JP2023520414A - Ｖｅｇｆ及びｐｄｇｆ－ｂに結合する抗体及び使用方法 - Google Patents

Ｖｅｇｆ及びｐｄｇｆ－ｂに結合する抗体及び使用方法 Download PDF

Info

Publication number
JP2023520414A
JP2023520414A JP2022559622A JP2022559622A JP2023520414A JP 2023520414 A JP2023520414 A JP 2023520414A JP 2022559622 A JP2022559622 A JP 2022559622A JP 2022559622 A JP2022559622 A JP 2022559622A JP 2023520414 A JP2023520414 A JP 2023520414A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
amino acid
seq
acid sequence
antibody
cdr
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2022559622A
Other languages
English (en)
Inventor
ベックマン，ローラント
イェンセン，クリスチャン・ホボルト
ケッテンベルガー，フーベルト
シュペック，ヤニナ
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
F Hoffmann La Roche AG
Original Assignee
F Hoffmann La Roche AG
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by F Hoffmann La Roche AG filed Critical F Hoffmann La Roche AG
Publication of JP2023520414A publication Critical patent/JP2023520414A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/34—Identification of a linear epitope shorter than 20 amino acid residues or of a conformational epitope defined by amino acid residues
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/55—Fab or Fab'
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本発明は、抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体及びその使用方法に関する。

Description

発明の分野
本発明は、抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体及びその使用方法に関する。
発明の背景
別個のＶＥＧＦアンタゴニスト及びＰＤＧＦアンタゴニストを使用して眼血管新生疾患の処置のＶＥＧＦ及びＰＤＧＦをブロッキングする併用療法アプローチが以前に示唆されている（国際公開第２００５／０２０９７２号、国際公開第２０１０／１２７０２９号、国際公開第２０１６／０２５３１３号）。
ＰＤＧＦ－Ｂ及びＶＥＧＦに結合する二重特異性抗体は以前に報告されており、眼血管疾患の処置について示唆された（国際公開第２０１６／０７５０３６号、抗体「０１１７」）。二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体０１１７は、１つの結合アームにドメイン交差交換を有する完全長ＩｇＧ様抗体である（Ｓｃｈａｅｆｅｒ，Ｗ．ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１１８７－１１９１）。ＶＥＧＦ結合アームは、抗ＶＥＧＦ抗体ラニビズマブのＶＨドメイン及びＶＬドメインを含む。
可変重鎖ドメイン（ＶＨ）及び可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）の１つの対に２つのパラトープを含む多重特異性抗体は、国際公開第２００８／０２７２３６号；国際公開第２０１０／１０８１２７号及びＢｏｓｔｒｏｍ，Ｊ．，ｅｔ ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３２３（２００９）１６１０－１６１４並びに国際公開第２０１２／１６３５２０号に記載されている。
国際公開第２０１２／１６３５２０号は、一対のＶＨドメイン及びＶＬドメインに２つの重複しないパラトープを含む二重特異性抗体を開示している（「ＤｕｔａＦａｂ」）。国際公開第２０１２／１６３５２０号の二重特異性抗体の各パラトープは、重鎖ＣＤＲ－Ｈ１及びＣＤＲ－Ｈ３並びに軽鎖ＣＤＲ－Ｌ２が第１のパラトープに寄与し、軽鎖ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３並びに重鎖ＣＤＲ－Ｈ２が第２のパラトープに寄与する、重鎖及び軽鎖ＣＤＲからのアミノ酸を含む。個々のパラトープを含む単一特異性抗体を、２つの独立したＦａｂライブラリーから独立してスクリーニングする。上記単一特異性抗体のアミノ酸配列が同定され、バイパラトピックＶＨ及びＶＬ対に融合される。ＶＥＧＦ及びＩＬ－６に特異的に結合する例示的なＦａｂフラグメントの一例は、国際公開第２０１２／１６３５２０号に開示されている。
ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ－Ｂに結合する改善された治療用抗体が必要とされている。
発明の概要
本発明は、二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体及びその使用方法に関する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内のＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、ＶＥＧＦパラトープが、抗体のＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含み、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープが、抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ酸残基を含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、ＶＬドメイン及びＶＨドメインの１つの同族対内にＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインの対がヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに同時に結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、ＶＬドメイン及びＶＨドメインの１つの同族対内にＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、ＶＥＧＦパラトープに含まれるアミノ酸のいずれもＰＤＧＦ－Ｂパラトープに含まれない抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、ＶＬドメイン及びＶＨドメインの１つの同族対内のＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、配列番号１１の可変重鎖ドメイン及び配列番号２１の可変軽鎖ドメインを有する抗体と同一のヒトＶＥＧＦ上のエピトープ及び同一のヒトＰＤＧＦ－Ｂ上のエピトープに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが６８℃以上の凝集開始温度を示す抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っている抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っている抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み；ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み；ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでおりＤ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでおりＡ１、Ｉ２、Ｈ６８、及びＥ６９を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従っている抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む抗体を提供する。一実施形態では、抗体は、（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２１の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従っている。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びにＶＬドメイン（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、抗体を提供する。
一実施形態では、本発明の抗体は、配列番号２２、配列番号２６又は配列番号３２のアミノ酸配列を含む軽鎖フレームワーク領域１（Ｌ－ＦＲ－１）を含む。
一態様では、本発明は、配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号３０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、配列番号３０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、抗体を提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、６８℃以上の凝集開始温度を示す、抗体を提供する。
本発明の一実施形態は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体フラグメントに関する。本発明の一実施形態は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する二重特異性抗体フラグメントに関する。一実施形態では、抗体フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２又はそれに由来する単鎖抗体から選択される。本発明の一実施形態は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合するＦａｂフラグメントに関する。本発明の一実施形態は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合するＦｖフラグメントに関する。
本発明の一実施形態は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する完全長ＩｇＧ抗体に関する。
一態様では、本発明は、本発明の抗体をコードする単離された核酸を提供する。
一態様では、本発明は、本発明の核酸を含む宿主細胞を提供する。
一態様では、本発明は、本発明の核酸を含む発現ベクターを提供する。
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を産生する方法であって、抗体が産生されるように本発明の宿主細胞を培養することを含む方法を提供する。
一態様では、本発明は、本発明の方法によって産生される抗体を提供する。
一態様では、本発明は、本発明の抗体及び薬学的に許容され得る担体を含む医薬製剤を提供する。
一態様では、本発明は、医薬として使用するための、一実施形態では血管疾患の処置に使用するための本発明の抗体を提供する。
一態様では、本発明は、医薬、一実施形態では血管疾患を処置するための医薬の製造における本発明の抗体又は本発明の医薬組成物の使用を提供する。
一態様では、本発明は、有効量の本発明の抗体又は本発明の医薬組成物を個体に投与することを含む、血管疾患を有する個体を処置する方法を提供する。
一態様において、本発明は、個体における血管新生を阻害する方法であって、血管新生を阻害するために有効量の本発明の抗体又は本発明の医薬組成物を個体に投与することを含む方法を提供する。
本発明によれば、二重特異性Ｆａｂフラグメントとして提供される場合であっても、その標的抗原に同時に結合することができる治療用抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体が提供される。さらに、本発明の抗体は、高い親和性、親水性、高い安定性並びに高いＶＥＧＦ１２１及びＶＥＧＦ１６５ブロッキング活性のような、その治療適用を可能にするいくつかの有益な特性を提供する。本発明の抗体は、眼への適用に適した粘度を有する高濃度液体製剤で提供することができる。本発明の抗体は、眼血管疾患の処置に適している。
本発明の抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体のＦａｂフラグメントの概略図。ＣＤＲアミノ酸の配置を含む同族ＶＨ／ＶＬ対の上面図が示されている（上の画像）。ＶＨドメインは灰色で示され、ＶＬドメインは白色で示される。さらに、ＣＤＲ領域の空間的配置が示されている。本発明の抗体のパラトープ領域が強調されており（下の画像）、ＶＥＧＦパラトープがＨ－ＣＤＲ２、Ｌ－ＣＤＲ１及びＬ－ＣＤＲ２の領域に配置され、ＰＤＧＦ－ＢパラトープがＨ－ＣＤＲ１、Ｈ－ＣＤＲ３及びＬ－ＣＤＲ２の領域に配置される。ＬＮ：ＶＬドメインのＮ末端；ＨＮ：ＶＨドメインのＮ末端； 本発明の例示的な抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体のＶＨドメインのアミノ酸配列。アミノ酸位置のＫａｂａｔナンバリング、並びにＣＤＲ及びＦＲ領域が示されている。ＶＥＧＦパラトープ及び実施例８で同定されたＰＤＧＦ－Ｂパラトープに寄与するアミノ酸位置を強調している。 本発明の例示的な抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体のＶＬドメインのアミノ酸配列。アミノ酸位置のＫａｂａｔナンバリング、並びにＣＤＲ及びＦＲ領域が示されている。ＶＥＧＦパラトープ及び実施例８で同定されたＰＤＧＦ－Ｂパラトープに寄与するアミノ酸位置を強調している。 実施例７で試験した、示された抗体のＶＥＧＦ１２１及びＶＥＧＦ１６５ブロッキング活性。
発明の詳細な説明
１．定義
本明細書で特に定義されていない限り、本発明に関連して使用される科学的及び技術的な用語は、当技術分野の当業者に一般的に理解される意味を有するものとする。さらに、文脈上特に必要とされない限り、単数形の用語は複数形を含み、複数形の用語は単数形を含むものとする。本開示の方法及び技術は、一般的に、当技術分野で周知の従来の方法に従って行われる。一般的に、本明細書中に記載されている生化学、酵素学、分子生物学、及び細胞生物学、微生物学、遺伝学、及びタンパク質及び核酸の化学、並びにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法並びに技術は、当技術分野でよく知られ、一般的に使用されているものである。
本明細書で特に定義されていない限り、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｏｆ）」という用語は、「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ ｏｆ）」という用語を含むものとする。
特定の値（例えば、温度、濃度、時間など）に関連して本明細書で使用される「約」という用語は、「約」という用語が指す特定の値の＋／－１％の変動を指すものとする。
本明細書において「抗体」という用語は、最も広い意味で使用されており、所望の抗原結合活性を示す限り、モノクローナル抗体、多重特異的抗体（例えば二重特異的抗体）、及び抗体フラグメントを含む多様な抗体構造を包含するが、これらに限られない。
「単離された」抗体とは、その自然環境の構成要素から分離されているものである。いくつかの実施形態では、抗体は、電気泳動（例えば、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点フォーカシング（ＩＥＦ）、キャピラリー電気泳動）又はクロマトグラフィー（例えば、イオン交換又は逆相ＨＰＬＣ）の方法によって決定される９５％超又は９９％超の純度に精製される。抗体純度の評価のための方法の総説については、例えば、Ｆｌａｔｍａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ．Ｂ ８４８：７９－８７（２００７）を参照されたい。
本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」という用語は、実質的に均質な抗体の集団から得られる抗体を指し、すなわち、集団を構成する個々の抗体が同一であり、及び／又は同一のエピトープと結合しているが、例えば、自然に生じる突然変異を含むか、又はモノクローナル抗体調製物の産生中に生じる可能性のあるバリアント抗体を除いて、そのようなバリアントは、一般的に微量で存在する。典型的には異なる決定基（エピトープ）に対して指向する異なる抗体を含むポリクローナル抗体製剤とは対照的に、モノクローナル抗体製剤のそれぞれのモノクローナル抗体は、１つの抗原上の単一の決定基に対して指向する。したがって、改変詞「モノクローナル」は、抗体の実質的に均一な集合から得られる抗体の特徴を示し、任意の特定の方法による抗体の産生を必要とするように解釈すべきではない。
「完全長抗体」、「インタクトな抗体」、及び「全抗体」という用語は、本明細書で、天然抗体構造と実質的に同様の構造を有するか、又は本明細書に定義されるＦｃ領域を含有する重鎖を有する抗体を指すように同義に使用される。
抗体の「クラス」は、その重鎖によって保有される定常ドメイン又は定常領域の型を指す。抗体には、次の５種類の主要なクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ及びＩｇＭが存在し、これらのうちのいくつかを、「サブクラス」（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に更に分けることができる。特定の実施形態では、抗体はＩｇＧ１アイソタイプである。特定の実施形態では、抗体は、Ｆｃ領域エフェクター機能を低下させるためのＰ３２９Ｇ、Ｌ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ変異を有するＩｇＧ１アイソタイプのものである。他の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ２アイソタイプのものである。特定の実施形態では、抗体は、ＩｇＧ４抗体の安定性を改善するためにヒンジ領域にＳ２２８Ｐ変異を有するＩｇＧ４アイソタイプのものである。免疫グロブリンの異なるクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γ及びμと呼ばれる。抗体の軽鎖は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２種類の１つに割り当てられてもよい。
