JP2023534355A - ヒト化抗－ｃ５ａ抗体 - Google Patents

ヒト化抗－ｃ５ａ抗体 Download PDF

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Abstract

本発明は、ヒトＣ５ａの立体構造エピトープに特異的に結合する抗体に関する。本発明は、特にヒト化抗－Ｃ５Ａ抗体に関する。本明細書に記載されている抗体は、医薬組成物における活性剤として有用である。抗体および医薬組成物は、とりわけ、病理学的Ｃ５ａ活性に関連する疾患または障害の処置および予防のために有用である。

Description

技術分野
本発明は、ヒトＣ５ａの立体構造エピトープに特異的に結合する抗体に関する。本発明は、特に、ヒト化抗－Ｃ５Ａ抗体に関する。本明細書に記載されている抗体は、医薬組成物における活性剤として有用である。抗体および医薬組成物は、とりわけ、病理学的Ｃ５ａ活性に関連する疾患または障害の処置および予防のために有用である。
発明の背景
Ｃ５ａ
Ｃ５ａは、その「マザー分子」Ｃ５の７４アミノ酸にわたる分解産物であり、補体活性化カスケードの１つのエンドポイントを示す。それは、少なくとも３つのよく説明される経路（代替、古典およびＭＢＬ経路）の活性化を介して生成することできる。全ての経路は、Ｃ３のレベルで統合し、Ｃ５または代替Ｃ５転換酵素を形成し、Ｃ５のＣ５ａおよびＣ５ｂへの開裂をもたらす。後者は、Ｃ６、Ｃ７、Ｃ８および複数のＣ９分子と結合し、例えば細菌膜において孔の形成を最後にもたらす（末端膜侵襲複合体＝ＭＡＣ）。補体系が炎症および他の免疫学的および炎症性障害／疾患の状況において活性化されるとき、Ｃ５ａは生成される。
補体活性化産物の中で、Ｃ５ａは、最も強力な炎症性ペプチドの１つであり、広範囲の機能を有する（Guo and Ward 2005）。Ｃ５ａは、高親和性Ｃ５ａ受容体（Ｃ５ａＲおよびＣ５Ｌ２）を介してその効果を発揮する（Ward 2009）。Ｃ５ａＲは、７回膜貫通セグメントを有するＧ－タンパク質－共役受容体のロドプシンファミリーに属する；Ｃ５Ｌ２は、同様の構造を有するが、Ｇ－タンパク質－共役ではないようである。現在、生物学的応答がほとんどＣ５ａ－Ｃ５Ｌ２相互作用に対して見られないため、Ｃ５ａはＣ５ａ－Ｃ５ａＲ相互作用を主に介してその生物学的機能を発揮すると考えられている。しかしながら、最新のレポートは、Ｃ５Ｌ２活性化も介するシグナル伝達を証明している（Rittirsch et al. 2008）。
Ｃ５ａＲは、好中球、好酸球、好塩基球、および単球を含む骨髄細胞、および多くの臓器、とりわけ肺および肝臓における非骨髄細胞上に広範に発現され、Ｃ５ａ／Ｃ５ａＲシグナル伝達の重要性を示す。Ｃ５ａＲ発現の広範囲にわたる上方制御は、敗血症の発症中に起こり、抗－Ｃ５ａ、または抗－Ｃ５ａＲ抗体、またはＣ５ａＲアンタゴニストによるＣ５ａ／Ｃ５ａＲ相互作用の遮断は、敗血症の齧歯動物モデルにおいて保護効果を高度に与える（Czermak et al. 1999; Huber-Lang et al. 2001; Riedemann et al. 2002）。
Ｃ５ａは、種々の生物学的機能を有する（Guo and Ward 2005）。Ｃ５ａは、好中球に対する強力な化学誘引物質であり、また単球およびマクロファージに対する走化性活性を有する。Ｃ５ａは、好中球において酸化的破壊（Ｏ２消費）を引き起こし、食作用および粒状酵素の放出を増強する。Ｃ５ａはまた、血管拡張薬であることが見いだされている。Ｃ５ａは、種々の細胞型からのサイトカイン発現の調節に関与すること、および好中球における接着分子発現の発現を増強することが示されている。高用量のＣ５ａは、好中球の非特異的走化性「脱感作」を引き起こし、それにより広範な機能障害を引き起こすことができる。敗血症、急性肺損傷、炎症性腸疾患、リウマチ性関節炎などを含む多くの炎症性疾患は、Ｃ５ａの効果に起因する。敗血症の実験的状況において、好中球のＣ５ａへの暴露は、好中球機能障害およびシグナル伝達経路のまひを引き起こし、ＮＡＤＰＨオキシダーゼの集合欠損、ＭＡＰＫシグナル伝達カスケードのまひ、酸化的破壊の重大な鬱病、食作用および走化性を引き起こすことができる（Guo et al. 2006; Huber-Lang et al. 2002）。胸腺細胞のアポトーシスおよび遅延性好中球アポトーシスは、敗血症発症のための２つの重要な病原性事象であり、これらはＣ５ａの存在に依存する。実験的敗血症中、Ｃ５ａは、好中球におけるβ２－インテグリン発現を上方制御し、臓器への細胞遊走を促進し、これは多臓器機能不全（ＭＯＦ）の主な原因の１つである。Ｃ５ａが実験的敗血症において起こる凝固経路の活性化に起因することも見いだされる。Ｃ５ａは、ヒト白血球からの、炎症性サイトカイン、例えばＴＮＦ－α、ＩＬ－１β、ＩＬ－６、ＩＬ－８、およびマクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）の合成および放出を刺激する。補体活性化が急性炎症の発症中に発生する事象であるため、Ｃ５ａはほとんどの炎症性「サイトカイン・ストーム」の出現前に作用し始める可能性がある。Ｃ５ａが、サイトカインネットワークの能力および全身性炎症反応症候群（ＳＩＲＳ）の形成を調整することおよび増幅することにおいて重要な役割を果たすようである。
適応免疫につながる免疫学的調節ネットワークにおいて、Ｃ５ａは樹状細胞（ＤＣ）およびγδＴ細胞間のクロストークに影響し、これが炎症性メディエーター、例えばＩＬ－１７の大量生産をもたらし得る（Xu et al. 2010）。Ｃ５ａに対して重要な役割は、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）における病原性Ｔｈ１７応答の生成において確立および定義されている（Pawaria et al. 2014）。加えて、Ｃ５ａが、Ｔｒｅｇ増殖および誘導の強力な抑制効果を提供するＴｒｅｇ細胞に対する重要な調節因子であることが報告されている（Strainic et al. 2013）。ＴｒｅｇおよびＴＨ１７が自己免疫疾患状況において重要なプレーヤーであるという事実を考慮すると、Ｃ５ａシグナル伝達の阻害は、自己免疫疾患において過活動免疫状態を有意に低下させることが期待される。
ＩＦＸ－１
ＩＦＸ－１は、可溶性ヒト補体分解産物Ｃ５ａに特異的に結合するキメラモノクローナルＩｇＧ４抗体である。ＩＦＸ－１は、１３２８アミノ酸から構成され、およそ１４８，４７２ダルトンの分子量を有する。ＩＦＸ－１のＣＤＲおよびＦＲ配列は、ＵＳ ２０１７／０１３７４９９ Ａ１としても開示されている、ＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１の表３に記載されている。ＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１およびＵＳ ２０１７／０１３７４９９ Ａ１の内容を、それら全体において出典明示により包含させる。
ＩＦＸ－１は、組換えタンパク質として哺乳動物ＣＨＯ細胞系において発現され、静脈内投与のためにリン酸緩衝生理食塩水溶液(PBS + 0.05% polysorbate 80)において最後に製剤化される。ヒトＣ５ａへのこの抗体の結合は、その対応する細胞結合受容体へのＣ５ａ結合および該受容体との反応を無効にすることによって、Ｃ５ａ誘導生物学的効果の非常に効果的な遮断を促進する。
（ＩＦＸ－１を使用する）インビトロ／エキソビボ試験およびカニクイザルにおけるＧＬＰ毒物学テストを含むインビボ試験に分類することができる様々な非臨床試験が実施され、ＩＦＸ－１の薬理学的および毒物学的局面を評価した。実施された非臨床テストおよび試験は、ＩＦＸ－１に対して毒物学的または安全性の懸念を示さなかった。ヒト第Ｉ相試験は、安全性実験室パラメーター、バイタルサインおよびＥＣＧパラメーターが、臨床的に関連する時間または用量依存的変化を示さなかったことを示した。
ＩＦＸ－１のインビトロ分析は、可溶性ヒトＣ５ａへの強い結合能力ならびにＣ５ａ誘導生物学的効果、例えば、ヒト好中球からのリゾチーム放出またはヒト全血における好中球においてＣＤ１１ｂ上方制御の高い遮断活性を証明する。１つのＩＦＸ－１抗体は、実験的インビトロ状況においてほぼ１００％効率で２分子Ｃ５ａの効果を中和する能力に達する。ＩＦＸ－１での臨床試験は、いくつかの炎症性疾患におけるその臨床的有効性を試験するために継続している。
本発明の根底にある技術的問題
Ｃ５のＣ５ａ部分に特異的に結合するが、Ｃ５ｂ部分に結合しない抗体は、先行技術に記載されている（Ｋｌｏｓ ｅｔ ａｌ． （１９９８） Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． Ｍｅｔｈ． １１１： ２４１－２５２； ＷＯ ０１／１５７３１； ＷＯ ０３／０１５８１９）。以前に生成された抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して中程度の遮断活性しか示さなかった。その結果、先行技術の抗Ｃ５ａ抗体は、Ｃ５ａ誘導生物学的効果の完全な遮断を達成することができないか、またはＣ５ａ活性の適度に高い遮断に達するために超化学量論で使用されなければならなかった。本発明者らは、化学量論的量、すなわちＣ５ａの１モル当たり二価抗体の０．５モルにおいて使用されたときでさえ、Ｃ５ａ誘導生物学的効果に対して強い遮断活性を示す２つのモノクローナル抗Ｃ５ａ抗体（ＩＮａｂ３０８及びＩＮａｂ７０８と命名）を製造することに成功した（ＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１参照、この内容は出典明示により本明細書に包含させる）。モノクローナル抗体ＩＮａｂ３０８に基づいて、本発明者らは、同じ強い遮断活性を示すキメラ抗体ＩＦＸ－１を開発した（ＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１参照、この内容は出典明示により本明細書に包含させる）。
しかしながら、ＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１に具体的に記載されている２つのモノクローナル抗体ＩＮａｂ３０８およびＩＮａｂ７０８は、マウス抗体である。ＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１に記載されている抗体ＩＦＸ－１は、キメラ抗体である。結果として、これらの抗体は、ヒトに投与されたとき、望ましくない免疫学的応答を誘導し得る。
したがって、患者における意図される臨床的使用を考慮して、ヒト抗体により近く似ているが、なおＣ５ａ活性の優れた遮断を示す抗Ｃ５ａ抗体について先行技術において必要性が残されていた。
今回、本発明者らは、ＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１およびＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１に記載されている抗体と比較して、大幅に向上したヒトらしさを有し、ＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１およびＷＯ ２０１５／１４０３０４ Ａ１に記載されている抗体の有利な特性をまだ維持する、すなわちＣ５ｂの生物学的活性に影響を与えることなくＣ５ａ誘導生物学的効果に対して同様の高い遮断活性を示す、ヒト化抗Ｃ５ａ抗体の製造に成功した。
上記概観は、本発明によって解決される全ての課題を必ずしも記載しない。
発明の概要
第１の局面において、本発明は、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
該ＶＨドメインは、
配列番号：１０
によるアミノ酸配列、または
配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列であって、該配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０から２２のＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、およびＣＤＲ３Ｈ配列を含み、そして該配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、アミノ酸位置５でのＶ、アミノ酸位置１０でのＥ、アミノ酸位置１２でのＫ、アミノ酸位置１３でのＫ、アミノ酸位置１６でのＡ、アミノ酸位置４０でのＡ、および／またはアミノ酸位置７６でのＴを含む、アミノ酸配列
を含み、本質的にからなり、またはからなり、そして
該ＶＬドメインは、
配列番号：１６
によるアミノ酸配列、または
配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列であって、該配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２３から２５のＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ配列を含み、そして該配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、アミノ酸位置１３でのＡ、アミノ酸位置１５でのＶ、アミノ酸位置１７でのＤ、アミノ酸位置１９でのＶ、アミノ酸位置２２でのＴ、アミノ酸位置４６でのＫ、アミノ酸位置４７でのＡ、アミノ酸位置６４でのＳ、アミノ酸位置７８でのＴ、アミノ酸位置８０でのＳ、アミノ酸位置８１でのＳ、アミノ酸位置８２でのＬ、アミノ酸位置８３でのＱ、アミノ酸位置８７でのＦ、および／またはアミノ酸位置１０４でのＱを含む、アミノ酸配列
を含む、本質的にからなる、またはからなる、
抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第２の局面において、本発明は、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
該ＶＨドメインは、
