ２の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号６５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ３の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ３の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号６７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ４の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ４の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号６８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号６９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ５の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ５の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号７０の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号７１の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ６の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ６の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトである。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号７２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号７３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ７の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ７の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態において、抗体は、ヒトである。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、Ｘ１がＳ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ２がＹ、Ｌ、Ｈ、またはＦである、Ｘ１Ｘ２ＡＩＳのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２５９）と、Ｘ１がＧまたはＨであり、Ｘ２がＩまたはＦであり、Ｘ３がＩ、Ｎ、またはＭであり、Ｘ４がＧ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ５がＡ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ６がＡ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ７がＴ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、Ｑ、またはＡであり、Ｘ８がＡまたはＴであり、Ｘ９がＮまたはＫであり、Ｘ１０がＡまたはＮであり、Ｘ１１がＱまたはＴである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＸ１１Ｇのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６０）と、Ｘ１がＤまたはＡであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ３がＡ、Ｌ、Ｐ、またはＹであり、Ｘ４がＩまたはＬであり、Ｘ５がＲ、Ａ、Ｑ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＤであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、Ａ、またはＳである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＬＦＸ６Ｘ７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２６１）とを含むＶＨドメイン、ならびにＸ１がＲまたはＧであり、Ｘ２がＡまたはＴであり、Ｘ３がＱまたはＥであり、Ｘ４がＥ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ５がＹ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＶである、Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５ＧＸ６ＬＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（配列番号２６２）と、Ｘ１がＡまたはＳであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｑ、またはＤであり、Ｘ３がＮ、Ｒ、Ａ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ４がＱまたはＡであり、Ｘ５がＳまたはＤである、ＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２（配列番号２６３）と、Ｘ１がＳ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ａ、またはＥであり、Ｘ２がＴ、Ｉ、またはＳであり、Ｘ３がＹ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ４がＤ、Ｇ、Ｔ、Ｅ、Ｑ、Ａ、またはＹであり、Ｘ５がＡ、Ｔ、Ｒ、Ｓ、Ｋ、またはＹである、ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＷＴのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３（配列番号２６４）とを含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ（配列番号２７４）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号２７５）を含むＦＷ－２、配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７６）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２４６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ９の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ９の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２４５の配列のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２４６の配列のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ（配列番号２７４）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号２７５）を含むＦＷ－２、配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７６）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５１の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２５２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５２のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１２の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ１２の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２５１の配列からのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２５２の配列からのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ（配列番号２７４）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号２７５）を含むＦＷ－２、配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７６）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２５４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１３の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ１３の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２５３の配列からのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２５４の配列からのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳ（配列番号２７４）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧ（配列番号２７５）を含むＦＷ－２、配列ＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２７６）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、Ｘ１がＳ、Ｄ、Ｅ、Ａ、またはＱであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、またはＴである、Ｘ１ＹＸ２ＭＳのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２６８）と、Ｘ１がＴ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、またはＡであり、Ｘ２がＹ、Ｗ、Ｆ、またはＨであり、Ｘ３がＡ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、またはＴであり、Ｘ４がＧまたはＥであり、Ｘ５がＳまたはＩであり、Ｘ６がＡまたはＧである、ＤＩＸ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＴＸ６ＹＡＤＳＶＫＧのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６９）と、Ｘ１がＳまたはＡであり、Ｘ２がＮ、Ｈ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、Ｙ、またはＲであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ４がＡ、Ｖ、Ｒ、Ｅ、またはＳであり、Ｘ５がＤまたはＳであり、Ｘ６がＤ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７がＬ、Ｆ、またはＭであり、Ｘ８がＩ、Ｙ、またはＶである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ４ＷＸ５Ｘ６ＡＸ７ＤＸ８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２７０）とを含むＶＨドメイン、ならびにＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、ＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２８１）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２８２）を含むＦＷ－２、配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８３）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２４８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１０の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ１０の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２４７の配列からのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２４８の配列からのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２８１）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２８２）を含むＦＷ－２、配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８３）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２５０の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２４９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインは、配列番号２５０のアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１１の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ１１の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２４９の配列からのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２５０の配列からのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２８１）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２８２）を含むＦＷ－２、配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８３）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２５６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１４の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ１４の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２５５の配列からのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２５６の配列からのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２８１）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２８２）を含むＦＷ－２、配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８３）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列番号２５７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、及び／またはＶＬドメインは、配列番号２５８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、抗体ｘｈＣＤ８ｖ１５の１、２、または３つの重鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）及び／または抗体ｘｈＣＤ８ｖ１５の１、２、または３つの軽鎖ＣＤＲ（例えば、表１～３に示される）を含む。いくつかの実施形態では、抗体は、ヒト化される。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２５７の配列からのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２５８の配列からのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳ（配列番号２８１）を含むＦＷ－１、配列ＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳ（配列番号２８２）を含むＦＷ－２、配列ＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８３）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
