JP2023546076A - 呼吸器感染症を検出するための方法及び器具 - Google Patents
呼吸器感染症を検出するための方法及び器具 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023546076A JP2023546076A JP2023522503A JP2023522503A JP2023546076A JP 2023546076 A JP2023546076 A JP 2023546076A JP 2023522503 A JP2023522503 A JP 2023522503A JP 2023522503 A JP2023522503 A JP 2023522503A JP 2023546076 A JP2023546076 A JP 2023546076A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- canine
- protein
- sample
- cirdc
- antigen
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 116
- 206010057190 Respiratory tract infections Diseases 0.000 title description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims abstract description 200
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 160
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 160
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 160
- 239000012491 analyte Substances 0.000 claims abstract description 136
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 128
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 105
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 86
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 69
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 56
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 48
- 241000282465 Canis Species 0.000 claims abstract description 47
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 claims abstract description 36
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims abstract description 35
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims abstract description 19
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 claims abstract description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 193
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 110
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 110
- 241000588779 Bordetella bronchiseptica Species 0.000 claims description 99
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 88
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 claims description 53
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 53
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 32
- 241000701114 Canine adenovirus 2 Species 0.000 claims description 31
- 241001353878 Canine parainfluenza virus Species 0.000 claims description 29
- 241000446430 Canine pneumovirus Species 0.000 claims description 28
- 241000194048 Streptococcus equi Species 0.000 claims description 28
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 28
- 241000680578 Canid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 claims description 27
- 241000711506 Canine coronavirus Species 0.000 claims description 24
- 241000712083 Canine morbillivirus Species 0.000 claims description 24
- 241000694560 Mycoplasma cynos Species 0.000 claims description 24
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 claims description 24
- 230000007923 virulence factor Effects 0.000 claims description 24
- 239000000304 virulence factor Substances 0.000 claims description 24
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 22
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 22
- 238000003317 immunochromatography Methods 0.000 claims description 22
- 241001280889 Canine bocavirus Species 0.000 claims description 21
- 241000827764 Canine hepacivirus Species 0.000 claims description 20
- 108010021711 pertactin Proteins 0.000 claims description 20
- 101710154643 Filamentous hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 19
- 108060003393 Granulin Proteins 0.000 claims description 18
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 claims description 18
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 claims description 18
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 claims description 17
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 claims description 17
- 101710154606 Hemagglutinin Proteins 0.000 claims description 15
- 101710093908 Outer capsid protein VP4 Proteins 0.000 claims description 15
- 101710135467 Outer capsid protein sigma-1 Proteins 0.000 claims description 15
- 101710176177 Protein A56 Proteins 0.000 claims description 15
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims description 14
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims description 14
- 101000859568 Methanobrevibacter smithii (strain ATCC 35061 / DSM 861 / OCM 144 / PS) Carbamoyl-phosphate synthase Proteins 0.000 claims description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 14
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 14
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 13
- 238000004590 computer program Methods 0.000 claims description 13
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 12
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 claims description 11
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 claims description 11
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 claims description 11
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 claims description 11
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 claims description 11
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 11
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 11
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 claims description 10
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 claims description 10
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 206010044314 Tracheobronchitis Diseases 0.000 claims description 9
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 9
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 9
- 101710145505 Fiber protein Proteins 0.000 claims description 8
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 8
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 8
- 101710094396 Hexon protein Proteins 0.000 claims description 8
- 101000993933 Murine coronavirus (strain JHM) Protein I Proteins 0.000 claims description 8
- 101710173835 Penton protein Proteins 0.000 claims description 8
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 claims description 8
- 239000000185 hemagglutinin Substances 0.000 claims description 8
- 101710114810 Glycoprotein Proteins 0.000 claims description 7
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 claims description 7
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 7
- 230000032258 transport Effects 0.000 claims description 7
- 241001594994 Canine respiratory coronavirus Species 0.000 claims description 6
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 241000711557 Hepacivirus Species 0.000 claims description 6
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 claims description 6
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 6
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 6
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 210000003731 gingival crevicular fluid Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 claims description 6
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 6
- 206010039101 Rhinorrhoea Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010753 nasal discharge Diseases 0.000 claims description 5
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 claims description 5
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 claims description 4
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 claims description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 4
- 239000003172 expectorant agent Substances 0.000 claims description 4
- 230000003419 expectorant effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 claims description 4
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 claims description 4
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 claims description 4
- 210000004243 sweat Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000001179 synovial fluid Anatomy 0.000 claims description 4
- 210000001138 tear Anatomy 0.000 claims description 4
- 241000283086 Equidae Species 0.000 claims description 3
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 claims description 3
- 241001128617 Felis silvestris silvestris Species 0.000 claims description 3
- 241000282887 Suidae Species 0.000 claims description 3
- 241000282894 Sus scrofa domesticus Species 0.000 claims description 3
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 2
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 claims description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 claims description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 claims 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 claims 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 76
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 abstract description 10
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 95
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 35
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 24
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 description 16
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 14
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 13
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 13
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 11
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 11
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 10
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 10
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 9
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 8
- -1 n Species 0.000 description 8
- 230000004044 response Effects 0.000 description 8
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 7
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 7
- 229940127121 immunoconjugate Drugs 0.000 description 7
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 6
- 102000011931 Nucleoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108010061100 Nucleoproteins Proteins 0.000 description 6
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 6
- 230000006870 function Effects 0.000 description 6
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 6
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 5
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 5
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 5
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 5
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 5
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 5
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 4
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 4
- 238000013500 data storage Methods 0.000 description 4
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 4
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 4
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- 239000002096 quantum dot Substances 0.000 description 4
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 4
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 4
- APUIQTDTBPKWKE-RNPGEKFLSA-N (2r,6s)-6-[[(4r)-4-[[(2s)-2-[2-[[(1r,2s,3r,4r,5r)-4-acetamido-2-[(2s,3r,4r,5s,6r)-3-acetamido-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6,8-dioxabicyclo[3.2.1]octan-3-yl]oxy]propanoylamino]propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-2-amino-7-[[(2r)-2-am Chemical compound O([C@@H]1[C@H]2CO[C@H](O2)[C@H](NC(C)=O)[C@H]1OC(C)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CCC(=O)N[C@@H](CCC[C@@H](N)C(O)=O)C(=O)NC(=O)[C@H](N)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1NC(C)=O APUIQTDTBPKWKE-RNPGEKFLSA-N 0.000 description 3
- 108010083528 Adenylate Cyclase Toxin Proteins 0.000 description 3
- 208000003322 Coinfection Diseases 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 3
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 3
- 101710147732 Small envelope protein Proteins 0.000 description 3
- 239000012805 animal sample Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 3
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 3
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 3
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 3
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 3
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 3
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 3
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 3
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 3
- 230000003100 immobilizing effect Effects 0.000 description 3
