JP2023530661A - 急性心筋梗塞後の左室機能不全の治療方法 - Google Patents
急性心筋梗塞後の左室機能不全の治療方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JP2023530661A JP2023530661A JP2022576386A JP2022576386A JP2023530661A JP 2023530661 A JP2023530661 A JP 2023530661A JP 2022576386 A JP2022576386 A JP 2022576386A JP 2022576386 A JP2022576386 A JP 2022576386A JP 2023530661 A JP2023530661 A JP 2023530661A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ami
- composition
- compound
- seq
- days
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 206010000891 acute myocardial infarction Diseases 0.000 title description 123
- 238000011282 treatment Methods 0.000 title description 53
- 206010049694 Left Ventricular Dysfunction Diseases 0.000 title description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims abstract description 87
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 66
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 57
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 42
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 35
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 claims abstract description 32
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 claims abstract description 27
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims abstract description 25
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 claims abstract description 24
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 22
- 102000004586 YY1 Transcription Factor Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108010042669 YY1 Transcription Factor Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 238000012228 RNA interference-mediated gene silencing Methods 0.000 claims abstract description 11
- 210000002064 heart cell Anatomy 0.000 claims abstract description 8
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 58
- 108020004459 Small interfering RNA Proteins 0.000 claims description 56
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 claims description 36
- 208000006029 Cardiomegaly Diseases 0.000 claims description 36
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 claims description 14
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 claims description 12
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000004904 shortening Methods 0.000 claims description 10
- 229940125898 compound 5 Drugs 0.000 claims description 8
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 8
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 8
- 229940125904 compound 1 Drugs 0.000 claims description 6
- 229940125782 compound 2 Drugs 0.000 claims description 6
- 229940126214 compound 3 Drugs 0.000 claims description 6
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims description 6
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 67
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 50
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 45
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 39
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 29
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 24
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 19
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 19
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 17
- 108010067003 Interleukin-33 Proteins 0.000 description 16
- 102000017761 Interleukin-33 Human genes 0.000 description 16
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 16
- 238000007634 remodeling Methods 0.000 description 16
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 15
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 15
- 101000780028 Homo sapiens Natriuretic peptides A Proteins 0.000 description 14
- 102100034296 Natriuretic peptides A Human genes 0.000 description 14
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 14
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 14
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 14
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 13
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 13
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 13
- 101150107698 MYH6 gene Proteins 0.000 description 12
- 101150043413 MYH7 gene Proteins 0.000 description 12
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 12
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 12
- 210000004413 cardiac myocyte Anatomy 0.000 description 11
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 11
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 11
- 101800000407 Brain natriuretic peptide 32 Proteins 0.000 description 10
- 102400000667 Brain natriuretic peptide 32 Human genes 0.000 description 10
- 101800002247 Brain natriuretic peptide 45 Proteins 0.000 description 10
- 102000036675 Myoglobin Human genes 0.000 description 10
- 108010062374 Myoglobin Proteins 0.000 description 10
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 10
- HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N nesiritide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@@H](N)CO)C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 HPNRHPKXQZSDFX-OAQDCNSJSA-N 0.000 description 10
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 9
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 9
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 9
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 9
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 9
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 9
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 9
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 9
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 9
- 102100036706 Interleukin-1 receptor-like 1 Human genes 0.000 description 8
- 206010028594 Myocardial fibrosis Diseases 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 102000003952 Caspase 3 Human genes 0.000 description 7
- 108090000397 Caspase 3 Proteins 0.000 description 7
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 7
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 7
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 7
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 7
- 102000030914 Fatty Acid-Binding Human genes 0.000 description 6
- 101000874160 Homo sapiens Succinate dehydrogenase [ubiquinone] iron-sulfur subunit, mitochondrial Proteins 0.000 description 6
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 6
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 6
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 6
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 6
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 6
- 239000003855 balanced salt solution Substances 0.000 description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- 108091022862 fatty acid binding Proteins 0.000 description 6
- 102000045360 human SDHB Human genes 0.000 description 6
- -1 siRNA Chemical class 0.000 description 6
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 6
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 5
- 230000009091 contractile dysfunction Effects 0.000 description 5
- 230000034994 death Effects 0.000 description 5
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 5
- 230000003831 deregulation Effects 0.000 description 5
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 5
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 5
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 238000013424 sirius red staining Methods 0.000 description 5
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 5
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 4
- 108091093037 Peptide nucleic acid Proteins 0.000 description 4
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 4
- 230000003293 cardioprotective effect Effects 0.000 description 4
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 4
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 238000002592 echocardiography Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 230000006870 function Effects 0.000 description 4
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 4
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 3
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 3
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010019280 Heart failures Diseases 0.000 description 3
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 3
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 3
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 3
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 210000002253 embryonic cardiomyocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000012226 gene silencing method Methods 0.000 description 3
- UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N guanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1N=CN2 UYTPUPDQBNUYGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N imidazole Natural products C1=CNC=N1 RAXXELZNTBOGNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 3
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 3
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 3
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 3
- CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 1-ethenylpyrrolidin-2-one;molecular iodine Chemical compound II.C=CN1CCCC1=O CPKVUHPKYQGHMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LCSKNASZPVZHEG-UHFFFAOYSA-N 3,6-dimethyl-1,4-dioxane-2,5-dione;1,4-dioxane-2,5-dione Chemical group O=C1COC(=O)CO1.CC1OC(=O)C(C)OC1=O LCSKNASZPVZHEG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 9H-xanthine Chemical compound O=C1NC(=O)NC2=C1NC=N2 LRFVTYWOQMYALW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 2
- 101150008656 COL1A1 gene Proteins 0.000 description 2
- 101150008975 Col3a1 gene Proteins 0.000 description 2
- 206010011703 Cyanosis Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 2
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 2
- 108700003107 Interleukin-1 Receptor-Like 1 Proteins 0.000 description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 2
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 2
- PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N Isoflurane Chemical compound FC(F)OC(Cl)C(F)(F)F PIWKPBJCKXDKJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N Ketamine Chemical compound C=1C=CC=C(Cl)C=1C1(NC)CCCCC1=O YQEZLKZALYSWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012098 Lipofectamine RNAiMAX Substances 0.000 description 2
- 102000005604 Myosin Heavy Chains Human genes 0.000 description 2
- 108010084498 Myosin Heavy Chains Proteins 0.000 description 2
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 2
- 101710163270 Nuclease Proteins 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 206010033546 Pallor Diseases 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 2
- 108091081021 Sense strand Proteins 0.000 description 2
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 2
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 2
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 2
- ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N Uracil Chemical compound O=C1C=CNC(=O)N1 ISAKRJDGNUQOIC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010051583 Ventricular Myosins Proteins 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 2
- 229940064804 betadine Drugs 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N buprenorphine Chemical compound C([C@]12[C@H]3OC=4C(O)=CC=C(C2=4)C[C@@H]2[C@]11CC[C@]3([C@H](C1)[C@](C)(O)C(C)(C)C)OC)CN2CC1CC1 RMRJXGBAOAMLHD-IHFGGWKQSA-N 0.000 description 2
- 229960001736 buprenorphine Drugs 0.000 description 2
- 230000009787 cardiac fibrosis Effects 0.000 description 2
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 2
- 210000003698 chordae tendineae Anatomy 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 2
- OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N cytosine Chemical compound NC=1C=CNC(=O)N=1 OPTASPLRGRRNAP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000023753 dehiscence Effects 0.000 description 2
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 2
- 210000003414 extremity Anatomy 0.000 description 2
- 125000001153 fluoro group Chemical group F* 0.000 description 2
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 208000019622 heart disease Diseases 0.000 description 2
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 2
- 230000003601 intercostal effect Effects 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 2
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 2
- 229960002725 isoflurane Drugs 0.000 description 2
- 229960003299 ketamine Drugs 0.000 description 2
- 210000005246 left atrium Anatomy 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N medetomidine Chemical compound C=1C=CC(C)=C(C)C=1C(C)C1=CN=C[N]1 HRLIOXLXPOHXTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002140 medetomidine Drugs 0.000 description 2
- 210000004115 mitral valve Anatomy 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 210000003516 pericardium Anatomy 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 2
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 description 2
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 description 2
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000003762 quantitative reverse transcription PCR Methods 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 description 2
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 2
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 2
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 2
- RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N thymine Chemical compound CC1=CNC(=O)NC1=O RWQNBRDOKXIBIV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 2
- 238000010967 transthoracic echocardiography Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 2-deoxy-D-ribose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)CC=O ASJSAQIRZKANQN-CRCLSJGQSA-N 0.000 description 1
- LMNPKIOZMGYQIU-UHFFFAOYSA-N 5-(trifluoromethyl)-1h-pyrimidine-2,4-dione Chemical compound FC(F)(F)C1=CNC(=O)NC1=O LMNPKIOZMGYQIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SVXNJCYYMRMXNM-UHFFFAOYSA-N 5-amino-2h-1,2,4-triazin-3-one Chemical compound NC=1C=NNC(=O)N=1 SVXNJCYYMRMXNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XZWMZFQOHTWGQE-UHFFFAOYSA-N 6-azathymine Chemical compound CC1=NNC(=O)NC1=O XZWMZFQOHTWGQE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CLGFIVUFZRGQRP-UHFFFAOYSA-N 7,8-dihydro-8-oxoguanine Chemical compound O=C1NC(N)=NC2=C1NC(=O)N2 CLGFIVUFZRGQRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PFUVOLUPRFCPMN-UHFFFAOYSA-N 7h-purine-6,8-diamine Chemical compound C1=NC(N)=C2NC(N)=NC2=N1 PFUVOLUPRFCPMN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGKBRPAAQSHTED-UHFFFAOYSA-N 8-oxoadenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1NC(=O)N2 RGKBRPAAQSHTED-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 9H-purine-2,6-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=C2NC=NC2=N1 MSSXOMSJDRHRMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 1