抗体可変ドメインのＣＤＲ配列に関する複数の定義が当該技術分野において知られている。他に指定がない限り、ＣＤＲ配列は、Ｋａｂａｔの定義に従って本明細書に記載されている（例えば、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ （１９９１），ｖｏｌｓ．１－３を参照）。ただし、他の定義は知られており、使用が意図される。例えば、いくつかの実施形態において、ＣＤＲ配列は、Ｃｈｏｔｈｉａ（例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１－９１７（１９８７）を参照）の定義に記載される場合がある。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、Ｘ１がＧ、Ｙ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｎ、またはＨであり、Ｘ３がＳ、Ｔ、Ｒ、Ｈ、Ｙ、Ｇ、またはＰであり、Ｘ４がＳ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ５がＹ、Ｌ、Ｈ、またはＦである、ＧＸ１Ｘ２ＦＸ３Ｘ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２６５）と、Ｘ１がＩ、Ｎ、またはＭであり、Ｘ２がＧ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ４がＡ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ５がＴ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、Ｑ、またはＡである、Ｘ１ＰＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６６）と、Ｘ１がＤまたはＡであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ３がＡ、Ｌ、Ｐ、またはＹであり、Ｘ４がＩまたはＬであり、Ｘ５がＲ、Ａ、Ｑ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＤであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、Ａ、またはＳである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＬＦＸ６Ｘ７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２６７）とを含むＶＨドメイン、ならびにＸ１がＲまたはＧであり、Ｘ２がＡまたはＴであり、Ｘ３がＱまたはＥであり、Ｘ４がＥ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ５がＹまたはＳであり、Ｘ６がＡまたはＶである、Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５ＧＸ６ＬＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（配列番号２６２）と、Ｘ１がＡまたはＳであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｑ、またはＤであり、Ｘ３がＮ、Ｒ、Ａ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ４がＱまたはＡであり、Ｘ５がＳまたはＤである、ＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２（配列番号２６３）と、Ｘ１がＳ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ａ、またはＥであり、Ｘ２がＴ、Ｉ、またはＳであり、Ｘ３がＹ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ４がＤ、Ｇ、Ｔ、Ｅ、Ｑ、Ａ、またはＹであり、Ｘ５がＡ、Ｔ、Ｒ、Ｓ、Ｋ、またはＹである、ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＷＴを含むアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３（配列番号２６４）とを含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号２７８）を含むＦＷ－１、配列ＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩ（配列番号２７９）を含むＦＷ－２、配列ＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８０）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号２７８）を含むＦＷ－１、配列ＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩ（配列番号２７９）を含むＦＷ－２、配列ＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８０）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号２７８）を含むＦＷ－１、配列ＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩ（配列番号２７９）を含むＦＷ－２、配列ＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８０）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳ（配列番号２７８）を含むＦＷ－１、配列ＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩ（配列番号２７９）を含むＦＷ－２、配列ＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８０）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２７７）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣ（配列番号２８９）含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹ（配列番号２９０）を含むＦＷ－２、配列ＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣ（配列番号２９１）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９２）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、Ｘ１がＳ、Ｄ、Ｅ、Ｑ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ２がＳ、Ｄ、Ｅ、Ａ、またはＱである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｙのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２７１）と、Ｘ１がＴ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、ＲまたはＡであり、Ｘ２がＹ、Ｗ、Ｆ、またはＨであり、Ｘ３がＡ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、またはＴであり、Ｘ４がＧまたはＥであり、Ｘ５がＳまたはＩである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２７２）と、Ｘ１がＳまたはＡであり、Ｘ２がＮ、Ｈ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、Ｙ、またはＲであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ４がＡ、Ｖ、Ｒ、Ｅ、またはＳであり、Ｘ５がＤまたはＳであり、Ｘ６がＤ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７がＬ、Ｆ、またはＭであり、Ｘ８がＩ、Ｙ、またはＶである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ４ＷＸ５Ｘ６ＡＸ７ＤＸ８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２７３）とを含むＶＨドメイン、ならびにＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、ＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号２８６）を含むＦＷ－１、配列ＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩ（配列番号２８７）を含むＦＷ－２、配列ＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８８）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号２８６）を含むＦＷ－１、配列ＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩ（配列番号２８７）を含むＦＷ－２、配列ＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８８）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。
いくつかの実施形態において、本開示の抗ＣＤ８抗体は、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメインならびに配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む。いくつかの実施形態において、ＶＨドメインは、配列ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳ（配列番号２８６）を含むＦＷ－１、配列ＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＳＤＩ（配列番号２８７）を含むＦＷ－２、配列ＴＡＹＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲ（配列番号２８８）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＷＧＱＧＴＭＶＴＶＳＳ（配列番号２８４）もしくはＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ（配列番号２８５）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、ＶＬドメインは、配列ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣ（配列番号２９３）を含むＦＷ－１、配列ＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹ（配列番号２９４）を含むＦＷ－２、配列ＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＲＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣ（配列番号２９５）を含むＦＷ－３、及び／または配列ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ（配列番号２９６）を含むＦＷ－４をさらに含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表１に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含むＶＨドメインならびに表１に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＶＬドメインを含む抗ＣＤ８抗体を提供する。例えば、抗ＣＤ８抗体は、表１に示される抗体ｘｈＣＤ８ｖ１、ｘｈＣＤ８ｖ１．１、ｘｈＣＤ８ｖ２、ｘｈＣＤ８ｖ３、ｘｈＣＤ８ｖ４、ｘｈＣＤ８ｖ５、ｘｈＣＤ８ｖ６、ｘｈＣＤ８ｖ７、ｘｈＣＤ８ｖ８、ｘｈＣＤ８ｖ９、ｘｈＣＤ８ｖ１０、ｘｈＣＤ８ｖ１１、ｘｈＣＤ８ｖ１２、ｘｈＣＤ８ｖ１３、ｘｈＣＤ８ｖ１４、ｘｈＣＤ８ｖ１５、Ｖ９ファミリー、またはＶ１１ファミリーの６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表２に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含むＶＨドメインならびに表２に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＶＬドメインを含む抗ＣＤ８抗体を提供する。例えば、抗ＣＤ８抗体は、表２に示される抗体ｘｈＣＤ８ｖ１、ｘｈＣＤ８ｖ１．１、ｘｈＣＤ８ｖ２、ｘｈＣＤ８ｖ３、ｘｈＣＤ８ｖ４、ｘｈＣＤ８ｖ５、ｘｈＣＤ８ｖ６、ｘｈＣＤ８ｖ７、ｘｈＣＤ８ｖ８、ｘｈＣＤ８ｖ９、ｘｈＣＤ８ｖ１０、ｘｈＣＤ８ｖ１１、ｘｈＣＤ８ｖ１２、ｘｈＣＤ８ｖ１３、ｘｈＣＤ８ｖ１４、ｘｈＣＤ８ｖ１５、Ｖ９ファミリー、またはＶ１１ファミリーの６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表１に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含むＶＨドメイン、ならびに表１に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＶＬドメインを含む抗ＣＤ８抗体を含む融合タンパク質を提供する。例えば、融合タンパク質の抗ＣＤ８抗体は、表１に示される抗体ｘｈＣＤ８ｖ１、ｘｈＣＤ８ｖ１．１、ｘｈＣＤ８ｖ２、ｘｈＣＤ８ｖ３、ｘｈＣＤ８ｖ４、ｘｈＣＤ８ｖ５、ｘｈＣＤ８ｖ６、ｘｈＣＤ８ｖ７、ｘｈＣＤ８ｖ８、ｘｈＣＤ８ｖ９、ｘｈＣＤ８ｖ１０、ｘｈＣＤ８ｖ１１、ｘｈＣＤ８ｖ１２、ｘｈＣＤ８ｖ１３、ｘｈＣＤ８ｖ１４、ｘｈＣＤ８ｖ１５、Ｖ９ファミリー、またはＶ１１ファミリーの６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表２に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含むＶＨドメイン、ならびに表２に列挙されている単一の抗体のＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＶＬドメインを含む抗ＣＤ８抗体を含む融合タンパク質を提供する。例えば、融合タンパク質の抗ＣＤ８抗体は、表２に示される抗体ｘｈＣＤ８ｖ１、ｘｈＣＤ８ｖ１．１、ｘｈＣＤ８ｖ２、ｘｈＣＤ８ｖ３、ｘｈＣＤ８ｖ４、ｘｈＣＤ８ｖ５、ｘｈＣＤ８ｖ６、ｘｈＣＤ８ｖ７、ｘｈＣＤ８ｖ８、ｘｈＣＤ８ｖ９、ｘｈＣＤ８ｖ１０、ｘｈＣＤ８ｖ１１、ｘｈＣＤ８ｖ１２、ｘｈＣＤ８ｖ１３、ｘｈＣＤ８ｖ１４、ｘｈＣＤ８ｖ１５、Ｖ９ファミリー、またはＶ１１ファミリーの６つのＣＤＲを含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表３に列挙されているＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含むＶＨドメイン、ならびに表３に列挙されているＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＶＬドメインを含む抗ＣＤ８抗体を提供する（いくつかの実施形態において、ＶＨ及びＶＬドメインは、表３に列挙されている同じ単一の抗体由来である）。例えば、抗ＣＤ８抗体は、表３に示される抗体ｘｈＣＤ８ｖ１、ｘｈＣＤ８ｖ１．１、ｘｈＣＤ８ｖ２、ｘｈＣＤ８ｖ３、ｘｈＣＤ８ｖ４、ｘｈＣＤ８ｖ５、ｘｈＣＤ８ｖ６、ｘｈＣＤ８ｖ７、ｘｈＣＤ８ｖ８、ｘｈＣＤ８ｖ９、ｘｈＣＤ８ｖ１０、ｘｈＣＤ８ｖ１１、ｘｈＣＤ８ｖ１２、ｘｈＣＤ８ｖ１３、ｘｈＣＤ８ｖ１４、またはｘｈＣＤ８ｖ１５のＶＨ及びＶＬを含む。いくつかの実施形態において、本開示は、表３に列挙されているＶＨドメインのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、及びＣＤＲ－Ｈ３配列を含むＶＨドメイン、ならびに表３に列挙されているＶＬドメインのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、及びＣＤＲ－Ｌ３配列を含むＶＬドメインを含む抗ＣＤ８抗体を含む融合タンパク質を提供する（いくつかの実施形態において、ＶＨ及びＶＬドメインは、表３に列挙されている同じ単一の抗体由来である）。いくつかの実施形態において、本開示は、表３に列挙されている単一の抗体に関するＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列を含む抗ＣＤ８抗体を提供する。いくつかの実施形態において、本開示は、表３に列挙されている単一の抗体に関するＶＨドメイン配列及びＶＬドメイン配列を含む抗ＣＤ８抗体を含む融合タンパク質を提供する。例えば、融合タンパク質の抗ＣＤ８抗体は、表３に示される抗体ｘｈＣＤ８ｖ１、ｘｈＣＤ８ｖ１．１、ｘｈＣＤ８ｖ２、ｘｈＣＤ８ｖ３、ｘｈＣＤ８ｖ４、ｘｈＣＤ８ｖ５、ｘｈＣＤ８ｖ６、ｘｈＣＤ８ｖ７、ｘｈＣＤ８ｖ８、ｘｈＣＤ８ｖ９、ｘｈＣＤ８ｖ１０、ｘｈＣＤ８ｖ１１、ｘｈＣＤ８ｖ１２、ｘｈＣＤ８ｖ１３、ｘｈＣＤ８ｖ１４、またはｘｈＣＤ８ｖ１５のＶＨ及びＶＬを含む。
本明細書で開示される抗ＣＤ８抗体、または抗原結合ドメイン、または抗体フラグメントのいずれか１つを含む融合タンパク質が本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、を含む。
いくつかの実施形態において、本開示は、表１３に列挙されている単一の融合タンパク質の２つの重鎖配列及び２つの軽鎖配列を含む融合タンパク質を提供し、重鎖配列の一方はＩＬ－１０融合物を有し、他方の重鎖配列はＩＬ－１０融合物を含まず、２つの軽鎖配列は同一である。いくつかの実施形態において、ＩＬ－１０融合物を含まない重鎖配列は、Ｃ末端にリジンを含む。いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、図６に示される形式Ｆのものである。例えば、いくつかの実施形態において、融合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、（１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む；（２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む；（３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む；（４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む；（５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む；（６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む；（７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む；（８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む；（９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む；（１０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む；（１１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む；（１２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む；（１３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む；（１４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む；（１５）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む；（１６）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む；（１７）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む；（１８）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む；（１９）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む；（２０）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む；（２１）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む；（２２）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む；（２３）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む；または（２４）第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む。