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 3
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 3
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 229920001169 thermoplastic Polymers 0.000 description 3
- 108700031103 Bordetella bronchiseptica FHA Proteins 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710121996 Hexon protein p72 Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 101710125507 Integrase/recombinase Proteins 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 description 2
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 2
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 2
- 206010038687 Respiratory distress Diseases 0.000 description 2
- 241000282696 Saimiri sciureus Species 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 2
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 2
- 230000008029 eradication Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 238000012125 lateral flow test Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 2
- 230000001338 necrotic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 2
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 2
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000012549 training Methods 0.000 description 2
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VIIIJFZJKFXOGG-UHFFFAOYSA-N 3-methylchromen-2-one Chemical compound C1=CC=C2OC(=O)C(C)=CC2=C1 VIIIJFZJKFXOGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 1
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 1
- 239000004382 Amylase Substances 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 241000282709 Aotus trivirgatus Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N Borate Chemical compound [O-]B([O-])[O-] BTBUEUYNUDRHOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000853395 Bordetella ansorpii Species 0.000 description 1
- 241000588851 Bordetella avium Species 0.000 description 1
- 241001128981 Bordetella bronchialis Species 0.000 description 1
- 241001129021 Bordetella flabilis Species 0.000 description 1
- 241001477981 Bordetella hinzii Species 0.000 description 1
- 241001495147 Bordetella holmesii Species 0.000 description 1
- 241001305292 Bordetella muralis Species 0.000 description 1
- 241000588780 Bordetella parapertussis Species 0.000 description 1
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 1
- 241000359246 Bordetella petrii Species 0.000 description 1
- 241000069838 Bordetella pseudohinzii Species 0.000 description 1
- 241000769987 Bordetella sputigena Species 0.000 description 1
- 241000543043 Bordetella trematum Species 0.000 description 1
- 241001305268 Bordetella tumbae Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 229920003043 Cellulose fiber Polymers 0.000 description 1
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 1
- 241000282552 Chlorocebus aethiops Species 0.000 description 1
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 108010061994 Coronavirus Spike Glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N Dioxetane Chemical compound C1COO1 BVTJGGGYKAMDBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000000655 Distemper Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 101710133291 Hemagglutinin-neuraminidase Proteins 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020843 Hyperthermia Diseases 0.000 description 1
- 102000017727 Immunoglobulin Variable Region Human genes 0.000 description 1
- 108010067060 Immunoglobulin Variable Region Proteins 0.000 description 1
- 102100023408 KH domain-containing, RNA-binding, signal transduction-associated protein 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010024264 Lethargy Diseases 0.000 description 1
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 1
- 241000282561 Macaca nemestrina Species 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 1
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 description 1
- 241000406120 Pasivirus Species 0.000 description 1
- 241000606856 Pasteurella multocida Species 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 1
- 206010046306 Upper respiratory tract infection Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 230000004308 accommodation Effects 0.000 description 1
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O acridine;hydron Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3[NH+]=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 239000012790 adhesive layer Substances 0.000 description 1
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 238000004164 analytical calibration Methods 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 description 1
- 208000022531 anorexia Diseases 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000013584 assay control Substances 0.000 description 1
- 238000011948 assay development Methods 0.000 description 1
- 238000013096 assay test Methods 0.000 description 1
- 238000013475 authorization Methods 0.000 description 1
- 238000002819 bacterial display Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000006406 biphasic response Effects 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000000337 buffer salt Substances 0.000 description 1
- 208000014058 canine distemper Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 210000000795 conjunctiva Anatomy 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 1
- MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N decan-1-ol Chemical compound CCCCCCCCCCO MWKFXSUHUHTGQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 208000028659 discharge Diseases 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N ethidium bromide Chemical compound [Br-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CC)=C1C1=CC=CC=C1 ZMMJGEGLRURXTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960005542 ethidium bromide Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 239000004744 fabric Substances 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 239000011152 fibreglass Substances 0.000 description 1
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000007274 generation of a signal involved in cell-cell signaling Effects 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 230000036031 hyperthermia Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 239000003547 immunosorbent Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000005061 intracellular organelle Anatomy 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 description 1
- 238000007837 multiplex assay Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011236 particulate material Substances 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 229940051027 pasteurella multocida Drugs 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920006255 plastic film Polymers 0.000 description 1
- 238000012123 point-of-care testing Methods 0.000 description 1
- 229920002492 poly(sulfone) Polymers 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000004417 polycarbonate Substances 0.000 description 1
- 229920000515 polycarbonate Polymers 0.000 description 1
- 229920000728 polyester Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 1
- 238000002203 pretreatment Methods 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M propidium iodide Chemical compound [I-].[I-].C12=CC(N)=CC=C2C2=CC=C(N)C=C2[N+](CCC[N+](C)(CC)CC)=C1C1=CC=CC=C1 XJMOSONTPMZWPB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000002702 ribosome display Methods 0.000 description 1
- 238000005096 rolling process Methods 0.000 description 1
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 1
- 239000004054 semiconductor nanocrystal Substances 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 206010041232 sneezing Diseases 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 1
- 230000003595 spectral effect Effects 0.000 description 1
- 238000012289 standard assay Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229920002994 synthetic fiber Polymers 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 208000008203 tachypnea Diseases 0.000 description 1
- 206010043089 tachypnoea Diseases 0.000 description 1
- MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N texas red Chemical compound [O-]S(=O)(=O)C1=CC(S(Cl)(=O)=O)=CC=C1C(C1=CC=2CCCN3CCCC(C=23)=C1O1)=C2C1=C(CCC1)C3=[N+]1CCCC3=C2 MPLHNVLQVRSVEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 239000006226 wash reagent Substances 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L3/00—Containers or dishes for laboratory use, e.g. laboratory glassware; Droppers
- B01L3/50—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes
- B01L3/502—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures
- B01L3/5023—Containers for the purpose of retaining a material to be analysed, e.g. test tubes with fluid transport, e.g. in multi-compartment structures with a sample being transported to, and subsequently stored in an absorbent for analysis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/06—Investigating concentration of particle suspensions
- G01N15/0606—Investigating concentration of particle suspensions by collecting particles on a support
- G01N15/0612—Optical scan of the deposits
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
- G01N33/54386—Analytical elements
- G01N33/54387—Immunochromatographic test strips
- G01N33/54388—Immunochromatographic test strips based on lateral flow
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/02—Identification, exchange or storage of information
- B01L2300/023—Sending and receiving of information, e.g. using bluetooth
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B01—PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
- B01L—CHEMICAL OR PHYSICAL LABORATORY APPARATUS FOR GENERAL USE
- B01L2300/00—Additional constructional details
- B01L2300/08—Geometry, shape and general structure
- B01L2300/0809—Geometry, shape and general structure rectangular shaped
- B01L2300/0825—Test strips
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/01—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials specially adapted for biological cells, e.g. blood cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/06—Investigating concentration of particle suspensions
- G01N2015/0681—Purposely modifying particles, e.g. humidifying for growing
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N15/00—Investigating characteristics of particles; Investigating permeability, pore-volume or surface-area of porous materials
- G01N15/06—Investigating concentration of particle suspensions
- G01N2015/0687—Investigating concentration of particle suspensions in solutions, e.g. non volatile residue
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/01—DNA viruses
- G01N2333/075—Adenoviridae
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/11—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/115—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
- G01N2333/13—Canine distemper virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/165—Coronaviridae, e.g. avian infectious bronchitis virus
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/235—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Bordetella (G)
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/30—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Mycoplasmatales, e.g. Pleuropneumonia-like organisms [PPLO]
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/195—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
- G01N2333/315—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Streptococcus (G), e.g. Enterococci
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/10—Detection of antigens from microorganism in sample from host
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2469/00—Immunoassays for the detection of microorganisms
- G01N2469/20—Detection of antibodies in sample from host which are directed against antigens from microorganisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2800/00—Detection or diagnosis of diseases
- G01N2800/26—Infectious diseases, e.g. generalised sepsis
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Hematology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Virology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Clinical Laboratory Science (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
