JP2023533857A - 抗ｋｌｋ２抗体に対する抗イディオタイプ抗体 - Google Patents

Abstract

特定の態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３含有タンパク質に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分、例えば、抗体又はその抗原結合部分に関する。いくつかの態様では、本開示の抗イディオタイプ抗体及び抗原結合部分は、ＫＬ２Ｂ４１３を含むキメラ抗原受容体を発現する細胞を検出及び定量するための方法において使用することができる。

Description

（関連出願の相互参照）
本出願は２０２０年７月１７日に出願された米国仮特許出願第６３／０５３，２７５号の優先権を主張するものである。前述の出願の全内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

（配列表）
本出願は、ＡＳＣＩＩフォーマットで電子的に提出済みである、その全体が参照により本明細書に組み込まれる配列表を含む。上記ＡＳＣＩＩコピーは、２０２１年７月７日に作成され、名称はＪＢＩ６３５１ＷＯＰＣＴ１＿ＳＬ．ｔｘｔであり、サイズは３６，１８７バイトである。

（発明の分野）
本発明は、ＫＬ２Ｂ４１３含有タンパク質に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分、例えば、抗体又はその抗原結合部分に関する。ＫＬ２Ｂ４１３を含むキメラ抗原受容体を発現する細胞を検出及び定量する方法も提供される。

標的ゲノムへのゲノム材料の送達及び統合の理解における最近の進歩は、標準治療を多様な疾患に合わせて変化させる大きな可能性を有している。Ｔ細胞療法では、特定の腫瘍関連抗原に対する特異性を高めるために遺伝子改変され単離されたＴ細胞を利用する。遺伝子改変は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）又は外因性Ｔ細胞受容体の発現を伴い、Ｔ細胞上に新たな抗原特異性を提供し得る。キメラ抗原受容体を発現するＴ細胞（ＣＡＲ－Ｔ細胞）は、腫瘍免疫反応性を誘導することができる。

関心のある特定のＣＡＲ標的の１つは、カリクレイン関連ペプチダーゼ２（ｈＫ２、ＨＫ２）である。これは、アンドロゲン受容体（ＡＲ）に駆動されて前立腺組織及び前立腺がんに特異的に発現するトリプシン様酵素である。ｈＫ２は、膜貫通プロテアーゼ、セリン２（ＴＭＰＲＳＳ２）によって活性化され、前立腺の管に分泌され、そこで、***液中の細胞外マトリクスであるセメノゲリンを切断して***の運動性を増強するカスケードを開始させる。ｈＫ２発現は、前立腺及び前立腺がん組織に限定されるが、最近、ステロイドホルモンによりＡＲ経路が適切に活性化された後の乳がん株及び一次患者サンプルでｈＫ２が検出可能であったことが証明された（米国特許出願公開第２０１８／０３２６１０２号）。肥大又は悪性形質転換時に前立腺の高度に構造化された組織が損なわれた場合に、触媒的に不活性なｈＫ２の血液への逆行性放出が生じる。

したがって、前立腺がんを治療するためのＣＡＲ－Ｔ細胞療法が必要とされている。ＣＡＲを発現するタンパク質及び細胞を検出、精製、又は選択するために、このようなＣＡＲに向けられた抗イディオタイプ抗体も必要とされている。

本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３含有タンパク質に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分、例えば、抗体又はその抗原結合部分を提供する。本開示はまた、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分をコードする核酸、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を産生する方法、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を使用してＫＬ２Ｂ４１３（又はＫＬ２Ｂ４１３を発現する細胞）を検出する方法、並びに抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を含むキットも提供する。

一態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３を含む標的抗体などの抗ｈＫ２標的抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を提供する。いくつかの実施形態では、標的抗体又は抗原結合部分は、配列番号４１を含むアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４２を含むアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。

他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３の検出において使用するためのものであり、検出が、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む。

別の態様では、本開示は、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２及び配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは、配列番号４６と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４６に対して少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＬドメインを含む。

いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。いくつかの他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。

いくつかの実施形態では、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、マウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む。いくつかの他の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分はＫＬ２Ｂ４１３に特異的であり、ＫＬ２Ｂ４１３は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある。いくつかの実施形態では、ＫＬ２Ｂ４１３はｓｃＦｖであり、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＣＡＲのｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＫＬ２Ｂ４１３は、ＫＬＫ２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合部分は、他のＫＬＫ２抗体又は他のＫＬＫ２結合ＣＡＲと交差反応しない。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸を提供する。

別の態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、配列番号３８のヌクレオチド配列、配列番号４０のヌクレオチド配列、又はその両方を含む、核酸を提供する。別の態様では、本開示は、核酸配列を含むベクターを提供する。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。別の態様では、本開示は、ベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は哺乳動物細胞である。

別の態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、当該抗体又は当該抗原結合部分を発現させる条件下で、抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞を培養することと、培養物から当該抗体又は当該抗原結合部分を単離することとを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸を含むベクターをコードする。

別の態様において、本開示は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、方法を提供する。

別の態様では、本開示は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによってＣＡＲの発現を検出することとを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む。いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清又は尿である。

いくつかの態様では、本開示は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するためのキットであって、（ａ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、キットを提供する。

他の態様では、本開示は、試料からＫＬ２Ｂ４１３を精製する方法であって、（ａ）ＫＬ２Ｂ４１３を含む生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を本開示の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＫＬ２Ｂ４１３を精製することとを含む、方法を提供する。

他の態様では、本開示は、細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的である。

本開示は、前述の態様及び実施形態のうちのいずれかの全ての組み合わせ、並びに詳細な説明及び実施例に記載の実施形態のうちのいずれかとの組み合わせを企図する。

本発明を説明する目的で、本開示のある特定の実施形態が図面に示されている。しかしながら、本開示は、図面に示された実施形態の精密な配置及び手段に限定されるものではない。
ポリクローナルＥＬＩＳＡで検出された４ラウンドのパニング後のＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０特異的結合濃縮のグラフ表示である。 ＧＣＤＢ７３４カウンタースクリーニング試薬結合アッセイと比較した、ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０標的結合アッセイからのモノクローナルＦａｂ結合スクリーニングの結果のグラフ表示である。 モノクローナル抗体がｓｃＦｖトランスフェクトＳｕｐＴ１細胞への結合においてスクリーニングされた、細胞ベースの結合アッセイのグラフ表示である。 ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞へのＡ００２Ｂ３９の用量依存的結合のグラフ表示である。 ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合タンパク質による、ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞へのＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の用量依存的結合のブロッキングのグラフ表示である。 全血中にスパイクされたＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ－ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ－Ａ００２Ｂ３９検出のグラフ表示である。 ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ－ＳｕｐＴ１と同様の結合プロファイルを有するＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の２つの異なるロットのグラフ表示である。

概説
本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３含有タンパク質に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分、例えば、抗体又はその抗原結合部分を提供する。本開示の抗イディオタイプ抗体及び抗原結合部分は、ＫＬ２Ｂ４１３を含むＣＡＲを発現する細胞を検出及び定量するための方法において使用することができる。このような方法により、研究者は、ｉｎ ｖｉｔｒｏで生成されたＣＡＲ－Ｔ細胞の所与のバッチが所望のＣＡＲを発現したかどうか、したがって、細胞が所望のタンパク質を標的とするのに治療上有用であるかどうかを判断できることがある。本開示において、抗イディオタイプ抗体及び抗原結合部分は、ＫＬ２Ｂ４１３を標的とし、これはそれ自体、前立腺組織に関連するタンパク質であるＫＬＫ２を標的とする。

定義
本明細書及び添付の「特許請求の範囲」において使用される場合、「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」という単数形は、その内容について別途明確に指示されない限り、複数の指示対象を包含する。したがって、例えば、「細胞（a cell）」という言及には、２つ又は３つ以上の細胞の組み合わせなどが含まれる。

移行句「備える／含む（comprising）」、「から本質的になる（consisting essentially of）」、及び「からなる（consisting of）」は、特許用語において一般的に受け入れられている意味を含意することを意図しており、すなわち、（ｉ）「備える／含む（comprising）」は、「含む」、「含有する」、又は「特徴とする」と同義であり、包括的又は非制限的なものであり、その他の列挙されていない要素又は方法工程を除外するものではなく、（ｉｉ）「からなる（consisting of）」は、特許請求の範囲において特定されていない、あらゆる要素、工程、又は成分を除外し、並びに（ｉｉｉ）「から本質的になる」は、特定される材料又は工程、並びに、特許請求される発明の「基本的かつ新しい特徴に実質的に影響しないもの」に、特許請求の範囲を制限する。語句「備える／含む」（又はその同等語）を伴って記載される実施形態はまた、「からなる」及び「から本質的になる」を伴って独立して記載される実施形態として提供する。

「活性化」又は「刺激」又は「活性化された」又は「刺激された」とは、活性化マーカーの発現、サイトカイン産生、又は標的細胞の増殖若しくは細胞傷害性の媒介をもたらす、細胞の生物学的状態の変化の誘導を指す。細胞は、一次刺激シグナルによって活性化され得る。共刺激シグナルは、一次シグナルの大きさを増幅し、初期刺激後の細胞死を抑制することができ、その結果、より耐久性のある活性化状態、ひいてはより高い細胞傷害能をもたらす。「共刺激シグナル」は、ＴＣＲ／ＣＤ３ライゲーションなどの一次シグナルと組み合わせて、Ｔ細胞及び／若しくはＮＫ細胞の増殖並びに／又は鍵となる分子のアップレギュレーション若しくはダウンレギュレーションを引き起こすシグナルを指す。

「抗イディオタイプ抗体」又は「抗イディオタイプの抗体」は、別の抗体の可変領域に特異的に結合する抗体を指す。ＫＬＫ２の場合、抗イディオタイプ抗体は、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する。

「抗原結合部分」、「抗原結合断片」又は「抗原結合ドメイン」は、抗原に結合するタンパク質の部分を指す。抗原結合部分は、合成ポリペプチド、酵素的に入手可能なポリペプチド、又は遺伝的に操作されたポリペプチドであってよく、これには、抗原に結合する免疫グロブリンの一部、例えば、ＶＨ、ＶＬ、ＶＨ及びＶＬ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｄ及びＦｖ断片、１つのＶＨドメイン又は１つのＶＬドメインからなるドメイン抗体（ｄＡｂ）、サメ可変ＩｇＮＡＲドメイン、ラクダ化ＶＨドメイン、ＶＨＨドメイン、ＦＲ３－ＣＤＲ３－ＦＲ４部分などの抗体のＣＤＲを模倣するアミノ酸残基からなる最小認識ユニット、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、及び／又はＨＣＤＲ３、並びにＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、及び／又はＬＣＤＲ３、抗原に結合するオルタナティブスカフォールド、並びに抗原結合部分を含む多重特異性タンパク質が挙げられる。抗原結合部分（ＶＨ及びＶＬなど）は、合成リンカーを介して互いに連結して、ＶＨ及びＶＬドメインが別々の一本鎖により発現された場合にＶＨ／ＶＬドメインが分子内又は分子間で対合して一価の抗原結合ドメイン、例えば一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）又はダイアボディを形成することができる、様々な種類の一本鎖抗体設計を形成することができる。抗原結合部分はまた、二重特異性及び多重特異性タンパク質を遺伝子操作するために、単一特異性又は多重特異性であり得る他の抗体、タンパク質、抗原結合部分、又はオルタナティブスカフォールドにコンジュゲートされてもよい。

「がん」は、身体における異常細胞の制御されていない成長を特徴とする様々な疾患の広範な群を指す。制御されていない細胞***及び成長は、隣接組織を浸潤する悪性腫瘍の形成をもたらし、リンパ系又は血流を介して身体の遠位部分にも転移し得る。「がん」又は「がん組織」は、腫瘍を含み得る。

「完全長抗体」は、ジスルフィド結合によって相互に接続された、２本の重鎖（ＨＣ）及び２本の軽鎖（ＬＣ）、並びにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）で構成される。各重鎖は、重鎖可変ドメイン（ＶＨ）及び重鎖定常ドメインで構成され、重鎖定常ドメインは、サブドメインＣＨ１、ヒンジ、ＣＨ２及びＣＨ３で構成される。各軽鎖は、軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）及び軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）で構成される。ＶＨ及びＶＬは、フレームワーク領域（ＦＲ）が散在している、相補性決定領域（Complementarity determining regions、ＣＤＲ）と呼ばれる超可変性の領域に更に細分化され得る。各ＶＨ及びＶＬは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４で配置された、３つのＣＤＲ及び４つのＦＲセグメントで構成される。

「相補性決定領域（ＣＤＲ）」は、抗体における抗原結合部位である。ＣＤＲは、様々な用語を使用して定義され得る：（ｉ）ＶＨ内に３つ（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、ＨＣＤＲ３）及びＶＬ内に３つ（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、ＬＣＤＲ３）の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、配列多様性に基づいている（Ｗｕ ａｎｄ Ｋａｂａｔ，Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １３２：２１１－５０，１９７０；Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．，１９９１）。（ｉｉ）ＶＨ内に３つ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３）及びＶＬ内に３つ（Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３）の「超可変性領域」、「ＨＶＲ」、又は「ＨＶ」は、Ｃｈｏｔｈｉａ及びＬｅｓｋ（Ｃｈｏｔｈｉａ ａｎｄ Ｌｅｓｋ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ １９６：９０１－１７，１９８７）によって定義されるとおり、構造において超可変性である、抗体可変ドメインの領域を指す。Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＩｍＭｕｎｏＧｅｎｅＴｉｃｓ（ＩＭＧＴ）データベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ＿ｉｍｇｔ＿ｏｒｇ）は、抗原結合部位についての標準的番号及び定義を提供する。ＣＤＲ、ＨＶ、及びＩＭＧＴ概要説明の対応が、Ｌｅｆｒａｎｃ ｅｔ ａｌ．，Ｄｅｖ Ｃｏｍｐａｒａｔ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２７：５５－７７，２００３に記載されている。本明細書で使用されている「ＣＤＲ」、「ＨＣＤＲ１」、「ＨＣＤＲ２」、「ＨＣＤＲ３」、「ＬＣＤＲ１」、「ＬＣＤＲ２」、及び「ＬＣＤＲ３」という用語は、本明細書において別途記載のない限り、上掲のＫａｂａｔ、Ｃｈｏｔｈｉａ、又はＩＭＧＴにより記載されている方法のいずれかによって定義されるＣＤＲを含む。

