JP2023522933A

JP2023522933A - 遺伝子操作された食細胞、並びに関連する組成物、ベクター、方法、及びシステム

Info

Publication number: JP2023522933A
Application number: JP2022564004A
Authority: JP
Inventors: モンテル，デニス; ミシュラ，アビナバ・ケー; トレセスピノサ，アルバ・ワイ
Original assignee: University of California
Current assignee: University of California
Priority date: 2020-04-23
Filing date: 2021-04-23
Publication date: 2023-06-01
Also published as: CA3173673A1; CN115943205A; WO2021217087A1; EP4118191A1

Abstract

遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞、並びに関連するベクター、組成物、方法、及びシステムが記載され、これらは、増強された標的細胞の食作用を通じて効率的な細胞標的化、及び個体における状態の治療を可能にする。【選択図】

Description

関連出願の相互参照
本出願は、ドケット番号Ｐ２４９５－ＵＳＰで２０２０年４月２３日に出願された「ＳｔｉｍｕｌａｔｉｎｇＰｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓｏｆＣａｎｃｅｒＣｅｌｌｓｂｙＡｃｔｉｖａｔｉｎｇＲａｃｉｎＭａｃｒｏｐｈａｇｅｓ」と題された米国仮出願第６３／０１４，６４９号、及びドケット番号Ｐ２４９５－ＵＳＰ２で２０２０年１２月１６日に出願された「ＧｅｎｅｔｉｃａｌｌｙＥｎｇｉｎｅｅｒｅｄＰｈａｇｏｃｙｔｅｓａｎｄＲｅｌａｔｅｄＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓＭｅｔｈｏｄｓａｎｄＳｙｓｔｅｍｓ」と題された米国仮出願第６３／１２６，３７９号の優先権を主張し、これらの各々の内容は、参照によりその全体が組み込まれる。

政府補助金に関する声明
本発明は、米国国立衛生研究所によって付与された補助金番号ＧＭ０４６４２５の下で米国政府の支援を受けて行われた。政府は、本発明に特定の権利を有する。

本開示は、概して、特に、食作用及び／又はトロゴサイトーシスを通じた細胞標的化に関する。より具体的には、本開示は、遺伝子操作された食細胞、並びに関連する組成物、ベクター、方法、及びシステムに関する。

標的とされた細胞の死をもたらす方法で細胞を標的とするための様々な方法及びシステムが開発されている。

がんを殺傷するようにＴ細胞を再プログラムするキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を含み、特に、個体の治療に関連する場合の細胞標的化に関連して進歩がなされてきているが、特に、疾患の治療に関連する場合の効率的な細胞標的化をもたらす方法を開発するための課題が依然として残っている。

活性化された食細胞、特に操作された活性化された食細胞、並びに関連するベクター、組成物、方法、及びシステムが本明細書で提供され、これらは、いくつかの実施形態では、標的細胞の増強された食作用を通じて効率的な細胞標的化を可能にし、これにより、生きている標的細胞の食作用が可能になる。

特に、自然発生の、若しくは操作された活性Ｒａｃ遺伝子を含む食細胞、並びに／又は活性化された食細胞としても本明細書で示される、活性化Ｒａｃ発現レベルで自然発生の、若しくは操作されたＲａｃ遺伝子を発現する食細胞が本明細書で提供される。本開示の意味における活性化された食細胞は、増強されたＲａｃ特性をもたらす構成において、かつ／又は発現レベルでＲａｃタンパク質を発現する。本開示を読んだ上で当業者によって理解されるように、本開示の意味における増強されたＲａｃ特性は、生細胞に対する貪食及び／又はトロゴサイトーシスを可能にする程度に、活性化された食細胞の食作用を増強することが示されている。

第１の態様によれば、遺伝子操作された活性化された食細胞が記載される。遺伝子操作された活性化された食細胞は、活性化されたＲａｃタンパク質をコードする活性化されたＲａｃ遺伝子を含み、活性化されたＲａｃ遺伝子は、第１の食細胞プロモーター及び第１の追加の食細胞調節領域の制御下にある。遺伝子操作された活性化された食細胞において、活性化されたＲａｃ遺伝子、第１の食細胞プロモーター、及び第１の追加の食細胞調節領域は、活性化された食作用を有する細胞における活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成にある。遺伝子操作された活性化された食細胞において、活性化されたＲａｃ遺伝子、第１の食細胞プロモーター、及び第１の追加の食細胞調節領域のうちの少なくとも１つは、食細胞に関して異種である。

本明細書に記載される、遺伝子操作された活性化された食細胞において、Ｒａｃ遺伝子を制御する第１の食細胞プロモーターは、食細胞に関して相同又は異種の構成的又は条件付きプロモーターであり得る。好ましい実施形態では、遺伝子操作された活性化された食細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子を更に含み、これは、活性化された食作用を有する細胞におけるＣＡＲの発現を可能にする構成において、第１の食細胞プロモーター又は第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第１の追加の調節領域又は第２の追加の食細胞調節領域の制御下にある。場合によりＣＡＲ発現を制御する第２の食細胞プロモーター及び第２の追加の食細胞調節領域は、活性化されたＲａｃ遺伝子を制御する第１の食細胞プロモーター及び第１の追加の食細胞調節領域と同じであっても、又は異なってもよい。

第２の態様によれば、遺伝子操作された活性化された食細胞が記載される。遺伝子操作された活性化された食細胞は、Ｒａｃタンパク質をコードするＲａｃ遺伝子を含み、Ｒａｃ遺伝子は、第３の食細胞プロモーター及び第３の追加の食細胞調節領域の制御下にある。遺伝子操作された活性化された食細胞において、Ｒａｃ遺伝子、第３の食細胞プロモーター、及び第３の追加の食細胞調節領域は、Ｒａｃ遺伝子を含む野生型又は天然食細胞と比較して、上昇した活性化発現レベルでの活性化された食作用を有する細胞におけるＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成にある。

遺伝子操作された活性化された食細胞において、Ｒａｃ遺伝子を制御する、活性化されたＲａｃ遺伝子、第３の食細胞プロモーター、及び第３の追加の食細胞調節領域の少なくとも１つは、食細胞に関して異種である。

本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食細胞において、活性化されたＲａｃ遺伝子を制御する第３の食細胞プロモーターは、構成的又は条件付きプロモーターであり得、典型的には、食細胞に関して異種である。好ましい実施形態では、遺伝子操作された活性化された食細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子を更に含み、これは、活性化された食作用を有する細胞におけるＣＡＲの発現を可能にする構成において、第３の食細胞プロモーター又は第４の食細胞プロモーターの制御下、かつ第３の追加の調節領域又は第４の追加の食細胞調節領域の制御下にある。ＣＡＲ遺伝子発現を制御する第４の食細胞プロモーター及び第４の追加の食細胞調節領域は、Ｒａｃ遺伝子を制御する第３の食細胞プロモーター及び第３の追加の食細胞調節領域と同じであっても、又は異なってもよい。

第３の態様によれば、遺伝子操作された活性化された食細胞が記載される。遺伝子操作された活性化された食細胞は、Ｒａｃ遺伝子回路を含み、分子成分は、相互作用する成分の完全に接続されたネットワークを形成するために、反応を活性化、阻害、結合、又は変換することによって、回路設計に従って互いに接続されており、Ｒａｃ遺伝子回路において、Ｒａｃ遺伝子回路が、活性化された食細胞内のトリガー分子成分に応答して回路設計に従って動作するときに、活性化されたＲａｃ遺伝子の発現又はＲａｃ遺伝子の発現レベルの増加が生じる。

第４の態様によれば、遺伝子操作された活性化された食細胞が記載される。遺伝子操作された活性化された食細胞は、第１のプロモーター及び第１の追加の調節領域の制御下にある自然発生の活性Ｒａｃ遺伝子を発現する自然発生の活性食細胞であり、第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第２の追加の食細胞調節領域の制御下にあるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を更に含む。遺伝子操作された活性化された食細胞において、キメラ抗原受容体、第２の食細胞プロモーター、及び第２の追加の食細胞調節領域は、遺伝子操作された活性化された食細胞における自然発生の活性Ｒａｃ遺伝子の発現と組み合わせて、ＣＡＲの発現を可能にする構成にある。

第５の態様によれば、Ｒａｃ発現ベクターが記載される。活性化されたＲａｃタンパク質をコードする活性化されたＲａｃ遺伝子を含む活性Ｒａｃ発現ベクターであって、遺伝子が、食細胞における活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第１の食細胞プロモーターの、かつ第１の追加の食細胞調節領域の制御下にある、活性Ｒａｃ発現ベクター。好ましくは、ベクターは、活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、第１の食細胞プロモーター又は第２の食細胞プロモーターの、かつ第１の追加の調節領域又は第２の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子を更に含む。加えて、又は代替的に、Ｒａｃ発現ベクターは、上昇した活性化発現レベルでの活性化された食作用を有する細胞における活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第３の食細胞プロモーターの、かつ第３の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＲａｃ遺伝子を含むことができる。第３の食細胞プロモーター及びＲａｃ遺伝子の上昇発現をもたらすＲａｃ遺伝子を制御することは、第１の食細胞プロモーター及び第２の食細胞プロモーターと同じであっても、又は異なってもよい。第３の追加の食細胞調節領域は、Ｒａｃ遺伝子を制御する第１の追加の食細胞調節領域、及びＣＡＲ遺伝子の発現を制御する第２の追加の調節領域と同じであっても、又は異なってもよい。

第６の態様によれば、本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞を提供するための方法及びシステムが記載される。本方法は、本明細書に記載される活性化されたＲａｃ遺伝子を、食細胞における活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第１の食細胞プロモーターの、かつ追加の第１の食細胞調節領域の制御下で、食作用を有する細胞に導入することを含む。

加えて、又は代替的に、本方法は、Ｒａｃ遺伝子、第３の食細胞プロモーター、及び第３の追加の食細胞調節領域を、活性化された発現レベルでの活性化された食作用を有する細胞における活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、食作用を有する細胞に導入することを含むことができる。

加えて、又は代替的に、本方法は、Ｒａｃ遺伝子回路が、食作用を有する細胞のトリガー分子成分に応答して回路設計に従って動作するときに、活性化されたＲａｃ遺伝子の発現又はＲａｃ遺伝子の発現レベルの増加が生じることを可能にする構成において、本明細書に記載されるＲａｃ遺伝子回路を、食作用を有する細胞分子成分に導入することを含むことができる。

加えて、又は代替的に、食細胞が、本明細書に記載される自然発生の活性食細胞である場合、本方法は、第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ任意選択で第２の追加の食細胞調節領域の制御下で、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）を、食作用を有する細胞に導入することを更に含むことができる。

本システムは、食細胞、本明細書に記載される自然発生の活性食細胞、本明細書に記載されるＲａｃ発現ベクター、及び食作用を有する細胞における、かつ／又は活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ任意選択で第２の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲを含むＣＡＲ発現ベクターの組み合わせを含む。

第７の態様によれば、Ｒａｃ活性組成物が記載され、Ｒａｃ活性組成物は、本明細書に記載される自然発生の活性食細胞、本明細書に記載される遺伝子操作された活性された食細胞、本明細書に記載されるＲａｃ発現ベクター、及び／又は本明細書に記載されるＣＡＲ発現ベクターを、標的細胞の貪食及び／又はトロゴサイトーシスを得るために使用するための、有効量の許容される担体とともに含む。

いくつかの実施形態では、組成物は、医薬組成物であり、本明細書に記載される自然発生の活性食細胞、本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食細胞、本明細書に記載されるＲａｃ発現ベクター、及び／又は本明細書に記載されるＣＡＲ発現ベクターは、標的細胞の呑み込み及び／又はトロゴサイトーシスによって個体を治療する方法において使用するための有効量で医薬組成物中に含まれる。

第８の態様によれば、標的細胞の貪食及び／又はトロゴサイトーシスによって個体を治療する方法が記載される。本方法は、個体に、治療有効量の、本明細書に記載されるＲａｃ活性医薬組成物を投与することを含む。

第９の態様によれば、個体における腫瘍を治療する方法が記載され、本方法は、個体に、治療有効量の、本開示の意味における活性化された食細胞を含む医薬組成物を投与することを含み、これは、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食細胞であり得る。

第１０の態様によれば、個体におけるアルツハイマー病を治療する方法が記載され、本方法は、個体に、治療有効量の、本開示の意味における活性化された食細胞を含む医薬組成物を投与することを含み、これは、いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食細胞、並びに／又は個体のマクロファージを直接標的とし、ベクターにおけるＲａｃ遺伝子のトランスフェクション及び発現時に、本開示の意味における活性化される個体のマクロファージを提供するように構成されている１つ以上のＲａｃ２で活性化されたベクター（例えば、ウイルス又はＲＮＡタンパク質粒子及びＲＮＡ脂質粒子）であり得る。特に、本明細書に記載される実施形態では、本明細書に記載される１つ以上の活性化された食細胞及び／又は１つ以上のＲａｃ発現ベクターの投与は、個体におけるアミロイドベータの食作用を誘発するために行われる。したがって、本明細書に記載される個体におけるアルツハイマー病を治療する方法及びシステムは、当業者によって理解されるように、個体のアミロイドベータプラークの低減及び場合によりクリアランスをもたらすことが予想される。

本明細書に記載される活性化された食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、様々な用途で、単独で、及び／又は追加の薬剤と組み合わせて使用して、インビトロ、インビボ、及び／又はエクスビボで生細胞を殺傷及び／又は排除することができる。特に、生細胞の殺傷及び／又は排除は、治療目的又は当業者によって特定可能な他の目的のために実行され得る。

本明細書に記載される食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、いくつかの実施形態では、マクロファージにおけるヒトＲａｃ２遺伝子の活性化変異の発現が、マクロファージを活性化して、がん性白血球を摂取及び／又は殺傷することができることを示している。

「変異」という用語は、点変異（例えば、ミスセンス若しくはナンセンス、又は枠の移動をもたらす単一塩基対の挿入若しくは欠失）、挿入、欠失、及び／又は切断を指す。変異が、アミノ酸配列内の残基の、別の残基との置換、又は配列内の１つ以上の残基の欠失若しくは挿入である場合、変異は、典型的には、元の残基、続いて配列内の残基の位置を特定することによって、かつ新たに置換された残基の固有性によって説明される。

特に、いくつかの実施形態において本明細書に記載される活性化された食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、ＣＡＲの抗原結合ドメインに特異的に結合する標的細胞に対して指向される標的特異的治療効果を提供するだけでなく、腫瘍細胞の低減における抗腫瘍治療有効性及びがん状態に関連する様々な生理学的症状の改善を大幅に改善することができる。

いくつかの実施形態において本明細書に記載される活性化された食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、抗生物質耐性及び食作用耐性細菌感染に対して有効であるとともに、ＣＯＶＩＤ１９及び当業者によって特定可能な追加のウイルスなどのウイルス感染に対するワクチン有効性を強化することができる。

本明細書に記載される食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、標的細胞の貪食及び／又はトロゴサイトーシスが所望される様々な用途と関連して使用され得る。例えば、本明細書に記載される食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、薬物研究において、かつ／又は腫瘍及びアルツハイマー病などの疾患に対抗するための診断及び治療アプローチ及び／又はツールを開発するために、使用され得る。更なる例示的な用途としては、基礎生物学的研究、応用生物学、生物工学、病因学、医学的研究、医学的診断学、治療学を含むいくつかの分野、及び本開示を読んだ上で当業者によって特定可能な更なる分野において、本明細書に記載される活性化された食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムの使用が挙げられる。

本開示の１つ以上の実施形態の詳細は、添付の付録及び以下の説明に記述されている。他の特徴、目的、及び利点は、説明及び図面、並びに特許請求の範囲から明らかであろう。

本明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付の図面は、本開示の１つ以上の実施形態を例示し、詳細な説明及び実施例のセクションとともに、本開示の原理及び実施を説明する役割を果たす。本開示の例示的な実施形態は、詳細な説明及び付属の図面からより完全に理解される。

ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，２０１６（ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ２０１６）からの概略図（図１Ａ）、及びＨａｌｌ，１９９８（Ｈａｌｌ１９９８）からの異常なＧＴＰアーゼ過剰活性化後の形態、特に、６～１０個の３Ｔ３線維芽細胞を有する血清飢餓細胞クラスター（図１Ｂ）Ｒａｃ分岐アクチン重合ラメリポジア形成（図１Ｃ）Ｃｄｃ４２線形アクチン重合フィロポジア形成（図１Ｄ）、Ｒｈｏアクトミオシン収縮性ストレス繊維形成（図１Ｅ）を示す画像を示す。ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，２０１６（ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ２０１６）からの概略図（図１Ａ）、及びＨａｌｌ，１９９８（Ｈａｌｌ１９９８）からの異常なＧＴＰアーゼ過剰活性化後の形態、特に、６～１０個の３Ｔ３線維芽細胞を有する血清飢餓細胞クラスター（図１Ｂ）Ｒａｃ分岐アクチン重合ラメリポジア形成（図１Ｃ）Ｃｄｃ４２線形アクチン重合フィロポジア形成（図１Ｄ）、Ｒｈｏアクトミオシン収縮性ストレス繊維形成（図１Ｅ）を示す画像を示す。ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，２０１６（ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ２０１６）からの概略図（図１Ａ）、及びＨａｌｌ，１９９８（Ｈａｌｌ１９９８）からの異常なＧＴＰアーゼ過剰活性化後の形態、特に、６～１０個の３Ｔ３線維芽細胞を有する血清飢餓細胞クラスター（図１Ｂ）Ｒａｃ分岐アクチン重合ラメリポジア形成（図１Ｃ）Ｃｄｃ４２線形アクチン重合フィロポジア形成（図１Ｄ）、Ｒｈｏアクトミオシン収縮性ストレス繊維形成（図１Ｅ）を示す画像を示す。ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，２０１６（ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ２０１６）からの概略図（図１Ａ）、及びＨａｌｌ，１９９８（Ｈａｌｌ１９９８）からの異常なＧＴＰアーゼ過剰活性化後の形態、特に、６～１０個の３Ｔ３線維芽細胞を有する血清飢餓細胞クラスター（図１Ｂ）Ｒａｃ分岐アクチン重合ラメリポジア形成（図１Ｃ）Ｃｄｃ４２線形アクチン重合フィロポジア形成（図１Ｄ）、Ｒｈｏアクトミオシン収縮性ストレス繊維形成（図１Ｅ）を示す画像を示す。ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ，２０１６（ＥｌｌｉｏｔｔａｎｄＲａｖｉｃｈａｎｄｒａｎ２０１６）からの概略図（図１Ａ）、及びＨａｌｌ，１９９８（Ｈａｌｌ１９９８）からの異常なＧＴＰアーゼ過剰活性化後の形態、特に、６～１０個の３Ｔ３線維芽細胞を有する血清飢餓細胞クラスター（図１Ｂ）Ｒａｃ分岐アクチン重合ラメリポジア形成（図１Ｃ）Ｃｄｃ４２線形アクチン重合フィロポジア形成（図１Ｄ）、Ｒｈｏアクトミオシン収縮性ストレス繊維形成（図１Ｅ）を示す画像を示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２及びＲａｃ３タンパク質間、並びに異なる個体間の保存された配列及び構造を示す。図１Ｆは特に、図１Ｆでは、（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からの三次元表現でのＲＡＣ１（３ＴＨ５）の三次構造を示し、キー残基Ｄ５７及びＥ６２を示す。図１ＧはＪａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製したヒトにおけるＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３タンパク質の配列間の配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１ＨはＲａｃ１、Ｒａｃ２、Ｒａｃ３、及びＣＤＣ４２タンパク質ヒトＲＨＯファミリーＧＴＰアーゼの例示的な配列アラインメントを示し、更に、保存スイッチＩ、スイッチＩＩ領域を示し、オープンボックス、Ｅ６２、＊Ｑ６１、Ｄ６３、及びＹ６４が協調されている。タンパク質配列（ＲＡＣ２ＮＰ＿００２８６３．１、ＲＡＣ１ＮＰ＿００８８３９．２、ＲＡＣ３ＮＰ＿００５０４３．１、ＣＤＣ４２ＮＰ＿００１７８２．１）は、ＮａｔｉｏｎａｌＣｅｎｔｅｒｆｏｒＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＩｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）からのものである。図１Ｉは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質間の、Ｊａｌｖｉｅｗソフトウェアを使用して調製された例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｊは例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びカエノルハブディスエレガンス）のＲａｃ２タンパク質間の例示的な配列アラインメントを示し、更に、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を示す。図１Ｋは（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）からのＲａｃ２の概略図を示し、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上のパネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び結果として生じる配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示す。図１Ｌはリン酸マグネシウム結合（ＰＭ）領域におけるＲａｃ１及びＨ－ｒａｓの配列アラインメントを示す。同一のアミノ酸は、垂直線によって連結されている。変異アミノ酸は、枠内にある。Ｘは、（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの任意のアミノ酸を示す。図１Ｍは（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌの配列アラインメントからのＲａｃ１、Ｈ－ｒａｓ、及び関連する変異体のＧＴＰアーゼ活性を示すチャートを示す。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。大規模な組織破壊及び他の濾胞細胞の貪食を引き起こす濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ－ＣＡ）の例示的な発現を説明する画像を示す。境界細胞（ｂ）及び極性細胞（ｐ）が示されている。詳細な視覚化に関する平面ごとのセクションについては、補足動画３及び４を参照されたい。全ての画像は、左側が前方、右側が後方を向いている。スケールバーは、図２Ｄ、２Ｆ、２Ｇ、２Ｐ～２Ｑ、２Ｓ～２Ｔ（２０μｍ）を除き、５０μｍである。図２Ａは特に、図２Ａは、発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管の画像を示す。段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する境界細胞（矢印）及び後濾胞細胞が標識化される。濾胞細胞（矢印）は、Ｅ－ｃａｄ（灰色）を発現し、Ｈｏｅｃｈｓｔは、核を標識化する。ナース細胞核（矢印）は、濾胞体細胞よりも大きい。図２Ｂはｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰを発現する例示的な段階９の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の開始を示す。遊走パスは、破線矢印で示される。図２Ｃは境界細胞遊走（矢印）の完了時の例示的な段階１０の卵室の画像である。卵母細胞及びナース細胞が示されている。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）が標識化される。図２Ｄは境界細胞クラスターの例示的な高倍率画像の画像である。境界細胞クラスターは、一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む６～１０個の境界細胞（ｂ）を担持する。Ｅ－ｃａｄ（白）は、境界細胞－境界細胞、境界細胞－極性細胞、及び極性細胞－極性細胞の接触で濃縮される。Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）は、細胞上皮質アクチンネットワークを構成する。図２Ｅはｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（Ｒａｃ－ＤＮ）を発現する例示的な段階１０の卵室の画像であり、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｆは例示的なｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－ｌａｃＺ境界細胞クラスターがアクチン豊富な突起を有する高倍率画像であるが、図２Ｇは、突起を欠くｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ；ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７クラスターを示す。ＧＦＰ（灰色）は、抗ＧＦＰ抗体によって標識化される。図２Ｈは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２（Ｒａｃ－ＣＡ）ハエの例示的な段階９の卵室の画像を示す。境界細胞クラスターが示される（矢印）。図２Ｉは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエの例示的な段階１０の卵室の画像を示し、境界細胞遊走（矢印）の失敗を示す。図２Ｊは１８℃で飼育された、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ、ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２ハエからの例示的な段階９の卵室の高倍率画像を示し、境界細胞（矢印）の内部に非Ｒａｃ１Ｖ１２発現極性細胞を表示する。ＧＦＰ（白色）、Ｆ－アクチン（灰色、ファロイジンによって標識化される）、及びＨｏｅｃｈｓｔが標識化される。図２Ｋは対照の段階９の卵室におけるｓｌｂｏエンハンサー（緑色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺの画像を示し、図２Ｌは、変性Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室を示す。図２Ｍは例示的なＲａｃ－ＣＡ発現卵室（ｓｌｂｏ－ＬｉｆｅａｃｔＧＦＰ、白色）の高倍率画像を示し、組織破壊を示す。図２Ｎはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを発現する例示的な対照の段階９の卵室の画像を示す。図２Ｏは例示的なＲａｃ－ＣＡの画像を示し、濾胞細胞（矢印）に呑み込まれる死んだナース細胞を示す。図２Ｐは例示的な対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。対照の段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－ｌａｃＺ卵室の前端の高倍率を示す。図２Ｑは段階８のｓｌｂｏ－Ｇａｌ４－ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２卵室の前端の高倍率画像を示す。前濾胞細胞は、極性細胞（ｐ）又はＲａｃ－ＣＡを発現しない近傍の濾胞細胞（白い矢印）のいずれかを噛む。図２Ｒは例示的な、濾胞細胞の貪食を有する卵室の割合の検出された定量化を報告するチャートを示す。統計は、対合していないｔ検定を表し、＊＊は、ｐ＜０．０１である。図２Ｓ及び２ＴはＧＦＰ（灰色）によって標識化される境界及び極性細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図２Ｓ）又はＲａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照クローンでは、境界細胞（実線）及び極性細胞（破線）は、区切られている。Ｒａｃ－ＣＡ（図２Ｔ）のクローン性境界細胞（実線）は、非クローン性極性細胞（破線）を貪食、「セルインセル（ｃｅｌｌ－ｉｎ－ｃｅｌｌ）」表現型を表示する。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。カスパーゼ媒介性濾胞細胞死及びリソソーム依存性の生殖系列ナース細胞死を開始する濾胞細胞のサブセットにおける例示的な構成的に活性なＲａｃを説明する画像を示す。スケールバーは、５０μｍである。図３Ａ～３Ｄは特に、図３Ａ～３Ｄは、ＧＦＰ抗体（白色）、Ｄｃｐ－１（灰色、葉緑体死亡カスパーゼ）によって標識化される濾胞細胞のサブセットにおいて対照ｌａｃＺ（図３Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄ）のいずれかを発現する例示的なＦｌｐｏｕｔクローンの画像を示す。対照の卵室（図３Ａ）は、Ｄｃｐ－１染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、早期の卵室（矢印）におけるＤｃｐ－１の非自律的な蓄積を示す（図３Ｂ）。図３Ｃは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階７の卵室の高倍率画像を示し、近傍の濾胞細胞（矢印）における非自律的なＤｃｐ－１活性化を表示する。図３Ｄは、Ｒａｃ－ＣＡを発現する段階９の卵室を示し、クローン性濾胞細胞のすぐ近くにない濾胞細胞（矢印）に長い範囲のＤｃｐ－１活性化をクローン的に表示し、濾胞細胞内の長い範囲のＤｃｐ－１活性化が、大規模な組織破壊を引き起こし得ることを示唆している。ＧＦＰで標識化されたクローンは、図３Ｂ、３Ｃ、３Ｄにおいて破線によって示されている。生殖系列ナース細胞は、対照又はＲａｃ－ＣＡ発現クローンのいずれにおいて、いかなるＤｃｐ－１をも表示しない。図３Ｅ～３Ｈは対照の段階１０、１１、１２の卵室（図３Ｅ、３Ｆ、３Ｇ）及びＲａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（白色）によって駆動される例示的なＬｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ及びｌａｃＺを示す画像を示す。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、矢印によって示されている。Ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒは、対照の卵室における段階１２で、生殖系列ナース細胞を取り囲む伸長濾胞細胞の酸性区画で濃縮を開始し、卵室の発達の後期段階において、ナース細胞透過及びリソソーム媒介死をもたらす（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６）。Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室（図３Ｈ）は、ナース細胞核（矢印）における早期のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮を表示し、これらの卵室におけるナース細胞透過の早期発現を示唆する。より小さな濾胞細胞核は、いかなるＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ濃縮をも有さない。図３Ｉ～３Ｐは対照のｌａｃＺ（図３Ｉ、３Ｊ、３Ｋ、３Ｌ）及びＲａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）における、ｓｌｂｏエンハンサー（境界細胞内）によって駆動される卵室の低速度撮影画像からの例示的な静止画を示す画像を示す。ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（灰色）は、全ての核を標識する。全てのナース細胞核は、対照とは対照的に、Ｒａｃ－ＣＡ（図３Ｍ、３Ｎ、３Ｏ、３Ｐ）の発現後数分以内に同期的に凝縮し始める。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。Ｒａｃ－ＣＡによって引き起こされる、濾胞細胞の貪食ではなく、ショウジョウバエの呑み込み受容体ドレーパーの機能喪失が、生殖系列ナース細胞死をどのように救済するかを説明する画像及びチャートを示す。図４Ａ及び４Ｂは特に、図４Ａ及び４Ｂは、ｓｌｂｏエンハンサーによって駆動されるｌａｃＺを発現する例示的な段階９の卵９図４Ａ）及び段階１０の卵（図４Ｂ）室を示す画像である。図４Ｃは例示的なＲａｃ－ＣＡの発現が、卵室全体の変性を引き起こすことを示す画像である。図４Ｄは生殖系列ナース細胞死を救済するドレーパーホモ接合性背景における例示的なＲａｃ－ＣＡの発現を示す画像である。境界濾胞細胞は、突出せず、遊走を開始する（矢印）。図４Ｅは周囲の濾胞細胞（矢印）を貪食始める境界細胞を含む例示的な前濾胞細胞を示す画像である。図４Ｆは影響を受けない（矢印）例示的な求心細胞遊走を示す画像であるが、これらの細胞は、異常な多層形態を表示する。卵室は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について標識化される。図４Ｇはボックスプロットが、指示された遺伝子型について検出された死んだナース細胞を有する卵室の割合を表す、実験の結果を説明するチャートを示す。「ｎ」は、観察された卵室の数を表す。図４Ｈは指示された遺伝子型において、ナース細胞－ナース細胞界面からのＥ－Ｃａｄの喪失の定量化が検出された実験の結果を示すチャートを示す。全てのデータを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＊＊＝ｐ＜０．００１、＊＊＝ｐ＜０．０１。図４Ｉはｓｌｂｏエンハンサーによって駆動される、ｌａｃＺを発現する境界細胞クラスターを表す例示的な高倍率画像を示す画像であり、個々の境界細胞「ｂ」及び極性細胞「ｐ」を示す。図４ＪはＲａｃ－ＣＡ発現クラスターが、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞（矢印）からの片を噛むことを示す画像である。図４Ｋはドレーパーホモ接合性背景におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現を示す画像であり、非Ｒａｃ－ＣＡ発現極性細胞の類似の咬合又は完全な貪食（矢印）を表示し、濾胞細胞の貪食がドレーパーを必要としないことを示唆する。境界細胞（ｂ、実線）及び極性細胞（ｐ、破線）は、Ｅ－Ｃａｄ（灰色）について示され、標識化される。図４Ｌは伸長細胞特異的ＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ｔｕｂ－ＧＡＬ８０ｔｓの制御下にあるＵＡＳ－ＧＦＰ及びＵＡＳ－ｌａｃＺを発現する例示的な卵室を示す画像である。図４Ｍは伸長細胞におけるＲａｃ－ＣＡの例示的な発現が、それらに生殖系列ナース細胞を早期に殺傷させることを示す画像である。図４ＮはＲａｃ－ＣＡ発現卵室の例示的な高倍率画像を示す画像であり、全ての縮合されたナース細胞核を示し、伸長細胞によるナース細胞の殺傷のプロセスが同期的であることを示唆する。卵室は、ＧＦＰ（灰色）について標識化される。Ａ～Ｆ及びＩ～Ｎのスケールバーは、それぞれ５０及び２０μｍである。分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の発現が、白血病ＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込み及び殺傷を増強することを説明する画像及びチャートを示す。図５Ａは特に、図５Ａは、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ標識化されたＪｕｒｋａｔＴ細胞と共培養された、Ｌｃｋ－ＧＦＰを発現する例示的な分化したＨＬ６０マクロファージが、貪食（白い矢印）又は安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触（灰色の矢印）がほとんど示さないことを示す画像である。図５ＢはＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込みを増強する分化したＨＬ６０マクロファージにおける野生型Ｒａｃ２の例示的な発現を示す画像である。図５ＣはＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食及び殺傷を更に増加させる、分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の例示的な発現を示す画像である。安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触も、著しく増加する。図５Ｄはボックスプロットが表す実験の結果が、分化したＨＬ６０マクロファージによるＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食の割合を検出したこと説明するチャートを示す。図５Ｅは指示された遺伝子型において、安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触の割合の定量化が検出された実験の結果を説明するチャートを示す。データを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＝ｐ＜０．０５。スケールバー５０μｍ。分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の発現が、白血病ＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込み及び殺傷を増強することを説明する画像及びチャートを示す。図５Ａは特に、図５Ａは、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ標識化されたＪｕｒｋａｔＴ細胞と共培養された、Ｌｃｋ－ＧＦＰを発現する例示的な分化したＨＬ６０マクロファージが、貪食（白い矢印）又は安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触（灰色の矢印）がほとんど示さないことを示す画像である。図５ＢはＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込みを増強する分化したＨＬ６０マクロファージにおける野生型Ｒａｃ２の例示的な発現を示す画像である。図５ＣはＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食及び殺傷を更に増加させる、分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の例示的な発現を示す画像である。安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触も、著しく増加する。図５Ｄはボックスプロットが表す実験の結果が、分化したＨＬ６０マクロファージによるＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食の割合を検出したこと説明するチャートを示す。図５Ｅは指示された遺伝子型において、安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触の割合の定量化が検出された実験の結果を説明するチャートを示す。データを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＝ｐ＜０．０５。スケールバー５０μｍ。分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の発現が、白血病ＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込み及び殺傷を増強することを説明する画像及びチャートを示す。図５Ａは特に、図５Ａは、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ標識化されたＪｕｒｋａｔＴ細胞と共培養された、Ｌｃｋ－ＧＦＰを発現する例示的な分化したＨＬ６０マクロファージが、貪食（白い矢印）又は安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触（灰色の矢印）がほとんど示さないことを示す画像である。図５ＢはＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込みを増強する分化したＨＬ６０マクロファージにおける野生型Ｒａｃ２の例示的な発現を示す画像である。図５ＣはＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食及び殺傷を更に増加させる、分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の例示的な発現を示す画像である。安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触も、著しく増加する。図５Ｄはボックスプロットが表す実験の結果が、分化したＨＬ６０マクロファージによるＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食の割合を検出したこと説明するチャートを示す。図５Ｅは指示された遺伝子型において、安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触の割合の定量化が検出された実験の結果を説明するチャートを示す。データを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＝ｐ＜０．０５。スケールバー５０μｍ。分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の発現が、白血病ＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込み及び殺傷を増強することを説明する画像及びチャートを示す。図５Ａは特に、図５Ａは、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ標識化されたＪｕｒｋａｔＴ細胞と共培養された、Ｌｃｋ－ＧＦＰを発現する例示的な分化したＨＬ６０マクロファージが、貪食（白い矢印）又は安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触（灰色の矢印）がほとんど示さないことを示す画像である。図５ＢはＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込みを増強する分化したＨＬ６０マクロファージにおける野生型Ｒａｃ２の例示的な発現を示す画像である。図５ＣはＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食及び殺傷を更に増加させる、分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の例示的な発現を示す画像である。安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触も、著しく増加する。図５Ｄはボックスプロットが表す実験の結果が、分化したＨＬ６０マクロファージによるＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食の割合を検出したこと説明するチャートを示す。図５Ｅは指示された遺伝子型において、安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触の割合の定量化が検出された実験の結果を説明するチャートを示す。データを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＝ｐ＜０．０５。スケールバー５０μｍ。分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の発現が、白血病ＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込み及び殺傷を増強することを説明する画像及びチャートを示す。図５Ａは特に、図５Ａは、ＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ標識化されたＪｕｒｋａｔＴ細胞と共培養された、Ｌｃｋ－ＧＦＰを発現する例示的な分化したＨＬ６０マクロファージが、貪食（白い矢印）又は安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触（灰色の矢印）がほとんど示さないことを示す画像である。図５ＢはＪｕｒｋａｔＴ細胞の呑み込みを増強する分化したＨＬ６０マクロファージにおける野生型Ｒａｃ２の例示的な発現を示す画像である。図５ＣはＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食及び殺傷を更に増加させる、分化したＨＬ６０マクロファージにおける構成的に活性なＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の例示的な発現を示す画像である。安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触も、著しく増加する。図５Ｄはボックスプロットが表す実験の結果が、分化したＨＬ６０マクロファージによるＪｕｒｋａｔＴ細胞の貪食の割合を検出したこと説明するチャートを示す。図５Ｅは指示された遺伝子型において、安定したＨＬ６０－Ｊｕｒｋａｔ接触の割合の定量化が検出された実験の結果を説明するチャートを示す。データを、チューキー・クレーマーの事後分析による一元配置分散分析によって分析した。＊＊＊＊＝ｐ＜０．０００１、＊＝ｐ＜０．０５。スケールバー５０μｍ。濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃは、カスパーゼ媒介性濾胞細胞死を開始する。（図６Ａ）濾胞細胞のサブセットにおける対照のｌａｃＺ（図６Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ）のいずれかを発現するＦｌｐｏｕｔクローンは、ＧＦＰ抗体（白色）、及び切断されたカスパーゼ－３（白色矢印）によって標識化される。対照の卵室（図６Ａ）は、ｃ－カスパーゼ３染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、ＧＦＰ＋（白色）クローンの横にｃ－カスパーゼ３（白色矢印）の非自律的な蓄積を示す。スケールバー２０μｍ。濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃは、カスパーゼ媒介性濾胞細胞死を開始する。（図６Ａ）濾胞細胞のサブセットにおける対照のｌａｃＺ（図６Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ）のいずれかを発現するＦｌｐｏｕｔクローンは、ＧＦＰ抗体（白色）、及び切断されたカスパーゼ－３（白色矢印）によって標識化される。対照の卵室（図６Ａ）は、ｃ－カスパーゼ３染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、ＧＦＰ＋（白色）クローンの横にｃ－カスパーゼ３（白色矢印）の非自律的な蓄積を示す。スケールバー２０μｍ。濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃは、カスパーゼ媒介性濾胞細胞死を開始する。（図６Ａ）濾胞細胞のサブセットにおける対照のｌａｃＺ（図６Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ）のいずれかを発現するＦｌｐｏｕｔクローンは、ＧＦＰ抗体（白色）、及び切断されたカスパーゼ－３（白色矢印）によって標識化される。対照の卵室（図６Ａ）は、ｃ－カスパーゼ３染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、ＧＦＰ＋（白色）クローンの横にｃ－カスパーゼ３（白色矢印）の非自律的な蓄積を示す。スケールバー２０μｍ。濾胞細胞のサブセットにおける構成的に活性なＲａｃは、カスパーゼ媒介性濾胞細胞死を開始する。（図６Ａ）濾胞細胞のサブセットにおける対照のｌａｃＺ（図６Ａ）又はＲａｃ－ＣＡ（図６Ｂ、６Ｃ、６Ｄ）のいずれかを発現するＦｌｐｏｕｔクローンは、ＧＦＰ抗体（白色）、及び切断されたカスパーゼ－３（白色矢印）によって標識化される。対照の卵室（図６Ａ）は、ｃ－カスパーゼ３染色を表示しないが、Ｒａｃ－ＣＡ発現卵室は、ＧＦＰ＋（白色）クローンの横にｃ－カスパーゼ３（白色矢印）の非自律的な蓄積を示す。スケールバー２０μｍ。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。本開示による例示的な活性化された食細胞の概略図を示す。各矩形は、異なる又は組み合わせたベクターを有する遺伝子操作された活性化された食細胞を表す。異なる色及び灰色の色合いは、特定のベクター要素を表す。