イヌ感染性呼吸器病症候群に関連する病原体を、ケンネルコフなどの動物において検出及び診断するための方法及び装置が、本明細書に開示される。上記装置は、2又はそれを超えるアッセイストリップであって、それぞれが固体支持体上に2又はそれを超える別個の反応ゾーンを含み、第1の別個の反応ゾーンが対照分析物捕捉剤を含み、かつ第2の別個の反応ゾーンが標的分析物捕捉試薬を含み、前記標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)抗原特異的抗体、CIRDC抗原、又はそれらの断片である、アッセイストリップを含む側方流動装置であり得る。
Description
関連出願
本出願は、2020年10月8日に出願された仮出願第63/089,523号に関する優先権主張書類であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
本出願は、2020年10月8日に出願された仮出願第63/089,523号に関する優先権主張書類であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
背景
イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)又はイヌ感染性気管気管支炎(ITB)としても知られているケンネルコフは、イヌを冒す上気道感染症である。CIRDCは、世界中でイヌの最も一般的な感染性呼吸器疾患の1つであると考えられており、イヌが犬舎などの高密度集団環境に収容されている場合、大流行する可能性がある。病原体の範囲には、ウイルス及び細菌、例えば、イヌアデノウイルス2型(CAV-2)、イヌパラインフルエンザウイルス(CPIV)、イヌコロナウイルス(CCoV)、イヌヘルペスウイルス1型(CHV)、及び最も一般的には、細菌Bordetella bronchiseptica(Bb)が含まれる。ケンネルコフによる感染は、イヌへの上気道及び下気道の上皮に定着するウイルス感染などの二次感染の素因となり、しばしばより重度の、時には致命的な呼吸困難をもたらす。
イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)又はイヌ感染性気管気管支炎(ITB)としても知られているケンネルコフは、イヌを冒す上気道感染症である。CIRDCは、世界中でイヌの最も一般的な感染性呼吸器疾患の1つであると考えられており、イヌが犬舎などの高密度集団環境に収容されている場合、大流行する可能性がある。病原体の範囲には、ウイルス及び細菌、例えば、イヌアデノウイルス2型(CAV-2)、イヌパラインフルエンザウイルス(CPIV)、イヌコロナウイルス(CCoV)、イヌヘルペスウイルス1型(CHV)、及び最も一般的には、細菌Bordetella bronchiseptica(Bb)が含まれる。ケンネルコフによる感染は、イヌへの上気道及び下気道の上皮に定着するウイルス感染などの二次感染の素因となり、しばしばより重度の、時には致命的な呼吸困難をもたらす。
病原体の範囲には、特定の実験室試験によって検出及び区別されるウイルス及び細菌が含まれる。市販の診断試験がないため、CIRDCに関連する疾患因子の多くは、認識されておらず、報告されていないままである。
ワクチン接種の有病率にもかかわらず、CIRDCは、例えば、動物間の基礎となる感染の急速な伝染、及び結果として生じる二次性のより重度の呼吸器感染症に対する感受性の増加のために、依然として問題である。更に、感染に対する免疫の逓減は、以前にワクチン接種された動物の間でさえ起こる場合があり、CIRDCを引き起こす感染性因子に対する動物の免疫状態を評価する必要性を増幅する。したがって、CIRDCの進行又は伝染を減少させるための処置又は介入に関するガイダンスを提供するために、特に疾患又は感染の初期段階で、CIRDCを検出するための方法及び装置が依然としてかなり必要とされている。
要旨
一部の態様では、本開示は、試料を処理又は分析するための方法であって、試料が、それを必要とする対象からであり、方法が、試料を処理することであって、側方流動装置のうちの1又はそれを超える別個の区画において、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)を引き起こし得る1又はそれを超える病原体に関連する呼吸症状に関連する1又はそれを超える標的分析物に特異的に結合するように構成された側方流動装置を使用して、側方流動装置が、1又はそれを超える標的分析物に結合すると、1又はそれを超える別個の区画に検出可能なシグナルを生成するように構成される、処理することと、検出可能なシグナルを分析することであって、対象が呼吸症状を有するか、又は呼吸症状に対する免疫を有するかどうかを決定することと、を含む、方法を提供する。方法は、スワブを介して対象から試料を得ることを更に含み得る。試料は、唾液、眼排出物、鼻排出物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択され得る。標的分析物は、1又はそれを超えるタンパク質を含み得る。1又はそれを超えるタンパク質は、CIRDC病原体によって産生される抗原、CIRDC病原体によって産生される病原性因子、CIRDC病原体によって産生される病原性因子の断片、CIRDC病原体又はその免疫原性断片であり得る。CIRDC病原体は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス、及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択され得る。抗原は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、mycoplasma cynos、streptococcus equi、及びイヌボカウイルスのうちの1又はそれを超える病原性因子であり得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、セルロパスミン(Cp)タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択され得る。標的分析物は、1又はそれを超える標的抗体を含み得る。1又はそれを超える標的抗体は、CIRDC病原体の1又はそれを超える免疫原性成分に対する親和性を有する抗体を含み得る。標的抗体は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、mycoplasma cynos、streptococcus equi、及びイヌボカウイルスタンパク質のうちの1又はそれを超える病原性因子に対する親和性を有する抗体からなる群から選択され得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン若しくはその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、セルロパスミン(Cp)タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択され得る。呼吸症状に対する対象のワクチン接種状態は不明であり得る。対象は、非ヒト動物であり得る。対象は、イヌ(Canis familiaris)、ブタ(Sus scrofa domesticus)、ヨーロッパヤマネコ(Felis catus)、アナウサギ(Oryctolagus cuniculus)及びウマ(Equus caballus)からなる群から選択される属に属し得る。対象は、イヌであり得る。呼吸症状は、感染性気管気管支炎であり得る。感染性気管気管支炎は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルス感染であり得る。感染性気管気管支炎は、ウイルス感染であり得る。感染性気管気管支炎は、細菌感染であり得る。方法は、呼吸症状に対するワクチンを受けた対象における呼吸症状に対する防御免疫の発症を評価することを含み得る。分析することは、検出可能なシグナルを対照と比較して、試料中の1又はそれを超える標的分析物の存在を決定することを含み得る。比較することは、側方流動装置によって生成された検出可能なシグナルのデジタル画像を分析することを含み得、デジタル画像は、対照を識別するためのコードを含む。分析することは、訓練されたアルゴリズムによって実行され得、デジタル画像は、コンピュータを介して訓練されたアルゴリズムに送信される。方法は、第2の時点で対象から第2の試料を得ることと、呼吸症状に対する免疫の持続時間を評価するために側方流動装置を使用して第2の試料を分析することと、を含み得る。側方流動装置は、1又はそれを超える捕捉剤を含み得る。1又はそれを超える捕捉剤は、呼吸症状に関連する1又はそれを超える抗原を含み得る。1又はそれを超える捕捉剤は、呼吸症状に関連する抗原に結合するように構成された1又はそれを超える抗体を含み得る。
一部の態様では、本開示は、試料を処理又は分析するための方法であって、試料が、それを必要とする対象からであり、方法が、試料を処理することであって、側方流動装置のうちの1又はそれを超える別個の区画において、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)を引き起こし得る1又はそれを超える病原体に関連する呼吸症状に関連する1又はそれを超える標的分析物に特異的に結合するように構成された側方流動装置を使用して、側方流動装置が、1又はそれを超える標的分析物に結合すると、1又はそれを超える別個の区画に検出可能なシグナルを生成するように構成される、処理することと、検出可能なシグナルを分析することであって、対象が呼吸症状を有するか、又は呼吸症状に対する免疫を有するかどうかを決定することと、を含む、方法を提供する。方法は、スワブを介して対象から試料を得ることを更に含み得る。試料は、唾液、眼排出物、鼻排出物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択され得る。標的分析物は、1又はそれを超えるタンパク質を含み得る。1又はそれを超えるタンパク質は、CIRDC病原体によって産生される抗原、CIRDC病原体によって産生される病原性因子、CIRDC病原体によって産生される病原性因子の断片、CIRDC病原体又はその免疫原性断片であり得る。CIRDC病原体は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス、及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択され得る。抗原は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、mycoplasma cynos、streptococcus equi、及びイヌボカウイルスのうちの1又はそれを超える病原性因子であり得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、セルロパスミン(Cp)タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択され得る。標的分析物は、1又はそれを超える標的抗体を含み得る。1又はそれを超える標的抗体は、CIRDC病原体の1又はそれを超える免疫原性成分に対する親和性を有する抗体を含み得る。標的抗体は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、mycoplasma cynos、streptococcus equi、及びイヌボカウイルスタンパク質のうちの1又はそれを超える病原性因子に対する親和性を有する抗体からなる群から選択され得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン若しくはその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、セルロパスミン(Cp)タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択され得る。呼吸症状に対する対象のワクチン接種状態は不明であり得る。対象は、非ヒト動物であり得る。対象は、イヌ(Canis familiaris)、ブタ(Sus scrofa domesticus)、ヨーロッパヤマネコ(Felis catus)、アナウサギ(Oryctolagus cuniculus)及びウマ(Equus caballus)からなる群から選択される属に属し得る。対象は、イヌであり得る。呼吸症状は、感染性気管気管支炎であり得る。感染性気管気管支炎は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルス感染であり得る。感染性気管気管支炎は、ウイルス感染であり得る。感染性気管気管支炎は、細菌感染であり得る。方法は、呼吸症状に対するワクチンを受けた対象における呼吸症状に対する防御免疫の発症を評価することを含み得る。分析することは、検出可能なシグナルを対照と比較して、試料中の1又はそれを超える標的分析物の存在を決定することを含み得る。比較することは、側方流動装置によって生成された検出可能なシグナルのデジタル画像を分析することを含み得、デジタル画像は、対照を識別するためのコードを含む。分析することは、訓練されたアルゴリズムによって実行され得、デジタル画像は、コンピュータを介して訓練されたアルゴリズムに送信される。方法は、第2の時点で対象から第2の試料を得ることと、呼吸症状に対する免疫の持続時間を評価するために側方流動装置を使用して第2の試料を分析することと、を含み得る。側方流動装置は、1又はそれを超える捕捉剤を含み得る。1又はそれを超える捕捉剤は、呼吸症状に関連する1又はそれを超える抗原を含み得る。1又はそれを超える捕捉剤は、呼吸症状に関連する抗原に結合するように構成された1又はそれを超える抗体を含み得る。
本明細書では、試料を処理又は分析するためのシステムであって、試料が、それを必要とする対象からであり、(i)2又はそれを超えるアッセイストリップであって、それぞれが固体支持体上に2又はそれを超える別個の反応ゾーンを含み、第1の別個の反応ゾーンが対照分析物捕捉剤を含み、かつ第2の別個の反応ゾーンが標的分析物捕捉試薬を含み、標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)抗原特異的抗体、CIRDC抗原、又はそれらの断片である、アッセイストリップと、(ii)試料投入ポートであって、2又はそれを超えるアッセイストリップが試料投入ポートの周りに配置され、側方流動装置が、対照分析物捕捉剤が対照分析物に結合すると、又は標的分析物捕捉剤が標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成され、検出可能なシグナルが、コンピュータに送られ、コンピュータプログラムによって分析されて、CIRDC抗原、抗体又はその断片の存在又は非存在を決定する、試料投入ポートと、を含む側方流動装置を含む、システムが開示される。コンピュータは、対象が呼吸症状を有する、呼吸症状を発症するだろう、又は呼吸症状に対する免疫を有する、という尤度を出力し得る。システムは、対照分析物捕捉剤によって結合された対照分析物に結合するように構成された第1のレポーター分子と、標的分析物捕捉剤によって結合された標的分析物に結合するように構成された第2のレポーター分子と、を更に含み得る。第1のレポーター分子及び第2のレポーター分子は、標的分析物又は対照分析物に結合すると、2又はそれを超える別個の反応ゾーンの別個の反応ゾーンで検出可能なシグナルを生成することができるものであり得る。第1のレポーター分子又は第2のレポーター分子は、コロイド金、プロテインA、酵素、又は指示薬色素を含み得る。検出可能なシグナルは、蛍光シグナル又は比色変化であり得る。生物学的試料は、唾液、鼻排出物、口腔内分泌物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択され得る。対照分析物捕捉剤は抗体であり得、かつ標的分析物捕捉剤が抗体である。対照分析物捕捉剤は、IgAであり得る。対照分析物は抗原であり得、かつ標的分析物は抗原であり得る。標的分析物は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパー、イヌインフルエンザ、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスの病原性因子であり得る。病原性因子は、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜五量体タンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、及びセルロパスミン(Cp)タンパク質を含む群から選択され得る。標的分析物は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス、イヌヘパシウイルス、又はイヌ(Canis familiaris)によって産生される病原性因子の断片であり得る。病原性因子は、イヌ(Canis familiaris)動物において、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスによって産生される構造タンパク質、細胞膜タンパク質又は毒素であり得る。対照分析物捕捉剤は抗原であり得、標的分析物捕捉剤は抗原であり得る。対照分析物は抗体であり得、標的分析物は抗体であり得る。対照分析物捕捉剤は、イヌIgAであり得る。対照分析物は、抗IgA抗体であり得る。標的分析物は、CIRDC病原体に対して親和性を有する抗体又はその免疫原性断片からなる群から選択される抗体であり得る。CIRDC病原体は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスであり得る。標的分析物は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群の病原性因子に対して親和性を有する抗体からなる群から選択される抗体であり得る。側方流動装置は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含み得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、ニトロセルロース膜を含み得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、第1の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤-対照分析物コンジュゲートを形成し、第2の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤-標的分析物コンジュゲートを形成するように構成され得る。
本明細書では、1又はそれを超える呼吸症状に関連する1又はそれを超える標的分析物を検出するための装置であって、固体支持体上に固定化された1又はそれを超える標的分析物捕捉試薬を含み、1又はそれを超える標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)抗原特異的抗体、CIRDC抗原、又はそれらの断片であり、1又はそれを超える標的分析物捕捉試薬の各々が、装置の複数の別個の区画のうちの異なる別個の区画にあり、複数の別個の区画が、中央試料投入ポートに流体接続され、かつ装置が、1又はそれを超える標的分析物捕捉剤による1又はそれを超える標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成される、装置が開示される。固体支持体は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含み得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、ニトロセルロースを含み得る。複数の標的及び対照分析物の別個の区画は、中央試料投入ポートの周りに輪状に1又はそれを超えるストリップ状に配置され得る。第1の対照分析物捕捉区画及び第1の標的分析物捕捉区画は、第1のストリップ上に配置され得、第2の対照分析物捕捉区画及び第2の標的分析物捕捉区画は、第2のストリップ上に配置され得、第1のストリップ及び第2のストリップは、中央試料投入ポートの周りに配置される。複数の別個の区画は、単一のストリップ内に存在し得、区画は、中央試料投入ポートに対して遠位に配置される。複数の別個の区画は、標的分析物区画が試料投入ポートの遠位のアッセイストリップ上に二次元アレイとして配列されるように配置され得る。複数の別個の区画は、各別個の標的分析物区画が別個の対照分析物区画に隣接して配置されるように配置され得る。複数の別個の区画は、各別個の標的分析物区画が別の標的分析物区画に隣接して配置されるように配置され得る。標的分析物区画は、単一の捕捉試薬を含み得る。標的分析物区画は、捕捉試薬の組み合わせを含み得る。装置は、少なくとも12個の別個の標的分析物区画を含み得、各標的分析物の存在又は非存在は、異なるCIRDC病原体の存在又は非存在を示す。CIRDC病原体は、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択され得る。免疫クロマトグラフィーアッセイストリップは、取り外し可能であり得る。
あるいは、固相上の複数の標的及び対照分析物反応部位は、単一のカートリッジ内の単一のニトロセルロースストリップ上に別個の「ドット」として配置することができる。各ドット位置は、モノクローナル捕捉抗体、抗原分析物、及び標的生物の1つ及びそれらのタンパク質抗原の1つに固有のコロイド金指標を有するコンジュゲート検出器抗体で構成される特異的抗原捕捉反応を表す。例えば、Bordetella bronchiseptica生物は、糸状ヘマグルチニン(FHA)、Pertactin(PRN)、及びBordetellaコロニー形成因子(Bcfa)抗原標的を含む3つの特異的標的タンパク質を有することができる。この初めに、目標は、単一の分析装置内の1つより多くの検出部位を配列させることである。この場合、標的タンパク質に対する特異性を有する特異的モノクローナル抗体は、捕捉抗体として機能する別個のドットとしてニトロセルロースストリップに適用される。標的分析物が動物試料中に存在する場合、その抗原は捕捉されて免疫複合体を形成する。次に、コロイド金を用いた検出抗体コンジュゲートを用いて、装置で読み取り可能な反応物を作製する。それぞれ3つの異なるタンパク質分析物を含む12の病原体をスクリーニングするために、36個の別個のドットをアレイ状フォーマットに配列することができ、ここでは6×6又は4×9アレイなどの任意の適切な構成を使用することができる(図6)。
本明細書では、装置及び説明書を含むキットが開示される。キットは、対象から試料を得るための器具と、装置の試料投入ポートに装填する前に試料を安定化するための輸送流体と、を含むことができる。キットは、検出可能なシグナルを生成するための緩衝液を含むことができる。緩衝液は、シグナル生成試薬を含むことができる。輸送流体は、プロテアーゼ阻害剤及びエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を含むことができる。
参照による組み込み
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許、及び特許出願は、あたかも各個々の刊行物、特許、又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示されているのと同程度に、参照により本明細書に組み込まれる。
本発明の新規な特徴は、添付の特許請求の範囲に詳細に記載されている。本発明の特徴及び利点のより良い理解は、本発明の原理が利用される例示的な実施形態を説明する以下の詳細な説明、及び添付の図面を参照することによって得られるであろう。
詳細な説明
生物学的試料中のCIRDCを引き起こし得る病原体などの標的病原体の存在を検出するための装置、システム、キット及び方法が本明細書に記載される。以下の開示では、CIRDC病原体は、例えば、Bordetella brochiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスなどであり得る。装置、システム、キット及び方法は、イヌなどの動物由来の又は動物から得られた試料中の、CIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchoseptica)などの目的の標的病原体の検出のための迅速試験(例えば、臨床検査又はポイントオブケア検査)に使用することができる。本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica又はイヌアデノウイルス2型)感染の多重検出を実行することができる。いくつかの態様では、本開示は、イヌなどの動物におけるCIRDC感染の早期検出のための装置、システム、キット及び方法を提供する。CIRDC又はケンネルコフの早期検出は、他の疾患因子によって引き起こされる二次性呼吸器感染症に対する感受性の増加から動物を保護し得る。場合によっては、二次感染は、イヌアデノウイルス2型(CAV-2)、イヌパラインフルエンザウイルス(CPIV)、イヌコロナウイルス(CCoV)、イヌヘルペスウイルス1型(CHV)又はPasteurella multocidaによって引き起こされる。
生物学的試料中のCIRDCを引き起こし得る病原体などの標的病原体の存在を検出するための装置、システム、キット及び方法が本明細書に記載される。以下の開示では、CIRDC病原体は、例えば、Bordetella brochiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスなどであり得る。装置、システム、キット及び方法は、イヌなどの動物由来の又は動物から得られた試料中の、CIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchoseptica)などの目的の標的病原体の検出のための迅速試験(例えば、臨床検査又はポイントオブケア検査)に使用することができる。本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica又はイヌアデノウイルス2型)感染の多重検出を実行することができる。いくつかの態様では、本開示は、イヌなどの動物におけるCIRDC感染の早期検出のための装置、システム、キット及び方法を提供する。CIRDC又はケンネルコフの早期検出は、他の疾患因子によって引き起こされる二次性呼吸器感染症に対する感受性の増加から動物を保護し得る。場合によっては、二次感染は、イヌアデノウイルス2型(CAV-2)、イヌパラインフルエンザウイルス(CPIV)、イヌコロナウイルス(CCoV)、イヌヘルペスウイルス1型(CHV)又はPasteurella multocidaによって引き起こされる。
いくつかの態様では、本開示は、CIRDCを引き起こし得る薬剤(例えば、イヌニューモウイルス)に対する動物の免疫状態を評価するための装置、システム、キット及び方法を提供する。装置、システム、キット及び方法は、1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica)へのワクチンの投与後の動物における1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica)に対する防御免疫の発症を評価するために、又は1又はそれを超えるCIRDC病原体へのワクチンの投与後の動物における1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica)に対する免疫の持続時間を評価するために、使用され得る。本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica)感染からの動物(例えば、イヌ)の継続的な保護を確実にするのに役立つ。装置、システム、キット及び方法は、CIRDC感染を引き起こし得る1又はそれを超える薬剤に対する免疫の逓減を予防又は制限することによって、動物の集団(例えば、イヌ)における1又はそれを超えるCIRDC病原体感染の急速伝染を減少させることができる。
