JP2023529214A - エリスロポエチン産生肝細胞受容体ａ２（ｅｐｈａ２）の過剰発現を特徴とする疾患の治療 - Google Patents

Abstract

本発明は、二環毒素コンジュゲートＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物、及びその使用に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物、及び、病変組織、例えば、腫瘍組織におけるエリスロポエチン産生肝細胞受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）の過剰発現を特徴とする疾患、障害、または状態を予防または治療するための使用に関する。

環状ペプチドは、高い親和性及び標的特異性でタンパク質標的に結合することができ、したがって、治療剤の開発のための魅力的な分子クラスである。実際、例えば、抗菌性ペプチドであるバンコマイシン、免疫抑制薬であるシクロスポリン、または抗がん薬であるオクトレオチドのようないくつかの環状ペプチドは、診療所において既に使用することに成功している（Ｄｒｉｇｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００８），Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ７（７），６０８－２４）。良好な結合特性は、ペプチドと標的の間に形成された比較的大きな相互作用表面、ならびに環状構造の配座の柔軟性の低下に起因する。典型的には、例えば、環状ペプチドＣＸＣＲ４アンタゴニストＣＶＸ１５（４００Å^２；Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３０，１０６６－７１）、インテグリンαＶｂ３に結合するＡｒｇ－Ｇｌｙ－Ａｓｐモチーフを有する環状ペプチド（３５５Å^２）（Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６（５５６５），１５１－５）またはウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子に結合する環状ペプチド阻害剤ｕｐａｉｎ－１（６０３Å^２；Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｊ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １６０（１），１－１０）のように、大環状分子は数百平方オングストロームの表面に結合する。

環状構造のため、ペプチド大環状分子は直鎖状ペプチドよりも柔軟性が低く、標的に結合した際のエントロピーの損失が小さくなり、結合親和性が高くなる。柔軟性が低下すると、標的特異的な配座がロックされ、直鎖状ペプチドと比較して結合特異性が向上する。この効果は、その環が開いたときに他のＭＭＰに対する選択性を喪失するマトリックスメタロプロテイナーゼ８（ＭＭＰ－８）の強力かつ選択的な阻害剤によって例示されている（Ｃｈｅｒｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４１（１１），１７４９－５１）。大環状化によって達成される好ましい結合特性は、例えばバンコマイシン、ナイシン、及びアクチノマイシンのように、複数のペプチド環を有する多環式ペプチドにおいてさらに顕著である。
さまざまな研究チームが、以前にシステイン残基を含むポリペプチドを合成分子構造にテザー連結している（Ｋｅｍｐ ａｎｄ ＭｃＮａｍａｒａ（１９８５），Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ；Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５），ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ）。Ｍｅｌｏｅｎ及び共同研究者らは、トリス（ブロモメチル）ベンゼン及び関連分子を使用して、複数のペプチドループを、タンパク質表面の構造を模倣した合成足場上に迅速かつ定量的に環化させた（Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５），ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ）。候補薬物化合物の生成方法であって、例えばＴＡＴＡ（１，１’，１”－（１，３，５－トリアジナン－１，３，５－トリイル）トリプロパ－２－エン－１－オンのような分子足場に、システイン含有ポリペプチドを連結させることにより、前記化合物を生成する、方法（Ｈｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ，Ｉｎｔ Ｅｄ．２０１４；５３：１６０２－１６０６）。
目的の標的に対する二環式ペプチドの大型ライブラリーを作製及びスクリーニングするためのファージディスプレイに基づくコンビナトリアルアプローチが開発されている（Ｈｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００９），Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ５（７），５０２－７及びＷＯ２００９／０９８４５０）。簡単に説明すると、３つのシステイン残基及び２つのランダムな６アミノ酸領域を含有する直鎖状ペプチド（Ｃｙｓ－（Ｘａａ）_６－Ｃｙｓ－（Ｘａａ）_６－Ｃｙｓ）のコンビナトリアルライブラリをファージ上に提示させ、システイン側鎖を低分子足場に共有結合させることにより環化させた。

国際公開第２００９／０９８４５０号

Ｄｒｉｇｇｅｒｓ ｅｔ ａｌ．（２００８），Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖ ７（７），６０８－２４ Ｗｕ ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｓｃｉｅｎｃｅ ３３０，１０６６－７１ Ｘｉｏｎｇ ｅｔ ａｌ．（２００２），Ｓｃｉｅｎｃｅ ２９６（５５６５），１５１－５ Ｚｈａｏ ｅｔ ａｌ．（２００７），Ｊ Ｓｔｒｕｃｔ Ｂｉｏｌ １６０（１），１－１０ Ｃｈｅｒｎｅｙ ｅｔ ａｌ．（１９９８），Ｊ Ｍｅｄ Ｃｈｅｍ ４１（１１），１７４９－５１ Ｋｅｍｐ ａｎｄ ＭｃＮａｍａｒａ（１９８５），Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ Ｔｉｍｍｅｒｍａｎ ｅｔ ａｌ．（２００５），ＣｈｅｍＢｉｏＣｈｅｍ Ｈｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ．Ａｎｇｅｗ Ｃｈｅｍ，Ｉｎｔ Ｅｄ．２０１４；５３：１６０２－１６０６ Ｈｅｉｎｉｓ ｅｔ ａｌ．（２００９），Ｎａｔ Ｃｈｅｍ Ｂｉｏｌ ５（７），５０２－７

本明細書に記載されるように、本発明者らは、疾患組織におけるＥｐｈＡ２のレベルが、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲートによる治療に対する患者の応答性を示すことを発見した。ＥｐｈＡ２は、ＮＳＣＬＣ、ＴＮＢＣ、膵臓、卵巣、胃／上部ＧＩ、及び尿路上皮がんなど、治療が困難な多くの腫瘍で過剰発現している。ＥｐｈＡ２は、正常な成体組織では比較的低いレベルで発現する。ＥｐｈＡ２は、ある特定の他の薬物によって標的にされてきたが、これらの薬物は、許容できない毒性のために臨床で失敗した。

一態様では、本発明は、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、患者の病変組織のＥｐｈＡ２レベルを測定すること、及び病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択することを含む、方法を提供する。

別の態様では、例えば、本明細書に記載の方法を使用して決定されるように、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者の疾患を治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を、本明細書で提供する。

別の態様では、本発明は、患者の疾患を治療する方法であって、例えば、本明細書に記載の方法を使用して、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、疾患は、がん、例えば、本明細書に記載のがんである。いくつかの実施形態では、病変組織は、腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲートは、本明細書に記載のものから選択される。

１．本発明のある特定の実施形態の一般的な説明：
腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルは、ＩＨＣ染色アッセイによって測定されている。腫瘍細胞膜上及び腫瘍細胞細胞質中のＥｐｈＡ２レベルは、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲートによる治療に対する腫瘍応答性を示すことがわかっている。いかなる特定の理論または機序にも拘束されることを望むものではないが、本発明者らは、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している腫瘍が、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲートによる治療から利益を得る可能性が高いことを発見した。腫瘍細胞膜上でＥｐｈＡ２レベルが上昇している腫瘍は、ＢＴ５５２８による治療から利益を得る可能性がより高いことも見出された。

したがって、一態様では、本発明は、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、患者の病変組織のＥｐｈＡ２レベルを測定すること、及び病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択することを含む、方法を提供する。

別の態様では、例えば、本明細書に記載の方法を使用して決定されるように、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者の疾患を治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を、本明細書で提供する。

別の態様では、本発明は、患者の疾患を治療する方法であって、例えば、本明細書に記載の方法を使用して、病変組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

２．化合物及び定義：
本明細書で使用される場合、「ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート」という用語は、ＥｐｈＡ２に特異的に結合する二環毒素コンジュゲートを指す。ＥｐｈＡ２に特異的な種々の二環毒素コンジュゲートは、例えばＵＳ２０１９／０１８４０２５、ＷＯ２０１９／１２２８６１、及びＷＯ２０１９／１２２８６３に以前に記載されており、それらのそれぞれの内容は参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。

本明細書で使用される「ＢＴ５５２８」という用語は、以下に示す構造を有する二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩であり、分子足場は１，１’，１”－（１，３，５－トリアジナン－１，３，５－トリイル）トリプロパ－２－エン－１－オン（ＴＡＴＡ）であり、ペプチドリガンドは、アミノ酸配列：
（β－Ａｌａ）－Ｓａｒ_１０－Ａ（ＨＡｒｇ）Ｄ－Ｃ_ｉ（ＨｙＰ）ＬＶＮＰＬＣ_ｉｉＬＨＰ（Ｄ－Ａｓｐ）Ｗ（ＨＡｒｇ）Ｃ_ｉｉｉ（配列番号１）
（式中、Ｓａｒはサルコシン、ＨＡｒｇはホモアルギニン、及びＨｙＰはヒドロキシプロリンである）を含む。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される塩」という用語は、妥当な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激性、アレルギー応答などを起こさずに、ヒト及び下等動物の組織と接触させて使用するのに好適であるとともに、合理的な利益／リスク比と釣り合う塩を指す。薬学的に許容される塩は、当技術分野において周知である。例えば、Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅ ｅｔ ａｌ．は、参照により本明細書に組み込まれるＪ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１９７７，６６，１－１９において薬学的に許容される塩を詳細に記載している。本発明の化合物の薬学的に許容される塩には、好適な無機及び有機の酸及び塩基に由来するものが含まれる。薬学的に許容される非毒性の酸付加塩の例は、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硫酸及び過塩素酸のような無機酸、または酢酸、シュウ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、コハク酸もしくはマロン酸のような有機酸と形成されるか、あるいは、イオン交換のように、当技術分野において使用されている他の方法を使用することによって形成される、アミノ基の塩である。他の薬学的に許容される塩としては、アジピン酸塩、アルギン酸塩、アスコルビン酸塩、アスパラギン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、重硫酸塩、ホウ酸塩、酪酸塩、樟脳酸塩、カンファースルホン酸塩、クエン酸塩、シクロペンタンプロピオン酸塩、ジグルコン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、ギ酸塩、フマル酸塩、グルコヘプトン酸塩、グリセロリン酸塩、グルコン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、ヨウ化水素酸塩、２－ヒドロキシ－エタンスルホン酸塩、ラクトビオン酸塩、乳酸塩、ラウリン酸塩、ラウリル硫酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、メタンスルホン酸塩、２－ナフタレンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、硝酸塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パルミチン酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３－フェニルプロピオン酸塩、リン酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、ステアリン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ－トルエンスルホン酸塩、ウンデカン酸塩、吉草酸塩などが挙げられる。

