JP2023539369A - 抗体－ナノ粒子複合体、ならびにその作製および使用方法 - Google Patents

抗体－ナノ粒子複合体、ならびにその作製および使用方法 Download PDF

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Abstract

本明細書では、結合剤および／または治療薬と複合体化したナノ粒子（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合パクリタキセル／ドキソルビシンナノ粒子および抗体－複合体化アルブミン結合パクリタキセル／ＳＮ３８ナノ粒子）、ならびにその医薬組成物が提供される。さらに、本明細書では、結合剤および／または治療薬と複合体化したナノ粒子（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合パクリタキセル／ドキソルビシンナノ粒子および抗体－複合体化アルブミン結合パクリタキセル／ＳＮ３８ナノ粒子）を作製する方法、ならびに癌の処置を必要とする患者において癌を処置する方法が提供される。

Description

発明の分野
本開示は、結合剤および担体タンパク質の新規な組成物、ならびに特に癌治療薬としてこれを作製および使用する方法に関する。
背景
化学療法は、多くの種類の癌の全身治療の中心であり続けている。大部分の化学療法薬は、腫瘍細胞に対する選択性がわずかしかなく、健康な増殖細胞に対する毒性が高くなることがあり（Ａｌｌｅｎ ＴＭ．（２００２）Ｃａｎｃｅｒ２：７５０－７６３）、多くの場合、用量の減少および処置の中止さえも必要とする。理論的には、化学療法の毒性の問題を克服し、薬効を改善する１つの方法は、腫瘍細胞が選択的に発現（または過剰発現）するタンパク質に特異的な抗体を使用して、化学療法薬が腫瘍を標的にして標的薬物を腫瘍に引き付けることである。それにより、化学療法の体内分布が変化し、より多くの薬物が腫瘍に行き、健康な組織への影響が少なくなる。しかし、３０年にわたる研究にもかかわらず、治療薬の状況で特異的ターゲティングが成功することはほとんどない。
従来の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）は、合成プロテアーゼ切断性リンカーを介してターゲティング抗体に連結された毒性物質を用いて設計されている。このようなＡＤＣ治療の有効性は、標的細胞が抗体に結合する能力、リンカー切断される能力、および毒性物質の標的細胞への取り込みに依存する（Ｓｃｈｒａｍａ，Ｄ．ら（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ５：１４７－１５９）。
抗癌抗体に共有結合によらずに結合させたｎａｂ－パクリタキセル（アブラキサン（登録商標））を含むナノ粒子複合体は、黒色腫および他の癌に対して効果的であり、単独で、または同時に別々に投与された複合体の成分よりも効果的であることが示されている（米国特許第９，４２７，４７７号；第９，４４６，１４８号；第９，７５７，４５３号）。
抗体標的化学療法は、ターゲティング能力、複数の細胞傷害性薬剤、および治療能力の向上の組み合わせを提供し、潜在的に毒性が低いため、従来の治療法よりも有利であることが見込まれる。広範な研究にもかかわらず、臨床的に効果的な抗体標的化学療法は依然として達成されていない。その主な障害には、抗体と化学療法薬との間のリンカーの不安性、抗体に結合したときの化学療法薬の腫瘍毒性の低下、および複合体が腫瘍細胞に結合および侵入できないことが挙げられる。さらに、これらの治療法では、抗体薬物複合体のサイズ自由に制御することができなかった。
米国特許第９，４２７，４７７号明細書 米国特許第９，４４６，１４８号明細書 米国特許第９，７５７，４５３号明細書
Ａｌｌｅｎ ＴＭ．（２００２）Ｃａｎｃｅｒ２：７５０－７６３ Ｓｃｈｒａｍａ，Ｄ．ら（２００６）Ｎａｔｕｒｅ ｒｅｖｉｅｗｓ．Ｄｒｕｇ ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ５：１４７－１５９
要旨
本発明は、パクリタキセルと治療薬を含む担体タンパク質に共有結合によらずに結合抗癌剤結合剤を含む、ナノ粒子複合体の開発に一部基づいている。本明細書に記載のナノ粒子複合体は、驚くことに、パクリタキセルのみを含む担体タンパク質に共有結合によらずに結合抗癌剤結合剤で作製したナノ粒子複合体と比較して、インビトロで安定性が向上し、癌細胞に対する毒性が増加した。理論に縛られるものではないが、この本明細書に記載のナノ粒子複合体の安定性および毒性の増強は、腫瘍への薬物沈着を好むように体内分布をさらに改善し、臨床効果をさらに高める可能性があると考えられている。さらに、パクリタキセル誘導体（パクリタキセルよりも毒性が低い）と治療薬を含む担体タンパク質に共有結合によらずに結合抗癌剤結合剤を含むナノ粒子複合体は、パクリタキセル誘導体のみを含む担体タンパク質に共有結合によらずに結合抗癌剤結合剤で作製したナノ粒子複合体と比較して、または担体タンパク質、パクリタキセル誘導体および治療薬を含むナノ粒子複合体と比較して、インビボで毒性が増加した。
ある態様では、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）およびパクリタキセルを含むナノ粒子複合体であって、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、ナノ粒子複合体が本明細書に提供される。
別の態様では、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）およびパクリタキセル誘導体を含むナノ粒子複合体であって、パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセル誘導体ナノ粒子と結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、ナノ粒子複合体が本明細書に提供される。
なお別の態様では、薬学的に許容され得る担体およびナノ粒子複合体を含む医薬組成物であって、ナノ粒子複合体が、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）およびパクリタキセルを含み、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、医薬組成物が本明細書に提供される。
別の態様では、薬学的に許容され得る担体およびナノ粒子複合体を含む医薬組成物であって、ナノ粒子複合体が、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）およびパクリタキセル誘導体を含み、パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセル誘導体ナノ粒子と結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、医薬組成物が本明細書に提供される。
別の態様では、ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥組成物であって、ナノ粒子複合体の各々は、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセルを含み、ナノ粒子複合体は凍結乾燥されており、水溶液で再構成すると、ナノ粒子複合体はインビボで抗－癌エピトープに結合可能である、凍結乾燥組成物が本明細書に提供される。
なお別の態様では、ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥組成物であって、ナノ粒子複合体の各々は担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセル誘導体を含み、パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、ナノ粒子複合体は凍結乾燥されており、水溶液で再構成すると、ナノ粒子複合体はインビボで抗－癌エピトープに結合可能である、凍結乾燥組成物が本明細書に提供される。
別の態様では、癌の処置を必要とする対象において癌を処置するための方法であって、方法は、治療有効量の上記のナノ粒子複合体、または医薬組成物を対象に投与し、それによって癌を処置することを含む方法が本明細書に提供される。
別の態様では、癌の処置を必要とする対象において癌を処置するための方法であって、方法は、ナノ粒子複合体の凍結乾燥組成物を薬学的に許容され得る賦形剤で再構成して、再構成されたナノ粒子組成物を形成すること、および治療有効量の再構成されたナノ粒子組成物を対象に投与し、それによって癌を処置することを含む、方法が本明細書に提供される。
別の態様では、ナノ粒子複合体を作製する方法であって、方法は、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤を、ナノ粒子複合体を形成する条件下でインビトロで混合することを含む、方法が本明細書に提供される。
別の態様では、ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥ナノ粒子組成物を作製する方法であって、ナノ粒子複合体の各々は、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセルを含み、方法は、水溶液で再構成されるとナノ粒子複合体が抗－癌エピトープに対する結合特異性を有するように、ナノ粒子複合体を形成する条件下で水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤をインビトロで混合し、ナノ粒子複合体を凍結乾燥して凍結乾燥ナノ粒子組成物を形成することを含む、方法が本明細書に提供される。
別の態様では、ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥ナノ粒子組成物を作製する方法であって、ナノ粒子複合体の各々は、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセル誘導体を含み、パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、方法は、水溶液で再構成されるとナノ粒子複合体が抗－癌エピトープに対する結合特異性を有するように、ナノ粒子複合体を形成する条件下で水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤をインビトロで混合し、ナノ粒子複合体を凍結乾燥して凍結乾燥ナノ粒子組成物を形成することを含む、方法が本明細書に提供される。
本明細書に記載のこれらおよび他の態様は、以下の説明においてさらに詳細に記載される。
図１Ａは、ドキソルビシンとパクリタキセルを１：１、１：３および１：９の比で作製したナノ粒子の粒径を示す。
図１Ｂは、ＨＰＬＣで測定した、ナノ粒子の製造後の総薬物量とアルブミン結合薬物量を示す。
図１Ｃは、ナノ粒子が安定しなくなる濃度の測定値を示す。
図２は、ベバシズマブ、アブラキサン（登録商標）、およびｎａｂ－パクリタキセルと比較した、Ａ３７５細胞に対するナノ粒子の毒性を示す。
図３は、パクリタキセルのメーヤワイン生成物（無毒性パクリタキセル誘導体である）を形成する、パクリタキセルとメーヤワイン試薬との反応を示す。
図４Ａは、以下のナノ粒子の粒径を示す：ＡＢＸ Ｎａｂ、ＡＢＸ：ＢＥＶ ＮＩＣ、ＡＢＸ：ＲＩＴ ＮＩＣ、ＡＢＸ：ＳＴＩ３０３１ ＮＩＣ、ＤＯＸ：ＮＴＰ Ｎａｂ、ＤＯＸ：ＮＴＰ：ＲＩＴ ＮＩＣ、ＳＮ３８：ＮＴＰ Ｎａｂ、ＳＮ３８：ＮＴＰ：ＢＥＶ ＮＩＣ、およびＳＮ３８：ＮＴＰ：ＳＴＩ３０３１ ＮＩＣ。
図４Ｂは、以下のナノ粒子のゼータ電位を示す：ＡＢＸ Ｎａｂ、ＡＢＸ：ＢＥＶ ＮＩＣ、ＡＢＸ：ＲＩＴ ＮＩＣ、ＡＢＸ：ＳＴＩ３０３１ ＮＩＣ、ＤＯＸ：ＮＴＰ Ｎａｂ、ＤＯＸ：ＮＴＰ：ＲＩＴ ＮＩＣ、ＳＮ３８：ＮＴＰ Ｎａｂ、ＳＮ３８：ＮＴＰ：ＢＥＶ ＮＩＣ、およびＳＮ３８：ＮＴＰ：ＳＴＩ３０３１ ＮＩＣ。
図４Ｃは、ＳＮ３８単独、または２ｍｇ／ｍｌ、４ｍｇ／ｍｌ、６ｍｇ／ｍｌ、もしくは８ｍｇ／ｍｌのＰＤＬ１抗体（ＳＴＩ－３０３１）と結合したＳＮ３８を含むｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子のゼータ電位を示す。
図５Ａは、ＨＰＬＣで測定した、ＳＮ３８と無毒性パクリタキセルの最初の投入量、ならびにナノ粒子の製造後の総薬物量およびアルブミン結合薬物量を示す。
図５Ｂは、ＨＰＬＣで測定した、ナノ粒子の製造後の総薬物量とアルブミン結合薬物量（ＳＮ３８またはドキソルビシン）を示す（無毒性パクリタキセルを使用してナノ粒子を製造）。
図６Ａは、イリノテカンおよびＳＮ３８と比較した、ＳＮ３８ Ｎａｂナノ粒子（ＳＮ３８を含むｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞に対する毒性を示す（無毒性パクリタキセルを使用してナノ粒子を製造）。
図６Ｂは、ドキソルビシンと比較した、ドキソルビシンＮａｂナノ粒子（ドキソルビシンを含むｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のＤａｕｄｉ細胞に対する毒性を示す（無毒性パクリタキセルを使用してナノ粒子を製造）。
図７は、雌胸腺欠損ヌードマウスのＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍異種移植片におけるインビボ有効性研究の結果を示す。すべてのｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子は無毒性パクリタキセル誘導体で調製した。図７Ａは、マウスにおけるＮＩＣ ７．５（７．５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８を含み、ＰＤＬ１抗体ＳＴＩ３０３１に結合したｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のインビボ有効性を示す。図７Ｂは、マウスにおけるＮａｂ ７．５（７．５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８を含むｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のインビボ有効性を示す。図７Ｃは、マウスにおけるＳＮ３８ ７．５（７．５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８）のインビボ有効性を示す。図７Ｄは、マウスにおけるＮＩＣ １５（１５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８を含み、ＰＤＬ１抗体ＳＴＩ３０３１に結合したｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のインビボ有効性を示す。図７Ｅは、マウスにおけるＮａｂ １５（１５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８を含むｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のインビボ有効性を示す。図７Ｆは、マウスにおけるＳＮ３８ １５（１５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８）のインビボ有効性を示す。図７Ｇは、マウスにおけるＰＤＬ１＋Ｎａｂ １５（１５ｍｇ／ｋｇのＳＮ３８と、別々に注射されたＰＤＬ１抗体ＳＴＩ ３０３１を含むｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）のインビボ有効性を示す。図７Ｈは、マウスにおけるイリノテカン１５（１５ｍｇ／ｋｇのイリノテカン）のインビボ有効性を示す。図７Ｉは、マウスにおける生理食塩水のインビボ有効性を示す。図７Ｊは、マウスにおける抗ＰＤＬ１抗体（ＳＴＩ３０３１）のインビボ有効性を示す。図７Ｋは、マウスにおけるＮＴＰ（ｎａｂ－無毒性パクリタキセルナノ粒子）のインビボ有効性を示す。 同上。 同上。 同上。 同上。 同上。
図８は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を注射し、生理食塩水、抗ＰＤＬ１、イリノテカン、ＮＴＰ、ＳＮ３８ ７．５、ＳＮ３８ １５、Ｎａｂ ７．５、Ｎａｂ １５、ＰＤＬ１＋Ｎａｂ １５、ＮＩＣ ７．５、またはＮＩＣ １５で処置したマウスにおける７日目の腫瘍応答を示す。
図９は、ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を注射し、生理食塩水、抗ＰＤＬ１、イリノテカン、ＮＴＰ、ＳＮ３８ ７．５、ＳＮ３８ １５、Ｎａｂ ７．５、Ｎａｂ １５、ＰＤＬ１＋Ｎａｂ １５、ＮＩＣ ７．５、またはＮＩＣ １５で処置したマウスのカプラン・マイヤー生存曲線を示す。
詳細な説明
本発明を以下でさらに詳細に説明する。この説明は、本発明を実施することのできるすべての異なる方法、または本発明に追加することのできるすべての機能の詳細なカタログであることを意図していない。例えば、一実施形態に関して例示される機能は、他の実施形態に組み込まれてもよく、特定の実施形態に関して例示される機能はその実施形態から削除されてもよい。その上、本発明から逸脱しない本開示に照らして、本明細書中で提案される様々な実施形態に対する多数の変形および追加が当業者には明らかであろう。したがって、以下の明細書は、本発明のいくつかの特定の実施形態を例示することを意図し、そのすべての置換、組合せ、および変形を網羅的に指定することを意図していない。
文脈がそうでないことを示していない限り、本明細書に記載される様々な機能は任意の組み合わせで使用され得ることが特に意図される。さらに、本発明は、一部の実施形態において、本明細書に記載の任意の機能または機能の組み合わせが除外または省略され得ることも企図する。例えば、複合体が成分Ａ、ＢおよびＣを含むと明細書に記載されている場合、それはＡ、ＢまたはＣのいずれか、あるいはその組合せは、単独でまたは任意の組合せで省略され、クレームを放棄され得ることが特に意図される。
別に定義されない限り、本明細書において使用されるすべての技術用語および科学用語は、本発明が属する当業者が一般に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書の説明で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではない。
ヌクレオチド配列は、特に指定のない限り、本明細書において左から右へ５’から３’方向の一本鎖のみで示される。ヌクレオチドおよびアミノ酸は、本明細書において、ＩＵＰＡＣ－ＩＵＢ生化学命名委員会に推奨される方法で、または（アミノ酸の場合には）１文字コードまたは３文字コードのいずれかで、両方とも３７Ｃ．Ｆ．Ｒ．§１．８２２および確立された使用法に従って表される。
特に指定のない限り、組換えおよび合成ポリペプチドの作製、抗体またはその抗原結合断片の作製、核酸配列の操作、および形質転換細胞の産生には当業者に公知の標準法を使用することができる。このような技術は当業者に公知である。例えば、ＳＡＭＢＲＯＯＫら、ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ ＭＡＮＵＡＬ ２ｎｄ Ｅｄ．（Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，１９８９）；Ｆ．Ｍ．ＡＵＳＵＢＥＬら、ＣＵＲＲＥＮＴ ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ ＩＮ ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ ＢＩＯＬＯＧＹ（Ｇｒｅｅｎ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．およびＪｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）を参照されたい。
本明細書で言及されるすべての刊行物、特許出願、特許、ヌクレオチド配列、アミノ酸配列、および他の参考文献は、参照によりその全文が組み込まれる。
定義
説明および添付される特許請求の範囲で使用される、単数形の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかにそうでないことを示さない限り、複数形も含むことが意図される。
本明細書において使用される、「および／または」とは、１またはそれを超える関連するリスト項目のありとあらゆる可能性のある組合せと、もう一つの選択肢（「または」）で解釈される場合の組合せの欠如を指し、包含する。
さらに、本発明は、一部の実施形態において、本明細書に記載の任意の機能または機能の組み合わせが除外または省略され得ることも企図する。
さらに、本発明の化合物または薬剤の量、用量、時間、温度などの測定可能な値に言及する場合に本明細書において使用される用語「約」は、指定された量の±１０％、±５％、±１％、±０．５％、またはさらには±０．１％の変動を包含することを意味する。