本開示は、保護抗体のレベルを評価するために、CIRDC病原体(例えば、Streptococcus equi)に対するワクチン状態のマーカーとして役立つ免疫アッセイを提供する。この試験方法の適用はまた、CIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchoseptica)へのワクチン接種のための最適な用量数及びスケジュールを決定するための有用なデータを提供し得る。本明細書に開示される方法は、CIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchoseptica)に対するワクチン接種シリーズの各段階での抗体応答の進行に従い得る。抗体力価をモニタリングすることによって、本明細書中に開示される方法は、例えば、ワクチン有効性のために一連の注射が必要であるかどうか、保護的免疫化を維持するために年1回のブースターが必要とされるかどうか、又は代替的に、免疫化がどのくらい長く続くか、かつ/又は最大抗体力価が達成される一連の注射の時点を決定し得る。
別の態様では、本明細書の装置、システム、キット及び方法は、症候性又は急性疾患の動物における呼吸困難のウイルス性及び細菌性の原因因子を区別すること、並びに動物の疾患からの回復を評価することに適用可能であり得る。一態様では、本明細書に記載の方法は、動物(すなわち、イヌ)から生体液(すなわち、鼻スワブ)を得ること、かつ1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica)を迅速に検出することに関する。別の態様では、本明細書に開示される方法は、動物(すなわち、イヌ)から得られた生体液(すなわち、唾液)中のCIRDC病原体(例えばStreptococcus equi)に対する1又はそれを超える抗体の迅速な検出を提供する。場合によっては、アッセイは、表面固定化捕捉試薬(すなわち、目的のStreptococcus equi抗原に対する親和性を有する標識抗体)を含む固体支持体(すなわち、免疫クロマトグラフィーストリップ)上で行われ得る。試料中の抗原又は抗体の存在は、シグナルを生成することによって検出され、その後、手持ち式スキャナを使用して同じ位置で迅速に測定及び分析することができる。
本開示は、動物、特にイヌのCIRDC病原体曝露又は免疫状態を評価するための迅速、高感度、特異的、非浸潤的診断スクリーニングツールとして特に有用である。本開示の手持ち式インビトロ試験方法は、動物の集団及び近接に起因してCIRDCのアウトブレイクの可能性がより高い訓練エリア及び収容エリアにおける動物の健康状態の監視に使用することができる。
したがって、本明細書に開示される装置、システム、キット及び方法は、イヌなどの動物間のCIRDC病原体(例えば、Bordetella bronchiseptica)感染の伝染を診断及び評価し、それによって引き起こされる苦痛及び経済的損失を回避することに関連する様々な問題に対処する。得られたデータは、実験室報告を生成するために使用され得るか、又は獣医学疫学者によって使用されて、これまで認識が低く、あまり理解されていなかった、CIRDCをもたらす因子の生態学、有病率、発生率、及び地理的分布における知識のギャップを埋めることができる。
定義
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語、表記並びに他の技術的及び科学的用語又は用語は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有することが意図される。場合によっては、一般に理解される意味を有する用語は、明確性及び/又は容易な参照のために本明細書で定義され、本明細書にそのような定義を含めることは、当技術分野で一般に理解されるものとの実質的な違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。
他に定義されない限り、本明細書で使用されるすべての技術用語、表記並びに他の技術的及び科学的用語又は用語は、特許請求される主題が属する技術分野の当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有することが意図される。場合によっては、一般に理解される意味を有する用語は、明確性及び/又は容易な参照のために本明細書で定義され、本明細書にそのような定義を含めることは、当技術分野で一般に理解されるものとの実質的な違いを表すと必ずしも解釈されるべきではない。
本出願を通して、様々な実施形態が範囲形式で提示され得る。範囲形式での説明は、単に便宜及び簡潔さのためのものであり、本開示の範囲に対する柔軟性のない限定として解釈されるべきではないことを理解されたい。したがって、範囲の説明は、すべての可能な部分範囲並びにその範囲内の個々の数値を具体的に開示したと見なされるべきである。
本明細書及び特許請求の範囲で使用される場合、単数形「a」、「an」、及び「the」は、文脈が明らかにそうでないことを指示しない限り、複数の言及を含む。例えば、「試料」という用語は、それらの混合物を含む複数の試料を含む。
用語「決定すること」、「測定すること」、「評価すること」、「評価すること」、「アッセイすること」及び「分析すること」は、測定の形態を指すために本明細書では交換可能に使用されることが多い。これらの用語は、要素が存在するか否かを決定すること(例えば、検出)を含む。これらの用語は、定量的、定性的又は定量的及び定性的な決定を含み得る。評価は、相対的又は絶対的であり得る。「存在を検出すること」は、文脈に応じて存在するか否かを決定することに加えて、存在する何かの量を決定することを含むことができる。
「捕捉試薬」、「捕捉剤」及び「捕捉分子」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
「標的反応ゾーン」及び「標的分析物捕捉ゾーン」という用語は、本明細書では互換的に使用される。
本明細書で使用される場合、「処置」又は「処置すること」という用語は、レシピエントにおいて有益な又は所望の結果を得るための薬学的又は他の介入レジメンに関して使用される。有益な又は所望の結果には、治療的利益及び/又は予防的利益が含まれるが、これらに限定されない。治療的利益は、臨床徴候又は処置されている基礎障害の根絶又は改善を指し得る。また、対象が依然として基礎障害に罹患している可能性があるにもかかわらず、対象において改善が観察されるように、基礎障害に関連する生理学的症状の1又はそれを超える根絶又は改善によって治療的利益を達成することができる。予防効果は、疾患又は症状の出現を遅延させること、予防すること、又は排除すること、疾患又は症状の発症を遅延させること、又は排除すること、疾患又は症状の進行を遅延させること、停止させること、又は逆転させること、又はそれらの任意の組み合わせを含む。予防的利益のために、特定の疾患を発症するリスクがある対象、又は疾患の1又はそれを超える生理学的症状を報告する対象は、この疾患の診断がなされていなくても、処置を受けることができる。
本明細書で使用されるセクションの見出しは、構成上の目的のためだけであり、記載された主題を限定するものと解釈されるべきではない。
抗原-抗体複合体
本開示は、本明細書に記載の装置、キット及び/又は組成物の1又はそれを超えるものを使用して、動物などの対象からの試料(例えば体液)中の1又はそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性抗原(例えば、Bordetella bronchiseptica抗原)又は1若しくはそれを超えるCIRDC病原体に対する抗体の存在又は非存在を検出する方法を含む。いくつかの実施形態では、対象はイヌである。
本開示は、本明細書に記載の装置、キット及び/又は組成物の1又はそれを超えるものを使用して、動物などの対象からの試料(例えば体液)中の1又はそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性抗原(例えば、Bordetella bronchiseptica抗原)又は1若しくはそれを超えるCIRDC病原体に対する抗体の存在又は非存在を検出する方法を含む。いくつかの実施形態では、対象はイヌである。
いくつかの実施形態では、対象は、呼吸症状の1又はそれを超える症状、例えば、重篤又は粘液膿性の鼻、口腔又は眼の分泌、くしゃみ、咳、高体温、吐き気、嘔吐、頻呼吸、呼吸困難、全身性疾患、嗜眠、及び食欲不振を有する。いくつかの実施形態では、対象は、以前にケンネルコフと診断されなかった。いくつかの実施形態では、対象は、以前にケンネルコフと診断された。
本明細書の方法は、家畜から得られた試料中のCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性抗原又は1つ若しくは複数のCIRDC病原体に対する抗体の、存在又は非存在を検出するために実施され得る。いくつかの実施形態では、本方法は、イヌ(Canis familiaris)、ブタ(Sus scrofa domesticus)、ヨーロッパヤマネコ(Felis catus)、アナウサギ(Oryctolagus cuniculus)及びウマ(Equus caballus)動物から得られた試料中のCIRDC病原体又はその1又はそれを超える免疫原性抗原、又はCIRDC病原体に対する抗体の、存在又は非存在を検出する。試料はまた、アカゲザル(Macaca mulatta)(rhesus monkey)、カニクイザル(M fascicularis)、ミナミブタオザル(M nemestrina)、ミドリザル(Chlorocebus aethiops)、ヒヒ(Papio spp.)、コモンリスザル(Saimiri sciureus)又はヨザル(Aotus trivirgatus)から得ることもできる。
本明細書の方法は、B.bronchiseptica、B.pertussis、b.parapertussis、B.hinzii、B.ansorpii、B.avium、B.bronchialis、B.flabilis、B.holmesii、B.muralis、B.petrii、B.pseudohinzii、B.sputigena、B.trematum、B.tumbae又はB.tumicola.の存在又は非存在を検出するように修正され得る。いくつかの実施形態では、本方法は、B.bronchisepticaの存在又は非存在を検出することを含む。本明細書の方法はまた、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスの存在又は非存在を検出するために使用され得る。
対象の1又はそれを超える体液から選択される試料中に存在する1又はそれを超える抗原を検出する、動物における呼吸器感染症の検出方法を本明細書で提供する。いくつかの実施形態では、本方法は、動物の1又はそれを超える体液から選択される試料中に存在する1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性抗原(例えば、Bordetella bronchiseptica)を検出する。体液は、唾液、血液(例えば、全血、血清、バフィーコート(すなわち、単核細胞))、尿、糞便、組織、創傷滲出液、膿瘍材料又は粘液であり得る。いくつかの実施形態では、体液は、唾液である。体液は、鼻、口腔及び結膜試料からであり得る。試料は、スワブで収集されてもよく、約0.5mL、1(l)mL、1.5(l.5)mL、2mL、2.5mL、又は3mLの培地を有する収集チューブに加えられてもよい。各試料タイプの性能データは、別々に保持されてもよく、又はプールされてもよい。いくつかの実施形態では、体液試料を同じ収集チューブに添加する。いくつかの実施形態では、試料は新鮮な試料である。いくつかの実施形態では、試料を予め凍結したか、又は安定剤を用いて予め保存した。安定剤としては、(1)スクロース、トレハロース、ソルビトール及びマンニトールなどの糖、又は糖の組み合わせ、又はグリセリンなどの糖アルコールを挙げることができ、(2)凍結乾燥、真空遠心分離、言及される糖のいずれかの添加、若しくは糖の任意の組み合わせによる結晶化又はガラス化プロセスなどの糖を含む方法、(3)乾燥乳又は乳誘導体のようなブロッキング溶液は、界面活性剤又は洗剤を除去するか、又はニトロセルロースストリップの湿潤特性に影響を与える膜上のそれらの濃度を低下させることができ、(4)アルブミン又はBSAのようなタンパク質及びSDS又はTween(登録商標)20のような界面活性剤は、コンジュゲートの再可溶化を促進してよく、試薬と分析物との間の非特異的結合を低減してよく、(5)尿のような高pH試料は、捕捉抗体及び検出抗体の感度及び特異性をシフトさせることができる高濃度緩衝塩での前処置を必要とする可能性が高く(例えば、I.OMボレート緩衝液、pH9.5)、(6)メタノール、エタノール又はイソプロパノールの使用は、試薬適用の一貫性を改善し、タンパク質溶解度を低下させ、タンパク質の乾燥及び固定を促進することができる。CIRDCの試験対象の試料が可溶性及び不溶性物質を含有する場合、体液の可溶性部分は、当技術分野で公知の任意のプロトコルによって収集され得る。試料の可溶性部分は、一般に、濾過、抽出、遠心分離、又は単純な混合とそれに続く重量沈降を使用することによって収集され得る。例えば、試料は、哺乳動物によって自然に***されるか、そうでなければ放出されるか、又は哺乳動物から人工的に得られる体液であり得る。このような人工的な抽出は、哺乳動物を搾乳することによって、又は哺乳動物に注射器を注射し、流体を注射器に引き込むことによって行うことができる。一旦得られると、流体は、必要に応じて分画され得る(例えば、血清を全血から分画し、次いで試料として使用してもよい)。別の例として、試料は、哺乳動物を、例えば哺乳動物の口腔又は鼻腔などを綿球で拭くことによって得られ得る。更に別の例として、組織切片を生検によって得ることができる。
いくつかの実施形態では、唾液及び/又は口腔粘膜漏出液及び歯肉溝滲出液を緩衝液と混合する。試料が膜の全長を移動するときに最適な膜流量を確保するために、バルブピペットを用いて添加を行うことができる。刺激された唾液及びプロテアーゼ阻害剤/EDTA希釈緩衝液を混合して、試料の流れを促進することができる。一実施形態では、試料が膜の全長を移動するときに最適な膜流量を確保するために、バルブピペットによって添加されるように、2滴の緩衝液と混合された4滴の唾液及び/又は口腔粘膜漏出液及び歯肉溝滲出液を添加することができる。2滴(80~100μL)のプロテアーゼ阻害剤/EDTA希釈緩衝液と混合された4滴(160~200μL)の刺激された唾液もまた、試料の流れを促進し得る。
動物から得られた生体液中のCIRDC病原体又はその1若しくは複数の免疫原性抗原(例えば、Bordetella bronchiseptica抗原)の存在又は非存在を、CIRDC感染のマーカーとして検出する方法が本明細書で提供される。一実施形態では、本方法の工程は、動物から1又はそれを超える体液の試料を採取することと、試料中のCIRDC抗原又はその一部に親和性を有する少なくとも1つの抗体を含む固体支持体に試料を適用することと、少なくとも1つの標識抗原-抗体コンジュゲートの形成を可能にすることであって、コンジュゲートがシグナルを生成することができる、形成を可能にすることと、シグナルを検出可能なレベルまで生成することを可能にすることと、シグナルを検出することであって、試料中の抗原の存在が、シグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
場合によっては、検出される病原体は、Bordetella bronchisepticaであり得る。場合によっては、検出される病原体は、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスであり得る。
場合によっては、アッセイにおいてCIRDC感染のマーカーとして使用される抗原は、動物(例えば、イヌ)の病原体によって産生される病原性因子又はその断片であり得る。場合によっては、病原性因子は、病原体によって産生される構造タンパク質、細胞膜タンパク質又は毒素である。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗原は、動物の病原体によって産生される免疫原性タンパク質であり得るが、病原性因子ではない。
場合によっては、検出される抗原は、p68タンパク質、糸状ヘマグルチニン(FHA)タンパク質、パータクチン(PER)タンパク質、線毛(FIM)タンパク質、ボルデテラコロニー形成因子A(Bcfa)、気管コロニー形成因子、血清抵抗因子(BrkA)、Bvg8タンパク質、O抗原タンパク質、アデニル酸シクラーゼ-ヘモリシン、皮膚壊死毒素、又はBordetella bronchisepticaの気管細胞毒素であり得る。
場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、マトリックス(M)、ヘマグルチニン-ノイラミニダーゼタンパク質(HN)、融合タンパク質(F)、核タンパク質(NP)、又はイヌパラインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質(M)であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌ呼吸器コロナウイルスのスパイク糖タンパク質三量体タンパク質(S)、膜タンパク質(M)、核タンパク質(N)、又はエンベロープ(E)、小膜五量体タンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌアデノウイルス2型のカプシドタンパク質(C)、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質若しくは周辺ヘキソンタンパク質(PH)、又はヘキソン(H)であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌヘルペスウイルスのエンベロープタンパク質(E)、主要カプシドタンパク質(C)、外被/内被タンパク質(T)であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌジステンパーウイルスのヘマグルチニン(H)、ヌクレオカプシド(N)、又は融合タンパク質(F)であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質、核タンパク質(NP)、H3タンパク質、N2タンパク質又はN8タンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌニューモウイルスの糖タンパク質(G)、融合タンパク質(F)、マトリックスタンパク質(M)又はSHタンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、Streptococcus equiのMAPタンパク質又はCPSタンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌボカウイルスのCpタンパク質であり得る。場合によっては、検出される免疫原性断片又は抗原は、イヌヘパシウイルスのE1(El)又はE2タンパク質であり得る。
場合によっては、動物(例えば、イヌ)におけるCIRDC感染の検出に使用される抗体は、動物(例えば、イヌ)に感染したときに病原体によって産生される抗原に対して特異的親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、抗体は、病原体によって産生される病原性因子であるタンパク質に対する親和性を示す。一例では、抗体は、動物(例えば、イヌ)に感染すると、病原体によって産生される免疫原性タンパク質に対する親和性を示す。
場合によっては、Bordetella bronchiseptica Pertactinに対して特異的親和性を有する抗体を感染の検出に使用することができる。1つの例では、アッセイにおけるBordetella bronchiseptica感染の検出に使用される抗体は、Bordetella bronchiseptica糸状ヘマグルチニンに対する特異的親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、Bordetella bronchiseptica O抗原タンパク質に対する特異的親和性を示す抗体をアッセイに使用することができる。
場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌパラインフルエンザウイルスのヘマグルチニンタンパク質(HN)、融合タンパク質(F)若しくはマトリックスタンパク質(M)の免疫原性断片又はその免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌ呼吸器コロナウイルスのスパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、又はエンベロープ、小膜五量体タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌアデノウイルス2型のカプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質又はヘキソンタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌヘルペスウイルスのエンベロープタンパク質又は主要カプシドタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌジステンパーウイルスのヘマグルチニン又は融合タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出のために使用される抗体は、イヌインフルエンザウイルスのマトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質又はN8タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌニューモウイルスの糖タンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質又はSHタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、Streptococcus equiのMAPタンパク質又はCPSタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌボカウイルスのCpタンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。場合によっては、CIRDC感染の検出に使用される抗体は、イヌヘパシウイルスのE1(El)又はE2タンパク質の免疫原性断片に対する親和性を有する抗体であり得る。
場合によっては、本明細書に記載の方法は、動物に感染したときに病原体によって産生され得る複数の抗原を同時に同定することによる検出の特異性の改善を必要とする。例えば、アッセイは、Bordetella bronchisepticaの複数の病原性因子又は免疫原性タンパク質の同時検出のための方法を使用し得る。場合によっては、Bordetella bronchiseptica糸状ヘマグルチニン(FHA)タンパク質又はその一部、Bordetella bronchisepticaパータクチン(PER)タンパク質又はその一部、Bordetella bronchiseptica線毛(FIM)タンパク質又はその一部、Bordetella bronchiseptica気管コロニー形成因子又はその一部、Bordetella bronchiseptica血清抵抗因子(BrkA)又はその一部、Bordetella bronchiseptica(Bvg8)タンパク質又はその一部、Bordetella bronchiseptica O抗原タンパク質又はその一部、Bordetella bronchisepticaアデニル酸シクラーゼ-ヘモリシン又はその一部、Bordetella bronchiseptica皮膚壊死毒素又はその一部、及びBordetella bronchiseptica気管細胞毒素又はその一部、から選択されるタンパク質の1又はそれを超える組み合わせを、Bordetella bronchiseptica感染の存在を同定するための抗原のサブセットとして使用することができる。
[0046]場合によっては、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性成分(例えば、Bordetella bronchiseptica抗原)に対して特異的親和性を有する1又はそれを超える抗体を使用して、動物から得られた試料中の病原体の存在又は非存在を検出することができる。本明細書の開示は、複数のそのような抗原-抗体複合体の形成のための固体支持体を提供する。一実施形態では、固体支持体は、空間的に異なるゾーンを含み、各ゾーンは、CIRDC病原体によって産生される異なる免疫原性タンパク質又は病原性因子に対する親和性を有する固有の抗体で前処理される。1つの実施形態では、記載される固体支持体は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップである。一実施形態では、アッセイストリップは、第1の抗体で前処理された(コーティングされた)第1のゾーンであって、第1の抗体が、第1のCIRDC病原体の第1のタンパク質又はその免疫原性断片に対して親和性を有する抗体である、第1のゾーンと、第2の抗体で前処理された(コーティングされた)第2のゾーンであって、第2の抗体が、第1のゾーンの第1の抗体とは異なる第2のCIRDC病原体の第2のタンパク質又はその断片に対して親和性を有する抗体である、第2のゾーンと、第3の抗体で前処理された(コーティングされた)第3のゾーンであって、第3の抗体が、第1のゾーンの第1の抗体及び第2のゾーンの第2の抗体とは異なる、第3のCIRDC抗原のタンパク質又はその断片のタンパク質に対して親和性を有する抗体である、第3のゾーンと、を含む。場合によっては、第1、第2、及び第3の病原体は、同じCIRDC病原体であり得る。場合によっては、第1、第2及び第3の病原体は、異なるCIRDC病原体であり得る。
一実施形態では、動物におけるCIRDC感染を1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片の存在を測定することによって検出する方法は、以下の工程:動物から1又はそれを超える体液の試料を採取することであって、1又はそれを超える薬剤が試料中に存在する、採取することと、試料をカセットユニットに適用することであって、カセットユニットは、複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを更に受け入れることができる、適用することと、生物学的試料を複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに接触させることと、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿って側方流動アッセイを実行することであって、実行することが、アッセイストリップに沿って試料を側方流動させることを含み、アッセイストリップが、CIRDC病原体によって産生される1又はそれを超える免疫原性タンパク質に対する親和性を有する少なくとも1つの膜結合検出器を含む少なくとも1つの膜結合ゾーンを含む、実行することと、少なくとも1つの標識-抗体コンジュゲートの形成を可能にすることであって、コンジュゲートが、スキャナによって検出され得る免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿った1又はそれを超える固有の領域においてシグナルを生成することができる、可能にすることと、シグナルを生成することと、シグナルを検出することであって、試料中の作用物質の存在が、アッセイストリップ中の1又はそれを超える空間的に異なるゾーンにおけるシグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
