JP2023535684A - 抗ｇｐｒｃ５ｄ抗体に対する抗イディオタイプ抗体 - Google Patents

Abstract

いくつかの態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３含有タンパク質、例えば抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分に関する。いくつかの態様では、本開示の抗イディオタイプ抗体及び抗原結合部分は、ＧＰ５Ｂ８３を含むキメラ抗原受容体を発現する細胞を検出及び定量するための方法において使用することができる。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は２０２０年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／０５３，２８６号の優先権を主張するものである。前述の出願の全内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。当該ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年７月７日に作成され、名称はＪＢＩ６３５２ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは３７，０５７バイトである。

（発明の分野）
本発明は、ＧＰ５Ｂ８３含有タンパク質、例えば、抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分に関する。ＧＰ５Ｂ８３を含むキメラ抗原受容体を発現する細胞を検出及び定量する方法もまた提供される。

標的ゲノムへのゲノム材料の送達及び統合の理解における最近の進歩は、標準治療を多様な疾患に合わせて変化させる大きな可能性を有している。Ｔ細胞療法では、特定の腫瘍関連抗原に対する特異性を高めるために遺伝子改変され単離されたＴ細胞を利用する。遺伝子改変は、キメラ抗原受容体（chimeric antigen receptor、ＣＡＲ）又は外因性Ｔ細胞受容体の発現を伴い、Ｔ細胞上に新たな抗原特異性を提供し得る。キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）は、腫瘍免疫反応性を誘導することができる。

目的の１つの特定のＣＡＲ標的は、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤ（G-protein coupled receptor family C group 5 member D、ＧＰＲＣ５Ｄ）である。ＧＰＲＣ５Ｄは、多発性骨髄腫並びに潜在的に他のがんの免疫療法の潜在的な標的として同定されている。

したがって、がんを処置するためのＣＡＲ－Ｔ細胞療法が必要とされている。ＣＡＲを発現するタンパク質及び細胞を検出、精製、又は選択するために、そのようなＣＡＲに対する抗イディオタイプ抗体も必要とされている。

本開示は、ＧＰ５Ｂ８３含有タンパク質、例えば、抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を提供する。本開示はまた、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分をコードする核酸、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を産生する方法、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を使用してＧＰ５Ｂ８３を検出する方法、並びに抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を含むキットを提供する。

一態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３を含む標的抗体などの抗ＧＰＲＣ５Ｄ抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を提供する。いくつかの実施形態では、標的抗体又は抗原結合部分は、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。

他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３の検出であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む検出において使用するためのものである。

別の態様では、本開示は、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４６と少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。

いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。いくつかの他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。

いくつかの実施形態では、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、マウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む。いくつかの他の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分はＧＰ５Ｂ８３に特異的であり、ＧＰ５Ｂ８３はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある。いくつかの実施形態では、ＧＰ５Ｂ８３はｓｃＦｖであり、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＣＡＲのｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＰ５Ｂ８３は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合部分は、他のＧＰＲＣ５Ｄ抗体又は他のＧＰＲＣ５Ｄ結合ＣＡＲと交差反応しない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸を提供する。

別の態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、配列番号３８のヌクレオチド配列、配列番号４０のヌクレオチド配列、又はその両方を含む核酸を提供する。別の態様では、本開示は、核酸配列を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。別の態様では、本開示は、ベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。

別の態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、当該抗体又は抗原結合部分が発現されることを可能にする条件下で、抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞を培養することと、培養物から当該抗体又は抗原結合部分を単離することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸を含むベクターをコードする。

別の態様では、本開示は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む方法を提供する。

別の態様では、本開示は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによってＣＡＲの発現を検出することとを含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む更に含む。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、血液、血清又は尿である。

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するためのキットを提供する。

他の態様では、本開示は、試料からＧＰ５Ｂ８３を精製する方法であって、（ａ）ＧＰ５Ｂ８３を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＧＰ５Ｂ８３を精製することとを含む方法を提供する。

他の態様では、本開示は、細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的である。

本開示は、前述の態様及び実施形態のうちのいずれかの全ての組み合わせ、並びに詳細な説明及び実施例に記載の実施形態のうちのいずれかとの組み合わせを企図する。

本発明を説明する目的で、本開示のある特定の実施形態が図面に図示されている。しかしながら、本開示は、図面に図示された実施形態の精密な配置及び手段に限定されるものでない。
ポリクローナルＥＬＩＳＡで検出された４ラウンドのパニング後のＧＣＤＢ３３２特異的結合富化のグラフ表示を示す図である。 ＨＲＰコンジュゲート化ストレプトアビジンカウンタースクリーニング試薬結合アッセイと比較した、ＧＣＤＢ３３２標的結合アッセイからのモノクローナルＦａｂ結合スクリーニングの結果のグラフ表示を示す図である。 （上記の通り。） ＧＰ５ＤＢ８３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞へのＧＰ５Ｂ３１８の用量依存的結合のグラフ表示を示す図である。 ＧＰＤＢ８３－ＨＬ ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合タンパク質によるＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ ＳｕｐＴ１細胞へのＰＥ－Ｐ５Ｂ３１８の用量依存的結合のブロッキングのグラフ表示を示す図である。

概説
本開示は、ＧＰ５Ｂ８３含有タンパク質、例えば、抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を提供する。本開示の抗イディオタイプ抗体及び抗原結合部分は、ＧＰ５Ｂ８３を含むＣＡＲを発現する細胞を検出及び定量するための方法において使用することができる。そのような方法は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで作製されたＣＡＲ－Ｔ細胞の所与のバッチが所望のＣＡＲを発現したかどうか、したがって、細胞が所望のタンパク質を標的化するために治療上有用であるかどうかを研究者が決定することを可能にし得る。本開示では、抗イディオタイプ抗体及び抗原結合部分は、多発性骨髄腫を含むがんに関連するタンパク質であるＧＰＲＣ５Ｄをそれ自体が標的とするＧＰ５Ｂ８３を標的とする。

定義
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組み合わせなどが含まれる。

移行句「備える／含む（comprising）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、及び「からなる（consisting）」は、特許用語において一般的に受け入れられている意味を含意することを意図しており、すなわち、（ｉ）「備える／含む（comprising）」は、「含む」、「含有する」、又は「特徴とする」と同義であり、包括的又は非制限的なものであり、その他の列挙されていない要素又は方法工程を除外するものではなく、（ｉｉ）「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲において特定されていない、あらゆる要素、工程、又は成分を除外し、並びに（ｉｉｉ）「から本質的になる」は、特定される材料又は工程、並びに、特許請求される発明の「基本的かつ新規な特徴に実質的に影響しないもの」に、特許請求の範囲の範囲を制限する。語句「備える／含む（comprising）」（又はその同等語）を伴って記載される実施形態はまた、「からなる」及び「から本質的になる」を伴って独立して記載される実施形態として提供する。

「活性化」又は「刺激」又は「活性化された」又は「刺激された」とは、活性化マーカーの発現、サイトカイン産生、又は標的細胞の増殖若しくは細胞傷害性の媒介をもたらす、細胞の生物学的状態の変化の誘導を指す。細胞は、一次刺激シグナルによって活性化され得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞及び／若しくはＮＫ細胞の増殖並びに／又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。

「抗イディオタイプ抗体（anti-idiotype antibody）」又は「抗イディオタイプ抗体（anti-idiotypic antibody）」は、別の抗体の可変領域に特異的に結合する抗体を指す。ＧＰＲＣ５Ｄの場合、抗イディオタイプ抗体は、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する。

「抗原結合部分」、「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」は、抗原に結合するタンパク質の一部を指す。抗原結合断片は、合成ポリペプチド、酵素的に入手可能なポリペプチド、又は遺伝的に操作されたポリペプチドであってよく、これには、抗原に結合する免疫グロブリンの一部、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ及びＦｖ断片、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＶＨＨドメイン、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分などの抗体のＣＤＲを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３、抗原に結合するオルタナティブスカフォールド、並びに抗原結合断片を含む多重特異性タンパク質が挙げられる。抗原結合断片（ＶＨ及びＶＬなど）は、合成リンカーを介して互いに連結して、ＶＨ及びＶＬドメインが別々の一本鎖により発現された場合にＶＨ／ＶＬドメインが分子内又は分子間で対合して一価の抗原結合ドメイン、例えば一本鎖Ｆｖ（single chain Fv、ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成することができる、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができる。抗原結合断片はまた、二重特異性及び多重特異性タンパク質を遺伝子操作するために、単一特異性又は多重特異性であり得る他の抗体、タンパク質、抗原結合断片、又はオルタナティブスカフォールドにコンジュゲートされてもよい。

「がん」は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞***及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「がん」又は「がん組織」は、腫瘍を含み得る。

「完全長抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に接続された、２本の重鎖（heavy chain、ＨＣ）及び２本の軽鎖（light chain、ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメインで構成され、重鎖定常ドメインは、サブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（variable domain、ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（constant domain、ＣＬ）で構成される。ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（framework region、ＦＲ）が散在している、相補性決定領域（complementarity determining region、ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。

「相補性決定領域（Complementarity determining regions、ＣＤＲ）」は、抗体における抗原結合部位である。ＣＤＲは、様々な用語を使用して定義され得る：（ｉ）ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列多様性に基づいている（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０，１９７０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の「超可変性領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７，１９８７）により定義されるとおり、構造において超可変性である、抗体可変ドメインの領域を指す。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位についての標準的番号及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴ概要説明の対応が、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７，２００３に記載されている。本明細書で使用されている「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、本明細書において別途記載のない限り、上掲のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより記載されている方法のいずれかにより定義されるＣＤＲを含む。