本明細書に記載の抗体、抗体フラグメント、及び融合タンパク質のいずれかをコードするポリヌクレオチド（例えば、単離ポリヌクレオチド）が本明細書でさらに提供される。本明細書に記載の抗体、抗体フラグメント、及び融合タンパク質のいずれかをコードするベクター（例えば、発現ベクター）が本明細書でさらに提供される。
本明細書に記載のポリヌクレオチドまたはベクターのいずれかを含む宿主細胞（例えば、単離宿主細胞または宿主細胞株）が本明細書でさらに提供される。
本明細書に記載の抗体、抗体フラグメント、及び融合タンパク質のいずれかを生成する方法が本明細書でさらに提供される。いくつかの実施形態において、方法は、本開示の宿主細胞を抗体、抗体フラグメント、または融合タンパク質の生成に適した条件下で培養することを含む。いくつかの実施形態において、方法は、抗体、抗体フラグメント、または融合タンパク質を回収することをさらに含む。
抗体、抗体フラグメント、及び融合タンパク質は、例えば、下で例示される、組み換え法を使用して生成することができる。いくつかの実施形態において、抗体／融合タンパク質をコードする核酸を単離し、さらなるクローニングのため、または発現のために、複製可能なベクターに挿入することができる。抗体／融合タンパク質をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して、容易に単離及び配列決定することができる（例えば、抗体／フラグメントの重鎖及び軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブにより）。多くのベクターが当該技術分野において既知である。ベクター構成要素としては、一般に、シグナル配列、複製起点、１つ以上のマーカー遺伝子、エンハンサーエレメント、プロモーター、及び転写終結配列のうちの１つ以上が挙げられるが、これらに限定されない。本明細書におけるベクター内のＤＮＡのクローニングまたは発現に適した宿主細胞は、原核生物、酵母、または高等真核生物の細胞である。組み換え技術を使用するとき、抗体／融合タンパク質は、細胞内で産生され得るか、細胞膜周辺腔内で産生され得るか、または培地に直接分泌され得る。抗体／フラグメントが細胞内で産生される場合、宿主細胞または溶解フラグメントのいずれかの粒状細片が、例えば、遠心分離または限外ろ過によって除去される。抗体／融合タンパク質が培地に分泌される場合、かかる発現系の上清は、一般に、市販のタンパク質濃縮フィルターを使用して最初に濃縮される。
いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、例えば、融合タンパク質及び１つ以上の薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物の一部である。本明細書に記載の医薬組成物及び製剤は、所望の純度を有する活性成分（例えば、融合タンパク質）を１つ以上の任意の薬学的に許容される担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と混合することにより、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で調製され得る。薬学的に許容される担体は、一般にレシピエントに対して、使用される投与量及び濃度で無毒であり、それらとしては、緩衝剤、例えば、リン酸塩、クエン酸塩、及び他の有機酸；アスコルビン酸及びメチオニンを含む酸化防止剤；防腐剤；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば、血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えば、ポリビニルピロリドン；アミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストリンを含む、単糖、二糖、及び他の炭水化物；キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ；糖、例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトール；塩形成対イオン、例えば、ナトリウム；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、及び／または非イオン性界面活性剤、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が含まれるが、これらに限定されない。いくつかの実施形態において、本開示の融合タンパク質は、凍結乾燥される。
本開示の特定の態様は、がんまたは慢性感染症を処置する方法に関する。いくつかの実施形態において、方法は、有効量の融合タンパク質または抗体、あるいは融合タンパク質もしくは抗体及び学的に許容される担体を含む医薬組成物を患者に投与することを含む。いくつかの実施形態において、前記処置を必要とする患者は、がんと診断されている。
いくつかの実施形態において、融合タンパク質または組成物は、Ｔ細胞療法、がんワクチン、化学療法剤、または免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）と組み合わせて投与される。いくつかの実施形態において、化学療法剤は、キナーゼ阻害剤、代謝拮抗薬、細胞毒もしくは細胞***阻害剤、抗ホルモン剤、白金ベースの化学療法剤、メチルトランスフェラーゼ阻害剤、抗体、または抗がんペプチドである。いくつかの実施形態において、免疫チェックポイント阻害剤は、ＰＤ－Ｌ１、ＰＤ－１、ＣＴＬＡ－４、ＣＥＡＣＡＭ、ＬＡＩＲ１、ＣＤ１６０、２Ｂ４、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ２７６、ＶＴＣＮ１、ＨＶＥＭ、ＫＩＲ、Ａ２ＡＲ、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＧＡＬＳ、アデノシン、ＴＧＦＲ、ＯＸ４０、ＣＤ１３７、ＣＤ４０、ＣＤ４７、ＴＲＥＭ１、ＴＲＥＭ２、ＨＬＡ－Ｇ、ＣＣＲ４、ＣＣＲ８、ＣＤ３９、ＣＤ７３、ＩＤＯ、ＣＳＦ１Ｒ、ＴＩＭ－３、ＢＴＬＡ、ＶＩＳＴＡ、ＬＡＧ－３、ＴＩＧＩＴ、ＩＤＯ、ＭＩＣＡ／Ｂ、ＬＩＬＲＢ４、ＳＩＧＬＥＣ－１５、またはアルギナーゼを標的とし、以下に限定されないが、ＰＤ－１（例えば、抗ＰＤ－１抗体）、ＰＤ－Ｌ１（例えば、抗ＰＤ－Ｌ１抗体）、またはＣＴＬＡ－４（例えば、抗ＣＴＬＡ－４抗体）の阻害剤が挙げられる。いくつかの実施形態において、融合タンパク質または組成物は、ＩＬ－２ポリペプチド（変異タンパク質もしくはそのバリアントを含む）、またはＩＬ－２ポリペプチド（変異タンパク質もしくはそのバリアントを含む）を含む、以下に限定されない抗体：ＩＬ－２融合タンパク質（例えば、抗ＣＤ８：ＩＬ－２融合タンパク質）などの融合タンパク質と組み合わせて投与される。
抗ＰＤ－１抗体の例としては、ペンブロリズマブ、ニボルマブ、セミプリマブ、ジンベレリマブ（Ａｒｃｕｓ）、ササンリマブ（Ｐｆｉｚｅｒ）、ＪＴＸ－４０１４、スパルタリズマブ（ＰＤＲ００１；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、カムレリズマブ（ＳＨＲ１２１０；Ｊｉａｎｇｓｕ ＨｅｎｇＲｕｉ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）、シンチリマブ（ＩＢＩ３０８；Ｉｎｎｏｖｅｎｔ及びＥｌｉ Ｌｉｌｌｙ）、チスレリズマブ（ＢＧＢ－Ａ３１７）、トリパリマブ（ＪＳ ００１）、ドスタルリマブ（ＴＳＲ－０４２、ＷＢＰ－２８５）、ＩＮＣＭＧＡ０００１２（ＭＧＡ０１２）、ＡＭＰ－２２４、及びＡＭＰ－５１４（ＭＥＤＩ０６８０）が挙げられるが、これらに限定されない。抗ＰＤ－Ｌ１抗体の例としては、アテゾリズマブ、アベルマブ、デュルバルマブ、ＫＮ０３５、及びＣＫ－３０１（チェックポイント治療薬）が挙げられるが、これらに限定されない。ＰＤ－Ｌ１阻害剤の例（非抗体ベース）としては、ＡＵＮＰ１２、ＣＡ－１７０、及びＢＭＳ－９８６１８９が挙げられるが、これらに限定されない。抗ＣＴＬＡ－４抗体の例としては、イピリムマブ、トレメリムマブ、ＢＭＳ－９８６２１８、ＢＭＳ－９８６２４９、ＢＭＳ－９８６２８８、ＨＢＭ４００３、ＯＮＣ－３９２、ＫＮ０４４、ＡＤＧ１１６、ＡＤＵ－１６０４、ＡＧＥＮ１１８１、ＡＧＥＮ１８８４、ＭＫ－１３０８、及びＲＥＧＮ４６５９が挙げられるが、これらに限定されない。
Ｔ細胞療法の例としては、ＣＤ４＋またはＣＤ８＋ Ｔ細胞ベースの療法、養子Ｔ細胞療法、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ベースのＴ細胞療法、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）ベースの療法、自家Ｔ細胞療法、同種Ｔ細胞療法、及び形質導入ＴＣＲを有するＴ細胞を用いた療法が挙げられるが、これらに限定されない。例示的ながんワクチンとしては、樹状細胞ワクチン、１つ以上のがん抗原をコードする１つ以上のポリヌクレオチドを含むワクチン、及び１つ以上のがん抗原ペプチドを含むワクチンが挙げられるが、これらに限定されない。
本開示の特定の態様は、例えば、エクスビボで、Ｔ細胞を増殖させる方法に関する。いくつかの実施形態において、方法は、１つ以上のＴ細胞を、例えば、エクスビボで有効量の本開示の抗体または融合タンパク質と接触させることを含む。いくつかの実施形態において、１つ以上のＴ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である。いくつかの実施形態において、方法は、腫瘍または腫瘍試料から腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）を単離することをさらに含む。いくつかの実施形態において、方法は、１つ以上のＴ細胞を、ＩＬ－２ポリペプチド（変異タンパク質もしくはそのバリアントを含む）、またはＩＬ－２ポリペプチド（変異タンパク質もしくはそのバリアントを含む）を含む、以下に限定されない抗体：ＩＬ－２融合タンパク質（例えば、抗ＣＤ８：ＩＬ－２融合タンパク質）などの融合タンパク質と組み合わせて、例えば、エクスビボで有効量の本開示の抗体または融合タンパク質と接触させることを含む。
実施例１：ＩＬ－１０融合タンパク質の調製及びＳＴＡＴ３のリン酸化によりＳＴＡＴ３を活性化するＩＬ－１０の能力
材料及び方法
組み換えＤＮＡ技術
組み換えＤＮＡ操作を含む技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｍａｎｕａｌ；Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．，１９８９に以前に記載されている。すべての試薬は、製造業者の指示に従って使用した。ＤＮＡ配列は、二本鎖配列決定によって決定した。
遺伝子合成
所望の遺伝子セグメントを適切な鋳型を使用したＰＣＲによって生成するか、または合成オリゴヌクレオチドからＧｅｎｅｗｉｚ（Ｓｏｕｔｈ Ｐｌａｉｎｆｉｅｌｄ、ＮＪ）、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ、ＩＡ）もしくはＧｅｎｅＳｃｒｉｐｔ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）で合成した。Ｇｉｂｓｏｎ ａｓｓｅｍｂｌｙ（登録商標）法を使用するか、または制限消化に続くライゲーションを使用して遺伝子セグメントを発現ベクターにクローニングした。ＤＮＡを形質転換細菌から精製し、濃度をＵＶ可視分光法によって測定した。サブクローニングした遺伝子フラグメントのＤＮＡ配列を確認するためにＤＮＡシーケンシングを使用した。
抗体遺伝子の単離
ＣＤ８抗原と結合する抗体を、マウス抗体のヒト化またはインビトロファージディスプレイ系のいずれかを使用して生成した。
ヒト化のために、マウス残基の相補性決定領域（ＣＤＲ）を、親マウスフレームワークに近い配列類似性及び良好な安定性を示す選択されたヒトフレームワーク（複数可）にグラフトした。得られたＣＤＲグラフト抗体を、さらにヒト化して、あらゆる不要な非ヒト変異を除去した。
インビトロディスプレイ法に関しては、ナイーブＢ細胞から生成した非免疫性ヒト単鎖Ｆｖファージライブラリーを５から６回パニングして、ＣＤ８抗原に対する抗体を単離した。パニング後、ＥＬＩＳＡで非特異的抗原よりも標的抗原に対して特異的な結合を示した個々のファージクローンを特定した。続いて、特異的なバインダーの重鎖及び軽鎖ＶドメインのＤＮＡフラグメントをクローニングし、配列決定した。
抗体構築物のクローニング
ヒト免疫グロブリン軽鎖及び重鎖のヌクレオチド配列に関する一般情報は、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ． ＩＭＧＴ（登録商標），ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標）２５ ｙｅａｒｓ ｏｎ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２０１５ Ｊａｎ；４３のＩＭＧＴ（登録商標）（ｔｈｅ ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ（登録商標））に示されている。重鎖及び軽鎖ＶドメインのＤＮＡフラグメントを、ヒトＩｇＧ１及びＣＫを含む哺乳動物発現ベクターにインフレームで挿入した。
融合構築物のクローニング
構築物のＩＬ－１０部分を、ＩｇＧ重鎖のＣ末端とＩＬ－１０のＮ末端の間にグリシン・セリンベースのリンカーを使用して重鎖とインフレームでクローニングした。ＩｇＧ重鎖のＣ末端リジン残基を、ＩＬ－１０部分の融合後に除去した。非対称形状を有する構築物を生成するために、ノブ・イントゥ・ホール改変をＦｃ領域のＣＨ３ドメインに導入し、ヘテロ二量体化を促進した。具体的には、「ホール」ドメインはＣＨ３ドメインにＹ３４９Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖ変異を有するが、「ノブ」ドメインはＣＨ３ドメインにＳ３５４Ｃ及びＴ３６６Ｗ変異を有した（ＥＵナンバリング）。ＦｃγＲ結合／エフェクター機能を止め、ＦｃＲの共活性化を防ぐために、変異Ｌ２３４Ａ／Ｌ２３５Ａ／Ｇ２３７Ａ（ＥＵナンバリング）を各ＩｇＧ重鎖またはＦｃ領域のＣＨ２ドメインに導入した。抗体・ＩＬ－１０融合構築物の発現は、ＣＭＶプロモーターによって駆動され、転写はコード配列の下流に位置する合成ポリＡシグナル配列によって終了した。
ＩＬ－１０ポリペプチドとの融合タンパク質の精製
実施例で使用したＩＬ－１０ポリペプチドとの融合タンパク質をコードする構築物は、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して指数関数的に増殖するＥｘｐｉ２９３細胞に哺乳動物発現ベクターをコトランスフェクトすることによって生成した。上清を培養４～５日後に回収した。ＩＬ－１０融合構築物は、まずプロテインＡマトリクスを使用したアフィニティークロマトグラフィーによって精製した。プロテインＡカラムを平衡化し、リン酸緩衝生理的食塩水（ＰＢＳ）中で洗浄した。融合構築物を、２０ｍＭクエン酸ナトリウム、５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ３．６で溶出した。溶出画分をプールし、１０ｍＭ ＭＥＳ、２５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６に透析した。タンパク質を、イオン交換クロマトグラフ（Ｍｏｎｏ－Ｓ、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用してさらに精製して、ホモ二量体よりもヘテロ二量体を精製した。タンパク質を充填後、カラムを１０ｍＭ ＭＥＳ、２５ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ６で洗浄した。次に、タンパク質を１０ｍＭ ＭＥＳ、ｐＨ６バッファー中で２５ｍＭから５００ｍＭまで塩化ナトリウムの濃度勾配を増加させて溶出した。ヘテロ二量体と対応する主な溶離液ピークを回収し、濃縮した。次いで、精製タンパク質を、ＰＢＳ中でサイズ排除クロマトグラフィー（Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）によって精製した。
アミノ酸配列に基づいて算出されたモル吸光係数を使用して２８０ｎｍで吸光度（ＯＤ）を測定することによって精製ＩＬ－１０融合構築物のタンパク質濃度を求めた。融合構築物の純度、完全性及び単量体状態を、還元剤（５ｍＭ １，４－ジチオスレイトール）の存在下及び非存在下においてＳＤＳ－ＰＡＧＥによって分析し、クマシーブルー（ＳｉｍｐｌｅＢｌｕｅ（商標）ＳａｆｅＳｔａｉｎ、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で染色した。ＮｕＰＡＧＥ（登録商標）Ｐｒｅ－Ｃａｓｔゲルシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、製造業者の指示に従って使用した（４～２０％トリスグリシンゲルまたは３～１２％ビストリス）。イムノコンジュゲートサンプルの凝集体含有量を、Ｓｕｐｅｒｄｅｘ２００ １０／３００ＧＬ分析的サイズ排除カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して分析した。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によるＣＤ８、ＩＬ－１０ＲＡ及びＩＬ－１０ＲＢに関する結合親和性測定