用語「Ｆｃ領域」とは、本明細書では定常領域の少なくとも一部分を含有する免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。該用語は、天然配列Ｆｃ領域とバリアントＦｃ領域とを含む。一実施形態では、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、Ｃｙｓ２２６から、又はＰｒｏ２３０から、重鎖のカルボキシル末端までに及ぶ。本明細書で特に明記されない限り、Ｆｃ領域又は定常領域におけるアミノ酸残基のナンバリングは、Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１に記載される、ＥＵインデックスとも呼ばれる、ＥＵナンバリングシステムに従う。
「エフェクター機能」とは、抗体のＦｃ領域に起因する生物学的活性のことで、抗体のアイソタイプによって異なる。抗体エフェクター機能の例には、以下：Ｃ１ｑ結合及び補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）；Ｆｃ受容体結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面受容体（例えば、Ｂ細胞受容体）の下方制御；及びＢ細胞活性化が含まれる。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、抗原に対する抗体の結合に関与する抗体重鎖又は抗体軽鎖のドメインを指す。天然抗体の重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれＶＨ及びＶＬ）は、概して、類似の構造を有しており、各ドメインは、４つの保存されたフレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ ｒｅｇｉｏｎ：ＦＲ）と、３つの超可変領域（ｈｙｐｅｒｖａｒｉａｂｌｅ ｒｅｇｉｏｎ：ＨＶＲ）とを含む（例えば、Ｋｉｎｄｔ等のＫｕｂｙ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，６ｔｈ ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏ．，ｐａｇｅ ９１（２００７）を参照されたい）。本発明の抗体において、ＶＨドメイン及びＶＬドメインの単一の対、すなわち同族ＶＨ／ＶＬ対は、その２つの標的：ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する。
「ＤｕｔａＦａｂ」は、国際公開第２０１２／１６３５２０号に開示されている二重特異性抗体である。ＤｕｔａＦａｂでは、ＶＨドメインとＶＬドメインの単一の対が２つの異なるエピトープに特異的に結合し、一方のパラトープはＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含み、他方のパラトープはＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ残基を含む。ＤｕｔａＦａｂは、同族ＶＨ／ＶＬ対内に２つの重複しないパラトープを含み、２つの異なるエピトープに同時に結合し得る。ＤｕｔａＦａｂ及び単一特異性Ｆａｂフラグメントを含むライブラリーのスクリーニングによるそれらの作製方法は、国際公開第２０１２／１６３５２０号に開示されている。
「ヒト抗体」とは、ヒト若しくはヒト細胞により産生された抗体、又はヒト抗体レパートリーなどのヒト抗体をコードする配列を利用した非ヒト由来の抗体に対応するアミノ酸配列を有する抗体である。このヒト抗体の定義は、非ヒト抗原結合残基を含むヒト化抗体を明確に除外する。
「ヒトコンセンサスフレームワーク」は、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨフレームワーク配列の選択において、最も一般的に生じるアミノ酸残基を表すフレームワークである。一般に、ヒト免疫グロブリンＶＬ又はＶＨ配列の選択は、可変ドメイン配列のサブグループからである。一般に、配列のサブグループは、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，第５版，ＮＩＨ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ ９１－３２４２，Ｂｅｔｈｅｓｄａ ＭＤ（１９９１）、第１－３巻におけるようなサブグループである。一実施形態では、ＶＬについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるサブグループカッパＩである。一実施形態では、ＶＨについては、サブグループは、Ｋａｂａｔら（上記参照）におけるサブグループＩＩＩである。
「抗体フラグメント」とは、インタクトな抗体が結合する抗原に結合するインタクトな抗体の一部を含む、インタクトな抗体以外の分子である。抗体フラグメントの例には、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）２；ダイアボディ；線形抗体；一本鎖抗体分子（例えばｓｃＦｖ）；及び抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が含まれるが、これらに限られない。
「パラトープ」又は「抗原結合部位」とは、抗原を認識して抗原に結合する抗体の一部分を指し、本明細書では互換可能に使用される。パラトープは、Ｆｖ領域の三次構造において空間的に近接して配置された、抗体の重鎖及び軽鎖可変ドメインからの複数の個別のアミノ酸残基によって形成される。本発明の抗体は、１つの同族ＶＨ／ＶＬ対に２つの「重複しない」パラトープを含む。「重複しない」とは、２つのパラトープの一方に含まれるアミノ酸のいずれも他方のパラトープに含まれないことを意味する。
本明細書で使用される場合、「ＶＥＧＦパラトープ」は、ＶＥＧＦに結合するパラトープ又は抗原結合部位である。本発明の抗体のＶＥＧＦパラトープは、抗体のＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含む。
本明細書で使用される場合、「ＰＤＧＦ－Ｂパラトープ」は、ＰＤＧＦ－Ｂに結合するパラトープ又は抗原結合部位である。本発明の抗体のＰＤＧＦ－Ｂパラトープは、抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ酸残基を含む。
本明細書で使用される「ＶＥＧＦ」という用語は、特に示さない限り、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）などの哺乳類を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然ＶＥＧＦを指す。この用語は、「完全長」の未処理のＶＥＧＦだけでなく、細胞内での処理に起因する任意の形態のＶＥＧＦをも包含する。この用語はまた、ＶＥＧＦの自然発生的なバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントをも包含する。例示的なヒトＶＥＧＦ１２１のアミノ酸配列は、配列番号２３に示されている。
「抗ＶＥＧＦ抗体」及び「ＶＥＧＦに結合する抗体」という用語は、ＶＥＧＦを標的とした診断及び／又は治療剤として有用であるように、十分な親和性でＶＥＧＦと結合することができる抗体を指す。一実施形態では、無関係な非ＶＥＧＦタンパク質への抗ＶＥＧＦ抗体の結合の程度は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定されたＶＥＧＦへの抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＶＥＧＦに結合する抗体は、解離定数（ＫＤ）が１ｎＭ以下、又は０．１ｎＭ以下である。抗体が１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体はＶＥＧＦに「特異的に結合」すると言われる。
本明細書で使用される「ＰＤＧＦ－Ｂ」という用語は、特に示さない限り、霊長類（例えばヒト）及びげっ歯類（例えばマウス及びラット）などの哺乳類を含む、任意の脊椎動物源からの任意の天然ＰＤＧＦ－Ｂを指す。この用語は、「完全長」の、未処理のＰＤＧＦ－Ｂ及び細胞内での処理から生じる任意の形態のＰＤＧＦ－Ｂも包含する。この用語は、天然に存在するＰＤＧＦ－Ｂのバリアント、例えば、スプライスバリアント又は対立遺伝子バリアントも包含する。例示的なヒトＰＤＧＦ－Ｂのアミノ酸配列は、配列番号２４に示されている。
用語「抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体」及び「抗ＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体」とは、抗体が抗ＰＤＧＦ－Ｂの標的化において診断剤及び／又は治療剤として有用であるような充分な親和性を有して、抗ＰＤＧＦ－Ｂに結合可能である抗体を指す。一実施形態では、無関係な非抗ＰＤＧＦ－Ｂタンパク質への抗－抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体の結合の程度は、例えば表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって測定された抗ＰＤＧＦ－Ｂへの抗体の結合の約１０％未満である。特定の実施形態では、ＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、１０ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。抗体が１μＭ以下のＫＤを有する場合、抗体は抗ＰＤＧＦ－Ｂに「特異的に結合」すると言われる。
本発明の抗体は、「ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに同時に結合」し、これは、（ａ）ヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合した本発明の抗体ＦａｂフラグメントがヒトＶＥＧＦに（も）特異的に結合し、（ｂ）ヒトＶＥＧＦに結合した本発明の抗体ＦａｂフラグメントがヒトＰＤＧＦ－Ｂに（も）特異的に結合することを意味する。同時に結合することは、当技術分野で公知の方法で、例えば表面プラズモン共鳴によって評価され得る。
本明細書において使用する用語「相補性決定領域」又は「ＣＤＲ」は、配列が超可変で、抗原に接触する残基を含む、抗体の可変ドメインの各領域を指す。一般的に抗体は、６つのＣＤＲを含む：ＶＨドメインに３つ（ＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｈ３）、ＶＬドメインに３つ（ＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ２、ＣＤＲ－Ｌ３）。特に断りのない限り、本明細書では、ＣＤＲ残基及び可変ドメインの他の残基（例えば、ＦＲ残基）は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従って付番されている（Ｋａｂａｔ ｅｔ ａｌ．，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９９１）。
本明細書で使用する「フレームワーク」又は「ＦＲ」は、ＣＤＲ残基以外の可変ドメインのアミノ酸残基を指す。可変ドメインのフレームワークは一般的に、４つのフレームワークドメイン：ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４からなる。したがって、ＣＤＲ及びＦＲアミノ酸配列は、一般に、以下の順番で現れる。（ａ）ＶＨドメイン中：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｈ１－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｈ２－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｈ３－ＦＲ４；及び（ｂ）ＶＬドメイン中：ＦＲ１－ＣＤＲ－Ｌ１－ＦＲ２－ＣＤＲ－Ｌ２－ＦＲ３－ＣＤＲ－Ｌ３－ＦＲ４。
Ｋａｂａｔナンバリングシステムによれば、本明細書で使用される場合、フレームワーク及びＣＤＲ領域は、可変ドメインの以下の領域に位置する。
Figure 2023520414000001
本明細書で言及されるＫａｂａｔナンバリングシステムによるアミノ酸位置は、本発明の抗体のアミノ酸配列と並べて図２に示されている。アミノ酸配列内のある特定の位置のアミノ酸への言及は、それぞれのアミノ酸及びアミノ酸位置を述べることによって当技術分野で周知のように本明細書でなされ、例えば、「Ｅ２」は、それぞれの抗体ドメインのアミノ酸配列のＫａｂａｔ位置２に位置するグルタミン酸残基を指す。
「親和性」は、分子（例えば、抗体）とその結合パートナー（例えば、抗原）との単一の結合部位の間の非共有性相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体及び抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子Ｘの、そのパートナーＹに対する親和性は一般に、解離定数（ＫＤ）によって表し得る。親和性は、本明細書に記載するものを含め、当技術分野で一般的な方法によって測定することができる。結合親和性を測定するための具体的な説明的、例示的な実施形態は、本明細書に記載されている。
「エピトープ」との用語は、抗体が結合する相手である、タンパク質性又は非タンパク質性のいずれかの、抗原上の部位を示す。エピトープは、連続したアミノ酸ストレッチ部位から形成される場合（線状エピトープ）、又は非連続のアミノ酸を含む場合（構造的エピトープ）の両方があり、例えば、抗原の折り畳みに起因して（すなわち、タンパク質性抗原の三次折り畳みによって）空間的に近接して形成される。線状エピトープは、典型的には、タンパク質性抗原を変性剤に曝露した後も依然として抗体によって結合されているが、コンフォメーションエピトープは、典型的には、変性剤での処理により破壊される。エピトープは、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個、少なくとも６個、少なくとも７個、又は８～１０個のアミノ酸を、独特な空間的構造で含む。
特定のエピトープに結合する抗体（すなわち、同じエピトープに結合する抗体）のスクリーニングは、例えば、限定されないが、アラニン・スキャニング、ペプチドブロット（Ｍｅｔｈ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２４８（２００４）４４３－４６３）、ペプチド切断分析、エピトープ切除、エピトープ抽出、抗原の化学的修飾（Ｐｒｏｔ．Ｓｃｉ．９（２０００）４８７－４９６を参照）、及びクロスブロッキング（「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ．，ＮＹを参照）などの、当該技術分野で慣用の方法を用いて行われ得る。
抗原構造系抗体プロファイリング（Ａｎｔｉｇｅｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ－ｂａｓｅｄ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＡＳＡＰ）は、変性促進型プロファイリング（Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎ－Ａｓｓｉｓｔｅｄ Ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ：ＭＡＰ）としても知られ、ＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する多数のモノクローナル抗体を、化学的又は酵素的に修飾された抗原表面に対する多数の抗体のそれぞれの結合プロファイルに基づいて区分けすることができる（例えばＵＳ ２００４／０１０１９２０参照）。区分けされた各抗体は同じエピトープに結合するが、このエピトープは、他の区分けで表されるエピトープとは明確に異なることがあるか、又は部分的に重なっている独特なエピトープであり得る。
また、競合結合は、抗体が本発明の参照抗体と同じＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂのエピトープに結合するか、又は結合について競合するかを容易に決定するために使用することができる。例えば、参照抗体と「同じＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ－Ｂ上のエピトープに結合する抗原」は、それぞれの競合アッセイにおいて、参照抗体のその抗原に対する結合を５０％以上ブロックする抗体を指し、逆に、参照抗体は、それぞれの競合アッセイにおいて、抗体のその抗原に対する結合を５０％以上ブロックする。また例えば、抗体が参照抗体と同じエピトープに結合するかどうかを決定するために、参照抗体を飽和状態でＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂに結合させることができる。過剰な参照抗体を除去した後、問題の抗体がＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂに結合する能力が評価される。問題の抗体が参照抗体の飽和結合後にＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂに結合できる場合、対象の抗体は、参照抗体とは異なるエピトープに結合すると結論付けることができる。しかし、問題の抗体が参照抗体の飽和結合後にＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂに結合できない場合、対象の抗体は、参照抗体が結合するエピトープと同じエピトープに結合する可能性がある。問題の抗体が同じエピトープに結合しているのか、又は立体的な理由で結合が妨害されているだけなのかを確認するためには、慣用的な実験を用いることができる（例えばペプチド変異や、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、表面プラズモン共鳴、フローサイトメトリー、又は当技術分野で利用可能なその他の定量的又は定性的な抗体結合アッセイを用いた結合分析など）。このアッセイは、２つのセットアップ、すなわち、両方の抗体が飽和抗体である状態で実施されるべきである。両方の設定において、第１の（飽和）抗体のみがＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂに結合できる場合、対象の抗体と参照抗体は、ＶＥＧＦ又はＰＤＧＦ－Ｂへの結合をめぐって競合すると結論付けることができる。
いくつかの実施形態では、競合結合アッセイで測定して、一方の抗体の１、５、１０、２０又は１００倍過剰が他方の結合を少なくとも５０％、少なくとも７５％、少なくとも９０％、更には９９％以上阻害する場合、２つの抗体は同じ又は重複するエピトープに結合するとみなされる。（例えば、Ｊｕｎｇｈａｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．５０（１９９０）１４９５－１５０２を参照）。
いくつかの実施形態では、一方の抗体の結合を低下又は排除する抗原のアミノ酸変異のうち、実質的に全てのアミノ酸変異が他方の抗体の結合も低下又は排除する場合、２つの抗体は同じエピトープに結合するとみなされる。２つの抗体は、一方の抗体の結合を減少又は排除するアミノ酸変異のサブセットのみが、他方の抗体の結合を減少又は排除する場合、「重複エピトープ」を有するとみなされる。