「ヒト抗体」は、ヒト対象に投与されるときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を意味する。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、当該定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットを含む。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。

「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来し、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を意味する。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。

「単離／単離された」とは、組換え細胞などにおける分子が産生される系の他の成分から離して実質的に分離及び／又は精製された分子の均質な集団（例えば、合成ポリヌクレオチド又はポリペプチド）、並びに少なくとも１つの精製又は単離工程に供されたタンパク質を指す。「単離／単離された」とは、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された分子を包含する。

「調節する」は、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より多い又はより少ない応答を媒介する（すなわち、下流効果）試験分子の増強された又は減少した能力のいずれかを指す。

「ナチュラルキラー細胞」及び「ＮＫ細胞」は、本明細書では互換的かつ同義的に使用される。ＮＫ細胞は、ＣＤ１６^＋ＣＤ５６^＋及び／又はＣＤ５７^＋ＴＣＲ^－表現型を有する分化リンパ球を指す。ＮＫ細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。

「特異的に結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合している」、又は「結合する」とは、タンパク質性分子が、抗原又は当該抗原内のエピトープに、他の抗原に対する親和性よりも高い親和性で結合することを指す。典型的には、タンパク質性分子は、約１×１０^－７Ｍ以下、例えば約５×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－９Ｍ以下、約１×１０^－１０Ｍ以下、約１×１０^－１１Ｍ以下、又は約１×１０^－１２Ｍ、１×１０^－１３Ｍ、１×１０^－１４Ｍ、１×１０^－１５Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で抗原又は抗原内のエピトープに結合し、典型的には、Ｋ_Ｄは、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についてのＫ_Ｄよりも少なくとも１００倍小さい。本明細書に記載の前立腺ネオ抗原の文脈において、「特異的結合」とは、タンパク質性分子が、前立腺ネオ抗原がそのバリアントである野生型タンパク質に検出可能には結合することなく、前立腺ネオ抗原に結合することを指す。

「腫瘍細胞」又は「がん細胞」とは、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、又は組織培養のいずれかにおいて、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有するがん性、前がん性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発がん物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換／がんは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、及びｅｘ ｖｉｖｏにおける、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣の形成、増殖、悪性病変、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、ヌードマウスなどの好適な動物宿主における腫瘍の増殖などによって例示される。

「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」という用語は、本明細書で使用するとき、全て天然では単一のタンパク質において一緒にみられることのない組み合わせで、細胞外標的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞表面受容体として定義される。これには、特に、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが天然では単一の受容体タンパク質において一緒にみられることのない受容体が含まれる。本発明のキメラ抗原受容体は、主に、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球での使用が意図される。

「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」という用語は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、Ｔ細胞は、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球、又は活性化Ｔリンパ球を含む。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（T helper、Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）又はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ、ＣＤ４＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（cytotoxic T cell、ＣＴＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔ細胞（tumor infiltrating cytotoxic T cell、ＴＩＬ；ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態で使用するのに好適なＴ細胞の他の例示的な集団としては、ナイーブＴ細胞及びメモリＴ細胞が挙げられる。また、「ＮＫＴ細胞」も含まれ、これは、半不変αβＴ細胞受容体を発現するだけでなく、ＮＫ１．１などの典型的にはＮＫ細胞に関連する様々な分子マーカーも発現する、Ｔ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１－、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４－、ＣＤ８＋、及びＣＤ８細胞が挙げられる。ＮＫＴ細胞のＴＣＲは、ＭＨＣ Ｉ様分子ＣＤ Ｉｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で独特である。ＮＫＴ細胞は、炎症又は免疫寛容のいずれかを促進するサイトカインを産生する能力により、保護効果又は有害効果のいずれかを有し得る。また、「ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）」も含まれる。ガンマデルタＴ細胞は、それらの表面に異なるＴＣＲを有するＴ細胞の小さなサブセットの特殊な集団を指し、ＴＣＲがα及びβ－ＴＣＲ鎖と表記される２つの糖タンパク質鎖から構成されるＴ細胞の大部分とは異なる。γδＴ細胞におけるＴＣＲは、γ鎖及びδ鎖から構成される。γδＴ細胞は、免疫監視及び免疫調節において役割を果たすことができ、ＩＬ－１７の重要な供給源であること、及び活発なＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することが見出された。また、異常又は過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容において役割を果たすＴ細胞を指す「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」も含まれる。Ｔｒｅｇは、典型的には、転写因子Ｆｏｘｐ３陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞であり、また、ＩＬ－１０産生ＣＤ４＋Ｔ細胞である転写因子Ｆｏｘｐ３陰性制御性Ｔ細胞も含み得る。

本明細書で使用するとき、「抗原」という用語は、Ｔ細胞受容体が結合することができる任意の剤（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、これらの一部、又はこれらの組み合わせ）分子を指す。抗原は、免疫応答を惹起することもできる。免疫応答の例は、限定するものではないが、抗体産生、若しくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化、又はその両方を伴い得る。当業者は、抗原が決して「遺伝子」によってコードされている必要はないことを理解するであろう。抗原は、合成で作製されてもよく、又は生物学的試料に由来していてもよく、又はポリペプチド以外の巨大分子であってもよいことは容易に明らかである。このような生物学的試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、又は他の生物学的成分、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、殺傷若しくは不活性化された全細胞若しくは溶解物を含む流体を挙げることができるが、これらに限定されない。

「抗体」という用語は、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディ、ミニボディ、ダイアボディ、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗原特異的ＴＣＲに対する抗Ｉｄ抗体を含む）、及び上記のいずれかのエピトープ結合断片を指す。「抗体」及び「抗体」という用語はまた、米国特許出願公開第２００７／０００４９０９号に記載のものなどの共有結合性ダイアボディ、及び米国特許出願公開第２００９／００６０９１０号に開示されているものなどのＩｇ－ＤＡＲＴＳを指す。ＴＣＲ結合分子として有用な抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合部位を含有する分子が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであってよい。

「宿主細胞」という用語は、異種核酸を含有する任意の細胞を意味する。異種核酸は、ベクター（例えば、発現ベクター）であり得る。例えば、宿主細胞は、細胞による物質の産生、例えば、遺伝子、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ配列、タンパク質、又は酵素の細胞による発現のための、任意の方法で選択、改変、形質転換、成長、使用、又は操作される任意の生物由来の細胞であってよい。適切な宿主を決定することができる。例えば、宿主細胞は、ベクター骨格及び所望の結果に基づいて選択され得る。例として、プラスミド又はコスミドは、いくつかのタイプのベクターを複製するために原核生物宿主細胞に導入され得る。ＤＨ５α、ＪＭ１０９、及びＫＣＢなどであるが、これらに限定されない細菌細胞、ＳＵＲＥ（登録商標）コンピテント細胞、並びにＳＯＬＯＰＡＣＫ Ｇｏｌｄ細胞を、ベクター複製及び／又は発現のための宿主細胞として使用することができる。更に、大腸菌ＬＥ３９２などの細菌細胞を、ファージウイルスの宿主細胞として使用することができる。宿主細胞として使用され得る真核細胞には、酵母（例えば、ＹＰＨ４９９、ＹＰＨ５００及びＹＰＨ５０１）、昆虫及び哺乳動物が含まれるが、これらに限定されない。ベクターの複製及び／又は発現のための哺乳類真核宿主細胞の例としては、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｊｕｒｋａｔ、２９３、ＣＯＳ、ＣＨＯ、Ｓａｏｓ、及びＰＣ１２が挙げられるが、これらに限定されない。

「発現する」及び「発現」という用語は、遺伝子又はＤＮＡ配列の情報が生成されることを可能にするか又は生成させること、例えば、対応する遺伝子又はＤＮＡ配列の転写及び翻訳に関与する細胞機能を活性化することによってタンパク質を生成することを意味する。ＤＮＡ配列は、細胞内に又は細胞によって発現して、タンパク質などの「発現産物」を形成する。発現産物自体、例えば、得られたタンパク質は、細胞によって「発現された」と言うこともできる。発現産物は、細胞内、細胞外、又は膜貫通として特徴付けることができる。

「トランスフェクション」という用語は、組換えＤＮＡ技術を使用して「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）核酸を細胞に導入することを意味する。「遺伝子改変」という用語は、宿主細胞が、導入された遺伝子又は配列を発現して、所望の物質、通常、導入された遺伝子又は配列によってコードされるタンパク質又は酵素を生成するように、「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）遺伝子、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列の宿主細胞への導入を意味する。導入された遺伝子又は配列はまた、「クローニングされた」又は「外来」遺伝子又は配列と呼ばれる場合もあり、開始、終止、プロモーター、シグナル、分泌、又は細胞の遺伝機構によって使用される他の配列などのキメラ抗原受容体をコードしているポリヌクレオチドに操作可能に連結した調節配列又は制御配列を含んでいてよい。遺伝子又は配列は、既知の機能を有さない非機能的配列を含んでいてよい。導入されたＤＮＡ又はＲＮＡを受け取って発現する宿主細胞は、「遺伝的に操作されている」。宿主細胞に導入されたＤＮＡ又はＲＮＡは、宿主細胞と同じ属若しくは種の細胞を含む任意の起源、又は異なる属若しくは種に由来し得る。