本明細書において使用される、「から本質的になる」という移行句は、列挙される材料またはステップと、特許請求される本発明の１または複数の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を及ぼさない材料またはステップを包含すると解釈される。したがって、本明細書において使用される「から本質的になる」という用語は、「含む」と等価であると解釈されるべきではない。
本発明のポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列に適用される、「から本質的になる」という用語（および文法上の変化形）は、列挙された配列（例えば、配列番号）と、ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの機能を実質的に変化させないような、列挙された配列の５’および／または３’あるいはＮ末端および／またはＣ末端あるいは両末端間（例えば、ドメイン間）の合計１０個またはそれ未満（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０個）の追加のヌクレオチドまたはアミノ酸の両方からなるポリヌクレオチドまたはポリペプチドを意味する。合計１０個またはそれ未満の追加のヌクレオチドまたはアミノ酸には、一緒に付加された追加のヌクレオチドまたはアミノ酸の総数が含まれる。本明細書に記載のポリヌクレオチドに適用される、「実質的に変化した」という用語は、コードされたポリペプチドを発現する能力が、列挙された配列からなるポリヌクレオチドの発現量と比較して、少なくとも約５０％またはそれを超えて増加または低下することを指す。本明細書に記載のポリペプチドに適用される、「実質的に変化した」という用語は、生物活性が、列挙された配列からなるポリペプチドの活性と比較して、少なくとも約５０％またはそれを超えて増加または低下することを指す。
「随意の」または「必要に応じて」とは、その後に記載される事象または状況が発生し得るかまたは発生し得ないか、およびその記載にその事象または状況が起こる例と起こらない例が含まれることを意味する。
本明細書において、「治療量以下（ｓｕｂ－ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ）」という用語は、癌を処置するために慣習的に使用される治療薬の量を下回る治療薬（例えば、抗体などの結合剤）の量を記載するために使用される。例えば、治療量以下の量は、治療に必要であると製造業者に定義された量未満の量である。
本明細書において使用される「ナノ粒子」という用語は、少なくとも１つの寸法が５ミクロン未満の粒子をさす。静脈内投与用などの好ましい実施形態では、ナノ粒子は１ミクロン未満である。腫瘍などへの直接投与では、ナノ粒子はより大きくてよい。さらに大きい粒子は、本発明では特に企図される。
粒子集団では、個々の粒子の大きさは平均値の周りに分布している。そのため、集団の粒径は平均で表すことができ、パーセンタイルでも表すことができる。Ｄ５０は、粒子の５０％がそれよりも小さくなる粒径である。粒子の１０％はＤ１０値よりも小さく、粒子の９０％はＤ９０よりも小さい。明確でない場合、「平均」サイズはＤ５０に等しい。粒径は、ＷＯ２０１６／０５７５５４号に記載されるように、例えばＭａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ２０００（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｌｔｄ、英国Ｗｏｒｃｅｓｔｅｒｓｈｉｒｅより入手可能）を使用して、当技術分野で周知のレーザー回折によって求めてよい。
「ナノ粒子」という用語は、より小さな単位のナノ粒子の別々の多量体も包含し得る。
本明細書において使用される「ｎａｂ」、「ｎａｂ－パクリタキセル」、または「担体タンパク質含有ナノ粒子」という用語は、アルブミン結合ナノ粒子を指す。Ｎａｂには、ナノ粒子を形成するアルブミンとパクリタキセルまたはアルブミンとパクリタキセル誘導体が含まれており、このパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体はアルブミンに非共有結合している。ｎａｂには、１またはそれを超える治療薬（ドキソルビシンまたはＳＮ３８など）がさらに含まれてよい。
本明細書において使用される「パクリタキセル誘導体」、「無毒性パクリタキセル（ＮＴＰ）」または「無毒性パクリタキセル誘導体」という用語は、パクリタキセルよりも毒性の低いパクリタキセル誘導体をさす。「パクリタキセルよりも毒性の低い」とは、パクリタキセルと比較して、癌細胞および正常細胞を含む細胞に対する毒性の低下（例えば、細胞の死滅の低下）を示すパクリタキセル誘導体をさす。例えば、パクリタキセルのメーヤワイン生成物（Ｍｅｅｒｗｅｉｎ Ｐｒｏｄｕｃｔ）である２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール（図３）は、毒性が大幅に低下しており、パクリタキセルのＣ－４、Ｃ－５オキセタン環の破壊による可能性が高い。
本明細書において使用される「ＮＩＣ」、「ナノ粒子複合体」または「担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体」という用語は、担体タンパク質（アルブミンなど）とパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体、結合剤（抗体またはその抗原結合断片、アプタマー、タンパク質、レクチンなど）、および必要に応じて１またはそれを超える治療薬（ドキソルビシンまたはＳＮ３８など）を含むナノ免疫複合体を指す。したがって、ＮＩＣは、結合剤（抗体またはその抗原結合断片、アプタマー、タンパク質、レクチンなど）に非共有結合的に結合した「ｎａｂ」で構成され、必要に応じて１またはそれを超える治療薬を含む。
本明細書において使用される「バイオシミラー」という用語は、品質、安全性、および有効性において、イノベーター企業が販売する参照製品に匹敵するとみなされるバイオ医薬品をさす（米国公衆衛生法（４２Ｕ．Ｓ．Ｃ．２６２（ｉ））の第３５１（ｉ）項）。バイオシミラーは、その参照生物製剤（例えば、ベバシズマブバイオシミラーの場合はベバシズマブ）と同一の一次アミノ酸配列、高度に類似した一次、二次、三次、および四次構造、翻訳後修飾、および生物活性を有すると当技術分野で理解されている。ここで、参照により本明細書に組み込まれる米国ＦＤＡ「Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎｓ ｉｎ ｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｉｎｇ ｂｉｏｓｉｍｉｌａｒｉｔｙ ｔｏ ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｐｒｏｄｕｃｔ：ｇｕｉｄａｎｃｅ ｆｏｒ ｉｎｄｕｓｔｒｙ」、２０１５に記載されるように、わずかな違いは臨床的に重要でないことが確認されており、バイオシミラーの臨床特性（機能、投薬、毒性など）は参照生物製剤と同じである。
本明細書において使用される「担体タンパク質」という用語は、結合剤（抗体など）および／または他の治療薬（パクリタキセル、ＳＮ３８およびドキソルビシンなど）を輸送する働きをするタンパク質をさす。本開示の結合剤は、担体タンパク質に可逆的に結合することができる。例示的な担体タンパク質は、以下でより詳細に考察される。
本明細書において使用される「コア」という用語は、担体タンパク質、担体タンパク質と治療薬、または他の薬剤または薬剤の組合せで構成され得るナノ粒子の中心部または内側部分をさす。一部の実施形態では、結合剤の疎水性部分（例えば、抗体の疎水性部分）は、コアに組み込まれていてもよい。
本明細書において、癌患者に対する「治療成績を高める」などの用語は、癌細胞または固形腫瘍の増殖の遅延または減少、あるいは癌細胞の総数または総腫瘍負荷の減少をさす。
本明細書において使用される「治療薬」という用語は、治療上有用である薬剤、例えば、疾患状態、生理的症状、症候、または病因因子を処置、緩解または減弱するための薬剤、あるいはその評価または診断のための薬剤を意味する。治療薬は、化学療法薬、例えば、有糸***阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤、ステロイド、抗腫瘍抗生物質、代謝拮抗剤、アルキル化剤、酵素、プロテアソーム阻害剤、またはそれらの任意の組合せであってよい。本開示の方法において効果的に用いることができる治療薬の例としては、限定されるものではないが、パクリタキセル（タキソール）、ドキソルビシン、およびＳＮ３８が挙げられる。
本明細書において、「結合剤」、「特異的な結合剤」、または「特異的に結合する結合剤」という用語は、標的抗原に結合し、無関係の化合物に特異的に結合しない薬剤をさす。本開示の方法において効果的に用いることができる結合剤の例としては、限定されるものではないが、レクチン、タンパク質、および抗体、例えばヒト化モノクローナル抗体などのモノクローナル抗体、キメラ抗体、またはポリクローナル抗体、またはその抗原結合断片、ならびにアプタマー、Ｆｃドメイン融合タンパク質、および、Ｆｃドメインなどの疎水性タンパク質ドメインを有するかまたはそれらに融合したアプタマーが挙げられる。一部の実施形態では、結合剤は外因性抗体である。外因性抗体は、ヒトなどの哺乳動物で哺乳動物の免疫系によって自然に産生されない抗体である。
本明細書において使用される「抗体」という用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分（すなわち、抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含有する分子）をさす。この用語は、２本の免疫グロブリン重鎖と２本の免疫グロブリン軽鎖で構成される抗体ならびに全長抗体およびその部分を含む様々な形態もさし；それには、例えば、免疫グロブリン分子、モノクローナル抗体、キメラ抗体、ＣＤＲグラフト抗体、ヒト化抗体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、シングルドメイン抗体（ｄＡｂ）、ダイアボディ、多重特異性抗体、二重特異性抗体、抗イディオタイプ抗体、二重特異性抗体、その機能活性エピトープ結合断片、二機能性ハイブリッド抗体（例えば、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７，１０５（１９８７））および単鎖（例えば、Ｈｕｓｔｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，８５、５８７９－５８８３（１９８８）およびＢｉｒｄら、Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２，４２３－４２６（１９８８）、これらは参照により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。（一般に、参照により本明細書に組み込まれる、Ｈｏｏｄら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎ．Ｙ．，２ＮＤ ｅｄ．（１９８４）；Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（１９８８）；Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ ａｎｄ Ｈｏｏｄ，Ｎａｔｕｒｅ，３２３，１５－１６（１９８６）を参照）。抗体はどんな種類のものであってもよい（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭ、ＩｇＥまたはＩｇＤ）。好ましくは、抗体はＩｇＧである。抗体は、非ヒト（例えば、マウス、ヤギ、または任意のその他の動物由来）、完全ヒト、ヒト化、またはキメラのいずれでもよい。
「アプタマー」という用語は、ポリペプチドなどの標的分子に結合する能力のある核酸分子またはペプチド分子をさす。例えば、本明細書に記載のアプタマーが特異的に結合することのできる標的分子としては、限定されるものではないが、ＣＤ２０、ＣＤ３８、ＣＤ５２、ＰＤ－Ｌ１、Ｌｙ６Ｅ、ＨＥＲ２、ＨＥＲ３／ＥＧＦＲ ＤＡＦ、ＥＲＢＢ－３受容体、ＣＳＦ－１Ｒ、ＳＴＥＡＰ１、ＣＤ３、ＣＥＡ、ＣＤ４０、ＯＸ４０、Ａｎｇ２－ＶＥＧＦ、およびＶＥＧＦが挙げられる。特定の結合特異性をもつアプタマーの生成およびアプタマーの治療用途は、当技術分野で十分に確立されている。例えば、米国特許第５，４７５，０９６号、第５，２７０，１６３号、第５，５８２，９８１号、第５，８４０，８６７号、第６，０１１，０２０号、第６，０５１，６９８号、第６，１４７，２０４号、第６，１８０，３４８号および第６，６９９，８４３号、ならびに加齢性黄斑変性の処置に対するＭａｃｕｇｅｎ（登録商標）（Ｅｙｅｔｅｃｈ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ）の治療効果などを参照されたい。
Ｆｃ融合タンパク質は、抗体の結晶化可能な断片（Ｆｃ）ドメインと別の生理活性物質、例えば、タンパク質ドメイン、ペプチド、または核酸またはペプチドアプタマーなどを連結して、望ましい構造－機能特性と意義深い治療可能性をもつ分子を生成する、生物工学によって作製されたポリペプチドである。ガンマ免疫グロブリン（ＩｇＧ）アイソタイプは、エフェクター機能の動員および血漿半減期の増加などの好ましい特徴のためにＦｃ融合タンパク質を生成するための基礎としてしばしば使用される。融合パートナーとして使用することができるペプチドと核酸の両方のアプタマーの範囲を考えると、Ｆｃ融合タンパク質には多数の生物学的用途および薬学的用途がある。
「解離定数」という用語は、「Ｋｄ」とも呼ばれ、特定の物質が個々の成分（例えば、タンパク質担体、結合剤、および随意の治療薬）に分離する程度を表す量をさす。
本明細書において使用される「凍結乾燥した」、「凍結乾燥」などは、乾燥させる材料（ナノ粒子など）を最初に凍結させ、次に真空環境で昇華させることによって氷または凍結溶媒を除去するプロセスをさす。賦形剤は、凍結乾燥生成物の保存時の安定性を高めるために、凍結乾燥前の製剤に必要に応じて含められる。一部の実施形態では、ナノ粒子は、治療薬として使用する前の凍結乾燥成分（担体タンパク質、結合剤および随意の治療薬）から形成することができる。他の実施形態では、担体タンパク質、結合剤、および随意の治療薬は、最初にナノ粒子に結合され、その後、凍結乾燥される。凍結乾燥した試料は、さらに賦形剤を含んでよい。
「緩衝液」という用語は、凍結乾燥前に溶液のｐＨを許容され得る範囲に維持する薬剤を包含し、それには、コハク酸（ナトリウムまたはカリウム）、ヒスチジン、リン酸（ナトリウムまたはカリウム）、トリス（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ジエタノールアミン、クエン酸（ナトリウム）などを挙げることができる。本発明の緩衝液は、約５．５～約６．５の範囲のｐＨを有し、好ましくは約６．０のｐＨを有する。ｐＨをこの範囲に制御する緩衝液の例としては、コハク酸（コハク酸ナトリウムなど）、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸および他の有機酸緩衝液が挙げられる。
「増量剤」という用語は、凍結乾燥製品の構造を提供する薬剤を含む。増量剤に使用される一般的な例としては、マンニトール、グリシン、ラクトース、およびスクロースが含まれる。薬学的に的確なケーキをもたらすことに加えて、増量剤は、崩壊温度の修正、凍結融解保護の提供、および長期保存でのタンパク質の安定性の向上長期保存に関して有用な品質を付与することもできる。これらの薬剤は張度調整剤としても機能し得る。
「凍結保護剤」という用語は、一般に、おそらくタンパク質表面から優先的に排除されることによって、凍結によって誘発されるストレスに対してタンパク質に安定性を提供する薬剤を含む。また、これは一次乾燥と二次乾燥中、および製品の長期保存中の保護も提供することができる。例は、デキストランおよびポリエチレングリコールなどのポリマー；スクロース、グルコース、トレハロース、およびラクトースなどの糖類；ポリソルベートなどの界面活性剤；およびグリシン、アルギニン、セリンなどのアミノ酸である。
「凍結乾燥保護剤」という用語には、乾燥または「脱水」プロセス（一次および二次乾燥サイクル）中にタンパク質に安定性を提供する薬剤が含まれる。これはおそらく非晶質のガラス状マトリックスを提供し、水素結合を介してタンパク質と結合し、乾燥プロセス中に除去される水分子を置換することによる。これは、タンパク質の立体構造を維持し、凍結乾燥サイクル中のタンパク質の分解を最小限に抑え、長期的な製品を改良するのに役立つ。例には、ポリオールまたはスクロースおよびトレハロースなどの糖類が挙げられる。
「医薬製剤」という用語は、活性成分が有効であるのを許容するような形態をとり、製剤が投与される対象に有毒な追加の成分を含まない調製物をさす。
「薬学的に許容され得る」賦形剤（ビヒクル、添加剤）は、用いる活性成分の有効量を提供するために、対象哺乳動物に合理的に投与されることができる賦形剤（ビヒクル、添加剤）である。
「再構成時間」は、凍結乾燥製剤を再水和して溶液にするのに必要な時間である。
「安定な」製剤は、保存時にその中のタンパク質がその物理的安定性および／または化学的安定性および／または生物活性を本質的に保持する製剤である。
本明細書において使用される「エピトープ」という用語は、抗体などの結合剤によって認識される抗原の部分をさす。エピトープには、限定されるものではないが、タンパク質（抗体など）またはリガンドとの特異的相互作用を可能にする短いアミノ酸配列またはペプチド（必要に応じてグリコシル化されているかまたは修飾されたもの）が含まれる。例えば、エピトープは、結合剤の抗原結合部位が結合する分子の部分であり得る。
「処置する」または「処置」という用語は、ヒトなどの対象における疾患または障害（例えば、癌）の処置を包含し、以下を含む：（ｉ）疾患または障害を抑制すること、すなわち、その発症を抑止すること；（ｉｉ）疾患または障害を緩和すること、すなわち、障害の退行を引き起こすこと；（ｉｉｉ）障害の進行を遅らせること；および／または（ｉｖ）疾患または障害の１またはそれを超える症候を抑制、緩和、またはその進行を遅らせること。一部の実施形態では「処置する」または「処置」は、癌細胞の死滅をさす。
癌の処置に関して「死滅させる」という用語は、その癌細胞または癌細胞集団の少なくとも一部の死をもたらすあらゆる種類の操作を含むことを表す。
「用量」という用語は、治療薬を必要とする患者に投与される治療薬の量をさす。主治医は、患者の体重、年齢、健康、癌のステージ、および他の関連する要因に基づいた範囲から適切な用量を選択することになるが、これらはすべて十分に当業者の範囲内である。
「単位用量」という用語は、所望の結果をもたらすために患者に投与される薬剤（例えば、治療薬、結合剤、および／またはナノ粒子複合体）の用量をさす。場合によっては、単位用量は、治療量以下の製剤（例えば、治療用量の１０％）で販売される。単位用量は、単回用量または一連のサブ用量として投与されてよい。所与のＦＤＡ承認適応症の抗体の治療用量は処方情報に記載されている、例えば、ベバシズマブの治療用量は、症状に応じて５ｍｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇであり、好ましくは治療用量の５％～２０％の治療量以下の用量範囲である。このような好ましい実施形態では、このような治療量以下の用量は、０．２５ｍｇ／ｋｇ～３ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは０．５～２ｍｇ／ｋｇの範囲となる。ある結合剤がまだＦＤＡに承認されていないか、または結合剤がまだその適応症に対して承認されていない場合には、その結合剤（例えば、抗体）の所与適応症に対する治療用量は、他の適応症について承認された治療用量に相関する量となる。したがって、ＦＤＡに承認されていない適応症の治療量以下の用量は、治療用量のパーセント（例えば、治療用量の１０％）として容易に計算される。例えば、転移性黒色腫の処置のための抗体の治療用量、したがって治療量以下の用量は、承認されている一般的な転移性癌の治療用量に相関する。
さらに、本明細書で使用されるいくつかの用語は、以下でより具体的に定義されている。
概要
本発明は、一部分、アルブミン結合治療薬／パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体／抗癌抗体ナノ粒子複合体による患者の癌の処置が予想外に改善された治療成績（ドキソルビシンまたはＳＮ３８などの治療薬）をもたらすという驚くべき発見に基づいている。本文書は癌の処置に関連する方法および材料を提供する。例えば、本文書は、担体タンパク質含有ナノ粒子（例えば、アルブミン結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体ナノ粒子）および結合剤（例えばＦｃ融合タンパク質、例えばアプタマー、例えば抗体、例えば抗癌抗体）を含有する複合体を使用して癌を処置するための方法および材料を提供する。