参照ポリペプチド配列に対する「アミノ酸配列の同一性率（％）」は、アラインメントの目的で、配列をアラインメントし、最大の配列同一性率を達成するために、必要ならばギャップを導入した後、配列同一性の一部として任意の保存的置換を考慮せずに、参照ポリペプチド配列中のアミノ酸残基と同一である、候補配列におけるアミノ酸残基の割合であると定義される。アミノ酸配列同一性率を決定するためのアラインメントは、当該技術分野の技術の範囲内にある種々の様式で、例えば、公的に入手可能なコンピュータソフトウェア、例えば、ＢＬＡＳＴ、ＢＬＡＳＴ－２、Ｃｌｕｓｔａｌ Ｗ、Ｍｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェア又はＦＡＳＴＡプログラムパッケージを用いて達成することができる。当業者であれば、比較される配列の全長にわたって最大のアラインメントを達成するために必要な任意のアルゴリズムを含む、配列のアラインメントのための適切なパラメータを決定することができる。あるいは、同一性率の値は、配列比較コンピュータプログラムＡＬＩＧＮ－２を使用して生成することができる。ＡＬＩＧＮ－２配列比較コンピュータプログラムは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．によって作成されており、ソースコードは、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｏｆｆｉｃｅ（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ Ｄ．Ｃ．，２０５５９）のユーザドキュメンテーションにファイルされており、Ｕ．Ｓ．Ｃｏｐｙｒｉｇｈｔ Ｒｅｇｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｎｏ．ＴＸＵ５１００８７の下に登録されており、かつ、国際公開第２０００／００５３１９号に記載されている。
しかしながら、別段の指定がない限り、本明細書での目的のために、アミノ酸配列同一性％の値は、ＦＡＳＴＡパッケージバージョン３６．３．８ｃのｇｇｓｅａｒｃｈプログラムを使用するか、又はその後にＢＬＯＳＵＭ５０比較マトリックスを用いて生成される。ＦＡＳＴＡプログラムパッケージは、Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ ａｎｄ Ｄ．Ｊ．Ｌｉｐｍａｎ（１９８８），「Ｉｍｐｒｏｖｅｄ Ｔｏｏｌｓ ｆｏｒ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ」ＰＮＡＳ ８５：２４４４－２４４８；Ｗ．Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ（１９９６）「Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｔｅｉｎ ｓｅｑｕｅｎｃｅ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ」Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：２２７－２５８；及び、Ｐｅａｒｓｏｎ ｅｔ．ａｌ．（１９９７）Ｇｅｎｏｍｉｃｓ ４６：２４－３６により記載されており、ｗｗｗ．ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｆａｓｔａ＿ｄｏｗｎ．ｓｈｔｍｌ ｏｒ ｗｗｗ．ｅｂｉ．ａｃ．ｕｋ／Ｔｏｏｌｓ／ｓｓｓ／ｆａｓｔａから公に利用可能である。あるいは、ｇｇｓｅａｒｃｈ（グローバルタンパク質：タンパク質）プログラム及びデフォルトオプション（ＢＬＯＳＵＭ５０；ｏｐｅｎ：－１０；ｅｘｔ：－２；Ｋｔｕｐ＝２）を使用して、ｆａｓｔａ．ｂｉｏｃｈ．ｖｉｒｇｉｎｉａ．ｅｄｕ／ｆａｓｔａ＿ｗｗｗ２／ｉｎｄｅｘ．ｃｇｉでアクセス可能な公共サーバを使用して配列を比較し、ローカルではなくグローバルなアライメントを確実に実行することができる。アミノ酸同一性パーセントは、アウトプットアラインメントヘッダーで与えられる。
「核酸分子」又は「ポリヌクレオチド」という用語は、ヌクレオチドのポリマーを含む任意の化合物及び／又は物質を含む。各ヌクレオチドは、塩基で構成され、具体的には、プリン塩基又はピリミジン塩基（すなわち、シトシン（Ｃ）、グアニン（Ｇ）、アデニン（Ａ）、チミン（Ｔ）又はウラシル（Ｕ））、糖（すなわち、デオキシリボース又はリボース）、及びリン酸基で構成される。多くは、核酸分子は、塩基配列によって記述され、ここで、当該塩基は、核酸分子の一次構造（線形構造）を表す。塩基の配列は、典型的には、５’から３’へと表される。本明細書において、核酸分子という用語は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、例えば、相補性ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）及びゲノムＤＮＡ、リボ核酸（ＲＮＡ）、特に、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）、ＤＮＡ又はＲＮＡの合成形態、及びこれらの分子の２つ以上を含む混合ポリマーを包含する。核酸分子は、線形又は環状であってもよい。これに加え、核酸分子という用語は、センス鎖及びアンチセンス鎖、並びに一本鎖形態及び二本鎖形態の両方を含む。さらに、本明細書で記載される核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド又は天然に存在しないヌクレオチドを含むことができる。天然に存在しないヌクレオチドの例としては、誘導体化された糖若しくはリン酸骨格結合を有する修飾ヌクレオチド塩基又は化学的に修飾された残基が挙げられる。核酸分子は、例えば、宿主又は患者において、インビトロ及び／又はインビボで本発明の抗体の直接的な発現のためのベクターとして適したＤＮＡ分子及びＲＮＡ分子も包含する。そのようなＤＮＡ（例えば、ｃＤＮＡ）又はＲＮＡ（例えば、ｍＲＮＡ）ベクターは、修飾されていなくてもよく、又は修飾されていてもよい。例えば、ｍＲＮＡは、インビボで抗体を産生するために対象にｍＲＮＡを注入することができるように、ＲＮＡベクターの安定性及び／又はコードされた分子の発現を高めるように化学修飾されてもよい（例えば、Ｓｔａｄｌｅｒ ｅｒｔ ａｌ，Ｎａｔｕｒｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ２０１７、２０１７年６月１２日にオンラインで公開、ｄｏｉ：１０．１０３８／ｎｍ．４３５６又は欧州特許第２１０１８２３Ｂ１号明細書を参照）。
「単離された」核酸とは、自然環境の構成要素から切り離されている核酸分子のことである。単離された核酸には、通常核酸分子を含む細胞内に含まれる核酸分子が含まれるが、核酸分子は、染色体外、又は天然の染色***置とは異なる染色***置に存在する。
抗体を「コードする単離された核酸」とは、抗体の重鎖及び軽鎖（又はそのフラグメント）をコードする１つ又は複数の核酸分子を指し、そのような核酸分子を単一のベクター又は別個のベクターに含み、そのような核酸分子が宿主細胞の１つ又は複数の位置に存在する。
「ベクター」という用語は、本明細書では、連結している別の核酸を増殖可能な核酸分子を指す。この用語には、自己複製する核酸構造としてのベクターだけでなく、ベクターが導入された宿主細胞のゲノムに組み込まれたベクターも含まれる。特定のベクターは、作動可能に連結された核酸の発現を指示することができる。そのようなベクターを本明細書では、「発現ベクター」と呼ぶ。
「宿主細胞」、「宿主細胞株」、及び「宿主細胞培養」という用語は、互換可能に使用され、外因性核酸が導入された細胞を指し、そのような細胞の子孫も含まれる。宿主細胞には、「形質転換体」及び「形質転換細胞」が含まれ、これらは、継代数によらず、一次形質転換細胞及びそれに由来する子孫を含む。子孫は、親細胞と完全に同一の核酸含量でない場合があるが、突然変異を含んでもよい。元々の形質転換された細胞についてスクリーニングされるか若しくは選択されるのと同じ機能、又は生物活性を有する突然変異型の後代が本発明に含まれる。
「医薬組成物」又は「医薬製剤」という用語は、調製物に含まれる有効成分の生物活性が有効になるような形態をしており、かつ、医薬組成物が投与されるであろう対象に対して容認できないほど毒性のある追加の成分を含まない、調製物を指す。
「薬学的に許容され得る担体」は、有効成分以外の医薬組成物又は製剤中の成分であって、対象にとって非毒性である成分を指す。薬学的に許容され得る担体には、緩衝剤、賦形剤、安定剤、又は防腐剤が含まれるが、これらに限定されない。
薬剤、例えば、医薬組成物の「有効量」は、所望の治療結果又は予防結果を達成するために必要な投薬量及び所要期間で有効な量を指す。
「個体」又は「対象」は、哺乳動物である。哺乳動物としては、家畜動物（例えば、ウシ、ヒツジ、ネコ、イヌ及びウマ）、霊長類（例えば、ヒト及び非ヒト霊長類、例えば、サル）、ウサギ及びげっ歯類（例えば、マウス及びラット）が含まれるが、これらに限定されない。ある特定の実施形態では、個体又は対象は、ヒトである。
本明細書で使用される場合、「処置（ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）」（及びその文法的な変化形、例えば、「処置（ｔｒｅａｔ）する」又は「処置すること（ｔｒｅａｔｉｎｇ）」）は、処置される個体において疾患の本来の経過を変える試行における臨床的介入を指し、予防のために、又は臨床病理の経過の間に行うことができる。処置の所望の効果としては、疾患の発症又は再発を予防すること、症状の軽減、疾患の任意の直接的又は間接的な病理学的結果の減弱、転移を予防すること、疾患進行率を低下させること、病状の寛解又は緩和、及び回復又は改良された予後が挙げられる。いくつかの実施形態において、本発明の抗体は、疾患の発症を遅延させるため、又は疾患の進行を遅延させるために使用される。
本明細書で使用される「眼疾患」という用語は、病理学的血管新生及び／又は萎縮に関連する任意の眼疾患を含む。眼疾患は、網膜又は角膜などの眼組織の構造内への新生血管の増殖及び／又は浸潤の変化又は非調節によって特徴付けることができる。眼疾患は、網膜組織（光受容体並びにその下の網膜色素上皮（ＲＰＥ）及び脈絡毛細管板）の萎縮によって特徴付けることができる。非限定的な眼疾患には、例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性、黄斑浮腫、ＤＭＥ（例えば、焦点、非中心ＤＭＥ、及び、びまん性、中心関与ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（例えば、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）（例えば、中心（ＣＲＶＯ）及び分岐（ＢＲＶＯ）形態）、ＣＮＶ（例えば、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）、病的近視、フォンヒッペル・リンダウ病、眼のヒストプラズマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノーリー病、骨粗鬆症性偽神経膠腫症候群（ＯＰＰＧ）に関連する網膜異常、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫状増殖、黄斑血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、限定されないが以下を含む網膜炎：ＣＭＶ網膜炎、眼黒色腫、網膜芽細胞腫、結膜炎（例えば、感染性結膜炎及び非感染性（例えば、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒丸症（レーバー先天性黒丸症又はＬＣＡとしても知られる）、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（例えば、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラズマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、シェーグレン病、並びに、疾患又は疾患が眼血管新生、血管漏出、及び／又は網膜浮腫若しくは網膜萎縮に関連する他の眼疾患を含む。さらなる例示的な眼疾患には、網膜分離症（網膜神経感覚層の異常な***）、ルベオーシス（隅角の血管新生）に関連する疾患、及び線維血管組織又は線維組織の異常な増殖によって引き起こされる疾患（増殖性硝子体網膜症のすべての形態を含む）が含まれる。角膜血管新生に関連する例示的な疾患には、限定するものではないが、流行性角結膜炎、ビタミンＡ欠乏症、コンタクトレンズオーバーウェア、アトピー性角膜炎、上輪部角膜炎、翼状片、乾性角膜炎、シェーグレン症候群、酒さ性ざ瘡（ａｃｎｅ ｒｏｓａｃｅａ）、フリクテン症（ｐｈｙｌｅｃｔｅｎｕｌｏｓｉｓ）、梅毒、マイクバクテリア感染症、脂肪変性症、化学的火傷、細菌性潰瘍、真菌性潰瘍、単純ヘルペス感染症、帯状疱疹感染症、原虫感染症、カポシ肉腫、モーレン潰瘍、テリエン周辺角膜変性、周辺角質溶解、リウマチ性関節炎、全身性紅斑、多発性動脈炎、外傷、ウェゲナーサルコイドーシス、強膜炎、スティーブンジョンソン症候群、類天疱瘡、角膜放射状切開、及び角膜移植後拒絶反応が含まれる。血管漏出の増加、動脈瘤及び毛細血管脱落を含む、脈絡膜新生血管形成及び網膜血管系の欠陥に関連する例示的な疾患には、糖尿病性網膜症、黄斑変性、鎌状赤血球貧血、サルコイド、梅毒、弾性線維性仮性黄色腫、パジェット病、静脈閉塞、動脈閉塞、頸動脈閉塞性疾患、慢性ブドウ膜炎／硝子体炎、マイコバクテリア感染症、ライム病、全身性エリテマトーデス、未熟児網膜症、網膜浮腫（黄斑浮腫を含む）、イールズ病、ベーチェット病、網膜炎又は脈絡膜炎を引き起こす感染症（例えば、多焦点脈絡膜）、推定眼ヒストプラズマ症、ベスト病（硝子体黄斑変性）、近視、視神経乳頭、扁平部炎、網膜剥離（例えば、慢性網膜剥離）、過粘度症候群、トキソプラスマ症、外傷及びレーザー後合併症が含まれるが、これらに限定されない。網膜組織の萎縮に関連する例示的な疾患（光受容体及びその下のＲＰＥ）には、萎縮性又は非滲出性ＡＭＤ（例えば、地図状萎縮又は進行性乾燥型ＡＭＤ）、黄斑萎縮（例えば、新生血管形成及び／又は地図状萎縮に関連する萎縮）、糖尿病性網膜症、シュタルガルト病、Ｓｏｒｓｂｙ Ｆｕｎｄｕｓジストロフィー、網膜分離症及び網膜色素変性症が含まれるが、これらに限定されない。
「パッケージ添付文書」との用語は、治療製品の市販パッケージに通常含まれる指示を指すために用いられ、このような治療製品に関する適応症、使用、投薬量、投与、併用療法、禁忌及び／又は警告に関する情報を含む。
２．本発明の実施形態の詳細な記載
一態様において、本発明は、部分的には、治療適用のための二重特異性抗体の提供に基づく。ある特定の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体が提供される。本発明の抗体は、例えば、血管疾患、例えば眼血管疾患の診断又は処置に有用である。
Ａ．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する例示的抗体
一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。一態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する単離された抗体が提供される。一態様では、本発明は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体を提供する。
ある特定の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、ＶＬドメイン及びＶＨドメインの１つの同族対内にＶＥＧＦパラトープ（すなわち、ＶＥＧＦに結合する抗原結合部位）及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープ（すなわち、ＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗原結合部位）を含み、
● ＶＥＧＦパラトープは、抗体のＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含み、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープは、抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ酸残基を含む；及び／又は
● 可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインとの対は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに同時に結合する；及び／又は
● ＶＥＧＦパラトープに含まれるアミノ酸のいずれもＰＤＧＦ－Ｂパラトープに含まれない；及び／又は
● 配列番号１１の可変重鎖ドメイン及び配列番号２１の可変軽鎖ドメインを有する抗体と同一のヒトＶＥＧＦ上のエピトープ及び同一のヒトＰＤＧＦ－Ｂ上のエピトープに結合する；及び／又は
● 抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する；及び／又は
● 抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、６８℃以上の凝集開始温度を示す。
別の態様では、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメイン；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメイン。
別の態様では、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメイン；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う）。
別の態様では、本発明は、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含む抗体を提供し、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従う。一実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む。
別の態様では、本発明は、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含む抗体を提供し、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従う。一実施形態では、抗体は、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む。
別の態様において、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● 配列番号１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は
● 配列番号１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は
● 配列番号２８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は
● 配列番号２８のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン。