適切な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属、アルカリ土類金属、アンモニウム、Ｎ^＋（Ｃ_１―４アルキル）_４塩が挙げられる。代表的なアルカリまたはアルカリ土類金属塩としては、ナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウムなどが挙げられる。さらなる薬学的に許容される塩としては、適切な場合、ハロゲン化物、水酸化物、カルボキシレート、サルフェート、ホスフェート、ニトレート、低級アルキルスルホネート及びアリールスルホネートなどの対イオンを使用して形成される、非毒性のアンモニウム、第四級アンモニウム、及びアミンカチオンが挙げられる。塩形態は本発明の範囲内であり、ペプチドリガンドへの言及は前記リガンドの塩形態を含むことが理解されるであろう。

本発明の塩は、従来の化学的方法、例として、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｕｓｅ，Ｐ．Ｈｅｉｎｒｉｃｈ Ｓｔａｈｌ（Ｅｄｉｔｏｒ），Ｃａｍｉｌｌｅ Ｇ．Ｗｅｒｍｕｔｈ（Ｅｄｉｔｏｒ），ＩＳＢＮ：３－９０６３９－０２６－８，Ｈａｒｄｃｏｖｅｒ，３８８ｐａｇｅｓ，Ａｕｇｕｓｔ ２００２に記載されている方法によって、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または遊離塩基形態を、適切な塩基または酸と水中または有機溶媒中、または両者の混合物中で反応させることによって調製することができる。

特に明記しない限り、本明細書に示される構造はまた、構造のすべての異性体（例えば、エナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何学的（または配座））形態；例えば、各不斉中心についてのＲ及びＳ配置、Ｚ及びＥ二重結合異性体、ならびにＺ及びＥ配座異性体を含むことを意味する。したがって、本発明の化合物の単一の立体化学異性体、ならびにエナンチオマー、ジアステレオマー、及び幾何学的（または配座）混合物は、本発明の範囲内である。特に明記しない限り、本発明の化合物のすべての互変異性形態は、本発明の範囲内である。さらに、特に明記しない限り、本明細書に示される構造はまた、１つまたは複数の同位体濃縮原子の存在においてのみ異なる化合物を含むことを意味する。例えば、重水素もしくは三重水素による水素の置き換えまたは^１３Ｃ－もしくは^１４Ｃ－濃縮炭素による炭素の置き換えを含む本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。このような化合物は、例えば、分析ツールとして、生物学的アッセイにおけるプローブとして、または本発明による治療剤として有用である。

本明細書で使用される場合、「約」または「およそ」という用語は、所与の値または範囲の２０％以内の意味を有する。いくつかの実施形態では、「約」という用語は、所与の値の２０％、１９％、１８％、１７％、１６％、１５％、１４％、１３％、１２％、１１％、１０％、９％、８％、７％、６％、５％、４％、３％、２％、または１％以内を指す。

３．本発明の例示的な実施形態の説明
いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、患者の腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルを測定すること、及び腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者に投与することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、患者は膵臓癌を有する患者である。いくつかの実施形態では、患者は胃癌を有する患者である。いくつかの実施形態では、患者は膀胱癌を有する患者である。いくつかの実施形態では、患者は、頭頸部癌を有する患者である。いくつかの実施形態では、患者は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を有する患者である。いくつかの実施形態では、患者は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）を有する患者である。いくつかの実施形態では、患者は卵巣癌を有する患者である。

いくつかの実施形態では、腫瘍組織は膵臓腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は胃腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は膀胱腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は頭頸部腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）腫瘍組織である。いくつかの実施形態では、腫瘍組織は卵巣腫瘍組織である。

本明細書で使用される場合、「上昇したＥｐｈＡ２レベル」という用語は、腫瘍組織内のある特定のパーセンテージの細胞が、例えば、腫瘍細胞膜上、または腫瘍細胞細胞質内、またはその両方で検出可能な量のＥｐｈＡ２を有することを指す。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２陽性とは、例えば、腫瘍細胞膜上、または腫瘍細胞の細胞質、またはその両方において、腫瘍組織中の細胞の約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％が検出可能な量のＥｐｈＡ２を有することを指す。

組織内のＥｐｈＡ２の量を測定するさまざまな方法がある。いくつかの実施形態では、患者の腫瘍組織におけるＥｐｈＡ２レベルを測定する方法は、ＥｐｈＡ２免疫組織化学（ＩＨＣ）染色アッセイを使用することを含む。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイは、ヒトＥｐｈＡ２抗体を使用して腫瘍組織切片を染色することを含む。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、ＥｐｈＡ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２のＥＣＤに選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体は、ヒトＥｐｈＡ２抗体ＡＦ３０３５である。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、ＥｐｈＡ２の細胞質ドメインに選択的に結合する。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２の細胞質ドメインに選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体は、ヒトＥｐｈＡ２抗体ＣＳＴ６９９７である。

いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、最大約５０μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、最大約４０μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、最大約３０μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、最大約２０μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、最大約１０μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ヒトＥｐｈＡ２抗体は、約５μｇ／ｍＬ、約６μｇ／ｍＬ、約７μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約９μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約１１μｇ／ｍＬ、約１２μｇ／ｍＬ、約１３μｇ／ｍＬ、約１４μｇ／ｍＬ、または約１５μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ＡＦ３０３５などのＥｐｈＡ２のＥＣＤに選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体は、約５μｇ／ｍＬ、約６μｇ／ｍＬ、約７μｇ／ｍＬ、約８μｇ／ｍＬ、約９μｇ／ｍＬ、約１０μｇ／ｍＬ、約１１μｇ／ｍＬ、約１２μｇ／ｍＬ、約１３μｇ／ｍＬ、約１４μｇ／ｍＬ、または約１５μｇ／ｍＬの濃度である。いくつかの実施形態では、ＡＦ３０３５などのＥｐｈＡ２のＥＣＤに選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体は、約１０μｇ／ｍＬの濃度である。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織においてＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、及びＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおいて染色陽性である患者を選択すること、を含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイは、本明細書の実施例２に記載されている通りである。

本明細書で使用される場合、「染色陽性である患者」という用語は、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおいて、腫瘍組織切片中のある特定のパーセンテージの細胞が染色陽性である患者を指す。いくつかの実施形態では、染色陽性である患者は、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおいて、腫瘍組織切片中の細胞の約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約５５％、約６０％、約６５％、約７０％、約７５％、約８０％、約８５％、約９０％、または約９５％が染色陽性である。

ＩＨＣ染色アッセイにおいて染色強度を測定するための様々な方法がある。いくつかの実施形態では、染色強度は、視覚的スコアリングによって、例えば、従来の光学顕微鏡法を使用する手動スコアリングによって測定される。いくつかの実施形態では、染色強度は、計算組織分析（ＣＴＡ）スコアリングによって測定される。染色強度レベルは、染色なし（０）、弱い染色（１＋）、中位の染色（２＋）、または強い染色（３＋）のいずれかであり得る。いくつかの実施形態では、染色強度は、腫瘍組織切片の腫瘍細胞膜上で測定される。いくつかの実施形態では、染色強度は、腫瘍組織切片の腫瘍細胞細胞質で測定される。いくつかの実施形態では、染色強度は、腫瘍組織切片の腫瘍細胞膜及び腫瘍細胞細胞質の両方で測定される。

いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約２０以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約３０以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約４０以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約５０以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約７５以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１００以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１２５以上のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５０以上のＨスコアを指す。

Ｈスコアは、細胞のパーセント×上記のような０～３のスケール（染色なし（０）、弱い染色（１＋）、中位の染色（２＋）、または強い染色（３＋））での細胞の染色強度の積の合計である：
［（（０×（０の細胞％））＋（（１×（１＋の細胞％））＋（（２×（２＋の細胞％））＋（（３×（３の細胞％））］