活性化された食細胞が本明細書で提供され、特に、遺伝子操作された食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムが本明細書で提供され、これらは、個体におけるＲａｃ遺伝子を活性化することによって標的細胞の呑み込み及び／又はトロゴサイトーシスを提供する、かつ／又は可能にすることができる。

食作用を有する細胞におけるＲａｃ濃度、活性、及び／又は機能を修飾することによって、食作用を有する細胞が、食作用及び／又はトロゴサイトーシスの増加を呈することができることが、本発明の発明者らによって予期せずに見出された。いくつかの実施形態では、食作用を有する細胞は、細胞中のＲａｃタンパク質若しくはその一部分の増加した濃度を有するように、かつ／又は細胞中の異なる種類（例えば、配列及び／又は構造）のＲａｃタンパク質若しくはその一部分を有するように修飾され、それにより、食作用を有する細胞におけるＲａｃ濃度、活性、及び／又は機能を修飾することができる。

本明細書で使用される場合、「食作用を有する細胞」若しくは「食細胞」という用語、又はそれらの複数形は、食作用が可能な細胞を示し、食作用とは、細胞がその原形質膜を使用して、大きな粒子（≧０．５μｍ）を貪食、ファゴソームと呼ばれる内部区画を生じさせるプロセスである。食作用は、当業者によって理解されるように、エンドサイトーシスの一種である。個体の食細胞は、典型的には、それらの原形質膜を使用して、細胞残屑、異物、微生物、及び細胞を貪食、取り除いて、個体の身体を保護する。本開示の意味における食細胞は、典型的には、抗原提示細胞にコンジュゲートされたリンパ球（Ｂ、Ｔ、及びＮＫ細胞）がこれらの細胞から表面分子を抽出し、それらを自身の表面上に発現させるプロセスである、トロゴサイトーシスを実行することもできる。

本明細書で使用される場合、食細胞、遺伝子、核酸、及び／又はタンパク質に関して「操作された」又は「組換え」という用語は、ヒト介入を通じて変化した食細胞、遺伝子、核酸、及び／又はタンパク質を指す。したがって、本明細書で使用される食細胞、遺伝子、核酸及び／又はタンパク質に関して本明細書で使用される「自然発生の」という用語は、天然に存在し、いかなるヒト介入も伴わない食細胞、遺伝子、核酸及び／又はタンパク質を指す。例示的なヒト介入には、本明細書に記載される食細胞、遺伝子、核酸、及び／又はタンパク質中の天然に生じる配列などの天然に生じる配列に関して欠失、挿入、修飾、及び／又は再配列をもたらす異種ポリヌクレオチドによるトランスフェクション、分子クローニングが含まれる。

本明細書で使用される場合、「個体」又は「対象」又は「患者」という用語は、単一の動物、特に高等動物、特に、無脊椎動物又は脊椎動物、例えば、哺乳類、及びより具体的には、ヒトなどの多細胞生物を含む。

本明細書に記載される例示的な食作用を有する細胞には、当業者が理解するように、マクロファージ、単球、好中球、樹状細胞、及びそれらの前駆体が含まれるが、ジクチオステリウム・アメーバなどの単一細胞生物も食細胞である。

本明細書で使用される場合、「マクロファージ」という用語は、食作用が可能である免疫系の白血球の種類を示す。マクロファージは、組織内に遊走する血液単球に由来する。マクロファージの主な機能の１つは、微生物を食作用し、細胞残屑を一掃することである。マクロファージはまた、炎症の開始及び解決の両方において重要な役割を果たす。マクロファージはまた、周囲の微小環境から受け取る刺激の種類に応じて、炎症促進性から抗炎症性までの範囲の異なる応答を表示することができる。Ｍ１及びＭ２は、極端なマクロファージ応答と相関することが提案されている２つの主要なマクロファージ表現型である。本開示の意味におけるマクロファージは、当業者によって理解されるように、結合組織において、並びに肝臓（クッパー細胞）、脾臓及びリンパ節（洞組織細胞）、肺（肺胞マクロファージ）、並びに中枢神経系（ミクログリア）において、典型的には、びまん性に散在する細胞を含む。

本明細書で使用される場合、「単球」という用語は、最大の種類の白血球であり、マクロファージと骨髄細胞系列の樹状細胞とに分化することができる、食作用が可能な白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）又は白血球（ｗｈｉｔｅｂｌｏｏｄｃｅｌｌ）の種類を示す。脊椎動物の先天性免疫系の一部として、単球はまた、適応免疫のプロセスにも影響を与える。当業者によって理解されるように、ＣＤ１４^＋＋ＣＤ１６^－単球、ＣＤ１４^＋ＣＤ１６^＋＋単球、及びＣＤ１４^＋＋ＣＤ１６^＋単球を含む、ヒト血液中の単球の表現型受容体に基づいて、少なくとも３つのサブクラスが存在する。単球は、様々な組織マクロファージ及び樹状細胞集団の前駆体として機能し、保護免疫応答及び病理学的免疫応答の両方に寄与する。

本明細書で使用される場合、「樹状細胞」という用語は、微生物及び他の侵入者を貪食することを補助する、樹状突起と呼ばれる長い突起物を有する、食作用が可能な、特殊な抗原提示細胞を示す。樹状細胞は、外部環境、主に皮膚、鼻の内層、肺、胃、及び腸と接触している組織に存在する。活性化されると、それらは成熟し、リンパ組織に遊走し、そこで、それらは、Ｔ細胞及びＢ細胞と相互作用して、適応免疫応答を開始し、編成する。成熟した樹状細胞は、ヘルパーＴ細胞及び細胞傷害性Ｔ細胞を活性化する。（Ｓｏｍｐａｙｒａｃ２０１９）。活性化されたヘルパーＴ細胞は、マクロファージ及びＢ細胞と相互作用して、順番にそれらを活性化する。加えて、樹状細胞は、産生される免疫応答の種類に影響を与えることができ、Ｔ細胞が保持されるリンパ系領域に移動すると、それらは、Ｔ細胞を活性化することができ、それらは、その後、細胞傷害性Ｔ細胞又はヘルパーＴ細胞に分化する。

本明細書で使用される場合、「好中球」という用語は、当業者に知られているように、ほとんどの哺乳類において最も豊富な種類の顆粒球及び最も豊富な種類の白血球を形成する食細胞を示す。好中球は、骨髄中の幹細胞から形成され、好中球キラーの亜集団と好中球ケイジャーの亜集団とに分化される。

本明細書で使用されるマクロファージ、単球、樹状細胞、及び／又は好中球と関連して使用される場合の「前駆体」という文言（本明細書ではまた、前駆細胞）は、本明細書に記載される食作用を有する細胞にもたらされる細胞系統における親細胞を示す。例示的な前駆細胞としては、骨髄、幹細胞、及び当業者によって特定可能な他の前駆細胞が挙げられる。

本開示による様々な実施形態の食細胞は、活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化発現レベルにあるＲａｃタンパク質を発現することができる、自然発生の、又は操作された活性化された食細胞である。

Ｒａｃタンパク質に関して本明細書で使用される場合、「活性化された」という用語は、増強されたＲａｃ特性をもたらす、かつ／又は提供する配列を有するＲａｃタンパク質を指す。

Ｒａｃ遺伝子に関して本明細書で使用される場合、「活性化した」という用語は、本開示の意味における活性化されたＲａｃタンパク質をコードするＲａｃ遺伝子、したがって、増強されたＲａｃ特性を提供するように構成されているＲａｃタンパク質を示す。

Ｒａｃタンパク質の発現レベルに関して本明細書で使用される場合、「活性化された」又は「活性化」という用語は、ベースラインの発現レベルと比較して増加した発現レベルを示し、増加した発現レベルは、増強されたＲａｃ特性をもたらす。

本明細書で使用される場合、「増加する」、「増加すること」、「改善する」、及び「改善すること」（及びそれらの文法的変形）は、文脈がそうでないことを示さない限り、参照値の検出可能な上昇を説明する。増加は、別の測定可能な特性又は量（例えば、対照値）と比較してなど、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、１００％、１５０％、２００％、３００％、４００％、５００％、又はそれ以上の上昇を含み得る。

本開示の意味におけるＲａｃ特性は、ＧＴＰ結合、ＧＴＰ加水分解、及び／又は下流エフェクターとの会合を含むＲａｃタンパク質の生物学的活性を特徴付ける特性であり、該下流エフェクターは、アクチンへの構造変化、細胞骨格再編成、細胞成長、細胞移動、グルコース形質転換小胞のトランスロケーション、グルコース取り込み、抗菌細胞傷害性、タンパク質キナーゼの活性化、並びに当業者によって特定可能な追加の事象などの様々な生物学的事象に対するＲａｃ効果を媒介する。例示的な下流エフェクターには、プロテインキナーゼＢとしても知られるセリン／トレオニンタンパク質キナーゼＡｋｔ、並びにｓｅｒ／ｔｈｒタンパク質キナーゼ、ＰＡＫ１としても知られるｐ６５^ＰＡＫ、及び当業者によって特定可能な追加の下流エフェクターが含まれる。

本開示の意味における増強されたＲａｃ特性は、配列番号１を有する活性化していないＲａｃタンパク質のＲａｃ特性に関して決定される増強されたＲａｃ特性である。
ＭＱＡＩＫＣＶＶＶＧＤＧＡＶＧＫＴＣＬＬＩＳＹＴＴＮＡＦＰＧＥＹＩＰＴＶＦＤＮＹＳＡＮＶＭＶＤＳＫＰＶＮＬＧＬＷＤＴＡＧＱＥＤＹＤＲＬＲＰＬＳＹＰＱＴＤＶＦＬＩＣＦＳＬＶＳＰＡＳＹＥＮＶＲＡＫＷＦＰＥＶＲＨＨＣＰＳＴＰＩＩＬＶＧＴＫＬＤＬＲＤＤＫＤＴＩＥＫＬＫＥＫＫＬＡＰＩＴＹＰＱＧＬＡＬＡＫＥＩＤＳＶＫＹＬＥＣＳＡＬＴＱＲＧＬＫＴＶＦＤＥＡＩＲＡＶＬＣＰＱＰＴＲＱＱＫＲＡＣＳＬＬ

したがって、食細胞における活性化されたＲａｃタンパク質の増強された特性の存在は、食細胞からＲａｃタンパク質のＧＴＰへの結合を検出して、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率を提供することと、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質のＧＴＰへの結合を検出して、活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率を提供することと、２つのＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率を比較して、活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率と比べて、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率に増加があるかどうかを決定することと、によって決定され得る。

本明細書に記載される実施形態では、ＧＴＰへの結合を検出することは、ＧＤＰ交換アッセイ（実施例５及び実施例６を参照されたい）、ＧＡＰの存在下でのＧＴＰ加水分解アッセイ、及び／又は当業者によって特定可能な他のアッセイによって決定される、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）媒介グアニンヌクレオチド交換などの試験で実施され得る。

したがって、増強されたＲａｃ特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率を活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率と比較することによって検出することができ、増強された特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率、又は同等のパラメータ（形成されるＲａｃーＧＴＰ複合体の量など）が活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率より高い場合に検出される（実施例５及び実施例６を参照されたい）。

特に、いくつかの実施形態では、増強されたＲａｃ特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率が、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質の活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率よりも高い場合に検出される。

それらの実施形態のうちのいくつかでは、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率は、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質の活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率よりも約１．５倍～２倍高いか、又は更に高いことがあり、場合により、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質よりも約２倍高い、３倍高い、４倍高い、５倍高い、６倍高い、７倍高い、８倍高い、９倍高い。

本明細書で使用される場合、「約」という用語は、量又は濃度などの測定可能な値を指す場合、指定された値の±１０％、±５％、±１％、±０．５％、又は更に±０．１％の変動、並びに文脈が別段明確に示さない限り、指定された値を包含することを意味する。例えば、「約Ｘ」（Ｘは、測定可能な値である）は、Ｘ、並びにＸの±１０％、±５％、±１％、±０．５％、又は更には±０．１％の変動を含むことを意味する。測定可能な値のために本明細書に提供される範囲は、任意の他の範囲及び／又はその中の個々の値を含み得る。

本明細書で使用される「倍率変化」という文言は、元の測定値と後続の測定値との間で量がどの程度変化するかを説明する測定値を示す。特に、倍率変化は、２つの量間の比として定義される。例えば、数量Ａ及びＢに関して、Ａに対するＢの倍率変化は、Ｂ／Ａである。言い換えれば、３０から６０への変更は、２の倍率変化として定義される（出典Ｗｉｋｉｐｅｄｉａページ（２０２１年４月２０日））。

いくつかの実施形態では、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ結合率は、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質の活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ結合率よりも１０倍以上高いことがあり、場合により、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質よりも約２０倍高い、３０倍高い、４０倍高い、５０倍高い、６０倍高い、７０倍高い、８０倍高い、９０倍高い、及び最大１００倍高い。

加えて、又は代替として、食細胞中の活性化されたＲａｃタンパク質の増強された特性の存在は、食細胞からのＲａｃタンパク質によるＧＴＰ加水分解を定量的に検出して、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率を提供することと、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質によるＧＴＰの加水分解を定量的に検出して、活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率を提供することと、によって検出することができる。

次いで、増強された特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率を、活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率と比較することによって検出することができ、増強された特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率が、活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率よりも低い場合に検出される。

特に、いくつかの実施形態では、増強されたＲａｃ特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率が、活性化されていないＲａｃタンパク質ＧＴＰ加水分解率と比較して、５０％以下である場合に検出される。

加えて、又は代替的に、食細胞中の活性化されたＲａｃタンパク質の増強された特性の存在は、食細胞Ｒａｃタンパク質とＲＡＣ下流エフェクターとの間の反応の生成物を定量的に検出して、食細胞Ｒａｃタンパク質からの検出された下流生成物レベルを提供することと、活性化されていないＲａｃタンパク質と同じ下流エフェクターとの間の同じ反応の生成物を定量的に検出して、活性化されていないＲａｃタンパク質から提供された、検出された下流生成物レベルを提供することと、によって検出することができる。

増強された特性は、次いで、食細胞Ｒａｃタンパク質からの検出された下流生成物レベルを、活性化されていないＲａｃタンパク質の検出された下流生成物レベルと比較することによって検出することができ、ここで、増強された特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質からの検出された下流生成物レベルが、活性化されていないＲａｃ生成物レベルからの検出された下流生成物よりも高い場合に検出される。

いくつかの実施形態では、増強されたＲａｃ特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質からの検出された下流生成物レベルが、活性化されていないＲａｃタンパク質、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質からの検出された生成物レベルよりも約１．５～２倍高いか、又は更に高い場合に検出され得、場合により、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質よりも約２倍高い、３倍高い、４倍高い、５倍高い、６倍高い、７倍高い、８倍高い、９倍高い。

いくつかの実施形態では、食細胞Ｒａｃタンパク質の検出された下流生成物レベルは、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質の検出された下流生成物レベルよりも１０倍以上高いことがあり、場合により、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質よりも約２０倍高い、３０倍高い、４０倍高い、５０倍高い、６０倍高い、７０倍高い、８０倍高い、９０倍高い、及び最大１００倍高い。

特定の下流エフェクター及び対応する生成物レベルは、本開示を読んだ上で当業者によって識別され得る。例示的な下流エフェクターは、Ｒａｃによってリン酸化されて、リン酸化ｐＡＫＴなどの下流生成物を提供するＡｋｔと、ｓｅｒ／ｔｈｒプロテインキナーゼと、ＰＡＫ１としても知られ、Ｒａｃによって活性化されると、下流生成物としてアクチン重合及びＦアクチン含有量を提供するｐ６５^ＰＡＫと、Ｒａｃによって活性化されると、下流生成物として反応性酸素種（ＲＯＳ）を提供する細胞質ＮＡＤＰＨオキシダーゼｐ６７^ｐｈｏｘ及びｇｐ９１^ｐｈｏｘと、を含む。

特に、いくつかの実施形態では、下流エフェクターは、ＡＫＴであり、生成物は、ｐＡＫＴであり、増強された特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質によるＡＫＴのリン酸化が、活性化されていないＲａｃタンパク質に対して約１．５倍～約２倍以上のｐＡＫＴレベルを提供する場合に検出される。特に、配列番号１のＲａｃタンパク質に対して約１．５倍～約２倍以上のｐＡＫＴのレベルは、当業者によって理解されるように、活性化されたＲａｃ発現レベルによる増強された下流シグナル伝達を示すであろう。

いくつかの実施形態では、下流エフェクターは、ＰＡＫ１であり、反応生成物は、アクチン重合／Ｆ－アクチン含有量であり、増強された特性は、食細胞Ｒａｃタンパク質によるＰａｋ１の活性化が、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質に対してＦ－アクチン含有量を約１．５倍～約２倍以上増加させる場合に検出される。特に、配列番号１のＲａｃタンパク質のＦ－アクチン含有量に対するＦ－アクチン含有量の約１．５倍～約２倍以上の増加は、当業者によって理解されるように、活性Ｒａｃ依存性シグナル伝達の増加の指標となり得る。

いくつかの実施形態では、下流エフェクターは、約１．５倍～約２倍以上の経時的な活性酸素種（ＲＯＳ）産生の増加、及び約１．５～２倍以上の微飲作用（細胞飲作用）の増加の一方又は両方である。特に、配列番号１のＲａｃタンパク質に対するＲＯＳ及び微飲作用の一方又は両方の増加は、活性化されたＲａｃ発現による増強された下流シグナル伝達とみなされるであろう。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化されたＲＡＣ発現レベルは、本開示を読んだ上で当業者によって理解されるように、任意の可能な組み合わせで１つ、２つ、３つ、又はそれ以上の増強されたＲａｃ特性を提供することができ、かつ／又は提供するように構成されている。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化されたＲａｃ発現レベルは、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質に対するＧＴＰの結合の１０％から１００倍（±５％の許容誤差）の増加を、（ＲａｃのＧＴＰ／ＧＤＰ結合比のインビトロの測定のための）ＰＡＫ－ＰＢＤ結合アッセイで提供することができ、かつ／又は提供するように構成されている。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化されたＲａｃ発現レベルは、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質に対するＡＫＴレベル（Ｒａｃの下流エフェクター）のリン酸化の１０％～１００倍（±５％の許容誤差）の増加を提供することができ、かつ／又は提供するように構成されている。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化されたＲａｃ発現レベルは、配列番号１の活性化されていないＲａｃタンパク質に対する、経時的な活性酸素種（ＲＯＳ）産生の１０％～１００倍（±５％の許容誤差）の増加、及び／又は微飲作用（細胞飲作用）の１０％～１００倍（±５％の許容誤差）の増加を提供することができ、かつ／又は提供するように構成されている。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化されたＲＡＣ発現レベルは、検出可能な毒性／表現型異常を引き起こすことなく、細胞によって許容される、増強されたＲａｃ特性を提供することができ、かつ／又は提供するように構成されている。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、Ｒａｃ特性及び／又は活性を増強する変異を有する変異Ｒａｃ遺伝子によってコードされる。いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質発現レベルは、Ｒａｃシグナル伝達経路に関与する１つ以上の上流調節因子、例えば、グアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ、例えば、ＴＩＡＭ１、Ｖａｖ、及び当業者によって特定可能な追加の交換因子）又はグアニンヌクレオチドトリホスファターゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）を過剰発現させるか、又は阻害することによって提供、かつ／又は達成され、したがって、Ｒａｃの活性化をもたらす。

本明細書で使用される「Ｒａｃ遺伝子」という用語は、ピレン－アクチン組み込み及び顕微鏡法などの標準アッセイを使用して測定されるように、遊走細胞の前縁でアクチン重合及び突起を刺激し、微飲作用を刺激し、かつ／又は及び食作用を刺激することができるＧＴＰアーゼのＲｈｏファミリーのＲａｃタンパク質をコードする遺伝子を示す。Ｒａｃ遺伝子の例示的な特徴は、例えば、Ｒｉｄｌｅｙｅｔａｌ．１９９２（Ｒｉｄｌｅｙ，Ｐａｔｅｒｓｏｎｅｔａｌ．１９９２）、ＭｕｒｐｈｙａｎｄＭｏｎｔｅｌｌ１９９６（ＭｕｒｐｈｙａｎｄＭｏｎｔｅｌｌ１９９６）、Ｒｉｄｌｅｙ２０１５（Ｒｉｄｌｅｙ２０１５）、Ｍａｓｓｏｌｅｔａｌ．１９９８（Ｍａｓｓｏｌ，Ｍｏｎｔｃｏｕｒｒｉｅｒｅｔａｌ．１９９８）に記載されている。

本開示の意味におけるＲａｃタンパク質は、ＢＬＡＳＴｐ、又は参照配列として、配列番号１
ＭＱＡＩＫＣＶＶＶＧＤＧＡＶＧＫＴＣＬＬＩＳＹＴＴＮＡＦＰＧＥＹＩＰＴＶＦＤＮＹＳＡＮＶＭＶＤＳＫＰＶＮＬＧＬＷＤＴＡＧＱＥＤＹＤＲＬＲＰＬＳＹＰＱＴＤＶＦＬＩＣＦＳＬＶＳＰＡＳＹＥＮＶＲＡＫＷＦＰＥＶＲＨＨＣＰＳＴＰＩＩＬＶＧＴＫＬＤＬＲＤＤＫＤＴＩＥＫＬＫＥＫＫＬＡＰＩＴＹＰＱＧＬＡＬＡＫＥＩＤＳＶＫＹＬＥＣＳＡＬＴＱＲＧＬＫＴＶＦＤＥＡＩＲＡＶＬＣＰＱＰＴＲＱＱＫＲＡＣＳＬＬを使用して、一次の生物学的配列情報を比較するための他のアルゴリズム及びプログラムによって取得された任意のタンパク質配列（天然又は合成）を指す。

本明細書で使用される場合、「参照配列」は、配列比較の基礎として使用される定義された配列である。参照配列は、例えば、全長タンパク質のセグメント、又はタンパク質断片としての、特定の配列のサブセット又は全体であり得る。参照配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ及びＵｎｉＰｒｏｔなどのデータベース内で特定可能な配列、並びに当業者に特定可能な他の配列を含むことができる。

任意の２つの配列間の一次生物学的配列情報を比較するためのアルゴリズム及びプログラムは、当業者によって特定可能である。そのような数学的アルゴリズムの非限定的な例は、Ｍｙｅｒｓ及びＭｉｌｌｅｒのアルゴリズム（ＭｙｅｒｓａｎｄＭｉｌｌｅｒ１９８８）、Ｓｍｉｔｈｅｔａｌ．の局所相同性アルゴリズム（ＳｍｉｔｈａｎｄＷａｔｅｒｍａｎ１９８１）、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ及びＷｕｎｓｃｈの相同性整列アルゴリズム（ＮｅｅｄｌｅｍａｎａｎｄＷｕｎｓｃｈ１９７０））、Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎの類似検索法（ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎ１９８８）、Ｋａｒｌｉｎ及びＡｌｔｓｃｈｕｌのアルゴリズム（ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ１９９０）、ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ（ＫａｒｌｉｎａｎｄＡｌｔｓｃｈｕｌ１９９３）のように修正されているもの）である。これらの数学的アルゴリズムのコンピュータ実施を、配列同一性を決定するための配列の比較のために利用することができる。そのような実施には、ＰＣ／ＧｅｎｅプログラムにおけるＣＬＵＳＴＡＬ（Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｅｔｉｃｓ、ＭｏｕｎｔａｉｎＶｉｅｗ，Ｃａｌｉｆ．から入手可能）、ＡＬＩＧＮプログラム（Ｖｅｒｓｉｏｎ２．０）及びＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ（ＰｅａｒｓｏｎａｎｄＬｉｐｍａｎ１９８８）、並びにＷｉｓｃｏｎｓｉｎＧｅｎｅｔｉｃｓＳｏｆｔｗａｒｅＰａｃｋａｇｅ、Ｖｅｒｓｉｏｎ８におけるＴＦＡＳＴＡ（ＧｅｎｅｔｉｃｓＣｏｍｐｕｔｅｒＧｒｏｕｐ（ＧＣＧ）、５７５ＳｃｉｅｎｃｅＤｒｉｖｅ，Ｍａｄｉｓｏｎ，Ｗｉｓ．，ＵＳＡ）が含まれるがこれらに限定されない。これらのプログラムを使用したアラインメントは、デフォルトのパラメータを使用して実行することができ、ユーザは、ある特定の信頼閾値を超える参照配列（クエリ配列）に類似するデータベース配列を特定することができる。

任意の２つの配列間の一次生物学的配列情報を比較するためのアルゴリズム及びプログラムは、典型的には、取り出された配列と参照配列との間のパーセント同一性を含む出力を提供する。

当業者であれば、配列間の同一性は、典型的には、２つのポリペプチド又はポリヌクレオチド配列を整列させて、整列させた配列を形成し、次いで、一致した文字の数、すなわち、２つの整列させた配列間の類似又は同一の文字の数を検出し、ＧＡＰを含む、各ポリペプチド又はポリヌクレオチド配列における整列させた文字の総数によって除算された一致した文字の総数を計算するステップを含むプロセスによって測定されることを理解するであろう。類似性結果は、同一性の割合として表される。

本明細書で使用する場合、「配列同一性の割合」とは、比較ウィンドウにわたって２つの最適に整列させた配列を比較することによって決定される値を意味し、比較ウィンドウ内のポリヌクレオチド配列の部分は、２つの配列の最適な整列のために、参照配列と比較して（付加又は欠失を含まない）、付加又は欠失（ＧＡＰ）を含み得る。割合は、同一の核酸塩基又はアミノ酸残基が、が両方の配列で生じる位置の数を決定して、一致した位置の数を得て、一致した位置の数を、比較ウィンドウ内の位置の総数で除算し、結果に１００を乗算して、配列同一性の割合を決定することによって計算される。

本開示の意味におけるＲａｃタンパク質は、配列番号１に関して９６％以上のパーセント同一性を有する活性化及び活性化されていない天然又は合成タンパク質を含み得、特に、９６．８８％、９７．３８％、９７．４０％、９７．４４％、９７．９１％、９７．９２％、９８．４４％、９８．９６％、９９．４８％、及び１００．００％のパーセント同一性を有する配列を包含し得る配列番号１との追加のパーセント同一性は、当業者によって特定可能である。

特に、活性化されたＲａｃタンパク質は、配列番号１に対して低いパーセント同一性を有し、依然として１つ以上のＲａｃ特性を維持するか、又はその増加を示すタンパク質を含むこともできる。したがって、本開示を読んだ上で当業者によって理解されるように、Ｒａｃ配列は、例えば、ヒト介入の結果として、配列番号１に対する同一性が９６％未満の配列を含むことができる。

特に、Ｒａｃタンパク質という用語は、ヒトＲａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３における３つの高度に関連するＲａｃタンパク質を包含し、これらは、異なる分類学的ランクの個体間でも高度に保存される（実施例１、実施例２を参照されたい）。特に、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３は、下流エフェクターに結合し、それらのＣ末端で保存された脂質結合領域を共有する、Ｎ末端に位置するエフェクター領域であるグアノシン三リン酸（ＧＴＰ）に結合するヌクレオチド結合領域を含有する。エフェクター領域は、スイッチＩ領域としても知られているが、スイッチＩＩ領域は、当業者によって理解されるように、ＲＡＣタンパク質がＧＴＰに結合する部位である（実施例２を参照されたい）（Ｋｕｍａｒ，Ｒａｊｅｎｄｒａｎｅｔａｌ．２０１３）。

本明細書で使用される場合、「Ｒａｃ１遺伝子」又は「ＲＡＣ１」という用語は、ＧＴＰアーゼ小グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）代謝タンパク質のＲｈｏファミリーのＲａｃ１タンパク質をコードする遺伝子を示す。Ｒａｃ１は、様々な選択的スプライスによるバージョンのＲａｃ１タンパク質で提供され、Ｒａｃ１は、細胞周期、細胞－細胞接着、運動性（アクチンネットワークを介して）を含む、多くの細胞プロセス及び上皮分化（表皮幹細胞を維持するために必要であることが提案される）の多向性調節因子である（Ｗｉｋｉｐｅｄｉａ２０２０年１２月３１日から）。

本明細書で使用される場合、「Ｒａｃ－２遺伝子」又は「ＲＡＣ２」という用語は、ＧＴＰアーゼ小グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）代謝タンパク質のＲｈｏファミリーのＲａｃ－２タンパク質をコードする遺伝子を示す。コードされたタンパク質は、原形質膜に局在し、そこで、それは、分泌、食作用、及び細胞の分極などの多様なプロセスを調節する。このタンパク質の活性はまた、活性酸素種の生成に関与している。この遺伝子の変異は、好中球免疫不全症候群と関連している。Ｒａｃ－２遺伝子は、主に造血起源の細胞において天然に発現され、食細胞の化学運動及び超酸化物産生、並びにリンパ球の発達及び／又は生存に必要である。

本明細書で使用される場合、「Ｒａｃ－３遺伝子」又は「ＲＡＣ３」という用語は、ＧＴＰアーゼ小グアノシン三リン酸（ＧＴＰ）のＲｈｏファミリーのＲａｃ－３タンパク質をコードする遺伝子を示す。Ｒａｃ３は、Ｂｃｒによって調節される活性型ＧＴＰアーゼである。構成的に活性化されるとき、Ｒａｃ３は、ｃ－Ｊｕｎアミノ末端キナーゼシグナル伝達経路を効率的に刺激することができる。これらの所見は、細胞内シグナル伝達におけるＲａｃ３の役割を支持する。Ｒａｃ３タンパク質レベルは、アクチン細胞骨格の組織化による影響を受けないが、意外なことに、血清誘導性である（出典（Ｈａａｔａｊａ，Ｇｒｏｆｆｅｎｅｔａｌ．１９９７）。本明細書で使用される場合、「遺伝子」という用語は、ある場合に、細菌、植物、又は他の生物内のゲノムＤＮＡの単位の形態をとることができるタンパク質をコードするポリヌクレオチドを示す。本明細書で使用される、遺伝子という用語は、自然発生のポリヌクレオチド、並びに自然発生のポリヌクレオチド又はその機能的バリアントによってコードされるタンパク質をコードする能力をまだ維持しながら、配列が、例えば、コドン変化（実施例の節を参照されたい）を通じて、並びに／又はＮ末端及び／若しくはＣ末端修飾の導入を通じて、例えば、発現を最適化するために、元の配列から修飾されている操作されたポリヌクレオチドを含む。

本明細書で使用される「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチド、ヌクレオシド、又はそれらの類似体を含む、２つ以上のモノマーで構成される有機ポリマーを示す。「ヌクレオチド」という用語は、プリン又はピリミジン塩基に、かつリン酸基に接合されるリボース又はデオキシリボース糖からなり、核酸の基本的な構造単位であるいくつかの化合物のいずれかを指す。「ヌクレオシド」という用語は、デオキシリボース又はリボースと組み合わせたプリン又はピリミジン塩基からなり、特に核酸に見られる化合物（グアノシン又はアデノシンなど）を指す。「ヌクレオチド類似体」又は「ヌクレオシド類似体」という用語は、それぞれ、１つ以上の個々の原子が異なる原子で、又は異なる官能基で置き換えられているヌクレオチド又はヌクレオシドを指す。したがって、ポリヌクレオチドという用語は、任意の長さの核酸、特にＤＮＡＲＮＡ類似体及びその断片を含む。