「形質導入」という用語は、ウイルスベクターを使用する外来核酸の細胞への導入を意味する。

「制御エレメント」という用語は、核酸配列の発現のいくつかの態様を制御する任意のシス作用性遺伝要素を指す。いくつかの実施形態では、「プロモーター」という用語は、本質的に、転写を開始するために必要な最小配列を含む。いくつかの実施形態では、「プロモーター」という用語は、転写を開始させるための配列を含み、加えて、それぞれ一般的に「エンハンサーエレメント」及び「リプレッサーエレメント」と呼ばれる、転写をアップレギュレート又はダウンレギュレートすることができる配列も含む。

本明細書で使用するとき、「動作可能に連結された」及び類似の語句は、核酸又はアミノ酸に関して使用される場合、それぞれ、互いに機能的な関係で配置された核酸配列又はアミノ酸配列の動作可能な連結を指す。例えば、操作可能であるように連結されたプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ、並びにターミネーター配列は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の正確な産生をもたらす。いくつかの実施形態では、操作可能であるように連結された核酸エレメントは、オープンリーディングフレームの転写及び最終的にはポリペプチドの生成（すなわち、オープンリーディングフレームの発現）をもたらす。別の例として、操作可能であるように連結されたペプチドは、機能ドメインが互いに適切な距離で配置されて、各ドメインの意図された機能を付与するものを指す。

「増強」又は「促進」、又は「増加」若しくは「拡大」若しくは「改善」は、全般的に、ビヒクル又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より大きな生理学的応答を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす（すなわち、下流効果）、本明細書で企図される組成物の能力を指す。測定可能な生理学的応答は、特に当該技術分野及び本明細書の記載の理解から明らかなように、Ｔ細胞の拡大、活性化、エフェクタ機能、持続性の増加、及び／又はがん細胞死殺傷能力の増加を含み得る。特定の実施形態では、「増加した」又は「増強された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル又は対照組成物によって生成される応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００、１０００倍）の増加（１の中間及びそれ以上、例えば、１．５、１．６、１．７、１．８などの全ての整数及び小数点を含む）を含み得る。

「減少する」又は「より低い」又は「より少なくする」又は「低下させる」又は「弱める」は、一般に、ビヒクル又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より少ない生理学的応答（即ち、下流効果）を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす、本明細書で企図される組成物の能力を指す。特定の実施形態では、「減少する」又は「低減された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル、対照組成物によって生成される応答（参照応答）、又は特定の細胞系譜における応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００、１０００倍）の減少（１の中間及びそれ以上、例えば、１．５、１．６、１．７．１．８など）を含み得る。

用量又は量に適用される「有効な」という用語は、それを必要とする被験体への投与時に所望の活性をもたらすのに十分な化合物又は医薬組成物の量を指す。活性成分の組み合わせを投与するとき、当該組み合わせの有効量は、個々に投与された場合に有効であろう各成分の量を含んでいる場合もあり、含んでいない場合もあることに留意されたい。正確な必要量は、対象の種、年齢、及び全身状態、治療される病態の重症度、用いられる具体的な薬物、投与の様式などに応じて、対象によって異なる。

本明細書に記載の組成物に関連して使用される「医薬的に許容される」という語句は、生理学的に許容可能であり、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されたときに通常は有害な反応を生じない分子実体及びそのような組成物の他の成分を指す。好ましくは、「医薬的に許容される」という用語は、哺乳類、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に記載されていることを意味する。

「タンパク質」という用語は、本明細書で使用するとき、全ての長さのタンパク質断片を含む天然及び合成のタンパク質、融合タンパク質、並びに糖タンパク質に加えて、全ての他の種類の修飾タンパク質（例えば、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ペグ化、ビオチン化などから得られるタンパク質）を含むがこれに限定されない修飾タンパク質の全ての種類を包含する。

「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「ポリヌクレオチド」という用語は、特に明記しない限り、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方を包含する。「核酸配列」又は「ヌクレオチド配列」とは、アミノ酸をコードしている核酸配列を意味し、これらの用語はまた、リンカーによってコードされている任意のアミノ酸を含む、クローニングのアーチファクトとして付加される任意のアミノ酸をコードしている部分を含む核酸配列を指す場合もある。

「担体」という用語は、化合物が一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このような医薬担体は、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体であってよい。水又は水溶液、生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセリン水溶液が、特に注射溶液用の担体として好ましく用いられる。あるいは、担体は、バインダー（圧縮丸剤用）、流動促進剤、封入剤、風味剤、及び着色剤のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない固体剤形担体であってもよい。好適な医薬用担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。

「約」又は「およそ」という用語は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを含む。このような範囲は、所与の値又は範囲の１桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、更により好ましくは１０％以内、更により好ましくは５％以内であり得る。「約」又は「およそ」という用語によって包含される許容可能な変動は、研究中の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。

「ＧＰＲＣ５Ｄ」は、公知のタンパク質である、Ｇタンパク質共役受容体ファミリーＣグループ５メンバーＤを指す。完全長ヒトＧＰＲＣ５Ｄのアミノ酸配列を配列番号４７に示す。

「ＧＰ５Ｂ８３」という用語は、ＣＡＲを含む、ＧＰ５Ｂ８３－ＶＨ－Ｎ２３Ｓ－Ｎ３０Ｓ ＶＨ（配列番号４１）及びＧＰ５Ｂ８３ ＶＬ（配列番号４２）に由来する可変領域を含有する任意の抗体、その抗原結合部分、又は任意の他のタンパク質を指す。「ＧＰ５Ｂ８３」は、「ＧＰ５ＤＢ８３」と互換的に使用され得る。特定の実施形態では、本開示の抗イディオタイプ抗体は、配列番号４１に示されるＶＨドメイン及び／又は配列番号４２に示されるＶＬドメインを含むタンパク質に特異的に結合する。特定の実施形態では、本開示の抗イディオタイプ抗体は、配列番号４１に示されるＶＨドメインの３つのＣＤＲと、配列番号４２に示されるＶＬドメインの３つのＣＤＲとを含むタンパク質に特異的に結合する。

「ＧＣＤＢ３３２」という用語は、ＧＰ５Ｂ８３由来のｓｃＦｖ融合タンパク質、具体的にはＧＰ５Ｂ８３－ＶＨ－Ｎ２３Ｓ－Ｎ３０Ｓ－ＬＨ－ｓｃＦｖを指す。

「ＧＰ５Ｂ３１８」という用語は、ＧＰ５Ｂ８３由来のｓｃＦｖ ＧＣＤＢ３３２及びマウスＩｇＧ２ａ／ｋを標的とするヒトＶＨ／ＶＬを有するキメラｍＡｂを指す。

本明細書で使用される用語は、あくまで特定の実施形態を説明する目的のものに過ぎず、限定を目的としたものではない。本明細書で使用される場合、文脈により別途明確に示されない限り、冠詞「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、複数の指示物を含むものと理解されたい。

本開示は、本明細書に記載の抗体、核酸、ポリペプチド、及びタンパク質のバリアント、例えば、機能的バリアントを更に提供する。「バリアント」は、例えば、置換、挿入、又は欠失といった１つ以上の改変によって参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用される「機能的バリアント」という用語は、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質と実質的な又は有意な配列同一性又は類似性を有する抗体、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、この機能的バリアントは、バリアントである抗体、ポリペプチド、又はタンパク質の生物学的活性を保持する。機能的バリアントは、例えば、本明細書に記載の抗体、ポリペプチド、又はタンパク質（親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質）のバリアントを包含し、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質と同様の程度、同程度、又はより高い程度で標的細胞を認識する能力を保持する。親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質に関して、機能的バリアントは、例えば、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質に対して、アミノ酸配列が少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又はそれ以上同一であり得る。

本明細書では、ポリペプチドの構造は、列挙された参照配列（所与の配列番号を有する）との％配列同一性に基づいて定義された場所にある。これに関連して、２つのアミノ酸配列間の％配列同一性は、最適な方法でアラインメントされたこれらの２つの配列を比較することによって判定することができ、比較されるアミノ酸配列は、これらの２つの配列間における最適なアラインメントのために参照配列に対して付加又は欠失を含み得る。同一性の百分率は、２つの配列間のアミノ酸残基が同一である同一位置の数を判定し、この同一の位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、これら２つの配列間における同一性の百分率を得るために得られた結果に１００を乗算することにより計算される。典型的には、比較ウィンドウは、比較される配列の全長に対応する。例えば、サイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｂｌ２．ｈｔｍｌで入手可能であるＢＬＡＳＴプログラム、「ＢＬＡＳＴ ２配列」（Ｔａｔｕｓｏｖａ ｅｔ ａｌ、「Ｂｌａｓｔ ２配列－タンパク質及びヌクレオチド配列を比較するための新しいツール」、ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．１７４：２４７－２５０）を使用することが可能であり、使用されるパラメータは、デフォルト（具体的には、パラメータ「オープンギャップペナルティ」：５、及び「エクステンションギャップペナルティ」：２；選択されたマトリックスは、例えば、プログラムによって提案されるマトリックス「ＢＬＯＳＵＭ ６２」）で指定されているパラメータであり、比較される２つの配列間における同一性の百分率は、プログラムによって直接計算される。クエリ配列の参照配列に対する配列同一性の判定は、当業者の能力の範囲内であり、ＢＬＡＳＴ（商標）などの市販の分析ソフトウェアを使用して実行することができる。

機能的バリアントは、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。別の実施形態では、機能的バリアントは、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的バリアントの生物活性を抑制又は阻害することができない。非保存的アミノ酸置換により、機能的バリアントの生物活性を増強させることができ、その結果、機能的バリアントの生物活性は、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質と比較して増加する。