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101800001288 Atrial natriuretic factor Proteins 0.000 description 1
- 102400001282 Atrial natriuretic peptide Human genes 0.000 description 1
- 101800001890 Atrial natriuretic peptide Proteins 0.000 description 1
- 239000012583 B-27 Supplement Substances 0.000 description 1
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 1
- AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N CT 99021 Chemical compound CC1=CNC(C=2C(=NC(NCCNC=3N=CC(=CC=3)C#N)=NC=2)C=2C(=CC(Cl)=CC=2)Cl)=N1 AQGNHMOJWBZFQQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000005623 Carcinogenesis Diseases 0.000 description 1
- 206010049993 Cardiac death Diseases 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N D-ribofuranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H]1O HMFHBZSHGGEWLO-SOOFDHNKSA-N 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 206010011906 Death Diseases 0.000 description 1
- 108700039887 Essential Genes Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 208000013875 Heart injury Diseases 0.000 description 1
- 102100027875 Homeobox protein Nkx-2.5 Human genes 0.000 description 1
- 101000632197 Homo sapiens Homeobox protein Nkx-2.5 Proteins 0.000 description 1
- 101001082142 Homo sapiens Pentraxin-related protein PTX3 Proteins 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZGSXEXBYLJIOGF-ALFLXDJESA-N IWR-1-endo Chemical compound C=1C=CC2=CC=CN=C2C=1NC(=O)C(C=C1)=CC=C1N1C(=O)[C@@H]2[C@H](C=C3)C[C@H]3[C@@H]2C1=O ZGSXEXBYLJIOGF-ALFLXDJESA-N 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 101710203526 Integrase Proteins 0.000 description 1
- 102000019223 Interleukin-1 receptor Human genes 0.000 description 1
- 108050006617 Interleukin-1 receptor Proteins 0.000 description 1
- 238000001276 Kolmogorov–Smirnov test Methods 0.000 description 1
- 238000012313 Kruskal-Wallis test Methods 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 102100025169 Max-binding protein MNT Human genes 0.000 description 1
- 102000018745 NF-KappaB Inhibitor alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010052419 NF-KappaB Inhibitor alpha Proteins 0.000 description 1
- 229910004679 ONO2 Inorganic materials 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- BFHAYPLBUQVNNJ-UHFFFAOYSA-N Pectenotoxin 3 Natural products OC1C(C)CCOC1(O)C1OC2C=CC(C)=CC(C)CC(C)(O3)CCC3C(O3)(O4)CCC3(C=O)CC4C(O3)C(=O)CC3(C)C(O)C(O3)CCC3(O3)CCCC3C(C)C(=O)OC2C1 BFHAYPLBUQVNNJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027351 Pentraxin-related protein PTX3 Human genes 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 238000011530 RNeasy Mini Kit Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N Ribose Natural products OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-LMVFSUKVSA-N 0.000 description 1
- 239000006146 Roswell Park Memorial Institute medium Substances 0.000 description 1
- RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N Thiophosphoric acid Chemical class OP(O)(S)=O RYYWUUFWQRZTIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100026893 Troponin T, cardiac muscle Human genes 0.000 description 1
- 101710165323 Troponin T, cardiac muscle Proteins 0.000 description 1
- 208000009982 Ventricular Dysfunction Diseases 0.000 description 1
- 206010047281 Ventricular arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 1
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 125000002015 acyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000002877 alkyl aryl group Chemical group 0.000 description 1
- HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N alpha-D-Furanose-Ribose Natural products OCC1OC(O)C(O)C1O HMFHBZSHGGEWLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002399 angioplasty Methods 0.000 description 1
- 230000003206 anti-remodeling effect Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 125000003710 aryl alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010009 beating Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000090 biomarker Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 125000001246 bromo group Chemical group Br* 0.000 description 1
- 108091006374 cAMP receptor proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000010805 cDNA synthesis kit Methods 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000036952 cancer formation Effects 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 230000003683 cardiac damage Effects 0.000 description 1
- 210000001054 cardiac fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N carperitide Chemical compound C([C@H]1C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@H](C(NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CSSC[C@@H](C(=O)N1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(O)=O)=O)[C@@H](C)CC)C1=CC=CC=C1 NSQLIUXCMFBZME-MPVJKSABSA-N 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000005754 cellular signaling Effects 0.000 description 1
- 230000004700 cellular uptake Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 125000001309 chloro group Chemical group Cl* 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 125000001651 cyanato group Chemical group [*]OC#N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 229940104302 cytosine Drugs 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008021 deposition Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011143 downstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 230000002526 effect on cardiovascular system Effects 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000003527 fibrinolytic agent Substances 0.000 description 1
- 230000003480 fibrinolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000011223 gene expression profiling Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 230000033083 heart process Effects 0.000 description 1
- 238000007489 histopathology method Methods 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 238000012744 immunostaining Methods 0.000 description 1
- 210000004263 induced pluripotent stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000012417 linear regression Methods 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 1
- 108010082117 matrigel Proteins 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 102000006240 membrane receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020004084 membrane receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000004005 microsphere Substances 0.000 description 1
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 1
- 125000001893 nitrooxy group Chemical group [O-][N+](=O)O* 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 230000009437 off-target effect Effects 0.000 description 1
- 239000012053 oil suspension Substances 0.000 description 1
- 125000001181 organosilyl group Chemical group [SiH3]* 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000008300 phosphoramidites Chemical class 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 1
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 230000034190 positive regulation of NF-kappaB transcription factor activity Effects 0.000 description 1
- 238000010149 post-hoc-test Methods 0.000 description 1
- 230000001124 posttranscriptional effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 1
- 108700015048 receptor decoy activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000008672 reprogramming Effects 0.000 description 1
- 230000012923 response to hydrostatic pressure Effects 0.000 description 1
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 210000005245 right atrium Anatomy 0.000 description 1
- 210000005241 right ventricle Anatomy 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 150000003384 small molecules Chemical class 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 1
- 238000001308 synthesis method Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940113082 thymine Drugs 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 108091006107 transcriptional repressors Proteins 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 125000000876 trifluoromethoxy group Chemical group FC(F)(F)O* 0.000 description 1
- 238000007492 two-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 229940035893 uracil Drugs 0.000 description 1
- 230000006815 ventricular dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 229940075420 xanthine Drugs 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
- A61K48/0083—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the administration regime
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K29/00—Other apparatus for animal husbandry
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/113—Non-coding nucleic acids modulating the expression of genes, e.g. antisense oligonucleotides; Antisense DNA or RNA; Triplex- forming oligonucleotides; Catalytic nucleic acids, e.g. ribozymes; Nucleic acids used in co-suppression or gene silencing
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/30—Animals modified by surgical methods
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/035—Animal model for multifactorial diseases
- A01K2267/0375—Animal model for cardiovascular diseases
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/14—Type of nucleic acid interfering N.A.
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2320/00—Applications; Uses
- C12N2320/30—Special therapeutic applications
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Electrotherapy Devices (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本発明は、ヒト又は動物対象の心臓細胞におけるYin Yang-1(Yy1)遺伝子の発現を、当該細胞における化合物の非存在下で観察される発現に対して減少させることができる化合物を含む組成物に関し、化合物は、Yy1遺伝子のRNA干渉(RNAi)であり、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)後の左室(LV)機能不全の治療方法における使用のためのものであり、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)の発症後12時間~7日の間に投与される。
Description
本発明は、生物医学分野、特に急性心筋梗塞後の左室機能不全の治療方法に関する。
急性心筋梗塞(acute myocardial infarction:AMI)に罹患している患者では、閉塞した冠動脈を開くことが、酸素供給を回復し、虚血性心筋損傷を制限するための最良の戦略である。しかし、一次血管形成術及び/又は線維素溶解薬に基づく再灌流療法は、症状発症後最初の12時間以内に行われた場合にのみ有効である[1]。残念なことに、患者のかなりの部分が適時に再灌流療法にアクセスせず、30分の遅延ごとに、1年で死亡リスクが相対的に7.5%増加する[2]。この死亡率の過剰は、虚血時間が梗塞サイズの主要な決定因子であり、心機能及び構造の病理学的変化をもたらすために説明される。これらの病理学的過程は有害な心臓リモデリングとして知られており、収縮不全、心腔拡張及び心筋異常を含む[3,4]。これらの過程の延長は、心不全(HF)、心室性不整脈及び短期及び長期の追跡調査における死亡への進行を決定する。したがって、AMI後の有害な心筋リモデリング及び心臓合併症を最小限に抑えるための新しい治療法の探索は、心血管医療における優先事項である。
腫瘍形成の可溶性抑制2(Soluble suppression of tumorigenesiss:sST2)は、インターロイキン1受容体ファミリーのメンバーであり、インターロイキン1受容体様1(IL1RL1)としても公知であり[5]、2つの主要なアイソフォーム:膜結合受容体(ST2リガンド[ST2L])及び可溶性ST2アイソフォーム(sST2)を有する[4]。sST2は、病的心臓過程に関連する固有のバイオマーカーである[6,7]。特に、AMIに罹患している患者では、sST2の循環濃度は、短期間(30日間)及び長期追跡調査においても、死亡のより高いリスク及びHFへの有害な心筋リモデリングの進行を繰り返し特定している[8-13]。
インターロイキン-33(IL-33)は、ST2Lと相互作用することによって[14]、IκBαリン酸化並びにNF-κBプロモーター活性の活性化の両方の遮断に関連する心臓保護的な抗リモデリング応答[7、15]を引き起こす[16]。循環中の増加した濃度のsST2は、膜結合ST2Lへのその結合を阻害することによって、IL-33に直接結合し、デコイ受容体として作用することができ、したがってIL-33の心臓保護作用を遮断し、そのような阻害は、心肥大、心筋線維症、及び心室機能不全をもたらす[7、15]。いくつかの実験研究は、心臓線維芽細胞及び心筋細胞の両方におけるIL-33及びsST2の発現が心臓ストレスに応答して増加したことを示している。Weinberg et al.は、2002年に、ST2が生体力学的ストレスに応答して最も高度に誘導された転写物であり、sST2及びST2L形態が、周期的歪みを受けた新生児心筋細胞で誘導されたことを決定した[10]。したがって、心筋梗塞モデルを使用して、本発明者らは、4週間後の心筋sST2レベルの増加が、炎症マーカー及び線維症マーカー等の心臓リモデリングマーカーと正に相関することを示した[17]。したがって、IL-33/ST2L経路を良好に調節することが治療選択肢として示唆されている[18]。
本発明者らは、ST2の可溶性形態及び膜形態が二重プロモーターの細胞特異的調節を介して発現されることを知っているが[10]、AMI後の特異的sST2発現に関連する分子要素は未知である。生体力学的歪み下での計算ゲノミクス及び新生児心筋細胞を使用して、本発明者らは、sST2の心臓発現に関連する転写因子としてYin yang-1(Yy1)を同定した[19]。このインビトロ研究では、内因性Yy1発現のサイレンシングは、sST2の発現及び放出の減少をもたらした[19]。全体として、これらの所見は、Yy1発現レベルを低下させることがAMI後の有望な抗有害心臓リモデリング療法であるという考えを支持する。
本発明は、AMI後の心機能障害及び有害な心筋リモデリングを改善するための新しい治療法を提供する。
Ibanez B,James S,Agewall S,Antunes MJ,Bucciarelli-Ducci C,Bueno H,Caforio ALP,Crea F,Goudevenos JA,Halvorsen S,Hindricks G,Kastrati A,Lenzen MJ,Prescott E,Roffi M,Valgimigli M,Varenhorst C,Vranckx P,Widimsky P,Baumbach A,Bugiardini R,Coman IM,Delgado V,Fitzsimons D,Gaemperli O,Gershlick AH,Gielen S,Harjola VP,Katus HA,Knuuti J,et al.2017 ESC Guidelines for the management of acute myocardial infarction in patients presenting with ST-segment elevation.Eur Heart J 2018;39:119-177.
De Luca G,Suryapranata H,Ottervanger J P.et al Time delay to treatment and mortality in primary angioplasty for acute myocardial infarction:every minute of delay counts.Circulation 2004;109:1223-1225.
Sutton MG,Sharpe N.Left ventricular remodeling after myocardial infarction:Pathophysiology and therapy.Circulation 2000;101:2981-2988.
Konstam MA,Kramer DG,Patel AR,Maron MS,Udelson JE.Left ventricular remodeling in heart failure:Current concepts in clinical significance and assessment.JACC Cardiovasc Imaging 2011;4:98-108.
Garlanda C,Dinarello CA,Mantovani A.The interleukin-1 family:back to the future.Immunity 2013;39:1003-18.
Pascual-Figal DA,Januzzi JL.The Biology of ST2:The International ST2 Consensus Panel.Am.J.Cardiol.2015;115:3B-7B.
Pascual-Figal DA,Lax A,Perez-Martinez MT,et al.Clinical relevance of sST2 in cardiac diseases.Clin Chem Lab Med 2016;54:29-35.
Weir RAP,Miller AM,Murphy GEJ,et al.Serum soluble ST2:a potential novel mediator in left ventricular and infarct remodeling after acute myocardial infarction.J Am Coll Cardiol 2010;55:243-50.
Biere L,Garcia G,Guillou S,et al.ST2 as a predictor of late ventricular remodeling after myocardial infarction.Int J Cardiol 2018;259:40-42.
Weinberg EO,Shimpo M,De Keulenaer GW,et al.Expression and regulation of ST2,an interleukin-1 receptor family member,in cardiomyocytes and myocardial infarction.Circulation 2002;106:2961-6.
Sabatine MS,Morrow DA,Higgins LJ,et al.Complementary roles for biomarkers of biomechanical strain ST2 and N-terminal prohormone B-type natriuretic peptide in patients with ST-elevation myocardial infarction.Circulation 2008;117:1936-44.
Shimpo M,Morrow DA,Weinberg EO,et al.Serum levels of the interleukin-1 receptor family member ST2 predict mortality and clinical outcome in acute myocardial infarction.Circulation 2004;109:2186-90.
Jenkins WS,Roger VL,Jaffe AS,et al.Prognostic Value of Soluble ST2 After Myocardial Infarction:A Community Perspective.Am J Med 2017;130:1112.e9-1112.e15.
Schmitz J,Owyang A,Oldham E,et al.IL-33,an interleukin-1-like cytokine that signals via the IL-1 receptor-related protein ST2 and induces T helper type 2-associated cytokines.Immunity 2005;23:479-90.