配列番号：１７（ＱＶＱＬＶＱＳＧＸ９Ｅ Ｘ１１ＫＫＰＧＡＳＶＫＸ２０ ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ ＴＦＷＭＤＷＶＸ３８ＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＸ４８ＧＲ ＩＤＰＳＤＳＥＳＲＬ ＤＱＸ６３ＦＫＤＲＸ６８ＴＸ７０ ＴＶＤＫＳＴＳＴＶＹ ＭＸ８２ＬＳＳＸ８６Ｘ８７ＳＥＤ Ｘ９１ＡＶＹＹＣＡＲＧＮ ＤＧＹＹＧＦＡＹＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）によるアミノ酸配列であって、Ｘ９はＡまたはＰであり、Ｘ１１はＬまたはＶであり、Ｘ２０はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＫまたはＲであり、Ｘ４８はＩまたはＭであり、Ｘ６３はＫまたはＲであり、Ｘ６８はＡまたはＶであり、Ｘ７０はＬまたはＭであり、Ｘ８２はＥまたはＱであり、Ｘ８６はＬまたはＰであり、Ｘ８７はＲまたはＴであり、そしてＸ９１はＳまたはＴであるか、または
１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を有する配列番号：１７によるアミノ酸配列であって、該１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０から２２のＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ配列を含むアミノ酸配列
を含み、本質的にからなり、またはからなり、そして
該ＶＬドメインは、
配列番号：１８（ＤＩＸ３Ｘ４ＴＱＳＰＸ９Ｓ ＬＸ１２ＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＫＡＳＱＳＶＤ ＹＤＧＤＳＹＭＫＷＹ ＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬ ＬＩＹＡＡＳＮＬＱＳ ＧＸ６２ＰＳＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳ ＳＬＱＸ８４ＥＤＦＡＴＹ ＹＣＱＱＳＮＥＤＰＹ ＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩ Ｋ）によるアミノ酸配列であって、Ｘ３はＶまたはＱであり、Ｘ４はＬまたはＭであり、Ｘ９はＡまたはＳであり、Ｘ１２はＡまたはＳであり、Ｘ６２はＩまたはＶであり、そしてＸ８４はＥまたはＰであるか、または
１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのアミノ酸置換を有する配列番号：１８によるアミノ酸配列であって、該１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２３から２５のＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ配列を含むアミノ酸配列
を含む、本質的にからなる、またはからなる、
抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第３の局面において、本発明は、
第１の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントまたは第２の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、そして
１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、増量剤、結合剤、滑剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤、および／または防腐剤をさらに含む、
医薬組成物に関する。
第４の局面において、本発明は、医薬における使用のための、第１の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントまたは第２の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第５の局面において、本発明は、病理学的Ｃ５ａ活性に関連する疾患または障害の処置または予防における使用のための、第１の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントまたは第２の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
この発明の概要は、本発明の全ての特徴を必ずしも説明しない。他の態様は、次の詳細な説明の説明から明らかになるであろう。
図１。同等の用量依存性における異なる濃度でのＩＦＸクローンのｒｈＣ５ａへの結合。親分子ＩＦＸ－１はＶＨ０Ｖｋ０と表記した。
図２。ＣＨ５０を計算するためのサンプル溶血（％）および血漿希釈倍率（－倍）のプロット。親分子ＩＦＸ－１はＶＨ０Ｖｋ０と表記した。
図３。ＩＦＸ－１（ｔｅｓｔＡＢ－ＩｇＧ４－００４）による遮断と比較しての、１：１のＡｇ：Ａｂモル比での１２個のＩＦＸ－２クローンによる、アナフィラトキシンｒｈＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節およびその個々の遮断。
発明の詳細な説明
定義
本発明を以下に詳細に説明する前に、本発明が、変化できるとき本願明細書に記載されている特定の方法論、プロトコールおよび試薬に限定されないことを理解されたい。本願明細書において使用される用語が、特定の態様のみを説明する目的のためであり、添付の特許請求の範囲のみによって限定される本発明の範囲を限定することを意図しないことも理解されたい。他に定義されていない限り、本願明細書において使用される全ての専門および科学用語は、本発明が属する当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。
好ましくは、本願明細書において使用される用語は、“A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)”, Leuenberger, H.G.W, Nagel, B. and Kolbl, H. eds. (1995), Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland)に記載されているとおりに定義される。本願明細書および添付の特許請求の範囲を通して、文脈上他の意味に解すべき場合を除き、用語「含む」、および「含み」および「含むこと」などの変形は、記載されている整数もしくは工程または整数もしくは工程の群の包含を意味するが、あらゆる他の整数もしくは工程または整数もしくは工程の群の除外をされないと理解される。
いくつかの文書（例えば：特許、特許出願、科学刊行物、製造業者の説明書、指示書、GenBank受入番号配列寄託など）は、本願明細書の本文を通して引用されている。本願明細書において、本発明が以前の発明の理由でかかる記載に先立つ権利がないという承認として解釈されるべきでない。本願明細書に引用される文書のいくつかは、「出典明示により包含させる」として特徴付けられる。かかる組み込まれた文献の定義または教示と本願明細書に引用される定義または教示間で矛盾がある場合、本願明細書の本文が優先される。
配列：本願明細書において言及される全ての配列は、添付の配列表に記載されており、その全体の内容および記載と共に、本願明細書の一部である。
本明細書において使用される「ヒトＣ５ａ」は、以下の７４個のアミノ酸ペプチドを指す：
（配列番号：１）
ヒトＣ５のアミノ酸配列は、受入番号ＵｎｉＰｒｏｔＫＢ Ｐ０１０３１（ＣＯ５＿ＨＵＭＡＮ）の下に見ることができる。「ヒトＣ５ａ」および「ｈＣ５ａ」なる用語は、本明細書において互換的に使用される。
本願明細書において使用されるとき、第１の化合物（例えば抗体）は、１μＭ以下、好ましくは９００ｎＭ以下、さらに好ましくは８００ｎＭ以下、さらに好ましくは７００ｎＭ以下、さらに好ましくは６００ｎＭ以下、さらに好ましくは５００ｎＭ以下、さらに好ましくは４００ｎＭ以下、さらに好ましくは３００ｎＭ以下、さらに好ましくは２００ｎＭ以下、よりさらに好ましくは１００ｎＭ以下、よりさらに好ましくは９０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは８０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは７０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは６０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは５０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは４０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは３０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは２０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは１０ｎＭ以下、よりさらに好ましくは５ｎＭ以下、よりさらに好ましくは４ｎＭ以下、よりさらに好ましくは３ｎＭ以下、よりさらに好ましくは２ｎＭ以下、およびよりさらに好ましくは１ｎＭ以下の第２の化合物への解離定数Ｋｄを有するとき、第２の化合物（例えば抗原、例えば標的タンパク質）に「結合する」と考えられる。
本発明による「結合」なる用語は、好ましくは、特異的結合に関する。「特異的結合」は、結合部分（例えば抗体）が、別の標的への結合と比較して特異的である標的、例えばエピトープにより強く結合することを意味する。結合部分は、第２の標的に対する解離定数よりも低い解離定数（Ｋｄ）を有する第１の標的に結合するとき、第２の標的と比較して第１の標的により強く結合する。好ましくは、結合部分が特異的に結合する標的に対する解離定数（Ｋｄ）は、結合部分が特異的に結合しない標的に対する解離定数（Ｋｄ）よりも、１０倍以上、好ましくは２０倍以上、さらに好ましくは５０倍以上、よりさらに好ましくは１００倍、２００倍、５００倍または１０００倍以上低い。
本願明細書において使用されるとき、「Ｋｄ」（通常「ｍｏｌ／Ｌ」において測定される、ときどき「Ｍ」として略される）なる用語は、結合部分（例えば抗体またはそのフラグメント）と標的分子（例えば抗原またはそのエピトープ）間の特定の相互作用の解離平衡定数を指すことを意図される。
化合物の結合親和性を決定するための、すなわち解離定数Ｋｄを決定するための方法は、当業者に知られており、例えば当分野で知られている以下の方法から選択することができる：表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）ベースの技術、バイオレイヤー干渉法（ＢＬＩ）、酵素免疫吸着法アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、フローサイトメトリー、等温滴定熱量計（ＩＴＣ）、分析超遠心分離、放射免疫測定法（ＲＩＡまたはＩＲＭＡ）および増強化学発光（ＥＣＬ）。典型的に、解離定数Ｋｄは、２０℃、２５℃、３０℃、または３７℃で決定される。他に具体的に示されていないとき、本願明細書に記載されるＫｄ値は、ＳＰＲによって２０℃で決定される。
抗原性決定因子としても知られている「エピトープ」は、免疫系により、具体的には抗体、Ｂ細胞、またはＴ細胞により認識される高分子の一部である。本願明細書において使用されるとき、「エピトープ」は、本願明細書に記載されている化合物（例えば抗体またはその抗原結合フラグメント）に結合することができる高分子の一部である。この文脈において、「結合」なる用語は、好ましくは特異的結合に関する。エピトープは、通常、分子、例えばアミノ酸または糖側鎖の化学的に活性な表面グループからなり、通常、特定の三次元構造的特性、ならびに特定の電荷特性を有する。立体および非立体構造エピトープは、後者ではなく前者への結合は変性溶媒の存在下で喪失されることにおいて区別することができる。
本明細書において使用されるとき、「立体構造エピトープ」は、線状高分子（例えばポリペプチド）のエピトープであって、該高分子の三次元構造により形成されるエピトープを指す。本出願の文脈において、「立体構造エピトープ」は、「不連続的なエピトープ」、すなわち高分子の一次配列（例えばポリペプチドのアミノ酸配列）における少なくとも２つの別々の領域から形成される高分子（例えばポリペプチド）上の立体構造エピトープである。言い換えれば、エピトープが、本発明の抗体（またはその抗原結合フラグメント）が同時に結合する一次配列において少なくとも２つの別個の領域からなり、これらの少なくとも２つの別個の領域は、本発明の抗体（またはその抗原結合フラグメント）が結合しない一次配列において１つ以上の領域によって中断されているとき、エピトープは本発明の文脈において「立体構造エピトープ」であると考えられる。好ましくは、かかる「立体構造エピトープ」は、ポリペプチド上に存在し、そして、一次配列において２つの別個の領域が、本発明の抗体（またはその抗原結合フラグメント）が結合する２つの別個のアミノ酸配列であり、これらの少なくとも２つの別個のアミノ酸配列が、本発明の抗体（またはその抗原結合フラグメント）が結合しない一次配列において１つ以上のアミノ酸配列によって中断される。好ましくは、中断するアミノ酸配列は、抗体（またはその抗原結合フラグメント）が結合しない２つまたはそれ以上のアミノ酸を含む隣接するアミノ酸配列である。本発明の抗体（またはその抗原結合フラグメント）が結合する少なくとも２つの別個のアミノ酸配列は、それらの長さに関して特に限定されない。このような別個のアミノ酸配列は、該少なくとも２つの別個のアミノ酸配列内のアミノ酸の総数が、抗体（またはその抗原結合フラグメント）および立体構造エピトープ間の特異的結合をもたらすように十分な大きさである限り、１つのアミノ酸のみからなってもよい。
「パラトープ」は、エピトープに結合する抗体の一部である。本発明の文脈において、「パラトープ」は、エピトープに結合する本願明細書に記載されている抗－Ｃ５ａ抗体（またはその抗原結合フラグメント）の一部である。
