JP2023543362A - Ｎｅｕｒｏｄ１組み合わせベクター - Google Patents
Ｎｅｕｒｏｄ１組み合わせベクター Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023543362A JP2023543362A JP2023544180A JP2023544180A JP2023543362A JP 2023543362 A JP2023543362 A JP 2023543362A JP 2023544180 A JP2023544180 A JP 2023544180A JP 2023544180 A JP2023544180 A JP 2023544180A JP 2023543362 A JP2023543362 A JP 2023543362A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- seq
- nucleic acid
- acid sequence
- sequence
- aav
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 102100032063 Neurogenic differentiation factor 1 Human genes 0.000 title claims abstract description 361
- 239000013598 vector Substances 0.000 title claims description 80
- 108700020297 NeuroD Proteins 0.000 title description 19
- 101150079937 NEUROD1 gene Proteins 0.000 title 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims abstract description 218
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 claims abstract description 183
- 102100036106 LIM/homeobox protein Lhx3 Human genes 0.000 claims abstract description 171
- 101001020452 Homo sapiens LIM/homeobox protein Lhx3 Proteins 0.000 claims abstract description 170
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 158
- 101150010353 Ascl1 gene Proteins 0.000 claims abstract description 146
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 135
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 claims abstract description 122
- 210000004498 neuroglial cell Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 792
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 728
- 101000638044 Homo sapiens Neurogenic differentiation factor 1 Proteins 0.000 claims description 475
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 414
- 102000010292 Peptide Elongation Factor 1 Human genes 0.000 claims description 227
- 108010077524 Peptide Elongation Factor 1 Proteins 0.000 claims description 227
- 102000053171 Glial Fibrillary Acidic Human genes 0.000 claims description 198
- 101710193519 Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 claims description 182
- 210000005046 glial fibrillary acidic protein Anatomy 0.000 claims description 182
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 177
- 241000829100 Macaca mulatta polyomavirus 1 Species 0.000 claims description 175
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 172
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 161
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 141
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 claims description 134
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 120
- 102000057054 human NEUROD1 Human genes 0.000 claims description 119
- 230000000926 neurological effect Effects 0.000 claims description 79
- 108020004684 Internal Ribosome Entry Sites Proteins 0.000 claims description 72
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims description 70
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 62
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 58
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims description 49
- 210000001130 astrocyte Anatomy 0.000 claims description 48
- 238000012384 transportation and delivery Methods 0.000 claims description 48
- 241001492404 Woodchuck hepatitis virus Species 0.000 claims description 45
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 claims description 44
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 42
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 39
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 35
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims description 30
- 241000710188 Encephalomyocarditis virus Species 0.000 claims description 24
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 23
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims description 22
- 241000282405 Pongo abelii Species 0.000 claims description 22
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 22
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 22
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 22
- 241000282575 Gorilla Species 0.000 claims description 21
- 241000282553 Macaca Species 0.000 claims description 21
- 241000282576 Pan paniscus Species 0.000 claims description 21
- 241001515942 marmosets Species 0.000 claims description 21
- 241000282577 Pan troglodytes Species 0.000 claims description 20
- 241000282620 Hylobates sp. Species 0.000 claims description 19
- 241000288904 Lemur Species 0.000 claims description 19
- 241001504519 Papio ursinus Species 0.000 claims description 19
- 230000006378 damage Effects 0.000 claims description 19
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 claims description 19
- 206010028570 Myelopathy Diseases 0.000 claims description 18
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 claims description 18
- 208000014674 injury Diseases 0.000 claims description 18
- 210000000278 spinal cord Anatomy 0.000 claims description 17
- 108700005000 Glial Fibrillary Acidic Proteins 0.000 claims description 16
- 101000888419 Homo sapiens Glial fibrillary acidic protein Proteins 0.000 claims description 16
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 16
- 102000051520 human GFAP Human genes 0.000 claims description 16
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 claims description 13
- 241001634120 Adeno-associated virus - 5 Species 0.000 claims description 12
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 claims description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 12
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 12
- 206010003694 Atrophy Diseases 0.000 claims description 11
- 230000037444 atrophy Effects 0.000 claims description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 11
- 241000649044 Adeno-associated virus 9 Species 0.000 claims description 10
- 101100074806 Homo sapiens LHX3 gene Proteins 0.000 claims description 10
- 108700042694 Lhx3 Proteins 0.000 claims description 10
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 10
- 108010090448 insulin gene enhancer binding protein Isl-1 Proteins 0.000 claims description 10
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 claims description 10
- 208000005189 Embolism Diseases 0.000 claims description 9
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 claims description 9
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 9
- 210000001362 glutamatergic neuron Anatomy 0.000 claims description 9
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 claims description 8
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 8
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 claims description 8
- 210000003710 cerebral cortex Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000002932 cholinergic neuron Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000005064 dopaminergic neuron Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000001222 gaba-ergic neuron Anatomy 0.000 claims description 8
- 210000002951 peptidergic neuron Anatomy 0.000 claims description 8
- 230000000862 serotonergic effect Effects 0.000 claims description 8
- 101000901099 Homo sapiens Achaete-scute homolog 1 Proteins 0.000 claims description 7
- 102100022142 Achaete-scute homolog 1 Human genes 0.000 claims description 6
- 206010003591 Ataxia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000024806 Brain atrophy Diseases 0.000 claims description 6
- 206010008138 Cerebral venous thrombosis Diseases 0.000 claims description 6
- 206010070511 Hypoxic-ischaemic encephalopathy Diseases 0.000 claims description 6
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 claims description 6
- 201000008450 Intracranial aneurysm Diseases 0.000 claims description 6
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037212 Neonatal hypoxic and ischemic brain injury Diseases 0.000 claims description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 6
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000030886 Traumatic Brain injury Diseases 0.000 claims description 6
- 208000009973 brain hypoxia - ischemia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037976 chronic inflammation Diseases 0.000 claims description 6
- 208000037893 chronic inflammatory disorder Diseases 0.000 claims description 6
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 claims description 6
- 230000002008 hemorrhagic effect Effects 0.000 claims description 6
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 claims description 6
- 238000007917 intracranial administration Methods 0.000 claims description 6
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 claims description 6
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 claims description 6
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 claims description 6
- 208000017169 kidney disease Diseases 0.000 claims description 6
- 201000006417 multiple sclerosis Diseases 0.000 claims description 6
- 208000033300 perinatal asphyxia Diseases 0.000 claims description 6
- 208000020431 spinal cord injury Diseases 0.000 claims description 6
- 230000009529 traumatic brain injury Effects 0.000 claims description 6
- 230000000472 traumatic effect Effects 0.000 claims description 6
- 241001515796 Cebinae Species 0.000 claims description 5
- 206010010254 Concussion Diseases 0.000 claims description 5
- 230000009514 concussion Effects 0.000 claims description 5
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 5
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 claims description 5
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 claims description 5
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 claims description 5
- 208000016988 Hemorrhagic Stroke Diseases 0.000 claims description 4
- 208000032382 Ischaemic stroke Diseases 0.000 claims description 4
- 201000009950 chronic meningitis Diseases 0.000 claims description 4
- 208000020658 intracerebral hemorrhage Diseases 0.000 claims description 4
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 claims description 4
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 claims description 3
- 230000003073 embolic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012385 systemic delivery Methods 0.000 claims description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 claims 2
- 210000000845 cartilage Anatomy 0.000 claims 2
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 claims 2
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 claims 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 claims 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 claims 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 claims 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 claims 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 claims 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 claims 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 claims 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 claims 1
- 102100024392 Insulin gene enhancer protein ISL-1 Human genes 0.000 abstract description 19
- 108050000588 Neurogenic differentiation factor 1 Proteins 0.000 abstract description 7
- 101001053263 Homo sapiens Insulin gene enhancer protein ISL-1 Proteins 0.000 abstract description 4
- 238000010586 diagram Methods 0.000 abstract 1
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 126
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 71
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 61
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 61
- FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 4',6-Diamino-2-phenylindol Chemical compound C1=CC(C(=N)N)=CC=C1C1=CC2=CC=C(C(N)=N)C=C2N1 FWBHETKCLVMNFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 23
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 23
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 22
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 18
- 101150070110 Isl1 gene Proteins 0.000 description 16
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 16
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 13
- 108091092195 Intron Proteins 0.000 description 12
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 12
- 108010020004 Microtubule-Associated Proteins Proteins 0.000 description 10
- 102000009664 Microtubule-Associated Proteins Human genes 0.000 description 10
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 10
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 102100021244 Integral membrane protein GPR180 Human genes 0.000 description 9
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 9
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 9
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 9
- 101001092197 Homo sapiens RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 8
- 102100035530 RNA binding protein fox-1 homolog 3 Human genes 0.000 description 8
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 8
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 8
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 8
- 210000001029 dorsal striatum Anatomy 0.000 description 7
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 7
- 239000002858 neurotransmitter agent Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 6
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 6
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 6
- 210000002637 putamen Anatomy 0.000 description 6
- 241000214054 Equine rhinitis A virus Species 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 102100030485 Platelet-derived growth factor receptor alpha Human genes 0.000 description 5
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 5
- 230000036982 action potential Effects 0.000 description 5
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 210000001159 caudate nucleus Anatomy 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 5
- 210000001577 neostriatum Anatomy 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 230000004044 response Effects 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- 101150053137 AIF1 gene Proteins 0.000 description 4
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 108010068588 Platelet-Derived Growth Factor alpha Receptor Proteins 0.000 description 4
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 4
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 4
- VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N dopamine Chemical compound NCCC1=CC=C(O)C(O)=C1 VYFYYTLLBUKUHU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000000968 fibrocartilage Anatomy 0.000 description 4
- BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N gamma-aminobutyric acid Chemical compound NCCCC(O)=O BTCSSZJGUNDROE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004129 prosencephalon Anatomy 0.000 description 4
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 4
- QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N serotonin Chemical compound C1=C(O)C=C2C(CCN)=CNC2=C1 QZAYGJVTTNCVMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000003523 substantia nigra Anatomy 0.000 description 4
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 description 3
- 241000202702 Adeno-associated virus - 3 Species 0.000 description 3
- 241000580270 Adeno-associated virus - 4 Species 0.000 description 3
- 241000972680 Adeno-associated virus - 6 Species 0.000 description 3
- 241001164823 Adeno-associated virus - 7 Species 0.000 description 3
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 description 3
- 241000649045 Adeno-associated virus 10 Species 0.000 description 3
- 241000649046 Adeno-associated virus 11 Species 0.000 description 3
- 241000649047 Adeno-associated virus 12 Species 0.000 description 3
- 102000012002 Aquaporin 4 Human genes 0.000 description 3
- 108010036280 Aquaporin 4 Proteins 0.000 description 3
- 108091029430 CpG site Proteins 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101000720704 Homo sapiens Neuronal migration protein doublecortin Proteins 0.000 description 3
- 102100025929 Neuronal migration protein doublecortin Human genes 0.000 description 3
- 102100026547 Platelet-derived growth factor receptor beta Human genes 0.000 description 3
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 3
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 3
- 108700009124 Transcription Initiation Site Proteins 0.000 description 3
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 3
- 210000004227 basal ganglia Anatomy 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 210000001052 bipolar neuron Anatomy 0.000 description 3
- 230000008499 blood brain barrier function Effects 0.000 description 3
- 210000004720 cerebrum Anatomy 0.000 description 3
- 210000005257 cortical tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000002599 functional magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 3
- 229960003692 gamma aminobutyric acid Drugs 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 210000000337 motor cortex Anatomy 0.000 description 3
- 238000002887 multiple sequence alignment Methods 0.000 description 3
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 3
- 210000004248 oligodendroglia Anatomy 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 230000002739 subcortical effect Effects 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 102000018720 Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factors Human genes 0.000 description 2
- 108010027344 Basic Helix-Loop-Helix Transcription Factors Proteins 0.000 description 2
- 102000005598 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Human genes 0.000 description 2
- 108010059480 Chondroitin Sulfate Proteoglycans Proteins 0.000 description 2
- 206010010904 Convulsion Diseases 0.000 description 2
- 108091029523 CpG island Proteins 0.000 description 2
- 208000012661 Dyskinesia Diseases 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000899111 Homo sapiens Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 2
- 101000711846 Homo sapiens Transcription factor SOX-9 Proteins 0.000 description 2
- 241000282596 Hylobatidae Species 0.000 description 2
- 108700005091 Immunoglobulin Genes Proteins 0.000 description 2
- 108090000862 Ion Channels Proteins 0.000 description 2
- 102000004310 Ion Channels Human genes 0.000 description 2
- 101150055061 LCN2 gene Proteins 0.000 description 2
- 241000288903 Lemuridae Species 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000009668 Neurobehavioral Manifestations Diseases 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 2
- 241000282520 Papio Species 0.000 description 2
- 108010051742 Platelet-Derived Growth Factor beta Receptor Proteins 0.000 description 2
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 2
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 2
- 206010037180 Psychiatric symptoms Diseases 0.000 description 2
- 101150106167 SOX9 gene Proteins 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 102100034204 Transcription factor SOX-9 Human genes 0.000 description 2
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 2
- 206010044565 Tremor Diseases 0.000 description 2
- 108090000704 Tubulin Proteins 0.000 description 2
- 102000004243 Tubulin Human genes 0.000 description 2
- 101710202239 Tubulin beta-3 chain Proteins 0.000 description 2
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 2
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical compound CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960004373 acetylcholine Drugs 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 210000003403 autonomic nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 238000002869 basic local alignment search tool Methods 0.000 description 2
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 2
- 230000031018 biological processes and functions Effects 0.000 description 2
- 210000001218 blood-brain barrier Anatomy 0.000 description 2
- 108010006025 bovine growth hormone Proteins 0.000 description 2
- 210000000133 brain stem Anatomy 0.000 description 2
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 2
- 238000007451 chromatin immunoprecipitation sequencing Methods 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 2
- 229960003638 dopamine Drugs 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000002964 excitative effect Effects 0.000 description 2
- 230000002518 glial effect Effects 0.000 description 2
- 102000005396 glutamine synthetase Human genes 0.000 description 2
- 108020002326 glutamine synthetase Proteins 0.000 description 2
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 2
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 2
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 210000001153 interneuron Anatomy 0.000 description 2
- 238000011005 laboratory method Methods 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 210000000274 microglia Anatomy 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000001706 olfactory mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000000196 olfactory nerve Anatomy 0.000 description 2
- 210000001328 optic nerve Anatomy 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 238000002600 positron emission tomography Methods 0.000 description 2
- 230000001242 postsynaptic effect Effects 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 210000001510 pseudounipolar neuron Anatomy 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 2
- 210000001044 sensory neuron Anatomy 0.000 description 2
- 229940076279 serotonin Drugs 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000005062 synaptic transmission Effects 0.000 description 2
- 210000003242 unipolar neuron Anatomy 0.000 description 2
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 2
- 230000021542 voluntary musculoskeletal movement Effects 0.000 description 2
- OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N (+/-)-DABA Natural products NCCC(N)C(O)=O OGNSCSPNOLGXSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N (R)-adrenaline Chemical compound CNC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 UCTWMZQNUQWSLP-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 229930182837 (R)-adrenaline Natural products 0.000 description 1
- 101800000263 Acidic protein Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- 108091010877 Allograft inflammatory factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 102100040121 Allograft inflammatory factor 1 Human genes 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 206010002942 Apathy Diseases 0.000 description 1
- 108091032955 Bacterial small RNA Proteins 0.000 description 1
- 208000020925 Bipolar disease Diseases 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010006100 Bradykinesia Diseases 0.000 description 1
- 208000007333 Brain Concussion Diseases 0.000 description 1
- 241000244203 Caenorhabditis elegans Species 0.000 description 1
- 101100451306 Caenorhabditis elegans hnd-1 gene Proteins 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000005701 Calcium-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010045403 Calcium-Binding Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 206010008748 Chorea Diseases 0.000 description 1
- 108010077544 Chromatin Proteins 0.000 description 1
- 108091062157 Cis-regulatory element Proteins 0.000 description 1
- 241001573498 Compacta Species 0.000 description 1
- 206010010144 Completed suicide Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 238000000116 DAPI staining Methods 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 108010008532 Deoxyribonuclease I Proteins 0.000 description 1
- 102000007260 Deoxyribonuclease I Human genes 0.000 description 1
- 101100345696 Drosophila melanogaster Mlp84B gene Proteins 0.000 description 1
- 208000014094 Dystonic disease Diseases 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010017577 Gait disturbance Diseases 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 241000700586 Herpesviridae Species 0.000 description 1