感染又はワクチン接種時に動物においてCIRDC病原体に対する応答として産生される1又はそれを超える抗体を同定することによって、以前にCIRDCに罹患している可能性があるか、又は1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、イヌ)に対するワクチンを受けている可能性がある動物における以前の又は現在のCIRDC感染を検出するための方法及びシステムであって、抗体が動物の1又はそれを超える体液から選択される試料中に存在する、方法及びシステムが本明細書で提供される。一態様では、本方法はまた、CIRDCを引き起こすことができる1又はそれを超える病原体に対する動物(例えば、イヌ)の免疫状態を評価することを可能にする。本明細書に記載の方法は、以下の工程:以前にCIRDCに罹患している可能性があるか、又は1つ若しくは複数のCIRDC病原体に対してワクチン接種されている可能性がある動物から1又はそれを超える体液の試料を採取することと、試料を、試料が由来する動物においてそれに応答して産生され得る少なくとも1つの抗体に対して親和性を有する少なくとも1つの抗原(例えば、CIRDC病原体又はその免疫原性タンパク質)を含む固体支持体に適用することと、少なくとも1つの標識抗原-抗体コンジュゲートの形成を可能にし、コンジュゲートがシグナルを生成することができる、形成を可能にすることと、シグナルを検出可能なレベルまで生成することを可能にすることと、シグナルを検出することであって、試料中の抗体の存在が、シグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
場合によっては、本明細書に記載の方法は、CIRDC感染を引き起こし得る1又はそれを超える病原体による同時感染時に動物の免疫系(例えば、イヌ)によって生成され得る複数の抗体を同時に同定することによって、生物学的試料中の以前の又は現在のCIRDC感染の検出の改善された特異性を必要とする。場合によっては、1又はそれを超えるCIRDC病原体又はその免疫原性断片を使用して、動物から得られた試料中の抗体の1つ又は複数と複合体を形成することができる。場合によっては、Bordetella bronchisepticaの糸状ヘマグルチニン(FHA)タンパク質、Bordetella bronchisepticaのパータクチン(PER)タンパク質、Bordetella bronchisepticaの線毛(FIM)タンパク質、Bordetella bronchisepticaの気管コロニー形成因子、Bordetella bronchiseptica血清抵抗因子(BrkA)、Bordetella bronchisepticaのBvg8タンパク質、Bordetella bronchisepticaのO抗原タンパク質、Bordetella bronchisepticaのアデニル酸シクラーゼ-ヘモリシン、Bordetella bronchiseptica皮膚壊死毒素及びBordetella bronchisepticaの気管細胞毒素に対する産生抗体の1又はそれを超える組み合わせは、動物(すなわち、イヌ)がBordetella bronchisepticaに感染した際に産生される、以前の又は現在の感染の存在及びその後の免疫応答を特徴付けるための抗体のサブセットとして使用することができる。
いくつかの実施形態では、動物によって1又はそれを超えるCIRDC病原体又はその免疫原性断片に対して生成された1又はそれを超える抗体の存在を測定することによって、動物における1又はそれを超えるCIRDC病原体によって引き起こされる現在又は以前のCIRDC感染を検出する方法は、以下の工程:動物から1又はそれを超える体液の試料を採取することであって、1又はそれを超える薬剤が試料中に存在する、採取することと、試料をカセットユニットに適用することであって、カセットユニットは、複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを更に受け入れることができる、適用することと、生物学的試料を複数の免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに接触させることと、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿って側方流動アッセイを実行することであって、実行することが、アッセイストリップに沿って試料を側方流動させることを含み、アッセイストリップが、1又はそれを超えるBordetella bronchiseptica因子に対する親和性を有する少なくとも1つの膜結合捕捉剤を含む少なくとも1つの膜結合ゾーンを含む、実行することと、少なくとも1つの標識-抗体コンジュゲートの形成を可能にすることであって、コンジュゲートが、スキャナによって検出され得る免疫クロマトグラフィーアッセイストリップに沿った1又はそれを超える固有の領域においてシグナルを生成することができる、可能にすることと、シグナルを生成することと、シグナルを検出することであって、試料中の作用物質の存在が、アッセイストリップ中の1又はそれを超える空間的に異なるゾーンにおけるシグナルの存在又は非存在によって決定されることと、を含む。
本明細書の開示は、1又はそれを超えるCIRDC病原体又はその免疫原性断片に対する感染動物によって生成された1又はそれを超える抗体の検出のために固体支持体を使用する方法を提供し、固体支持体は、空間的に異なるゾーンを含み、各ゾーンは、動物からの生物学的試料中に存在し得る異なる抗体に対して親和性を有する固有の抗原(CIRDC病原体の免疫原性成分)を含む。1つの実施形態では、記載される固体支持体は、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップである。一実施形態では、アッセイストリップは、第1の抗原で前処理された第1のゾーンと、第2の抗原で前処理された第2のゾーンであって、第2の抗原が第1のゾーンの第1の抗原とは異なる第2のゾーンと、第3の抗原で前処理された第3のゾーンであって、第3の抗原が第1のゾーンの第1の抗原及び第2のゾーンの第2の抗原とは異なる第3のゾーンと、を含む。場合によっては、第1の抗原は、第2の抗原と同じであり得る。場合によっては、第1の抗原及び第2の抗原は、異なっていてもよい。
別の実施形態では、本方法は1又はそれを超える捕捉剤を、アッセイ基板に結合させることを含む。一例では、本方法は、固体支持体(例えば、ニトロセルロース膜)上の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、28、30、31、32、34、36、39又は40の空間的に異なる位置(例えば、標的反応ゾーン)に1又はそれを超える捕捉剤(例えば、1又はそれを超えるBordetella bronchiseptica抗原に特異的な捕捉抗体)を結合させることを含む。一例では、本方法は、固体支持体(例えば、ニトロセルロース膜)上の1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、28、30、31、32、34、36、39又は40の空間的に異なる位置(例えば、標的反応ゾーン)に1又はそれを超える捕捉剤(例えば、1又はそれを超えるBordetella bronchiseptica抗体に特異的な捕捉抗原)を結合させることを含む。
一例において、本方法は、1又はそれを超える抗種抗体(例えば、イヌ抗IgA)を基板(例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ)上の異なる位置(例えば、対照ゾーン)に結合させることを含む。一例において、本方法は、1又はそれを超える対照抗体(例えば、内因性鼻タンパク質に対する抗体)を、基板(例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ)上の異なる位置(例えば、対照ゾーン)に結合させることを含む。
一例において、本方法は、既知の予め測定された濃度のプローブ-レポーター対(例えば、抗体-HRP)をアッセイストリップの基板上の固有の既知の位置(例えば、参照スポット)に結合させることを含む。
一例では、本方法は、1若しくはそれを超える標的CIRDC病原体又はその免疫原性断片に特異的な1若しくはそれを超えるプローブ-レポーター対(例えば、抗体-酵素対)を基板(例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ)上の異なる位置(例えば、コンジュゲートゾーン)に結合させることを含む。一例において、本方法は、1又はそれを超える標的抗体(例えば、感染動物のCIRDC病原体に対して生成された抗体)に特異的な1又はそれを超えるプローブ-レポーター対(例えば、抗原-酵素対)を、基板(例えば、ニトロセルロースアッセイストリップ)上の異なる位置(例えば、コンジュゲートゾーン)に結合させる工程を含む。
本開示の方法は、捕捉剤-標的分析物複合体の形成の検出を提供する。一態様では、試料からの抗原の結合後、捕捉抗体/標的抗原複合体は、任意の適切な方法によって検出される。異なる態様では、試料からの抗体の結合後、捕捉抗原-標的抗体複合体は、任意の適切な方法によって検出される。例えば、標的-分析物-捕捉剤複合体をレポーター-プローブ試薬(例えば、酵素-抗体コンジュゲート)と反応させ、続いて分析物を検出することができる(例えば、基質との反応時に)。
本明細書に開示される方法は、標的分析物捕捉剤(例えば、抗体-抗原)複合体の標的分析物(例えば、感染動物におけるCIRDC抗原に対する抗体)に対して親和性を有する追加のプローブでアッセイ膜を処理することを提供する。いくつかの実施形態では、この追加のプローブは、Bordetella bronchiseptica病原体又はその免疫原性断片に対する親和性を有する抗体である。いくつかの実施形態では、標的分析物-捕捉剤複合体は、捕捉剤又は標的分析物に結合し得る酵素コンジュゲートなどの指標試薬が検出可能な反応によって触媒されるときに検出される。必要に応じて、シグナル生成化合物などのレポーター試薬を、検出可能な標的分析物捕捉剤-レポーター試薬複合体の形成を可能にする条件下で標的分析物捕捉剤複合体に適用することができる。必要に応じて、捕捉剤は、標的分析物-捕捉剤-レポーター複合体の形成前にレポーター試薬で標識され得る。
ペプチドを固相上に固定化するための適切な方法としては、イオン性、疎水性、共有結合相互作用などが挙げられる。本開示の装置において使用される抗体は、例えば、抗体を固体支持体に結合させることを共有結合的又は非共有結合的に、直接的又は間接的に含む、当技術分野で公知の任意の方法論によって固体支持体上に固定化され得る。したがって、これらの抗体は、物理的吸着によって(すなわち、化学リンカーの使用なしで)固体支持体に結合され得るが、これらの抗体は、当業者に容易に知られている任意の化学結合(例えば、化学リンカーの使用)法によって固体支持体に固定化され得ることもまた事実である。一態様では、プローブ-レポーター対又は捕捉剤は、ウシ血清アルブミン又はキーホールリンペットヘモシアニンなどのタンパク質担体を使用して基板に接着され得る。
本開示の方法には、ELISA、RIA、免疫蛍光アッセイ(IFA)、赤血球凝集(HA)、蛍光偏光イムノアッセイ(FPIA)及びマイクロタイタープレートアッセイ(例えば、マイクロタイタープレートの1又はそれを超えるウェルで行われる任意のアッセイ)を含むが、これらに限定されない競合、直接反応又はサンドイッチ型アッセイに基づく方法が含まれるが、これらに限定されない。例えば、本開示のアッセイは、可逆的フロークロマトグラフィー結合アッセイを含み、これは、例えば、SNAP(登録商標)装置を使用することによって実施され得る。米国特許第5,726,010号を参照されたい。
他の実施形態では、本開示の方法は、競合アッセイを含む。一実施形態では、本方法は、標的反応ゾーンの1つ又は複数に捕捉分子(例えば、1又はそれを超えるBordetella bronchiseptica抗原に対する抗体)を固定化することと、固定化された捕捉抗体を試料由来の抗原及び抗原-レポーター対(例えば、抗原-酵素コンジュゲート)と同時に接触させることと、を含む。この実施形態では、標的反応ゾーンで検出される標識の量は、試料中の抗原の量に反比例し得る。
一実施形態では、試料が第1の吸収性フィルタパッド(例えば、試料パッド)に適用されると、試料は、(遠位端で)第2の吸収性フィルタパッドに向かって横方向に流れ、1又はそれを超える標的反応ゾーンにわたって洗浄する。不適切な試料(例えば、ヒト試料)の適用は、標的反応ゾーンに存在する捕捉剤又は試料中に存在する分析物と結合せず、対照ゾーンに存在する抗体とほとんど又は全く結合しないプローブ-レポーター対をもたらす。逆に、分析物が試料中に存在する場合、遊離分析物は、プローブ-レポーター対中のプローブ及び/又は標的反応ゾーンの捕捉剤に結合する。プローブ-レポーター対はまた、対照ゾーンにおいて抗体によって結合され得る。多くの分析物が存在する場合、標的反応ゾーン及び対照ゾーンは、プローブ-レポーター対との高い結合を示し得る。過剰な試料は、アッセイストリップの遠位端で第2の吸収性フィルタパッドに吸い込まれる。
一実施形態では、咳及び鼻排出物を含む呼吸器症状を有する動物からの唾液試料が得られる。試料は、輸送緩衝液を用いて安定化し、アッセイストリップの試料投入領域に添加する。場合によっては、1又はそれを超える第2の抗種抗体を添加することができる(例えば、Bordetella bronchiseptica)。これらの第2の抗体は、固相捕捉抗体とは異なる種からであり得る。第2の抗体に特異的に結合し、固相抗体に特異的に結合しない第3の抗種抗体を添加する。第3の抗体は、酵素コンジュゲートなどの指標試薬を含み得る。洗浄工程は、各添加の前に実施され得る。発色団又は酵素基質を添加してもよく、発色させてもよい。色反応を停止し、例えば分光光度計を使用して色を定量化することができ、及び/又は色を人間の目によって主観的に評価することができる。
抗体
本開示は、動物(すなわち、イヌ)から得られた試料中に存在する1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片の全部又は一部に対して惹起され、それらに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供し、抗体及びその抗原結合断片を含む組成物も含む。動物から得られた試料と接触させると、これらの抗体及び抗原結合断片は、抗原(例えば、CIRDC病原体又はその免疫原性断片)に特異的に結合することができる。一例では、病原体は、Bordetella bronchosepticaである。例えば、抗体及び抗原結合断片は、試料中に存在するCIRDC抗原に特異的に結合することができるが、CIRDCを引き起こさず、試料中に存在し得る病原体からの任意の抗原には特異的に結合することができない。本開示の抗体は、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片を捕捉するためだけに、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片を検出するためだけに、又はより好ましくは、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片を捕捉及び検出するためだけに、使用されるのに適している。
本開示は、動物(すなわち、イヌ)から得られた試料中に存在する1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片の全部又は一部に対して惹起され、それらに特異的に結合する抗体及びその抗原結合断片を提供し、抗体及びその抗原結合断片を含む組成物も含む。動物から得られた試料と接触させると、これらの抗体及び抗原結合断片は、抗原(例えば、CIRDC病原体又はその免疫原性断片)に特異的に結合することができる。一例では、病原体は、Bordetella bronchosepticaである。例えば、抗体及び抗原結合断片は、試料中に存在するCIRDC抗原に特異的に結合することができるが、CIRDCを引き起こさず、試料中に存在し得る病原体からの任意の抗原には特異的に結合することができない。本開示の抗体は、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片を捕捉するためだけに、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片を検出するためだけに、又はより好ましくは、1若しくはそれを超えるCIRDC病原体又はその1若しくはそれを超える免疫原性断片を捕捉及び検出するためだけに、使用されるのに適している。
本開示の抗体は、例えばIgG、IgM、IgA、IgD及びIgEを含む任意の抗体クラスに属してよく、当業者に公知の様々な技術のいずれかによって調製され得る。(例えば、Dean,Methods Mol.Biol.80:23-37(1998);Dean,Methods Mol.Biol.32:361-79(1994);Baileg,Methods Mol.Biol.32:381-88(1994);Gullick,Methods Mol.Biol.32:389-99(1994);DrenckhahnらMethods Cell.Biol.37:7-56(1993);Morrison,Ann.Rev.Immunol.10:239-65(1992);WrightらCrit.Rev.Immunol.12:125-68(1992);Harlow and Lane,Antibodies:A Laboratory Manual,Cold Spring Harbor Laboratory(1988);及びMaking and Using Antibodies:A Practical Handbook,Howard and Kaser,eds.,CRC Press(2006)に記載されており、その各々は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。)本開示の抗体は、必要に応じて、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体、一本鎖抗体(scFv)、キメラ抗体、及びそれらの断片であり得ることも理解されるべきである。目的の抗原ペプチドに特異的なモノクローナル抗体は、例えば、目的の抗原ペプチドに対して所望の特異性を有する抗体を生成する細胞株を調製することによって得られ、精製され得る。
動物における抗体の産生を刺激するために使用される免疫原は、特定のタンパク質配列に由来する破壊された生物、合成ペプチド又は組換えタンパク質から精製されたタンパク質であり得る。更に、特定のタンパク質配列を研究して、最も免疫原性であると考えられるタンパク質配列の一部を組換えタンパク質にして免疫原として使用するように、より免疫原性の高いタンパク質配列の任意の部分及びより免疫原性が低いと予測される部分を同定することができる。
本開示の抗体はまた、一本鎖抗体(scFv)又は抗体の抗原結合断片であり得る。抗体の抗原結合断片は、インタクト抗体の抗原結合部位又は可変領域を含むインタクト抗体の一部であり、この部分は、インタクト抗体のFe領域の定常重鎖ドメインを含まない。抗体断片の例としては、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2及びFv断片が挙げられる。動物又は哺乳動物細胞からの産生及び精製に加えて、抗体、抗体断片又は非抗体足場は、ファージディスプレイ、リボソームディスプレイ又は細菌ディスプレイを含む様々なインビトロ技術に基づいて選択することができる。
二次抗体を含む抗体は、例えば、蛍光、化学発光、放射性、酵素、コロイド粒子、放射性同位元素及び生物発光標識を含む、当技術分野で公知の任意の種類の標識で標識され得る。本開示の様々な実施形態では、本開示の1又はそれを超える抗体は、酵素、コロイド粒子、放射性核種又はフルオロフォアで標識される。粒子状標識は、例えば、抗体にコンジュゲートされた着色ラテックス粒子、染料ゾル又は金ゾルであり得る。
固体支持体
1つの態様において、装置は固体支持体(例えば、アッセイストリップ)を含み、本開示の1又はそれを超える抗体が、固体支持体に固定化される。固体支持体は、例えば、側方流動装置の一部として含まれるマイクロタイタープレート又は基板のウェルの内側底面であってもよいが、これに限定されない。例示的なマイクロタイタープレートは、Immulon IB 96ウェルプレート(これは、マサチューセッツ州ミルフォードのThermo Scientificから市販されている)であるが、当業者は、Immulon IB 96ウェルプレートではない多種多様な他のマイクロタイタープレートが、抗体の固定を可能にし、したがって本開示の固体支持体を提供するのに適していることを認識することを理解されたい。
1つの態様において、装置は固体支持体(例えば、アッセイストリップ)を含み、本開示の1又はそれを超える抗体が、固体支持体に固定化される。固体支持体は、例えば、側方流動装置の一部として含まれるマイクロタイタープレート又は基板のウェルの内側底面であってもよいが、これに限定されない。例示的なマイクロタイタープレートは、Immulon IB 96ウェルプレート(これは、マサチューセッツ州ミルフォードのThermo Scientificから市販されている)であるが、当業者は、Immulon IB 96ウェルプレートではない多種多様な他のマイクロタイタープレートが、抗体の固定を可能にし、したがって本開示の固体支持体を提供するのに適していることを認識することを理解されたい。
固体支持体は、マイクロタイターウェル、SNAP(登録商標)装置の抗体固定化部分、磁気ビーズ、非磁気ビーズ、カラム、マトリックス、膜、合成又は天然繊維(例えば、ガラス又はセルロース系材料又は熱可塑性ポリマー、例えば、ポリエチレン、ポリプロピレン又はポリエステル)で構成された繊維マット、粒状材料(例えば、ガラス又は様々な熱可塑性ポリマー)で構成された焼結構造、又はニトロセルロース、ナイロン、ポリスルホンなど(一般に本質的に合成)で構成されたキャスト膜フィルムであり得る。膜フィルムは、ガラス繊維とすることができる。これらの基板材料は、フィルム、シート、又はプレートなどの適切な形状で使用されてもよく、又は紙、ガラス、プラスチックフィルム、又は布地などの適切な不活性担体上にコーティング又は接着又は積層されてもよい。ストリップは、小さい再細孔サイズ(5μm)及び遅い毛細管流量(例えば、Merk Millipore HF 180又はHF135)を有することができる。毛細管流量は、約180秒/cm~135(秒/cm)であり得る。毛細管流量は、約100秒/cm~約200秒/cmであり得る。ストリップ寸法は、幅約1cm、長さ約5~約7cmであってもよい。
固体支持体基板(例えば、アッセイストリップ)は、本開示の抗体の固定化のための任意の好適な材料であり得ることも理解されるべきである。例えば、固体支持体(例えば、アッセイストリップ)基板は、ビーズ、粒子、チューブ、ウェル、プローブ、ディップスティック、ピペットチップ、スライド、繊維、膜、紙、天然セルロース及び修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、ガラス、ポリプロピレン、ポリエチレン、ポリスチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、プラスチック、マグネタイト又は当業者に容易に公知の任意の他の適切な材料であり得る。
一実施形態では、固体支持体は、適切な材料、例えば、均一サイズ(10×500mm)のニトロセルロース膜(Millipore(商標)XA3J072100)を含むことができる。一実施形態では、固体支持体は、膜の一端に配置されたコンジュゲート標識パッド(例えば、試料入力パッド)を含むことができる。吸収パッドは、膜の反対側の端部に配置されてもよく、毛細管作用によって試料、例えば唾液を膜に沿って引き込むのに役立ち得る。一実施形態では、プラスチック裏打ち材は、接着剤層及び膜の支持を提供することができ、組み合わせを個々の試験ストリップ(例えば、5×60mm)に切断し、プラスチック製収容カセットに嵌め込むことができる。試料適用ウェルは、試料パッドの真上に流体連通して配置されてもよく、検出窓は、ニトロセルロース膜の上に配置されてもよい。
ニトロセルロース層は、側方流動システムの一部であってもよく、第1の吸収性フィルタパッドがアッセイストリップの近位端で基板に適用され、側方流動システムは、アッセイストリップを横切って一端から他端まで試料を吸い上げることができる。本開示の一実施形態では、第1の吸収性フィルタパッド、例えば試料パッドは、試料を受け取り、試料中の任意の大きな粒子状物質を除去し、試料を保持して、ゆっくりとアッセイに吸い込むことができる。
アッセイストリップは、アッセイストリップの遠位端に位置する第2の吸収性フィルタパッドを更に備える。第2の吸収性フィルタパッドは、アッセイストリップを横切って試料が吸い上げられた後に、試料を吸収及び保持し、試料が反対方向に流れるのを防ぎ、非特異的結合を生じさせることができる。
本開示の一実施形態では、アッセイストリップは、剛性又は半剛性であり得る固体支持体基板を有する。この基板は、ニトロセルロース層から作製されてもよい。しかしながら、層が、ブロッティング材料、毛細管、セルロース、シリカ、ポリスチレン、ラテックス、又はポリマーでコーティングされたガラスを含む、不溶性マトリックスである任意の材料であることは、本開示の範囲内である。
一実施形態では、本開示のアッセイストリップは使い捨てであり、カセットユニットに解放可能に挿入することが更に可能である。一実施形態では、本開示のアッセイストリップは、カセットユニットに取り付けられてもよい。カセットユニットは、分析される試料の数に応じて、1つ又は複数のアッセイストリップを受け入れることができる。
例示的な側方流動装置は、米国特許第5,726,010号に記載されている側方流動装置であり、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。一実施形態では、側方流動アッセイを実施するための装置は、メーン州WestbrookのIDEXX Laboratories,Inc.から市販されているSNAP(登録商標)装置であってもよい。しかしながら、当業者は、SNAP(登録商標)装置ではなく、又は米国特許第5,726,010号に記載されていない多種多様な他の側方流動装置が、その上に抗体を固定化できることを認識するであろうことを理解されたい。したがって、本開示の装置として使用するのに適している。これらの装置は、例えば、コロイド金技術を使用する側方流動装置を含むことができる。
プローブ-レポーター対
一実施形態では、コンジュゲートは、アッセイストリップの基板に結合される。別の実施形態では、第1の吸収性フィルタパッド(例えば、試料パッド)は、プローブ-レポーター対を含むコンジュゲートを更に受容することができ、コンジュゲートは第1の吸収性フィルタパッドに適用される。一例において、コンジュゲートは、プローブ抗体に結合したアッセイレポーターから構成される。しかしながら、アッセイレポーターが、抗原、タンパク質、核酸、細胞、細胞内オルガネラ、及び他の生物学的分子に結合することができる分子を含む、標的分析物に対する親和性を有する任意の分子と会合することができることは、本開示の範囲内である。あるいは、アッセイは、アッセイレポーターが既知量の標的分析物にコンジュゲートされ、標的分析物に対して特異的親和性を有する抗体又は他の化合物を介して捕捉される競合設計として設定され得る。