Seki K,Sanada S,Kudinova AY,et al.Interleukin-33 Prevents Apoptosis and Improves Survival After Experimental Myocardial Infarction Through ST2 Signaling.Circ.Hear.Fail.2009;2:684-691.
Sanada S,Hakuno D,Higgins LJ,Schreiter ER,McKenzie ANJ,Lee RT.IL-33 and ST2 comprise a critical biomechanically induced and cardioprotective signaling system.J.Clin.Invest.2007;117:1538-49.
Sanchez-Mas J,Lax A,Asensio-Lopez M,et al.Modulation of IL-33/ST2 system in post-infarction heart failure:correlation with cardiac remodeling markers.Eur.J.Clin.Invest.2014;44:643-51.
Kakkar R,Lee RT.The IL-33/ST2 pathway:therapeutic target and novel biomarker.Nat Rev Drug Discov 2008;7:827-40.
Asensio-Lopez MC,Lax A,Fernandez del Palacio MJ,et al.Yin-Yang 1 transcription factor modulates ST2 expression during adverse cardiac remodeling post-myocardial infarction.J.Mol.Cell.Cardiol.2019;130:216-233.
本発明の初期の態様は、ヒト又は動物対象の心臓細胞におけるYin Yang-1(Yy1)遺伝子の発現を、当該細胞における化合物の非存在下で観察される発現に対して減少させることができる化合物を含む組成物に関し、化合物は、Yy1遺伝子のRNA干渉(RNAi)であり、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)後の左室(LV)機能不全の治療方法における使用のためのものであり、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)の発症後12時間~7日の間に投与される。
好ましくは、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)の発症後1~7日の間に投与される。
より好ましくは、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)の発症後12時間~3日の間に投与される。更に好ましくは、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)の発症後1~3日の間に投与される。
更に好ましくは、当該組成物は、対象における心筋梗塞(AMI)の発症後3~7日の間に投与される。
好ましい実施形態では、組成物が対象において心筋梗塞(AMI)の発症後12時間~3日の間に投与されるか、又は対象において心筋梗塞(AMI)の発症後1~3日の間に投与される場合、当該組成物は、左室(LV)駆出率及び/又は短縮率の喪失を予防すること、治療すること、緩和すること、若しくは減少させることによって、並びに/あるいはMI誘発性心肥大を予防すること、治療すること、緩和すること、若しくは減少させることによって、対象における心筋梗塞(AMI)後のLV機能不全を治療する方法において使用するためのものである。
好ましい実施形態では、組成物が対象において心筋梗塞(AMI)の発症後1日~7日の間に投与されるか、又は対象において心筋梗塞(AMI)の発症後3~7日の間に投与される場合、当該組成物は、左室(LV)拡大を予防すること、治療すること、緩和すること、若しくは減少させることによって、対象における心筋梗塞(AMI)後のLV機能不全を治療する方法において使用するためのものである。
好ましい実施形態では、Yy1遺伝子の干渉RNA(RNAi)は、以下の化合物:センス配列番号1及びアンチセンス配列番号2を有する化合物1、センス配列番号3及びアンチセンス配列番号4を有する化合物2、センス配列番号5及びアンチセンス配列番号6を有する化合物3、センス配列番号7及びアンチセンス配列番号8を有する化合物4、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8の任意のものからなる群より選択されるsiRNAである。
好ましい実施形態では、化合物は静脈内投与される。
好ましい実施形態では、組成物は、以下の化合物:センス配列番号1及びアンチセンス配列番号2を有する化合物1、センス配列番号3及びアンチセンス配列番号4を有する化合物2、センス配列番号5及びアンチセンス配列番号6を有する化合物3、センス配列番号7及びアンチセンス配列番号8を有する化合物4、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8、又はこれらのオリゴヌクレオチドを発現するベクターの任意のものからなる群より選択されるsiRNAの治療有効量と、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物である。
本発明は、概して、内因性Yy1発現を抑制し、sST2の発現及び放出を減少させ、IL-33/ST2L軸に関連する心保護反応を促進する化合物に関し、特にYy1発現レベルを低下させる低分子干渉RNA(siRNA)、及び有害な心筋リモデリングの予防又は治療、特に心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害等のAMI後の心臓合併症の予防又は治療のための、AMIの2~48時間後のそれを必要とする対象へのこれらのsiRNAの投与に関する。全体として、これらの所見は、AMIの2時間以上後に再灌流療法の有効な代替治療を提供するという技術的問題を解決する。
また、本発明は更に、IL-33/ST2L軸、特に、AMIの12時間後~7日後に投与される左室機能不全の治療方法において、内因性Yy1の細胞における発現を下方制御するのに有効な量で、Yy1発現レベルを低下させる低分子干渉RNA(siRNA)に関連する心保護反応を促進する、sST2の発現及び放出の減少をもたらす内因性Yy1発現をサイレンシングする化合物を一般的に提供する。特に、AMI後最初の3日以内に開始される治療方法では、好ましくは肉眼的心肥大に関して、AMI誘発性心肥大を治療又は予防する。好ましくは、最初の7日以内に開始される治療方法では、好ましくは(Myh6に関連する)肥大関連マーカー遺伝子Myh7及びNppaのレベルに関して、AMI誘発性心肥大を治療又は予防する。好ましくは、最初の3日以内に開始される治療方法において、LV駆出率及び/又は短縮率の有意に低い低下に関して、LV収縮機能不全に対して治療又は保護する。好ましくは、AMI後最初の7日以内に開始される治療方法では、好ましくはLV拡張末期径及び収縮末期径並びに/あるいはLV拡張末期容積及び収縮末期容積のより低い増加に関して、LV拡大に対して治療又は保護する。
本明細書では、Yy1(Yin Yang-1)は、Yy1遺伝子によってコードされるヒトの転写抑制タンパク質であることに留意されたい(Shi Y et al.,Cell.1991 Oct 18;67(2):377-88;Zhu W et al.,Mamm Genome.1994 Apr;5(4):234-6)。
より好ましくは、本発明は、ヒト又は動物対象の心臓細胞における内因性Yy1の発現を、当該細胞における化合物の非存在下で観察される発現に対して下方制御する化合物であって、例えばsiRNA、好ましくはセンス配列番号1及びアンチセンス配列番号2を有する化合物1、センス配列番号3及びアンチセンス配列番号4を有する化合物2、センス配列番号5及びアンチセンス配列番号6を有する化合物3、センス配列番号7及びアンチセンス配列番号8を有する化合物4、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8として列挙される化合物に関し、AMI後の有害な心筋リモデリングの予防又は治療、特に心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害等のAMI後の心臓合併症の予防又は治療におけるこれらの化合物の使用に関し、これらの化合物は、AMIの発症の2~48時間後にそれを必要とする対象に投与される。好ましくは、そのような化合物は、AMIの4~48時間後に投与される。より好ましくは、AMIの6~48時間後である。更により好ましくは、AMI後12~48時間又は24~48時間である。更により好ましくは、AMI後2、4、6又は12~24時間後である。
また、本発明は、AMI後の12時間~7日、好ましくはAMI後の1~7日に投与される、左室機能不全の治療方法における上記化合物の使用に言及する。特に、AMI後最初の3日間、好ましくは12時間~3日間、より好ましくは1~3日間で開始される治療方法では、好ましくは肉眼的心肥大に関して、AMI誘発性心肥大を治療又は予防する。好ましくは、最初の7日間、好ましくは12時間~7日間、より好ましくは1~7日間に開始される治療方法では、好ましくは肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連する)及びNppaのレベルに関して、AMI誘発性心肥大に対して治療又は保護する。好ましくは、最初の3日間、好ましくは12時間~3日間、より好ましくは1~3日間に開始される治療方法では、LV駆出率及び/又は短縮率の有意に低い低下に関して、LV収縮機能不全に対して治療又は保護する。好ましくは、AMI後最初の7日間、好ましくは12時間~7日間、より好ましくは1~7日間で開始される治療方法では、好ましくはLV拡張末期径及び収縮末期径並びに/あるいはLV拡張末期容積及び収縮末期容積のより低い増加に関して、LV拡大に対して治療又は保護する。
本発明は更に、AMI後の上記の時間間隔の任意内に組成物を必要とする患者に当該組成物を投与することによって、AMI後の有害な心筋リモデリングに罹患している、特に、心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害等のAMI後の心臓合併症に罹患している患者において回復を促進するための組成物を調製するための、内因性Yy1の発現を下方制御する1つ又は複数の化合物、例えばsiRNA、好ましくはセンス配列番号1及びアンチセンス配列番号2を有する化合物1、センス配列番号3及びアンチセンス配列番号4を有する化合物2、センス配列番号5及びアンチセンス配列番号6を有する化合物3、並びにセンス配列番号7及びアンチセンス配列番号8を有する化合物4、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8として列挙されるものの治療有効用量の使用を提供する。
したがって、本発明は、ヒト又は動物対象の心臓細胞におけるインビボでの内因性Yy1の発現を、当該細胞における化合物の非存在下で観察される発現に対して阻害するための方法及び組成物を提供する。一般に、方法は、心臓細胞中の内因性Yy1を標的とし、生物学的条件下(心臓細胞内)で当該mRNAにハイブリダイズする又は相互作用する低分子干渉RNA(すなわち、siRNA)等のオリゴリボヌクレオチドを、RNA干渉機構によって内因性Yy1の発現を下方制御するのに十分な量で投与することを含む。
したがって、本発明によれば、内因性Yy1のsiRNA分子又は阻害剤は、AMIの発症後に以前に示された時間間隔内にこれらの薬物を投与することによって、AMI後に予防、治療又は回復を促進するための薬物として、それを必要とする患者において使用され得る。特に、これらの薬物は、AMI後の有害な心筋リモデリングを予防又は治療するために、特に心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害等のAMI後の心臓合併症を予防又は治療するために投与される。より具体的には、内因性Yy1のsiRNA分子又は阻害剤は、AMI後の12時間~7日、好ましくはAMI後の1~7日に投与される左室機能不全の治療方法に使用される。特に、AMI後最初の3日間、好ましくは12時間~3日間、より好ましくは1~3日間で開始される治療方法では、好ましくは肉眼的心肥大に関して、AMI誘発性心肥大を治療又は予防する。好ましくは、最初の7日間、好ましくは12時間~7日間、より好ましくは1~7日間に開始される治療方法では、好ましくは肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連する)及びNppaのレベルに関して、AMI誘発性心肥大に対して治療又は保護する。好ましくは、最初の3日間、好ましくは12時間~3日間、より好ましくは1~3日間に開始される治療方法では、LV駆出率及び/又は短縮率の有意に低い低下に関して、LV収縮機能不全に対して治療又は保護する。好ましくは、AMI後最初の7日間、好ましくは12時間~7日間、より好ましくは1~7日間で開始される治療方法では、好ましくはLV拡張末期径及び収縮末期径並びに/あるいはLV拡張末期容積及び収縮末期容積のより低い増加に関して、LV拡大に対して治療又は保護する。
したがって、本発明は、ヒト又は動物対象の心臓細胞における内因性Yy1の発現を、当該細胞における化合物の非存在下で観察される発現に対して下方制御する二本鎖オリゴリボヌクレオチド(siRNA)を提供する(本明細書における「本発明の化合物」又は「本発明のsiRNA」の後から)。本発明のsiRNA又は本発明の化合物は、センス鎖が内因性Yy1のmRNA配列に由来し、アンチセンス鎖がセンス鎖に相補的である二重鎖オリゴリボヌクレオチドである。一般に、標的mRNA配列からのいくらかの逸脱は、siRNA活性を損なうことなく許容される(例えば、Czauderna et al 2003 Nucleic Acids Research H(H),2705-2716を参照されたい)。本発明のsiRNAは、mRNAを破壊してもしなくても、転写後レベルで遺伝子発現を阻害する。理論に拘束されるものではないが、siRNAは、特異的な切断及び分解のためにmRNAを標的化し得、及び/又は標的化されたメッセージからの翻訳を阻害し得る。