「ヒト抗体」は、ヒト対象に投与されるときに、最小の免疫応答を有するように最適化された抗体を意味する。ヒト抗体の可変領域は、ヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体が定常領域又は定常領域の一部を含む場合、その定常領域もヒト免疫グロブリン配列に由来する。ヒト抗体は、ヒト抗体の可変領域がヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子を使用する系から得られた場合、ヒト起源の配列に「由来する」重鎖可変領域及び軽鎖可変領域を含む。このような例示的な系は、ファージにディスプレイされたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリ、及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を保有するトランスジェニック非ヒト動物、例えばマウス又はラットを含む。「ヒト抗体」は、典型的には、ヒト抗体及びヒト免疫グロブリン遺伝子座を得るために使用した系の違い、フレームワーク若しくはＣＤＲへの体細胞変異の導入若しくは置換の意図的な導入、又はこれらの両方により、ヒトで発現した免疫グロブリンと比較したときにアミノ酸の違いを含有する。典型的には、「ヒト抗体」は、ヒト生殖系列免疫グロブリン又は再編成された免疫グロブリン遺伝子によってコードされているアミノ酸配列に対して、アミノ酸配列が少なくとも約８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一である。場合によっては、「ヒト抗体」は、例えばＫｎａｐｐｉｋ ｅｔ ａｌ．，（２０００）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ２９６：５７－８６に記載されるヒトフレームワーク配列分析から得られたコンセンサスフレームワーク配列、又は例えばＳｈｉ ｅｔ ａｌ．，（２０１０）Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６及び国際公開第２００９／０８５４６２号に記載される、ファージ上に提示されたヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリに組み込まれた合成ＨＣＤＲ３を含有し得る。少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来する抗体は、「ヒト抗体」の定義には含まれない。

「ヒト化抗体」は、少なくとも１つのＣＤＲが非ヒト種に由来し、少なくとも１つのフレームワークがヒト免疫グロブリン配列に由来する抗体を意味する。ヒト化抗体は、フレームワークに置換を含むことができるため、フレームワークは、発現したヒト免疫グロブリン又はヒト免疫グロブリン生殖細胞系列遺伝子配列の厳密なコピーではない場合がある。

「単離／単離された」とは、組み換え細胞などにおける分子が産生される系の他の成分から実質的に分離及び／又は精製された分子の均質な集団（例えば、合成ポリヌクレオチド又はポリペプチド）、並びに少なくとも１つの精製又は単離工程に供されたタンパク質を指す。「単離／単離された」とは、他の細胞材料及び／又は化学物質を実質的に含まない分子を指し、より高い純度、例えば８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の純度まで単離された分子を包含する。

「調節する」は、対照又はビヒクルによって媒介される応答と比較したときに、より多い又はより少ない応答を媒介する（すなわち、下流効果）試験分子の増強された又は低減された能力のいずれかを指す。

「ナチュラルキラー細胞」及び「ＮＫ細胞」は、本明細書では互換的かつ同義的に使用される。ＮＫ細胞とは、ＣＤ１６^＋ＣＤ５６^＋及び／又はＣＤ５７^＋ＴＣＲ^－表現型を有する分化リンパ球を指す。ＮＫ細胞は、特定の細胞溶解性酵素の活性化によって「自己」ＭＨＣ／ＨＬＡ抗原を発現できない細胞に結合し、殺傷する能力、腫瘍細胞又はＮＫ活性化受容体のリガンドを発現する他の疾患細胞を殺傷する能力、及び免疫応答を刺激又は阻害するサイトカインと呼ばれるタンパク質分子を放出する能力を特徴とする。

「特異的に結合する」、「特異的結合」、「特異的に結合している」、又は「結合する」とは、タンパク質性分子が、抗原又は抗原内のエピトープに、他の抗原に対する親和性よりも高い親和性で結合することを指す。典型的には、タンパク質性分子は、約１×１０^－７Ｍ以下、例えば約５×１０^－８Ｍ以下、約１×１０^－８Ｍ以下約１×１０^－９Ｍ以下、約１×１０^－１０Ｍ以下、約１×１０^－１１Ｍ以下、又は約１×１０^－１２Ｍ、１×１０^－１３Ｍ、１×１０^－１４Ｍ、１×１０^－１５Ｍ以下の平衡解離定数（Ｋ_Ｄ）で抗原又は抗原内のエピトープに結合し、典型的には、Ｋ_Ｄは、非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合についてのＫ_Ｄよりも少なくとも１００倍小さい。本明細書に記載の前立腺ネオ抗原の文脈において、「特異的結合」とは、タンパク質性分子が、前立腺ネオ抗原がその変異体である野生型タンパク質に検出可能には結合することなく、前立腺ネオ抗原に結合することを指す。

「腫瘍細胞」又は「がん細胞」とは、ｉｎ ｖｉｖｏ、ｅｘ ｖｉｖｏ、又は組織培養のいずれかにおいて、自然発生的な又は導入された表現型の変化を有するがん性、前がん性、又は形質転換細胞を指す。これらの変化は、必ずしも新たな遺伝物質の取り込みを伴うものではない。形質転換は、形質転換ウイルスの感染及び新たなゲノム核酸の組み込み、外因性核酸の取り込みにより発生させることもでき、自然発生的に又は発がん物質に曝露した後に発生し、それによって内因性の遺伝子が変異する場合もある。形質転換／がんは、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖｉｖｏ、及びｅｘ ｖｉｖｏにおける、形態学的変化、細胞の不死化、異常な増殖制御、病巣の形成、増殖、悪性病変、腫瘍特異的マーカーレベルの調節、浸潤性、ヌードマウスなどの好適な動物宿主における腫瘍の増殖などによって例示される。

用語「キメラ抗原受容体」又は「ＣＡＲ」は、本明細書で使用するとき、全て天然では単一のタンパク質において一緒にみられることのない組み合わせで、細胞外標的結合ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞内シグナル伝達ドメインを含む細胞表面受容体として定義される。これには、特に、細胞外ドメイン及び細胞内シグナル伝達ドメインが天然では単一の受容体タンパク質において一緒にみられることのない受容体が含まれる。本発明のキメラ抗原受容体は、主に、Ｔ細胞及びナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのリンパ球での使用が意図される。

用語「Ｔ細胞」及び「Ｔリンパ球」は、互換的であり、本明細書において同義的に使用される。本明細書で使用するとき、Ｔ細胞は、胸腺細胞、ナイーブＴリンパ球、未成熟Ｔリンパ球、成熟Ｔリンパ球、休止Ｔリンパ球、又は活性化Ｔリンパ球を含む。Ｔ細胞は、Ｔヘルパー（T helper、Ｔｈ）細胞、例えば、Ｔヘルパー１（Ｔｈ１）又はＴヘルパー２（Ｔｈ２）細胞であり得る。Ｔ細胞は、ヘルパーＴ細胞（ＨＴＬ、ＣＤ４＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋Ｔ細胞、細胞傷害性Ｔ細胞（cytotoxic T cell、ＣＴＬ、ＣＤ８＋Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞傷害性Ｔ細胞（ＴＩＬ、ＣＤ８＋Ｔ細胞）、ＣＤ４＋ＣＤ８＋Ｔ細胞、又はＴ細胞の任意の他のサブセットであってもよい。特定の実施形態で使用するのに好適なＴ細胞の他の例示的な集団としては、ナイーブＴ細胞及びメモリＴ細胞が挙げられる。また、「ＮＫＴ細胞」も含まれ、これは、半不変αβＴ細胞受容体を発現するだけでなく、ＮＫ１．１などの典型的にはＮＫ細胞に関連する様々な分子マーカーも発現する、Ｔ細胞の特殊な集団を指す。ＮＫＴ細胞としては、ＮＫ１．１＋及びＮＫ１．１－、並びにＣＤ４＋、ＣＤ４－、ＣＤ８＋、及びＣＤ８細胞が挙げられる。ＮＫＴ細胞のＴＣＲは、ＭＨＣ Ｉ様分子ＣＤ Ｉｄによって提示される糖脂質抗原を認識するという点で独特である。ＮＫＴ細胞は、炎症又は免疫寛容のいずれかを促進するサイトカインを産生する能力により、保護効果又は有害効果のいずれかを有し得る。また、「ガンマデルタＴ細胞（γδＴ細胞）」も含まれ、これは、それらの表面に異なるＴＣＲを有するＴ細胞の小さなサブセットの特殊な集団を指し、ＴＣＲがα及びβ－ＴＣＲ鎖と表記される２つの糖タンパク質鎖から構成されるＴ細胞の大部分とは異なる。γδＴ細胞におけるＴＣＲは、γ鎖及びδ鎖から構成される。γδＴ細胞は、免疫監視及び免疫調節において役割を果たすことができ、ＩＬ－１７の重要な供給源であること、及び活発なＣＤ８＋細胞傷害性Ｔ細胞応答を誘導することが見出された。また、異常又は過剰な免疫応答を抑制し、免疫寛容において役割を果たすＴ細胞を指す「制御性Ｔ細胞」又は「Ｔｒｅｇ」も含まれる。Ｔｒｅｇは、典型的には、転写因子Ｆｏｘｐ３陽性ＣＤ４＋Ｔ細胞であり、また、ＩＬ－１０産生ＣＤ４＋Ｔ細胞である転写因子Ｆｏｘｐ３陰性制御性Ｔ細胞も含み得る。

本明細書で使用するとき、用語「抗原」とは、Ｔ細胞受容体が結合することができる任意の剤（例えば、タンパク質、ペプチド、多糖類、糖タンパク質、糖脂質、核酸、これらの一部、又はこれらの組み合わせ）分子を指す。抗原は、免疫応答を惹起することもできる。免疫応答の例は、限定するものではないが、抗体産生、若しくは特定の免疫学的コンピテント細胞の活性化、又はその両方を伴い得る。当業者は、抗原が決して「遺伝子」によってコードされている必要はないことを理解するであろう。抗原は、合成で作製されてもよく、又は生物学的試料に由来していてもよく、又はポリペプチド以外の巨大分子であってもよいことは容易に明らかである。このような生物学的試料としては、組織試料、腫瘍試料、細胞、又は他の生物学的成分、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、殺傷若しくは不活性化された全細胞若しくは溶解物を含む流体を挙げることができるが、これらに限定されない。

用語「抗体」とは、モノクローナル抗体、多重特異性抗体、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）、一本鎖抗体、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）断片、ジスルフィド連結Ｆｖ（ｓｄＦｖ）、イントラボディ、ミニボディ、ダイアボディ、及び抗イディオタイプ（抗Ｉｄ）抗体（例えば、抗原特異的ＴＣＲに対する抗Ｉｄ抗体を含む）、及び上記のいずれかのエピトープ結合部分を指す。「抗体」及び「抗体」という用語はまた、米国特許出願公開第２００７／０００４９０９号に記載のものなどの共有結合性ダイアボディ、及び米国特許出願公開第２００９／００６０９１０号に開示されているものなどのＩｇ－ＤＡＲＴＳを指す。ＴＣＲ結合分子として有用な抗体としては、免疫グロブリン分子及び免疫グロブリン分子の免疫学的に活性な断片、すなわち、抗原結合部位を含有する分子が挙げられる。免疫グロブリン分子は、任意の種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＡ、及びＩｇＹ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ１、ＩｇＭ２、ＩｇＡ１、及びＩｇＡ２）、又はサブクラスであってよい。

用語「宿主細胞」は、異種核酸を含有する任意の細胞を意味する。異種核酸は、ベクター（例えば、発現ベクター）であり得る。例えば、宿主細胞は、細胞による物質の産生、例えば、遺伝子、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ配列、タンパク質、又は酵素の細胞による発現のための、任意の方法で選択、改変、形質転換、成長、使用、又は操作される任意の生物由来の細胞であってよい。適切な宿主を決定することができる。例えば、宿主細胞は、ベクター骨格及び所望の結果に基づいて選択され得る。例として、プラスミド又はコスミドは、いくつかのタイプのベクターを複製するために原核生物宿主細胞に導入され得る。ＤＨ５α、ＪＭ１０９、及びＫＣＢなどであるが、これらに限定されない細菌細胞、ＳＵＲＥ（登録商標）コンピテント細胞、並びにＳＯＬＯＰＡＣＫ Ｇｏｌｄ細胞を、ベクター複製及び／又は発現のための宿主細胞として使用することができる。更に、大腸菌ＬＥ３９２などの細菌細胞を、ファージウイルスの宿主細胞として使用することができる。宿主細胞として使用され得る真核細胞には、酵母（例えば、ＹＰＨ４９９、ＹＰＨ５００及びＹＰＨ５０１）、昆虫及び哺乳動物が含まれるが、これらに限定されない。ベクターの複製及び／又は発現のための哺乳類真核宿主細胞の例としては、ＨｅＬａ、ＮＩＨ３Ｔ３、Ｊｕｒｋａｔ、２９３、ＣＯＳ、ＣＨＯ、Ｓａｏｓ、及びＰＣ１２が挙げられるが、これらに限定されない。

用語「発現する」及び「発現」は、遺伝子又はＤＮＡ配列の情報が生成されることを可能にするか又は生成させること、例えば、対応する遺伝子又はＤＮＡ配列の転写及び翻訳に関与する細胞機能を活性化することによってタンパク質を生成することを意味する。ＤＮＡ配列は、細胞内に又は細胞によって発現して、タンパク質などの「発現産物」を形成する。発現産物自体、例えば、得られたタンパク質は、細胞によって「発現された」と言うこともできる。発現産物は、細胞内、細胞外、又は膜貫通として特徴付けることができる。