- 102000009331 Homeodomain Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010048671 Homeodomain Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101000785963 Homo sapiens Histone-lysine N-methyltransferase ASH1L Proteins 0.000 description 1
- 101001000998 Homo sapiens Protein phosphatase 1 regulatory subunit 12C Proteins 0.000 description 1
- 101000713575 Homo sapiens Tubulin beta-3 chain Proteins 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 208000006083 Hypokinesia Diseases 0.000 description 1
- -1 ISL1 Proteins 0.000 description 1
- 206010022998 Irritability Diseases 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 108091026898 Leader sequence (mRNA) Proteins 0.000 description 1
- 101100511174 Lilium longiflorum LIM3 gene Proteins 0.000 description 1
- 102000013519 Lipocalin-2 Human genes 0.000 description 1
- 108010051335 Lipocalin-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010026749 Mania Diseases 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- 108010059724 Micrococcal Nuclease Proteins 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 208000016285 Movement disease Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 101001092200 Mus musculus RNA binding protein fox-1 homolog 3 Proteins 0.000 description 1
- 206010052904 Musculoskeletal stiffness Diseases 0.000 description 1
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 102000019040 Nuclear Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010051791 Nuclear Antigens Proteins 0.000 description 1
- 208000021384 Obsessive-Compulsive disease Diseases 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 101710148465 Platelet-derived growth factor receptor alpha Proteins 0.000 description 1
- 101710164680 Platelet-derived growth factor receptor beta Proteins 0.000 description 1
- 241001672814 Porcine teschovirus 1 Species 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010036590 Premature baby Diseases 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 102100035620 Protein phosphatase 1 regulatory subunit 12C Human genes 0.000 description 1
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 1
- 238000003559 RNA-seq method Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 238000010240 RT-PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108700008625 Reporter Genes Proteins 0.000 description 1
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 1
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 1
- 208000013738 Sleep Initiation and Maintenance disease Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- 108050009621 Synapsin Proteins 0.000 description 1
- 102000001435 Synapsin Human genes 0.000 description 1
- 108700026226 TATA Box Proteins 0.000 description 1
- 241000839309 Thesea Species 0.000 description 1
- 108091036066 Three prime untranslated region Proteins 0.000 description 1
- 108020004566 Transfer RNA Proteins 0.000 description 1
- 102100036790 Tubulin beta-3 chain Human genes 0.000 description 1
- 101710158352 Type III intermediate filament Proteins 0.000 description 1
- 108091023045 Untranslated Region Proteins 0.000 description 1
- 108700005077 Viral Genes Proteins 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004598 abnormal eye movement Effects 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002164 acetylcholinergic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 101150024658 aldh1l1 gene Proteins 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000036815 beta tubulin Diseases 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000008933 bodily movement Effects 0.000 description 1
- 230000007177 brain activity Effects 0.000 description 1
- 208000029028 brain injury Diseases 0.000 description 1
- 230000003139 buffering effect Effects 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 1
- 210000005056 cell body Anatomy 0.000 description 1
- 230000023402 cell communication Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 210000001638 cerebellum Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 208000012601 choreatic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000003483 chromatin Anatomy 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004186 co-expression Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004891 communication Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001276 controlling effect Effects 0.000 description 1
- 210000001653 corpus striatum Anatomy 0.000 description 1
- 230000001054 cortical effect Effects 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000001934 delay Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 208000010118 dystonia Diseases 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 210000004242 electrical synapse Anatomy 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 230000013020 embryo development Effects 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 229960005139 epinephrine Drugs 0.000 description 1
- 210000001808 exosome Anatomy 0.000 description 1
- 230000003619 fibrillary effect Effects 0.000 description 1
- 210000001652 frontal lobe Anatomy 0.000 description 1
- 230000005021 gait Effects 0.000 description 1
- 210000000609 ganglia Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 238000011331 genomic analysis Methods 0.000 description 1
- 210000004907 gland Anatomy 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000001114 immunoprecipitation Methods 0.000 description 1
- 230000005032 impulse control Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 206010022437 insomnia Diseases 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 101150110371 lhx3 gene Proteins 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 210000001259 mesencephalon Anatomy 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 210000003078 multipolar neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017311 musculoskeletal movement, spinal reflex action Effects 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 210000004126 nerve fiber Anatomy 0.000 description 1
- 210000005155 neural progenitor cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010091047 neurofilament protein H Proteins 0.000 description 1
- 230000007658 neurological function Effects 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 238000007481 next generation sequencing Methods 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012758 nuclear staining Methods 0.000 description 1
- 231100000862 numbness Toxicity 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 239000006179 pH buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000002888 pairwise sequence alignment Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 230000001144 postural effect Effects 0.000 description 1
- 239000011591 potassium Substances 0.000 description 1
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001414 potassium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002028 premature Effects 0.000 description 1
- 210000005215 presynaptic neuron Anatomy 0.000 description 1
- 210000000063 presynaptic terminal Anatomy 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 101150007867 rbfox2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000003705 ribosome Anatomy 0.000 description 1
- CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N saccharin Chemical compound C1=CC=C2C(=O)NS(=O)(=O)C2=C1 CVHZOJJKTDOEJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000004599 slow eye movement Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 125000006850 spacer group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000012453 sprague-dawley rat model Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000008093 supporting effect Effects 0.000 description 1
- 230000009747 swallowing Effects 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000005042 type III intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- 210000005043 type IV intermediate filament Anatomy 0.000 description 1
- 210000001030 ventral striatum Anatomy 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
- 230000036266 weeks of gestation Effects 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 208000016261 weight loss Diseases 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 238000009736 wetting Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 230000004572 zinc-binding Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
- A61K48/0058—Nucleic acids adapted for tissue specific expression, e.g. having tissue specific promoters as part of a contruct
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0618—Cells of the nervous system
- C12N5/0619—Neurons
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/60—Transcription factors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2506/00—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells
- C12N2506/08—Differentiation of animal cells from one lineage to another; Differentiation of pluripotent cells from cells of the nervous system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14171—Demonstrated in vivo effect
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/008—Vector systems having a special element relevant for transcription cell type or tissue specific enhancer/promoter combination
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/48—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating transport or export of RNA, e.g. RRE, PRE, WPRE, CTE
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2830/00—Vector systems having a special element relevant for transcription
- C12N2830/50—Vector systems having a special element relevant for transcription regulating RNA stability, not being an intron, e.g. poly A signal
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2840/00—Vectors comprising a special translation-regulating system
- C12N2840/20—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron
- C12N2840/203—Vectors comprising a special translation-regulating system translation of more than one cistron having an IRES
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Neurology (AREA)
- Marine Sciences & Fisheries (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本開示は、ＡＡＶベクターにおけるＮｅｕｒｏＤ１のコード配列とＡｓｃｌ１、ＩＳＬ１、又はＬＨＸ３のいずれかのコード配列との使用による、グリア細胞のニューロンへの変換に関連するＡＡＶベクター、組成物、及び方法に関する。【選択図】図１Ａ
Description
関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年９月２９日に出願された米国仮出願第６３／０８４，９７１号及び２０２１年９月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／２４７，４３９号の優先権を主張し、それらのいずれも、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
本出願は、２０２０年９月２９日に出願された米国仮出願第６３／０８４，９７１号及び２０２１年９月２３日に出願された米国仮特許出願第６３／２４７，４３９号の優先権を主張し、それらのいずれも、参照によりそれらの全体が本明細書に援用される。
配列表の援用
３７，０４０バイト（ＭＳ－Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）で測定）であり、２０２１年９月２７日に作成された、Ｐ３４８４０ＷＯ００＿ＳＬ．ＴＸＴという名前のファイルに含まれる配列表は、本明細書と共に電子的に提出され、その全体が参照により援用される。
３７，０４０バイト（ＭＳ－Ｗｉｎｄｏｗｓ（登録商標）で測定）であり、２０２１年９月２７日に作成された、Ｐ３４８４０ＷＯ００＿ＳＬ．ＴＸＴという名前のファイルに含まれる配列表は、本明細書と共に電子的に提出され、その全体が参照により援用される。
本開示は、グリア細胞をニューロンに変換するために、ヒトＮｅｕｒｏＤ１並びに他の中枢神経系及び末梢神経系関連因子をコードする核酸配列を含むＡＡＶベクターを使用する方法及び組成物を含む。
ニューロンは、神経学的状態を有する対象において、又は中枢神経系（ＣＮＳ）若しくは末梢神経系（ＰＮＳ）への傷害後、しばしば死滅するか又は損傷され、再生することができない。
グリア細胞は、脳傷害又は神経学的状態などのＣＮＳ又はＰＮＳへの傷害の後に反応する。
現在、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を使用して、神経学的状態を有するヒト対象において機能的な新しいニューロンを再生するための利用可能な方法はない。
一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を有するＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及び第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のタンパク質のコード配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、治療を必要とする対象の治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２の核酸コード配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に送達することを含み、ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、ベクターが、それを必要とする対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。
一態様では、本開示は、神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を対象に送達することを含み、ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、それを必要とする対象への、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）ヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつこれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を含む組成物を提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及び配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。本開示の一態様では、（ｉｉ）は、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１３を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む。本開示の一態様では、（ｉｉ）は、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１１を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む。
一態様では、本開示は、（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及び配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。一態様では、（ｉｉ）は、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１４を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含む。一態様では、（ｉｉ）は、（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１２を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含む。
配列の簡単な説明
表１に、核酸配列及びアミノ酸配列のリストを提供する。
表１に、核酸配列及びアミノ酸配列のリストを提供する。
別途定義されない限り、使用される全ての技術用語及び科学用語は、本開示が属する技術分野における当業者によって一般に理解されるものと同一の意味を有する。用語が単数形で記載される場合、本発明者らはまた、その用語の複数形によって説明される本開示の態様も企図する。参照によって組み込まれる参考文献で使用される用語及び定義に矛盾がある場合、本願で使用される用語は、本明細書で与えられる定義を有するものとする。使用される他の専門用語は、当該技術分野専門の様々な辞書、例えば、“Ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅｒｉｔａｇｅ（登録商標）Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ”（Ｅｄｉｔｏｒｓ ｏｆ ｔｈｅ Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｈｅｒｉｔａｇｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｉｅｓ，２０１１，Ｈｏｕｇｈｔｏｎ Ｍｉｆｆｌｉｎ Ｈａｒｃｏｕｒｔ，Ｂｏｓｔｏｎ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、“ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ Ｔｅｒｍｓ”（６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００２，ＭｃＧｒａｗ－Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）、又は“Ｏｘｆｏｒｄ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｙ”（６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，２００８，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ ａｎｄ Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）によって例示されているような、それらが使用される技術分野における通常の意味を有する。
例えば、全ての特許、公開された特許出願、及び非特許文献を含む、本明細書で引用される任意の参考文献は、それらの全体が参照により本明細書に援用される。
選択肢の群化が提示される場合、その選択肢の群化を構成するメンバーの任意の組み合わせ及び全ての組み合わせが具体的に想定される。例えば、項目が、Ａ、Ｂ、Ｃ、及びＤからなる群から選択される場合、発明者らは、各代替例を個別に（例えば、Ａ単独、Ｂ単独など）、並びにＡ、Ｂ、及びＤ、Ａ及びＣ、Ｂ及びＣなどの組み合わせを具体的に想定する。「及び／又は」という用語は、２つ以上の項目のリストにおいて使用される場合、それ自体で、又は他の列挙された項目のうちのいずれか１つ以上と組み合わせて、列挙された項目のうちのいずれか１つを意味する。例えば、「Ａ及び／又はＢ」という表現は、Ａ及びＢのいずれか又は両方、すなわち、Ａ単独、Ｂ単独、又はＡ及びＢの組み合わせを意味することを意図している。「Ａ、Ｂ、及び／又はＣ」という表現は、Ａ単独、Ｂ単独、Ｃ単独、Ａ及びＢの組み合わせ、Ａ及びＣの組み合わせ、Ｂ及びＣの組み合わせ、又はＡ、Ｂ、及びＣの組み合わせを意味することを意図している。
数値の範囲が本明細書で提供される場合、範囲は、範囲の縁及び定義された範囲の縁の間の任意の数字を含むと理解される。例えば、「１～１０」は、１～１０の任意の数字、並びに数字１及び数字１０を含む。
数値に関して「約（ａｂｏｕｔ）」という用語が使用される場合、プラス又はマイナス１０％を意味すると理解される。例えば、「約１００」には、９０～１１０が含まれる。
本明細書で使用される場合、「ｈＮＤ１」は、ヒト神経分化（ＮｅｕｒｏＤ１）遺伝子又はタンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、「ＣＥ」は、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターエンハンサー配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ＥＥ」は、Ｅｆ１αプロモーターエンハンサー配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｐＧｆａ６８１」は、６８１ｂｐサイズのヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーター切断型配列を指す。本明細書で使用される場合、「ｐＧｆａ６８１」、「Ｇｆａ６８１」、「ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ」、及び「ＧｆａＡＢＣ１Ｄ」は、同義的に使用される。
本明細書で使用される場合、「ＣＩ」は、ヒトβグロビン遺伝子の第１イントロンからの５’ドナー部位と免疫グロブリン遺伝子重鎖可変領域のイントロンからの分岐及び３’アクセプター部位とからなるキメライントロンを指す。
本明細書で使用される場合、「ＣＲＧＩ」は、ＣＡＧプロモーターにおけるものと同様のウサギβグロビン（ｇｌｏｂｉｎｇ）及びニワトリβアクチンのキメライントロンを指す。
本明細書で使用される場合、「ＧＩ」は、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）第１イントロンを指す。
本明細書で使用される場合、「ＷＰＲＥ」は、ウッドチャック肝炎ウイルス（ＷＨＶ）転写後調節因子を指す。
本明細書で使用される場合、「ｏＰＲＥ」は、ＷＰＲＥの最適化バージョンを指す。
本明細書で使用される場合、「ＳＶ４０ｐＡ」は、ＳＶ４０ウイルスのポリＡシグナルを指す。
本明細書で使用される場合、「ｂＧＨｐＡ」は、ウシ成長ホルモンのポリＡシグナルを指す。
本明細書で使用される場合、「ＳｐＡ」は、合成ポリＡシグナルを表す。
本明細書で使用される場合、「ｖｇ」は、ウイルスゲノムを指す。
本明細書で使用される場合、「ｈｌｓ１」は、ヒトインスリン遺伝子エンハンサータンパク質ＩＳＬ－１を指す。
本明細書で使用される場合、「ｈＡｓｃ１」は、ヒトＡｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅホモログ１を指す。
本明細書に提供される任意の組成物又はベクターは、本明細書に提供される任意の方法で使用するために具体的に想定される。
一態様では、本明細書に提供される方法及び組成物は、ベクターを含む。本明細書で使用される場合、「ベクター」という用語は、染色体ＤＮＡから物理的に分離された環状の二本鎖ＤＮＡ分子を指す。「ベクター」という用語は、「プラスミド」という用語と互換的に使用され得ることに留意されたい。
一態様では、本明細書に提供されるベクターは、組換えベクターである。本明細書で使用される場合、「組換えベクター」という用語は、組換え核酸を含むベクターを指す。本明細書で使用される場合、「組換え核酸」は、限定されないが、分子クローニングなどの遺伝子組換えの実験室法によって形成される核酸分子を指す。組換えベクターは、限定されないが、分子クローニングなどの遺伝子組換えの実験室法によって形成され得る。また、限定されないが、当業者は、個々のヌクレオチドによってプラスミドを合成することによって、又は異なる既存のベクターからの核酸分子を一緒にスプライシングすることによって、組換えベクターを新規に作製することができる。
アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）は、ヒト及び追加の霊長類種に感染する複製欠陥非エンベロープ型ディペンドパルボウイルスである。ＡＡＶは、いかなる種においても疾患を引き起こすことは知られていないが、軽度の免疫応答を引き起こす可能性がある。ＡＡＶは、***細胞及び静止細胞に感染することができる。ＡＡＶは、ＡＡＶＳ１遺伝子座（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＡＣ０１０３２７．８のヌクレオチド７７７４～１１４２９）と呼ばれる染色体１９の特定の部位でヒトゲノムに安定して組み込まれるが、ヒトゲノムの他の遺伝子座でのランダムな組み込みも可能である。
ＡＡＶは、約４７００ヌクレオチド長の一本鎖ＤＮＡを有する直鎖ゲノムを含む。ＡＡＶのゲノムはまた、ゲノムの各末端に１４５ヌクレオチド長の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む。ＩＴＲは、２つのウイルス遺伝子であるｒｅｐ（複製のために非構造タンパク質をコードする）及びｃａｐ（カプシドのために構造タンパク質をコードする）に隣接する。ＩＴＲには、ＡＡＶのゲノムレスキュー、複製、及びパッケージングに必要な全てのシス作用エレメントが含まれている。
遺伝子療法アプローチで使用される場合、ＡＡＶゲノム配列のｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子は除去され、２つのＡＡＶ ＩＴＲの間に配置される目的のＤＮＡで置き換えられる。本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター構築物」は、２つのＡＡＶ ＩＴＲ配列間に挿入される所望の配列を含むＤＮＡ分子を指す。本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター」は、ＤＮＡベクター構築物と共にパッケージングされたＡＡＶを指す。
本明細書で使用される場合、「ＡＡＶベクター血清型」という用語は、主に、ＡＡＶベクターのカプシドタンパク質内のバリエーションを指す。
一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶベクター血清型１、ＡＡＶベクター血清型２、ＡＡＶベクター血清型３、ＡＡＶベクター血清型４、ＡＡＶベクター血清型５、ＡＡＶベクター血清型６、ＡＡＶベクター血清型７、ＡＡＶベクター血清型８、ＡＡＶベクター血清型９、ＡＡＶベクター血清型１０、ＡＡＶベクター血清型１１、及びＡＡＶベクター血清型１２からなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型２である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型３である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型４である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型５である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型６である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型７である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型８である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型９である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１０である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１１である。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶ血清型１２である。
一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型２のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型３のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型４のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型５のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型６のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型７のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型８のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型９のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型１０のＩＴＲ、ＡＡＶ血清型１１のＩＴＲ、及びＡＡＶ血清型１２のＩＴＲからなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型２のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型３のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型４のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型５のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型６のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型７のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型８のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型９のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１０のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１１のＩＴＲである。一態様では、ＡＡＶベクターのＩＴＲは、ＡＡＶ血清型１２のＩＴＲである。
一態様では、少なくとも１つのＡＡＶベクターのＩＴＲの核酸配列は、配列番号１及び９からなる群から選択される。一態様では、少なくとも１つのＡＡＶベクターのＩＴＲの核酸配列は、配列番号１である。一態様では、少なくとも９つのＡＡＶベクターのＩＴＲの核酸配列は、配列番号１である。
一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号１又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＡＡＶ ＩＴＲの核酸配列は、配列番号９又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
２つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸配列に関して本明細書で使用される「パーセント同一性」又は「パーセント同一」という用語は、（ｉ）比較のウィンドウ（「整列可能な」領域）にわたって２つの最適に整列された配列（ヌクレオチド又はアミノ酸）を比較し、（ｉｉ）両方の配列で同一の核酸塩基（ヌクレオチド配列の場合）又はアミノ酸残基（タンパク質及びポリペプチドの場合）が生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を得、（ｉｉｉ）一致した位置の数を比較ウィンドウの位置の総数で割り、次いで、（ｉｖ）この商に１００％を掛けて、パーセント同一性を得ることによって計算される。「パーセント同一性」が特定の比較ウィンドウを指定せずに参照配列に関連して計算されている場合、パーセント同一性は、整列領域にわたる一致した位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。したがって、本出願の目的のために、２つの配列（クエリ及び対象）が最適に整列されている場合（それらの整列のギャップを考慮して）、クエリ配列の「パーセント同一性」は、２つの配列間の同一の位置の数をその長さ（又は比較ウィンドウ）にわたってクエリ配列の位置の総数で割って、それに１００％を掛けたものと等しい。
配列同一性のパーセンテージがアミノ酸に関して使用される場合、同一ではない残基位置は、保存的アミノ酸置換（アミノ酸残基が、同様の化学的特性（例えば、電荷又は疎水性）を有し、したがって、分子の機能的特性を変化させない他のアミノ酸残基で置換されている）によってしばしば異なることが認識される。配列が保存的置換で異なる場合、パーセント配列同一性を、置換の保存的性質について補正するために上向きに調整することができる。そのような保存的置換によって異なる配列は、「配列類似性」又は「類似性」を有すると言われる。
パーセント同一性を計算するための配列の最適な整列のために、２つ以上のヌクレオチド又はアミノ酸配列間の配列同一性又は類似性を比較するために使用することができるＣｌｕｓｔａｌＷ又はＢａｓｉｃ Ｌｏｃａｌ Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ Ｓｅａｒｃｈ Ｔｏｏｌ（登録商標）（ＢＬＡＳＴ（商標））などの様々なペアワイズ又は多重配列整列アルゴリズム及びプログラムが当該技術分野で既知である。他の整列及び比較方法が、当該技術分野で既知であるが、２つの配列間の整列及びパーセント同一性（上記のパーセント同一性の範囲を含む）は、ＣｌｕｓｔａｌＷアルゴリズムによって決定され得る。例えば、Ｃｈｅｎｎａ ｅｔ ａｌ．，“Ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｃｌｕｓｔａｌ ｓｅｒｉｅｓ ｏｆ ｐｒｏｇｒａｍｓ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ３１：３４９７－３５００（２００３）、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ：Ｉｍｐｒｏｖｉｎｇ ｔｈｅ ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｗｅｉｇｈｔｉｎｇ，ｐｏｓｉｔｉｏｎ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｇａｐ ｐｅｎａｌｔｉｅｓ ａｎｄ ｗｅｉｇｈｔ ｍａｔｒｉｘ ｃｈｏｉｃｅ，”Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２２：４６７３－４６８０（１９９４）、Ｌａｒｋｉｎ ＭＡ ｅｔ ａｌ．，“Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ ａｎｄ Ｃｌｕｓｔａｌ Ｘ ｖｅｒｓｉｏｎ ２．０，”Ｂｉｏｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ２３：２９４７－４８（２００７）、及びＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．“Ｂａｓｉｃ ｌｏｃａｌ ａｌｉｇｎｍｅｎｔ ｓｅａｒｃｈ ｔｏｏｌ．”Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－４１０（１９９０）を参照されたい（それらの内容及び開示全体は、参照により本明細書に援用される）。
２つのヌクレオチド配列に関して本明細書で使用される「パーセント相補性」又は「パーセント相補」という用語は、パーセント同一性の概念に類似しているが、クエリ及び対象配列が直線的に配置され、ループ、ステム、又はヘアピンなどの二次フォールディング構造なしで最適に塩基対形成された場合、対象配列をヌクレオチドに最適に塩基対形成又はハイブリダイズするクエリ配列のヌクレオチドのパーセントを指す。かかるパーセント相補性は、２つのＤＮＡ鎖、２つのＲＮＡ鎖、又はＤＮＡ鎖とＲＮＡ鎖との間であり得る。「パーセント相補性」は、（ｉ）比較のウィンドウにわたって直線的にかつ完全に伸長した配置で２つのヌクレオチド配列を最適に塩基対形成又はハイブリダイズさせ（すなわち、フォールディング又は二次構造なしで）、（ｉｉ）比較のウィンドウにわたって２つの配列間の塩基対の位置の数を決定して、相補的な位置の数を得、（ｉｉｉ）相補的な位置の数を比較ウィンドウの位置の総数で割り、（ｉｖ）この商に１００％を掛けて、２つの配列のパーセント相補性を得ることによって計算することができる。２つの配列の最適な塩基対形成は、水素結合を介して、Ｇ－Ｃ、Ａ－Ｔ、及びＡ－Ｕなどのヌクレオチド塩基の既知の対形成に基づいて決定することができる。「パーセント相補性」が、特定の比較ウィンドウを指定せずに参照配列に関連して計算される場合、パーセント同一性は、２つの直線的な配列間の相補的な位置の数を参照配列の全長で割ることによって決定される。したがって、本出願の目的のために、２つの配列（クエリ及び対象）が最適に塩基形成された場合（ミスマッチ又は非塩基対形成ヌクレオチドを許容する場合）、クエリ配列の「パーセント相補性」は、２つの配列間の塩基対形成の位置の数をその長さにわたるクエリ配列の位置の総数で割って、これに１００％を掛けたものと等しくなる。
「ポリヌクレオチド」、「核酸配列」、又は「核酸分子」という用語の使用は、本開示を、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）を含むポリヌクレオチドに限定することを意図するものではない。例えば、リボ核酸（ＲＮＡ）分子も想定される。当業者であれば、ポリヌクレオチド及び核酸分子が、リボヌクレオチド並びにリボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドの組み合わせを含むことができることを認識するであろう。かかるデオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドは、天然に存在する分子及び合成類似体の両方を含む。本開示のポリヌクレオチドはまた、一本鎖形態、二本鎖形態、ヘアピン、ステム及びループ構造などを含むが、これらに限定されない配列の全ての形態を包含する。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、ＤＮＡ分子である。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、ＲＮＡ分子である。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、一本鎖である。一態様では、本明細書に提供される核酸分子は、二本鎖である。核酸分子は、ポリペプチド又は低分子ＲＮＡをコードすることができる。
本明細書で使用される場合、「ポリペプチド」という用語は、少なくとも２つの共有結合したアミノ酸の鎖を指す。ポリペプチドは、本明細書に提供されるポリヌクレオチドによってコードされ得る。本明細書に提供されるタンパク質は、本明細書に提供される核酸分子によってコードされ得る。タンパク質は、本明細書に提供されるポリペプチドを含むことができる。本明細書で使用される場合、「タンパク質」は、細胞に構造又は酵素活性を提供することができるアミノ酸残基の鎖を指す。本明細書で使用される場合、「コード配列」は、タンパク質をコードする核酸配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ＣｐＧ部位」又は「ＣＧ部位」という用語は、シトシン及びグアニンが１つのリン酸基によってのみ分離されているＤＮＡ配列の領域を指す。
本明細書で使用される場合、「ＣＧ島」の「ＣｐＧ島」という用語は、高頻度で発生するＣｐＧ部位を指す。
本明細書で使用される場合、「コドン」という用語は、３つのヌクレオチドの配列を指す。
本明細書で使用される場合、「コドン最適化」という用語は、元のアミノ酸配列を維持しながら、配列の少なくとも１つのコドンを、宿主細胞の遺伝子においてより頻繁に又は最も頻繁に使用されるコドンで置き換えることによって、目的の宿主細胞における発現の増強のために改変されるコードを指す。
本明細書で使用される場合、「エンハンサー」という用語は、少なくとも特定の組織、発生段階、及び／又は状態において、関連する転写可能なＤＮＡ配列又はコード配列の転写及び発現を開始、支援、影響、起因、及び／又は促進するように作動するＤＮＡ配列の領域を指す。一態様では、エンハンサーは、シスエンハンサーである。一態様では、エンハンサーは、トランスエンハンサーである。