本発明の抗体のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換であり得る。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において既知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１つのアミノ酸を、同じ又は類似の化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸と交換するアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性アミノ酸で置換された酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌなど）、別の塩基性アミノ酸で置換された塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）等であり得る。

本発明の実施形態の抗体、ポリペプチド、及びタンパク質（本発明の機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含むことができる。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において既知であり、例としては、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。

本発明の実施形態の抗体、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的バリアントを含む）は、翻訳後修飾を受けることができる。これらは、グリコシル化、エステル化、Ｎ－アシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、例えば、ジスルフィド架橋を介して環化することができ、又は酸付加塩に変換することができる。いくつかの実施形態では、これらは、二量体化若しくはポリマー化、又はコンジュゲートされている。

本発明の実施形態の抗体、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）は、当該技術分野において既知の方法によって得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をｄｅ ｎｏｖｏ合成する好適な方法は、Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２０００、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００、及びＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００１などの参考文献に記載されている。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組換え方法を使用し、本明細書に記載の核酸を使用して、組換えにより産生され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４を参照されたい。更に、本発明の抗体、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）の一部は、植物、細菌、昆虫、哺乳動物などの供給源から単離及び／又は精製することができる。単離及び精製の方法は、当該技術分野において既知である。代替的に、本明細書に記載の抗体、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（機能的部分及びその機能的バリアントを含む）は、商業的に合成することができる。この点において、抗体、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成、組換え、単離、及び／又は精製することができる。

本開示の方法及び使用
本開示は、ＧＰ５Ｂ８３含有タンパク質、例えば、抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、特異的結合を容易にするために、ＧＰ５Ｂ８３抗体の一部に相補的なアミノ酸配列を含み得る。本開示はまた、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分をコードする核酸、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を産生する方法、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を使用してＧＰ５Ｂ８３を検出する方法、並びに抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を含むキットを提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、他の試薬を含有するキットに含まれてもよく、例えば、ＣＡＲ中のＴ細胞の表面上に発現されるＧＰ５Ｂ８３／ＧＣＤＢ３３２抗体又はその断片を所与の生物学的試料が含むかどうかを判定するために使用されてもよい。

ＧＰ５Ｂ８３の任意の機能的部分に結合する能力について抗体を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、任意の抗体－抗原結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）、ウエスタンブロット、酵素連結免疫吸着アッセイ（enzyme-linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び競合阻害アッセイなどが挙げられる。

抗体を作製する好適な方法は、当該技術分野において既知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，５１１－５１９（１９７６），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）、及びＣ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００１））に記載されている。代替的に、他の方法、例えば、ＥＢＶ－ハイブリドーマ法（Ｈａｓｋａｒｄ ａｎｄ Ａｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，７４（２），３６１－６７（１９８４），ａｎｄ Ｒｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１，１４０－６７（１９８６））、及びバクテリオファージベクター発現系（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６，１２７５－８１（１９８９）を参照されたい）などが当該技術分野において既知である。更に、非ヒト動物において抗体を産生する方法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号、及び同第５，７１４，３５２号、並びに米国特許出願公開第２００２／０１９７２６６（Ａ１））号に記載されている。

ファージディスプレイを使用して、抗体を生成することもできる。これに関して、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリは、標準的な分子生物学及び組換えＤＮＡ技術を使用して生成することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（上記）を参照されたい）。所望の特異性を有する可変領域をコードするファージは、所望の抗原への特異的結合のために選択され、選択された可変ドメインを含む完全又は部分的な抗体が再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に使用される骨髄腫細胞などの好適な細胞株に導入され、その結果、モノクローナル抗体の特性を有する抗体が細胞によって分泌される（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（上記）、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．（上記）、及び米国特許第６，２６５，１５０号を参照されたい）。

一態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３を含む標的抗体又はＣＡＲに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＶＨ及びＶＬを含む断片抗原結合領域（Ｆａｂ）のドメインの１つ以上に特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。

他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３の検出であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む検出において使用するためのものである。例えば、抗イディオタイプ抗体は、組織試料、腫瘍試料、他の生物学的成分を有する細胞又は流体、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、殺傷若しくは不活性化された全細胞若しくは溶解物を含む任意の生物学的試料に添加され得る。抗イディオタイプ抗体は、緩衝液、安定剤、及び／又はポリマーを含むがこれらに限定されない医薬的に許容される試薬を含有する溶液中に含有されてもよい。抗イディオタイプ抗体を、ピペッティング及び／又は混合によって生物学的試料と接触させることができる。抗イディオタイプ抗体は次いで、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３含有タンパク質、例えば、抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合し得る。一例として、抗イディオタイプ抗体がＧＰ５Ｂ８３に結合したか否かは、結合していない抗イディオタイプ抗体を洗浄し、複合体を形成した抗イディオタイプ抗体のみを残すことによって判定することができる。引き続きこの例では、抗イディオタイプ抗体は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３の量に比例するシグナルを発するように照射され得るフルオロフォアを含んでもよい。ＧＰ５Ｂ８３に対する抗イディオタイプ抗体の結合複合体の検出を、以下に更に記載する。

別の態様では、本開示は、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。６つのＣＤＲは、任意の公知の方法に従って選択され得る。Ｋａｂａｔ、ＡｂＭ、Ｃｈｏｔｈｉａ及び接触法に従って決定されたＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを表３に示す。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

いくつかの実施形態では、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。

いくつかの実施形態では、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。いくつかの他の実施形態では、抗ＧＰＲＣ５Ｄ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。

いくつかの実施形態では、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、マウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む。特定の実施形態では、マウスＩｇＧ２ａフレームワークは、配列ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ（配列番号４８）を含むミックスＦＶＢ／Ｎ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ由来のマウスＩｇ重鎖シグナルペプチドを含み得る。

いくつかの他の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。例えば、完全ヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＤであり得る。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分はＧＰ５Ｂ８３に特異的であり、ＧＰ５Ｂ８３はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある。例えば、核酸をコードするＧＰ５Ｂ８３をｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞に導入することができ、その少なくとも一部は次いでＣＡＲの細胞外部分で発現される。次いで、抗イディオタイプ抗体は、ＣＡＲの細胞外部分に特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、ＧＰ５Ｂ８３はｓｃＦｖであり、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＣＡＲのｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＧＰ５Ｂ８３は、ＧＰＲＣ５Ｄに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合部分は、他のＧＰＲＣ５Ｄ抗体又は他のＧＰＲＣ５Ｄ結合ＣＡＲと交差反応しない。例えば、ＧＰ５Ｂ８３がＣＡＲの細胞外部分上で発現されたかどうかを判定するためのアッセイにおいて偽陽性を防止するために、抗イディオタイプ抗体は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的であり、かつその標的ＧＰＲＣ５Ｄ又はＧＰ５Ｂ８３ではない他のＧＰＲＣ５Ｄ標的化リガンドに対する認識可能な結合を有していなくてもよい。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸を提供する。例えば、核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらに対する任意の化学修飾（例えば、ヌクレオシド修飾）であってもよい。

別の態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、配列番号３８のヌクレオチド配列、配列番号４０のヌクレオチド配列、又はその両方を含む核酸を提供する。別の態様では、本開示は、核酸配列を含むベクターを提供する。例えば、ベクターは、自己複製核酸構造であり得るか、又はそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれ得る。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。別の態様では、本開示は、ベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。

別の態様では、本開示は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、当該抗体又は抗原結合部分が発現されることを可能にする条件下で、抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞を培養することと、培養物から当該抗体又は抗原結合部分を単離することとを含む方法を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、ディープタンク撹拌発酵槽、灌流タンクシステム、エアリフト反応器、及び連続培養システムにおける均一な懸濁培養によって産生され得る。抗イディオタイプ抗体は、プロテインＡ又はＧを使用する親和性分離、サイズ排除クロマトグラフィー、及び電荷分離を含む物理的又は化学的分離手順によって、反応混合物及び／又は増殖混合物から単離され得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸を含むベクターをコードする。

別の態様では、本開示は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む方法を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、生物学的試料中で発現されたＧＰ５Ｂ８３に結合し得る。結合複合体は、化学的検出法及び物理的検出法の両方を含む任意の検出法によって検出することができる。例えば、この検出方法は、生物学的試料中の目的の抗体の単なる存在を同定するために使用され得るか、又は試料中の目的の抗体が検出可能なレベルで存在するか否かを試験するために使用され得るか、又は試料中の目的の抗体の量を定量し、更に、抗体レベルを異なる試料と比較するために使用され得る。例えば、検出方法は、免疫沈降、免疫細胞化学、免疫ブロッティング、及び免疫吸着アッセイのうちの１つ以上であり得る。具体的な一例として、免疫吸着アッセイは、生物学的試料が洗浄される結合した抗イディオタイプ抗体又はその断片を含む、ＥＬＩＳＡ又はＥＬＩＳＡ型アッセイであり得る。

別の態様では、本開示は、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによってＣＡＲの発現を検出することとを含む方法を提供する。

いくつかの実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む更に含む。例えば、検出可能な標識は、抗イディオタイプ抗体と一体であるか、抗イディオタイプ抗体に結合するか、ないしは別の方法で抗イディオタイプ抗体と複合体を形成し、固有の識別可能なシグナルを放出するか、ないしは別の方法で提供する任意の化学タグ又は成分であり得る。例えば、検出可能な標識は、同位体マーカー、比色バイオセンサ、フォトクロミック化合物、蛍光標識、蛍光発生標識、又は電気化学センサであり得る。具体的な一例として、蛍光標識は、緑色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、シアニン、フィコエリトリン、及びそれらの誘導体であってもよい。