「トランスフェクション」という用語は、組み換えＤＮＡ技術を使用して「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）核酸を細胞に導入することを意味する。「遺伝子改変」という用語は、宿主細胞が、導入された遺伝子又は配列を発現して、所望の物質、通常、導入された遺伝子又は配列によってコードされるタンパク質又は酵素を生成するように、「外来」（すなわち、外因性又は細胞外）遺伝子、ＤＮＡ又はＲＮＡ配列の宿主細胞への導入を意味する。導入された遺伝子又は配列はまた、「クローニングされた」又は「外来」遺伝子又は配列と呼ばれる場合もあり、開始、終止、プロモーター、シグナル、分泌、又は細胞の遺伝機構によって使用される他の配列などのキメラ抗原受容体をコードしているポリヌクレオチドに操作可能に連結した調節配列又は制御配列を含んでいてよい。遺伝子又は配列は、既知の機能を有さない非機能的配列を含んでいてよい。導入されたＤＮＡ又はＲＮＡを受け取って発現する宿主細胞は、「遺伝的に操作されている」。宿主細胞に導入されたＤＮＡ又はＲＮＡは、宿主細胞と同じ属若しくは種の細胞を含む任意の起源、又は異なる属若しくは種に由来し得る。

用語「形質導入」とは、ウイルスベクターを使用する外来核酸の細胞への導入を意味する。

用語「制御エレメント」は、核酸配列の発現のいくつかの態様を制御する任意のシス作用性遺伝要素を指す。いくつかの実施形態では、用語「プロモーター」は、本質的に、転写を開始するために必要な最小配列を含む。いくつかの実施形態では、用語「プロモーター」は、転写を開始させるための配列を含み、加えて、それぞれ一般的に「エンハンサーエレメント」及び「リプレッサーエレメント」と呼ばれる転写をアップレギュレート又はダウンレギュレートすることができる配列も含む。

本明細書で使用するとき、「操作可能であるように連結された」及び類似の語句は、核酸又はアミノ酸に関して使用される場合、それぞれ、互いに機能的な関係で配置された核酸配列又はアミノ酸配列の操作可能であるような連結を指す。例えば、操作可能であるように連結されたプロモーター、エンハンサーエレメント、オープンリーディングフレーム、５’及び３’ＵＴＲ、並びにターミネーター配列は、核酸分子（例えば、ＲＮＡ）の正確な産生をもたらす。いくつかの実施形態では、操作可能であるように連結された核酸エレメントは、オープンリーディングフレームの転写及び最終的にはポリペプチドの生成（すなわち、オープンリーディングフレームの発現）をもたらす。別の例として、操作可能であるように連結されたペプチドは、機能ドメインが互いに適切な距離で配置されて、各ドメインの意図された機能を付与するものを指す。

「増強する」又は「促進する」又は「増加する」又は「拡大する」又は「改善する」は、全般的に、ビヒクル又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より大きな生理学的応答を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす（すなわち、下流効果）、本明細書で企図される組成物の能力を指す。測定可能な生理学的応答は、特に当該技術分野及び本明細書の記載の理解から明らかなように、Ｔ細胞の拡大、活性化、エフェクタ機能、持続性の増加、及び／又はがん細胞死殺傷能力の増加を含み得る。特定の実施形態では、「増加した」又は「増強された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル又は対照組成物によって生じた応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００、１０００倍）（全ての整数及び間の小数点、かつ１超、例えば、１．５、１．６、１．７。１．８などを含む）の増加を含み得る。

「減少する」又は「より低い」又は「より少なくする」又は「低下させる」又は「弱める」は、一般に、ビヒクル又は対照分子／組成物のいずれかによって引き起こされる応答と比較して、より少ない生理学的応答（即ち、下流効果）を生じさせるか、誘発するか、又は引き起こす、本明細書で企図される組成物の能力を指す。特定の実施形態では、「減少する」又は「低減された」量は、「統計的に有意な」量であり得、ビヒクル、対照組成物によって生じた応答（参照応答）、又は特定の細胞系譜における応答の１．１、１．２、１．５、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、３０倍、又はそれ以上（例えば、５００、１０００倍）（全ての整数及び間の小数点、かつ１超、例えば、１．５、１．６、１．７。１．８などを含む）の減少を含み得る。

用量又は量に適用される「有効な」という用語は、それを必要とする被験体への投与時に所望の活性をもたらすのに十分な化合物又は医薬組成物の量を指す。活性成分の組み合わせを投与するとき、その組み合わせの有効量は、個々に投与された場合に有効であろう各成分の量を含んでいる場合もあり、含んでいない場合もあることに留意されたい。正確な必要量は、種、年齢、及び全身状態、治療される病態の重症度、用いられる具体的な薬物、投与の様式などに応じて、対象によって異なる。

本明細書に記載の組成物に関連して使用される「医薬的に許容される」という語句は、生理学的に許容可能であり、哺乳動物（例えば、ヒト）に投与されたときに通常は有害な反応を生じない分子実体及びそのような組成物の他の成分を指す。好ましくは、用語「医薬的に許容される」とは、哺乳類、より具体的にはヒトにおける使用について、連邦政府若しくは州政府の規制機関によって認可されているか、又は米国薬局方若しくは他の全般的に認められている薬局方に記載されていることを意味する。

用語「タンパク質」は、本明細書で使用するとき、全ての長さのタンパク質断片を含む天然及び合成のタンパク質、融合タンパク質、並びに糖タンパク質に加えて、全ての他の種類の修飾タンパク質（例えば、リン酸化、アセチル化、ミリストイル化、パルミトイル化、グリコシル化、酸化、ホルミル化、アミド化、ポリグルタミル化、ＡＤＰ－リボシル化、ペグ化、ビオチン化などから得られるタンパク質）を含むがこれに限定されない修飾タンパク質の全ての種類を包含する。

用語「核酸」、「ヌクレオチド」、及び「ポリヌクレオチド」は、別途明記しない限り、ＤＮＡ及びＲＮＡの両方を包含する。「核酸配列」又は「ヌクレオチド配列」とは、アミノ酸をコードしている核酸配列を意味し、これらの用語はまた、リンカーによってコードされている任意のアミノ酸を含む、クローニングのアーチファクトとして付加される任意のアミノ酸をコードしている部分を含む核酸配列を指す場合もある。

用語「担体」は、化合物が一緒に投与される希釈剤、補助剤、賦形剤、又はビヒクルを指す。このような医薬担体は、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの、石油、動物、植物、又は合成起源のものを含む、水及び油などの滅菌液体であってよい。水又は水溶液、生理食塩水、並びにデキストロース及びグリセリン水溶液が、特に注射溶液用の担体として好ましく用いられる。代替的に、担体は、バインダー（圧縮丸剤用）、流動促進剤、封入剤、風味剤、及び着色剤のうちの１つ以上を含むがこれらに限定されない固体剤形担体であってもよい。好適な医薬用担体の例は、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎによる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。

用語「約」又は「およそ」は、値の統計的に意味のある範囲内にあることを含む。このような範囲は、所与の値又は範囲の１桁以内、好ましくは５０％以内、より好ましくは２０％以内、更により好ましくは１０％以内、更により好ましくは５％以内であり得る。用語「約」又は「およそ」によって包含される許容可能な変動は、研究中の具体的なシステムに依存し、当業者によって容易に理解され得る。

「カリクレイン関連ペプチダーゼ２」、「ｈＫ２」、「ＫＬＫ２」、又は「ｋｌｋ２」とは、カリクレイン－２、顆粒状カリクレイン２、又はＨＫ２とも呼ばれる既知のタンパク質を指す。ｈＫ２は、プレプロタンパク質として生成され、タンパク質分解中に切断されて活性プロテアーゼを生成する。全てのｈＫ２アイソフォーム及び変異体が、「ｈＫ２」に包含される。様々なアイソフォームのアミノ酸配列は、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００５５４２．１、ＮＰ＿００１００２２３１．１、及びＮＰ＿００１２４３００９から検索可能である。配列番号４７における完全長ヒトｈＫ２のアミノ酸配列を示す。配列は、シグナルペプチド（残基１～１８）及びプロペプチド領域（残基１９～２４）を含む。

「ＫＬ２Ｂ４１３」という用語は、ＣＡＲを含む、ＫＬ２Ｂ４１３ ＶＨ（配列番号４１）及びＫＬ２Ｂ４１３ ＶＬ（配列番号４２）に由来する可変領域を含有する、任意の抗体、その抗原結合部分、又は任意の他のタンパク質を指す。特定の実施形態では、本開示の抗イディオタイプ抗体は、配列番号４１に示されるＶＨドメイン及び／又は配列番号４２に示されるＶＬドメインを含むタンパク質に特異的に結合する。特定の実施形態では、本開示の抗イディオタイプ抗体は、配列番号４１に示されるＶＨドメインの３つのＣＤＲ及び配列番号４２に示されるＶＬドメインの３つのＣＤＲを含むタンパク質に特異的に結合する。

「ＫＬ２Ｂ５１３」という用語は、ＶＬ－ＶＨ方向の可変領域を有するＫＬ２Ｂ４１３由来のｓｃＦｖ融合タンパク質を指す。ＫＬ２Ｂ５１３は、ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ－ｓｃＦｖと互換的に呼ばれる場合がある。

「ＫＬ２Ｂ６１０」という用語は、ＶＨ－ＶＬ方向の可変領域を有するＫＬ２Ｂ４１３由来のｓｃＦｖ融合タンパク質を指す。ＫＬ２Ｂ６１０は、ＫＬ２Ｂ４１３－ＨＬ－ｓｃＦｖと互換的に呼ばれる場合がある。

「Ａ００２Ｂ３９」という用語は、ＫＬ２Ｂ４１３を標的とするヒトＶＨ／ＶＬ及びマウスＩｇＧ２ａ／ｋを有するキメラｍＡｂを指す。Ａ００２Ｂ３９は、Ａ００２Ｍ３９と互換的に呼ばれる場合がある。

本明細書で使用される用語は、あくまで特定の実施形態を説明する目的のものに過ぎず、限定を目的としたものではない。本明細書で使用される場合、文脈により別途明確に示されない限り、冠詞「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、複数の指示物を含むものと理解されたい。

本開示は、本明細書に記載の抗体、核酸、ポリペプチド、及びタンパク質の変異体、例えば機能的変異体を更に提供する。「変異体」は、例えば、置換、挿入、又は欠失といった１つ以上の改変によって参照ポリペプチド又は参照ポリヌクレオチドと異なるポリペプチド又はポリヌクレオチドを指す。本明細書で使用される「機能的変異体」という用語は、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質と実質的又は有意な配列同一性又は類似性を有する抗体、ポリペプチド、又はタンパク質を指し、この機能的変異体は、変異体である抗体、ポリペプチド、又はタンパク質の生物活性を保持する。機能的変異体は、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質と同様の程度、同程度、又はより高い程度で標的細胞を認識する能力を保持する、例えば、本明細書に記載の抗体、ポリペプチド、又はタンパク質（親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質）の変異体を包含する。親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質に関して、機能的変異体は、例えば、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質に対して、アミノ酸配列が少なくとも約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、約９１％、約９２％、約９３％、約９４％、約９５％、約９６％、約９７％、約９８％、約９９％、又はそれ以上同一であり得る。

本明細書では、ポリペプチドの構造は、列挙された参照配列（所与の配列番号を有する）との％配列同一性に基づいて定義された場所にある。これに関連して、２つのアミノ酸配列間の％配列同一性は、最適な方法でアラインメントされたこれらの２つの配列を比較することによって判定することができ、比較されるアミノ酸配列は、これらの２つの配列間における最適なアラインメントのために参照配列に対して付加又は欠失を含み得る。同一性の百分率は、２つの配列間のアミノ酸残基が同一である同一位置の数を判定し、この同一位置の数を比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、得られた結果に１００を乗算し、これら２つの配列間における同一性の百分率を得るようにすることにより計算される。典型的には、比較ウィンドウは、比較される配列の全長に対応する。例えば、ＢＬＡＳＴプログラム、「ＢＬＡＳＴ ２配列」（Ｔａｔｕｓｏｖａ ｅｔ ａｌ，「Ｂｌａｓｔ ２ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ－ａ ｎｅｗ ｔｏｏｌ ｆｏｒ ｃｏｍｐａｒｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ ａｎｄ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ」，ＦＥＭＳ Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ Ｌｅｔｔ．１７４：２４７－２５０）を使用することが可能であり、サイトｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｇｏｒｆ／ｂｌ２．ｈｔｍｌで入手可能であり、使用されるパラメータは、デフォルト（具体的には、パラメータ「オープンギャップペナルティ」：５、及び「エクステンションギャップペナルティ」：２；選択されたマトリックスは、例えば、プログラムによって提案されるマトリックス「ＢＬＯＳＵＭ ６２」）で与えられているパラメータであり、比較される２つの配列間における同一性の百分率は、プログラムによって直接計算される。クエリ配列の参照配列に対する配列同一性の判定は、当業者の能力の範囲内であり、ＢＬＡＳＴ（商標）などの市販の解析ソフトウェアを使用して実行することができる。

機能的変異体は、例えば、少なくとも１つの保存的アミノ酸置換を有する親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。別の実施形態では、機能的変異体は、少なくとも１つの非保存的アミノ酸置換を有する親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質のアミノ酸配列を含み得る。この場合、非保存的アミノ酸置換は、機能的変異体の生物活性を抑制又は阻害することができない。非保存的アミノ酸置換により、機能的変異体の生物活性を向上させることができ、その結果、機能的変異体の生物活性は、親抗体、ポリペプチド、又はタンパク質と比較して増強する。