一実施形態では、コンジュゲートは、アッセイストリップの基板に結合される。別の実施形態では、第1の吸収性フィルタパッド(例えば、試料パッド)は、プローブ-レポーター対を含むコンジュゲートを更に受容することができ、コンジュゲートは第1の吸収性フィルタパッドに適用される。一例において、コンジュゲートは、プローブ抗体に結合したアッセイレポーターから構成される。しかしながら、アッセイレポーターが、抗原、タンパク質、核酸、細胞、細胞内オルガネラ、及び他の生物学的分子に結合することができる分子を含む、標的分析物に対する親和性を有する任意の分子と会合することができることは、本開示の範囲内である。あるいは、アッセイは、アッセイレポーターが既知量の標的分析物にコンジュゲートされ、標的分析物に対して特異的親和性を有する抗体又は他の化合物を介して捕捉される競合設計として設定され得る。
一実施形態では、プローブ-レポーター対は、アッセイレポーターに結合したプローブの複数の対を含む。一実施形態では、プローブは、試料中に潜在的に存在するBordetella bronchiseptica抗原であり得る標的分析物に特異的な抗体である。別の実施形態では、プローブは、動物から得られた試料中に存在し得るBordetella bronchiseptica抗体であり得る標的分析物に特異的な抗原である。別の例では、プローブ-レポーター対は、アッセイレポーターに結合した既知量の標的分析物を含み得る。プローブ-レポーター対は、第1の吸収性フィルタパッド(例えば、試料パッド)内に乾燥させることができる。
一例において、アッセイレポーターは、シグナル生成化合物を含む指標試薬である。指標試薬は、プローブと会合したシグナル生成化合物(標識)を含み、発色剤、触媒、例えば酵素コンジュゲート、蛍光化合物、例えばフルオレセイン及びローダミン、化学発光化合物、例えばジオキセタン、アクリジニウム、フェナントリジニウム、ルテニウム及びルミノール、放射性元素、直接視覚標識、並びに補因子、阻害剤、磁性粒子などを含み得る。酵素コンジュゲートの例としては、アルカリホスファターゼ、セイヨウワサビペルオキシダーゼ、ベータガラクトシダーゼなどが挙げられる。一実施形態では、アッセイレポーターは、量子ドット(カリフォルニア州HaywardのQuantum Dot Corp.から入手可能なQDots(登録商標)、及びニューヨーク州TroyのEvident Technologiesから入手可能なEviTag(登録商標)Quantum Dotsを含む)としても知られる蛍光半導体ナノ結晶である。特定の標識の選択は重要ではないが、それ自体で又は1又はそれを超える追加の物質と組み合わせてシグナルを生成することができる。更に、本開示の他の代替の実施形態では、コンジュゲートプローブ-レポーター対は、コロイド的に安定化された高感度の小径粒子であり、生物学的リガンドを結合させることができる高い表面積/体積比を有し、プローブ(例えば、抗体又は抗原)に結合してプローブ-レポーター対を形成する標準的なアッセイレポーター(例えば、標識されたコロイド金、ラテックスビーズ、ランタニドドープセラミックナノ粒子)を含み得る。
一実施形態では、アッセイレポーターは、生物学的又は化学的部分の存在又は量、生物学的部分の構造、組成及び立体配座、環境における生物学的又は化学的部分の局在化、生物学的又は化学的部分の相互作用、生物学的又は化学的化合物の構造の変化、及び生物学的又は化学的プロセスの変化を検出することができる。一実施形態では、アッセイレポーターは、量子ドットの粒径及び標的分析物に対する親和性の選択によって所望のエネルギーに調整可能な特徴的なスペクトル発光を有する。一実施形態では、会合の位置及び性質は、アッセイレポーターの発光をモニタリングすることによって検出することができる。
一実施形態では、アッセイレポーターは、広い励起波長範囲を有し、単一の光源を有するシステムにおいてすべてのアッセイレポーターの同時励起を可能にし、経時的な分解又は光退色に耐性である。
1つの実施形態では、1又はそれを超えるプローブ-レポーター試薬は、本明細書中の装置に適用する前に、動物(例えば、イヌ)からの試料と混合される場合がある。別の実施形態では、上記のプローブ-レポーター対又は捕捉剤(例えば、所与の標的イヌヘパシウイルス抗原に特異的な抗体)は、固体支持体又は基板に直接的又は間接的に結合され得る。1つの例において、1又はそれを超えるイヌボカウイルス抗体に特異的な捕捉抗原は、固体支持体に直接的又は間接的に結合され得る。ペプチドを固相上に固定化するための適切な方法としては、イオン性、疎水性、共有結合相互作用などが挙げられる。本開示の装置において使用される抗体は、例えば、抗体を固体支持体に結合させることを共有結合的又は非共有結合的に、直接的又は間接的に含む、当技術分野で公知の任意の方法論によって固体支持体上に固定化され得る。したがって、これらの抗体は、物理的吸着によって(例えば、化学リンカーの使用なしで)固体支持体に結合され得るが、これらの抗体は、当業者に容易に知られている任意の化学結合(例えば、化学リンカーの使用)法によって固体支持体に固定化され得ることもまた事実である。一態様では、プローブ-レポーター対又は捕捉剤は、ウシ血清アルブミン又はキーホールリンペットヘモシアニンなどのタンパク質担体を使用して基板に接着され得る。
アッセイストリップは、アッセイストリップ上の空間的に異なるゾーンに基質結合捕捉剤を含む最大1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、16、17、18、19、20、21、23、24、25、26、28、30、31、32、34、36、39又は40個の標的反応ゾーンを、更に含み得る。一実施形態では、標的反応ゾーンは、アッセイストリップの基板上に適用され、乾燥される。「捕捉剤」又は「捕捉分子」は、目的の「抗原」又は「抗体」に特異的な任意の化合物を指す。「捕捉剤」又は「捕捉分子」は、捕捉抗原又は捕捉抗体であり得る。一実施形態では、標的反応ゾーンは、アッセイストリップに結合した捕捉剤(例えば、抗体)を含んでよく、これは、試料が捕捉ラインを通過するとき、抗原-抗体親和性結合を介して、1又はそれを超えるCIRDC病原体(例えば、試料中に存在するイヌヘパシウイルス抗原)の1又はそれを超える免疫原性タンパク質を「捕捉する」ことができる。一実施形態では、標的反応ゾーンは、アッセイストリップに結合した捕捉剤(例えば、1又はそれを超えるCIRDC病原体の1又はそれを超える免疫原性断片)を含むことができ、これは、試料が捕捉ラインを通過するとき、抗原-抗体親和性結合を介して、感染時に(例えば、試料中に存在するイヌヘパシウイルス抗原)1又はそれを超えるCIRDC病原体に対して動物によって生成された1又はそれを超える抗体を「捕捉する」ことができる。一実施形態では、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14又は15個の対照ゾーンが装置内に存在してもよい。別の実施形態では、各対照ゾーンは、異なる捕捉分子を含み得る。別の実施形態では、対照ゾーンの少なくとも2つの捕捉分子は同じである。一実施形態では、アッセイストリップは、Bordetella bronchisepticaの第1の基質に結合した捕捉の抗原を含む第1の標的反応ゾーンと、第1のゾーンの第1の捕捉の抗原とは異なるBordetella bronchisepticaの第2の基質に結合した捕捉の抗原を有する第2の標的反応ゾーンと、第1のゾーンの第1の抗原及び第2のゾーンの第2の抗原とは異なるBordetella bronchisepticaの第3の基質に結合した捕捉の抗原を有する第3の標的反応ゾーンと、を含み得る。別の実施形態では、アッセイストリップは、Bordetella bronchisepticaの第1の基質に結合した捕捉抗体を含む第1の標的反応ゾーンと、第1のゾーンの第1の抗体とは異なるBordetella bronchisepticaの第2の基質に結合した捕捉抗体を含む第2の標的反応ゾーンと、第1のゾーンの第1の抗体及び第2のゾーンの第2の抗体とは異なるBordetella bronchisepticaの第3の基質に結合した捕捉抗体を含む第3の標的反応ゾーンと、を含み得る。
一実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じて、Bordetella bronchisepticaの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第1の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第2の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第3の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス2型の1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第4の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第5の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第6の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第7の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第8の標的反応ゾーン、必要に応じてMycoplasma cynosの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第9の標的反応ゾーン、必要に応じて、Streptococcus equiの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第10の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第11の標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む第12の標的反応ゾーンを含み得る。
一実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じて、Bordetella bronchisepticaの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス2型の1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じてMycoplasma cynosの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、Streptococcus equiの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗原を含む少なくとも1つの標的反応ゾーンを含み得る。
別の実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じて、Bordetella bronchisepticaの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第1の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第2の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第3の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス2型の1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第4の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第5の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む第6の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第7の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第8の標的反応ゾーン、必要に応じて、Mycoplasma cynosの1又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第9の標的反応ゾーン、必要に応じて、Streptococcus equiの1又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第10の標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第11の標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対して親和性を有する1又はそれを超える基質に結合した捕捉抗体を含む第12の標的反応ゾーンを含み得る。
別の実施形態では、アッセイストリップは、必要に応じてBordetella bronchisepticaの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌパラインフルエンザウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌコロナウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌアデノウイルス2型の1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌヘルペスウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌジステンパーウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌインフルエンザウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌニューモウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じてMycoplasma cynosの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、Streptococcus equiの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、必要に応じて、イヌボカウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーン、及び必要に応じて、イヌヘパシウイルスの1又はそれを超える免疫原性断片に対する親和性を有する1又はそれを超える基質結合捕捉抗体を含む少なくとも1つの標的反応ゾーンを含み得る。
ここで表Iに提供されるのは、様々なCRDIC病原体の免疫原性部分の部分リストである。ここに列挙される様々な抗原は、アッセイにおける標的分析物又は捕捉試薬として使用することができる。1又はそれを超えるこれらの免疫原性成分に対する親和性を有する抗体は、アッセイにおいて標的分析物又は捕捉剤として使用され得る。
本開示の方法の他の実施形態では、競合アッセイが行われる。一実施形態では、捕捉分子は、既知の濃度の特定の標的分析物(例えば、抗原)であってもよく、試料中に存在する分析物に結合していないレポーター-プローブ対を更に捕捉することができる。したがって、標的反応ゾーンで放出される蛍光は、試料中に存在する分析物の量が増加するにつれて減少するだろう。競合アッセイの一実施形態では、捕捉抗原を標的反応ゾーンに固定化し、試料からの抗原及び抗原-レポーター対(例えば、抗原-酵素コンジュゲート)と同時に接触させる。標的反応ゾーンで検出されるアッセイレポーターの量は、試料中の抗原の量に反比例する。例えば、アッセイストリップは、Bordetella bronchisepticaの第1の捕捉抗原を含む標的反応ゾーンを含むことができ、捕捉抗原は、試料中に存在する抗原に結合していない抗体-レポーター対(例えば、プローブ-レポーター対)を捕捉することができる。
アッセイストリップは、放射性マーカー;蛍光タグ(例えば、フルオレセイン、ヨウ化プロピジウム、ヘキスト染料、臭化エチジウム、メチルクマリン、又はテキサスレッド)で標識され、かつ特定の標的に向けられたモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を含むタグとしての蛍光分子;及び蛍光マーカーでタグ化され、標的を可視化するために一次抗体に向けられた二次抗体を含む分析物を検出するために、従来のアッセイレポーターを代替的に使用してもよいことが更に企図される。
本開示の装置はまた、標的反応ゾーンとは異なる位置に固定化された様々な結合試薬を含み得る。例えば、アッセイストリップは、抗体-レポーター試薬若しくは抗原-レポーター試薬の種特異的(例えば、イヌボカウイルス)抗体部分、又は酵素標識プローブ-レポーター試薬の酵素部分を認識する免疫試薬(抗体、抗原又はポリペプチド)が、装置内の試薬の生存率を評価するための陽性対照として含まれ得る対照ゾーンを含む。例えば、陽性対照は、例えばヤギ又はマウスにおいて産生された抗セイヨウワサビペルオキシダーゼ抗体であり得る。一実施形態では、アッセイストリップは、既知濃度の市販の抗種抗体を有する「対照ゾーン」を含む。抗種抗体は、標的分析物が存在するか否かにかかわらず、レポータープローブ対と結合することができ、アッセイが適切に機能しているか否かを示すのに役立ち、試料中の標的分析物に結合したレポータープローブ対の量に比例してよく、アッセイに対して別のレベルの感度を提供する。更に、抗原抗体複合体の抗体部分が由来する種の非免疫メンバーから単離された試薬、例えば抗体は、免疫複合体(例えば、抗原-抗体複合体)形成の特異性を評価するための陰性対照として含めることができる。
本開示の複数の実施形態では、アッセイストリップはまた、アッセイストリップの基板上の、固有の既知の位置にスポットして乾燥した既知の予め測定された濃度のプローブ-レポーター対を含む参照スポットを含む。参照スポットは、円形スポット又は線を含む任意の形状又はサイズであってもよい。参照スポットにおけるプローブ-レポーター対の既知の予め測定された濃度はシグナル読み取り値を生成し、これは対照として機能し、リーダーが対照スポットによって生成されたシグナルの量を検出することを可能にする。参照スポットは更に、機器の較正を提供し、アッセイ試験結果をこの対照と比較することができる。参照スポットの使用は更に、現場での診断アッセイリーダーの自動較正を可能にする。
装置はまた、必要に応じて、固体支持体(例えば、アッセイストリップ)中の反応ゾーンから離れて未結合材料(例えば、動物試料の未反応部分、例えば、鼻抽出物の未反応部分、及び未結合捕捉試薬)を輸送するか、又はそうでなければ除去する(例えば、装置がマイクロタイタープレートを含む場合などには)ことを容易にする液体試薬を含み得る。液体試薬は、洗浄試薬であってよく、未結合物質を反応ゾーンから除去するためだけに役立つか、又は検出試薬を含んでよく、未結合物質の除去及び抗原検出の促進の両方に役立つ。例えば、抗体-HRP又は抗原-HRP(プローブ-レポーターコンジュゲート)の場合、検出試薬は、固体支持体上の標的反応ゾーンでプローブ-レポーターコンジュゲートと反応すると検出可能なシグナルを生成する基質を含む。あるいは、アッセイレポーターが、放射性、蛍光性又は光吸収性分子であるプローブ-レポーターコンジュゲートの場合、液体試薬は、未結合標識試薬を洗い流すことによって標的反応ゾーンでの複合体形成の検出を容易にする洗浄液として作用し得る。液体試薬は、限られた量の「阻害剤」、例えば検出可能なシグナルの発生を遮断する物質を更に含み得る。限られた量は、大部分又はすべての過剰の未結合物質が標的反応ゾーンから輸送され、その時点で検出可能なシグナルが生成されるまで、シグナル発生を遮断するのに十分な阻害剤の量であると定義される。
動物の試料からBordetella bronchiseptica抗原を特異的に結合及び単離するように設計されることに加えて、本開示の装置は、必要に応じて、1又はそれを超える他の診断試験を実施できるように設計されてもよい。例えば、固体支持体はまた、1若しくはそれを超える寄生生物、1若しくはそれを超えるウイルス、1若しくはそれを超える真菌、又は1若しくはそれを超える細菌を検出するための試薬を含み得る。1若しくはそれを超える非寄生虫、1若しくはそれを超えるウイルス、1若しくはそれを超える真菌、又は1若しくはそれを超える細菌を検出するための試薬は、例えば、1若しくはそれを超える非寄生虫、1若しくはそれを超えるウイルス、1若しくはそれを超える真菌、又は1若しくはそれを超える細菌に特異的な抗体によって認識される1若しくはそれを超える抗体又は1若しくはそれを超える抗原であり得る。
装置ユニット
装置ユニットは、カセットユニットとすることができる。カセットユニットは、試料の適用及びリーダー内部のアッセイストリップの走査のためにアッセイストリップを保持する。カセットユニットは、使い捨ての1回しか使えない装置であってもよく、又は使用後にアッセイストリップを交換できるように再充填可能であってもよい。いくつかの実施形態では、カセットユニットは、円形であり、ハブを軸方向ピボット点とし、スポーク状の構成でハブから半径方向に延在するアッセイストリップが取り付けられている。いくつかの実施形態では、カセットユニットは、楕円形、長方形、正方形又はアモルファスである。
装置ユニットは、カセットユニットとすることができる。カセットユニットは、試料の適用及びリーダー内部のアッセイストリップの走査のためにアッセイストリップを保持する。カセットユニットは、使い捨ての1回しか使えない装置であってもよく、又は使用後にアッセイストリップを交換できるように再充填可能であってもよい。いくつかの実施形態では、カセットユニットは、円形であり、ハブを軸方向ピボット点とし、スポーク状の構成でハブから半径方向に延在するアッセイストリップが取り付けられている。いくつかの実施形態では、カセットユニットは、楕円形、長方形、正方形又はアモルファスである。
この実施形態では、スポークは、ハブの中央試料ポートから外側に接続する。カセットユニットの設計は、各アッセイストリップが、各アッセイがハブからカセットユニットの外周に向かって横方向に流れることを可能にするように装着されるようなものである。本開示の一実施形態では、各カセットユニットは、固定的に取り付けられた複数の1回しか使えないアッセイストリップを保持する。カセットユニットは、診断アッセイリーダーから取り外し可能であり、保管又は廃棄されてもよい。本開示の別の実施形態では、カセットユニットは再使用可能であり、処理されたものが除去された後に新しい1回しか使えないアッセイストリップを受け取ることができる。
カセットユニットは、金属、ポリスチレン、ポリカーボネート、又は同様の耐久性のあるプラスチックなどの任意の軽量剛性材料で製造することができる。カセットにアッセイストリップを取り付けるいくつかの方法が提供されてもよい。一実施形態では、適切なサイズの浅いスロットをカセットユニット表面に形成することができ、その中にアッセイストリップを挿入することができる。別の実施形態では、アッセイストリップは、底面上に接着剤裏当てを用いて製造されてもよく、それらをカセットユニットディスク上に貼り付けることができる。
カセットユニットが、アッセイストリップの真下に配置された励起源を提供するリーダーユニットと共に使用される場合、カセットユニットは、少なくともアッセイストリップの真下で、励起エネルギーに対して透明でなければならない。例えば、スロットの下のカセットユニット材料は、透明プラスチックであってもよい。あるいは、カセットユニット本体全体が、透明プラスチックであってもよい。加えて、励起源は、発光を読み取る前にそれをオフにするための制御によってアッセイストリップの上方に配置されてもよい。
一実施形態では、カセットユニットは、試料が採取又は保存されるピペットから試料を受け取るように設計されている。ピペットが試料ポートに嵌合し、水が注入される。試料は、所定の体積が複数のアッセイストリップに選択的に向けられるように、試料分配器による適用時に同時に細分化又は分割される。アッセイストリップは、それぞれ単一の特定の分析物用であってもよく、又は何らかの重複性が使用されてもよい。本開示のこの実施形態では、試料分配器は、試料の一部を各アッセイストリップに分配するためにコーンの外面を下って複数のチャネルで構成されたコーンを備える。分配器は、等量の試料を放射するアッセイストリップの各々に送ることができるか、又は、正当な場合には、不等量の試料を分割して特定のアッセイストリップに向けることができる。
スポーク付きディスク以外のカセットユニット構成を使用してもよい。例えば、いくつかの用途では、並列スロット構成が望ましい場合がある。任意の代替カセットの構成は、それが使用されるリーダーの構成と一致しなければならない。一例では、装置は、標的反応ゾーンのアレイを有する単一のアッセイ基板を含んでよく、各標的反応ゾーンは、1又はそれを超える基質に結合した捕捉分子を含み得る。一構成において、標的反応ゾーンのアレイは、アッセイをよりロバストにするために、基質に結合した捕捉分子として抗原及び抗体の両方を含み得る。一例では、各ゾーンは、捕捉分子の固有の組成物を含み得る。一例では、標的反応ゾーンは、捕捉分子の非固有の組み合わせを含み得る。一例では、装置は、標的反応ゾーンのアレイを有する単一のアッセイ基板を含むことができ、各ゾーンは、少なくとも1つの基板に結合した捕捉抗原を含み、その各々は、1又はそれを超えるCIRDC病原体による感染時に動物において生成される1又はそれを超える抗体を同定することができる。一例では、装置は、各々が少なくとも1つのCIRDC病原体の少なくとも1又はそれを超える免疫原性成分を同定することができる基板結合捕捉抗体を含む標的反応ゾーンのアレイを含む少なくとも単一のアッセイ基板を含むことができる。
アレイは、ドットの二次元配列として構成されてもよい。一例では、標的反応ゾーンのアレイは、互いに平行に配列された一連のストリップであってもよく、各標的反応ゾーンは、1又はそれを超える基質結合捕捉分子(例えば、1又はそれを超えるCIRDC病原体の1又はそれを超える免疫原性成分を同定することができる抗体)を含む。一構成では、捕捉分子のアレイは、試料投入ゾーンの遠位及び試料を吸収してそれをアッセイ基板の遠位端に向かって引っ張るウィッキングパッドの近位に存在し得る。一構成では、装置は、標的反応ゾーンに到達する前に汚染物質の試料を濾過することができるフィルタパッドを備えることができる。構成は、ドットのアレイ(ゾーン)を含んでよく、各ドットは、CIRDC抗原(例えばイヌボカウイルス)に応答して動物によって生成される少なくとも1つの抗体に対する親和性を有する少なくとも1つの抗原を含む。フィルタは、セルロース繊維又は織メッシュを含むことができる。フィルタは、セルロース、ガラス、又はプラスチック(ポリエステル、ポリプロピレン、ポリエチレン等)の繊維を薄いマットに圧縮することによって製造することができる。試料は、アッセイストリップへの分配のためにマニホールドトラフ内に流すことができ、又は試料は、滴下器又は他の装置から直接近位パッドに適用することができる。
一例では、基板はニトロセルロース膜ストリップであり得る。一例では、膜ストリップは、幅0.2インチ、幅0.5(o.5)インチ、幅1(I)インチ、幅2インチ、幅3インチ、幅4インチ、又は幅5インチまでであってもよい。ストリップは、長さ1(I)インチ、長さ2インチ、長さ3インチ、長さ4インチ、長さ5インチ、又は長さ6インチまでであってもよい。
いくつかの態様では、図5に見られるように、装置501は、各々が別個の区画504、505を含む1又はそれを超えるストリップ503を含むことができる。ある別個の区画は、対照分析物結合剤504を含むことができる。別の別個の区画は、標的分析物結合剤505を含むことができる。装置は、中央試料入力502を有することができる。中央試料入力は、フィルタを含むことができる。装置は、コンピュータプログラムに対して装置の標的分析物を識別するためのコード506(例えば、QRコード(登録商標))を含むことができる。