本明細書で提供される方法および材料は、あらゆるタイプの癌を処置するために使用することができる。例えば、本明細書で提供される方法および材料は、皮膚癌（黒色腫など）および乳癌を処置するために使用することができる。場合によっては、本明細書で提供される方法および材料は、限定されないが、マウス、ラット、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、サル、およびヒトをはじめとするあらゆる種類の哺乳動物の癌を処置するために使用することができる。皮膚癌の処置の場合には、黒色腫などのあらゆるタイプの皮膚癌が本明細書で提供される方法および材料を使用して処置され得る。例えば、ステージＩ、ステージＩＩ、ステージＩＩＩ、またはステージＩＶの黒色腫を処置することができる。場合によっては、リンパ節陽性、リンパ節陰性、または転移性黒色腫を本明細書に記載のように処置することができる。
本明細書に記載される組成物および方法によって処置することができる癌または腫瘍としては、限定されるものではないが以下が挙げられる：胆道癌；神経膠芽腫および髄芽細胞腫を含む脳癌；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌、胃癌；急性リンパ性および骨髄性白血病を含む血液腫瘍；多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連白血病および成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病およびパジェット病を含む上皮内腫瘍；肝臓癌（肝細胞癌）；肺癌；ホジキン病およびリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；扁平上皮癌を含む口腔癌；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞および間葉系細胞から生じるものを含む卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫および骨肉腫を含む肉腫；黒色腫、カポジ肉腫、基底細胞癌および扁平上皮癌を含む皮膚癌；胚性腫瘍（セミノーマ、非セミノーマ［奇形腫、絨毛癌］）、間質性腫瘍および胚細胞腫瘍を含む精巣癌；甲状腺癌および髄様癌を含む甲状腺癌；腺癌およびウィルムス腫瘍を含む腎癌；および表１および表２に記載の癌。
担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、および抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）およびナノ粒子複合体を調製する方法は、例えば、ＰＣＴ特許公報第ＷＯ２０１２／１５４８６１号、ＷＯ２０１４／０５５４１５号、ＷＯ２０１５／１９１９６９号、ＷＯ２０１５／１９５４７６号、ＷＯ２０１６／０５７５５４号、ＷＯ２０１７／０３１３６８号、ＷＯ２０１７／１７６２６５号、ＷＯ２０１８／０４８８１６号、およびＷＯ２０１８／０４８９５８号に記載されており、その開示は参照によりその全文が本明細書に組み込まれる。
一部の実施形態では、抗体はそのバイオシミラーバージョンである。一部の実施形態では、抗体は、ナノ粒子の表面の全部または一部にある実質的に単層の抗体である。
結合剤
一部の実施形態では、結合剤は、Ｆｃ融合タンパク質および／またはアプタマーであってよい。一部の実施形態では、結合剤は、抗体（抗癌抗体など）またはその抗原結合断片であってよい。一部の実施形態では、抗体は、表１に記載の抗体から選択され得る。実施形態では、抗体は、抗ＰＤＬ１ Ｈ６Ｂ１Ｌ－ＥＭ抗体（ＳＴＩ３０３１）ＨＣ／ＬＣ配列番号１／配列番号２（ＰＣＴ特許公報第ＷＯ２０１７／１３２５６２号に配列番号１／配列番号２（Ｈ６Ｂ１Ｌ－ＥＭ）として開示）である。抗体はそのバイオシミラーバージョンであってよい。表１の抗体のバイオシミラーとしては、限定されるものではないが、ベバシズマブのバイオシミラーとしてベバシズマブ－ａｗｗｂ（「ＭＶＡＳＩ（商標）」）、リツキシマブのバイオシミラーとしてＧＰ２０１３およびリツキシマブ－ａｂｂｓ「ＴＲＵＸＩＭＡ（登録商標）」）、トラスツズマブのバイオシミラーとしてトラスツズマブ－ｄｋｓｔ（「ＯＧＩＶＲＩ」）、トラスツズマブ－ｄｔｔｂ（「ＯＮＴＲＵＺＡＮＴ（登録商標）」）、およびトラスツズマブ－ｐｋｒｂ（「ＨＥＲＺＵＭＡ（登録商標）」）が挙げられる。
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担体
一部の実施形態では、担体タンパク質は、アルブミン、ゼラチン、エラスチン（トポエラスチンを含む）またはエラスチン由来ポリペプチド（例えば、α－エラスチンおよびエラスチン様ポリペプチド（ＥＬＰ））、グリアジン、レグミン、ゼイン、大豆タンパク質（例えば、大豆タンパク質分離物（ＳＰＩ））、乳タンパク質（例えば、β－ラクトグロブリン（ＢＬＧ）およびカゼイン）、またはホエイタンパク質（例えば、ホエイタンパク質濃縮物（ＷＰＣ）およびホエイタンパク質分離物（ＷＰＩ））であってよい。一部の実施形態では、担体タンパク質はアルブミンであってよい。一部の実施形態では、アルブミンは、卵白（オボアルブミン）、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）などである。一部の実施形態では、担体タンパク質は、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、例えば、組換えＨＳＡである。一部の実施形態では、担体タンパク質は、米国食品医薬品局（ＦＤＡ）によって承認された、一般に安全とみなされている（ＧＲＡＳ）賦形剤である。
治療薬
治療薬としてドキソルビシンおよびパクリタキセルを比較するナノ粒子を開発した。この薬剤の組合せは、パクリタキセルのみを含むナノ粒子よりも、安定性の向上および細胞毒性の向上をはじめとする実質的な利益をもたらす。ＳＮ３８（イリノテカンの活性代謝物）とパクリタキセルを治療薬として比較するナノ粒子も開発された。この薬剤の組合せは、パクリタキセルのみを含むナノ粒子よりも、インビトロおよびインビボでの細胞毒性の向上をはじめとする実質的な利益をもたらす。したがって、本明細書に記載のナノ粒子複合体は、少なくともドキソルビシンまたはＳＮ３８、およびパクリタキセル（またはパクリタキセル誘導体）を治療薬として含む。ナノ粒子複合体には、さらなる治療薬が含まれてよい。
１または複数の治療薬は、ナノ粒子の内部、ナノ粒子の外表面、またはその両方に位置し得ることが理解される。一部の実施形態では、ナノ粒子複合体は、１よりも多くの治療薬、例えば、２種類の治療薬、３種類の治療薬、４種類の治療薬、５種類の治療薬、またはそれを超える治療薬を含むことがある。さらに、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の内側と外側に同じまたは異なる治療薬を含むことがある。一部の実施形態では、どんな担体タンパク質、結合剤、治療薬、またはそのどんな組合せも明白に除外される。例えば、一部の実施形態では、組成物は、担体タンパク質およびアブラキサン（登録商標）以外の治療薬および／またはベバシズマブ以外のターゲティング抗体を含むことがある。
一部の実施形態では、さらなる治療薬は、アビラテロン、ベンダムスチン、ボルテゾミブ（プロテアソーム阻害剤）、カルボプラチン、カバジタキセル、シスプラチン、クロラムブシル、ダサチニブ、ドセタキセル、ドキソルビシン、エピルビシン、エルロチニブ、エトポシド、エベロリムス、ゲフィチニブ、イダルビシン、イマチニブ、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、ラパチニブ、リュープロレリン、メルファラン、メトトレキサート、ミトキサントロン、ネダプラチン、ニロチニブ、オキサリプラチン、パゾパニブ、ペメトレキセド、ピコプラチン、ロミデプシン、サトラプラチン、ソラフェニブ、ベムラフェニブ、スニチニブ、テニポシド、トリプラチン、ビンブラスチン、ビノレルビン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、ベンダムスチン、ボルテゾミブ、カバジタキセル、クロラムブシル、ダサチニブ、ドセタキセル、エピルビシン、エルロチニブ、イダルビシン、ヒドロキシ尿素、イマチニブ、アドリアマイシン、プレドニゾン、デキサメタゾン、シタラビン、チオテパ、イフォスファミド、ダカルバジン、ブレオマイシン、イブルチニブ、キャンパス－Ｂ、ゲムシタビン、レブラミド、シロリムス、テムシロリムス、ベキサール、ブレンツキシマブ、ベンダムスチン、ベドチン、エムタンシン、および／または表２に記載のものから選択される。
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場合によっては、癌を処置するための複合体を形成するために、結合剤、少なくともドキソルビシンとパクリタキセル、少なくともドキソルビシンとパクリタキセル誘導体、少なくともＳＮ３８とパクリタキセル、少なくともＳＮ３８とパクリタキセル誘導体を含む治療薬、または結合剤と治療薬の任意の組合せ、例えば表１および表２に記載されるものと複合体を形成する担体タンパク質を含有するナノ粒子（例えばアルブミンシェルを有するナノ粒子）を含むように組成物を製剤化することができる。例えば、担体タンパク質ナノ粒子は、黒色腫を処置するためにベバシズマブを含むように製剤化することができる。黒色腫を標的化する追加の結合剤、および黒色腫を処置するために有用な治療薬をナノ粒子に含めることができる。場合によっては、複数の異なる癌を処置する能力のある複合体を形成するために、表１および表２に記載される様々な結合剤または治療薬の組合せと複合体化（例えば、非共有結合）された担体タンパク質を含有するナノ粒子（例えばアルブミンシェルを有するナノ粒子）を含むように組成物を製剤化することができる。例えば、担体タンパク質ナノ粒子は、乳癌および卵巣癌を処置するための複合体として、トラスツズマブ、ベバシズマブ、およびドセタキセルを含むように製剤化することができる。
場合によっては、担体タンパク質を含有するナノ粒子（例えばアルブミンシェルを有するナノ粒子）または本明細書に記載の複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合治療薬（例えばドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、癌患者内に存在する免疫機能障害および／または慢性炎症の全体的な状態を軽減するように設計された１またはそれを超える抗慢性炎症処置剤を含むように製剤化することができる。例えば、ステロイド性抗炎症薬（プレドニゾンなど）、非ステロイド性抗炎症薬（ナプロキセンなど）、リンパ枯渇性細胞傷害性薬剤（シクロホスファミドなど）、免疫細胞および／またはサイトカインターゲティング抗体（インフリキシマブなど）、またはその組合せを、担体タンパク質または結合剤－複合体化担体タンパク質結合治療薬（ドキソルビシンまたはＳＮ３８など）／パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体を含有するナノ粒子に組み込むことができる。場合によっては、抗ＩＬ－４剤（例えば、抗ＩＬ－４抗体）、抗ＩＬ－１３剤（例えば可溶性ＩＬ－１３受容体）、およびその組合せを、担体タンパク質またはアブラキサン（登録商標）を含有するナノ粒子／結合剤複合体に組み込むことができる。
慢性炎症の処置の後に免疫機能障害および／または慢性炎症の全体的な状態が軽減されたかどうかを評価するために、任意の適切な方法を使用することができる。例えば、血液中に存在するサイトカインプロファイル（例えば、ＩＬ－４、ＩＬ－１３、ＩＬ－５、ＩＬ－１０、ＩＬ－２、およびインターフェロンγ）を、抗慢性炎症の処置の前後に評価して、免疫機能障害および／または慢性炎症の全体的な状態軽減されたかどうかを決定することができる。
ナノ粒子およびナノ粒子複合体
任意の適切な方法を使用して担体タンパク質含有ナノ粒子を得ることができる。例えば、アルブミンを治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）およびパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体と組み合わせて、ナノ粒子を形成してもよい。
本明細書に記載の担体タンパク質含有ナノ粒子は、担体タンパク質（アルブミンなど）をパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）およびドキソルビシンまたはＳＮ３８などの治療薬とともに、ナノ粒子を形成するための適した条件下でインキュベートすることによって形成されてよい。一部の実施形態では、担体タンパク質をドキソルビシンおよびパクリタキセルと同時に接触させる。実施形態では、担体タンパク質を、ドキソルビシンおよびパクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）と同時に接触させる。実施形態では、担体タンパク質をＳＮ３８およびパクリタキセルと同時に接触させる。実施形態では、担体タンパク質を、ＳＮ３８およびパクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）と同時に接触させる。他の実施形態では、担体タンパク質を最初にパクリタキセルに接触させた後、ドキソルビシンに接触させるか、またはその逆にする。実施形態では、担体タンパク質を最初にパクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）に接触させた後、ドキソルビシンに接触させるかまたはその逆にする。他の実施形態では、担体タンパク質を最初にパクリタキセルに接触させた後、ＳＮ３８に接触させるか、またはその逆にする。実施形態では、担体タンパク質を最初にパクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）に接触させた後、ＳＮ３８に接触させるかまたはその逆にする。
ナノ粒子中のドキソルビシン対パクリタキセル、またはＳＮ３８対パクリタキセルの比は、例えば、重量で５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセル、例えば、３：１～１：１０、例えば５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、または１：２０、またはその中の任意の範囲であってよい。ナノ粒子中のドキソルビシン対パクリタキセル誘導体、またはＳＮ３８対パクリタキセル誘導体の比は、例えば、重量で５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセル誘導体、例えば、３：１～１：１０、例えば５：１、４：１、３：１、２：１、１：１、１：２、１：３、１：４、１：５、１：６、１：７、１：８、１：９、１：１０、１：１１、１：１２、１：１３、１：１４、１：１５、１：１６、１：１７、１：１８、１：１９、または１：２０、またはその中の任意の範囲であってよい。
任意の適切な方法を使用して担体タンパク質含有ナノ粒子および結合剤（ナノ粒子複合体）を得ることができる。例えば、アルブミンを治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）およびパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体と組み合わせてナノ粒子を形成することができ、次にそれを結合剤と組み合わせてナノ粒子複合体を形成することができる。
一態様では、本発明のナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合少なくとも１００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合少なくとも２００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合少なくとも３００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合少なくとも４００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合少なくとも５００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合少なくとも６００個の結合剤を含む。一部の実施形態では、結合剤は、Ｆｃ融合タンパク質、アプタマー、および／または抗体、例えば抗癌抗体であってよい。
一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約１００個～約１０００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約２００個～約１０００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子複合体の表面に共有結合によらずに結合約３００個～約１０００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約４００個～約１０００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約５００個～約１０００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約６００個～約１０００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約２００個～約８００個の結合剤を含む。一態様では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約３００個～約８００個の結合剤を含む。好ましい実施形態では、ナノ粒子複合体は、ナノ粒子の表面に共有結合によらずに結合約４００個～約８００個の結合剤を含む。企図される値には、エンドポイントを含む、列挙された範囲のいずれかの内の任意の値または部分範囲が含まれる。
いかなる理論にも拘束されることを望まないが、本出願の発明者らは、参照によりその全文が本明細書に組み込まれるＢｕｔｔｅｒｆｉｅｌｄら、２０１７ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｒｅｐｏｒｔｓ ７（１）：１４４７６に開示されるように、アルブミン－パクリタキセルまたはアルブミン－パクリタキセル誘導体ナノ粒子に特異的なアルブミンへのパクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体の結合が、そうでなければ隠れていたナノ粒子上の抗体の疎水性結合のための結合部位を開くことを見出した。抗体の結合部位は、完全なＨＳＡ分子内の比較的内側に位置し、非常に疎水性の薬物結合部位に隣接している。このことは、完全抗体とｎａｂ－パクリタキセル（例えば、アブラキサン（登録商標））粒子以外の供給源由来のアルブミンとの間の結合が起こらないことと対になっていることから、アルブミン結合パクリタキセルまたはアルブミン結合パクリタキセル誘導体ナノ粒子形成のプロセスで、そうでなければ起こらない抗体－アルブミン結合を何かが可能にしていることが示唆される。この未知の独特な結合部位が凍結乾燥中に解放されて安定したままになるかどうかは不明であり、予測不可能であった。
パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体に誘導される抗体の隠れた結合部位の解放は、ドキソルビシンまたはＳＮ３８のナノ粒子への添加によって阻害されない。実際に、治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）の添加は、パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体のみと比較してナノ粒子複合体の特徴を強化する。
場合によっては、担体タンパク質含有ナノ粒子と結合剤（例えば、Ｆｃ融合タンパク質、アプタマー、および／または抗体）を含有する複合体は、平均直径が１μｍを超えるように設計することができる。例えば、平均直径が１μｍを超える複合体が形成されるような、適切な濃度の担体タンパク質含有ナノ粒子および結合剤を使用することができる。場合によっては、遠心分離などの操作を使用して、複合体の平均直径が１μｍを超える担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物を形成することができる。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物の平均直径は、１μｍ～５μｍの間（例えば、１．１μｍ～５μｍの間、１．５μｍ～５μｍの間、２μｍ～５μｍの間、２．５μｍ～５μｍの間、３μｍ～５μｍの間、３．５μｍ～５μｍの間、４μｍ～５μｍの間、４．５μｍ～５μｍの間、１．１μｍ～４．５μｍの間、１．１μｍ～４μｍの間、１．１μｍ～３．５μｍの間、１．１μｍ～３μｍの間、１．１μｍ～２．５μｍの間、１．１μｍ～２μｍの間、または１．１μｍ～１．５μｍの間）であり得る。平均直径が１μｍ～５μｍの間である本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、哺乳動物の体内に位置する癌を処置するために全身に（例えば、静脈内に）投与され得る。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物の平均直径は、５μｍ～５０μｍの間、（例えば、６μｍ～５０μｍの間、７μｍ～５０μｍの間、１０μｍ～５０μｍの間、１５μｍ～５０μｍの間、２０μｍ～５０μｍの間、２５μｍ～５０μｍの間、３０μｍ～５０μｍの間、３５μｍ～５０μｍの間、５μｍ～４５μｍの間、５μｍ～４０μｍの間、５μｍ～３５μｍの間、５μｍ～３０μｍの間、５μｍ～２５μｍの間、５μｍ～２０μｍの間、５μｍ～１５μｍの間、または１０μｍ～３０μｍの間）であり得る。平均直径が５μｍ～５０μｍの間である本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、哺乳動物の体内に位置する腫瘍に（例えば、腫瘍内に）または腫瘍の領域に投与され得る。