ヒト及びカニクイザルＣＤ８、ＩＬ－１０ＲＡ及びＩＬ－１０ＲＢに対するＩＬ－１０融合タンパク質の動態速度定数（ｋｏｎ及びｋｏｆｆ）ならびに親和性（ＫＤ）を、３７℃でＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｔ２００（Ｃｙｔｉｖａ）を使用した表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定した。簡単にいえば、ヒト及びカニクイザルＣＤ８に対する親和性を測定するために、Ｈｕｍａｎ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｃａｐｔｕｒｅ Ｋｉｔ（Ｃｙｔｉｖａ）を使用して作製した共有結合で固定された抗ヒトＦｃ捕捉抗体によってＦｃを介して抗体または融合タンパク質をＣＭ４センサーチップ上に捕捉した。リファレンス表面として働くフローセル１上にはタンパク質は捕捉されなかった。ＫＤの０．１×から１０×に及ぶ４つ以上の濃度でＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中に希釈した可溶性抗原を、抗体／融合タンパク質を捕捉した表面上に１～２分間流した。解離を５～１０分間監視し、それぞれ次のサイクルで抗体／融合タンパク質を再捕捉する前に抗ｈＩｇＧ－Ｆｃ表面を３Ｍ ＭｇＣｌ２で再生した。マストランスポートモデルとともに１：１ラングミュアを使用してＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２によって結合データを分析した。
ＩＬ－１０ＲＡとの親和性を測定するために、共有結合で固定された抗ヒトＦｃ抗体によってＦｃを介して抗体または融合タンパク質をＣＭ４センサーチップ上に捕捉した（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号２０８１－０１）。リファレンス表面として働くフローセル１上にはタンパク質は捕捉されなかった。１ｇ／ＬのＢＳＡを加えたＨＢＳ－Ｐ＋緩衝液中に８、４０、２００、１０００、及び５０００ｎＭの濃度で希釈した社内で生成したヒトＩＬ－１０ＲＡ ＥＣＤ、または緩衝液を、融合タンパク質を捕捉した表面上に３０μＬ／分で２分間流した。解離を４～５分間監視し、分析サイクル間に７５ｍＭリン酸の３０秒間の３回の注入により抗ｈＩｇＧ－Ｆｃ表面を再生した。マストランスポートモデルとともに１：１ラングミュアを使用してＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２または定常状態親和性分析によって結合データを分析した。
ＩＬ－１０ＲＢとの結合を測定するために、製造業者の指示に従いＣＡＰセンサーチップ（Ｃｙｔｉｖａ）上にまず固定したｂｉｏｔｉｎ ＣＡＰｔｕｒｅ試薬（Ｃｙｔｉｖａ）を有するチップ上に社内で生成したビオチン化ヒトＩＬ－１０ＲＡを捕捉した。表面を２０μＭのアミン－ＰＥＧ２－ビオチン（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）で６０秒間ブロックした後、ＩＬ－１０融合タンパク質を１０μＬ／分で３分間注入した。リファレンス表面として働くフローセル１にはＩＬ－１０融合タンパク質は捕捉されなかった。１ｇ／ＬのＢＳＡを加えたＨＢＳ－ＥＰ＋緩衝液中に０．２、１、５、１０、及び２０μＭの濃度で希釈した社内で生成したヒトＩＬ－１０ＲＢ ＥＣＤ、または緩衝液を分析物として３０μＬ／分で２分間流し、４分間解離させた。分析サイクル間に３部の８Ｍグアニジン－ＨＣｌと１部の１Ｍ ＮａＯＨの混合物の２分間の注入によりＣＡＰセンサーチップ表面を再生した。センサーグラムをダブルリファレンスした。結合をランク付けするために、ＩＬ－１０融合タンパク質の捕捉応答単位を正規化した後、ＩＬ－１０ＲＢの結合応答単位を、最高濃度で結合ステップの終了の５秒前にＢｉａｃｏｒｅ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅバージョン３．２を使用して記録した。
初代ヒト細胞におけるＳＴＡＴ３リン酸化アッセイ
ヒトＰＢＭＣまたはヒト全血におけるフローサイトメトリーによってＳＴＡＴ３のリン酸化を測定するアッセイにおいて、様々な免疫細胞サブセットを活性化するＩＬ－１０の能力を測定した。
Ｆｉｃｏｌｌ－Ｐａｑｕｅ Ｐｌｕｓ（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用して健康なドナーの血液からＰＢＭＣを単離し、製造業者の指示に従ってＡＣＫ溶解緩衝液（Ｇｉｂｃｏ）を使用して赤血球を溶解させた。一般に、ＰＢＭＣを無血清ＲＰＭＩ１６４０培地に２０×１０６細胞／ｍｌで再懸濁させ、９６ウェルＵ底プレート（各ウェル当たり５０μｌ）に等分した。ＩＬ－１０融合タンパク質及び対照タンパク質、例えば、野生型ＩＬ－１０二量体及び対照融合タンパク質を所望の濃度に希釈し、ウェルに添加した（２×刺激として５０μｌ添加した）。インキュベーションは、一般に３７℃で３０分行った。ＣＤ８抗体、例えば、ＣＤ８ａで染色するために（ＳＫ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ；ＲＰＡ－Ｔ８、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、抗体をウェルに直接加え、氷上で１０分間インキュベートした。染色は、１００μｌの氷冷８％ＰＦＡ（４％最終）により氷上で１０分間停止させた。細胞を洗浄緩衝液（ＰＢＳ中の２％ＦＢＳ）で３回洗浄した。製造業者の手順に従って予め冷却した１００ｍｌのＰｈｏｓｆｌｏｗ Ｐｅｒｍ緩衝液ＩＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中で細胞を透過処理し、－２０℃で一晩保存した。翌日、細胞を洗浄緩衝液で２回洗浄し、ＣＤ３（ＵＣＨＴ１、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１４（Ｍ５Ｅ２、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ２５（Ｍ－Ａ２５１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ５６（ＨＣＤ５６、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）及び／またはパーフォリン（クローンδＧ９、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｆｏｘｐ３（２５９Ｄ、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ｐＳＴＡＴ３［ｐＹ７０５］（クローン４、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）に対する抗体により４℃で３０～４５分間染色した。その後、細胞をフローサイトメーターで分析した。データはｐＳＴＡＴ３陽性パーセントとして、ある場合にはｐＳＴＡＴ３ 平均蛍光強度（ＭＦＩ）として表し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにインポートした。
ヒト全血におけるアッセイのために、１ｍＬの９６ウェルディーププレートウェルにおいて各ウェルあたり９０μＬのヒト血液を使用し、３７℃で１０分間予熱した。ＩＬ－１０融合タンパク質及び対照タンパク質、例えば、野生型ＩＬ－１０二量体及び対照融合タンパク質を調製し、１０倍の強度で３７℃に予熱した。１０μＬの予熱した１０×刺激を各ウェルに加えて、１×刺激濃度で１００μＬの総体積にした。インキュベーションは、一般に３７℃で２５分行った。プレフィックス抗体染色カクテルを添加することによって刺激をクエンチして、短時間ボルテックスし、暗所において氷上で１０分間インキュベートした。プレフィックス染色カクテルは、ＴｒｕＳｔａｉｎ ＦｃＸ（Ｂｉｏｌｇｅｎｅｄ）ならびに、ＣＤ４（ＲＰＡ－Ｔ４、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、ＣＤ１９（ＨＩＢ１９、ＢＤ）、ＣＤ５６（ＮＣＡＭ１６．２、ＢＤ）、ＣＤ１６（３Ｇ８、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びＣＤ８（ＳＫ１、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）に対する抗体を含むものであった。９００μＬの予熱したＬｙｓｅ Ｆｉｘ（ＢＤ）をサンプルウェルに添加し、３７℃で１０分間インキュベートした。ＰＢＳ＋０．５％ウシ血清アルブミン及び２ｍＭ ＥＤＴＡを含む予め冷却した洗浄緩衝液中で細胞を洗浄した。予め冷却したＰｅｒｍ Ｂｕｆｆｅｒ ＩＩＩ（ＢＤ）を添加し、－２０℃で６０分間インキュベートした後、洗浄緩衝液中で２回洗浄し、ＴＦＰ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ（ＢＤ）中で１回洗浄した。ＣＤ３（ＵＣＨＴ、ＢＤ）、ＣＤ１４（ＭΦＰ９、ＢＤ）、ＣＤ１１ｃ（Ｂ－ｌｙ６、ＢＤ）、ＨＬＡＤＲ（Ｌ２４３、Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）、及びｐＳＴＡＴ３ ｐＹ７０５（４／Ｐ－ＳＴＡＴ３、ＢＤ）に対する抗体を含むＴＦＰ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ中で調製された２５μＬの「メタノール後」染色カクテルに細胞を再懸濁させた。細胞を暗所において４℃で３０分間インキュベートした後、ＴＦＰ Ｐｅｒｍ／Ｗａｓｈ緩衝液中で洗浄し、続いて、１００μＬの４％ＰＦＡ中において室温で１０分間固定した。細胞を洗浄緩衝液中で２回洗浄し、フローサイトメーターにおいて分析した。データはｐＳＴＡＴ３陽性パーセントとして表し、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍにインポートした。
ＥＬＩＳＡによる多反応性評価
候補融合タンパク質の多反応性を評価するために、ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、無関係の抗原のパネルとの結合について調べた。抗原として以下のものを使用し、これらは、Ｓｉｇｍａから購入した：ｄｓＤＮＡサケ***、ヒト血清アルブミン、キーホールリンペットヘモシアニン、リポ多糖、インスリン、及びヘパリンビオチンナトリウム塩。
抗原をＰＢＳ中で０．３～１０μｇ／ｍＬに及ぶ濃度に希釈し、各ウェル当たり２５μＬの容量で３８４ウェルＮｕｎｃ ＭａｘｉＳｏｒｐプレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）にコーティングした。抗原なし対照として、２５μＬのＰＢＳのみを使用した。プレートを４℃で一晩インキュベートした。抗原を除去し、プレートをｍｉｌｌｉ－Ｑ水（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）で洗浄した。ウェルを０．０５％Ｔｗｅｅｎ（登録商標）及び１ｍＭ ＥＤＴＡ（アッセイ緩衝液）を加えたＰＢＳで満たした後、室温で１時間インキュベートした。アッセイ緩衝液を除去し、ウェルをｍｉｌｌｉ－Ｑ水で洗浄した。アッセイ緩衝液中に希釈した１０μｇ／ｍＬの融合タンパク質または多反応性に関する陽性対照であるボコシズマブを２５μＬ添加し、室温で１時間インキュベートした。サンプルを除去し、プレートをｍｉｌｌｉ－Ｑ水で洗浄した。２５μｌの検出抗体、１：２５０００希釈した西洋ワサビペルオキシダーゼ結合ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を添加し、室温で１時間インキュベートした。試薬を除去し、ウェルをｍｉｌｌｉ－Ｑ水で洗浄した。２５μＬのＫＰＬ ＳｕｒｅＢｌｕｅ ＴＭＢ Ｍｉｃｒｏｗｅｌｌ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（ＳｅｒａＣａｒｅ）を使用して５～７分間ウェルを発色させ、２５μＬの０．１Ｍ ＨＣｌでクエンチした。４５０ｎｍにおける吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ ｉＤ５プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ）において記録し、抗原なし対照ウェルに対して正規化した。
結果
単球及びＣＤ８＋ Ｔ細胞においてＳＴＡＴ３を活性化する野生型ＩＬ－１０二量体の能力を図５Ａ及び５Ｂに示す。２人の健康なドナーのＰＢＭＣを使用し、代表的なデータを図５Ａに示す。２人の異なる健康なドナーの全血を使用し、代表的なデータを図５Ｂに示す。各細胞種における活性化の程度及び活性化のＥＣ５０は、両アッセイにわたり同等である。両アッセイにおいて、単球（ＣＤ１４＋ＣＤ３－としてゲート）が、ＩＬ－１０に対してＣＤ８＋ Ｔ細胞よりも感受性が高いことがわかった。
実施例２：ＩＬ－１０二量体を含む融合タンパク質によるＣＤ８＋ Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ３の優先的活性化
ＣＤ８抗体及びＩＬ－１０二量体ポリペプチドを含む融合タンパク質を、５つの二量体形式（図６に示されるＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥ）のうちの１つで作製した。
形式ＡのＩＬ－１０融合タンパク質によるｈＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化の選択性及び効力を図７に示す。試験した融合タンパク質には、野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びマウスＣＤ８を標的とする対照抗体を含む形式ＡのｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ（図７Ａ）、ならびに野生型ＩＬ－１０ポリペプチド及びヒトＣＤ８を標的とする抗体を含む形式ＡのｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ （図７Ｂ）が含まれた。抗体ｘｍＣＤ８ａは以前に公開された抗マウスＣＤ８抗体（２．４３クローン）であり、ｘｈＣＤ８ａは以前に公開された抗ヒトＣＤ８抗体（ＯＫＴ８）であった。ヒトＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化は、実施例１に記載されているとおりに測定した。ヒトＣＤ８と特異的に結合する抗体を含む形式ＡのＩＬ－１０融合タンパク質ｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化したが、対照抗体を含む形式ＡのＩＬ－１０融合タンパク質であるｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球を優先的に活性化した。
形式ＣのＩＬ－１０融合タンパク質ｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔ及びｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔを作製し、ヒトＰＢＭＣにおいてＳＴＡＴ３を活性化する能力を評価した。形式ＣのｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔに関する結果を図８Ａに、形式ＣのｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔに関する結果を図８Ｂに示す。形式Ｃの融合タンパク質ｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔの効力は、形式ＡのｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔの約１０分の１であり（図７Ａと図８Ａを比較）、これは、ヒトＦｃのＮ末端におけるＩＬ－１０の融合が、ＩＬ－１０がヒトＦｃのＣ末端で融合された場合のものと比較して、活性を低下させたことを示唆する。さらに、低濃度（最大０．０１ｎＭ）を除いて、形式Ｃは、ヒトＣＤ８と結合する抗体を含むＩＬ－１０融合タンパク質に最適ではなかった。高濃度の形式ＣのｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、ＣＤ８＋ Ｔ細胞において完全にはＳＴＡＴ３を活性化せず、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化しなかった（図８Ｂ）。
形式ＤのＩＬ－１０融合タンパク質によるｈＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化の選択性及び効力を図９に示す。形式ＤのｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔに関する結果を図９Ａに、形式ＤのｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔに関する結果を図９Ｂに示す。ヒトＣＤ８と特異的に結合する抗体を含む形式ＤのＩＬ－１０融合タンパク質ｘｈＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化したが、対照抗体を含む形式ＤのＩＬ－１０融合タンパク質であるｘｍＣＤ８ａ－ＩＬ１０ｗｔは、単球を優先的に活性化した。
実施例３：ＩＬ－１０単量体を含む融合タンパク質によるＣＤ８＋ Ｔ細胞におけるＳＴＡＴ３の優先的活性化
ＣＤ８抗体及びＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含む融合タンパク質を、図６に示される形式Ｆに従って作製した。融合タンパク質の一部として構築されたＩＬ－１０単量体ポリペプチドのアミノ酸配列を、ＩＬ１０ｍｏｎｏと呼ぶ無改変の単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの場合は図１Ｄに示し、または変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドの場合は上記の表４Ａに示す。ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈは、以前に示された変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドである（Ｇｏｒｂｙ ｅｔ ａｌ．Ｓｃｉ Ｓｉｇｎａｌ．２０２０ Ｓｅｐ１５；１３（６４９）：ｅａｂｃ０６５３）。それは、ＩＬ１０ｍｏｎｏバックグラウンドにアミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｎ９２Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌを含み、ＩＬ－１０ＲＢに対する結合親和性が増加している。ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２は、ＩＬ１０ｍｏｎｏバックグラウンドに単一のアミノ酸置換Ｎ９２Ｉを含む変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドである。