一般に、本発明で使用されるsiRNAは、二本鎖構造を含むリボ核酸を含み、それによって、二本鎖構造は第1の鎖及び第2の鎖を含み、それによって、第1の鎖は連続したヌクレオチドの第1の伸長を含み、それによって、当該第1の伸長は標的核酸(内因性Yy1)に少なくとも部分的に相補的であり、第2の鎖は連続したヌクレオチドの第2の伸長を含み、それによって、当該第2の伸長は標的核酸(内因性Yy1)と少なくとも部分的に同一である。鎖は、糖及び/又はホスファート及び/又は塩基上で修飾されていてもよく、あるいは修飾されていなくてもよい。本発明の一実施形態では、当該第1の鎖及び/又は当該第2の鎖は、2’位に修飾を有する修飾ヌクレオチドの複数の群を含み、それにより、鎖内で、修飾ヌクレオチドの各群は、隣接するヌクレオチド群と片側又は両側で隣接し、それにより、ヌクレオチドの隣接群を形成する隣接ヌクレオチドは、未修飾ヌクレオチド又は修飾ヌクレオチドの修飾とは異なる修飾を有するヌクレオチドのいずれかである。更に、当該第1の鎖及び/又は当該第2の鎖は、当該複数の修飾ヌクレオチドを含んでもよく、当該複数の修飾ヌクレオチド群を含んでもよい。
修飾されたヌクレオチドの群及び/又は隣接するヌクレオチドの群は、多数のヌクレオチドを含み得、それによって、その数は、1ヌクレオチド~10ヌクレオチドを含む群から選択される。本明細書で指定される任意の範囲に関連して、各範囲は、当該範囲を定義する当該2つの図を含む範囲を定義するために使用されるそれぞれの図の間の任意の個々の整数を開示することを理解されたい。したがって、この場合、群は、1ヌクレオチド、2ヌクレオチド、3ヌクレオチド、4ヌクレオチド、5ヌクレオチド、6ヌクレオチド、7ヌクレオチド、8ヌクレオチド、9ヌクレオチド及び10ヌクレオチドを含む。
当該第1の鎖の修飾ヌクレオチドのパターンは、第2の鎖の修飾ヌクレオチドのパターンに対して1つ以上のヌクレオチドだけシフトされ得る。
上に論じられる修飾は、アミノ、フルオロ、メトキシアルコキシ、アルキル、アミノ、フルオロ、クロロ、ブロモ、CN、CF、イミダゾール、カルボキシレート、チオエート、Ci~Cio低級アルキル、置換低級アルキル、アルカリル又はアラルキル、OCF3、OCN、O-、S-又はN-アルキル;O-、S-又はN-アルケニル;SOCH3;SO2CH3;ONO2;NO2、N3;ヘテロジクロアルキル;ヘテロジクロアルカリル;アミノアルキルアミノ;とりわけ、欧州特許第586 520号又は欧州特許第618 925号に記載されているような、ポリアルキルアミノ又は置換シリルを含む群から選択され得る。
siRNAの二本鎖構造は、片側又は両側が平滑末端であってもよい。より具体的には、二本鎖構造は、第1の鎖の5’-末端及び第2の鎖の3’-末端によって規定される二本鎖構造側で平滑末端であってもよく、又は二本鎖構造は、第1の鎖の3’-末端及び第2の鎖の5’-末端によって規定される二本鎖構造側で平滑末端であってもよい。
更に、2つの鎖のうちの少なくとも1つは、5’-末端に少なくとも1つのヌクレオチドのオーバーハングを有し得、オーバーハングは、少なくとも1つのデオキシリボヌクレオチドからなり得る。鎖の少なくとも1つは、3’-末端に少なくとも1つのヌクレオチドのオーバーハングを有していてもよい。siRNAの二本鎖構造の長さは、典型的には約17~27塩基、より好ましくは19又は21塩基である。更に、当該第一の鎖の長さ及び/又は当該第二の鎖の長さは、互いに独立して、約15~約27塩基、17~21塩基及び18又は19塩基の範囲を含む群から選択されてもよい。具体例は27塩基である。更に、当該第1の鎖と標的核酸との間の相補性は完全であってもよく、又は第1の鎖と標的核酸との間に形成される二重鎖は、少なくとも15ヌクレオチドを含み得、当該第1の鎖と当該二本鎖構造を形成する標的核酸との間には、1つのミスマッチ又は2つのミスマッチがある。
いくつかの場合、第1鎖及び第2鎖の両方はそれぞれ、少なくとも1つの修飾ヌクレオチドの群及び少なくとも1つの隣接するヌクレオチドの群を含み、それによって、修飾ヌクレオチドの各群は少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって、ヌクレオチドの各隣接する群は、第1鎖の修飾ヌクレオチドの各群が第2鎖の隣接するヌクレオチドの群と整列している、少なくとも1つのヌクレオチドを含み、それによって、第1鎖の最末端5’ヌクレオチドは修飾ヌクレオチドの群のヌクレオチドであり、第2鎖の最末端3’ヌクレオチドは、ヌクレオチドの隣接する群のヌクレオチドである。修飾ヌクレオチドの各群は、単一ヌクレオチドからなり得、及び/又はヌクレオチドの各隣接群は、単一ヌクレオチドからなり得る。
更に、第1の鎖では、ヌクレオチドの隣接基を形成するヌクレオチドは、修飾ヌクレオチドの群を形成するヌクレオチドに対して3’方向に配置された非修飾ヌクレオチドであり、第2の鎖では、修飾ヌクレオチドの群を形成するヌクレオチドは、ヌクレオチドの隣接基を形成するヌクレオチドに対して5’方向に配置された修飾ヌクレオチドであることが可能である。
更に、siRNAの第一鎖は、8~12個、好ましくは9~11個の修飾ヌクレオチドの群を含み得、第二鎖は、7~11個、好ましくは8~10個の修飾ヌクレオチドの群を含み得る。
第1の鎖及び第2の鎖は、とりわけポリエチレングリコール等の非核酸ポリマーから構成され得るループ構造によって連結され得る。あるいは、ループ構造は核酸から構成されてもよい。
更に、siRNAの第1の鎖の5’末端は、第2の鎖の3’末端に連結されていてもよく、又は第1の鎖の3’末端は、第2の鎖の5’末端に連結されていてもよく、当該連結は、典型的には10~2000個の核酸塩基の長さを有する核酸リンカーを介している。
特に、以前に既に示したように、本発明は、センス配列番号1及びアンチセンス配列番号2を有する化合物1、センス配列番号3及びアンチセンス配列番号4を有する化合物2、センス配列番号5及びアンチセンス配列番号6を有する化合物3、並びにセンス配列番号7及びアンチセンス配列番号8を有する化合物4、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8からなる群より選択される本発明の化合物又は本発明のsiRNAを提供し、これらの化合物の任意のものは、本明細書全体を通して示される修飾の任意のものを含んでいてもよい。好ましくは、本発明は、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8からなる群より選択される本発明の化合物又は本発明のsiRNAを提供し、これらの化合物のいずれも、本明細書全体を通して示される修飾の任意のものを含んでいてもよい。
したがって、本発明の化合物は、共有結合によって連結された複数のヌクレオチドからなることが当業者によって容易に理解されるであろう。そのような各共有結合は、個々の鎖のヌクレオチド配列の長さに沿って、ホスホジエステル結合、ホスホロチオエート結合、又はその両方の組合わせであり得る。他の可能な骨格修飾は、とりわけ米国特許第5,587,361号、同第6,242,589号、同第6,277,967号、同第6,326,358号、同第5,399,676号、同第5,489,677号、及び同第5,596,086号に記載される。
本発明は更に、前述のオリゴリボヌクレオチドのどれかを非修飾形態で細胞において発現させることができ、その後に適切な修飾を行うことができるベクターを提供する。
本発明はまた、1つ又は複数の本発明の化合物又は本発明のsiRNAを担体、好ましくは薬学的に許容される担体中に含む組成物を提供する。この組成物は、2つ以上の異なるsiRNAの混合物を含み得る。
より具体的には、本発明は、担体と、内因性Yy1の細胞における発現を下方制御するのに有効な量の本発明の化合物の1つ以上と、を含む組成物を提供する。特に、既に示し、実施例2で説明したように、図11に示す実験データは、担体と、内因性Yy1の細胞における発現を下方制御するのに有効な量の本発明の化合物の1つ又は複数と、を含む任意の組成物を用いたsiYy1療法が、最初の3日以内に開始された場合、肉眼的心肥大(a)、HW/BW比(b)に関して、MI誘発性心肥大から保護したことを示している。最初の7日以内にsiYy1療法を開始した場合、肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連する)及びNppa(c)のレベルに関して、MI誘発性心肥大から保護した。14日目に開始されたsiYy1治療は効果がなかった。図12は、最初の3日以内に開始されたsiYy1治療が、LV駆出率(a)及び短縮率(b)の有意に低い低下に関してLV収縮機能不全に対して保護し、最初の7日以内に開始されたsiYy1治療は、LV拡張末期径及び収縮末期径(c、d)、並びにLV拡張末期容積及び収縮末期容積(e,f)のより低い増加に関してLV拡大に対して保護したことを示す。14日目に開始されたsiYy1治療は効果がなかった。図13は、最初の7日以内に開始されたsiYy1療法が、有意に低いシリウスレッド染色(a)(パネルbの代表的な画像)並びに有意に低いレベルの異なる線維症関連マーカー遺伝子調節解除(TGF-β、α-sma、Col1a1及びCol3a1)(c~f)に関して、梗塞心筋における線維症に対して保護したことを示す。14日目に開始した治療は効果がなかった。図14は、最初の7日以内に開始したsiYy1療法が、より低レベルのCD45陽性染色(a)(パネルbの代表的な画像)及び炎症関連特異的マーカー(c~d)に関して、梗塞心筋における炎症に対して保護したことを示す。14日目に開始した治療は効果がなかった。図15は、最初の7日以内に開始されたsiYy1療法が、カスパーゼ3タンパク質レベルの有意に低い増加(a)、並びにBNP及びMyO mRNAレベルの有意に低い増加(c~d)に関して、細胞死に対して保護したことを示す。図16は、siYy1療法がヒトiP由来心筋細胞の伸展誘導性肥大を予防することを示す。対照群(Scr)と比較して、ヒトiP由来心筋細胞(hiPsCM)におけるYy1 mRNAレベルは、伸張後に上昇し(PMA+Scr)(p<0.001)、siYy1療法によって有意に低下した(siYy1+PMA)(p<0.001)(a)。更に、siYy1療法は、肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連する)及びNppa(b、c)のレベルに関して、ストレッチング誘発性心肥大から保護した。
したがって、本発明は、急性心筋梗塞後の左室(LV)機能不全を患者においてAMIの12時間後~7日後に治療する方法であって、本発明に記載の化合物又は組成物を治療有効用量で患者に投与し、それにより患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法を提供する。好ましくは、方法はAMIの1~7日後に投与される。より好ましくは、AMIの12時間後~3日後、好ましくはAMIの1~3日後である。また好ましくは、AMIの3~7日後である。
本発明は更に、AMI後の有害な心筋リモデリングを治療する方法、特にAMI後の心臓合併症、例えば心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害を予防又は治療する方法、より詳細には急性心筋梗塞後、AMIの2~48時間後に左室機能不全を治療する方法であって、本発明に記載の化合物又は組成物を治療有効用量で患者に投与し、それにより患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法を更に提供する。好ましくは、この方法はAMIの4~48時間後に投与される。より好ましくは、AMIの6~48時間後である。更により好ましくは、AMI後12~48時間又は24~48時間である。更により好ましくは、AMI語2、4、6又は12~24時間後である。
本発明は、急性心筋梗塞後の左室(LV)機能不全を患者においてAMIの12時間後~7日後に治療する方法であって、本発明に記載の化合物又は組成物を治療有効用量で患者に投与し、それにより患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法を更に提供する。好ましくは、方法はAMIの1~7日後に投与される。より好ましくは、AMIの12時間後~3日後、好ましくはAMIの1~3日後である。更により好ましくは、AMIの3~7日後である。
好ましい実施形態では、本発明は、急性心筋梗塞後の左室(LV)機能不全を、好ましくは患者のAMIの12~72時間後に、LV駆出率及び/又は短縮率の減少を予防、治療、緩和又は低減することによって治療する方法であって、本発明に記載の化合物又は組成物を治療有効用量で患者に投与し、それにより患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法を提供する。好ましくは、この方法はAMIの24~72時間後に投与される。より好ましくは、AMIの36~72時間後である。更により好ましくは、AMIの48~72時間後である。
好ましい実施形態では、本発明は、急性心筋梗塞後の左室(LV)機能不全を、好ましくは患者のAMIの12~72時間後に、好ましくは肉眼的心肥大に関して、MI誘発性心肥大を予防、治療、緩和、又は減少させることによって治療する方法であって、本発明に記載の化合物又は組成物を治療有効用量で患者に投与し、それにより患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法を提供する。好ましくは、この方法はAMIの24~72時間後に投与される。より好ましくは、AMIの36~72時間後である。更により好ましくは、AMIの48~72時間後である。