本発明の抗体のアミノ酸置換は、保存的アミノ酸置換であり得る。保存的アミノ酸置換は、当該技術分野において既知であり、特定の物理的及び／又は化学的特性を有する１つのアミノ酸を、同じ又は類似の化学的又は物理的特性を有する別のアミノ酸と交換するアミノ酸置換を含む。例えば、保存的アミノ酸置換は、別の酸性アミノ酸で置換された酸性アミノ酸（例えば、Ａｓｐ又はＧｌｕ）、非極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された非極性側鎖を有するアミノ酸（例えば、Ａｌａ、Ｇｌｙ、Ｖａｌ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、Ｍｅｔ、Ｐｈｅ、Ｐｒｏ、Ｔｒｐ、Ｖａｌなど）、別の塩基性アミノ酸で置換された塩基性アミノ酸（Ｌｙｓ、Ａｒｇなど）、極性側鎖を有する別のアミノ酸で置換された極性側鎖を有するアミノ酸（Ａｓｎ、Ｃｙｓ、Ｇｌｎ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ｔｙｒなど）等であり得る。

本発明の実施形態の抗体、ポリペプチド、及びタンパク質（本発明の機能的部分及び機能的変異体を含む）は、１つ以上の天然に存在するアミノ酸の代わりに合成アミノ酸を含むことができる。かかる合成アミノ酸は、当該技術分野において既知であり、例としては、アミノシクロヘキサンカルボン酸、ノルロイシン、α－アミノｎ－デカン酸、ホモセリン、Ｓ－アセチルアミノメチル－システイン、トランス－３－及びトランス－４－ヒドロキシプロリン、４－アミノフェニルアラニン、４－ニトロフェニルアラニン、α－（２－アミノ－２－ノルボルナン）－カルボン酸、α，γ－ジアミノ酪酸、α，β－ジアミノプロピオン酸、ホモフェニルアラニン、４－クロロフェニルアラニン、４－カルボキシフェニルアラニン、β－フェニルセリンβ－ヒドロキシフェニルアラニン、フェニルグリシン、α－ナフチルアラニン、シクロヘキシルアラニン、シクロヘキシルグリシン、Ｎ’－ベンジル－Ｎ’－メチル－リジン、Ｎ’，Ｎ’－ジベンジル－リジン、６－ヒドロキシリジン、オルニチン、α－アミノシクロペンタンカルボン酸、α－アミノシクロヘキサンカルボン酸、α－アミノシクロヘプタンカルボン酸、インドリン－２－カルボン酸、１，２，３，４－テトラヒドロイソキノリン－３－カルボン酸、アミノマロン酸、アミノマロン酸モノアミド、及びα－ｔｅｒｔ－ブチルグリシンが挙げられる。

本発明の実施形態の抗体、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及び機能的変異体を含む）は、翻訳後修飾を受けることができる。これらは、グリコシル化、エステル化、Ｎ－アシル化、アミド化、カルボキシル化、リン酸化、エステル化、例えば、ジスルフィド架橋を介して環化することができ、又は酸付加塩に変換することができる。いくつかの実施形態では、これらは、二量体化若しくはポリマー化、又はコンジュゲートされている。

本発明の実施形態の抗体、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（機能的部分及びその機能的変異体を含む）は、当該技術分野において既知の方法によって得ることができる。ポリペプチド及びタンパク質をｄｅ ｎｏｖｏ合成する好適な方法は、Ｃｈａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｆｍｏｃ Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｐｅｐｔｉｄｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２０００、Ｐｅｐｔｉｄｅ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｄｒｕｇ Ａｎａｌｙｓｉｓ，ｅｄ．Ｒｅｉｄ，Ｒ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，２０００、及びＥｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ，ｅｄ．Ｗｅｓｔｗｏｏｄ ｅｔ ａｌ．，Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｕｎｉｔｅｄ Ｋｉｎｇｄｏｍ，２００１などの参考文献に記載されている。また、ポリペプチド及びタンパク質は、標準的な組み換え方法を使用して本明細書に記載の核酸を使用して、組み換えにより産生され得る。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ ｅｄ．，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．２００１、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ａｎｄ Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ，ＮＹ，１９９４を参照されたい。更に、本発明の抗体、ポリペプチド、及びタンパク質（機能的部分及びその機能的変異体を含む）の一部は、植物、細菌、昆虫、哺乳動物などの供給源から単離及び／又は精製することができる。単離及び精製の方法は、当該技術分野において既知である。代替的に、本明細書に記載の抗体、ポリペプチド、及び／又はタンパク質（機能的部分及びその機能的変異体を含む）は、商業的に合成することができる。この点において、抗体、ポリペプチド、及びタンパク質は、合成、組み換え、単離、及び／又は精製することができる。

本開示の方法及び使用
本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３含有タンパク質に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分、例えば、抗体又はその抗原結合部分を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、特異的結合を促進するためにＫＬ２Ｂ４１３抗体の部分に相補的なアミノ酸配列を含み得る。本開示はまた、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分をコードする核酸、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を産生する方法、抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を使用してＫＬ２Ｂ４１３を検出する方法、並びに抗イディオタイプ抗体及びその抗原結合部分を含むキットを提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、他の試薬を含むキットに含めることができ、所与の生体試料が、例えばＣＡＲ中のＴ細胞の表面に発現するＫＬ２Ｂ４１３抗体又はその断片を含むかどうかを判定するために使用され得る。

ＫＬ２Ｂ４１３の任意の機能的部分に結合する能力について抗体を試験する方法は、当該技術分野において既知であり、任意の抗体－抗原結合アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ（radioimmunoassay、ＲＩＡ）、ウエスタンブロット、酵素結合免疫吸着アッセイ（enzyme-linked immunosorbent assay、ＥＬＩＳＡ）、免疫沈降、及び競合阻害アッセイなどが挙げられる。

抗体を作製する好適な方法は、当該技術分野において既知である。例えば、標準的なハイブリドーマ法は、例えば、Ｋｏｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５，５１１－５１９（１９７６），Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ（ｅｄｓ．），Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，ＣＳＨ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）、及びＣ．Ａ．Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（ｅｄｓ．），Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（２００１））に記載されている。代替的に、他の方法、例えば、ＥＢＶ－ハイブリドーマ法（Ｈａｓｋａｒｄ ａｎｄ Ａｒｃｈｅｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ，７４（２），３６１－６７（１９８４）、及びＲｏｄｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．，１２１，１４０－６７（１９８６））、及びバクテリオファージベクター発現系（例えば、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４６，１２７５－８１（１９８９）を参照されたい）などが当該技術分野において既知である。更に、非ヒト動物において抗体を産生する方法は、例えば、米国特許第５，５４５，８０６号、同第５，５６９，８２５号及び同第５，７１４，３５２号、並びに米国特許出願公開第２００２／０１９７２６６（Ａ１）号に記載されている）。

ファージディスプレイを使用して、抗体を生成することもできる。これに関して、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリは、標準的な分子生物学及び組み換えＤＮＡ技術を使用して生成することができる（例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．（上記）、及びＡｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．（上記）を参照されたい）。所望の特異性を有する可変領域をコードするファージは、所望の抗原への特異的結合のために選択され、選択された可変ドメインを含む完全又は部分的な抗体が再構成される。再構成された抗体をコードする核酸配列は、ハイブリドーマ産生に使用される骨髄腫細胞などの好適な細胞株に導入され、その結果、モノクローナル抗体の特性を有する抗体が細胞によって分泌される（例えば、Ｊａｎｅｗａｙ ｅｔ ａｌ．（上記）、Ｈｕｓｅ ｅｔ ａｌ．（上記）、及び米国特許第６，２６５，１５０号を参照されたい）。

一態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３を含む標的抗体又はＣＡＲに特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＶＨ及びＶＬを含む断片抗原結合領域（Ｆａｂ）の１つ以上のドメインに特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。

他の実施形態では、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３の検出において使用するためのものであり、検出が、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む。例えば、抗イディオタイプ抗体は、組織試料、腫瘍試料、細胞又は他の生物学的成分を含む液体、生物、タンパク質／抗原のサブユニット、死滅又は不活性化した全細胞又は溶解物を含む、任意の生体試料に添加することができる。抗イディオタイプ抗体は、緩衝剤、安定剤、及び／又はポリマーを含むがこれらに限定されない、医薬的に許容される試薬を含む溶液に含有され得る。抗イディオタイプ抗体は、生体試料とのピペッティング及び／又は混合によって接触させることができる。次いで、抗イディオタイプ抗体は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３含有タンパク質、例えば、抗体又はその抗原結合部分に特異的に結合し得る。一例として、抗イディオタイプ抗体がＫＬ２Ｂ４１３に結合したかどうかは、結合していない抗イディオタイプ抗体を洗浄し、複合体化した抗イディオタイプ抗体のみを残すことによって判断することができる。この例を続けると、抗イディオタイプ抗体は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３の量に比例するシグナルを与えるように照射され得るフルオロフォアを含み得る。ＫＬ２Ｂ４１３に対する抗イディオタイプ抗体の結合複合体の検出は、以下に更に記載される。

別の態様では、本開示は、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。６つのＣＤＲは、任意の既知の方法に従って選択され得る。Ｋａｂａｔ法、ＡｂＭ法、Ｃｈｏｔｈｉａ法、及び接触法に従って決定されたＶＨ及びＶＬ ＣＤＲを表３に示す。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号５のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号６のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号１９のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３３のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

特定の実施形態では、本開示は、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２６のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号３０のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２、及び配列番号３４のアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を提供する。

いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含み、ＶＬドメインは、配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。

いくつかの実施形態では、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号４５のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４６のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む。いくつかの他の実施形態では、抗ＫＬＫ２抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む。

いくつかの実施形態では、抗原結合部分は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される。いくつかの実施形態では、抗体は、モノクローナル抗体である。いくつかの実施形態では、抗体は、キメラ抗体である。いくつかの実施形態では、キメラ抗体は、マウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む。特定の実施形態では、マウスＩｇＧ２ａフレームワークは、配列ＭＡＷＶＷＴＬＬＦＬＭＡＡＡＱＳＩＱＡ（配列番号４８）を含む混合ＦＶＢ／Ｎ、Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ由来のマウスＩｇ重鎖シグナルペプチドを含み得る。

いくつかの他の実施形態では、抗体は、完全ヒト抗体である。例えば、完全ヒト抗体は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、又はＩｇＤであり得る。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的であり、ＫＬ２Ｂ４１３は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある。例えば、ＫＬ２Ｂ４１３をコードする核酸をｉｎ ｖｉｔｒｏでＴ細胞に導入することができ、その後、その少なくとも一部がＣＡＲの細胞外部分で発現される。次いで、抗イディオタイプ抗体は、ＣＡＲの細胞外部分に特異的に結合し得る。いくつかの実施形態では、ＫＬ２Ｂ４１３はｓｃＦｖであり、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分は、ＣＡＲのｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する。いくつかの実施形態では、ＫＬ２Ｂ４１３は、ＫＬＫ２に特異的に結合する。いくつかの実施形態では、抗体又は抗原結合部分は、他のＫＬＫ２抗体又は他のＫＬＫ２結合ＣＡＲと交差反応しない。例えば、ＫＬ２Ｂ４１３がＣＡＲの細胞外部分に発現しているかどうかを判定するためのアッセイにおいて偽陽性を防ぐために、抗イディオタイプ抗体は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的であり得、その標的ＫＬＫ２又はＫＬ２Ｂ４１３ではない他のＫＬＫ２標的化リガンドへの認識可能な結合を有さない場合がある。いくつかの実施形態では、ＣＡＲは、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する。

いくつかの実施形態では、本開示は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸を提供する。例えば、核酸は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらに対する任意の化学修飾（例えば、ヌクレオシド修飾）であり得る。

別の態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、配列番号３８のヌクレオチド配列、配列番号４０のヌクレオチド配列、又はその両方を含む、核酸を提供する。別の態様では、本開示は、核酸配列を含むベクターを提供する。例えば、ベクターは、自己複製核酸構造であってもよく、又はそれが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれてもよい。いくつかの実施形態では、ベクターは、発現ベクターである。別の態様では、本開示は、ベクターを含む宿主細胞を提供する。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、哺乳動物細胞である。

別の態様では、本開示は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、当該抗体又は当該抗原結合部分を発現させる条件下で、抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む宿主細胞を培養することと、培養物から当該抗体又は当該抗原結合部分を単離することとを含む、方法を提供する。例えば、抗イディオタイプ抗体は、深タンク撹拌発酵槽、灌流タンクシステム、エアリフト反応器、及び連続培養システムでの均質な懸濁培養によって産生され得る。抗イディオタイプ抗体は、プロテインＡ又はＧを使用したアフィニティ分離、サイズ排除クロマトグラフィ、及び電荷分離を含む物理的又は化学的分離手順によって、反応混合物及び／又は増殖混合物から単離することができる。いくつかの実施形態では、宿主細胞は、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分をコードする核酸を含むベクターをコードする。

別の態様において、本開示は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む。例えば、抗イディオタイプ抗体は、生体試料において発現されたＫＬ２Ｂ４１３に結合し得る。結合した複合体は、化学的検出方法及び物理的検出方法の両方を含む任意の検出方法によって検出することができる。例えば、検出方法は、生体試料中の目的の抗体の単なる存在を同定するために使用され得るか、又は試料中の目的の抗体が検出可能なレベルで存在するかどうかを試験するために使用され得るか、又は試料中の目的の抗体の量を定量し、更に異なる試料からの抗体レベルを比較するために使用され得る。例えば、検出方法は、免疫沈降、免疫細胞化学、免疫ブロッティング、及び免疫吸着アッセイのうちの１つ以上であり得る。具体例として、免疫吸着アッセイは、生体試料が洗浄される結合抗イディオタイプ抗体又はその断片を含む、ＥＬＩＳＡ又はＥＬＩＳＡ型アッセイであり得る。