ＩＬ－１０単量体融合タンパク質によるｈＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化の選択性及び効力を図１０Ａ～１０Ｃに示す。試験した融合タンパク質には、上記のＩＬ１０ｍｏｎｏポリペプチド及びヒトＣＤ８を標的とする抗体を含む形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ（図１０Ａ）；上記のＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチド及びヒトＣＤ８を標的とする抗体を含む形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ（図１０Ｂ）；ならびに、上記のＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチド及びヒトＣＤ８を標的とする抗体を含む形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２（図１０Ｃ）が含まれた。抗体ｘｈＣＤ８ｂは、ヒトＣＤ８ｂに対して特異性を有する抗体であった。ヒトＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化を実施例２に記載されているとおりに測定した。
融合タンパク質ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏは、１ｎＭ以下の濃度で単球及びＣＤ４＋ Ｔ細胞よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化したが、活性化の程度は比較的低かった（図１０Ａ）。ヒトＣＤ８と特異的に結合する抗体を含む、ＩＬ－１０ＲＢ親和性を増強させた変異単量体融合タンパク質ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈも、単球及びＣＤ４＋ Ｔ細胞よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を優先的に活性化した（図１０Ｂ）。単球／ＣＤ４ Ｔ細胞に対するＣＤ８＋ Ｔ細胞のｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈによる活性化効力の差は、単球／ＣＤ４ Ｔ細胞に対するＣＤ８＋ Ｔ細胞のｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏによる活性化効力の差よりも著しく高かった。さらに、ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈによるＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化の効力は、ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏによるものよりもはるかに高く、野生型二量体ＩＬ－１０の融合タンパク質のものと同等であった。これは、ＩＬ－１０ＲＢに対する結合親和性の増加が、ＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化の効力ならびに単球及びＣＤ４＋ Ｔ細胞に対するＣＤ８＋ Ｔ細胞の活性化の選択性の両方に対して無改変のＩＬ－１０ＲＢよりも好ましいことを示す。ＩＬ１０ｍｏｎｏバックグラウンドに単一のＮ９２Ｉ置換のみを含む融合タンパク質ｘｈＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２も、効力の増加ならびに単球及びＣＤ４＋ Ｔ細胞に対するＣＤ８＋ Ｔ細胞の選択的な活性化を示した（図１０Ｃ）。
実施例４：ＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性の減弱
実施例３及び図１０に示されるとおり、ＩＬ－１０ＲＢとの結合の増強は、単量体ＩＬ－１０によるＳＴＡＴ３活性化を増強させることができた。この目的のために、ＩＬ－１０ＲＢ結合を増強させると考えられるＩＬ－１０ｍｏｎｏバックグラウンドに対する変異を、ＩＬ－１０及びその受容体の既存の構造（例えば、ＰＤＢ ＩＤ：１Ｊ７Ｖ、６Ｘ９３、３ＬＱＭ）ならびに類似のサイトカイン／受容体複合体に対するホモロジーモデリング（例えば、ＰＤＢ ＩＤ：５Ｔ５Ｗ、４ＤＯＨ、１Ｙ６Ｋ）の組み合わせを使用して特定した。評価した代表的な変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列を表５に示す。
ＩＬ－１０ＲＢ増強ＩＬ－１０単量体のパネルとｘｈＣＤ８ｂ抗体の融合タンパク質、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ３からＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２０によるｈＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化を図１１Ａから１１Ｄに示す。すべての融合タンパク質を形式Ｆで構築し、ヒトＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化は、実施例１に記載されているとおりに測定した。ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ３からＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ１３の融合タンパク質のＳＴＡＴ３活性化を、ＣＤ８ Ｔ細胞に関しては図１１Ａに、単球に関しては図１１Ｂに示す。ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ１４からＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２０の融合タンパク質のＳＴＡＴ３活性化をＣＤ８ Ｔ細胞に関しては図１１Ｃに、単球に関しては図１１Ｄに示す。すべての図において、ＳＴＡＴ３活性化は、ｘｈＣＤｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２のものと比較している。このパネルから、ＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ３からＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ１３、ならびにＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ１７からＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２０のすべての融合物は、ｘＣＤ８ｂ－ＩＬ１０ｍｏｎｏと比較して、ＣＤ８ Ｔ細胞における増強されたＳＴＡＴ３活性化及び単球よりもＣＤ８ Ｔ細胞選択性を示した。また、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ３、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ４、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ６、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ７、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ８、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ１８、及びＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ１９の融合タンパク質は、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２融合タンパク質と同等のＳＴＡＴ３活性化の効力及びＣＤ８選択性を示す。
ＩＬ－１０ＲＢ増強に対して予想されるさらなる変異を実施例１に記載されているとおりに構築し、ＢＩＡｃｏｒｅベースのアッセイを使用してスクリーニングした。ＩＬ－１０ＲＢに対する結合親和性が低いため、厳密な動態を特定することはできなかった。代わりに、ＩＬ１０ｍｏｎｏ変異タンパク質のＩＬ－１０ＲＢに対する相対的な結合親和性をランク付けするために、２０μＭ ＩＬ－１０ＲＢに対する結合応答を測定し、ＩＬ１０ｍｏｎｏ融合タンパク質の捕捉レベルに対して正規化した。ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２１からＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ６０の融合タンパク質に関する正規化したＩＬ－１０ＲＢに対する結合応答を、いくつかの対照とともに表６に示す。特に、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ３８、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ４０、及びＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ６０は、ＩＬ１０ｍｏｎｏよりも増強した結合を示す。
ＢＩＡｃｏｒｅベースのスクリーニングによって特定した選択された融合タンパク質に関してヒト全血におけるＳＴＡＴ３活性化を評価した。ＳＴＡＴ３活性化をＣＤ８ Ｔ細胞に関しては図１１Ｅに、単球に関しては図１１Ｆに示す。ここで、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ３８の融合タンパク質は、ＣＤ８ Ｔ細胞においてＳＴＡＴ３活性化を示し、これは、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２のものよりわずかに低いが、類似している。
実施例５：ＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性の減弱
実施例３に示されるとおり、ＣＤ８抗体及びＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含む融合タンパク質は、単球及びＣＤ４＋ Ｔ細胞よりもＣＤ８＋ Ｔ細胞を選択的に活性化した。非特異的な細胞に対する活性をさらに低下させるために、ＩＬ－１０ＲＢ増強ポリペプチド、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈまたはＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２のバックグラウンドに対してＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性を低下させるためのアミノ酸置換のパネルを設計した。評価した代表的な変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸置換及びアミノ酸配列を表４Ａに示す。これらの構築物のＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性を実施例１に記載されているとおりにＢＩＡｃｏｒｅによって測定し、これらのデータの概要を表７に示す。あらゆる場合において、ＩＬ－１０ポリペプチドは、列２に明記される抗体結合ドメイン及び図６に示される概略図に基づいて、括弧内に示される形式を有する融合タンパク質として表される。結合のＫｄを列３に列挙し、ここで、「ＮＤ」は、結合は検出されたが、親和性が低すぎて、Ｋｄの確実な計算ができなかったことを示す。「ＮＴ」は、変異タンパク質がＢＩＡｃｏｒｅによって評価されなかったことを示す。
すべての場合において、変異は、ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性を低下させ、このことは、単球及び他の非特異的な細胞種に対する活性を低下させるのにこれらのアミノ酸置換が有用であることを示す。
ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈまたはＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２のいずれかのバックグラウンドにおけるＩＬ－１０ＲＡ減弱構築物のパネルに対するｘｈＣＤ８ｂ抗体の融合タンパク質によるｈＰＢＭＣにおけるＳＴＡＴ３活性化の選択性及び効力を図１２Ａから１２Ｆに示す。すべての融合タンパク質を形式Ｆで構築し、ヒトＰＢＭＣ中のＳＴＡＴ３活性化は、実施例１に記載されているとおりに測定した。図１２Ａ及び１２Ｂは、それぞれ、ＩＬ－１０ＲＡとの結合が十分に減弱されていない融合タンパク質のＣＤ８ Ｔ細胞及び単球におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｂに示されるとおり、単球に対する活性はほとんど変化しないままである。図１２Ｃ、１２Ｄ、１２Ｅ及び１２Ｆは、それぞれ、ＩＬ－１０ＲＡとの結合が様々な程度に減弱された融合タンパク質のＣＤ８ Ｔ細胞及び単球におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。図１２Ｄ及び１２Ｆの結果は、単球における効力の低下がＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＿ｍ１０に関する約２分の１の減弱からＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ＿ｍ１１に関する１００分の１以下の減弱に及ぶことを示す。いかなるＩＬ－１０ＲＡ変異も含まないＩＬ－１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈと比較して、同様のレベルの効力の低下が、これらのＩＬ－１０ＲＡ変異タンパク質のそれぞれに対して単球及びＣＤ８ Ｔ細胞の両方で確認された。選択された融合物のＩＬ－１０ＲＡに対する親和性も表７に報告する。
これらの結果に基づいて、選択されたＩＬ－１０ＲＡ－減弱変異を、様々なＩＬ－１０ＲＢ－増強変異と組み合わせ、ヒト全血においてＳＴＡＴ３アッセイで評価した。評価した代表的な変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列を表８に示す。図１２Ｇ及び１２Ｈは、それぞれ、これらの代表的な融合タンパク質のＣＤ８ Ｔ細胞及び単球におけるＳＴＡＴ３活性化を示す。試験したすべての構築物において、単球よりもＣＤ８ Ｔ細胞の活性化の選択性が存在し、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２＿ｍ１０またはＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ７＿ｍ１０の融合タンパク質でより高い効力及び選択性が確認されている。
実施例６：ＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性が減弱された構築物のさらなるスクリーニング
ＩＬ－１０ＲＡ結合を減弱することが予想される変異を設計し、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ６バックグラウンドに組み込んだ。評価した代表的な変異単量体ＩＬ－１０ポリペプチドのアミノ酸配列を表９に示す。
ＩＬ－１０ＲＡに対する結合親和性を減弱する変異タンパク質のスクリーニングを、実施例１に記載されているとおりにＢＩＡｃｏｒｅによって実施した。親和性データを表１０に示す。ＩＬ－１０ＲＡとの結合が弱いか、または検出できない構築物を、プロテインＧとの結合に関して、ならびに分解タンパク質の可能性を除外するために、ＳＤＳ－ＰＡＧＥによって完全性に関して評価した。「ＮＤ」は、結合は検出されたが、親和性が低すぎてＫｄの確実な計算ができなかったことを示す。「ＮＢ」は、緩衝液のみの対照を超える結合が検出されなかったことを示す。
実施例７：ＩＬ－１０上のグリコサミノグリカン結合部位の除去
ＩＬ－１０は、ＩＬ－１０に対する最も強力なバインダーとしてヘパリンを含む、グリコサミノグリカンと結合することが示されている正電荷パッチを含む（Ｋｕｎｚｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ，２０１６）。ＩＬ－１０のこの特性は、ＩＬ－１０の機能を調節するのに役立つと推測されるが、曝露の減少によりＩＬ－１０の治療効果を制限する可能性もある。Ｒ１０７は、特にグリコサミノグリカンと相互作用する最も重要な残基と特定されており、分子モデリングに基づくと、他の残基ではＲ１０７の喪失を補うことができない（Ｇｅｈｒｃｋｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｍｏｌ Ｇｒａｐｈ Ｍｏｄｅｌ，２０１５）。
ｍ１１７と呼ばれるＲ１０７Ａの変異をＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２バックグラウンドに形式ＦのｘｈＣＤ８ｂ抗体との融合物として組み込み、ヒト全血においてＳＴＡＴ３アッセイで試験した。この構築物の配列を表１１に示す。ＣＤ８ Ｔ細胞及び単球に関するＳＴＡＴ３活性化データを、それぞれ図１３Ａ及び１３Ｂに示す。ＣＤ８ Ｔ細胞及び単球の両方に対するＳＴＡＴ３活性化は、ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２とＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２＿ｍ１１７の間で同等であり、これは、ｍ１１７変異の追加が活性に大きな影響を及ぼさないことを示す。
無関係のタンパク質のパネルとの結合を測定する多反応性ＥＬＩＳＡアッセイの結果を表１２に示す。ポリ反応性であることが示されているボコシズマブも陽性対照として含まれる。ＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２をＩＬ１０ｍｏｎｏ＿ＲＢｅｎｈ２＿ｍ１１７と比較すると、多くの無関係の標的との非特異的な結合が減少している。これはヘパリンに関しても同様である。要するに、これは、ｍ１１７の導入が非特異的な無関係のタンパク質との反応性を低下させ、その結果として曝露の改善につながる可能性があることを示す。

Claims (80)