Ｈスコアは、例えば腫瘍細胞膜及び細胞質を含む、腫瘍組織切片の異なる区分に対して生成することができる。いくつかの実施形態では、Ｈスコアは、腫瘍細胞膜のＨスコアを指し、これは、上記のように、細胞のパーセント×０～３のスケールでのそれらの細胞膜染色強度の積の合計である。いくつかの実施形態では、Ｈスコアは、腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指し、これは、上記のように、細胞のパーセント×０～３のスケールでのそれらの細胞質染色強度の積の合計である。

いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約２０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約３０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約４０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約７５以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１００以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１２５以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す。

いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約２０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約３０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約４０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約７５以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１００以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１２５以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。いくつかの実施形態では、染色陽性とは、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織においてＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、及び約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを有する患者を選択すること、を含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織においてＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、及び約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者を選択すること、を含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織においてＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、及び約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを有する患者を選択すること、を含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、上昇したＥｐｈＡ２レベルは、本明細書に記載されている通りである。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、上昇したＥｐｈＡ２レベルは、本明細書に記載されている通りである。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、患者の腫瘍組織切片におけるＥｐｈＡ２レベルを測定すること、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、上昇したＥｐｈＡ２レベルは、本明細書に記載されている通りである。

いくつかの実施形態では、がんは膵臓癌である。いくつかの実施形態では、がんは胃癌である。いくつかの実施形態では、がんは膀胱癌である。いくつかの実施形態では、がんは頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、がんは非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。いくつかの実施形態では、がんは、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）である。いくつかの実施形態では、がんは卵巣癌である。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを有する患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイは、本明細書に記載される通りである。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを有する患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲートは、ＵＳ２０１９／０１８４０２５、ＷＯ２０１９／１２２８６１、及びＷＯ２０１９／１２２８６３に記載の化合物から選択され、これらのそれぞれは参照によりその全体が本明細書に組み込まれている。

いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲートは、本明細書に記載のＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩である。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者におけるがんを治療する方法であって、ＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者におけるがんを治療する方法であって、ＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、患者の腫瘍組織におけるＥｐｈＡ２レベルを測定すること、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを用いて患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。

ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物は、種々の用量範囲で患者に投与することができる。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、約１ｍｇ／ｋｇ以下の用量で、患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、約０．９ｍｇ／ｋｇ、約０．８ｍｇ／ｋｇ、約０．７ｍｇ／ｋｇ、約０．６ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．４ｍｇ／ｋｇ、約０．３ｍｇ／ｋｇ、約０．２ｍｇ／ｋｇ、または約０．１ｍｇ／ｋｇの用量で、患者に投与することを含む。

いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、約１００ｍｇ／ｍ^２以下の用量で、患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、約９０ｍｇ／ｍ^２、約８０ｍｇ／ｍ^２、約７０ｍｇ／ｍ^２、約６０ｍｇ／ｍ^２、約５０ｍｇ／ｍ^２、約４０ｍｇ／ｍ^２、約３０ｍｇ／ｍ^２、約２５ｍｇ／ｍ^２、約２２．５ｍｇ／ｍ^２、約２０ｍｇ／ｍ^２、約１７．５ｍｇ／ｍ^２、約１５ｍｇ／ｍ^２、約１２．５ｍｇ／ｍ^２、約１０ｍｇ／ｍ^２、約７．５ｍｇ／ｍ^２、約５ｍｇ／ｍ^２、約２．５ｍｇ／ｍ^２、または約１ｍｇ／ｍ^２の用量で、患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、約２ｍｇ／ｍ^２～約２５ｍｇ／ｍ^２の用量で、患者に投与することを含む。

ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物は、種々の投与頻度で患者に投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を、２日ごとに１回、３日ごとに１回、４日ごとに１回、５日ごとに１回、６日ごとに１回、または７日ごとに１回の投与頻度で患者に投与することを含む。いくつかの実施形態では、本発明の方法は、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、または薬学的に許容されるその塩、またはその医薬組成物を、毎週２回、毎週１回、２週間ごとに１回、３週間ごとに１回、または４週間ごとに１回の投与頻度で患者に投与することを含む。

４．製剤化及び投与
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法は、本明細書に記載のＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、及び薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクルを含む医薬組成物を投与することを含む。いくつかの実施形態では、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩を、患者へのＩＶ投与のために製剤化する。

「薬学的に許容される担体、アジュバント、またはビヒクル」という用語は、製剤化される化合物の薬理活性を破壊しない非毒性の担体、アジュバント、またはビヒクルを指す。本発明の組成物に使用してもよい薬学的に許容される担体、アジュバントまたはビヒクルとして、限定されないが、イオン交換体、アルミナ、ステアリン酸アルミニウム、レシチン、ヒト血清アルブミン等の血清タンパク質、リン酸塩等の緩衝物質、グリシン、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、硫酸プロタミン等の飽和植物脂肪酸、水、塩または電解質の部分グリセリド混合物、リン酸水素二ナトリウム、リン酸水素カリウム、塩化ナトリウム、亜鉛塩、コロイド状シリカ、三ケイ酸マグネシウム、ポリビニルピロリドン、セルロース系物質、ポリエチレングリコール、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリアクリレート、ワックス、ポリエチレン－ポリオキシプロピレン－ブロックポリマー、ポリエチレングリコール及び羊毛脂が挙げられる。

本発明の組成物は、経口的に、非経口的に、吸入噴霧によって、局所的に、直腸的に、経鼻的に、頬側に、腟に、または植込みリザーバーを介して投与され得る。本明細書で使用される場合、「非経口」という用語は、皮下、静脈内、筋肉内、関節内、滑液内、胸骨内、髄腔内、肝内、病巣内及び頭蓋内注射または注入技術を含む。好ましくは、組成物は経口的に、腹腔内にまたは静脈内に投与される。本発明の組成物の滅菌注射用形態は、水性または油性の懸濁液であってもよい。これらの懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して、当技術分野で既知の技術に従って製剤化され得る。滅菌注射用調製物はまた、非毒性の非経口で許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、１，３－ブタンジオール中の溶液などであってもよい。利用されてもよい許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液、及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌不揮発性油が、溶媒または懸濁化媒体として従来用いられている。

この目的のために、合成モノ－またはジグリセリドを含む、任意の低刺激性不揮発性油を使用することができる。オレイン酸及びそのグリセリド誘導体などの脂肪酸は、注射剤の調製に有用であり、同様に、オリーブ油またはヒマシ油などの天然の薬学的に許容される油は、特にそれらのポリオキシエチル化バージョンにおいて、有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコール希釈剤または分散剤、例としてエマルジョン及び懸濁液を含む、薬学的に許容される剤形の製剤化で一般的に使用される、カルボキシメチルセルロースまたは同様の分散剤などを含有し得る。薬学的に許容される固体、液体、または他の剤形の製造で一般的に使用される、他の一般的に使用される界面活性剤、例として、Ｔｗｅｅｎ（登録商標）、Ｓｐａｎ（登録商標）、及び他の乳化剤、またはバイオアベイラビリティ強化剤もまた、製剤化の目的で使用され得る。

本発明の薬学的に許容される組成物は、カプセル、錠剤、水性懸濁液または溶液を含むがこれらに限定されない、任意の経口的に許容される剤形で経口投与することができる。経口使用のための錠剤の場合、一般的に使用される担体には、ラクトース及びコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤も典型的に添加される。カプセル形態での経口投与では、有用な希釈剤には、ラクトース及び乾燥コーンスターチが含まれる。経口使用のために水性懸濁液が必要な場合、活性成分は、乳化剤及び懸濁化剤と組み合わされる。所望の場合、ある特定の甘味剤、香味剤、または着色剤もまた、添加され得る。

あるいは、本発明の薬学的に許容される組成物は、直腸投与のための坐薬の形態で投与され得る。これらは、薬剤を、室温では固体であるが、直腸温度では液体であり、それにより直腸内で溶けて薬物を放出する好適な非刺激性賦形剤と混合することにより調製され得る。このような材料には、ココアバター、蜜蝋、及びポリエチレングリコールが含まれる。

本発明の薬学的に許容される組成物はまた、特に、治療の標的が目、皮膚、または下部腸管の疾患を含む、局所適用によって容易に到達可能な領域または器官を含む場合、局所投与することもできる。好適な局所製剤は、これらの領域または器官のそれぞれのために容易に調製される。

下部腸管のための局所適用は、直腸坐薬製剤（上を参照されたい）または好適な浣腸製剤で行うことができる。局所経皮パッチもまた使用され得る。

局所適用の場合、提供される薬学的に許容される組成物は、１つまたは複数の担体に懸濁または溶解した活性成分を含有する好適な軟膏に製剤化され得る。本発明の化合物の局所投与のための担体としては、鉱油、液体ワセリン、白色ワセリン、プロピレングリコール、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン化合物、乳化ろう、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、提供される薬学的に許容される組成物は、１つまたは複数の薬学的に許容される担体中に懸濁または溶解した活性成分を含有する、好適なローションまたはクリームに製剤化され得る。好適な担体としては、鉱油、モノステアリン酸ソルビタン、ポリソルベート６０、セチルエステルワックス、セテアリルアルコール、２－オクチルドデカノール、ベンジルアルコール、及び水が挙げられるが、これらに限定されない。

眼科用として提供される薬学的に許容される組成物は、等張でｐＨ調整された滅菌食塩水中の微粉化懸濁液として、または好ましくは、塩化ベンジルアルコニウム（ｂｅｎｚｙｌａｌｋｏｎｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ）等の防腐剤を含むかまたは含まないのいずれかで、等張でｐＨ調整された滅菌食塩水中の溶液として、製剤化され得る。あるいは、眼科用に、薬学的に許容される組成物は、ワセリン等の軟膏に製剤化され得る。