腫瘍への直接注射には、腫瘍部位へのまたはその近傍への注射、腫瘍への灌流などが含まれる。腫瘍への直接注射用に製剤化される場合、ナノ粒子複合体はどんな平均粒径も含むことができる。理論に縛られるものではないが、大きい粒子（例えば、５００ｎｍを超える、１μｍを超える粒子など）のほうが腫瘍内で固定化される可能性が高く、それによって有益な効果をもたらすと考えられている。大きい粒子は腫瘍または特定の臓器に蓄積することができる。例えば、肝臓の腫瘍を養う冠動脈に注射するために使用される２０～６０ミクロンのガラス粒子、「ＴｈｅｒａＳｐｈｅｒｅ（登録商標）」（肝臓癌に対して臨床使用中）を参照されたい。そのため、静脈内投与では、通常１μｍ未満の粒子が使用される。１μｍを超える粒子は、より一般的には、腫瘍に直接投与されるか（「直接注射」）、または腫瘍の部位に流れ込む動脈に投与される。
場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、６０パーセントを超える（例えば、６５、７０、７５、８０、９０、９５、または９９パーセントを超える）複合体を有することができ、複合体の直径は１μｍ～５μｍの間、（例えば、１．１μｍ～５μｍの間、１．５μｍ～５μｍの間、２μｍ～５μｍの間、２．５μｍ～５μｍの間、３μｍ～５μｍの間、３．５μｍ～５μｍの間、４μｍ～５μｍの間、４．５μｍ～５μｍの間、１．１μｍ～４．５μｍの間、１．１μｍ～４μｍの間、１．１μｍ～３．５μｍの間、１．１μｍ～３μｍの間、１．１μｍ～２．５μｍの間、１．１μｍ～２μｍの間、または１．１μｍ～１．５μｍの間）である。直径が１μｍ～５μｍの間の複合体が６０パーセントを超える（例えば、６５、７０、７５、８０、９０、９５、または９９パーセントを超える）、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、全身に（例えば、静脈内に）投与されて、哺乳動物の体内に位置する癌を処置することができる。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、６０パーセントを超える（例えば、６５、７０、７５、８０、９０、９５、または９９パーセントを超える）複合体を有することができ、複合体の直径は５μｍ～５０μｍの間（例えば、６μｍ～５０μｍの間、７μｍ～５０μｍの間、１０μｍ～５０μｍの間、１５μｍ～５０μｍの間、２０μｍ～５０μｍの間、２５μｍ～５０μｍの間、３０μｍ～５０μｍの間、３５μｍ～５０μｍの間、５μｍ～４５μｍの間、５μｍ～４０μｍの間、５μｍ～３５μｍの間、５μｍ～３０μｍの間、５μｍ～２５μｍの間、５μｍ～２０μｍの間、５μｍ～１５μｍの間、または１０μｍ～３０μｍの間）である。直径が５μｍ～５０μｍの間の複合体が６０パーセントを超える（例えば、６５、７０、７５、８０、９０、９５、または９９パーセントを超える）、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、哺乳動物の体内に位置する腫瘍に（例えば、腫瘍内に）または腫瘍の領域に投与され得る。一部の実施形態では、ナノ粒子複合体は、新たに作製されたか、または凍結乾燥されて注射に適した水溶液に再懸濁された後のいずれかに上記の平均粒径を有する。
一態様では、組成物内の約０．０１％未満のナノ粒子複合体は、２００ｎｍよりも大きい、３００ｎｍよりも大きい、４００ｎｍよりも大きい、５００ｎｍよりも大きい、６００ｎｍよりも大きい、７００ｎｍ、または８００ｎｍよりも大きい粒径を有する。一態様では、組成物内の約０．００１％未満のナノ粒子複合体は、２００ｎｍよりも大きい、３００ｎｍよりも大きい、４００ｎｍよりも大きい、５００ｎｍよりも大きい、６００ｎｍよりも大きい、７００ｎｍ、または８００ｎｍよりも大きい粒径を有する。好ましい実施形態では、組成物内の約０．０１％未満のナノ粒子複合体は、８００ｎｍよりも大きい粒径を有する。より好ましい実施形態では、組成物内の約０．００１％未満のナノ粒子複合体は、８００ｎｍよりも大きい粒径を有する。
場合によっては、担体タンパク質含有ナノ粒子と結合剤（例えば、抗体）を含有する複合体は、平均直径が１μｍ未満になるように設計することができる。例えば、平均直径が１μｍ未満の複合体が形成されるような、適切な濃度の担体タンパク質含有ナノ粒子および結合剤を使用することができる。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物の平均直径は、０．０５μｍ～１μｍの間（例えば、０．０５μｍ～０．９５μｍの間、０．０５μｍ～０．９μｍの間、０．０５μｍ～０．８μｍの間、０．０５μｍ～０．７μｍの間、０．０５μｍ～０．６μｍの間、０．０５μｍ～０．５μｍの間、０．０５μｍ～０．４μｍの間、０．０５μｍ～０．３μｍの間、０．０５μｍ～０．２μｍの間、０．２μｍ～１μｍの間、０．３μｍ～１μｍの間、０．４μｍ～１μｍの間、０．５μｍ～１μｍの間、０．２μｍ～０．６μｍの間、０．３μｍ～０．６μｍの間、０．２μｍ～０．５μｍの間、または０．３μｍ～０．５μｍの間）であり得る。平均直径が０．０５μｍ～０．９μｍの間である本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、哺乳動物の体内に位置する癌を処置するために全身に（例えば、静脈内に）投与され得る。一態様では、ナノ粒子複合体組成物は、静脈内注射用に製剤化される。虚血事象を回避するために、静脈内注射用に製剤化されたナノ粒子組成物は、平均粒径が約１μｍ未満のナノ粒子を含むべきである。
場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、６０パーセントを超える（例えば、６５、７０、７５、８０、９０、９５、または９９パーセントを超える）複合体を有することができ、複合体の直径は０．０５μｍ～１μｍの間（例えば、０．０５μｍ～０．９５μｍの間、０．０５μｍ～０．９μｍの間、０．０５μｍ～０．８μｍの間、０．０５μｍ～０．７μｍの間、０．０５μｍ～０．６μｍの間、０．０５μｍ～０．５μｍの間、０．０５μｍ～０．４μｍの間、０．０５μｍ～０．３μｍの間、０．０５μｍ～０．２μｍの間、０．２μｍ～１μｍの間、０．３μｍ～１μｍの間、０．４μｍ～１μｍの間、０．５μｍ～１μｍの間、０．２μｍ～０．６μｍの間、０．３μｍ～０．６μｍの間、０．２μｍ～０．５μｍの間、または０．３μｍ～０．５μｍの間）である。直径が０．０５μｍ～１μｍの間の複合体が６０パーセントを超える（例えば、６５、７０、７５、８０、９０、９５、または９９パーセントを超える）、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体の調製物は、全身に（例えば、静脈内に）投与されて、哺乳動物の体内に位置する癌を処置することができる。
一部の実施形態では、本明細書に列挙されるサイズおよびサイズ範囲は、再構成された凍結乾燥ナノ粒子組成物の粒径に関連する。つまり、凍結乾燥ナノ粒子が水溶液（例えば、水、他の薬学的に許容され得る賦形剤、緩衝液など）に再懸濁された後の粒径または平均粒径は、本明細書に列挙される範囲内にある。
一態様では、少なくとも約５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％、または９９．９％のナノ粒子複合体が、再構成された組成物中に単一のナノ粒子として存在する。つまり、ナノ粒子複合体の約５０％、４０％、３０％未満などが二量体化または多量体化（オリゴマー化）されている。
一部の実施形態では、ナノ粒子複合体のサイズは、担体タンパク質と結合剤の量（例えば、比）を調製することによって制御することができる。ナノ粒子複合体のサイズ、およびサイズ分布も重要である。本明細書に記載のナノ粒子複合体は、それらのサイズに応じて異なって挙動することがある。大きいサイズでは、凝集が血管を塞ぐ可能性がある。そのため、ナノ粒子複合体の凝集は、組成物の性能および安全性に影響を及ぼし得る。一方、より大きな粒子複合体（例えば、多量体）は、特定の条件下（例えば、静脈内投与されない場合）でより治療的であり得る。
一般に、担体タンパク質含有ナノ粒子は、ヒトへの投与の前にポリペプチド抗体などの結合剤と接触させて、担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体（例えば、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル粒子／抗ＶＥＧＦポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル粒子／抗ＶＥＧＦポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体粒子／抗ＶＥＧＦポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体粒子／抗ＶＥＧＦポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル粒子／抗ＣＤ２０ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル粒子／抗ＣＤ２０ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体粒子／抗ＣＤ２０ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体粒子／抗ＣＤ２０ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル粒子／抗ＰＤＬ１ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル粒子／抗ＰＤＬ１ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体粒子／抗ＰＤＬ１ポリペプチド抗体複合体、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体粒子／抗ＰＤＬ１ポリペプチド抗体複合体など）を形成することができる。任意の適切な担体タンパク質含有ナノ粒子調製物および任意の適切な結合剤は、本明細書に記載されるように使用することができる。例えば、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル粒子ナノ粒子、アルブミン／ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）粒子ナノ粒子、アルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル粒子ナノ粒子、またはアルブミン／ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）粒子ナノ粒子は、本明細書に記載されるように使用することができる。本明細書に記載されるように担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を形成するために使用することができる結合剤の例としては、限定されないが、表１に列挙されるものが挙げられる。例えば、適切な用量のアルブミン／ドキソルビシンまたはＳＮ３８／パクリタキセルまたはパクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）粒子と適切な用量の結合剤は、同一容器内で一緒に混合することができる。この混合物は、約５℃～約６０℃の適切な温度、またはエンドポイントを含むその範囲内の任意の範囲、部分範囲、または値でインキュベートすることができる。実施形態では、混合物は、癌患者に投与される前の一定期間（例えば、約３０分、または約５～約６０分の間、約５～約４５分の間、約１５～約６０分の間、約１５～約４５分の間、約２０～約４０分の間、または約２５～約３５分の間）、室温で、例えば、約１５℃～約３０℃の間、約１５℃～約２５℃の間、約２０℃～約３０℃の間、または約２０℃～約２５℃の間でインキュベートすることができる。
場合によっては、担体タンパク質含有ナノ粒子を結合剤と接触させて、癌患者に投与される前に保存される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を形成することができる。例えば、担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物は、本明細書に記載されるように形成し、癌患者に投与される前に一定期間（例えば、数日または数週間）保存することができる。
一実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、ナノ粒子複合体上におよび／またはその内部に、例えば担体タンパク質結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセルコアの表面上に組み込まれている。一実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、担体タンパク質（例えば、アルブミン）結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセルコアの表面上に配置されている。一実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、担体タンパク質結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセルコアと会合している。実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、ナノ粒子複合体上におよび／またはその内部に、例えば、担体タンパク質結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセル誘導体コアの表面上に組み込まれている。実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、担体タンパク質（例えば、アルブミン）結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセル誘導体コアの表面上に配置されている。実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、担体タンパク質結合治療薬（例えば、ドキソルビシンまたはＳＮ３８）／パクリタキセル誘導体コアと会合している。一実施形態では、ナノ粒子複合体の結合剤は、ナノ粒子複合体中の担体タンパク質、例えば、アルブミンと非共有結合的に会合（結合）している。一実施形態では、担体タンパク質（例えば、アルブミン）および治療薬、例えば、ドキソルビシン、ＳＮ３８およびパクリタキセル（またはパクリタキセル誘導体）は、非共有結合を介して会合している（互いに結合している）。
一態様では、ナノ粒子組成物のナノ粒子複合体は、担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子と結合剤を、約５０：１～約１０：３０（濃度による）の比の担体タンパク質粒子または担体タンパク質－治療薬粒子：結合剤の比で接触させることにより形成される。一実施形態では、この比は約５０：２～約１０：２５である。一実施形態では、この比は約５０：２～約１：１である。一実施形態では、この比は約５０：２～約１０：６である。一実施形態では、この比は約５０：４である。一実施形態では、この比は約５０：２である。企図される比には、エンドポイントを含む、列挙された範囲のいずれかの内の任意の値、部分範囲、または範囲が含まれる。
一実施形態では、ナノ粒子複合体を形成するために用いられる溶液または他の液体培地の量は特に重要である。ナノ粒子複合体は、担体タンパク質（または担体タンパク質－治療薬）および結合剤の過度に希薄な溶液では形成されない。過度に濃縮された溶液は、構造化されていない凝集体をもたらす。一部の実施形態では、用いる溶液（例えば、滅菌水、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水）の量は、約０．５ｍＬの溶液～約２０ｍＬの溶液の間である。一部の実施形態では、担体タンパク質（または担体タンパク質－治療薬）ナノ粒子の濃度は、約１ｍｇ／ｍＬ～約１００ｍｇ／ｍＬの間である。一部の実施形態では、抗体の濃度は、約０．０４ｍｇ／ｍＬ～約４ｍｇ／ｍＬの間である。例えば、一部の実施形態では、担体タンパク質：結合剤溶液の比は、１ｍＬの溶液（例えば、生理食塩水）中、約２５ｍｇの担体タンパク質（例えば、アルブミン）：１ｍｇの結合剤（例えば、抗体）である。治療薬（例えば、ドキソルビシン、ＳＮ３８およびパクリタキセル）も担体タンパク質に添加することができる。典型的なＩＶバッグを使用する場合、例えば約１リットルの溶液では、１ｍＬで使用する場合と比較して１０００倍の量の担体タンパク質／担体タンパク質－治療薬および結合剤を使用する必要がある。したがって、標準的なＩＶバッグでは本発明のナノ粒子を形成することはできない。さらに、成分を本発明の治療量で標準的なＩＶバッグに添加すると、成分はナノ粒子複合体を形成するために自己集合しない。
一実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約４～約８の間のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。一実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約４のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。一実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約５のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。一実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約６のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。一実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約７のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。一実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約８のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。好ましい実施形態では、１または複数の担体タンパク質または担体タンパク質－治療薬粒子を、約５～約７の間のｐＨを有する溶液中で結合剤と接触させる。
理論に縛られるものではないが、ナノ粒子組成物内のナノ粒子複合体の安定性は、少なくとも一部分、ナノ粒子複合体が形成される温度および／またはｐＨ、ならびに溶液中の成分（すなわち、担体タンパク質、結合剤、および必要に応じて治療薬）の濃度に依存すると考えられている。一実施形態では、ナノ粒子複合体のＫｄは、約１×１０－１１Ｍ～約２×１０－５Ｍの間である。一実施形態では、ナノ粒子複合体のＫｄは、約１×１０－１１Ｍ～約２×１０－８Ｍの間である。一実施形態では、ナノ粒子複合体のＫｄは、約１×１０－１１Ｍ～約７×１０－９Ｍの間である。好ましい実施形態では、ナノ粒子複合体のＫｄは、約１×１０－１１Ｍ～約３×１０－８Ｍの間である。企図される値には、エンドポイントを含む、列挙された範囲のいずれかの内の任意の値、部分範囲、または範囲が含まれる。
凍結乾燥
本明細書に記載の凍結乾燥組成物は、安定剤、緩衝液などの存在下または非存在下で、標準的な凍結乾燥技術によって調製される。驚くべきことに、これらの条件は、ナノ粒子複合体の比較的脆弱な構造を変えない。さらに、これらのナノ粒子複合体は、凍結乾燥によってせいぜいそのサイズ分布を保持するかまたはそのサイズ分布を増大させる程度であり、さらに重要なことに、新たに作製された場合と実質的に同じ形態および比でインビボ投与（例えば、静脈内送達）用に再構成することができる。
本発明はさらに、担体タンパク質、結合剤、例えば、抗体、アプタマー、または疎水性ドメインと結合ドメインを有する融合タンパク質、例えば、アプタマーまたは細胞受容体のリガンドに融合したＦｃドメイン、および治療薬を含む、必要に応じて凍結乾燥したナノ粒子が、患者に対する毒性を最小限に抑えながら腫瘍への標的治療を提供するという驚くべき発見に一部分基づいている。したがって、本明細書に記載のナノ粒子は、従来のＡＤＣと比べて大幅に改善されている。