「抗体」なる用語は、一般的に、ジスルフィド結合によって相互連結された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質、またはその抗原結合部分を指す。「抗体」なる用語はまた、抗体の、特に本願明細書に記載されている抗体、例えば原核生物において発現される抗体、非グリコシル化抗体、真核生物（例えばＣＨＯ細胞）において発現される抗体、グリコシル化抗体、および以下に記載されるあらゆる抗原結合抗体フラグメントおよび誘導体の全ての組換え形態を含む。それぞれの重鎖は、重鎖可変領域（本願明細書においてＶＨまたはＶＨと省略される）および重鎖定常領域で構成される。それぞれの軽鎖は、軽鎖可変領域（本願明細書においてＶＬまたはＶＬと省略される）および軽鎖定常領域で構成される。ＶＨおよびＶＬ領域は、フレームワーク領域（ＦＲ）と称されるより保存されている領域で散在される相補性決定領域（ＣＤＲ）と称される超可変性の領域にさらに細分化することができる。それぞれのＶＨおよびＶＬは、３つのＣＤＲおよび４つのＦＲで構成され、アミノ－末端からカルボキシ－末端に以下の順番において配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含む。抗体の定常領域は、免疫系の種々の細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の最初の成分（Ｃ１ｑ）を含む宿主組織または因子への免疫グロブリンの結合を媒介し得る。
本願明細書において使用されるとき、抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語（または単に「結合部分」）は、抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上のフラグメントを指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体のフラグメントによって行うことができることが示されている。抗体の「抗原結合部分」なる用語内に包含される結合フラグメントの例は、（ｉ）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨドメインからなる一価のフラグメントであるＦａｂフラグメント；（ｉｉ）ヒンジ領域でジスルフィド架橋によって連結される２つのＦａｂフラグメントを含む二価のフラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（ｉｉｉ）ＶＨおよびＣＨ１ドメインからなるＦｄフラグメント；（ｉｖ）抗体の単一アームのＶＬおよびＶＨドメインからなるＦｖフラグメント、（ｖ）ＶＨドメインからなるｄＡｂフラグメント（Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546）；（ｖｉ）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）、および（ｖｉｉ）所望により合成リンカーによって連結されてもよい２つまたはそれ以上の単離されたＣＤＲの組合せを含む。さらに、Ｆｖフラグメントの２つのドメインであるＶＬおよびＶＨが別々の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対になって一価の分子を形成する単一のタンパク質鎖として作ることが可能である合成リンカーによって連結することができる（一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Bird et al. (1988) Science 242: 423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883参照）。かかる一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合フラグメント」なる用語内に包含されることを意図される。さらなる例は、（ｉ）免疫グロブリンヒンジ領域ポリペプチドに融合される結合ドメインポリペプチド、（ｉｉ）ヒンジ領域に融合される免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域、および（ｉｉｉ）ＣＨ２定常領域に融合される免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域、を含む結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質である。結合ドメインポリペプチドは、重鎖可変領域または軽鎖可変領域であってよい。結合ドメイン免疫グロブリン融合タンパク質は、ＵＳ ２００３／０１１８５９２およびＵＳ ２００３／０１３３９３９にさらに記載されている。これらの抗体フラグメントは、当業者に知られている慣用の技術を使用して得られ、フラグメントは、無傷な抗体と同じ様式において有用性についてスクリーニングされる。「抗原結合フラグメント」のさらなる例は、単一のＣＤＲに由来する、いわゆるマイクロ抗体である。例えば、Heap et al., 2005は、ＨＩＶ－１のｇｐ１２０エンベロープ糖タンパク質に対する抗体の重鎖ＣＤＲ３に由来する１７アミノ酸残基マイクロ抗体を記載している（Heap C.J. et al. (2005) Analysis of a 17-amino acid residue, virus-neutralizing microantibody. J. Gen. Virol. 86:1791-1800）。他の例は、好ましくはコグネイトフレームワーク領域によって、互いに融合される２つまたはそれ以上のＣＤＲ領域を含む小さい抗体模倣物を含む。コグネイトＶＨ ＦＲ２によって連結されるＶＨ ＣＤＲ１およびＶＬ ＣＤＲ３を含むかかる小さい抗体模倣物は、Qiu et al., 2007によって記載されている（Qiu X.-Q. et al. (2007) Small antibody mimetics comprising two complementary-determining regions and a framework region for tumor targeting. Nature biotechnology 25(8):921-929）。
したがって、本願明細書において使用されるとき、「抗体またはその抗原結合フラグメント」なる用語は、免疫グロブリン分子および免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な部分、すなわち抗原に免疫特異的に結合する抗原結合部位を含む分子を指す。広義では、用語「抗体またはその抗原結合フラグメント」は、免疫グロブリン分子のあらゆるタイプ（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡおよびＩｇＹ）を含む。しかしながら、本発明の好ましい免疫グロブリン分子は、ＩｇＧタイプである。ＩｇＧタイプ内で、本発明の好ましい免疫グロブリン分子は、あらゆるクラスまたはサブクラス（例えば、ＩｇＧ１；ＩｇＧ２、好ましくはＩｇＧ２ａおよびＩｇＧ２ｂ；ＩｇＧ３；またはＩｇＧ４）であることができる。
本発明において使用可能な抗体およびその抗原結合フラグメントは、鳥および哺乳動物を含むあらゆる動物起源由来であってよい。したがって、抗体またはそれらのフラグメントは、ヒト、チンパンジー、齧歯動物（例えばマウス、ラット、モルモット、またはウサギ）、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、またはイヌ起源からのものであることができる。多数の適用について、抗体がヒトまたはマウス起源であることが特に好ましい。本発明において使用のために適切である抗体は、１つの種、例えばヒトに由来する抗体定常領域が、別の種、例えばマウスに由来する抗原結合部位と組み合わせられているキメラ分子を含む。本発明の非常に好ましい態様において、抗体およびその抗原結合フラグメントは、非ヒト種に由来する（例えばマウスに由来する）抗体の抗原結合部位が、ヒト起源の定常およびフレームワーク領域と組み合わせられているヒト化分子を含む。
本願明細書に例示されるとき、本発明の抗体は、抗体を発現するハイブリドーマから直接的に得ることができるか、または宿主細胞（例えば、ＣＨＯ細胞、またはリンパ球細胞）においてクローニングさせるおよび組換え的に発現させることができる。宿主細胞のさらなる例は、微生物、例えば大腸菌、および真菌、例えば酵母である。あるいは、それらは、トランスジェニック非ヒト動物または植物において組換え的に生産することができる。
「キメラ抗体」なる用語は、重鎖および軽鎖のアミノ酸配列のそれぞれの１つの部分が特定の種に由来するかまたは特定のクラスに属する抗体において対応する配列と同種であるが、鎖の残りのセグメントが別の種またはクラスにおいて対応する配列と同種である抗体を指す。一般的には、軽鎖および重鎖の両方の可変領域は哺乳動物の１つの種に由来する抗体の可変領域を模倣するが、定常部分は別の種に由来する抗体の配列と同種である。かかるキメラ形態の１つの明確な利点は、例えばヒト細胞調製物に由来する定常領域と組み合わせて、非ヒト宿主生物からの容易に利用できるＢ細胞またはハイブリドーマを使用して、可変領域が現在知られている供給源に便利に由来することができることである。可変領域が調製の容易さの利点を有し、特異性が供給源によって影響されないが、ヒトである定常領域は、非ヒト供給源からの定常領域よりも、抗体が注射されるときヒト対象から免疫応答を引き起こす可能性が低い。しかしながら、定義は、この特定の例に限定されない。
「ヒト化抗体」なる用語は、非ヒト種からの免疫グロブリンに実質的に由来する抗原結合部位を有し、分子の残りの免疫グロブリン構造がヒト免疫グロブリンの構造および／または配列に基づく、分子を指す。抗原結合部位は、定常ドメイン上に融合される完全な可変ドメインまたは可変ドメインにおいて適当なフレームワーク領域上にグラフトされる相補性決定領域（ＣＤＲ）のみのいずれかを含んでよい。抗原結合部位は、野生型であってもよく、または１つ以上のアミノ酸置換によって修飾されてもよく、例えばより密接にヒト免疫グロブリンに似るように修飾されてもよい。ヒト化抗体のいくつかの形態は、全てのＣＤＲ配列（例えばマウス抗体からの全ての６つのＣＤＲを含むヒト化マウス抗体）を保存している。他の形態は、起源抗体に対して変化されている１つ以上のＣＤＲを有する。
抗体をヒト化するための種々の方法は、Almagro & Fransson, 2008, Frontiers in Bioscience, 13:1619-1633（その内容を出典明示によりその全体において本願明細書に包含させる）により説明されるとおり、当業者に知られている。Ａｌｍａｇｒｏ ＆ Ｆｒａｎｓｓｏｎによるレビュー記事は、国際特許出願ＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１の国内段階事項であるＵＳ ２０１２／０２３１００８ Ａ１において簡潔に要約される。ＵＳ ２０１２／０２３１００８ Ａ１およびＷＯ ２０１１／０６３９８０ Ａ１の内容を出典明示によりそれら全体において本願明細書に包含させる。
本願明細書において使用されるとき、「ヒト抗体」は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列に由来する可変および定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖細胞系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでランダムまたは部位特異的突然変異誘発またはインビボで体細胞突然変異によって導入される突然変異）を含んでよい。本発明のヒト抗体は、例えばＫｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ ＆ Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓによる米国特許第５，９３９，５９８号に記載されているように、ヒト免疫グロブリンライブラリーまたは１つ以上のヒト免疫グロブリンに対してトランスジェニック動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しない、抗体を含む。
本願明細書において使用される「モノクローナル抗体」なる用語は、単一の分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。典型的には、モノクローナル抗体は、不死化細胞に融合された非ヒト動物、例えばマウスから得られるＢ細胞を含むハイブリドーマにより生産される。
本願明細書において使用されるとき、「組換え抗体」なる用語は、組換え手段によって調製、発現、作成または単離される全ての抗体、例えば、（ａ）免疫グロブリン遺伝子に対してトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（例えば、マウス）またはそこから調製されるハイブリドーマから単離される抗体、（ｂ）例えばトランスフェクトーマから、抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から単離される抗体、（ｃ）組み換えコンビナトリアル抗体ライブラリーから単離される抗体、および（ｄ）免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを含む他の手段によって調製、発現、作成または単離される抗体を含む。
本願明細書において使用されるとき、「トランスフェクトーマ」なる用語は、抗体を発現する組換え真核宿主細胞、例えばＣＨＯ細胞、ＮＳ／０細胞、ＨＥＫ２９３細胞、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞、植物細胞、または酵母細胞を含む真菌を含む。
本願明細書において使用されるとき、「異種抗体」は、かかる抗体を生産するトランスジェニック生物に関して定義される。この用語は、トランスジェニック生物からならない生物体において見いだされたものに対応し、一般的にトランスジェニック生物以外の種に由来するアミノ酸配列を有する抗体またはコードする核酸配列を指す。