本発明の薬学的に許容される組成物はまた、鼻腔エアロゾルまたは吸入によって投与され得る。このような組成物は、医薬製剤の技術分野で周知の技術に従って調製され、ベンジルアルコールもしくは他の好適な防腐剤、バイオアベイラビリティを高めるための吸収促進剤、フッ化炭素、及び／または他の従来の可溶化剤もしくは分散剤を使用して、生理食塩水中の溶液として調製され得る。

最も好ましくは、本発明の薬学的に許容される組成物は、経口投与用に製剤化される。このような製剤は、食物とともに、または食物なしで投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明の薬学的に許容される組成物は、食物をなしで投与される。他の実施形態では、本発明の薬学的に許容される組成物は、食物とともに投与される。

単一剤形の組成物を作製するために担体材料と組み合わせることができる本発明の化合物の量は、治療される宿主、特定の投与様式に応じて変わることになる。好ましくは、提供される組成物は、これらの組成物を受ける患者に０．０１～１ｍｇ／ｋｇ体重／日の間の投与量を投与できるように製剤化されるべきである。

任意の特定の患者に対する特定の投薬量及び治療レジメンは、用いられる特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康状態、性別、食事、投与時間、***速度、薬物の組み合わせ、ならびに治療する医師の判断及び治療される特定の疾患の重症度を含む様々な要因に依存することもまた、理解されるべきである。組成物中の本発明の化合物の量はまた、組成物中の特定の化合物に依存する。
５．使用

いくつかの実施形態では、本発明は、患者におけるがんを治療する方法であって、例えば、本明細書に記載の方法を使用して、腫瘍組織においてＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療方法は、例えば、本明細書に記載のＩＨＣアッセイを使用して、患者の腫瘍組織におけるＥｐｈＡ２レベルを測定することをさらに含む。

いくつかの実施形態では、本発明は、腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を患者に投与することを含む、方法を提供する。いくつかの実施形態では、治療方法は、例えば、本明細書に記載のＩＨＣ法を使用して、患者の腫瘍組織におけるＥｐｈＡ２レベルを測定することをさらに含む。

がん
本明細書に記載の方法及び使用を用いて治療されるがんまたは増殖性障害もしくは腫瘍としては、血液癌、リンパ腫、骨髄腫、白血病、神経癌、皮膚癌、乳癌、前立腺癌、大腸癌、肺癌、頭頸部癌、消化管癌、肝臓癌、膵臓癌、泌尿生殖器癌、骨癌、腎癌、及び血管癌が挙げられるが、これらに限定されない。

本明細書に記載の方法を用いて治療されるがんは、大腸癌、例として進行性（ａｄｖａｎｃｅｄ）または進行（ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｖｅ）マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）ＣＲＣを含む、マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）転移性大腸癌；非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、例として進行性及び／または転移性ＮＳＣＬＣ；卵巣癌；炎症性乳癌などの乳癌；子宮内膜癌；子宮頸癌；頭頸部癌；胃癌；胃食道接合部癌；及び膀胱癌、から選択することができる。いくつかの実施形態では、がんは、大腸癌である。いくつかの実施形態では、大腸癌は、転移性大腸癌である。いくつかの実施形態では、大腸癌は、マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）転移性大腸癌である。いくつかの実施形態では、がんは、進行性または進行マイクロサテライト安定（ＭＳＳ）ＣＲＣである。いくつかの実施形態では、がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）である。いくつかの実施形態では、がんは、進行性及び／または転移性ＮＳＣＬＣである。いくつかの実施形態では、がんは、卵巣癌である。いくつかの実施形態では、がんは、乳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、炎症性乳癌である。いくつかの実施形態では、がんは、子宮内膜癌である。いくつかの実施形態では、がんは、子宮頸癌である。いくつかの実施形態では、がんは、頭頸部癌である。いくつかの実施形態では、がんは、胃癌である。いくつかの実施形態では、がんは、胃食道接合部癌である。いくつかの実施形態では、がんは、膀胱癌である。

いくつかの実施形態では、がんとしては、限定されるものではないが、白血病（例えば、急性白血病、急性リンパ性白血病、急性骨髄性白血病、急性骨髄芽球性白血病、急性前骨髄球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性単球性白血病、急性赤白血病、慢性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病）、真性多血症、リンパ腫（例えば、ホジキン病または非ホジキン病）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、多発性骨髄腫、重鎖疾患、ならびに肉腫及び癌腫などの固形腫瘍（例えば、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、多形性膠芽腫（ＧＢＭ、膠芽腫としても知られる）、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、神経線維肉腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、及び網膜芽細胞腫）、が挙げられる。

いくつかの実施形態では、がんは、神経膠腫、星状細胞腫、膠芽腫、多形性神経膠芽腫（ＧＢＭ、膠芽腫としても知られる）、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、乏突起膠腫、神経鞘腫、神経線維肉腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、または網膜芽細胞腫である。

いくつかの実施形態では、がんは、聴神経腫、星状細胞腫（例えば、グレードＩ－毛様細胞性星細胞腫、グレードＩＩ－低悪性度星細胞腫、グレードＩＩＩ－退形成性星状細胞腫、またはグレードＩＶ－膠芽腫（ＧＢＭ））、脊索腫、ＣＮＳリンパ腫、頭蓋咽頭腫、脳幹神経膠腫、上衣腫、混合型神経膠腫、視神経神経膠腫、上衣下腫、髄芽腫、髄膜腫、転移性脳腫瘍、乏突起膠腫、下垂体腫瘍、原始神経外胚葉性（ＰＮＥＴ）腫瘍、または神経鞘腫、である。いくつかの実施形態では、がんは、成人よりも子供に、より一般的に見られるタイプであり、例として、脳幹神経膠腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、若年性毛様細胞性星状細胞腫（ＪＰＡ）、髄芽腫、視神経神経膠腫、松果体腫瘍、原始神経外胚葉性腫瘍（ＰＮＥＴ）、またはラブドイド腫瘍である。いくつかの実施形態では、患者は成人である。いくつかの実施形態で、患者は、子供または小児患者である。

別の実施形態では、がんとしては、限定されるものではないが、中皮腫、肝胆道（ｈｅｐａｔｏｂｉｌｌｉａｒｙ）（肝管及び胆管）、骨癌、膵臓癌、皮膚癌、頭部もしくは頸部の癌、皮膚もしくは眼球内黒色腫、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、肛門部の癌、胃癌、消化管（胃、大腸、及び十二指腸）、子宮癌、卵管の癌種、子宮内膜の癌種、子宮頸部の癌種、膣の癌種、外陰部の癌種、ホジキン病、食道の癌、小腸の癌、内分泌系の癌、甲状腺の癌、副甲状腺の癌、副腎の癌、軟部組織の肉腫、尿道の癌、陰茎の癌、前立腺癌、精巣癌、慢性もしくは急性白血病、慢性骨髄性白血病、リンパ球性リンパ腫、膀胱の癌、腎臓もしくは尿管の癌、腎細胞癌、腎盂の癌種、非ホジキンリンパ腫、脊髄軸腫瘍、脳幹神経膠腫、下垂体腺腫、副腎皮質癌、胆嚢癌、多発性骨髄腫、胆管癌、線維肉腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、または前述のがんの１つもしくは複数の組み合わせ、が挙げられる。

いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、もしくは卵管癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌もしくは子宮体部漿液性腺癌（ＵＰＳＣ）；前立腺癌；精巣癌；胆嚢癌；肝胆管癌；軟部組織及び骨滑膜肉腫；横紋筋肉腫；骨肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；甲状腺退形成癌；副腎皮質腺腫；膵臓癌；膵管癌もしくは膵腺癌；消化管／胃（ＧＩＳＴ）癌；リンパ腫；頭頸部の扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＨＮ）；唾液腺癌；神経膠腫、もしくは脳腫瘍；神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；または髄芽腫、から選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝芽腫、結腸癌、直腸癌、卵巣癌、卵巣上皮癌、卵管癌、乳頭漿液性嚢胞腺癌、子宮乳頭漿液性癌（ＵＰＳＣ）、肝胆管癌、軟部組織及び骨滑膜肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、甲状腺退形成癌、副腎皮質腺腫、膵臓癌、膵管癌、膵腺癌、神経膠腫、神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、または髄芽腫、から選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、肉腫、癌腫、またはリンパ腫などの固形腫瘍である。固形腫瘍は、典型的には嚢胞または液状領域を含まない組織の異常な塊を一般的に含む。いくつかの実施形態では、がんは、腎細胞癌、もしくは腎臓癌；肝細胞癌（ＨＣＣ）もしくは肝芽腫、または肝癌；黒色腫；乳癌；大腸癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、もしくは大腸癌（ｃａｎｃｅｒ）；結腸癌；直腸癌；肛門癌；非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）もしくは小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）などの肺癌；卵巣癌（ｃａｎｃｅｒ）、卵巣上皮癌、卵巣癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、もしくは卵管癌；乳頭状漿液性嚢胞腺癌もしくは子宮体部漿液性腺癌（ＵＰＳＣ）；前立腺癌；精巣癌；胆嚢癌；肝胆管癌；軟部組織及び骨滑膜肉腫；横紋筋肉腫；骨肉腫；軟骨肉腫；ユーイング肉腫；甲状腺退形成癌；副腎皮質癌；膵臓癌；膵管癌もしくは膵腺癌；消化管／胃（ＧＩＳＴ）癌；リンパ腫；頭頸部の扁平上皮細胞癌（ＳＣＣＨＮ）；唾液腺癌；神経膠腫、もしくは脳腫瘍；神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）；ワルデンシュトレームマクログロブリン血症；または髄芽腫、から選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、腎細胞癌、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝芽腫、大腸癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、大腸癌（ｃａｎｃｅｒ）、結腸癌、直腸癌、肛門癌、卵巣癌（ｃａｎｃｅｒ）、卵巣上皮癌、卵巣癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、卵管癌、乳頭漿液性嚢胞腺癌、子宮乳頭漿液性癌（ＵＰＳＣ）、肝胆管癌、軟部組織及び骨滑膜肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、軟骨肉腫、甲状腺退形成癌、副腎皮質腺腫、膵臓癌、膵管癌、膵腺癌、神経膠腫、脳腫瘍、神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、または髄芽腫、から選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）、肝芽腫、結腸癌、直腸癌、卵巣癌（ｃａｎｃｅｒ）、卵巣上皮癌、卵管癌、卵巣癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳頭漿液性嚢胞腺癌、子宮乳頭漿液性癌（ＵＰＳＣ）、肝胆管癌、軟部組織及び骨滑膜肉腫、横紋筋肉腫、骨肉腫、甲状腺退形成癌、副腎皮質癌、膵臓癌、膵管癌、膵腺癌、神経膠腫、神経線維腫症－１関連悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、または髄芽腫、から選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、肝細胞癌（ＨＣＣ）である。いくつかの実施形態では、がんは、肝芽腫である。いくつかの実施形態では、がんは、結腸癌である。いくつかの実施形態では、がんは、直腸癌である。いくつかの実施形態では、がんは、卵巣癌（ｃａｎｃｅｒ）、または卵巣癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ）である。いくつかの実施形態では、がんは、卵巣上皮癌である。いくつかの実施形態では、がんは、卵管癌である。いくつかの実施形態では、がんは、乳頭状漿液性嚢胞腺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、子宮体部漿液性腺癌（ＵＰＳＣ）である。いくつかの実施形態では、がんは、肝胆管癌である。いくつかの実施形態では、がんは、軟部組織及び骨滑膜肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、横紋筋肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、骨肉腫である。いくつかの実施形態では、がんは、甲状腺退形成癌である。いくつかの実施形態では、がんは、副腎皮質癌である。いくつかの実施形態では、がんは、膵臓癌または膵管癌である。いくつかの実施形態では、がんは、膵腺癌である。いくつかの実施形態では、がんは、神経膠腫である。いくつかの実施形態では、がんは、悪性末梢神経鞘腫瘍（ＭＰＮＳＴ）である。いくつかの実施形態では、がんは、神経線維腫症－１関連ＭＰＮＳＴである。いくつかの実施形態では、がんは、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症である。いくつかの実施形態では、がんは、髄芽腫である。

いくつかの実施形態では、がんは、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、副腎皮質癌、肛門癌、虫垂癌、非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳腫瘍、星状細胞腫、脳及び脊髄腫瘍、脳幹神経膠腫、中枢神経系非定型奇形腫様／ラブドイド腫瘍、中枢神経系胎児性腫瘍、乳癌、気管支腫瘍、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、原発不明の癌種、中枢神経系癌、子宮頸癌、小児癌、脊索腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄増殖性疾患、結腸癌、大腸癌、頭蓋咽頭腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、腺管上皮内癌（ＤＣＩＳ）、胎児性腫瘍、子宮内膜癌、上衣芽細胞腫、上衣腫、食道癌、鼻腔神経芽細胞腫、ユーイング肉腫、頭蓋外胚細胞腫瘍、性腺外胚細胞腫瘍、肝外胆管癌、眼癌、骨原発線維性組織球腫、胆嚢癌、胃癌、消化管カルチノイド腫瘍、消化管間質腫瘍（ＧＩＳＴ）、胚細胞腫瘍、卵巣胚細胞腫瘍、妊娠性絨毛性腫瘍、神経膠腫、毛様細胞性白血病、頭頸部癌、心臓癌、肝細胞癌、組織球症、ランゲルハンス細胞癌、ホジキンリンパ腫、下咽頭癌、眼内黒色腫、膵島細胞腫瘍、カポジ肉腫、腎臓癌、ランゲルハンス細胞組織球症、喉頭癌、白血病、***及び口腔癌、肝臓癌、非浸潤性小葉癌（ＬＣＩＳ）、肺癌、リンパ腫、エイズ関連リンパ腫、マクログロブリン血症、男性乳癌、髄芽腫、髄上皮腫、黒色腫、メルケル細胞癌、悪性中皮腫、原発不明の転移性扁平上皮頸部癌、ＮＵＴ遺伝子が関与する正中線癌、口癌、多発性内分泌腫瘍症候群、多発性骨髄腫／形質細胞腫瘍、菌状息肉腫、骨髄異形成症候群、骨髄異形成／骨髄増殖性腫瘍、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄腫、多発性骨髄腫、慢性骨髄増殖性疾患、鼻腔癌、副鼻腔癌、鼻咽頭癌、神経芽細胞腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、口腔癌（Ｏｒａｌ Ｃａｎｃｅｒ）、口腔癌（Ｏｒａｌ Ｃａｖｉｔｙ Ｃａｎｃｅｒ）、***癌、中咽頭癌、骨肉腫、卵巣癌、膵臓癌、乳頭腫症、傍神経節腫、副鼻腔癌、鼻腔癌、副甲状腺癌、陰茎癌、咽頭癌、褐色細胞腫、中間分化型松果体実質腫瘍、松果体芽腫、下垂体腫瘍、形質細胞腫瘍、胸膜肺芽細胞腫、乳癌、原発性中枢神経系（ＣＮＳ）リンパ腫、前立腺癌、直腸癌、腎細胞癌、明細胞腎細胞癌、腎盂癌、尿管癌、移行性上皮癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、唾液腺癌、肉腫、セザリー症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟部組織肉腫、扁平上皮細胞癌、原発不明の扁平上皮頸部癌、頭頸部扁平上皮細胞癌（ＨＮＳＣＣ）、胃癌、テント上原始神経外胚葉性腫瘍、Ｔ細胞リンパ腫、精巣癌、咽頭癌、胸腺腫、胸腺癌、甲状腺癌、腎盂及び尿管の移行性上皮癌、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、妊娠性絨毛性腫瘍、原発不明希少小児癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉腫、ワルデンシュトレームマクログロブリン血症、またはウィルムス腫瘍、である。

ある特定の実施形態では、がんは、膀胱癌、乳癌（ＴＮＢＣを含む）、子宮頸癌、大腸癌、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、食道腺癌、膠芽腫、頭頸部癌、白血病（急性及び慢性）、低悪性度神経膠腫、肺癌（腺癌、非小細胞肺癌、扁平上皮細胞癌を含む）、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）、黒色腫、多発性骨髄腫（ＭＭ）、卵巣癌、膵臓癌、前立腺癌、腎癌（腎明細胞癌及び腎乳頭細胞癌を含む）、及び胃癌、から選択される。

いくつかの実施形態では、がんは、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、大腸癌、多発性骨髄腫、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、膵臓癌、肝臓癌、肝細胞癌、神経芽細胞腫、その他の固形腫瘍またはその他の血液癌、である。

いくつかの実施形態では、がんは、小細胞肺癌、非小細胞肺癌、大腸癌、多発性骨髄腫、またはＡＭＬである。

本発明はさらに、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）関連固形腫瘍、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）－１６陽性の不治の固形腫瘍、及び、ヒトＴ細胞白血病ウイルスＩ型（ＨＴＬＶ－Ｉ）によって引き起こされ、白血病細胞へのＨＴＬＶ－Ｉのクローン組み込みを特徴とする、ＣＤ４＋Ｔ細胞性白血病の非常に攻撃的な形態である、成人Ｔ細胞性白血病（https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT02631746を参照のこと）；ならびに胃癌、鼻咽頭癌、子宮頸癌、膣癌、外陰癌、頭頸部の扁平上皮細胞癌、及びメルケル細胞癌におけるウイルス関連腫瘍、を含む、ウイルス関連癌の診断、予後及び治療のための方法及び組成物を特徴とする。（https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT02488759を参照のこと；https://clinicaltrials.gov/ct2/show/study/NCT0240886も参照のこと；https://clinicaltrials.gov/ct2/show/NCT02426892も参照のこと）

いくつかの実施形態では、がんまたは腫瘍は、本明細書に記載のがんのいずれかを含む。いくつかの実施形態では、がんは、黒色腫を含む。いくつかの実施形態では、がんは、乳癌を含む。いくつかの実施形態では、がんは、肺癌を含む。いくつかの実施形態では、がんは、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）を含む。いくつかの実施形態では、がんは、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法または使用は、がんまたは腫瘍の増殖または拡散を阻害または低減または阻止する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法または使用は、がんまたは腫瘍のさらなる増殖を阻害または低減または阻止する。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法または使用によって、がんまたは腫瘍のサイズ（例えば、体積または質量）を、治療前のがんまたは腫瘍のサイズと比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％ほど減少させる。いくつかの実施形態では、本明細書に記載の方法または使用によって、患者のがんまたは腫瘍の量を、治療前のがんまたは腫瘍の量と比較して、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、または少なくとも９９％ほど減少させる。