凍結乾燥またはフリーズドライは、組成物から水を除去する。このプロセスでは、乾燥させる材料が最初に凍結され、次に氷または凍結した溶媒が真空環境での昇華によって除去される。賦形剤は、凍結乾燥プロセス中の安定性を高めるため、および／または保存時の凍結乾燥製品の安定性を改善するために、凍結乾燥前の製剤に含めることができる。Ｐｉｋａｌ、Ｍ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．３（９）２６－３０（１９９０）およびＡｒａｋａｗａら、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．８（３）：２８５－２９１（１９９１）。
タンパク質は凍結乾燥することができるが、凍結乾燥および再構成のプロセスは、タンパク質の特性に影響を及ぼす可能性がある。タンパク質は、従来の有機および無機薬物よりも大きく複雑であるため（すなわち、複雑な三次元構造に加えて複数の官能基をもっている）、このようなタンパク質の製剤は特別な問題を提起する。タンパク質が生物活性を維持するために、製剤は、タンパク質の複数の官能基を分解から保護すると同時に、タンパク質のアミノ酸の少なくともコア配列のコンフォメーションの完全性をそのまま維持する必要がある。タンパク質の分解経路には、化学的不安定性（すなわち、結合形成または切断によるタンパク質の修飾を伴い、新しい化学物質が生じるあらゆるプロセス）または物理的不安定性（すなわち、タンパク質の工事構造の変化）が関与する可能性がある。化学的不安定性は、脱アミド化、ラセミ化、加水分解、酸化、β脱離またはジスルフィド交換に起因し得る。物理的不安定性は、例えば、変性、凝集、沈殿または吸着に起因し得る。最も一般的な３つのタンパク質分解経路は、タンパク質の凝集、脱アミド化および酸化である。Ｃｌｅｌａｎｄら、Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ Ｄｒｕｇ Ｃａｒｒｉｅｒ Ｓｙｓｔｅｍｓ １０（４）：３０７－３７７（１９９３）。
本明細書で提供される組成物は、（ａ）担体タンパク質（ｂ）結合剤および（ｃ）治療薬を含有するナノ粒子を含む。結合剤は、おそらくその性質上弱い疎水性相互作用によって、担体タンパク質に非共有結合している。そのため、このような組成物の凍結乾燥および再構成は、個々の成分の活性を維持するだけでなく、ナノ粒子におけるそれらの相対的な関係も維持する必要がある。しかし、個々の成分の活性、ならびにナノ粒子におけるそれらの相対的な関係は、組成物の凍結乾燥および再構成にもかかわらず維持される。担体タンパク質への結合、例えば結合剤の担体タンパク質への複合体形成は、結合剤の疎水性部分、例えば抗体のＦｃ成分の一部または全部を介して起こり、その結果、疎水性部分の全部または一部が担体タンパク質コアに組み込まれるが、一方、標的結合部分（領域）（例えば、抗体のＦａおよびＦｂ部分）は担体タンパク質コアの外側に残り、それにより、それらの標的特異的結合能力を保持することはさらに企図される。一部の実施形態では、結合剤は、非治療的かつ非内在性のヒト抗体、融合タンパク質、例えば、抗体のＦｃドメインと標的抗原に結合するペプチドとの融合、またはアプタマーである。
ナノ粒子複合体は治療で使用されるため、さらなる課題が課せられる。例えば、ナノ粒子複合体中の疎水性成分の再配列は、成分間の共有結合によって軽減され得る。しかし、このような共有結合は、癌の処置におけるナノ粒子複合体の治療的使用に課題をもたらす。結合剤、担体タンパク質、および追加の治療薬は、通常、腫瘍の異なる位置で、異なる機構を通じて作用する。非共有結合は、ナノ粒子複合体の成分が腫瘍で解離することを容認する。したがって、共有結合は凍結乾燥には有利かもしれないが、治療用途には不利になる場合がある。
ナノ粒子複合体のサイズ、およびサイズ分布も重要である。本明細書に記載のナノ粒子複合体は、それらのサイズに応じて異なって挙動することがある。大きなサイズでは、ナノ粒子複合体またはこれらの粒子の凝集が血管を塞ぐ可能性があり、いずれも組成物の性能および安全性に影響を与える可能性がある。最後に、凍結保護剤および凍結乾燥プロセスを助ける薬剤は、安全で治療用途に許容されるものでなければならない。
従来のＡＤＣが効果的であるためには、リンカーが全身循環で解離しない程度に安定していて、腫瘍部位では十分な薬物放出を可能にすることが重要である。Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら、（２００８）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ１９：７５９－７６５。これは、効果的な薬物複合体を開発する上で大きなハードルであることが分かった（Ｊｕｌｉｅｎ，Ｄ．Ｃ．ら、（２０１１）ＭＡｂｓ ３：４６７－４７８；Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら、（２００８）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ Ｃｈｅｍ１９：７５９－７６５）；そのため、ナノ粒子複合体の魅力的な機能は、生化学リンカーを必要としないことである。
現在のＡＤＣのもう１つの欠点は、腫瘍へのより高い薬物浸透がヒトの腫瘍で実質的に証明されていないことである。マウスモデルにおけるＡＤＣの初期の試験により、抗体を用いた腫瘍ターゲティングが腫瘍での活性剤の濃度を高くすることが示唆された（Ｄｅｇｕｃｈｉ，Ｔ．ら（１９８６）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ４６：３７５１－３７５５）。しかし、おそらくヒト腫瘍の透過性がマウス腫瘍の透過性よりもはるかに不均一であるために、これはヒトの疾患の処置とは相関していなかった。Ｊａｉｎ，Ｒ．Ｋ．ら（２０１０）Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃｌｉｎ Ｏｎｃｏｌ７：６５３－６６４。また、ナノ粒子複合体のサイズも脈管構造から腫瘍への血管外遊走にとって重要である。ヒト結腸腺癌異種移植モデルを使用したマウスの研究では、血管孔は４００ｎｍまでのリポソームに対して透過性であった。Ｙｕａｎ，Ｆ．ら、（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ５５：３７５２－３７５６。腫瘍の孔径および透過性の別の研究では、両方の特徴が腫瘍の位置と成長状態に依存し、退行性腫瘍と頭蓋腫瘍は２００ｎｍ未満の粒子を透過することが示された。Ｈｏｂｂｓ，Ｓ．Ｋ．ら、（１９９８）Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ９５：４６０７－４６１２。本明細書に記載のナノ粒子複合体は、２００ｎｍ未満のインタクトな大きな複合体が、全身循環で部分的に解離して、腫瘍組織に容易に浸透できる小さな機能単位になるという事実によってこの問題を克服する。さらに、複合体は腫瘍部位に到着すると、より毒性の低いペイロードを放出することができるので、複合体全体ではなく、毒性部分だけを腫瘍細胞に取り込ませればよい。
治療薬（すなわち、パクリタキセル）を含有する抗体（すなわち、アバスチン（登録商標））でコーティングされたアルブミンナノ粒子の出現は、２またはそれを超える治療薬をインビボで所定の部位に指向性送達するという新しいパラダイムをもたらした。ＰＣＴ特許公報第ＷＯ２０１２／１５４８６１号、ＷＯ２０１４／０５５４１５号、ＷＯ２０１５／１９１９６９号、ＷＯ２０１５／１９５４７６号、ＷＯ２０１６／０５７５５４号、ＷＯ２０１７／０３１３６８号、ＷＯ２０１７／１７６２６５号、ＷＯ２０１８／０４８８１６号、およびＷＯ２０１８／０４８９５８号を参照されたい。
単一の供給源タンパク質を含むタンパク質組成物は、一般に、かなりの有効期間を示す凍結乾燥形態で保存されるが、このような凍結乾燥組成物は、疎水性－疎水性相互作用によって一緒に組み込まれた２つの異なるタンパク質の自己組織化ナノ粒子を含まない。さらに、抗体結合部分の大部分がナノ粒子の表面に露出しているナノ粒子構成は、そうでなければ良性とみなされる条件による移動または再構成の影響を受けやすい。例えば、凍結乾燥中に、タンパク質のイオン電荷が脱水され、それにより下にある電荷が露出する。露出した電荷により、２つのタンパク質の電荷－電荷相互作用が可能になり、各タンパク質の他方に対する結合親和性を変化させることができる。さらに、ナノ粒子の濃度は、溶媒（例えば、水）が除去されると大幅に増加する。このようなナノ粒子の濃度の増加は、不可逆的なオリゴマー化を引き起こすことがあり得る。オリゴマー化は、モノマー形態と比較してオリゴマーの生物学的特性を低下させ、粒子のサイズを時には１ミクロン以上に増大させることもある、タンパク質の既知の特性である。
一方、ナノ粒子組成物の安定な形態は、少なくとも３か月の有効期間が必要とされ、６カ月または９カ月を超える有効期間が好ましい、臨床的および／または商業的使用のために必要である。このような安定な組成物は、静脈内注射に容易に利用可能でなければならず、ナノ粒子をインビボで所定の部位に向けるように、静脈内注射時にその自己組織化形態を保持しなければならず、血流中に送達された場合に虚血事象を回避するために最大サイズが１ミクロン未満でなければならず、最後に、注射に使用される水性組成物に適合しなければならない。
本発明のものと同様のナノ粒子複合体の治療効果を並べて比較すると、結果は、驚くべきことに、凍結乾燥および再構成された複合体が新鮮な複合体と同等またはそれを超える活性を保持することを示した。さらに、複合体の直径は、平均して凍結乾燥前よりも凍結乾燥後のほうが大きい。この直径の増加は、凍結乾燥プロセス後の水の減少のために、抗体がナノ粒子上により高密度に充填されているためであり得る。腫瘍サイズの減少とベバシズマブナノ粒子複合体の生存率は、１６０ｎｍから１１３０ｎｍまでのサイズ間でますます増加しているため（Ｎｅｖａｌａら、２０１６ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ（７６）１３：３９５４－３９６４）、凍結乾燥は、再構成後に平均直径が増加した複合体を生成することによって、製品を予想外に改善する。
ナノ粒子複合体を用いた医薬組成物および方法
一般に、本明細書で提供される複合体は、承認された投与様式のいずれかによって患者に投与するために製剤化することができる。様々な製剤および薬物送達システムが当技術分野で利用可能である。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，ｅｄ．（２０１２）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄ ｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．を参照されたい。
一般に、本明細書で提供される複合体は、以下の経路：経口、全身（例えば、経皮、経鼻または座薬による）、または非経口（例えば、筋肉内、静脈内または皮下）投与のいずれか１つによって医薬組成物として投与される。
一態様では、本明細書に記載のナノ粒子複合体の医薬組成物は、腫瘍への直接注射用に製剤化される。直接注射には、腫瘍部位へのまたはその近傍への注射、腫瘍への灌流などが含まれる。ナノ粒子複合体の医薬組成物は全身投与されないので、ナノ粒子複合体の医薬組成物は、腫瘍への直接注射用に製剤化され、任意の平均粒径を含み得る。理論に縛られるものではないが、大きい粒子（例えば、６００ｎｍを超える、１μｍを超えるなど）のほうが腫瘍内で固定化される可能性が高く、それによって、より有益な効果であると考えられるものをもたらすと考えられている。
一態様では、本明細書では、本明細書に記載のナノ粒子複合体の医薬組成物が提供される。医薬組成物は、一般に、少なくとも１つの薬学的に許容され得る賦形剤と組み合わせた、本明細書に記載のナノ粒子複合体から構成される。許容され得る賦形剤は無毒であり、投与を補助し、特許請求された複合体の治療効果に悪影響を及ぼさない。このような賦形剤は、当業者が一般に入手可能な任意の固体、液体、半固体、またはエアロゾル組成物の場合にはガス状の賦形剤であってよい。
固体の医薬賦形剤には、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルクなどが含まれる。液体およびの賦形剤は、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、および石油、動物、野菜または合成期限のものを含む様々な油、例えば、ピーナッツ油、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などから選択されてよい。好ましい液体担体、特に注射液用の担体としては、水、生理食塩水、水性デキストロース、およびグリコールが挙げられる。他の適した医薬賦形剤およびそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｅｄｉｔｅｄ ｂｙ Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏｍｐａｎｙ，２２ｎｄ ｅｄ．，２０１２）に記載されている。
本発明の製剤は、必要に応じて、単位用量の活性成分を含有するパックまたはディスペンサー装置で提示されてよい。このようなパックまたは装置は、例えば、金属箔またはプラスチック箔、例えばブリスター包装など、またはガラス、およびバイアルなどでのゴム栓を含み得る。パックまたはディスペンサー装置には、投与のための説明書が添付されていてもよい。適合する薬学的担体に製剤化された単位用量製剤を含む、本明細書に記載の薬学的組成物は、指示された症状の処置のために調製され、適切な容器に入れられ、ラベル付けされてもよい。
任意の適切な方法を用いて、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／抗体複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合治療薬／パクリタキセルナノ粒子複合体または抗体－複合体化アルブミン結合治療薬／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）を哺乳動物に投与することができる。例えば、担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する医薬組成物は、注射（例えば、皮下注射、筋肉内注射、静脈内注射、またはくも膜下腔内注射）によって投与することができる。
本明細書に記載されるナノ粒子複合体およびナノ粒子複合体の医薬組成物は、哺乳動物の癌細胞および／または腫瘍を処置するのに有用である。一実施形態では、哺乳動物はヒト（すなわち、ヒト患者）である。実施形態では、凍結乾燥ナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物は、投与の前に再構成される（水性賦形剤に懸濁される）。
一態様では、癌細胞を処置するための方法が提供され、この方法は、癌細胞を処置するために、本明細書に記載される有効量のナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物を細胞に接触させることを含む。癌細胞の処置には、限定されないが、増殖の低下、細胞の死滅、細胞の転移の防止などが含まれる。
一態様では、腫瘍の処置を必要とする患者において腫瘍を処置するための方法が提供され、この方法は、腫瘍細胞を処置するために、本明細書に記載される治療有効量のナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物を患者に投与することを含む。一実施形態では、腫瘍のサイズが小さくなる。一実施形態では、処置中および／または処置後の少なくとも一定の期間、腫瘍サイズは増加しない（すなわち、進行しない）。
一実施形態では、ナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物は、静脈内に投与される。一実施形態では、ナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物は、腫瘍に直接投与される。一実施形態では、ナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物は、腫瘍への直接注射または灌流によって投与される。
一実施形態では、この方法は、ａ）ナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物を週１回、３週間投与すること；ｂ）ナノ粒子複合体またはナノ粒子複合体の医薬組成物の投与を１週間中止すること；およびｃ）必要に応じて、腫瘍を処置するために必要なだけステップａ）およびｂ）を繰り返すことを含む。
一実施形態では、治療有効量の本明細書に記載のナノ粒子複合体は、約５０ｍｇ／ｍ２～約２００ｍｇ／ｍ２の担体タンパク質または担体タンパク質と治療薬を含む。一部の実施形態では、治療有効量は、約７５ｍｇ／ｍ２～約１７５ｍｇ／ｍ２の担体タンパク質または担体タンパク質と治療薬を含む。企図される値には、エンドポイントを含む、列挙された範囲のいずれかの内の任意の値、部分範囲、または範囲が含まれる。
一実施形態では、治療有効量は、約２ｍｇ／ｍ２～約９ｍｇ／ｍ２の結合剤、例えば、抗体、アプタマー、またはＦｃ融合体を含む。一部の実施形態では、治療有効量は、３ｍｇ／ｍ２～約７ｍｇ／ｍ２の結合剤を含む。企図される値には、エンドポイントを含む、列挙された範囲のいずれかの内の任意の値、部分範囲、または範囲が含まれる。
本明細書に記載される組成物および方法によって処置することができる癌または腫瘍としては、限定されるものではないが以下が挙げられる：胆道癌；神経膠芽腫および髄芽細胞腫を含む脳癌；乳癌；子宮頸癌；絨毛癌；結腸癌；子宮内膜癌；食道癌、胃癌；急性リンパ性および骨髄性白血病を含む血液腫瘍；多発性骨髄腫；ＡＩＤＳ関連白血病および成人Ｔ細胞白血病リンパ腫；ボーエン病およびパジェット病を含む上皮内腫瘍；肝臓癌（肝細胞癌）；肺癌；ホジキン病およびリンパ球性リンパ腫を含むリンパ腫；神経芽細胞腫；扁平上皮癌を含む口腔癌；上皮細胞、間質細胞、生殖細胞および間葉系細胞から生じるものを含む卵巣癌；膵臓癌；前立腺癌；直腸癌；平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、脂肪肉腫、線維肉腫および骨肉腫を含む肉腫；黒色腫、カポジ肉腫、基底細胞癌および扁平上皮癌を含む皮膚癌；胚性腫瘍（セミノーマ、非セミノーマ［奇形腫、絨毛癌］）、間質性腫瘍および胚細胞腫瘍を含む精巣癌；甲状腺癌および髄様癌を含む甲状腺癌；腺癌およびウィルムス腫瘍を含む腎癌；ならびに表１および表２に記載の癌。
一般に、本明細書に記載の化合物は、同様の有用性を果たす薬剤について承認された投与様式のいずれかによって、治療有効量で投与されることになる。本発明の化合物、すなわちナノ粒子複合体の実際の量は、処置される疾患の重症度、対象の年齢および相対的な健康状態、使用される化合物の効力、投与の経路および形態、および当業者に周知の他の要因などの多数の要因に依存することになる。
このような化合物の有効量は、最も効果的で便利な投与経路、および最も適切な製剤と同様に、日常的な実験によって容易に決定することができる。様々な製剤および薬物送達システムが当技術分野で利用可能である。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．，ｅｄ．（２０１２）Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２２ｎｄｅｄ．，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．を参照されたい。
本明細書に記載の化合物の有効量または治療有効量または用量は、対象において症状の改善または生存期間の延長をもたらす化合物の量をさす。このような化合物の毒性および治療効果は、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％にとって致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療効果のある用量）を決定することにより、決定することができる。毒性効果と治療効果の用量比が治療指数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。高い治療指数を示す化合物が好ましい。
有効量または治療有効量は、研究者、獣医、医師または他の臨床医が求めている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を誘発する化合物または医薬組成物の量である。投与量は、用いる剤形および／または利用する投与経路に応じてこの範囲内で変化することがある。正確な製剤、投与経路、投与量、および投与間隔は、対象の症状の詳細を考慮して、当技術分野で公知の方法に従って選択されるべきである。
投与量および投与間隔は、所望の効果を得るのに十分な活性部分の血漿レベル、すなわち最小有効濃度（ＭＥＣ）を提供するように個別に調整することができる。ＭＥＣは化合物ごとに異なるが、例えばインビトロデータおよび動物実験から推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投与量は、個々の特徴および投与経路によって異なる。局所投与または選択的取込みの場合、化合物の有効な局所濃度は、血漿濃度に関連しない場合がある。