好ましい実施形態では、本発明は、好ましくは、患者のAMI後AMI後3~7日目の、好ましくはLV拡張末期径及び収縮末期径並びに/あるいはLV拡張末期容積及び収縮末期容積のより低い増加に関して、好ましくは、LV拡大を予防、治療、緩和、又は減少させることによって、急性心筋梗塞後の左室(LV)機能不全を治療する方法であって、本発明に記載の化合物又は組成物を治療有効用量で患者に投与し、それによって患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法を提供する。
送達:哺乳動物細胞へのsiRNAの送達の増強及び改善を特に目的とした送達系が開発されている。例えば、Shen et al(FEBS letters 539:111-114(2003)),Xia et al.,Nature Biotechnology 20:1006-1010(2002),Reich et al.,Molecular Vision 9:210-216(2003),Sorensen et al.(J.Mol.Biol.327:761-766(2003),Lewis et al.,Nature Genetics 32:107-108(2002)and Simeoni et al.,Nucleic Acids Research 31,11:2717-2724(2003)を参照されたい。siRNAは、霊長類における阻害のために首尾よく使用されており、更なる詳細については、Tolentino et al.,Retina 24(1)February 2004 I 132-138.Respirator}’を参照されたく、siRNAは、Davis et al.の米国特許出願第2004/0063654号に記載されており、コレステロール結合siRNA(及び他のステロイド及び脂質結合siRNA)は、送達に使用することができ、Soutschek et al Nature 432:173-177(2004).Therapeutic silencing of an endogenous gene by systemic administration of modified siRNAs;及びLorenz et al.Bioorg.Med.Chemistry.Lett.14:4975-4977(2004)Steroid and lipid conjugates of siRNAs to enhance cellular uptake and gene silencing in liver cellsを参照されたい。
本発明の化合物、siRNA又は医薬組成物は、個々の患者の臨床状態、投与の部位及び方法、投与のスケジュール、患者の年齢、性別、体重、及び医療従事者に知られている他の要因を考慮して、優良医療行為に従って投与及び投薬される。
したがって、本明細書の目的のための「治療有効用量」は、当技術分野で知られているような考慮事項によって決定される。用量は、生存率の改善若しくはより迅速な回復、又は当業者によって適切な手段として選択されるような症状及び他の指標の改善若しくは排除を含むがこれらに限定されない改善を達成するのに有効でなければならない。本発明の化合物は、従来の投与経路の任意のものによって投与することができる。化合物は、化合物として又は薬学的に許容される塩として投与することができ、単独で、又は薬学的に許容される担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクルと組み合わせて有効成分として投与することができることに留意すべきである。化合物は、経口、皮下、又は静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、及び鼻腔内投与、並びに髄腔内及び注入技術を含む非経口投与することができる。好ましくは、本発明の化合物、siRNA又は医薬組成物は、非経口的に、好ましくは静脈内経路によって投与される。
化合物のインプラントも有用である。注射用に液体形態を調製することができ、この用語は、皮下、経皮、静脈内、筋肉内、髄腔内及び他の親投与経路を含む。液体組成物は、有機共溶媒を含む及び含まない水溶液、水性又は油懸濁液、食用油を含むエマルジョン、並びに同様の医薬ビヒクルを含む。更に、特定の状況下では、本発明の新規な治療に使用するための組成物は、エアロゾルとして、鼻腔内投与等のために形成され得る。治療される患者は、温血動物、特にヒトを含む哺乳動物である。薬学的に許容される担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント及びビヒクル並びにインプラントイヤナーは、一般に、本発明の活性成分と反応しない不活性、非毒性の固体又は液体充填剤、希釈剤又は封入材料を指し、リポソーム及びミクロスフェアを含む。本発明において有用な送達システムの例としては、米国特許第5,225,182号、同第5,169,383号、同第5,167,616号、同第4,959,217号、同第4,925,678号、同第4,487,603号、同第4,486,194号、同第4,447,233号、同第4,447,224号、同第4,439,196号、及び同第4,475,196号が挙げられる。他の多くのそのようなインプラント、送達システム、及びモジュールは、当業者に周知である。本発明の1つの特定の実施形態では、局部製剤及び経皮製剤が特に好ましい。
一般に、ヒトに対する化合物の活性用量は、1mg/kg~約20~100mg/kg体重/日、好ましくは約0.01mg~約2~10mg/kg体重/日の範囲である。
本明細書で使用される「治療」という用語は、疾患に関連する症状を改善する、疾患の重症度を低下させる若しくは疾患を治癒させる、又は疾患の発生を予防するのに有効な治療物質の投与を指す。特定の実施形態では、投与は静脈内投与を含む。別の特定の実施形態では、投与は局部投与又は局所投与を含む。
本発明の別の態様は、AMI後の本明細書全体を通して示される時間間隔内の心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害を患者において治療する方法であって、治療有効量の本発明の医薬組成物を患者に投与し、それにより患者を予防的又は治療的に処置することを含む方法である。
本発明の別の態様では、これらのオリゴヌクレオチドを発現する化合物1~3又はベクターの任意のものと、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物が提供される。本発明の別の態様は、AMI後の本明細書全体を通して示される時間間隔内に、心筋線維症、心臓炎症、心肥大及び/又は機能障害に罹患している患者の回復を促進するための医薬品を調製するための治療有効量の任意の上記オリゴリボヌクレオチド又はベクターのいずれかの使用である。
本発明はまた、本発明の1つ以上の化合物を薬学的に許容される担体と混合することを含む、医薬組成物を調製するプロセスを提供する。
好ましい実施形態では、医薬組成物の調製に使用される化合物は、薬学的に有効な用量で担体と混合される。特定の実施形態では、本発明の化合物は、ステロイド又は脂質あるいは別の適切な分子、例えばコレステロールにコンジュゲートされる。
ヌクレオチドの治療特性を改善するために、ヌクレオチドの修飾又は類似体を導入することができる。改善された特性には、ヌクレアーゼ耐性の増加及び/又は細胞膜透過能の増加が含まれる。
したがって、本発明はまた、ポリヌクレオチド又はオリゴヌクレオチドの機能に実質的に影響を及ぼさない本発明のオリゴヌクレオチドの全ての類似体又は修飾体を含む。好ましい実施形態では、そのような修飾は、ヌクレオチドの塩基部分、ヌクレオチドの糖部分及び/又はヌクレオチドのリン酸部分に関する。
本発明の実施形態では、ヌクレオチドは、天然に存在する塩基又は合成的に修飾された塩基から選択することができる。天然に存在する塩基としては、アデニン、グアニン、シトシン、チミン及びウラシルが挙げられる。オリゴヌクレオチドの修飾塩基としては、イノシン、キサンチン、ヒポキサンチン、2-アミノアデニン、6-メチル-、2-プロピル-及び他のアルキルアデニン、5-ハロウラシル、5-ハロシトシン、6-アザ-シトシン及び6-アザ-チミン、偽ウラシル、4-チウラシル、8-ハロアデニン、8-アミノアデニン、8-チオールアデニン、8-チオールアルキルアデニン、8-ヒドロキシルアデニン及び他の8-置換アデニン、8-ハログアニン、8-アルニノグアニン、8-チオールグアニン、8-チオアルキルグアニン、8-ヒドロキシルグアニン及び他の置換グアニン、他のアザ及びデアザアデニン、他のアザ及びデアザグアニン、5-トリフルオロメチルウラシル及び5-トリフルオロシトシンが挙げられる。
更に、ヌクレオチドの構造が根本的に変化しており、治療試薬又は実験試薬としてより適しているヌクレオチドの類似体を調製することができる。ヌクレオチド類似体の例は、DNA(又はRNA)中のデオキシリボース(又はリボース)リン酸骨格が、ペプチドに見られるものと同様のポリアミド骨格で置き換えられているペプチド核酸(PNA)である。PNA類似体は、酵素による分解に耐性であり、インビボ及びインビトロで長寿命であることが示されている。更に、PNAは、DNA分子よりも相補的DNA配列により強く結合することが示されている。この観察は、PNA鎖とDNA鎖との間の電荷反発の欠如に起因する。オリゴヌクレオチドに行うことができる他の修飾としては、ポリマー骨格、環状骨格、又は非環状骨格が挙げられる。
一実施形態では、修飾は、リン酸部分の修飾であり、修飾リン酸部分は、ホスホロチオエートを含む群から選択される。
本発明の化合物は、リボ核酸(又はデオキシリボ核酸)オリゴヌクレオチドを合成するための当技術分野で周知の任意の方法によって合成することができる。そのような合成は、とりわけ、Beaucage S.L.and Iyer R.P.,Tetrahedron 1992;48:2223-2311,Beaucage SX.and Iyer R.P.,Tetrahedron 1993;49:6123-6194及びCaruthers M.H.et al.,Methods Enzymol.1987;154:287-313に記載されており、チオエートの合成は、とりわけ、Eckstein F.,Annu.Rev.Biochem.1985;54:367-402に記載されており、RNA分子の合成は、Sproat B.,in Humana Press 2005 Edited by Herdewijn P.;Kap.2:17-31に記載されており、それぞれの下流プロセスは、とりわけ、Pingoud A.et.al.,in IRL Press 1989 Edited by Oliver R.W.A.;Kap.7:183-208 and Sproat B.,in Humana Press 2005 Edited by Herdewijn P.;Kap.2:17-31(前出)に記載されている。
他の合成手順、例えば、Usman et al.,1987,J.Am.Chem.Soc,109,7845;Scaringe et al.,1990,Nucleic Acids Res.,18,5433;Wincott et al.,1995,Nucleic Acids Res.23,2677-2684;及びWincott et al.,1997,Methods MoI.Bio.,74,59に記載されているような手順が当該分野で知られており、これらの手順は、5’末端のジメトキシトリチル及び3末端のホスホラミダイト等の一般的な核酸保護及びカップリング基を利用することができる。修飾(例えば、2’-O-メチル化)ヌクレオチド及び非修飾ヌクレオチドは、所望に応じて組み込まれる。
本発明のオリゴヌクレオチドは、別々に合成することができ、例えばライゲーション(Moore et al.,1992,Science 256,9923;Draper et al.,国際公開第93/23569号;Shabarova et al.,1991,Nucleic Acids Research 19,4247;Bellon et al.,1997,Nucleosides Sc Nucleotides,16,951;Bellon et al.,1997,Bioconjugate Chem.8,204)によって、あるいは合成及び/又は脱保護後のハイブリダイゼーションによって、合成後に一緒に結合させることができる。
市販の機械(とりわけ、Applied Biosystemsから入手可能である)を用いてもよく、オリゴヌクレオチドは、本明細書に開示される配列に従って調製されることに留意されたい。重複する化学合成されたフラグメントの対は、当技術分野で周知の方法(例えば、米国特許第6,121,426号を参照されたい)を使用して連結することができる。鎖は別々に合成され、次いでチューブ内で互いにアニーリングされる。次いで、HPLCによってアニールされなかった一本鎖オリゴヌクレオチド(例えば、それらのうちの1つが過剰であるために)から二本鎖siRNAを分離する。本発明のsiRNA又はsiRNA断片に関して、2つ以上のそのような配列を合成し、本発明で使用するために一緒に連結することができる。
本発明の化合物は、米国特許出願公開第2004/0019001号明細書(McSwiggen)に記載されているように、タンデム合成法を介して合成することもでき、ここで、両方のsiRNA鎖は、切断可能なリンカーによって分離された単一の連続するオリゴヌクレオチドフラグメント又は鎖として合成され、その後切断されて、siRNA二重鎖にハイブリダイズし、その精製を可能にする別個のsiRNAフラグメント又は鎖を提供する。リンカーは、ポリヌクレオチドリンカー又は非ヌクレオチドリンカーであり得る。
本発明の化合物は、直接又はウイルスベクター若しくは非ウイルスベクターを用いてのいずれかで送達することができる。直接送達される場合、配列は一般にヌクレアーゼ耐性にされる。あるいは、配列は、本明細書において下で議論されるように、その配列が細胞において発現されるように、発現カセット又は構築物に組み込まれ得る。一般に、構築物は、標的細胞において配列が発現されることを可能にする適切な調節配列又はプロモーターを含む。本発明の化合物の送達のために場合により使用されるベクターは市販されており、当業者に公知の方法によって本発明の化合物の送達の目的のために改変され得る。
以下の実施例は、本発明を例示するが、本発明を限定するものではない。
実施例1.