「タンパク質」という用語は、本明細書で使用される場合、別の分子、特に、他のタンパク質、ＤＮＡ、ＲＮＡ、脂質、代謝産物、ホルモン、ケモカイン、及び／又は小分子を含む他の生体分子と相互作用することができる特定の二次及び三次構造を有するポリペプチドを示す。本明細書で使用される「ポリペプチド」という用語は、２つ以上のアミノ酸単量体及び／又はそれらの類似体で構成される有機直鎖状、環状、又は分枝状ポリマーを示す。「ポリペプチド」という用語は、全長タンパク質及びペプチドを含む任意の長さのアミノ酸ポリマー、並びにそれらの類似体及び断片を含む。３つ以上のアミノ酸のポリペプチドは、タンパク質オリゴマー、ペプチド、又はオリゴペプチドとも呼ばれる。特に、「ペプチド」及び「オリゴペプチド」という用語は、通常、１００個未満のアミノ酸モノマーを有するポリペプチドを示す。特に、タンパク質において、ポリペプチドは、タンパク質の一次構造を提供し、タンパク質の「一次構造」という用語は、ポリペプチドポリマーを形成するために共有結合したポリペプチド鎖内のアミノ酸の配列を指す。タンパク質「配列」は、一次構造を形成するアミノ酸の順序を示す。一次構造内のアミノ酸間の共有結合は、ペプチド結合又はジスルフィド結合、及び当業者によって特定可能な追加の結合を含むことができる。本開示の意味におけるポリペプチドは、通常、ペプチド結合又は合成共有結合によって共有結合されたアルファ－アミノ酸残基の直鎖で構成される。末端残基及び隣接セグメントを包含する直鎖ポリペプチド鎖の２つの末端は、各肢の遊離基の性質に基づいて、カルボキシル末端（Ｃ末端）及びアミノ末端（Ｎ末端）と称される。別途示されない限り、ポリペプチド中の残基の計数は、アミノ基がペプチド結合に関与していない末端であるＮ末端（ＮＨ_２－基）から、ＣＯＯＨ基がペプチド結合に関与していない末端であるＣ末端（－ＣＯＯＨ基）へ実施される。タンパク質及びポリペプチドは、Ｘ線結晶学、直接配列決定、免疫沈降、及び当業者によって理解される様々な他の方法によって特定することができる。タンパク質は、当業者によって特定可能ないくつかの方法によってインビトロ又はインビボで提供することができる。タンパク質がポリマーの少なくとも一部分の合成タンパク質であるいくつかの事例では、２つ以上のアミノ酸単量体及び／又はその類似体は、有機酸（－ＣＯＯＨ）及びアミン（－ＮＨ_２）の化学的に媒介される縮合を介して接合されて、アミド結合又は「ペプチド」結合を形成する。

ヌクレオチド配列又はポリペプチド配列の「一部分」又は「断片」は、それぞれ、参照ヌクレオチド又はポリペプチド配列と比較して、（例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、又はそれ以上の残基（例えば、ヌクレオチド又はペプチド）が減少した）減少した長さのヌクレオチド又はポリペプチド配列を意味し、それぞれ、参照ヌクレオチド又はポリペプチド配列の機能性を維持する、連続した残基のヌクレオチド又はポリペプチド配列を含む、それから本質的になる、及び／又はそれからなる、ヌクレオチド又はポリペプチド配列を意味することが理解されるであろう。一部又は断片は、参照ヌクレオチド又はポリペプチド配列と同一又はほぼ同一（例えば、７０％、７１％、７２％、７３％、７４％、７５％、７６％、７７％、７８％、７９％、８０％、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一）のヌクレオチド配列又はポリペプチド配列を含むことができる。本発明による、かかる核酸断片又は部分は、適切な場合、それが構成要素である、より大きなポリヌクレオチドに含まれ得る。

本明細書で使用される場合、「アミノ酸」、「アミノ酸単量体」、又は「アミノ酸残基」という用語は、アミン及びカルボン酸官能基、並びに各アミノ酸に特異的な側鎖で構成される有機化合物を指す。特に、アルファ－又はα－アミノ酸は、アミン（－ＮＨ２）及びカルボン酸（－ＣＯＯＨ）、並びにアルファ炭素に接続された各アミノ酸に特異的な側鎖で構成される有機化合物を指す。異なるアミノ酸は、異なる側鎖を有し、電荷、極性、芳香族性、還元電位、疎水性、及びｐＫａなどの独特の特徴を有する。アミノ酸は、共有結合して、第１のアミノ酸のアミン基と第２のアミノ酸のカルボン酸基との間の反応によるペプチド結合を介してポリマーを形成することができる。本開示の意味におけるアミノ酸とは、２０個の天然アミノ酸、非天然アミノ酸のいずれかを指し、Ｄ及びＬ光学異性体の両方を含む。

例示的なＲａｃタンパク質は、表１に要約される活性化されていないＲａｃタンパク質を含む。

Ｒａｃ遺伝子及びタンパク質配列の追加の例は、ＮＣＢＩ、Ｕｎｉｐｒｏｔ、並びに当業者に特定可能な他の公開ゲノム及びタンパク質配列データベースなどの公開遺伝子データベースで見ることができる。

ヒトＲＡＣ１転写産物バリアント１の配列は、正準配列であり、残りのアイソフォームに関して記載されている全ての位置情報は、この配列から決定され、配列は、ＮＭ＿００６９０８．４及びＮＰ００８８３９．２の下でＧｅｎＢａｎｋデータベースにおいて一般に利用可能である。ヒトＲＡＣ１転写産物バリアント２の配列は、ＮＭ＿０１８８９０．３及びＮＰ６９１４８５．１の下で見ることができ、コードされたタンパク質は、転写バリアントＲＡＣ１で欠損している、選択的スプライスによる５７ｂｐ領域（エクソン３ｂ）を含む。ヒト以外の生物中のＲＡＣ１オルソログの核酸及びポリペプチド配列が周知であり、例えば、マウスＲＡＣ１（ＮＭ＿００９００７．２及びＮＰ０３３０３３．１）、ラットＲＡＣ１（ＮＭ＿１３４３６６．１及びＮＰ５９９１９３．１）、ニワトリＲＡＣ１（ＮＭ＿２０５０１７．１及びＮＰ＿９９０３４８．１）、ゼブラフィッシュＲＡＣ！（ＮＭ＿１９９７７１．１及びＮＰ＿９５６０６５．１）、ウシＲＡＣ１（ＮＭ＿ｌ７４１６３．２及びＮＰ７７６５８８．１）、及びイヌＲＡＣ１（ＮＭ＿００１００３２７４．２及びＮＰ００１００３２７４．１）が含まれる。（出典米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号、参照によりその全体が組み込まれる）（Ｍａｎｏ）。

例示的なＲａｃ２遺伝子は、当業者によって理解されるように、ＵｎｉＰｒｏｔエントリーＢ１ＡＨ８０（ウェブページｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｕｎｉｐｒｏｔ．ｏｒｇ／ｕｎｉｐｒｏｔ／Ｂ１ＡＨ８０）を有するＲａｓ関連Ｃ３ボツリヌス菌毒素基質２である。例示的なＲａｃ２配列はまた、当業者によって理解されるように、ＲａｓサブファミリーＰＦ００７１（ウェブページｈｔｔｐ：／／ｐｆａｍ．ｘｆａｍ．ｏｒｇ／ｆａｍｉｌｙ／ＰＦ０００７１）の他の配列を含むことができる。代表的なヒトＲＡＣ２バイオマーカーの核酸及びアミノ酸配列は、ＮＭ＿００２８７２．３及びＮＰ００２８６３．１の下で、ＧｅｎＢａｎｋデータベースで一般公開されている。ヒト以外の生物中のＲＡＣ２オルソログの核酸及びポリペプチド配列は周知であり、例えば、マウスＲＡＣ２（ＮＭ＿００９００８．３及びＮＰ０３３０３４．１）、ラットＲＡＣ２（ＮＭ＿００１００８３８４．１及びＮＰ＿００１００８３８５．１）、チンパンジーＲＡＣ２（ＸＭ＿００１１４５８１５．３及びＸＰ００１１４５８１５．３）、サルＲＡＣ２（ＸＭ＿００１０８６２２８．２及びＸＰ＿００１０８６２２８．１）、イヌＲＡＣ２（ＸＭ＿５３８３９２．４及びＸＰ５３８３９２．４）、ウシＲＡＣ２（ＮＭ＿１７５７９２．２及びＮＰ７８６９８６．１）、ニワトリＲＡＣ２（ＮＭ＿００１２０１４５２．１及びＮＰ＿００１１８８３８１．１）、及びゼブラフィッシュＲＡＣ２（ＮＭ＿００１００２０６１．１及びＮＰ００１００２０６１．１）が含まれる。（出典米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号、参照によりその全体が組み込まれる）（Ｍａｎｏ）。

代表的なヒトＲＡＣ３バイオマーカーの核酸配列及びアミノ酸配列は、ＮＭ＿００５０５２．２及びＮＰ００５０４３．１の下で、ＧｅｎＢａｎｋデータベースで一般公開されている。ヒト以外の生物中のＲＡＣ３オルソログの核酸及びポリペプチド配列が周知であり、例えば、マウスＲＡＣ３（ＮＭ＿１３３２２３．４及びＮＰ５７３４８６．１）、サルＲＡＣ３（ＸＭ＿００１１１３３６．２及びＸＰ００１１１３３６．２）、ウシＲＡＣ３（ＮＭ＿００１０９９１７９．１及びＮＰ＿００１０９２６４９．１）、及びニワトリＲＡＣ３（ＮＭ＿２０５０１６．１及びＮＰ９９０３４７．１）が含まれる（出典米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号、参照によりその全体が組み込まれる）。（Ｍａｎｏ）。

Ｒａｃ１Ｒａｃ２、及びＲａｃ３は、ヌクレオチド結合領域を有するＧＴＰに結合し（実施例２及び実施例３を参照されたい）、ＧＴＰの加水分解に関して、いくつかのＧＥＦ（例えば、Ｐ－Ｒｅｘ１及びＤｏｃｋ－２）は、当業者によって理解されるように、ヌクレオチド結合領域と同様に相互作用することによるＧＤＰとの解離及びＧＴＰとの会合を促進することによってＲａｃ１Ｒａｃ２、及びＲａｃ３の両方を活性化することができ（Ｐａｎｔａｒｅｌｌｉ及びＷｅｌｃｈ２０１８）、関連する活性化が本開示に示されるように。（例えば、実施例５及び実施例６を参照のこと）、かつ当業者によって特定可能であるように検出される。

Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、及びＲａｃ３はまた、エフェクター領域を介して様々な下流エフェクターに結合することが知られており（実施例２及び実施例３を参照されたい）、これらを使用して、Ｒａｃ１Ｒａｃ２、又はＲａｃ３タンパク質が、関連する下流生成物の検出によって本開示の意味における活性Ｒａｃ特性であるかどうかを決定することができる。例えば、Ｒａｃ１、及びＲａｃ２は、ＡＫＴ、ＰＡＫ１、並びにｐ６７^ｐｈｏｘ及びｇｐ９１^ｐｈｏｘに加えて、下流エフェクターＡｒｐ２／３複合体（アクチン核酸子）及びコフィリン（アクチンマイクロフィラメントの急速な脱重合に関連するアクチン結合タンパク質）に結合して、アクチンダイナミクスを調節し、下流生成物としてアクチン重合（Ａｒｐ２／３複合体）及び脱重合（コフィリン）を提供することができる。Ｒａｃ３の下流エフェクターは、ＨＮＦ１ホメオボックスＡ（肝細胞核因子１ホメオボックスＡ）、別名ＨＮＦ１Ａを含み、これは、本開示の意味における活性化Ｒａｃ３を特定するための下流生成物として使用することができる、グルコーストラスポーター１（ＧＬＵＴ１）及びグルコーストランスポーター２（ＧＬＵＴ２）などのいくつかの遺伝子の発現の調節に関与する転写因子である。Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、及び／又はＲａｃ３の追加の下流エフェクターは、当業者によって特定され得る。

本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、活性化された食細胞内のＲａｃ遺伝子は、Ｒａｃ１、Ｒａｃ－２、及び／又はＲａｃ３特性及び活性を増強する変異を含む活性化されたＲａｃタンパク質をコードする活性化されたＲａｃ１、Ｒａｃ－２、及び／又はＲａｃ３遺伝子である。したがって、本明細書に記載されるＲＡＣ１、ＲＡＣ２、及び／又はＲＡＣ３の活性化変異は、一般に、ＧＡＰ媒介性ＧＴＰ加水分解を損ない、それによって、持続的なＧＴＰ結合活性Ｒａｃをもたらし、したがって、下流エフェクターの長期的な活性化がもたらされる、Ｒａｃ遺伝子内の変異を指す。いくつかの実施形態では、Ｒａｃ活性化変異は、下流生成物の検出によって、又はＲａｃ下流エフェクター複合体の検出によって検出され得る。したがって、Ｒａｃ活性化変異は、例えば、ＰＡＫ１ＧＴＰアーゼ結合ドメイン（ＧＢＤ）に融合されたグルタチオンＳトランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を使用して、ＰＡＫ１抗体を用いたウエスタンブロットにおいてＰＡＫ１結合を検出するＧＳＴプルダウンアッセイによって検出することができる。更に、抗ＲＡＣ２ウサギポリクローナル抗体（ＯＲＩＧＥＮＥ）を使用して、ＲＡＣ２［ＷＴ］及びＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現ＨＬ６０細胞における免疫蛍光を検出することもできる。したがって、本明細書で使用される「活性Ｒａｃ遺伝子」という文言は、本開示の意味における活性Ｒａｃタンパク質をコードするＲａｃ遺伝子、例えば、本開示の意味における増強されたＲａｃ特性を提供する自然発生の、又は操作されたＲａｃタンパク質を示す。

本開示の意味における例示的な活性化されたＲａｃタンパク質は、１つ以上の増強されたＲａｃ特性を有し、配列番号１～配列番号１５のうちのいずれか１つのＲａｃタンパク質における１つ以上の変異を含み得る。特に、いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、配列番号１～配列番号１５のうちのいずれか１つと少なくとも９６％、９７％、９８％、９９．７０％、９９．８０％、９９．９１％、９９．９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。より具体的には、活性化されたＲａｃタンパク質は、当業者に理解されるように、１つ以上の置換アミノ酸、並びに挿入又は欠失を有するアミノ酸配列を含むことができる。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、本開示を読んだ上で当業者によって特定可能な、ヌクレオチド結合領域エフェクター領域及び／又は脂質結合領域のうちの少なくとも１つに１つ以上の変異（例えば、１つ以上の点変異）を有し得る。いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、本開示を読んだ上で当業者によって特定可能な、スイッチＩ、スイッチＩＩ領域、及びＰＭ領域のうちの少なくとも１つに１つ以上に変異（例えば、１つ以上の点変異）を有し得る。

特に、いくつかの実施形態では、本開示の意味における活性Ｒａｃタンパク質は、ヌクレオチド結合領域、エフェクター領域、及び／又は脂質結合領域の１つ以上のＲａｃ活性化変異を含む、配列番号１～配列番号１５のうちのいずれか１つのＲａｃタンパク質を含み、本開示の意味における増強されたＲａｃ特性を呈する（実施例３、実施例４を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、本開示の意味における活性Ｒａｃタンパク質は、スイッチＩ領域、スイッチＩＩ領域、及び／又はＰＭ領域のうちの少なくとも１つの１つ以上のＲａｃ活性化変異を含む、配列番号１～１５のＲａｃタンパク質を含み、本開示の意味における増強されたＲａｃ特性を呈する。（実施例３、実施例４を参照されたい）。例えば、いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、ヌクレオチド結合領域（残基９～１６、５７～６１、１１５～１１８）、エフェクター領域（３２～４０）、及び／又は脂質結合領域（１９０）のうちの少なくとも１つに１つ以上の変異（例えば、１つ以上の点変異）を含む、配列番号１又は配列番号３を有することができる。加えて、又は代替的ないくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、配列番号１又は配列番号３の１つ以上の変異（例えば、スイッチＩ領域（残基２６～４５）及び／又はスイッチＩＩ領域（残基５９～７４）における１つ以上の点変異）を含む、配列番号１又は配列番号３を有することができる（実施例のセクションを参照されたい）。追加の例は、本開示を読んだ上で当業者によって特定可能である。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃタンパク質は、任意選択で配列番号１～配列番号１５のうちのいずれか１つのアミノ酸配列に対して、アミノ酸残基番号１１、１２、２８、２９、３０、３４、６２、６３、９２、及び／又は１５７に対応する１つ以上のアミノ酸残基に変異（例えば、点変異）を有する。いくつかの実施形態では、Ｒａｃ活性化変異は、配列番号１～配列番号１５のうちのいずれか１つに対する、Ｄ１１Ａ、Ｇ１２Ｖ／Ｒ、Ｆ２８Ｌ、Ｐ２９Ｓ、Ｐ２９Ｌ、Ｐ２９Ｑ、ＰＧ（２９，３０）ＶＤ、Ｐ３４Ｈ、Ｅ６２Ｋ、Ｄ６３ＶＮ９２Ｓ、Ｎ９２ＴＮ９２Ｉ、Ｃ１５７Ｙ変異のうちの少なくとも１つを含むことができる。（実施例４を参照されたい）。これらの実施形態のうちのいくつかでは、活性化されたＲａｃタンパク質は、配列番号１に対する、Ｐ２９Ｌ、Ｐ２９Ｑ、Ｐ３４Ｈ、Ｎ９２Ｓ、及びＮ９２Ｔのうちの１つ以上の変異を有する。（実施例４を参照されたい）。

特に、いくつかの実施形態では、本開示の意味におけるＲａｃ活性化変異及び／又はＲａｃ活性化タンパク質は、ＲＡＣ１（Ｄ１１Ａ）、ＲＡＣ１（Ｇ１２Ｖ／Ｒ）、ＲＡＣ１（Ｆ２８Ｌ）、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）、ＲＡＣ１（ＰＧ（２９，３０）ＶＤ）、ＲＡＣ１（Ｎ９２Ｉ）、及び／又はＲＡＣ１（Ｃ１５７Ｙ）を含む（実施例４を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、本開示の意味におけるＲａｃ活性化変異及び／又はＲａｃで活性化されたタンパク質は、当業者によっても理解されるように、ＲＡＣ２（Ｇ１２Ｒ）ＲＡＣ２（Ｐ２９Ｌ）、ＲＡＣ２（Ｐ２９Ｑ）、ＲＡＣ２（Ｐ３４Ｈ）、ＲＡＣ２（Ｇ１２Ｖ／Ｒ）、ＲＡＣ２（Ｅ６２Ｋ）、ＲＡＣ２（Ｄ６３Ｖ）、ＲＡＣ２（Ｎ９２Ｓ）、及び／又はＲＡＣ２（Ｎ９２Ｔ）を含む。

追加の例示的なＲａｃ活性化変異は、ヒト患者において報告される変異を含み、そのような患者からの好中球は、高活性であり、健常な対照からの細胞では見られない異常な巨大細胞小胞及び大きな空胞を呈する（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）。例えば、Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］変異は、ＧＤＰ交換のためのＴＩＡＭ１媒介性ＧＴＰ、及びｐ５０ＲｈｏＧＡＰ媒介性ＧＴＰ加水分解の両方を損なう。正味の効果は、長期間のＲａｃ２活性化、及びＰＡＫなどのエフェクタータンパク質との相互作用である。Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］に起因する臨床的に最も顕著な欠陥は、典型的には、Ｂ細胞及びＴ細胞の数の減少に起因する免疫不全である。Ｒａｃ－２遺伝子の活性化変異の効果は、マウスモデルにおいて特定され、ＣＤ３＋Ｔ細胞の２０倍超の低減を含む、患者において見られる効果を要約することができる。観察されたＢ細胞及びＴ細胞リンパ球減少症は、骨髄でのＢ細胞及びＴ細胞の発達の失敗、又は胸腺での成熟に起因するものではないと思われ、原因不明のままである。好中球もＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］において注目された。［Ｇ１２Ｖ］などの他の活性化変異は、Ｒａｃ２のＧＴＰ加水分解酵素活性を損ない、再び、ＰＡＫなどのエフェクタータンパク質との増強された相互作用をもたらすことができる。（実施例４を参照されたい）。いくつかの実施形態では、Ｒａｃ－２遺伝子の活性化変異は、ＲＡＣ２における以下の変異のうちの少なくとも１つを含む：Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１２Ｖ。（実施例４を参照されたい）。

特に、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］は、顕性表現型に関連する、Ｒａｃ２遺伝子におけるヘテロ接合型バリアントである。ＲＡＣ２遺伝子のスイッチＩＩドメイン内にある、グルタミン酸６２（Ｅ６２）における変異である。ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］は、ＧＡＰ媒介性ＧＴＰ加水分解を損ない、それによって、持続的なＧＴＰ結合活性Ｒａｃ２をもたらし、したがって、下流エフェクターの長期的な活性化がもたらされる（Ｈｓｕｅｔａｌ．，２０１９）。ＲＡＣ２［Ｑ６１Ｌ］、ＲＡＣ２［Ｄ６３Ｖ］、ＲＡＣ２［Ｇ１２Ｒ］、及び構成的に活性なＲＡＣ２［Ｇ１２Ｖ］などのＲａｃ２における他の既知の活性化変異もまた、同様の方法で、ＧＤＰ交換及びＧＴＰ加水分解を損なう（Ｘｕ，Ｗａｎｇｅｔａｌ．１９９７）、（Ｃａｙｅ，Ｓｔｒｕｌｌｕｅｔａｌ．２０１５）、（Ｌａｇｒｅｓｌｅ－Ｐｅｙｒｏｕ，Ｏｌｉｃｈｏｎｅｔａｌ．２０２１）。

本明細書に記載の遺伝子操作された活性化された食細胞の実施形態では、活性化されたＲａｃ遺伝子は、自然発生であり得るか、又は第１の食細胞プロモーターの制御下に置かれ、場合により、追加の第１の食細胞調節領域の制御下に置かれる食細胞で操作され得る。

「食細胞プロモーター」という用語は、食細胞における発現を駆動又は調節するヌクレオチド配列を指す。

マクロファージ、好中球、樹状細胞、及び破骨細胞を含む、単核食細胞系（ＭＰＳ）に特異的なプロモーターは、食細胞プロモーターを構成するであろう。そのようなプロモーターの例としては、ＣＳＦ－１プロモーター、ＣＤ６８、ＣＤ１１ｃ、ＤＣ－ＳＩＧＮ、ＤＣ－ＳＴＡＭＰ、ランゲリン、ヒト好中球エラスターゼ、及び食作用を有する細胞において高いレベルの発現を達成するように設計された食細胞系の要素を含有する任意の合成プロモーターが挙げられるが、これらに限定されない。

いくつかの実施形態では、本開示による活性化された食細胞は、遺伝子操作された食細胞において構成的又は条件付き発現を可能にする構成における活性化されたＲａｃ遺伝子を含むように遺伝子操作される。

「構成的プロモーター」という用語は、その関連遺伝子の継続的な転写を可能にする、調節されていないプロモーターを指す。哺乳類細胞における発現に使用され得る例示的な哺乳類構成的プロモーターとしては、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、ＳｙｎＩ、及び当業者に特定可能な他のものが挙げられる。

「条件付きプロモーター」という用語は、内因性転写因子又は外因性入力、例えば、化学的若しくは熱的誘導剤又は光学的誘導によって調節可能又は制御される活性を有するプロモーターを指す。哺乳類の条件付きプロモーターの例としては、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈなどの外因性作用物質に基づく誘導性プロモーター、並びにＴＮＦ－アルファ、ｃＦＯＳ、及び当業者に特定可能な他のものなどの内因性シグナルに基づく誘導性プロモーターが挙げられる。

本明細書に記載される「調節配列」又は「調節領域」という用語は、インビトロ又はインビボのいずれかで、生物内の遺伝子の転写又は翻訳を増加又は減少させることができる核酸分子のセグメントを示す。特に、本明細書に記載される活性化されたＲａｃ遺伝子のコード領域は、転写及び翻訳されるときにポリペプチドを産生する１つ以上のタンパク質コード領域を含む。本明細書に記載の遺伝子の調節領域は、プロモーター、転写因子結合部位、結合部位オペレーター、活性化因子結合部位、タンパク質－タンパク質結合ドメイン、ＲＮＡ結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、リプレッサー、エンハンサー、絶縁体、サイレンサー、及び当業者に認識されるように、発達刺激及び／又は外部刺激に応答して遺伝子発現を変化させることができる追加の調節領域を含む。

食細胞における遺伝子の発現を制御する調節領域は、本明細書では、「食細胞調節領域」として示される。

いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食細胞の構成は、細胞型特異的発現のための調節配列（例えば、マクロファージ特異的転写因子ＰＵ．１、Ｅｔｓファミリー転写因子、並びにＳＴＡＴ１、Ｃ／ＥＢＰ－α、Ｃ／ＥＢＰ－δ、ＩＲＦ９、ＫＬＦ６、及びＮＦ－κＢ転写因子）、自然発生の、過剰発現された、又は活性化されたＲａｃ遺伝子の上流にあるＤＮＡ及びＲＮＡ結合タンパク質（例えば、ＥＷＳ及びＦＵＳ／ＴＬＳ）を含有する構成的、条件付き、及び／又は食細胞プロモーター（例として、ＣＳＦ－１、ＣＤ６８、ｐ４７ｐｈｏｘプロモーターなど）を含むことができる。操作された食細胞における様々な遺伝子要素の化学量論的構成は、他の遺伝子要素とともにレポーター（ＧＦＰなど）を導入し、例えば、プロモーター、エンハンサー、転写因子結合部位、及び当業者によって特定可能な追加の要素の複数のコピーを導入することによって異なる化学量論的構成におけるレポーターの発現を評価することによって最適化することができる。

「導入すること」、「導入する」、「導入された」（及びその文法的変形）は、目的のポリヌクレオチド及び／又はポリペプチドの文脈において、目的のヌクレオチド配列（例えば、ポリヌクレオチド、核酸構築物、及び／又はガイド核酸）及び／又は目的のポリペプチドを、ヌクレオチド配列及び／又はポリペプチドが、細胞の内部へのアクセスを得るような方法で、宿主生物又は該生物の細胞（例えば、哺乳類細胞）に提示することを意味する。

遺伝子操作された活性化された食細胞のいくつかの実施形態では、第１の食細胞プロモーターは、典型的には、Ｒａｃ遺伝子の上流に少なくともコアプロモーター（転写を適切に開始するのに必要な最小限の配列）を含有する。コアプロモーターは、５’から３’の順番の以下の要素又はモチーフの一部又は全部を有することができる：１）Ｂ認識要素（ＢＲＥ）、２）ＴＡＴＡボックスモチーフ、３）転写開始部位を含有するイニシエーターモチーフ（Ｉｎｒ）、４）モチーフ１０要素（ＭＴＥ）、及び５）下流プロモーター要素（ＤＰＥ）。要素の異なる組み合わせの存在及び数は、コアプロモーターに関連して許容されるが、各要素の少なくとも１つの配列を含有するものが、Ｒａｃ発現のために最も好ましいであろう。

プロモーター近位要素、上流活性化因子配列、及びエンハンサーなどの第１の追加の食細胞調節領域は、異なる数及びコピーで必要とされ得るが、Ｒａｃ遺伝子発現には必要ではない。

遺伝子操作された活性化された食細胞において、Ｒａｃ遺伝子を制御する第１の食細胞プロモーターは、食細胞に関して相同又は異種である構成的又は条件付きプロモーターであり得る。しかしながら、活性化されたＲａｃタンパク質が引き起こし得る細胞傷害効果のために、条件付きプロモーターが好ましい。したがって、活性化されたＲａｃタンパク質は、光、熱、又は抗生物質などの化学物質によって条件付けられ得る。抗生物質によって条件付けられたプロモーターは、インビボ及びインビトロで分析が行われなければならないときに最も好ましい。

「異種」又は「組換え」ヌクレオチド配列は、自然発生のヌクレオチド配列の非自然発生の複数のコピーを含む、それが導入される宿主細胞に天然に関連付けられていないヌクレオチド配列である。例えば、Ｒａｃタンパク質又はその一部分をコードする異種ポリヌクレオチドは、それが存在する食作用を有する細胞にある自然発生のヌクレオチド配列の存在と比較して、それが存在する食作用を有する細胞に天然に存在しない核酸配列であり得、及び／又は追加の核酸配列であり得る。

。「相同」核酸ヌクレオチド配列、ポリペプチド又はアミノ酸配列は、それが導入される宿主細胞と自然に関連するヌクレオチド配列である。相同核酸は、「天然」核酸、ヌクレオチド配列、ポリペプチド又はアミノ酸配列を含み、これは、当業者によって理解されるであろう自然発生の、又は内因性核酸、ヌクレオチド配列、ポリペプチド又はアミノ酸配列を指す。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃ、食細胞プロモーター、及び追加の食細胞調節領域は、遺伝子発現カセットの一部として含まれ得る。

本明細書で使用される場合、「遺伝子カセット」という用語は、少なくとも１つの遺伝子及び組換え部位を含有する移動性遺伝子要素を示した。したがって、遺伝子カセットは、単一の遺伝子、又は場合によりオペロン構造で組織された複数の遺伝子を含有することができる。遺伝子カセットは、制限酵素、又はトランスポザーゼ、ｃｒｉｐｒ、ウイルス及び／若しくはリコンビナーゼ酵素、並びに他のヌクレアーゼを使用して断片を「切断」し、それを新しい状況又は他の分子生物学的及びクローニング技術（例えば、ｐｃｒ、ＣＲＩＳＰＲ、ＴＡＬＥＮ、ＺＦＮ）に「貼り戻す」ことによって、１つのＤＮＡ配列（通常はベクター上の）から別のＤＮＡ配列に移入することができる。遺伝子カセットは、生物のゲノム内を移動することができるか、又は水平遺伝子移入を介して環境内の別の生物に移入することができる。

「遺伝子発現カセット」は、トランスフェクト細胞によって発現される調節配列を含む遺伝子カセットである。形質転換後、発現カセットは、細胞の機構にＲＮＡ及びタンパク質を作製するように指示する。いくつかの発現カセットは、同じカセットが、異なるタンパク質を作製するように変化させることができるように、タンパク質をコードする配列のモジュラークローニングのために設計されている。発現カセットは、１つ以上の遺伝子、及びそれらの発現を制御する配列で構成される。発現カセットは、典型的には、プロモーター配列、オープンリーディングフレーム、及び真核生物において、通常、ポリアデニル化部位を含有する３’非翻訳領域の少なくとも３つの構成要素を含む。発現カセットは、制限部位の１つ以上のセットの間に任意選択で位置する１つ以上の目的の遺伝子を担持し、それを発現することができる、ＤＮＡの操作可能な断片によって形成され得る。本明細書で使用される遺伝子発現カセットは、典型的には、カセットのコード領域としても本明細書で示されるオープンリーディングフレーム内の遺伝子の発現を調節するための、プロンプターに加えて、更なる調節配列を含む。

「形質転換」又は「トランスフェクション」という用語は、互換的に使用され得、本明細書で使用される場合、細胞への核酸の導入を指す。細胞の形質転換は、安定であり得るか、又は一過性であり得る。したがって、いくつかの実施形態では、宿主細胞又は宿主生物は、本発明のポリヌクレオチド／核酸分子で安定的に形質転換され得る。いくつかの実施形態では、宿主細胞又は宿主生物は、本発明の核酸構築物で一過性に形質転換され得る。

ポリヌクレオチドの文脈における「一過性形質転換」は、ポリヌクレオチドが細胞に導入され、細胞のゲノムに組み込まれないことを意味する。

細胞に導入されたポリヌクレオチドの文脈における「安定的に導入する」又は「安定的に導入される」は、導入されたポリヌクレオチドが細胞のゲノムに安定的に組み込まれ、したがって、細胞がポリヌクレオチドで安定的に形質転換されることが意図される。

本明細書で使用される「安定した形質転換」又は「安定的に形質転換された」は、核酸分子が細胞に導入され、細胞のゲノムに組み込まれることを意味する。したがって、統合された核酸分子は、その子孫、より具体的には、複数の連続した世代の子孫によって受け継がれることが可能である。本明細書で使用される「ゲノム」は、核ゲノム及び可塑性ゲノムを含み、したがって、核酸の、例えば、葉緑体又はミトコンドリアゲノムへの組み込みを含む。本明細書で使用される安定した形質転換はまた、例えば、ミニ染色体又はプラスミドとして染色体外で維持される導入遺伝子を指すことができる。

一過性形質転換は、例えば、生物に導入される１つ以上の導入遺伝子によってコードされるペプチド又はポリペプチドの存在を検出することができる、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）又はウエスタンブロットによって検出され得る。細胞の安定した形質転換は、例えば、生物（例えば、哺乳類）に導入された導入遺伝子のヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズする核酸配列による細胞のゲノムＤＮＡのサザンブロットハイブリダイゼーションアッセイによって検出することができる。細胞の安定した形質転換は、例えば、宿主生物に導入された導入遺伝子のヌクレオチド配列と特異的にハイブリダイズする核酸配列による細胞のＲＮＡのノーザンブロットハイブリダイゼーションアッセイによって検出することができる。細胞の安定した形質転換はまた、例えば、導入遺伝子の標的配列とハイブリダイズする特異的プライマー配列を使用して、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）又は当該技術分野において周知の他の増幅反応によって検出することができ、標準的な方法に従って検出することができる導入遺伝子配列の増幅をもたらす。形質転換は、当該技術分野で周知の直接配列決定及び／又はハイブリダイゼーションプロトコルによっても検出することができる。

したがって、いくつかの実施形態では、本発明のヌクレオチド配列、ポリヌクレオチド、核酸構築物、及び／又は発現カセットは、一過性に発現されてもよく、かつ／又はそれらは、宿主生物のゲノムに安定的に組み込まれてもよい。

特に、本明細書に記載される活性化されたＲａｃ遺伝子の実施形態では、遺伝子発現カセットは、１つ以上の活性化されたＲａｃ遺伝子を含むことができ、食細胞内で動作可能な調節領域の制御下にあり、したがって、活性化された食細胞を提供するように構成されている。

本明細書で使用される場合、「制御下にある」又は「作動接続」という用語は、適切な効果の生成を可能にする組み合わせにおける要素の配置を示す。遺伝子及び調節配列に関して、作動接続は、調節配列が遺伝子の転写又は翻訳を直接的又は間接的に増加又は減少させることを可能にする調節配列に関して遺伝子の構成を示す。

本明細書に記載される遺伝子発現カセットに使用される調節配列は、食細胞を提供する個体に基づいて選択される。個体が哺乳類である好ましい実施形態では、調節領域は、哺乳類調節領域に選択され、哺乳類細胞内で作動するように構成されている。

哺乳類細胞で作動することができる例示的な調節領域は、当技術分野で知られている中でも、プロモーター、エンハンサー、サイレンサー、ターミネーター、レギュレーター、オペレーター、リボソーム結合／エントリー部位、及びリボスイッチを含む。哺乳類宿主で作動することができる調節領域は、目的の哺乳類宿主の選択後に、当業者によって選択され得る。哺乳類宿主における活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を調節するのに好適な、例示的な構成的及び誘導可能な哺乳類プロモーター及びオペレーターは、当業者によって特定可能であり、本明細書に記載される。

いくつかの実施形態では、活性化された食細胞は、活性化発現レベルの発現を可能にするように構成されている調節領域の制御下にある、１つ以上の自然発生の、又は操作された、活性化されたか、又は活性化されていないＲａｃ遺伝子を含むように操作され、本開示の意味における増強されたＲａｃ特性をもたらす。