  1. 配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有し、前記配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む、変異ＩＬ－１０ポリペプチドであって、前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｎ２１、Ｍ２２、Ｒ２４、Ｄ２５、Ｄ２８、Ｓ３１、Ｒ３２、Ｄ５５、Ｍ６８、Ｉ６９、Ｌ７３、Ｅ７４、Ｍ７７、Ｐ７８、Ｑ７９、Ｅ８１、Ｎ８２、Ｋ８８、Ａ８９、Ｈ９０、Ｎ９２、Ｓ９３、Ｇ９５、Ｅ９６、Ｎ９７、Ｋ９９、Ｔ１００、Ｌ１０１、Ｌ１０３、Ｒ１０４、Ｒ１０７、Ｒ１１０及びＦ１１１からなる群から選択される位置（複数可）にある、前記変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  2. 前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８、Ｄ２８、Ｎ９２、Ｋ９９、及びＬ１０３からなる群から選択される位置（複数可）にある、請求項１に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  3. 前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｎ１８Ｆ、Ｎ１８Ｌ、Ｎ１８Ｙ、Ｄ２８Ｑ、Ｄ２８Ｒ、Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｉ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、Ｎ９２Ｙ、Ｋ９９Ｎ、Ｌ１０３Ｎ、及びＬ１０３Ｑからなる群から選択される、請求項２に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  4. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号３のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して増加した結合親和性を示す、請求項１～３のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  5. 前記ポリペプチドは、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して５０％以上増加した結合親和性を示す、請求項４に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  6. 前記ポリペプチドは、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号３のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＢポリペプチドに対して１５０％以上増加した結合親和性を示す、請求項４に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  7. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、前記配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含み、前記１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８からなる群から選択される位置（複数可）にある、請求項１～６のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  8. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、前記配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のさらなるアミノ酸置換を含み、前記１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される位置（複数可）にある、請求項７に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  9. 前記１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される、請求項８に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  10. 前記１つ以上のさらなるアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される、請求項９に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  11. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号８７～８９、１８８～２０１、及び３１０～３１８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～１０のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  12. 配列番号１のアミノ酸配列と少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性を有し、前記配列番号１のアミノ酸配列に対して１つ以上のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む変異ＩＬ－１０ポリペプチドであって、前記１つ以上のアミノ酸置換は、配列番号１に従うナンバリングで、Ｐ２０、Ｌ２３、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｄ２８、Ｋ３４、Ｔ３５、Ｑ３８、Ｍ３９、Ｄ４１、Ｌ４３、Ｄ４４、Ｎ４５、Ｌ４６、Ｋ４９、Ｉ８７、Ｖ９１、Ｌ９４、Ｌ９８、Ｋ１３８、Ｓ１４１、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、Ｅ１５１、及びＩ１５８からなる群から選択される位置（複数可）にある、前記変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  13. 前記１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４、Ｒ２７、Ｋ３４、Ｑ３８、Ｄ４４、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、Ｎ１４８、及びＥ１５１からなる群から選択される位置（複数可）にある、請求項１２に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  14. 前記１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｒ、Ｋ３４Ｑ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｈ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｎ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｄ４４Ａ、Ｄ４４Ｅ、Ｄ４４Ｓ、Ｄ４４Ｖ、Ｄ４４Ｇ、Ｄ４４Ｈ、Ｄ４４Ｉ、Ｄ４４Ｋ、Ｄ４４Ｐ、Ｄ４４Ｌ、Ｄ４４Ｎ、Ｄ４４Ｆ、Ｄ４４Ｔ、Ｄ４４Ｒ、Ｄ４４Ｑ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｇ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｓ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｔ、Ｎ１４８Ｋ、Ｎ１４８Ｖ、Ｎ１４８Ｉ、Ｎ１４８Ｅ、Ｎ１４８Ｆ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される、請求項１３に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  15. 前記１つ以上のアミノ酸置換は、Ｒ２４Ａ、Ｒ２７Ａ、Ｋ３４Ａ、Ｋ３４Ｄ、Ｋ３４Ｅ、Ｋ３４Ｓ、Ｋ３４Ｐ、Ｋ３４Ｇ、Ｋ３４Ｔ、Ｋ３４Ｈ、Ｋ３４Ｌ、Ｋ３４Ｎ、Ｋ３４Ｆ、Ｋ３４Ｖ、Ｋ３４Ｙ、Ｑ３８Ａ、Ｑ３８Ｄ、Ｑ３８Ｐ、Ｑ３８Ｇ、Ｑ３８Ｉ、Ｑ３８Ｌ、Ｑ３８Ｒ、Ｑ３８Ｋ、Ｑ３８Ｆ、Ｑ３８Ｔ、Ｑ３８Ｅ、Ｑ３８Ｓ、Ｑ３８Ｖ、Ｑ３８Ｙ、Ｉ８７Ａ、Ｋ１３８Ａ、Ｅ１４２Ａ、Ｅ１４２Ｇ、Ｅ１４２Ｎ、Ｅ１４２Ｌ、Ｅ１４２Ｆ、Ｅ１４２Ｉ、Ｅ１４２Ｖ、Ｅ１４２Ｋ、Ｅ１４２Ｒ、Ｅ１４２Ｐ、Ｅ１４２Ｑ、Ｅ１４２Ｔ、Ｅ１４２Ｓ、Ｅ１４２Ｙ、Ｄ１４４Ａ、Ｄ１４４Ｅ、Ｄ１４４Ｇ、Ｄ１４４Ｈ、Ｄ１４４Ｒ、Ｄ１４４Ｉ、Ｄ１４４Ｋ、Ｄ１４４Ｎ、Ｄ１４４Ｑ、Ｄ１４４Ｐ、Ｄ１４４Ｓ、Ｄ１４４Ｌ、Ｄ１４４Ｔ、Ｄ１４４Ｖ、Ｄ１４４Ｙ、Ｎ１４８Ｐ、Ｎ１４８Ｄ、Ｎ１４８Ｉ、Ｅ１５１Ａ、Ｅ１５１Ｇ、Ｅ１５１Ｈ、Ｅ１５１Ｉ、Ｅ１５１Ｎ、Ｅ１５１Ｆ、Ｅ１５１Ｌ、Ｅ１５１Ｖ、Ｅ１５１Ｒ、Ｅ１５１Ｋ、Ｅ１５１Ｐ、Ｅ１５１Ｑ、Ｅ１５１Ｓ、Ｅ１５１Ｔ、及びＥ１５１Ｙからなる群から選択される、請求項１４に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  16. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号２のアミノ酸配列を含むＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して低下した結合親和性を示す、請求項７～１５のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  17. 前記ポリペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して５０％以上低下した結合親和性を示す、請求項１６に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  18. 前記ポリペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して１５０％以上低下した結合親和性を示す、請求項１６に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  19. 前記ポリペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して２分の１以下に低下した結合親和性を示す、請求項１６に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  20. 前記ポリペプチドは、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む前記野生型成熟ＩＬ－１０ポリペプチドの結合親和性と比較して、前記配列番号２のアミノ酸配列を含む前記ＩＬ－１０ＲＡポリペプチドに対して１０分の１以下に低下した結合親和性を示す、請求項１６に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  21. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、前記配列番号１のアミノ酸配列に対して位置Ｒ１０７にアミノ酸置換をさらに含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  22. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号１に従うナンバリングで、Ｒ１０７Ａ変異をさらに含む、請求項２１に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  23. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、配列番号４２２～４２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項１～２０のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  24. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、二量体である、請求項１～２３のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  25. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ホモ二量体である、請求項２４に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  26. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、ヘテロ二量体である、請求項２４に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  27. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、単量体である、請求項１～２３のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  28. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、残基Ｃ１１４、Ｅ１１５、Ｎ１１６、Ｋ１１７、Ｓ１１８、Ｋ１１９、またはＡ１２０の直後に１から１５個の間のアミノ酸のペプチド挿入を有する前記配列番号１のアミノ酸配列を含む、請求項２７に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  29. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、位置Ｎ９２にアミノ酸置換を含む、請求項２７または請求項２８に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  30. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ９２Ｉを含む、請求項２９に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  31. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、アミノ酸置換Ｎ９２Ｆ、Ｎ９２Ｈ、Ｎ９２Ｋ、Ｎ９２Ｌ、Ｎ９２Ｒ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔ、Ｎ９２Ｖ、またはＮ９２Ｙを含む、請求項２９に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  32. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、アミノ酸置換Ｎ１８Ｉ、Ｋ９９Ｎ及びＦ１１１Ｌのうちの１つ以上をさらに含む、請求項２９～３１のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  33. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号１に基づくナンバリングで、位置（複数可）Ｒ２４、Ｒ２７、Ｑ３８、Ｉ８７、Ｋ１３８、Ｅ１４２、Ｄ１４４、及び／またはＥ１５１に１つ以上のアミノ酸置換をさらに含む、請求項２９～３２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  34. 前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、配列番号８７～８９、１８８～２０１、３１０～３１８及び４２２～４２８からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、請求項３３に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド。
  35. 請求項１から３４のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチド及びＴ細胞上の抗原と結合する抗原結合分子を含む、融合タンパク質。
  36. 前記融合タンパク質は、単球よりもＴ細胞を選択的に刺激する、請求項３５に記載の融合タンパク質。
  37. 前記抗原結合分子は、ＣＤ８と結合する、請求項３５または請求項３６に記載の融合タンパク質。
  38. 前記抗原結合分子は、ＣＤ８ａｂ、ＣＤ８ａ、またはＣＤ８ａａと結合する、請求項３７に記載の融合タンパク質。
  39. 前記抗原結合分子は、ＣＤ８ｂ及び／またはＣＤ８ａｂと結合する、請求項３７に記載の融合タンパク質。
  40. 前記抗原結合分子は、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
    （ａ）前記ＶＨドメインは、配列番号１１０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１１１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１１２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｂ）前記ＶＨドメインは、配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｃ）前記ＶＨドメインは、配列番号１９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｄ）前記ＶＨドメインは、配列番号２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｅ）前記ＶＨドメインは、配列番号３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｆ）前記ＶＨドメインは、配列番号３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｇ）前記ＶＨドメインは、配列番号４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｈ）前記ＶＨドメインは、配列番号１７７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１７８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｉ）前記ＶＨドメインは、Ｘ１がＳ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ２がＹ、Ｌ、Ｈ、またはＦである、Ｘ１Ｘ２ＡＩＳのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２５９）と、Ｘ１がＧまたはＨであり、Ｘ２がＩまたはＦであり、Ｘ３がＩ、Ｎ、またはＭであり、Ｘ４がＧ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ５がＡ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ６がＡ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ７がＴ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、Ｑ、またはＡであり、Ｘ８がＡまたはＴであり、Ｘ９がＮまたはＫであり、Ｘ１０がＡまたはＮであり、Ｘ１１がＱまたはＴである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＰＸ４Ｘ５Ｘ６Ｘ７Ｘ８Ｘ９ＹＸ１０ＱＫＦＸ１１Ｇのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６０）と、Ｘ１がＤまたはＡであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ３がＡ、Ｌ、Ｐ、またはＹであり、Ｘ４がＩまたはＬであり、Ｘ５がＲ、Ａ、Ｑ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＤであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、Ａ、またはＳである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＬＦＸ６Ｘ７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２６１）とを含み、前記ＶＬドメインは、Ｘ１がＲまたはＧであり、Ｘ２がＡまたはＴであり、Ｘ３がＱまたはＥであり、Ｘ４がＥ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ５がＹ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＶである、Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５ＧＸ６ＬＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（配列番号２６２）と、Ｘ１がＡまたはＳであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｑ、またはＤであり、Ｘ３がＮ、Ｒ、Ａ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ４がＱまたはＡであり、Ｘ５がＳまたはＤである、ＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２（配列番号２６３）と、Ｘ１がＳ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ａ、またはＥであり、Ｘ２がＴ、Ｉ、またはＳであり、Ｘ３がＹ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ４がＤ、Ｇ、Ｔ、Ｅ、Ｑ、Ａ、またはＹであり、Ｘ５がＡ、Ｔ、Ｒ、Ｓ、Ｋ、またはＹである、ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＷＴのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３（配列番号２６４）とを含む；