本発明の方法による化合物及び組成物は、がんもしくは腫瘍を治療するかまたはがんもしくは腫瘍の重症度を軽減するのに有効な任意の量及び任意の投与経路を使用して投与することができる。必要とされる正確な量は、対象の種、年齢、及び全身状態、疾患または状態の重症度、特定の薬剤、その投与様式などに応じて、対象ごとに異なる。本発明の方法による化合物及び組成物は、投与の容易さ及び投薬量の均一性のために単位剤形で製剤化されることが好ましい。本明細書で使用される「単位剤形」という表現は、治療される患者に適した薬剤の物理的に別個の単位を指す。しかし、化合物及び組成物の１日の総使用量は、合理的な医療判断の範囲内で担当医師により決定されることが理解される。特定の患者または生物についての具体的な有効用量レベルは、様々な要因に依存し、そのような要因として、治療される障害及び障害の重症度；使用される具体的な化合物の活性；使用される具体的な組成物；患者の年齢、体重、一般的健康状態、性別、及び食事；使用される具体的な化合物の投与の時間、投与経路、***速度；治療期間；使用される具体的な化合物と組み合わせてまたは同時に使用される薬物、ならびに医療分野で周知の同様な要因が挙げられる。本明細書で使用される「患者」または「対象」という用語は、動物、好ましくは哺乳動物、最も好ましくはヒトを意味する。

本発明の薬学的に許容される組成物は、治療される疾患または障害の重症度に応じて、経口、直腸、非経口、大槽内、膣内、腹腔内、局所（粉末、軟膏、または滴剤による）、頬側、経口もしくは経鼻スプレーとして、またはこれらと同様に、ヒト及び他の動物に投与され得る。ある特定の実施形態では、本発明の化合物は、所望の治療効果を得るために、１日に１回以上、経口または非経口で、１日あたり対象の体重あたり、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約５０ｍｇ／ｋｇ、好ましくは約１ｍｇ／ｋｇ～約２５ｍｇ／ｋｇの用量レベルで投与することができる。

経口投与のための液体剤形は、薬学的に許容されるエマルジョン、マイクロエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ剤、及びエリキシル剤を含むが、これらに限定されない。活性化合物に加えて、液体剤形は、例えば、水または他の溶媒などの当技術分野において一般的に使用される不活性希釈剤、可溶化剤、ならびにエチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール、１，３－ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタン脂肪酸エステルなどの乳化剤、ならびにこれらの混合物を含有し得る。不活性希釈剤以外に、経口組成物はまた、湿潤剤、乳化剤及び懸濁化剤、甘味剤、香味剤、及び芳香剤などのアジュバントを含み得る。

注射用調製物、例えば、減菌注射用水性または油性懸濁液は、好適な分散剤または湿潤剤及び懸濁化剤を使用して既知の技術に従って製剤化され得る。減菌注射用調製物はまた、非毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中、例えば１，３－ブタンジオール中の溶液として、減菌注射用溶液、懸濁液、またはエマルジョンであり得る。利用されてもよい許容されるビヒクル及び溶媒の中には、水、リンゲル液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．及び等張塩化ナトリウム溶液がある。加えて、滅菌不揮発性油が、溶媒または懸濁化媒体として従来用いられている。この目的のために、合成モノ－またはジグリセリドを含む、任意の低刺激性不揮発性油を用いることができる。更に、オレイン酸などの脂肪酸が、注射剤の調製において使用される。

注射用製剤は、例えば、細菌を保持するフィルターに通して濾過することにより、または使用前に減菌水または他の減菌注射用媒体に溶解または分散することができる減菌固体組成物の形態で滅菌剤を組み込むことによって、滅菌することができる。

本明細書に記載の化合物の効果を持続させるために、皮下または筋肉内注射からの化合物の吸収を遅らせることが、多くの場合望ましい。これは、難水溶性を有する結晶または非晶質材料の液体懸濁液の使用によって達成することができる。化合物の吸収速度は、したがってその溶解速度に依存し、それはまた、結晶サイズ及び結晶形態に依存し得る。あるいは、非経口投与された化合物形態の遅延吸収は、化合物を油ビヒクルに溶解または懸濁させることによって達成される。注射用デポー形態は、ポリラクチド－ポリグリコリドなどの生分解性ポリマー中に化合物のマイクロカプセルマトリックスを形成することによって作製される。化合物対ポリマーの比率及び利用される特定のポリマーの性質に応じて、化合物の放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）及びポリ（無水物）が含まれる。デポー注射用製剤はまた、体組織と適合するリポソームまたはマイクロエマルジョンに化合物を封入することによって調製される。

直腸または膣投与のための組成物は、好ましくは、周囲温度で固体であるが体温で液体であり、したがって、直腸または膣腔で溶けて活性化合物を放出する、好適な非刺激性賦形剤または担体、例としてカカオバター、ポリエチレングリコール、または坐薬ワックスと、本発明の化合物を混合することによって調製することができる坐薬である。

経口投与のための固体剤形は、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、及び顆粒剤を含む。そのような固体剤形において、活性化合物は、クエン酸ナトリウムもしくはリン酸二カルシウムなどの少なくとも１つの不活性な薬学的に許容される賦形剤もしくは担体、及び／またはａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸などの充填剤もしくは増量剤、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールなどの湿潤剤、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプンもしくはタピオカデンプン、アルギン酸、ある特定のケイ素、及び炭酸ナトリウムなどの崩壊剤、ｅ）パラフィンなどの溶液遅延剤、ｆ）第四級アンモニウム化合物などの吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコール及びモノステアリン酸グリセロールなどの湿潤剤、ｈ）カオリン及びベントナイト粘土などの吸収剤、ならびにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固形ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウム、及びこれらの混合物などの滑沢剤を混合される。カプセル、錠剤、及び丸薬の場合、剤形は緩衝剤も含んでもよい。

類似した型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖、及び高分子量のポリエチレングリコール、ならびに同様物などの賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として用いられ得る。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬、及び顆粒の固体剤形は、腸溶性コーティング及び医薬製剤技術で周知の他のコーティングなどのコーティング及びシェルを用いて調製することができる。それらは任意選択で乳白剤を含有することができ、活性成分（複数可）を腸管のある特定の部分のみに、または優先的に、任意選択で遅延様式で放出する組成物であり得る。使用され得る埋封組成物の例としては、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。類似した型の固体組成物はまた、ラクトースまたは乳糖、及び高分子量のポレチレングリコール、ならびに同様物などの賦形剤を使用して、軟質及び硬質充填ゼラチンカプセル中の充填剤として用いられ得る。

活性化合物はまた、上述の１つまたは複数の賦形剤を有するマイクロ－カプセル化形態であり得る。錠剤、糖衣錠、カプセル、丸薬、及び顆粒剤の固体剤形は、腸溶コーティング、放出制御コーティング、及び医薬製剤分野で周知の他のコーティングなどのコーティング及びシェルを用いて調製することができる。そのような固体剤形では、活性化合物は、スクロース、ラクトースまたはデンプンなどの少なくとも１つの不活性希釈剤と混合され得る。常法に従って、そのような剤形はまた、不活性希釈剤以外の追加の物質、例えば、ステアリン酸マグネシウム及びマイクロ結晶性セルロースなどの錠剤化滑沢剤及び他の錠剤化補助剤を含み得る。カプセル、錠剤、及び丸剤の場合、剤形はまた、緩衝剤も含み得る。それらは任意選択で乳白剤を含有することができ、活性成分（複数可）を腸管のある特定の部分のみに、または優先的に、任意選択で遅延様式で放出する組成物であり得る。使用され得る埋封組成物の例としては、ポリマー物質及びワックスが挙げられる。

本発明の化合物の局所または経皮投与のための剤形は、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ゲル、粉末、溶液、噴霧、吸入剤、またはパッチを含む。活性成分は、薬学的に許容される担体及び必要に応じて任意の必要な防腐剤または緩衝剤と減菌条件下で混合される。眼科用製剤、点耳薬、及び点眼薬もまた、本発明の範囲内にあることが企図される。更に、本発明は、身体への化合物の制御送達を提供する更なる利点を有する経皮パッチの使用を企図する。そのような剤形は、適切な媒体内に化合物を溶解または分配することによって作製することができる。吸収促進剤もまた、皮膚を通過する化合物の流束を増加させるために使用され得る。速度は、速度制御膜を提供することによって、またはポリマーマトリックスもしくはゲル中に化合物を分散させることによってのいずれかで、制御され得る。