これらの実施形態のうちのいくつかでは、マクロファージにおける活性Ｒａｃの高レベルの発現を得るために所望される構成を行って、マクロファージ特異的プロモーター（ＭＳＰ）又はマクロファージにおける高発現のために設計された合成プロモーター（ＳＰ１４６）を、自然発生の、過剰発現されたか、又は活性化されたＲａｃ遺伝子（例えば、Ｒａｃ２Ｅ６２Ｋ）の上流のエンハンサー、マクロファージ特異的転写因子ＰＵ．１などの調節領域とともに含むことができる。様々な遺伝子要素の化学量論的構成は、他の遺伝子要素とともにレポーター（例えば、プロモーターに融合されたＧＦＰ）を導入し、異なる化学量論的構成におけるレポーターの発現を評価すること（例えば、プロモーター、エンハンサー、転写因子結合部位などの複数のコピーを導入すること）によって最適化して、当業者によって理解されるように、より高い又は最高レベルの発現を得ることができる。

いくつかの実施形態では、増加した発現は、本開示の意味における同じ又は異なる活性化されていないＲａｃ遺伝子及び／又は活性化されたＲａｃ遺伝子を発現する複数のカセットを食細胞に挿入することによって得ることができる。

例となる実施形態では、食作用を有する細胞におけるＲａｃタンパク質の適切な発現及び活性化のためのＲａｃ発現カセットは、少なくとも１つのコアプロモーター及びＲａｃ遺伝子を含むことができる。そのカセット内への異なる調節領域の数及び存在は、任意である。

本明細書に記載される実施形態では、活性化変異を含む活性化されたＲａｃ遺伝子を発現する活性化された食作用を有する細胞は、食作用能力の増加、並びに標的細胞を貪食、かつ／又はトロゴサイトーシス細胞を増加させる能力の増加を示す。増加した食作用、並びに標的細胞を貪食、トロゴサイトーシスを行う能力は、当業者に知られている方法で検出することができる。

例えば、いくつかの実施形態では、マクロファージ及び標的細胞を用いた共培養実験における貪食は、ライブ及び固定イメージングにおいて検出され得、フローサイトメトリーを使用して定量化され得る。特に、異なる蛍光標識化されたマクロファージ（例えば、ＧＦＰなどの第１の標識に融合されたＲａｃ２Ｅ６２Ｋなどの活性Ｒａｃタンパク質を発現する）及び標的細胞（例えば、ＨＡ－ｍＣｈｅｒｒｙなどの第２の標識を有する融合タンパク質を発現するＪｕｒｋａｔＴ細胞）を選別することができ、単一の（例えば、ＧＦＰ又はｍＣｈｅｒｒｙのいずれか）及び二重陽性（例えば、ＧＦＰ及びｍＣｈｅｒｒｙ）蛍光細胞を選別することができる。二重陽性細胞（例えば、ＧＦＰ及びｍＣｈｅｒｒｙ陽性細胞）は、標的細胞を貪食するマクロファージの集団を表す。この実験は、対照マクロファージ（第１の標識、例えば、ＧＦＰのみを発現する）、マクロファージ（例えば、第１の標識、例えば、ＧＦＰに融合された活性化されていないＲａｃタンパク、例えば、ＲＡＣ２ＷＴ質を発現する）、及びＧＦＰに融合されたＲＡＣ２Ｅ６２Ｋを発現するマクロファージで、各々別々に標的細胞とともに設定することができる。各ケースにおける二重陽性細胞の割合を評価し、対照に対して正規化して、呑み込み割合を測定することができる。活性化されていないＲａｃ（例えば、ＲＡＣ２ＷＴ）又は活性化されたＲａｃ（例えば、ＲＡＣ２Ｅ６２Ｋ）のより高い貪食割合は、貪食能力／食作用容量の増加を表すであろう。同様に、トロゴサイトーシス事象は、ライブイメージング実験において定量化することもできる。トロゴサイトーシス事象を記録し、専用のアルゴリズム／プログラムによって測定し、対照に対して正規化して、トロゴサイトーシスの割合を測定することができる。

トロゴサイトーシス、貪食、及び一般的に、食細胞の食作用の増加を特定するのに好適な追加の試験には、リアルタイムの自動食作用／トロゴサイトーシス分析を実行するために使用することができるＩｎｃｕｃｙｔｅ生細胞分析システム、及び食作用を測定するための別の高感度／低バックグラウンド分析技術として提供することができる高含量分析（ＨＣＡ）、並びに当業者によって特定可能な追加の試験が含まれる。

例示的な実施形態では、分化したＨＬ６０Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージは、共培養の２４時間以内に、ビヒクル対照及びＲＡＣ２［ＷＴ］と比較して、不死化Ｊｕｒｋａｔ白血病Ｔ細胞の呑み込みの増加を示した。いくつかのＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージは、１つ以上のＴ細胞を貪食することができ、Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］がこれらのマクロファージの貪食容量を増加させたことを示唆する（参照によりその全体が組み込まれる、２０２０年１２月１６日に出願された米国仮出願第６３／１２６，３７９号の付録を参照されたい）。Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］発現マクロファージとＴ細胞との間の安定した細胞－細胞接触の頻度の増加が、共培養における非結合細胞を洗い出した後にも観察され、好中球及びマクロファージにおいて先に報告された「トロゴサイトーシス」様事象の増加を示した（Ｍａｔｌｕｎｇ，Ｂａｂｅｓｅｔａｌ．２０１８）（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎｅｔａｌ．２０１８）。

いくつかの実施形態では、本開示の遺伝子操作された活性化された食細胞は、Ｒａｃタンパク質をコードするＲａｃ遺伝子を含み、Ｒａｃ遺伝子は、活性化発現レベルでの活性化された食作用を有する細胞における活性Ｒａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第３の食細胞プロモーター及び第３の追加の食細胞調節領域の制御下にある。

いくつかの実施形態では、遺伝子操作された活性化された食細胞は、Ｒａｃ遺伝子回路を含み、分子成分は、相互作用する成分の完全に接続されたネットワークを形成するために、反応を活性化、阻害、結合、又は変換することによって、回路設計に従って互いに接続されており、Ｒａｃ遺伝子回路において、Ｒａｃ遺伝子回路が、活性化された食細胞内のトリガー分子成分に応答して、回路設計に従って動作するときに、活性化されたＲａｃ遺伝子の発現又はＲａｃ遺伝子の発現レベルの増加が生じる。

本明細書に記載されるＲａｃ遺伝子回路に関連して使用される「分子成分」という用語は、細胞環境に含まれる複数の化学物質からなる化学物質又は構造を示す。したがって、例示的な分子成分は、ポリヌクレオチド、例えば、細胞環境中に見られるリボ核酸又はデオキシリボ核酸、ポリペプチド、多糖類、脂質、アミノ酸、ペプチド、糖、及び／又は他の小分子若しくは大分子及び／又はポリマーを含む。本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、Ｒａｃ遺伝子回路の分子成分は、Ｒａｃタンパク質である。

本明細書で使用される「遺伝分子成分」という用語は、遺伝子によって形成される分子単位（場合により、遺伝子クラスターを含むか、又はそれによって形成される）、該遺伝子又はその一部から転写されたＲＮＡ、及び任意選択で該転写されたＲＮＡから翻訳されたポリペプチド又はタンパク質を示す。本明細書に記載される遺伝的回路において、遺伝分子成分を回路の別の分子成分に接続する生化学反応は、分子成分を形成する遺伝子、転写ＲＮＡ、及び／又はポリペプチドのうちのいずれか１つを含むことができる。

遺伝分子成分に含まれる遺伝子は、ＲＮＡを提供するために転写され得るポリヌクレオチドであり、典型的には、コード領域及び１つ以上の調節配列領域を含み、これは、インビトロ、又はインビボのいずれかで、生物内の遺伝子の転写又は翻訳を増加又は減少させることができる核酸分子のセグメントである。特に、本明細書に記載される遺伝子のコード領域は、転写及び翻訳されるときにポリペプチドを産生する１つ以上のタンパク質コード領域を含むことができるか、又はＲＮＡが最終産物である場合、翻訳されることを目的としない機能的ＲＮＡ配列のみを含むことができる。本明細書に記載される遺伝子の調節領域は、プロモーター、転写因子結合部位、オペレーター、活性化因子結合部位、リプレッサー結合部位、エンハンサー、タンパク質－タンパク質結合ドメイン、ＲＮＡ結合ドメイン、ＤＮＡ結合ドメイン、サイレンサー、絶縁体、及び当業者によって認識されるように、刺激に応答して遺伝子発現を変化させることができる追加の調節領域を含む。

遺伝分子成分のＲＮＡは、遺伝子から転写され得る任意のＲＮＡ、例えば、メッセンジャーリボ核酸（ｍＲＮＡ）、短い干渉リボ核酸、又は細胞内の調節因子として機能することができるリボ核酸を含む。遺伝分子成分に含まれるｍＲＮＡは、タンパク質をコードする領域、並びに調節領域を含む。ｍＲＮＡは、遺伝子の上流に配置されたリボレギュレーター配列又はタンパク質結合アプタマー配列などの追加の制御要素をコードすることができるので、タンパク質は、リボソームをブロックし、条件的に翻訳を妨げる。遺伝分子成分を含むことができる調節役割を果たす他のＲＮＡとしては、リボスイッチ、アプタマー（例えば、マラカイトグリーン、ホウレンソウ）、アプタジーム、ガイドＣＲＩＳＰＲＲＮＡ、及び当業者に知られている他のＲＮＡが挙げられる。

分子成分に含まれるタンパク質は、活性化、阻害、結合、変換、又は報告機能を有するタンパク質であり得る。活性化又は阻害機能を有するタンパク質は、典型的には、ＤＮＡ上にコードされたオペレーター部位に作用するが、他の分子成分にも作用することができる。結合機能を有するタンパク質は、典型的には、他のタンパク質に作用するが、他の分子成分にも作用することができる。変換機能を有するタンパク質は、典型的には、低分子に作用し、化学反応又は酵素反応を行うことによって、低分子を１つの低分子から別の低分子に変換する。変換機能を有するタンパク質は、他の分子成分にも作用することができる。報告機能を有するタンパク質は、一般的に使用される検出方法（例えば、吸光度、蛍光）によって容易に検出可能である能力を有するか、又はそうでなければ二次アッセイによって容易に検出される別の分子成分上で反応を引き起こす（例えば、次いでアッセイされ得る代謝産物のレベルを調整する）。タンパク質の活性化、阻害、結合、変換、又は報告機能は、典型的には、遺伝的回路の遺伝成分間の相互作用を形成する。遺伝分子成分に含まれることができる例示的なタンパク質は、単量体タンパク質及び多量体タンパク質、三次構造又は四次構造を有するタンパク質、リンカーを有するタンパク質、非天然アミノ酸を有するタンパク質、異なる結合ドメインを有するタンパク質、並びに当業者に知られている他のタンパク質を含む。

「細胞分子成分」という用語は、遺伝子によってコードされていない分子成分を示すか、又は遺伝子によって転写、かつ／若しくは翻訳されるが、対応する遺伝子を伴わずに回路に含まれる分子成分を示す。例示的な細胞成分は、ポリヌクレオチド、ポリペプチド、多糖類、低分子、及び細胞環境に存在し、当業者によって特定可能である追加の化学物質を含む。多糖類、低分子、及び追加の化合物は、例えば、ＮＡＤ、ＦＡＤ、ＡＴＰ、ＧＴＰ、ＣＴＰ、ＴＴＰ、ＡＭＰ、ＧＭＰ、ＡＤＰ、ＧＤＰ、ビタミンＢ１、Ｂ１２、クエン酸、グルコース、ピルビン酸、３－ホスホグリセリン酸、ホスホエノールピルビン酸、アミノ酸、ＰＥＧ－８０００、ＦｉＣｏｌｌ４００、スペルミジン、ＤＴＴ、ｂ－メルカプトエタノールマルトース、マルトデキストリン、フルクトース、ＨＥＰＥＳ、Ｔｒｉｓ－Ｃｌ、酢酸、ａＴｃ、ＩＰＴＧ、３ＯＣ１２ＨＳＬ、３ＯＣ６ＨＳＬ、バニリン、マラカイトグリーン、ホウレンソウ、コハク酸塩、トリプトファン、及び当業者に知られている他のものを含み得る。ポリヌクレオチドは、ＤＮＡ結合酵素（エキソヌクレアーゼなど）を飽和させるか、又はシステム内に存在する活性化剤若しくはリプレッサー酵素を隔離するオペレーター部位を含有する、ＲＮＡ調節因子（低分子活性化ＲＮＡ、低分子干渉ＲＮＡ）、又は「ジャンク」デコイＤＮＡを含むことができる。ポリペプチドには、遺伝子回路内に存在するが、回路内の遺伝子成分によって産生されないもの、又は回路の分子成分に影響を及ぼすように添加されるものが含まれ得る。

本明細書に記載される遺伝子回路の実施形態では、１つ以上の分子成分は、遺伝子組換え（分子クローニングなど）及び／又は複数の供給源からの分子又は関連部分を一緒にし、したがって、そうでなければ単一の供給源では見られない分子成分を作成するための化学合成によって提供することができる組換え分子成分である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲａｃ遺伝子回路は、（（Ｂｕｃｈｌｅｒ，Ｇｅｒｌａｎｄｅｔａｌ．２００３）に記載されるものなど、当業者に知られている遺伝子回路設計におけるブール論理演算子として機能する複数の遺伝分子成分を含むことができる。（Ｓｉｌｖａ－Ｒｏｃｈａ及びｄｅＬｏｒｅｎｚｏ２００８）当業者によって理解されるように、ブール論理は、変数の値が、通常、それぞれ、デジタル論理用語「１」及び「０」によって示される真理値「ｔｒｕｅ」及び「ｆａｌｓｅ」である、代数の分岐である。変数の値が数値であり、主な演算が加法と乗法である基本代数とは対照的に、ブール論理の主な演算は、連結「ＡＮＤ」、分離「ＯＲ」、及び否定「ＮＯＴ」である。したがって、それは、当業者によって理解されるように、通常の代数が数値関係を説明するのと同じ方法で論理関係を説明するための形式主義である。

したがって、「ＡＮＤゲート」という用語は、表２に示される真理値表に従って動作するデジタル論理ゲートを指す。「ｔｒｕｅ」出力（１）は、ＡＮＤゲートへの両方の入力が「ｔｒｕｅ」（１）である場合にのみ表示される。ＡＮＤゲートへのいずれの入力、又は１つだけの入力が「ｔｒｕｅ」（１）である場合、「ｆａｌｓｅ」（０）が出力される。したがって、全ての入力が１の場合を除き、出力は常に０である。

特に、本明細書で使用される「ＡＮＤゲート」という用語は、ＧＶＲ遺伝子回路における２つの遺伝分子成分間の論理的関係を指し、表１の入力「Ａ」及び「Ｂ」は、２つの生化学的事象であり、表２の出力「Ａ及びＢ」は、活性化されたＲａｃ遺伝子の発現及び／若しくは活性化発現レベルでのＲａｃ遺伝子単独での発現、又は本開示を読んだ上で当業者によって理解されるであろうキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）などの１つ以上の追加の標的化リガンドと組み合わせた発現である。

例えば、本明細書に記載されるＲａｃ遺伝子回路に含まれる「ＡＮＤゲート」のいくつかの実施形態では、Ｒａｃ遺伝子回路は、複数の遺伝分子成分を含み、少なくとも第１の遺伝分子成分が、活性化されたＲａｃ遺伝子の第１のカセット発現を含み、少なくとも第２の遺伝分子成分が、ＣＡＲを含み、ともに、第１の遺伝分子成分から発現される活性化されたＲａｃ遺伝子と、第２の遺伝分子成分によって発現されるＣＡＲは、本開示の意味における活性化された食細胞において組み合わせて動作するように構成されている。

これらの実施形態では、遺伝子回路が遺伝子回路の設計に従って動作するとき、遺伝子回路内での組み合わされた活性化されたＲａｃ及びＣＡＲ発現の出力には、第１及び第２の遺伝分子成分の両方の活性化が必要である。例えば、第１及び第２の遺伝分子成分は、Ｒａｃ遺伝子回路を含む食細胞内の２つ以上の生化学的事象によって活性化されるプロモーターを含むことができる。

「ＯＲゲート」という用語は、表３に示される真理値表に従って動作するデジタル論理ゲートを指す。ＯＲゲートへの入力のいずれかが「ｔｒｕｅ」（１）の場合、「ｔｒｕｅ」出力（１）が表示される。

特に、本明細書で使用される「ＯＲゲート」という用語は、Ｒａｃ遺伝子回路における２つの遺伝分子成分間の論理的関係を指し、表２の入力「Ａ」及び「Ｂ」は、２つの生化学的事象であり、表２の出力「Ａ又はＢ」は、活性化されたＲａｃ遺伝子及び／又は活性化発現レベルでの１つ以上のＣＡＲと組み合わせたＲａｃ遺伝子の発現である。

例えば、本明細書に記載されるＲａｃ遺伝子回路に含まれる「ＯＲゲート」のいくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃ遺伝子に作動可能に接続されたプロモーター、及び生化学的事象Ａ又はＢによって活性化されるＲａｃ遺伝子回路の遺伝分子成分に含まれるＣＡＲは、Ｒａｃ遺伝子回路における活性化されたＲａｃ遺伝子とＣＡＲとの組み合わせ発現の出力をもたらす。例えば、プロモーターは、両方が、例えば、腫瘍治療の同じ段階で発現される、２つの異なる転写活性化因子のいずれかの結合によって活性化される。

遺伝子回路及び関連分子成分に関する更なる情報は、当業者によって理解されるように、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる（ＤｅｌＶｅｃｃｈｉｏａｎｄＭｕｒｒａｙ２０１４）で見ることができる。

いくつかの実施形態では、食細胞は、本明細書に記載される遺伝子操作された食細胞、ベクター、及び／若しくは組成物を投与される個体、並びに／又は本明細書に記載される方法によって治療される個体などの個体からの細胞である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞は、キメラ抗原受容体（「ＣＡＲ」）をコードするヌクレオチド配列と、活性化変異を含むＲａｃ遺伝子と、を含むように操作されるか、又は更に操作され得る。

本明細書で使用される場合、「キメラ抗原受容体」という用語は、がん細胞上のある特定のタンパク質に結合するように設計された人工の細胞表面受容体を指す。キメラ抗原受容体は、Ｔ細胞又はマクロファージなどの免疫細胞が、受容体が結合するように設計された特異的タンパク質を有するがん細胞を発見し、殺傷するのを補助することができる。例えば、マクロファージ又は単球などの食細胞は、患者の血液、腫瘍、又は腹水から取り出され、それらが、腫瘍細胞上の特定の形態の抗原に特異的なキメラ抗原受容体を発現するように、修飾され得る。したがって、ＣＡＲは、腫瘍関連抗原に特異的なＣＡＲを発現する単球又はマクロファージなどの食細胞を再指向することによって、がんを標的とすることができる。

本開示の活性化された食細胞、並びに本明細書に記載される関連するベクター組成物、方法、及びシステムの実施形態では、ＣＡＲは、当業者が理解するように、腫瘍関連抗原結合領域を含む、細胞内活性化ドメイン、膜貫通ドメイン、及び細胞外ドメインを含むことができる。いくつかの実施例では、ＣＡＲは、ＣＤ３－ゼータ膜貫通及び細胞内ドメインに融合した、単鎖可変断片（ｓｃＲ）由来モノクローナル抗体の融合物を含むことができる。ＣＡＲ設計の特異性は、受容体のリガンドに由来し得る。

本開示の活性化された食細胞並びに本明細書に記載される関連するベクター組成物、方法、及びシステムとの関連で使用されるのに好適なＣＡＲの例としては、ＣＤ３、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１２３、Ｂ細胞成熟抗原（ＢＣＭＡ）、ＧＤ２、メソテリン、ＥＧＶＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ２、ｅ－ＭＥＴ、ＰＤ－Ｌ１、及び他の腫瘍関連抗原に結合するＣＡＲが挙げられる。

本開示のＣＡＲが活性化した食細胞並びに本明細書に記載される関連するベクター組成物、方法及びシステムが結合することができる腫瘍関連抗原の例としては、メソテリン、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＴＳＨＲ、ＣＤ１９、ＣＤ１２３、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ１７１、ＣＳ－１、ＣＬＬ－１、ＣＤ３３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＢＣＭＡ、ＴｎＡｇ、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、ＲＯＲ１、ＦＬＴ３、ＦＡＰ、ＴＡＧ７２、ＣＤ３８、ＣＤ４４ｖ６、ＣＥＡ、ＥＰＣＡＭ、Ｂ７Ｈ３、ＫＩＴ、ＩＬ－１３Ｒａ２、インターロイキン－１１受容体ａ（ＩＬ－１１Ｒａ）、ＰＳＣＡ、ＰＲＳＳ２１、ＶＥＧＦＲ２、ＬｅｗｉｓＹ、ＣＤ２４、血小板由来成長因子受容体ベータ（ＰＤＧＦＲ－ベータ）、ＳＳＥＡ－４、ＣＤ２０、葉酸受容体アルファ（ＦＲａ）、ＥＲＢＢ２（Ｈｅｒ２／ｎｅｕ）、ＭＵＣ１、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＮＣＡＭ、プロスターゼ、ＰＡＰ、ＥＬＦ２Ｍ、エフリンＢ２、ＩＧＦ－Ｉ受容体、ＣＡＩＸ、ＬＭＰ２、ｇｐ１ＯＯ、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ＥｐｈＡ２、フコシルＧＭ１、ｓＬｅ、ＧＭ３、ＴＧＳ５、ＨＭＷＭＡＡ、ｏ－アセチル－ＧＤ２、葉酸受容体ベータ、ＴＥＭ１／ＣＤ２４８、ＴＥＭ７Ｒ、ＣＬＤＮ６、ＧＰＲＣ５Ｄ、ＣＸＯＲＦ６１、ＣＤ９７、ＣＤ１７９ａ、ＡＬＫ、ポリシアル酸、ＰＬＡＣ１、ＧｌｏｂｏＨ、ＮＹ－ＢＲ－１、ＵＰＫ２、ＨＡＶＣＲ１、ＡＤＲＢ３、ＰＡＮＸ３、ＧＰＲ２０、ＬＹ６Ｋ、ＯＲ５１Ｅ２、ＴＡＲＰ、ＷＴ１、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＬＡＧＥ－１ａ、ＭＡＧＥ－Ａ１、レグマイン、ＨＰＶＥ６、Ｅ７、ＭＡＧＥＡ１、ＥＴＶ６－ＡＭＬ、***タンパク質１７、ＸＡＧＥ１、Ｔｉｅ２、ＭＡＤ－ＣＴ－１、ＭＡＤ－ＣＴ－２、Ｆｏｓ関連抗原１、ｐ５３、ｐ５３変異体、プロステイン、スルビビン及びテロメラーゼ、ＰＣＴＡ－１／ガレクチン８、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ変異体、ｈＴＥＲＴ、肉腫トランスロケーションブレークポイント、ＭＬ－ＩＡＰ、ＥＲＧ（ＴＭＰＲＳＳ２ＥＴＳ融合遺伝子）、ＮＡ１７、ＰＡＸ３、アンドロゲン受容体、サイクリンＢ１、ＭＹＣＮ、ＲｈｏＣ、ＴＲＰ－２、ＣＹＰ１Ｂ１、ＢＯＲＩＳ、ＳＡＲＴ３、ＰＡＸ５、ＯＹ－ＴＥＳ１、ＬＣＫ、ＡＫＡＰ－４、ＳＳＸ２、ＲＡＧＥ－１、ヒトテロメラーゼ逆転写酵素、ＲＵ１、ＲＵ２、腸カルボキシルエステラーゼ、ｍｕｔｈｓｐ７０－２、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ７２、ＬＡＩＲ１、ＦＣＡＲ、ＬＩＬＲＡ２、ＣＤ３００ＬＦ、ＣＬＥＣ１２Ａ、ＢＳＴ２、ＥＭＲ２、ＬＹ７５、ＧＰＣ３、ＦＣＲＬ５、及びＩＧＬＬ１が挙げられる。

いくつかの実施形態では、本開示の活性化された食細胞、並びに本明細書に記載される関連するベクター組成物、方法、及びシステムは、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ３８、ＣＳ－１、ＴＩＭ３、ＣＤ１２３、メソテリン、葉酸受容体、ＨＥＲ２－ｎｅｕ、上皮成長因子受容体、及び上皮成長因子受容体を含む、腫瘍細胞の表面上に発現される分子に結合するように構成されているＣＡＲを含むことができる。いくつかの実施形態では、免疫活性化受容体は、ＣＡＲ（例えば、抗ＣＤ１９－４－１ＢＢ－ＣＤ３ζＣＡＲ）である。ある特定の実施形態では、免疫活性化受容体は、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ７、ＣＤ８、ＣＤ４５、ＣＤ５２、ＣＤ３８、ＣＳ－１、ＴＩＭ３、ＣＤ１２３、メソテリン、葉酸受容体、ＨＥＲ２－ｎｅｕ、上皮成長因子受容体、及び上皮成長因子受容体を含むがこれらに限定されない、腫瘍細胞の表面上に発現される分子に結合する抗体又はその抗原結合断片（例えば、ｓｃＦｖ）を含む。

本開示の活性化された食細胞、並びに本明細書に記載される関連するベクター組成物、方法、及びシステムがＣＡＲを含む実施形態では、遺伝子操作された活性化された食細胞は、活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第２の追加の食細胞調節領域下にあるＣＡＲを更に含む。ＣＡＲの発現を調節する際に使用される第２の食細胞プロモーター及び第２の追加の食細胞調節領域は、Ｒａｃ遺伝子の発現及び活性化を調節する際に使用される第１及び／又は第３の食細胞プロモーター並びに第１及び／又は第３の追加の食細胞調節領域と同じ又は異なり得る。

好適な第２の食細胞プロモーター、及び追加の第２の食細胞調節領域、並びにＣＡＲが結合することができる腫瘍関連抗原の実施形態、並びに細胞を操作して、ＣＡＲを発現させる方法は、参照によりそれらの全体が組み込まれる、ＵＳ２０２０／０２３９５９２、ＵＳ２０２０／００５５９１７、ＵＳ１０，１２５，１９３、及びＭｅｇｈａｎＭｏｒｒｉｓｓｅｙらによる「Ｃｈｉｍｅｒｉｃａｎｔｉｇｅｎｒｅｃｅｐｔｏｒｓｔｈａｔｔｒｉｇｇｅｒｐｈａｇｏｃｙｔｏｓｉｓ」などの公開文献で見ることができる。（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎｅｔａｌ．２０１８）（ＭｏｒｒｉｓｓｅｙａｎｄＶａｌｅ２０１９）。

追加の標的化リガンドは、当業者によって理解されるように、ＣＡＲ－Ｐに加えて、又はＣＡＲ－Ｐの代わりに食細胞上に提示され得る。追加の標的化リガンドは、目的の標的細胞の臓器、組織、細胞外マトリックス、又は細胞内領域に関連する標的などの目的の標的細胞上に提示される任意の分子と会合するように構成されている分子を含む。いくつかの実施形態では、追加の標的は、がん性状態などの標的細胞の特定の状態に関連付けることができる。

本明細書に記載される活性化された食細胞に提示される標的化リガンドは、１つの標的に特異的であり得るか、又は複数の標的分子に結合するように構成され得る。好適な標的分子は、例えば、細胞の表面上に存在し得る、タンパク質（例えば、受容体、腫瘍マーカー、膜貫通タンパク質、酵素、又は抗体）、核酸、例えば、ＤＮＡ若しくはＲＮＡ、又は炭水化物、例えば、単糖、二糖、若しくは多糖を含むことができる。例示的な標的化リガンドは、ＲＧＤ含有ペプチド、小分子（例えば、ペプチド）模倣リガンド、又は特定の標的に特異的な抗体若しくは抗体断片を含む。例えば、いくつかの実施形態では、ＣＡＲに加えて、又はＣＡＲの代わりに、マクロファージ及び標的細胞抗原に特異的な二価抗体は、がん性細胞を標的とする（Ｆｅｕｅｒｓｔｅｉｎｎ．ｄ．）。

実施形態では本明細書に記載される遺伝子操作された活性化された食細胞は、関連する発現を可能にする構成において、ＣＡＲ遺伝子を更に含み、したがって、ＣＡＲの抗原結合ドメインに特異的に結合する標的細胞に対して指向される治療効果、腫瘍細胞に対するそのような抗腫瘍効果を有する。これらの実施形態のいくつかでは、本明細書に記載されるＣＡＲ発現活性化された食細胞は、Ｒａｃにおける活性化変異及び／又はＲａｃ遺伝子を構成的に活性な遺伝子に変える変異を更に含む。

例えば、例示的な実施形態では、活性化されたＲａｃ遺伝子カセット（活性Ｒａｃ遺伝子又はＲａｃ遺伝子に対する顕性活性化効果を有する変異とともに、食細胞プロモーター及び調節領域）を含有する食細胞を、ＣＡＲ構築物で更にトランスフェクトして、ＣＡＲ技術を使用してその治療効果を可能にすることができる。食作用のためのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｐ）は、Ｂ細胞抗原ＣＤ１９（αＣＤ１９）、及びαＣＤ１９ＣＡＲ－Ｔに存在する及びＣＤ８膜貫通ドメインを認識する細胞外一本鎖抗体可変フラグメント（ｓｃＦｖ）を、食作用受容体Ｍｅｇｆ１０の細胞質ドメインとともに含有する。この構築物は、レンチウイルス又はアデノウイルストランスフェクション法を使用して活性食細胞に導入される。更に、ＣＡＲ－Ｐを発現する食作用を有する細胞を活性化されたＲａｃ遺伝子カセットでトランスフェクトして、食細胞におけるＣＡＲ－Ｐ及び活性Ｒａｃの同時発現を可能にすることができる。同様に、ＣＡＲ－Ｍ構築物（別のＣＡＲ発現構築物）を、食作用を有する細胞において活性化されたＲａｃ遺伝子カセットと共トランスフェクトして、それらの抗腫瘍治療効果を利用することができる。

特に、に記載される方法のいずれか１つに従って、かつ／又は組成物のいずれか１つを使用して、ＣＡＲでトランスフェクトした食細胞は、ＵＳ２０２０／０２３９５９２、ＵＳ２０２０／００５５９１７、ＵＳ１０，１２５，１９３。並びに（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎｅｔａｌ．２０１８）（ＭｏｒｒｉｓｓｅｙａｎｄＶａｌｅ２０１９）で見ることができ、自然発生の活性化された食細胞であり得、かつ／又は本開示を読んだ上で当業者によって理解されるように、活性Ｒａｃ遺伝子及び／若しくは活性化発現レベルでのＲａｃを提供するように更に操作され得る。

本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法は、食作用を有する細胞に、食細胞におけるＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、食細胞プロモーター、好ましくは構成的プロモーターの制御下、かつ１つ以上の追加の食細胞調節領域の制御下で、本明細書に記載される活性Ｒａｃ遺伝子を導入することを含む。

本明細書に記載される活性化された食細胞を提供する実施形態では、導入することは、好適なＲａｃ発現ベクターで食細胞をトランスフェクト又は形質転換することによって実施され得る。本明細書で使用される場合、「トランスフェクトされた」又は「形質転換された」又は「形質導入された」という用語は、外因性核酸が食作用を有する細胞に移入又は導入されるプロセスを指す。

本開示の意味における「発現ベクター」は、特定の遺伝子を標的細胞に導入し、標的細胞機構を使用して、遺伝子によってコードされるタンパク質を産生するように構成されている構築物を示す。発現ベクターは、典型的には、プロモーター、正しい翻訳開始配列、例えば、リボソーム結合部位及び開始コドン、終結コドン、及び転写終結配列などの遺伝子発現に必要な要素を含む。発現ベクターは、複製起点、選択可能なマーカー、及び複数のクローニング部位などの遺伝子の挿入のための好適な部位などの追加の要素を含み得る。本開示の意味におけるベクターは、細胞中に自律複製を指向する配列を含み得るか、又は宿主細胞ＤＮＡへの組み込みを可能にするのに十分な配列を含み得る。

本明細書に記載される方法及びシステムで使用することができる例示的な発現ベクターには、プラスミド（例えば、ＤＮＡプラスミド又はＲＮＡプラスミド）、トランスポゾン、コスミド、細菌人工染色体ウイルスベクターが含まれる。いくつかの実施形態では、ベクターは、レトロウイルスベクター、レンチウイルスベクター、及びアデノ随伴ベクターなどの遺伝子送達ベクターである。いくつかの実施形態では、ベクターは、遺伝子を細胞に移入する遺伝子送達ビヒクルとして使用される。発現ベクターは、高分子ナノ粒子又はリポソームなどの非ウイルス遺伝子送達ナノ材料、及び当業者によって特定可能な他のものも含むことができる。

レトロウイルスベクターは、標的細胞にレトロウイルス遺伝子ではなく、治療遺伝子を送達するように遺伝子操作されたレトロウイルスである。レトロウイルスベクターは、導入遺伝子をウイルスゲノムの一部の代わりに挿入することによって産生され得、感染性ウイルス粒子の調製は、組換えウイルスを組織培養細胞に導入することによって産生される。

「レンチウイルスベクター」という用語は、レンチウイルスゲノムの少なくとも一部分に由来するベクターを指し、特に、（Ｍｉｌｏｎｅ，Ｆｉｓｈｅｔａｌ．２００９）に提供される自己不活性化レンチウイルスベクターを含む。レンチウイルスベクターの他の例としては、ＯｘｆｏｒｄＢｉｏＭｅｄｉｃａからのＬＥＮＴＩＶＥＣＴＯＲ（登録商標）遺伝子送達技術、ＬｅｎｔｉｇｅｎぁらのＬＥＮＴＩＭＡＸ（商標）ベクターシステムなどが挙げられる。

したがって、本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、Ｒａｃ発現ベクターは、構成的に活性な形態でＲａｃ遺伝子をコードする遺伝子と、当業者に理解されるように、遺伝子を発現する標的細胞と適合するプロモーター、エンハンサー、並びに転写後及び翻訳後調節配列などの適切な調節要素と、を含む。

いくつかの実施形態では、Ｒａｃ発現ベクターは、任意の食作用を有する細胞（好中球、単球、及び単球由来マクロファージ及び単球由来樹状細胞）へのＲａｃ遺伝子の長期的な過剰発現又は活性化を可能にするゲノム挿入のために構成されている。これらの実施形態では、ゲノム挿入は、安定なトランスフェクションによって優先的に行われる。したがって、それらの実施形態のいくつかでは、レンチウイルス形質導入が、物理的若しくは化学的形質導入又はアデノウイルス形質導入よりも好ましい。好ましい実施形態では、レンチウイルス形質導入は、Ｒａｃ遺伝子送達のためにインビボで効果的に使用されることが予想され、当業者によって理解されるように、***細胞及び非***細胞において安定した発現を可能にする。

いくつかの実施形態では、少なくともコアプロモーター、続いてＲａｃ遺伝子を含有するＲａｃ発現ベクターを使用して、前述したＲａｃ遺伝子における１つ以上の活性化Ｒａｃ変異を含むように、Ｒａｃ遺伝子を操作することができる。Ｒａｃ遺伝子における変異は、Ｒａｃタンパク質に特異的なアミノ酸の置換をもたらす、部位特異的変異導入によって生成され得る。

ＵＳ２０２０／０２３９５９２、ＵＳ２０２０／００５５９１７号、ＵＳ１０，１２５，１９３、並びに（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎｅｔａｌ．２０１８）（ＭｏｒｒｉｓｓｅｙａｎｄＶａｌｅ２０１９）に記載されているものなどのＣＡＲトランスフェクションに関連して報告されているトランスフェクション方法も、活性Ｒａｃ遺伝子、活性化Ｒａｃ発現レベル、及び／又は１つ以上のＣＡＲの発現を提供するように食細胞を操作するために使用可能であることが期待される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＣＡＲ及び変異Ｒａｃ遺伝子をコードする核酸は、レトロウイルス及びレンチウイルスベクター構築物などのウイルスベクター、並びにアデノ随伴ベクター、又は当業者によって理解されるように、非ウイルス遺伝子送達アプローチを使用して細胞に導入され得る。