エンハンサー配列は、当該技術分野で既知のゲノム技術を利用することによって同定することができる。非限定的な例としては、レポーター遺伝子及び次世代配列決定方法、例えば、クロマチン免疫沈降配列決定（ＣｈＩＰ－ｓｅｑ）、ＤＮａｓｅＩ過感受性配列決定（ＤＮａｓｅ－ｓｅｑ）、小球菌ヌクレアーゼ配列決定（ＭＮａｓｅ－ｓｅｑ）、調節エレメントのホルムアルデヒド支援単離配列決定（ＦＡＩＲＥ－ｓｅｑ）、及びトランスポザーゼアクセス可能クロマチン配列決定のためのアッセイ（ＡＴＡＣ－ｓｅｑ）の使用が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「作動可能に連結された」という用語は、プロモーター又は他の調節エレメントと、関連する転写可能なＤＮＡ配列又は遺伝子（又は導入遺伝子）のコード配列との間の機能的連結を指し、そのため、プロモーターなどが、少なくとも特定の組織、発生段階、及び／又は状態において、関連する転写可能なＤＮＡ配列又はコード配列の転写及び発現を開始、支援、影響、起因、及び／又は促進するように作動する。本明細書で使用される場合、「調節エレメント」は、作動可能に連結された配列の発現を正又は負に調節する任意の配列エレメントを指す。「調節エレメント」には、細胞において遺伝子又は転写可能なＤＮＡ配列の発現を調節又は可能にするのに好適、必要、又は好ましい、プロモーター、エンハンサー、リーダー、転写開始部位（ＴＳＳ）、リンカー、５’及び３’非翻訳領域（ＵＴＲ）、イントロン、ポリアデニル化シグナル、及び終止領域又は配列などが含まれるが、これらに限定されない。このような追加の調節エレメントは任意選択的であり、遺伝子又は転写可能なＤＮＡ配列の発現を増強又は最適化するために使用することができる。
本明細書で使用される場合、「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位、転写開始部位、及び／又はＴＡＴＡボックスを含み、かつ会合した転写可能なポリヌクレオチド配列及び／又は遺伝子（又は導入遺伝子）の転写及び発現を支援又は促進するＤＮＡ配列を指す。プロモーターは、既知の又は天然に存在するプロモーター配列若しくは他のプロモーター配列から、合成的に産生、変化、又は誘導され得る。プロモーターは、２つ以上の異種配列の組み合わせを含むキメラプロモーターも含むことができる。したがって、本出願のプロモーターは、プロモーター配列のバリアントを含むことができ、それらは、既知の又は本明細書に提供される他のプロモーター配列と組成が類似しているが、同一ではない。
本明細書で使用される場合、「イントロン」は、ｍＲＮＡ前駆体からメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）が成熟するとＲＮＡスプライシングによって除去される、ヌクレオチド配列を指す。
本明細書で使用される場合、「ｍＲＮＡ」又は「メッセンジャーＲＮＡ」は、遺伝子の遺伝子配列に対応する一本鎖ＲＮＡを指す。
ｍＲＮＡの発現は、当該技術分野で既知の任意の好適な方法を使用して測定され得る。ｍＲＮＡ発現を測定する非限定的な例としては、定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ－ＰＣＲ）、ＲＮＡブロット（例えば、ノーザンブロット）、及びＲＮＡ配列決定が挙げられる。発現の違いは、絶対定量化又は相対定量化として説明され得る。例えば、Ｌｉｖａｋ ａｎｄ Ｓｃｈｍｉｔｔｇｅｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ，２５：４０２－４０８（２００１）を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「グリア」又は「グリア細胞」という用語は、ＣＮＳ又はＰＮＳ内の非神経細胞を指す。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのオリゴデンドロサイト、少なくとも１つのアストロサイト、少なくとも１つのＮＧ２細胞、少なくとも１つの上衣細胞、及び少なくとも１つのミクログリアからなる群から選択される。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのオリゴデンドロサイトである。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのＮＧ２細胞である。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つの上衣細胞である。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つのミクログリアである。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞は、少なくとも１つの反応性アストロサイトである。一態様では、少なくとも１つのアストロサイトは、少なくとも１つの反応性アストロサイトである。
本明細書で使用される場合、「アストロサイト」という用語は、脳の重要な構成要素であるグリア細胞を指す。アストロサイトは、シナプス形成及び可塑性、カリウム緩衝、栄養供給、神経又はグリア伝達物質の分泌及び吸収、並びに血液脳関門の維持などの神経機能のサポートに関与する。本明細書で使用される場合、「反応性アストロサイト」という用語は、傷害又は疾患後のアストロサイトの異常な状態を指す。
本明細書で使用される場合、「ＮＧ２細胞」又は「ポリデンドロサイト」という用語は、コンドロイチン硫酸プロテオグリカン（ＣＳＰＧ４）及び血小板由来増殖因子のα受容体（ＰＤＧＦＲＡ）を発現するグリア細胞を指す。
本明細書で使用される場合、「ニューロン」又は「神経細胞」という用語は、シナプスを介して他のニューロンと通信する電気的に励起の細胞を指す。一態様では、ニューロンは、単極ニューロン、双極ニューロン、擬単極ニューロン、及び多極ニューロンからなる群から選択される。一態様では、ニューロンは、単極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、双極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、擬単極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、双極ニューロンである。一態様では、ニューロンは、感覚ニューロン、運動ニューロン、及び介在ニューロンからなる群から選択される。一態様では、ニューロンは、感覚ニューロンである。一態様では、ニューロンは、運動ニューロンである。一態様では、ニューロンは、介在ニューロンである。
本明細書で使用される場合、「機能的なニューロン」という用語は、生物学的プロセスを実行することができるニューロンを指す。限定されないが、生物学的プロセスの例としては、化学シナプス及び電気シナプスを介した情報及び通信の処理及び伝達が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「グルタミン酸作動性ニューロン」という用語は、グルタミン酸を産生し、興奮性シナプスを確立するニューロンのサブクラスを指す。本明細書で使用される場合、「興奮性シナプス」という用語は、シナプス前ニューロンにおける活動電位が、シナプス後細胞で発生する活動電位の確率を増加させるシナプスを指す。本明細書で使用される場合、「活動電位」又は「神経インパルス」という用語は、軸索の膜を横切る電気インパルスを指す。本明細書で使用される場合、「軸索」又は「神経線維」という用語は、活動電位を伝導するニューロンを指す。本明細書で使用される場合、「ＧＡＢＡ作動性ニューロン」という用語は、ＧＡＢＡを産生し、抑制性シナプスを確立するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「ＧＡＢＡ」又は「γアミノ酪酸」という用語は、イオンチャネルを開いて、負に帯電した塩化物イオンを細胞に流入させるか、又は正に帯電したカリウムイオンを細胞から流出させることを可能にする化合物を指す。本明細書で使用される場合、「抑制性シナプス」という用語は、シナプス後ニューロンの膜電位を、活動電位を生成するための閾値から遠ざけるシナプスを指す。本明細書で使用される場合、「ドーパミン作動性ニューロン」という用語は、ドーパミンを産生するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「ドーパミン」という用語は、神経伝達物質を指す。本明細書で使用される場合、「神経伝達物質」という用語は、神経伝達を活性化する内因性化学物質を指す。本明細書で使用される場合、「神経伝達」という用語は、ニューロンの軸索末端によって神経伝達物質が放出されるプロセスを指す。本明細書で使用される場合、「アセチルコリン作動性ニューロン」又は「コリン作動性ニューロン」という用語は、アセチルコリンを分泌するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「アセチルコリン」という用語は、神経伝達物質を指す。本明細書で使用される場合、「セロトニン作動性（ｓｅｒａｔｏｎｅｒｇｉｃ）ニューロン」という用語は、セロトニンを合成するニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、「セロトニン」という用語は、神経伝達物質を指す。本明細書で使用される場合、「エピネフリン作動性（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅｒｇｉｃ）ニューロン」は、神経伝達物質としてエピネフリンを放出するニューロンを指す。本明細書で使用される場合、「運動ニューロン」という用語は、細胞体が運動皮質、脳幹、又は脊髄に位置し、軸索が脊髄又は脊髄の外側に投射し、筋肉及び腺を直接的又は間接的に制御する、ニューロンのサブセットを指す。本明細書で使用される場合、ペプチド作動性ニューロンという用語は、小さなペプチド分子を神経伝達物質として利用するニューロンのサブセットを指す。
一態様では、ニューロンは、機能的なニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される。一態様では、機能的なニューロンは、グルタミン酸作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、ＧＡＢＡ作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、ドーパミン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、コリン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、セロトニン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、エピネフリン作動性ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、運動ニューロンである。一態様では、機能的なニューロンは、ペプチド作動性ニューロンである。
本明細書で使用される場合、「変換」又は「変換された」という用語は、その物理的形態及び／又は生物学的機能を異なる物理的形態及び／又は異なる生物学的機能に変化させる細胞型を指す。一態様では、本開示は、少なくとも１つのグリア細胞を少なくとも１つのニューロンに変換することを提供する。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞の少なくとも１つのニューロンへの変換は、ＣＮＳ又はＰＮＳにおいて生じる。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞の少なくとも１つのニューロンへの変換は、ＣＮＳにおいて生じる。一態様では、少なくとも１つのグリア細胞の少なくとも１つのニューロンへの変換は、ＰＮＳにおいて生じる。
一態様では、本開示は、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列、並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を有するＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及び第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを提供し、かつそれを含み、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のタンパク質のコード配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２のコード配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、治療を必要とする対象の治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物を提供し、かつそれを含み、ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、ＡＡＶベクターは、ＡＡＶタンパク質をコードする核酸配列を含む。一態様では、ＡＡＶベクターは、ウイルスタンパク質をコードする核酸配列を含む。ＡＡＶタンパク質及びウイルスタンパク質の非限定的な例としては、ｒｅｐ及びｃａｐタンパク質が挙げられる。
神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１；β２とも称される）は、他のｂＨＬＨタンパク質とヘテロ二量体を形成して、Ｅボックスとして知られているＤＮＡ配列を含む遺伝子の転写を活性化する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（ｂＨＬＨ）転写因子である。
一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１配列、ボノボＮｅｕｒｏＤ１配列、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１配列、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１配列、マカクＮｅｕｒｏＤ１配列、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１配列、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１配列、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１配列、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１配列、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１配列からなる群から選択される。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ボノボＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、マカクＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１配列である。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１配列は、キツネザルＮｅｕｒｏＤ１配列である。
一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＮｅｕｒｏＤ１核酸配列は、配列番号６又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸配列は、配列番号１０と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＮｅｕｒｏＤ１タンパク質をコードする。
Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１、ＡＳＨ１、ＨＡＳＨ１、ＭＡＳＨ－１、及びｂＨＬＨａ４６とも称される）は、転写因子の塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックスファミリーのメンバーをコードし、神経コミットメント及び分化に役割を果たす遺伝子である。
一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、チンパンジーＡｓｃｌ１配列、ボノボＡｓｃｌ１配列、オランウータンＡｓｃｌ１配列、ゴリラＡｓｃｌ１配列、マカクＡｓｃｌ１配列、マーモセットＡｓｃｌ１配列、オマキザルＡｓｃｌ１配列、ヒヒＡｓｃｌ１配列、テナガザルＡｓｃｌ１配列、及びキツネザルＡｓｃｌ１配列からなる群から選択される。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、チンパンジーＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、ボノボＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、オランウータンＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、ゴリラＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、マカクＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、マーモセットＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、オマキザルＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、ヒヒＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、テナガザルＡｓｃｌ１配列である。一態様では、Ａｓｃｌ１配列は、キツネザルＡｓｃｌ１配列である。
一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９１１％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ａｓｃｌ１核酸配列は、配列番号１１又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１２と１２０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＡｓｃｌ１タンパク質をコードする。
インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１；ＩＳＬ ＬＩＭホメオボックス－１及びＩＳＬＥＴ１としても知られている）は、２つのＮ末端ＬＩＭドメイン及び１つのＣ末端ホメオドメインを含む転写因子をコードする遺伝子である。コードされたタンパク質は、膵臓ランゲルハンス島の胚発生に役割を果たす。
一態様では、ＩＳＬ１配列は、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、チンパンジーＩＳＬ１配列、ボノボＩＳＬ１配列、オランウータンＩＳＬ１配列、ゴリラＩＳＬ１配列、マカクＩＳＬ１配列、マーモセットＩＳＬ１配列、オマキザルＩＳＬ１配列、ヒヒＩＳＬ１配列、テナガザルＩＳＬ１配列、及びキツネザルＩＳＬ１配列からなる群から選択される。一態様では、ＩＳＬ１配列は、チンパンジーＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、ボノボＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、オランウータンＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、ゴリラＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、マカクＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、マーモセットＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、オマキザルＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、ヒヒＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、テナガザルＩＳＬ１配列である。一態様では、ＩＳＬ１配列は、キツネザルＩＳＬ１配列である。
一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９１３％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＩＳＬ１核酸配列は、配列番号１３又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１４と１４０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＩＳＬ１タンパク質をコードする。
ＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ３；ＬＩＭ３及びＣＰＨＤ３としても知られている）遺伝子は、独自のシステインリッチ亜鉛結合ドメイン（ＬＩＭドメイン）を有するタンパク質のファミリーからのタンパク質をコードする。
一態様では、ＬＨＸ３配列は、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、チンパンジーＬＨＸ３配列、ボノボＬＨＸ３配列、オランウータンＬＨＸ３配列、ゴリラＬＨＸ３配列、マカクＬＨＸ３配列、マーモセットＬＨＸ３配列、オマキザルＬＨＸ３配列、ヒヒＬＨＸ３配列、テナガザルＬＨＸ３配列、及びキツネザルＬＨＸ３配列からなる群から選択される。一態様では、ＬＨＸ３配列は、チンパンジーＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、ボノボＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、オランウータンＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、ゴリラＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、マカクＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、マーモセットＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、オマキザルＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、ヒヒＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、テナガザルＬＨＸ３配列である。一態様では、ＬＨＸ３配列は、キツネザルＬＨＸ３配列である。
一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＬＨＸ３核酸配列は、配列番号１５又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号１６と１００％同一のアミノ酸配列を含むＬＨＸ３タンパク質をコードする。
一態様では、ＡＡＶベクターは、第２のタンパク質配列を含み、第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１、ＩＳＬ１、及びＬＨＸ３からなる群から選択される。一態様では、ＡＡＶベクターは、第２のタンパク質のコード配列を含み、第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である。一態様では、ＡＡＶベクターは、第２のタンパク質のコード配列を含み、第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である。一態様では、ＡＡＶは、第２のタンパク質のコード配列を含み、第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターは、機能性について、ＮｅｕＮ、ダブルコルチン（ＤＣＸ）、β３チューブリン、（ニューロフィラメント２００）ＮＦ－２００、（微小管関連タンパク質２）ＭＡＰ２、イオン化カルシウム結合アダプター分子（Ｉｂａ１）の転写レベル及びタンパク質レベルを評価することによって測定される。
本明細書で使用される場合、「ＮｅｕＮ」又は「Ｆｏｘ－３」又は「Ｒｂｆｏｘ２」又は「ヘキサリボヌクレオチド結合タンパク質－３」という用語は、Ｃａｅｎｏｒｈａｂｄｉｔｉｓ ｅｌｅｇａｎｓにおける性決定遺伝子のタンパク質産物のホモログであり、ニューロン核抗原であるタンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、「ＤＣＸ」又は「ダブリング」又は「リッセンセファリン－Ｘ」という用語は、胚及び成体の皮質構造の神経前駆細胞及び未熟ニューロンによって発現される微小管関連タンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、「β３－チューブリン」又は「クラスＩＩＩβ－チューブリン」又は「β－チューブリンＩＩＩ」という用語は、ニューロンに見られるチューブリンファミリーの微小管要素を指す。
本明細書で使用される場合、「ＮＦ－２００」という用語は、ニューロンの細胞質に見出されるＩＶ型中間径フィラメントであるタンパク質のクラスを指す。
本明細書で使用される場合、「ＭＡＰ２」という用語は、微小管関連タンパク質ファミリーに属し、ニューロン発生中にニューロン形態を決定及び安定化する役割を果たすタンパク質を指す。
本明細書で使用される場合、「Ｉｂａ１」という用語は、ミクログリアマクロファージ特異的カルシウム結合タンパク質を指す。
一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列、Ａｌｓ１コード配列を含む。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列を含む。一態様では、ＡＡＶは、Ａｌｓ１コード配列を含む。
一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列、ＩＳＬ１コード配列を含む。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列を含む。一態様では、ＡＡＶは、ＩＳＬ１コード配列を含む。
一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列、ＬＨＸ３コード配列を含む。一態様では、ＡＡＶベクターは、ＮｅｕｒｏＤ１コード配列を含む。一態様では、ＡＡＶは、ＬＨＸ３コード配列を含む。
本明細書で使用される場合、「リンカー」又は「スペーサー」は、複数のタンパク質ドメイン及びコードドメインを分離する短い配列である。リンカーは、切断可能又は切断不可能であり、単一ベクターにおける多重遺伝子の共発現を促進することができる。
本明細書で使用される場合、「２Ａ自己切断ペプチド」又は「２Ａペプチド」は、細胞において組換えタンパク質の切断を誘導することができるリンカーのクラスである。
本明細書で使用される場合、「Ｐ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーであるブタテッショウウイルス－１（Ｐ２Ａ）リンカーを指す。
本明細書で使用される場合、「ＩＲＥＳ」は、脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）の内部リボソーム進入部位を指す。
一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１９の核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａリンカーは、配列番号１９の核酸配列を有する。一態様では、Ｐ２Ａタンパク質は、配列番号２４の核酸コード配列を有する。
本明細書で使用される場合、「Ｔ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーである、ｔｈｏｓｅａ ａｓｉｇｎａウイルス２Ａ（Ｔ２Ａ）リンカーを指す。
一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を有する。一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号２０の核酸配列を有する。一態様では、Ｔ２Ａリンカーは、配列番号２３の核酸配列を有する。一態様では、Ｔ２Ａタンパク質は、配列番号２５の核酸コード配列を有する。
本明細書で使用される場合、「Ｅ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーであるウマ鼻炎Ａウイルス（Ｅ２Ａ）リンカーを指す。
本明細書で使用される場合、「Ｆ２Ａリンカー」は、２Ａ自己切断ペプチドのメンバーである***(foot and mouse)ウイルス（Ｆ２Ａ）リンカーを指す。
一態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカー、Ｔ２Ａリンカー、Ｅ２Ａリンカー、及びＦ２Ａリンカーからなる群から選択される。一態様では、リンカーは、Ｐ２Ａリンカーである。一態様では、リンカーは、Ｔ２Ａリンカーである。一態様では、リンカーは、Ｅ２Ａリンカーである。一態様では、リンカーは、Ｆ２Ａリンカーである。
一態様では、リンカー配列は、Ｐ２Ａリンカーである。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９１５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号１９又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、リンカー配列は、Ｐ２Ａリンカーである。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９１５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｐ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２２又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２４と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＰ２Ａタンパク質をコードする。
一態様では、リンカー配列は、Ｔ２Ａリンカーを含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９１７％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２０又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、リンカー配列は、Ｔ２Ａリンカーを含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９１７％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、Ｔ２Ａリンカー核酸配列は、配列番号２３又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも７０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも７５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも８５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９０％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９１％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９２％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９３％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９４％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９６％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９７％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９９．５％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９９．８％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と少なくとも９９．９％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。一態様では、核酸コード配列は、配列番号２５と１００％同一又は類似のアミノ酸配列を含むＴ２Ａタンパク質をコードする。
一態様では、本開示のＡＡＶ又はベクターは、脳心筋炎ウイルス（ＩＲＥＳ）配列の内部リボソーム進入部位を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＩＲＥＳ配列は、配列番号３又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）（グリア線維性酸性タンパク質とも称される）は、タンパク質のＩＩＩ型中間径フィラメントファミリーのメンバーであり、中枢神経系で発現され、細胞コミュニケーション及び血液脳関門の機能において役割を果たす。
一態様では、プロモーターは、ＧＦＡＰプロモーター、Ｓｏｘ９プロモーター、Ｓ１００ｂプロモーター、Ａｌｄｈ１ｌ１プロモーター、リポカリン２（Ｌｃｎ２）プロモーター、グルタミンシンテターゼプロモーター、アクアポリン－４（ＡＱＰ４）プロモーター、オリゴデンドロサイト転写因子（Ｏｌｉｇ２）プロモーター、及びシナプシンプロモーター、ＮＧ２プロモーター、イオン化カルシウム結合アダプター分子１（Ｉｂａ１）プロモーター、表面抗原分類８６（ＣＤ８６）プロモーター、血小板由来増殖因子受容体α（ＰＤＧＦＲＡ）プロモーター、血小板由来増殖因子受容体β（ＰＤＧＦＲＢ）プロモーター、伸長因子１－α（ＥＦ１ａ）プロモーター、ＣＡＧプロモーター、サイゴメウイル（ＣＭＶ）プロモーター、ユビキチンプロモーターからなる群から選択される。一態様では、プロモーターは、ＧＦＡＰプロモーターである。一態様では、プロモーターは、切断型ＧＦＡＰプロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｓｏｘ９プロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｓ１００ｂプロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ａｌｄｈ１ｌ１プロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｌｃｎ２プロモーターである。一態様では、プロモーターは、グルタミンシンテターゼプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＡＱＰ４プロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｏｌｉｇ２プロモーターである。一態様では、プロモーターは、シナプシンプロモーターである。一態様では、プロモーターは、Ｉｂａ１プロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＣＤ８６プロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＰＤＧＦＲＡプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＰＤＧＦＲＢプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＥＦ１ａプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＣＡＧプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ＣＭＶプロモーターである。一態様では、プロモーターは、ユビキチンプロモーターである。
一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、細胞におけるグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）と呼ばれるタンパク質のアストロサイト特異的発現を指示するプロモーターである。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、ＧｆａＡＢＣ１Ｄ（「ｐＧｆａ６８１」とも呼ばれる）、Ｇｆａ１．６、及びｈＧＦＡ２．２からなる群から選択される。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、ＧｆａＡＢＣ１Ｄ（「ｐＧｆａ６８１」とも呼ばれる）である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、Ｇｆａ１．６である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、ｈＧＦＡ２．２である。一態様では、ｐＧｆａ６８１は、配列番号２７である。一態様では、ＧＦＡＰ Ｇｆａ１．６は、配列番号４である。一態様では、ｈＧＦａ２．２は、配列番号１８である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号４である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号１８である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、配列番号２７である。
一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター配列、ボノボＧＦＡＰプロモーター配列、オランウータンＧＦＡＰプロモーター配列、ゴリラＧＦＡＰプロモーター配列、マカクＧＦＡＰプロモーター配列、マーモセットＧＦＡＰプロモーター配列、オマキザルＧＦＡＰプロモーター配列、ヒヒＧＦＡＰプロモーター配列、テナガザルＧＦＡＰプロモーター配列、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーター配列からなる群から選択される。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ボノボＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、オランウータンＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ゴリラＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、マカクＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、マーモセットＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、オマキザルＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、ヒヒＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、テナガザルＧＦＡＰプロモーター配列である。一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、キツネザルＧＦＡＰプロモーター配列である。
一態様では、ＧＦＡＰプロモーター配列は、少なくとも１００ヌクレオチドを含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、少なくとも５００ヌクレオチドを含む。更なる態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、少なくとも１０００ヌクレオチドを含む。更に別の態様では、ＧＦＡＰプロモーターは、少なくとも１５００ヌクレオチドを含む。
当該技術分野では、プロモーター配列の断片は、作動可能に連結された核酸分子の転写を駆動するように機能し得ることが理解される。例えば、限定されないが、１０００ヌクレオチドのプロモーターが５００ヌクレオチドに切断され、５００ヌクレオチド断片が転写を駆動することができる場合、５００ヌクレオチド断片は、「機能性断片」と称される。
一態様では、プロモーターは少なくとも１０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも１００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも１５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも２００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも２５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも３００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも３５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも４００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも４５０ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、少なくとも５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、５０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、プロモーターは、１０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。
一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＧＦＡＰプロモーターの核酸配列は、配列番号４、１８、２７、及びその機能的断片と１００％同一の配列を含む。
本明細書で使用される場合、「脳」という用語は、神経系の中枢として機能する臓器を指す。一態様では、脳は、大脳、大脳皮質、小脳、及び／又は脳幹を含む。
本明細書で使用される場合、「大脳皮質」という用語は、大脳の神経組織の外層を指す。
本明細書で使用される場合、「線条体（ｓｔｒｉａｔｕｍ）」又は「線条体（ｃｏｒｐｕｓ ｓｔｒｉａｔｕｍ）」という用語は、前脳の皮質下基底核のニューロンのクラスターを指し、腹側線条体及び背側線条体を含む。
本明細書で使用される場合、「黒質」という用語は、中脳の皮質下基底核のニューロンのクラスターを指し、緻密部及び網様部を含む。
本明細書で使用される場合、「前脳」という用語は、脳の最も前方の部分を指す。
本明細書で使用される場合、「被殻」という用語は、前脳の基底の丸い構造を指し、背部線条体の構成要素である。
本明細書で使用される場合、「尾状核」という用語は、前脳の基底の構造を指し、背部線条体の構成要素である。
本明細書で使用される場合、「皮質下基底核」という用語は、脳の深部大脳半球におけるニューロンのクラスターを指す。
本明細書で使用される場合、「脊髄」という用語は、運動皮質から身体への神経シグナルの伝達において機能する構造を指す。
本明細書で使用される場合、「運動皮質」という用語は、随意運動の計画、制御、及び実行に関与する大脳皮質の前頭葉の領域を指す。
一態様では、本明細書に提供される方法は、脳において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の大脳皮質において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の線条体において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の背側線条体において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の脊髄において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の被殻において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の尾状核において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。一態様では、本明細書に提供される方法は、脳の黒質において反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する。
伸長因子１α（ＥＦ－１α；ｅＥＦ１ａ１とも称される）は、伸長因子１複合体のαサブユニットのアイソフォームである。複合体は、アミノアシルｔＲＮＡのリボソームへの酵素的送達に関与する。ＥＦ－１αのアイソフォームは、脳、胎盤、肺、肝臓、腎臓、及び膵臓で発現する。
一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのヒトエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのチンパンジーエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのボノボエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのオランウータンエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのゴリラエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのマカクエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのマーモセットエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのオマキザルハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのヒヒエンハンサー配列、ＥＦ－１αプロモーターからのテナガザルエンハンサー配列、及びＥＦ－１αプロモーターからのキツネザルエンハンサー配列からなる群から選択される。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列はＥＦ－１αプロモーターからの、チンパンジーエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのボノボエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのオランウータンエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのゴリラエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのマカクエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのマーモセットエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのオマキザルエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのヒヒエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのテナガザルエンハンサー配列である。一態様では、ＥＦ－１αプロモーターからのエンハンサー配列は、ＥＦ－１αプロモーターからのキツネザルエンハンサー配列である。
一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＥＦ－１αプロモーター核酸配列からのエンハンサーは、配列番号２又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）は、ヘルペスウイルス目のウイルスの属である。
一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのヒトエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのチンパンジーエンハンサー配列、ＣＭＶからのボノボエンハンサー配列、ＣＭＶからのオランウータンエンハンサー配列、ＣＭＶからのゴリラエンハンサー配列、ＣＭＶからのマカクエンハンサー配列、ＣＭＶからのマーモセットエンハンサー配列、ＣＭＶからのオマキザルエンハンサー配列、ＣＭＶからのヒヒエンハンサー配列、ＣＭＶからのテナガザルエンハンサー配列、及びＣＭＶからのキツネザルエンハンサー配列からなる群から選択される。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのチンパンジーエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのボノボエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのオランウータンエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのゴリラエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのマカクエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのマーモセットエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのオマキザルエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのヒヒエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのテナガザルエンハンサー配列である。一態様では、ＣＭＶからのエンハンサー配列は、ＣＭＶからのキツネザルエンハンサー配列である。
一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９１１％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＣＭＶ核酸配列からのエンハンサーは、配列番号１７又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、本開示のベクターは、キメライントロンを含む。一態様では、キメライントロンは、ヒトβグロビン遺伝子の第１イントロンからの５’ドナー部位、並びに免疫グロブリン遺伝子重鎖可変領域のイントロンからの分岐及び３’アクセプター部位からなる。一態様では、キメライントロンは、ＣＡＧプロモーターにおけるものと同様のウサギβグロビン及びニワトリβアクチンのキメライントロンである。一態様では、本開示のベクターは、グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）のイントロンを含む。一態様では、本開示のベクターは、グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）の第１イントロンを含む。
イントロンは、スプライソソームイントロン、トランスファーＲＮＡイントロン、グループＩイントロン、グループＩＩイントロン、及びグループＩＩＩイントロンを含む、少なくとも５つのクラスに分類することができる。イントロンは、既知の若しくは天然に存在するイントロン配列又は他のイントロン配列から、合成的に産生、変化、又は誘導することができる。イントロンは、２つ以上の異種配列の組み合わせを含むキメライントロンも含むことができる。したがって、本出願のイントロンは、イントロン配列のバリアントを含むことができ、既知の又は本明細書に提供される他のイントロン配列と組成が類似しているが、同一ではない。一態様では、イントロンは、少なくとも１０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも１００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも１５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも２００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも２５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも３００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも３５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも４００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも４５０ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、少なくとも５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、５０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～７５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～５０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～２５００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～１０００ヌクレオチドを含む。一態様では、イントロンは、１０ヌクレオチド～５００ヌクレオチドを含む。