本願明細書において使用されるとき、「ヘテロハイブリッド抗体」は、異なる生物起源の軽鎖および重鎖を有する抗体を指す。例えば、マウス軽鎖を伴うヒト重鎖を有する抗体は、ヘテロハイブリッド抗体である。
したがって、「抗体およびその抗原結合フラグメント」は、一般的に、限定はしないが、ポリクローナル、モノクローナル、一価、二重特異性、ヘテロコンジュゲート、多特異的、組換え、異種、ヘテロハイブリッド、キメラ、ヒト化（特にＣＤＲグラフト化）、脱免疫化、またはヒト抗体、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーによって生産されるフラグメント、Ｆｄ、Ｆｖ、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、一本鎖抗体（例えばｓｃＦｖ）、ダイアボディまたはテトラボディ（Holliger P. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 90(14), 6444-6448）、ナノボディ（単一ドメイン抗体としても知られている）、抗－イディオタイプ（抗－Ｉｄ）抗体（例えば、本発明の抗体に対する抗－Ｉｄ抗体を含む）、および上記のいずれかのエピトープ結合フラグメントを含む。
本願明細書に記載されている抗体は、好ましくは、単離されている。本願明細書において使用される「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない；例えば、Ｃ５ａに特異的に結合する単離された抗体は、Ｃ５ａ以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない、抗体を指すことを意図する。しかしながら、ヒトＣ５ａのエピトープ、アイソフォームまたは変異体に特異的に結合する単離された抗体は、他の関連抗原、例えば他の種からの抗原（例えばＣ５ａ種ホモログ、例えばラットＣ５ａ）に対して交差反応性を有してもよい。さらに、単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まなくてもよい。本明細書において使用されるとき、「単離された抗体の組合せ」は、異なる特異性を有し、明確な組成物において組み合わせられている抗体に関する。
物体に適用されるとき、本願明細書において使用されるとき、「天然」なる用語は、物体が自然界で見つけることができるという事実を指す。例えば、自然界で供給源から単離することができる生物体（ウイルスを含む）において存在する、および研究室においてヒトによって意図的に修飾されていない、ポリペプチドまたはポリヌクレオチド配列は、天然である。
「保存的置換」は、例えば関連するアミノ酸残基の極性、電荷、サイズ、溶解度、疎水性、親水性、および／または両親媒性の類似性に基づいて行われてよい。アミノ酸は、以下の６つの標準的なアミノ酸グループにグループ分けすることができる：
（１）疎水性：Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性の親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；および
（６）芳香族性：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
本明細書において使用されるとき、「保存的置換」は、上記の６つの標準アミノ酸グループの同じグループ内に列挙された別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。例えば、ＡｓｐのＧｌｕへの交換は、そのように修飾されたポリペプチドにおいて１つの負電荷を保持する。加えて、グリシンおよびプロリンは、αヘリックスを破壊する能力に基づいて互いに置換されてもよい。上記の６つのグループ内のいくつかの好ましい保存的置換は、以下のサブグループ内で交換される：（ｉ）Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ；（ｉｉ）ＳｅｒおよびＴｈｒ；（ｉｉ）ＡｓｎおよびＧｌｎ；（ｉｖ）ＬｙｓおよびＡｒｇ；および（ｖ）ＴｙｒおよびＰｈｅ。既知の遺伝子コード、および組み換えおよび合成ＤＮＡ技術があれば、当業者は保存的アミノ酸変異体をコードするＤＮＡを容易に構築することができる。
本明細書において使用されるとき、「非保存的置換」または「非保存的アミノ酸交換」は、上記の６つの標準アミノ酸グループ（１）から（６）の異なるグループに列挙された別のアミノ酸によるアミノ酸の交換として定義される。
ヌクレオチドおよびアミノ酸配列の類似性、すなわち配列同一性のパーセントは、配列アラインメントを介して決定することができる。このようなアラインメントは、いくつかの当分野に知られたアルゴリズムで実施することができ、好ましくは、Karlin and Altschulの数学アルゴリズム(Karlin & Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877)、ｈｍｍａｌｉｇｎ（ＨＭＭＥＲパッケージ）またはＣＬＵＳＴＡＬアルゴリズム（Thompson, J. D., Higgins, D. G. & Gibson, T. J. (1994) Nucleic Acids Res. 22, 4673-80）またはＣＬＵＳＴＡＬＷ２アルゴリズム（Larkin MA, Blackshields G, Brown NP, Chenna R, McGettigan PA, McWilliam H, Valentin F, Wallace IM, Wilm A, Lopez R, Thompson JD, Gibson TJ, Higgins DG. (2007). Clustal W and Clustal X version 2.0. Bioinformatics, 23, 2947-2948）で実施することができる。
配列同一性（配列の一致）のグレードは、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＴまたはＢｌａｓｔＺ（またはＢｌａｓｔＸ）を用いて計算されてよい。同様のアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ． （１９９０） Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ２１５： ４０３－４１０のＢＬＡＳＴＮおよびＢＬＡＳＴＰプログラムに組み込まれている。ＢＬＡＳＴによるタンパク質検索は、例えばＷｅｂサイトで利用できるＢＬＡＳＴＰプログラムによって行われる：
http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi?PROGRAM=blastp&BLAST_PROGRAMS=blastp&PAGE_TYPE=BlastSearch&SHOW_DEFAULTS=on&LINK_LOC=blasthome
使用される好ましいアルゴリズムパラメーターは、指定のＷｅｂサイトで設定されているとおりのデフォルトパラメーターである：
予期閾値（Expect threshold）＝１０、ワードサイズ（word size）＝３、クエリー範囲における最大マッチ（max matches in a query range）＝０、マトリックス（matrix）＝ＢＬＯＳＵＭ６２、ギャップコスト（gap costs）＝存在（Existence）：１１ 伸長（Extension）：１、組成調節（compositional adjustments）＝非冗長タンパク質配列（ｎｒ）のデータベースと共に条件付き組成スコアマトリックス調節（conditional compositional score matrix adjustment together with the database of non-redundant protein sequences(nr)）。
比較目的のためにギャップド・アラインメント（gapped alignments）を得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴを、Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402に記載されているように利用する。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用するとき、それぞれのプログラムのデフォルトパラメーターを使用する。配列マッチング分析は、Shuffle-LAGAN (Brudno M., Bioinformatics 2003b, 19 Suppl 1:I54-I62)またはMarkovランダムフィールドのような確立した相同性マッピング技術によって補完してよい。
配列同一性のパーセンテージが本出願において言及されるとき、これらのパーセンテージは、他に具体的に示されていないとき、示された参照配列の全長に関して計算される。例えば、「配列番号：ＸＹＺと少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列」なる記載は、配列同一性パーセンテージが配列番号：ＸＹＺの全長に関して計算されることを意味する。
本明細書において使用される「生物学的活性」は、ポリペプチドが示し得るあらゆる活性を指し、限定はしないが、酵素活性；別の化合物への結合活性（例えば、別のポリペプチドへの結合、特に受容体への結合、または核酸への結合）；阻害活性（例えば酵素阻害活性）；活性化活性（例えば酵素活性化活性）；または毒性効果を含む。ポリペプチドの変異体および誘導体に関して、変異体または誘導体が親ポリペプチドと同じ程度にそのような活性を示すことは必要とされない。変異体は、親ポリペプチドの活性の少なくとも１０％（例えば、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）の程度で関連する活性を示すとき、本出願の文脈内において、変異体と見なされる。同様に、誘導体は、親ポリペプチドの活性の少なくとも１０％の程度で関連する生物学的活性を示すとき、本願の文脈において誘導体と見なされる。本発明の文脈において特に関連する「生物学的活性」は、アミノ酸配列ＮＤＥＴＣＥＱＲＡ（配列番号：２）およびＳＨＫＤＭＱＬ（配列番号：３）によって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープに対する結合活性である。好ましくは、本発明の文脈において関連する「生物学的活性」は、アミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）およびＨＫＤＭＱ（配列番号：５）によって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープに対する結合活性である。よりさらに好ましくは、本発明の文脈において関連する「生物学的活性」は、アミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）およびＫＤＭによって形成されるヒトＣ５ａの立体構造エピトープに対する結合活性である。結合活性を決定するためのアッセイは、当業者に知られており、ＥＬＩＳＡおよび表面プラズモン共鳴アッセイを含む。
本願明細書において使用されるとき、「患者」は、本願明細書に記載されている抗－Ｃ５ａ抗体での処置から利益を得ることができるあらゆる哺乳動物または鳥を意味する。好ましくは、「患者」は、実験動物（例えばマウスまたはラット）、家畜動物（例えばモルモット、ウサギ、ニワトリ、シチメンチョウ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ラクダ、ウシ、ウマ、ロバ、ネコ、またはイヌを含む）、またはサル（例えばアフリカングリーンモンキー(African green monkeys)、チンパンジー、ボノボ(bonobos)、ゴリラ）およびヒトを含む霊長類からなる群から選択される。「患者」がヒトであることが特に好ましい。「患者」および「処置される対象」（または要するに「対象」）なる用語は、本明細書において互換的に使用される。
本願明細書において使用されるとき、疾患または障害の「処置する」、「処置すること」または「処置」は、以下のものの１つ以上を達成することを意味する：（ａ）障害の重症度および／または期間を減少させること；（ｂ）処置される障害の症状特性の発生を限定または防止すること；（ｃ）処置される障害の症状特性の悪化を阻害すること；（ｄ）以前に障害を有していた患者において障害の再発を限定または防止すること；および（ｅ）障害に対して以前に症候的であった患者において症状の再発を限定または防止すること。
本願明細書において使用されるとき、疾患または障害の「防止する」、「防止すること」、「防止」、または「予防」は、ある時間の間、障害が対象において起こることを防止することを意味する。例えば本発明の抗体（またはその抗原結合フラグメント）が疾患または障害を防止する目的で対象に投与されるとき、該疾患または障害は、少なくとも投与の日および好ましくは投与の日後１日以上（例えば１から３０日間；または２から２８日間；または３から２１日間；または４から１４日間；または５から１０日間）にて発生から防止される。
本明細書において使用されるとき、「投与する」は、インビボ投与、ならびにエキソビボでの組織への直接的投与、例えば静脈移植片を含む。
本発明による「医薬組成物」は、異なる活性成分および希釈剤および／または担体が互いに混合されている組成物の形態で存在してもよく、または活性成分が部分的にまたは完全に異なる形態で存在する組み合わせ調製物の形態をとってもよい。かかる組合せまたは組み合わせ調製物の例は、複数パーツのキットである。
「有効量」は、意図される目的をなし遂げるために十分な治療剤の量である。所定の治療剤の有効量は、薬剤の性質、投与経路、治療剤を受ける対象のサイズおよび種、および投与の目的などの要因で変化する。それぞれの個々の場合において有効量は、当分野で確立された方法によって当業者により経験的に決定することができる。
文脈が他に記載がないとき、用語「活性剤」は、本発明の抗体および本発明の抗原結合フラグメントを指す。用語「活性剤」及び「治療剤」は、本明細書において互換的に使用される。