アッセイリーダー
一実施形態では、診断アッセイリーダーは手持ち式ユニットである。診断アッセイリーダーは、アッセイを読み取り、結果を記録し、後の検索及び分析のために複数の結果をアーカイブすることができる。一実施形態では、アッセイリーダーは、スロットを介して複数のアッセイストリップを含むカセットユニットを受け入れるように構成されてもよい。
一実施形態では、診断アッセイリーダーは手持ち式ユニットである。診断アッセイリーダーは、アッセイを読み取り、結果を記録し、後の検索及び分析のために複数の結果をアーカイブすることができる。一実施形態では、アッセイリーダーは、スロットを介して複数のアッセイストリップを含むカセットユニットを受け入れるように構成されてもよい。
更に別の実施形態では、診断アッセイリーダーは、ポータブルの閉鎖可能な器具ケース構成を含む。一実施形態では、構成は、保護ケース、バッテリストレージ、より大きなバッテリの収容、追加のカセットユニットのためのストレージ、及び追加のアレイストリップのためのストレージを含む1つ又は複数の特徴を含む。
少なくとも1つの実施形態では、診断アッセイリーダーは、パーソナルデータアシスタント又は携帯電話又はタブレットと同様のインターフェースを使用してユーザ入力データ(例えば、位置地点名、緯度、別個のGPSからの経度、気象条件、日時)を受信することができるスクリーンディスプレイ及びメモリを含むことができる。ユーザデータは、タッチスクリーン又はキーパッドを介して入力することができる。
一実施形態では、診断アッセイリーダーは、アッセイストリップから情報を抽出するための励起源及び発光受容体を提供することができ、励起源は、分析に使用される分析レポーターのタイプに基づいて適切な範囲の励起を提供する源である。一実施形態では、励起源は、処理されるアッセイストリップの下方のリーダーケース内に配置された紫外線光源であってもよい。一実施形態では、アッセイリーダーは、所定の波長でストリップ上のコンジュゲートによって放射された蛍光エネルギーを感知し、ストリップの長さに沿って及び幅にわたって強度分布をマッピングするフォトダイオード検出器アレイ発光受容体を含み得る。次いで、強度分布が両方に記憶又は表示される。
一実施形態では、システムは、アッセイストリップを放射状配列を有する円形カセットに適合したリーダーを含む。一実施形態では、ストリップは、検出器アレイの下に配列され、励起源及び発光受容体を活性化することによって読み取りを行うことができる。読み取りが完了すると、カセットユニットは、次のストリップが検出器と配列するまで回転されてよく、そのアッセイストリップが読み取られ得る。
アッセイストリップの読み取り
ユーザがアッセイストリップを読み取る準備ができたら、1つ又は複数のアッセイストリップで満たされたカセットユニットを診断アッセイリーダーのスロットに挿入することができる。別の実施形態では、診断アッセイリーダーは、最初に、内部診断対照として参照スポットから指定されたシグナルを受信し得る。一実施形態では、参照スポットは、内部機器チェックとして、及びアッセイシグナルが比較されるシグナルコンパレータ又は参照として機能するために、各アッセイのアッセイストリップ又はカセットユニットに組み込まれてもよい。一実施形態では、参照スポットは、試験シグナルと相対標準(同じ周囲条件を条件とする)を提供することができる。
ユーザがアッセイストリップを読み取る準備ができたら、1つ又は複数のアッセイストリップで満たされたカセットユニットを診断アッセイリーダーのスロットに挿入することができる。別の実施形態では、診断アッセイリーダーは、最初に、内部診断対照として参照スポットから指定されたシグナルを受信し得る。一実施形態では、参照スポットは、内部機器チェックとして、及びアッセイシグナルが比較されるシグナルコンパレータ又は参照として機能するために、各アッセイのアッセイストリップ又はカセットユニットに組み込まれてもよい。一実施形態では、参照スポットは、試験シグナルと相対標準(同じ周囲条件を条件とする)を提供することができる。
一実施形態では、参照スポットが読み取られると、シグナルは電子データ記憶ユニットに記憶され、アッセイストリップ上の対照ゾーン及び標的反応ゾーンからのシグナルと比較され得る。一実施形態では、特定の分析物のアッセイ開発中に、各アッセイ対照ゾーン及び標的反応ゾーンについてシグナル/濃度データを決定し、参照スポットと比較するために電子データ記憶ユニットにプログラムすることができる。一実施形態では、診断アッセイリーダーは、対照ゾーン及び標的反応ゾーンから放出されたシグナルを検出することができ、これらのシグナル読み取り値は、試験試料中の分析物の濃度に正比例し得る。
一態様では、図4に見られるように、前鼻、口腔、又は結膜からの生物学的試料!対象の領域が得られ(401)、安定化緩衝液と混合されて試験試料が生成される402。次いで、試験試料は、本明細書に記載の装置の試料投入ポートに配置される403。次いで、シグナル緩衝液を試料投入ポートに入れ、5~10分間放置してストリップを飽和させる404。次いで、装置の写真がコンピュータプログラムによって受信される405。次いで、コンピュータプログラムは、対象が呼吸症状を有するか、呼吸症状に対する免疫を有する尤度を提供する406。
本開示の別の実施形態では、データは、輝度又は色の変化として報告されてもよい。一実施形態では、データは、ゲル電気泳動のような技術及び分析を使用して、試験ストリップに沿った水平距離の関数、又はアッセイストリップに沿ったプローブ-レポーターの移動の距離に基づいて収集及び解釈され得る。別の実施形態では、プローブ-レポーター対は、標的分析物に結合したか否かに応じて、ストリップに沿って異なる距離に移動する。2つの線の間のアッセイレポーターシグナルの強度の比率は、試料中の分析物の間接的な尺度となる。
データ分析
データ分析
一実施形態では、分析物濃度の決定において、機器が標的反応ゾーン、対照ゾーン、及び参照スポットのシグナル強度を比較することを可能にした後、標的分析物が試料中に存在するかどうかをバイナリ用語で示す、バイナリプロファイルとしてアッセイデータを生成することができる。
別の実施形態では、アッセイデータを発光強度プロファイルとして生成することができ、装置は、分析物濃度の決定において、標的反応ゾーン、対照ゾーン、及び参照スポットのシグナル強度を比較することができる。本開示の少なくとも1つの実施形態では、これらの強度に基づいて、直接比などのアルゴリズム、又は試料濃度と逆に変化する勾配決定が、試料中に存在する分析物濃度を決定するために使用される。
一実施形態では、アルゴリズムを使用して、定量的又は半定量的な結果(例えば、100万分の1又は10億分の1での読み取りに表示される特定の分析物の検出)を生成することができる。更に、このデータポイントは、ユーザがデータポイントに関連する固有の英数字識別子を入力するように格納されてもよい(位置名、全地球測位システム座標、又は他の固有の識別子など)。電子データ記憶ユニットは、ユーザがスクリーンディスプレイ上でデータを呼び出し、データベースを作成するために有線又は無線接続を介してパーソナルコンピュータにデータをアップロードすることを可能にすることができる。
一実施形態では、いくつかのシグナル比較アルゴリズムが、診断アッセイリーダーの動作中に実行され得る。そのようなアルゴリズムの1つは、カセットに組み込まれた各アッセイについて、試料によって発せられたシグナルと予め適用された対照参照スポットとの間のシグナル比較であり得る。参照スポットは、ストリップ上の固有のアドレス(位置)で発光シグナルを提供することができる。このアドレスは、診断アッセイリーダーにプログラムされ得る。
アッセイストリップの長さを走査する前に、診断アッセイリーダーは、最初に参照スポットに移動して開始シグナルを受け取ることができる。診断アッセイリーダーは、参照スポットから正の閾値シグナル値を受け取ることができる。このシグナルが受信されないか、又は割り当てられた閾値を下回る場合、診断アッセイリーダーは、アッセイストリップの読み取りを続行しなくてもよい。一実施形態では、そのようなエラーモードに入ると、視覚シグナル又は可聴シグナルがオペレータに発せられ、及び/又はリーダーへの1又はそれを超える命令が読み出しディスプレイに表示され得る。同様に、対照シグナルが閾値以上である場合、リーダーは、ユーザがアッセイ手順を継続することを可能にすることができる。
次いで、参照スポットシグナルを、別個のアルゴリズムを使用して1又はそれを超えるアッセイシグナルと比較することができる。この第2のアルゴリズムは、アッセイストリップ上の少なくとも2つの別個の位置からのシグナルレベルを、対照参照スポットシグナルとも比較するために使用され得る。次いで、発光強度プロファイルが生成される。これにより、装置は、試料濃度の決定において標的反応ゾーン、対照ゾーン、及び参照スポットのシグナル強度を比較することができる。
シグナル強度の直接比を使用して、分析物レベルを決定することができる。例えば、陰性試料における1つの標的反応ゾーン:対照ゾーンのシグナル比は、100:2(=50)である。中程度の陽性は、50:50(=l)となるだろう。高い正の値は2:100(=0.02)となるだろう。一実施形態では、2つのゾーンシグナルを合計することもでき、この合計を参照スポットからのシグナルで除算する。これによりシグナルが正規化され、試料間の直接比較を行うことができる。別のアルゴリズムの可能性は、ゾーンを決定する点としての試料及び対照ゾーンピークに基づく勾配決定である。結果として生じる線の傾きは、試料濃度に反比例して変化する。
本開示の少なくとも1つの実施形態では、アッセイデータ(距離ごとのバイナリ又は強度プロファイル)は、分析物濃度の値を決定することができ、即時使用のためにスクリーンディスプレイ上に提示することができる。次いで、強度プロファイル及び濃度値は、キーパッド又はスクリーンディスプレイを介してユーザによって入力された任意の試験試料記述情報と共に、電子データ記憶ユニットの不揮発性メモリに記憶することができる。ディスプレイは、ユーザ装置であり得る。ユーザ装置は、モバイル装置(例えば、スマートフォン、タブレットなど)、コンピュータ(例えば、ラップトップコンピュータ、デスクトップコンピュータなど)、及び/又はウェアラブル装置(例えば、スマートウォッチなど)とすることができる。ユーザ装置は、ローカルエリアネットワーク(LAN)、インターネット、イントラネット、エクストラネットなどのワイドエリアネットワーク(WAN)、電気通信ネットワーク、データネットワーク、及び/又は任意の他の種類のネットワークなどのネットワークに接続することができるネットワーク装置であってもよい。ユーザ装置は、本明細書に記載の装置のデジタル画像を分析することができるコンピュータプログラムにアクセスするために使用することができる。ユーザ装置は、コンピュータプログラムが装置が比較されるべき対照値を識別することができるコード(例えばQRコード(登録商標))を有することができる。QRコード(登録商標)を使用して、装置上の試験情報及び解釈基準を符号化することもできる。コンピュータプログラムは、分析の結果をユーザ装置に中継することができる。コンピュータプログラムは、分析の結果をユーザアカウントに保存することができる。コンピュータプログラムは、複数の分析の複数の結果をユーザアカウントに保存することができる。コンピュータプログラムは、経時的な症状の進行をモニタリングするのを助けるために、経時的な分析の結果を追跡及びグラフ表示することができる。コンピュータプログラムは、スマートフォン用に構成されたアプリケーション(例えば、アプリ)を介してアクセスすることができる。コンピュータプログラムは、デスクトップ又はスマートフォン上のディスプレイのために構成されたウェブサイトを介してアクセスすることができる。
本開示の好ましい実施形態の前述の説明は、例示及び説明の目的で提供されている。網羅的であること、又は本開示を開示された正確な形態に限定することは意図されていない。
以下の実施例は、例示のみを目的として含まれ、本開示の範囲を限定することを意図しない。
実施例I:動物のBordetella bronchiseptica免疫状態の評価
スワブを数秒間回転させることによって、イヌから鼻スワブ試料を得る。試料を、プロテアーゼ阻害剤を含有する移動緩衝液に入れる。試料は、アッセイストリップに隣接する試料パッド上の装置に滴下される。次いで、スワブを、約3mLの培地を含む収集チューブに入れる。次いで、試料のアリコート(例えば、500μl~1mL(500μ1-lmL)))を装置の試料ポートに配置する。アッセイストリップは、図2に示すように、2つの異なる標的反応ゾーンにBordetella bronchiseptica特異的抗原パータクチン及びFHAを含み、アッセイストリップの基板に結合している。試料は、試料パッドを通り、次いで、コンジュゲート標識、例えばコロイド金とコンジュゲートしたプロテインAを含有するコンジュゲート標識パッドを通って濾過する。金粒子は、指示薬色素として機能する。コンジュゲート標識は、試料中のBordetella bronchiseptica特異的抗Per及び抗FHA IgG抗体に結合して複合体を形成し、次いで複合体が、膜又は検出ストリップに沿って移動する。Bordetella bronchiseptica抗Per及び抗FHA IgG抗体の複合体は、存在する場合、膜上の別個の標的反応ゾーン位置に固定化されたBordetella bronchiseptica per及びFHA抗原に結合する。Bordetella bronchiseptica抗原とのこの金標識プロテインA抗体複合体の形成は、検出可能な色の線をもたらし、Bordetella bronchiseptica特異的抗体が試料中に存在するという陽性結果を示す。対照ゾーンでの着色線の形成は、適切な試料が添加され、アッセイが機能したことを示す。この試験の時間は、約5~10分であり、20分未満である。
スワブを数秒間回転させることによって、イヌから鼻スワブ試料を得る。試料を、プロテアーゼ阻害剤を含有する移動緩衝液に入れる。試料は、アッセイストリップに隣接する試料パッド上の装置に滴下される。次いで、スワブを、約3mLの培地を含む収集チューブに入れる。次いで、試料のアリコート(例えば、500μl~1mL(500μ1-lmL)))を装置の試料ポートに配置する。アッセイストリップは、図2に示すように、2つの異なる標的反応ゾーンにBordetella bronchiseptica特異的抗原パータクチン及びFHAを含み、アッセイストリップの基板に結合している。試料は、試料パッドを通り、次いで、コンジュゲート標識、例えばコロイド金とコンジュゲートしたプロテインAを含有するコンジュゲート標識パッドを通って濾過する。金粒子は、指示薬色素として機能する。コンジュゲート標識は、試料中のBordetella bronchiseptica特異的抗Per及び抗FHA IgG抗体に結合して複合体を形成し、次いで複合体が、膜又は検出ストリップに沿って移動する。Bordetella bronchiseptica抗Per及び抗FHA IgG抗体の複合体は、存在する場合、膜上の別個の標的反応ゾーン位置に固定化されたBordetella bronchiseptica per及びFHA抗原に結合する。Bordetella bronchiseptica抗原とのこの金標識プロテインA抗体複合体の形成は、検出可能な色の線をもたらし、Bordetella bronchiseptica特異的抗体が試料中に存在するという陽性結果を示す。対照ゾーンでの着色線の形成は、適切な試料が添加され、アッセイが機能したことを示す。この試験の時間は、約5~10分であり、20分未満である。
結果は、図1に示すように、動物のBordetella bronchiseptica免疫状態を評価するために使用することができる。例えば、試料試験が陽性であり、試料がBordetella bronchisepticaワクチンを受けた動物からの場合、陽性結果は、特に動物にBordetella bronchisepticaの他の適応症又は症状がない場合、その動物から適切な免疫応答が誘発されたことを示すだろう。試料試験が陰性であり、陰性結果は、試料がBordetella bronchisepticaワクチンを受けた動物からの場合、動物が適切に免疫化されていないことを示すだろう。
実施例2:動物におけるBordetella bronchiseptica感染の存在の評価
唾液試料は、未知の病因の呼吸器疾患の症状を有するイヌから得られる。抗真菌成分並びに他のタンパク質分解阻害剤を含有する輸送緩衝液を使用して試料を安定化する。次いで、試料をアッセイストリップの試料パッド領域に添加する。アッセイストリップは、図3に示されているように、2つの異なる標的反応ゾーンにおいて、Bordetella bronchisepticaパータクチン及びFHAに特異的な抗体を含み、アッセイストリップの基板に結合している。次の工程では、抗Per-HRP及び抗FHA-HRPなどのHRP結合抗体を添加して、試料中に存在し得る1又はそれを超えるパータクチン抗原及びFHA抗原に特異的に結合させる。結合した抗体(抗Per及び抗FHA)は、酵素結合抗体にも結合し得る抗原(それぞれPer及びFHA)に結合し、サンドイッチ複合体を形成する。発色団又は酵素基質を添加して、発色させてもよい。一実施形態では、色反応を停止し、例えば分光光度計を使用して色を定量化することができ、及び/又は色を人間の目によって主観的に評価することができる。標的反応ゾーンにおけるシグナルの存在は、動物から得られた生体液の試料中のBordetella bronchiseptica抗原の存在を示す。対照ゾーンにおけるシグナルの存在は、アッセイが適切に機能しており、イヌ試料が添加されたことを示す。シグナルの存在は、図1に示すように動物における活動性Bordetella bronchiseptica感染を示し得る。
唾液試料は、未知の病因の呼吸器疾患の症状を有するイヌから得られる。抗真菌成分並びに他のタンパク質分解阻害剤を含有する輸送緩衝液を使用して試料を安定化する。次いで、試料をアッセイストリップの試料パッド領域に添加する。アッセイストリップは、図3に示されているように、2つの異なる標的反応ゾーンにおいて、Bordetella bronchisepticaパータクチン及びFHAに特異的な抗体を含み、アッセイストリップの基板に結合している。次の工程では、抗Per-HRP及び抗FHA-HRPなどのHRP結合抗体を添加して、試料中に存在し得る1又はそれを超えるパータクチン抗原及びFHA抗原に特異的に結合させる。結合した抗体(抗Per及び抗FHA)は、酵素結合抗体にも結合し得る抗原(それぞれPer及びFHA)に結合し、サンドイッチ複合体を形成する。発色団又は酵素基質を添加して、発色させてもよい。一実施形態では、色反応を停止し、例えば分光光度計を使用して色を定量化することができ、及び/又は色を人間の目によって主観的に評価することができる。標的反応ゾーンにおけるシグナルの存在は、動物から得られた生体液の試料中のBordetella bronchiseptica抗原の存在を示す。対照ゾーンにおけるシグナルの存在は、アッセイが適切に機能しており、イヌ試料が添加されたことを示す。シグナルの存在は、図1に示すように動物における活動性Bordetella bronchiseptica感染を示し得る。
実施例3:イヌ犬舎におけるBordetella bronchiseptica感染のアウトブレイクの評価
グレイハウンド犬用の訓練センターは、何匹かのイヌが呼吸器不快感の症状を示していることを観察している。原因は不明であり、ケンネルコフの大発生の可能性を迅速に評価する方法が必要である。
グレイハウンド犬用の訓練センターは、何匹かのイヌが呼吸器不快感の症状を示していることを観察している。原因は不明であり、ケンネルコフの大発生の可能性を迅速に評価する方法が必要である。
センターの各イヌから口腔スワブを入手し、必要に応じて識別情報をマークする。図5に示すように、試料を、Bordetella bronchiseptica感染の存在を検出することができる多重アッセイ装置に添加する。装置は、ハブスポーク方式でラジアルカセットユニットに取り付けられた複数のアッセイストリップを含み、各アッセイストリップは数値的に識別される。試料は、試料識別番号に従ってカセットユニット内のアッセイストリップに添加される。各アッセイストリップは、図3に示されているように、2つの異なる標的反応ゾーンにおいて、Bordetella bronchisepticaパータクチン及びFHAに特異的な抗体を含み、アッセイストリップの基板に結合している。次の工程では、抗Per-HRP及び抗FHA-HRPなどのHRP結合抗体を添加して、トレーニングセンターの動物から得られた1又はそれを超える試料に存在し得る1又はそれを超えるパータクチン及びFHA抗原に特異的に結合させる。標的反応ゾーンで結合した抗体(抗Per及び抗FHA)は、試料の1又はそれを超える抗原(それぞれPer及びFHA)に結合する。抗原はまた、HRP結合抗体に結合し、サンドイッチ複合体を形成する。
発色団又は酵素基質を添加して、約5~10分かけて発色させる。色反応を停止し、スマートフォンを使用して色を定量化し、及び/又は色を人間の目によって主観的に評価する。データを処理し、各アッセイストリップのシグナル強度(Bordetella bronchiseptica特異的抗原の存在を示す)に基づいて、数値識別子に対応する動物から得られた生体液の試料中でBordetella bronchiseptica感染を迅速に診断する。訓練センターのイヌの間でのBordetella bronchiseptica感染の状態を迅速に評価することは、起こり得るケンネルコフのアウトブレイクの拡大を阻止するのに役立つであろう。
実施例4:側方流動試験結果の試験による診断及び分析のための応用の開発。
実施例4:側方流動試験結果の試験による診断及び分析のための応用の開発。
この例では、独自の側方流動試験の試験を通じて迅速で信頼性の高い診断を提供するために、ControlPointアプリケーションが開発される。より多くの試験が実行されるにつれて、大規模なデータ分析を可能にするために、試験結果の適用及び記憶をサポートするデータベースが開発される。
ユーザインターフェース
ユーザがControlPointアプリケーションを訪問すると、固有のプロファイルが作成され、それらを特定の診療所に結び付け、すべての将来の試験を必要に応じて呼び出すことができるようにする。ロケーションサービスを可能にするための標準的な連絡先情報及び認可は、長期的なデータ分析及び使用の利便性を支援するために要求される。
ユーザがControlPointアプリケーションを訪問すると、固有のプロファイルが作成され、それらを特定の診療所に結び付け、すべての将来の試験を必要に応じて呼び出すことができるようにする。ロケーションサービスを可能にするための標準的な連絡先情報及び認可は、長期的なデータ分析及び使用の利便性を支援するために要求される。
所与の試験中、各潜在的診断に固有の色ベースの指標のアレイが捕捉され、ControlPointのクラウドベースのデータベースにアップロードされる。受信されると、人工知能を搭載したアルゴリズムが画像を試験し、固有の病原体ごとの結果と共に装置のトレーサビリティ情報を見つける。有効になっている場合、位置及び環境データは、患者、所有者、技術者、獣医、及び診療所情報などのすべての標準的な試験データと共に格納される。分析が完了すると、ユーザは追加の画像をアップロードするか(画質が低い場合)、結果を提供するように促される。すべてのデータは、追加のレビューのためにいつでもエクスポート、電子メールで送信、又はアプリケーションを介してリコールすることができる。
より多くの試験が行われるにつれて、地域データを分析して、場所又は環境条件に結び付けられ、特定の病原体の有病率と相関する傾向を追跡する。この機能は、ControlPointの管理者に隔離され、ユーザのセキュリティを保証する。
データベース構造
次に、3つの固有のテーブルからなるMySQL構造を使用してデータベースが構築される。第1の表は、診療所情報を含むように設計されている。異なる場所にいるより多くのユーザがControlPointアプリケーションを使用し始めるにつれて、固有の診療所プロファイルが作成される。そうすることにより、診療所でユーザが受けた試験が追跡され、臨床ベースの分析が可能になる。表2は、初期化時に収集されるように意図された各固有の入力を記載している。
次に、3つの固有のテーブルからなるMySQL構造を使用してデータベースが構築される。第1の表は、診療所情報を含むように設計されている。異なる場所にいるより多くのユーザがControlPointアプリケーションを使用し始めるにつれて、固有の診療所プロファイルが作成される。そうすることにより、診療所でユーザが受けた試験が追跡され、臨床ベースの分析が可能になる。表2は、初期化時に収集されるように意図された各固有の入力を記載している。
バックエンド構造
複数の同時ユーザを容易にするために、マルチスレッド化されたPythonベースのバックエンドは、3つの高レベル機能に分割される。図7は、各固有のスレッド間の相互作用を説明する。着信要求及び発信応答は、固有のスレッドによって処理される。各要求は、先入れ先出し方式でサービスされるキューに入る。適切な関数にルーティングされると、処理中に、スレッドは追加の要求に対応するために解放される。要求に対する以前の応答が形成されると、応答がソースに返されることを可能にするフラグが立てられる。
複数の同時ユーザを容易にするために、マルチスレッド化されたPythonベースのバックエンドは、3つの高レベル機能に分割される。図7は、各固有のスレッド間の相互作用を説明する。着信要求及び発信応答は、固有のスレッドによって処理される。各要求は、先入れ先出し方式でサービスされるキューに入る。適切な関数にルーティングされると、処理中に、スレッドは追加の要求に対応するために解放される。要求に対する以前の応答が形成されると、応答がソースに返されることを可能にするフラグが立てられる。
要求タイプに応じて固有の関数が呼び出される。各関数の実行は、追加のスレッド上で行われる。要求とデータベース対話との間の橋渡しとして機能するこのスレッドは、新しいユーザ及び診療所が適切な方法で作成され、既存のユーザがログインすることができ、新しい試験を処理することができ、以前の試験を視覚化することができることを保証するために必要な順序でデータをアップロード又はプルする。これにより、各要求を処理することが可能になり、より多くのユーザがアクティブになるにつれてアプリケーション応答時間を遅くすることなく十分な処理時間を提供する。所与の試験結果を分析するために必要な必要な処理に応じて、遅延を更に回避するために追加のスレッドを作成することができる。データベースからの変更及び読み取りは、最終スレッドで行われる。このスレッドは、複数の機能が同時にアクセスすることによるデータ破損を回避するためにデータベースへのすべての変更を管理する。
フロントエンド構造
ユーザは、視覚的に使いやすいユーザインターフェースを介して、ControlPointのアプリケーション機能にアクセスすることができる。ウェブベースのアプリケーションは、情報を収集し、要求を送信し、応答を受信し、バックエンドから提供されたデータを表示するために、HTML、JavaScript(登録商標)、及びCSSを実装する。図7に示すように、ユーザは、最初にログインするか、又は新しいプロファイルを作成する必要がある。提供されたリストから関連する診療所を見つけることができない場合、新しい診療所プロファイルが作成される。
ユーザは、視覚的に使いやすいユーザインターフェースを介して、ControlPointのアプリケーション機能にアクセスすることができる。ウェブベースのアプリケーションは、情報を収集し、要求を送信し、応答を受信し、バックエンドから提供されたデータを表示するために、HTML、JavaScript(登録商標)、及びCSSを実装する。図7に示すように、ユーザは、最初にログインするか、又は新しいプロファイルを作成する必要がある。提供されたリストから関連する診療所を見つけることができない場合、新しい診療所プロファイルが作成される。