    （ｊ）前記ＶＨドメインは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２２６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｋ）前記ＶＨドメインは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｌ）前記ＶＨドメインは、配列番号２２５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｍ）前記ＶＨドメインは、Ｘ１がＳ、Ｄ、Ｅ、Ａ、またはＱであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、またはＴである、Ｘ１ＹＸ２ＭＳのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２６８）と、Ｘ１がＴ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、Ｒ、またはＡであり、Ｘ２がＹ、Ｗ、Ｆ、またはＨであり、Ｘ３がＡ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、またはＴであり、Ｘ４がＧまたはＥであり、Ｘ５がＳまたはＩであり、Ｘ６がＡまたはＧである、ＤＩＸ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＴＸ６ＹＡＤＳＶＫＧのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６９）と、Ｘ１がＳまたはＡであり、Ｘ２がＮ、Ｈ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、Ｙ、またはＲであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ４がＡ、Ｖ、Ｒ、Ｅ、またはＳであり、Ｘ５がＤまたはＳであり、Ｘ６がＤ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７がＬ、Ｆ、またはＭであり、Ｘ８がＩ、Ｙ、またはＶである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ４ＷＸ５Ｘ６ＡＸ７ＤＸ８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２７０）とを含み、前記ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、ＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む；
    （ｎ）前記ＶＨドメインは、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；または
    （ｏ）前記ＶＨドメインは、配列番号２２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項３７に記載の融合タンパク質。
  41. 前記抗原結合分子は、重鎖可変（ＶＨ）ドメイン及び軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを含み、
    （ａ）前記ＶＨドメインは、配列番号５１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｂ）前記ＶＨドメインは、配列番号５３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｃ）前記ＶＨドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｄ）前記ＶＨドメインは、配列番号５４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｅ）前記ＶＨドメインは、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｆ）前記ＶＨドメインは、配列番号５５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号４５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号４６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号４７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号４８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｇ）前記ＶＨドメインは、配列番号４９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号５０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｈ）前記ＶＨドメインは、配列番号１８３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号１８４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号１７９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１８０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１８１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号１８２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｉ）前記ＶＨドメインは、Ｘ１がＧ、Ｙ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｇ、Ｒ、Ｎ、またはＨであり、Ｘ３がＳ、Ｔ、Ｒ、Ｈ、Ｙ、Ｇ、またはＰであり、Ｘ４がＳ、Ｋ、Ｇ、Ｎ、Ｒ、Ｄ、Ｔ、またはＧであり、Ｘ５がＹ、Ｌ、Ｈ、またはＦである、ＧＸ１Ｘ２ＦＸ３Ｘ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２６５）と、Ｘ１がＩ、Ｎ、またはＭであり、Ｘ２がＧ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｒ、Ｉ、またはＡであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｈ、Ｓ、Ｔ、Ｆ、またはＹであり、Ｘ４がＡ、Ｄ、またはＧであり、Ｘ５がＴ、Ｅ、Ｋ、Ｖ、Ｑ、またはＡである、Ｘ１ＰＸ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２６６）と、Ｘ１がＤまたはＡであり、Ｘ２がＡ、Ｇ、Ｅ、Ｒ、Ｙ、Ｋ、Ｎ、Ｑ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ３がＡ、Ｌ、Ｐ、またはＹであり、Ｘ４がＩまたはＬであり、Ｘ５がＲ、Ａ、Ｑ、またはＳであり、Ｘ６がＡまたはＤであり、Ｘ７がＤ、Ｅ、Ａ、またはＳである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５ＬＦＸ６Ｘ７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２６７）とを含み、前記ＶＬドメインは、Ｘ１がＲまたはＧであり、Ｘ２がＡまたはＴであり、Ｘ３がＱまたはＥであり、Ｘ４がＥ、Ｎ、Ｔ、Ｓ、Ａ、Ｋ、Ｄ、Ｇ、Ｒ、またはＱであり、Ｘ５がＹまたはＳであり、Ｘ６がＡまたはＶである、Ｘ１Ｘ２ＳＸ３Ｘ４ＩＸ５ＧＸ６ＬＮのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１（配列番号２６２）と、Ｘ１がＡまたはＳであり、Ｘ２がＴ、Ｓ、Ｅ、Ｑ、またはＤであり、Ｘ３がＮ、Ｒ、Ａ、Ｅ、またはＨであり、Ｘ４がＱまたはＡであり、Ｘ５がＳまたはＤである、ＧＸ１Ｘ２Ｘ３ＬＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２（配列番号２６３）と、Ｘ１がＳ、Ｎ、Ｄ、Ｑ、Ａ、またはＥであり、Ｘ２がＴ、Ｉ、またはＳであり、Ｘ３がＹ、Ｌ、またはＦであり、Ｘ４がＤ、Ｇ、Ｔ、Ｅ、Ｑ、Ａ、またはＹであり、Ｘ５がＡ、Ｔ、Ｒ、Ｓ、Ｋ、またはＹである、ＱＸ１Ｘ２Ｘ３Ｘ４Ｘ５ＰＷＴを含むアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３（配列番号２６４）とを含む；
    （ｊ）前記ＶＨドメインは、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２３９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｋ）前記ＶＨドメインは、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２３４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号２３５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２３６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｌ）前記ＶＨドメインは、配列番号２３８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２３３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び配列番号２２８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；
    （ｍ）前記ＶＨドメインは、Ｘ１がＳ、Ｄ、Ｅ、Ｑ、Ｓ、またはＡであり、Ｘ２がＳ、Ｄ、Ｅ、Ａ、またはＱである、ＧＦＴＦＸ１Ｘ２Ｙのアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１（配列番号２７１）と、Ｘ１がＴ、Ｎ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、Ｈ、ＲまたはＡであり、Ｘ２がＹ、Ｗ、Ｆ、またはＨであり、Ｘ３がＡ、Ｓ、Ｑ、Ｅ、またはＴであり、Ｘ４がＧまたはＥであり、Ｘ５がＳまたはＩである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＧＸ４Ｘ５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２（配列番号２７２）と、Ｘ１がＳまたはＡであり、Ｘ２がＮ、Ｈ、Ａ、Ｄ、Ｌ、Ｑ、Ｙ、またはＲであり、Ｘ３がＡ、Ｎ、Ｓ、またはＧであり、Ｘ４がＡ、Ｖ、Ｒ、Ｅ、またはＳであり、Ｘ５がＤまたはＳであり、Ｘ６がＤ、Ｎ、Ｑ、Ｅ、Ｓ、Ｔ、またはＬであり、Ｘ７がＬ、Ｆ、またはＭであり、Ｘ８がＩ、Ｙ、またはＶである、Ｘ１Ｘ２Ｘ３ＹＸ４ＷＸ５Ｘ６ＡＸ７ＤＸ８のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３（配列番号２７３）とを含み、前記ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２と、ＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３とを含む；
    （ｎ）前記ＶＨドメインは、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４１のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む；または
    （ｏ）前記ＶＨドメインは、配列番号２４０のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、配列番号２４４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び配列番号２４２のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含み、前記ＶＬドメインは、ＲＡＳＱＳＶＳＳＮＬＡ（配列番号４０）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、ＧＡＳＳＲＡＴ（配列番号４１）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及びＱＱＹＧＳＳＰＰＶＴ（配列番号４２）のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む、請求項３７に記載の融合タンパク質。
  42. （ａ）前記ＶＨドメインは、配列番号６２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号６３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｂ）前記ＶＨドメインは、配列番号６４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号６５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｃ）前記ＶＨドメインは、配列番号６６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号６７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｄ）前記ＶＨドメインは、配列番号６８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号６９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｅ）前記ＶＨドメインは、配列番号７０の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号７１の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｆ）前記ＶＨドメインは、配列番号７２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号７３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｇ）前記ＶＨドメインは、配列番号２４５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２４６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｈ）前記ＶＨドメインは、配列番号２５１の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２５２の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｉ）前記ＶＨドメインは、配列番号２５３の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２５４の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｊ）前記ＶＨドメインは、配列番号２４７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２４８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｋ）前記ＶＨドメインは、配列番号２４９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２５０の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｌ）前記ＶＨドメインは、配列番号２５５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２５６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｍ）前記ＶＨドメインは、配列番号２５７の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号２５８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；
    （ｎ）前記ＶＨドメインは、配列番号５８の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号５９の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む；または
    （ｏ）前記ＶＨドメインは、配列番号１８５の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含み、前記ＶＬドメインは、配列番号１８６の配列と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９９％、または１００％同一であるアミノ酸配列を含む、請求項４０または請求項４１に記載の融合タンパク質。