本明細書において使用されるとき、用語「補助療法」は、少なくとも２つの異なる薬剤が患者に投与される併用療法を指す。これらの少なくとも２つの異なる薬物は、両方の薬物を含む１つの単一の医薬組成物に製剤化することができる。あるいは、各薬物を別々の医薬組成物に製剤化することができ、そして医薬組成物を患者に（例えば、異なる時点で、および／または異なる投与経路によって）別々に投与する。この後者の代替において、（少なくとも）２つの異なる薬物は、複数パーツのキットにおいて提供することができる。
「薬学的に許容される」は、連邦政府または州政府の監督官庁によって承認されているか、または動物、さらに特にヒトにおける使用のための米国薬局方または他の一般的に認識された薬局方に列挙されていることを意味する。
本明細書において使用されるとき、「担体」なる用語は、治療剤と共に投与される希釈剤、アジュバント、賦形剤、またはビヒクルを指す。かかる医薬担体は、滅菌液体、例えば、塩水および石油、動物、植物または合成起源のものを含む油、例えばピーナッツオイル、ダイズ油、鉱油、ゴマ油などであってよい。医薬組成物が静脈内に投与されるとき、塩水が好ましい担体である。塩水および水性デキストロースおよびグリセロール溶液もまた、特に注射可能な溶液のための、液体担体として使用することができる。適当な医薬賦形剤は、デンプン、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、コメ、穀粉（ｆｌｏｕｒ）、チョーク（ｃｈａｌｋ）、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを含む。組成物は、所望により、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝剤もまた含むことができる。これらの組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、丸薬、カプセル、粉末、持続放出製剤などの形態をとることができる。組成物は、従来の結合剤および担体、例えばトリグリセリドを用いて、坐薬として製剤化することができる。本発明の化合物は、中性または塩の形態として製剤化することができる。薬学的に許容される塩は、遊離アミノ基で形成されるもの、例えば塩酸、リン酸、酢酸、シュウ酸、酒石酸などに由来するもの、および遊離カルボキシル基で形成されるもの、例えばナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウム、水酸化第二鉄、イソプロピルアミン、トリエチルアミン、２－エチルアミノエタノール、ヒスチジン、プロカインなどに由来するものを含む。適当な医薬担体の例は、“Remington: The Science and Practice of Pharmacy” 22nd edition, Loyd V. Allen Jr. et al. (eds.), Pharmaceutical Press, 2012に記載されている。このような組成物は、患者への適切な投与のための形態を提供するように、適切な量の担体とともに、好ましくは精製された形態において、治療有効量の化合物を含む。製剤は、投与様式に適するべきである。
分子生物学、細胞生物学、タンパク質化学および抗体技術の分野において一般的に知られ、実施されている方法は、継続的に更新される出版物“Molecular Cloning: A Laboratory Manual”, (Sambrook et al., Cold Spring Harbor); “Current Protocols in Molecular Biology” (F. M. Ausubel et al. Eds., Wiley & Sons); “Current Protocols in Protein Science” (J. E. Colligan et al. eds., Wiley & Sons); “Current Protocols in Cell Biology” (J. S. Bonifacino et al., Wiley & Sons) および “Current Protocols in Immunology” (J. E. Colligan et al., Eds., Wiley & Sons)に完全に記載されている。細胞培養および培地に関する知られている技術は、“Large Scale Mammalian Cell Culture (D. Hu et al., Curr. Opin. Biotechnol. 8:148-153, 1997); “Serum free Media” (K. Kitano, Biotechnol. 17:73-106, 1991); および “Suspension Culture of Mammalian Cells” (J.R. Birch et al. Bioprocess Technol. 10:251-270, 1990)に記載されている。
本発明の態様
本発明は、ここにさらに説明される。以下の段落において、本発明の異なる局面は、さらに詳細に定義される。以下に定義されるそれぞれの局面は、明確に反対の指示がない限り、あらゆる他の１つの局面または複数の局面と組み合わせてよい。特に、好ましいまたは有利であると示されているあらゆる特徴は、好ましいまたは有利であると示されているあらゆる他の１つの特徴または複数の特徴と組み合わせてよい。
第１の局面において、本発明は、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
該ＶＨドメインは、
配列番号：１０
によるアミノ酸配列、または
配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性（好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９６％、さらに好ましくは少なくとも９７％、よりさらに好ましくは少なくとも９８％、またはより好ましくは少なくとも９９％配列同一性）を有するアミノ酸配列であって、該配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０から２２のＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、およびＣＤＲ３Ｈ配列を含み、そして該配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）を有するアミノ酸配列は、アミノ酸位置５でのＶ、アミノ酸位置１０でのＥ、アミノ酸位置１２でのＫ、アミノ酸位置１３でのＫ、アミノ酸位置１６でのＡ、アミノ酸位置４０でのＡ、および／またはアミノ酸位置７６でのＴを含む、アミノ酸配列
を含み、本質的にからなり、またはからなり、そして
該ＶＬドメインは、
配列番号：１６
によるアミノ酸配列、または
配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性（好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９６％、さらに好ましくは少なくとも９７％、よりさらに好ましくは少なくとも９８％、またはより好ましくは少なくとも９９％配列同一性）を有するアミノ酸配列であって、該配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２３から２５のＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ配列を含み、そして該配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性（少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）を有するアミノ酸配列は、アミノ酸位置１３でのＡ、アミノ酸位置１５でのＶ、アミノ酸位置１７でのＤ、アミノ酸位置１９でのＶ、アミノ酸位置２２でのＴ、アミノ酸位置４６でのＫ、アミノ酸位置４７でのＡ、アミノ酸位置６４でのＳ、アミノ酸位置７８でのＴ、アミノ酸位置８０でのＳ、アミノ酸位置８１でのＳ、アミノ酸位置８２でのＬ、アミノ酸位置８３でのＱ、アミノ酸位置８７でのＦ、および／またはアミノ酸位置１０４でのＱを含む、アミノ酸配列
を含む、本質的にからなる、またはからなる、
抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第１の局面の好ましい態様において、配列番号：１０と少なくとも８０％（好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９６％、さらに好ましくは少なくとも９７％、よりさらに好ましくは少なくとも９８％、またはより好ましくは少なくとも９９％）配列同一性を有するアミノ酸配列は、指定された位置で以下の７つのアミノ酸の少なくとも４つ（好ましくは少なくとも５つ、さらに好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは７つ）を含む：
－アミノ酸位置５でのＶ、
－アミノ酸位置１０でのＥ、
－アミノ酸位置１２でのＫ、
－アミノ酸位置１３でのＫ、
－アミノ酸位置１６でのＡ、
－アミノ酸位置４０でのＡ、または
－アミノ酸位置７６でのＴ。
第１の局面の好ましい態様において、配列番号：１６と少なくとも８０％（好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９６％、さらに好ましくは少なくとも９７％、よりさらに好ましくは少なくとも９８％、またはより好ましくは少なくとも９９％）配列同一性を有するアミノ酸配列は、指定された位置で以下の１５個のアミノ酸の少なくとも８つ（好ましくは少なくとも９つ、さらに好ましくは少なくとも１０個、さらに好ましくは少なくとも１１個、よりさらに好ましくは少なくとも１２個、よりさらに好ましくは少なくとも１３個、よりさらに好ましくは少なくとも１４個、より好ましくは１５個）を含む：
－アミノ酸位置１３でのＡ、
－アミノ酸位置１５でのＶ、
－アミノ酸位置１７でのＤ、
－アミノ酸位置１９でのＶ、
－アミノ酸位置２２でのＴ、
－アミノ酸位置４６でのＫ、
－アミノ酸位置４７でのＡ、
－アミノ酸位置６４でのＳ、
－アミノ酸位置７８でのＴ、
－アミノ酸位置８０でのＳ、
－アミノ酸位置８１でのＳ、
－アミノ酸位置８２でのＬ、
－アミノ酸位置８３でのＱ、
－アミノ酸位置８７でのＦ、または
－アミノ酸位置１０４でのＱ。
第１の局面の好ましい態様において、配列番号：１０と少なくとも８０％（好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９６％、さらに好ましくは少なくとも９７％、よりさらに好ましくは少なくとも９８％、またはより好ましくは少なくとも９９％）配列同一性を有するアミノ酸配列は、指定された位置で以下の７つのアミノ酸の少なくとも４つ（好ましくは少なくとも５つ、さらに好ましくは少なくとも６つ、より好ましくは７つ）を含み：
－アミノ酸位置５でのＶ、
－アミノ酸位置１０でのＥ、
－アミノ酸位置１２でのＫ、
－アミノ酸位置１３でのＫ、
－アミノ酸位置１６でのＡ、
－アミノ酸位置４０でのＡ、または
－アミノ酸位置７６でのＴ、
そして、所望により、配列番号：１０のアミノ酸位置１から４または６から９で位置される１、２、または３つのアミノ酸置換、好ましくは保存的置換を含み；
そして
配列番号：１６と少なくとも８０％（好ましくは少なくとも８５％、さらに好ましくは少なくとも９０％、さらに好ましくは少なくとも９５％、さらに好ましくは少なくとも９６％、さらに好ましくは少なくとも９７％、よりさらに好ましくは少なくとも９８％、またはより好ましくは少なくとも９９％）配列同一性を有するアミノ酸配列は、指定された位置で以下の１５個のアミノ酸の少なくとも８つ（好ましくは少なくとも９つ、さらに好ましくは少なくとも１０個、さらに好ましくは少なくとも１１個、よりさらに好ましくは少なくとも１２個、よりさらに好ましくは少なくとも１３個、よりさらに好ましくは少なくとも１４個、より好ましくは１５個）を含み：
－アミノ酸位置１３でのＡ、
－アミノ酸位置１５でのＶ、
－アミノ酸位置１７でのＤ、
－アミノ酸位置１９でのＶ、
－アミノ酸位置２２でのＴ、
－アミノ酸位置４６でのＫ、
－アミノ酸位置４７でのＡ、
－アミノ酸位置６４でのＳ、
－アミノ酸位置７８でのＴ、
－アミノ酸位置８０でのＳ、
－アミノ酸位置８１でのＳ、
－アミノ酸位置８２でのＬ、
－アミノ酸位置８３でのＱ、
－アミノ酸位置８７でのＦ、または
－アミノ酸位置１０４でのＱ
そして、所望により、配列番号：１６のアミノ酸位置１から１０で位置される１、２、または３つのアミノ酸置換、好ましくは保存的置換を含む。
第２の局面において、本発明は、
重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
該ＶＨドメインは、
配列番号：１７（ＱＶＱＬＶＱＳＧＸ９Ｅ Ｘ１１ＫＫＰＧＡＳＶＫＸ２０ ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ ＴＦＷＭＤＷＶＸ３８ＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＸ４８ＧＲ ＩＤＰＳＤＳＥＳＲＬ ＤＱＸ６３ＦＫＤＲＸ６８ＴＸ７０ ＴＶＤＫＳＴＳＴＶＹ ＭＸ８２ＬＳＳＸ８６Ｘ８７ＳＥＤ Ｘ９１ＡＶＹＹＣＡＲＧＮ ＤＧＹＹＧＦＡＹＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）によるアミノ酸配列であって、Ｘ９はＡまたはＰであり、Ｘ１１はＬまたはＶであり、Ｘ２０はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＫまたはＲであり、Ｘ４８はＩまたはＭであり、Ｘ６３はＫまたはＲであり、Ｘ６８はＡまたはＶであり、Ｘ７０はＬまたはＭであり、Ｘ８２はＥまたはＱであり、Ｘ８６はＬまたはＰであり、Ｘ８７はＲまたはＴであり、そしてＸ９１はＳまたはＴであるか、または