いくつかの実施形態では、生物学的試料は、血液、血清又は尿である。例えば、生物学的試料は、全血、血清、血漿、尿、糞便、脳脊髄液、腹水などであってもよい。いくつかの実施形態では、生物学的試料は、この分析の目的のために所与の時間に取得された生物学的材料などの新鮮な生物学的材料である。生物学的試料はまた、この目的若しくは他の目的のために患者の治療中の別の時点で取得された、又はアーカイブされた患者材料を使用して取得された生物学的材料であってもよい。生物学的試料は、新たに得られても前もって得られてもよく、前もって得られた場合、使用前に（例えば、室温、冷蔵、又は凍結で）保存されていてもよい。

いくつかの態様では、本開示は、（ａ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するためのキットを提供する。例えば、キットは、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を、混合して溶液を形成するための固体粉末、凍結乾燥粉末、液体溶液、又は液体成分として含んでもよく、又は固体支持体に結合させて含んでもよい。キットは、安定剤、緩衝剤、及び生物学的試料のアッセイにおけるキットの使用を容易にするために必要な他の医薬的に許容される賦形剤を含む、更なる試薬を含んでもよい。キットはまた、アッセイの実施方法を使用者に指示する書面の説明書を含んでもよい。

他の態様では、本開示は、試料からＧＰ５Ｂ８３を精製する方法であって、（ａ）ＧＰ５Ｂ８３を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を本開示の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）ＧＰ５Ｂ８３を含有するＣＡＲ又は他のタンパク質を含む抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＧＰ５Ｂ８３を精製することとを含む方法を提供する。例えば、物理的方法及び化学的方法を含む任意の分離方法を使用して、抗イディオタイプ抗体を捕捉することができる。具体的には、ＧＰ５Ｂ８３は、抗イディオタイプ抗体の特定のエピトープに特異的な抗体を用いたイオン交換クロマトグラフィー、ゲル濾過クロマトグラフィー、限外濾過、電気泳動、及び免疫親和性精製を含む、タンパク質を精製するための当該分野で公知の技術を使用して、細胞培養培地、宿主細胞、又はその両方から捕捉及び単離することができる。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、その精製を容易にするドメインを含有する融合タンパク質である。特定の実施形態では、精製ＧＰ５Ｂ８３組成物は、ＧＰ５Ｂ８３を含まないタンパク質から実質的に単離される。いくつかの実施形態では、精製ＧＰ５Ｂ８３組成物は、１００％純粋、９９％純粋、９８％純粋、９７％純粋、９６％純粋、９５％純粋、又は９０％純粋又はそれ以上である。

他の態様では、本開示は、細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、ＧＰ５Ｂ８３に特異的である。

実施形態
本発明の特定の非限定的な実施形態を、以下に付番した段落に記載する。
１．ＧＰ５Ｂ８３を含む標的抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
２．標的抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む、段落１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
３．ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
４．ＶＨドメインは、配列番号４５と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインは、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
５．抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、配列番号３７と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
６．ＶＨドメインは配列番号４５のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインは配列番号４６のアミノ酸配列を有する、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
７．抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
８．抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
９．抗体はモノクローナル抗体である、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１０．抗体はキメラ抗体である、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１１．抗体はマウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む、段落１０に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１２．抗体は完全ヒト抗体である、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１３．段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸。
１４．ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、
ａ）配列番号３８のヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号４０のヌクレオチド配列、
ｃ）ａ）及びｂ）の両方
を含む、核酸。
１５．段落１４に記載の核酸を含む、ベクター。
１６．ベクターは発現ベクターである、段落１５に記載のベクター。
１７．段落１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
１８．細胞は哺乳動物細胞である、段落１７に記載の宿主細胞。
１９．ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、当該抗体又は抗原結合部分が発現されることを可能にする条件下で、抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む段落１７に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から当該抗体又は抗原結合部分を単離することとを含む、方法。
２０．生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、方法。
２１．生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによってＣＡＲの発現を検出することとを含む、方法。
２２．抗体は検出可能な標識を含む、段落２０に記載の方法。
２３．抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む、段落２０に記載の方法。
２４．生物学的試料は、血液、血清又は尿である、段落２０に記載の方法。
２５．ＧＰ５Ｂ８３はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２６．ＧＰ５Ｂ８３はｓｃＦｖであり、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＣＡＲのｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する、段落２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２７．ＧＰ５Ｂ８３はＧＰＲＣ５ｄに特異的に結合する、段落２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２８．抗体又は抗原結合部分は、他のＧＰＲＣ５ｄ抗体又は他のＧＰＲＣ５ｄ結合ＣＡＲと交差反応しない、段落２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２９．ＣＡＲは、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、段落２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
３０．生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するためのキットであって、（ａ）段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、キット。
３１．生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３の検出において使用するための、段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分であって、検出は、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
３２．試料からＧＰ５Ｂ８３を精製する方法であって、（ａ）ＧＰ５Ｂ８３を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＧＰ５Ｂ８３を精製することとを含む、方法。
３３．細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）生物学的試料を段落１～３のいずれか１つに記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む、方法。

実施例１：ＧＣＤＢ３３２結合Ｆａｂの決定
ＧＰ５Ｂ８３由来ｓｃＦｖ融合タンパク質ＧＣＤＢ３３２結合Ｆａｂを、Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６，２０１０；国際公開第２００９／０８５４６２号；米国特許出願公開第２０１０／００２１４７７号）に記載のとおり、２セットのｄｅ ｎｏｖｏ Ｆａｂ－ｐＩＸファージディスプレイライブラリから選択した。

精製された組換え抗原を使用するファージ選択では、ビオチン化ＧＣＤＢ３３２を「ベイト」として使用して、ファージバインダーを捕捉及び固定化した。数回の選別ラウンド後、精製抗原を用いるポリクローナルファージＥＬＩＳＡを実施して、個々のパニング実験の特異的富化（enrichment）を検出した。ＧＣＤＢ３３２に対するバインダーの富化を実証したこれらのパニング実験から収集したファージを、一次スクリーニングのために大腸菌で発現させた。富化されたＦａｂライブラリからモノクローナルＦａｂ溶解物を調製し、バックグラウンド対照には結合しないＧＣＤＢ３３２への結合についてＥＬＩＳＡでスクリーニングした。選択されたＦａｂを配列決定して、固有のＦａｂクローンを同定し、それらのＶ領域遺伝子を単離した。固有のＦａｂ Ｖ領域を哺乳動物発現ベクターにクローニングして、マウスＩｇＧ２ａ／マウスκ定常領域を有するキメラｍＡｂを発現させた。キメラｍＡｂを、ＧＣＤＢ３３２ ｓｃＦｖ融合タンパク質中のｓｃＦｖに対応するＳｕｐＴ１細胞（ＧＰ５Ｂ８３）上に発現されたｓｃＦｖへの特異的結合について評価し、結合動態をＳＰＲを用いて測定した。

ファージパニング
個々のＶ３．０及びＶ５．０ ｄｅ ｎｏｖｏ Ｆａｂファージライブラリを使用する６つの個々のパニング実験を、標準的なプロトコルに従ってビオチン化ＧＣＤＢ３３２に対してパニングした（Ｃｈｅａｄｌｅ，Ｅ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．９０７：６４５－６６６（２０１２）。簡潔に説明すると、ファージライブラリ及び常磁性ストレプトアビジン（ＳＡ）ビーズを、５０％ Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号２１７０）／５０％ １ｘＴＢＳＴ（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｔ０３１０）中で１時間ブロッキングした。ライブラリをＳＡビーズに添加して、ビーズに非特異的に結合するクローンを吸着させた。ＳＡビーズを廃棄し、吸着処理したライブラリをビオチン化ＧＣＤＢ３３２に添加した。ＳＡビーズの添加によってビーズ／抗原／ファージ複合体を形成させ、これを１ｘＴＢＳＴ中で洗浄することによってバインダーを回収した。最終洗浄後、ファージを対数期ＴＧ１大腸菌細胞（ＯＤ６００ｎｍ＝０．４～０．６）の感染によってレスキューした。ファージ感染したＴＧ１細胞を、７５μｇ／ｍＬのカルベニシリン及び１％グルコースを含有する３枚の１５０ｍｍ ＬＢ／寒天プレート上に広げ、次いで３７℃で一晩増殖させた。ファージを作製し、更なるパニングに供した。選択圧を上げるために、抗原濃度を下げ、インキュベーション時間をその後の各ラウンドについて延長した：Ｒ１ １００ｎＭ、１時間；Ｒ２ １０ｎＭ １時間；Ｒ３ １０ｎＭ １６時間。