別の態様において、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列に対して少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメイン；又は
● （ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメイン；又は
● （ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメイン；又は
● （ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う）。
別の態様では、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む抗体であって、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含み、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含んでおり、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従っている、抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むアミノ酸残基ＦＲ３を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含む抗体であって、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従っており、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む抗体を提供する。
別の態様において、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン；又は
● （ａ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン；又は
● （ａ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン；又は
● （ａ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号３１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメイン。
別の態様において、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号１１の位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２１の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメイン；又は
● （ａ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号１１の位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２５の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメイン；又は
● （ａ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２８の位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２５の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメイン；又は
● （ａ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２８の位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号３１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号３１の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメイン（ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う）。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む抗体であって、（ａ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１個～１５個、１個～１０個又は１個～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７２、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ｉ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、（ａ）１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び、１～１５個、１～１０個、又は１～５個のアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、抗体を提供する。
別の態様では、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● 配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメイン；又は
● 配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメイン；又は
● 配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメイン；又は
● 配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメイン。
別の態様では、本発明は、以下を含む抗体を提供する：
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む；又は
● （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｇ）配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む。
一態様において、本発明は、配列番号１１又は配列番号２８のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＨドメインを含む抗体を提供する。ある特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＨ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含むヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する能力を保持する。ある特定の態様では、配列番号１１又は配列番号２８において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。ある特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。特定の態様では、ＶＨは、ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３又は配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含む。
一態様において、本発明は、配列番号２１、配列番号２５又は配列番号３１のアミノ酸配列に対して少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％又は１００％の配列同一性を有するＶＬドメインを含む抗体を提供する。ある特定の態様では、少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％の同一性を有するＶＬ配列は、参照配列と比較して置換（例えば、保存的置換）、挿入又は欠失を含むが、その配列を含むヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する能力を保持する。ある特定の態様では、配列番号２１、配列番号２５又は配列番号３１において合計１～１０個のアミノ酸が置換、挿入及び／又は欠失されている。ある特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、ＣＤＲの外側の領域で（即ち、ＦＲで）生じる。特定の態様では、ＶＬは、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含む。
別の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、上に提供される態様のいずれかのＶＨ配列及び上に提供される態様のいずれかＶＬ配列を含む抗体が提供される。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号１１及び配列番号２１のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号１１及び配列番号２５のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号２８及び配列番号２５のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。一態様では、抗体は、それぞれ配列番号２８及び配列番号３１のＶＨ及びＶＬ配列を含み、これにはそれらの配列の翻訳後修飾が含まれる。
別の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体が提供される。
別の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体が提供される。
別の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体が提供される。
別の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、配列番号３０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体が提供される。
別の態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３の軽鎖アミノ酸配列を含む抗体が提供される。
本発明のさらなる態様では、上記態様のいずれかによるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体はモノクローナル抗体である。一態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、抗体フラグメント、例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、ｓｃＦｖ、ダイアボディ、又はＦ（ａｂ’）２フラグメントである。別の態様では、抗体は、完全長抗体である。
さらなる態様では、上記態様のいずれかによるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、以下のセクション１～７に記載されるように、任意の特徴を単独で又は組み合わせて組み込むことができる。
１．抗体親和性
特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、１ｎＭ以下、又は０．１ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）でＶＥＧＦに結合する。特定の実施形態では、ＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、１μＭ以下、１００ｎＭ以下、又は１０ｎＭ以下の解離定数（ＫＤ）を有する。
一態様では、ＫＤは、実施例３に記載のＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）表面プラズモン共鳴アッセイを使用して測定される。
例えば、ＶＥＧＦに結合する抗体のＫＤは、約１０応答単位（ＲＵ）でＣ１チップ上の固定化ＶＥＧＦ１２１を用いて２５°Ｃで実施されるＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－２０００又はＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）－３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を使用するアッセイで測定される。動態測定のために、Ｆａｂの２倍連続希釈物（１．２～１００ｎＭ）をＨＢＳ－Ｐ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．４、０．０５％界面活性剤Ｐ２０）中に２５°Ｃで約３０μｌ／分の流速で注入する。会合速度（ｋｏｎ）及び解離速度（ｋｏｆｆ）を、会合センサグラム及び解離センサグラムを同時に適合することによって、単純１対１Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデル（ＢＩＡＣＯＲＥ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ Ｓｏｆｔｗａｒｅ第３．２版）を使用して計算する。平衡解離定数（ＫＤ）は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として計算される。例えば、ＣｈｅｎらＪ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２９３：８６５－８８１（１９９９）を参照されたい。
２．抗体フラグメント
ある特定の態様では、本明細書に提供される抗体は、抗体フラグメントである。
一態様では、抗体フラグメントは、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、又はＦ（ａｂ’）２フラグメント、特にＦａｂフラグメントである。無傷の抗体をパパイン消化すると、重鎖及び軽鎖の可変ドメイン（それぞれ順にＶＨ及びＶＬ）に加えて、軽鎖の定常ドメイン（ＣＬ）及び重鎖の第１定常ドメイン（ＣＨ１）もそれぞれが含む、２つの同一の抗原結合フラグメント（いわゆる「Ｆａｂ」フラグメント）が得られる。よって「Ｆａｂフラグメント」とは、ＶＬドメイン及びＣＬドメインを含む軽鎖と、ＶＨドメイン及びＣＨ１ドメインを含む重鎖フラグメントを有する抗体フラグメントのことである。「Ｆａｂ’フラグメント」は、抗体ヒンジ領域から１つ以上のシステインを含むＣＨ１ドメインのカルボキシ末端にて、残基を添加することによって、Ｆａｂフラグメントとは異なる。Ｆａｂ’－ＳＨとは、定常ドメインのシステイン残基（複数価）が遊離チオール基を保持するＦａｂ’フラグメントである。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位（２つのＦａｂフラグメント）と、Ｆｃ領域の一部とを有するＦ（ａｂ’）２フラグメントが得られる。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が長くなったＦａｂ及びＦ（ａｂ’）２フラグメントの説明については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照のこと。
抗体フラグメントは、限定されないが、本明細書に記載される、インタクト抗体のタンパク質分解による消化、及び組み換え宿主細胞（例えば、大腸菌、ＣＨＯ）による組換え産生を含む種々の技術によって作製することができる。
３．熱安定性
本明細書で提供される抗体は、優れた熱安定性を示す。ある特定の実施形態では、本明細書中に提供される抗体のＦａｂフラグメントは、６８°Ｃを超える凝集開始温度を示す。
４．ライブラリー由来の抗体
一部の態様では、本明細書に提供される抗体はライブラリーから得られる。本発明の抗体は、１つ以上の所望の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングすることによって単離され得る。コンビナトリアルライブラリをスクリーニングするための方法は、例えば、Ｌｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｎａｔｕｒｅ Ｒｅｖｉｅｗｓ １６：４９８－５０８（２０１６）に総説がある。例えば、ファージディスプレイライブラリーを産生し、所望の結合特性を有する抗体についてかかるライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野で知られている。このような方法は、例えば、Ｆｒｅｎｚｅｌ等のｍＡｂｓ８：１１７７－１１９４（２０１６）；Ｂａｚａｎ等のＨｕｍａｎ Ｖａｃｃｉｎｅｓ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ ８：１８１７－１８２８（２０１２）及びＺｈａｏ等のＣｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ３６：２７６－２８９（２０１６）及びＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍ等のＭｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ１７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ等の編集、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００１）及びＭａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ２４８：１６１－１７５（Ｌｏの編集、Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，２００３）に見られる。
一部のファージディスプレイ法において、ＶＨ遺伝子及びＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって個別にクローニングされ、ファージライブラリーにおいて無作為に組み換えられ、次いで、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ａｎｎｕａｌ Ｒｅｖｉｅｗ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １２：４３３－４５５（１９９４）に記載のように、抗原結合ファージについてスクリーニングすることができる。ファージは、典型的には、抗体フラグメントを一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）フラグメント又はＦａｂフラグメントのいずれかとしてディスプレイする。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築する必要なく、免疫原に対する高親和性抗体を与える。代替的に、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ｉｎ ＥＭＢＯ Ｊｏｕｒｎａｌ １２：７２５－７３４（１９９３）によって記載されるように、ナイーブなレパートリーをクローン化し（例えば、ヒトから）、免疫化することなく、非自己及び更には自己抗原の広範囲に対する単一の抗体源を得ることができる。最終的に、ナイーブライブラリーはまた、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ ｉｎ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２２７：３８１－３８８（１９９２）により記載されるように、再整列していないＶ遺伝子セグメントを幹細胞からクローニングすること、及びランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変性のＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再整列を達成することによって、合成により作製することができる。ヒト抗体ファージライブラリーを説明する特許刊行物には、例えば、以下が含まれる：米国特許第５，７５０，３７３号、同第７，９８５，８４０号、同第７，７８５，９０３号及び同第８，６７９，４９０号、並びに米国特許出願公開第２００５／００７９５７４号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０２３７７６４号及び同第２００７／０２９２９３６号。