１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を有する配列番号：１７によるアミノ酸配列であって、該１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０から２２のＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ配列を含むアミノ酸配列
を含み、本質的にからなり、またはからなり、そして
該ＶＬドメインは、
配列番号：１８（ＤＩＸ３Ｘ４ＴＱＳＰＸ９Ｓ ＬＸ１２ＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＫＡＳＱＳＶＤ ＹＤＧＤＳＹＭＫＷＹ ＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬ ＬＩＹＡＡＳＮＬＱＳ ＧＸ６２ＰＳＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳ ＳＬＱＸ８４ＥＤＦＡＴＹ ＹＣＱＱＳＮＥＤＰＹ ＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩ Ｋ）によるアミノ酸配列であって、Ｘ３はＶまたはＱであり、Ｘ４はＬまたはＭであり、Ｘ９はＡまたはＳであり、Ｘ１２はＡまたはＳであり、Ｘ６２はＩまたはＶであり、そしてＸ８４はＥまたはＰであるか、または
１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのアミノ酸置換を有する配列番号：１８によるアミノ酸配列であって、該１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２３から２５のＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ配列を含むアミノ酸配列
を含む、本質的にからなる、またはからなる、
抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第１または第２の局面の態様において、ＶＨドメインは、ＶＨ１からＶＨ５（配列番号：７から１１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなる；および／またはＶＬドメインは、Ｖκ１からＶκ４（配列番号：１３から１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなる。
第１または第２の局面の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、
ａ）配列番号：１０（ＶＨ４）のアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＨドメインおよび配列番号：１６（Ｖκ４）によるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＬドメイン、または
ｂ）配列番号：１１（ＶＨ５）のアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＨドメインおよび配列番号：１５（Ｖκ３）によるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＬドメイン
を含む。
第１または第２の局面の態様において、抗体はヒト化抗体である。
第１または第２の局面の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは定常ドメインをさらに含む。第１または第２の局面のいくつかの態様において、定常ドメインは、配列番号：１９（ＩｇＧ４ ＷＴ定常）によるアミノ酸配列を含み、本質的にからなり、またはからなり、
配列番号：１９による該アミノ酸配列は、所望により以下のアミノ酸交換：
－アミノ酸交換Ｓ１０８Ｐ；
－アミノ酸交換Ｔ１３０ＱおよびＭ３０８Ｌ；
－アミノ酸交換Ｍ１３２Ｙ、Ｓ１３４Ｔ、およびＴ１３６Ｅ
の１つ以上を含む。
第１または第２の局面の態様において、抗体の抗原結合フラグメントは、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体および一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体からなる群から選択される。
第１または第２の局面の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、以下の特性：
－該抗体または該その抗原結合フラグメントは、１０ｎＭ以下（例えば９ｎＭ以下；８ｎＭ以下、７ｎＭ以下、６ｎＭ以下、５ｎＭ以下、４ｎＭ以下、３ｎＭ以下、または２ｎＭ以下）のＫｄ値でのＣ５ａへの結合定数を有する；
－該抗体または該その抗原結合フラグメントは、１つの分子Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％の遮断活性を示す；
－該抗体または該その抗原結合フラグメントは、ヒト血漿においてＣＨ５０活性を阻害しない；
－該抗体または該その抗原結合フラグメントは、ヒト全血において大腸菌誘導ＩＬ－８生産を低下させることができる；
－該抗体または該その抗原結合フラグメントは、ＩＦＸ－１と比較して低下した免疫原性を有する、
の１つ以上を示す。
相対的な免疫原性を決定する方法は、以下の実施例に示されており、すなわちＡＤＡスクリーニングアッセイである。略語ＡＤＡは、抗薬物抗体(anti-drug-antibodies)を指す。
第１または第２の局面の態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ５ａのアミノ酸配列ＮＤＥＴＣＥＱＲＡ（配列番号：２）およびＳＨＫＤＭＱＬ（配列番号：３）によって形成される立体構造エピトープに結合し、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：２によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸および配列番号：３によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
第１または第２の局面のさらなる態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ５ａのアミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）およびＨＫＤＭＱ（配列番号：５）によって形成される立体構造エピトープに結合し、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：４によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸および配列番号：５によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
第１または第２の局面のさらなる態様において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、Ｃ５ａのアミノ酸配列ＤＥＴＣＥＱＲ（配列番号：４）およびＫＤＭによって形成される立体構造エピトープに結合し、抗体またはその抗原結合フラグメントは、配列番号：４によるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸およびＫＤＭによるアミノ酸配列内の少なくとも１つのアミノ酸に結合する。
第３の局面において、本発明は、
第１の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントまたは第２の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントを含み、そして
１つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、増量剤、結合剤、滑剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤、および／または防腐剤をさらに含む、
医薬組成物に関する。
第４の局面において、本発明は、医薬における使用のための、第１の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントまたは第２の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第５の局面において、本発明は、病理学的Ｃ５ａ活性に関連する疾患または障害の処置または予防における使用のための、第１の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントまたは第２の局面による抗体またはその抗原結合フラグメントに関する。
第５の局面の態様において、疾患または障害は、
－自己免疫疾患、
－炎症性疾患、自己炎症性障害、または関連状態、
－心臓血管または脳血管障害、
－細菌感染またはウイルス感染、
－神経変性障害または関連疾患、および
－癌または前癌状態
からなる群から選択される。
第５の局面のいくつかの態様において、ウイルス感染はＨＩＶまたはＡＩＤＳである。
実施例
以下の実施例は、当業者に本発明の化合物、組成物および方法の製造方法および使用方法の完全な開示および説明を提供するように提示されており、本発明者らが発明とみなす範囲を制限することを意図していない。使用される数値に関して正確さを確保するための努力がなされているが、いくらかの実験誤差および偏差を考慮すべきである。特に断らない限り、分子量は平均分子量、温度は摂氏、圧力は大気圧または大気圧近傍である。
実施例１：ＩＦＸ－１由来の完全ヒト化抗－Ｃ５Ａ抗体（ＩＦＸ－２クローン）の作製
本実施例は、キメラ抗体ＩＦＸ－１（ＶＨ０／Ｖκ０）をコードするＶ領域遺伝子配列を用いて、Ｃｏｍｐｏｓｉｔｅ Ｈｕｍａｎ ＡｎｔｉｂｏｄｙＴＭ技術を使用する一連の完全ヒト化抗体を構築した例を記す。設計した重鎖および軽鎖の可変領域遺伝子をそれぞれ、ヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメイン（Ｓ１０８Ｐアミノ酸交換を有するが配列番号：１９参照）およびヒトカッパ軽鎖定常ドメインをコードするベクターにクローニングした。他の刊行物において、Ｓ１０８Ｐアミノ酸交換は、ときどき、Ｓ２４１Ｐアミノ酸交換（全長ヒトＩｇＧ４のＫａｂａｔ番号付けを使用する）と称される。キメラ抗体およびヒト化抗体は、ＨＥＫ ＥＢＮＡ細胞で一過性に発現させ、プロテインＡ精製を行った。
方法および結果
合成ヒト抗体 ＴＭ 可変領域配列の設計
ＩＦＸ－１抗体のＶ領域の構造モデルをＳｗｉｓｓ ＰＤＢを用いて作成し、抗体の結合特性に必須である可能性のあるＶ領域における重要な「制約（ｃｏｎｓｔｒａｉｎｉｎｇ）」アミノ酸を特定するために分析した。多くのフレームワーク残基と共にＣＤＲ内に含まれるほとんどの残基が、重要であると考えられた。ＩＦＸ－１のＶＨおよびＶκ配列は、典型的なフレームワーク残基を含み、ＣＤＲ１、２および３モチーフは多くのマウス抗体と同等である。
上記の分析から、ＩＦＸ－１の複合ヒト配列は、ＣＤＲの外側の代替残基には広い幅があるが、ＣＤＲ配列内の可能な残基には狭いメニューしかないと考えられた。予備的な分析は、いくつかのヒト抗体から対応する配列セグメントを組み合わせて、マウス配列のＣＤＲと類似または同一のＣＤＲを作成することができることが示された。ＣＤＲの外側にある領域およびＣＤＲに隣接する領域について、ヒト配列セグメントの幅広い選択が新規のヒト化Ｖ領域の可能な構成要素として同定された。
ＣＤ４＋ Ｔ細胞エピトープ回避
構造分析に基づいて、ＩＦＸ－１ヒト化変異体を作成するために使用することができる配列セグメントの大規模な予備セットを選択し、ヒトＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子へのペプチド結合のコンピューター内分析のためのｉＴｏｐｅＴＭ技術（Perry et al New Approaches to Prediction of Immune Responses to Therapeutic Proteins during Preclinical Development (2008). Drugs R D 9 (6): 385-396）を用いて、および既知の抗体配列関連Ｔ細胞エピトープのＴＣＥＤＴＭ（Bryson et al Prediction of Immunogenicity of Therapeutic Proteins (2010). Biodrugs 24 (1):1-8）を用いて分析した。ヒトＭＨＣクラスＩＩに対する有意な非ヒト生殖細胞系列結合因子として同定されたか、またはＴＣＥＤＴＭに対して有意なヒットを記録した配列セグメントを、廃棄した。これはセグメントの低下したセットをもたらし、これらの組合せを上記のとおりに再び分析し、セグメント間のジャンクション（ｊｕｎｃｔｉｏｎ）が起こりうるＴ細胞エピトープを含まないことを保証した。選択された配列セグメントを、有意なＴ細胞エピトープを欠いている完全なＶ領域配列に集合させた。次に、５つの重鎖（ＶＨ１からＶＨ５）および４つの軽鎖（Ｖκ１からＶκ４）配列を、哺乳動物細胞における遺伝子合成および発現のために選択した。ＶＨ１からＶＨ５のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：７から１１として配列表において示される。Ｖκ１からＶκ４のアミノ酸配列は、それぞれ、配列番号：１３から１６として配列表において示される。
キメラ抗体およびヒト化変異体の構築
ＩＦＸ－１のＶＨおよびＶκ配列（ＶＨ０（配列番号：６）およびＶκ０（配列番号：１２））およびそのヒト化変異体を、それぞれ、ヒトＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）重鎖およびカッパ軽鎖のためのＡｂｚｅｎａ’ｓ ｐＡＮＴ発現ベクター系にクローニングするための制限酵素部位に隣接させて合成した。ＶＨ領域はＭｌｕ ＩおよびＨｉｎｄ ＩＩＩ制限酵素認識部位間にクローニングされ、Ｖκ領域はＢｓｓＨ ＩＩおよびＢａｍＨ Ｉ制限酵素認識部位間にクローニングされた。全てのコンストラクトを配列決定により確認した。