一実施例では、ＲＡＣ２（ＲＡＣ２）（ＮＭ＿００２８７２）ヒトタグなしクローン（ＨｕｍａｎＵｎｔａｇｇｅｄＣｌｏｎｅ）（ＯＲＩＧＥＮＥ）及びＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］（Ｈｓｕ、Ｄｏｎｋｏｅｔａｌ．２０１９））を、Ｎｈｅ及びＡｇｅ部位を用いてｐＣＷ５７ベクター内でクローニングした。これらの構築物のレンチウイルストランスフェクションを、ＨＬ６０細胞で実施した。マクロファージ分化のために、ＨＬ６０細胞を、５×１０^５個の細胞／ｍＬの密度で、カバースリップコーティング６ウェルプレート中のＲＰＭＩ１６４０に加えてＬ－グルタミン及び１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）培地に播種し、ドキシサイクリン及び３２ｎＭの１２－Ｏ－テトラデカノイルホルボール－１３－アセテート（ＴＰＡ）で４８時間処理した。等密度のＪｕｒｋａｔＴ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識化し、食作用アッセイのために、分化したマクロファージと２４時間共培養した。これらの共培養実験も、ＨＡ－ｍＣｈｅｒｒｙタグ付きＪｕｒｋａｔＴ細胞で繰り返し、一貫した結果を見出した（実施例６を参照されたい）。

Ｒａｃ発現ベクターという用語は、場合により、遺伝子発現カセット内の食細胞プロモーター及び追加の食細胞調節領域を有する活性化されたＲａｃ遺伝子を含む発現ベクターを示す。いくつかの実施形態では、Ｒａｃ発現ベクターは、ＣＡＲ遺伝子、並びに場合により、ＣＡＲ遺伝子発現カセット内の関連する食細胞プロンプター及び追加の食細胞調節配列を更に含む。

いくつかの実施形態では、活性化されたＲａｃ遺伝子及び／又はＣＡＲ遺伝子は、アデノ随伴ウイルスベクター（「ＡＡＶ」）を含むウイルスベクターで導入され得る。ＡＡＶは、パルボウイルス科のデペンドパルボウイルス属の非エンベロープ一本鎖ＤＮＡウイルスである。ＡＡＶは、先天的に非病原性であり、免疫原性が低く、かつ広範囲にトロピックであり、ウイルスベースの遺伝子療法のための魅力的な遺伝子送達候補となる。ＡＡＶベクターは、標的ゲノムへの組み込みなしに哺乳類細胞を安定的にトランスフェクションすることが示されている。

例示的な好適なＡＡＶは、様々な血清型のＡＡＶを含み、化学遺伝子タンパク質遺伝子を担持するためのベクターとして使用され得る。ＡＡＶ血清型は、細胞表面へのＡＡＶの初期結合を媒介する、それらの相互作用するグリカン部分に基づいて特定される。ＡＡＶ血清型の例としては、ＡＡＶ血清型１（「ＡＡＶ１」）、ＡＡＶ２、ＡＡＶ３、ＡＡＶ５、ＡＡＶ６、ＡＡＶ９、及び当業者に特定可能な他の血清型、例えば、ＡＡＶ７、ＡＡＶ８、ＡＡＶ１１、ＡＡＶ－ＤＪが挙げられる。

他の実施形態では、核酸は、食細胞に直接トランスフェクトされ得る。

いくつかの実施形態では、ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓシステムは、当業者によって理解されるように、Ｒａｃ遺伝子における標的遺伝子変化を誘導するために使用される。ＣＲＩＳＰＲシステムを使用して標的遺伝子を修飾する方法は、当業者によって特定可能であろう。

他の実施形態では、核酸は、細胞にエレクトロポレーションされ得る。エレクトロポレーションの詳細な方法は、例えば、（Ｒｏｔｈ，Ｐｕｉｇ－Ｓａｕｓｅｔａｌ．２０１８）（ＶａｎＴｅｎｄｅｌｏｏ，Ｗｉｌｌｅｍｓｅｔａｌ．２０００）に記載されている。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載されるＲａｃ発現ベクターは、本明細書に記載される物理的、化学的、又は生物学的手段、及び当業者に知られている他の手段によって、宿主細胞に移入することができる。導入されたタンパク質のいずれかの産生は、配列決定によって検証することができる。全長タンパク質の発現は、免疫ブロット、免疫組織化学、フローサイトメトリー、又は当該技術分野において周知であり、利用可能な他の技術を使用して検証され得る。

いくつかの実施形態では、１つ以上の活性Ｒａｃ遺伝子を、条件付きドキシサイクリン誘導性（ＴｅｔＯＮ）、レンチウイルス、哺乳類発現ベクター（例えば、ｐＣＷ５７）中でクローニングすることができ、レンチウイルスベクター（ｐＨＲＳＩＮ－ＣＳＧＷに由来するものなど）中でクローニングされるＣＡＲ－Ｐモジュール、又はレンチウイルス若しくはアデノウイルスベクター（ｐＴＲＰＥレンチウイルス骨格又はｐＡｄ５ｆ３５アデノウイルス骨格を含有するものなど）中でクローニングされるＣＡＲ－Ｍモジュールは、食細胞中で安定して発現するであろう。これらのＣＡＲモジュールのうちのいずれかを含有する食細胞を、活性化されたＲａｃ遺伝子カセットモジュールでトランスフェクトして、これらの構築物の共発現を可能にする。宿主細胞を形質転換又はトランスフェクションするための追加の好適な方法は、（（Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｆｒｉｔｓｃｈｅｔａｌ．１９８９）、及び当業者によって理解されるように、他の標準的な分子生物学研究室マニュアルで見ることができる。

いくつかの実施形態では、Ｒａｃ発現ベクター及び／又は遺伝子操作された細胞は、適合性のあるビヒクルとともに組成物中に含まれ得る。

本明細書で使用される「ビヒクル」という用語は、活性成分として組成物中に含まれる、本明細書に記載される発現ベクター、遺伝子、造影剤、及び／又は化学アクチュエーターのための溶媒、担体、結合剤、又は希釈剤として通常作用する様々な媒体のいずれかを示す。特に、発現ベクター、遺伝子、造影剤、及び／又は化学アクチュエーターを含む組成物は、本明細書に記載される方法又はシステムのうちの１つにおいて使用することができる。

いくつかの実施形態では、ビヒクルは、薬学的に許容されるビヒクルであり、組成物は、薬学的に許容される組成物である。

本明細書で使用される場合、「薬学的に許容される」という用語は、過度の毒性、刺激、又はアレルギー反応なしに対象に投与することができ、許容されない生物学的効果を引き起こさないか、又はそれが含有される組成物の他の成分のいずれとも有害な様式で相互作用しないという点で、生物学的に又は他の点で望ましくないものではないことを意味する。

注射用組成物のための好適なビヒクルは、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びそれらの好適な混合物を含有する、溶媒又は分散媒体を含む。

経口組成物のための好適なビヒクルは、錠剤、丸剤、トローチ、又はカプセル、例えば、ゼラチンカプセルの形態の活性成分と組み合わせることができる、不活性希釈剤又は可食性担体、及び賦形剤を含む。薬学的に適合性の結合剤、及び／又はアジュバント材料を、組成物の一部として含めることができ、微結晶性セルロース、トラガントガム若しくはゼラチン、並びに当業者によって特定可能な追加の結合剤及び／又はアジュバントなどを含む。

好適な推進剤、例えば、二酸化炭素などのガスを含有する加圧容器又はディスペンサー、又は噴霧器からの吸入に使用されるエアロゾルスプレーのための好適なビヒクルは、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許第６，４６８，７９８号に記載される方法などの方法で製剤化及び／又は投与されることが予想される。

経粘膜又は経皮投与のための好適なビヒクル、浸透されるバリアに適切な浸透剤が、製剤に使用される。かかる浸透剤は、当該技術分野において一般に知られており、例えば、経粘膜投与のために、界面活性剤、胆汁酸塩、及びフシジン酸誘導体を含む。経粘膜投与は、鼻腔スプレー又は坐薬の使用によって達成され得る。経皮投与に関しては、活性成分は、当該技術分野で一般に知られている軟膏、膏薬、ゲル、又はクリームに製剤化される。

坐剤（例えば、ココアバター及び他のグリセリドなどの従来の坐剤ベースを有する）又は直腸送達のための保持浣腸の形態の組成物に好適なビヒクル。

好ましくは、インプラント及びマイクロカプセル化送達システムを含む、放出制御製剤などの、身体からの急速な排除に対して、食細胞、ポリペプチド、及び核酸分子を保護するであろう医薬組成物担体。

本開示の実施形態では、本開示の活性化された食細胞、又は関連するベクター及び組成物は、標的細胞の貪食及び／又はトロゴサイトーシスによって個体を治療する方法で投与され得る。特に、の方法は、標的細胞のトロゴサイトーシス及び／又は呑み込みが、治療効果を有することが知られているか、又は予想される１つ以上の健康状態又は障害を有する、それらを有すると疑われる、又はそれらを発症するリスクが高い可能性がある個体を治療するために使用することができる。

「標的細胞」という用語は、本明細書で使用される場合、本開示の活性化された食細胞によって認識され、排除される細胞を示す。標的細胞の例としては、腫瘍細胞、細菌、ウイルス感染細胞、ウイルス粒子、老人細胞、及び当業者にとって特定可能な他のものが挙げられる。いくつかの実施形態では、標的細胞は、Ｔａｕ又はベータアミロイドの異常な形態の蓄積に起因して、非機能的であるか、又は死にかけているニューロンも含む。

本開示の食細胞、ベクター、及び／又は組成物で治療され得る例示的な状態は、急性及び／若しくは慢性感染症、炎症性疾患、免疫疾患、並びに／又はがんを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に開示される方法は、感染細胞、形質転換細胞、悪性細胞、アポトーシス細胞、損傷細胞、及び／又は壊死細胞だけでなく、生細胞（腫瘍細胞、がん細胞、又は本開示の意味における活性化された食細胞によって標的とされる他の細胞）も除去することを含む、増強された食作用を通じて個体の身体からの細胞の除去を増強する（例えば、増加させる）ことによって、１つ以上の健康状態又は障害を治療する際に有用である。

本方法は、個体に、治療有効量の、本明細書に記載されるＲａｃ活性医薬組成物を投与することを含む。特に、本明細書に記載される方法において、活性Ｒａｃ又は活性化Ｒａｃレベルを有する活性化された食細胞は、個体に、単独で、又は治療される状態に関連して特定される標的細胞に特異性を付与する受容体と組み合わせてのいずれかで投与される。

特に、好ましい実施形態では、本開示の方法は、治療有効量の、本明細書に記載されるＲａｃ活性食細胞、ベクター、及び／又は組成物を、ＣＡＲと組み合わせて投与することを含む（参照によりその全体が組み込まれるＵＳ２０２０／０２３９５９２を参照されたい）。

いくつかの実施形態では、標的細胞は、腫瘍細胞であり、標的細胞の貪食及び／又はトロゴサイトーシスは、好ましくは１つ以上のＣＡＲと組み合わせて、本開示の発現ベクター及び／又は活性化された食細胞を使用して対象における腫瘍を治療する方法によって実施することができる。

本明細書で使用される場合、「腫瘍」又は「がん」という用語は、異常な細胞の急速かつ制御不能な成長を特徴とする疾患を指す。異常細胞は、固形腫瘍を形成し得るか、又は血液悪性腫瘍を構成し得る。がん細胞は、局所的に、又は血流及びリンパ系を通じて、身体の他の部分に広がり得る。本開示の組成物及び方法によって治療することができるがんに関して特定の制限はない。好適ながんの非限定的な例としては、卵巣がん、腎臓がん、乳がん、前立腺がん、肝臓がん、脳がん、リンパ腫、白血病、子宮頸がん、皮膚がん、膵臓がん、結腸直腸がん、肺がんなどが挙げられる。本開示の組成物及び方法で好適治療することができる他のがんとしては、これらに限定されないが、ＡＭＬ、ＡＬＬ、ＣＭＬ、副腎皮質がん、肛門がん、再生不良性貧血、胆管がん、膀胱がん、骨がん、骨転移、脳がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、末梢神経系（ＰＮＳ）がん、乳がん、子宮頸がん、小児非ホジキンリンパ腫、結腸及び直腸がん、子宮内膜がん、食道がん、ユーイングファミリー腫瘍（例えば、ユーイング肉腫）、眼がん、移行細胞がん、膣がん、骨髄増殖性疾患、鼻腔及び副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽腫、口腔及び口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、下垂体腫瘍、前立腺がん、網膜芽腫、胆嚢がん、胃腸がん、胃腸間質腫瘍、妊娠性絨毛性疾患、ホジキンリンパ腫、カポジ肉腫、腎臓がん、喉頭及び下咽頭がん、肝臓がん、肺がん、肺カルチノイド腫瘍、脳がん、中枢神経系（ＣＮＳ）がん、末梢神経系（ＰＮＳ）がん、乳がん、子宮頸がん、小児非ホジキンリンパ腫、結腸及び直腸がん、非ホジキンリンパ腫、悪性中皮腫、多発性骨髄腫、骨髄異形成症候群、下垂体腫瘍、前立腺がん、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、黒色腫皮膚がん、非黒色腫皮膚がん、胃がん、睾丸がん、胸腺がん、甲状腺がん、子宮がん（例えば、子宮肉腫）、遊走細胞がん、膣がん、髄増殖性障害、鼻腔及び副鼻腔がん、鼻咽頭がん、神経芽腫、口腔及び口腔咽頭がん、骨肉腫、卵巣がん、膵臓がん、陰茎がん、下垂体腫瘍、前立腺がん、網膜芽腫、横紋筋肉腫、唾液腺がん、肉腫、黒色腫皮膚がん、非黒色腫皮膚がん、胃がん、結腸がん、胸腺がん、甲状腺がん、子宮がん（例えば、子宮肉腫）、移行上皮がん、膣がん、外陰がん、中皮腫、扁平上皮若しくは扁平上皮がん、気管支腺腫、絨毛がん、頭頸部がん、奇形がん、又は原発性マクログロブリン血症（Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍ’ｓｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎｅｍｉａ）が挙げられる。特に好適ながんとしては、これらに限定されないが、乳がん、卵巣がん、肺がん、膵がん、中皮腫、白血病、リンパ腫、脳がん、前立腺がん、多発性骨髄腫、黒色腫、膀胱がん、骨肉腫、軟部組織肉腫、網膜芽腫、腎腫瘍、神経芽腫、及びがん腫が挙げられる（出典ＵＳ２０２０／０２３９５９２、参照によりその全体が組み込まれる）。

アルツハイマー病を治療するいくつかの実施形態では、本開示の発現ベクター及び／又は活性化された食細胞は、マクロファージによってアミロイドベータの食作用を引き起こすことができ、したがって、アミロイドベータのクリアランスをもたらす。これらの実施形態では、投与される活性化された食細胞は、本開示を読んだ上で当業者によって理解されるように、活性化マクロファージ、特に、活性化グリア細胞を含むと予想される。マクロファージ、特に、グリア細胞における増強されたＲａｃ特性は、本開示を読んだ上で当業者によって理解されるように、アミロイドベータを呑み込み、かつ／又はそのトロゴサイトーシスを実行するグリア細胞の増強された能力をもたらすことが予想される（実施例２０を参照されたい）。

特に、いくつかの実施形態では、本方法は、治療有効量の、本明細書に記載される活性化された食細胞及び／又は活性化されたＲａｃ発現ベクターを含む医薬組成物を対象に投与することを含む。

本明細書に記載される活性化された食細胞は、適切な臨床前及び臨床実験及び試験において決定される、投与量及び経路、並びに回数で投与することができる。活性化された食細胞組成物は、これらの範囲内の投与量で複数回投与され得る。いくつかの実施形態では、活性化された食細胞の投与は、当業者によって決定される、所望の疾患又は状態を治療するのに有用な他の方法と組み合わされ得る。

投与される食細胞は、療法を受ける対象に関して、自家、同種異系、又は異種異系であり得る。

細胞の投与は、当業者に知られている任意の好適な様式で行うことができる。例えば、細胞は、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、埋め込み、又は移植によって対象に投与することができる。本明細書に記載される組成物は、動脈内、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内注射によって、又は腹腔内で患者に投与することができる。他の実施では、細胞は、対象における標的領域、対象における局所疾患部位、リンパ節、臓器、腫瘍などに直接注射され得る。発現ベクターは、ベクターが個体の血液中に提供されることを可能にする投与経路、典型的には静脈内注射によって標的領域に投与され得る。原則として、本明細書に記載されるベクターを標的細胞に送達するために好適に用いられると予想される手順及び技術に関して、特定の制限はない。本明細書で開示される方法に好適な非限定的な送達手順としては、安定的又は一過性のトランスフェクション、リポフェクション、エレクトロポレーション、マイクロインジェクション、リポソーム、イオン電気泳動、及び組換えウイルスベクターによる感染が挙げられる。いくつかの実施形態では、投与は、ウイルス、粒子、リポソーム、又はエクソソームに基づく送達手順を含む。。（出典ＵＳ２０２０／０２３９５９２）。

いくつかの実施形態では、治療される腫瘍は、固形腫瘍又は血液悪性腫瘍である。血液悪性腫瘍の例には、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫が含まれる。固形腫瘍の例としては、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞がん、卵巣がん、膵がん、肝細胞がん、神経芽細胞がん、横紋筋肉がん、及び脳がんが挙げられる。本明細書で開示される方法に適用可能な他の疾患状態としては、細菌感染、ウイルス感染細胞、ビリオン、欠陥ニューロン、又は老人性細胞が挙げられる。

いくつかの実施形態では、投与は、食細胞において発現される１つ以上のＲａｃタンパク質のＲａｃ特性を増強するために、１つ以上の遺伝子及び／又は調節領域をエクスビボで内因性細胞内に送達することを含む。いくつかの実施形態では、投与は、本明細書に記載される１つ以上のベクターをインビボで細胞内に送達することを含む。いくつかの実施形態では、本明細書に記載される活性化された食細胞、ベクター、及び／又は組成物の投与は、がん細胞のトロゴサイトーシス及び／又は食作用を活性化することが予想される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、Ｒａｃタンパク質又はその一部（例えば、Ｒａｃ遺伝子）をコードする異種ポリヌクレオチドを含み、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを欠く食細胞についての食作用及び／又はトロゴサイトーシスの量と比較して、増加した量の食作用及び／又はトロゴサイトーシスを呈する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを欠く食細胞についての生細胞の食作用及び／又はトロゴサイトーシスの量と比較して、増加した量の生細胞の食作用及び／又はトロゴサイトーシスを呈し、任意選択で生細胞は、罹患生細胞（例えば、生がん細胞及び／又は生ウイルス感染細胞）である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを欠く食細胞の細胞機能と比較して、修飾された細胞機能を有し、任意選択で異種ポリヌクレオチドの発現は、修飾された細胞機能を提供する。これらの実施形態のいくつかでは、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、修飾細胞機能は、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部によるＧＴＰへの結合の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する結合率の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する加水分解率の低減、並びに／又は下流生成物レベルの修飾（例えば、増加又は減少）（例えば、増加したｐＡＫＴ濃度、増加したＦ－アクチン含有量、及び／又は増加した反応性酸素種（ＲＯＳ）濃度）のうちの１つ以上である。

本明細書で使用される場合、「減少する」、「低減する」、「低減した」、「低減すること」、「低減」、「小さくなる」、及び（及びその文法的変形）、文脈が別途示さない限り、参照値の検出可能な減少。減少は、別の測定可能な特性又は量（例えば、対照値）と比較して、少なくとも約５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９７％、９８％、９９％、又は１００％の減少を含むことができる。いくつかの実施形態では、低減によって、検出可能な活性若しくは量がなくなるか、又は本質的になくなる（すなわち、わずかな量、例えば、約１０％未満、又は更に５％未満）場合がある。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチドを含み、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを欠く食細胞の細胞機能と比較して、修飾された細胞機能を有する。それらの実施形態のいくつかでは、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを発現し、任意選択で異種ポリヌクレオチドの発現は、修飾細胞機能を提供する。それらの実施形態のいくつかでは、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、修飾細胞機能は、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部によるＧＴＰへの結合の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する結合率の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する加水分解率の低減、並びに／又は下流生成物レベルの修飾（例えば、増加又は減少）（例えば、増加したｐＡＫＴ濃度、増加したＦ－アクチン含有量、及び／又は増加した反応性酸素種（ＲＯＳ）濃度）のうちの１つ以上である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを含み、異種ポリヌクレオチドは、変異Ｒａｃタンパク質若しくはその一部、又は非変異Ｒａｃタンパク質若しくはその一部（例えば、野生型Ｒａｃタンパク質又はその一部）をコードし、任意選択で異種ポリヌクレオチドは、配列番号１のいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする核酸配列を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを含み、異種ポリヌクレオチドは、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、若しくはＲａｃ３タンパク質又はその一部をコードする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを含み、異種ポリヌクレオチドは、配列番号１のアミノ酸配列及び位置番号付けを参照して、１１、１２、２８、２９、３０、３４、６２、６３、９２、及び／又は１５７位に位置する１つ以上の置換アミノ酸残基を含む変異Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを含み、異種ポリヌクレオチドは、変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部をコードし、任意選択で変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部は、配列番号１のアミノ酸位置番号付けを参照して、６２位にリジン、６１位にロイシン、６３位にバリン、１２位にアルギニン、及び／又は１２位にバリンを有し、更に任意選択で変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部は、配列番号１と比較して、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及び／又はＧ１２Ｖ変異を含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを含み、更に、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含む。これらの実施形態のうちのいくつかでは、遺伝子操作された食作用を有する細胞、プロモーターは、構成的プロモーターであり得、任意選択で構成的プロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される。

ポリヌクレオチドに関して本明細書で使用される「作用可能に連結された」又は「作用可能に会合された」とは、示される要素が互いに機能的に関連しており、また一般に物理的に関連していることを意味する。したがって、本明細書で使用される「作動可能に連結された」又は「作動可能に会合された」という用語は、機能的に会合された単一の核酸分子上のヌクレオチド配列を指す。したがって、第２のヌクレオチド配列に作動可能に連結される第１のヌクレオチド配列は、第１のヌクレオチド配列が第２のヌクレオチド配列と機能的関係に置かれる場合の状況を意味する。例えば、プロモーターがヌクレオチド配列と作用可能に会合されるのは、プロモーターが該ヌクレオチド配列の転写又は発現をもたらす場合である。当業者は、制御配列（例えば、プロモーター）が、それらの発現を誘導するように機能する限り、制御配列が作用可能に関連付けられているヌクレオチド配列と連続している必要はないことを理解するであろう。したがって、例えば、プロモーター配列とコード配列との間に、未翻訳であるが転写された介在する配列が存在してもよく、それでもなおプロモーター配列は、ヌクレオチド配列に「作動可能に連結されている」とみなすことができる。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種ポリヌクレオチド、及び異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含むいくつかの実施形態では、プロモーターは、条件付きプロモーターであり、任意選択で条件付きプロモーターは、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、並びにｃＦＯＳプロモーターから選択される。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、異種ポリヌクレオチド、及び異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含むいくつかの実施形態では、細胞は、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結された１つ以上の調節領域を更に含む。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、異種ポリヌクレオチド、及び異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを含むいくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチド及びプロモーターは、遺伝子発現カセット内に含まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含み、遺伝子操作された食細胞は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を欠く食細胞についての食作用及び／又はトロゴサイトーシスの量と比較して、増加した量の食作用及び／又はトロゴサイトーシスを呈する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種ポリヌクレオチドを含むいくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを欠く食細胞についての生細胞の食作用及び／又はトロゴサイトーシスの量と比較して、増加した量の生細胞の食作用及び／又はトロゴサイトーシスを呈し、任意選択で生細胞は、罹患生細胞（例えば、生がん細胞及び／又は生ウイルス感染細胞）である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種ポリヌクレオチドを含むいくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を欠く食細胞の細胞機能と比較して、修飾された細胞機能を有し、任意選択で異種Ｒａｃタンパク質又はその一部の産生は、修飾された細胞機能を提供する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種ポリヌクレオチドを含む、これらの実施形態のうちのいくつかでは、修飾細胞機能は、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部によるＧＴＰへの結合の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する結合率の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する加水分解率の低減、並びに／又は下流生成物レベルの修飾（例えば、増加又は減少）（例えば、増加したｐＡＫＴ濃度、増加したＦ－アクチン含有量、及び／又は増加した反応性酸素種（ＲＯＳ）濃度）のうちの１つ以上である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを欠く食細胞の細胞機能と比較して、修飾された細胞機能を有する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部分を産生し、任意選択で異種タンパク質又はその一部分の発現は、修飾された細胞機能を提供する。それらの実施形態のいくつかでは、修飾細胞機能は、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部によるＧＴＰへの結合の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する結合率の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する加水分解率の低減、並びに／又は下流生成物レベルの修飾（例えば、増加又は減少）（例えば、ｐＡＫＴ濃度の増加、Ｆ－アクチン含量の増加、及び／又は活性酸素種（ＲＯＳ）濃度の増加）のうちの１つ以上である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部は、変異若しくは非変異のＲａｃタンパク質又はその一部であり、任意選択で異種Ｒａｃタンパク質又はその一部は、配列番号１のいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部は、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、若しくはＲａｃ３タンパク質又はその一部である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部は、配列番号１のアミノ酸配列及び位置番号付けを参照して、１１、１２、２８、２９、３０、３４、６２、６３、９２、及び／又は１５７位に位置する１つ以上の置換アミノ酸残基を含む変異Ｒａｃタンパク質又はその一部である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部は、変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部であり、任意選択で変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部は、配列番号１のアミノ酸位置番号付けを参照して、６２位にリジン、６１位にロイシン、６３位にバリン、１２位にアルギニン、及び／又は１２位にバリンを有し、更に任意選択で変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部は、配列番号１と比較して、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及び／又はＧ１２Ｖ変異を含む。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、細胞は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部（例えば、Ｒａｃ遺伝子）をコードする異種ポリヌクレオチドを更に含み、任意選択で遺伝子操作された食作用を有する細胞は、異種ポリヌクレオチドを発現し、更に任意選択で異種ポリヌクレオチドは、配列番号１のいずれか１つに対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％の配列同一性を有する核酸配列を含む。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を含む、いくつかの実施形態では、細胞は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチドを更に含み、細胞は、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを更に含む。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチド、及びプロモーターを含む、いくつかの実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターであり得、任意選択で構成的プロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチド、及びプロモーターを含む、いくつかの実施形態では、プロモーターは、条件付きプロモーターであり、任意選択で条件付きプロモーターは、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、並びにｃＦＯＳプロモーターから選択される。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチド、及びプロモーターを含む、いくつかの実施形態では、細胞は、異種ポリヌクレオチドに作動可能に連結された１つ以上の調節領域を更に含むことができる。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチド、及びプロモーターを含む、いくつかの実施形態では、異種ポリヌクレオチド及びプロモーターは、遺伝子発現カセット内に含まれる。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含む、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作されていない食細胞（例えば、天然又は野生型食細胞、任意選択でＲａｃタンパク質又はその一部を産生する遺伝子操作されていない食細胞）と比較して、増加した量のＲａｃタンパク質又はその一部を産生し、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作されていない食細胞についての食作用及び／又はトロゴサイトーシスの量と比較して、増加した量の食作用及び／又はトロゴサイトーシスを呈する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含む、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作されていない食細胞についての生細胞の食作用及び／又はトロゴサイトーシスの量と比較して、増加した量の生細胞の食作用及び／又はトロゴサイトーシスを呈し、任意選択で生細胞は、罹患生細胞（例えば、生きているがん細胞及び／又は生きているウイルス感染細胞）である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含む、これらの実施形態のうちのいくつかでは、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作されていない食細胞の細胞機能と比較して、修飾された細胞機能を有し、任意選択でＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドの発現は、修飾された細胞機能を提供する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、遺伝子操作された食作用を有する細胞が修飾された細胞機能を有する、それらの実施形態のいくつかでは、修飾された細胞機能は、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部によるＧＴＰへの結合の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する結合率の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する加水分解率の低減、並びに／又は下流生成物レベルの修飾（例えば、増加又は減少）（例えば、増加したｐＡＫＴ濃度、増加したＦ－アクチン含有量、及び／又は増加した反応性酸素種（ＲＯＳ）濃度）のうちの１つ以上である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含む、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作されていない食細胞（例えば、Ｒａｃタンパク質又はその一部を産生する遺伝子操作されていない食細胞）と比較して、増加した量のＲａｃタンパク質又はその一部を産生し、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作されていない食細胞の細胞機能と比較して、修飾された細胞機能を有する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞が、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含む、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを発現し、任意選択でＲａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生は、修飾細胞機能を提供する。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能を提供する、いくつかの実施形態では、修飾細胞機能は、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部によるＧＴＰへの結合の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する結合率の増加、ＧＴＰ及びＲａｃタンパク質若しくはその一部に対する加水分解率の減少、並びに／又は下流生成物レベルの修飾（例えば、増加又は減少）（例えば、増加したｐＡＫＴ濃度、増加したＦ－アクチン含有量、及び／又は増加した反応性酸素種（ＲＯＳ）濃度）のうちの１つ以上である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能を提供する、いくつかの実施形態では、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドは、変異若しくは非変異Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードし、任意選択でＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、又は９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列をコードする。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能を提供する、いくつかの実施形態では、Ｒａｃタンパク質又はその一部分をコードするポリヌクレオチドは、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、若しくはＲａｃ３タンパク質又はその一部分をコードする。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能を提供する、いくつかの実施形態では、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドは、配列番号１のアミノ酸配列及び位置番号付けを参照して、１１、１２、２８、２９、３０、３４、６２、６３、９２、及び／又は１５７位に位置する１つ以上の置換アミノ酸残基を含む変異Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能を提供する、いくつかの実施形態では、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドは、変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部をコードし、任意選択で変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部は、配列番号１のアミノ酸位置番号付けを参照して、６２位にリジン、６１位にロイシン、６３位にバリン、１２位にアルギニン、及び／又は１２位にバリンを有し、更に任意選択で変異Ｒａｃ２タンパク質又はその一部は、配列番号１と比較して、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及び／又はＧ１２Ｖ変異を含む。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能を提供する、いくつかの実施形態では、細胞は、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されたプロモーターを更に含み、任意選択でプロトマーは、異種プロモーターである。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能及びプロモーターを提供する、いくつかの実施形態では、プロモーターは、構成的プロモーターであり、任意選択で構成的プロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能及びプロモーターを提供する、いくつかの実施形態では、プロモーターは、条件付きプロモーターであり、任意選択で条件付きプロモーターは、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルに基づく誘導性プロモーター、並びにｃＦＯＳプロモーターから選択される。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能及びプロモーターを提供する、いくつかの実施形態では、細胞は、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結された１つ以上の調節領域を更に含み、任意選択で１つ以上の調節領域のうちの少なくとも１つが、異種調節領域である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能及びプロモーターを提供する、いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、上流調節因子の発現を過剰発現又は阻害し、任意選択で上流調節因子は、グアニンヌクレオチド交換因子（例えば、ＴＩＡＭ１及び／又はＶａｖ）及び／又はグアニンヌクレオチドトリホスファターゼ活性化タンパク質である。

本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞がＲａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを含み、Ｒａｃタンパク質若しくはその一部をコードするポリヌクレオチドの発現及び／又はＲａｃタンパク質若しくはその一部の産生が修飾細胞機能及びプロモーターを提供する、いくつかの実施形態では、プロモーターは、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチド、及びプロモーターは、遺伝子発現カセット内に含まれる。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞は、遺伝子操作された単球（例えば、遺伝子操作されたミクログリア細胞）、マクロファージ、樹状細胞、好中球、又はそれらの前駆体である。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、細胞は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子（例えば、ＣＡＲをコードするポリヌクレオチド）を更に含み、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、ＣＡＲ遺伝子を発現する。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、ＣＡＲ遺伝子は、Ｒａｃタンパク質若しくは一部をコードする異種ポリヌクレオチド、又はＲａｃタンパク質若しくは一部をコードするポリヌクレオチドと同じプロモーターに作動可能に連結される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、ＣＡＲ遺伝子は、第２のプロモーターに作動可能に連結され、第２のプロモーターは、Ｒａｃタンパク質若しくは一部をコードする異種ポリヌクレオチド、又はＲａｃタンパク質若しくは一部をコードするポリヌクレオチドに作動可能に連結されるプロモーターと異なり、任意選択で第２のプロモーターは、異種プロモーターである。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、第２のプロモーターは、構成的プロモーターであり、任意選択で構成的プロモーターは、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、第２のプロモーターは、条件付きプロモーターであり、任意選択で条件付きプロモーターは、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、及びｃＦＯＳプロモーターから選択される。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、ＣＡＲ遺伝子は、遺伝子発現カセット、任意選択でＲａｃタンパク質若しくは部分をコードする異種ポリヌクレオチド、又はＲａｃタンパク質若しくは部分をコードするポリヌクレオチドと同じ又は異なる遺伝子発現カセット内に含まれる。

いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法が記載され、本方法は、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチドを、食作用を有する細胞に導入し、それによって、遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生することを含み、任意選択で遺伝子操作された食作用を有する細胞は、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれか１つによる遺伝子操作された食作用を有する細胞である。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチドを安定的に導入することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチドを一時的に導入することを含む。

いくつかの実施形態では、遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法が記載され、本方法は、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部を、食作用を有する細胞に導入し、それによって、遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生することを含み、任意選択で遺伝子操作された食作用を有する細胞は、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれか１つの遺伝子操作された食作用を有する細胞である。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、異種Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードする異種ポリヌクレオチドを、食作用を有する細胞に導入することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、異種Ｒａｃタンパク質又はその部分をコードする異種ポリヌクレオチドを、安定的に導入することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、異種Ｒａｃタンパク質又はその部分をコードする異種ポリヌクレオチドを、一時的に導入することを含む。

いくつかの実施形態では、本明細書に記載される実施形態のうちのいずれか１つによる遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法が記載され、本方法は、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを、食作用を有する細胞に導入し、それによって、遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを、安定的に導入することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、Ｒａｃタンパク質又はその一部をコードするポリヌクレオチドを、一時的に導入することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、導入することは、インビボ又はエクスビボで実施される。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、食作用を有する細胞を得ることを更に含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、食作用を有する細胞は、遺伝子操作された食作用を有する細胞を投与される個体から得られる。

遺伝子操作された食作用を有する細胞を産生する方法のいくつかの実施形態では、食作用を有する細胞は、遺伝子操作された食作用を有する細胞を投与される個体と適合する供給源から得られる。

いくつかの実施形態では、対象を治療する方法が記載され、本方法は、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞、又は本明細書に記載される方法のうちのいずれか１つによって産生された、遺伝子操作された食作用を有する細胞を対象に投与し、それによって、対象を治療することを含む。

いくつかの実施形態では、対象を治療する方法が記載され、本方法は、本明細書に記載される遺伝子操作された食作用を有する細胞を対象に投与することを含み、遺伝子操作された食作用を有する細胞は、対象から得られた食作用を有する細胞から産生され、それによって、対象を治療する。