ポリクローナルファージＥＬＩＳＡ
バインダーの富化を、ポリクローナルファージＥＬＩＳＡによる各パニング実験から測定した。簡単に説明すると、１×ＴＢＳ（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｔ９５３０）に希釈した２０ｎＭ非ビオチン化ＧＣＤＢ３３２ １００μＬを、ＮＡ被覆プレート（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号１５２１７）上に捕捉した。３７℃で１時間インキュベートした後、プレートを３００μＬの１ｘＴＢＳＴ中で３回洗浄した。５０％Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ／５０％ １×ＴＢＳＴのブロッキング緩衝液３００μＬをプレートの各ウェルに添加し、室温で１時間インキュベートした。ブロッキング後、プレートを１×ＴＢＳＴ ３００μＬで３回洗浄した。アッセイ緩衝液（１０％Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ／９０％ＴＢＳＴ）で１／１００希釈した各パニングラウンドからのポリクローナルファージ排出物１００μＬをＥＬＩＳＡプレートに添加し、室温で１時間インキュベートして、ファージ粒子にディスプレイされたＦａｂを固定化ＧＣＤＢ３３２に結合させた。インキュベーション後、プレートを１×ＴＢＳＴで３回洗浄した。アッセイ緩衝液で１：２５００に希釈したＨＲＰコンジュゲート化抗Ｍ１３（ｐＶＩＩＩ）抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号２７９４２１０１）１００μＬをプレートに添加し、室温でインキュベートした。１時間のインキュベーション後、プレートを３００μＬの１×ＴＢＳＴで６回洗浄した。調製済みのＢＭ化学発光ＥＬＩＳＡ基質（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１１５８２９５０００１）１００μＬをプレートに添加した。化学発光又は相対光単位（ＲＬＵ）をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーによって測定した。図１に示すように、６回のパニング実験は全て、３ラウンドのパニング後にＧＣＤＢ３３２特異的結合富化を示した。ＧＰ５Ｂ３１８は、ＸＰ３パニング実験に由来した。

Ｆａｂ産生
プラスミドＤＮＡを、ＧＣＤＢ３３２へのバインダーの富化を実証するために同定されたファージパニング実験の特定のラウンドのグリセロールストックから単離及び精製し、ＴＧ－１大腸菌細胞に形質転換し、ＬＢ／寒天プレート上で一晩増殖させた。一晩培養物を、（ｉ）コロニーＰＣＲ及びＶ－領域の配列決定、並びに（ｉｉ）Ｆａｂ産生のための培養の開始に使用した。Ｆａｂ産生のために、一晩培養物を新しい培地で１０～１００倍希釈し、３７°Ｃで５～６時間増殖させた。ＩＰＴＧを含有する新鮮な培地の添加によってＦａｂ産生を誘導し、培養物を３０℃で一晩増殖させた。培養物をスピンダウンし、ＢｕｇＢｕｓｔｅｒ（商標）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて細菌ペレットを溶解して可溶性Ｆａｂタンパク質を放出させた。細胞溶解物をスピンダウンし、上清をＦａｂ ＥＬＩＳＡに使用した。

一次スクリーニング
ＧＣＤＢ３３２に対するバインダーの富化を実証したパニング実験から収集したファージを、一次スクリーニングのために大腸菌で発現させた。可溶性Ｆａｂタンパク質を、ポリクローナルヒツジ抗ヒトＦｄ（ＣＨ１）抗体（Ｔｈｅ Ｂｉｎｄｉｎｇ Ｓｉｔｅ）によってプレート上に捕捉した。適切な洗浄及びブロッキングの後、ビオチン化ＧＣＤＢ３３２を５０ｎＭの濃度で添加した。このビオチン化ＧＣＤＢ３３２を、ＨＲＰコンジュゲート化ストレプトアビジン及びＥＬＩＳＡ Ｐｉｃｏ Ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号３７０６９）によって検出し、次いで、プレートリーダーで読み取った。更に、ＨＲＰコンジュゲート化ストレプトアビジンをカウンタースクリーニングに使用した。ＧＣＤＢ３３２に対する結合シグナルが陰性対照Ｆａｂの４倍以上であり、ストレプトアビジン－ＨＲＰに対する結合シグナルが陰性対照Ｆａｂ以下であるＦａｂクローンを選択し、配列決定した。

図２は、一次スクリーニングの結果を示す。モノクローナルＦａｂを、ＧＣＤＢ３３２への結合においてＥＬＩＳＡでスクリーニングした。バックグラウンドに対して４倍のバインダーシグナルを有するクローンを選択し、配列決定した。星印によって同定された２つのクローンは、ＧＰ５Ｂ３１８においてＶＨ及びＶＬを生成したものである。

実施例２：ＧＰ５Ｂ８３（ＧＰ５Ｂ３１８）に対するモノクローナル抗体の作製
Ｆａｂ選択
一次スクリーニングから選択されたＦａｂを配列決定して、Ｖ領域配列を決定し、固有のクローンを同定した。固有のＦａｂ Ｖ領域を哺乳動物発現ベクターにクローニングして、マウスＩｇＧ２ａ／マウスκ定常領域を有するキメラｍＡｂとして発現させた。

ＧＰ５Ｂ３１８の可変領域を、可溶性ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合タンパク質ＧＣＤＢ３３２に対するヒトＦａｂ－ｐＩＸ ｄｅ ｎｏｖｏライブラリを使用したファージディスプレイによって同定した。これらのＶ領域は親和性成熟を受けなかった。ＤＮＡ配列を、コドン最適化を行わずにｄｅ ｎｏｖｏ Ｆａｂライブラリから得た。

Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌのクローニング
２つのｐｃＤＮＡ３．１由来哺乳動物発現ベクター（ｖＤＲ０００３６８及びｖＤＲ０００９６１）を使用して、キメラｍＡｂの重鎖（ＨＣ）又は軽鎖（ＬＣ）をコードする単一遺伝子構築物を作製した。各ベクターは、ＨＣ及びＬＣの発現を駆動するためのヒトサイトメガロウイルス（human cytomegalovirus、ｈＣＭＶ）プロモーターを含有し、両方ともクローニングを容易にするためのアンピシリン耐性遺伝子（Ａｍｐ（Ｒ））を含有する。ｖＤＲ０００３６８は、クローニングのための固有のＨｉｎｄＩＩＩ及びＤｒａＩＩＩ制限酵素部位、並びにマウスＩｇＧ２ａ定常領域も有する。ｖＤＲ０００９６１は、クローニングのための固有のＨｉｎｄＩＩＩ及びＴｔｈ１１１Ｉ制限酵素部位、並びにマウスκ定常領域も有する。

ＨＣ（ＶＨ）又はＬＣ（ＶＬ）の可変領域を含むＤＮＡ断片をＩＤＴによって合成し、ＨＣベクターｖＤＲ０００３６８及びＬＣベクターｖＤＲ０００９６１にライゲーションした。ＨＣ合成断片は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位、コザック配列、シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列、ＶＨ及びＣＨ１の一部、並びにＤｒａＩＩＩクローニング部位を含んでいた。ＬＣ合成断片は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位、コザック配列、シグナルペプチドをコードするＤＮＡ配列、ＶＬ、及びκ定常領域の一部、並びにＴｔｈ１１１Ｉ制限クローニング部位を含んでいた。最終ＨＣ構築物はＰＢＤ００００９４８１９であり、最終ＬＣ構築物はＰＢＤ００００９４８１８である。２つの構築物を哺乳動物発現細胞株ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ又はＣＨＯに同時トランスフェクトして、ＧＰ５Ｂ３１８を作製した。

タンパク質発現
トランスフェクションの前に、ＨＣ構築物ＰＢＤ００００９４８１９及びＬＣ構築物ＰＢＤ００００９４８１８を配列決定した。Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号Ａ１４３５１０１）中でＨＥＫ Ｅｘｐｉ２９３（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号Ａ１４５２７）を増殖させた。細胞を８％ＣＯ_２下で１２５ＲＰＭで振盪しながら３７℃で増殖させた。Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現キット（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号Ａ１４５２４）を使用して、細胞を２．５×１０^６細胞／ｍＬでトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞１Ｌにつき、１ｍｇの全ＤＮＡを２５ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号３１９８５０６２０）で希釈し、２．６ｍＬのＥｘｐｉ２９３（商標）試薬を２５ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭで希釈し、室温で５分間インキュベートした。希釈したＤＮＡと希釈したＥｘｐｉ２９３試薬を加え合わせ、室温で２０分間インキュベートした。次に、このＤＮＡ複合体を細胞に加えた。細胞を振盪インキュベーターに一晩入れた。トランスフェクションの翌日、５ｍＬのエンハンサー１を５０ｍＬのエンハンサー２に希釈し、２つのエンハンサーの全量を細胞に加えた。トランスフェクトした細胞をインキュベーター内に再び４日間戻してから収穫した。細胞を４，５００ｇで３５分間の遠心分離によって除去し、次いで、発現レベルを確認する前に０．２ｕｍフィルターで濾過した。

発現をＯｃｔｅｔによって定量した。マウスＩｇＧ２（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｍ９１４４）を標準として使用した。Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａバイオセンサを使用した。試料及び標準を使用済みＥｘｐｉ２９３培地で希釈した。標準曲線は、２倍希釈で１００μｇ／ｍＬで開始した。試料を１：１０に希釈した。標準曲線は線形点曲線であった。計算をＦｏｒｔｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓソフトウェアによって行った。

実施例３：抗イディオタイプ抗体ＧＰ５Ｂ３１８の結合アッセイ
可溶性タンパク質を使用するＰｒｏｔｅｏｎ結合アッセイ
ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、結合アッセイを行った。ＰｒｏｔｅＯｎ ＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号１７６－５０１１）を、抗マウスＦｃ抗体でコーティングした。ライブラリ抗体（マウスＩｇＧ２ａ）を、約１００～２００ＲＬに達するように０．２５ｕｇ／ｍＬ～１ｕｇ／ｍＬに希釈した。抗原（ｓｃＦｖ Ｆｃ融合物）を、５０ｎＭ～０．２ｎＭ、１：４希釈で３分間会合させた。解離を３０分間行った。アッセイの結果（以下の表１）は、ＧＰ５Ｂ３０５に対するＧＰ５Ｂ３１８のピコモル親和性を示す。ＧＰ５Ｂ３０５は、ＨＣ１ Ｎ末端ＣＤ３Ｂ３７６－Ｆａｂ／Ｃ末端ＢＣＭＢ５１６－ＬＨ－ｓｃＦｖ^＊及びＨＣ２ Ｎ末端ＧＰ５Ｂ８３ Ｎ２３Ｔ，Ｎ３０Ｓ－ＬＨ－ｓｃＦｖ^＊を含む二重特異性抗体である。