以下の実施例は、本発明を説明することを意図しており、本発明を限定するものと解釈されるべきではない。特に明記しない限り、すべてのアミノ酸は、Ｌ配置で使用した。

実施例１：ＢＴ５５２８の合成
二環ペプチド１の調製

ペプチドは、固相合成により合成した。リンクアミドＭＢＨＡ樹脂を使用した。リンクアミドＭＢＨＡ（０．４～０．４５ｍｍｏｌ／ｇ）及びＦｍｏｃ－Ｃｙｓ（Ｔｒｔ）－ＯＨ（３．０当量）を含有する混合物にＤＭＦを加えた後、ＤＩＣ（３当量）、ＨＯＡｔ（３当量）を加えて１時間混合した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを脱ブロッキングに使用した。後続の各アミノ酸を、ＤＭＦ中の活性化試薬、ＤＩＣ（３．０当量）及びＨＯＡＴ（３．０当量）を使用して３当量とカップリングさせた。反応を、ニンヒドリン呈色反応またはテトラクロル呈色反応によって監視した。合成完了後、ペプチド樹脂をＤＭＦ×３、ＭｅＯＨ×３で洗浄し、次にＮ_２バブリング下で一晩乾燥させた。次に、ペプチド樹脂を９２．５％ ＴＦＡ／２．５％ ＴＩＳ／２．５％ ＥＤＴ／２．５％ Ｈ_２Ｏで３時間処理した。ペプチドを、冷イソプロピルエーテルで沈殿させ、遠心分離した（３０００ｒｐｍで３分間）。ペレットをイソプロピルエーテルで２回洗浄し、粗ペプチドを真空下で２時間乾燥させ、次いで凍結乾燥させた。凍結乾燥粉末をＡＣＮ／Ｈ_２Ｏ（５０：５０）に溶解し、ＡＣＮ中の１００ｍＭ ＴＡＴＡの溶液を加え、続いてＨ_２Ｏ中の重炭酸アンモニウム（１Ｍ）を加え、溶液を１時間混合した。環化が完了したら、反応を１Ｍ塩酸システイン水溶液（ＴＡＴＡに対して１０当量）でクエンチし、次に混合して１時間静置した。溶液を凍結乾燥して粗生成物を得た。粗ペプチドを分取ＨＰＬＣで精製し、凍結乾燥して、アミノ酸配列：（β－Ａｌａ）－Ｓａｒ_１０－（配列番号１）－ＣＯＮＨ_２を有する二環ペプチド１を得た。

８．０ｇの樹脂を使用して、２．１ｇの二環ペプチド１（純度９９．２％；収率１６．３％）を白色固体として生成した。

ＭＭＡＥ－ＰＡＢＣ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ－グルタレート－ＮＨＳの調製

化合物２の調製

ペプチドを、固相合成により合成した。５０ｇ ＣＴＣ樹脂（置換（ｓｕｂ）：１．０ｍｍｏｌ／ｇ）を使用した。ＣＴＣ樹脂（５０ｍｍｏｌ、５０ｇ、１．０ｍｍｏｌ／ｇ）とＦｍｏｃ－Ｃｉｔ－ＯＨ（１９．８ｇ、５０ｍｍｏｌ、１．０当量）とを含有する混合物にＤＣＭ（４００ｍＬ）を加え、次にＤＩＥＡ（６．００当量）を加え、３時間混合した。その後、ＭｅＯＨ（５０ｍＬ）を加え、キャッピングのために３０分間混合した。ＤＭＦ中の２０％ピペリジンを脱ブロッキングに使用した。ＤＭＦ（４００ｍＬ）中のＨＢＴＵ（２．８５当量）及びＤＩＰＥＡ（６．０当量）を使用して３当量とＢｏｃ－Ｖａｌ－ＯＨ（３２．５ｇ、１５０ｍｍｏｌ、３当量）をカップリングさせた。反応を、ニンヒドリン呈色反応試験によって監視した。合成完了後、ペプチド樹脂をＤＭＦ×３、ＭｅＯＨ×３で洗浄し、次にＮ_２バブリング下で一晩乾燥させた。その後、ペプチド樹脂を２０％ＨＦＩＰ／ＤＣＭで３０分間、２回処理した。溶液をロータリーエバポレーターで除去して、粗生成物を得た。粗ペプチドをＡＣＮ／Ｈ２Ｏに溶解し、次いで２回凍結乾燥させて、ペプチド生成物（粗１７．３ｇ）を得た。

化合物３の調製

ＤＣＭ（４０．００ｍＬ）及びＭｅＯＨ（２０．００ｍＬ）中の化合物２（４．００ｇ、１０．６８ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液を室温で撹拌し、次いで、（４－アミノフェニル）メタノール（１．５８ｇ、１２．８２ｍｍｏｌ、１．２０当量）及びＥＥＤＱ（５．２８ｇ、２１．３７ｍｍｏｌ、２．００当量）を加え、混合物を暗所で９時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール＝５／１、Ｒｆ＝０．５６）は、１つの新しいスポットが形成されたことを示した。反応混合物を減圧下で濃縮して溶媒を除去した。得られた残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１２０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）Ｓｉｌｉｃａ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ、８０ｍＬ／分で０～２０％ＭｅＯＨ／ＤＣＭの溶離剤）によって精製した。化合物３（３．００ｇ、６．２６ｍｍｏｌ、収率５８．５７％）が、白色固体として得られた。

化合物４の調製

無水ＴＨＦ（３５．００ｍＬ）及び無水ＤＣＭ（１５．００ｍＬ）中の化合物３（３．００ｇ、６．２６ｍｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、（４－ニトロフェニル）クロロホルメート（６．３１ｇ、３１．３０ｍｍｏｌ、５．００当量）及びピリジン（２．４８ｇ、３１．３０ｍｍｏｌ、２．５３ｍＬ、５．００当量）を加え、混合物を２５℃で５時間撹拌した。ＴＬＣ（ジクロロメタン／メタノール＝１０／１、Ｒｆ＝０．５５）は、新しいスポットが形成されたことを示した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮して、残留物を得た。残留物をフラッシュシリカゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１２０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）Ｓｉｌｉｃａ Ｆｌａｓｈ Ｃｏｌｕｍｎ、８０ｍＬ／分で０～１０％ＤＣＭ／ＭｅＯＨの溶離剤）によって精製した。化合物４（２．００ｇ、３．１０ｍｍｏｌ、収率４９．５６％）が、白色固体として得られた。

化合物５の調製

ＤＭＦ（５．００ｍＬ）中の化合物４（２７８．４３ｍｇ、３８７．８０μｍｏｌ、１．００当量）及びＤＩＥＡ（５０１．１９ｍｇ、３．８８ｍｍｏｌ、６７７．２９μＬ、１０．００当量）の混合物を窒素下で１０分間撹拌した。ＭＭＡＥ（２５０．００ｍｇ、３８７．８０μｍｏｌ、１．００当量）及びＨＯＢｔ（５２．４０ｍｇ、３８７．８０μｍｏｌ、１．００当量）を加え、混合物を窒素下で０℃にて２０分間撹拌し、３０℃でさらに１８時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、所望の質量を有する１つの主要なピークが検出されたことを示した。得られた混合物をフラッシュＣ１８ゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１３０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃ１８フラッシュカラム、７５ｍＬ／分で０～５０％のＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏの溶離剤）によって精製した。化合物５（１９０．００ｍｇ、１５５．２９μｍｏｌ、収率４０．０４％）が、白色固体として得られた。

化合物６の調製

ＤＣＭ（２．７０ｍＬ）中の化合物５（１７０．００ｍｇ、１３８．９４μｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、２，２，２－トリフルオロ酢酸（４１３．３２ｍｇ、３．６２ｍｍｏｌ、２６８．３９μＬ、２６．０９当量）を加え、混合物を２５℃で１時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、化合物５が完全に消費されたことを示した。混合物を減圧下で濃縮し、残留物を得た。残留物をＴＨＦ（１０．００ｍＬ）に溶解し、Ｋ_２ＣＯ_３（１９２．０３ｍｇ、１．３９ｍｍｏｌ、１０．００当量）を加え、混合物を室温でさらに３時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、所望の質量を有する１つの主要なピークが検出されたことを示した。得られた反応混合物を減圧下で濃縮して溶媒を除去し、残留物を得た。残留物をフラッシュＣ１８ゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１３０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃ１８フラッシュカラム、７５ｍＬ／分で０～５０％のＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏの溶離剤）によって精製した。化合物６（１１０．００ｍｇ、９７．９２μｍｏｌ、収率７０．４８％）が白色固体として得られた。

化合物７の調製

ＤＭＡ（５ｍＬ）中の化合物６（１１０．００ｍｇ、９７．９２μｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、ＤＩＥＡ（２５．３１ｍｇ、１９５．８３μｍｏｌ、３４．２０μＬ、２．００当量）及びテトラヒドロピラン－２，６－ジオン（２２．３４ｍｇ、１９５．８３μｍｏｌ、２．００当量）。混合物を室温で１８時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、化合物６が完全に消費され、所望の質量を有する１つの主ピークが検出されたことを示した。反応混合物をフラッシュＣ１８ゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１３０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃ１８フラッシュカラム、７５ｍＬ／分で０～５０％のＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏの溶離剤）によって精製した。化合物７（１００．００ｍｇ、８０．８１μｍｏｌ、収率８２．５３％）が白色固体として得られた。