本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物を哺乳動物に投与する前に、哺乳動物を評価して、哺乳動物が癌を有するか否かを決定することができる。任意の適切な方法を使用して、哺乳動物が癌を有するか否かを決定することができる。例えば、哺乳動物（例えば、ヒト）は、標準的な診断技術を使用して、癌（例えば、リンパ腫などの皮膚癌）を有すると特定することができる。場合によっては、組織生検（例えば、皮膚生検、例えば、リンパ節生検）を採取および分析して、哺乳動物が癌を有するか否かを決定することができる。
哺乳動物が癌を有することを特定した後、哺乳動物に、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物を投与することができる。例えば、担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合パクリタキセルナノ粒子複合体）を含む組成物は、腫瘍の外科的切除の前または代わりに投与することができる。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体）は、腫瘍の切除の後に投与することができる。
実施形態では、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、適切な量で、適切な頻度で、そして所望の結果を達成するため（例えば、無憎悪生存期間を増加させるため）に有効な適切な期間、哺乳動物に投与され得る。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、癌を有する哺乳動物に投与して、癌の進行速度を５、１０、２５、５０、７５、１００、またはそれを超えるパーセントだけ低下させることができる。例えば、進行速度は、さらなる癌の進行が検出されないように低下させることができる。任意の適切な方法を使用して、癌の進行速度が低下したか否かを決定することができる。例えば、皮膚癌の進行速度は、様々な時点で組織を画像化し、存在する癌細胞の量を決定することによって評価することができる。異なる時期に組織内で求めた癌細胞の量を比較することで、進行速度を決定することができる。本明細書に記載の処置の後、進行速度を別の時間間隔で再度決定することができる。場合によっては、処置後の癌のステージを決定し、処置前のステージと比較して、進行速度が低下したか否かを決定することができる。
場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、未処置の癌を有する対応する哺乳動物の無憎悪生存期間中央値、または担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を形成せずに（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体を形成せずに）ナノ粒子と結合剤で処置した癌を有する対応する哺乳動物の無憎悪生存期間中央値と比較して、無憎悪生存期間が（例えば、５、１０、２５、５０、７５、１００、またはそれを超えるパーセントだけ）増加する条件下で、癌を有する哺乳動物に投与することができる。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、癌を有する哺乳動物に投与して、癌を有し、ナノ粒子または結合剤を単独で投与された対応する哺乳動物の無憎悪生存期間中央値と比較して５、１０、２５、５０、７５、１００、またはそれを超えるパーセントだけ無憎悪生存期間を増加させることができる。無増悪生存期間は、任意の長さの期間（例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、またはそれ以上）にわたって測定することができる。
場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、哺乳動物の集団の８週間無憎悪生存率が、本明細書に記載の担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）を含有する組成物を投与されていない比較可能な哺乳動物の集団で観察されたものに比べて６５％またはそれを超える（例えば、６６％、６７％、６８％、６９％、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％ またはそれを超える）という条件下で癌を有する哺乳動物に投与することができる。場合によっては、本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、哺乳動物の集団の腫瘍増殖停止時間中央値が少なくとも１５０日（例えば、少なくとも１５５、１６０、１６３、１６５、または１７０日）である条件下で癌を有する哺乳動物に投与することができる。
有効量の本明細書で提供される担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体を含有する組成物（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）は、哺乳動物に重大な毒性を生じることなく、癌の進行速度を低下させるか、無憎悪生存率を増加させるか、または腫瘍増殖停止時間中央値を増加させる量であってよい。一般に、有効量のアルブミン／治療薬／パクリタキセルは、約５０ｍｇ／ｍ２～約１５０ｍｇ／ｍ２（例えば、約８０ｍｇ／ｍ２）であり得、有効量の結合剤、例えば、抗体、例えば、そのベバシズマブまたはバイオシミラーバージョンなどの抗ＶＥＧＦポリペプチド抗体、例えば、そのリツキシマブまたはバイオシミラーバージョンなどの抗ＣＤ２０ポリペプチド抗体は、約１ｍｇ／ｋｇ～約２０ｍｇ／ｋｇ（例えば、約３ｍｇ／ｋｇ）であり得る。特定の哺乳動物が特定の量に反応しない場合、アルブミン／治療薬／パクリタキセルまたは結合剤の量を、例えば２倍に増やすことができる。この高濃度を投与した後、処置に対する反応性と毒性症状の両方について哺乳動物をモニターし、それに応じて調整を行うことができる。有効量は、一定のままであってもよいし、処置に対する哺乳動物の応答に応じてスライド式または可変用量として調整することもできる。様々な要因が、特定の用途に使用される実際の有効量に影響を及ぼす可能性がある。例えば、投与頻度、処置期間、複数の処置剤の使用、投与経路、および癌の重症度によって、投与される実際の有効量の増減を必要とすることがある。
投与頻度は、哺乳動物に重大な毒性を生じることなく、癌の進行速度を低下させるか、無憎悪生存率を増加させるか、または腫瘍増殖停止時間中央値を増加させる頻度であり得る。例えば、投与頻度は、１ヶ月に約１回～１ヶ月に約３回、または１ヶ月に約２回～１ヶ月に約６回、または２ヶ月に約１回～２ヶ月に約３回であってよい。処置期間中、投与頻度は一定のままにすることも、変えることもできる。本明細書に記載の担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）を含有する組成物による処置の過程は、休息期間を含むことができる。例えば、本明細書に記載の組成物を２週間にわたって投与した後に２週間の休息期間が続くことがあり、このようなレジメンを複数回繰り返すことができる。有効量と同様に、様々な要因が、特定の用途に使用される実際の投与頻度に影響を及ぼす可能性がある。例えば、有効量、処置期間、複数の処置剤の使用、投与経路、および皮膚癌の重症度によって、投与頻度の増減を必要とすることがある。
本明細書で提供される組成物を投与するための有効な期間は、哺乳動物に重大な毒性を生じることなく、癌の進行速度を低下させるか、無憎悪生存率を増加させるか、または腫瘍増殖停止時間中央値を増加させる期間であり得る。したがって、有効期間は、数日から数週間、数か月、または数年までさまざまであり得る。一般に、皮膚癌の処置の有効期間は、数週間から数か月の期間の範囲であり得る。場合によっては、有効期間は個々の哺乳動物が生きている限りであってよい。複数の要因が、特定の処置に使用される実際の有効期間に影響を及ぼす可能性がある。例えば、有効期間は、投与頻度、有効量、複数の処置剤の使用、投与経路、および癌の重症度によって変動し得る。
本明細書に記載の担体タンパク質含有ナノ粒子／結合剤複合体（例えば、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセルナノ粒子複合体、抗体－複合体化アルブミン結合ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体、または抗体－複合体化アルブミン結合ＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子複合体）を含有する組成物は、任意の適切な形態をとってよい。例えば、本明細書で提供される組成物は、注射用の懸濁液を作製するための希釈剤を含むまたは含まない溶液または粉末の形態であってよい。組成物は、限定されないが、薬学的に許容され得るビヒクルを含む追加の成分を含むこともできる。薬学的に許容され得るビヒクルは、例えば、生理食塩水、水、乳酸、マンニトール、またはそれらの組合せであってよい。
本明細書で提供される組成物を哺乳動物に投与した後、哺乳動物をモニターして、癌が処置されたか否かを決定することができる。本明細書に記載されるように、任意の方法を使用して進行および生存率を評価することができる。
一態様では、抗原（例えば、表１に記載の抗原）を発現する癌に罹患している患者を処置するための方法が提供され、前記患者は、前記治療量以下の量の抗－抗原結合剤（例えば、抗体）の投与が前記ナノ粒子複合体の有効性を高めるように、治療量以下の量の、抗原（例えば、表１に記載の抗体）に対して特異的な結合剤と、治療有効量の化学療法薬を含有する担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤ナノ粒子複合体で処置される。
明確にするために、「同時処置」は、抗－抗原抗体が可溶性抗原に優先的に結合する能力があることを条件として、抗原（例えば、ＶＥＧＦ；可溶性サイトカイン）を発現している癌の、担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤複合体の投与の前、同時または投与直後の抗－抗原（例えば、抗ＶＥＧＦ）結合剤による処置をさす。
一実施形態では、抗－抗原結合剤は、ナノ粒子複合体の前に、治療量以下の用量で投与される。この実施形態では、抗－抗原結合剤の投与は、ナノ粒子複合体の投与の約０．５～４８時間前に行われる。
もう一つの実施形態では、抗－抗原結合剤組成物は、ナノ粒子複合体の投与の０．５時間前から投与の０．５時間後までの間に投与される。この実施形態では、このような投与は、それにもかかわらず結合剤（例えば、抗体）組成物によって一部の循環抗原（例えば、ＶＥＧＦ）の結合をもたらすことが企図される。
さらに別の実施形態では、抗体組成物は、ナノ粒子複合体の投与後２時間まで投与することができる。
一態様では、治療量以下の量の抗－抗原結合剤で患者を前処置した約０．５～４８時間後に担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤ナノ粒子複合体を投与することによって、担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤ナノ粒子複合体の有効性を増強するための方法が本明細書で提供される。一実施形態では、このようなナノ粒子複合体は、治療量以下の量の抗－抗原結合剤の約２４時間後に投与される。
別の態様では、可溶性抗原（例えば、ＶＥＧＦ）を発現している癌に罹患している患者の治療成績を増強するための方法が本明細書で提供される。この患者は担体タンパク質結合ドキソルビシン／パクリタキセルまたは担体タンパク質結合ＳＮ３８／パクリタキセルおよび抗－抗原結合剤を含むナノ粒子で処置されるように選択されており、ナノ粒子の前記結合剤は、前記ナノ粒子上および／または前記ナノ粒子の中に組み込まれており、この方法は、ナノ粒子による後続の処置の前に、治療量以下の量の前記抗－抗原結合剤で前記患者を処置することを含む。
別の態様では、可溶性抗原（例えば、ＶＥＧＦ）を過剰発現している癌に罹患している患者の治療成績を増強するための方法が本明細書で提供され、前記方法は、患者を治療量以下の量の前記抗－抗原結合剤で処置すること、および前記患者を有効量の担体タンパク質結合ドキソルビシン／パクリタキセルまたは担体タンパク質結合ＳＮ３８／パクリタキセルおよび抗－抗原結合剤を含むナノ粒子（ナノ粒子の前記結合剤は、前記ナノ粒子上および／または前記ナノ粒子の中に組み込まれている）で同時処置することを含む。
別の態様では、可溶性抗原（例えば、ＶＥＧＦ）を発現している癌に罹患している患者の治療成績を増強するための方法が本明細書で提供される。この患者は担体タンパク質結合ドキソルビシン／パクリタキセルまたは担体タンパク質結合ＳＮ３８／パクリタキセルおよび抗－抗原結合剤を含むナノ粒子で処置され、ナノ粒子の前記結合剤は、前記ナノ粒子上および／または前記ナノ粒子の中に組み込まれており、この方法は、前記ナノ粒子の投与から＋／－０．５時間以内に前記患者を治療量以下の量の前記抗－抗原結合剤で処置することを含む。
別の態様では、治療量以下の量の前記抗－抗原結合剤で処置されている、可溶性抗原（例えば、ＶＥＧＦ）を過剰発現している癌に罹患している患者の治療成績を増強するための方法が本明細書で提供され、前記方法は、前記患者を有効量の担体タンパク質結合ドキソルビシン／パクリタキセルまたは担体タンパク質結合ＳＮ３８／パクリタキセルおよび抗－抗原結合剤を含むナノ粒子で処置することを含み、ナノ粒子の前記結合剤は、前記結合剤の投与から＋／－０．５時間以内に前記ナノ粒子抗体上および／または前記ナノ粒子抗体の中に組み込まれている。
患者は、治療量以下の量の抗－抗原結合剤および担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤複合体で同時処置されてよい。
一部の実施形態では、担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤複合体の前に抗－抗原結合剤が投与され、例えば、結合剤は、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与の数分、数時間または数日前に投与することができる。一部の実施形態では、結合剤は、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与の前の約５～約５９分、約１０～約５０分、約１５～約４５分、約２０～約４０分、約２５～約３５分の間に投与される。他の実施形態では、結合剤は、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与の約１時間、約２時間、約３時間、約４時間、約５時間、約６時間、約１２時間、約２４時間、約４８時間、約７２時間、またはそれ以上前に投与することができる。他の実施形態では、結合剤は、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与の約１日、約２日、約３日、約４日、約５日、約６日、約７日、約１０日、約１２日、約１５日、またはそれ以上前に投与することができる。
一部の実施形態では、結合剤は、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与と同時に、例えば、互いの１０分またはそれ未満で投与することができる。他の実施形態では、結合剤は、後続の投与が抗体を可溶性抗原に優先的に結合させるという条件で、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与に続いて、例えば、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体の投与後２時間以内に投与することができる。
一部の実施形態では、結合剤の治療量以下の量は、結合剤の治療投与量の約１％、約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％または約６０％からなる量から選択される。
一部の実施形態では、抗ＶＥＧＦ抗体の治療量以下の量は、腫瘍に関連するＶＥＧＦをブロックすることなく、循環ＶＥＧＦを優先的にブロックする量である。
一態様では、抗－抗原（例えば、抗－可溶性抗原、例えば、抗ＶＥＧＦ）用量は、抗－抗原結合剤の単位用量製剤であり、その製剤は、前記結合剤の治療用量の約１％～約６０％を構成し、前記製剤は、単位用量として投与されるように包装されている。一態様では、抗－抗原結合剤の単位用量製剤は、前記結合剤の治療用量の約１０％を構成する 例えば、抗ＶＥＧＦ抗体、例えば、ベバシズマブの治療用量の１０％は、０．５ｍｇ／ｋｇ～５ｍｇ／ｋｇであり得る。
抗－抗原（例えば、抗－可溶性抗原、例えば、抗ＶＥＧＦ）結合剤の単位用量製剤は、抗－抗原（例えば、抗－可溶性抗原、例えば、抗ＶＥＧＦ）結合剤の治療用量の約１％～約６０％、約５％～約５０％、約１０％～約４０％、約１５％～約３０％、約２０％～約２５％であり得る。企図される値には、エンドポイントを含む、列挙された範囲のいずれかの内の任意の値、部分範囲、または範囲が含まれる。
一部の実施形態では、抗－抗原（例えば、抗－可溶性抗原、例えば、抗ＶＥＧＦ）抗体は、そのバイオシミラーバージョン（例えば、ベバシズマブのバイオシミラーバージョン）であり、この製剤は、抗体またはそのバイオシミラーバージョンの治療用量の約５％～約２０％を構成する。
キット
一部の態様では、（ａ）一定量の担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤複合体、および必要に応じて（ｂ）取扱説明書を含むキットが本明細書で提供される。一部の実施形態では、（ａ）一定量の担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原結合剤複合体、（ｂ）治療量以下の量の抗－抗原結合剤の単位用量、および必要に応じて（ｃ）取扱説明書を含むキットが本明細書で提供される。一部の実施形態では、キットには、担体タンパク質結合化学療法薬／結合剤の凍結乾燥複合体が含まれ得る。
一部の実施形態では、キットの構成成分は、構成成分が使用順にアクセスされるような方法で構成され得る。例えば、一部の態様では、キットは、開封時またはユーザーのアクセス時に利用可能な第１の成分が、例えば、第１のバイアルに入った、治療量以下の量の結合剤の単位用量であるように構成され得る。次に、一定量の単体タンパク質結合化学療法薬／結合剤複合体を含むまたは含有する第２の容器（例えば、バイアル）がアクセスされ得る。そのため、キットは、第２のバイアルを開ける前に第１のバイアルを開けなければならないように、直感的に構成され得る。一部の実施形態では、例えば、結合剤の投与の前に最初に複合体を投与することが望まれる場合には、順序は異なっていてもよいことを理解されたい。また、両方が同時に投与されるように構成することもできる。最後に、いずれかまたは両方の１または複数の成分の追加のバイアルまたは容器を含めることができ、任意の望ましい順序で開くように構成することができることを理解されたい。例えば、第１のバイアルは結合剤であり得、第２のバイアルは複合体を含み得、第３のバイアルは結合剤または複合体などのいずれを含み得る。このように構成されたキットは、取扱説明書によって意図されていない順序で投与されることを防止する、または少なくとも防止に役立つことが企図される。
一部の態様では、本発明は、担体タンパク質結合化学療法薬／抗－抗原（例えば、抗－可溶性抗原、例えば、抗ＶＥＧＦ）結合剤複合体および治療量以下の量の結合剤の単位用量の投与用のパーツ；および必要に応じてさらに、可読媒体に投薬処置スケジュールを含むキットに関する。一部の実施形態では、投薬スケジュールには、望ましい平均血清レベルを達成するために必要な、治療量以下の量の抗可溶性抗体が提供されることが含まれる。一部の実施形態では、パーツのキットには、患者の性別、患者の体重、および臨床医が達成したい血清レベルに基づく治療量以下の量の抗可溶性結合剤の投薬レジメンを選択する能力を主治医に提供する投薬スケジュールが含まれる。一部の実施形態では、投薬処置は、患者の血液中の循環可溶性抗原（例えば、ＶＥＧＦ）のレベルに基づく。一部の実施形態では、投薬スケジュールは、患者の体重（または質量）および性別に基づいて患者の血液量に対応する情報をさらに提供する。一実施形態では、記憶媒体は、キット内の単位用量形態に付随する付属のパンフレットまたは同様の書面による情報を含むことができる。一実施形態では、記憶媒体は、例えば、このような情報のデジタル符号化された機械可読表現を記憶するための電子、光学、または不揮発性メモリなどの他のデータ記憶装置を含み得る。
本明細書において使用される「可読媒体」という用語は、例えば、ヒトによるかまたは機械によって読み取ることができるデータの表現をさす。人間が読める形式の限定されない例としては、パンフレット、挿入物、または他の書面が含まれる。機械が読める形式の限定されない例には、機械（例えば、コンピュータ、錠剤、および／またはスマートフォン）で読み取り可能な形式で情報を提供する（すなわち、保存および／または送信する）あらゆる機構が含まれる。例えば、機械可読媒体には、読み取り専用メモリ（ＲＯＭ）；ランダムアクセスメモリ（ＲＡＭ）；磁気ディスク記憶媒体；光学記憶媒体；およびフラッシュメモリ装置が含まれる。一実施形態では、機械可読媒体は、ＣＤ－ＲＯＭである。一実施形態では、機械可読媒体は、ＵＳＢドライブである。一実施形態では、機械可読媒体は、Ｑｕｉｃｋ Ｒｅｓｐｏｎｓｅ Ｃｏｄｅ（ＱＲコード（登録商標））または他のマトリックスバーコードである。