材料及び方法
材料及び方法
動物のケア及び倫理的側面。C57Bl/6J雄マウス(体重25~30g)をJackson Laboratoryから購入した。マウスを、12時間の明暗サイクルを用いて23±2℃で50±5%の相対湿度を有する特定の病原体のない環境に収容した。マウスは、食物及び水を自由に摂取することができた。全ての動物実験は、University of Murciaの動物使用に関する倫理審査委員会によって承認された(許可番号:A13150105)。7日の適応後、動物に外科的処置を施して、全身Yy1遺伝子サイレンシングの前にAMIを誘導した。動物を無作為に6つの群に分けた(群及び実験計画を参照のこと)。
マウスにおける実験的AMIの誘導。外科的処置の前に、動物を腹腔内ケタミン(75mg/kg)及びメデトミジン(0.5mg/kg)で麻酔した後、18ゲージ静脈内カテーテルで挿管及び換気し、温調パッド上で仰臥位で置いた。動物を、皮下に挿入した小型針を通して四肢に接続した心電図(ECG)電極によって監視した。左側開胸術を、第3及び第4の肋間腔の間の小さな切開によって行った。切開は、肺が収縮領域で回避されるように、鈍端レトラクタによって拡張された。心臓を取り囲む心膜を切開したが、心臓は露出しなかった。左前下行枝(LAD)の結紮部位を、起点から4mm離して決定した。先細の非外傷性針を使用して、8-0絹結紮糸をLADの下に通し、3つの結び目で結紮した。左室の前壁の目に見えるブランチング及びチアノーゼ並びに左心房の腫脹を、結紮の成功を示すものとみなした。ECGがST上昇を示し、左室の前壁がブランチングになった場合、処置は成功したとみなされた。6-0ビクリル溶解縫合糸を使用して肋骨及び筋肉を閉じ、胸腔内に残った空気を吸引するための小さな隙間を残した。再び肺に触れることなく、空気をインハウスのチューブ(直径2mm)によって吸引した。閉鎖時に、ネオマイシン粉末及びベタジンを筋肉及び皮膚の縫合部位にそれぞれ適用した。手術部位は、あらゆる感染を回避し、縫合部位のあらゆる裂開を監視するために毎日整えられた。麻酔の導入から20分以内に全手順を実施した。偽手術ラットは、結紮なしで同じ手順を受けた。手術後、動物にブプレノルフィン(0.05mg/kg、皮下)を8時間間隔で4回投与した。偽群は、LAD冠動脈を閉塞しなかったことを除いて、同じ外科的処置を受けた。心電図モニタリングを使用して、AMI誘導後のSTセグメント上昇を確認した。心臓損傷の進展を評価するために、手術前、並びにAMIの24時間後、1週間後及び4週間後に、各マウスに対して心エコー検査を実施した(16)。
実験設計及び試験プロトコル。AMI後24回、生存動物を無作為に6つの実験群にリンスした。(1)静脈内経路によりPBSで処置した偽群(偽群PBS、n=10);(2)静脈内経路によりsiControl(siCtrl、表3参照)で処置した偽群(偽群siCtrl、n=10);(3)siYy1で処置した偽群(「siYy1」という用語は、本明細書では、静脈内経路(偽群siYy1、n=10)によって内因性Yy1レベル(表3の化合物1~4)をサイレントにする4つの特異的siRNA配列によって形成されたプールと理解されるものとする);(4)プラセボ(PBS)を静脈内経路により処置した梗塞群(AMI群PBS、n=10);(5)静脈内経路によりsiControl(siCtrl)で処置した梗塞群(AMI群siCtrl、n=10);(6)静脈内経路によってsiYy1で処置した梗塞群(AMI群siYy1、n=10)。動物は、屠殺するまで(AMIの4週間後)上記の条件に維持した。
マウスにおける内因性Yin-Yang1転写因子サイレンシング。内因性Yy1因子発現レベルがサイレンスである実験モデルを生成するために、マウスに4つの特異的干渉RNA配列の混合物(表3の化合物1~4)をトランスフェクトした。AMIの24時間後に、動物の尾静脈を通して静脈内注入を行った。Yy1転写因子(カスタムsiRNA、インビボHPLC Accell)に対するsiRNA配列をDharmacon(A-050273-13、-14、-15及び-16)から取得し、AMI後の1、7及び14日目に6mg/kgの3つの独立した用量で一緒に投与したところ、累積最終濃度は18mg/kgとなった。実験手順の概要を図2aに示す。手短に言えば、使用直前に、GE Healthcare(B-005000)のAccell siRNA Delivery Mediaを使用して、4つのsiRNAのそれぞれ1つの75μgを混合した。マウス特異的Yy1転写因子及び非標的化Accell siRNA配列(siCtrl)の両方の標的配列を以下の表3に示す。
LV構造及び機能。経胸壁心エコー検査(2D及びMモード心エコー検査)を、手術前(ベースライン)、AMI後24時間及びAMI後4週間に、Vevo機械及び13MHzプローブ(MJFP)を使用して麻酔したマウス(1.8%イソフルラン、吸入)で行った。四腔長軸図から、収縮末期(LVEsV)及び拡張末期左室(LVEdV)容積をシンプソン法によって決定し、駆出率(EF)をEF(%)=LVEdV-LVEsV/LVEdV×100として自動的に決定した。僧帽弁の腱索のレベルで、左室拡張末期径(LVEdD)及び収縮末期径(LVEsD)の測定をMモードによって行った。データを表1に列挙する。データを分析した研究者は、実験群を盲検化した。
新鮮な梗塞心室(約20mg)を冷DPBSで洗浄した。次いで、試料を予め冷却したガラスペトリ皿に入れ、鋭利なハサミを使用して氷浴中で細断した。RNA単離及び定量的リアルタイムPCRを、わずかな修正を加えた製造業者のプロトコルに従って実施した(15)。定量的リアルタイムPCR分析に使用したプライマー配列を表2に記載する。
データを平均±平均の標準誤差として表した。Kolmogorov-Smirnov検定を用いて正常性を試験した。全ての群間の差をKruskal-Wallis検定で試験した。偽群との多重比較のために、Siegel-Castellan検定を使用した。非パラメトリック相関を、梗塞動物においてのみ、Kendallの方法に従って試験した。統計学的有意性はp<0.05と仮定した。SPSS統計22(IBM Corp.,Armonk,NY,USA)を使用してデータを統計的に分析した。グラフ化は、SigmaPlot 11.0ソフトウェアを使用して行った。0.05未満のP値を統計学的に有意とみなした。
結果
AMIはYin yang-1(Yy1)転写因子の上方制御を誘導する
結果
AMIはYin yang-1(Yy1)転写因子の上方制御を誘導する
最初に、梗塞マウス及び非梗塞マウスの左室(LV)から抽出された全RNA中のYy1レベルを定量化した(図1)。図1aに示すように、LV梗塞領域のYy1 mRNAレベルは、AMIから1週間後に有意に増加し(p<0.01)、期間を4週間に延長した場合より高い増加であった(p<0.001)(図1a)。Yy1 mRNAの増加は、遠隔LV領域では生じなかった(図1b)。
Yy1転写因子の遺伝的欠損はAMI後の有害な心臓リモデリングを防止する
Yy1転写因子の遺伝的欠損はAMI後の有害な心臓リモデリングを防止する
次に、特定のsiRNAによるYy1レベル及び活性の減少がインビトロで新生児心筋細胞の肥大を予防したという観察から開始して(15)、Yy1の全体的な遺伝子欠失がAMI後の病理学的心臓リモデリングを予防するかどうかを問うた。図2aに示すように、及び上記のように、AMI誘発後、STセグメント上昇直後に、siYy1療法を開始した。梗塞したLV領域(AMI+siCtrl群)のYy1 mRNAレベルを評価すると、偽群(Sham+siCtrl群)で得られたmRNAレベルと比較して、動物をsiYy1で治療した場合に予防される有意な増加(p<0.001)が観察された(AMI+siYy1対AMI+siCtrl;p<0.001)(図2b)。
重要なことに、siYy1で処置した梗塞マウスは、AMI誘発性心肥大及び機能障害から保護された。処置動物は、より良好な心機能(図3)(p<0.001)、より低い肉眼的心肥大(すなわち、心臓重量)(p<0.001)(図4a)、より低いレベルの肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連)及びNppa(p<0.001、いずれの場合も)(図4b~c)、並びにより低い心筋細胞肥大(p<0.01)を示した(図4d)。
注目すべきことに、線維症関連マーカー遺伝子の調節解除によって決定されるように、心筋線維症もこれらのsiYy1欠損マウスにおいて減少した(図5a~f)。シリウスレッド及びマッソン染色により、これらの保護結果が確認された(図5g)。
AMI後の心臓炎症に対するsiYy1療法の効果を評価した場合、同様の効果が得られた。再び、siYy1療法は、炎症関連マーカー遺伝子の調節解除の点でAMI後の有害炎症を予防した(図6)。
次に、心筋死に関する実験を行った。図7に示すように、AMIは梗塞したLV心筋の細胞死を誘導し、これはMyO(p<0.001)、H-FABP(p<0.001)及びBNP mRNAレベル(p<0.001)の有意な増加を特徴とする(図7)。siYy1療法はこの増加を予防した(p<0.001、全ての場合)。
siYy1療法の保護的心臓効果は、IL-33/ST2軸の調節に関連する。
siYy1療法の保護的心臓効果は、IL-33/ST2軸の調節に関連する。
次に、インビボでの心臓リモデリング中のsiYy1療法の有益な効果がIL33/ST2L軸と関連しているかどうかを確認するために、定量的RT-PCRによってマウス由来の梗塞LV領域でIL-33、ST2L及びsST2のmRNAレベルを評価した(図8)。AMIは、IL-33(p<0.001)、ST2L(p<0.001)及びsST2(p<0.01)mRNA発現の増加と関連していた。興味深いことに、内因性Yy1の欠如は、IL-33及びST2L mRNAレベルに影響を及ぼさず、心筋sST2 mRNAレベルの上方制御を妨げた。損傷の非存在下又はPBSの使用下でのYy1のサイレンシングは、それぞれの対照と比較して、IL33、ST2L及びsST2の発現に影響を及ぼさなかった。
実施例2.
材料及び方法
実施例2.