一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号５又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２８又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、キメライントロンの核酸配列は、配列番号２９又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）は、ウイルスベクターで送達される遺伝子の発現を増強する三次構造を作成するＤＮＡ配列である。
一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、ＷＰＲＥの最適化バージョンである。
一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７及び３０からなる群から選択される。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７である。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０である。
一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号７又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＷＰＲＥの核酸配列は、配列番号３０又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル（ＳＶ４０ポリＡ、サルウイルス４０ポリＡ、及びポリＡとも称される）は、ＤＮＡ配列であり、転写を終結させ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の３’末端にポリＡテールを付加することができる。
ｈＧＨポリアデニル化シグナル（ｈＧＨポリＡとも称される）は、転写を終結させ、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の３’末端にポリＡテールを付加することができるＤＮＡ配列である。
ｂＧＨポリアデニル化シグナル（ｂＧＨポリＡ又はｂＧＨｐＡとも称される）は、ウシ成長ホルモンのポリＡシグナル又はポリＡテールを指す。
本明細書で使用される場合、「ポリＡテール」は、核酸塩基アデニンのみを含む一続きのＲＮＡを指す。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター構築物から転写されるＲＮＡ分子は、ポリＡテールを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも２つのアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも１０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも５０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも１００個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも１５０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも２００個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、少なくとも２５０個のアデニンを含む。一態様では、ポリＡテールは、５０個のアデニン～３００個のアデニンを含む。
一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９．８％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号８又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９１７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．１７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号１７又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
一態様では、ｂＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも７０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも７５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９０％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９１％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９２％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９３％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９４％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９６％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９７％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９８％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９９％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９９．５％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９９．３１％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と少なくとも９９．９％同一の配列を含む。一態様では、ｈＧＨポリアデニル化シグナルの核酸配列は、配列番号２６又はその相補体と１００％同一の配列を含む。
本明細書で使用される場合、「中枢神経系」又は「ＣＮＳ」という用語は、左右対称の動物の脳及び脊髄を指す。ＣＮＳはまた、網膜、視神経、嗅神経、及び嗅上皮を含む。
本明細書で使用される場合、「末梢神経系」又は「ＰＮＳ」という用語は、網膜、視神経、嗅神経、及び嗅上皮を除く、脳及び脊髄以外の神経及び神経節を指す。一態様では、末梢神経系は、体性神経系と自律神経系とに分けられる。
本明細書で使用される場合、「体性神経系」という用語は、身体運動の随意制御と関連するＰＮＳの部分を指す。
本明細書で使用される場合、「自律神経系」という用語は、内臓の機能を調節するＰＮＳの部分を指す。
本明細書で使用される場合、「ＧＦＡＰ陽性」という用語は、当該技術分野で標準的な技術を使用して、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）の検出可能なタンパク質蓄積又はＧＦＡＰ ｍＲＮＡ発現の検出可能な蓄積を有する細胞を指す。一態様では、グリア細胞は、ＧＦＡＰ陽性である。
本明細書で使用される場合、「検出可能な」という用語は、同定可能なタンパク質又はｍＲＮＡの蓄積を指す。
タンパク質の蓄積は、抗体を使用して同定することができる。タンパク質蓄積を測定する非限定的な例としては、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び免疫蛍光が挙げられる。本明細書に提供される抗体は、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体であり得る。本明細書に提供されるタンパク質に対する特異的結合親和性を有する抗体は、当該技術分野で既知の方法を使用して生成され得る。当該技術分野で既知の方法を使用して、本明細書に提供される抗体をマイクロタイタープレートなどの固体支持体に付着させることができる。
本明細書で使用される場合、「感染多重度（ｍｕｌｔｉｐｌｉｃｉｔｙ ｏｆ ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ）」及び「ＭＯＩ」という用語は、感染中に添加される細胞当たりのビリオンの数を指す。
本明細書で使用される場合、「ビリオン」という用語は、宿主細胞の外側のウイルスの感染形態を指す。
本明細書で使用される場合、「神経学的状態」という用語は、中枢神経系又は末梢神経系における障害、疾病、病気、傷害、又は疾患を指す。神経学的状態の非限定的な例は、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ：ｃｏｕｒｓｅ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，２ｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００２）（Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｉｎｃ．）ａｎｄ Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ Ｇｏｅｔｚ，Ｔｅｘｔｂｏｏｋ ｏｆ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，３ｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ（２００７）（Ｓａｕｎｄｅｒｓ）に見出され得る。
本明細書で使用される場合、「損傷」という用語は、中枢神経系又は末梢神経系への損傷を指す。
一態様では、神経学的状態は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される。一態様では、神経学的状態は、アルツハイマー病である。一態様では、神経学的状態は、パーキンソン病である。一態様では、神経学的状態は、ＡＬＳである。一態様では、神経学的状態は、ハンチントン病である。一態様では、神経学的状態は、てんかんである。一態様では、神経学的状態は、身体的傷害である。一態様では、神経学的状態は、脳卒中である。一態様では、神経学的状態は、虚血性脳卒中である。一態様では、神経学的状態は、出血性脳卒中である。一態様では、神経学的状態は、脳動脈瘤である。一態様では、神経学的状態は、外傷性脳傷害である。一態様では、神経学的状態は、脳振盪である。一態様では、神経学的状態は、腫瘍である。一態様では、神経学的状態は、炎症である。一態様では、神経学的状態は、感染である。一態様では、神経学的状態は、運動失調症である。一態様では、神経学的状態は、脳萎縮である。一態様では、神経学的状態は、脊髄萎縮である。一態様では、神経学的状態は、多発性硬化症である。一態様では、神経学的状態は、外傷性脊髄傷害である。一態様では、神経学的状態は、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）である。一態様では、神経学的状態は、全虚血である。一態様では、神経学的状態は、低酸素性虚血性脳症である。一態様では、神経学的状態は、塞栓症である。一態様では、神経学的状態は、線維軟骨塞栓症脊髄症である。一態様では、神経学的状態は、血栓症である。一態様では、神経学的状態は、腎症である。一態様では、神経学的状態は、慢性炎症性疾患である。一態様では、神経学的状態は、髄膜炎である。一態様では、神経学的状態は、脳静脈洞血栓症である。
一態様では、神経学的状態は、ＣＮＳ又はＰＮＳへの傷害を含む。一態様では、神経学的状態は、ＣＮＳに対する傷害を含む。一態様では、神経学的状態は、ＰＮＳへの傷害を含む。
一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法を提供し、かつそれを含み、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び配列番号１９及び２２からなる群から選択される第２のコード配列、又は配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び第２の核酸コード配列が、（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本開示は、グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に送達することを含み、ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）エンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、ベクターが、それを必要とする対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。
一態様では、本開示は、神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法を提供し、かつそれを含み、本方法は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を対象に送達することを含み、ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のタンパク質配列が、それを必要とする対象への、（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、（ｂ）ヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサーと、（ｃ）キメライントロンと、（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、（ｅ）ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本明細書に提供される方法は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。一態様では、本明細書に提供される方法は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換する。
一態様では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる。一態様では、本明細書に提供される組成物は、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換する。
一態様では、本明細書に提供される組成物は、治療を必要とする対象の治療のためのＡＡＶベクターを含み、ＡＡＶベクターが、第１のＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列を含み、第１のＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列が、リンカー配列によって分離され、当該第１のＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列が、第１のプロモーター、エンハンサー、キメライントロン、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルを含む発現制御エレメントに作動可能に連結される。
一態様では、本明細書に提供される組成物は、治療を必要とする対象の治療のためのＡＡＶベクターを含み、ＡＡＶベクターが、第１のＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列を含み、第１のＮｅｕｒｏＤ１配列が、第１のプロモーターに作動可能に連結され、第２のＮｅｕｒｏＤ１配列が、第２のプロモーターに作動可能に連結され、第１及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列が、エンハンサー、キメライントロン、ＷＰＲＥ、及びポリアデニル化シグナルに更に作動可能に連結される。
本明細書で使用される場合、「哺乳動物」という用語は、哺乳綱に分類される任意の種を指す。
本明細書で使用される場合、「ヒト」という用語は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓを指す。一態様では、ヒトは、神経学的障害を有する。
本明細書で使用される場合、「生きているヒト」という用語は、心臓、呼吸、及び脳活動を有するヒトを指す。
本明細書で使用される場合、「非ヒト霊長類」という用語は、Ｈｏｍｏ ｓａｐｉｅｎｓではない霊長目に分類される任意の種又は亜種を指す。非ヒト霊長類の非限定的な例としては、チンパンジー、ボノボ、オランウータン、ゴリラ、マカク、マーモセット、オマキザル、ヒヒ、テナガザル、及びキツネザルが挙げられる。
本明細書で使用される場合、「送達すること」又は「送達」という用語は、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物で哺乳動物を処置することを指す。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、それを必要とする対象に送達される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される。一態様では、送達は、局所送達を含む。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、局所送達用に製剤化される。一態様では、送達は、全身送達を含む。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、全身送達用に製剤化される。一態様では、送達は、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物を、それを必要とする対象に注入することを含む。一態様では、送達は、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内（ｉｎｔｒａ ｌａｔｅｒａｌ ｖｅｎｔｒｉｃｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ｂｒａｉｎ）、大槽内、硝子体内、網膜下内（ｉｎｔｒａ－ｓｕｂｒｅｔｉｎａ）、実質内、鼻腔内、又は経口投与からなる群から選択される。一態様では、送達は、腹腔内送達を含む。一態様では、送達は、筋肉内送達を含む。一態様では、送達は、静脈内送達を含む。一態様では、送達は、髄腔内送達を含む。一態様では、送達は、脳内送達を含む。一態様では、送達は、頭蓋内送達を含む。一態様では、送達は、側脳室内送達を含む。一態様では、送達は、大槽内送達を含む。一態様では、送達は、硝子体内送達を含む。一態様では、送達は、網膜下内送達を含む。一態様では、送達は、実質内送達を含む。一態様では、送達は、鼻腔内送達を含む。一態様では、送達は、経口投与を含む。
本明細書で使用される場合、「注入する」という用語は、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物を、圧力下及び力を用いて送達することを指す。非限定的な例として、注入は、シリンジ及び針の使用を含むことができる。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、対象の脳に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の大脳皮質に注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、対象の線条体に注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、対象の脊髄に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の背側線条体に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の被殻に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の尾状核に注入される。一態様では、ＡＡＶベクター又は組成物は、対象の黒質に注入される。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脳の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脳の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、大脳皮質の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、大脳皮質の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脊髄の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、脊髄の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、線条体の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、線条体の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、背側線条体の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、背側線条体の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、被殻の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、被殻の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、尾状核の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、尾状核の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
及び態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、注入部位から約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、注入部位から約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、黒質の約１％～約１００％に広がっている。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクター又は組成物は、被殻の約１％～約１０％、１％～約２０％、１％～約３０％、１０％～約２０％、１０％～約３０％、約１０％～約４０％、約２０％～約３０％、約２０％～約４０％、約２０％～約５０％、約３０％～約４０％、約３０％～約５０％、約３０％～約６０％、約４０％～約５０％、約４０％～約６０％、約４０％～約７０％、約５０％～約６０％、約５０％～約７０％、約５０％～約８０％、約６０％～約７０％、約６０％～約８０％、約６０％～約９０％、約７０％～約８０％、約７０％～約９０％、約７０％～約１００％、約８０％～約９０％、約８０％～約１００％、又は約９０％～約１００％に広がっている。
本明細書で使用される場合、「ＡＡＶ粒子」という用語は、その核酸ゲノムを細胞に伝達するＡＡＶウイルスのパッケージングされたカプシド形態を指す。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１４ＡＡＶ粒子／ｍＬの濃度で注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１０ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１１ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１４ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ、１０１２ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１４ＡＡＶ粒子／ｍＬ、又は１０１３ＡＡＶ粒子／ｍＬ～１０１４ＡＡＶ粒子／ｍＬの濃度で注入される。
一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０μＬ～１０００μＬの体積で注入される。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶベクターによってコードされるＡＡＶ粒子を含む組成物は、１０μＬ～１００μＬ、１０μＬ～２００μＬ、１０μＬ～３００μＬ、１００μＬ～２００μＬ、１００μＬ～３００μＬ、１００μＬ～４００μＬ、２００μＬ～３００μＬ、２００μＬ～４００μＬ、２００μＬ～５００μＬ、３００μＬ～４００μＬ、３００μＬ～５００μＬ、３００μＬ～６００μＬ、４００μＬ～５００μＬ、４００μＬ～６００μＬ、４００μＬ～７００μＬ、５００μＬ～６００μＬ、５００μＬ～７００μＬ、５００μＬ～８００μＬ、６００μＬ～７００μＬ、６００μＬ～８００μＬ、６００μＬ～９００μＬ、７００μＬ～８００μＬ、７００μＬ～９００μＬ、７００μＬ～１０００μＬ、８００μＬ～９００μＬ、８００μＬ～１０００μＬ、又は９００μＬ～１０００μＬの体積で注入される。
本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、任意の動物対象を指す。動物対象の非限定的な例としては、ヒト、実験動物（例えば、霊長類、ラット、マウス）、家畜（例えば、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ブタ、シチメンチョウ、ニワトリ）、及び家庭用ペット（例えば、イヌ、ネコ、げっ歯類など）が挙げられる。
本明細書で使用される場合、「それを必要とする対象」は、神経学的状態を有する対象を指す。一態様では、それを必要とする対象は、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される神経疾患を有する。一態様では、それを必要とする対象は、アルツハイマー病を有する。一態様では、それを必要とする対象は、パーキンソン病を有する。一態様では、それを必要とする対象は、ＡＬＳを有する。一態様では、それを必要とする対象は、ハンチントン病を有する。一態様では、それを必要とする対象は、てんかんを有する。一態様では、それを必要とする対象は、身体的傷害を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳卒中を有する。一態様では、それを必要とする対象は、虚血性脳卒中を有する。一態様では、それを必要とする対象は、出血性脳卒中を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳動脈瘤を有する。一態様では、それを必要とする対象は、外傷性脳傷害を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳震盪を有する。一態様では、それを必要とする対象は、腫瘍を有する。一態様では、それを必要とする対象は、炎症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、感染を有する。一態様では、それを必要とする対象は、運動失調症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳萎縮を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脊髄萎縮を有する。一態様では、それを必要とする対象は、多発性硬化症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、外傷性脊髄傷害を有する。一態様では、それを必要とする対象は、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）を有する。一態様では、それを必要とする対象は、全虚血を有する。一態様では、それを必要とする対象は、低酸素性虚血性脳症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、塞栓症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、線維軟骨塞栓症脊髄症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、血栓症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、腎症を有する。一態様では、それを必要とする対象は、慢性炎症性疾患を有する。一態様では、それを必要とする対象は、髄膜炎を有する。一態様では、それを必要とする対象は、脳静脈洞血栓症を有する。
一態様では、それを必要とする対象は、哺乳動物である。一態様では、それを必要とする対象は、ヒトである。一態様では、それを必要とする対象は、非ヒト霊長類である。一態様では、それを必要とする対象は、チンパンジー、ボノボ、オランウータン、ゴリラ、マカク、マーモセット、オマキザル、ヒヒ、テナガザル、及びキツネザルからなる群から選択される。一態様では、それを必要とする対象は、チンパンジーである。一態様では、それを必要とする対象は、ボノボである。一態様では、それを必要とする対象は、オランウータンである。一態様では、それを必要とする対象は、ゴリラである。一態様では、それを必要とする対象は、マカクである。一態様では、それを必要とする対象は、マーモセットである。一態様では、それを必要とする対象は、オマキザルである。一態様では、それを必要とする対象は、ヒヒである。一態様では、それを必要とする対象は、テナガザルである。一態様では、それを必要とする対象は、キツネザルである。
一態様では、それを必要とする対象は、雄である。一態様では、それを必要とする対象は、雌である。一態様では、それを必要とする対象は、ジェンダーニュートラルである。一態様では、それを必要とする対象は、未熟児（ｐｒｅｍａｔｕｒｅ ｎｅｗｂｏｒｎ）である。一態様では、未熟児は、妊娠３６週以前に生まれる。一態様では、それを必要とする対象は、新生児である。一態様では、新生児（ｎｅｗｂｏｒｎ）という用語は、約２ヶ月齢未満である。一態様では、それを必要とする対象は、新生児（ｎｅｏｎａｔｅ）である。一態様では、新生児は、約１ヶ月齢未満である。一態様では、それを必要とする対象は、乳児である。一態様では、乳児は、２ヶ月～２４ヶ月齢である。一態様では、乳児は、２ヶ月～３ヶ月、２ヶ月～４ヶ月、２ヶ月～５ヶ月、３ヶ月～４ヶ月、３ヶ月～５ヶ月、３ヶ月～６ヶ月、４ヶ月～５ヶ月、４ヶ月～６ヶ月、４ヶ月～７ヶ月、５ヶ月～６ヶ月、５ヶ月～７ヶ月、５ヶ月～８ヶ月、６ヶ月～７ヶ月、６ヶ月～８ヶ月、６ヶ月～９ヶ月、７ヶ月～８ヶ月、７ヶ月～９ヶ月、７ヶ月～１０ヶ月、８ヶ月～９ヶ月、８ヶ月～１０ヶ月、８ヶ月～１１ヶ月、９ヶ月～１０ヶ月、９ヶ月～１１ヶ月、９ヶ月～１２ヶ月、１０ヶ月～１１ヶ月、１０ヶ月～１２ヶ月、１０ヶ月～１３ヶ月、１１ヶ月～１２ヶ月、１１ヶ月～１３ヶ月、１１ヶ月～１４ヶ月、１２ヶ月～１３ヶ月、１２ヶ月～１４ヶ月、１２ヶ月～１５ヶ月、１３ヶ月～１４ヶ月、１３ヶ月～１５ヶ月、１３ヶ月～１６ヶ月、１４ヶ月～１５ヶ月、１４ヶ月～１６ヶ月、１４ヶ月～１７ヶ月、１５ヶ月～１６ヶ月、１５ヶ月～１７ヶ月、１５ヶ月～１８ヶ月、１６ヶ月～１７ヶ月、１６ヶ月～１８ヶ月、１６ヶ月～１９ヶ月、１７ヶ月～１８ヶ月、１７ヶ月～１９ヶ月、１７ヶ月～２０ヶ月、１８ヶ月～１９ヶ月、１８ヶ月～２０ヶ月、１８ヶ月～２１ヶ月、１９ヶ月～２０ヶ月、１９ヶ月～２１ヶ月、１９ヶ月～２２ヶ月、２０ヶ月～２１ヶ月、２０ヶ月～２２ヶ月、２０ヶ月～２３ヶ月、２１ヶ月～２２ヶ月、２１ヶ月～２３ヶ月、２１ヶ月～２４ヶ月、２２ヶ月～２３ヶ月、２２ヶ月～２４ヶ月、及び２３ヶ月～２４ヶ月齢である。一態様では、それを必要とする対象は、幼児である。一態様では、幼児は、１歳～４歳齢である。一態様では、幼児は、１歳～２歳、１歳～３歳、１歳～４歳、２歳～３歳、２歳～４歳、及び３歳～４歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、小児である。一態様では、小児は２歳～５歳齢である。一態様では、小児は、２歳～３歳、２歳～４歳、２歳～５歳、３歳～４歳、３歳～５歳、４歳～５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、子供である。一態様では、子供は、６歳～１２歳齢である。一態様では、子供は、６歳～７歳、６歳～８歳、６歳～９歳、７歳～８歳、７歳～９歳、７歳～１０歳、８歳～９歳、８歳～１０歳、８歳～１１歳、９歳～１０歳、９歳～１１歳、９歳～１２歳、１０歳～１１歳、１０歳～１２歳、及び１１歳～１２歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、青年である。一態様では、青年は、１３歳～１９歳齢である。一態様では、青年は、１３歳～１４歳、１３歳～１５歳、１３歳～１６歳、１４歳～１５歳、１４歳～１６歳、１４歳～１７歳、１５歳～１６歳、１５歳～１７歳、１５歳～１８歳、１６歳～１７歳、１６歳～１８歳、１６歳～１９歳、１７歳～１８歳、１７歳～１９歳、及び１８歳～１９歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、小児対象である。一態様では、１日～１８歳齢の小児対象である。一態様では、小児対象は、１日～１歳、１日～２歳、１日～３歳、１歳～２歳、１歳～３歳、１歳～４歳、２歳～３歳、２歳～４歳、２歳～５歳、３歳～４歳、３歳～５歳、３歳～６歳、４歳～５歳、４歳～６歳、４歳～７歳、５歳～６歳、５歳～７歳、５歳～８歳、６歳～７歳、６歳～８歳、６歳～９歳、７歳～８歳、７歳～９歳、７歳～１０歳、８歳～９歳、８歳～１０歳、８歳～１１歳、９歳～１０歳、９歳～１１歳、９歳～１２歳、１０歳～１１歳、１０歳～１２歳、１０歳～１３歳、１１歳～１２歳、１１歳～１３歳、１１歳～１４歳、１２歳～１３歳、１２歳～１４歳、１２歳～１５歳、１３歳～１４歳、１３歳～１５歳、１３歳～１６歳、１４歳～１５歳、１４歳～１６歳、１４歳～１７歳、１５歳～１６歳、１５歳～１７歳、１５歳～１８歳、１６歳～１７歳、１６歳～１８歳、及び１７歳～１８歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、高齢者対象である。一態様では、高齢者対象は、６５歳～９５歳以上齢である。一態様では、高齢者対象は、６５歳～７０歳、６５歳～７５歳、６５歳～８０歳、７０歳～７５歳、７０歳～８０歳、７０歳～８５歳、７５歳～８０歳、７５歳～８５歳、７５歳～９０歳、８０歳～８５歳、８０歳～９０歳、８０歳～９５歳、８５歳～９０歳、及び８５歳～９５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、成人である。一態様では、成人対象は、２０歳～９５歳以上齢である。一態様では、成人対象は、２０歳～２５歳、２０歳～３０歳、２０歳～３５歳、２５歳～３０歳、２５歳～３５歳、２５歳～４０歳、３０歳～３５歳、３０歳～４０歳、３０歳～４５歳、３５歳～４０歳、３５歳～４５歳、３５歳～５０歳、４０歳～４５歳、４０歳～５０歳、４０歳～５５歳、４５歳～５０歳、４５歳～５５歳、４５歳～６０歳、５０歳～５５歳、５０歳～６０歳、５０歳～６５歳、５５歳～６０歳、５５歳～６５歳、５５歳～７０歳、６０歳～６５歳、６０歳～７０歳、６０歳～７５歳、６５歳～７０歳、６５歳～７５歳、６５歳～８０歳、７０歳～７５歳、７０歳～８０歳、７０歳～８５歳、７５歳～８０歳、７５歳～８５歳、７５歳～９０歳、８０歳～８５歳、８０歳～９０歳、８０歳～９５歳、８５歳～９０歳、及び８５歳～９５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、１歳～５歳、２歳～１０歳、３歳～１８歳、２１歳～５０歳、２１歳～４０歳、２１歳～３０歳、５０歳～９０歳、６０歳～９０歳、７０歳～９０歳、６０歳～８０歳、又は６５歳～７５歳齢である。一態様では、それを必要とする対象は、前期高齢者（ｙｏｕｎｇ ｏｌｄ）対象（６５～７４歳齢）である。一態様では、それを必要とする対象は、中期高齢者（ｍｉｄｄｌｅ ｏｌｄ）対象（７５～８４歳齢）である。一態様では、それを必要とする対象は、後期高齢者（ｏｌｄ）対象（＞８５歳齢）である。
本明細書で使用される場合、「流量」という用語は、ＡＡＶベクター又は組成物の送達速度を指す。一態様では、流量は、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分である。一態様では、流量は、０．１μＬ／分～０．２μＬ／分、０．１μＬ／分～０．３μＬ／分、０．１μＬ／分～０．４μＬ／分、０．２μＬ／分～０．３μＬ／分、０．２μＬ／分～０．４μＬ／分、０．２μＬ／分～０．５μＬ／分、０．３μＬ／分～０．４μＬ／分、０．３μＬ／分～０．５μＬ／分、０．３μＬ／分～０．６μＬ／分、０．４μＬ／分～０．５μＬ／分、０．４μＬ／分～０．６μＬ／分、０．４μＬ／分～０．７μＬ／分、０．５μＬ／分～０．６μＬ／分、０．５μＬ／分～０．７μＬ／分、０．５μＬ／分～０．８μＬ／分、０．６μＬ／分～０．７μＬ／分、０．６μＬ／分～０．８μＬ／分、０．６μＬ／分～０．９μＬ／分、０．７μＬ／分～０．８μＬ／分、０．７μＬ／分～０．９μＬ／分、０．７μＬ／分～１．０μＬ／分、０．８μＬ／分～０．９μＬ／分、０．８μＬ／分～１．０μＬ／分、０．８μＬ／分～１．１μＬ／分、０．９μＬ／分～１．０μＬ／分、０．９μＬ／分～１．１μＬ／分、０．９μＬ／分～１．２μＬ／分、１．０μＬ／分～１．１μＬ／分、１．０μＬ／分～１．２μＬ／分、１．０μＬ／分～１．３μＬ／分、１．１μＬ／分～１．２μＬ／分、１．１μＬ／分～１．３μＬ／分、１．１μＬ／分～１．４μＬ／分、１．２μＬ／分～１．３μＬ／分、１．２μＬ／分～１．４μＬ／分、１．２μＬ／分～１．５μＬ／分、１．３μＬ／分～１．４μＬ／分、１．３μＬ／分～１．５μＬ／分、１．３μＬ／分～１．６μＬ／分、１．４μＬ／分～１．５μＬ／分、１．４μＬ／分～１．６μＬ／分、１．４μＬ／分～１．７μＬ／分、１．５μＬ／分～１．６μＬ／分、１．５μＬ／分～１．７μＬ／分、１．５μＬ／分～１．８μＬ／分、１．６μＬ／分～１．７μＬ／分、１．６μＬ／分～１．８μＬ／分、１．６μＬ／分～１．９μＬ／分、１．７μＬ／分～１．８μＬ／分、１．７μＬ／分～１．９μＬ／分、１．７μＬ／分～２．０μＬ／分、１．８μＬ／分～１．９μＬ／分、１．８μＬ／分～２．０μＬ／分、１．８μＬ／分～２．１μＬ／分、１．９μＬ／分～２．０μＬ／分、１．９μＬ／分～２．１μＬ／分、１．９μＬ／分～２．２μＬ／分、２．０μＬ／分～２．１μＬ／分、２．０μＬ／分～２．２μＬ／分、２．０μＬ／分～２．３μＬ／分、２．１μＬ／分～２．２μＬ／分、２．１μＬ／分～２．３μＬ／分、２．１μＬ／分～２．４μＬ／分、２．２μＬ／分～２．３μＬ／分、２．２μＬ／分～２．４μＬ／分、２．２μＬ／分～２．５μＬ／分、２．３μＬ／分～２．４μＬ／分、２．３μＬ／分～２．５μＬ／分、２．３μＬ／分～２．６μＬ／分、２．４μＬ／分～２．５μＬ／分、２．４μＬ／分～２．６μＬ／分、２．４μＬ／分～２．７μＬ／分、２．５μＬ／分～２．６μＬ／分、２．５μＬ／分～２．７μＬ／分、２．５μＬ／分～２．８μＬ／分、２．６μＬ／分～２．７μＬ／分、２．６μＬ／分～２．８μＬ／分、２．６μＬ／分～２．９μＬ／分、２．７μＬ／分～２．８μＬ／分、２．７μＬ／分～２．９μＬ／分、２．７μＬ／分～３．０μＬ／分、２．８μＬ／分～２．９μＬ／分、２．８μＬ／分～３．０μＬ／分、２．８μＬ／分～３．１μＬ／分、２．９μＬ／分～３．０μＬ／分、２．９μＬ／分～３．１μＬ／分、２．９μＬ／分～３．２μＬ／分、３．０μＬ／分～３．１μＬ／分、３．０μＬ／分～３．２μＬ／分、３．０μＬ／分～３．３μＬ／分、３．１μＬ／分～３．２μＬ／分、３．１μＬ／分～３．３μＬ／分、３．１μＬ／分～３．４μＬ／分、３．２μＬ／分～３．３μＬ／分、３．２μＬ／分～３．４μＬ／分、３．２μＬ／分～３．５μＬ／分、３．３μＬ／分～３．４μＬ／分、３．３μＬ／分～３．５μＬ／分、３．３μＬ／分～３．６μＬ／分、３．４μＬ／分～３．５μＬ／分、３．４μＬ／分～３．６μＬ／分、３．４μＬ／分～３．７μＬ／分、３．５μＬ／分～３．６μＬ／分、３．５μＬ／分～３．７μＬ／分、３．５μＬ／分～３．８μＬ／分、３．６μＬ／分～３．７μＬ／分、３．６μＬ／分～３．８μＬ／分、３．６μＬ／分～３．９μＬ／分、３．７μＬ／分～３．８μＬ／分、３．７μＬ／分～３．９μＬ／分、３．７μＬ／分～４．０μＬ／分、３．８μＬ／分～３．９μＬ／分、３．８μＬ／分～４．０μＬ／分、３．８μＬ／分～４．１μＬ／分、３．９μＬ／分～４．０μＬ／分、３．９μＬ／分～４．１μＬ／分、３．９μＬ／分～４．２μＬ／分、４．０μＬ／分～４．１μＬ／分、４．０μＬ／分～４．２μＬ／分、４．０μＬ／分～４．３μＬ／分、４．１μＬ／分～４．２μＬ／分、４．１μＬ／分～４．３μＬ／分、４．１μＬ／分～４．４μＬ／分、４．２μＬ／分～４．３μＬ／分、４．２μＬ／分～４．４μＬ／分、４．２μＬ／分～４．５μＬ／分、４．３μＬ／分～４．４μＬ／分、４．３μＬ／分～４．５μＬ／分、４．３μＬ／分～４．６μＬ／分、４．４μＬ／分～４．５μＬ／分、４．４μＬ／分～４．６μＬ／分、４．４μＬ／分～４．７μＬ／分、４．５μＬ／分～４．６μＬ／分、４．５μＬ／分～４．７μＬ／分、４．５μＬ／分～４．８μＬ／分、４．６μＬ／分～４．７μＬ／分、４．６μＬ／分～４．８μＬ／分、４．６μＬ／分～４．９μＬ／分、４．７μＬ／分～４．８μＬ／分、４．７μＬ／分～４．９μＬ／分、４．７μＬ／分～５．０μＬ／分、４．８μＬ／分～４．９μＬ／分、４．８μＬ／分～５．０μＬ／分、又は４．９μＬ／分～５．０μＬ／分である。
本明細書で使用される場合、「治療有効用量（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃａｌｌｙ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」又は「薬学的活性用量（ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖｅ ｄｏｓｅ）」という用語は、神経学的状態の治療に有効である本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物の量を指す。一態様では、本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物は、薬学的に許容される担体と一緒に提供され得る。本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される担体」は、本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物と混合される非毒性の溶媒、分散剤、賦形剤、アジュバント、又は他の材料を指す。
薬学的に許容される担体の非限定的な例としては、液体（例えば、生理食塩水）、ゲル、ナノ粒子、エクソソーム、脂質小胞、又は希釈剤、アジュバント、賦形剤、又は耐酸性カプセル化成分の固体形態が挙げられる。好適な希釈剤及び賦形剤の非限定的な例としては、医薬品グレードの生理食塩水、デキストロース、グリセロール、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、炭酸マグネシウムなど、及びそれらの組み合わせが挙げられる。一態様では、治療有効用量は、補助物質、例えば、湿潤剤又は乳化剤、安定剤又はｐＨ緩衝剤を含む。一態様では、治療有効用量の本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物が、対象に注入される。一態様では、治療有効用量の本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物が、対象に送達される。一態様では、治療有効用量は、少なくとも１つの薬学的に許容される担体と共に投与される。一態様では、治療有効用量は、本明細書に提供されるＡＡＶ粒子又は組成物の約１％～約５％、約５％～約１０％、約１０％～約１５％、約１５％～約２０％、約２０％～約２５％、約２５％～約３０％、約３０％～約３５％、約４０～約４５％、約５０％～約５５％、約１％～約９５％、約２％～約９５％、約５％～約９５％、約１０％～約９５％、約１５％～約９５％、約２０％～約９５％、約２５％～約９５％、約３０％～約９５％、約３５％～約９５％、約４０％～約９５％、約４５％～約９５％、約５０％～約９５％、約５５％～約９５％、約６０％～約９５％、約６５％～約９５％、約７０％～約９５％、約４５％～約９５％、約８０％～約９５％、又は約８５％～約９５％を含む。
一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも２日間又は数週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回投与される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、若しくは１５日間又は数週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、最大で４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、若しくは２０日間又は数週間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、最大で１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２週間又は数ヶ月間連続して、少なくとも１日１回又は少なくとも１週間に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、若しくは１２ヶ月間又は数年間連続して、慢性的に、対象の全生涯、又は無期限に、少なくとも１回投与される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、２年間連続して、３年間連続して、又は５年間連続して、年に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、２年間連続して、年に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、３年間連続して、年に１回送達される。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象に、５年間連続して、年に１回送達される。
本明細書で使用される場合、「寛解」、「治癒」、又は「解消」という用語は、それを必要とする対象の、治療有効用量に応答して治癒される割合又は神経学的状態の寛解若しくは完全な解消が得られる割合を指す。
本明細書で使用される場合、「奏効率」という用語は、それを必要とする対象の、治療有効用量に肯定的に応答する（例えば、１つ以上の症状の重症度又は頻度が低下した）割合を指す。
一態様では、治療有効用量は、少なくとも約５０％の神経学的状態の寛解、治癒、奏効率、又は解消率を達成する。一態様では、治療有効用量は、１つ以上の神経学的状態の症状を排除、低減、減速、又は遅延させる。神経学的状態の症状の非限定的な例としては、振戦、動きの鈍化（運動緩慢）、筋肉の硬直、姿勢及び平衡の障害、自動運動の喪失、非協調運動、非制御運動、自発痙攣運動、発話の変化、しびれ、及び書字の変化が挙げられる。一態様では、神経学的状態の症状は、運動症状である。運動症状の非限定的な例としては、不随意運動の障害又は随意運動の障害が挙げられる。一態様では、神経学的状態の症状は、認知症状である。認知症状の非限定的な例としては、微細運動能力、振戦、発作、舞踏病、ジストニア、ジスキネジア、遅い又は異常な眼球運動、歩行障害、姿勢障害、平衡障害、発話困難、嚥下困難、整理困難、優先順位付け困難、課題に集中することの困難、柔軟性の欠如、衝動制御の欠如、爆発、自分自身の行動及び／又は能力の認識の欠如、思考の処理の遅さ、新しい情報の学習の困難、物事を記憶することの困難、コミュニケーションの困難、命令に従うことの困難、課題を実行することの困難が挙げられる。
一態様では、神経学的状態の症状は、精神医学的症状である。精神医学的症状の非限定的な例としては、うつ病、過敏性、悲しみ又は無感情、ひきこもり、不眠症、疲労、エネルギーの欠如、強迫性障害、躁病、双極性障害、及び体重減少が挙げられる。一態様では、神経学的状態の症状は、少なくとも１つの損傷した血管である。一態様では、神経学的状態の症状は、損傷した血液脳関門である。一態様では、神経学的状態の症状は、損傷した血流である。神経学的状態の症状の除去、低減、減速、又は遅延を評価するための試験の非限定的な例としては、ハンチントン病統一評価尺度（ＵＨＤＲＳ）スコア、ＵＨＤＲＳ総機能容量（ＴＦＣ）、ＵＨＤＲＳ機能評価、ＵＨＤＲＳ歩行スコア、ＵＨＤＲＳ総運動スコア（ＴＭＳ）、ハミルトンうつ病尺度（ＨＡＭ－Ｄ）、コロンビア自殺重症度評価尺度（Ｃ－ＳＳＲＳ）、モントリオール認知評価（ＭｏＣＡ）、改訂ランキン尺度（ｍＲＳ）、国立衛生研究所脳卒中尺度（ＮＩＨＳＳ）、及びバーセル指数（ＢＩ）、タイムアップ・アンド・ゴー検査（Ｔｉｍｅｄ Ｕｐ ａｎｄ Ｇｏ Ｔｅｓｔ）（ＴＵＧ）、チェドック上肢機能調査（Ｃｈｅｄｏｋｅ Ａｒｍ ａｎｄ Ｈａｎｄ Ａｃｔｉｖｉｔｙ Ｉｎｖｅｎｔｏｒｙ）（ＣＡＨＡＩ）、記号数字モダリティー検査、制御口頭語連想課題（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｏｒａｌ Ｗｏｒｄ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｔａｓｋｓ）、磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）、機能的磁気共鳴画像診断（ｆＭＲＩ）、並びに陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）が挙げられる。
一態様では、治療有効用量は、約１０％～約９９％以上の神経学的状態の寛解、治癒、奏効率、又は解消率を達成する。一態様では、治療有効用量は、１０％～１００％、例えば、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の神経学的状態の寛解、治癒、奏効率、又は解消率を達成する。
一態様では、治療有効用量は、１つ以上の神経学的状態の症状を１０％～１００％、例えば、１０％～約１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％除去、低減、減速、又は遅延させる。
一態様では、神経学的状態の症状は、処置当日、処置後１日、処置後３ヶ月、処置後６ヶ月、処置後１年、及びその後は毎年評価される。
一態様では、神経学的状態の症状は、処置後１日～処置後７日に評価される。一態様では、症状は、処置後１日～処置後２日、処置後１日～処置後３日、処置後１日～処置後４日、処置後２日～処置後３日、処置後２日～処置後４日、処置後２日～処置後５日、処置後３日～処置後４日、処置後３日～処置後５日、処置後３日～処置後６日、処置後４日～処置後５日、処置後４日～処置後６日、処置後４日～処置後７日、処置後５日～処置後６日、処置後５日～処置後７日、又は処置後６日～処置後７日に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後２週、処置後１週～処置後３週、処置後１週～処置後４週、処置後２週～処置後３週、処置後２週～処置後４週、又は処置後３週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後２ヶ月、処置後１ヶ月～処置後３ヶ月、処置後１ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後３ヶ月、処置後２ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後４ヶ月、処置後３ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後５ヶ月、処置後４ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後６ヶ月、処置後５ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後７ヶ月、処置後６ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後８ヶ月、処置後７ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後９ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１２ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１２ヶ月、又は処置後１１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後約２０年に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後５年、処置後１年～処置後１０年、処置後１年～処置後１５年、処置後５年～処置後１０年、処置後５年～処置後１５年、処置後５年～処置後２０年、処置後１０年～処置後１５年、処置後１０年～処置後２０年、又は処置後１５年～処置後２０年に評価され得る。