配列リスト
抗ＰＤＬ１Ｈ６Ｂ１Ｌ－ＥＭ（ＳＴＩ３０３１）ＩｇＧ１抗体重鎖配列番号１：
ＱＭＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＹＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＳＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＧＰＩＶＡＴＩＴＰＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＳＴＫＧＰＳＶＦＰＬＡＰＳＳＫＳＴＳＧＧＴＡＡＬＧＣＬＶＫＤＹＦＰＥＰＶＴＶＳＷＮＳＧＡＬＴＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＳＧＬＹＳＬＳＳＶＶＴＶＰＳＳＳＬＧＴＱＴＹＩＣＮＶＮＨＫＰＳＮＴＫＶＤＫＫＶＥＰＫＳＣＤＫＴＨＴＣＰＰＣＰＡＰＥＬＬＧＧＰＳＶＦＬＦＰＰＫＰＫＤＴＬＭＩＳＲＴＰＥＶＴＣＶＶＶＤＶＳＨＥＤＰＥＶＫＦＮＷＹＶＤＧＶＥＶＨＮＡＫＴＫＰＲＥＥＱＹＮＳＴＹＲＶＶＳＶＬＴＶＬＨＱＤＷＬＮＧＫＥＹＫＣＫＶＳＮＫＡＬＰＡＰＩＥＫＴＩＳＫＡＫＧＱＰＲＥＰＱＶＹＴＬＰＰＳＲＤＥＬＴＫＮＱＶＳＬＴＣＬＶＫＧＦＹＰＳＤＩＡＶＥＷＥＳＮＧＱＰＥＮＮＹＫＴＴＰＰＶＬＤＳＤＧＳＦＦＬＹＳＫＬＴＶＤＫＳＲＷＱＱＧＮＶＦＳＣＳＶＭＨＥＡＬＨＮＨＹＴＱＫＳＬＳＬＳＰＧＫ
抗ＰＤＬ１Ｈ６Ｂ１Ｌ－ＥＭ（ＳＴＩ３０３１）λ抗体軽鎖配列番号２：
ＳＹＶＬＴＱＰＰＳＶＳＶＡＰＧＫＴＡＴＩＡＣＧＧＥＮＩＧＲＫＴＶＨＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＶＬＶＩＹＹＤＳＤＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＲＶＥＡＧＤＥＡＤＹＹＣＬＶＷＤＳＳＳＤＨＲＩＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬＧＱＰＫＡＡＰＳＶＴＬＦＰＰＳＳＥＥＬＱＡＮＫＡＴＬＶＣＬＩＳＤＦＹＰＧＡＶＴＶＡＷＫＡＤＳＳＰＶＫＡＧＶＥＴＴＴＰＳＫＱＳＮＮＫＹＡＡＳＳＹＬＳＬＴＰＥＱＷＫＳＨＲＳＹＳＣＱＶＴＨＥＧＳＴＶＥＫＴＶＡＰＴＥＣＳ
実施例
前述の例は本発明を例示するものであり、これを限定するものと解釈されるものではない。本発明は、好ましい実施形態を参照して詳細に説明されているが、以下の特許請求の範囲に記載および定義されるように、本明細書に記載される範囲および精神内で変形形態および修正形態が存在する。
実施例１ 薬物含有ナノ粒子の製造
ＳＮ３８－ＮａｂまたはＳＮ３８－ＮＴＰ Ｎａｂ（ナノ粒子アルブミン結合ＳＮ３８）
３０ｍｇのＳＮ３８を０．６ｍｌのＤＭＳＯに溶解し、１０ｍｇのパクリタキセル（または無毒性パクリタキセル（ＮＴＰ）誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール））を０．５ｍｌのクロロホルムに溶解した。２つの溶液を混合し、０．１ｍｌのエタノールを混合物に添加した。４００ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を３８．８ｍｌのＨＰＬＣグレードの水に溶解し、薬物混合物に添加し、ハンドヘルドホモジナイザ－で５０００ｒｐｍで５分間均質化した。次に、均質化した混合物をＭｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ製マイクロフルイダイザー高圧乳化装置（マイクロフルイダイザーモデル１１０Ｓ）に加え、チューブを通して２０回ポンプで送り、ナノ粒子アルブミン結合ＳＮ３８（ＳＮ３８－ＮａｂまたはＳＮ３８－ＮＴＰ Ｎａｂ）を形成した。ナノ粒子混合を－８０℃で一晩凍結させ、９６時間凍結乾燥させた。ナノ粒子は１００ｍｇ／ｍｌの生理食塩水で再構成された。
ＤＯＸ－ＮａｂまたはＤＯＸ－ＮＴＰ Ｎａｂ（ナノ粒子アルブミン結合ドキソルビシン）
ステップ１：ドキソルビシン塩酸塩の疎水性形態への変換－５０ｍｇのドキソルビシン－ＨＣｌ（Ｃａｙｍａｂ Ｃｈｅｍｉｃａｌ、カタログ番号１５００７）を１２ｍｌ：８ｍｌのクロロホルム：メタノール（３：２）混合物に溶解し、続いて１１２ｍｇのトリエチルアミン（Ａｃｒｏｓ Ｏｒｇａｎｉｃｓ、カタログ番号１５７９１）を添加した。この溶液を室温で２４時間、回転させることによって混合した。次に、ドキソルビシンを乾燥させないようにしながら、溶液をロータベーパーで４０℃で５分間蒸発させた。このプロセスを、すべての溶媒が除去されるまで３～４回繰り返した。ドキソルビシンを７．５～１０ｍｌのクロロホルムに再懸濁した。
ステップ２：３０ｍｇのドキソルビシンを約６ｍｌのクロロホルムに溶解した。１０ｍｇのパクリタキセル（または無毒性パクリタキセル（ＮＴＰ）誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール））をドキソルビシン溶液に溶解し、１０容量％の１００％エタノールを添加した。４００ｍｇのヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）を３４ｍｌのＨＰＬＣグレードの水に溶解し、薬物混合物に添加し、５分間撹拌した。混合直後に、混合物をガラスリザーバに移し、マイクロフルイダイザーポンプを使用して乳化した。混合物は、チューブシステムを通して８０～１００ｐｓｉで２０回ポンプで送った。ポンプを５回通すごとにシステムを閉じて、混合物をポンプチューブに５回循環させた。次に、ナノ粒子混合物をロータベーパーで４０℃で２５分間蒸発させた。混合物を－８０℃で少なくとも４時間凍結させ、次いで４８～７２時間凍結乾燥させた。ナノ粒子は１００ｍｇ／ｍｌの生理食塩水で再構成された。
ナノ免疫複合体（ＮＩＣ）
抗体を、ＳＮ３８－Ｎａｂ、ＳＮ３８－ＮＴＰ Ｎａｂ、ＤＯＸ－ＮａｂまたはＤＯＸ－ＮＴＰ Ｎａｂとともに、０．９％生理食塩水中１：２５（抗体：ナノ粒子の濃度）の比で穏やかに撹拌しながら室温で３０～６０分間インキュベートした。
実施例２ ドキソルビシン／パクリタキセル（Ｐａｃｔｉｌａｘｅｌ）ナノ粒子の安定性および細胞毒性
本発明者らは、以前に、特にベバシズマブ、リツキシマブ、およびアテゾリズマブをはじめとする、臨床的に関連するモノクローナル抗体に結合する能力を有するヒト血清アルブミンの球の中心にパクリタキセルを含有する１３０ｎｍのナノ粒子を含むナノ粒子複合体を開発し、１６０ｎｍの粒子を作成した。この複合体は、臨床効果があることが示されている。データは、ナノ粒子単独と比較して抗体でコーティングされたナノ粒子の臨床効果の改善が、少なくとも部分的に、循環から離れて腫瘍へのより高い薬物沈着を好む体内分布の変化に起因することを示唆している。
他の疎水性小分子はアルブミンと安定したナノ粒子を形成することができるが、パクリタキセルにはアルブミン上の抗体結合部位を開く独自の能力がある。アルブミンの中心にある疎水性ポケットに他の化学療法剤を含めるために、ドキソルビシンおよびＳＮ３８をパクリタキセル（タキソール）と様々な比で試験して、癌ターゲティング抗体に非共有結合することもできる安定したナノ粒子を作成した。
これらのドキソルビシン含有ナノ粒子は、パクリタキセルのみのナノ粒子と比較して改善された安定性を示した。この追加された粒子安定性は、体内分布を腫瘍への薬物沈着を好むようにさらに改善し、臨床効果をさらに高めることができる。ナノサイトを実施して、ドキソルビシンおよびパクリタキセル（タキソール）を１：１、１：３および１：９の重量比で用いて作製したナノ粒子の粒径を決定した（図１Ａ）。これらのデータは、ドキソルビシンとパクリタキセル（タキソール）の両方を用いて作製されたナノ粒子が、すべて同様のサイズの安定した粒子を形成することを示唆する。ドキソルビシンおよびパクリタキセル（タキソール）のナノ粒子を製造した後、ＨＰＬＣによって総薬物およびアルブミン結合薬物の測定を行った（図１Ｂ）。ナノサイト測定を行って、ナノ粒子が安定しなくなる濃度を決定した（図１Ｃ）。ドキソルビシンを含有する粒子は安定しており、パクリタキセル（タキソール）のみを含むナノ粒子よりもはるかに高い希釈度で測定可能であった。
１：１の比のドキソルビシン：パクリタキセルを含有するアルブミン粒子（発明者が製造したナノ粒子複合体；Ｍａｙｏ＿Ｐａｃ．Ｄｏｘ）、市販のアブラキサン（Ｃｏｍ＿ＡＢＸ）、Ｎａｂ－パクリタキセル（発明者が製造したアブラキサン；Ｍａｙｏ＿ＡＢＸ）、および市販のベバシズマブ（アバスチン、Ｂｅｖのみ）の細胞毒性を、Ａ３７５黒色腫細胞に対して試験した。Ｍａｙｏ＿ＡＢＸは、ＤＯＸ－Ｎａｂの調製について上述した手順に従って調製したが、ドキソルビシンは含まなかった。６．２５～２００ｍｇ／ｍｌの各パクリタキセルおよびドキソルビシンをヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）と組み合わせて、両方の化学療法薬Ｍａｙｏ＿Ｐａｃ．Ｄｏｘ（上記のＤＯＸ－Ｎａｂの調製手順に従って調製）を含有するナノ粒子を形成した。７．５×１０４ Ａ３７５細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むＤＭＥＭ培地中の２４ウェルプレートの各ウェルに播種した。Ａ３７５細胞を、１２．５～４００ｍｇ／ｍｌのベバシズマブ、１２．５～４００ｍｇ／ｍｌの市販のアブラキサン（登録商標）、１２．５～４００ｍｇ／ｍｌの発明者が製造したＮａｂ－パクリタキセル、またはドキソルビシン：パクリタキセルナノ粒子（６．２５～２００ｍｇ／ｍｌの各パクリタキセルおよびドキソルビシン）とともに３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートし、１０ｍＭの５－エチニル－２’－デオキシウリジン（ＥｄＵ）も各ウェルに含めた。一晩インキュベートした後、細胞を回収し、４％パラホルムアルデヒドで固定した。固定後、細胞洗剤（１０％サポニン）で透過処理し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７結合抗ＥｄＵ抗体を用いて製造業者の指示に従って染色する（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ１０６３４）。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７陽性の増殖細胞の計数は、フローサイトメトリー（Ｇｕａｖａ ８ＨＴ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって行われた。図２は、ナノ粒子中の薬物の濃度（Ｘ軸）に対するＡ３７５細胞の増殖指数（Ｙ軸）を示す。増殖指数は、試験ウェルにおける陽性率を、未処置（最大増殖）のＥｄＵ標識細胞における陽性率で割ることによって算出した。ドキソルビシン：パクリタキセルナノ粒子（Ｍａｙｏ＿Ｐａｃ．Ｄｏｘ）は、パクリタキセルしか含まないナノ粒子よりも毒性が著しく高く、わずか１２．５μｇ／ｍｌの薬物でほとんどの細胞が死滅した。
実施例３ ドキソルビシン／パクリタキセル誘導体およびＳＮ３８／パクリタキセル誘導体ナノ粒子の特徴づけ
以下の実験では、ＳＮ３８またはドキソルビシンの毒性効果をナノ粒子中のパクリタキセルの毒性効果から分離するために、通常のパクリタキセルの代わりに、無毒の形態のパクリタキセル（ＮＴＰ）を一部のナノ粒子の製造に使用した（図３）。ドキソルビシンおよびＳＮ３８を、無毒性パクリタキセル誘導体（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）と様々な比で試験して安定したナノ粒子を作製した。これは癌ターゲティング抗体に非共有結合させることもできた。
ナノサイトを実施して以下のナノ粒子の粒径を求めた：ＡＢＸ Ｎａｂ（市販のアブラキサン（登録商標））、ＡＢＸ：ＢＥＶ ＮＩＣ（ベバシズマブと結合したアブラキサン（登録商標）ナノ粒子）、ＡＢＸ：ＲＩＴ ＮＩＣ（リツキシマブと結合したアブラキサン（登録商標）ナノ粒子）、ＡＢＸ：ＳＴＩ３０３１ ＮＩＣ（ＰＤＬ１抗体ＳＴＩ３０３１と結合したアブラキサン（登録商標）ナノ粒子）、ＤＯＸ：ＮＴＰ Ｎａｂ（無毒性パクリタキセル誘導体を使用し、ドキソルビシンを含む、Ｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）、ＤＯＸ：ＮＴＰ：ＲＩＴ ＮＩＣ（無毒性パクリタキセル誘導体を使用し、ドキソルビシンを含み、リツキシマブと結合したＮａｂ－パクリタキセルナノ粒子）、ＳＮ３８：ＮＴＰ Ｎａｂ（無毒性パクリタキセル誘導体を使用し、ＳＮ３８を含む、Ｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）、ＳＮ３８：ＮＴＰ：ＢＥＶ ＮＩＣ（無毒性パクリタキセル誘導体を使用し、ＳＮ３８を含み、ベバシズマブと結合したＮａｂ－パクリタキセルナノ粒子）、ＳＮ３８：ＮＴＰ：ＳＴＩ３０３１ ＮＩＣ（無毒性パクリタキセル誘導体を使用し、ＳＮ３８を含み、ＰＤＬ１抗体ＳＴＩ３０３１と結合したｎａｂ－パクリタキセルナノ粒子）（図４Ａ）。これらのデータは、ドキソルビシンと無毒性パクリタキセル誘導体（ＮＴＰ）（２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソール）の両方で作製されたナノ粒子が、すべて同様のサイズで、ドキソルビシンを含まないナノ粒子よりも小さい粒子を形成するが、ＳＮ３８と無毒性パクリタキセル誘導体の両方で作製されたナノ粒子は、すべて同様のサイズで、ＳＮ３８を含まないナノ粒子よりもはるかに大きな粒子を形成することを示唆する。
上記段落に記載した粒子のゼータ電位を、Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ（Ｍａｌｖｅｒｎ）を使用して測定した。このデータは、ナノ粒子にドキソルビシンを含めるとゼータ電位がわずかに低下するが、ＳＮ３８はゼータ電位に影響を与えないことを示唆している。抗体をナノ粒子と結合することにより、ゼータ電位は著しく上昇する（図４Ｂ）。ゼータ電位の上昇を用いて、抗体がナノ粒子の表面に結合していることを確認した。図４Ｃは、ＳＮ３８を含むＮａｂ－パクリタキセル（タキソール）ナノ粒子から作成され、様々な濃度のＳＴＩ３０３１（ＰＤＬ１）抗体と結合したナノ免疫複合体（ＮＩＣ）のゼータ電位を示す。ゼータ電位は、ｎａｂ－パクリタキセルＳＮ３８ナノ粒子に結合したＳＴＩ３０３１抗体の濃度の増加とともに上昇し、４ｍｇ／ｍｌ抗体がＮａｂ－パクリタキセルＳＮ３８ナノ粒子と結合したときにその最大値に達すると思われる。
実施例４ 薬物負荷および結合効率
ＳＮ３８およびパクリタキセル（タキソール）のナノ粒子を製造した後、ＨＰＬＣによって総薬物およびアルブミン結合薬物の測定を行った（図５Ａ）。このデータは、ＳＮ３８が非常に優れた負荷および結合効率を有することを示唆する。７５．０ｍｇのＳＮ３８と２５ｍｇのパクリタキセル（タキソール）をホモジナイズし、アルブミンで乳化してナノ粒子を調製すると、総量７２．３ｍｇのＳＮ３８が検出され（負荷効率９６．４％）、６９．９ｍｇのＳＮ３８がナノ粒子に共有結合によらずに結合（結合効率９６．７％）。
ドキソルビシンおよび無毒性パクリタキセル誘導体（ＮＴＰ）ナノ粒子またはＳＮ３８および無毒性パクリタキセル誘導体（ＮＴＰ）ナノ粒子の製造後、ＨＰＬＣによって総薬物およびアルブミン結合薬物の測定を行った（図５Ｂ）。６２．５ｍｇのドキソルビシン、無毒性パクリタキセル誘導体およびアルブミンをホモジナイズし、一緒に乳化してナノ粒子を形成すると、総量３５ｍｇのドキソルビシンが検出され（負荷効率５６％）、約２７．５ｍｇのドキソルビシンがナノ粒子に共有結合によらずに結合（結合効率７８．６％）。７５ｍｇのＳＮ３８、無毒性パクリタキセル誘導体およびアルブミンをホモジナイズし、一緒に乳化してナノ粒子を形成すると、総量５１．２ｍｇのＳＮ３８が検出され（負荷効率６８．２％）、約５０．１ｍｇのＳＮ３８がナノ粒子に共有結合によらずに結合（結合効率９７．９％）。このデータは、ＳＮ３８がドキソルビシンよりもはるかに優れた負荷および結合効率を有することを示唆する。
実施例５ ドキソルビシン／無毒性パクリタキセルおよびＳＮ３８／無毒性パクリタキセルナノ粒子の細胞毒性
イリノテカン（数種類の癌を処置するために使用されるトポイソメラーゼＩ阻害剤）、ＳＮ３８（イリノテカンの疎水性活性代謝物）、およびＳＮ３８ Ｎａｂ（上記のように、無毒性パクリタキセル誘導体を用いてナノ粒子を調製した場合）の細胞毒性をＭＤＡ－ＭＢ－２３１乳癌細胞に対して試験した。１×１０５ ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むＤＭＥＭ培地中の２４ウェルプレートの各ウェルに播種した。ＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、１、５、１０、または５０ｍｇ／ｍｌのイリノテカン、ＳＮ３８、またはＳＮ３８ Ｎａｂナノ粒子とともに３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートし、１０ｍＭの５－エチニル－２’－デオキシウリジン（ＥｄＵ）も各ウェルに含めた。一晩インキュベートした後、細胞を回収し、４％パラホルムアルデヒドで固定した。固定後、細胞洗剤（１０％サポニン）で透過処理し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７結合抗ＥｄＵ抗体を用いて製造業者の指示に従って染色する（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ１０６３４）。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７陽性の増殖細胞の計数は、フローサイトメトリー（Ｇｕａｖａ ８ＨＴ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって行われた。図６Ａは、ナノ粒子中の薬物の濃度（Ｘ軸）に対するＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞の増殖指数（Ｙ軸）を示す。増殖指数は、試験ウェルにおける陽性率を、未処置（最大増殖）のＥｄＵ標識細胞における陽性率で割ることによって算出した。ＳＮ３８ Ｎａｂナノ粒子は、ＳＮ３８およびイリノテカンよりも著しく毒性が高く、わずか１μｇ／ｍｌの薬物で半分以上の細胞が死滅した。重要なことに、薬物をナノ粒子に封入した結果として、ＳＮ３８の毒性はいずれの濃度でも失われなかった。
ドキソルビシンおよびドキソルビシン Ｎａｂ（上記のように、無毒性パクリタキセル誘導体を用いてナノ粒子を調製した場合）の細胞毒性を、ＤａｕｄｉヒトＢ細胞リンパ腫細胞に対して試験した。２×１０５Ｄａｕｄｉ細胞を、１０％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）を含むＤＭＥＭ培地中の２４ウェルプレートの各ウェルに播種した。Ｄａｕｄｉ細胞を、１、５、１０、または５０ｍｇ／ｍｌのイリノテカン、ドキソルビシンまたはドキソルビシン Ｎａｂナノ粒子とともに３７℃および５％ＣＯ２で一晩インキュベートし、１０ｍＭの５－エチニル－２’－デオキシウリジン（ＥｄＵ）も各ウェルに含めた。一晩インキュベートした後、細胞を回収し、４％パラホルムアルデヒドで固定した。固定後、細胞洗剤（１０％サポニン）で透過処理し、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７結合抗ＥｄＵ抗体を用いて製造業者の指示に従って染色する（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号Ｃ１０６３４）。Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７陽性の増殖細胞の計数は、フローサイトメトリー（Ｇｕａｖａ ８ＨＴ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）によって行われた。図６Ｂは、ナノ粒子中の薬物の濃度（Ｘ軸）に対するＤａｕｄｉ細胞の増殖指数（Ｙ軸）を示す。増殖指数は、試験ウェルにおける陽性率を、未処置（最大増殖）のＥｄＵ標識細胞における陽性率で割ることによって算出した。ドキソルビシンＮａｂナノ粒子は、低い濃度ではドキソルビシンと同等の細胞毒性を示したが、５０ｍｇ／ｍｌのドキソルビシンＮａｂでは細胞毒性が高い。重要なことに、薬物をナノ粒子に封入した結果として、ドキソルビシンの毒性はいずれの濃度でも失われなかった。
実施例６ ＰＤＬ１－ＳＮ３８ Ｎａｂ（無毒性パクリタキセルで作製）のインビボ有効性
６週齢の雌の胸腺欠損ヌードマウスは、Ｅｎｖｉｇｏ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎより購入した。
ヒト乳癌細胞株ＭＤＡ－ＭＢ－２３１を、ＡＴＣＣより購入し、５％ＣＯ２ ３７℃の加湿環境で、１０％ＦＢＳ、１００単位／ｍｌのペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌのストレプトマイシンを添加したＤＭＥＭ培地で、移植用に収集する前の２～３週間の期間、培養および増殖させた。トリパンブルー色素排除アッセイによって求めた細胞生存率は移植前に９０％を超えていた。１００μｌのＰＢＳ中４００万個のＭＤＡ－ＭＢ－２３１細胞を、皮下注射により各マウスの右上側腹部に接種した。