材料及び方法
動物のケア及び倫理的側面。C57Bl/6J雄マウス(体重25~30g)をJackson Laboratoryから購入した。マウスを、12時間の明暗サイクルを用いて23±2℃で50±5%の相対湿度を有する特定の病原体のない環境に収容した。マウスは、食物及び水を自由に摂取することができた。全ての動物実験は、University of Murciaの動物使用に関する倫理審査委員会によって承認された(許可番号:A13150105)。7日の適応後、動物に外科的処置を施して、全身Yy1遺伝子サイレンシングの前にMIを誘導した。
マウスにおける実験的MIの誘導。外科的処置の前に、動物を腹腔内ケタミン(75mg/kg)及びメデトミジン(0.5mg/kg)で麻酔した後、18ゲージ静脈内カテーテルで挿管及び換気し、温調パッド上で仰臥位で置いた。動物を、皮下に挿入した小型針を通して四肢に接続した心電図(ECG)電極によって監視した。左側開胸術を、第3及び第4の肋間腔の間の小さな切開によって行った。切開は、肺が収縮領域で回避されるように、鈍端レトラクタによって拡張された。心臓を取り囲む心膜を切開したが、心臓は露出しなかった。左前下行枝(LAD)の結紮部位を、起点から4mm離して決定した。先細の非外傷性針を使用して、8-0絹結紮糸をLADの下に通し、3つの結び目で結紮した。左室の前壁の目に見えるブランチング及びチアノーゼ並びに左心房の腫脹を、結紮の成功を示すものとみなした。ECGがST上昇を示し、左室の前壁がブランチングになった場合、処置は成功したとみなされた。6-0ビクリル溶解縫合糸を使用して肋骨及び筋肉を閉じ、胸腔内に残った空気を吸引するための小さな隙間を残した。再び肺に触れることなく、空気をインハウスのチューブ(直径2mm)によって吸引した。閉鎖時に、ネオマイシン粉末及びベタジンを筋肉及び皮膚の縫合部位にそれぞれ適用した。手術部位は、あらゆる感染を回避し、縫合部位のあらゆる裂開を監視するために毎日整えられた。麻酔の導入から20分以内に全手順を実施した。偽手術ラットは、結紮なしで同じ手順を受けた。手術後、動物にブプレノルフィン(0.05mg/kg、皮下)を8時間間隔で4回投与した。偽群は、LAD冠動脈を閉塞しなかったことを除いて、同じ外科的処置を受けた。心電図モニタリングを使用して、MI誘導後のSTセグメント上昇を確認した。手術誘発MI後、梗塞マウスは、偽群と比較して心電図の有意な変化を示す(図9の上部パネル)。心臓損傷の進展を評価するために、心エコー試験を各マウスの屠殺時(MI後4又は8週間)に行った(Sacks D.et al.,Int J Stroke.2018 Aug;13(6):612-632)。
マウスにおける実験設計及び試験プロトコル。MI後30分で、生存動物をMI及び偽の2つの全体的な群に無作為化した。各場合において、MI後1時間(S1h)、24時間(S24h)、3日(S3d)、7日(S7d)又は14日(S14d)後に開始したsiYy1治療開始(6mg/kg、i.v.)に基づいて動物を再度群分けした。SiYy1療法を、それぞれ合計3サイクルが完了するまで7日ごとに繰り返した(図9)。群S1h、S24h、S3d及びS7dに属する動物をMI後4週間で屠殺し、一方、S14dに属する動物をMI後8週間で屠殺した(図9のスキーム)。
ヒトiP由来心筋細胞(hiPsCM)調製及び生体力学的歪み。ヒト人工多能性幹細胞(hiPSC)をPhenocell(PCi-CAU)から購入し、約0.5×105個の生細胞をクライオバイアルに入れた。最初に、細胞凝集体の付着を可能にする適切なマトリックス(Matrigel(登録商標))上で、hiPSCを、mTeSR(商標)+培地を使用して80%コンフルエンスまで成長させ、37℃で5%CO2及び95%空気の加湿雰囲気中で維持した。継代20において、本発明者らの研究室で標準化プロトコルを使用してリプログラミング手順を開始した。簡潔には、培養培地を除去し、4μMのCHIR99021を含むB27マイナスインスリン補助物質(基礎分化補助物質)を含むRPMI-1640(0日目)に交換した。3日目に、培地を基礎分化補助物質及び3μMのIWR-1に交換した。5日目に、培地を基礎分化補助物質でリフレッシュした。8日目に、培地を、B27補助物質を含むRPMI1640(上記でRMPI/B27として引用)に交換した。11日目に、培地をグルコースを含まず、B27マイナスインスリンを含むRPMI1640に交換した。14日目に、培地をRPMI/B27に交換した。分化のための培養物を37℃の5%CO2/95%空気環境で維持した。分化中、培地を3日ごとに交換した。20日後に鼓動するクラスターが観察された。実験前に、iCell維持培地(Cellular Dynamics International)中でHiPsCMを12日間回復させた。アッセイを開始する前に、hiPSC及びhiPsCMの両方の標準化遺伝子発現プロファイリング(RT-qPCR)を各ヒト単離クローンに行った。OCT4及びNANOG mRNAレベルをhiPSC特異的マーカーとして使用し、cTnT及びNKX2-5に対するmRNAレベルをiPsCM特異的マーカーとして使用した。生体力学的歪みは、Asensio-Lopez MC.et al.(Sci Rep.2021 Feb 16;11(1):3915)によって記載された実験設計の適合を使用して行った。ここで、hiPsCMを0.2μMのPMA及び0.4μMのA23187で6時間共刺激し、したがって持続的な細胞伸長を誘導した。
内因性Yin-Yang1転写因子サイレンシング。Yy1発現レベルが下方制御される実験モデルを生成するために、マウスを4つの特異的干渉RNA配列の混合物(化合物1~4)で処置し、hiPsCMを、ヒトYy1 mRNA配列に特異的に設計された同等の混合物(化合物5~8)でトランスフェクトした。
マウスでは、MIの1時間後、24時間後、3日後、7日後又は14日後に、動物の尾静脈を通して静脈内に注入を行った。Yy1転写因子(カスタムsiRNA、インビボHPLC Accell)に対するsiRNA配列をDharmacon(A-050273-13、-14、-15、-16)から入手し、MI後に6mg/kg/週の3つの独立した用量で一緒に投与した。実験手順の概要を図9に示す。手短に言えば、使用直前に、GE Healthcare(B-005000)のAccell siRNA Delivery Mediaを使用して、4つのsiRNAのそれぞれ1つの75μgを混合した。マウス特異的Yy1転写因子及び非標的化Accell siRNA配列(siCtrl)の両方の標的配列を上記の表3に示す(化合物1~4及び非標的化Accell siRNA配列(siCtrl)として引用)。
hiPsCMにおいて、Lipofectamine RNAiMAXを用いて、Yy1特異的siRNA又は対照siRNA(Dharmacon,Lafayette,CO)を細胞にトランスフェクトした。センス鎖及びアンチセンス鎖の両方によって引き起こされるオフターゲット効果を防止するために、1つの遺伝子を標的とするように設計された4つの個々の二重鎖の市販の混合物を使用した(化合物5~8及びScr;表3)。簡潔には、hiPsCM(約20×103細胞)を6ウェルプレートに播種し、完全培地中37℃で2日間増殖させた。次に、Lipofectamine RNAiMAX(Invitrogen,Carlsbad,CA,USA)を用いて製造者の指示に従って細胞をトランスフェクションした。トランスフェクション濃度は25nMであった。トランスフェクションミックスを添加した後、細胞を24時間維持した。次いで、トランスフェクト細胞を37℃でDPBSで2回洗浄し、次いで、先に示したように、PMA及びA23187で6時間共刺激した。
LV構造及び心機能。経胸壁心エコー検査(2D及びMモード心エコー検査)を、MI後4週間又は8週間後に、VEVO機及び13MHzプローブを使用して麻酔したマウス(1.8%イソフルラン、吸入)に対して行った。四腔長軸図から、収縮末期(LVEsV)及び拡張末期左室(LVEdV)容積をシンプソン法によって決定し、駆出率(EF)をEF(%)=LVEdV-LVEsV/LVEdV×100として自動的に決定した。僧帽弁の腱索のレベルで、左室拡張末期径(LVEdD)及び収縮末期径(LVEsD)の測定をMモードによって行った。データを分析した研究者は、実験群を盲検化した。
組織試料及び組織学。LAD動脈結紮の4週間後(S1h、S24h、S3d及びS7d群)又は8週間後(S14d群)に動物を屠殺し、それらの心臓を0.2mlの10%(w/v)塩化カリウム(MERCK,USA)の静脈内注射によって拡張期に停止させた。次いで、心臓を摘出し、右心室及び心房を除去する前に氷冷DPBSですすいだ。組織病理学的分析のために、各処置群からの7匹のマウスの左室の中乳頭切片を、パラフィン包埋の24時間前まで4%ホルムアルデヒドで固定した。シリウスレッド染色を行って、線維化を評価した。その定量化のために、境界梗塞領域からの少なくとも6つの不作為写真を、20倍の倍率で各スライドから撮影した。コラーゲン沈着(赤色)を使用して線維症を定義し、これは、DIGITAL IMAGE HUBソフトウェアバージョン4.0.6を使用して定量した赤色画素に対する赤色画素の割合として表される。他の分子細胞生物学的研究のために、梗塞部位を採取し、RNA抽出のために-80℃で保存した。画像解析、並びに分子及び細胞生物学的実験を行った観察者は、実験群に対して盲検化した。
免疫組織化学。次の実験手順は、いくつかの修正を加えて、前述のように実施した(Asensio-Lopez MC.et al.,Sci Rep.2021 Feb 16;11(1):3915)。簡潔には、LVのパラフィン包埋された中乳頭スライスからの切片(3μm)をポリ-l-リジンでコーティングされたガラススライド上に置いた。次いで、切片を脱パラフィンし、DAKO PT Link中、97℃で20分間前処理した。CD45又はカスパーゼ3染色のために、再水和した切片をウサギポリクローナルCD45抗体(作業希釈1:500、ABCAM[ab10558])又はウサギポリクローナルカスパーゼ3抗体(希釈倍率1:300、CELL SIGNALLING[9661])と一晩インキュベートした。次に、切片を製造者の説明書に従って抗ウサギビオチン化標識ポリマー(DAKO ENVISION)とインキュベートし、2-2’ジアミノベンシジン(DAB)で明らかにした。細胞質の暗褐色沈殿物は、陽性免疫染色を示した。Zeiss Axio Scope A10(CARL ZEISS,Madrid,Spain)顕微鏡を使用して画像を撮影した。各スライドの6つの無作為写真を20倍の倍率で撮影した(n=7スライス/各処置群)。
RNA抽出及び定量的RT-PCR総RNAを、梗塞心筋組織試料並びに伸展下のhiPsCMから単離した。RNeasy Mini Kit(QIAGEN)を用いてRNAを精製し、iScript cDNA Synthesis Kit(BIORAD LAB.INC.,Madrid)を用いて製造元の推奨に従ってcDNAを調製した。TB Green Premix Ex Taq II(Tli RNase H Plus)Master Mix(TAKARA BIO INC.,Europe)を用いて、定量的リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応(RT-qPCR)を行った。グリセルアルデヒド3-リン酸デヒドロゲナーゼ(GAPDH)をハウスキーピング遺伝子として使用した。使用したプライマー(MERCK,USA)の配列を追加の表4に列挙する。
統計分析梗塞(MI対偽)、処置(siYy1対対照)及び処置開始時間の間の相互作用効果による線形回帰モデルを実施して、平均及び標準誤差(SE)を推定した。各群の動物の不均衡のため、周辺平均を使用した(EMM、推定周辺平均)。梗塞(MIと偽との間の変化、MI-偽)の効果を推定し、表及び図に報告した。これらの変化の差(diff-in-diff)もまた、治療の各開始時間に従って治療間の比較及びp値計算のために推定した。p値<0.05を統計学的に有意とみなした。全ての分析は、統計ソフトウェアR(v.4.0)及びpackage emmeans(v.1.5.4)を用いて行った。
結果
結果
この例の結果を図9~図16に示す。この意味で、図11は、最初の3日以内に開始したsiYy1治療が、肉眼的心肥大(a)、HW/BW比(b)に関して、MI誘発性心肥大に対して保護したことを示すことに本明細書において留意されたい。最初の7日以内に開始したsiYy1療法が、肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連する)及びNppa(c)のレベルに関して、MI誘発性心肥大に対して保護した。14日目に開始されたsiYy1治療は効果がなかった。図12は、最初の3日以内に開始されたsiYy1治療が、LV駆出率(a)及び短縮率(b)の有意に低い低下に関して、LV収縮機能不全から保護したことを示す。最初の7日以内に開始されたSiYy1療法が、LV拡張末期径及び収縮末期径(c、d)、並びにLV拡張末期容積及び収縮末期容積(e、f)のより低い増加に関して、LV拡大から保護した。14日目に開始されたsiYy1治療は効果がなかった。更に図13に示されるように、最初の7日以内に開始されたsiYy1療法が、有意に低いシリウスレッド染色(a)(パネルbの代表的な画像)並びに有意に低いレベルの異なる線維症関連マーカー遺伝子調節解除(TGF-β、α-sma、Col1a1及びCol3a1)(c~f)に関して、梗塞心筋における線維症に対して保護した。14日目に開始した治療は効果がなかった。図14は、最初の7日以内に開始したsiYy1療法が、より低レベルのCD45陽性染色(a)(パネルbの代表的な画像)及び炎症関連特異的マーカー(c~d)に関して、梗塞心筋における炎症に対して保護したことを示す。14日目に開始した治療は効果がなかった。図15は、最初の7日以内に開始されたsiYy1療法が、カスパーゼ3タンパク質レベルの有意に低い増加(a)、並びにBNP及びMyO mRNAレベルの有意に低い増加(c~d)に関して、細胞死に対して保護したことを示す。図16に示されるように、siYy1療法はヒトiP由来心筋細胞の伸展誘導性肥大を予防した。対照群(Scr)と比較して、ヒトiP由来心筋細胞(hiPsCM)におけるYy1 mRNAレベルは、伸張後に上昇し(PMA+Scr)(p<0.001)、siYy1療法によって有意に低下した(siYy1+PMA)(p<0.001)(a)。siYy1療法は、肥大関連マーカー遺伝子Myh7(Myh6に関連する)及びNppa(b、c)のレベルに関して、伸展誘発性心肥大から保護した。
Claims (12)
- ヒト又は動物対象の心臓細胞におけるYin Yang-1(Yy1)遺伝子の発現を、前記細胞における化合物の非存在下で観察される発現に対して減少させることができる化合物を含む組成物であって、前記化合物は、Yy1遺伝子のRNA干渉(RNAi)であり、前記組成物は、前記対象における心筋梗塞(AMI)後の左室(LV)機能不全の治療方法における使用のためのものであり、前記組成物は、前記対象における心筋梗塞(AMI)の発症後12時間~7日の間に投与される、組成物。
- 前記組成物が、前記対象における心筋梗塞(AMI)の発症後1~7日の間に投与される、請求項1に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、前記対象における心筋梗塞(AMI)の発症後12時間~3日の間に投与される、請求項1に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、前記対象における心筋梗塞(AMI)の発症後1~3日の間に投与される、請求項1に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、前記対象における心筋梗塞(AMI)の発症後3~7日の間に投与される、請求項1に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、左室(LV)駆出率及び/又は短縮率の減少を予防、治療、緩和、又は低減することによって、前記対象における心筋梗塞(AMI)後のLV機能不全を治療する方法に使用するためのものである、請求項3又は4に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、MI誘発性心肥大を予防、治療、緩和、又は低減させることによって、前記対象の心筋梗塞(AMI)後の左室(LV)機能不全を治療する方法で使用するためのものである、請求項3又は4に記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、前記対象における心筋梗塞(AMI)後の左室(LV)機能不全を、前記LV拡大を予防する、治療する、緩和する、又は減少させることによって治療する方法において使用するためのものである、請求項5に記載の使用のための組成物。