本明細書で使用される場合、「生存率」という用語は、神経学的状態の診断後の所与の期間後にまだ生きている処置群の対象のコホートを指す。
一態様では、治療有効用量は、約１０％～９９％以上の生存率の増加を達成する。一態様では、治療有効用量は、１０％～１００％、例えば、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％の生存率の増加を達成する。
本明細書で使用される場合、「平均余命」という用語は、対象が生存すると予想される期間を指す。
一態様では、治療有効用量は、平均余命を約１０％～９９％以上増加させる。一態様では、治療有効用量は、平均余命を１０％～１００％、例えば、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％増加させる。
一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象の脳内の萎縮の量を約１０％～９９％以上減少させる。一態様では、治療有効用量は、それを必要とする対象の脳内の萎縮の量を１０％～１００％、例えば、１０％～１５％、１０％～２０％、１０％～２５％、１５％～２０％、１５％～２５％、１５％～３０％、２０％～２５％、２０％～３０％、２０％～３５％、２５％～３０％、２５％～３５％、２５％～４０％、３０％～３５％、３０％～４０％、３５％～４５％、３５％～５０％、４０％～４５％、４０％～５０％、４０％～５５％、４５％～５０％、４５％～５５％、４５％～６０％、５０％～５５％、５０％～６０％、５０％～６５％、５５％～６０％、５５％～６５％、５５％～７０％、６０％～６５％、６０％～７０％、６０％～７５％、６５％～７０％、６５％～７５％、６５％～８０％、７０％～７５％、７０％～８０％、７０％～８５％、７５％～８０％、７５％～８５％、７５％～９０％、８０％～８５％、８０％～９０％、８０％～９５％、８５％～９０％、８５％～９５％、８５％～１００％、９０％～９５％、９０％～１００％、又は９５％～１００％減少させる。
一態様では、治療を必要とする対象の脳内の萎縮の量は、処置当日、処置後１日、処置後３ヶ月、処置後６ヶ月、処置後１年、及びその後は毎年評価される。
一態様では、それを必要とする対象の脳内の萎縮の量は、処置後１日～処置後７日に評価される。一態様では、症状は、処置後１日～処置後２日、処置後１日～処置後３日、処置後１日～処置後４日、処置後２日～処置後３日、処置後２日～処置後４日、処置後２日～処置後５日、処置後３日～処置後４日、処置後３日～処置後５日、処置後３日～処置後６日、処置後４日～処置後５日、処置後４日～処置後６日、処置後４日～処置後７日、処置後５日～処置後６日、処置後５日～処置後７日、又は処置後６日～処置後７日に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１週～処置後２週、処置後１週～処置後３週、処置後１週～処置後４週、処置後２週～処置後３週、処置後２週～処置後４週、又は処置後３週～処置後４週に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１ヶ月～処置後２ヶ月、処置後１ヶ月～処置後３ヶ月、処置後１ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後３ヶ月、処置後２ヶ月～処置後４ヶ月、処置後２ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後４ヶ月、処置後３ヶ月～処置後５ヶ月、処置後３ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後５ヶ月、処置後４ヶ月～処置後６ヶ月、処置後４ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後６ヶ月、処置後５ヶ月～処置後７ヶ月、処置後５ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後７ヶ月、処置後６ヶ月～処置後８ヶ月、処置後６ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後８ヶ月、処置後７ヶ月～処置後９ヶ月、処置後７ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後９ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後８ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１０ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後９ヶ月～処置後１２ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１１ヶ月、処置後１０ヶ月～処置後１２ヶ月、又は処置後１１ヶ月～処置後１２ヶ月に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後約２０年に評価され得る。一態様では、症状は、処置後１年～処置後５年、処置後１年～処置後１０年、処置後１年～処置後１５年、処置後５年～処置後１０年、処置後５年～処置後１５年、処置後５年～処置後２０年、処置後１０年～処置後１５年、処置後１０年～処置後２０年、又は処置後１５年～処置後２０年に評価され得る。
それを必要とする対象の脳内の萎縮の量を評価するための検査の非限定的な例としては、Ｎｉｓｓｌｅ染色、ＭＲＩ、機能的磁気共鳴ｆＭＲＩ、及びＰＥＴスキャンが挙げられる。
本開示は、好ましい実施形態を参照して説明されているが、本開示の範囲から逸脱することなく特定の状況に適応するように、様々な変更が行われ得、均等物がその要素に置き換えられ得ることが当業者によって理解されるであろう。したがって、本開示は、本開示を実施するために企図される最良の形態として開示される特定の実施形態に限定されるものではなく、本開示は、添付の特許請求の範囲の範囲及び趣旨内にある全ての実施形態を含むであろうことが意図される。
本明細書に示される実施例は、本開示のいくつかの実施形態を例示するが、いかなる様式でも本開示の範囲を限定するものとして解釈されるべきではない。
実施例１．ＡＡＶベクター構築物
１９２種類のＡＡＶベクター構築物：
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｂ）、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図６Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：Ｈｇｈ（図６Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１２Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１２Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図６Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図６Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：Ｈｇｈ（図１２Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１２Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、及びＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｄ）、
ＣＥ：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｅ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｆ）、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｄ）、
ＣＥ：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｅ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｆ）、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４（図１５Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４（図１５Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ｄ）、
ＣＥ：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ｅ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ｆ）、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｅ）、並びに
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧ（図１６Ｆ）が構築される。
１９２種類のＡＡＶベクター構築物：
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｂ）、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図６Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：Ｈｇｈ（図６Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１２Ｂ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１２Ａ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図２Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図３Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図４Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：Ａｓｃｌ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図６Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図５Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図６Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図７Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図８Ｃ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図９Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１０Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｐ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ｄ）、ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：Ｈｇｈ（図１２Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１１Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１２Ｃ）、ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、及びＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＳＧ－Ｔ２Ａ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＥＦ－１α：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：ＧＦＡ２．２：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｄ）、
ＣＥ：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｅ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１３Ｆ）、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｄ）、
ＣＥ：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｅ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＩＳＬ１：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１４Ｆ）、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４（図１５Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４（図１５Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ｄ）、
ＣＥ：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ｅ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０（図１５Ｆ）、
ＣＥ：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ａ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ６８１：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｂ）、
ＣＥ：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｃ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６ｐ：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｄ）、
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧＨ（図１６Ｅ）、並びに
ＥＦ－１α：Ｇｆａ２．２：ＬＨＸ３：ＷＰＲＥ：ｈＧ（図１６Ｆ）が構築される。
１９２種類のベクター構築物は全て、ｐＨＳＧ－２９９（Ｔａｋａｒａ，ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，ＣＡ）を利用し、これは、骨格として、複製起点、カナマイシン耐性遺伝子、及びｌａｃＺ遺伝子と共に多重クローニング部位（ＭＣＳ）を含むｐＵＣベースのベクター構築物である。
発現カセットの５’末端は、ヒト伸長因子－１αプロモーターからのエンハンサー（ＥＦ－１αエンハンサー、配列番号２）又はサイトメガロウイルスエンハンサー（ＣＭＶエンハンサー、配列番号１７）であり、７５８ヌクレオチドのＧＦＡＰプロモーター（ＧｆａＡＢＣ１Ｄ；配列番号３）、１６６７ヌクレオチドのＧＦＡＰプロモーター（Ｇｆａ１．６；配列番号４）、又は２２１４ヌクレオチドのＧＦＡＰプロモーター（ＧＦＡ２．２配列番号１８）のいずれかの５’に配置される。
ＥＦ－１αエンハンサー／ＧＦＡＰプロモーターに続いて（例えば、３’に）、５’から３’方向へ、いくつかの追加の配列が発現カセットに導入され、これには、キメライントロン（配列番号５）、ヒトＮｅｕｒｏＤ１コード配列（ｈＮｅｕｒｏＤ１；配列番号６）、及びヒトＡｓｃｌ１コード配列（ｈＡｓｃｌ１；配列番号１１）、ヒトＩＳＬ１コード配列（ｈＩＳＬ１；配列番号１３）、又はヒトＬＨＸ３コード配列（ｈＬＨＸ３；配列番号１５）、リンカー配列（Ｐ２Ａ；配列番号１９）、（ＧＳＧ－Ｐ２Ａ；配列番号２２）、（Ｔ２Ａ；配列番号２０）、若しくは（ＧＳＧ－Ｔ２Ａ；配列番号２３）、及びウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ；配列番号７）が含まれる。これらの配列は全て、ＳＶ４０ポリ（Ａ）シグナル（配列番号８）又はｈＧＨポリ（Ａ）シグナル（配列番号２１）に作動可能に連結される。エンハンサー、ＧＦＡＰプロモーター、キメライントロン、ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、ｈＡｓｃｌ１コード配列、ｈＩＳＬ１コード配列、若しくはｈＬＨＸ３コード配列、リンカー、ＷＰＲＥ、及びポリ（Ａ）シグナルは、２つのＡＡＶ ＩＴＲ配列に隣接している。
実施例２．ＡＡＶウイルス産生
１９２種類のプラスミドの各々を、ポリエチレンイミンを使用して、Ｒｅｐ－Ｃａｐプラスミド（ＡＡＶのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子の発現を駆動するプロモーターを含むプラスミド）及びヘルパープラスミド（アデノウイルスのＥ２Ａ、Ｅ４、及びＶＡ ＲＮＡの発現を駆動するプロモーターを含むプラスミド）と共に、２９３ＡＡＶ細胞に共トランスフェクトして、組換えＡＡＶウイルス粒子を産生する（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．）。
１９２種類のプラスミドの各々を、ポリエチレンイミンを使用して、Ｒｅｐ－Ｃａｐプラスミド（ＡＡＶのｒｅｐ及びｃａｐ遺伝子の発現を駆動するプロモーターを含むプラスミド）及びヘルパープラスミド（アデノウイルスのＥ２Ａ、Ｅ４、及びＶＡ ＲＮＡの発現を駆動するプロモーターを含むプラスミド）と共に、２９３ＡＡＶ細胞に共トランスフェクトして、組換えＡＡＶウイルス粒子を産生する（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ，Ｉｎｃ．）。
トランスフェクションの７２時間後、トランスフェクトされた細胞を掻き取り、遠心分離する。細胞ペレットを、凍結し、解凍し、ドライアイス／エタノール混合物に入れ、続いて、３７℃の水浴に入れる。凍結／融解サイクルを更に３回繰り返す。ＡＡＶ溶解物を、不連続イオジキサノール勾配で、３５０，０００ｇで１時間超遠心分離することによって精製する（例えば、細胞破片を除去する）。ウイルス含有層を回収し、次いで、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ Ａｍｉｃｏｎ Ｕｌｔｒａ遠心式フィルターを使用して濃縮する。次いで、ＩＴＲ領域又は遺伝子／発現カセット特異的配列を増幅するプライマーを使用して、ｑＰＣＲによって、ウイルス力価を決定する。
実施例３．アストロサイト細胞培養物
ヒト皮質アストロサイト（ＨＡ１８００；ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）は、それらが９０％超コンフルエントである場合、継代培養する。継代培養の場合、細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｓｅｌｅｃｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用してトリプシン処理し、２００×ｇで５分間遠心分離し、次いで、再懸濁し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、３．５ｍＭのグルコース（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｎｇ／ｍＬの上皮増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び１０ｎｇ／ｍＬの線維芽細胞増殖因子２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む培地にプレーティングする。アストロサイトを、２４ウェルプレート（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、ポリ－Ｄ－リジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングされたカバースリップ（１２ｍｍ）上で、カバースリップ当たり約５０，０００細胞の密度で培養する。
ヒト皮質アストロサイト（ＨＡ１８００；ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）は、それらが９０％超コンフルエントである場合、継代培養する。継代培養の場合、細胞を、ＴｒｙｐＬＥ（商標）Ｓｅｌｅｃｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を使用してトリプシン処理し、２００×ｇで５分間遠心分離し、次いで、再懸濁し、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、３．５ｍＭのグルコース（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）、Ｂ２７（Ｇｉｂｃｏ）、１０ｎｇ／ｍＬの上皮増殖因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、及び１０ｎｇ／ｍＬの線維芽細胞増殖因子２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む培地にプレーティングする。アストロサイトを、２４ウェルプレート（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）中、ポリ－Ｄ－リジン（Ｓｉｇｍａ－Ａｌｄｒｉｃｈ）でコーティングされたカバースリップ（１２ｍｍ）上で、カバースリップ当たり約５０，０００細胞の密度で培養する。
（Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの皮質又は線条体から単離された）ラット初代アストロサイトは、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、１０％のウシ胎仔血清（Ｇｉｂｃｏ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ）、３．５ｍＭのグルコース（Ｇｉｂｃｏ）を含む培地中で培養される。
全ての細胞は、５％の二酸化炭素を含む加湿空気中、３７℃で維持される。
実施例４．アストロサイト細胞培養物中でのＡＡＶベクターの（インビトロ）試験
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、実施例３からのヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイトを感染させる。細胞の感染の２４時間後、培地を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｎ２サプリメント（Ｇｉｂｃｏ）、及び２０ｎｇ／ｍＬの脳由来神経栄養因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む分化培地で置き換える。４日ごとに、分化培地を細胞培養物に添加する。Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１７：３９－４４（２００２）を参照されたい。
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、実施例３からのヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイトを感染させる。細胞の感染の２４時間後、培地を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｎ２サプリメント（Ｇｉｂｃｏ）、及び２０ｎｇ／ｍＬの脳由来神経栄養因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む分化培地で置き換える。４日ごとに、分化培地を細胞培養物に添加する。Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１７：３９－４４（２００２）を参照されたい。
細胞培養物中の空きスペースは、追加のヒトアストロサイトで満たされ、アストロサイト又はラット初代アストロサイトがニューロンに変換された場合、変換されたニューロンの機能的発生をサポートする。
実施例５．ＡＡＶベクター効力の試験
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、継代数４～７の実施例３のヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイト（又は他の脳領域又は脊髄からのアストロサイト）を、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で感染させる。ｑＰＣＲ、酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）、及びウエスタンブロットを実施して、ＮｅｕｒｏＤ１、Ａｓｃｌ１、ＩＳＬ１、又はＬＨＸ３転写物の発現及びタンパク質レベルを決定する。
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを使用して、継代数４～７の実施例３のヒト皮質アストロサイト及びラット初代アストロサイト（又は他の脳領域又は脊髄からのアストロサイト）を、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で感染させる。ｑＰＣＲ、酵素結合免疫吸着（ＥＬＩＳＡ）、及びウエスタンブロットを実施して、ＮｅｕｒｏＤ１、Ａｓｃｌ１、ＩＳＬ１、又はＬＨＸ３転写物の発現及びタンパク質レベルを決定する。
ＮｅｕＮ、ダブルコルチン（ＤＣＸ）、β３－チューブリン、ＮＦ－２００、及びＭＡＰ２の発現を、ｑＰＣＲ、ＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット、及び免疫染色によって評価して、組換えＡＡＶの機能的出力を決定する。
実施例６．ＡＡＶベクターの滴定及び感染率の試験
精製したＡＡＶベクターをＤＮａｓｅＩで処理して、残留プラスミドの混入を排除する。一連のＡＡＶベクターの希釈を、１００倍、５００倍、２５００倍、及び１２５００倍で実施する。ＡＡＶプラスミド骨格を希釈して、段階希釈によって標準曲線を生成する。プラスミドを１０４、１０５、１０６、１０７、及び１０８分子／μＬに希釈する。ｑＰＣＲを、希釈したＡＡＶベクター及び希釈したＡＡＶプラスミドに対して実施する。使用するプライマーは、ＩＴＲ領域（フォワードＩＴＲプライマー、５’－ＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴ（配列番号３３）、リバースＩＴＲプライマー、５’－ＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡ（配列番号３４））に対するものである。ｑＰＣＲミックスは、１０μＬのユニバーサルＳＹＢＲマスターミックス２Ｘ、２μＬの５μＭフォワードＩＴＲプライマー、２μＬの５μＭリバースＩＴＲプライマー、５μＬの試験試料又は希釈した標準物質、及び１μＬのＨ２Ｏを含む。ｑＰＣＲのプログラムは、９５℃で１０分間、続いて、９５℃で１５秒間、６０℃で３０秒間を４０サイクル、続いて、溶融曲線である。ｑＰＣＲサイクラーのソフトウェアを使用して、データを分析する。ＡＡＶ試料（ウイルスゲノム（ｖｇ）／ｍｌ）の物理的力価は、標準曲線に基づいて計算される。
精製したＡＡＶベクターをＤＮａｓｅＩで処理して、残留プラスミドの混入を排除する。一連のＡＡＶベクターの希釈を、１００倍、５００倍、２５００倍、及び１２５００倍で実施する。ＡＡＶプラスミド骨格を希釈して、段階希釈によって標準曲線を生成する。プラスミドを１０４、１０５、１０６、１０７、及び１０８分子／μＬに希釈する。ｑＰＣＲを、希釈したＡＡＶベクター及び希釈したＡＡＶプラスミドに対して実施する。使用するプライマーは、ＩＴＲ領域（フォワードＩＴＲプライマー、５’－ＧＧＡＡＣＣＣＣＴＡＧＴＧＡＴＧＧＡＧＴＴ（配列番号３３）、リバースＩＴＲプライマー、５’－ＣＧＧＣＣＴＣＡＧＴＧＡＧＣＧＡ（配列番号３４））に対するものである。ｑＰＣＲミックスは、１０μＬのユニバーサルＳＹＢＲマスターミックス２Ｘ、２μＬの５μＭフォワードＩＴＲプライマー、２μＬの５μＭリバースＩＴＲプライマー、５μＬの試験試料又は希釈した標準物質、及び１μＬのＨ２Ｏを含む。ｑＰＣＲのプログラムは、９５℃で１０分間、続いて、９５℃で１５秒間、６０℃で３０秒間を４０サイクル、続いて、溶融曲線である。ｑＰＣＲサイクラーのソフトウェアを使用して、データを分析する。ＡＡＶ試料（ウイルスゲノム（ｖｇ）／ｍｌ）の物理的力価は、標準曲線に基づいて計算される。
ＡＡＶベクターの感染率は、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ；Ｍａｎａｓｓａｓ、ＶＡ）からの標準的なプロトコルを使用して実施される５０％組織培養感染用量（ＴＣＩＤ５０）アッセイを使用して試験する。
実施例７．ＡＡＶ用量範囲の試験（インビボ）
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、運動皮質への両側頭蓋内注入により、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに注入する。各ＡＡＶは、１μＬの体積で、１×１０１１、３×１０１１、１×１０１２、３×１０１２、１×１０１２、３×１０１２、１×１０１３ウイルスゲノム／ｍＬの投与量で注入される。各投与量を、注入後４日、２０日、及び６０日で評価して、細胞及び組織レベルでの最適有効用量（ＯＥＤ）、最大耐容用量（ＭＴＤ）、及び最小有効用量（ＭＥＤ）を決定する。時点ごとに３匹のマウスが存在する。ＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤは、ＮｅｕｒｏＤ１、Ａｃｌ１、ＩＳＬ１、ＬＨＸ３、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮ、及びＩｂａ１の免疫染色を介して、アストロサイトからニューロンへの変換効率及び潜在的な毒性の評価によって決定される。第１の用量範囲がＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤを決定するのに十分でない場合、第２の用量範囲は、１μＬの体積で、１×１０１０ウイルスゲノム／ｍＬ～１×１０１４ＧＣ／ｍＬで行われる。
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、運動皮質への両側頭蓋内注入により、Ｃ５７／ＢＬ６マウスに注入する。各ＡＡＶは、１μＬの体積で、１×１０１１、３×１０１１、１×１０１２、３×１０１２、１×１０１２、３×１０１２、１×１０１３ウイルスゲノム／ｍＬの投与量で注入される。各投与量を、注入後４日、２０日、及び６０日で評価して、細胞及び組織レベルでの最適有効用量（ＯＥＤ）、最大耐容用量（ＭＴＤ）、及び最小有効用量（ＭＥＤ）を決定する。時点ごとに３匹のマウスが存在する。ＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤは、ＮｅｕｒｏＤ１、Ａｃｌ１、ＩＳＬ１、ＬＨＸ３、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮ、及びＩｂａ１の免疫染色を介して、アストロサイトからニューロンへの変換効率及び潜在的な毒性の評価によって決定される。第１の用量範囲がＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤを決定するのに十分でない場合、第２の用量範囲は、１μＬの体積で、１×１０１０ウイルスゲノム／ｍＬ～１×１０１４ＧＣ／ｍＬで行われる。
実施例８．ヒト細胞培養物中の様々なＡＡＶベクターから得られた組換えＡＡＶのニューロン変換率の比較（インビトロ）
ＡＡＶベクター構築物は、ＮｅｕｒｏＤ１単独、Ａｓｃｌ１単独、ＩＳＬ１単独、又はＬＨＸ３単独のいずれかを発現するように、実施例１に記載されるように設計される。組換えＡＡＶは、（１）ＮｅｕｒｏＤ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（２）Ａｓｃｌ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（３）ＩＳＬ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（４）ＬＨＸ３単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（５）ＡＡＶベクター構築物（１）、（２）、（３）、及び（４）の組み合わせ、（６）Ａｓｃｌ１と共にＮｅｕｒｏＤ１及びリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物、（７）ＩＳＬ１と共にＮｅｕｒｏＤ１及びリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物、（８）ＬＨＸ３と共にＮｅｕｒｏＤ１及びリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物について、実施例２に記載されているように得られる。得られた組換えＡＡＶを使用して、実施例３のヒト皮質アストロサイト及びヒト初代ミクログリア細胞に感染させる。細胞の感染の２４時間後、培地を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｎ２サプリメント（Ｇｉｂｃｏ）、及び２０ｎｇ／ｍＬの脳由来神経栄養因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む分化培地で置き換える。４日ごとに、分化培地を細胞培養物に添加する。Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１７：３９－４４（２００２）を参照されたい。細胞培養物中の空きスペースは、追加のヒトアストロサイトで満たされ、アストロサイト又はラット初代アストロサイトがニューロンに変換された場合、変換されたニューロンの機能的発生をサポートする。各処理のニューロン変換レベルが測定され、比較される。
ＡＡＶベクター構築物は、ＮｅｕｒｏＤ１単独、Ａｓｃｌ１単独、ＩＳＬ１単独、又はＬＨＸ３単独のいずれかを発現するように、実施例１に記載されるように設計される。組換えＡＡＶは、（１）ＮｅｕｒｏＤ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（２）Ａｓｃｌ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（３）ＩＳＬ１単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（４）ＬＨＸ３単独を発現するＡＡＶベクター構築物、（５）ＡＡＶベクター構築物（１）、（２）、（３）、及び（４）の組み合わせ、（６）Ａｓｃｌ１と共にＮｅｕｒｏＤ１及びリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物、（７）ＩＳＬ１と共にＮｅｕｒｏＤ１及びリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物、（８）ＬＨＸ３と共にＮｅｕｒｏＤ１及びリンカーを発現するＡＡＶベクター構築物について、実施例２に記載されているように得られる。得られた組換えＡＡＶを使用して、実施例３のヒト皮質アストロサイト及びヒト初代ミクログリア細胞に感染させる。細胞の感染の２４時間後、培地を、ＤＭＥＭ／Ｆ１２（Ｇｉｂｃｏ）、Ｎ２サプリメント（Ｇｉｂｃｏ）、及び２０ｎｇ／ｍＬの脳由来神経栄養因子（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含む分化培地で置き換える。４日ごとに、分化培地を細胞培養物に添加する。Ｓｏｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，４１７：３９－４４（２００２）を参照されたい。細胞培養物中の空きスペースは、追加のヒトアストロサイトで満たされ、アストロサイト又はラット初代アストロサイトがニューロンに変換された場合、変換されたニューロンの機能的発生をサポートする。各処理のニューロン変換レベルが測定され、比較される。
実施例９．ヒト対象におけるＡＡＶベクターの試験（インビボ）
実施例２から得られた組換えＡＡＶを使用して、インビボでヒト皮質アストロサイトに感染させる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１ｍＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の大脳皮質に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む脳の画像診断、並びに行動メトリックが、注入前、注入中、及び注入後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
実施例２から得られた組換えＡＡＶを使用して、インビボでヒト皮質アストロサイトに感染させる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１ｍＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の大脳皮質に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む脳の画像診断、並びに行動メトリックが、注入前、注入中、及び注入後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
実施例１０．非ヒト霊長類における用量スケールアッセイ
実施例７からのＮｅｕｒｏＤ１を発現する脳組織の体積を、ベクターゲノムの数で割ったもの（ｍｍ３／ベクターゲノム）を使用して、脳組織のウイルス感染率を決定する。非ヒト霊長類において処置される特定の脳領域の体積（ｍｍ３）を計算し、ベクターゲノムの用量範囲を、実施例７で得られた感染率に従ってスケーリングする。用量範囲試験は、実施例７のように実施され、ＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤは、ＮｅｕｒｏＤ１、Ａｓｃｌ１、ＩＳＬ１、ＬＨＸ３、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮ、及びＩｂａ１の免疫染色を介して、アストロサイトから神経細胞への変換効率及び潜在的な毒性の評価によって決定される。
実施例７からのＮｅｕｒｏＤ１を発現する脳組織の体積を、ベクターゲノムの数で割ったもの（ｍｍ３／ベクターゲノム）を使用して、脳組織のウイルス感染率を決定する。非ヒト霊長類において処置される特定の脳領域の体積（ｍｍ３）を計算し、ベクターゲノムの用量範囲を、実施例７で得られた感染率に従ってスケーリングする。用量範囲試験は、実施例７のように実施され、ＯＥＤ、ＭＴＤ、及びＭＥＤは、ＮｅｕｒｏＤ１、Ａｓｃｌ１、ＩＳＬ１、ＬＨＸ３、ＧＦＡＰ、ＮｅｕＮ、及びＩｂａ１の免疫染色を介して、アストロサイトから神経細胞への変換効率及び潜在的な毒性の評価によって決定される。
実施例１１．パーキンソン病を有するそれを必要とする対象の治療（インビボ）
パーキンソン病を有する対象を、実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、発話の変化、振戦、制御不能な動き、認知機能の障害、及び書字の変化が含まれる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の大脳皮質に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状及び行動メトリックは、注射前、注射中、及び注射後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
パーキンソン病を有する対象を、実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、発話の変化、振戦、制御不能な動き、認知機能の障害、及び書字の変化が含まれる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の大脳皮質に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状及び行動メトリックは、注射前、注射中、及び注射後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
実施例１２．脳卒中を有するそれを必要とする対象の治療（インビボ）
脳卒中を有する対象を、実施例２の方法から得られた第１のＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列を含む組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、発話の変化及び書字の変化が含まれる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の大脳皮質に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状及び行動メトリックは、注射前、注射中、及び注射後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
脳卒中を有する対象を、実施例２の方法から得られた第１のＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２のＮｅｕｒｏＤ１配列を含む組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、発話の変化及び書字の変化が含まれる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の大脳皮質に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状及び行動メトリックは、注射前、注射中、及び注射後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
実施例１３．脊髄傷害を有するそれを必要とする対象の治療（インビボ）
脊髄傷害を有する対象を、実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、随意運動の障害が含まれる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の脊髄に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む脊髄の画像診断、並びに行動メトリックが、注入前、注入中、及び注入後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
脊髄傷害を有する対象を、実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶで処置する。対象の神経学的症状には、随意運動の障害が含まれる。組換えＡＡＶは、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度範囲で、１０μＬ～１０００μＬの範囲の体積で、神経学的状態を有するヒト対象の脊髄に注入される。ヒト対象の神経学的状態の症状、ＭＲＩ、ＰＥＴスキャン、又はＭＲＩ及びＰＥＴの組み合わせを含む脊髄の画像診断、並びに行動メトリックが、注入前、注入中、及び注入後に観察される。注入後の観察は、注入後最初の月まで、週に１回行われる。注入後の最初の月の後、観察は、次の１１ヶ月間、月に１回行われ、ウイルス注入後、２年まで延長され得る。
実施例１４．Ｐ３５のＡＡＶウイルス産生
組換えＡＡＶは、実施例２に記載されるように得られる。Ｐ３５プラスミドを、血清型９カプシドタンパク質を発現するＲｅｐ－Ｃａｐプラスミド及びヘルパープラスミドＰ４０Ｈｅｌｐｅｒ（Ｐ４０Ｈ）又はｐＡＬＤ－Ｘ８０（ｘ８０）と共に、ＡＡＶ２９３細胞に共トランスフェクトして、組換えＡＡＶウイルス粒子（Ｐ３５－Ｐ４０Ｈ又はＰ３５－Ｘ８０）を産生する。ウイルス収率は、目的の遺伝子（ＧＯＩ）増幅するプライマー、Ｐ３４プラスミド及びＩＴＲ領域に特異的なプライマーを使用して、ｑＰＣＲによって決定される。リバースパッケージングプライマーは、非特異的パッケージングを評価するために使用される。Ｘ８０ヘルパープラスミドでは、Ｐ４０Ｈヘルパープラスミドと比較して、ウイルス産生の増加が観察される（図１７）。
組換えＡＡＶは、実施例２に記載されるように得られる。Ｐ３５プラスミドを、血清型９カプシドタンパク質を発現するＲｅｐ－Ｃａｐプラスミド及びヘルパープラスミドＰ４０Ｈｅｌｐｅｒ（Ｐ４０Ｈ）又はｐＡＬＤ－Ｘ８０（ｘ８０）と共に、ＡＡＶ２９３細胞に共トランスフェクトして、組換えＡＡＶウイルス粒子（Ｐ３５－Ｐ４０Ｈ又はＰ３５－Ｘ８０）を産生する。ウイルス収率は、目的の遺伝子（ＧＯＩ）増幅するプライマー、Ｐ３４プラスミド及びＩＴＲ領域に特異的なプライマーを使用して、ｑＰＣＲによって決定される。リバースパッケージングプライマーは、非特異的パッケージングを評価するために使用される。Ｘ８０ヘルパープラスミドでは、Ｐ４０Ｈヘルパープラスミドと比較して、ウイルス産生の増加が観察される（図１７）。
実施例１５．ラットアストロサイト初代培養の樹立の成功
皮質及び線条体の組織を、生後３日のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの脳から単離する。組織を、パパインで処理して、単一細胞懸濁液を生成し、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたフラスコに播種する。細胞を、ＧＦＡＰ抗体及びＳＯＸ９抗体で免疫染色する。細胞を、ＤＡＰＩ抗体で対比染色する。ＧＦＡＰ及びＳＯＸ９染色によって同定された細胞の９５％超がアストロサイトである（図１８）。左端のパネルは、ＧＦＡＰ染色細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＳＯＸ９染色細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＤＡＰＩ染色細胞の画像を提示する。右端のパネルは、ＧＦＡＰ、ＳＯＸ９、及びＤＡＰＩ染色細胞の重ね合わせ画像を提示する。
皮質及び線条体の組織を、生後３日のＳｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙラットの脳から単離する。組織を、パパインで処理して、単一細胞懸濁液を生成し、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたフラスコに播種する。細胞を、ＧＦＡＰ抗体及びＳＯＸ９抗体で免疫染色する。細胞を、ＤＡＰＩ抗体で対比染色する。ＧＦＡＰ及びＳＯＸ９染色によって同定された細胞の９５％超がアストロサイトである（図１８）。左端のパネルは、ＧＦＡＰ染色細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＳＯＸ９染色細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＤＡＰＩ染色細胞の画像を提示する。右端のパネルは、ＧＦＡＰ、ＳＯＸ９、及びＤＡＰＩ染色細胞の重ね合わせ画像を提示する。
実施例１６．ラットアストロサイトのトランスフェクションの成功
Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃの標準的なプロトコルを使用して、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたガラスカバーリップを有する２４ウェルプレートに播種し、プラスミドＰ５（ｐＥＦ－１α：ｈＮｅｕｒｏＤ１：ＧＦＰ）、対照プラスミド、及びＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ試薬でトランスフェクトする。トランスフェクションの４８時間後、細胞を固定し、抗ＮｅｕｒｏＤ１抗体で免疫染色し、続いて、Ａｌｅｘａ－５６８でタグ付けされた二次抗体で免疫染色する。全ての細胞核を示すために、細胞をＤＡＰＩで対比染色する（図１９）。左パネルは、ＮＤ１で染色された細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＧＦＰ発現細胞の画像を提示する。右中央のパネルは、ＤＡＰＩ染色細胞を表す。右パネルは、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＰ、及びＤＡＰＩ染色細胞の重ね合わせ画像を提示する。
Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃの標準的なプロトコルを使用して、ポリ－Ｄ－リジンでコーティングされたガラスカバーリップを有する２４ウェルプレートに播種し、プラスミドＰ５（ｐＥＦ－１α：ｈＮｅｕｒｏＤ１：ＧＦＰ）、対照プラスミド、及びＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ ＬＴＸ試薬でトランスフェクトする。トランスフェクションの４８時間後、細胞を固定し、抗ＮｅｕｒｏＤ１抗体で免疫染色し、続いて、Ａｌｅｘａ－５６８でタグ付けされた二次抗体で免疫染色する。全ての細胞核を示すために、細胞をＤＡＰＩで対比染色する（図１９）。左パネルは、ＮＤ１で染色された細胞の画像を提示する。左中央のパネルは、ＧＦＰ発現細胞の画像を提示する。右中央のパネルは、ＤＡＰＩ染色細胞を表す。右パネルは、ＮｅｕｒｏＤ１、ＧＦＰ、及びＤＡＰＩ染色細胞の重ね合わせ画像を提示する。
実施例１７．プラスミドのトランスフェクションの比較
初代ラットアストロサイトを播種し、実施例１６に記載されるように、発現ベクターであるＰ６（ｐＥＦ－１α：ｈＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、Ｐ１１（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、Ｐ３５（ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、及びＰ３９（ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）でトランスフェクションして、ＮｅｕｒｏＤ１の細胞へのトランスフェクション効率を試験する。Ｐ１１は、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色によって示される最高のＮｅｕｒｏＤ１発現をもたらした（図２０；上部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色を示し、下部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１及びＤＡＰＩ染色の重ね合わせを示す）。
初代ラットアストロサイトを播種し、実施例１６に記載されるように、発現ベクターであるＰ６（ｐＥＦ－１α：ｈＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、Ｐ１１（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、Ｐ３５（ＥＦ－１α：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）、及びＰ３９（ＥＦ－１α：Ｇｆａ１．６：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）でトランスフェクションして、ＮｅｕｒｏＤ１の細胞へのトランスフェクション効率を試験する。Ｐ１１は、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色によって示される最高のＮｅｕｒｏＤ１発現をもたらした（図２０；上部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１染色を示し、下部パネルは、細胞のＮｅｕｒｏＤ１及びＤＡＰＩ染色の重ね合わせを示す）。