所望の活性又は複数の活性を有する抗体についてコンビナトリアルライブラリをスクリーニングするための当該技術分野で知られている方法のさらなる例には、リボソーム及びｍＲＮＡディスプレイ、並びに細菌、哺乳動物細胞、昆虫細胞又は酵母細胞における抗体ディスプレイ及び選択のための方法が含まれる。酵母表面ディスプレイのための方法は、例えば、Ｓｃｈｏｌｌｅｒ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ５０３：１３５－５６（２０１２）及びＣｈｅｒｆ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｂｉｏｌｏｇｙ １３１９：１５５－１７５（２０１５）並びにＺｈａｏ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ８８９：７３－８４（２０１２）に概説がある。リボソームディスプレイのための方法は、例えば、Ｈｅ ｅｔ ａｌ．Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ２５：５１３２－５１３４（１９９７）ａｎｄ ｉｎ Ｈａｎｅｓ ｅｔ ａｌ、ＰＮＡＳ９４：４９３７－４９４２（１９９７）に記載される。
ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体又は抗体フラグメントは、本明細書ではヒト抗体又はヒト抗体フラグメントとみなされる。
５．多重特異性抗体
ある特定の態様では、本明細書で提供される抗体は多重特異性抗体である。多重特異性抗体は、少なくとも２つの異なる部位、すなわち、異なる抗原上の異なるエピトープ又は同じ抗原上の異なるエピトープに対して結合特異性を有するモノクローナル抗体である。ある特定の態様では、多重特異性抗体は３つ以上の結合特異性を有する。
本明細書で提供される抗体を含む３つ以上の結合特異性を有する多重特異性抗体は、同じ抗原特異性の１つ又は複数の結合アームにドメインクロスオーバーを持つ非対称の形で、すなわちＶＨ／ＶＬドメイン（例えば、国際公開第２００９／０８０２５２号及び国際公開第２０１５／１５０４４７号を参照）、ＣＨ１／ＣＬドメイン（国際公開第２００９／０８０２５３号を参照）又は完全なＦａｂアーム（国際公開第２００９／０８０２５１号、国際公開第２０１６／０１６２９９号を参照、Ｓｃｈａｅｆｅｒ ｅｔ ａｌ，ＰＮＡＳ，１０８（２０１１）１１８７－１１９１、及びＫｌｅｉｎ ａｔ ａｌ．，ＭＡｂｓ ８（２０１６）１０１０－２０も参照）を交換することによっても提供され得る。多重特異性抗体の様々なさらなる分子形式が当技術分野で知られており、本明細書に含まれる（例えばＳｐｉｅｓｓ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｌ ６７（２０１５）９５－１０６参照）。
６．抗体バリアント
ある特定の態様では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列バリアントが企図される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を変化させることが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列バリアントは、抗体をコードするヌクレオチド配列中に適正な修飾を導入することによって、又はペプチド合成によって調製されてもよい。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基からの欠失、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基への挿入、及び／又は抗体のアミノ酸配列内の残基の置換が挙げられる。欠失、挿入及び置換の任意の組み合わせは、最終コンストラクトが、所望の特徴（例えば、抗原結合）を有する限り、最終コンストラクトに到達するように行うことができる。
ある特定の態様では、１つ又は複数のアミノ酸置換を有する抗体バリアントが提供される。置換変異誘発に関心のある部位には、ＣＤＲ及びＦＲが含まれる。保存的置換は、以下の表において、「好ましい置換」の見出しの下に示される。より実質的な変化は、表１において、「例示的な置換」の見出しの下に提供され、またアミノ酸側鎖クラスを参照して以下に更に記載されるとおりである。目的の抗体中にアミノ酸置換を導入することができ、その産物を、所望の活性、例えば、保持／改善された抗原結合、減少した免疫原性、又は改善されたＡＤＣＣ若しくはＣＤＣについてスクリーニングする。
Figure 2023520414000002
アミノ酸は、一般的な側鎖特性に従って分類され得る。
（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
（５）鎖配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；
（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを伴うことになる。
ある種の置換バリアントは、親抗体（例えば、ヒト化抗体又はヒト抗体）の１つ以上の超可変領域残基を置換することを含む。一般に、さらなる試験ために選択される結果として生じるバリアント（複数可）は、親抗体と比較して特定の生物学的特性（例えば、親和性の増加、免疫原性の低減）の修正（例えば、改善）を有し、かつ／又は実質的に保持された親抗体の特定の生物学的特性を有する。例示的な置換バリアントは、親和性成熟した抗体であり、例えば、本明細書に記載されるようなファージディスプレイに基づく親和性成熟技術を用い、簡便に作製され得る。要するに、１つ以上のＣＤＲ残基が変異され、バリアント抗体がファージにディスプレイされ、特定の生物活性（例えば、結合親和性）についてスクリーニングされる。
抗体親和性を向上させるために、例えば、ＣＤＲにおいて改変（例えば、置換）を行ってもよい。そのような改変は、ＣＤＲ「ホットスポット」、すなわち、体細胞成熟プロセス中に高頻度で突然変異を受けるコドンによってコードされる残基（例えば、Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ，Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０７：１７９－１９６（２００８）を参照されたい）、及び／又は抗原と接触する残基内で行われ得、結果として得られるバリアントＶＨ又はＶＬが結合親和性について試験される。二次ライブラリーの構築及びそこからの再選択による親和性成熟は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ，（２００１））に記載されている。親和性成熟のいくつかの態様では、多様な方法（例えば、エラープローンＰＣＲ、鎖シャッフリング、又はオリゴヌクレオチド指向性変異誘発）のいずれかによって、成熟のために選択される可変遺伝子に多様性が導入される。次いで、二次ライブラリーが作製される。次いで、このライブラリーをスクリーニングして、所望の親和性を有する抗体バリアントを同定する。多様性を導入する別の方法は、いくつかのＣＤＲ残基（例えば、一度に４～６残基）がランダム化されるＣＤＲ指向手法を含む。抗原結合に関与するＣＤＲ残基は、例えば、アラニン・スキャニング突然変異誘発又はモデル化を用いて、特異的に同定され得る。特に、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ３が、標的にされることが多い。
ある特定の態様では、置換、挿入、又は欠失は、そのような改変が抗体の抗原に結合する能力を実質的に低減させない限り、１つ以上のＣＤＲ内で生じ得る。例えば、結合親和性を実質的に低下させない保存的な変更（例えば、本明細書で提供されるような保存的置換）は、ＣＤＲにおいて行われてもよい。そのような改変は、例えば、ＣＤＲ中の抗原接触残基の外側であってもよい。上述の特定のバリアントＶＨ及びＶＬ配列において、各ＣＤＲは、改変されていないか、又は１つ、２つ、又は３つ以下のアミノ酸置換を有するかのいずれかである。
変異導入の標的となり得る抗体の残基又は領域を同定するための有用な方法は、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍ ａｎｄ Ｗｅｌｌｓ（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１－１０８５に記載されているように「アラニン・スキャニング突然変異誘発」と呼ばれる。この方法では、標的残基（例えば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕなどの荷電残基）の残基又はグループを同定し、中性又は負に荷電したアミノ酸（例えば、アラニン又はポリアラニン）で置換して、抗体と抗原との相互作用が影響を受けるかどうかを決定する。さらなる置換が、最初の置換に対する機能的感受性を示すアミノ酸の位置に導入されてもよい。代替的に、又は追加的に、抗原－抗体複合体の結晶構造を使用して、抗体と抗原との間の接触点が特定され得る。そのような接触残基及び隣接残基は、置換の候補として標的とされるか、又は除去されてもよい。バリアントは、所望の特性を有するか否かを判定するためにスクリーニングされてもよい。
アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端及び／又はカルボキシル末端融合、並びに１個以上のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入バリアントとしては、酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ（抗体指向性酵素プロドラッグ治療法のための）又はポリペプチドへの抗体のＮ末端若しくはＣ末端の融合が挙げられ、これは抗体の血清半減期を増大させる。
ａ）Ｆｃ領域バリアント
ある特定の態様では、１つ以上のアミノ酸改変は、本明細書で提示される抗体のＦｃ領域に導入されてもよく、それにより、Ｆｃ領域バリアントを作製する。Ｆｃ領域バリアントは、１つ以上のアミノ酸位置にアミノ酸改変（例えば、置換）を含むヒトＦｃ領域配列（例えば、ヒトＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４Ｆｃ領域）を含み得る。
ある特定の態様では、本発明は、全てではないがいくつかのエフェクター機能を有することで、抗体のインビボ半減期が重要でありながら、特定のエフェクター機能（例えば補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）及び抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ））が不必要、又は有害である用途に対して望ましい候補となる、抗体バリアントを想到する。ＣＤＣ及び／又はＡＤＣＣ活性の低下／消失を確認するために、インビトロ及び／又はインビボの細胞毒性アッセイを実施することができる。例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合アッセイを実行して、抗体がＦｃγＲ結合を欠いている（そのため、ＡＤＣＣ活性を欠いている可能性が高い）が、ＦｃＲｎ結合能力を保持することを確認することができる。ＡＤＣＣを媒介するための主要な細胞であるＮＫ細胞は、ＦｃγＲＩＩＩのみを発現するが、一方で単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、及びＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞におけるＦｃＲの発現については、Ｒａｖｅｔｃｈ ａｎｄ Ｋｉｎｅｔ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７－４９２（１９９１）の４６４頁の表３に要約されている。目的の分子のＡＤＣＣ活性を評価するためのインビトロアッセイの非限定的な例は、米国特許第５，５００，３６２号（例えば、Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ．ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８３：７０５９－７０６３（１９８６）を参照）及びＨｅｌｌｓｔｒｏｍ，Ｉ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：１４９９－１５０２（１９８５）；５，８２１，３３７（Ｂｒｕｇｇｅｍａｎｎ，Ｍ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１６６：１３５１－１３６１（１９８７）を参照）に記載されている。代替としては、非放射性アッセイ法を採用してもよい（例えば、ＡＣＴＩ（商標）フローサイトメトリー用非放射性細胞毒性アッセイ（ＣｅｌｌＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．Ｍｏｕｎｔａｉｎ Ｖｉｅｗ、ＣＡ）、及び ＣｙｔｏＴｏｘ ９６（登録商標）非放射性細胞毒性試験法（Ｐｒｏｍｅｇａ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）を参照されたい）。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ：ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌ）及びナチュラルキラー（Ｎａｔｕｒａｌ Ｋｉｌｌｅｒ：ＮＫ）細胞が挙げられる。あるいは、又は加えて、目的のＡＤＣＣ活性は、例えば、Ｃｌｙｎｅｓ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９５：６５２－６５６（１９９８）に開示されるような動物モデルにおいて、インビトロで評価され得る。また、抗体がＣ１ｑに結合することができず、ＣＤＣ活性を欠いていることを確認するために、Ｃ１ｑ結合アッセイを実施してもよい。例えば、国際公開第２００６／０２９８７９号及び同第２００５／１００４０２号のＣ１ｑ及びＣ３ｃ結合ＥＬＩＳＡを参照されたい。補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイを行うことができる（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ－Ｓａｎｔｏｒｏ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２０２：１６３（１９９６）；Ｃｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ｅｔ ａｌ．，Ｂｌｏｏｄ １０１：１０４５－１０５２（２００３）；及びＣｒａｇｇ，Ｍ．Ｓ．ａｎｄ Ｍ．Ｊ．Ｇｌｅｎｎｉｅ，Ｂｌｏｏｄ １０３：２７３８－２７４３（２００４）を参照）、ＦｃＲｎ結合及びインビトロクリアランス／半減期の決定は、当該技術分野に既知の方法を使用して実施することもできる（例えば、Ｐｅｔｋｏｖａ，Ｓ．Ｂ．ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ’ｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８（１２）：１７５９－１７６９（２００６）；ＷＯ２０１３／１２０９２９Ａｌを参照されたい）。
エフェクター機能が低下した抗体としては、Ｆｃ領域の残基２３８、２６５、２６９、２７０、２９７、３２７及び３２９の１つ以上の置換を有する抗体が挙げられる（米国特許第６，７３７，０５６号）。このようなＦｃ変異体としては、アミノ酸位置２６５、２６９、２７０、２９７及び３２７のうち２つ以上での置換を有するＦｃ変異体が挙げられ、残基２６５及び２９７がアラニンに置換されている、いわゆる「ＤＡＮＡ」Ｆｃ変異体を含む（米国特許第７，３３２，５８１号）。
ＦｃＲへの結合が改善又は減少した特定の抗体バリアントが記載されている。（例えば、米国特許第６，７３７，０５６号；国際公開第２００４／０５６３１２号，及びＳｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９（２）：６５９１－６６０４（２００１）を参照されたい。）
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＡＤＣＣを改善する１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の２９８、３３３、及び／又は３３４位（残基のＥＵナンバリング）での置換を有するＦｃ領域を含む。
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃγＲ結合を減少さあせる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置２３４及び２３５（ＥＵ付番の残基）を有するＦｃ領域を含む。一態様では、置換はＬ２３４Ａ及びＬ２３５Ａ（ＬＡＬＡ）である。ある特定の態様では、抗体バリアントは、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域に、Ｄ２６５Ａ及び／又はＰ３２９Ｇを更に含む。一態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＰ３２９Ｇ（ＬＡＬＡ－ＰＧ）である。（例えば、国際公開第２０１２／１３０８３１号を参照されたい。）別の態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ａ、及びＤ２６５Ａ（ＬＡＬＡ－ＤＡ）である。
いくつかの態様では、例えば米国特許第６，１９４，５５１号、国際公開第９９／５１６４２号、及びＩｄｕｓｏｇｉｅ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：４１７８－４１８４（２０００）に記載されているように、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）の変化（すなわち向上又は低下のいずれか）をもたらすＦｃ領域内で変化が起こる。