抗体の発現および精製
キメラＩＦＸ－１（ＶＨ０／Ｖκ０）、２つのコントロール抗体（ＶＨ０／Ｖκ１、ＶＨ１／Ｖκ０）および合成ＩｇＧ４（Ｓ２４１Ｐ）ＶＨおよびＶκ鎖の組合せ（合計２３組、表１）を、ＰＥＩトランスフェクション法を使用してＨＥＫ ＥＢＮＡ付着細胞（LGC Standards, Teddington, UK）に一時的にトランスフェクトし、トランスフェクション後７日間インキュベートした。上清の抗体価をＥＬＩＳＡによって決定し、ＶＨ１を含む変異体が他の変異体と比較したとき一貫して低い発現を示したことが観察された（データは示していない）。
表１．キメラ（ＶＨ０／Ｖκ０）、２つのコントロールヒト化変異体（ＶＨ１／Ｖκ０およびＶＨ０／Ｖκ１）および２０個のＩＦＸ－１合成ヒト抗体ＴＭ変異体を含む一過性のトランスフェクション（交差されたボックス）によって生成された抗体の概要表。

抗体（発現が乏しいＶＨ１変異体を除いた）を、プロテインＡセファロースカラム（GE Healthcare, Little Chalfont, UK）で細胞培養上清から精製し、１ｘ ＰＢＳ ｐＨ７．２にバッファー交換し、予測アミノ酸配列に基づく減衰係数（Ｅｃ（０．１％））を使用してＯＤ２８０ｎｍによって定量した。１μｇのそれぞれの抗体をゲル上に付加することによってＳＤＳ－ＰＡＧＥを使用して抗体を分析し、典型的な抗体のプロフィールに対応するバンドを観察した（データは示していない）。
実施例２：親抗体ＩＦＸ－１に対する異なるＩＦＸ－２クローンの比較
材料および試薬
ＣＤ１１ｂアッセイのため：
ｏ ACD, Sigma Aldrich (Taufkirchen, Germany), Cat. No. C3821-50ML
ｏ フローサイトメーターのための試薬（全てBD Bioscience, NJ, USA）
■ FACS Flow Sheat Fluid, Cat. No. 342003
■ FACS Shutdown solution, Cat. No. 334224
■ FACS Clean solution, Cat. No. 340345
■ ラット 抗マウスCD11b:FITC, Cat. No. 553310, 0.5 mg/mL
■ １０× 溶解溶液、BD Bioscience (NJ, USA), Cat. No. 349202 → ＡｎａｌａＲ水にて１：１０希釈した
ｏ HBSS, Life Technologies GmbH (Darmstadt, Germany), Cat. No. 14025-050
ｏ FBS, Invitrogen (CA, USA), Cat. No. 10099133 → 熱不活化：５６℃、３０分
ｏ アジ化ナトリウム、Merck (Darmstadt, Germany), Cat. No. 1.06688.0250
ｏ 組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）、Sigma Aldrich (Taufkirchen, Germany), Cat. No. C5788-.1MG、大腸菌において発現される、純度：～９５％、滅菌ＡｎａｌａＲ水において溶解された
ｏ 染色バッファー（ＳＢ－ｂｕｆｆｅｒ）：１×ＰＢＳ中 １％ 熱不活化ＦＢＳ＋０．１％ アジ化ナトリウム
ｏ １２％ ＡＣＤを含む健常ドナーからのヒト血液（即座に使用された）
Ｃ５ａベースのＰＫ ＥＬＩＳＡのため：
ｏ ＡｎａｌａＲ水、VWR International (Darmstadt, Germany), Cat. No. 102923C
ｏ 滅菌ＡｎａｌａＲ水において溶解され、大腸菌において発現された、組換えヒトＣ５ａ（ｒｈＣ５ａ）、Hycult Biotech (Uden, The Netherlands), Cat. No. HC2101
ｏ 滅菌ＡｎａｌａＲ水において溶解され、大腸菌において発現された、rhC5a デサルギニン(desarginine) 誘導体(rhC5aDArg), Hycult Biotech (Uden, The Netherlands), Cat. No. HC2102
ｏ ＩＦＸ－１、コントロールとして使用される抗－ヒトＣ５ａ抗体、InflaRx (Jena, Germany)、ＰＢＳ ＋ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ８０中１０ｍｇ／ｍＬ
ｏ マウス抗－ヒトＩｇＧ４：ＨＲＰ、AbD Serotec (Puchheim, Germany), Cat. No. MCA2098P、１ｍｇ／ｍＬ
ｏ Ｎａ２ＣＯ３、Sigma-Aldrich (Taufkirchen, Germany), Cat. No. 71350 (Sigma, WI, USA, Cat. No. 31432)
ｏ ＮａＨＣＯ３、VWR International (Darmstadt, Germany), Cat. No. L1730
ｏ ＮａＮ３、VWR International, (Darmstadt, Germany), Cat. No. 1.06688.0100
ｏ ＰＢＳ粉末、Sigma-Aldrich (Taufkirchen, Germany), Cat. No. P5368-10PAK → １０００ｍＬの脱イオン水に溶解させた１パッケージ
ｏ Ｔｗｅｅｎ ２０、Sigma-Aldrich, (Taufkirchen, Germany), Cat. No. P1379-25ML
ｏ ＢＳＡ、Sigma-Aldrich (Taufkirchen, Germany), Cat. No. A7030-100G
ｏ 被覆バッファー：１０００ｍＬ ＡｎａｌａＲ水中 １．５９ｇ Ｎａ２ＣＯ３ ＋ ２．９３ｇ ＮａＨＣＯ３ ＋ ０．２ｇ ＮａＮ３、ｐＨ９．６
ｏ 洗浄バッファー： １ｘ ＰＢＳ ＋ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０
ｏ アッセイ希釈剤： １×ＰＢＳ ＋ ０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０中 ３％ ＢＳＡ（３％ ＢＳＡ／ＰＢＳＴ）
ｏ ＴＭＢ基質（基質溶液Ｃ）、BioLegend/Biozol (Heidelberg, Germany), Cat. No. BLD-78105
ｏ 停止液：ＡｎａｌａＲ水で１：１０希釈した硫酸（Sigma-Aldrich, Cat. No. 258105-100ML）
血漿の溶血活性（ＣＨ５０）について：
ｏ ＡｎａｌａＲ水、VWR International (Darmstadt, Germany), Cat. No. 102923C
ｏ 補体ＣＨ５０アッセイ、Haemoscan (Groningen, Netherlands), Cat. No. K002
ｏ 健常なヒト血漿プール、huPP-013、自社調製
方法
ｒｈＣ５ａベースのＥＬＩＳＡ
ＥＬＩＳＡのために、１００μＬのｒｈＣ５ａ（１μｇ／ｍＬ）を９６－ウェルＥＬＩＳＡプレート上に一晩４℃で被覆した。プレートを洗浄し（５×）、２００μＬのブロッキングバッファーで１時間３７℃でブロックした。洗浄工程（５×）後、２５０ｎｇ／ｍＬ－３．９１ｎｇ／ｍＬの２倍連続希釈におけるＩＦＸクローンをＣ５ａ－被覆ウェルに加えた。３７℃での２時間インキュベーションおよび洗浄工程（５×）後、０．０４μｇ／ｍＬのＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ４抗体を、３７℃で１時間適用し、結合したＩＦＸクローンを検出した。発色のために、１００μＬのＴＭＢ基質を洗浄（５×）後に加え、ＲＴで５分インキュベートした。発色反応を１００μＬ 停止液で停止した。４５０ｎｍでの吸光度読み取りを、プレートリーダーを使用して発色反応後３０分以内に行った。ブランクの低下を生データで行った。
血漿の溶血活性（ＣＨ５０）
総溶血性補体価（ＣＨ５０）は、古典的補体経路の活性化を決定するための慣用の方法である。簡潔には、ヒツジ赤血球（ｓＲＢＣ）を遠心分離によって新鮮なヒツジ全血から調製し、抗ｓＲＢＣ抗体で感作した。ＩＦＸクローンを含む健常ボランティアからの血漿サンプルを、連続希釈し、感作したｓＲＢＣと共に３７℃で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、混合物を遠心分離し、上清に放出されたヘモグロビンの吸光度を４５０ｎｍで測定することにより溶血の程度を定量した。補体活性の量を、感作されたｓＲＢＣを溶解する試験血漿サンプルの種々の希釈物の能力を試験することによって、決定した。
ＣＤ１１ｂ効力アッセイ
ヒト全血を１６．７ｎＭ ｒｈＣ５ａで刺激した。ｒｈＣ５ａ誘導ＣＤ１１ｂ上方調節に対するＩＦＸ－１およびＩＦＸ－２クローンのブロッキング活性をテストするために、抗体を１：１のＡｇ：Ａｂ比で最終濃度まで希釈した。バッファーのみでインキュベートした血液（ＨＢＳＳコントロール）は、ベースラインＣＤ１１ｂ発現を評価するための非刺激条件として使用した。ＩＦＸ抗体単独を有する血液を、ヒト血液に対する抗体の阻害効果または刺激効果を除外するために使用した。混合サンプルを、３７℃で２０分インキュベートし、Ｃ５ａ介在ＣＤ１１ｂ上方調節を誘導した。その後、ＦＩＴＣ－コンジュゲートされた抗マウスＣＤ１１ｂ抗体をさらに氷上で３０分サンプルとインキュベートし、顆粒球の細胞表面上のＣＤ１１ｂを染色した。蛍光シグナルを、フローサイトメーターを通して捕獲した。
統計分析
グラフおよび統計分析を、ＧｒａｐｈＰａｄ ＰＲＩＳＭ（登録商標） Ｖ７．０５で行った。
結果
ＩＦＸ－２クローンは、ＩＦＸ－１と比較して、Ｃ５ａに十分に等しく結合した
ＩＦＸ－２クローンのＣ５ａへの結合を特徴付けるために、ｒｈＣ５ａベースのＥＬＩＳＡプラットフォームを使用した。３．９１ｎｇ／ｍＬ－２５０ｎｇ／ｍＬの範囲において１２×ＩＦＸ－２および１×ＩＦＸ－１（ＶＨ０Ｖｋ０）クローンを、サンプルとして、１μｇ／ｍＬ ｒｈＣ５ａコーティングされた９６－ウェルプレートに適用した。次に、Ｃ５ａ捕捉ＩＦＸクローンを、０．０４μｇ／ｍＬのＨＲＰコンジュゲートされた抗ヒトＩｇＧ４ｍＡｂで検出した。ＩＦＸ抗体がＣ５ａに結合しているほど、化学発光シグナルは強く現れる。図１に示されるとおり、適用される濃度範囲においてすべての試験された抗体が、同等の用量依存性でコーティングされたｒｈＣ５ａに結合した。
Ｃ５ａ結合に対するＩＦＸクローンのＥＣ５０を定量化するために、同様のＥＬＩＳＡベースのアッセイをＡＢＺＥＮＡで実施した。０－１００ｎｇ／ｍＬの範囲において、すべてのＩＦＸクローンはＣ５ａに対して非常に近い結合挙動を示した。親分子ＩＦＸ１と比較すると、すべてのＩＦＸ２クローンの相対ＥＣ５０は２倍の範囲内にあり、中央値は１．０４であった（表２）。
表２．Ｃ５ａ結合親和性に関するＩＦＸ－１（ＶＨ０Ｖｋ０）に対するＩＦＸ－２の相対的なＥＣ５０


ＩＦＸ－２抗体は、膜侵襲複合体（ＭＡＣ）の形成を阻害しないことを示した
親ＩＦＸ－１（ＶＨ０Ｖｋ０）は、Ｃ５ａおよびＣ５ｂへのＣ５開裂を妨害することなく、Ｃ５ａを中和することが知られている。Ｃ５ｂは古典的補体経路の終末産物である膜侵襲複合体Ｃ５ｂ－９の出発物質であり、膜に孔を形成する。総溶血補体価（ＣＨ５０）を、感作されたヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）のＭＡＣ介在溶血を介して古典的補体経路の活性化を指標とするために使用した。それぞれのＩＦＸクローン（１２×ＩＦＸ－２および１×ＩＦＸ－１（ＶＨ０Ｖｋ０））の初期濃度１００μｇ／ｍＬを有するプールしたヒト血漿を、４、８、１６、３２、６４および１２８倍に連続希釈し、赤血球懸濁液とインキュベートした。上清に放出されたヘモグロビンの吸光度を４５０ｎｍで測定することにより溶血の程度を定量した。
表３．各試験ＩＦＸクローンのＣＨ５０（血漿希釈倍率）

図２および表３に示されるとおり、完全に比較可能である５０％溶血（ＣＨ５０）をなし遂げるために、ＩＦＸ－２クローンの７０から７７倍（中央７４倍）希釈または親分子ＩＦＸ－１の７４倍希釈が必要であった。このことから、ＩＦＸ－２クローンの突然変異が古典的補体経路の活性化を損なわないことを証明した。
ＩＦＸ－２抗体はｒｈＣ５ａ駆動のＣＤ１１ｂ上方調節を効果的にブロックした
ヒト顆粒球の表面上のＣＤ１１ｂ上方調節は、ヒト全血へのｒｈＣ５ａの添加後、数分以内で検出可能である。ＣＤ１１ｂレベルを、蛍光標識抗ＣＤ１１ｂ抗体を用いて測定し、平均蛍光強度（ＭＦＩ）として示した。ｒｈＣ５ａ駆動のＣＤ１１ｂ上方調節のブロッキングを、２つのＣＤ１１ｂ効力アッセイにおいてＩＦＸ－１と比較して、１２×ＩＦＸ－２抗体で評価した。両方のアッセイにおいて、１６．７ｎＭ ｒｈＣ５ａを刺激として使用し、それぞれＣＤ１１ｂ発現の３．６５倍および５．８９倍の上方調節を誘導した。全てのＩＦＸクローンを、ＣＤ１１ｂ上方調節に対するブロッキングについて１：１のモル比でテストした。ＩＦＸクローンのブロッキング活性を、ｒｈＣ５ａ刺激条件に対するそれぞれの蛍光強度の変化に従って計算した。親分子ＩＦＸ－１の活性を１００％と設定した。１：１のｒｈＣ５ａ：ＩＦＸクローン比率で、ＩＦＸ－２クローンは９４％－１０４％の相対的なブロッキング活性を示した（図３参照）。ＩＦＸ－２クローンの相対的なブロッキング活性の中央は１００．６８％であった。
実施例３：ＩＦＸ－１／ＩＦＸ－２処置後の非ヒト霊長類におけるＡＤＡ分析
材料および試薬
表４． 試薬およびこれらの供給者

方法
抗薬物抗体を、二段階アプローチにおいて決定する。血清サンプルを、ＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡで抗薬物抗体についてスクリーニングする。光学濃度（ＯＤ）に基づく一定のアッセイカットポイントは、０．１０２であり（ＩＦＸ－１ ＡＤＡの検出のためのヒト血漿を用いたＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡ確認による）、そして９％の偽陽性サンプルをもたらすはずである。したがって、ＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡで陽性となったサンプルを、ＡＤＡ確認ＥＬＩＳＡで分析し、結果を確認または拒絶し、そして適用できるときＡＤＡ濃度を決定しなければならない。
ＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡは、薬物ＩＦＸ－１（抗ヒトＣ５ａ抗体）を捕捉抗体（非標識）および検出抗体（ビオチン標識）として使用するブリッジング（ｂｒｉｄｇｉｎｇ）ＥＬＩＳＡである。検量線（ｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎ （ＣＡＬ） ｃｕｒｖｅ）の作成および品質管理（ＱＣ）サンプルのスパイク（ｓｐｉｋｉｎｇ）のために使用される抗薬物抗体を、精製ＩＦＸ－１でのウサギの免疫化後に、ウサギ血清から精製した。抗薬物抗体は２つの結合部位を有するため、これらは、捕獲用ＩＦＸ－１ならびに検出のために使用される標識ＩＦＸ－１の両方に結合（ブリッジ）することができる。ＡＤＡ陽性とスクリーニングされた血漿サンプルはすべて、ＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡセットアップに基づくＡＤＡ確認ＥＬＩＳＡで再評価される。さらなる遊離の非標識薬物（ＩＦＸ－１）をサンプルに加え、プレート上に捕捉されたＩＦＸ－１への起こりうる抗薬物抗体の結合と競合させる。もし利用できる抗薬物抗体が存在すれば、それらは加えられた遊離非標識ＩＦＸ－１に結合し、検出されなくなる。薬物特異的なＡＤＡ阻害が観察され、スクリーニング結果が確認されたとき、サンプルは陽性が確認されたとみなされる。
ＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡおよびＡＤＡ確認ＥＬＩＳＡは、以下に記載されているように実施した：
簡潔には、１００μｌ／ウェルの捕捉抗体（ＩＦＸ－１、０．５μｇ／ｍｌ）を、高結合プレート上で５±３℃で一晩インキュベートする。洗浄工程後、２００μｌのブロッキングバッファーをそれぞれのウェルに分注し、プレートを３７℃±２℃で２時間インキュベートする。別の洗浄工程後、１００μｌ／ウェルのＣＡＬサンプル、ＱＣサンプルおよび興味あるサンプル（試験サンプル）を、ウェルに分注し、３７℃±２℃で２時間インキュベートする。洗浄工程後、１００μＬの検出抗体（ビオチン化ＩＦＸ－１、０．０８μｇ／ｍｌ）をそれぞれのウェルに分注し、３７℃±２℃で６０分間インキュベートする。その後プレートを洗浄し、１００μｌ希釈アビジン－ＨＲＰ（１：３０００）をそれぞれのウェルに加え、３７℃±２℃で３０分間インキュベートする。最終洗浄工程後、１００μｌ／ウェルのＴＭＢ（基質溶液）を加え、遮光して室温で５分間インキュベートし、そして１００μｌ／ウェルの希硫酸を加えて反応を停止させる。発色強度を、ｍａｇｅｌｌａｎＴＭ ６．５ソフトウェアを使用してＴｅｃａｎ Ｉｎｆｉｎｉｔｅ Ｍ２００リーダーで４５０ｎｍで分析する。
知られていないＡＤＡ濃度を有する血漿サンプルは、ＡＤＡスクリーニングＥＬＩＳＡで分析する前に、ＣｒｏｓｓＤｏｗｎバッファーで１：２希釈する。ＡＤＡ確認用ＥＬＩＳＡにおける再評価のために、サンプルをＣｒｏｓｓＤｏｗｎバッファーで１回および薬物スパイク（ｓｐｉｋｅｄ）ＣｒｏｓｓＤｏｗｎバッファー（ＩＦＸ－１濃度１００μｇ／ｍｌ）で１回、１：２希釈する。
ＡＤＡスクリーニングアッセイにおいて０．１０２未満のＯＤ値を有するサンプルは、「陰性」に分類される。ＡＤＡ確認アッセイにおいて５０％以上のシグナルブロッキングを有するサンプルは「陽性確定」に分類される。結果を表５に示す。
結果
ＩＦＸ－２処置動物は、投与後８週間、検出可能なＡＤＡを発症しなかった。
表５．ＡＤＡスクリーニングおよび確認ＥＬＩＳＡの概要

配列表フリーテキスト情報

Claims (12)

  1. 重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
    該ＶＨドメインは、
    配列番号：１０
    によるアミノ酸配列、または
    配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列であって、該配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０から２２のＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、およびＣＤＲ３Ｈ配列を含み、そして該配列番号：１０と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、アミノ酸位置５でのＶ、アミノ酸位置１０でのＥ、アミノ酸位置１２でのＫ、アミノ酸位置１３でのＫ、アミノ酸位置１６でのＡ、アミノ酸位置４０でのＡ、および／またはアミノ酸位置７６でのＴを含む、アミノ酸配列
    を含み、本質的にからなり、またはからなり、そして
    該ＶＬドメインは、
    配列番号：１６
    によるアミノ酸配列、または
    配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列であって、該配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２３から２５のＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ配列を含み、そして該配列番号：１６と少なくとも８０％配列同一性を有するアミノ酸配列は、アミノ酸位置１３でのＡ、アミノ酸位置１５でのＶ、アミノ酸位置１７でのＤ、アミノ酸位置１９でのＶ、アミノ酸位置２２でのＴ、アミノ酸位置４６でのＫ、アミノ酸位置４７でのＡ、アミノ酸位置６４でのＳ、アミノ酸位置７８でのＴ、アミノ酸位置８０でのＳ、アミノ酸位置８１でのＳ、アミノ酸位置８２でのＬ、アミノ酸位置８３でのＱ、アミノ酸位置８７でのＦ、および／またはアミノ酸位置１０４でのＱを含む、アミノ酸配列
    を含む、本質的にからなる、またはからなる、
    抗体またはその抗原結合フラグメント。
  2. 重鎖可変ドメイン（ＶＨ）および軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）を含む抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
    該ＶＨドメイン、
    配列番号：１７（ＱＶＱＬＶＱＳＧＸ９Ｅ Ｘ１１ＫＫＰＧＡＳＶＫＸ２０ ＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴ ＴＦＷＭＤＷＶＸ３８ＱＡ ＰＧＱＧＬＥＷＸ４８ＧＲ ＩＤＰＳＤＳＥＳＲＬ ＤＱＸ６３ＦＫＤＲＸ６８ＴＸ７０ ＴＶＤＫＳＴＳＴＶＹ ＭＸ８２ＬＳＳＸ８６Ｘ８７ＳＥＤ Ｘ９１ＡＶＹＹＣＡＲＧＮ ＤＧＹＹＧＦＡＹＷＧ ＱＧＴＬＶＴＶＳＳ）によるアミノ酸配列であって、Ｘ９はＡまたはＰであり、Ｘ１１はＬまたはＶであり、Ｘ２０はＩまたはＶであり、Ｘ３８はＫまたはＲであり、Ｘ４８はＩまたはＭであり、Ｘ６３はＫまたはＲであり、Ｘ６８はＡまたはＶであり、Ｘ７０はＬまたはＭであり、Ｘ８２はＥまたはＱであり、Ｘ８６はＬまたはＰであり、Ｘ８７はＲまたはＴであり、そしてＸ９１はＳまたはＴであるか、または
    １つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を有する配列番号：１７によるアミノ酸配列であって、該１つ、２つまたは３つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２０から２２のＣＤＲ１Ｈ、ＣＤＲ２Ｈ、ＣＤＲ３Ｈ配列を含むアミノ酸配列
    を含み、本質的にからなり、またはからなり、そして
    該ＶＬドメインは、
    配列番号：１８（ＤＩＸ３Ｘ４ＴＱＳＰＸ９Ｓ ＬＸ１２ＡＳＶＧＤＲＶＴ ＩＴＣＫＡＳＱＳＶＤ ＹＤＧＤＳＹＭＫＷＹ ＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬ ＬＩＹＡＡＳＮＬＱＳ ＧＸ６２ＰＳＲＦＳＧＳＧ ＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳ ＳＬＱＸ８４ＥＤＦＡＴＹ ＹＣＱＱＳＮＥＤＰＹ ＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩ Ｋ）によるアミノ酸配列であって、Ｘ３はＶまたはＱであり、Ｘ４はＬまたはＭであり、Ｘ９はＡまたはＳであり、Ｘ１２はＡまたはＳであり、Ｘ６２はＩまたはＶであり、そしてＸ８４はＥまたはＰであるか、または
    １つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのアミノ酸置換を有する配列番号：１８によるアミノ酸配列であって、該１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、または７つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列は、それぞれ配列番号：２３から２５のＣＤＲ１Ｌ、ＣＤＲ２Ｌ、ＣＤＲ３Ｌ配列を含むアミノ酸配列
    を含む、本質的にからなる、またはからなる、
    抗体またはその抗原結合フラグメント。
  3. 請求項１または２に記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、
    該ＶＨドメインが、ＶＨ１からＶＨ５（配列番号：７から１１）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなる；および／または
    該ＶＬドメインが、Ｖκ１からＶκ４（配列番号：１３から１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなる、
    抗体またはその抗原結合フラグメント。
  4. 請求項１から３のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体または該その抗原結合フラグメントが、
    ａ）配列番号：１０（ＶＨ４）によるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＨドメインおよび配列番号：１６（Ｖκ４）によるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＬドメイン、または
    ｂ）配列番号：１１（ＶＨ５）によるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＨドメインおよび配列番号：１５（Ｖκ３）によるアミノ酸配列を含む、本質的にからなる、またはからなるＶＬドメイン
    を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
  5. 抗体がヒト化抗体である、請求項１から４のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  6. 定常ドメインをさらに含む請求項１から５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該定常ドメインが、配列番号：１９（ＩｇＧ４ ＷＴ定常）によるアミノ酸配列を含み、本質的にからなり、またはからなり、
    配列番号：１９による該アミノ酸配列は、所望により以下のアミノ酸交換：
    －アミノ酸交換Ｓ１０８Ｐ；
    －アミノ酸交換Ｔ１３０ＱおよびＭ３０８Ｌ；
    －アミノ酸交換Ｍ１３２Ｙ、Ｓ１３４Ｔ、およびＴ１３６Ｅ
    の１つ以上を含む、抗体またはその抗原結合フラグメント。
  7. 抗体の抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｄフラグメント、Ｆｖフラグメント、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｄｓＦｖ）、単一ドメイン抗体および一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）抗体からなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  8. 請求項１から７のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントであって、該抗体または該その抗原結合フラグメントは、以下の特性：
    －該抗体または該その抗原結合フラグメントが、１０ｎＭ以下のＫｄ値でのＣ５ａへの結合定数を有する；
    －該抗体または該その抗原結合フラグメントが、１つの分子Ｃ５ａによって誘導される生物学的効果に対して少なくとも７５％の遮断活性を示す；
    －該抗体または該その抗原結合フラグメントが、ヒト血漿においてＣＨ５０活性を阻害しない；
    －該抗体または該その抗原結合フラグメントが、ＩＦＸ－１と比較して低下した免疫原性を有する、
    の１つ以上を示す、抗体またはその抗原結合フラグメント。
  9. 請求項１から８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメントを含み；そして
    １つ以上の薬学的に許容される担体、希釈剤、賦形剤、増量剤、結合剤、滑剤、流動促進剤、崩壊剤、吸着剤、および／または防腐剤をさらに含む、
    医薬組成物。
  10. 医薬における使用のための、請求項１から８のいずれかに記載の抗体またはその抗原結合フラグメント。
  11. 病理学的Ｃ５ａ活性に関連する疾患または障害の処置または予防における使用のための、請求項１から８のいずれかに記載の化合物。
  12. 疾患または障害が、
    －自己免疫疾患、
    －炎症性疾患、自己炎症性障害、または関連状態、
    －心臓血管または脳血管障害、
    －細菌感染またはウイルス感染、
    －神経変性障害または関連疾患、および
    －癌または前癌状態
    からなる群から選択される、請求項１１に記載の使用のための化合物。
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