実施例１８．初代ラットアストロサイトへのＡＡＶウイルス粒子の形質導入の成功
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）からの対照ウイルス粒子を使用して、９６ウェルプレート中１００μｌの培地中で、３×１０１０ｖｇ／ウェル、１×１０１０ｖｇ／ウェル、２．５×１０１９ｖｇ／ウェルのいずれかの用量で初代ラットアストロサイトに形質導入する。継代５～７のＲＣＡを、形質導入の２４時間前に、５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞は、新鮮なアストロサイト培地中で、指定された力価のウイルスで形質導入される。培地を、翌日、及び３～４日ごとに交換する。ＧＦＰ陽性細胞の形質導入から６日後に取得した画像は、ウイルス力価が高い場合に形質導入率が高いことを示す（図２１）。
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）からの対照ウイルス粒子を使用して、９６ウェルプレート中１００μｌの培地中で、３×１０１０ｖｇ／ウェル、１×１０１０ｖｇ／ウェル、２．５×１０１９ｖｇ／ウェルのいずれかの用量で初代ラットアストロサイトに形質導入する。継代５～７のＲＣＡを、形質導入の２４時間前に、５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞は、新鮮なアストロサイト培地中で、指定された力価のウイルスで形質導入される。培地を、翌日、及び３～４日ごとに交換する。ＧＦＰ陽性細胞の形質導入から６日後に取得した画像は、ウイルス力価が高い場合に形質導入率が高いことを示す（図２１）。
実施例１９．初代ラットアストロサイトへのＡＡＶウイルス粒子の形質導入の定量分析
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、２４ウェルプレート又は９６ウェルプレートに播種した初代ラットアストロサイトに、ウイルス粒子ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）及びＡＡＶ５－Ｐ７（ｐＥＦ－１α：ＧＦＰ）で形質導入する。感染の７日後、細胞をトリプシン処理によって回収する。細胞を、固定し、洗浄し、ＰＢＳに懸濁する。全ての細胞と比較して、ＧＦＰ陽性細胞をカウントするために、フローサイトメトリーを使用してウイルス形質導入率を分析する（図２２Ａ～２２Ｂ）。図２２Ａは、５×１０５ｖｇ／細胞、２×１０５ｖｇ／細胞、及び５×１０４ｖｇ／細胞のＭＯＩにおけるＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）及びＡＡＶ５－Ｐ７（ｐＥＦ－１α：ＧＦＰ）の形質導入率（％）を提示する。図２２Ｂは、２×１０４細胞／ウェル、１．５×１０４細胞／ウェル、１×１０４細胞／ウェル、及び５×１０３細胞／ウェルの一連の密度で播種され、１００μｌの培地中で２μｌ、１μｌ、０．５μｌ、０．２５μｌ、０．１２５μｌの１×１０１３ｖｇ／ｍｌウイルスの一連の量のウイルスで感染した細胞におけるＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）の形質導入率（％）を示す。
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、２４ウェルプレート又は９６ウェルプレートに播種した初代ラットアストロサイトに、ウイルス粒子ＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）及びＡＡＶ５－Ｐ７（ｐＥＦ－１α：ＧＦＰ）で形質導入する。感染の７日後、細胞をトリプシン処理によって回収する。細胞を、固定し、洗浄し、ＰＢＳに懸濁する。全ての細胞と比較して、ＧＦＰ陽性細胞をカウントするために、フローサイトメトリーを使用してウイルス形質導入率を分析する（図２２Ａ～２２Ｂ）。図２２Ａは、５×１０５ｖｇ／細胞、２×１０５ｖｇ／細胞、及び５×１０４ｖｇ／細胞のＭＯＩにおけるＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）及びＡＡＶ５－Ｐ７（ｐＥＦ－１α：ＧＦＰ）の形質導入率（％）を提示する。図２２Ｂは、２×１０４細胞／ウェル、１．５×１０４細胞／ウェル、１×１０４細胞／ウェル、及び５×１０３細胞／ウェルの一連の密度で播種され、１００μｌの培地中で２μｌ、１μｌ、０．５μｌ、０．２５μｌ、０．１２５μｌの１×１０１３ｖｇ／ｍｌウイルスの一連の量のウイルスで感染した細胞におけるＡＡＶ９－Ｐ１２（ｐＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＧＦＰ）の形質導入率（％）を示す。
実施例２０．ＮｅｕｒｏＤ１を含むＡＡＶウイルス粒子の初代ラットアストロサイトへの形質導入の成功
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、２４ウェルプレートに播種された初代ラットアストロサイトに、ウイルス粒子１）ＡＡＶ５－Ｐ１（ＡＡＶ５：ｐＧｆａ２．２：ｃｒｅ）及びＡＡＶ５－Ｐ４（ＡＡＶ５：ｐＣＡＧ：ｆｌｅｘ：ｈＮｅｕｒｏＤ１：ＧＦＰ）、２）ＡＡＶ９－Ｐ９（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＦＰ）、及び３）ＡＡＶ９－Ｐ１１（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）で形質導入する。１×１０６ｖｇ／細胞のＭＯＩでウイルス粒子に感染した細胞を、感染後６日に固定し、ＮｅｕｒｏＤ１で免疫染色する。全ての細胞を示すために、細胞をＤＡＰＩで対比染色する（図２３）。
実施例２の方法から得られた組換えＡＡＶを、２４ウェルプレートに播種された初代ラットアストロサイトに、ウイルス粒子１）ＡＡＶ５－Ｐ１（ＡＡＶ５：ｐＧｆａ２．２：ｃｒｅ）及びＡＡＶ５－Ｐ４（ＡＡＶ５：ｐＣＡＧ：ｆｌｅｘ：ｈＮｅｕｒｏＤ１：ＧＦＰ）、２）ＡＡＶ９－Ｐ９（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＧＦＰ）、及び３）ＡＡＶ９－Ｐ１１（ＣＥ：ＧｆａＡＢＣ１Ｄ：ＮｅｕｒｏＤ１：ＷＰＲＥ：ＳＶ４０）で形質導入する。１×１０６ｖｇ／細胞のＭＯＩでウイルス粒子に感染した細胞を、感染後６日に固定し、ＮｅｕｒｏＤ１で免疫染色する。全ての細胞を示すために、細胞をＤＡＰＩで対比染色する（図２３）。
実施例２１．インビトロでのＮｅｕｒｏＤ１ベクターによって誘導された導入遺伝子の発現及びアストロサイトからニューロンへの変換
材料及び方法
初代ラットアストロサイト培養：ラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）は、生後３日のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの皮質組織から単離される。細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、３．５ｍＭのグルコース、ペニシリン／ストレプトマイシンで補充されたＤＭＥＭからなるアストロサイト培地（ＡＭ）中で維持される。細胞は、残存する前駆細胞の分化を促進するために、低細胞密度で、最初の２回の継代について１：３～１：４の比率で継代培養される。その後の継代培養は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：２又は１：３の比である。継代５～７の細胞は、トランスフェクション及び形質導入に使用される。ＧＦＡＰ抗体による免疫染色は、９０％超の細胞がＧＦＡＰ陽性アストロサイトであることを示す。培養アストロサイトは、継代６でアストロサイトのマーカーであるＧＦＡＰ及びＳｏｘ９で免疫染色される（図１８）。
材料及び方法
初代ラットアストロサイト培養：ラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）は、生後３日のＳｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙラットの皮質組織から単離される。細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、３．５ｍＭのグルコース、ペニシリン／ストレプトマイシンで補充されたＤＭＥＭからなるアストロサイト培地（ＡＭ）中で維持される。細胞は、残存する前駆細胞の分化を促進するために、低細胞密度で、最初の２回の継代について１：３～１：４の比率で継代培養される。その後の継代培養は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：２又は１：３の比である。継代５～７の細胞は、トランスフェクション及び形質導入に使用される。ＧＦＡＰ抗体による免疫染色は、９０％超の細胞がＧＦＡＰ陽性アストロサイトであることを示す。培養アストロサイトは、継代６でアストロサイトのマーカーであるＧＦＡＰ及びＳｏｘ９で免疫染色される（図１８）。
ベクター：ＡＡＶは、選択されたベクターで産生され、ラットアストロサイトを使用してインビトロで試験される：
●ＮＸＬ－Ｐ９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＲＰＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３５（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＲＰＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３７（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１０７（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１０８（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１０９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３６（ＥＥ－Ｇｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３８（ＥＥ－Ｇｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ２２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＲＰＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３５（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ＷＲＰＥ－ＳＶ４０ｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ３７（ＥＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ
●ＮＸＬ－Ｐ１０７（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１０８（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１０９（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３０（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３６（ＥＥ－Ｇｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１３８（ＥＥ－Ｇｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＮＤ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
ウイルスの産生：インビトロ試験に使用されるウイルスは、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いた三重トランスフェクション（ＧＯＩ、ヘルパー、及びＲｅｐ／Ｃａｐプラスミド）によって、付着性ＡＡＶ２９３細胞を使用して産生される。ウイルスの回収及び精製は、超遠心分離又は市販の精製キットの使用によって達成される。
具体的には、トランスフェクションの２４時間前に、ＡＡＶ２９３細胞（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、カタログ番号ＡＡＶ－１００）を、１５ｃｍの培養皿に播種する。７０～８５％コンフルエントの細胞を、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を使用して、１：４のＤＮＡ：ＰＥＩ比で、ディッシュ当たり１０ｕｇのＧＯＩ、１０ｕｇのＲｅｐ／Ｃａｐ、及び１４ｕｇのｐＡＬＤ－Ｘ８０（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）又はｐＨｅｌｐｅｒ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）でトランスフェクトする。産生のために、必要なスケールに基づいて、複数のディッシュをトランスフェクトする。培養培地を、毎日交換する。トランスフェクションの７２時間後、細胞を、回収し、溶解して、製造元のプロトコルに従ってＡＡＶｐｒｏ精製キット（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６６６６、６６７５、６２３５）を使用してウイルスを採取する。
ウイルス力価は、ＩＴＲ領域のプライマー対、目的の遺伝子（ＧＯＩ）を増幅するプライマー、又はベクターに特異的なプライマーを使用して、リアルタイムの定量ＰＣＲによって決定される。標準物質として、プラスミドＤＮＡを使用した。産生収率は、約１０３～１０４ｖｇ／細胞レベルである。図４５は、ｑＰＣＲによって測定されるように、Ｐ１３４、Ｐ１３０、Ｐ１３８及びＰ２１プラスミドの各々を、血清型９カプシドタンパク質を発現するＲｅｐ－Ｃａｐプラスミド及び組換えＡＡＶウイルス粒子を産生したヘルパープラスミドｐＡＬＤ－Ｘ８０（Ｘ８０）で、ＡＡＶ２９３細胞に共トランスフェクトした方法を示す。
トランスフェクション及び免疫蛍光：継代５～７のラット皮質アストロサイト（ＲＣＡ）を、トランスフェクションの２４～４８時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、製造業者のプロトコルに従って、リポフェクタミン試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５３３８）を使用して、３００ｎｇのベクターＤＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクションの２４～４８時間後、細胞を、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、抗ＮｅｕｒｏＤ１（抗ＮＤ１）抗体（Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ６０７０４）で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色する。画像は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下でキャプチャされる。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。
形質導入及び免疫蛍光：継代５～７のＲＣＡを、形質導入の２４～４８時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、新鮮なアストロサイト培地中２～６×１０１０ウイルスゲノム（ｖｇ）／ｍｌのＡＡＶで形質導入する。培地を、翌日、及び３～４日ごとに交換する。形質導入の３～６日後、細胞をＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、抗ＮＤ１抗体（Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ６０７０４）で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色し、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下で観察し、画像をキャプチャする。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。
アストロサイトからニューロンへの変換の評価形質導入の２４～４８時間前、継代５～７のＲＣＡを、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のポリ－Ｄ－リジン（ＰＤＬ）でコーティングされたガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、５００μｌの新鮮なアストロサイト培地（１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、３．５ｍＭのグルコース、ペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭ）中２～６×１０１０ｖｇ／ｍｌのウイルスで形質導入する。形質導入の４８時間後、培地を、５％ ＦＢＳのアストロサイト培地に交換する。その後、１００μｌの変換培地（ＤＭＥＭ／Ｆ１２＋１％のＦＢＳ＋Ｂ２７＋Ｎ２及び１ｕＭのＲｏｃｋ阻害剤及び１０ｎｇ／ｍｌのＢＤＮＦ）を４日間毎日添加する。４日後、培地を、変換培地と完全に置き換える。
細胞を、様々な所望の時点（３日間、形質導入の１～５週間後）で、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、ＮＤ１（Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ６０７０４）、ＮｅｕＮ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、カタログ番号ＡＢＮ７８）、Ｍａｐ２（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号ＰＡ５－１７６４６）に対する抗体で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色し、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下で観察及び撮像する。
インビトロ試験の結果：
試験したＮｅｕｒｏＤ１（ＮＤ１）プラスミドは全て、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を駆動するのに有効である（図２５～４１）。ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルは、ベクターのエレメントによって影響を受ける。ＧＦＡプロモーターの３つのバージョンのうち、６８１ｂｐプロモーターは、最も高いＮｅｕｒｏＤ１発現レベルを示し、１．６ｋｂプロモーターは、最も弱いＮｅｕｒｏＤ１発現レベルを示す。プロモーターエンハンサーエレメントは、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルに大幅に影響を及ぼす。ＣＭＶエンハンサーは、ｅｆ１αエンハンサーよりも、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルを上昇させる。キメライントロン及びＷＰＲＥもまた、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルを上昇させる。
試験したＮｅｕｒｏＤ１（ＮＤ１）プラスミドは全て、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を駆動するのに有効である（図２５～４１）。ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルは、ベクターのエレメントによって影響を受ける。ＧＦＡプロモーターの３つのバージョンのうち、６８１ｂｐプロモーターは、最も高いＮｅｕｒｏＤ１発現レベルを示し、１．６ｋｂプロモーターは、最も弱いＮｅｕｒｏＤ１発現レベルを示す。プロモーターエンハンサーエレメントは、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルに大幅に影響を及ぼす。ＣＭＶエンハンサーは、ｅｆ１αエンハンサーよりも、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルを上昇させる。キメライントロン及びＷＰＲＥもまた、ＮｅｕｒｏＤ１の発現レベルを上昇させる。
試験したＮＤ１含有ＡＡＶは全て、ＮｅｕＮ及び／又はＭＡＰ２の陽性染色によって示されるように、ＮＤ１の発現を駆動し、培養ラットアストロサイトにおいてアストロサイトからニューロンへの変換を誘導するのに有効である（図２７、３０、３２、３５、及び３８）。アストロサイトがより高いＮＤ１発現を駆動するベクターによって形質導入されると、変換率がより高い。ベクターＮＸＬ－Ｐ１３４及びＮＸＬ－Ｐ１３８、並びにこれらのベクターを使用して生成されたウイルス（すなわち、それぞれＡＡＶ９－Ｐ１３４及びＡＡＶ９－Ｐ１３８）は、ＮＤ１の発現を駆動し、アストロサイトからニューロンへの変換を誘導するのに最も有効であり（図２５～３０）、ＡＡＶ－Ｐ１３４が最も有効である。ＮＤ１配列を含まないプラスミドＡＡＶ９－Ｐ２１（ＣＥ－ｐＧＦＡ６８１－ＣＩ－ＧＦＰ－ＷＰＲＥ－ＳＶ４０ｐＡ）を対照として使用し、これは、ＮｅｕＮ及び／又はＭａｐ２の陽性染色の欠如によって示されるように、アストロサイトからニューロンへの変換を誘導しない（図２４）。
ＮｅｕＮ／ＲＢＦＯＸ３（ニューロン核タンパク質）は、ニューロンの核及び核周囲の細胞質を染色するニューロン分化マーカーである。ＭＡＰ２（微小管関連タンパク質２）は、ニューロンの樹状突起を含む細胞質の微小管を染色する別のニューロンマーカーである。
ＮＤ１含有ＡＡＶによる形質導入の１週間後、少数のＮｅｕＮ及びＭＡＰ２陽性細胞（ニューロン）が観察される。２～３週間で、より多くのＮｅｕＮ／ＭＡＰ２陽性細胞が観察される。いくつかのＮｅｕＮ／ＭＡＰ２陽性細胞は、典型的なニューロン形態を示す。
実施例２２．インビボでのＮｅｕｒｏＤ１ウイルスベクターによって誘導された導入遺伝子の発現及びアストロサイトからニューロンへの変換
インビボ試験には、ＡＡＶ９－Ｐ１３４及びＡＡＶ９－Ｐ１３８ウイルスが使用される。ＧＦＡＰプロモーター下でＧＦＰ単独の発現を駆動する（ＮＤ１を含まない）ＡＡＶ９－Ｐ１２を、対照用に、かつＧＦＡＰを発現する細胞（アストロサイト）を同定するために使用する。
インビボ試験には、ＡＡＶ９－Ｐ１３４及びＡＡＶ９－Ｐ１３８ウイルスが使用される。ＧＦＡＰプロモーター下でＧＦＰ単独の発現を駆動する（ＮＤ１を含まない）ＡＡＶ９－Ｐ１２を、対照用に、かつＧＦＡＰを発現する細胞（アストロサイト）を同定するために使用する。
一本鎖アデノウイルス関連ウイルス（ｓｓＡＡＶ、略してＡＡＶ）ベクターであるＮＸＬ－Ｐ１２、ＮＸＬ－Ｐ１３４、及びＮＸＬ－Ｐ１３８は、ＡＡＶ、血清型９（ＡＡＶ９）にパッケージングされ、続いて、イオジキサノール勾配の超遠心分離及び濃縮される。精製されたＡＡＶウイルスは、定量ＰＣＲベースの方法を使用して滴定される。本試験で使用される全てのＡＡＶを、ＰＢＳ（ｐＨ７．４）中０．００１％のＰｌｕｒｏｎｉｃ Ｆ－６８（Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ １８８溶液、ＰＦＬ０１－１００ＭＬ、Ｃａｉｓｓｏｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｓｍｉｔｈｆｉｅｌｄ、ＵＴ、ＵＳＡ）で調製される。
８週超の正常なＣ５７ＢＬ／６Ｊマウスに、以下のようにＡＡＶ９－Ｐ１３４、ＡＡＶ－Ｐ１３８、及びＡＡＶ９－Ｐ１２ウイルスを注入する。
●Ｐ１２対照群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１３４群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１３８群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１２対照群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１３４群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
●Ｐ１３８群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３８ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質に１回の注入（片側）（ｎ＝６）
マウスを犠牲にし、感染後１０日（ｄｐｉ）及び３０ｄｐｉで脳皮質組織を分析する。動物を１．２５％のＡｖｅｒｔｉｎで麻酔し、次いで、最初に生理食塩水（０．９％のＮａＣｌ）、次いで、４％のパラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）で順次心内灌流した。脳を採取し、４％のＰＦＡ中で一晩固定し、２０％及び３０％のスクロースに、組織が沈むまで４℃で順次入れる。脱水された脳を、Ｏｐｔｉｍａｌ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ（Ｔｉｓｓｕｅ－Ｔｅｋ（登録商標）Ｏ．Ｃ．Ｔ．コンパウンド、Ｓａｋｕｒａ（登録商標）Ｆｉｎｅｔｅｋ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）に包埋し、次いで、３０μｍ厚で、クライオスタット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓｈａｎｇｈａｉ、Ｃｈｉｎａ）で、冠状面で連続的に薄片作製した。免疫蛍光の場合、浮遊脳切片を最初にＰＢＳで洗浄し、ＰＢＳ中で調製された５％の正常ロバ血清、３％のウシ血清アルブミン、及び０．３％のＴｒｉｔｏｎＸ－１００中で、室温（ＲＴ）で１時間ブロックし、次いで、ブロッキング溶液に希釈された一次抗体と、４℃で一晩インキュベートする。０．２％のＰＢＳＴ（ＰＢＳ中０．２％のＴｗｅｅｎ－２０）で更に洗浄した後、試料を、０．５μｇ／μＬの４’，６－ジアミジノ－２－フェニルインドール（ＤＡＰＩ；Ｆ．Ｈｏｆｆｍａｎｎ－Ｌａ Ｒｏｃｈｅ、Ｎａｔｌｅｙ、ＮＪ、ＵＳＡ）、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ５５５にコンジュゲートされた適切なロバ抗マウス／ウサギ二次抗体、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ４８８にコンジュゲートされたヤギ抗ニワトリ二次抗体（１：１０００、Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ、ＵＳＡ）、及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ６４７（１：５００）にコンジュゲートされたヤギ抗ラット（Ｌｉｆｅ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）／モルモット（Ｊａｃｋｓｏｎ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ）二次抗体と、室温で２時間インキュベートし、続いて、ＰＢＳで十分に洗浄する。試料を、最終的に、ＶＥＣＴＡＳＨＩＥＬＤ（登録商標）封入剤（ＶＥＣＴＯＲ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ、ＵＳＡ）で試料を封入し、マニキュアで密封する。代表的な画像は、共焦点顕微鏡（ＬＳＭ８８０、Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）で撮影される。使用した一次抗体は、以下の通りである：ラット抗ＧＦＡＰ（アストロサイトのマーカー、１：１０００、カタログ番号１３－０３００、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）、モルモット抗ＮｅｕＮ（ニューロンのマーカー、１：１０００、カタログ番号ＡＢＮ９０、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）、マウス抗ＮｅｕｒｏＤ１（１：５００、カタログ番号ａｂ６０７０４、Ａｂｃａｍ）、及びニワトリ抗ＧＦＰ（１：１０００、カタログ番号ａｂ１３９７０、Ａｂｃａｍ）。代表的な画像は、Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｐｌａｎ蛍光顕微鏡（Ａｘｉｏ Ｉｍａｇｅｒ Ｚ２、Ｚｅｉｓｓ、Ｇｏｔｔｉｎｇｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）又は共焦点顕微鏡（ＬＳＭ８８０、Ｚｅｉｓｓ、Ｊｅｎａ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のいずれかによってキャプチャされる。１匹のマウス当たり３つの脳切片（１群当たり３匹のマウス）から、４つの無作為に選択された視野（２１２μｍ×２１２μｍ、ＬＳＭ８８０共焦点顕微鏡から４００倍で取得）に基づいて定量分析を行う。データは、平均値±ＳＥＭとして示される。
ＧＦＰレポーターのみを発現する対照ウイルスであるＰ１２は、最初に、ＮｅｕｒｏＤ１を発現するウイルスであるＰ１３４及びＰ１３８（両方とも、Ｐ１２を一緒に添加して、変換されたニューロンを追跡する）と比較される。対照ウイルスＰ１２を無傷のマウス皮質に注入する場合、感染細胞は、１０ｄｐｉ（注入後の日数、図４２）では、主に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を伴わないアストロサイトである。対照的に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現は、Ｐ１３４及びＰ１３８の両群で明らかに検出される。１０ｄｐｉでは、Ｐ１３８群のほとんどのＮｅｕｒｏＤ１発現細胞は、依然としてアストロサイトであるが、Ｐ１３４群のＮｅｕＲｏＤ１発現細胞の一部は既にＮｅｕＮ＋ニューロンであり、Ｐ１３４がＰ１３８よりも優れた変換能力を有し得ることを示唆している。加えて、１０ｄｐｉでは、Ｐ１３４群のマウスの皮質脳組織の分析は、ＧＦＰ陽性細胞における長い突起の存在などの形態変化によって実証されるように、アストロサイトのニューロンへの高いレベルの変換を示す（図４２）。Ｐ１３８群は、より低いレベルの変換を示す。
ウイルス注入の３０日後、対照群（Ｐ１２）の感染細胞は、アストロサイトとして残っているが、Ｐ１３４群のＧＦＰ陽性細胞のほとんどは、ＮｅｕＮを発現するニューロンである。しかしながら、Ｐ１３８群の変換率は、Ｐ１３４群よりも低い。この段階でのＰ１３８群におけるほとんどの感染細胞は、まだアストロサイトであり、変換されたニューロンにおけるＧＦＰシグナルは弱い。加えて、３０ｄｐｉでは、Ｐ１３４群のマウスの皮質脳組織の分析は、ＧＦＰ陽性細胞における長いプロセスの存在によって実証されるように、アストロサイトのニューロンへの更に高いレベルの変換を示す（図４３）。
ＡＡＶ９－Ｐ１３４ウイルスはまた、両側傷害マウスモデルにおいても有効である。虚血性脳卒中は、皮質の各側に１μＬのエンドフィリン１，１－３１ａａ（１μｇ／μＬ）を注入することによって、正常なＣ５７ＢＬ／６Ｊマウス（８週齢超）において誘導される。マウスを、腹腔内注入によって２０ｍｇ／ｋｇの１．２５％のＡｖｅｒｔｉｎ（１２．５ｍｇ／ｍＬの２，２，２－トリブロモエタノールと２５μＬ／ｍＬの２－メチル－２－ブタノール（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ、ＵＳＡ）の混合物）で麻酔し、次いで、定位フレームに伏臥位で配置する。エンドセリン－１（ＥＴ－１）及びウイルスは、ガラスピペットを通して、座標＋０．２ｍｍ前側－後側（ＡＰ、ブレブマから）、－１．５ｍｍ内側－外側（ＭＬ、ブレグマから、左側）、－０．７ｍｍ背側－外側（ＤＶ硬膜から）の運動皮質に注入される。注入速度は、８０ｎＬ／分である。注入後、ピペットを約１０分間そのままにした後、ゆっくりと引き抜く。エンドセリン１の注入の７日後、マウスに以下のようにＡＡＶ９－Ｐ１２及びＡＡＶ９－Ｐ１３４ウイルスを注入する。
●Ｐ１２群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質の両側に１回の注入（両側）
●Ｐ１４群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質の両側に１回の注入（両側）
●Ｐ１２群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質の両側に１回の注入（両側）
●Ｐ１４群：ＡＡＶ９－Ｐ１２ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ＋ＡＡＶ９－Ｐ１３４ ２．５×１０１１ＧＣ／ｍｌ、１μＬ、皮質の両側に１回の注入（両側）
ウイルスの注入（ｄｐｉ）の１０日後、マウスを犠牲にし、脳皮質組織を分析した。対照ウイルスＰ１２をＥＴ－１損傷マウス皮質に注入する場合、感染細胞は、１０ｄｐｉ（注入後の日数、図４４）では、主に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現を伴わないアストロサイトである。対照的に、ＮｅｕｒｏＤ１の発現は、Ｐ１３４群で検出される。１０ｄｐｉでのＰ１３４群のマウスの皮質脳組織の分析は、長い突起の存在などのＧＦＰ陽性細胞で観察される形態変化によって実証されるように、アストロサイトのニューロンへの高いレベルの変換を示す（図４４）。
実施例２３．ＮｅｕｒｏＤ１／Ｉｓｌ１及びＮｅｕｒｏＤ１／Ａｓｃｌ１ベクターによって誘導されるインビトロ導入遺伝子発現
材料及び方法
細胞培養：Ｃ８－ＤＩＡ細胞
ＣＤ８－ＤＩＡ細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－２５４１）は、インビトロ自発的形質転換後の生後８日のマウス小脳の移植培養から樹立されたアストロサイト又はミクログリアの特性を有するクローン永久細胞株である。（Ａｌｌｉｏｔ Ｆ，Ｐｅｓｓａｃ Ｂ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３０６：２８３－２９１，１９８４．ＰｕｂＭｅｄ：６４６６９７７）。Ｃ８－ＤＩＡ細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭからなる培地中で、５％のＣＯ２を含む３７℃インキュベーターで維持される。細胞は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：５の比で継代培養される。Ｃ８－ＤＩＡ細胞は、初代ラットアストロサイトよりも高いトランスフェクション及び形質導入率を有し、ベクターの遺伝子発現を評価するための優れた代替物である。
材料及び方法
細胞培養：Ｃ８－ＤＩＡ細胞
ＣＤ８－ＤＩＡ細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－２５４１）は、インビトロ自発的形質転換後の生後８日のマウス小脳の移植培養から樹立されたアストロサイト又はミクログリアの特性を有するクローン永久細胞株である。（Ａｌｌｉｏｔ Ｆ，Ｐｅｓｓａｃ Ｂ．Ｂｒａｉｎ Ｒｅｓ．３０６：２８３－２９１，１９８４．ＰｕｂＭｅｄ：６４６６９７７）。Ｃ８－ＤＩＡ細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したＤＭＥＭからなる培地中で、５％のＣＯ２を含む３７℃インキュベーターで維持される。細胞は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：５の比で継代培養される。Ｃ８－ＤＩＡ細胞は、初代ラットアストロサイトよりも高いトランスフェクション及び形質導入率を有し、ベクターの遺伝子発現を評価するための優れた代替物である。
細胞培養：Ｌｅｃ２細胞
Ｌｅｃ２細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－１７３６ ）は、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞株に由来する上皮細胞株の変異クローンである。（Ｓｔａｎｌｅｙ Ｐ，Ｓｉｍｉｎｏｖｉｔｃｈ Ｌ．Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．３：３９１－４０５，１９７７．ＰｕｂＭｅｄ：６０１６７９）。Ｌｅｃ２細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したαＭＥＭからなる培地中で、５％のＣＯ２を含む３７℃インキュベーターで維持される。細胞は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：５の比で継代培養される。Ｌｅｃ２細胞は、高効率でトランスフェクトされ、形質導入され得る。それらは、ベクターの遺伝子発現を評価するためのアストロサイトの優れた代替物である。
Ｌｅｃ２細胞（ＡＴＣＣ、カタログ番号ＣＲＬ－１７３６ ）は、ＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞株に由来する上皮細胞株の変異クローンである。（Ｓｔａｎｌｅｙ Ｐ，Ｓｉｍｉｎｏｖｉｔｃｈ Ｌ．Ｓｏｍａｔｉｃ Ｃｅｌｌ Ｇｅｎｅｔ．３：３９１－４０５，１９７７．ＰｕｂＭｅｄ：６０１６７９）。Ｌｅｃ２細胞は、１０％のＦＢＳ、２．５ｍＭのグルタミン、及びペニシリン／ストレプトマイシンを補充したαＭＥＭからなる培地中で、５％のＣＯ２を含む３７℃インキュベーターで維持される。細胞は、９０～１００％コンフルエントに達した場合、１：５の比で継代培養される。Ｌｅｃ２細胞は、高効率でトランスフェクトされ、形質導入され得る。それらは、ベクターの遺伝子発現を評価するためのアストロサイトの優れた代替物である。
ベクター：ベクターを、Ｃ８－ＤＩＡ細胞又はＬｅｃ２細胞のトランスフェクションにより試験する。加えて、ＡＡＶは、選択されたベクターで産生され、形質導入を介してインビトロで試験される：
●ＮＸＬ－Ｐ１４１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＩｓｌ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＩｓｌ１－ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４３（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＩｓｌ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＩｓｌ１－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１８１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ｈＩｓｌ１－ＳｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４３（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＩｓｌ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＩｓｌ１－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１５１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＡｓｃｌ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１５２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＡｓｃｌ１－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＩｓｌ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＩｓｌ１－ｐ２Ａ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４３（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＩｓｌ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＩｓｌ１－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１８１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ｈＩｓｌ１－ＳｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４３（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＮＤ１－ｐ２Ａ－ｈＩｓｌ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１４４（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＩｓｌ１－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１５１（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＲＧＩ－ｈＡｓｃｌ１－ｏＰＲＥ－ｂＧＨｐＡ）
●ＮＸＬ－Ｐ１５２（ＣＥ－ｐＧｆａ６８１－ＣＩ－ｈＡｓｃｌ１－ＩＲＥＳ－ｈＮＤ１－ｂＧＨｐＡ）
ウイルスの産生：インビトロ試験に使用されるウイルスは、ポリエチレンイミン（ＰＥＩ）を用いた三重トランスフェクション（ＧＯＩ、ヘルパー、及びＲｅｐ／Ｃａｐプラスミド）によって、付着性ＡＡＶ２９３細胞を使用して産生される。ウイルスの回収及び精製は、超遠心分離又は市販の精製キットの使用によって達成される。
具体的には、トランスフェクションの２４時間前に、ＡＡＶ２９３細胞（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ、カタログ番号ＡＡＶ－１００）を、７０～８５％コンフルエントで１５ｃｍの培養皿に播種する。細胞を、ＰＥＩを使用して、１：４のＤＮＡ：ＰＥＩ比で、ディッシュ当たり１０ｕｇのＧＯＩ、１０ｕｇのＲｅｐ／Ｃａｐ、及び１４ｕｇのｐＡＬＤ－Ｘ８０（Ａｌｄｅｖｒｏｎ）又はｐＨｅｌｐｅｒ（Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌａｂｓ）でトランスフェクトする。産生のために、必要なスケールに基づいて、複数のディッシュをトランスフェクトする。培養培地を、毎日交換する。トランスフェクションの７２時間後、細胞を、回収し、溶解して、製造元のプロトコルに従ってＡＡＶｐｒｏ精製キット（Ｔａｋａｒａ、カタログ番号６６６６、６６７５、６２３５）を使用してウイルスを回収する。ウイルス力価は、ＩＴＲ領域のプライマー対又はベクターに特異的なプライマーを使用して、リアルタイムの定量ＰＣＲによって決定される。標準物質として、プラスミドＤＮＡを使用する。ウイルス産生収率は、約１０３～１０４ｖｇ／細胞レベルである。
トランスフェクション及び免疫蛍光：Ｌｅｃ２細胞を、形質導入の２４時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、製造元のプロトコルに従って、Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ試薬（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ、カタログ番号１５３３８）を使用して、各々５００ｎｇのプラスミドＤＮＡでトランスフェクトする。トランスフェクションの２４～４８時間後、細胞を、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、抗ＮＤ１抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ６０７０４）及び／又は抗Ｉｓｌ１抗体（ＤＳＨＢ、４０．２Ｄ６）及び／又は抗Ａｓｃｌ１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５５６６０４）で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色する。画像は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下でキャプチャされる。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。
形質導入及び免疫蛍光：Ｃ８－ＤＩＡ細胞を、形質導入の２４～４８時間前に、３０～５０％コンフルエントで、２４ウェルプレート中のガラスカバースリップ上に播種する。細胞を、新鮮な培地中２～６×１０１０ｖｇ／ｍｌのウイルスで形質導入する。培地を、翌日、及び３～４日ごとに交換する。トランスフェクションの３～６日後、細胞を、ＰＢＳ中４％のパラホルムアルデヒドで固定し、その後、洗浄し、抗ＮＤ１抗体（Ａｂｃａｍ、カタログ番号ａｂ６０７０４）及び／又は抗Ｉｓｌ１抗体（ＤＳＨＢ、４０．２Ｄ６）及び／又は抗Ａｓｃｌ１抗体（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、カタログ番号５５６６０４）で免疫染色し、続いて、蛍光色素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ）とコンジュゲートされた二次抗体で免疫染色する。画像は、蛍光顕微鏡（Ｚｅｉｓｓ Ａｘｉｏｖｅｒｔ Ａ１、Ｚｅｎ Ｂｌｕｅ）下でキャプチャされる。遺伝子発現レベルは、蛍光強度を比較することによって評価される。
インビトロ試験の結果：
試験されたｈＩｓ１及びｈＩｓｌ１／ｈＮＤ１構築物は、これらの細胞におけるｈＩｓｌ１及びｈＮＤ１の陽性状態によって示されるように、培養細胞のトランスフェクション及び／又は形質導入によってｈＩｓｌ１及び／又はｈＮＤ１の発現を駆動するのに有効である（図４６～４９、５１、及び５２）。試験されたｈＡｓｃｌ１及びｈＡｓｃｌ１／ｈＮＤ１構築物は、これらの細胞におけるｈＡｓｃｌ１及びｈＮＤ１の陽性染色によって示されるように、培養細胞のトランスフェクション及び／又は形質導入によってｈＡｓｃｌ１及び／又はｈＮＤ１の発現を駆動するのに有効である（図５３～５６）。
試験されたｈＩｓ１及びｈＩｓｌ１／ｈＮＤ１構築物は、これらの細胞におけるｈＩｓｌ１及びｈＮＤ１の陽性状態によって示されるように、培養細胞のトランスフェクション及び／又は形質導入によってｈＩｓｌ１及び／又はｈＮＤ１の発現を駆動するのに有効である（図４６～４９、５１、及び５２）。試験されたｈＡｓｃｌ１及びｈＡｓｃｌ１／ｈＮＤ１構築物は、これらの細胞におけるｈＡｓｃｌ１及びｈＮＤ１の陽性染色によって示されるように、培養細胞のトランスフェクション及び／又は形質導入によってｈＡｓｃｌ１及び／又はｈＮＤ１の発現を駆動するのに有効である（図５３～５６）。
本開示の組成物及び方法の様々な更なる修正及び改善は、当業者には明らかであろう。以下の非限定的な実施形態が想定される。
１． 配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
２．配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を有するＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
３．神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及び第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のタンパク質のコード配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のタンパク質のコード配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
４．ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
５．ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
６．治療を必要とする対象における治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、組成物。
７．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
８．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
９．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１０．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１１．当該グリア細胞が、反応性アストロサイトである、実施形態４又は５に記載の組成物。
１２．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態４又は５に記載の組成物。
１３．当該ヒトが、神経学的状態を有する、実施形態４又は５に記載の組成物。
１４．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１５．当該第２のタンパク質が、Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１）、及びＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ２）からなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１６．当該第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１７．当該Ａｓｃｌ１が、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）である、実施形態１６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１８．当該第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１９．当該ＩＳＬ１が、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）である、実施形態１８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２０．当該第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２１．当該ＬＨＸ３が、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）である、実施形態２０に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２２．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