半減期が増大し、胎生Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）への結合が向上した、母体ＩｇＧを胎児に移行する役割を果たす抗体（Ｇｕｙｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７（１９７６）及びＫｉｍ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））は、米国特許出願公開第２００５／００１４９３４号（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．）に記載されている。それらの抗体は、Ｆｃ領域とＦｃＲｎとの結合を改善する１つ以上の置換をその中に有するＦｃ領域を含む。このようなＦｃバリアントとしては、Ｆｃ領域残基：２３８、２５２、２５４、２５６、２６５、２７２、２８６、３０３、３０５、３０７、３１１、３１２、３１７、３４０、３５６、３６０、３６２、３７６、３７８、３８０、３８２、４１３、４２４、又は４３４の１つ以上において置換、例えば、Ｆｃ領域残基４３４の置換を有するものが挙げられる（例えば、米国特許第７，３７１，８２６号；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２８１（２００６）２３５１４－２３５２４を参照のこと）。
マウスＦｃマウスＦｃＲｎ相互作用に決定的なＦｃ領域残基は、部位特異的突然変異誘発により識別されている（例えば、Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ，Ｗ．Ｆ．，ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １６９（２００２）５１７１－５１８０を参照のこと）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、Ｈ４３３、Ｎ４３４、及びＨ４３５（ＥＵインデックス付番）が、相互作用に関与する（Ｍｅｄｅｓａｎ，Ｃ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２６（１９９６）２５３３；Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４（１９９４）５４２）。残基Ｉ２５３、Ｈ３１０、及びＨ４３５が、ヒトＦｃとマウスＦｃＲｎの相互作用に決定的であることが発見された（Ｋｉｍ，Ｊ．Ｋ．，ｅｔ ａｌ．，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（１９９９）２８１９）。ヒトＦｃ－ヒトＦｃＲｎ複合体の研究により、残基Ｉ２５３、Ｓ２５４、Ｈ４３５、及びＹ４３６が相互作用に決定的であることが示されている（Ｆｉｒａｎ，Ｍ．，ｅｔ ａｌ．，Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３（２００１）９９３；Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６（２００１）６５９１－６６０４）。Ｙｅｕｎｇ，Ｙ．Ａ．，ｅｔ ａｌ．（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８２（２００９）７６６７－７６７１）において、残基２４８～２５９、及び３０１～３１７、及び３７６～３８２、及び４２４～４３７の様々な変異が報告され、調査されている。
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５３、及び／又は３１０、及び／又は４３５（ＥＵ付番の残基）における変異を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５３、３１０、及び４３５におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｉ２５３Ａ、Ｈ３１０Ａ、及びＨ４３５Ａである。例えば、Ｇｒｅｖｙｓ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９４（２０１５）５４９７－５５０８を参照のこと。
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を低下させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃ領域の位置３１０、及び／又は４３３、及び／又は４３６（ＥＵ付番の残基）における変異を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、抗体バリアントは、位置３１０、４３３、及び４３６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域における、Ｈ３１０Ａ、Ｈ４３３Ａ、及びＹ４３６Ａである。（例えば、国際公開第２０１４／１７７４６０号を参照されたい。）
ある特定の態様では、抗体バリアントは、ＦｃＲｎ結合を増加させる１つ以上のアミノ酸置換、例えば、Ｆｃの領域位置２５２、及び／又は２５４、及び／又は２５６（ＥＵ付番の残基）における変異を有するＦｃ領域を含む。ある特定の態様では、抗体バリアントは、位置２５２、２５４、及び２５６におけるアミノ酸置換を有するＦｃ領域を含む。一態様において、置換は、ヒトＩｇＧ１ Ｆｃ領域に由来するＦｃ領域におけるＭ２５２Ｙ、Ｓ２５４Ｔ、及びＴ２５６Ｅである。Ｆｃ領域バリアントの他の例に関しては、Ｄｕｎｃａｎ＆Ｗｉｎｔｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ ３２２：７３８－４０（１９８８）、米国特許第５，６４８，２６０号、米国特許第５，６２４，８２１号、及び国際公開第９４／２９３５１号も参照されたい。
本明細書に報告されるような抗体の重鎖のＣ末端は、アミノ酸残基ＰＧＫで終わる完全なＣ末端であってもよい。重鎖のＣ末端は、Ｃ末端アミノ酸残基のうち１つ又は２つが除去された、短くなったＣ末端であってもよい。１つの好ましい態様では、重鎖のＣ末端は短縮Ｃ末端末端ＰＧである。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン－リシンジペプチドを含む（Ｇ４４６及びＫ４４７、ＥＵインデックス付番のアミノ酸位置）。本明細書に報告される全ての態様のうちの１つの態様では、本明細書に明記されるＣ末端のＣＨ３ドメインを含む重鎖を含む抗体は、Ｃ末端グリシン残基を含む（Ｇ４４６、ＥＵインデックス付番のアミノ酸位置）。
ｂ）システイン操作抗体バリアント
ある特定の態様では、抗体の１つ以上の残基がシステイン残基で置換されているシステイン操作抗体、例えば、ＴＨＩＯＭＡＢ（商標）を生成することが望ましい場合がある。特定の態様では、置換された残基は、抗体の利用しやすい部位で生じる。これらの残基をシステインで置換することにより、反応性チオール基は、それによって抗体のアクセス可能な部位に配置され、本明細書に更に記載されるように、抗体を薬物部位又はリンカー薬物部位等のような他の部位に複合して免疫コンジュゲートを作成するために使用することができる。システイン操作抗体は、例えば、米国特許第７，５２１，５４１号、同第８，３０，９３０号、同第７，８５５，２７５号、同第９，０００，１３０号、又は国際公開第２０１６０４０８５６号に記載のように生成することができる。
７．免疫コンジュゲート
本発明はまた、細胞傷害剤、化学療法剤、薬物、成長阻害剤、毒素（例えば、タンパク質毒素、細菌、真菌、植物、若しくは動物起源の酵素活性毒素、又はそれらのフラグメント）、又は放射性同位体などの１つ以上の治療剤と複合された本明細書中に開示のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を含む、免疫コンジュゲートを提供する。
一態様において、免疫コンジュゲートは、抗体が、前述の治療剤の１つ以上にコンジュゲートされた、抗体薬物コンジュゲート（ＡＤＣ）である。抗体は典型的には、リンカーを使用して、治療剤の１つ以上に接続される。治療剤及び薬剤及びリンカーの例を含む、ＡＤＣ技術の概観は、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｒｅｖｉｅｗ ６８：３－１９（２０１６）に記載されている。
Ｂ．組換え方法及び組成物
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法及び組成物を使用して産生することができる。これらの方法のために、抗体をコードする１つ以上の単離された核酸が提供される。
一態様では、本発明の抗体をコードする単離された核酸が提供される。
一態様では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を作製する方法であって、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を、抗体の発現に好適な条件下で培養することと、任意に、抗体を宿主細胞（又は宿主細胞培養物）から回収することとを含む、方法が提供される。
ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体の組換え産生に関しては、例えば、上述の抗体をコードする核酸が単離され、宿主細胞内でのさらなるクローニング及び／又は発現のために、１つ以上のベクター中に挿入される。このような核酸は、容易に単離することができ、一般的な手順を用いて（例えば、抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合できるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定することができる。
抗体コード化ベクターのクローニング又は発現のための好適な宿主細胞には、本明細書に記載の原核細胞又は真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、特に糖鎖修飾やＦｃエフェクター機能を必要としない場合には、細菌中で産生されてもよい。細菌中の抗体フラグメント及びポリペプチドの発現については、例えば、ＵＳ５，６４８，２３７号、ＵＳ５，７８９，１９９号及びＵＳ５，８４０，５２３号を参照。（大腸菌における抗体フラグメントの発現を記載するＣｈａｒｌｔｏｎ，Ｋ．Ａ．，Ｉｎ：Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００３），ｐｐ．２４５－２５４も参照。）発現後、抗体は、適切なフラクション中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、更に精製されてもよい。
脊椎動物細胞も、宿主として使用され得る。例えば、懸濁物中で成長するように適合した哺乳動物細胞株が有用であり得る。有用な哺乳動物宿主細胞株の他の例は、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株、ヒト胚腎臓株（例えばＧｒａｈａｍ，Ｆ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６（１９７７）５９－７４に記載されるような２９３細胞又は２９３Ｔ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）、マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３（１９８０）２４３－２５２に記載されるようなＴＭ４細胞）、サル腎臓細胞（ＣＶ１）、アフリカミドリサル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）、ヒト頸部癌腫細胞（ＨＥＬＡ）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）、バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）、ヒト肺細胞（Ｗ１３８）、ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）、マウス***腫瘍（ＭＭＴ０６０５６２）、ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｊ．Ｐ．ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３（１９８２）４４－６８に記載）、ＭＲＣ５細胞及びＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳動物宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ－ＣＨＯ細胞を含む、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞（Ｕｒｌａｕｂ，Ｇ．ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７（１９８０）４２１６－４２２０）、及び、骨髄腫細胞株、例えば、Ｙ０、ＮＳ０及びＳｐ２／０が挙げられる。抗体産生に適した特定の哺乳動物宿主細胞の総説としては、例えば、Ｙａｚａｋｉ，Ｐ．ａｎｄ Ｗｕ，Ａ．Ｍ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８，Ｌｏ，Ｂ．Ｋ．Ｃ．（ｅｄ．），Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＮＪ（２００４），ｐｐ．２５５－２６８を参照。
一態様において、宿主細胞は、真核生物、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞又はリンパ球細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。
Ｃ．医薬組成物
さらなる態様において、例えば、以下の治療方法のいずれかにおいて使用するための、本明細書に提供される抗体のいずれかを含む、医薬組成物が提供される。一態様では、医薬組成物は、本明細書に提供される抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。別の態様では、医薬組成物は、本明細書で提供される抗体のいずれかと、少なくとも１つのさらなる治療剤、例えば、以下に記載するものとを含む。
本明細書に記載されているヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体の医薬組成物は、所望の純度を有するかかる抗体を１つ以上の必要に応じて存在する薬学的に許容され得る担体（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と、凍結乾燥された組成物又は水溶液の形態で混合することによって調製される。薬学的に許容され得る担体は、一般的に、用いられる投薬量及び濃度でレシピエントに対して非毒性であり、ヒスチジン、ホスファート、シトラート、アセタート及び他の有機酸などの緩衝剤；アスコルビン酸及びメチオニンを含む抗酸化剤；防腐剤（塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンザルコニウム；塩化ベンゼトニウム；フェノール、ブチル若しくはベンジルアルコール；メチル若しくはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３－ペンタノール；及びｍ－クレゾール等）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン若しくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン若しくはリジンなどのアミノ酸；単糖類、二糖類、及びグルコース、マンノース若しくはデキストリンを含む他の炭水化物；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース若しくはソルビトールなどの糖類；ナトリウムなどの塩形成対イオン；金属錯体（例えば、Ｚｎ－タンパク質錯体）、並びに／又はポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン性界面活性剤を含むが、これらに限定されない。本明細書における例示的な薬学的に許容され得る担体は、可溶性の中性活性ヒアルロニダーゼ糖タンパク質（ｓＨＡＳＥＧＰ）、例えば、ｒＨｕＰＨ２０（ＨＹＬＥＮＥＸ（登録商標）、Ｈａｌｏｚｙｍｅ，Ｉｎｃ．）等のヒト可溶性ＰＨ－２０ヒアルロニダーゼ糖タンパク質等の介在性薬物分散剤を更に含む。ｒＨｕＰＨ２０を含む、ある特定の例示的なｓＨＡＳＥＧＰ及び使用方法は、米国特許出願公開第２００５／０２６０１８６号及び同第２００６／０１０４９６８号に記載される。一態様では、ｓＨＡＳＥＧＰを、１つ以上のさらなるグリコサミノグリカナーゼ（例えば、コンドロイチナーゼ）と組み合わせる。
例示の凍結乾燥抗体組成物は、米国特許第６，２６７，９５８号に記載されている。水性抗体組成物としては、米国特許第６，１７１，５８６号及びＷＯ２００６／０４４９０８に記載のものが挙げられ、後者の組成物は、ヒスチジン－酢酸緩衝液を含む。
本明細書の医薬組成物はまた、処置されている特定の徴候に必要とされる複数の有効成分、好ましくは互いに悪影響を及ぼさない補完的な活性を有するものも含みうる。そのような有効成分は、意図される目的に有効な量で組み合わせて好適に存在する。
有効成分は、例えば、コアセルベーション技術によって、又は界面重合によって調製されたマイクロカプセル中に封入されてもよく（例えば、それぞれ、ヒドロキシメチルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）、コロイド状薬物送達システム（例えば、リポソーム、アルブミン微小球、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションに封入されてもよい。そのような技術が、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１６版、Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
徐放性の医薬組成物を調製することができる。徐放性調製物の好適な例としては、抗体を含有する固体疎水性ポリマーの半透性マトリクスが含まれ、これらのマトリクスは、成形物品、例えば、フィルム又はマイクロカプセルの形態である。
インビボ投与に使用される医薬組成物は、一般に無菌である。滅菌は、例えば滅菌濾過膜による濾過によって容易に達成され得る。
Ｄ．治療方法及び投与経路
本明細書中に提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する任意の抗体を治療方法において使用され得る。
一態様では、医薬として使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体が提供される。さらなる態様では、血管疾患の処置に使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体が提供される。ある特定の態様では、処置方法に使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体が提供される。ある特定の態様では、本発明は、血管疾患を有する個体を処置する方法に使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する有効量の抗体を個体に投与することを含む抗体を提供する。そのような一態様では、本方法は、例えば以下に記載されるように、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤（例えば、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又は６つのさらなる治療剤）を個体に投与することを更に含む。さらなる態様では、本発明は、血管新生の阻害に使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を提供する。ある特定の態様では、本発明は、個体における血管新生を阻害する方法で使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、血管新生を阻害するためにヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する有効量の抗体を個体に投与することを含む抗体を提供する。上記の態様のいずれかによる「個体」は、好ましくはヒトである。