別の態様では、本開示は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによってＣＡＲの発現を検出することとを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、抗体は、検出可能な標識を含む。いくつかの実施形態では、本方法は、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む。例えば、検出可能な標識は、抗イディオタイプ抗体と一体化するか、抗イディオタイプ抗体と結合するか、又はそうでなければ抗イディオタイプ抗体と複合体を形成し、固有の同定可能なシグナルを発するか、若しくはそうでなければシグナルを提供する任意の化学タグ又は成分であり得る。例えば、検出可能な標識は、同位体マーカー、比色バイオセンサー、フォトクロミック化合物、蛍光標識、蛍光発生標識、又は電気化学センサーであり得る。具体例として、蛍光標識は、緑色蛍光タンパク質、黄色蛍光タンパク質、青色蛍光タンパク質、フルオレセイン、ローダミン、クマリン、シアニン、フィコエリスリン、及びそれらの誘導体であり得る。

いくつかの実施形態では、生体試料は、血液、血清又は尿である。例えば、生体試料は、全血、血清、血漿、尿、糞便、脳脊髄液、腹水等であり得る。いくつかの実施形態では、生体試料は、この解析のために所与の時間に採取された生体材料などの新鮮な生体材料である。生体試料はまた、この目的又は他の目的のために、患者の治療中の別の時点で採取された生体材料、又はアーカイブされた患者材料を使用した生体材料であり得る。生体試料は、新たに得られたものでも、前もって得られていたものでもよく、前もって得られていたものは、使用前に保存されていてもよい（例えば、室温、冷蔵、又は凍結）。

いくつかの態様では、本開示は、生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するためのキットであって、（ａ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、キットを提供する。例えば、キットは、固体粉末、凍結乾燥粉末、液体溶液又は混合して溶液を形成する液体成分として、又は固体支持体に結合された抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を含んでもよい。キットは、生体試料のアッセイにおいてキットの使用を容易にするために必要な、安定剤、緩衝剤、及び他の医薬的に許容される賦形剤を含む、追加の試薬を含んでもよい。キットはまた、アッセイの実施方法について使用者に指示する説明書を含み得る。

他の態様では、本開示は、試料からＫＬ２Ｂ４１３を精製する方法であって、（ａ）ＫＬ２Ｂ４１３を含む生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を本開示の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）ＫＬ２Ｂ４１３を含有するＣＡＲ又は他のタンパク質を含む抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＫＬ２Ｂ４１３を精製することとを含む、方法を提供する。例えば、物理的及び化学的方法を含む任意の分離方法を使用して、抗イディオタイプ抗体を捕捉することができる。具体的には、イオン交換クロマトグラフィ、ゲル濾過クロマトグラフィ、限外濾過、電気泳動、及び抗イディオタイプ抗体の特定のエピトープに特異的な抗体を用いた免疫親和性精製を含む、タンパク質を精製するための当技術分野で公知の技術を用いて、細胞培養培地、宿主細胞、又はその両方からＫＬ２Ｂ４１３を捕捉及び単離することができる。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体は、その精製を容易にするドメインを含有する融合タンパク質である。特定の実施形態では、精製されたＫＬ２Ｂ４１３組成物は、ＫＬ２Ｂ４１３を含有しないタンパク質から実質的に単離される。いくつかの実施形態では、精製されたＫＬ２Ｂ４１３組成物は、１００％純粋、９９％純粋、９８％純粋、９７％純粋、９６％純粋、９５％純粋、又は９０％純粋又はそれ以上のものである。

他の態様では、本開示は、細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分は、ＫＬ２Ｂ４１３に特異的である。

実施形態
本発明の特定の非限定的な実施形態は、以下の番号付けされた項に記載されている。
１．ＫＬ２Ｂ４１３を含む標的抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
２．標的抗体又はその抗原結合部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む、項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
３．ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２及び配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
４．ＶＨドメインが、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
５．配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
６．ＶＨドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を有し、ＶＬドメインが、配列番号４６のアミノ酸配列を有する、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
７．配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
８．抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
９．抗体が、モノクローナル抗体である、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１０．抗体が、キメラ抗体である、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１１．抗体が、マウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む、項１０に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１２．抗体が、完全ヒト抗体である、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
１３．項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸。
１４．ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の重鎖、軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、
ａ）配列番号３８のヌクレオチド配列、
ｂ）配列番号４０のヌクレオチド配列、
ｃ）ａ）及びｂ）の両方、を含む、核酸。
１５．項１４に記載の核酸を含む、ベクター。
１６．ベクターが、発現ベクターである、項１５に記載のベクター。
１７．項１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
１８．細胞が、哺乳動物細胞である、項１７に記載の宿主細胞。
１９．ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、当該抗体又は当該抗原結合部分を発現させる条件下で、抗体又は抗原結合部分の重鎖及び軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、項１７に記載の宿主細胞を培養することと、培養物から当該抗体又は当該抗原結合部分を単離することとを含む、方法。
２０．生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、方法。
２１．生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出し、それによってＣＡＲの発現を検出することとを含む、方法。
２２．抗体が、検出可能な標識を含む、項２０に記載の方法。
２３．抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出する前に、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む、項２０に記載の方法。
２４．生体試料が、血液、血清又は尿である、項２０に記載の方法。
２５．ＫＬ２Ｂ４１３が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２６．ＫＬ２Ｂ４１３がｓｃＦｖであり、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分がＣＡＲのｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する、項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２７．ＫＬ２Ｂ４１３が、ＫＬＫ２に結合する、項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２８．抗体又は抗原結合部分が、他のＫＬＫ２抗体又は他のＫＬＫ２結合ＣＡＲと交差反応しない、項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
２９．ＣＡＲが、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
３０．生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するためのキットであって、（ａ）項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、キット。
３１．生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３の検出において使用するための、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分であって、検出が、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を検出することとを含む、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
３２．試料からＫＬ２Ｂ４１３を精製する方法であって、（ａ）ＫＬ２Ｂ４１３を含む生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＫＬ２Ｂ４１３を精製することとを含む、方法。
３３．細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生体試料を準備することと、（ｂ）生体試料を、項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む、方法。

実施例１：ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０結合Ｆａｂの決定
Ｓｈｉ ｅｔ ａｌ．，Ｊ Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ ３９７：３８５－９６，２０１０、国際公開第２００９／０８５４６２号、米国特許出願公開第２０１０／００２１４７７号）に記載されているように、ＫＬ２Ｂ４１３由来ｓｃＦｖ融合タンパク質結合Ｆａｂを、２セットのｄｅ ｎｏｖｏ Ｆａｂ－ｐＩＸファージディスプレイライブラリから選択した。２つのＫＬ２Ｂ４１３由来のｓｃＦｖ融合タンパク質、すなわち、ＫＬ２Ｂ５１３（ＶＬ－ＶＨ）及びＫＬ２Ｂ６１０（ＶＨ－ＶＬ）が存在し、ｓｃＦｖ内のＶＨ及びＶＬの方向が異なる。

精製組み換え抗原を使用したファージ選択では、ビオチン化ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０を「ベイト」として使用して、ファージバインダーを捕捉及び固定した。数回の選択ラウンド後、精製抗原を用いるポリクローナルファージＥＬＩＳＡを実施して、個々のパニング実験の特異的濃縮（enrichment）を検出した。ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に対するバインダーの濃縮を示したこれらのパニング実験から収集されたファージを、一次スクリーニングのために大腸菌で発現させた。濃縮ＦａｂライブラリからモノクローナルＦａｂ溶解物を調製し、ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０への結合についてＥＬＩＳＡでスクリーニングしたが、同様の陰性対照ｓｃＦｖ融合タンパク質ＧＣ５Ｂ７３４又はＧＣＤＢ３３２への結合についてはスクリーニングしなかった。選択されたＦａｂを配列決定して、固有のＦａｂクローンを同定し、それらのＶ領域遺伝子を単離した。固有のＦａｂ Ｖ領域を哺乳動物発現ベクターにクローニングして、マウスＩｇＧ２ａ／マウスカッパ定常領域を有するキメラｍＡｂを発現させた。ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０ ｓｃＦｖ融合タンパク質中のｓｃＦｖに対応するＳｕｐＴ１細胞上に発現されたＫＬ２Ｂ４１３由来のｓｃＦｖへの特異的結合についてキメラｍＡｂを評価し、ＳＰＲを用いて結合動態を測定した。

ファージパニング
個別のＶ３．０及びＶ５．０ ｄｅ ｎｏｖｏ Ｆａｂファージライブラリを使用した６つの個別のパニング実験を、標準プロトコルに従ってビオチン化ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に対して行った（Ｃｈｅａｄｌｅ，Ｅ．Ｊ．ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ．９０７，６４５－６６６（２０１２）。簡単に説明すると、ファージライブラリと常磁性ストレプトアビジン（ＳＡ）ビーズを、５０％Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅカタログ番号２１７０）／５０％１×ＴＢＳＴ（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｔ０３１０）で１時間ブロッキングした。ライブラリをＳＡビーズに添加して、ビーズに非特異的に結合するクローンを吸着させた。ＳＡビーズを廃棄し、１００ｎＭのＧＰ５Ｂ３０５の存在下でビオチン化ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に、予め吸着したライブラリを加えた。ＳＡビーズを添加してビーズ／抗原／ファージ複合体を形成し、１×ＴＢＳＴで洗浄することによりバインダーを回収した。最後の洗浄後、対数期ＴＧ１大腸菌細胞（ＯＤ６００ｎｍ＝０．４～０．６）の感染によりファージをレスキューした。ファージ感染したＴＧ１細胞を、７５μｇ／ｍＬカルベニシリンと１％グルコースを含有する１５０ｍｍ ＬＢ／寒天プレート３枚に広げ、３７℃で一晩培養した。ファージを生成し、追加のパニングに供した。選択圧を高めるために、その後のラウンドごとに室温で抗原濃度を下げた：Ｒ１ １００ｎＭ、１時間；Ｒ２ ５０ｎＭ １時間；Ｒ３ １０ｎＭ １時間、Ｒ４ ５ｎＭ １時間とした。

ポリクローナルファージＥＬＩＳＡ
ポリクローナルファージＥＬＩＳＡによる各パニング実験から、バインダーの濃縮を求めた。簡単に説明すると、１×ＴＢＳ（Ｔｅｋｎｏｖａカタログ番号Ｔ９５３０）で希釈した２０ｎＭの非ビオチン化ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０を１００μＬ、ＮＡコーティングプレート（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号１５２１７）に捕捉した。３７℃で１時間インキュベーションした後、３００μＬの１×ＴＢＳＴで３回プレートを洗浄した。３００μＬのブロッキング緩衝液（５０％Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ／５０％１×ＴＢＳＴ）をプレートの各ウェルに加え、室温で１時間インキュベートした。ブロッキング後、３００μＬの１×ＴＢＳＴで３回プレートを洗浄した。アッセイ緩衝液、１０％Ｃｈｅｍｉｂｌｏｃｋｅｒ／９０％ＴＢＳＴで１／１００に希釈した各パニングラウンドからのポリクローナルファージアウトプット１００μＬを、ＥＬＩＳＡプレートに加え、室温で１時間インキュベートして、ファージ粒子上に提示されたＦａｂを固定化ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に結合させた。インキュベーション後、１×ＴＢＳＴで３回プレートを洗浄した。アッセイ緩衝液で１：２５００に希釈した１００μＬのＨＲＰコンジュゲート抗Ｍ１３（ｐＶＩＩＩ）抗体（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅカタログ番号２７９４２１０１）をプレートに加え、室温でインキュベートした。１時間のインキュベーション後、３００μＬの１×ＴＢＳＴで６回プレートを洗浄した。１００μＬの調製したＢＭ化学発光ＥＬＩＳＡ基質（Ｒｏｃｈｅカタログ番号１１５８２９５０００１）をプレートに添加した。化学発光又は相対光単位（ＲＬＵ）をＥｎｖｉｓｉｏｎプレートリーダーによって測定した。

図１は、ポリクローナルファージＥＬＩＳＡの結果を示す。１２回のパニング実験からのラウンド１～ラウンド４のパニングアウトプットを、ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０、及び陰性対照ＧＣＤＢ３３２への結合において、ＮＡコーティングプレート上でスクリーニングした。特異的濃縮を伴うパニングアウトプットを、モノクローナルＦａｂ産生のために選択した。Ａ００２Ｂ３９は、ＡＰＤ３１６ＸＰ＿１９パニング実験に由来した。

Ｆａｂ産生
プラスミドＤＮＡを、ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に対するバインダーの濃縮を示すために同定されたファージパニング実験の特定のラウンドのグリセロールストックから単離及び精製し、ＴＧ－１大腸菌細胞に形質転換し、ＬＢ／寒天プレート上で一晩培養させた。一晩の培養物を、（ｉ）コロニーＰＣＲ及びＶ領域の配列決定、並びに（ｉｉ）Ｆａｂ産生用の開始培養に使用した。Ｆａｂ産生のために、一晩の培養物を新しい培地で１０～１００倍希釈し、３７℃にて５～６時間増殖させた。Ｆａｂ産生は、ＩＰＴＧを含有する新鮮な培地を添加することにより誘発し、培養物を３０℃にて一晩増殖させた。培養物をスピンダウンし、細菌ペレットをＢｕｇＢｕｓｔｅｒ（商標）（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて溶解し、可溶性Ｆａｂタンパク質を放出させた。細胞溶解物をスピンダウンし、上清をＦａｂ ＥＬＩＳＡに使用した。