遺伝子操作された食作用を有する細胞が、対象から得られた食作用を有する細胞から産生され、それによって、対象を治療する、対象を治療する方法のいくつかの実施形態では、本方法は、がん（例えば、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞がん、卵巣がん、膵臓がん、肝細胞がん、神経芽細胞腫、横紋筋肉腫、及び／又は脳がん）、血液悪性腫瘍（例えば、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、及び／又は非ホジキンリンパ腫）、感染症（例えば、ウイルス感染）、及び／又はアルツハイマー病を治療することを含む。

遺伝子操作された食作用を有する細胞が、対象から得られた食作用を有する細胞から産生され、それによって、対象を治療する、対象を治療する方法のいくつかの実施形態では、対象は、がん、血液悪性腫瘍、感染症、及び／又はアルツハイマー病を有するか、又は有すると考えられる。

遺伝子操作された食作用を有する細胞が、対象から得られた食作用を有する細胞から産生され、それによって、対象を治療する、対象を治療する方法のいくつかの実施形態では、投与することは、遺伝子操作された食作用を有する細胞を、吸入（例えば、エアロゾル吸入）、注射（例えば、静脈内注射）、摂取、輸血、埋め込み、及び／又は移植を介して対象に投与することを含み、任意選択で遺伝子操作された食作用を有する細胞は、対象に静脈内注射される。

遺伝子操作された食作用を有する細胞が、対象から得られた食作用を有する細胞から産生され、それによって、対象を治療する、対象を治療する方法のいくつかの実施形態では、投与することは、遺伝子操作された食作用を有する細胞を、対象に注射することを含み、任意選択で遺伝子操作された食作用を有する細胞は、対象のリンパ節、臓器、及び／又は罹患部位（例えば、腫瘍及び／又は感染部位）に注射される。

本明細書に記載されるいくつかの実施形態では、発現ベクター、活性化、特に変異遺伝子、遺伝子操作された細胞は、がんを治療するためのシステムの一部として提供され得る。システムは、標的疾患状態を考慮して選択される遺伝子、発現ベクター、遺伝子操作された細胞の任意の組み合わせを実験設計に応じて有効量で含むことができる。

本明細書に記載されるシステムは、部品のキットの形態で提供され得る。本明細書に記載される方法のうちのいずれか１つを実施するための部品のキットにおいて、発現ベクター、Ｒａｃ遺伝子、遺伝子操作された細胞、及び医薬組成物は、関連する検出のための追加の標識、並びに当業者によって特定可能な追加の構成要素の存在下で、キットに単独で含めることができる。

部品のキットにおいて、発現ベクター、Ｒａｃ遺伝子、遺伝子操作された細胞、医薬組成物、及び当業者によって特定可能な追加の試薬は、場合により独立して、好適なビヒクル担体又は補助剤とともに組成物に含まれる。

追加の構成要素は、標識、参照標準、及び本開示を読んだ上で当業者によって特定可能な追加の構成要素を含むことができる。

本明細書で使用される「標識」及び「標識化された分子」という用語は、放射性同位体、フルオロフォア、化学発光色素、発色団、酵素、酵素基質、酵素補因子、酵素阻害剤、色素、金属イオン、ナノ粒子、金属ゾル、リガンド（例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジン、又はハプテン）などを含むがこれらに限定されない、検出可能な分子を指す。「フルオロフォア」という用語は、検出可能なイメージで蛍光を呈することができる物質又はその一部を指す。結果として、本明細書で使用される「標識シグナル」という文言は、放射能、蛍光、化学発光、酵素反応の結果における化合物の生成などを含むがこれらに限定されない、標識の検出を可能にする、標識から放出されるシグナルを示す。

本明細書に記載される実施形態では、キットの構成要素は、本明細書に開示される方法を実行するために、好適な説明書及び他の必要な試薬とともに提供され得る。キットは、通常、別々の容器に組成物を含有する。紙面、若しくは電子支持体、例えば、テープ、ＣＤ－ＲＯＭ、フラッシュドライブ上、又はアッセイを実施するための説明書のｐｄｆコピーを含むユニフォームリソースロケータ（ＵＲＬ）による説明書は、通常、キットに含まれる。キットはまた、使用される特定の方法に応じて、他の包装された試薬及び材料（すなわち、洗浄緩衝液など）を含有することができる。

本明細書に記載される、活性化された食細胞、ベクター、組成物、並びに関連する方法及びシステムは、基礎生物学的研究を含む医学及び／又は研究において、当業者によって理解されるように、単独、及び／又は追加の薬剤と組み合わせて様々な用途で使用することができる。飢餓中のショウジョウバエ卵巣における発達上のプログラムされた細胞死への機械的な洞察を提供するいくつかのｅｍでは、卵形成の中間段階でのチェックポイント及び卵形成の後期段階の間のナース細胞の濾胞細胞媒介性の呑み込みを誘導した（（ＳｅｒｉｚｉｅｒａｎｄＭｃＣａｌｌ２０１７）、（Ｍｅｅｈａｎ，Ｋｌｅｉｎｓｏｒｇｅｅｔａｌ．２０１５）。

組成物の好適な担体剤又は補助剤の特定関する更なる詳細、及び概してキットの製造及び包装は、本開示を読んだ上で当業者によって特定可能であり得る。

本開示の活性化された食細胞、並びに本明細書に記載される関連するベクター、組成物、方法、及びシステムは、以下の実施例に更に例示され、これらは、例示として提供され、限定することを意図するものではない。

特に、以下の実施例は、本開示の活性化された食細胞、並びに本明細書に記載される関連するベクター、組成物、方法、及びシステムを提供及び使用するための例示的な方法及びプロトコルを例示する。当業者であれば、本開示の実施形態に従って、本開示の追加の活性化された食細胞、並びに本明細書に記載される関連するベクター、組成物、方法、及びシステムに対する、本セクションで詳細に記載される特徴を適合させるための適用可能性及び必要な修正を理解するであろう。

別段の指示がない限り、以下の材料及び方法を使用した。

ショウジョウバエ株及び遺伝子研究で使用されたハエ株は、ｓｌｂｏ－４ＸＰＨＥＧＦＰ（ＩＩＩ）、ＵＭＡＴ－Ｌｙｎ－ｔｄＴｏｍａｔｏ（ＩＩＩ）、ｕｂｉ－ＨｉｓＲＦＰ（ＷｅｉｍｉａｏＹｕ、（Ｃｌｉｆｆｅ、Ｄｏｕｐｅｅｔａｌ．２０１７）から得られた）、ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４（Ｒｏｒｔｈ，Ｓｚａｂｏｅｔａｌ．１９９８）、ｈｓＦｌｐ、Ａｙ－Ｇａｌ４、ＵＡＳ－ＧＦＰ（Ｍｉｓｈｒａ，Ｍｏｎｄｏｅｔａｌ．２０１９）、ＵＡＳ－Ｌｉｆｅａｃｔ－ＧＦＰ（Ｃａｉ，Ｃｈｅｎｅｔａｌ．２０１４）、及びＰＧ１５０－Ｇａｌ４、ＵＡＳ－ＧＦＰ、Ｇａｌ８０ｔｓ（ＣｅｌｅｓｔｅＢｅｒｇ）であった。以下のストックは、ＢｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎＤｒｏｓｏｐｈｉｌａＳｔｏｃｋＣｅｎｔｅｒ（ＢＤＳＣ）Ｂｌｏｏｍｉｎｇｔｏｎから入手した：ＩＮＵＡＳ－ＰＬＣｄ１－ＰＨ－ＧＦＰ（３９６９３）、ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｖ１２（６２９１）、ＵＡＳ－Ｒａｃ１Ｎ１７（６２９２）、ＵＡＳ－Ｒｈｏ１Ｖ１４（７３３０、８１４４）、ｄｒａｐｅｒ（６７０３３）。ＵＡＳ－ｌａｃＺを不活性対照として使用した。全ての実験交配を２５℃で行い、１日齢の子孫を２５℃で１６～２０時間、乾燥／湿潤酵母を食べさせた後、固定及びライブイメージングのために解剖した。Ｒａｃ１Ｖ１２クローンを生成するために、ハエに、３７℃の水浴中で、１日２回、１時間の熱ショックを約４時間の間隔で与えた。次いで、ハエを、解剖の前に、２５℃で一晩保った（乾燥／湿潤酵母上で）。

免疫染色：免疫染色を、Ｍｉｓｈｒａｅｔａｌ．，２０１９に記載されるように行った。試験で使用した抗体は、ウサギ抗ＧＦＰ（Ｇ１０３６２、ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ、１：１０００）、Ｅ－ｃａｄ（ＤＣＡＤ２、ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｉｅｓＨｙｂｒｉｄｏｍａＢａｎｋ、１：５）、Ｆａｓ３（７Ｇ１０、ＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔａｌＳｔｕｄｉｅｓＨｙｂｒｉｄｏｍａＢａｎｋ、１：１０）、Ｄｃｐ－１（９５７８Ｓ、ＣｅｌｌＳｉｇｎａｌｌｉｎｇ、１：５０）、及び活性カスパーゼ３（Ｐｒｏｍｅｇａ、１：２００）であった。ＡｌｅｘａＦｌｕｏｒ４８８及び５６８共役二次抗体（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ）を１：４００希釈で使用し、Ｆ－アクチンを、ファロイジン－Ａｔｔｏ６４７Ｎ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）を使用して標識化した。卵室のＬｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ染色を、Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．，２０１６に記載されるように行った。

培養卵室のライブイメージングライブでの卵室の解剖及び取り付けを、以前に記載したように行った（ＰｒａｓａｄａｎｄＭｏｎｔｅｌｌ２００７）。低速度撮影イメージングを、４０倍／１．１の数値開口（ＮＡ）液浸対物レンズを使用して、Ｚｅｉｓｓ７８０レーザースキャン共焦点顕微鏡で行った。卵室全体に及ぶ１μｍの厚さのＺ切片を、ラムダモードで、５分間隔で収集した。ＧＦＰ、ｔｄＴｏｍａｔｏ、及びＲＦＰシグナルを、ＺｅｉｓｓＺｅｎソフトウェアにおける直線的な混合解除アプローチを使用して混合解除した。動物細胞培養ＲＡＣ２（ＲＡＣ２）（ＮＭ＿００２８７２）ヒトタグなしクローン（ＯＲＩＧＥＮＥ）及びＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］（Ｈｓｕｅｔａｌ．，２０１９）を、Ｎｈｅ及びＡｇｅ部位を使用してｐＣＷ５７ベクター内でクローニングした。これらの構築物のレンチウイルストランスフェクションを、ＨＬ６０細胞で実施した。マクロファージ分化のために、ＨＬ６０細胞を、５×１０５個の細胞／ｍＬの密度で、カバースリップコーティング６ウェルプレート中のＲＰＭＩ１６４０に加えてＬ－グルタミン及び１０％熱不活化ウシ胎児血清（ＦＢＳ）培地に播種し、ドキシサイクリン及び３２ｎＭの１２－Ｏ－テトラデカノイルホルボール－１３－アセテート（ＴＰＡ）で４８時間処理した。等密度のＪｕｒｋａｔＴ細胞をＣｅｌｌＴｒａｃｋｅｒＲｅｄ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で標識化し、食作用アッセイのために、分化したマクロファージと２４時間共培養した。

統計分析及び図の準備全ての統計分析（対応のないｔ検定及び一元配置分散分析［ＡＮＯＶＡ］）及びグラフの準備をＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍソフトウェアで実施した。図及びイラストをＡｄｏｂｅＰｈｏｔｏｓｈｏｐで作成した。

実施例１：ＲｈｏファミリーＧＴＰアーゼ：アクチン細胞骨格ネットワークの調節因子
Ｒａｃは、移動細胞の前縁におけるアクチン重合及び突起を刺激する役割で最もよく知られているＲｈｏファミリーＧＴＰアーゼである（Ｒｉｄｌｅｙ，Ｐａｔｅｒｓｏｎｅｔａｌ．１９９２）、（ＭｕｒｐｈｙａｎｄＭｏｎｔｅｌｌ１９９６）、（Ｒｉｄｌｅｙ２０１５））。Ｒａｃは、マクロピノサイトーシス（Ｒｉｄｌｅｙ，Ｐａｔｅｒｓｏｎｅｔａｌ．１９９２））及び食作用（Ｍａｓｓｏｌ，Ｍｏｎｔｃｏｕｒｒｉｅｒｅｔａｌ．１９９８）も刺激する。ヒトにおける３つの高度に関連するＲａｃ遺伝子のうち、Ｒａｃ１は、比較的普遍的に発現されるが、Ｒａｃ２は、造血起源の細胞で主に発現される。Ｒａｃ２における顕性陰性Ｄ５７Ｎ変異を有する乳児は、超酸化物の欠陥産生を含む重度の食細胞欠損を呈する。ヌル対立遺伝子に対してホモ接合性の患者は、リンパ球減少症及び可変免疫不全を呈する。Ｒａｃ２＋／－又はＲａｃ２－／－マウスからの好中球は、化学運動及びＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性の障害を呈する。これらの知見は、Ｒａｃ２が、食細胞の化学運動及び超酸化物産生、並びにリンパ球の発達及び／又は生存に必要であることを示す。

ＲｈｏファミリーＧＴＰアーゼがアクチン細胞骨格ネットワークの調節因子としてどのように作用するかの概略図を図１Ａに示し、異常なＧＴＰアーゼ高活性化後の形態の画像を図１Ｂ～１Ｄに示し、図１Ｂは、刺激されていない３Ｔ３線維芽細胞を示し、図１Ｃは、Ｒａｃ活性化時に観察されたアクチンフリルを示し、図１Ｄは、Ｃｄｃ４２活性化後に観察された糸状仮足を示し、図１Ｅは、Ｒｈｏ活性化後に観察されたアクチンストレスファイバーを示す。

実施例２：Ｒａｃタンパク質は、様々な分類学的ランクの個体間で保存される。
Ｒａｃタンパク質は、ＧＴＰ及び下流エフェクターの結合を通じて細胞内に提供される主要な機能を考慮して、配列及び構造において高度に保存される。

図１Ｆは、例示的なＲＡＣ１（３ＴＨ５）の３Ｄ構造を示し、Ｍｇ^２＋と協調して、Ｒａｃ１の活性化サイクルに重要であるＲａｃ１の残基Ｄ５７（Ａｃｕｎｅｒｅｔａｌ．２０２１）、Ｒａｃ１及びＲａｃ２の両方に対する顕性陰性変異として作用することが知られているＲａｃＤ５７Ｎ（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０２０）、並びにリジン（Ｋ）との置き換えが顕性活性化変異をもたらすＥ６２残基（Ｈｓｕｅｔａｌ．２０１９）を示す。

図１Ｇ及び図１Ｈに示される例示的な配列アラインメントによって示されるように、３Ｄ構造は、Ｒａｃ１Ｒａｃ２、及びＲｃ３タンパク質間で高度に保存される。

特に図１Ｇは、ヒトＲＡＣ１、２、３タンパク質の多重配列アラインメントを示し、配列保存、及び異なるモチーフ／領域、特に、増強されたｒａｃ特性を有するＲａｃタンパク質をもたらすことが知られているか、又は予想される残基を包含する領域である、ヌクレオチド結合領域、エフェクター結合領域、及び脂質結合領域を示す（以下の実施例３及び実施例４を参照されたい）。

図１Ｈは、スイッチＩ及びスイッチＩＩ領域を示すヒトＲＡＣ１、２、３及びＣＤＣ４２タンパク質の多重配列アラインメントを報告する。

Ｒａｃタンパク質の配列及び構造は、ヌクレオチド結合領域、エフェクター領域、及び脂質結合領域の保存された残基を示す図１Ｉ及び図１Ｊによって例示されるように、異なる分類学的レベルの異なる個体間で更に保存される。

図１Ｉ及び図１Ｊは、ヌクレオチド結合領域（黒色のハイライト）、エフェクター領域（灰色のハイライト）、及び脂質結合領域（枠内の薄灰色のハイライト）を更に示す、例示的な個体（ショウジョウバエ、ヒト、ウシ、マウス、及びシノラブディスエレガンス）のＲａｃ１タンパク質（図１Ｉ）とＲａｃ２タンパク質（図１Ｊ）との間の例示的な配列アラインメントを示す。

ＲＡＣ１、ＲＡＣ２、及び／又はＲＡＣ３遺伝子配列及び遺伝子産物の配列、スプライスバリアント、及び構造が当技術分野で記載されている。例えば、ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ｃａｒｄｄｉｓｐ．ｐｌ？ｇｅｎｅ＝ＲＡＣｌ、ｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ｃａｒｄｄｉｓｐ．ｐｌ？ｇｅｎｅ＝ＲＡＣ２、及びｇｅｎｅｃａｒｄｓ．ｏｒｇ／ｃｇｉ－ｂｉｎ／ｃａｒｄｄｉｓｐ．ｐｌ？ｇｅｎｅ＝ＲＡＣ３におけるワールド・ワイド・ウェブで利用可能なＧｅｎｅＣａｒｄｓ．ｃｏｍウェブサイト（参照によりその全体が組み込まれる米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号から）（Ｍａｎｏ）を参照されたい。

図１Ｉ及び図１Ｊの例示的な例示からわかるように、ＲＡＣ１及びＲＡＣ２は、残基レベル及び構造ドメインで種にわたって高度に保存され、当業者に理解されるように、ＲＡＣ３も同じである。したがって、Ｄ１１、Ｇ１２、Ｆ２８、Ｐ２９、Ｇ３０、Ｐ３４、Ｅ６２、Ｎ９２、Ｃ１５７、以下の実施例３及び実施例４を参照されたい）における変異などの機能獲得変異は、同様の方法で挙動することが予想される。

このような類似性は、図１Ｋの概略図によって例示され、これは、スイッチＩ、スイッチＩＩ、及びＣ末端領域、並びにＰ３４Ｈ置換の位置（上部パネル）、並びにＰ３４Ｈの位置及び得られた保存配列を示すスイッチＩ領域の様々な個体における配列アラインメントを示すＲａｃ２の概略図を示す。

実施例３：Ｒａｃタンパク質領域におけるＲａｃ遺伝子変異の効果
Ｒａｃタンパク質は、保存された構造を有し、異なるＲＡＣ構造領域とＲａｃタンパク質の機能性との間の相関が知られている。

そのような領域の１つは、スイッチＩ領域（典型的には、Ｒａｃ配列の残基２６から残基４５へ）であり、ヌクレオチドのグアニン環とアミノ酸残基との間の相互作用における検出された喪失を考慮すると、Ｆ２８、Ｐ２９、Ｇ３０、Ｐ３４などの残基における変異は、内因性ＲＡＣと比較して、ＧＴＰ会合の増加（約１．５倍以上）及びＧＴＰアーゼ活性の低下（５０％以下）をもたらし得る（実施例４の説明を参照されたい）。Ｐ２９、Ｇ３０の二重変異体などの、ＧＴＰアーゼ活性も（５０％以下）低下させることができる、スイッチＩ領域の残基の複数の変異が認識されている（実施例４の説明を参照されたい）。

内因性ＲＡＣと比較した、検出されたＧＴＰ会合の増加（約１．５倍以上）、及び／又はＧＴＰアーゼ活性の低下（５０％以下）、並びにその中の残基の変異に起因する、下流エフェクターＰＡＫ１への結合及びＡＫＴのリン酸化の増加（約１．５倍）（例えば、ＲａｃのＧＴＰへの結合に関与することが知られているＥ６２を参照されたい）を考慮して、類似の考慮事項がスイッチＩＩ領域（典型的には、Ｒａｃ配列の残基５９から残基７４まで）に適用される。

変異が、増強されたｒａｃ特性を有するＲａｃタンパク質をもたらすことが知られているか、又は予想される残基を包含する追加の領域は、ＰＭ（リン酸マグネシウム）結合領域である。特に、Ｒａｃタンパク質は、第１のＰＭ領域（典型的には、残基１０から残基１７）、第２のＰＭ領域（典型的には、残基２９から残基３５）、及び第３のＰＭ領域（典型的には、残基５６から残基６０）を含む。変異は、スイッチＩ領域と重複するＰＭ領域であり、内因性ＲＡＣ、例えば、Ｄ１１と比較して、ＧＴＰアーゼ活性の低下（５０％以下）をもたらすことが認識されている。

第３のＰＭ領域は、残基間（ａａ５６～６０）に存在し、Ｒａｃｌ及びＨ－ｒａｓにおいて同一であるが、最初の２つのＰＭ領域においていくつかの違いが存在する（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎｎ．ｄ．）。

増強されたＲａｃ特性をもたらすＲａｃ構造及び変異に関する知られているデータを考慮して、変異がＲａｃ活性化をもたらすことが知られているか、又は予想される残基を包含すると認識されている領域は、ヌクレオチド結合領域、エフェクター領域、及び脂質結合領域である（実施例２、図１Ｇ、図１Ｉ、図１Ｊを参照されたい）。

特に、Ｒａｃ２のヌクレオチド結合領域における変異は、ＲＡＣ２がＧＴＰ結合活性形態でロックされる顕性活性化表現型をもたらすことができる。例えば、Ｎ末端ＧＴＰ結合領域でのミスセンス変異ＲＡＣ２Ｇ１２Ｒは、ＲＡＣ２Ｅ６２Ｋと同様の方法でＧＴＰ加水分解を妨害する。ヘテロ接合性ＲＡＣ２Ｇ１２Ｒ変異を有する患者はまた、ＲＡＣ２Ｅ６２Ｋなどの類似の表現型を示し、それらは、Ｔ及びＢリンパ球及び血液中の循環単球を欠き、重症複合免疫不全^４の形態をもたらす（Ｌａｇｒｅｓｌｅ－Ｐｅｙｒｏｕ，Ｏｌｉｃｈｏｎｅｔａｌ．２０２１）。

活性化Ｒａｃタンパク質をもたらすヌクレオチド結合領域の変異の例には、ＲａｃとＧＴＰとの間の結合を強化し、延長する現在の変異の距離など、３．２Å以下、特に、２．５又は２．７Åの結合後の残基と標的部分との間の距離をもたらす残基の置換が含まれる。

ヌクレオチド結合領域、エフェクター領域、及び脂質結合領域に収まる変異は、Ｄ１１（ＰＭ領域）、Ｇ１２、Ｆ２８、Ｐ２９、Ｇ３０、Ｐ３４（スイッチＩ領域）、Ｅ６２（スイッチＩＩ領域）、Ｎ９２、Ｃ１５７を含み、これらは全て、Ｒａｃタンパク質に対する活性化変異について報告されている（以下の実施例４も参照されたい）。

実施例４：例示的な活性化Ｒａｃ変異
様々な例示的な変異が、Ｒａｃタンパク質のヌクレオチド結合領域、エフェクター領域、及び脂質結合領域において認識されている。

例えば、ＲＡＣ１では、スイッチＩ領域における変異Ｐ２９Ｓは、ＧＤＰ解離の増加、ＧＴＰ結合に対するより高い親和性、ＧＴＰアーゼ活性の低下をもたらすことが示されている（参照によりその全体が組み込まれる、（Ｋａｗａｚｕｅｔａｌ．２０１３）（Ｋａｗａｚｕ，Ｕｅｎｏｅｔａｌ．２０１３）、及び米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号（Ｍａｎｏ）を参照されたい）。

特に、ＲＡＣ１変異Ｐ２９Ｓに関しては、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）結晶構造において、ＧＭＰ－ＰＮＰ（ＧＴＰ類似体）のリボースヒドロキシル基と、Ｓｅｒ２９及びＧｌｙ３０の両方の骨格カルボニルとの間に直接的な水素結合が存在することに留意されたい。この結合は、リボースヒドロキシル基とスイッチＩ残基との間に水媒介性水素結合が形成される、ＲｈｏファミリーＧＴＰアーゼで典型的に観察されるパターンとは対照的である。代わりに、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）に見られる結合は、活性化ＨＲＡＳの結晶構造において観察される水素結合パターンに密接に整列し、ここでは、リボースヒドロキシルの、骨格との直接的な相互作用が一般的に存在する。ｐ．Ｐｒｏ２９Ｓｅｒ変化は、２９位のプロリン残基に固有の立体構造拘束を放出するように思われ、したがって、スイッチＩループ内のＧＴＰ結合のためのＲＡＳ様の変化した立体構造、及びエフェクター活性の増加を可能にする。（Ｋｒａｕｔｈａｍｍｅｒｅｔａｌ．２０１２）（Ｋｒａｕｔｈａｍｍｅｒ，Ｋｏｎｇｅｔａｌ．２０１２）。

Ｒａｃを活性化することが認識された追加の変異は、高速リサイクル変異であるＲＡＣ１変異Ｆ２８Ｌである。特に、ＲＡＣ１のＦ２８Ｌ変異は、コドン２８とヌクレオシドとの間の相互作用の喪失をもたらし、ＲＡＣ１（Ｆ２８Ｌ）について、高速サイクルは、ヌクレオチドに対する低減された親和性から生じることを示唆する。（Ｋｕｍａｒ，Ｒａｊｅｎｄｒａｎｅｔａｌ．２０１３）。

全体的なアーキテクチャは非常に類似しているが、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）及びＲＡＣ１（Ｆ２８Ｌ）のスイッチＩループの立体構造は、互いに異なっており、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）は、Ｒａｓ様のスイッチＩ立体構造を示し、ＲＡＣ１Ｆ２８Ｌは、増加した柔軟性を示す。ＲＡＣ１Ｆ２８Ｌについては、これは、場合により、フェニルアラニンベンジル基の喪失、及び結果としてのヌクレオチドとの安定化相互作用の低減に起因する。（Ｋｕｍａｒ，Ｒａｊｅｎｄｒａｎｅｔａｌ．２０１３）。

特に、ＲＡＣ１（Ｆ２８Ｌ）及びＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）は、異なるメカニズムによって自己活性化され、ＲＡＣ１（Ｆ２８）Ｌ自己活性化は、グアニン環とＦ２８との間の相互作用の喪失によって駆動され、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）は、場合により、別のメカニズム、おそらく、ＧＤＰで負荷をかけられた不活性状態の不安定化によって駆動される（Ｋｕｍａｒ，Ｒａｇｅｎｄｒａｎｅｔａｌ．２０１３）。

追加のＲａｃＩ変異は、結合したＧＴＰのグアニン環に隣接する残基である位置Ｃ１５７において提供され得る。特に、変異ＲＡＣ１（Ｃ１５７Ｙ）は、ＧＴＰのための会合及び解離の両方が加速されるＲａｃ１タンパク質をもたらす。したがって、Ｃ１５７Ｙの形質転換能は、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）又はＲＡＣ１（Ｎ９２Ｉ）のそれと比較してより含有される（参照によりその全体が組み込まれる、（Ｋａｗａｚｕｅｔａｌ．２０１３）（Ｋａｗａｚｕ，Ｕｅｎｏｅｔａｌ．２０１３）、及び米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号を参照されたい）（Ｍａｎｏ））。

追加のＲＡＣ１変異は、ＧＤＰ／ＧＴＰの結合ポケットから離れて位置し、ＲＡＣ１を構成的に活性化させる残基であるＮ９２位において提供され得る（参照によりその全体が組み込まれる、（Ｋａｗａｚｕｅｔａｌ．２０１３）（Ｋａｗａｚｕ，Ｕｅｎｏｅｔａｌ．２０１３）、及び米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号（Ｍａｎｏ）を参照されたい）。

特に、肉腫細胞株であるＨＴ１０８０におけるＲＡＣｌのアミノ酸置換（Ｎ９２Ｉ）は、ＲＡＣ１を構成的に活性化し、高度に発がん性とする。ＨＴ１０８０は、ＮＲＡＳ（Ｑ６１Ｋ）腫瘍タンパク質も担持するが、ＲＡＣ１（Ｎ９２Ｉ）は、ＮＲＡＳ（Ｑ６１Ｋ）のｓｉＲＮＡ媒介性ノックダウンではなく、ＲＡＣｌ（Ｎ９２Ｉ）のｓｉＲＮＡ媒介性ノックダウンが、明らかに制帽成長を抑制したため、この細胞株における必須の成長ドライバーである。がん細胞株間のＲＡＣ１／ＲＡＣ２／ＲＡＣ３変異の更なるスクリーニング、並びに公開データベースによって、ＲＡＣ１（Ｎ９２Ｉ）及びＲＡＣ２（Ｐ２９Ｑ）などの、ＲＡＣ！及びＲＡＣ２に関する新たな形質転換変異を認識した。（当業者によって理解されるように、参照によりその全体が組み込まれる米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号（Ｍａｎｏ）を参照されたい）。

加えて、スイッチＩ領域におけるＲＡＣ２（Ｐ２９Ｌ）及びＲＡＣ２（Ｐ２９Ｑ）の変異は、活性化及び形質転換であり、かつ増強されたＲａｃタンパク質を有するＲａｃタンパク質をもたらすことも示されている（参照によりその全体が組み込まれる、（Ｋａｗａｚｕｅｔａｌ．２０１３）（Ｋａｗａｚｕ，Ｕｅｎｏｅｔａｌ．２０１３）、及び米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号（Ｍａｎｏ）を参照されたい）。

また、参照によりその全体が組み込まれる、（Ｋａｗａｚｕｅｔａｌ．２０１３）（Ｋａｗａｚｕ，Ｕｅｎｏｅｔａｌ．２０１３）の表Ｓ３に示される変異を参照する。

上記を考慮すると、Ｒａｃタンパク質の１つ以上のアミノ酸置換は、当業者によって理解されるように、ＲＡＣ１（Ｎ９２Ｉ）、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）、ＲＡＣ１（Ｃ１５７Ｙ）、ＲＡＣ１（Ｐ１７９Ｌ）、ＲＡＣ２（Ｉ１２１Ｍ）、ＲＡＣ２（Ｐ２９Ｑ）、ＲＡＣ２（Ｄ４７Ｙ）、及びＲＡＣ２（Ｐ１０６Ｈ）で検出される、増強されたＲａｃ特性に基づいて、Ｎ９２Ｉ、Ｃ１５７Ｙ、Ｐ１７９ＬＩ１２１Ｍ、Ｐ２９Ｑ、Ｐ２９Ｓ、Ｄ４７Ｙ、Ｐ１０６Ｈから選択することができる（参照によりその全体が組み込まれる米国特許第２０１５／０１８５２２３Ａ１号（Ｍａｎｏ）を参照されたい）。

Ｒａｃ活性化であることが認識される追加の変異は、ＲａｃＰＭ領域に位置する。Ｒａｃｌは、最初の２つのＰＭ領域の各々にＨ－ｒａｓからの３つの異なるアミノ酸を有するが、第３のＰＭ領域は、Ｈ－ｒａｓ（ＰＭ－リン酸マグネシウム結合領域）のそれと同一である（（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｌを参照されたい）。第１のＰＭ領域（ａａ１０～１７）におけるアミノ酸の、Ｈ－ｒａｓで見られる対応するアミノ酸への変異は、それらのうちの１つであるＡｓｐｌ１の修飾が、ｒａｃｌ中のＧＴＰアーゼを５０％減少させたが、Ｇｌｙｌ３及びＳｅｒｌ７は効果を有しなかったことを示した。第２のＰＭ領域（ａａ２９～３５）において、Ｐｒｏ２９－Ｇｌｙ３０ペアの修飾はまた、ｒａｃｌにおいてＧＴＰアーゼ活性を５０％低下させた。１１位及び２９位、並びに３０位（Ｐ１－Ｐ２変異体）で変異したｒａｃｌは、天然のｒａｃｌと比較して、３～４倍のＧＴＰアーゼ活性の低下（３７℃、１分当たりの、ＧＴＰ加水分解／ＧＴＰ７Ｓ結合タンパク質のｎｍｏｌ、１９０対５５２ｐｍｏｌ）を有し、両方のドメイン間の協力的（ただし非付加的）相互作用を示唆した。（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎｎ．ｄ．）（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ１９９３）。（（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｍを参照されたい）。

特に、ＰＭ１領域（Ｄ１１Ａ、Ｔ１７Ｓ、及びループ１）において３つの変異体、ＰＭ２領域［ＰＧ（２９、３０）ＶＤ］において１つの変異体、両方の領域（すなわち、１１位及び２９～３０位、Ｐ１－Ｐ２変異体）において「二重」変異体を作製した。Ｄ１１Ａ、ＰＧ（２９、３０）ＶＤ、及びＰ１－Ｐ２変異体は、ＧＴＰアーゼ加水分解の著しい低減を有したため、最も強力な活性化変異である（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎｎ．ｄ．）（（ＭｅｎａｒｄａｎｄＳｎｙｄｅｒｍａｎ，１９９３）からの図１Ｍを参照されたい）。

活性化することが示されている更なるＲａｃ変異は、ＲＡＣ２Ｐ３４Ｈであり（図１Ｋ）、スイッチＩ領域では、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］（（Ｌｏｕｇａｒｉｓ，Ｃｈｏｕｅｔａｌ．２０１９）（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．２０１９）のような免疫不全ＲＡＣ２（Ｐ３４Ｈ）のモデリングは、グアノシン三リン酸とＰ３４Ｈとの間の潜在的な相互作用を示唆し、これは、活性ＲＡＣ２のエフェクタータンパク質への結合を安定化させるであろう。ＲＡＣ２Ｐ３４Ｈは、ＷＴＲＡＣ２と比較して、エフェクタータンパク質ＰＡＫへの結合が増加しており、これは、内因性グアノシン二リン酸で負荷をかけることによって逆転した。したがって、ＲＡＣ２Ｐ３４Ｈは、機能獲得効果を有する。（Ｌｏｕｇａｒｉｓｅｔａｌ．，２０１９（Ｌｏｕｇａｒｉｓ，Ｃｈｏｕｅｔａｌ．２０１９）。

いくつかの実施形態では、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１２ＶなどのＲＡＣ２における活性化変異は、ＧＴＰ結合活性形態に留まるようにＲＡＣ２の親和性を増加させ、ＲＡＣ２媒介性シグナル伝達を増強することができる。例えば、ＲＡＣ２のスイッチＩＩドメイン内にあるグルタミン酸６２（Ｅ６２）は、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］でリジン（Ｋ）に変換される（図１Ｆ、１Ｇ、（Ｈｓｕ，Ｄｏｎｋｏｅｔａｌ．２０１９）。追加の例として、ＲＡＣ２Ｅ６２Ｋは、増加された下流エフェクターＰＡＫ１への結合及びＡＫＴのリン酸化（約１．５倍）などの定量化可能なパラメータの変化を示し、ＲＡＣ２の野生型発現（ＲＡＣ２［ＷＴ］）と比較して、高いレベルのＦ－アクチン含有量を維持する。結果として生じる下流シグナル伝達は、時間の経過とともに活性酸素種（ＲＯＳ）産生の増加、及び患者の好中球でのマクロピノサイトーシスの増加をもたらす^１（Ｈｓｕ，Ｄｏｎｋｏｅｔａｌ．２０１９）。

本開示の意味における上記の例示的なＲａｃ活性化変異を考慮すると、Ｄ１１Ａ、Ｇ１２Ｖ／Ｒ、Ｆ２８Ｌ、Ｐ２９Ｓ、ＰＧ（２９，３０）ＶＤ、Ｎ９２Ｉ、Ｃ１５７Ｙ、Ｐ２９Ｌ、Ｐ２９Ｑ、Ｐ３４Ｈ、Ｇ１２Ｖ／Ｒ、Ｅ６２Ｋ、Ｎ９２Ｓ、Ｎ９２Ｔを含む。