２３．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２４．当該ｈＡｓｃｌ１が、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態１７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２５．当該ｈＩＳＬ１が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態１９に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２６．当該ｈＬＨＸ３が、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態２１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２７．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２８．当該ｈＡｓｃｌ１配列が、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２９．当該ｈＩＳＬ１配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１９に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３０．当該ｈＬＨＸ３配列が、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３１．当該リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３２．当該リンカーが、当該Ｐ２Ａである、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３３．当該リンカーが、当該Ｔ２Ａである、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３４．当該Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１９及び２２からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３５．当該Ｔ２Ａリンカーが、配列番号２０及び２３からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３６．当該ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３７．当該ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３８．当該ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、先行実施形態のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３９．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４０．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４１．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４２．当該エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４３．当該ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４４．当該ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４５．当該キメライントロンが、配列番号５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４６．当該キメライントロンが、配列番号２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４７．当該ＷＰＲＥが、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４８．当該ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ｈＧＨポリアデニル化シグナル、合成ポリアデニル化シグナル、及びｂＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４９．当該ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
５０．当該ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号２１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
５１．当該ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
５２．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
５３．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５４．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５５．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５６．当該ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５７．当該ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５８．組成物を必要とする当該対象が、哺乳動物である、実施形態６に記載の組成物。
５９．当該哺乳動物が、ヒトである、実施形態５８に記載の組成物。
６０．当該哺乳動物が、非ヒト霊長類である、実施形態５８に記載の組成物。
６１．組成物を必要とする当該対象が、神経学的状態を有する、実施形態６に記載の組成物。
６２．当該神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６３．当該神経学的状態が、ＣＮＳへの傷害を含む、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６４．当該神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６５．当該神経学的状態が、アルツハイマー病である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６６．当該神経学的状態が、パーキンソン病である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６７．当該神経学的状態が、ＡＬＳである、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６８．当該神経学的状態が、ハンチントン病である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６９．当該神経学的状態が、脳卒中である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
７０．当該脳卒中が、虚血性脳卒中である、実施形態６９に記載の組成物。
７１．当該脳卒中が、出血性脳卒中である、実施形態６９に記載の組成物。
７２．当該組成物が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、実施形態６１に記載の組成物。
７３．当該グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態７２に記載の組成物。
７４．当該グリア細胞が、アストロサイトである、実施形態７２に記載の組成物。
７５．当該アストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態７４に記載の組成物。
７６．当該グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、実施形態７２に記載の組成物。
７７．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態７２に記載の組成物。
７８．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態７２に記載の組成物。
７９．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロンである、実施形態７８に記載の組成物。
８０．当該組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、実施形態６に記載の組成物。
８１．当該組成物が、局所送達用に製剤化される、実施形態８０に記載の組成物。
８２．当該組成物が、全身送達用に製剤化される、実施形態８０に記載の組成物。
８３．当該組成物が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を介した送達用に製剤化される、実施形態８０～８２のいずれか１つに記載の組成物。
８４．実施形態６に記載の組成物を、それを必要とする当該対象に送達することを含む、方法。
８５．当該組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、実施形態８４に記載の方法。
８６．当該送達が、局所投与を含む、実施形態８４に記載の方法。
８７．当該送達が、全身投与を含む、実施形態８４に記載の方法。
８８．当該送達が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を含む、実施形態８４～８７のいずれか１つに記載の方法。
８９．生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含む、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、方法。
９０．生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２の核酸コード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含む、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。
９１．グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、
当該ベクターが、それを必要とする当該対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、方法。
９２．神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）ヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）それを必要とする当該対象へのＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。
９３．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
９４．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２である、実施形態９３に記載の方法。
９５．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型５である、実施形態９３に記載の方法。
９６．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型９である、実施形態９３に記載の方法。
９７．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンである、実施形態８９又は９０に記載の方法。
９８．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、実施形態９１又は９２に記載の方法。
９９．当該第２のタンパク質が、Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１）、及びＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ２）からなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１００．当該第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である、実施形態９９に記載の方法。
１０１．当該Ａｓｃｌ１が、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）である、実施形態１００に記載の方法。
１０２．当該第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である、実施形態９９に記載の方法。
１０３．当該ＩＳＬ１が、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）である、実施形態１０２に記載の方法。
１０４．当該第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である、実施形態９９に記載の方法。
１０５．当該ＬＨＸ３が、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）である、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１０７．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１０８．当該ｈＡｓｃｌ１が、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１０９．当該ｈＩＳＬ１が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態１０３に記載の方法。
１１０．当該ｈＬＨＸ３が、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１１１．当該ｈＡｓｃｌ１コード配列が、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１１２．当該ｈＩＳＬ１コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０３に記載の方法。
１１３．当該ｈＬＨＸ３コード配列が、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。
１１４．当該ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１１５．当該ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１１６．当該ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態８９～１１５のいずれか１つに記載の方法。
１１７．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１４に記載の方法。
１１８．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１４に記載の方法。
１１９．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１４に記載の方法。
１２０．当該リンカーが、Ｐ２Ａ又はＴ２Ａからなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２１．当該Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１９及び２２からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１２０に記載の方法。
１２２．当該Ｔ２Ａリンカーが、配列番号２０及び２３からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１２０に記載の方法。
１２３．当該エンハンサーが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２４．当該キメライントロンが、配列番号５若しくは２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２５．当該ＷＰＲＥが、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２６．当該ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８、２１、２６、又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２７．当該ベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２８．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１２９．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３０．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３１．当該ベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３２．当該ベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３３．当該変換が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系において生じる、実施形態９１に記載の方法。
１３４．当該変換が、ＣＮＳにおいて生じる、実施形態９１に記載の方法。
１３５．方法を必要とする当該対象が、哺乳動物である、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１３６．当該哺乳動物が、ヒトである、実施形態１３５に記載の方法。
１３７．当該哺乳動物が、非ヒト霊長類である、実施形態１３５に記載の方法。
１３８．当該送達が、局所投与を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１３９．当該送達が、全身投与を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４０．当該送達が、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、髄腔内投与、脳内投与、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内投与、鼻腔内投与、及び経口投与からなる群から選択される投与を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４１．当該注入が、腹腔内注入、筋肉内注入、静脈内注入、髄腔内注入、脳内注入、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内注入、鼻腔内注入、及び経口注入からなる群から選択される注入を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４２．当該送達が、注入を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４３．当該注入が、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度で行われる、実施形態８９、９０、又は１４２のいずれか１つに記載の方法。
１４４．当該注入が、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分の流量を更に含む、実施形態１４３に記載の方法。
１４５．当該少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイト及び少なくとも１つのＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態９１に記載の方法。
１４６．当該少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイトである、実施形態１４５に記載の方法。
１４７．当該少なくとも１つのアストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態１４５又は１４６に記載の方法。
１４８．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態９１に記載の方法。
１４９．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態８９、９０、又は１４８のいずれか１つに記載の方法。
１５０．当該対象が、当該送達前の当該対象と比較して、少なくとも１つの神経学的状態の症状の改善を示す、実施形態９１に記載の方法。
１５１．当該改善が、当該送達の１年以内に測定される、実施形態１５０に記載の方法。
１５２．当該方法が、当該ＡＡＶを当該対象の脳に直接注入することを含む、実施形態８９、９０、又は１４２のいずれか１つに記載の方法。
１５３．当該変換が、当該脳の大脳皮質におけるものである、実施形態８９又は９０に記載の方法。
１５４．当該方法が、当該ＡＡＶを当該対象の脊髄に直接注入することを含む、実施形態８９、９０、又は１４２のいずれか１つに記載の方法。
１５５．当該神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、実施形態９２に記載の方法。
１５６．当該神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、実施形態９２に記載の方法。
１５７．当該神経学的状態が、アルツハイマー病である、実施形態９２に記載の方法。
１５８．当該神経学的状態が、パーキンソン病である、実施形態９２に記載の方法。
１５９．当該神経学的状態が、ＡＬＳである、実施形態９２に記載の方法。
１６０．当該神経学的状態が、ハンチントン病である、実施形態９２に記載の方法。
１６１．当該神経学的状態が、脳卒中である、実施形態９２に記載の方法。
１６２．当該脳卒中が、虚血性脳卒中である、実施形態１６１に記載の方法。
１６３．当該脳卒中が、出血性脳卒中である、実施形態１６１に記載の方法。
１６４．当該方法が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、実施形態９２に記載の方法。
１６５．当該グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態１６４に記載の方法。
１６６．当該グリア細胞が、アストロサイトである、実施形態１６４に記載の方法。
１６７．当該アストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態１６６に記載の方法。
１６８．当該グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、実施形態１６４に記載の方法。
１６９．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態１６４に記載の方法。
１７０．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態１６９に記載の方法。
１７１．治療有効用量の当該ＡＡＶが、当該対象に注入される、実施形態８９又は９０に記載の方法。
１７２．治療有効用量の当該ＡＡＶが、当該対象に送達される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１７３．当該治療有効用量が、薬学的に許容される担体と共に投与される、実施形態１７１又は１７２に記載の方法。
１７４．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７５．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７６．配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７７．配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７８．（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１７９．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１３を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、実施形態１７８に記載の組成物。
１８０．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１１を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、実施形態１７８に記載の組成物。
１８１．（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１８２．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１４を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含む、実施形態１８１に記載の組成物。
１８３．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１２を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、実施形態１８１に記載の組成物。
１８４．当該合成ポリアデニル化シグナルが、配列番号３１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１． 配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
２．配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を有するＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
３．神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及び第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のタンパク質のコード配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のタンパク質のコード配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
４．ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
５．ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
６．治療を必要とする対象における治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、当該ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び第２の配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、組成物。
７．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
８．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
９．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１０．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９である、実施形態７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１１．当該グリア細胞が、反応性アストロサイトである、実施形態４又は５に記載の組成物。
１２．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態４又は５に記載の組成物。
１３．当該ヒトが、神経学的状態を有する、実施形態４又は５に記載の組成物。
１４．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１５．当該第２のタンパク質が、Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１）、及びＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ２）からなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
１６．当該第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１７．当該Ａｓｃｌ１が、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）である、実施形態１６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１８．当該第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
１９．当該ＩＳＬ１が、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）である、実施形態１８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２０．当該第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である、実施形態１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２１．当該ＬＨＸ３が、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）である、実施形態２０に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２２．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
２３．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２４．当該ｈＡｓｃｌ１が、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態１７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２５．当該ｈＩＳＬ１が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態１９に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２６．当該ｈＬＨＸ３が、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、実施形態２１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２７．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２８．当該ｈＡｓｃｌ１配列が、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
２９．当該ｈＩＳＬ１配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１９に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３０．当該ｈＬＨＸ３配列が、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態２１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３１．当該リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３２．当該リンカーが、当該Ｐ２Ａである、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３３．当該リンカーが、当該Ｔ２Ａである、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３４．当該Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１９及び２２からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３５．当該Ｔ２Ａリンカーが、配列番号２０及び２３からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３６．当該ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３７．当該ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
３８．当該ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、先行実施形態のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
３９．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４０．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４１．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４２．当該エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４３．当該ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４４．当該ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
４５．当該キメライントロンが、配列番号５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４６．当該キメライントロンが、配列番号２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４７．当該ＷＰＲＥが、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４８．当該ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ｈＧＨポリアデニル化シグナル、合成ポリアデニル化シグナル、及びｂＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
４９．当該ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
５０．当該ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号２１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
５１．当該ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
５２．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、実施形態３に記載のＡＡＶベクター、又は実施形態６に記載の組成物。
５３．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５４．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５５．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５６．当該ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５７．当該ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態１～３のいずれか１つに記載のＡＡＶベクター、又は実施形態４～６のいずれか１つに記載の組成物。
５８．組成物を必要とする当該対象が、哺乳動物である、実施形態６に記載の組成物。
５９．当該哺乳動物が、ヒトである、実施形態５８に記載の組成物。
６０．当該哺乳動物が、非ヒト霊長類である、実施形態５８に記載の組成物。
６１．組成物を必要とする当該対象が、神経学的状態を有する、実施形態６に記載の組成物。
６２．当該神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６３．当該神経学的状態が、ＣＮＳへの傷害を含む、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６４．当該神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６５．当該神経学的状態が、アルツハイマー病である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６６．当該神経学的状態が、パーキンソン病である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６７．当該神経学的状態が、ＡＬＳである、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６８．当該神経学的状態が、ハンチントン病である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
６９．当該神経学的状態が、脳卒中である、実施形態１３又は６１に記載の組成物。
７０．当該脳卒中が、虚血性脳卒中である、実施形態６９に記載の組成物。
７１．当該脳卒中が、出血性脳卒中である、実施形態６９に記載の組成物。
７２．当該組成物が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、実施形態６１に記載の組成物。
７３．当該グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態７２に記載の組成物。
７４．当該グリア細胞が、アストロサイトである、実施形態７２に記載の組成物。
７５．当該アストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態７４に記載の組成物。
７６．当該グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、実施形態７２に記載の組成物。
７７．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態７２に記載の組成物。
７８．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態７２に記載の組成物。
７９．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロンである、実施形態７８に記載の組成物。
８０．当該組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、実施形態６に記載の組成物。
８１．当該組成物が、局所送達用に製剤化される、実施形態８０に記載の組成物。
８２．当該組成物が、全身送達用に製剤化される、実施形態８０に記載の組成物。
８３．当該組成物が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を介した送達用に製剤化される、実施形態８０～８２のいずれか１つに記載の組成物。
８４．実施形態６に記載の組成物を、それを必要とする当該対象に送達することを含む、方法。
８５．当該組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、実施形態８４に記載の方法。
８６．当該送達が、局所投与を含む、実施形態８４に記載の方法。
８７．当該送達が、全身投与を含む、実施形態８４に記載の方法。
８８．当該送達が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を含む、実施形態８４～８７のいずれか１つに記載の方法。
８９．生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含む、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、方法。
９０．生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、当該ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２の核酸コード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含む、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。
９１．グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、
当該ベクターが、それを必要とする当該対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、方法。
９２．神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、当該対象に送達することを含み、当該ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、当該ＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２のタンパク質配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）ヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）それを必要とする当該対象へのＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。
９３．当該ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
９４．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２である、実施形態９３に記載の方法。
９５．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型５である、実施形態９３に記載の方法。
９６．当該ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型９である、実施形態９３に記載の方法。
９７．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンである、実施形態８９又は９０に記載の方法。
９８．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、実施形態９１又は９２に記載の方法。
９９．当該第２のタンパク質が、Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１）、及びＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ２）からなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１００．当該第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である、実施形態９９に記載の方法。
１０１．当該Ａｓｃｌ１が、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）である、実施形態１００に記載の方法。
１０２．当該第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である、実施形態９９に記載の方法。
１０３．当該ＩＳＬ１が、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）である、実施形態１０２に記載の方法。
１０４．当該第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である、実施形態９９に記載の方法。
１０５．当該ＬＨＸ３が、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）である、実施形態１０４に記載の方法。
１０６．当該ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１０７．当該ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１０８．当該ｈＡｓｃｌ１が、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１０９．当該ｈＩＳＬ１が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態１０３に記載の方法。
１１０．当該ｈＬＨＸ３が、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１１１．当該ｈＡｓｃｌ１コード配列が、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９８に記載の方法。
１１２．当該ｈＩＳＬ１コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０３に記載の方法。
１１３．当該ｈＬＨＸ３コード配列が、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１０５に記載の方法。
１１４．当該ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１１５．当該ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１１６．当該ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態８９～１１５のいずれか１つに記載の方法。
１１７．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１４に記載の方法。
１１８．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１４に記載の方法。
１１９．当該ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１１４に記載の方法。
１２０．当該リンカーが、Ｐ２Ａ又はＴ２Ａからなる群から選択される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２１．当該Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１９及び２２からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１２０に記載の方法。
１２２．当該Ｔ２Ａリンカーが、配列番号２０及び２３からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態１２０に記載の方法。
１２３．当該エンハンサーが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２４．当該キメライントロンが、配列番号５若しくは２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２５．当該ＷＰＲＥが、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２６．当該ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８、２１、２６、又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２７．当該ベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１２８．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１２９．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３０．当該ベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３１．当該ベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３２．当該ベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、実施形態８９～９２のいずれか１つに記載の方法。
１３３．当該変換が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系において生じる、実施形態９１に記載の方法。
１３４．当該変換が、ＣＮＳにおいて生じる、実施形態９１に記載の方法。
１３５．方法を必要とする当該対象が、哺乳動物である、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１３６．当該哺乳動物が、ヒトである、実施形態１３５に記載の方法。
１３７．当該哺乳動物が、非ヒト霊長類である、実施形態１３５に記載の方法。
１３８．当該送達が、局所投与を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１３９．当該送達が、全身投与を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４０．当該送達が、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、髄腔内投与、脳内投与、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内投与、鼻腔内投与、及び経口投与からなる群から選択される投与を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４１．当該注入が、腹腔内注入、筋肉内注入、静脈内注入、髄腔内注入、脳内注入、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内注入、鼻腔内注入、及び経口注入からなる群から選択される注入を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４２．当該送達が、注入を含む、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１４３．当該注入が、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度で行われる、実施形態８９、９０、又は１４２のいずれか１つに記載の方法。
１４４．当該注入が、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分の流量を更に含む、実施形態１４３に記載の方法。
１４５．当該少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイト及び少なくとも１つのＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態９１に記載の方法。
１４６．当該少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイトである、実施形態１４５に記載の方法。
１４７．当該少なくとも１つのアストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態１４５又は１４６に記載の方法。
１４８．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態９１に記載の方法。
１４９．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態８９、９０、又は１４８のいずれか１つに記載の方法。
１５０．当該対象が、当該送達前の当該対象と比較して、少なくとも１つの神経学的状態の症状の改善を示す、実施形態９１に記載の方法。
１５１．当該改善が、当該送達の１年以内に測定される、実施形態１５０に記載の方法。
１５２．当該方法が、当該ＡＡＶを当該対象の脳に直接注入することを含む、実施形態８９、９０、又は１４２のいずれか１つに記載の方法。
１５３．当該変換が、当該脳の大脳皮質におけるものである、実施形態８９又は９０に記載の方法。
１５４．当該方法が、当該ＡＡＶを当該対象の脊髄に直接注入することを含む、実施形態８９、９０、又は１４２のいずれか１つに記載の方法。
１５５．当該神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、実施形態９２に記載の方法。
１５６．当該神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、実施形態９２に記載の方法。
１５７．当該神経学的状態が、アルツハイマー病である、実施形態９２に記載の方法。
１５８．当該神経学的状態が、パーキンソン病である、実施形態９２に記載の方法。
１５９．当該神経学的状態が、ＡＬＳである、実施形態９２に記載の方法。
１６０．当該神経学的状態が、ハンチントン病である、実施形態９２に記載の方法。
１６１．当該神経学的状態が、脳卒中である、実施形態９２に記載の方法。
１６２．当該脳卒中が、虚血性脳卒中である、実施形態１６１に記載の方法。
１６３．当該脳卒中が、出血性脳卒中である、実施形態１６１に記載の方法。