腫瘍体積の測定は、腫瘍細胞接種後２５日目に開始し、週２回実施した。最も長い縦径を長さとして、最も広い横径を幅として、デジタルノギスを用いることによって測定した。次に、腫瘍体積（ＴＶ）を式：ＴＶ＝［長さ×（幅）２］／２によって算出し、エクセルで分析した。
平均腫瘍サイズが約４００ｍｍ３に達したときに処置を開始した。
腫瘍サイズが２０００ｍｍ３に達したときにマウスを安楽死させた。
担癌マウスを無作為化した後、０．９％生理食塩水、抗ＰＤＬ１、イリノテカン１５、アルブミン結合無毒性パクリタキセル（ＮＴＰ）、７．５および１５ｍｇ／ｋｇの遊離ＳＮ－３８（ＳＮ３８ ７．５および１５）、７．５および１５ｍｇ／ｋｇのアルブミン結合ＳＮ－３８（Ｎａｂ ７．５および１５）、別々の注射で同時に送達される抗ＰＤＬ１＋ＳＮ３８ Ｎａｂ（ＰＤＬ１＋Ｎａｂ１５）、または７．５および１５ｍｇ／ｋｇの抗ＰＤＬ１コーティングアルブミン結合ＳＮ－３８（ＮＩＣ７．５およびＮＩＣ１５）を投与した。アルブミン結合ＳＮ－３８（Ｎａｂ）および抗ＰＤＬ１コーティングＳＮ－３８ Ｎａｂ（ＮＩＣ）を上記のように作製した。薬物を０．９％生理食塩水に希釈し、胸腺欠損ヌードマウスの尾静脈に静脈注射によって１００μｌ投与した。すべての形態のＳＮ－３８は、７．５および１５ｍｇ／ｋｇの単回投与で投与された。
腫瘍測定の生データ（図７Ａ～図７Ｋ）はエクセルで分析した。腫瘍増殖曲線、７日目の腫瘍応答およびカプラン・マイヤー生存曲線は、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ８．０ソフトウェアを用いてプロットした。７日目の腫瘍応答のデータは、スチューデントｔ検定を用いて比較した。０．０５未満のＰ値を有意とみなした（図８）。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１腫瘍異種移植モデルでは、腫瘍応答は、７日目に式：｛（０日目の腫瘍サイズ－７日目の腫瘍サイズ）／０日目の腫瘍サイズ｝＊１００を使用して求めた。腫瘍応答の違いは、ＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍソフトウェア８．０でスチューデントｔ検定によって求めた。ゼロの線よりも上の変化率は腫瘍の増殖を示し、ゼロの線よりも下の変化率は腫瘍の縮小を示す。ＮＩＣ１５群は、Ｎａｂ １５（ｐ値＝０．４９）およびＮＩＣ ７．５（ｐ値＝０．０６）を除く他のすべての群（ｐ値０．０３またはそれ未満）と比較して有意に高い腫瘍応答を示した。このデータは、１５ｍｇ／ｍｌのＳＮ－３８は、抗ＰＤＬ１で標的化されていようといまいと同等の効果があることを示唆している；しかし、薬物投与量をＮＩＣの観点から７．５ｍｇ／ｋｇから１５ｍｇ／ｋｇに増加させることは、有意性に向かって進んでいる（ｔｒｅａｄｉｎｇ ｔｏｗａｒｄｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ）。また、両方の用量の遊離ＳＮ３８と、同じ用量のＮａｂおよびＮＩＣとの比較も行った。ＮＩＣ ７．５と遊離ＳＮ３８ ７．５の差は非常に有意であるが（ｐ値＝０．０００２）、Ｎａｂ ７．５と遊離ＳＮ３８ ７．５の差は有意に達しなかった（ｐ値＝０．０７）。１５ｍｇ／ｋｇの遊離ＳＮ３８とＮａｂ １５およびＮＩＣ １５を比較すると、ｐ値はそれぞれ０．０１３および０．００２８でいずれも有意であった。
ＭＤＡ－ＭＢ－２３１異種移植モデルのカプラン・マイヤー曲線をＧｒａｐｈＰａｄ Ｐｒｉｓｍ ソフトウェア８．０で生成し、生存期間の中央値を、生理食塩水、抗ＰＤＬ１、イリノテカン１５、ＮＴＰ、遊離ＳＮ３８ ７．５、および遊離ＳＮ３８ １５について、それぞれ２８、３４、３０、２４．５、３０、および４２．５と決定した。ＮａｂまたはＮＩＣにＳＮ３８を含有するすべての群の生存期間の中央値は、未決定のままであった（生存期間の中央値に未達）。これらの群間の生存率の差は、Ｍａｎｔｅｌ－Ｃｏｘログランク検定によってｐ値０．０００３で有意に異なることが見出された（図９）。ＮＩＣ １５による処置のみが、１００％の生存率をもたらした。
前述の例は本発明を例示するものであり、これを限定するものと解釈されるものではない。本発明は、好ましい実施形態を参照して詳細に説明されているが、以下の特許請求の範囲に記載および定義されるように、本明細書に記載される範囲および精神内で変形形態および修正形態が存在する。

Claims (63)

  1. 担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセルを含むナノ粒子複合体であって、前記ナノ粒子複合体は、前記ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、前記ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と前記結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、ナノ粒子複合体。
  2. 担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセル誘導体を含むナノ粒子複合体であって、前記パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、前記ナノ粒子複合体は、前記ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、前記ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセル誘導体ナノ粒子と前記結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、ナノ粒子複合体。
  3. 前記パクリタキセル誘導体が、２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソールである、請求項２に記載のナノ粒子複合体。
  4. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項１または２に記載のナノ粒子複合体。
  5. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約３：１～１：１０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項４に記載のナノ粒子複合体。
  6. 前記結合剤が抗体またはその抗原結合断片である、請求項１から５のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  7. 前記担体タンパク質がアルブミンである、請求項１から６のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  8. 前記治療薬がドキソルビシンまたはＳＮ３８である、請求項１から７のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  9. 前記複合体の直径が０．０５μｍ～１．０μｍの間である、請求項１から８のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  10. 前記複合体の直径が０．０５μｍ～０．６μｍの間である、請求項９に記載のナノ粒子複合体。
  11. 担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤の前記比が、重量で５０：１～１：２．５である、請求項１から１０のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  12. 薬学的に許容され得る担体およびナノ粒子複合体を含む医薬組成物であって、前記ナノ粒子複合体が、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセルを含み、前記ナノ粒子複合体は、前記ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、前記ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と前記結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、医薬組成物。
  13. 薬学的に許容され得る担体およびナノ粒子複合体を含む医薬組成物であって、前記ナノ粒子複合体が、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセル誘導体を含み、前記パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、前記ナノ粒子複合体は、前記ナノ粒子複合体が抗癌結合特異性を有するように、前記ナノ粒子複合体を形成する条件下で、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセル誘導体ナノ粒子と前記結合剤とを混合することにより、インビトロで予め形成されている、医薬組成物。
  14. 前記パクリタキセル誘導体が、２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソールである、請求項１３に記載の医薬組成物。
  15. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項１２または１３に記載の医薬組成物。
  16. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約３：１～１：１０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項１５に記載の医薬組成物。
  17. 前記結合剤が抗体またはその抗原結合断片である、請求項１２から１６のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  18. 前記担体タンパク質がアルブミンである、請求項１２から１７のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  19. 前記治療薬がドキソルビシンまたはＳＮ３８である、請求項１２から１８のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  20. 前記複合体の前記平均直径が、０．０５μｍ～１．０μｍの間である、請求項１２から１９のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  21. 前記複合体の前記平均直径が、０．０５μｍ～０．６μｍの間である、請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. 担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤の前記比が、重量で５０：１～１：２．５である、請求項１２から２１のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  23. 注射用に製剤化される、請求項１２から２２のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  24. 前記薬学的に許容され得る担体が、生理食塩水、水、乳酸、マンニトール、またはそれらの組合せである、請求項１２から２３のいずれか１項に記載の医薬組成物。
  25. ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥組成物であって、前記ナノ粒子複合体の各々は、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセルを含み、前記ナノ粒子複合体は凍結乾燥されており、水溶液で再構成すると、前記ナノ粒子複合体はインビボで前記抗－癌エピトープに結合可能である、凍結乾燥組成物。
  26. ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥組成物であって、前記ナノ粒子複合体の各々は担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセル誘導体を含み、前記パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、前記ナノ粒子複合体は凍結乾燥されており、水溶液で再構成すると、前記ナノ粒子複合体はインビボで前記抗－癌エピトープに結合可能である、凍結乾燥組成物。
  27. 前記パクリタキセル誘導体が、２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソールである、請求項２６に記載のナノ粒子複合体。
  28. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項２５または２６に記載の凍結乾燥組成物。
  29. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約３：１～１：１０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項２８に記載の凍結乾燥組成物。
  30. 前記結合剤が抗体またはその抗原結合断片である、請求項２５から２９のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物。
  31. 前記担体タンパク質がアルブミンである、請求項２５から３０のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物。
  32. 前記治療薬がドキソルビシンまたはＳＮ３８である、請求項２５から３１のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  33. 前記複合体の前記平均直径が、０．０５μｍ～１．０μｍの間である、請求項２５～３２のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物。
  34. 前記複合体の前記平均直径が、０．０５μｍ～０．６μｍの間である、請求項３３に記載の凍結乾燥組成物。
  35. 担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤の前記比が、重量で５０：１～１：２．５である、請求項２５から３４のいずれか１項に記載の凍結乾燥組成物。
  36. 癌の処置を必要とする対象において癌を処置するための方法であって、前記方法は、治療有効量の請求項１～１１のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体、または請求項１２～２４のいずれか１項に記載の前記医薬組成物を前記対象に投与し、それによって前記癌を処置することを含む方法。
  37. 前記ナノ粒子複合体または前記医薬組成物が、静脈内注射によって投与される、請求項３６に記載の方法。
  38. 前記対象がヒトである、請求項３６または３７に記載の方法。
  39. 癌の処置を必要とする対象において癌を処置するための方法であって、前記方法は、請求項２５～３５のいずれか１項に記載の前記凍結乾燥組成物を薬学的に許容され得る賦形剤で再構成して、再構成されたナノ粒子組成物を形成すること、および治療有効量の前記再構成されたナノ粒子組成物を前記対象に投与し、それによって前記癌を処置することを含む、方法。
  40. 前記再構成されたナノ粒子組成物が、静脈内注射によって投与される、請求項３９に記載の方法。
  41. 前記対象がヒトである、請求項３９または４０に記載の方法。
  42. ナノ粒子複合体を作製する方法であって、前記方法は、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤を、ナノ粒子複合体を形成する条件下でインビトロで混合することを含む、方法。
  43. ナノ粒子複合体を作製する方法であって、前記方法は、水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセル誘導体ナノ粒子と結合剤を、ナノ粒子複合体を形成する条件下でインビトロで混合することを含み、前記パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低い、方法。
  44. 前記パクリタキセル誘導体が、２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソールである、請求項４３に記載のナノ粒子複合体。
  45. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項４２または４３に記載の方法。
  46. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約３：１～１：１０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項４５に記載の方法。
  47. 前記結合剤が抗体またはその抗原結合断片である、請求項４２から４６のいずれか１項に記載の方法。
  48. 前記担体タンパク質がアルブミンである、請求項４２から４７のいずれか１項に記載の方法。
  49. 前記治療薬がドキソルビシンまたはＳＮ３８である、請求項４２から４８のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  50. 前記複合体の直径が０．０５μｍ～１．０μｍの間である、請求項４２から４９のいずれか１項に記載の方法。
  51. 前記複合体の直径が０．０５μｍ～０．６μｍの間である、請求項５０に記載の方法。
  52. 担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤の前記比が、重量で５０：１～１：２．５である、請求項４２から５１のいずれか１項に記載の方法。
  53. ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥ナノ粒子組成物を作製する方法であって、前記ナノ粒子複合体の各々は、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセルを含み、前記方法は、水溶液で再構成されると前記ナノ粒子複合体が前記抗－癌エピトープに対する結合特異性を有するように、前記ナノ粒子複合体を形成する条件下で水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤をインビトロで混合し、前記ナノ粒子複合体を凍結乾燥して前記凍結乾燥ナノ粒子組成物を形成することを含む、方法。
  54. ナノ粒子複合体を含む凍結乾燥ナノ粒子組成物を作製する方法であって、前記ナノ粒子複合体の各々は、担体タンパク質、抗－癌エピトープに対する結合特異性をもつ結合剤、および治療有効量の治療薬およびパクリタキセル誘導体を含み、前記パクリタキセル誘導体はパクリタキセルよりも毒性が低く、前記方法は、水溶液で再構成されると前記ナノ粒子複合体が前記抗－癌エピトープに対する結合特異性を有するように、前記ナノ粒子複合体を形成する条件下で水性の担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤をインビトロで混合し、前記ナノ粒子複合体を凍結乾燥して前記凍結乾燥ナノ粒子組成物を形成することを含む、方法。
  55. 前記パクリタキセル誘導体が、２０－アセトキシ－４－デアセチル－５－エピ－２０，Ｏ－セコタキソールである、請求項５４に記載のナノ粒子複合体。
  56. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約５：１～１：２０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項５３または５４に記載の方法。
  57. 前記治療薬とパクリタキセル、または治療薬とパクリタキセル誘導体が、約３：１～１：１０の治療薬：パクリタキセルの比で存在する、請求項５６に記載の方法。
  58. 前記結合剤が抗体またはその抗原結合断片である、請求項５３から５７のいずれか１項に記載の方法。
  59. 前記担体タンパク質がアルブミンである、請求項５３から５８のいずれか１項に記載の方法。
  60. 前記治療薬がドキソルビシンまたはＳＮ３８である、請求項５３から５９のいずれか１項に記載のナノ粒子複合体。
  61. 前記複合体の直径が０．０５μｍ～１．０μｍの間である、請求項５３から６０のいずれか１項に記載の方法。
  62. 前記複合体の直径が０．０５μｍ～０．６μｍの間である、請求項６１に記載の方法。
  63. 担体タンパク質－治療薬－パクリタキセルナノ粒子と結合剤の前記比が、重量で５０：１～１：２．５である、請求項５３から６２のいずれか１項に記載の方法。
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