特に、本開示の意味における上記のＲａｃ活性化変異を考慮すると、ＲＡＣ１（Ｄ１１Ａ）、ＲＡＣ１（Ｇ１２Ｖ／Ｒ）、ＲＡＣ１（Ｆ２８Ｌ）、ＲＡＣ１（Ｐ２９Ｓ）、ＲＡＣ１（ＰＧ（２９，３０）ＶＤ）、ＲＡＣ１（Ｎ９２Ｉ）、及びＲＡＣ１（Ｃ１５７Ｙ）、並びにＲＡＣ２（Ｐ２９Ｌ）、ＲＡＣ２（Ｐ２９Ｑ）、ＲＡＣ２（Ｐ３４Ｈ）、ＲＡＣ２（Ｇ１２Ｖ／Ｒ）、ＲＡＣ２（Ｅ６２Ｋ）、ＲＡＣ２（Ｎ９２Ｓ）、及びＲＡＣ２（Ｎ９２Ｔ）を含む。

実施例５：ＧＴＰへの、Ｒａｃの増加した結合の検出による、活性化されたＲａｃタンパク質の増強された特性の検出
活性化されたＲａｃ遺伝子の増強された特性は、多くの方法で（又はいくつかの場合、全ての組み合わせで）示され、定量化することができる。

以前の研究により、活性化Ｒａｃは、ＧＴＰの結合の約１．５～２倍の増加をもたらし得ることが示されている。

持続性ＧＴＰ結合活性Ｒａｃ２の定量化は、ＧＤＰ交換アッセイによって決定することができる。活性化されていないＲＡＣ２と比較して、活性化Ｒａｃ２は、ＧＥＦがアッセイで添加されると著しい定量可能なＧＤＰ解離をもたらし、ＧＡＰが導入されるとＧＴＰ加水分解を低減させるであろう。以前の研究によって、活性化Ｒａｃ２は、活性化されたＲＡＣ２により、ＧＴＰの結合及びＡＫＴ（下流エフェクター）のリン酸化の約１．５～２倍の増加をもたらし得ることが示されている^１。（Ｈｓｕ，Ｄｏｎｋｏｅｔａｌ．２０１９）。

特に、例示的な試験は、ＧＤＰ交換アッセイによって決定されるグアニンヌクレオチド交換因子（ＧＥＦ）媒介性グアニンヌクレオチド交換によって提供される。

当業者に理解されるように、ＧＥＦは、ＧＴＰへのそれらの結合を促進することによってＧＴＰアーゼを活性化するが、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）は、ＧＴＰを加水分解し、ＧＴＰアーゼを不活性化する。Ｒａｃ２などのＧＴＰアーゼは、ＧＥＦ結合によって著しく増加する、ヌクレオチド交換の遅い固有速度を有する。例えば、ＧＥＦの非存在下では、活性化されていないＲＡＣ２及びＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］は両方とも、同様のＧＤＰ交換の固有速度を示したが、ＧＥＦ（ＴＩＡＭ１）の存在下では、活性化されていないＲＡＣ２からのＧＤＰ解離速度は、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］よりも有意に大きかった。更に、活性化されていないＲＡＣ２と異なり、ＧＡＰ（ｐ５０ＲｈｏＧＡＰ）の付加は、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］のＧＴＰ加水分解を駆動することに失敗した^１。これらのデータは、活性化されていないＲＡＣ２と比較して、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］が、ＧＴＰロックされた活性形態のままであることを示し、これらのパラメータを使用して、「活性化された」Ｒａｃ２又はＲａｃ２における「活性化」変異を試験することができる。

ＧＤＰ交換アッセイを使用して、Ｒａｃ遺伝子の活性化発現レベルを決定することができる。ＧＥＦは、ＧＴＰへのそれらの結合を促進することによってＧＴＰアーゼを活性化するが、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）は、ＧＴＰを加水分解し、ＧＴＰアーゼを不活性化する。ＧＴＰアーゼは、ＧＥＦ結合によって著しく増加する、ヌクレオチド交換の遅い固有速度を有する。例えば、一般に、ＧＥＦの非存在下では、ＲＡＣ［ＷＴ］及び活性化ＲＡＣは両方とも、同様のＧＤＰ交換の固有速度を示すが、ＧＥＦの存在下では、ＲＡＣ［ＷＴ］からのＧＤＰ解離速度は、活性化ＲＡＣよりも有意に大きい。更に、活性化されていないＲＡＣと異なり、ＧＡＰの付加は、活性化ＲＡＣのＧＴＰ加水分解を駆動することに失敗する。

したがって、内因性ＲＡＣと比較した、ＧＴＰ会合の増加（細胞によって許容され、毒性／表現型異常を引き起こさない約１．５倍以上）、ＧＴＰアーゼ加水分解活性の低減（５０％以下）、又は両方の組み合わせを使用して、ＲＡＣ発現の活性化レベルが達成されるかどうかを決定することができる。

実施例６：活性化されたＲａｃ遺伝子の活性化発現レベルの検出：ＧＴＰへの、Ｒａｃの増加した結合の検出による
ＧＤＰ交換アッセイを使用して、Ｒａｃ遺伝子の活性化発現レベルを決定することができる。ＧＥＦは、ＧＴＰへのそれらの結合を促進することによってＧＴＰアーゼを活性化するが、ＧＴＰアーゼ活性化タンパク質（ＧＡＰ）は、ＧＴＰを加水分解し、ＧＴＰアーゼを不活性化する。ＧＴＰアーゼは、ＧＥＦ結合によって著しく増加する、ヌクレオチド交換の遅い固有速度を有する。例えば、一般に、ＧＥＦの非存在下では、ＲＡＣ［ＷＴ］及び活性化ＲＡＣは両方とも、同様のＧＤＰ交換の固有速度を示すが、ＧＥＦの存在下では、ＲＡＣ［ＷＴ］からのＧＤＰ解離速度は、活性化ＲＡＣよりも有意に大きい。更に、ＲＡＣ［ＷＴ］と異なり、ＧＡＰの付加は、活性化ＲＡＣのＧＴＰ加水分解を駆動することに失敗する。したがって、内因性ＲＡＣと比較した、ＧＴＰ会合の増加（細胞によって許容され、毒性／表現型異常を引き起こさない約１．５倍以上）、ＧＴＰアーゼ加水分解活性の低減（５０％以下）、又は両方の組み合わせを使用して、ＲＡＣ発現の活性化レベルが達成されるかどうかを決定することができる。

実施例７：境界細胞は、Ｒａｃ機能のインビボモデルである。
ショウジョウバエ卵巣の境界細胞は、長い間、Ｒａｃの機能を理解するためのインビボモデルとして機能してきた。

発生卵室を含有するショウジョウバエの卵巣管を示す（図２Ａ）。ショウジョウバエの卵巣における６～１０個の上皮濾胞細胞のグループは、境界細胞（ｂ）と呼ばれ、一対の非運動性極性細胞（ｐ）とともに、卵室を通って卵母細胞の前縁に集団的に遊走する（図２Ｂ、２Ｃ、２Ｄ）。

境界細胞は、卵形成の段階９の間に集団的な細胞遊走を始める、６～１０個の遊走体細胞のグループである（図２Ａ～Ｄ）。卵室は、１５個のナース細胞及び１個の卵母細胞の嚢胞を取り囲む約８５０個の体細胞濾胞細胞で構成される（図２Ａ～Ｃ）。卵室は、成長し、１４段階を経て成熟卵に発達する。

境界細胞（ｂ）及び非運動性極性細胞（ｐ）はともに、***の侵入に必要な構造である卵門を形成する。適切な遊走の欠如は、不妊症を引き起こす。一対の非運動性極性細胞（ｐ）を取り囲む境界細胞（ｂ）の高倍率画像を図２Ｄに示す。

インビボでの突起及び細胞遊走におけるＲａｃの役割は、顕性陰性Ｒａｃ（Ｒａｃ１Ｎ１７）の発現が突起及び走化性を遮断する境界細胞において初めて実証された（ＭｕｒｐｈｙａｎｄＭｏｎｔｅｌｌ１９９６）（図２Ｅ、２Ｆ、２Ｇ）。

加えて、Ｒａｃ活性の空間的及び時間的調節が不可欠である。正常な境界細胞では、Ｒａｃ活性は、突起において増強され、光活性化可能な形態のＲａｃの局所照明は、遊走クラスターを誘導するのに十分である（Ｗａｎｇ，Ｈｅｅｔａｌ．２０１０））。構成的に活性なＲａｃの、血清飢餓ＮＩＨ３Ｔ３線維芽細胞への急性発現は、細胞膜の波打ち現象及びマクロピノサイトーシスを生じさせる（Ｒｉｄｌｅｙ，Ｐａｔｅｒｓｏｎｅｔａｌ．１９９２））が、境界細胞における構成的に活性なＲａｃ（Ｒａｃ１Ｖ１２）の低レベル（正常な２５℃とは対照的な１８℃で）の発現でさえも、それらの走化性を遮断する（ＧｅｉｓｂｒｅｃｈｔａｎｄＭｏｎｔｅｌｌ２００４））（図２Ｈ～Ｊ）。

顕著なことに、構成的に活性なＲａｃの高レベルの発現（２５℃）は、発現が４～６個の外側の境界細胞に制限されている場合であっても、卵室全体の破壊（図２Ｋ、図２Ｌ）をもたらす（図２Ｍ）。境界細胞クラスターは、非遊走性の極性細胞の対である２つの細胞型で構成され、これらは、４～６個の遊走細胞を動員して、それらを取り囲み（図２Ｄ）、両方の細胞型が協力して、卵門と呼ばれる卵殻構造を形成する、卵母細胞境界にそれらを運ぶ（ＺａｒａｎｉａｎｄＭａｒｇａｒｉｆｓ１９９１）。卵門は、***の侵入部位であるため、境界細胞の遊走の失敗は、完全な雌の不妊症をもたらす（Ｍｏｎｔｅｌｌ，Ｒｏｒｔｈｅｔａｌ．１９９２）。

境界細胞の遊走は、段階１０までに完了し、卵形成の段階１１の間に、ナース細胞は、それらの細胞質の内容物の大部分を卵母細胞に移す。段階１２において、ナース細胞に接触している濾胞細胞は、貪食受容体ドレーパー、接着受容体インテグリン、及びＲａｃに依存するプロセスにおいて、ナース細胞の残骸を貪食する（（Ｔｉｍｍｏｎｓｅｔａｌ．２０１６（Ｔｉｍｍｏｎｓ，Ｍｏｎｄｒａｇｏｎｅｔａｌ．２０１６）、（Ｍｅｅｈａｎ，Ｋｌｅｉｎｓｏｒｇｅｅｔａｌ．２０１５）。濾胞細胞による生殖細胞の貪食は、ハエがタンパク質食品を奪われた段階８で、推定上、産卵から生存までの栄養素を別の目的に使うために、発生の早い段階でも生じ得る（Ｐｅｔｅｒｓｏｎｅｔａｌ．２００３（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ，Ｂａｒｋｅｔｔｅｔａｌ．２００３）。

したがって、以下の実施例２～４に報告されるように、Ｒａｃ遺伝子と貪食及び食作用との間の可能な関連性を境界細胞において試験した。

実施例８：境界細胞における構成的なＲａｃ活性化は、食作用を促進する
活性化されたＲａｃが境界細胞による生殖細胞線の異常又は早期の呑み込みを刺激しているかどうかを決定するために、発達シグナル又は栄養奪取による正常な調節を迂回する。この解釈と一致して、濾胞細胞のサブセット内でのみＲａｃＣＡが発現された卵室では、ナース細胞核は、対照卵室の大きな核と比較して、小さく、濃縮して見え、死にかけている細胞を示していた（図２Ｎ及び２Ｏを比較する）。

高倍率で、ＲａｃＣＡ発現濾胞細胞は、生殖細胞を殺傷するだけでなく、隣接体細胞を貪食することも検出され（図２Ｐ、２Ｑ、２Ｒ）、これは、６～１０個の前部の濾胞細胞で発現された対照ｓｌｂｏ－Ｇａｌ４において一度も観察されていない（図２Ｐ）。

別の一連の実験では、ＲａｃＶ１２は、ＦＬＰｏｕｔ技術（ＳｔｒｕｈｌａｎｄＢａｓｌｅｒ１９９３）を使用して、単一及び対の境界細胞で発現された。関連する結果は、これらの実験におけるＲａｃＶ１２発現もまた、貪食をもたらしたことを示し（図２Ｓ、Ｔ）、したがって、ＲａｃＶ１２を発現する単一の細胞でさえも、食作用をもたらすであろうとしても、その結論を支持する。

極性細胞（ｐ）は破線で、境界細胞（ｂ）は実線で示されている。対照（図２Ｓ）では、極性細胞及び境界細胞の境界が分離されているが、Ｒａｃ１Ｖ１２発現では。極性細胞は、Ｒａｃ１Ｖ１２を発現する境界細胞によって取り囲まれ、貪食されている。境界細胞及び極性細胞内のクローンは、ＧＦＰで示されている。

これらの結果を総合すると、Ｒａｃの局所活性化及び一過性活性化が走行性を促進する一方で、Ｒａｃの構成的な活性化が運動を損ない、高レベルの構成的なＲａｃ活性化は、隣接細胞の食作用、生細胞の食作用でさえも促進するのに十分であることが実証される。これらの観察はまた、インビボにおいて、活性Ｒａｃは、ＲａｃＶ１２発現細胞の挙動を自律的に変化させることができるが、異常な細胞－細胞相互作用に起因する組織スケール表現型をもたらし得ることを示唆する。

実施例９：Ｒａｃで活性化された細胞は、細胞殺傷及び貪食が可能である。
ＲａｃＶ１２発現細胞によって攻撃された細胞が結果的に死んだかどうかを決定するために、アポトーシス細胞死のマーカーである活性実行型カスパーゼ（ｃ－Ｄｃｐ１）発現に関して、卵室を、ＲａｃＶ１２を発現する濾胞細胞のクローンで試験した。

カスパーゼ染色が希少であったクローンにおいてＧＦＰを発現する対照卵室と比較して（図３Ａ）、ｃ－Ｄｃｐ１－陽性細胞は、ＧＦＰ＋クローンＲａｃＶ１２発現細胞の隣に頻繁に見られた（ＧＦＰ＋クローン細胞は、破線によって示され、ｃ－Ｄｃｐ１染色は、白い矢印によって示される）（図３Ｂ～Ｄ）。

段階１０及び１１の卵室は、ＧＦＰ（白色）によって示される境界細胞又は濾胞細胞におけるｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ染色を示さない。段階１２のナース細胞は、周囲の濾胞細胞の貪食によって誘導されるリソソーム依存性プロセスによって死ぬため、リソソーム染色は、段階１２から始まり、ｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ色素によってナース細胞を取り囲んで観察される（図３Ｅ～Ｇ）。

ｓｌｂｏＧａｌ４；ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２を発現する段階９卵室内のナース細胞もまた、強烈なｌｙｓｏｔｒａｃｋｅｒ染色を示し（図３Ｈ）、それらが早期に殺傷されたことを示唆した。

少ないＲａｃＶ１２発現細胞が、どのようにして１５個の巨大な多倍体ナース細胞及び１個の卵母細胞で構成される生殖細胞株全体を殺傷することができるかを調べるために、対照（図３Ｉ～Ｌ）及びｓｌｂｏＧａｌ４；ＵＡＳ－ＲａｃＶ１２卵室（図３Ｍ～Ｐ）のライブイメージングを行った。

対照では、ナース細胞核は、１５分間のイメージング期間を通して、Ｈｏｅｃｈｓｔ染料で大きく、比較的に均一に染色されたように、正常に見えた（図３Ｉ～Ｌ）。ＲａｃＶ１２発現卵室は、ｓｌｂｏＧａｌ４が発現を開始したときには比較的正常に見えたが（図３Ｍ）、ナース細胞は、ＤＮＡの異常な分布（核凝縮）及び細胞質自己蛍光の蓄積を含む細胞死の兆候を急速かつ同期的に示した（図３Ｎ～Ｐ）。

実施例１０：Ｒａｃで活性化された細胞は、ドレーパー依存性食作用を行うことが可能である
濾胞細胞によって誘導されるナース細胞の正常な死は、ファゴトーシス（摂食による死）と呼ばれる。段階１２のナース細胞の分子認識は、濾胞細胞によって発現される貪食受容体ドレーパーの活性化によって生じる。境界細胞におけるＲａｃＶ１２発現によって引き起こされる組織破壊も、ファゴトーシス様機構に起因する場合、それも、ドレーパー依存性であり得る。この仮説を試験するために、ｓｌｂｏＧａｌ４を使用して、ドレーパーホモ接合変異体におけるＵＡＳ－ＲａｃＶ１２を駆動した。

ドレーパーの変異は、卵室破壊を著しく抑制した（図４Ａ～Ｇ）。卵室全体の形態及びナース細胞の核形態が救助された一方で、他の欠陥が明らかになった。ｄｒｐｒ－／－変異体において、ＲａｃＶ１２発現は、依然として境界細胞遊走欠損を引き起こした（図４Ｄ、Ｅ、Ｆ）。境界細胞は、図４Ａ～Ｅにおいて白い矢印によって標識化され、Ｒａｃ１Ｖ１２発現卵室における正常な遊走を示す求心細胞（別の種類の濾胞細胞）は、図４Ｆにおいて白い矢印によって強調される。加えて、生殖細胞株は、多くの卵室において健全なままであったが、活性Ｒａｃを発現する境界細胞は、ナース細胞の代わりに極性細胞を貪食した（図４Ｉ～Ｋ）。破線によって示される極性細胞（ｐ）は、境界細胞（ｂ）によって貪食される（白色の矢印）。

伸長濾胞細胞の小さなサブセットにおいて早期に、かつナース細胞関連濾胞細胞において段階９に発現する、異なるＧａｌ４株を使用したＲａｃＶ１２の発現は、同様に生殖細胞死及び組織破壊を引き起こす（図４Ｌ～Ｎ）。したがって、活性Ｒａｃは、本来は健康な生殖系列及び体細胞に向けて濾胞細胞を、過剰に食作用を有するものにするように見えた。

実施例１１：境界細胞における活性化されたＲａｃ遺伝子の効果
ショウジョウバエにおける実施例７～１０で報告された結果は、構成的に活性な形態のＲａｃの発現が、卵巣における濾胞細胞に、隣接細胞を早期に殺傷させ、摂取させることを示した。

特に、ショウジョウバエの実施例７～１０で報告された結果は、境界細胞における高レベルの活性Ｒａｃの持続的な発現が、組織全体の破壊を引き起こすことを示す。この破壊は、正常な卵巣形成の後期に濾胞細胞による生殖細胞残部の食作用を媒介する、呑み込み受容体ドレーパーの変異によって抑制される。ドレーパー変異体では、活性Ｒａｃを発現する境界細胞は、生殖細胞の代わりに、近くの生きている濾胞細胞を呑み込む。したがって、活性Ｒａｃは、境界細胞に生細胞を呑み込ませるのに十分である。

実施例１２：活性化されたＲａｃ２遺伝子（Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］）は、ＪｕｒｋａｔＴ白血病細胞の食細胞活性化及び呑み込みをもたらす。
好中球及び／又はマクロファージは、通常、それらの自然寿命の終わりにＢ細胞及びＴ細胞を呑み込むため、活性Ｒａｃが、この正常なプログラムを早期に活性化させ、ヒトＢ細胞及びＴ細胞の早期Ｂ細胞及びＴ細胞死をもたらす可能性があるかどうかを決定するために、一連の実験を実施した。

この仮説を試験するために、ヒト患者で見られた活性化された形態のＲａｃ２を、細胞培養物中のマクロファージにおいて発現させ、白血病患者に由来するＴ細胞である、蛍光で標識化されたＪｕｒｋａｔ細胞において混合した。

特に、野生型Ｒａｃ２、Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］、又はベクター対照を、ＧＦＰとともにマクロファージ様表現型に分化させたＨＬ６０由来細胞において発現させた。これらの細胞を、赤色蛍光色素で標識化されたヒトＪｕｒｋａｔＴ細胞白血病細胞と混合した。

対照マクロファージ様細胞は、ほとんどＪｕｒｋａｔ細胞を貪食しなかった（図５Ａ）が、野生型Ｒａｃの過剰発現は、そのような事象の頻度を２倍増加させ（図５Ｂ）、Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］の発現は、頻度をほぼ４倍増加させた（図５Ｃ及びＤ）（図５Ａ、５Ｂ、５Ｃにおける白い矢印）。Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］はまた、マクロファージとＴ細胞との間の接触頻度を増加させた（図５Ｅ）（図５Ａ、５Ｂ、５Ｃにおける灰色の矢印）。これらの結果は、Ｒａｃ２Ｅ［６２Ｋ］患者における理解しにくいリンパ球減少及び免疫不全についての説明を提供する。

実施例１３：Ｒａｃ２変異を有するヒト患者におけるリンパ球減少は、食細胞の高活性又は活性化によって引き起こされる。
ヌル対立遺伝子に対してホモ接合性のヒト患者は、リンパ球減少症及び可変免疫不全を呈する。Ｒａｃ２＋／－又はＲａｃ２－／－マウスからの好中球は、化学運動及びＮＡＤＰＨオキシダーゼ活性の障害を呈する。これらの知見は、Ｒａｃ２が、食細胞の化学運動及び超酸化物産生、並びにリンパ球の発達及び／又は生存に必要であることを示す。

造血特異的Ｒａｃ２遺伝子における活性化変異［Ｅ６２Ｋ］を有するヒト患者は、リンパ球減少（Ｂ細胞及びＴ細胞の数が抑制されている）及び免疫不全を含む症状を提示し、これらは、原因不明のままである。特に、ヒト患者における免疫不全に関する公表された報告書は、患者からのマクロファージが、いくつかの基準に従って高活性であることを示しているが、免疫不全の根拠は不明である。

マクロファージ中のヒトＲａｃ２遺伝子における活性化変異の発現が、がん性白血球を摂取し、殺傷するようにそれらを活性化するのに十分であることを示す、実施例１２で報告されたデータ。実施例１２で試験された活性化変異は、Ｂ細胞及びＴ細胞の喪失（リンパ球減少症）による免疫不全を患うヒト患者において発見された。

Ｒａｃ２における活性化変異は、ヒト患者において報告されている。意外なことではないが、そのような患者からの好中球は、高活性であり、健常な対照からの細胞では見られない異常なマクロピノサイトーシス小胞及び大きな空胞を呈する。Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］変異は、ＴＩＡＭ１媒介性ＧＤＰ交換及びｐ５０ＲｈｏＧＡＰ媒介性ＧＴＰ加水分解の両方を損なう。正味の効果は、長期間のＲａｃ２活性化、及びＰＡＫなどのエフェクタータンパク質との相互作用である。臨床的に最も重要な欠陥は、Ｂ細胞及びＴ細胞の数の低減による免疫不全である。マウスモデルは、ＣＤ３＋Ｔ細胞の２０倍超の低減を含む、患者に見られる効果を要約する。観察されたＢ細胞及びＴ細胞リンパ球減少症は、骨髄でのＢ細胞及びＴ細胞の発達の失敗、又は胸腺での成熟に起因するものではないと思われ、原因不明のままである。好中球もＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］において注目された。更に、患者は、骨髄移植によって治癒することができ、その効果が骨髄由来細胞に対して自律的であることを実証する。

実施例１２の結果は、実施例７～１１で報告された結果とともに、Ｒａｃ［Ｅ６２Ｋ］患者で観察されたリンパ球減少症が、実施例１４で更に詳述されるように、食細胞の超活性及びＢ細胞及びＴ細胞の早期呑み込みによる原因であるという結論を支持する。

実施例１４：マクロファージ中のＲａｃを活性化することによってがん細胞の食作用を刺激する
マクロファージの正常な機能は、Ｂ細胞及びＴ細胞が裏返ったときに除去することであるため、実施例１２のデータは、高活性Ｒａｃが、マクロファージに、それらが正常に死ぬ前にＢ細胞及びＴ細胞を早期に摂取させているという結論を支持し、かつ高活性マクロファージが「摂食」し、それによって患者のＢ細胞及びＴ細胞を殺傷しているという結論を支持する。

実施例１２において、Ｒａｃ活性化されたマクロファージ（対照マクロファージではない）が、Ｊｕｒｋａｔ細胞を熱心に摂取し、殺傷したため、この原理証明実験は、がん患者のマクロファージにおけるＲａｃ中の活性化変異を発現することは、マクロファージにがん細胞を殺傷させ、摂取させる可能性があり、免疫系及び患者生存に有利に、がんと免疫系との間の戦いにおけるバランスを崩すという結論を支持する。

実施例１５：標的細胞の殺傷及び食作用のためのＲａｃで活性化されたＣＡＲの組み合わせ
ＣＡＲ－Ｔは、がん性Ｂ細胞を攻撃するように患者Ｔ細胞を操作する前提に基づくがん療法である。ＣＡＲ－Ｐは、マクロファージががん細胞を攻撃するようにプログラムされ得るという考えに基づく治療的アプローチである。

しかしながら、既存のアプローチは、Ｔ細胞及びマクロファージをプログラムして、それらをＢ細胞に結合させる細胞外受容体タンパク質を発現させることに基づく。ごく一部の細胞－細胞接触事象が、腫瘍細胞の呑み込み及び死をもたらす。事象の８０％は、非致死的な細胞の「噛み付き」行動につながる。

実施例７～１０で報告されたショウジョウバエにおける実験、並びに実施例１１及び１２で議論された哺乳類細胞を用いたデータに基づいて、マクロファージ及び／又は好中球におけるＲａｃ２中の活性化変異を発現することは、以下の予測的な実施例１８及び１９に概説されるように、公開されているＣＡＲ－Ｐの効率を大幅に改善する可能性を有することが期待される。

実施例１６：Ｒａｃ活性ベクター構成
遺伝子操作された活性化された食細胞において、Ｒａｃ遺伝子は、定量的又は定性的方法によってその存在を検出するために、レポーター遺伝子（図７Ａ）と共発現されなければならないが、Ｒａｃ遺伝子が、その上流又は下流のタグ配列を含有し、インビボでの研究のために特別にそれらの方法による独自の検出を可能にする場合（図７Ｂ）を除く。Ｒａｃ遺伝子及びレポーター遺伝子の同時発現を別々であるが、同じのＲＮＡ転写産物からに可能にするＰＡ又は内部リボソーム侵入部位（ＩＲＥＳ）配列を含有するバイシストロン性ベクターが、大部分で好ましい（図７Ｃ）。バイシストロン性ベクターのプロモーターは、Ｒａｃ遺伝子を単独で発現するために使用される同じものであり得る。１つの異なるプロモーターが使用される場合、それは、少なくとも１つのコアプロモーター、続いてＲａｃ遺伝子を有しなければならず、調節配列の数の存在は、任意であり得る。２つの異なるベクターに由来するＲａｃとレポーター遺伝子との共発現が受け入れられ得る。その場合、第２のベクターは、レポーター遺伝子の上流に少なくともコアプロモーターを含有しなければならず、調節領域の使用は、任意であり得る。これは、最小限のカセットとみなされ、レポーター遺伝子の適切な発現のために、少なくとも１つのコピーが必要である。第２のベクターにおけるプロモーターは、食細胞に関して構成的又は条件付き、相同的又は異種であり得る。Ｒａｃとレポーター遺伝子との共発現が異なるベクターに由来する場合、食細胞内での同じ種類のゲノム挿入が好ましいであろう（安定したトランスフェクション）。この場合、最初にＲａｃ又はレポーター遺伝子を発現する安定した食作用を有する細胞の作成順序は、任意となるであろう。最後に、Ｒａｃ及びレポーター遺伝子の両方を発現する食作用を有する細胞を、定量的又は定性的方法によって特定し、選択することができる。

遺伝子操作された活性化された食細胞による生細胞の食作用を増強するために、食作用のためのキメラ抗原受容体（ＣＡＲ－Ｐ）をＲａｃ遺伝子と共発現させることができる。ＣＡＲ－Ｐ遺伝子は、Ｒａｃ発現を検出するために使用されるものと異なるタグ又はレポーター遺伝子をそのＣ末端に含有しなければならない。Ｒａｃとレポーター遺伝子との共発現の場合のように、Ｒａｃ及びＣＡＲ－Ｐ遺伝子の発現は、バイシストロン性ベクターを使用することによってか（図８Ａ）、又は全員１つの遺伝子を発現する２つの異なるベクターによって行うことができるが、この場合、Ｒａｃ遺伝子は、その上流又は下流のタグ配列を有しなければならない（図８Ｂ）。同じ転写産物中の任意のタグ、レポーター遺伝子、及びＣＡＲ－ＰなしでＲａｃ遺伝子を発現するマルチシストロン性ベクターを、ＰＡ又はＩＲＥＳ配列の上流又は下流の遺伝子の順序に対するいかなる優先順位なしで使用することができる（図８Ｃ）。第１のプロモーターは、このマルチシストロン性ベクターで使用することができるが、それは、１つの異なるプロモーターが使用される場合、少なくとも１つのコアプロモーター、続いてＲａｃ遺伝子を有しなければならず、調節配列の数の存在は、任意であり得る。

ＣＡＲ－ＰがＲａｃと異なるベクターで共発現される場合、この第３のベクターは、ＣＡＲ－Ｐ遺伝子の上流に少なくともコアプロモーターを含有しなければならず、調節領域の使用は、任意であり得る。これは、最小限のカセットとみなされ、ＣＡＲ－Ｐ遺伝子の適切な発現のために、少なくとも１つのコピーが必要である。この第３のベクターにおけるプロモーターは、食細胞に関して構成的又は条件付き、相同的又は異種であり得る。しかしながら、構成的プロモーターが、ＣＡＲ－Ｐ発現に関して最も好ましい。Ｒａｃ遺伝子及びＣＡＲ－Ｐ遺伝子をそれぞれ発現する第１及び第３のベクターに加えて、第１のベクターがＲａｃ遺伝子の上流又は下流のタグ配列を含有しない場合にのみ、レポーター遺伝子を発現する第２のベクターの存在が必要である（図８Ｄ）。

遺伝子操作された活性化された食細胞は、バイシストロン性ベクターが単一ベクターと同時に使用される場合、これらの異なる組み合わせのうちの１つを有することができる（図９Ａ、９Ｂ）。これらの組み合わせにおいて、Ｒａｃ遺伝子は、上流又は下流のタグ配列を有さず、バイシストロン性ベクター内の遺伝子の順序は、任意であり得る。

Ｒａｃ及びＣＡＲ－Ｐ遺伝子、又はＲａｃ、ＣＡＲ－Ｐ及びレポーター遺伝子の共発現が、異なるベクター又はバイシストロン性及び単一ベクターの異なる組み合わせに由来する場合、食細胞における同じ種類のゲノム挿入が好ましいであろう（安定したトランスフェクション）。この場合、最初にＲａｃ若しくはＣＡＲ－Ｐ遺伝子、又はレポーター遺伝子を発現する安定した食細胞の作成順序は、任意となるであろう。最後に、異なる遺伝子を発現する食作用を有する細胞を、定量的又は定性的方法によって特定し、選択することができる。

実施例１７：Ｒａｃ活性遺伝子回路構成
活性化されたＲａｃタンパク質及び／又は活性化されたか、若しくは活性化されていないＲａｇ遺伝子を活性化発現レベルで発現するための例示的な遺伝子回路は、条件付きドキシサイクリン誘導性（ＴｅｔＯＮ）、レンチウイルス又はアデノウイルスの哺乳類発現ベクターにおける蛍光標識化された野生型Ｒａｃ２｛ＲＡＣ２［ＷＴ］｝又は顕性の活性化されたＲａｃ２｛Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］｝のクローニング、及びマクロファージ又は好中球細胞株（ＨＬ６０）においてそれらをトランスフェクションすることを含む。

これらの細胞は、ドキシサイクリンで誘導されたとき、遺伝子カセットのみを発現するであろう。活性化されたＲａｃ遺伝子の発現は、ドキシサイクリンによって誘導されたとき、ＧＦＰの発現によって監視され得る。別の蛍光で標識化された標的細胞（ＨＡ－ｍＣｈｅｒｒｙ発現ＪｕｒｋａｔＴ細胞）との共培養において、マクロファージ又は好中球は、標的細胞を完全に又は部分的に貪食するであろう（トロゴサイトーシス）。これは、ライブ及び固定イメージングで監視することができ、フローサイトメトリーによって定量化することができる。

実施例１８：ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］分化したマクロファージは、ある範囲のリンパ腫細胞及び白血病細胞を殺傷及び／又は貪食することができる。－予測
現在のＣＡＲ－Ｐアプローチの最も重要な制限は、遺伝子操作されたマクロファージが、堅牢な細胞噛み付きを示すが、頻繁ではない全細胞貪食を示すことである（Ｍｏｒｒｉｓｓｅｙ，Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎｅｔａｌ．２０１８）。ＣＡＲ－Ｐの効率を制限する１つのメカニズムは、腫瘍細胞が、ＣＤ４７などの「ｄｏｎ’ｔ－ｅａｔ－ｍｅ」シグナルの発現を頻繁に上方制御することである（ＭｏｒｒｉｓｓｅｙａｎｄＶａｌｅ２０１９）。

実施例１２に報告されているＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現マクロファージによるＣＤ４７＋Ｊｕｒｋａｔ細胞の効率的な貪食は、Ｒａｃの高活性化がこの阻害を克服するのに十分であることを示す。特に、実施例６のデータは、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］を発現するＨＬ６０由来のヒトマクロファージが、Ｊｕｒｋａｔ白血病Ｔ細胞を効率的に呑み込み、殺傷することを示す。ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］細胞は、多くの場合、２つ以上の標的細胞を貪食する。これは、マクロファージを、高活性Ｒａｃを発現するように操作することが、現在のＣＡＲ－Ｐ療法を改善し得ることを示す。

これに基づいて、様々なヒト白血病及びリンパ腫細胞株を殺傷するＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現マクロファージの有効性が期待される。

ＮＩＡＩＤのＳｔｅｖｅｎＨｏｌｌａｎｄ教授の研究室から受け取ったＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］プラスミドは、レンチウイルス感染によって、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］及びＧＦＰを発現する、安定した、ドキシサイクリン（ＤＯＸ）誘導性のＨＬ６０好中球様細胞株を生成するように操作されている。

これらの細胞を、４８時間、培養培地中に１６ｎｍ、１２－Ｏ－テトラデカノイルホルボール１３－酢酸塩（ＴＰＡ）を添加することによってマクロファージに分化させるであろう。ｍＣｈｅｒｒｙは、９つのリンパ腫細胞株（ＡＴＣＣＴＣＰ－１０１５）及びＬ１２１０細胞（マウスリンパ球性白血病細胞株）のパネル内で、レンチウイルス感染によって安定的に発現させるであろう。更に、これらの細胞を、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］分化されたＨＬ６０マクロファージを発現するＧＦＰと共培養するであろう。マクロファージがｍＣｈｅｒｒｙ発現腫瘍細胞を貪食することができるかどうかを確認し、蛍光選別によって貪食する割合を定量化するために、固定イメージングを行うであろう。ＧＦＰのみを発現するＨＬ６０細胞を陰性対照として使用するであろう。更に、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マウスは、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マウス由来の原発性骨髄由来マクロファージが、造血がん細胞を貪食する際のＨＬ６０由来マクロファージと同程度に効果的（又は場合により、より効果的）であることを確認することが予想される。