- 前記Yy1遺伝子の前記干渉RNA(RNAi)は、以下の化合物:センス配列番号1及びアンチセンス配列番号2を有する化合物1、センス配列番号3及びアンチセンス配列番号4を有する化合物2、センス配列番号5及びアンチセンス配列番号6を有する化合物3、センス配列番号7及びアンチセンス配列番号8を有する化合物4、センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8の任意のものからなる群より選択されるsiRNAである、請求項1~8のいずれかに記載の使用のための組成物。
- 前記Yy1遺伝子の前記干渉RNA(RNAi)が、以下の化合物:センス配列番号49及びアンチセンス配列番号50を有する化合物5、センス配列番号51及びアンチセンス配列番号52を有する化合物6、センス配列番号53及びアンチセンス配列番号54を有する化合物7、並びにセンス配列番号55及びアンチセンス配列番号56を有する化合物8の任意のものからなる群より選択されるsiRNAである、請求項1~8のいずれかに記載の使用のための組成物。
- 前記化合物が静脈内投与される、請求項1~10のいずれかに記載の使用のための組成物。
- 前記組成物が、治療有効量の請求項9又は10に記載のsiRNA又はこれらのオリゴヌクレオチドを発現するベクターと、薬学的に許容される担体と、を含む医薬組成物である、請求項1~8のいずれかに記載の使用のための組成物。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
EP20382498.2 | 2020-06-09 | ||
EP20382498.2A EP3922720A1 (en) | 2020-06-09 | 2020-06-09 | Therapy to prevent adverse cardiac remodeling following an acute myocardial infarction |
PCT/EP2021/065521 WO2021250124A1 (en) | 2020-06-09 | 2021-06-09 | Treatment method of left ventricular dysfunction following an acute myocardial infarction |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JP2023530661A true JP2023530661A (ja) | 2023-07-19 |
Family
ID=71130910
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2022576386A Pending JP2023530661A (ja) | 2020-06-09 | 2021-06-09 | 急性心筋梗塞後の左室機能不全の治療方法 |
Country Status (8)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20240238449A1 (ja) |
EP (2) | EP3922720A1 (ja) |
JP (1) | JP2023530661A (ja) |
CN (1) | CN116096893A (ja) |
AU (1) | AU2021290158A1 (ja) |
CA (1) | CA3185338A1 (ja) |
IL (1) | IL298791A (ja) |
WO (1) | WO2021250124A1 (ja) |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4475196A (en) | 1981-03-06 | 1984-10-02 | Zor Clair G | Instrument for locating faults in aircraft passenger reading light and attendant call control system |
US4447233A (en) | 1981-04-10 | 1984-05-08 | Parker-Hannifin Corporation | Medication infusion pump |
US4439196A (en) | 1982-03-18 | 1984-03-27 | Merck & Co., Inc. | Osmotic drug delivery system |
US4447224A (en) | 1982-09-20 | 1984-05-08 | Infusaid Corporation | Variable flow implantable infusion apparatus |
US4487603A (en) | 1982-11-26 | 1984-12-11 | Cordis Corporation | Implantable microinfusion pump system |
US4486194A (en) | 1983-06-08 | 1984-12-04 | James Ferrara | Therapeutic device for administering medicaments through the skin |
US4959217A (en) | 1986-05-22 | 1990-09-25 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Delayed/sustained release of macromolecules |
US4925678A (en) | 1987-04-01 | 1990-05-15 | Ranney David F | Endothelial envelopment drug carriers |
US5080646A (en) | 1988-10-03 | 1992-01-14 | Alza Corporation | Membrane for electrotransport transdermal drug delivery |
US5270030A (en) | 1988-12-29 | 1993-12-14 | Bio-Technology General Corp. | Fibrin binding domain polypeptide and method of producing |
US5399676A (en) | 1989-10-23 | 1995-03-21 | Gilead Sciences | Oligonucleotides with inverted polarity |
US5167616A (en) | 1989-12-14 | 1992-12-01 | Alza Corporation | Iontophoretic delivery method |
US5587361A (en) | 1991-10-15 | 1996-12-24 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleotides having phosphorothioate linkages of high chiral purity |
US5378825A (en) | 1990-07-27 | 1995-01-03 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Backbone modified oligonucleotide analogs |
US5489677A (en) | 1990-07-27 | 1996-02-06 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Oligonucleoside linkages containing adjacent oxygen and nitrogen atoms |
CA2092002A1 (en) | 1990-09-20 | 1992-03-21 | Mark Matteucci | Modified internucleoside linkages |
US5225182A (en) | 1991-10-31 | 1993-07-06 | Sharma Yash P | Vectored drug delivery system using a cephaloplastin linking agent and a methed of using the system |
ATE515510T1 (de) | 1991-12-24 | 2011-07-15 | Isis Pharmaceuticals Inc | Durch dna-abschnitte unterbrochene modifizierte oligonukleotide |
CA2135646A1 (en) | 1992-05-11 | 1993-11-25 | Kenneth G. Draper | Method and reagent for inhibiting viral replication |
US6277967B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-08-21 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Carbohydrate or 2′-modified oligonucleotides having alternating internucleoside linkages |
US6242589B1 (en) | 1998-07-14 | 2001-06-05 | Isis Pharmaceuticals, Inc. | Phosphorothioate oligonucleotides having modified internucleoside linkages |
US20040019001A1 (en) | 2002-02-20 | 2004-01-29 | Mcswiggen James A. | RNA interference mediated inhibition of protein typrosine phosphatase-1B (PTP-1B) gene expression using short interfering RNA |
US20040063654A1 (en) | 2001-11-02 | 2004-04-01 | Davis Mark E. | Methods and compositions for therapeutic use of RNA interference |
ES2637032B1 (es) * | 2017-02-06 | 2018-07-17 | Universidad De Murcia | Composición para promover la recuperación cardiaca tras un infarto de miocardio (IM) |
-
2020
- 2020-06-09 EP EP20382498.2A patent/EP3922720A1/en not_active Withdrawn
-
2021
- 2021-06-09 CN CN202180056606.5A patent/CN116096893A/zh active Pending
- 2021-06-09 WO PCT/EP2021/065521 patent/WO2021250124A1/en active Search and Examination
- 2021-06-09 US US18/009,482 patent/US20240238449A1/en active Pending
- 2021-06-09 JP JP2022576386A patent/JP2023530661A/ja active Pending
- 2021-06-09 AU AU2021290158A patent/AU2021290158A1/en active Pending
- 2021-06-09 CA CA3185338A patent/CA3185338A1/en active Pending
- 2021-06-09 IL IL298791A patent/IL298791A/en unknown
- 2021-06-09 EP EP21730620.8A patent/EP4162046A1/en active Pending
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA3185338A1 (en) | 2021-12-16 |
CN116096893A (zh) | 2023-05-09 |
EP3922720A1 (en) | 2021-12-15 |
IL298791A (en) | 2023-02-01 |
EP4162046A1 (en) | 2023-04-12 |
US20240238449A1 (en) | 2024-07-18 |
AU2021290158A1 (en) | 2023-02-09 |
WO2021250124A1 (en) | 2021-12-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP6457645B2 (ja) | GST−π遺伝子を調節するためのRNA干渉剤 | |
ES2743600T3 (es) | Métodos de tratamiento de los trastornos inflamatorios vasculares | |
AU2015301221B2 (en) | Inhibitors of MYH7B and uses thereof | |
EP3033114A1 (en) | Heterochromatin forming non-coding rnas | |
EP2683411B1 (en) | Methods of using microrna-26a to promote angiogenesis | |
JP2013511964A (ja) | miRNA−100を含む医薬組成物ならびに血管増殖および内皮炎症を調節するためのその使用 | |
US9885043B2 (en) | Methods for inducing cardiomyocyte proliferation | |
JPWO2011111824A1 (ja) | マイクロrnaを用いた心筋細胞の増殖方法 | |
US9879255B2 (en) | Modulation of RNA activity and vascular permeability | |
US10260067B2 (en) | Enhancing dermal wound healing by downregulating microRNA-26a | |
WO2018183127A1 (en) | Mir-92 inhibitors for treatment of heart failure | |
KR101890874B1 (ko) | 근육 노화 억제용 또는 근육 노화 관련 질환 치료용 조성물 | |
WO2015042435A1 (en) | Treating diseases associated with pgc1-alpha by modulating micrornas mir-130a and mir-130b | |
JP2023530661A (ja) | 急性心筋梗塞後の左室機能不全の治療方法 | |
WO2022026648A1 (en) | Inhibition of incexact1 to treat heart disease | |
KR20180096330A (ko) | 남성형 탈모 표적 유전자의 발현을 억제하는 비대칭 siRNA | |
KR100848665B1 (ko) | 서바이빈의 발현을 억제하는 siRNA | |
JP6751185B2 (ja) | GST−π遺伝子を調節するためのRNA干渉剤 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20230112 |
|
RD01 | Notification of change of attorney |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A7426 Effective date: 20230112 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20240607 |