さらなる態様では、眼疾患の処置に使用するためのヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体が提供される。一実施形態では、眼疾患は、ＡＭＤ（一実施形態では、滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性、黄斑浮腫、ＤＭＥ（一実施形態では、焦点、非中心ＤＭＥ、及び、びまん性、中心関与ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（一実施形態では、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲ）、他の虚血関連網膜症、ＲＯＰ、網膜静脈閉塞（ＲＶＯ）（一実施形態では、中心（ＣＲＶＯ）及び分岐（ＢＲＶＯ）形態）、ＣＮＶ（一実施形態では、近視性ＣＮＶ）、角膜血管新生、角膜血管新生に関連する疾患、網膜血管新生、網膜／脈絡膜血管新生に関連する疾患、中心性漿液性網膜症（ＣＳＲ）、病的近視、フォンヒッペル・リンダウ病、眼のヒストプラズマ症、ＦＥＶＲ、コーツ病、ノーリー病、骨粗鬆症性偽神経膠腫症候群（ＯＰＰＧ）に関連する網膜異常、結膜下出血、ルベオーシス、眼血管新生疾患、血管新生緑内障、網膜色素変性症（ＲＰ）、高血圧性網膜症、網膜血管腫状増殖、黄斑血管拡張症、虹彩血管新生、眼内血管新生、網膜変性、類嚢胞黄斑浮腫（ＣＭＥ）、血管炎、乳頭浮腫、限定されないが以下を含む網膜炎：ＣＭＶ網膜炎、眼黒色腫、網膜芽細胞腫、結膜炎（一実施形態では、感染性結膜炎及び非感染性（一実施形態では、アレルギー性）結膜炎）、レーバー先天性黒丸症（レーバー先天性黒丸症又はＬＣＡとしても知られる）、ブドウ膜炎（感染性及び非感染性ブドウ膜炎を含む）、脈絡膜炎（一実施形態では、多巣性脈絡膜炎）、眼ヒストプラズマ症、眼瞼炎、ドライアイ、外傷性眼損傷、シェーグレン病、並びに、疾患又は疾患が眼血管新生、血管漏出、及び／又は網膜浮腫若しくは網膜萎縮に関連する他の眼疾患から選択される。一実施形態では、眼疾患は、ＡＭＤ（一実施形態では、滲出型ＡＭＤ、乾燥型ＡＭＤ、中間型ＡＭＤ、進行型ＡＭＤ、及び地図状萎縮（ＧＡ））、黄斑変性、黄斑浮腫、ＤＭＥ（一実施形態では、焦点、非中心ＤＭＥ、及び、びまん性、中心関与ＤＭＥ）、網膜症、糖尿病性網膜症（ＤＲ）（一実施形態では、増殖性ＤＲ（ＰＤＲ）、非増殖性ＤＲ（ＮＰＤＲ）、及び高所ＤＲから選択される。
さらなる態様では、本発明は、医薬の製造又は調製におけるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体の使用を提供する。一態様では、医薬は血管疾患の処置用である。さらなる態様では、医薬は、血管疾患を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、血管疾患を処置する方法に使用するためのものである。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤、例えば、以下に記載されるものを個体に投与することを更に含む。
一態様では、医薬は眼疾患の処置用である。さらなる態様では、医薬は、眼疾患を有する個体に有効量の医薬を投与することを含む、眼疾患を処置する方法に使用するためのものである。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤、例えば、以下に記載されるものを個体に投与することを更に含む。
さらなる態様では、本発明は、血管疾患を処置する方法を提供する。一態様では、本方法は、そのような血管疾患を有する個体に、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する有効量の抗体を投与することを含む。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤、以下に記載されるものを個体に投与することを更に含む。
さらなる態様では、本発明は、眼疾患を処置する方法を提供する。一態様では、本方法は、そのような眼疾患を有する個体に、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する有効量の抗体を投与することを含む。そのような一つの態様では、該方法は、有効量の少なくとも１つのさらなる治療剤、以下に記載されるものを個体に投与することを更に含む。
上記の態様のいずれかによる「個体」は、ヒトであってもよい。
さらなる態様では、本発明は、例えば上記の治療方法のいずれかで使用するための、本明細書で提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体のいずれかを含む医薬組成物を提供する。一態様では、医薬組成物は、本明細書で提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体のいずれかと、薬学的に許容され得る担体とを含む。別の態様では、医薬組成物は、本明細書で提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体のいずれかと、例えば以下に記載される少なくとも１つのさらなる治療剤とを含む。
本発明の抗体は、単独で投与され得るか、又は併用療法において使用され得る。例えば、該併用療法には、本発明の抗体を投与することと、少なくとも１種類の追加の治療剤（例えば、１種類、２種類、３種類、４種類、５種類、又は６種類の追加の治療剤）を投与することとが含まれる。
例えば、特定の実施形態では、任意の前述の方法は、１つ以上のさらなる化合物を投与することを更に含む。特定の実施形態では、本明細書に提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、さらなる化合物（複数可）と同時に投与される。特定の実施形態では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、さらなる化合物（複数可）の前又は後に投与される。特定の実施形態では、さらなる化合物は、ＩＬ－６；ＩＬ－６Ｒ；ＩＬ－１３；ＩＬ－１３Ｒ；ＰＤＧＦ；アンジオポエチン；Ａｎｇ２；Ｔｉｅ２；Ｓ１Ｐ；インテグリンαｖβ３、αｖβ５及びα５β１；ベタセルリン；アペリン／ＡＰＪ；エリスロポエチン；補体因子Ｄ；ＴＮＦα；ＨｔｒＡ１；ＶＥＧＦ受容体；ＳＴ－２受容体；及びＡＭＤリスクに遺伝的に関連するタンパク質、例えば補体経路成分Ｃ２、Ｂ因子、Ｈ因子、ＣＦＨＲ３、Ｃ３ｂ、Ｃ５、Ｃ５ａ及びＣ３ａ；ＨｔｒＡ１；ＡＲＭＳ２；ＴＩＭＰ３；ＨＬＡ；インターロイキン－８（ＩＬ－８）；ＣＸ３ＣＲ１；ＴＬＲ３；ＴＬＲ４；ＣＥＴＰ；ＬＩＰＣ；ＣＯＬ１０Ａ１；及びＴＮＦＲＳＦ１０Ａからなる群から選択される第２の生物学的分子に結合する。特定の実施形態において、さらなる化合物は、抗体又はその抗原結合フラグメントである。
上の実施形態のいずれかに従った（又は適用される）特定の実施形態では、眼疾患は、増殖性網膜症、脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）、糖尿病性及び他の虚血関連網膜症、糖尿病性黄斑浮腫、病理学的近視、フォンヒッペル・リンダウ病、眼のヒストプラズマ症、ＣＲＶＯ及びＢＲＶＯを含む網膜静脈閉塞症（ＲＶＯ）、角膜血管新生、網膜血管新生、及び未熟児網膜症（ＲＯＰ）からなる群から選択される眼内血管新生疾患である。
いくつかの例において、本明細書中に提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害、例えば、本明細書中に記載される眼障害（例えば、ＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）を処置するための少なくとも１つのさらなる治療剤と組み合わせて投与され得る。眼障害を処置するための併用療法のための例示的なさらなる治療剤としては、限定されないが、抗血管新生剤、例えば、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ））、可溶性受容体融合タンパク質（例えば、組換え可溶性受容体融合タンパク質ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト、ＶＥＧＦ Ｔｒａｐ Ｅｙｅ；Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ａｖｅｎｔｉｓとしても知られる））、アプタマー（例えば、抗ＶＥＧＦペグ化アプタマーＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム；ＮｅＸｓｔａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／ＯＳＩ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ））及びＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、４－（４－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－６－メトキシ－７－（１－メチルピペリジン－４－イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４－（４－フルオロ－２－メチルインドール－５－イルオキシ）－６－メトキシ－７－（３－ピロリジン－１－イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ＳＵ５４１６；ＳＵＧＥＮ）、及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ））；トリプトファニル－ｔＲＮＡシンセターゼ（ＴｒｐＲＳ）；スクアラミン；ＲＥＴＡＡＮＥ（登録商標）（デポー懸濁液用の酢酸アカンノルタベ；Ａｌｃｏｎ，Ｉｎｃ．）；コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ（ＣＡ４Ｐ）；ＭＩＦＥＰＲＥＸ（登録商標）（ミフェプリストン－ｒｕ４８６）；サブテノントリアムシノロンアセトニド；硝子体内結晶トリアムシノロンアセトニド；マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤（例えば、Ｐｒｉｎｏｍａｓｔａｔ（ＡＧ３３４０；Ｐｆｉｚｅｒ））；フルオシノロンアセトニド（フルオシノロン眼内インプラントを含む；Ｂａｕｓｃｈ＆Ｌｏｍｂ／Ｃｏｎｔｒｏｌ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ）；リノミド；インテグリンβ３機能の阻害剤；アンジオスタチン、及びそれらの組み合わせを含むＶＥＧＦアンタゴニストなどが挙げられる。本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて投与することができるこれら及び他の治療剤は、例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる米国特許出願第２０１４／００１７２４４号に記載されている。
眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のために本明細書中に提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂａｓに結合する抗体と組み合わせて使用することができるさらなる治療剤のさらなる例としては、限定されないが、ＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）（バーテポルフィン；非熱レーザーを用いた光線力学的療法と併せて典型的に使用される光活性化薬物）、ＰＫＣ４１２、Ｅｎｄｏｖｉｏｎ（ＮＳ ３７２８；ＮｅｕｒｏＳｅａｒｃｈ Ａ／Ｓ）、神経栄養因子（例えば、グリア由来神経栄養因子（ＧＤＮＦ）及び毛様体神経栄養因子（ＣＮＴＦ））、ジルチアゼム、ドルゾラミド、ＰＨＯＴＯＴＲＯＰ（登録商標）、９－シス－レチナール、点眼薬（例えば、ヨウ化ホスホリン、エコーチオフェート又は炭酸脱水酵素阻害剤）、ベオバスタット（ＡＥ－９４１；ＡＥｔｅｒｎａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、シルナ－０２７（ＡＧＦ－７４５；Ｓｉｍａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ニューロトロフィン（例としてのみ、ＮＴ－４／５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈを含む）、Ｃａｎｄ５（Ａｃｕｉｔｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ＩＮＳ－３７２１７（Ｉｎｓｐｉｒｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、インテグリンアンタゴニスト（Ｊｅｒｉｎｉ ＡＧ及びＡｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのものを含む）、ＥＧ－３３０６（Ａｒｋ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ Ｌｔｄ．）、ＢＤＭ－Ｅ（ＢｉｏＤｉｅｍ Ｌｔｄ．）、サリドマイド（例えば、ＥｎｔｒｅＭｅｄ，Ｉｎｃ．によって使用される）、カルジオトロフィン－１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、２－メトキシエストラジオール（Ａｌｌｅｒｇａｎ／Ｏｃｕｌｅｘ）、ＤＬ－８２３４（Ｔｏｒａｙ Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ）、ＮＴＣ－２００（Ｎｅｕｒｏｔｅｃｈ）、テトラチオモリブデン酸塩（ミシガン大学）、ＬＹＮ－００２（Ｌｙｎｋｅｕｓ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、微細藻類化合物（Ａｑｕａｓｅａｒｃｈ／Ａｌｂａｎｙ，Ｍｅｒａ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｄ－９１２０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ Ｇｒｏｕｐ ｐｌｃ）、ＡＴＸ－Ｓ１０（Ｈａｍａｍａｔｓｕ Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ）、ＴＧＦ－ベータ２（Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｃｅｌｔｒｉｘ）、チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、Ａｌｌｅｒｇａｎ、ＳＵＧＥＮ、又はＰｆｉｚｅｒからのもの）、ＮＸ－２７８－Ｌ（ＮｅＸｓｔａｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｉｌｅａｄ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｏｐｔ－２４（ＯＰＴＩＳ Ｆｒａｎｃｅ ＳＡ）、網膜細胞神経節神経保護剤（Ｃｏｇｅｎｔ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｎ－ニトロピラゾール誘導体（Ｔｅｘａｓ Ａ＆Ｍ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｓｙｓｔｅｍ）、ＫＰ－１０２（Ｋｒｅｎｉｔｓｋｙ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、シクロスポリンＡ、光線力学療法に使用される治療剤（例えば、ＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）、受容体を標的とするＰＤＴ、Ｂｒｉｓｔｏｌ－Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ，Ｃｏ．；ＰＤＴとの注射用ポルフィマーナトリウム；ベルテポルフィン、ＱＬＴ Ｉｎｃ．；ＰＤＴとのロスタポーフィン、Ｍｉｒａｖｅｎｔ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ；ＰＤＴとのタラポーフィンナトリウム、Ｎｉｐｐｏｎ Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ；及びモテクサーフィンルテチウム、Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、アンチセンスオリゴヌクレオチド（例として、Ｎｏｖａｇａｌｉ Ｐｈａｒｍａ ＳＡ及びＩＳＩＳ－１３６５０、Ｉｏｎｉｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓによって試験された製品を含む）、及びそれらの組合せが挙げられる。
本明細書で提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、例えば、レーザー光凝固（例えば、汎網膜光凝固（ＰＲＰ））、ドルーゼンレーザー発振、黄斑円孔手術、黄斑転座手術、埋め込み型小型望遠鏡、ＰＨＩ運動血管造影法（マイクロレーザー治療及びフィーダー血管処置としても知られる）、陽子線療法、微小刺激療法、網膜剥離及び硝子体手術、強膜バックル、黄斑下手術、経乳頭温熱療法、光化学系Ｉ療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の使用、体外レオフェレーシス（膜分画濾過及びレオセラピーとしても知られる）、マイクロチップ移植、幹細胞療法、遺伝子置換療法、リボザイム遺伝子療法（低酸素応答エレメントの遺伝子療法を含む、Ｏｘｆｏｒｄ Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ；Ｌｅｎｔｉｐａｋ、Ｇｅｎｅｔｉｘ；及びＰＤＥＦ遺伝子療法、ＧｅｎＶｅｃ）、光受容体／網膜細胞移植（移植可能な網膜上皮細胞を含む、Ｄｉａｃｒｉｎ，Ｉｎｃ．；網膜細胞移植、例えば、Ａｓｔｅｌｌａｓ Ｐｈａｒｍａ ＵＳ，Ｉｎｃ．、ＲｅＮｅｕｒｏｎ、ＣＨＡ Ｂｉｏｔｅｃｈ）、穿刺、及びそれらの組み合わせを含む、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のための治療又は外科的手順と組み合わせて投与され得る。