一次スクリーニング
ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に対するバインダーの濃縮を示したパニング実験から収集されたファージを、一次スクリーニングのために大腸菌で発現させた。ＭＳＤ ３８４ウェルストレプトアビジンプレート（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ ＃Ｌ２１ＳＡ－５）を、５０μＬ／ウェルのＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ Ｔ２０（ＴＢＳ）ブロッキング緩衝液（Ｔｈｅｒｍｏ ＃３７５３６）で室温で３０分間ブロッキングし、その後吸引した。２．５ｎＭのビオチン化ＳｃＦｖ－Ｆｃ融合抗原、標的抗原ＫＬ２Ｂ５１３若しくはＫＬ２Ｂ６１０、又はカウンタースクリーニング試薬ＧＣＤＢ７３４を、ブロッキングした３８４ウェルＭＳＤプレートに加え、振盪機上で室温で３０分間インキュベートした。プレートを、Ｔｗｅｅｎ洗剤を含む１×リン酸緩衝生理食塩水（「１×ＰＢＳＴ」）で８０μＬ／ウェルで２回洗浄し、９６ウェルプレートにおける大腸菌発現からの粗Ｆａｂ溶解物を、３８４ウェルアッセイプレートに二重にスタンプし、振盪機上で室温で１時間インキュベートした。アッセイプレートを８０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳＴで１回洗浄し、次に６ｎＭのＳＵＬＦＯ－ＴＡＧ抗ヒト／ＮＨＰカッパ抗体（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ ＃Ｄ２０ＴＦ－６）を２０μＬ／ウェルで加え、プレートを振盪機上で室温で１時間インキュベートした。プレートを８０μＬ／ウェルの１×ＰＢＳＴで１回洗浄し、３５μＬ／ウェルの１×ＭＳＤ Ｒｅａｄ Ｂｕｆｆｅｒ Ｔ（Ｍｅｓｏ Ｓｃａｌｅ ＃Ｒ９２ＴＣ－１）を各ウェルに加え、プレートをＭＳＤ Ｓｅｃｔｏｒ Ｓ６００プレートリーダーで解析した。全ての液体処理をＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｒａｖｏシステムで行い、３８４ウェルプレートの洗浄をＢｉｏＴｅｋ ４０５ Ｓｅｌｅｃｔプレート洗浄機で行った。

図２は、一次スクリーニングの結果を示す。ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０への結合について、ＭＳＤプレート上でモノクローナルＦａｂをスクリーニングした。ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０標的結合アッセイで平均バックグラウンドシグナルに標準偏差の３倍を加えたものより大きいシグナルを有し、ＧＣＤＢ７３４カウンター試薬結合アッセイで平均バックグラウンドシグナルに標準偏差の３倍を加えたものより小さいシグナルを有するクローンを、配列決定のために選択した。星印によって同定されているクローンは、Ａ００２Ｂ３９のＶＨ及びＶＬの親クローンである。

実施例２：ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ／ＨＬ－ｓｃＦｖ（Ａ００２Ｂ３９）に対するモノクローナル抗体の作製
Ｆａｂ選択
一次スクリーニングから選択されたＦａｂを配列決定して、Ｖ領域配列を決定し、固有のクローンを同定した。固有のＦａｂ Ｖ領域を哺乳動物発現ベクターにクローニングして、マウスＩｇＧ２ａ／マウスカッパ定常領域を有するキメラｍＡｂとして発現させた。

Ａ００２Ｂ３９の可変領域を、可溶性ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合タンパク質ＫＬ２Ｂ５１３又はＫＬ２Ｂ６１０に対するヒトＦａｂ－ｐＩＸ ｄｅ ｎｏｖｏライブラリを用いたファージディスプレイによって同定した。これらのＶ領域は、いかなる親和性成熟も受けなかった。ＤＮＡ配列は、コドン最適化なしでｄｅ ｎｏｖｏ Ｆａｂライブラリから取得された。

Ｖ_Ｈ及びＶ_Ｌのクローニング
２つのｐｃＤＮＡ３．１由来哺乳動物発現ベクター（ｖＤＲ０００３６８及びｖＤＲ０００９６１）を用いて、キメラｍＡｂの重鎖（ＨＣ）又は軽鎖（ＬＣ）をコードする単一遺伝子構築物を生成した。各ベクターは、ＨＣ及びＬＣの発現を駆動するヒトサイトメガロウイルス（ｈＣＭＶ）プロモーターを含有し、両方ともクローニングを容易にするアンピシリン耐性遺伝子（Ａｍｐ（Ｒ））を含有する。ｖＤＲ０００３６８は、クローニングのための固有のＨｉｎｄＩＩＩ及びＤｒａＩＩＩ制限酵素部位、並びにマウスＩｇＧ２ａ定常領域も有する。ｖＤＲ０００９６１は、クローニングのための固有のＨｉｎｄＩＩＩ及びＴｔｈ１１１Ｉ制限酵素部位、並びにマウスカッパ定常領域も有する。

ＨＣ（Ｖ_Ｈ）又はＬＣ（Ｖ_Ｌ）の可変領域を含むＤＮＡ断片を合成し、ＨＣベクターｖＤＲ０００３６８及びＬＣベクターｖＤＲ０００９６１にライゲーションした。ＨＣ合成断片は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位、Ｋｏｚａｋ配列、シグナルペプチド、Ｖ_Ｈ及びＣ_Ｈ１の一部をコードするＤＮＡ配列、並びにＤｒａＩＩＩクローニング部位を含んでいた。ＬＣ合成断片は、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位、Ｋｏｚａｋ配列、シグナルペプチド、Ｖ_Ｌ、及びカッパ定常領域の一部をコードするＤＮＡ配列、並びにＴｔｈ１１１Ｉ制限クローニング部位を含んでいた。最終的なＨＣ構築物はＰＢＤ０００１０５９２０であり、ＬＣ構築物はＰＢＤ０００１０５９２１である。２つの構築物を哺乳動物発現細胞株ＨＥＫ２９３ Ｅｘｐｉ又はＣＨＯに共トランスフェクトして、Ａ００２Ｂ３９を作製した。

タンパク質発現
ＨＣ構築物ＰＢＤ０００１０５９２０及びＬＣ構築物ＰＢＤ０００１０５９２１を、トランスフェクション前に配列検証した。Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現培地（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号Ａ１４３５１０１）で増殖させたＨＥＫ Ｅｘｐｉ２９３（商標）細胞（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号Ａ１４５２７）。細胞を８％ＣＯ_２下で１２５ＲＰＭで振盪しながら３７℃で増殖させた。Ｅｘｐｉ２９３（商標）発現キット（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号Ａ１４５２４）を使用して細胞を１ｍＬ当たり２．５×１０^６個でトランスフェクトした。トランスフェクトした細胞１Ｌにつき、１ｍｇの全ＤＮＡを２５ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭ（Ｔｈｅｒｍｏカタログ番号３１９８５０６２０）に希釈し、２．６ｍＬのＥｘｐｉ２９３（商標）試薬を２５ｍＬのＯｐｔｉ－ＭＥＭに希釈し、室温で５分間インキュベートした。希釈したＤＮＡと希釈したＥｘｐｉ２９３試薬を加え合わせ、室温で２０分間インキュベートした。次に、このＤＮＡ複合体を細胞に加えた。細胞を振盪インキュベーターに一晩入れた。トランスフェクションの翌日、５ｍＬのＥｎｈａｎｃｅｒ１を５０ｍＬのＥｎｈａｎｃｅｒ２に希釈し、２つのＥｎｈａｎｃｅｒの全量を細胞に加えた。トランスフェクトした細胞をインキュベーター内に再び４日間戻してから収穫した。４，５００ｇで３５分間の遠心分離によって細胞を除去し、次いで０．２μｍフィルタで濾過してから発現レベルを確認した。

Ｏｃｔｅｔ機器を用いて発現を定量した。マウスＩｇＧ２（Ｓｉｇｍａカタログ番号Ｍ９１４４）を標準として使用した。プロテインＡバイオセンサーを使用した。試料及び標準を使用済みＥｘｐｉ２９３培地で希釈した。標準曲線は、２倍希釈で１００μｇ／ｍＬから開始した。試料を１：１０に希釈した。標準曲線は直線点曲線であった。計算は、Ｆｏｒｔｅ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓソフトウェアによって行った。

実施例３：抗イディオタイプ抗体Ａ００２Ｂ３９の結合アッセイ
Ｂｉａｃｏｒｅによる可溶性タンパク質を用いた結合アッセイ
Ｍ５センサーチップ上に直接固定化された抗マウスＦｃ抗体。約２０～５０ＲＵに達するように１μｇ／ｍＬに希釈したライブラリ抗体（マウスＩｇＧ２ａ）。抗原（ｓｃＦＶ Ｆｃ融合）を、５００ｎＭ～０．８ｎＭ、１：５希釈で３分間会合させる。３０分間解離させる。アッセイの結果（以下の表２）は、ＰｒｏｔｅＯｎを用いてみられたものと同様のＫＬＢ５１３に対する結合親和性を示す。

Ｐｒｏｔｅｏｎ及びＢｉａｃｏｒｅによる可溶性タンパク質を使用した結合アッセイ
ＰｒｏｔｅＯｎ ＸＰＲ３６システム（ＢｉｏＲａｄ）を使用して、結合アッセイを行った。ＰｒｏｔｅＯｎ ＧＬＣチップ（ＢｉｏＲａｄ、カタログ番号１７６－５０１１）を、抗マウスＦｃ抗体でコーティングした。ライブラリ抗体（マウスＩｇＧ２ａ）を、０．２５μｇ／ｍＬ～１μｇ／ｍＬに希釈して、約１００～２００ＲＬにした。抗原（ｓｃＦｖ－Ｆｃ融合）を、１０００ｎＭ～０．４ｎＭ、１：４希釈で３分間会合させ、続いて３０分間解離させた。アッセイの結果（以下の表１）は、ＫＬＢ５１３及びＫＬＢ６１０の両方に対するＡ００２Ｂ３９の同様の結合親和性を示す。

Ｍ５センサーチップに直接固定化された抗マウスＦｃ抗体。ライブラリ抗体（マウスＩｇＧ２ａ）を、１μｇ／ｍＬに希釈し、約４０～８０ＲＵにした。抗原（ｓｃＦＶ Ｆｃ融合）を、５００ｎＭ～０．８ｎＭ、１：５希釈で３分間会合させる。３０分間解離させる。アッセイの結果（以下の表２）は、Ａ００２Ｂ３９のＫＬＢ５１３との結合親和性を示す。

細胞結合アッセイ
ＳｃＦｖトランスフェクトＳｕｐＴ１－ＫＬ２Ｂ４１３ ＨＬ、ＳｕｐＴ１－ＫＬ２Ｂ４１３ ＬＨ、又はＳｕｐＴ１－ＣＤ９Ｂ３３７－ＨＬ細胞を、ＲＭＰＩ １６４０、１０％ＦＢＳ、１％非必須アミノ酸、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、２ｍＭのＬ－グルタミン、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、０．１％炭酸水素塩中で培養した。細胞培養サプリメントは、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｇｉｂｃｏ製品であった。ｍＡｂを染色緩衝液（ＢＳＡ）（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎカタログ番号５５４６５７）中で６マイクログラム／ｍＬに希釈した。ｓｃＦｖ発現ＳｕｐＴ１細胞を固定可能なＬｉｖｅ／Ｄｅａｄ染色（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ ＃Ｌ３４９７４）で標識し、３８４ウェルＶ底マイクロプレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ Ｂｉｏ－Ｏｎｅ ＃７８１２８１）に５０，０００細胞／ウェルで添加した。

正規化したｍＡｂ試料を２０μＬ／ウェルの量で穏やかに混合しながら細胞懸濁液に添加し、細胞を氷上で３０分間インキュベートした。細胞懸濁液を７０μＬ／ウェルの氷冷の染色緩衝液（ＢＳＡ）で希釈し、細胞を４００×ｇ、４℃で５分間ペレット化し、上清を吸引した。細胞ペレットを７０μＬ／ウェルの氷冷の染色緩衝液（ＢＳＡ）でもう一度洗浄した。３μｇ／ｍＬのＡＦ４８８抗マウスＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）特異的ヤギＦ（ａｂ’）２（Ｊａｃｋｓｏｎ ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ ＃１１５－５４６－０６２）を細胞ペレットに４０μＬ／ウェルで穏やかに混合しながら添加し、細胞を氷上、暗所で３０分間インキュベートした。細胞を前述のように洗浄し、４０μＬ／ウェルのＢＤ Ｃｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ ＃５５４６５５）を用いて氷上で２０分間固定した。固定した細胞を上記のように洗浄し、細胞ペレットを２０μＬの染色緩衝液に再懸濁し、ｉＱｕｅ ＰＬＵＳ ＶＢＲフローサイトメーターで解析した。細胞を、生存集団及び一重項集団に対してゲーティングし、ＢＬ１－Ｈ（ＡＦ４８８）チャネルにおける抗体結合について解析した。全ての液体処理をＡｇｉｌｅｎｔ Ｂｒａｖｏシステムで行い、３８４ウェルプレートの吸引をＢｉｏＴｅｋ ４０５ Ｓｅｌｅｃｔプレート洗浄機で行った。

図３に示すように、ｓｃＦｖトランスフェクトＳｕｐＴ１細胞への結合において、多数の候補ｍＡｂをスクリーニングした。Ａ００２Ｂ３９（Ａ００２Ｍ３９と標識）は、ＳｕｐＴ１－ＫＬ２Ｂ４１３ ＨＬ、ＳｕｐＴ１－ＫＬ２Ｂ４１３ ＬＨ細胞の両方への特異的結合を示したが、陰性対照ＳｕｐＴ１－ＣＤ９Ｂ３３７－ＨＬへの特異的結合は示さなかった。