細胞結合アッセイ
ｓｃＦｖトランスフェクトＳｕｐＴ１－ＧＰ５Ｂ６８０ ＨＬ、ＳｕｐＴ１－ＧＰ５Ｂ６８０ ＬＨ、又はＧＰ５Ｂ８３細胞を、ＲＭＰＩ １６４０、１０％ＦＢＳ、１％非必須アミノ酸、１ｍＭピルビン酸ナトリウム、２ｍＭ Ｌ－グルタミン、１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．１％重炭酸塩中で培養した。細胞培養培地及びサプリメントは、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏ製品であった。ｍＡｂを染色緩衝液（ＢＳＡ）（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎカタログ番号５５４６５７）中で１．０又は０．１マイクログラム／ｍＬのいずれかに希釈した。ｓｃＦｖ発現ＳｕｐＴ１細胞を、３８４ウェルＶ底ポリプロピレンプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ＃７８１２８０又は＃７８１２８１）に５０，０００細胞／ウェルで添加した。細胞を含むプレートを４５０×ｇで２分間遠心分離し、上清を吸引した。希釈したｍＡｂ試料を細胞ペレットに添加し、混合し、氷上で１時間インキュベートした。細胞を含むプレートを４５０×ｇで２分間遠心分離し、上清を吸引した。Ｓｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＳＡ）に１：２００で希釈した抗マウスＩｇＧ重鎖及び軽鎖－ＰＥコンジュゲート化二次抗体（ＪａｃｋｓｏｎＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ、カタログ番号１１５－１１６－１４６）をセルペレットに加え、混合し、氷上で３０分間インキュベートした。細胞を含有するプレートを４５０×ｇで２分間遠心分離し、上清を吸引し、細胞ペレットをＳｔａｉｎ Ｂｕｆｆｅｒ（ＢＳＡ）に再懸濁し、混合し、ＨＴＳオートサンプラー（Ｂｅｃｋｔｏｎ Ｄｉｃｋｅｎｓｏｎ）を備えたＬＳＲ ＩＩフローサイトメーターで分析し、ゲーティングした生存集団の平均蛍光強度についてＦｌｏｗｊｏソフトウェア（Ｔｒｅｅｓｔａｒ）を使用してデータを分析した。全ての液体処理をＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｒａｖｏシステムで行い、３８４ウェルプレートの吸引をＢｉｏＴｅｋ ４０５ Ｓｅｌｅｃｔプレートウォッシャで行った。

表２に示すように、ＧＰ５Ｂ３１８は、ＧＰ５Ｂ８３発現細胞株に対して特異的結合を示したが、陰性対照ＳｕｐＴ１－ＧＰ５Ｂ６８０－ＨＬ及びＳｕｐＴ１－ＧＰ５Ｂ６８０－ＬＨに対しては示さなかった。

実施例４：ＣＡＲ＋ＳｕｐＴ１細胞上のＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ ＧＰ５Ｂ８３－ＬＨに対する検出抗体の特徴付け
ＮＫ細胞及びＴ細胞上で発現されるＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ（ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ）を検出するための抗体を、ファージディスプレイスクリーニングに由来するタンパク質のパネルから同定した。先の実施例で考察したように、タンパク質を最初に組換えＣＡＲタンパク質への結合について試験し、潜在的なバインダーをスケールアップした。タンパク質を精製し、ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬを発現するＳｕｐＴ１細胞への用量依存的結合をフローサイトメトリーによって試験した。結合は、Ｆｃ－ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ融合タンパク質を用いた競合結合実験によって、及び親ＳｕｐＴ１細胞への結合の欠如によって、ＣＡＲに特異的であると確認された。最良のバインダーを選択した後、ＣＡＲ検出試薬として使用するために、抗体を組換えフィコエリトリン（「ＰＥ」）に直接コンジュゲートした。抗体を１：１ ＰＥ：抗体比で精製し、受容体計数試験（細胞表面上に発現されるＣＡＲの数）を可能にした。

精製
細胞培養上清をＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムにロードし、１００ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ ３．０などの低ｐＨ緩衝液で溶出し、その後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラムを使用して１×ＳＳＣ、８．５％スクロースｐＨ ７．０に緩衝液交換した。タンパク質を含有する画分を回収した。精製後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ法及びＬＣ－ＭＳ法を用いてタンパク質をＱＣした。

フィコエリトリン標識
標識する抗体１０μＬにつきＭｏｄｉｆｉｅｒ試薬を１μＬずつ添加し、穏やかに混合した。抗体試料（Ｍｏｄｉｆｉｅｒ試薬を添加した）を凍結乾燥ＰＥ（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ、カタログ番号７０３－００１５）上に直接ピペットで移し、次いで穏やかに再懸濁し、暗所、室温（２０～２５℃）で１時間インキュベートした。１μＬのＱｕｅｎｃｈｅｒ試薬を、使用される抗体１０μＬごとに添加し、３０分間インキュベートした。

標識後、ＰＥ－抗体コンジュゲートをサイズ排除クロマトグラムカラムで精製した。画分を回収し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣで分析した。１つのＰＥを有する１つの抗体のみを含有する画分を一緒にプールし、必要に応じて濃縮した。最終生成物をＳＥＣ－ＨＰＬＣで分析した。

ＧＰＲＣ５Ｄ ＣＡＲ（ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ）ＣＡＲ抗イディオタイプ抗体ＧＰ５Ｂ３１８の特性評価
ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬを発現するＳｕｐＴ１細胞を、親ＣＡＲ－ＳｕｐＴ１細胞と比較した。ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬを発現するＳｕｐＴ１細胞及び親ＣＡＲ－ＳｕｐＴ１細胞を、氷上で２０分間、近ＩＲ ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ蛍光反応性色素で染色した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、ＢＳＡ染色緩衝液に再懸濁した。細胞（１００，０００細胞／ウェル）を９６ウェルプレートに播種し、１０μｇ／ｍＬのＣＡＲ－Ｆｃ融合タンパク質、ＧＰ５Ｂ８３＿Ｎ２４Ｔ＿Ｎ３１５－ＨＬ－ｈｕ Ｆｃ－ｓｃＦｖ（ＧＰ５Ｂ３０．００２）の存在下及び非存在下で、漸増濃度のＧＰ５Ｂ３１８と共に氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、試料をＢＳＡ染色緩衝液で洗浄し、ＰＥ－ヤギ抗マウスＩｇＧポリクローナルで染色して、生存ＳｕｐＴ１細胞上の結合抗体を検出した。インキュベーション、洗浄、及び固定の後、試料を１０色ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターで取得した。ＦｌｏｗＪｏを用いて分析を行い、生存ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ蛍光強度中央値を図３にプロットした。図３に、ＧＰ５Ｂ３１８のＧＰ５ＤＢ８３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞への用量依存的結合を示す。ＣＡＲ－ＳｕｐＴ１親細胞では結合は検出されなかった。

ＧＰ５Ｂ３１８を上記のようにＲ－ＰＥにコンジュゲートし、１０μｇ／ｍＬのＧＰ５ＤＢ８３－ｓｃＦｖ Ｆｃ融合タンパク質の存在下又は非存在下でＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ ＳｕｐＴ１への結合について試験して、ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ ＣＡＲへのＧＰ５Ｂ３１８結合の特異性を評価し、ＣＡＲ検出がＰＥ標識によって影響されなかったことを確認した。ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ ＳｕｐＴ１細胞を、氷上の５０ｍＬチューブ中で近ＩＲ ＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ蛍光反応性色素で２０分間染色した。インキュベーション後、細胞を洗浄し、ＢＳＡ染色緩衝液に２×１０^６細胞／ｍＬまで再懸濁した。１００，０００細胞／ウェルを９６ウェルプレートに播種し、漸増濃度のＰＥ－ＧＰ５Ｂ３１８及び１０μｇ／ｍＬのＧＰ５ＤＢ８３－ｓｃＦｖ Ｆｃと共に氷上で４５分間インキュベートした。インキュベーション、洗浄、及び固定の後、試料を１０色ＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターで取得した。ＦｌｏｗＪｏ解析ソフトウェアを用いて解析を行い、生存ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ蛍光強度中央値を図４にプロットした。図４に示すように、ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ ＳｕｐＴ１細胞へのＰＥ－Ｐ５Ｂ３１８の用量依存性結合は、ＧＰ５ＤＢ８３－ＨＬ ＣＡＲに特異的であり、１０μｇ／ｍＬのＧＰＤＢ８３－ＨＬ ｓｃＦｖ Ｆｃによってブロッキングすることができる。

配列

配列番号３７：ｍｕＩｇＧ２ａを有するＧＰ５Ｂ３１８の重鎖（アミノ酸）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＷＤＹＧＴＧＥＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ

配列番号３８：ｍｕＩｇＧ２ａを有するＧＰ５Ｂ３１８の重鎖（ＤＮＡ）
ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＣＧＡＡＡＧＣＣＴＧＡＡＡＡＴＴＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＧＣＡＧＣＧＧＣＴＡＴＡＧＣＴＴＴＡＣＣＡＧＣＴＡＴＴＧＧＡＴＴＧＧＴＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＡＴＧＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＡＴＴＡＴＴＴＡＴＣＣＧＧＧＴＧＡＴＡＧＣＧＡＴＡＣＣＣＧＴＴＡＴＡＧＣＣＣＧＡＧＣＴＴＴＣＡＧＧＧＣＣＡＧＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＧＣＧＧＡＴＡＡＡＡＧＣＡＴＴＡＧＣＡＣＣＧＣＧＴＡＴＣＴＧＣＡＧＴＧＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＡＴＡＣＣＧＣＧＡＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＧＣＧＣＧＧＣＴＧＧＧＡＣＴＡＴＧＧＴＡＣＣＧＧＣＧＡＧＴＴＣＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＧＴＣＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＴＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＣＴＣＴＡＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＣＡＡＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＡＡＣＣＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＡＴＧＴＡＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＣＡＴＡＧＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＡＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＴＧＧＡＡＧＴＡＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＡＧＡＧＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＧＧＴＣＡＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＡＴＡＴＧＴＣＴＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＧＡＡＡＡＣＡＧＡＧＣＴＡＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＧＡＡＣＣＡＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＴＡＣＴＴＣＡＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＣＧＡＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＣＡＣＡＣＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ

配列番号３９：ｍｕＫａｐｐａを有するＧＰ５Ｂ３１８の軽鎖（アミノ酸）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＧＮＷＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＬＳＦＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ

配列番号４０：ｍｕＫａｐｐａを有するＧＰ５Ｂ３１８の軽鎖（ＤＮＡ）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＡＡＣＧＣＧＣＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＴＧＣＣＧＣＧＣＧＡＧＣＣＡＧＡＧＣＡＴＣＧＧＴＡＡＣＴＧＧＣＴＧＡＡＣＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＡＡＡＧＣＧＣＣＧＡＡＡＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＴＴＡＣＧＣＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＴＧＣＣＧＡＧＣＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＡＧＣＣＧＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＧＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＴＣＣＣＴＴＴＣＣＴＴＴＣＣＧＡＴＴＡＣＡＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＣＣＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ

配列番号４１：ＧＰ５Ｂ８３ Ｎ２３Ｔ／Ｎ３０Ｓ ＶＨ
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＬＳＳＳＳＹＷＷＧＷＴＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＴＭＹＹＳＧＮＩＹＹＮＰＳＬＱＳＲＡＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＶＧＹＳＹＧＲＲＦＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号４２：ＧＰ５Ｂ８３ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号４３－ＣＡＲ １（ＧＰ５Ｂ８３－ＨＬ）
ＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＬＳＳＳＳＹＷＷＧＷＴＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＴＭＹＹＳＧＮＩＹＹＮＰＳＬＱＳＲＡＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＶＧＹＳＹＧＲＲＦＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号４４－ＣＡＲ ２（ＧＰ５Ｂ８３－ＬＨ）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＳＳＹＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＤＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＳＮＷＰＰＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＱＬＱＬＱＥＳＧＰＧＬＶＫＰＳＥＴＬＳＬＴＣＴＶＳＧＧＳＬＳＳＳＳＹＷＷＧＷＴＲＱＰＰＧＲＧＬＥＷＩＧＴＭＹＹＳＧＮＩＹＹＮＰＳＬＱＳＲＡＴＩＳＶＤＴＳＫＮＱＦＳＬＫＬＳＳＶＴＡＡＤＴＡＶＹＹＣＡＲＨＶＧＹＳＹＧＲＲＦＷＹＦＤＬＷＧＲＧＴＬＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号４５：ＧＰ５Ｂ３１８の重鎖可変ドメイン（アミノ酸）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＥＳＬＫＩＳＣＫＧＳＧＹＳＦＴＳＹＷＩＧＷＶＲＱＭＰＧＫＧＬＥＷＭＧＩＩＹＰＧＤＳＤＴＲＹＳＰＳＦＱＧＱＶＴＩＳＡＤＫＳＩＳＴＡＹＬＱＷＳＳＬＫＡＳＤＴＡＭＹＹＣＡＲＧＷＤＹＧＴＧＥＦＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号４６：ＧＰ５Ｂ３１８の軽鎖可変ドメイン（アミノ酸）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＩＧＮＷＬＮＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＹＡＳＳＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＬＳＦＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号４７－ヒトＧＰＲＣ５Ｄ配列（アミノ酸）
ＭＹＫＤＣＩＥＳＴＧＤＹＦＬＬＣＤＡＥＧＰＷＧＩＩＬＥＳＬＡＩＬＧＩＶＶＴＩＬＬＬＬＡＦＬＦＬＭＲＫＩＱＤＣＳＱＷＮＶＬＰＴＱＬＬＦＬＬＳＶＬＧＬＦＧＬＡＦＡＦＩＩＥＬＮＱＱＴＡＰＶＲＹＦＬＦＧＶＬＦＡＬＣＦＳＣＬＬＡＨＡＳＮＬＶＫＬＶＲＧＣＶＳＦＳＷＴＴＩＬＣＩＡＩＧＣＳＬＬＱＩＩＩＡＴＥＹＶＴＬＩＭＴＲＧＭＭＦＶＮＭＴＰＣＱＬＮＶＤＦＶＶＬＬＶＹＶＬＦＬＭＡＬＴＦＦＶＳＫＡＴＦＣＧＰＣＥＮＷＫＱＨＧＲＬＩＦＩＴＶＬＦＳＩＩＩＷＶＶＷＩＳＭＬＬＲＧＮＰＱＦＱＲＱＰＱＷＤＤＰＶＶＣＩＡＬＶＴＮＡＷＶＦＬＬＬＹＩＶＰＥＬＣＩＬＹＲＳＣＲＱＥＣＰＬＱＧＮＡＣＰＶＴＡＹＱＨＳＦＱＶＥＮＱＥＬＳＲＡＲＤＳＤＧＡＥＥＤＶＡＬＴＳＹＧＴＰＩＱＰＱＴＶＤＰＴＱＥＣＦＩＰＱＡＫＬＳＰＱＱＤＡＧＧＶ

参照による組み込み
本明細書において言及される全ての刊行物及び特許出願は、各個々の刊行物又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示された場合と同程度まで、参照により本明細書に組み込まれる。

主題の開示の特定の実施形態について論じてきたが、上の明細書は例示的であり、限定的ではない。本明細書及び以下の特許請求の範囲を考察すると、本開示の多くの変形が当業者には明らかになるであろう。等価物の全範囲と共に特許請求の範囲、及びそのような変形と共に明細書を参照することによって、本開示の全範囲は決定されるべきである。

Claims (33)

1. ＧＰ５Ｂ８３を含む標的抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
2. 前記標的抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
3. ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分であって、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１と、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２と、配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３と、を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１と、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２と、配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３と、を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
4. 前記ＶＨドメインは、配列番号４５と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインは、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
5. 前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、配列番号３７と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
6. 前記ＶＨドメインは配列番号４５のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインは配列番号４６のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
7. 前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
8. 前記抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
9. 前記抗体はモノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
10. 前記抗体はキメラ抗体である、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
11. 前記抗体はマウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む、請求項１０に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
12. 前記抗体は完全ヒト抗体である、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
13. 請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸。
14. ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、
    ａ）配列番号３８のヌクレオチド配列、
    ｂ）配列番号４０のヌクレオチド配列、
    ｃ）ａ）及びｂ）の両方
    を含む、核酸。
15. 請求項１４に記載の核酸を含む、ベクター。
16. 前記ベクターは発現ベクターである、請求項１５に記載のベクター。
17. 請求項１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
18. 前記細胞は哺乳動物細胞である、請求項１７に記載の宿主細胞。
19. ＧＰ５Ｂ８３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、前記抗体又は抗原結合部分が発現されることを可能にする条件下で、前記抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む請求項１７に記載の宿主細胞を培養することと、前記培養物から前記抗体又は抗原結合部分を単離することとを含む、方法。
20. 生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）前記生物学的試料を請求項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、方法。
21. 生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）前記生物学的試料を請求項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによって前記ＣＡＲの前記発現を検出することとを含む、方法。
22. 前記抗体は検出可能な標識を含む、請求項２０に記載の方法。
23. 前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む、請求項２０に記載の方法。
24. 前記生物学的試料は、血液、血清又は尿である、請求項２０に記載の方法。
25. ＧＰ５Ｂ８３はキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
26. ＧＰ５Ｂ８３はｓｃＦｖであり、前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、前記ＣＡＲの前記ｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
27. ＧＰ５Ｂ８３はＧＰＲＣ５ｄに特異的に結合する、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
28. 前記抗体又は抗原結合部分は、他のＧＰＲＣ５ｄ抗体又は他のＧＰＲＣ５ｄ結合ＣＡＲと交差反応しない、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
29. 前記ＣＡＲは、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
30. 生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３を検出するためのキットであって、（ａ）請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、キット。
31. 生物学的試料中のＧＰ５Ｂ８３の検出において使用するための、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分であって、前記検出は、（ａ）生物学的試料を提供することと、（ｂ）前記生物学的試料を前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
32. 試料からＧＰ５Ｂ８３を精製する方法であって、（ａ）ＧＰ５Ｂ８３を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）前記生物学的試料を請求項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＧＰ５Ｂ８３を精製することとを含む、方法。
33. 細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生物学的試料を提供することと、（ｂ）前記生物学的試料を請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む、方法。