ログイン認証情報が承認されると、ユーザは、自身及び関連する診療所で行われた以前の試験を閲覧するか、又は追加の試験を実行するオプションを有する。以前の試験データをレビューするとき、日付、品種、又は試験結果によってフィルタリングオプションが利用可能になる。これにより、関心のある試験又は一連の試験に迅速にナビゲートし、必要に応じてデータをエクスポート/送信することが可能になる。あるいは、ユーザは、アプリケーションに示された指示に従って、流体試料が堆積された装置の写真をアップロードし、アプリケーションの分析アルゴリズムからフィードバックを受け取ることによって、新しい試験を実行するオプションを与えられる。有効にすると、位置及び温度設定が自動的に収集され、ユーザの分析を支援するためにユーザに表示される。
ウェブベースのアプリケーションは、インターネットに接続する能力を有する任意の装置と互換性があるが、オフライン機能を可能にする一般的なオペレーティングシステムのために追加のアプリケーションが作成されるべきである。フロントエンド機能には、SwiftやAndroid(登録商標)(Java(登録商標))などの追加の言語が追加されている。
本発明の好ましい実施形態を本明細書に示し説明してきたが、そのような実施形態が例としてのみ提供されることは当業者には明らかであろう。本発明から逸脱することなく、当業者には多数の変形、変更、及び置換が思い浮かぶであろう。本明細書に記載の本発明の実施形態に対する様々な代替形態が、本発明を実施する際に使用され得ることを理解されたい。以下の特許請求の範囲が本発明の範囲を定義し、これらの特許請求の範囲内の方法及び構造並びにそれらの均等物がそれによって包含されることが意図される。
Claims (71)
- 試料を処理又は分析するための方法であって、前記試料が、それを必要とする対象からであり、前記方法が、
(a)前記試料を処理することであって、側方流動装置のうちの1又はそれを超える別個の区画において、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)を引き起こし得る1又はそれを超える病原体に関連する呼吸症状に関連する1又はそれを超える標的分析物に特異的に結合するように構成された前記側方流動装置を使用して、
前記側方流動装置が、前記1又はそれを超える標的分析物に結合すると、前記1又はそれを超える別個の区画に検出可能なシグナルを生成するように構成される、処理することと、
(b)前記検出可能なシグナルを分析することであって、前記対象が前記呼吸症状を有するか、又は前記呼吸症状に対する免疫を有するかどうかを決定することと、を含む、方法。 - スワブを介して前記対象から前記試料を得ることを更に含む、請求項1に記載の方法。
- 前記試料が、唾液、眼排出物、鼻排出物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択される、請求項1に記載の方法。
- 前記標的分析物が、1又はそれを超えるタンパク質を含む、請求項1又は3に記載の方法。
- 前記1又はそれを超えるタンパク質が、CIRDC病原体によって産生される抗原、前記CIRDC病原体によって産生される病原性因子、前記CIRDC病原体によって産生される病原性因子の断片、前記CIRDC病原体又はその免疫原性断片である、請求項4に記載の方法。
- 前記CIRDC病原体が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス、及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択される、請求項5に記載の方法。
- 前記抗原が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、mycoplasma cynos、streptococcus equi、及びイヌボカウイルスのうちの1又はそれを超える病原性因子である、請求項4に記載の方法。
- 前記病原性因子が、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、セルロパスミン(Cp)タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択される、請求項7に記載の方法。
- 前記標的分析物が、1又はそれを超える標的抗体を含む、請求項1~4のいずれか一項に記載の方法。
- 前記1又はそれを超える標的抗体が、CIRDC病原体の1又はそれを超える免疫原性成分に対する親和性を有する抗体を含む、請求項9に記載の方法。
- 前記標的抗体が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌ呼吸器コロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、mycoplasma cynos、streptococcus equi、及びイヌボカウイルスタンパク質のうちの1又はそれを超える病原性因子に対する親和性を有する抗体からなる群から選択される、請求項9又は10に記載の方法。
- 前記病原性因子が、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜ペントラマータンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン若しくはその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、セルロパスミン(Cp)タンパク質、又はそれらの免疫原性断片を含む群から選択される、請求項11に記載の方法。
- 前記呼吸症状に対する前記対象のワクチン接種状態が不明である、請求項1~12のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、非ヒト動物である、請求項1~13のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、イヌ(Canis familiaris)、ブタ(Sus scrofa domesticus)、ヨーロッパヤマネコ(Felis catus)、アナウサギ(Oryctolagus cuniculus)及びウマ(Equus caballus)からなる群から選択される属に属する、請求項1~14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、イヌである、請求項1~14のいずれか一項に記載の方法。
- 前記呼吸症状が、感染性気管気管支炎である、請求項1~16のいずれか一項に記載の方法。
- 前記感染性気管気管支炎が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルス感染である、請求項17に記載の方法。
- 前記感染性気管気管支炎が、ウイルス感染である、請求項17に記載の方法。
- 前記感染性気管気管支炎が、細菌感染である、請求項17に記載の方法。
- 前記呼吸症状に対するワクチンを受けた前記対象における前記呼吸症状に対する防御免疫の発症を評価することを更に含む、請求項1~20のいずれか一項に記載の方法。
- 前記分析することが、前記検出可能なシグナルを対照と比較して、前記試料中の前記1又はそれを超える標的分析物の存在を決定することを含む、請求項1~21のいずれか一項に記載の方法。
- 前記比較することは、前記側方流動装置によって生成された前記検出可能なシグナルのデジタル画像を分析することを含み、前記デジタル画像は、前記対照を識別するためのコードを含む、請求項22に記載の方法。
- 前記分析することは、訓練されたアルゴリズムによって実行され、前記デジタル画像は、コンピュータを介して前記訓練されたアルゴリズムに送信される、請求項23に記載の方法。
- 第2の時点で前記対象から第2の試料を得ることと、前記呼吸症状に対する免疫の持続時間を評価するために前記側方流動装置を使用して前記第2の試料を分析することと、を含む、請求項1~24のいずれか一項に記載の方法。
- 前記側方流動装置が、1又はそれを超える捕捉剤を含む、請求項1~25のいずれか一項に記載の方法。
- 前記1又はそれを超える捕捉剤が、前記呼吸症状に関連する1又はそれを超える抗原を含む、請求項26に記載の方法。
- 前記1又はそれを超える捕捉剤が、前記呼吸症状に関連する抗原に結合するように構成された1又はそれを超える抗体を含む、請求項26に記載の方法。
- 試料を処理又は分析するためのシステムであって、前記試料が、それを必要とする対象からであり、(i)2又はそれを超えるアッセイストリップであって、それぞれが固体支持体上に2又はそれを超える別個の反応ゾーンを含み、第1の別個の反応ゾーンが対照分析物捕捉剤を含み、かつ第2の別個の反応ゾーンが標的分析物捕捉試薬を含み、前記標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)抗原特異的抗体、CIRDC抗原、又はそれらの断片である、アッセイストリップと、(ii)試料投入ポートであって、前記2又はそれを超えるアッセイストリップが前記試料投入ポートの周りに配置され、前記側方流動装置が、前記対照分析物捕捉剤が対照分析物に結合すると、又は前記標的分析物捕捉剤が標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成され、前記検出可能なシグナルが、前記コンピュータに送られ、コンピュータプログラムによって分析されて、CIRDC抗原、抗体又はその断片の存在又は非存在を決定する、試料投入ポートと、を含む側方流動装置を含む、システム。
- 前記コンピュータが、前記対象が呼吸症状を有する、前記呼吸症状を発症するだろう、又は前記呼吸症状に対する免疫を有する、という尤度を出力する、請求項29に記載のシステム。
- 前記対照分析物捕捉剤によって結合された対照分析物に結合するように構成された第1のレポーター分子と、前記標的分析物捕捉剤によって結合された標的分析物に結合するように構成された第2のレポーター分子と、を更に含む、請求項29に記載のシステム。
- 前記第1のレポーター分子及び前記第2のレポーター分子が、前記標的分析物又は前記対照分析物に結合すると、前記2又はそれを超える別個の反応ゾーンの別個の反応ゾーンで前記検出可能なシグナルを生成することができる、請求項31に記載のシステム。
- 前記第1のレポーター分子又は前記第2のレポーター分子が、コロイド金、プロテインA、酵素、又は指示薬色素を含む、請求項31又は32に記載のシステム。
- 前記検出可能なシグナルが、蛍光シグナル又は比色変化である、請求項29~33のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記生物学的試料が、唾液、鼻排出物、口腔内分泌物、中咽頭液、含嗽液去痰剤、口腔液、歯肉溝滲出液、尿、汗、涙、血液、血清、便、胃液、滑液、及び痰からなる群から選択される、請求項29に記載のシステム。
- 前記対照分析物捕捉剤が抗体であり、かつ前記標的分析物捕捉剤が抗体である、請求項31~35のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記対照分析物捕捉剤が、IgAである、請求項36に記載のシステム。
- 前記対照分析物が抗原であり、かつ前記標的分析物が抗原である、請求項36又は37に記載のシステム。
- 前記標的分析物が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパー、イヌインフルエンザ、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスの病原性因子である、請求項29に記載のシステム。
- 前記病原性因子が、糸状ヘマグルチニン(hemagluttinin)タンパク質(FHA)、パータクチンタンパク質、分枝鎖脂肪酸タンパク質、ヘマグルチニンタンパク質、融合タンパク質、マトリックスタンパク質、スパイク糖タンパク質三量体タンパク質、膜タンパク質、核タンパク質、エンベロープ小膜五量体タンパク質、カプシドタンパク質、ファイバータンパク質、ペントンタンパク質、ヘキソンタンパク質、エンベロープタンパク質、カプシドタンパク質、ヘマグルチニン又はその融合タンパク質、マトリックスタンパク質、H3タンパク質、N2タンパク質、N8タンパク質、糖タンパク質、SHタンパク質、微小管関連タンパク質(MAP)、カルバモイルリン酸シンテターゼ(CPS)タンパク質、及びセルロパスミン(Cp)タンパク質を含む群から選択される、請求項39に記載のシステム。
- 前記標的分析物が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス、イヌヘパシウイルス、又はイヌ(Canis familiaris)によって産生される病原性因子の断片である、請求項29に記載のシステム。
- 前記病原性因子が、イヌ(Canis familiaris)動物において、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスによって産生される構造タンパク質、細胞膜タンパク質又は毒素である、請求項29に記載のシステム。
- 前記対照分析物捕捉剤が抗原であり、前記標的分析物捕捉剤が抗原である、請求項31~42のいずれか一項に記載のシステム。
- 前記対照分析物が抗体であり、前記標的分析物が抗体である、請求項43に記載のシステム。
- 前記対照分析物捕捉剤が、イヌIgAである、請求項44に記載のシステム。
- 前記対照分析物が、抗IgA抗体である、請求項43に記載のシステム。
- 前記標的分析物が、CIRDC病原体に対して親和性を有する抗体又はその免疫原性断片からなる群から選択される抗体である、請求項44に記載のシステム。
- 前記CIRDC病原体が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス又はイヌヘパシウイルスである、請求項47に記載のシステム。
- 前記標的分析物が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群の病原性因子に対して親和性を有する抗体からなる群から選択される抗体である、請求項42に記載のシステム。
- 前記側方流動装置が、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含む、請求項29に記載のシステム。
- 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、ニトロセルロース膜を含む、請求項50に記載のシステム。
- 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、前記第1の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤-対照分析物コンジュゲートを形成し、前記第2の別個の反応ゾーンにおいて標識捕捉剤-標的分析物コンジュゲートを形成するように構成される、請求項50に記載のシステム。
- 1又はそれを超える呼吸症状に関連する1又はそれを超える標的分析物を検出するための装置であって、固体支持体上に固定化された1又はそれを超える標的分析物捕捉試薬を含み、
前記1又はそれを超える標的分析物捕捉試薬が、イヌ感染性呼吸器病症候群(CIRDC)抗原特異的抗体、CIRDC抗原、又はそれらの断片であり、
前記1又はそれを超える標的分析物捕捉試薬の各々が、前記装置の複数の別個の区画のうちの異なる別個の区画にあり、
前記複数の別個の区画が、中央試料投入ポートに流体接続され、かつ
前記装置が、前記1又はそれを超える標的分析物捕捉剤による前記1又はそれを超える標的分析物に結合すると、検出可能なシグナルを生成するように構成される、装置。 - 前記固体支持体が、免疫クロマトグラフィーアッセイストリップを含む、請求項53に記載の装置。
- 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、ニトロセルロースを含む、請求項54に記載の装置。
- 前記複数の標的及び対照分析物の別個の区画が、前記中央試料投入ポートの周りに輪状に1又はそれを超えるストリップ状に配置される、請求項53に記載の装置。
- 前記第1の対照分析物捕捉区画及び前記第1の標的分析物捕捉区画が、第1のストリップ上に配置され、前記第2の対照分析物捕捉区画及び前記第2の標的分析物捕捉区画が、第2のストリップ上に配置され、前記第1のストリップ及び前記第2のストリップが、前記中央試料投入ポートの周りに配置される、請求項56に記載の装置。
- 前記複数の別個の区画が、単一のストリップ内に存在し、前記区画が、前記中央試料投入ポートに対して遠位に配置される、請求項53に記載の装置。
- 前記複数の別個の区画が、前記標的分析物区画が前記試料投入ポートの遠位の前記アッセイストリップ上に二次元アレイとして配列されるように配置される、請求項58に記載の装置。
- 前記複数の別個の区画が、各別個の標的分析物区画が別個の対照分析物区画に隣接して配置されるように配置される、請求項53に記載の装置。
- 前記複数の別個の区画が、各別個の標的分析物区画が別の標的分析物区画に隣接して配置されるように配置される、請求項53に記載の装置。
- 各標的分析物区画が、単一の捕捉試薬を含む、請求項53に記載の装置。
- 各標的分析物区画が、捕捉試薬の組み合わせを含む、請求項53に記載の装置。
- 少なくとも12個の別個の標的分析物区画を含み、各標的分析物の存在又は非存在が、異なるCIRDC病原体の存在又は非存在を示す、請求項53に記載の装置。
- 前記CIRDC病原体が、Bordetella bronchiseptica、イヌパラインフルエンザウイルス、イヌコロナウイルス、イヌアデノウイルス2型、イヌヘルペスウイルス、イヌジステンパーウイルス、イヌインフルエンザウイルス、イヌニューモウイルス、Mycoplasma cynos、Streptococcus equi、イヌボカウイルス及びイヌヘパシウイルスからなる群から選択される、請求項64に記載の装置。
- 前記免疫クロマトグラフィーアッセイストリップが、取り外し可能である、請求項54に記載の装置。
- 請求項53~66に記載の装置及び説明書を含むキット。
- 対象から試料を得るための器具と、前記装置の前記試料投入ポートに装填する前に試料を安定化させるための輸送流体と、を更に含む、請求項67に記載のキット。
- 前記検出可能なシグナルを生成するための緩衝液を更に含む、請求項68に記載のキット。
- 前記緩衝液が、シグナル生成試薬を含む、請求項69に記載のキット。
- 前記輸送流体が、プロテアーゼ阻害剤及びエチレンジアミン四酢酸(EDTA)を含む、請求項68に記載のキット。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US202063089523P | 2020-10-08 | 2020-10-08 | |
US63/089,523 | 2020-10-08 | ||
PCT/US2021/054039 WO2022076734A1 (en) | 2020-10-08 | 2021-10-07 | Methods and apparatuses for detecting respiratory infections |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023546076A true JP2023546076A (ja) | 2023-11-01 |
Family
ID=81126108
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2023522503A Pending JP2023546076A (ja) | 2020-10-08 | 2021-10-07 | 呼吸器感染症を検出するための方法及び器具 |
Country Status (7)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240077482A1 (ja) |
EP (1) | EP4226164A1 (ja) |
JP (1) | JP2023546076A (ja) |
AU (1) | AU2021358538A1 (ja) |
CA (1) | CA3194830A1 (ja) |
MX (1) | MX2023003961A (ja) |
WO (1) | WO2022076734A1 (ja) |
Family Cites Families (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US8313915B2 (en) * | 2009-01-21 | 2012-11-20 | Gundersen Lutheran Medical Foundation, Inc. | Early detection of canine lyme disease by specific peptides and antibodies |
CN102803943B (zh) * | 2009-04-15 | 2016-03-16 | 纳诺米克斯公司 | 呼吸冷凝液取样器和检测器以及呼吸/呼吸冷凝液取样器和检测器 |
US11459619B2 (en) * | 2016-02-08 | 2022-10-04 | The Johns Hopkins University | Handheld nucleic acid-based assay for rapid identification |
-
2021
- 2021-10-07 CA CA3194830A patent/CA3194830A1/en active Pending
- 2021-10-07 EP EP21878561.6A patent/EP4226164A1/en active Pending
- 2021-10-07 WO PCT/US2021/054039 patent/WO2022076734A1/en active Application Filing
- 2021-10-07 MX MX2023003961A patent/MX2023003961A/es unknown
- 2021-10-07 JP JP2023522503A patent/JP2023546076A/ja active Pending
- 2021-10-07 AU AU2021358538A patent/AU2021358538A1/en active Pending
-
2023
- 2023-04-06 US US18/296,982 patent/US20240077482A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
AU2021358538A1 (en) | 2023-05-25 |
US20240077482A1 (en) | 2024-03-07 |
EP4226164A1 (en) | 2023-08-16 |
MX2023003961A (es) | 2023-06-02 |
WO2022076734A1 (en) | 2022-04-14 |
CA3194830A1 (en) | 2022-04-14 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
ES2773471T3 (es) | Aparato de ensayo para el biomarcador cardiaco ST2 | |
US20050208593A1 (en) | Lateral flow diagnostic assay reader with radial cassette | |
TW201903408A (zh) | 用於定量分析的新穎通用測試系統 | |
JP2019164143A (ja) | ウイルス感染及び細菌感染の一体検出のための方法及び装置 | |
US20130034863A1 (en) | Apparatus and Methods for Detecting Inflammation Using Quantum Dots | |
JP2012524279A5 (ja) | ||
CN109765383B (zh) | 一种猫瘟热病毒抗体荧光检测试纸条及其制备方法和应用 | |
US12013395B2 (en) | Serodiagnostic testing device and system for early-stage Lyme disease using a multiplexed immunoassay | |
US20180074074A1 (en) | Homogenous and heterogeneous assays and systems for determination of ocular biomarkers | |
US11789020B2 (en) | Neutralizing antibody testing and treatment | |
US20230213516A1 (en) | Immunoassays for detection of immunoglobulins against sars cov-2 and methods of use | |
JP2013170835A (ja) | イムノクロマト用検査器具、分析装置、および分析方法 | |
US20220244258A1 (en) | Assay For Neutralizing Antibody Testing And Treatment | |
CN107389928A (zh) | 定量检测胃泌素释放肽前体(pro‑GRP)的双光子荧光免疫层析试剂盒及其制备方法 | |
Aboul-Ella et al. | Development, preparation, and evaluation of a novel dotted lateral flow immunochromatographic kit for rapid diagnosis of dermatophytosis | |
WO2019241188A1 (en) | Antibody pairs for use in a rapid influenza b diagnostic test | |
JP6858784B2 (ja) | サブトラクティブイムノアッセイ方法およびその方法を実施するためのラテラルフローイムノクロマトグラフィーアッセイストリップ | |
JP2019113425A (ja) | イムノクロマトアッセイ用検査カートリッジ及び検査装置 | |
US20240077482A1 (en) | Methods and apparatuses for detecting respiratory infections | |
RU2532352C2 (ru) | Способ проведения иммунохроматографического анализа для серодиагностики | |
US20230221319A1 (en) | A Method, A System, An Article, A Kit And Use Thereof For Biomolecule, Bioorganelle, Bioparticle, Cell And Microorganism Detection | |
Wei et al. | Direct detection of Yersinia pestis from the infected animal specimens by a fiber optic biosensor | |
CN117110604A (zh) | 检测新冠病毒抗原的免疫层析试纸条 | |
KR101894489B1 (ko) | Igm 반정량적 렙토스피라증 진단 키트 | |
US20220082560A1 (en) | Capture flow assay device and methods |