実施例４：ＣＡＲ＋ＳｕｐＴ１細胞上のＫＬＫ２ ＣＡＲ ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ（タンパク質ＩＤ＃Ａ００２Ｂ３９）に対する検出抗体の特性評価
ＮＫ細胞及びＴ細胞上に発現するＫＬＫ２ ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ）を検出する抗体を、ファージディスプレイスクリーニングに由来するタンパク質のパネルから同定した。前述の実施例で論じたように、最初に組み換えＣＡＲタンパク質への結合についてタンパク質を試験し、潜在的なバインダーをスケールアップした。タンパク質を精製し、フローサイトメトリーによってそれぞれＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨを発現するＳｕｐＴ１細胞への用量依存的結合について試験した。Ｆｃ－ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ融合タンパク質との競合結合実験及び親ＳｕｐＴ１細胞への結合の欠如により、ＣＡＲに特異的な結合であることが判明した。最良のバインダーを選択した後、ＣＡＲ検出試薬として使用するために、抗体を組み換えフィコエリトリン（「ＰＥ」）に直接コンジュゲートした。抗体を精製してＰＥ：抗体の比を１：１とし、受容体計数試験を可能とした（細胞表面上に発現されるＣＡＲの数）。

精製
細胞培養上清をＭａｂＳｅｌｅｃｔカラムにロードし、１００ｍＭ酢酸ナトリウムｐＨ３．０などの低ｐＨ緩衝液で溶出し、続いてＳｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－２５カラムを使用して１×ＳＳＣ、８．５％スクロースｐＨ７．０に緩衝液交換した。タンパク質を含有する画分を回収した。精製後、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ法、ＳＥＣ－ＨＰＬＣ法、及びＬＣ－ＭＳ法を使用してタンパク質のＱＣを行った。

フィコエリトリン標識
Ｍｏｄｉｆｉｅｒ試薬１μＬを、標識する抗体１０μＬごとに添加し、穏やかに混合した。抗体試料（Ｍｏｄｉｆｉｅｒ試薬を加えたもの）を凍結乾燥したＰＥ（Ｅｘｐｅｄｅｏｎ、カタログ番号７０３－００１５）に直接ピペットで移し、穏やかに再懸濁し、室温（２０～２５℃）の暗所で１時間インキュベートした。Ｑｕｅｎｃｈｅｒ試薬１μＬを、使用した抗体１０μＬごとに加え、３０分間インキュベートした。

標識後、サイズ排除クロマトグラムカラム上でＰＥ抗体コンジュゲートを精製した。画分を回収し、ＳＥＣ－ＨＰＬＣで解析した。１つのＰＥを有する１つの抗体のみを含有する画分を一緒にプールし、必要に応じて濃縮した。最終生成物をＳＥＣ－ＨＰＬＣで解析した。

ＫＬＫ２ ＣＡＲ（ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ）抗イディオタイプ抗体Ａ００２Ｂ３９の特性評価
ＫＬ２Ｂ４１３ＬＨを発現するＳｕｐＴ１細胞を親ＣＡＲ－ＳｕｐＴ１細胞と比較した。細胞（１００，０００細胞／ウェル）をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ生存性色素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌ１０１１９）で染色し、Ａ００２Ｂ３９の濃度を上げながら氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション後、試料をＢＳＡ染色緩衝液（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ ＃５５４６５７）で洗浄し、ＰＥヤギ抗マウスＩｇＧポリクローナル抗体（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ ＃４０５３０７）で染色して、生ＣＡＲ＋ＳｕｐＴ１細胞上の結合抗体を検出した。インキュベーション、洗浄、及び固定（Ｃｙｔｏｆｉｘ、ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の後、試料を１０色のＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）フローサイトメーターで取得した。ＦｌｏｗＪｏを用いて解析を行い、生存ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ中央蛍光強度を図４にプロットする。図４に示すように、ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞へのＡ００２Ｂ３９の用量依存的結合が観察された。ＣＡＲ－ＳｕｐＴ１親細胞では結合は検出されなかった。

Ａ００２Ｂ３９を上記のようにＲ－ＰＥにコンジュゲートし、１０μｇ／ｍＬのＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ｓｃＦｖ Ｆｃ融合タンパク質の存在下又は非存在下でＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１への結合について試験して、ＫＬ２Ｂ４１３ ＣＡＲへのＡ００２Ｂ３９結合の特異性を評価した。ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞（１００，０００細胞／ウェル）をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ生存性色素（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ Ｌ１０１１９）で染色し、ＰＥ－Ａ００２Ｂ３９及び１０μｇ／ｍＬ ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ｓｃＦｖ Ｆｃの濃度を上げながら氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション、洗浄、及び固定の後、試料を１０色のＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーター上で取得した。ＦｌｏｗＪｏ解析ソフトウェアを用いて解析を行い、生存ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ中央蛍光強度を図５にプロットする。図５に示すように、ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞へのＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の用量依存的結合は、ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＣＡＲに特異的であり、１０μｇ／ｍＬのＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ｓｃＦｖ－Ｆｃによってブロッキングすることができる。

臨床試料中のＣＡＲ細胞の検出を反映するために、ＫＬ２Ｂ４１３ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞を全血にスパイクした。以下の図３に示すように、ＰＥ－Ａ００２Ｂ３９によるＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＣＡＲ検出は、全血の存在下では阻害されなかった。ＫＬ２Ｂ４１３ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ生存性色素で染色し、洗浄し、染色緩衝液又は新鮮な全血（ｎ＝２）に懸濁して、１００，０００個のＫＬ２Ｂ４１３ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞を５０μＬ／ウェルで播種し、ＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の濃度を上げながら氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション、洗浄、及び固定の後、試料を１０色のＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーターで取得した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェアを使用して解析を行い、生存ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ中央蛍光強度を図６にプロットする。図６に示すように、全血中にスパイクされたＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ－ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ－Ａ００２Ｂ３９検出。

ＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の複数のロットを比較して、バッチ間のＫＬ２Ｂ４１３ＬＨ－ＳｕｐＴ１細胞への結合の差を評価した。ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ ＳｕｐＴ１細胞（２００，０００細胞／ウェル）をＬＩＶＥ／ＤＥＡＤ Ｆｉｘａｂｌｅ Ｎｅａｒ－ＩＲ生存性色素で染色し、ＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の濃度を上げながら氷上で３０分間インキュベートした。インキュベーション、洗浄、及び固定の後、試料を１０色のＦＡＣＳＣａｎｔｏ ＩＩフローサイトメーター上で取得した。ＦｌｏｗＪｏ解析ソフトウェアを用いて解析を行い、生存ＳｕｐＴ１細胞のＰＥ中央蛍光強度を図７にプロットする。図７に示すように、ＰＥ－Ａ００２Ｂ３９の２つの異なるロットは、ＫＬ２Ｂ４１３－ＬＨ－ＳｕｐＴ１に対して同様の結合プロファイルを有する。

配列

配列番号３７：ｍｕＩｇＧ２ａを有するＡ００２Ｂ３９の重鎖（アミノ酸）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＱＷＧＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳＡＫＴＴＡＰＳＶＹＰＬＡＰＶＣＧＤＴＴＧＳＳＶＴＬＧＣＬＶＫＧＹＦＰＥＰＶＴＬＴＷＮＳＧＳＬＳＳＧＶＨＴＦＰＡＶＬＱＳＤＬＹＴＬＳＳＳＶＴＶＴＳＳＴＷＰＳＱＳＩＴＣＮＶＡＨＰＡＳＳＴＫＶＤＫＫＩＥＰＲＧＰＴＩＫＰＣＰＰＣＫＣＰＡＰＮＬＬＧＧＰＳＶＦＩＦＰＰＫＩＫＤＶＬＭＩＳＬＳＰＩＶＴＣＶＶＶＤＶＳＥＤＤＰＤＶＱＩＳＷＦＶＮＮＶＥＶＨＴＡＱＴＱＴＨＲＥＤＹＮＳＴＬＲＶＶＳＡＬＰＩＱＨＱＤＷＭＳＧＫＥＦＫＣＫＶＮＮＫＤＬＰＡＰＩＥＲＴＩＳＫＰＫＧＳＶＲＡＰＱＶＹＶＬＰＰＰＥＥＥＭＴＫＫＱＶＴＬＴＣＭＶＴＤＦＭＰＥＤＩＹＶＥＷＴＮＮＧＫＴＥＬＮＹＫＮＴＥＰＶＬＤＳＤＧＳＹＦＭＹＳＫＬＲＶＥＫＫＮＷＶＥＲＮＳＹＳＣＳＶＶＨＥＧＬＨＮＨＨＴＴＫＳＦＳＲＴＰＧＫ

配列番号３８：ｍｕＩｇＧ２ａを有するＡ００２Ｂ３９の重鎖（ＤＮＡ）
ＧＡＡＧＴＧＣＡＧＣＴＧＧＴＧＣＡＧＡＧＣＧＧＣＧＣＧＧＡＡＧＴＧＡＡＡＡＡＡＣＣＧＧＧＣＡＧＣＡＧＣＧＴＧＡＡＡＧＴＧＡＧＣＴＧＣＡＡＡＧＣＧＡＧＣＧＧＣＧＧＣＡＣＣＴＴＴＡＧＣＡＧＣＴＡＴＧＣＧＡＴＴＡＧＣＴＧＧＧＴＧＣＧＣＣＡＧＧＣＧＣＣＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＣＴＧＧＡＡＴＧＧＡＴＧＧＧＣＧＧＣＡＴＴＡＴＴＣＣＧＡＴＴＴＴＴＧＧＣＡＣＣＧＣＧＡＡＣＴＡＴＧＣＧＣＡＧＡＡＡＴＴＴＣＡＧＧＧＣＣＧＣＧＴＧＡＣＣＡＴＴＡＣＣＧＣＧＧＡＴＧＡＡＡＧＣＡＣＣＡＧＣＡＣＣＧＣＧＴＡＴＡＴＧＧＡＡＣＴＧＡＧＣＡＧＣＣＴＧＣＧＣＡＧＣＧＡＡＧＡＴＡＣＣＧＣＧＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＧＣＧＣＧＣＧＴＧＣＡＧＴＧＧＧＧＣＴＴＧＧＡＣＴＡＴＴＧＧＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＣＴＧＧＴＧＡＣＣＧＴＧＡＧＣＡＧＣＧＣＣＡＡＡＡＣＡＡＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＴＧＴＣＴＡＴＣＣＡＣＴＧＧＣＣＣＣＴＧＴＧＴＧＴＧＧＡＧＡＴＡＣＡＡＣＴＧＧＣＴＣＣＴＣＧＧＴＧＡＣＴＣＴＡＧＧＡＴＧＣＣＴＧＧＴＣＡＡＧＧＧＴＴＡＴＴＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＡＧＴＧＡＣＣＴＴＧＡＣＣＴＧＧＡＡＣＴＣＴＧＧＡＴＣＣＣＴＧＴＣＣＡＧＴＧＧＴＧＴＧＣＡＣＡＣＣＴＴＣＣＣＡＧＣＴＧＴＣＣＴＧＣＡＧＴＣＴＧＡＣＣＴＣＴＡＣＡＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＧＴＡＡＣＣＴＣＧＡＧＣＡＣＣＴＧＧＣＣＣＡＧＣＣＡＧＴＣＣＡＴＣＡＣＣＴＧＣＡＡＴＧＴＧＧＣＣＣＡＣＣＣＧＧＣＡＡＧＣＡＧＣＡＣＣＡＡＧＧＴＧＧＡＣＡＡＧＡＡＡＡＴＴＧＡＧＣＣＣＡＧＡＧＧＧＣＣＣＡＣＡＡＴＣＡＡＧＣＣＣＴＧＴＣＣＴＣＣＡＴＧＣＡＡＡＴＧＣＣＣＡＧＣＡＣＣＴＡＡＣＣＴＣＴＴＧＧＧＴＧＧＡＣＣＡＴＣＣＧＴＣＴＴＣＡＴＣＴＴＣＣＣＴＣＣＡＡＡＧＡＴＣＡＡＧＧＡＴＧＴＡＣＴＣＡＴＧＡＴＣＴＣＣＣＴＧＡＧＣＣＣＣＡＴＡＧＴＣＡＣＡＴＧＴＧＴＧＧＴＧＧＴＧＧＡＴＧＴＧＡＧＣＧＡＧＧＡＴＧＡＣＣＣＡＧＡＴＧＴＣＣＡＧＡＴＣＡＧＣＴＧＧＴＴＴＧＴＧＡＡＣＡＡＣＧＴＧＧＡＡＧＴＡＣＡＣＡＣＡＧＣＴＣＡＧＡＣＡＣＡＡＡＣＣＣＡＴＡＧＡＧＡＧＧＡＴＴＡＣＡＡＣＡＧＴＡＣＴＣＴＣＣＧＧＧＴＧＧＴＣＡＧＴＧＣＣＣＴＣＣＣＣＡＴＣＣＡＧＣＡＣＣＡＧＧＡＣＴＧＧＡＴＧＡＧＴＧＧＣＡＡＧＧＡＧＴＴＣＡＡＡＴＧＣＡＡＧＧＴＣＡＡＣＡＡＣＡＡＡＧＡＣＣＴＣＣＣＡＧＣＧＣＣＣＡＴＣＧＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＴＣＡＡＡＡＣＣＣＡＡＡＧＧＧＴＣＡＧＴＡＡＧＡＧＣＴＣＣＡＣＡＧＧＴＡＴＡＴＧＴＣＴＴＧＣＣＴＣＣＡＣＣＡＧＡＡＧＡＡＧＡＧＡＴＧＡＣＴＡＡＧＡＡＡＣＡＧＧＴＣＡＣＴＣＴＧＡＣＣＴＧＣＡＴＧＧＴＣＡＣＡＧＡＣＴＴＣＡＴＧＣＣＴＧＡＡＧＡＣＡＴＴＴＡＣＧＴＧＧＡＧＴＧＧＡＣＣＡＡＣＡＡＣＧＧＧＡＡＡＡＣＡＧＡＧＣＴＡＡＡＣＴＡＣＡＡＧＡＡＣＡＣＴＧＡＡＣＣＡＧＴＣＣＴＧＧＡＣＴＣＴＧＡＴＧＧＴＴＣＴＴＡＣＴＴＣＡＴＧＴＡＣＡＧＣＡＡＧＣＴＧＡＧＡＧＴＧＧＡＡＡＡＧＡＡＧＡＡＣＴＧＧＧＴＧＧＡＡＡＧＡＡＡＴＡＧＣＴＡＣＴＣＣＴＧＴＴＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＣＧＡＧＧＧＴＣＴＧＣＡＣＡＡＴＣＡＣＣＡＣＡＣＧＡＣＴＡＡＧＡＧＣＴＴＣＴＣＣＣＧＧＡＣＴＣＣＧＧＧＴＡＡＡ