全てのリンパ腫及び白血病細胞を効率的に呑み込み、かつ／又は殺傷するＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージは、様々な造血がんに対する治療アプローチを実証するであろう。ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージが細胞を殺傷する前に細胞を貪食する場合、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］がファゴトーシス（呑み込みによる殺傷）を活性化させるという結論が得られるであろう。代替として、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］－マクロファージが、腫瘍細胞を貪食する前にそれらを殺傷する場合、腫瘍細胞殺傷のメカニズムは、噛み付いて殺傷するプロセスに起因する可能性が高いという結論が得られるであろう。ＧＦＰのみを発現する対照と比較して、全ての腫瘍細胞株に対するＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］－マクロファージにおける噛み付き効率の定量化が行われるであろう。

一部の腫瘍細胞株では、噛み付きの増加及び完全ではない呑み込みが観察されるであろう。これらの腫瘍に対する貪食効率を増加させるために、ホスファチジルセリン（ＰＳ）残基に結合することによってマクロファージによる標的アポトーシス細胞を認識する細胞表面受容体を共発現するであろう。２つのかかる受容体には、Ｔ細胞免疫グロブリン（Ｉｇ）及びムチンドメイン含有分子（Ｔｉｍ４）、並びに乳脂肪球上皮成長因子（ＥＧＦ）因子８（ＭＦＧ－Ｅ８、ラクタデヘリンとしても知られる）に結合したインテグリンａＶｂ３が含まれる。（Ｏｎｕｍａ，Ｋｏｍａｔｓｕｅｔａｌ．２０１４）ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］とともに細胞表面受容体を共発現するマクロファージの貪食効率を試験する。

ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現マクロファージによる腫瘍細胞株のうちのいくつかの殺傷が観察されない場合、試験されるであろう別の興味深い可能性は、高活性マクロファージが間接的にがん細胞を殺傷することができるかどうかである。例えば、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現細胞は、栄養素及び成長因子などの細胞外物質の取り込みを伴うプロセスであるマクロピノサイトーシス（又は細胞飲作用）の増加を呈する（Ｈｓｕ，Ｄｏｎｋｏｅｔａｌ．２０１９）。これは、腫瘍細胞の栄養素の可用性を制限し、細胞死を促進し得る。腫瘍細胞を、ＧＦＰ対照、ＲＡＣ２－ＷＴ、及びＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］を発現するマクロファージからの調節培地内で成長させるであろう。ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現がマクロピノサイトーシスの増加をもたらす場合、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］からの調節培地内で成長する腫瘍細胞は、細胞死の増加を示すであろう。これは、死んだ腫瘍細胞によるトリパンブルー取り込みの増加によってアッセイされるであろう。別の陰性対照として、親腫瘍細胞からの調節培地もまた使用されるであろう。別の可能性は、高活性マクロファージが、腫瘍細胞に対して毒性であり得る過剰反応性酸素種（ＲＯＳ）を産生することである。この可能性を試験するために、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージ及び腫瘍細胞を、Ｎ－アセチル－システイン（ＮＡＣ）などのＲＯＳ阻害剤の有り、及び無しで共培養し、生きている／死んでいる腫瘍細胞を定量化する。

実施例１９：固形腫瘍細胞株に対するＲａｃ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージの貪食効率。
ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］を発現する分化したＨＬ６０マクロファージが、不死化Ｊｕｒｋａｔ白血病Ｔ細胞を貪食することができるという観察は、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］媒介性貪食が、固形腫瘍を標的とするＣＡＲ－Ｐ／Ｍ法の効率を更に向上させることができることを示唆する（Ｋｌｉｃｈｉｎｓｋｙ，Ｒｕｅｌｌａｅｔａｌ．２０２０）。わずか数週間前に発表された研究は、固形腫瘍抗原を認識する受容体を発現するように操作されたマクロファージが、インビトロ及び２つの固形腫瘍異種移植マウスモデルにおいて、腫瘍クリアランスをもたらしたことを示す（Ｋｌｉｃｈｉｎｓｋｙ，Ｒｕｅｌｌａｅｔａｌ．２０２０）貪食による直接的な殺傷に加えて、ＣＡＲ－Ｍマクロファージは、Ｔ細胞浸潤及び細胞毒性の増強をもたらす、Ｔ細胞への腫瘍抗原も提示する（Ｋｌｉｃｈｉｎｓｋｙ，Ｒｕｅｌｌａｅｔａｌ．２０２０）。

このプラットフォームを確立した後、今後の最も緊急な作業は、合理的な組み合わせを使用することによってアプローチを増強し、食作用に影響を与える「薬剤」を強調することであろう。実施例７～１５で議論されたデータは、Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］を共発現することが、併用ＣＡＲ－Ｍ療法のための有効かつ合理的な薬剤であり、免疫療法によって効果的に治療され得る患者の範囲を大幅に拡大することを示す。

ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージを、ｍＣｈｅｒｒｙ発現ＭＤＡ－ＭＢ－４５３又はＢＴ－４７４細胞（乳がん細胞株）、ＳＷ１１１６細胞（ヒト結腸がん細胞株）、及びＳＫＯＶ３（卵巣がん細胞）と共培養するであろう。これらの細胞株は全て、腫瘍抗原ＨＥＲ２を発現する（Ｈｅｙｅｒｄａｈｌ，Ｋｒｏｇｈｅｔａｌ．２０１１、Ｊｅｒｎｓｔｒｏｍ，Ｈｏｎｇｉｓｔｏｅｔａｌ．２０１７、Ｃｏｎｒａｄｉ，Ｓｐｉｔｚｎｅｒｅｔａｌ．２０１９）。ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現単独が、マクロファージにこれらの固形腫瘍を貪食させるのに十分であるかどうかを確認するために、固定イメージングを実施し、抗ＨＥＲ２ＣＡＲ単独、Ｒａｃ２［Ｅ６２Ｋ］単独、又は両方ともの発現を比較し、蛍光活性化選別によって貪食能を定量化するであろう。ＧＦＰ発現のみを有するマクロファージは、陰性対照として機能するであろう。

予想される観察は、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］が、抗ＨＥＲ２ＣＡＲの非存在下においても、固形腫瘍細胞の呑み込みを引き起こすのに十分であるということである。代替として、又は加えて、別の予想される観察は、両方を共発現することによる貪食の増強である。実施例１８のように、全体の細胞呑み込み又は殺傷ではないが、噛み付きの増加が生じるとおそらく予想される。

ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現ＨＬ６０細胞によるがん細胞の呑み込み及びトロゴプトーシス媒介性殺傷がいずれも観察されない場合、それでも高活性マクロファージが治療効果を有し得ることが予想される。それらは、メカニズムによる、例えば、炎症促進因子の分泌の増加及び／又はＴ細胞に対する抗原提示の増加によるがん細胞の拡散を制限し得る。固形腫瘍微小環境（ＴＭＥ）は、腫瘍関連マクロファージ（ＴＡＭ）を能動的に動員し、それらは、プロ腫瘍（腫瘍細胞に対する食作用を有する細胞の能力の減少）及び免疫抑制（Ｍ２）表現型に向けて分極化される。（Ｊａｙａｓｉｎｇａｍ，Ｃｉｔａｒｔａｎｅｔａｌ．２０２０）それらの食作用を有する細胞の能力を増強するための治療的アプローチが進行中である。（Ｍｏｒｒｉｓｏｎ２０１６，Ｍａｎｔｏｖａｎｉ，Ｍａｒｃｈｅｓｉｅｔａｌ．２０１７）（Ｗｅｉｓｋｏｐｆ２０１７）ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージが抗腫瘍Ｍ１関連経路の発現を促進することができるということは、可能であり得る。

これをＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージで試験するために、Ｍ１関連インターフェロン応答遺伝子（ＩＦＩＴ１、ＩＳＧ１５、及びＩＦＩＴＭ１など）の発現、ＴＨ１経路及びｉＮＯＳシグナル伝達、抗原提示機構の主要な構成要素、例えば、共刺激リガンド（ＣＤ８０、ＴＡＰ１）、ＨＬＡ－Ａ／Ｂ／Ｃ、並びにＭＨＣクラスＩ／ＩＩ遺伝子を、定量ＰＣＲ及びフローサイトメトリーによって確認するであろう。これらの遺伝子の発現レベルが（ＧＦＰ対照と比較して）ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージにおいて上方制御される場合、これらのマクロファージは、炎症誘発応答を促進することによってか、又はＴ細胞に対する抗原提示の増加によって、がん細胞の殺傷を実行し得ると結論付けることが可能であろう。代替として、転移性がん細胞は、その同胞種及び免疫系からの他の細胞を餌にすることによって発育する。（Ｃａｒｕｓｏ，Ｆｅｄｅｌｅｅｔａｌ．２０１２）したがって、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージががん細胞を全く殺傷することができない場合、がん細胞がＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］マクロファージを共食いすることができるかどうかを試験するであろう。がん細胞がマクロファージを効率的に貪食することができない場合、ＲＡＣ２［Ｅ６２Ｋ］発現マクロファージは、マクロファージにおけるＲａｃ２媒介性応答を高活性化することによって、がん細胞の共食い能を制限する可能性があると結論付けるであろう。かかるプロセスは、がん細胞の転移的拡散を制限する可能性がある。

実施例２０：アルツハイマー病を治療するためのＲａｃで活性化された細胞－
この研究の影響は、更により重要である可能性があり、それは、最近の研究が、脳マクロファージの食作用能の増加が、アルツハイマー病の軽度の認知障害患者に有益であり得ることを示唆するからである。（Ｏｌｉｖｅｒａ－Ｐｅｒｅｚ，Ｌａｍｅｔａｌ．２０１７）。

脳内のアミロイド－βペプチド（Ａβ）の蓄積は、アルツハイマー病（ＡＤ）の特徴と考えられる。Ａβ凝集体は、可溶性及び不溶性の線維形態の両方である。ＡＤ患者における不溶性線維アミロイド－β（Ａβ）負荷は、ＡＤ依存性神経変性又は認知機能の喪失と相関しない（Ｇｉａｎｎａｋｏｐｏｕｌｏｓｅｔａｌ．２００３）（Ｇｉａｎｎａｋｏｐｏｕｌｏｓ，Ｈｅｒｒｍａｎｎｅｔａｌ．２００３）が、しかしながら、可溶性の小Ａβ凝集体は、いくつかの動物モデル及びＡＤ患者において記憶障害及び他のＡＤ症状を示している（Ｋｕｏｅｔａｌ．１９９６、Ｌｅｓｎｅｅｔａｌ．２００６、Ｐａｎｚａｅｔａｌ．２０１９）（Ｋｕｏ，Ｅｍｍｅｒｌｉｎｇｅｔａｌ．１９９６）（Ｌｅｓｎｅ，Ｋｏｈｅｔａｌ．２００６）（Ｐａｎｚａ，Ｌｏｚｕｐｏｎｅｅｔａｌ．２０１９）。

Ａβの可溶性凝集体を標的とする取り組みは、現在、効果的な治療を開発するために進行中である。インビトロ及びインビボ研究は、ミクログリア（脳内のマクロファージ）が、食作用（貪食）及びマクロピノサイトーシス（細胞飲作用）を介して、Ａβの可溶性及び線維性形態の両方を取り込むことができることを示している。

これらのプロセスはどちらも、Ｒａｃ活性化に依存している（Ｍａｎｄｒｅｋａｒｅｔａｌ．２００９）。（Ｍａｎｄｒｅｋａｒ，Ｊｉａｎｇｅｔａｌ．２００９）興味深いことに、ショウジョウバエのグリアにおける貪食受容体ドレーパーの発現は、ＡＤのショウジョウバエモデルにおけるＡβ毒性を低減させる（Ｒａｙｅｔａｌ．２０１７）。（Ｒａｙ，Ｓｐｅｅｓｅｅｔａｌ．２０１７）ショウジョウバエの卵巣における我々の研究は、わずかな細胞におけるＲａｃ１［Ｇ１２Ｖ］の発現が組織スケールの呑み込みを促進することができることを示唆する。

したがって、グリア細胞（例えば、ミクログリア細胞）における活性Ｒａｃ（Ｒａｃ１［Ｇ１２Ｖ］）の発現は、それらを、過剰に食作用を有するものにし、Ａβのより更に効率的なクリアランスをもたらすことが予想される。

要約すると、本明細書に記載されるのは、活性化された食細胞であり、特に遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞、並びに関連するベクター、組成物、方法、及びシステムが記載され、これらは、標的細胞の増強された食作用を通じて効率的な細胞標的化、及び個体における状態の治療を可能にする。

上記の実施例は、当業者に、完全な開示、並びに本開示の化合物、組成物、システム、及び方法の実施形態をどのように作製及び使用するかの説明を与えるために提供され、本発明者が本開示とみなす範囲を限定することを意図するものではない。本明細書で言及される全ての特許及び刊行物は、本開示が属する当業者の技術水準を示している。

背景、要約、詳細な説明、及び実施例で引用される各文書（ウェブページ特許、特許出願、ジャーナル記事、要約、実験マニュアル、書籍、又は他の開示を含む）の全体的な開示は、参照により本明細書に組み込まれる。参照により組み込まれる文書のいずれか１つで引用される参照文献を含む、本開示で引用される全ての参照文献は、各参照文献が参照によりその全体が個別に組み込まれたものと同じ程度に参照により組み込まれる。しかしながら、引用された参照と本開示との間に矛盾が生じる場合、本開示が優先される。更に、コンピュータ可読形態のＡＳＣＩＩテキストファイルＰ２４９５－ＰＣＴ－Ｓｅｑ－Ｌｉｓｔ＿ＳＴ２５の配列表は、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる。

本明細書で使用されている用語及び表現は、限定ではなく説明の用語として使用されており、そのような用語及び表現の使用において、示され説明された特徴のいかなる同等物又はその一部を除外する意図はないが、請求される本開示の範囲内で様々な修正が可能であると認識される。したがって、本開示は、実施形態、例示的な実施形態、及び任意の特徴によって具体的に開示されているが、本明細書に開示される概念の修正及び変形は、当業者によって援用され得、そのような修正及び変形は、添付の特許請求の範囲によって定義される本開示の範囲内であるとみなされることを理解されたい。

本明細書で使用される用語が特定の実施形態を説明することのみを目的とし、限定することを意図するものではないことも理解されたい。本明細書及び添付の特許請求の範囲で使用される場合、単数形「ａ」、「ａｎ」、及び「ｔｈｅ」は、文脈が別途明確に指示しない限り、複数の指示対象を含む。「複数の」という用語は、文脈が別途明確に指示しない限り、２つ以上の指示対象を含む。別途定義されない限り、本明細書で使用される全ての技術用語及び科学用語は、本発明が属する当業者に一般に理解される意味と同じ意味を有する。また、本明細書で使用される場合、「及び／又は」は、関連する列挙された項目のうちの１つ以上のありとあらゆる可能な組み合わせ、並びに代替物（「又は」）で解釈されるときの組み合わせの欠如を指し、包含する。

本明細書で使用される場合、「ＸとＹとの間」及び「約ＸとＹとの間」などの語句は、ＸとＹを含むと解釈されるべきである。本明細書で使用される場合、「約ＸとＹとの間」などの語句は、「約Ｘと約Ｙとの間」を意味し、「約ＸからＹ」などの語句は、「約Ｘから約Ｙ」を意味する。

本明細書における値の範囲の列挙は、本明細書に別段の指示がない限り、範囲内に収まる各別個の値を個別に指す速記法として機能することが意図されているに過ぎず、各別個の値は、本明細書に個別に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。例えば、範囲１０～１５が開示される場合、１１、１２、１３、及び１４も開示される。

本明細書でマーカッシュ群又は他の群が使用される場合、群の個々のメンバー、並びに群の全ての組み合わせ及び可能なサブ組み合わせは、本開示に個別に含まれることが意図される。特に明記されない限り、本明細書に記載又は例示される構成要素又は材料の全ての組み合わせは、本開示を遂行するために使用することができる。当業者は、具体的に例示されるもの以外の方法、デバイス要素、及び材料が、過度の実験を用いることなく、本開示の遂行に用いられ得ることを理解するであろう。任意のかかる方法、デバイス要素、及び材料のうちの全ての当技術分野で知られている機能的同等物が、本開示に含まれることが意図される。範囲、例えば、温度範囲、頻度範囲、時間範囲、又は組成物範囲が本明細書に与えられるときは常に、全ての中間範囲及び全てのサブ範囲、並びに与えられた範囲に含まれる全ての個々の値が、本開示に含まれることが意図される。本明細書に開示される範囲又は群の任意の１つ以上の個々のメンバーは、本開示の請求項から除外され得る。本明細書に例示的に記載されている開示は、本明細書に具体的に開示されていない任意の１つ又は複数の要素、１つ又は複数の限定がなくても遂行することができる。

本開示のいくつかの実施形態を説明した。本明細書に提供される特定の実施形態は、本発明の有用な実施形態の例であり、本開示は、本説明に記載されるデバイス、デバイス構成要素、方法ステップの多数の変形を使用して実行され得ることが当業者には明らかであろう。当業者には明らかであろうように、本方法に有用な方法及びデバイスは、多数の任意の組成物及び加工要素及びステップを含み得る。

特に、本開示の趣旨及び範囲から逸脱することなく、様々な修正が行われ得ることが理解される。したがって、他の実施形態は、以下の例示的な特許請求の範囲内にある。

参考文献
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Claims

遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞であって、
活性化されたＲａｃタンパク質をコードする活性化されたＲａｃ遺伝子を含み、前記活性化されたＲａｃ遺伝子が、前記活性化された食作用を有する細胞における前記活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第１の食細胞プロモーター及び第１の追加の食細胞調節領域の制御下にある、遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞。
前記食作用を有する細胞が、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、グリア細胞、又はそれらの前駆体である、請求項１に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子が、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、又はＲａｃ３遺伝子である、請求項１又は２に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子が、活性化変異を含むＲａｃ－２遺伝子である、請求項１～３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記活性化変異が、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１２Ｖのうちの少なくとも１つを含む、請求項４に記載の食作用を有する細胞。
前記第１の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項１～４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第１の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項１～４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記活性化されたＲａｃ遺伝子、前記第１の食細胞プロモーター、及び前記第１の調節領域が、遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項１～７のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞が、前記活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、前記第１の食細胞プロモーターの、又は第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ任意選択で第２の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子を更に含む、請求項１～８のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第２の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項９に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記構成的プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される、請求項１０に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第２の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項９に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記条件付きプロモーターが、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、及びｃＦＯＳプロモーターから選択される、請求項１２に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記ＣＡＲ遺伝子、前記第２の食細胞プロモーター、及び前記第２の調節領域が、遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項９～１３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第１の食細胞プロモーターが、前記第２の食細胞プロモーターと異なり、かつ／又は前記第１の追加の調節領域が、前記第２の追加の調節領域と異なる、請求項９～１４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記活性化されたＲａｃ遺伝子及び前記ＣＡＲ遺伝子が、単一の遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項９～１５のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
Ｒａｃタンパク質をコードするＲａｃ遺伝子を含む、遺伝子操作された活性化された食細胞であって、前記Ｒａｃ遺伝子が、活性化発現レベルでの前記活性化された食作用を有する細胞における前記Ｒａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第３の食細胞プロモーター及び第３の追加の食細胞調節領域の制御下にある、遺伝子操作された活性化された食細胞。
前記細胞が、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、又はそれらの前駆体である、請求項１７に記載の遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子が、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、又はＲａｃ３である、請求項１７又は１８に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子が、Ｒａｃ－２であり、活性化変異が、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１２Ｖのうちの少なくとも１つを含む、請求項１７～１９のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第３の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第３の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項１７～２０のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記活性化されたＲａｃ遺伝子、前記第３の食細胞プロモーター、及び前記第３の調節領域が、前記第１のプロモーター、前記第２のプロモーター、前記第１の追加の調節領域、及び／又は前記第２の追加の調節領域を更に含む遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項１７～２２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞が、前記活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子の発現を可能にする構成において、前記第３の食細胞プロモーター又は第４の食細胞プロモーターの制御下、かつ前記第３の追加の食細胞調節領域又は第４の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲを更に含む、請求項１７～２３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第４の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項２４に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記構成的プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される、請求項２５に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第４の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項２４に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記条件付きプロモーターが、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、及びｃＦＯＳプロモーターから選択される、請求項２７に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記ＣＡＲ遺伝子、前記第４の食細胞プロモーター、及び前記第４の調節領域が、遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項２４～２８のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第３の食細胞プロモーターが、前記第４の食細胞プロモーターと異なり、かつ／又は前記第３の追加の調節領域が、前記第４の追加の調節領域と異なる、請求項２４～２９のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子及び前記ＣＡＲ遺伝子が、前記第３のプロモーター、前記第４のプロモーター、前記第３の追加の調節領域、及び／又は前記第４の追加の調節領域を更に含む、単一の遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項２４～３０のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
Ｒａｃ遺伝子回路を含む遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞であって、分子成分が、相互作用する成分の完全に接続されたネットワークを形成するために、反応を活性化、阻害、結合、又は変換することによって、回路設計に従って互いに接続されており、前記Ｒａｃ遺伝子回路において、
第１の遺伝分子成分による活性化されたＲａｃ遺伝子の発現であって、前記活性化されたＲａｃ遺伝子が、第１のプロモーター及び第１の追加の調節領域の制御下にある、活性化されたＲａｃ遺伝子の発現、並びに／又は
第３の遺伝分子成分によるＲａｃ遺伝子の増加した発現のレベルであって、前記Ｒａｃ遺伝子が、上昇した活性化発現レベルでの前記活性化された食作用を有する細胞における前記活性化されたＲａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第３のプロモーター及び第３の追加の調節領域の制御下にある、Ｒａｃ遺伝子の増加した発現のレベルは、
前記Ｒａｃ遺伝子回路が、前記活性化された食細胞内の分子成分を引き起こすことに応答して、前記回路設計に従って動作するときに生じる、遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞。
前記細胞食細胞が、単球、マクロファージ、樹状細胞、好中球、又はそれらの前駆体である、請求項３２に記載の遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子が、Ｒａｃ１、Ｒａｃ２、又はＲａｃ３を含む、請求項３２又は３３に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記Ｒａｃ遺伝子が、Ｅ６２Ｋ、Ｑ６１Ｌ、Ｄ６３Ｖ、Ｇ１２Ｒ、及びＧ１２Ｖのうちの少なくとも１つを含むＲａｃ－２を含む、請求項３２～３４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞が、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子を、
前記活性化された食作用を有する細胞における前記ＣＡＲ遺伝子の発現を可能にする前記第１の遺伝分子成分内の前記第１のプロモーター及び第１の追加の調節領域の制御下にある前記第１の遺伝分子成分内、並びに／又は
前記活性化された食作用を有する細胞における前記ＣＡＲ遺伝子の発現を可能にする前記第１の遺伝分子成分内の前記第３のプロモーター及び第１の追加の調節領域の制御下にある前記第３の遺伝分子成分内、並びに／又は
キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子が、前記活性化された食作用を有する細胞における前記ＣＡＲの発現を可能にする構成において、第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第２の追加の食細胞調節領域下にある、第２の遺伝分子成分内に、
前記Ｒａｃ遺伝子回路が、前記活性化された食細胞内の分子成分を引き起こすことに応答して、前記回路設計に従って動作するときに更に含む、請求項３２～３５のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
遺伝子操作された活性化された食細胞であって、第１の食細胞プロモーター及び第１の追加の調節領域の制御下にある自然発生の活性Ｒａｃ遺伝子を発現する自然発生の活性食細胞を含み、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第２の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子を、前記遺伝子操作された活性化された食細胞における自然発生の活性Ｒａｃ遺伝子の発現と組み合わせて更に含む、遺伝子操作された活性化された食細胞。
前記第１の食細胞プロモーター及び第１の追加の調節領域が、自然に発生する、請求項３７に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第２の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項３７又は３８に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記構成的プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される、請求項３９に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記第２の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項３７又は３８に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記条件付きプロモーターが、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、及びｃＦＯＳプロモーターから選択される、請求項４１に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記ＣＡＲ遺伝子、前記第２の食細胞プロモーター、及び前記第２の調節領域が、遺伝子発現カセット内に構成されている、請求項３７～４２のいずれか一項に記載の遺伝子操作された食作用を有する細胞。
前記キメラ抗原受容体が、腫瘍関連抗原に結合することができる抗原結合ドメインを含む、請求項３７～４３のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞。
Ｒａｃ発現ベクターであって、第１の食細胞プロモーターの、かつ任意選択で追加の第１の食細胞調節領域の制御下にある活性Ｒａｃ遺伝子を、食細胞における前記Ｒａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において含む、Ｒａｃ発現ベクター。
前記第１の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項４５に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記第１の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項４５に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記活性化されたＲａｃ遺伝子、前記第１の食細胞プロモーター、及び前記第１の調節領域が、遺伝子発現カセット内に含まれる、請求項４５～４７のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記Ｒａｃ発現ベクターが、前記活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、前記第１の食細胞プロモーターの、又は第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第２の追加の食細胞調節領域下にあるＣＡＲ遺伝子を更に含む、請求項４５～４８のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記第２の食細胞プロモーターが、構成的プロモーターである、請求項４９に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記構成的プロモーターが、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択される、請求項５０に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記第２の食細胞プロモーターが、条件付きプロモーターである、請求項４９に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記条件付きプロモーターが、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、及びｃＦＯＳプロモーターから選択される、請求項５２に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記ＣＡＲ遺伝子、前記第２の食細胞プロモーター、及び前記第２の調節領域が、遺伝子発現カセット内に含まれる、請求項４９～５３のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記第１の食細胞プロモーターが、前記第２の食細胞プロモーターと異なり、かつ／又は前記第１の追加の調節領域が、前記第２の追加の調節領域と異なる、請求項４９～５４のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター。
前記活性化されたＲａｃ遺伝子及び前記ＣＡＲ遺伝子が、単一の遺伝子発現カセット内に含まれる、請求項４５～５５のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター。
Ｒａｃタンパク質をコードするＲａｃ遺伝子を含み、前記Ｒａｃ遺伝子が、上昇した活性化発現レベルでの前記活性化された食作用を有する細胞における前記Ｒａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第３の食細胞プロモーター及び第３の追加の食細胞調節領域の制御下にあり、前記Ｒａｃ遺伝子、前記第３の食細胞プロモーター、及び前記第３の追加の調節領域が、前記活性化されたＲａｃ遺伝子、前記第１の食細胞プロモーター、及び前記第１の食細胞追加の調節領域に加えて、又はそれらの代わりに含まれる、請求項４５～５６のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター。
請求項１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食作用を有する細胞を提供する方法であって、前記方法が、
食細胞に、
食細胞における前記Ｒａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第１の食細胞プロモーターの制御下、かつ任意選択で第１の追加の食細胞調節領域の制御下にある活性Ｒａｃ遺伝子、
前記活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、前記第１の食細胞プロモーターの、若しくは第２の食細胞プロモーターの制御下、かつ第２の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子、並びに／又は
上昇した活性化発現レベルでの前記活性化された食作用を有する細胞における前記Ｒａｃ遺伝子の発現を可能にする構成において、第３の食細胞プロモーター及び第３の追加の食細胞調節領域の制御下にあるＲａｃ遺伝子、を導入することを含む、方法。
前記第１の食細胞プロモーター、第２の食細胞プロモーター、及び第３の食細胞プロモーターのうちの少なくとも１つが、構成的プロモーターである、請求項５８に記載の方法。
前記第１の食細胞プロモーター、第２の食細胞プロモーター、及び第３の食細胞プロモーターのうちの少なくとも１つが、条件付きプロモーターである、請求項５８又は５９に記載の方法。
前記活性Ｒａｃ遺伝子及び前記ＣＡＲ遺伝子のうちの少なくとも１つが、ＴＥＴ（テトラサイクリン応答要素、ＴＥＴ－ＯＮ／ＴＥＴ－ＯＦＦ）、Ｌａｃ、ｄＣａｓ－トランス活性化因子、亜鉛フィンガー－ＴＦ、ＴＡＬＥＮ－ＺＦＧａｌ４－ｕａｓ、ｓｙｎＮｏｔｃｈ、及び内因性シグナルＴＮＦ－アルファに基づく誘導性プロモーター、及びｃＦＯＳプロモーターから選択されるプロモーターの制御下にある、請求項５８～６０のいずれか一項に記載の方法。
前記活性Ｒａｃ遺伝子及び前記ＣＡＲ遺伝子のうちの少なくとも１つが、ヒトサイトメガロウイルス由来のＣＭＶ、ヒト伸長因子１アルファ由来のＥＦ１ａ、サル空胞ウイルス４０由来のＳＶ４０、ホスホグリセリン酸キナーゼ遺伝子由来のＰＧＫ１、ヒトユビキチンＣ遺伝子由来のＵｂｃ、ヒトベータアクチン、ＣＡＡＧ、及びＳｙｎＩプロモーターから選択されるプロモーターの制御下にある、請求項５８～６０のいずれか一項に記載の方法。
前記導入することが、インビボ又はエクスビボで行われる、請求項５８～６２のいずれか一項に記載の方法。
食細胞と、請求項４５～５７のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクターのうちの少なくとも１つと、を含む、
請求項５８～６３のいずれか一項に記載の方法における同時組み合わせ又は連続使用のための、遺伝子操作された活性化された食細胞を提供するためのシステム。
食作用を有する細胞及び／又は活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子の発現を可能にする構成において、食細胞プロモーターの制御下、かつ追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子を含むＣＡＲ発現ベクターを更に含む、請求項６４に記載のシステム。
Ｒａｃ活性医薬組成物であって、
請求項１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食細胞、及び／又は請求項４５～５７のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクターを、任意選択で食作用を有する細胞及び／又は活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子の発現を可能にする構成において、食細胞プロモーターの制御下、かつ追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子を含むＣＡＲ発現ベクターと組み合わせて含み、
前記遺伝子操作された活性化された食細胞、前記Ｒａｃ発現ベクター、及び前記任意選択のＣＡＲ発現ベクターが、標的細胞の呑み込み及び／又はトロゴサイトーシスによって個体を治療するための有効量で、薬学的に許容されるビヒクルとともに含まれる、Ｒａｃ活性医薬組成物。
前記個体が、哺乳類である、請求項６６に記載のＲａｃ活性医薬組成物。
前記個体が、ヒトである、請求項６６に記載のＲａｃ活性医薬組成物。
標的細胞の貪食及び／又はトロゴサイトーシスによって個体を治療する方法であって、
前記個体に、治療有効量の
請求項１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食細胞、並びに／又は
請求項４５～５７のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター、並びに任意選択で
前記個体の食作用を有する細胞及び／若しくは活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子の発現を可能にする構成において、食細胞プロモーターの制御下、かつ追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲ遺伝子を含むＣＡＲ発現ベクターを投与すること、を含む、方法。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞を投与することが、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、埋め込み、又は移植によって行われる、請求項６９に記載の方法。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞を投与することが、前記遺伝子操作された活性化された食細胞を、
標的領域、前記個体における局所疾患部位、前記個体のリンパ節、臓器、及び／又は腫瘍に直接注射することによって行われる、請求項６９に記載の方法。
前記Ｒａｃ発現ベクターを投与することが、前記個体の血液中に前記ベクターを提供することを可能にする投与経路によって、前記Ｒａｃ発現ベクターを標的領域に投与することによって行われる、請求項６９～７１のいずれか一項に記載の方法。
前記Ｒａｃ発現ベクターを投与することが、静脈内注射によって行われる、請求項７２に記載の方法。
前記投与することが、前記個体に、請求項６６～６８のいずれか一項に記載の組成物を投与することによって行われ、前記投与することが、経動脈、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内注射により、又は腹腔内で行われる、請求項６９～７３のいずれか一項に記載の方法。
前記投与することが、固形腫瘍又は血液悪性腫瘍を治療するために行われる、請求項６９～７４のいずれか一項に記載の方法。
前記固形腫瘍が、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞がん、卵巣がん、膵がん、肝細胞がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、及び脳がんを含む、請求項７５に記載の方法。
前記血液悪性腫瘍が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含む、請求項７５に記載の方法。
前記投与することが、細菌感染、ウイルス感染細胞、ビリオン、欠陥ニューロン、又は老人性細胞を治療するために行われる、請求項６９～７４のいずれか一項に記載の方法。
前記個体が、哺乳類である、請求項６９～７８のいずれか一項に記載の方法。
前記個体が、ヒトである、請求項７９に記載の方法。
個体における腫瘍を治療する方法であって、前記方法が、前記個体に、治療有効量の
請求項１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食細胞、並びに／又は
請求項４５～５８のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクターを、任意選択で
前記個体の食作用を有する細胞及び／若しくは活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、食細胞プロモーターの、かつ追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲを含むＣＡＲ発現ベクターと組み合わせて投与することを含む、方法。
前記腫瘍が、肺がん、黒色腫、乳がん、前立腺がん、結腸がん、腎細胞がん、卵巣がん、膵がん、肝細胞がん、神経芽腫、横紋筋肉腫、及び脳がんを含む、請求項８１に記載の方法。
前記腫瘍が、血液悪性腫瘍を含む、請求項８１又は８２に記載の方法。
前記血液悪性腫瘍が、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、骨髄異形成、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫及び非ホジキンリンパ腫を含む、請求項８３に記載の方法。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞を投与することが、エアロゾル吸入、注射、摂取、輸血、埋め込み、又は移植によって行われる、請求項８１～８４のいずれか一項に記載の方法。
前記遺伝子操作された活性化された食細胞を投与することが、前記遺伝子操作された活性化された食細胞を、
標的領域、前記個体における局所疾患部位、前記個体のリンパ節、臓器、及び／又は腫瘍に直接注射することによって行われる、請求項８１～８５のいずれか一項に記載の方法。
前記Ｒａｃ発現ベクターを投与することが、前記個体の血液中に前記ベクターを提供することを可能にする投与経路によって、前記Ｒａｃ発現ベクターを標的領域に投与することによって行われる、請求項８１～８６のいずれか一項に記載の方法。
前記Ｒａｃ発現ベクターを投与することが、静脈内注射によって行われる、請求項８７に記載の方法。
前記投与することが、
前記個体に、請求項６５～６７のいずれか一項に記載の組成物を投与することを含み、前記投与することが、経動脈、皮下、皮内、腫瘍内、結節内、髄内、筋肉内、静脈内注射により、又は腹腔内で行われることを含む、請求項８１～８８のいずれか一項に記載の方法。
前記個体が、哺乳類である、請求項８０～８８のいずれか一項に記載の方法。
前記個体が、ヒトである、請求項８９に記載の方法。
個体におけるアルツハイマー病を治療する方法であって、前記方法が、前記個体に、治療有効量の
請求項１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食細胞、並びに／又は
前記個体の前記マクロファージを標的にして、前記個体の活性化マクロファージを提供するように構成された、請求項４５～５８のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクター、を投与することを含み、
前記投与することが、前記遺伝子操作された活性化された食細胞による、及び／又は前記個体の前記活性化マクロファージによる、アミロイド－ベータの食作用を引き起こして、前記個体のアミロイド－ベータプラークを減少させるために行われる、方法。
前記個体が、ヒトである、請求項９２に記載の方法。
個体を治療するためのシステムであって、前記システムが、
請求項１～４４のいずれか一項に記載の遺伝子操作された活性化された食細胞、並びに／又は
請求項４５～５７のいずれか一項に記載のＲａｃ発現ベクターを、任意選択で
前記食作用を有する細胞及び／若しくは前記活性化された食作用を有する細胞におけるキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）の発現を可能にする構成において、食細胞プロモーターの、かつ追加の食細胞調節領域の制御下にあるＣＡＲを含むＣＡＲ発現ベクターと組み合わせて含み、
請求項６９～８０のいずれか一項に記載の方法、請求項８１～９１のいずれか一項に記載の方法、及び／又は請求項９２に記載の方法において同時に組み合わせて、若しくは連続で使用するための、システム。