化合物８（ＭＭＡＥ－ＰＡＢＣ－Ｃｉｔ－Ｖａｌ－グルタレート－ＮＨＳ）の調製

ＤＭＡ（４．５ｍＬ）及びＤＣＭ（１．５ｍＬ）中の化合物７（１００．００ｍｇ、８０．８１μｍｏｌ、１．００当量）の溶液に、１－ヒドロキシピロリジン－２，５－ジオン（２７．９０ｍｇ、２４２．４２μｍｏｌ、３．００当量）をＮ_２下にて加え、混合物を０℃で３０分間撹拌した。ＥＤＣＩ（４６．４７ｍｇ、２４２．４３μｍｏｌ、３．００当量）を混合物に加え、混合物を２５℃でさらに１６時間撹拌した。ＬＣ－ＭＳは、化合物７が完全に消費され、所望の質量を有する１つの主ピークが検出されたことを示した。反応混合物をフラッシュＣ１８ゲルクロマトグラフィー（ＩＳＣＯ（登録商標）；１３０ｇ ＳｅｐａＦｌａｓｈ（登録商標）Ｃ１８フラッシュカラム、７５ｍＬ／分で０～５０％のＭｅＣＮ／Ｈ_２Ｏの溶離剤）によって精製した。化合物８（９０．００ｍｇ、６０．６９μｍｏｌ、収率７５．１１％）が白色固体として得られた。

ＢＴ５５２８の調製
ＤＭＡ中の二環ペプチド１（１．０～１．３当量）の溶液に、ＤＩＥＡ（３当量）及び化合物８（１当量）を加えた。混合物を、２５℃で１８時間撹拌した。反応をＬＣ－ＭＳにより監視し、完了したら分取ＨＰＬＣで直接精製した。

二環ペプチド１（７１．５ｍｇ、２２．４８μｍｏｌ）を二環試薬として使用した。ＢＴ５５２８（４０．９ｍｇ、９．０５μｍｏｌ、収率４０．２７％、純度９７．４２％）が白色固体として得られた。

実施例２．ＥｐｈＡ２ ＩＨＣアッセイ
このアッセイでは、ＢＴ５５２８の結合部位であるＥｐｈＡ２細胞外ドメイン（ＥＣＤ）を検出する。

３．アッセイ手順
１．組織を固定して包埋し、切片を切断して正に帯電したスライドに取り付け、標準的な方法に従って切片を脱パラフィンし、再水和する
２．試料を、Ｄａｋｏ ＰＴ Ｌｉｎｋ前処理モジュールにロードする
３．モジュールを６５℃に温め、Ｔａｒｇｅｔ Ｒｅｔｒｉｅｖａｌ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ低ｐＨを使用して９７℃で２０分間抗原賦活化を行い、自動染色装置を６５℃に冷却する
４．ＰＴ Ｌｉｎｋからスライドを取りはずし、室温のＤａｋｏ洗浄緩衝液に浸す（最短５分間）
５．Ｄａｋｏ Ａｕｔｏｓｔａｉｎｅｒ４８に試料をロードする
６．周囲温度で５分間、Ｄａｋｏ洗浄緩衝液で洗浄する
７．Ｆｌｅｘペルオキシダーゼブロッキング試薬で周囲温度にて５分間ブロックする
８．洗浄緩衝液ですすぐ
９．周囲温度で１０分間、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｂｌｏｃｋでブロックする
１０．通気
１１．Ｄａｋｏ Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ Ｒｅｄｕｃｉｎｇ Ｄｉｌｕｅｎｔで希釈した抗ｈＥｐｈＡ２抗体（１０ｕｇ／ｍｌ）を用いて周囲温度で３０分間インキュベートする
１２．洗浄緩衝液ですすぐ
１３．周囲温度で２０分間、２．５％の正常ウマ血清を用いてインキュベートする
１４．洗浄緩衝液ですすぐ
１５．ウマ抗ヤギＩｇＧポリマー試薬を用いて、周囲温度で１５分間インキュベートする
１６．洗浄緩衝液ですすぐ
１７．ＦＬＥＸ ＤＡＢ基質緩衝液＆発色剤を用いて周囲温度で１０分間インキュベートする
１８．洗浄緩衝液ですすぐ
１９．ＤＩ水ですすぐ
２０．ＦＬＥＸヘマトキシリンを用いて周囲温度にて１分間インキュベートする
２１．ＤＩ水ですすぐ
２２．ＤＩ水ですすぐ
２３．Ｄａｋｏから取りはずし、等級分けしたアルコール（ｇｒａｄｅｄ ａｌｃｏｈｏｌｓ）で脱水し、周囲温度にて７分間キシレンで透徹化する
２４．カバースリップ

４．ＥｐｈＡ２ ＩＨＣスコアリング
Ｈスコア法を使用して、ＥｐｈＡ２染色結果をスコア付けする（０が陰性であり、３が強い染色である０～３のスケールで、細胞のパーセント×それらの染色強度の積の合計として定義される）。腫瘍細胞膜（ＴＭ）及び腫瘍細胞質（ＴＣ）の独立したＨスコアを生成して、２つの区分を区別することができる。≧２０のＨスコアは、ＥｐｈＡ２陽性と見なされた。

５．結果
膵臓、膀胱、頭頸部、胃、ＮＳＣＬＣ、ＴＮＢＣ、及び卵巣癌を含む適応症のＴＭＡを染色し、ＥｐｈＡ２発現についてスコア付けした。ＥｐｈＡ２発現のパターンは、ＥｐｈＡ２発現の頻度が最も高い膵臓について試験された適応症全体で異なっていた。評価された他の適応症とは対照的に、膵臓及び膀胱ではＴＣよりもＴＭ陽性のコアのパーセンテージが高かった。これらの違いは、ＴＭ陽性の場合にＢＴＣの機序が強化される場合があることを考えると、ＢＴ５５２８適応症の選択に関連している場合がある。

複数のＴＭＡにわたってＥｐｈＡ２の発現を評価し、ＴＭ及びＴＣを個別にスコア付けするＩＨＣアッセイの使用は、ＢＴ５５２８臨床プログラムの適応症選択を導くのに役立ち得る。

本発明の数多くの実施形態が記載されているが、本発明の化合物及び方法を利用する他の実施形態を提供するために実施例を変更してもよいことは明らかである。したがって、本発明の範囲は、実施例として示された特定の実施形態によってではなく、出願及び特許請求の範囲によって定義されるべきであることが理解されよう。

Claims (20)

1. 腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、患者の腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルを測定すること、及び前記腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を選択することを含む、前記方法。
2. 患者の腫瘍組織におけるＥｐｈＡ２レベルを測定する前記ステップが、ＥｐｈＡ２免疫組織化学（ＩＨＣ）染色アッセイを使用することを含む、請求項１に記載の方法。
3. 腫瘍組織においてＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者を同定または選択する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイを使用して患者の腫瘍組織切片における染色強度を測定すること、及び前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおいて染色陽性である患者を選択すること、を含む、前記方法。
4. 前記患者が、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、または卵巣癌を有する、請求項１～３のいずれか１項に記載の方法。
5. 前記ＥｐｈＡ２免疫組織化学（ＩＨＣ）染色アッセイでは、ＥｐｈＡ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または細胞質ドメインに選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体を使用する、請求項２または３に記載の方法。
6. 前記ＥｐｈＡ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に選択的に結合する前記ヒトＥｐｈＡ２抗体が、ヒトＥｐｈＡ２抗体ＡＦ３０３５である、請求項５に記載の方法。
7. 前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける染色陽性が、前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを指す、請求項３に記載の方法。
8. 前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける染色陽性が、前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを指す、請求項３に記載の方法。
9. 前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける染色陽性が、前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す、請求項３に記載の方法。
10. 腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。
11. 腫瘍組織のＥｐｈＡ２レベルが上昇している患者が、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片における約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを有する患者を指す、請求項１０に記載の方法。
12. 患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＥｐｈＡ２に特異的な二環毒素コンジュゲート、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。
13. 前記がんが、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、または卵巣癌である、請求項１０～１２のいずれか１項に記載の方法。
14. 前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイでは、ＥｐｈＡ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）または細胞質ドメインに選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体を使用する、請求項１１または１２に記載の方法。
15. ＥｐｈＡ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に選択的に結合する前記ヒトＥｐｈＡ２抗体が、ヒトＥｐｈＡ２抗体ＡＦ３０３５である、請求項１４に記載の方法。
16. 前記Ｈスコアが、腫瘍細胞膜のＨスコアまたは腫瘍細胞細胞質のＨスコアを指す、請求項１２に記載の方法。
17. 患者におけるがんを治療する方法であって、ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイにおける腫瘍組織切片において約１５以上、約２０以上、約３０以上、約４０以上、約５０以上、約７５以上、約１００以上、約１２５以上、または約１５０以上の腫瘍細胞膜のＨスコアを有する患者を選択すること、及びＢＴ５５２８、またはその薬学的に許容される塩、またはその医薬組成物を前記患者に投与することを含む、前記方法。
18. 前記がんが、膵臓癌、胃癌、膀胱癌、頭頸部癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、トリプルネガティブ乳癌（ＴＮＢＣ）、または卵巣癌である、請求項１７に記載の方法。
19. 前記ＥｐｈＡ２ ＩＨＣ染色アッセイでは、細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に選択的に結合するヒトＥｐｈＡ２抗体を使用する、請求項１７に記載の方法。
20. ＥｐｈＡ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）に選択的に結合する前記ヒトＥｐｈＡ２抗体が、ヒトＥｐｈＡ２抗体ＡＦ３０３５である、請求項１９に記載の方法。