配列番号３９：ｍｕＫａｐｐａを有するＡ００２Ｂ３９の軽鎖（アミノ酸）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＤＳＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＦＮＷＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＲＡＤＡＡＰＴＶＳＩＦＰＰＳＳＥＱＬＴＳＧＧＡＳＶＶＣＦＬＮＮＦＹＰＫＤＩＮＶＫＷＫＩＤＧＳＥＲＱＮＧＶＬＮＳＷＴＤＱＤＳＫＤＳＴＹＳＭＳＳＴＬＴＬＴＫＤＥＹＥＲＨＮＳＹＴＣＥＡＴＨＫＴＳＴＳＰＩＶＫＳＦＮＲＮＥＣ

配列番号４０：ｍｕＫａｐｐａを有するＡ００２Ｂ３９の軽鎖（ＤＮＡ）
ＧＡＡＡＴＴＧＴＧＣＴＧＡＣＣＣＡＧＡＧＣＣＣＧＧＣＧＡＣＣＣＴＧＡＧＣＣＴＧＡＧＣＣＣＧＧＧＣＧＡＡＣＧＣＧＣＧＡＣＣＣＴＴＡＧＣＴＧＣＣＧＴＧＣＡＡＧＴＣＡＧＡＧＴＧＴＧＧＡＣＡＧＣＧＣＧＣＴＧＧＣＧＴＧＧＴＡＴＣＡＧＣＡＧＡＡＡＣＣＧＧＧＣＣＡＧＧＣＧＣＣＧＣＧＣＣＴＧＣＴＧＡＴＴＴＡＴＧＧＴＧＣＧＡＧＣＡＡＣＣＧＣＧＣＧＡＣＣＧＧＣＡＴＴＣＣＧＧＣＧＣＧＣＴＴＴＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＧＣＧＧＣＡＣＣＧＡＴＴＴＴＡＣＣＣＴＧＡＣＣＡＴＴＡＧＣＡＧＣＣＴＧＧＡＡＣＣＧＧＡＡＧＡＴＴＴＴＧＣＧＧＴＧＴＡＴＴＡＴＴＧＣＣＡＧＣＡＧＣＧＴＴＴＣＡＡＣＴＧＧＣＣＧＡＴＣＡＣＣＴＴＴＧＧＣＣＡＧＧＧＣＡＣＣＡＡＡＧＴＧＧＡＡＡＴＴＡＡＡＣＧＧＧＣＴＧＡＴＧＣＴＧＣＡＣＣＧＡＣＴＧＴＧＴＣＣＡＴＣＴＴＣＣＣＡＣＣＡＴＣＣＡＧＴＧＡＧＣＡＧＴＴＡＡＣＡＴＣＴＧＧＡＧＧＴＧＣＣＴＣＡＧＴＣＧＴＧＴＧＣＴＴＣＴＴＧＡＡＣＡＡＣＴＴＣＴＡＣＣＣＣＡＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＴＧＴＣＡＡＧＴＧＧＡＡＧＡＴＴＧＡＴＧＧＣＡＧＴＧＡＡＣＧＡＣＡＡＡＡＴＧＧＣＧＴＣＣＴＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＣＴＧＡＴＣＡＧＧＡＣＡＧＣＡＡＡＧＡＣＡＧＣＡＣＣＴＡＣＡＧＣＡＴＧＡＧＣＡＧＣＡＣＣＣＴＣＡＣＧＴＴＧＡＣＣＡＡＧＧＡＣＧＡＧＴＡＴＧＡＡＣＧＡＣＡＴＡＡＣＡＧＣＴＡＴＡＣＣＴＧＴＧＡＧＧＣＣＡＣＴＣＡＣＡＡＧＡＣＡＴＣＡＡＣＴＴＣＡＣＣＣＡＴＴＧＴＣＡＡＧＡＧＣＴＴＣＡＡＣＡＧＧＡＡＴＧＡＧＴＧＴ

配列番号４１：ＫＬ２Ｂ４１３ ＶＨ
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ

配列番号４２：ＫＬ２Ｂ４１３ ＶＬ
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号４３－ＣＡＲ１（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＨＬ；ｐＢＤ００００９１６２８）
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号４４－ＣＡＲ２（ＫＬ２Ｂ４１３＿ＬＨ；ｐＢＤ００００９１６２３）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＳＦＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＲＡＳＱＧＩＳＳＹＬＳＷＹＱＱＫＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＡＴＳＴＬＱＳＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＧＴＥＦＴＬＴＩＳＳＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＬＮＳＹＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫＧＧＳＥＧＫＳＳＧＳＧＳＥＳＫＳＴＧＧＳＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＳＹＷＭＴＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＷＶＡＮＩＫＱＤＧＳＥＲＹＹＶＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＡＫＮＳＬＹＬＱＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＱＮＹＤＩＬＴＧＨＹＧＭＤＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳＴＳＴＰＡＰＲＰＰＴＰＡＰＴＩＡＳＱＰＬＳＬＲＰＥＡＣＲＰＡＡＧＧＡＶＨＴＲＧＬＤＦＡＣＤＩＹＩＷＡＰＬＡＧＴＣＧＶＬＬＬＳＬＶＩＴＬＹＣＫＲＧＲＫＫＬＬＹＩＦＫＱＰＦＭＲＰＶＱＴＴＱＥＥＤＧＣＳＣＲＦＰＥＥＥＥＧＧＣＥＬＲＶＫＦＳＲＳＡＤＡＰＡＹＫＱＧＱＮＱＬＹＮＥＬＮＬＧＲＲＥＥＹＤＶＬＤＫＲＲＧＲＤＰＥＭＧＧＫＰＲＲＫＮＰＱＥＧＬＹＮＥＬＱＫＤＫＭＡＥＡＹＳＥＩＧＭＫＧＥＲＲＲＧＫＧＨＤＧＬＹＱＧＬＳＴＡＴＫＤＴＹＤＡＬＨＭＱＡＬＰＰＲ

配列番号４５：Ａ００２Ｂ３９の重鎖可変ドメイン（アミノ酸）
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＳＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＧＴＦＳＳＹＡＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＧＩＩＰＩＦＧＴＡＮＹＡＱＫＦＱＧＲＶＴＩＴＡＤＥＳＴＳＴＡＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＶＹＹＣＡＲＶＱＷＧＬＤＹＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ

配列番号４６：Ａ００２Ｂ３９の軽鎖可変ドメイン（アミノ酸）
ＥＩＶＬＴＱＳＰＡＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＤＳＡＬＡＷＹＱＱＫＰＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＮＲＡＴＧＩＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＲＦＮＷＰＩＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ

配列番号４７－ヒトカリクレイン－２配列（シグナル配列：アミノ酸１－１８）
ＭＷＤＬＶＬＳＩＡＬＳＶＧＣＴＧＡＶＰＬＩＱＳＲＩＶＧＧＷＥＣＥＫＨＳＱＰＷＱＶＡＶＹＳＨＧＷＡＨＣＧＧＶＬＶＨＰＱＷＶＬＴＡＡＨＣＬＫＫＮＳＱＶＷＬＧＲＨＮＬＦＥＰＥＤＴＧＱＲＶＰＶＳＨＳＦＰＨＰＬＹＮＭＳＬＬＫＨＱＳＬＲＰＤＥＤＳＳＨＤＬＭＬＬＲＬＳＥＰＡＫＩＴＤＶＶＫＶＬＧＬＰＴＱＥＰＡＬＧＴＴＣＹＡＳＧＷＧＳＩＥＰＥＥＦＬＲＰＲＳＬＱＣＶＳＬＨＬＬＳＮＤＭＣＡＲＡＹＳＥＫＶＴＥＦＭＬＣＡＧＬＷＴＧＧＫＤＴＣＧＧＤＳＧＧＰＬＶＣＮＧＶＬＱＧＩＴＳＷＧＰＥＰＣＡＬＰＥＫＰＡＶＹＴＫＶＶＨＹＲＫＷＩＫＤＴＩＡＡＮＰ

参照による組み込み
本明細書において言及される全ての刊行物及び特許出願は、各個々の刊行物又は特許出願が参照により組み込まれることが具体的かつ個別に示された場合と同程度まで、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

主題の開示の特定の実施形態について論じてきたが、上の明細書は例示的であり、限定的ではない。本明細書及び以下の特許請求の範囲を考察すると、本開示の多くの変形が当業者には明らかになるであろう。等価物の全範囲と共に特許請求の範囲、及びそのような変形と共に明細書を参照することによって、本開示の全範囲は決定されるべきである。

Claims (33)

1. ＫＬ２Ｂ４１３を含む標的抗体に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
2. 前記標的抗体又はその抗原結合部分が、配列番号４１のアミノ酸配列を有するＶＨドメインと、配列番号４２のアミノ酸配列を有するＶＬドメインとを含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
3. ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分であって、配列番号４～７からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ１、配列番号１１～１４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ２及び配列番号１９～２０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＨ ＣＤＲ３を含む重鎖可変（ＶＨ）ドメインを含み、配列番号２５～２６からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ１、配列番号２９～３０からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ２及び配列番号３３～３４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有するＶＬ ＣＤＲ３を含む軽鎖可変（ＶＬ）ドメインを更に含む、抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分。
4. 前記ＶＨドメインが、配列番号４５に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号４６に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
5. 配列番号３７に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９に対して少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
6. 前記ＶＨドメインが、配列番号４５のアミノ酸配列を有し、前記ＶＬドメインが、配列番号４６のアミノ酸配列を有する、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
7. 配列番号３７のアミノ酸配列を含む重鎖を含み、配列番号３９のアミノ酸配列を含む軽鎖を更に含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
8. 前記抗原結合部分が、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）_２、又はｓｃＦｖから選択される、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
9. 前記抗体が、モノクローナル抗体である、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
10. 前記抗体が、キメラ抗体である、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
11. 前記抗体が、マウスＩｇＧ２ａフレームワークを含む、請求項１０に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
12. 前記抗体が、完全ヒト抗体である、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
13. 請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分の前記重鎖、前記軽鎖、又はその両方をコードする核酸。
14. ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分の前記重鎖、前記軽鎖、又はその両方をコードする核酸であって、
    ａ）配列番号３８のヌクレオチド配列、
    ｂ）配列番号４０のヌクレオチド配列、
    ｃ）ａ）及びｂ）の両方、を含む、核酸。
15. 請求項１４に記載の核酸を含む、ベクター。
16. 前記ベクターが、発現ベクターである、請求項１５に記載のベクター。
17. 請求項１６に記載のベクターを含む、宿主細胞。
18. 前記細胞が、哺乳動物細胞である、請求項１７に記載の宿主細胞。
19. ＫＬ２Ｂ４１３に特異的に結合する抗イディオタイプ抗体又はその抗原結合部分を産生する方法であって、前記抗体又は前記抗原結合部分を発現させる条件下で、前記抗体又は前記抗原結合部分の前記重鎖及び前記軽鎖をコードするヌクレオチド配列を含む、請求項１７に記載の宿主細胞を培養することと、前記培養物から前記抗体又は前記抗原結合部分を単離することとを含む、方法。
20. 生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）前記生体試料を、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を検出することとを含む、方法。
21. 生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を含むキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を検出するための方法であって、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）前記生体試料を、請求項１～３のいずれか一項に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を検出し、それによって前記ＣＡＲの前記発現を検出することとを含む、方法。
22. 前記抗体が、検出可能な標識を含む、請求項２０に記載の方法。
23. 前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を検出する前に、前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を検出可能な標識と接触させることを更に含む、請求項２０に記載の方法。
24. 前記生体試料が、血液、血清又は尿である、請求項２０に記載の方法。
25. ＫＬ２Ｂ４１３が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の細胞外部分の抗原結合ドメイン内にある、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
26. ＫＬ２Ｂ４１３がｓｃＦｖであり、前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分が前記ＣＡＲの前記ｓｃＦｖ中のエピトープに特異的に結合する、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
27. ＫＬ２Ｂ４１３が、ＫＬＫ２に結合する、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
28. 前記抗体又は前記抗原結合部分が、他のＫＬＫ２抗体又は他のＫＬＫ２結合ＣＡＲと交差反応しない、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
29. 前記ＣＡＲが、配列番号４３～４４からなる群から選択されるアミノ酸配列を有する、請求項２５に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
30. 生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３を検出するためのキットであって、（ａ）請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と、（ｂ）前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を検出するための説明書とを含む、キット。
31. 生体試料中のＫＬ２Ｂ４１３の検出において使用するための、抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分であって、前記検出が、（ａ）生体試料を準備することと、（ｂ）前記生体試料を前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を検出することとを含む、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分。
32. 試料からＫＬ２Ｂ４１３を精製する方法であって、（ａ）ＫＬ２Ｂ４１３を含む生体試料を準備することと、（ｂ）前記生体試料を、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を捕捉し、それによってＫＬ２Ｂ４１３を精製することとを含む、方法。
33. 細胞集団からＣＡＲ－Ｔ細胞を選択する方法であって、（ａ）ＣＡＲ－Ｔ細胞を含む生体試料を準備することと、（ｂ）前記生体試料を、請求項１に記載の抗イディオタイプ抗体又は抗原結合部分と接触させることと、（ｃ）前記抗イディオタイプ抗体又は前記抗原結合部分を捕捉し、それによってＣＡＲ－Ｔ細胞を選択することとを含む、方法。