１６４．当該方法が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、実施形態９２に記載の方法。
１６５．当該グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、実施形態１６４に記載の方法。
１６６．当該グリア細胞が、アストロサイトである、実施形態１６４に記載の方法。
１６７．当該アストロサイトが、反応性アストロサイトである、実施形態１６６に記載の方法。
１６８．当該グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、実施形態１６４に記載の方法。
１６９．当該ニューロンが、機能的なニューロンである、実施形態１６４に記載の方法。
１７０．当該機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、実施形態１６９に記載の方法。
１７１．治療有効用量の当該ＡＡＶが、当該対象に注入される、実施形態８９又は９０に記載の方法。
１７２．治療有効用量の当該ＡＡＶが、当該対象に送達される、実施形態９１又は９２に記載の方法。
１７３．当該治療有効用量が、薬学的に許容される担体と共に投与される、実施形態１７１又は１７２に記載の方法。
１７４．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７５．配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び当該第２の配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７６．配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７７．配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、当該第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び当該第２のコード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。
１７８．（ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
当該ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１７９．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１３を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、実施形態１７８に記載の組成物。
１８０．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１１を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、実施形態１７８に記載の組成物。
１８１．（ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
当該ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。
１８２．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１４を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含む、実施形態１８１に記載の組成物。
１８３．（ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１２を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、実施形態１８１に記載の組成物。
１８４．当該合成ポリアデニル化シグナルが、配列番号３１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、実施形態４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
Claims (184)
- 配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - 配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、前記第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を有するＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - 神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードするＮｅｕｒｏＤ１核酸コード配列及び第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のタンパク質のコード配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記ＡＡＶベクターが、配列番号６の核酸配列を有するヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。 - ヒトにおいて、グリア細胞を機能的なニューロンに変換するためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記ＡＡＶベクターが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含むヒトグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。 - 治療を必要とする対象における治療のためのアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、前記ＡＡＶベクターが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含み、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、組成物。 - 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２である、請求項７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５である、請求項７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９である、請求項７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記グリア細胞が、反応性アストロサイトである、請求項４又は５に記載の組成物。
- 前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性（ｓｅｒａｔｏｎｅｒｇｉｃ）ニューロン、エピネフリン作動性（ｅｐｉｎｅｐｈｒｉｎｅｒｇｉｃ）ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項４又は５に記載の組成物。
- 前記ヒトが、神経学的状態を有する、請求項４又は５に記載の組成物。
- 前記ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記第２のタンパク質が、Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１）、及びＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ２）からなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である、請求項１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記Ａｓｃｌ１が、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）である、請求項１６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である、請求項１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＩＳＬ１が、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）である、請求項１８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である、請求項１５に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＬＨＸ３が、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）である、請求項２０に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、請求項１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＡｓｃｌ１が、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、請求項１７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＩＳＬ１が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、請求項１９に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＬＨＸ３が、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードする核酸コード配列を含む、請求項２１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１４に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＡｓｃｌ１配列が、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１７に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＩＳＬ１配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１９に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＬＨＸ３配列が、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項２１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記リンカーが、Ｐ２Ａ及びＴ２Ａからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記リンカーが、前記Ｐ２Ａである、請求項３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記リンカーが、前記Ｔ２Ａである、請求項３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１９及び２２からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記Ｔ２Ａリンカーが、配列番号２０及び２３からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３１に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、先行請求項のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３６に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記エンハンサーが、ヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー及びサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ＥＦ１－αが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項４２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＣＭＶエンハンサーが、配列番号１７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項４２に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記キメライントロンが、配列番号５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記キメライントロンが、配列番号２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ＷＰＲＥが、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ポリアデニル化シグナルが、ＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、ｈＧＨポリアデニル化シグナル、合成ポリアデニル化シグナル、及びｂＧＨポリアデニル化シグナルからなる群から選択される、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号２１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ｈＧＨポリアデニル化シグナルが、配列番号２６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、請求項３に記載のＡＡＶベクター、又は請求項６に記載の組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
- 前記ＡＡＶベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項１～３のいずれか一項に記載のＡＡＶベクター、又は請求項４～６のいずれか一項に記載の組成物。
- 組成物を必要とする前記対象が、哺乳動物である、請求項６に記載の組成物。
- 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項５８に記載の組成物。
- 前記哺乳動物が、非ヒト霊長類である、請求項５８に記載の組成物。
- 組成物を必要とする前記対象が、神経学的状態を有する、請求項６に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、ＣＮＳへの傷害を含む、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、アルツハイマー病である、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、パーキンソン病である、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、ＡＬＳである、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、ハンチントン病である、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記神経学的状態が、脳卒中である、請求項１３又は６１に記載の組成物。
- 前記脳卒中が、虚血性脳卒中である、請求項６９に記載の組成物。
- 前記脳卒中が、出血性脳卒中である、請求項６９に記載の組成物。
- 前記組成物が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、請求項６１に記載の組成物。
- 前記グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、請求項７２に記載の組成物。
- 前記グリア細胞が、アストロサイトである、請求項７２に記載の組成物。
- 前記アストロサイトが、反応性アストロサイトである、請求項７４に記載の組成物。
- 前記グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、請求項７２に記載の組成物。
- 前記ニューロンが、機能的なニューロンである、請求項７２に記載の組成物。
- 前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項７２に記載の組成物。
- 前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロンである、請求項７８に記載の組成物。
- 前記組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、請求項６に記載の組成物。
- 前記組成物が、局所送達用に製剤化される、請求項８０に記載の組成物。
- 前記組成物が、全身送達用に製剤化される、請求項８０に記載の組成物。
- 前記組成物が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を介した送達用に製剤化される、請求項８０～８２のいずれか一項に記載の組成物。
- 請求項６に記載の組成物を、それを必要とする前記対象に送達することを含む、方法。
- 前記組成物が、それを必要とする対象に送達されるように製剤化される、請求項８４に記載の方法。
- 前記送達が、局所投与を含む、請求項８４に記載の方法。
- 前記送達が、全身投与を含む、請求項８４に記載の方法。
- 前記送達が、腹腔内、筋肉内、静脈内、髄腔内、脳内、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内、鼻腔内、又は経口投与を含む、請求項８４～８７のいずれか一項に記載の方法。
- 生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、前記ＡＡＶが、配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含む、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、方法。 - 生きているヒトの脳において、反応性アストロサイトを機能的なニューロンに変換する方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする対象に注入することを含み、前記ＡＡＶが、配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２の核酸コード配列が、
（ａ）配列番号４、１８、及び２７からなる群から選択される核酸配列を含む、ヒトグリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５又は２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号８の核酸配列を含むＳＶ４０ポリアデニル化シグナル、配列番号２１の核酸配列を含むｈＧＨポリアデニル化シグナル、配列番号３１を含む合成ポリアデニル化シグナル、又は配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。 - グリア細胞をニューロンに変換することを必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、それを必要とする前記対象に送達することを含み、前記ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２のタンパク質配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）エンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）ポリアデニル化シグナル配列と、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結され、
前記ベクターが、それを必要とする前記対象において、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、方法。 - 神経学的状態の治療を必要とする対象において、それを行う方法であって、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）を、前記対象に送達することを含み、前記ＡＡＶが、神経原性分化１（ＮｅｕｒｏＤ１）配列及び第２の配列を含むＤＮＡベクター構築物を含み、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２のタンパク質配列が、リンカー配列によって分離され、前記ＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２のタンパク質配列が、
（ａ）グリア線維性酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）ヒト伸長因子－１α（ＥＦ－１α）プロモーターからのエンハンサーと、
（ｃ）キメライントロンと、
（ｄ）ウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）それを必要とする前記対象へのＳＶ４０ポリアデニル化シグナルと、を含む発現制御エレメントに作動可能に連結される、方法。 - 前記ＡＡＶベクターが、ＡＡＶ血清型２、ＡＡＶ血清型５、及びＡＡＶ血清型９からなる群から選択される、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型２である、請求項９３に記載の方法。
- 前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型５である、請求項９３に記載の方法。
- 前記ＡＡＶが、ＡＡＶ血清型９である、請求項９３に記載の方法。
- 前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンである、請求項８９又は９０に記載の方法。
- 前記ＮｅｕｒｏＤ１が、ヒトＮｅｕｒｏＤ１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）である、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記第２のタンパク質が、Ａｃｈａｅｔｅ－ｓｃｕｔｅファミリーＢＨＬＨ転写因子１（Ａｓｃｌ１）、インスリン遺伝子エンハンサータンパク質（ＩＳＬ１）、及びＬＩＭホメオボックス３（ＬＨＸ２）からなる群から選択される、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記第２のタンパク質が、Ａｓｃｌ１である、請求項９９に記載の方法。
- 前記Ａｓｃｌ１が、ヒトＡｓｃｌ１（ｈＡｓｃｌ１）である、請求項１００に記載の方法。
- 前記第２のタンパク質が、ＩＳＬ１である、請求項９９に記載の方法。
- 前記ＩＳＬ１が、ヒトＩＳＬ１（ｈＩＳＬ１）である、請求項１０２に記載の方法。
- 前記第２のタンパク質が、ＬＨＸ３である、請求項９９に記載の方法。
- 前記ＬＨＸ３が、ヒトＬＨＸ３（ｈＬＨＸ３）である、請求項１０４に記載の方法。
- 前記ＮｅｕｒｏＤ１が、チンパンジーＮｅｕｒｏＤ１、ボノボＮｅｕｒｏＤ１、オランウータンＮｅｕｒｏＤ１、ゴリラＮｅｕｒｏＤ１、マカクＮｅｕｒｏＤ１、マーモセットＮｅｕｒｏＤ１、オマキザルＮｅｕｒｏＤ１、ヒヒＮｅｕｒｏＤ１、テナガザルＮｅｕｒｏＤ１、及びキツネザルＮｅｕｒｏＤ１からなる群から選択される、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ｈＮｅｕｒｏＤ１が、配列番号１０と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、請求項９８に記載の方法。
- 前記ｈＡｓｃｌ１が、配列番号１２と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、請求項９８に記載の方法。
- 前記ｈＩＳＬ１が、配列番号１４と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、請求項１０３に記載の方法。
- 前記ｈＬＨＸ３が、配列番号１６と少なくとも８０％同一又は類似のアミノ酸配列をコードするアミノ酸コード配列を含む、請求項１０５に記載の方法。前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、配列番号６又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９８に記載の方法。
- 前記ｈＡｓｃｌ１コード配列が、配列番号１１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９８に記載の方法。
- 前記ｈＩＳＬ１コード配列が、配列番号１３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１０３に記載の方法。
- 前記ｈＬＨＸ３コード配列が、配列番号１５又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１０５に記載の方法。
- 前記ＧＦＡＰプロモーターが、ヒトＧＦＡＰ（ｈＧＦＡＰ）プロモーターである、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ＧＦＡＰプロモーターが、チンパンジーＧＦＡＰプロモーター、ボノボＧＦＡＰプロモーター、オランウータンＧＦＡＰプロモーター、ゴリラＧＦＡＰプロモーター、マカクＧＦＡＰプロモーター、マーモセットＧＦＡＰプロモーター、オマキザルＧＦＡＰプロモーター、ヒヒＧＦＡＰプロモーター、テナガザルＧＦＡＰプロモーター、及びキツネザルＧＦＡＰプロモーターからなる群から選択される、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ＩＲＥＳ配列が、配列番号３又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項８９～１１５のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号４又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１１４に記載の方法。
- 前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号１８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１１４に記載の方法。
- 前記ｈＧＦＡＰプロモーターが、配列番号２７又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１１４に記載の方法。
- 前記リンカーが、Ｐ２Ａ又はＴ２Ａからなる群から選択される、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記Ｐ２Ａリンカーが、配列番号１９及び２２からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１２０に記載の方法。
- 前記Ｔ２Ａリンカーが、配列番号２０及び２３からなる群から選択される配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項１２０に記載の方法。
- 前記エンハンサーが、配列番号２又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記キメライントロンが、配列番号５若しくは２８又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ＷＰＲＥが、配列番号７及び３０からなる群から選択される核酸配列又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ＳＶ４０ポリアデニル化シグナルが、配列番号８、２１、２６、又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ベクターが、ＡＡＶタンパク質配列をコードする核酸配列を更に含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記ベクターが、ＡＡＶ血清型２の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベクターが、ＡＡＶ血清型５の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベクターが、ＡＡＶ血清型９の逆位末端反復（ＩＴＲ）を含む、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベクターが、配列番号１と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記ベクターが、配列番号９と少なくとも８０％同一の少なくとも１つのＩＴＲ核酸配列を含む、請求項８９～９２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記変換が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系において生じる、請求項９１に記載の方法。
- 前記変換が、ＣＮＳにおいて生じる、請求項９１に記載の方法。
- 方法を必要とする前記対象が、哺乳動物である、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１３５に記載の方法。
- 前記哺乳動物が、非ヒト霊長類である、請求項１３５に記載の方法。
- 前記送達が、局所投与を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記送達が、全身投与を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記送達が、腹腔内投与、筋肉内投与、静脈内投与、髄腔内投与、脳内投与、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内投与、鼻腔内投与、及び経口投与からなる群から選択される投与を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記注入が、腹腔内注入、筋肉内注入、静脈内注入、髄腔内注入、脳内注入、頭蓋内、側脳室内、大槽内、硝子体内、網膜下内、実質内注入、鼻腔内注入、及び経口注入からなる群から選択される注入を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記送達が、注入を含む、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記注入が、１０１０粒子／ｍＬ～１０１４粒子／ｍＬの濃度で行われる、請求項８９、９０、又は１４２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記注入が、０．１μＬ／分～５．０μＬ／分の流量を更に含む、請求項１４３に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイト及び少なくとも１つのＮＧ２細胞からなる群から選択される、請求項９１に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのグリア細胞が、少なくとも１つのアストロサイトである、請求項１４５に記載の方法。
- 前記少なくとも１つのアストロサイトが、反応性アストロサイトである、請求項１４５又は１４６に記載の方法。
- 前記ニューロンが、機能的なニューロンである、請求項９１に記載の方法。
- 前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項８９、９０、又は１４８のいずれか一項に記載の方法。
- 前記対象が、前記送達前の前記対象と比較して、少なくとも１つの神経学的状態の症状の改善を示す、請求項９１に記載の方法。
- 前記改善が、前記送達の１年以内に測定される、請求項１５０に記載の方法。
- 前記方法が、前記ＡＡＶを前記対象の前記脳に直接注入することを含む、請求項８９、９０、又は１４２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記変換が、前記脳の大脳皮質におけるものである、請求項８９又は９０に記載の方法。
- 前記方法が、前記ＡＡＶを前記対象の脊髄に直接注入することを含む、請求項８９、９０、又は１４２のいずれか一項に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、中枢神経系（ＣＮＳ）又は末梢神経系への傷害を含む、請求項９２に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、ハンチントン病、てんかん、身体的傷害、脳卒中、脳動脈瘤、外傷性脳傷害、脳振盪、腫瘍、炎症、感染、運動失調症、脳萎縮、脊髄萎縮、多発性硬化症、外傷性脊髄傷害、虚血性又は出血性脊髄症（脊髄症）、全虚血、低酸素性虚血性脳症、塞栓症、線維軟骨塞栓症脊髄症、血栓症、腎症、慢性炎症性疾患、髄膜炎、及び脳静脈洞血栓症からなる群から選択される、請求項９２に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、アルツハイマー病である、請求項９２に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、パーキンソン病である、請求項９２に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、ＡＬＳである、請求項９２に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、ハンチントン病である、請求項９２に記載の方法。
- 前記神経学的状態が、脳卒中である、請求項９２に記載の方法。
- 前記脳卒中が、虚血性脳卒中である、請求項１６１に記載の方法。
- 前記脳卒中が、出血性脳卒中である、請求項１６１に記載の方法。
- 前記方法が、少なくとも１つのグリア細胞をニューロンに変換することができる、請求項９２に記載の方法。
- 前記グリア細胞が、アストロサイト及びＮＧ２細胞からなる群から選択される、請求項１６４に記載の方法。
- 前記グリア細胞が、アストロサイトである、請求項１６４に記載の方法。
- 前記アストロサイトが、反応性アストロサイトである、請求項１６６に記載の方法。
- 前記グリア細胞が、ＧＦＡＰ陽性である、請求項１６４に記載の方法。
- 前記ニューロンが、機能的なニューロンである、請求項１６４に記載の方法。
- 前記機能的なニューロンが、グルタミン酸作動性ニューロン、ＧＡＢＡ作動性ニューロン、ドーパミン作動性ニューロン、コリン作動性ニューロン、セロトニン作動性ニューロン、エピネフリン作動性ニューロン、運動ニューロン、及びペプチド作動性ニューロンからなる群から選択される、請求項１６９に記載の方法。
- 治療有効用量の前記ＡＡＶが、前記対象に注入される、請求項８９又は９０に記載の方法。
- 治療有効用量の前記ＡＡＶが、前記対象に送達される、請求項９１又は９２に記載の方法。
- 前記治療有効用量が、薬学的に許容される担体と共に投与される、請求項１７１又は１７２に記載の方法。
- 配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - 配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列並びに配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含む第２の配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列及び前記第２の配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - 配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、前記第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号５の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - 配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列並びに配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸を有する第２のタンパク質をコードする第２の核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターであって、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列、前記第２のコード配列が、（ｉ）配列番号１９及び２２からなる群から選択される核酸配列を含むＰ２Ａリンカー、（ｉｉ）配列番号２０及び２３からなる群から選択される核酸配列を含むＴ２Ａリンカー、又は（ｉｉｉ）配列番号３を含む脳心筋炎ウイルスの内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）配列によって分離され、前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列及び前記第２のコード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター。 - （ｉ）配列番号６の核酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１１、１３、及び１５からなる群から選択される核酸配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
前記ｈＮｅｕｒｏＤ１配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。 - （ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１３を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、請求項１７８に記載の組成物。 - （ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１１を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、請求項１７８に記載の組成物。 - （ｉ）配列番号１０のアミノ酸配列を含むヒト神経原性分化１（ｈＮｅｕｒｏＤ１）タンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター並びに（ｉｉ）配列番号１２、１４、及び１６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むアデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクターを含む組成物であって、
前記ｈＮｅｕｒｏＤ１コード配列が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号２の核酸配列を含むヒト伸長因子－１α（ＥＦ１－α）プロモーターからのエンハンサー又は配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結される、組成物。 - （ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１４を含むアミノ酸配列を有するタンパク質をコードする核酸コード配列を含むＡＡＶベクターを含む、請求項１８１に記載の組成物。 - （ｉｉ）が、
（ａ）配列番号２７の核酸配列を含むグリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモーターと、
（ｂ）配列番号１７の核酸配列を含むサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）エンハンサーと、
（ｃ）配列番号２８の核酸配列を含むキメライントロンと、
（ｄ）配列番号３０の核酸配列を含むウッドチャック肝炎ウイルス転写後調節エレメント（ＷＰＲＥ）と、
（ｅ）配列番号２６の核酸配列を含むｂＧＨポリアデニル化シグナルと、を含む調節エレメントに作動可能に連結された配列番号１２を含む核酸配列を含むＡＡＶを含む、請求項１８１に記載の組成物。 - 前記合成ポリアデニル化シグナルが、配列番号３１又はその相補体と少なくとも８０％同一の核酸配列を含む、請求項４８に記載のＡＡＶベクター又は組成物。
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US202063084971P | 2020-09-29 | 2020-09-29 | |
| US63/084,971 | 2020-09-29 | ||
| US202163247439P | 2021-09-23 | 2021-09-23 | |
| US63/247,439 | 2021-09-23 | ||
| PCT/US2021/052358 WO2022072325A1 (en) | 2020-09-29 | 2021-09-28 | Neurod1 combination vector |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2023543362A true JP2023543362A (ja) | 2023-10-13 |
Family
ID=80823426
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2023544180A Pending JP2023543362A (ja) | 2020-09-29 | 2021-09-28 | Ｎｅｕｒｏｄ１組み合わせベクター |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20220098255A1 (ja) |
| EP (1) | EP4221761A1 (ja) |
| JP (1) | JP2023543362A (ja) |
| AU (1) | AU2021353867A1 (ja) |
| CA (1) | CA3197178A1 (ja) |
| MX (1) | MX2023003654A (ja) |
| WO (1) | WO2022072325A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20210162002A1 (en) * | 2019-10-17 | 2021-06-03 | The Penn State Research Foundation | Regenerating functional neurons for treatment of spinal cord injury and als |
Family Cites Families (19)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US9388427B2 (en) * | 2002-12-02 | 2016-07-12 | Biovec, Llc | In vivo and ex vivo gene transfer into renal tissue using gutless adenovirus vectors |
| EP1995309A1 (en) * | 2007-05-21 | 2008-11-26 | Vivalis | Recombinant protein production in avian EBx® cells |
| WO2009114673A2 (en) * | 2008-03-14 | 2009-09-17 | The General Hospital Corporation | Methods for production of atrial progenitors and their differentiation into smooth muscle cells and cardiomyocytes |
| WO2012022725A2 (en) * | 2010-08-19 | 2012-02-23 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Conversion of somatic cells to induced reprogrammed neural stem cells (irnscs) |
| WO2013025963A2 (en) * | 2011-08-17 | 2013-02-21 | President And Fellows Of Harvard College | Conversion of somatic cells into functional spinal motor neurons, and methods and uses thereof |
| US9708414B2 (en) * | 2011-11-18 | 2017-07-18 | UNIVERSITé LAVAL | Methods and products for increasing frataxin levels and uses thereof |
| WO2013151667A1 (en) * | 2012-04-02 | 2013-10-10 | modeRNA Therapeutics | Modified polynucleotides |
| CA2876293C (en) * | 2012-06-27 | 2023-10-10 | Arthrogen B.V. | Combination for treating an inflammatory disorder |
| CN113512565A (zh) * | 2012-07-19 | 2021-10-19 | 宾夕法尼亚州研究基金会 | 再生用于在神经***中治疗疾病和损伤的功能性神经元 |
| WO2014142984A1 (en) * | 2013-03-15 | 2014-09-18 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Coincidence reporter gene system |
| EP3011034B1 (en) * | 2013-06-17 | 2019-08-07 | The Broad Institute, Inc. | Delivery, use and therapeutic applications of the crispr-cas systems and compositions for targeting disorders and diseases using viral components |
| KR101712247B1 (ko) * | 2014-09-29 | 2017-03-06 | 단국대학교 산학협력단 | 암 특이적 트랜스-스플라이싱 라이보자임 및 이의 용도 |
| EP3285788A4 (en) * | 2015-04-23 | 2018-12-05 | University of Massachusetts | Modulation of aav vector transgene expression |
| EP3881857A1 (en) * | 2016-02-18 | 2021-09-22 | The Penn State Research Foundation | Generating gabaergic neurons in brains |
| WO2018098365A2 (en) * | 2016-11-22 | 2018-05-31 | TCR2 Therapeutics Inc. | Compositions and methods for tcr reprogramming using fusion proteins |
| US10724052B2 (en) * | 2018-09-07 | 2020-07-28 | Crispr Therapeutics Ag | Universal donor cells |
| AU2019368215B2 (en) * | 2018-10-22 | 2023-05-18 | Inscripta, Inc. | Engineered enzymes |
| PE20211419A1 (es) * | 2018-11-21 | 2021-08-03 | Stridebio Inc | Vectores virales recombinantes y acidos nucleicos para producirlos |
| CA3117228A1 (en) * | 2018-12-14 | 2020-06-18 | Pioneer Hi-Bred International, Inc. | Novel crispr-cas systems for genome editing |
-
2021
- 2021-09-28 US US17/487,436 patent/US20220098255A1/en active Pending
- 2021-09-28 AU AU2021353867A patent/AU2021353867A1/en active Pending
- 2021-09-28 CA CA3197178A patent/CA3197178A1/en active Pending
- 2021-09-28 MX MX2023003654A patent/MX2023003654A/es unknown
- 2021-09-28 JP JP2023544180A patent/JP2023543362A/ja active Pending
- 2021-09-28 EP EP21876285.4A patent/EP4221761A1/en active Pending
- 2021-09-28 WO PCT/US2021/052358 patent/WO2022072325A1/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20220098255A1 (en) | 2022-03-31 |
| AU2021353867A1 (en) | 2023-05-11 |
| CA3197178A1 (en) | 2022-04-07 |
| AU2021353867A9 (en) | 2023-06-29 |
| WO2022072325A1 (en) | 2022-04-07 |
| EP4221761A1 (en) | 2023-08-09 |
| MX2023003654A (es) | 2023-06-22 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN108699565B (zh) | 用于定向腺相关病毒(aav)的靶向肽 | |
| JP7432621B2 (ja) | 選択的遺伝子調節のための組成物および方法 | |
| JP7289306B2 (ja) | 網膜障害を治療するための組成物及び方法 | |
| JP2023543362A (ja) | Ｎｅｕｒｏｄ１組み合わせベクター | |
| JP2023544068A (ja) | Ｎｅｕｒｏｄ１ベクター | |
| JP2023543361A (ja) | Ｎｅｕｒｏｄ１及びｄｌｘ２ベクター | |
| US20220098616A1 (en) | ISL1 and LHX3 VECTOR | |
| JP2023543360A (ja) | Ｄｌｘ２ベクター | |
| US20220098617A1 (en) | Ascl1 vector | |
| WO2024017387A1 (en) | Novel aav capsids for targeting nervous system and uses thereof | |
| WO2023108507A1 (en) | Recombinant aav vectors and use thereof | |
| US20240067989A1 (en) | Compositions and Methods for Treating Retinal Disorders | |
| CN116761812A (zh) | Neurod1和dlx2载体 | |
| CN116782921A (zh) | Neurod1组合载体 | |
| CN116710566A (zh) | Neurod1载体 | |
| KR20240028976A (ko) | 뇌에서 높은 발현 수준을 갖는 aav 조성물 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| RD04 | Notification of resignation of power of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7424 Effective date: 20231222 |