  43. 前記抗原結合分子は、ＣＤ４と結合する、請求項３５または請求項３６に記載の融合タンパク質。
  44. 前記抗原結合分子は、ＰＤ－１と結合する、請求項３５または請求項３６に記載の融合タンパク質。
  45. 前記Ｔ細胞は、ヒトＴ細胞である、請求項３５～４４のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  46. 前記融合タンパク質は、２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの二量体を含み、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方は、前記抗原結合分子に融合される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  47. 前記融合タンパク質は、それぞれが抗原結合部位を含む、２つのポリペプチドを含み、１つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、前記ポリペプチドのそれぞれに融合される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  48. 前記融合タンパク質は、変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドは、前記抗原結合分子に融合される、請求項３５～４５のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  49. 前記変異ＩＬ－１０ポリペプチドは、直接またはリンカーを介して前記抗原結合分子に融合される、請求項３５～４８のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  50. 前記抗原結合分子は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
    ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］
    に従う構造を含む、２つの抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
    ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］
    に従う構造を含む２つの抗体軽鎖ポリペプチドとを含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、ＶＨ／ＶＬは、抗原結合部位を形成する、請求項３５～４５及び４９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  51. 前記融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して前記２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合される、請求項５０に記載の融合タンパク質。
  52. 前記融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、直接またはリンカーを介して前記２つのＣＨ３ドメインの第１のＣ末端に融合され、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、直接またはリンカーを介して前記２つのＣＨ３ドメインの第２のＣ末端に融合される、請求項５０に記載の融合タンパク質。
  53. 前記融合タンパク質は、１つの変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのＮ末端は、直接またはリンカーを介して前記２つのＣＨ３ドメインのうちの一方のＣ末端に融合される、請求項５０に記載の融合タンパク質。
  54. 前記抗原結合分子は、式［Ｉ］、Ｎ末端からＣ末端に、
    ＶＨ－ＣＨ１－ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［Ｉ］、
    に従う構造を含む第１の抗体重鎖ポリペプチドと、式［ＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
    ＶＬ－ＣＬ ［ＩＩ］、
    に従う構造を含む抗体軽鎖ポリペプチドと、式［ＩＩＩ］、Ｎ末端からＣ末端に、
    ヒンジ－ＣＨ２－ＣＨ３ ［ＩＩＩ］、
    に従う構造を含む第２の抗体重鎖ポリペプチドとを含み、ＶＨは、抗体重鎖可変（ＶＨ）ドメインであり、ＣＨ１は、抗体ＣＨ１ドメインであり、ヒンジは、抗体ヒンジドメインであり、ＣＨ２は、抗体ＣＨ２ドメインであり、ＣＨ３は、抗体ＣＨ３ドメインであり、ＶＬは、抗体軽鎖可変（ＶＬ）ドメインであり、ＣＬは、抗体定常軽鎖ドメインであり、ＶＨ／ＶＬは、抗原結合部位を形成する、請求項３５～４５及び４９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  55. 前記融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドのうちの一方のＮ末端は、直接またはリンカーを介して、前記第２の抗体重鎖ポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインのＣ末端または前記第１の抗体重鎖ポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインのＣ末端のうちの一方に融合される、請求項５４に記載の融合タンパク質。
  56. 前記融合タンパク質は、二量体に結合した２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドを含み、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第１のＮ末端は、直接またはリンカーを介して前記第１の抗体重鎖ポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインのＣ末端に融合され、前記２つの変異ＩＬ－１０ポリペプチドの第２のＮ末端は、直接またはリンカーを介して前記第２の抗体重鎖ポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインのＣ末端に融合される、請求項５４に記載の融合タンパク質。
  57. 前記融合タンパク質は、１つの変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドを含み、前記変異ＩＬ－１０単量体ポリペプチドのＮ末端は、直接またはリンカーを介して、前記第２の抗体重鎖ポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインのＣ末端または前記第１の抗体重鎖ポリペプチドの前記ＣＨ３ドメインのＣ末端のうちの一方に融合される、請求項５４に記載の融合タンパク質。
  58. 前記抗体重鎖ポリペプチドの一方または両方は、ＥＵインデックスによるナンバリングで、以下のアミノ酸置換：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＧ２３７Ａを含む、請求項５０～５７のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  59. ＥＵインデックスによるナンバリングで、前記２つのＦｃドメインの第１は、アミノ酸置換Ｙ３４９Ｃ及びＴ３６６Ｗを含み、前記２つのＦｃドメインの第２は、アミノ酸置換Ｓ３５４Ｃ、Ｔ３６６Ｓ、Ｌ３６８Ａ及びＹ４０７Ｖを含む、請求項５０～５８のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  60. 前記リンカーは、配列（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７４）、（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７５）、（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号７６）、Ｓ（ＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８６）、Ｓ（ＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８７）、またはＳ（ＧＧＧＧＧＳ）ｘＧｎ（配列番号３８８）を含み、ｘ＝１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、または１２であり、ｎ＝０、１、２または３である、請求項５０～５９のいずれか１項に記載の融合タンパク質。
  61. 前記リンカーは、配列ＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７９）またはＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳＧＧＧＧＳ（配列番号７７）を含む、請求項６０に記載の融合タンパク質。
  62. 前記融合タンパク質は、４つのポリペプチド鎖を含み、
    第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１５のアミノ酸配列を含み、第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１４のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１６のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１３のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１１９のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１１８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２０のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１１７のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２３のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２２のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２４のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２１のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２７のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１２６のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１２８のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２５のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３１のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３０のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３２のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１２９のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３５のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３４のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３６のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３３のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１３９のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１３８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４０のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１３７のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４３のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４２のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４４のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４１のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４７のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１４６のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１４８のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４５のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５１のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５０のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５２のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１４９のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５５のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５４のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５６のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５３のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１５９のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む；
    前記第１のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含み、前記第２のポリペプチド鎖は、配列番号１５８のアミノ酸配列を含み、前記第３のポリペプチド鎖は、配列番号１６０のアミノ酸配列を含み、前記第４のポリペプチド鎖は、配列番号１５７のアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の融合タンパク質。
  63. 請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質をコードする、１つ以上の単離ポリヌクレオチド。
  64. 請求項６３に記載の１つ以上のポリヌクレオチドを含む、１つ以上のベクター。
  65. 前記ベクター（複数可）は、発現ベクター（複数可）である、請求項６４に記載の１つ以上のベクター。
  66. 請求項６２に記載の１つ以上のポリヌクレオチドまたは請求項６４もしくは請求項６５に記載の１つ以上のベクターを含む、宿主細胞。
  67. 変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質を生成する方法であって、請求項６６に記載の宿主細胞を前記ポリペプチドまたは前記融合タンパク質の生成に適した条件下で培養することを含む、前記方法。
  68. 前記ポリペプチドまたは前記融合タンパク質を前記宿主細胞から回収することをさらに含む、請求項６７に記載の方法。
  69. 請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質及び薬学的に許容される担体を含む、医薬組成物。
  70. 医薬として使用するための、請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質。
  71. がんを処置する方法であって、がんを有する個体に有効量の請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドもしくは融合タンパク質、または請求項６９に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
  72. 前記個体にＴ細胞療法、がんワクチン、化学療法剤、ＩＬ－２ポリペプチド、または免疫チェックポイント阻害剤（ＩＣＩ）を施すことをさらに含む、請求項７１に記載の方法。
  73. 前記ＩＣＩは、ＰＤ－１、ＰＤ－Ｌ１、またはＣＴＬＡ－４の阻害剤である、請求項７２に記載の方法。
  74. 前記Ｔ細胞療法は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）ベースのＴ細胞療法、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）ベースの療法、または形質導入ＴＣＲを有するＴ細胞を用いた療法を含む、請求項７２に記載の方法。
  75. がんを有する個体に有効量の前記ポリペプチドまたは前記融合タンパク質を投与することを含む、がんを処置する方法に使用するための請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質。
  76. 感染症を処置する方法であって、感染症の処置を必要とする個体に有効量の請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドもしくは融合タンパク質、または請求項６９に記載の組成物を投与することを含む、前記方法。
  77. 前記感染症は、ウイルス感染症である、請求項７６に記載の方法。
  78. がんまたは慢性感染症を処置するための医薬の製造のための請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドまたは融合タンパク質の使用。
  79. １つ以上のＴ細胞をエクスビボで有効量の請求項１～６２のいずれか１項に記載の変異ＩＬ－１０ポリペプチドもしくは融合タンパク質または請求項６９に記載の組成物と接触させることを含む、エクスビボでＴ細胞を増殖させる方法。
  80. 前記１つ以上のＴ細胞は、腫瘍浸潤リンパ球（ＴＩＬ）である、請求項７９に記載の方法。
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