いくつかの例では、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）を処置するための抗血管新生剤と組み合わせて投与することができる。任意の適切な抗血管新生剤を、Ｃａｒｍｅｌｉｅｔ ｅｔ ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ ４０７：２４９－２５７，２０００によって列挙されたものを含むがこれらに限定されない、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて使用することができる。いくつかの実施形態では、抗血管新生剤は、限定するものではないが、抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ Ｆａｂ ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）、ＲＴＨ－２５８（以前はＥＳＢＡ－１００８、抗ＶＥＧＦ一本鎖抗体フラグメント；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、又は二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗血管新生２二重特異性抗体、例えば、ファリシマブ；Ｒｏｃｈｅ））、可溶性組換え受容体融合タンパク質（例えば、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト））、ＶＥＧＦバリアント、可溶性ＶＥＧＦＲフラグメント、ＶＥＧＦをブロッキングすることができるアプタマー（例えば、ペガプタニブ）又はＶＥＧＦＲ、中和抗ＶＥＧＦＲ抗体、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼの小分子阻害剤、抗ＶＥＧＦ ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）（例えば、アビシパル・ペゴル、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ ＡＧ／Ａｌｌｅｒｇａｎ）、ＶＥＧＦ又はＶＥＧＦＲの発現を阻害する低分子干渉ＲＮＡ、ＶＥＧＦＲチロシンキナーゼ阻害剤（例えば、４－（４－ブロモ－２－フルオロアニリノ）－６－メトキシ－７－（１－メチルピペリジン－４－イルメトキシ）キナゾリン（ＺＤ６４７４）、４－（４－フルオロ－２－メチルインドール－５－イルオキシ）－６－メトキシ－７－（３－ピロリジン－１－イルプロポキシ）キナゾリン（ＡＺＤ２１７１）、バタラニブ（ＰＴＫ７８７）、セマキサミニブ（ＳＵ５４１６；ＳＵＧＥＮ）及びＳＵＴＥＮＴ（登録商標）（スニチニブ））、及びそれらの組み合わせを含むＶＥＧＦアンタゴニストである。
眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のために本明細書で提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて投与され得る他の適切な抗血管新生剤としては、コルチコステロイド、血管新生抑制ステロイド、酢酸アカンコルターブ、アンギオスタチン、エンドスタチン、チロシンキナーゼ阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤、インスリン様成長因子結合タンパク質３（ＩＧＦＢＰ ３）、間質由来因子（ＳＤＦ－１）アンタゴニスト（例えば、抗ＳＤＦ－１抗体）、色素上皮由来因子（ＰＥＤＦ）、ガンマ－セクレターゼ、Ｄｅｌｔａ様リガンド４、インテグリンアンタゴニスト、低酸素誘導性因子（ＨＩＦ）－１αアンタゴニスト、プロテインキナーゼＣＫ２アンタゴニスト、新生血管形成）部位にホーミングする幹細胞（例えば、内皮前駆細胞）を阻害する薬剤（例えば、抗血管内皮カドヘリン（ＣＤ－１４４）抗体及び／又は抗ＳＤＦ－１抗体、及びそれらの組み合わせが挙げられる。
さらなる例では、いくつかの例において、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体、及び／又はそのポリマー製剤は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のための新生血管形成に対して活性を有する薬剤、例えば抗炎症薬、ラパマイシンの哺乳動物標的（ｍＴＯＲ）阻害剤（例えば、ラパマイシン、ＡＦＩＮＩＴＯＲ（登録商標）（エベロリムス）及びＴＯＲＩＳＥＬ（登録商標）（テムシロリムス））、シクロスポリン、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）アンタゴニスト（例えば、抗ＴＮＦα抗体若しくはその抗原結合フラグメント（例えば、インフリキシマブ、アダリムマブ、セルトリズマブ・ペゴル、及びゴリムマブ）又は可溶性受容体融合タンパク質（例えば、エタネルセプト））、抗補体剤、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、又はそれらの組み合わせと組み合わせて投与することができる。
なおさらなる例では、いくつかの例において、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を、神経保護的であり、潜在的に乾燥型ＡＭＤから湿潤型ＡＭＤへの進行を減少させることができる薬剤、例えばデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）（商品名：ＰＲＡＳＴＥＲＡ（商標）及びＦＩＤＥＬＩＮ（登録商標））、デヒドロエピアンドロステロンサルフェート、及びプレグネノロンサルフェートなどの薬物を含む 「ニューロステロイド」 と呼ばれる薬物クラスと組み合わせて投与することができる。
任意の適切なＡＭＤ治療剤は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、例えば抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）、ＲＴＨ－２５８（以前はＥＳＢＡ－１００８、抗ＶＥＧＦ一本鎖抗体フラグメント；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、又は二重特異性抗ＶＥＧＦ抗体（例えば、抗ＶＥＧＦ／抗アンジオポエチン２二重特異性抗体、例えば、ファリシマブ；Ｒｏｃｈｅ））、可溶性ＶＥＧＦ受容体融合タンパク質（例えば、ＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト））、抗ＶＥＧＦ ＤＡＲＰｉｎ（登録商標）（例えば、アビシパル・ペゴル；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐａｒｔｎｅｒｓ ＡＧ／Ａｌｌｅｒｇａｎ）、又は抗ＶＥＧＦアプタマー（例えば、ＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム）；血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）アンタゴニスト、例えば、抗ＰＤＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦＲ抗体（例えば、ＲＥＧＮ２１７６－３）、抗ＰＤＧＦ－ＢＢペグ化アプタマー（例えば、ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）；Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、可溶性ＰＤＧＦＲ受容体融合タンパク質、又は二重ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤（例えば、ＤＥ－１２０（Ｓａｎｔｅｎ）又はＸ－８２（ＴｙｒｏｇｅｎｅＸ））又は二重特異性抗ＰＤＧＦ／抗ＶＥＧＦ抗体））；光線力学的療法と組み合わせたＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）（ｖｅｒｔｅｐｏｒｆｉｎ）；酸化防止剤；補体系アンタゴニスト、例えば補体因子Ｃ５アンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤（例えば、ＡＲＣ－１９０５；Ｏｐｔｈｏｔｅｃｈ）又は抗Ｃ５抗体（例えば、ＬＦＧ－３１６；Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、プロパージンアンタゴニスト（例えば、抗プロパージン抗体、例えば、ＣＬＧ－５６１；Ａｌｃｏｎ）、又は補体因子Ｄアンタゴニスト（例えば、抗補体因子Ｄ抗体、例えば、ランパリズマブ；Ｒｏｃｈｅ））；Ｃ３ブロッキングペプチド（例えば、ＡＰＬ－２、Ａｐｐｅｌｌｉｓ）；視覚サイクル調整剤（例えば、エミクススタット塩酸塩）；スクアラミン（例えば、ＯＨＲ－１０２；Ｏｈｒ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ）；ビタミン及びミネラル補助剤（例えば、加齢性眼疾患試験１（ＡＲＥＤＳ１；亜鉛及び／又は酸化防止剤）及び試験２（ＡＲＥＤＳ２；亜鉛、酸化防止剤、ルテイン、ゼアキサンチン、及び／又はオメガ－３脂肪酸）に記載されているもの）；細胞ベースの治療、例えば、ＮＴ－５０１（Ｒｅｎｅｘｕｓ）；ＰＨ－０５２０６３８８（Ｐｆｉｚｅｒ）、ｈｕＣＮＳ－ＳＣ細胞移植（ＳｔｅｍＣｅｌｌｓ）、ＣＮＴＯ－２４７６（臍帯幹細胞株；Ｊａｎｓｓｅｎ）、ＯｐＲｅｇｅｎ（ＲＰＥ細胞の懸濁液；Ｃｅｌｌ Ｃｕｒｅ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、又はＭＡ０９－ｈＲＰＥ細胞移植（Ｏｃａｔａ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；組織因子アンタゴニスト（例えば、ｈＩ－ｃｏｎ１；Ｉｃｏｎｉｃ Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ）；α－アドレナリン受容体アゴニスト（例えば、酒石酸ブリモニジン；Ａｌｌｅｒｇａｎ）；ペプチドワクチン（例えば、Ｓ－６４６２４０；Ｓｈｉｏｎｏｇｉ）；アミロイドβ拮抗薬（例えば、抗βアミロイドモノクローナル抗体、例えばＧＳＫ－９３３７７６）；Ｓ１Ｐアンタゴニスト（例えば、抗Ｓ１Ｐ抗体、例えばｉＳＯＮＥＰ（商標）；Ｌｐａｔｈ Ｉｎｃ）；ＲＯＢＯ４アンタゴニスト（例えば、抗ＲＯＢＯ４抗体、例えばＤＳ－７０８０ａ；Ｄａｉｉｃｈｉ Ｓａｎｋｙｏ）；エンドスタチン及びアンジオスタチンを発現するレンチウイルスベクター（例えば、ＲｅｔｉｎｏＳｔａｔ）；及びそれらの任意の組み合わせを含むがこれらに限定されない、眼疾患（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のために本明細書において提供されるヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて、追加の治療剤として投与することができる。いくつかの例では、ＡＭＤ治療剤（前述のＡＭＤ治療剤のいずれかを含む）を共製剤化することができる。例えば、抗ＰＤＧＦＲ抗体ＲＥＧＮ２１７６－３は、アフリベルセプト（ＥＹＬＥＡ（登録商標））と共製剤化することができる。いくつかの例では、そのような共製剤は、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のためにＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のためにＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト）と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のためにＭＡＣＵＧＥＮ（登録商標）（ペガプタニブナトリウム）と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）を処置するための光線力学療法と組み合わせてＶＩＳＵＤＹＮＥ（登録商標）（ベルテポルフィン）と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のためにＰＤＧＦアンタゴニストと組み合わせて投与することができる。本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて使用され得る例示的なＰＤＧＦアンタゴニストには、抗ＰＤＧＦ抗体、抗ＰＤＧＦＲ抗体、小分子阻害剤（例えば、スクアラミン）、ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）などの抗ＰＤＧＦ－Ｂペグ化アプタマー（Ｅ１００３０；Ｏｐｈｔｈｏｔｅｃｈ／Ｎｏｖａｒｔｉｓ）、又は二重ＰＤＧＦ／ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、小分子阻害剤（例えば、ＤＥ－１２０（Ｓａｎｔｅｎ）又はＸ－８２（ＴｙｒｏｇｅｎｅＸ））又は二重特異性抗ＰＤＧＦ／抗ＶＥＧＦ抗体）が含まれる。例えば、ＦＯＶＩＳＴＡ（登録商標）は、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体の補助療法として投与することができる。ＯＨＲ－１０２は、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）又はＥＹＬＥＡ（登録商標）などのＶＥＧＦアンタゴニストと組み合わせて投与することができる。いくつかの実施形態では、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ＯＨＲ－１０２、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）及び／又はＥＹＬＥＡ（登録商標）と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のためにＲＴＨ－２５８と組み合わせて投与することができる。ＲＴＨ－２５８は、例えば、硝子体内注射又は眼注入によって投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のためにアビシパル・ペゴルと組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
限定されないが、ＶＥＧＦアンタゴニスト（例えば、ＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）又はＥＹＬＥＡ（登録商標））、コルチコステロイド（例えば、コルチコステロイドのインプラント（例えば、ＯＺＵＲＤＥＸ（登録商標）（デキサメタゾン硝子体内インプラント）又はＩＬＵＶＩＥＮ（登録商標）（フルオシノロンアセトニド硝子体内インプラント））又は硝子体内注射による投与のために製剤化されたコルチコステロイド（例えば、トリアムシノロンアセトニド））、又はそれらの組み合わせを含む任意の適切なＤＭＥ及び／又はＤＲ治療剤は、眼障害（例えば、ＡＭＤ、ＤＭＥ、ＤＲ、ＲＶＯ、又はＧＡ）の処置のために、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体と組み合わせて投与することができる。いくつかの例では、眼障害はＤＭＥ及び／又はＤＲである。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ＤＭＥ及び／又はＤＲ（例えば、ＮＰＤＲ又はＰＤＲ）の処置のためにＬＵＣＥＮＴＩＳ（登録商標）（ラニビズマブ）と組み合わせて投与することができる。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ＤＭＥ及び／又はＤＲ（例えば、ＮＰＤＲ又はＰＤＲ）の処置のためにＥＹＬＥＡ（登録商標）（アフリベルセプト）と組み合わせて投与することができる。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ＤＭＥ及び／又はＤＲの処置のためにＯＺＵＲＤＥＸ（登録商標）（デキサメタゾン硝子体内インプラント）と組み合わせて投与することができる。
本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体は、ＤＭＥ及び／又はＤＲの処置のためにＩＬＵＶＩＥＮ（登録商標）（デキサメタゾン硝子体内インプラント）と組み合わせて投与することができる。
場合によっては、ＴＡＯ／ＰＲＮ処置レジメン又はＴＡＥ処置レジメンを使用して、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体及び／又はそのポリマー製剤と組み合わせてＡＭＤ治療剤（例えば、ラニビズマブ又はアフリベルセプト）を投与してもよい。いくつかの例では、眼障害はＡＭＤ（例えば、滲出型ＡＭＤ）である。いくつかの例では、眼障害はＧＡである。
上述したそのような併用療法は、併用投与（ここでは、２つ以上の治療剤が同一又は別個の製剤中に含まれる）及び別個の投与を包含し、この場合、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する本発明の抗体の投与は、追加の治療剤又は薬剤の投与に先立って、同時に、及び／又はそれに続いて、行われ得る。一実施形態では、本発明のヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体の投与及びさらなる治療剤の投与は、互いに約１、２、３、４、若しくは５ヶ月以内、又は約１、２、若しくは３週間以内、又は約１、２、３、４、５、若しくは６日以内に行われる。
本発明の抗体（及び任意の追加の治療剤）は、非経口、肺内、及び鼻腔内、並びに局所的な処置のために望まれる場合、病変内投与を含む、任意の適切な手段によって投与することができる。非経口輸液には、筋肉内投与、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、又は皮下投与が含まれる。投薬は、投与が短期又は長期であるかに部分的に応じて、任意の好適な経路、例えば、静脈内又は皮下注射等の注射によるものであり得る。単回又は様々な時点にわたる複数回投与、ボーラス投与、及びパルス輸注を含むが、これらに限定されない様々な投薬スケジュールが、本明細書では企図される。
本発明の抗体は、良好な医療行為と一致した方法で製剤化され、投与され、投与されるであろう。これに関連して考慮すべき要因としては、処置される特定の障害、処置される特定の哺乳動物、個々の患者の臨床状態、障害の原因、薬剤の送達部位、投与方法、投与スケジュール、及び医療従事者に既知である他の要因が挙げられる。抗体は、問題の疾患を予防又は処置するために現在使用されている１種以上の薬剤と一緒に製剤化されている必要はないが、任意に製剤化される。このような他の薬剤の有効量は、医薬組成物中に存在する抗体の量、疾患又は処置の種類、及び上述した他の要因に依存する。これらは、一般に、本明細書に記載のものと同じ投薬量及び投与経路によって、又は本明細書に記載の投薬量の約１～９９％、又は適切であると経験的／臨床的に判断される任意の投薬量及び任意の経路で使用される。
疾患の予防又は処置について、本発明の抗体の適切な投薬量は（単独で、又は１つ以上の他の追加の治療剤と組み合わせて使用される場合）、処置される疾患の種類、抗体の種類、疾患の重症度及び経過、抗体が予防目的又は治療目的で投与されるかどうか、以前の療法、患者の病歴及び抗体への応答、並びに主治医の裁量に依存するだろう。本発明の抗体は、好適には、患者に一度に又は一連の処置にわたって投与される。疾患の種類及び重症度に応じて、約１μｇ／ｋｇ～１５ｍｇ／ｋｇ（例えば、０．１ｍｇ／ｋｇ～１０ｍｇ／ｋｇ）の抗体が、例えば、１回以上の別個の投与によるか、又は連続注入によるかにかかわらず、患者への投与のための初期候補投薬量であり得る。典型的な１日投薬量は、上述の因子に依存して、約１μｇ／ｋｇ～１００ｍｇ／ｋｇの範囲であってもよい。数日間又はそれ以上にわたる反復投与において、状態に応じ、処置は通常、疾患症状の所望の抑制が生じるまで続けられる。抗体の１つの例示的な投与量は、約０．０５ｍｇ／ｋｇから約１０ｍｇ／ｋｇの範囲であろう。したがって、約０．５ｍｇ／ｋｇ、２．０ｍｇ／ｋｇ、４．０ｍｇ／ｋｇ、又は１０ｍｇ／ｋｇ（又はこれらの任意の組合せ）のうちの１つ以上の用量が、患者に投与され得る。かかる用量は、断続的に、例えば毎週又は３週間毎（例えば、患者が約２～約２０回、又は例えば約６回の用量の抗体を受容するように）投与されてもよい。最初の多めの投与量、それに続く１回以上の量の少ない用量を投与してよい。この療法の進行は、従来の技術及びアッセイによって容易に監視される。
Ｅ．製造物品
本発明の別の態様では、上述の障害の処置、予防及び／又は診断に有用な材料を含む製造物品が提供される。製造物品は、容器と、容器に挿入されるか、又は容器に付随するラベル又はパッケージ添付文書とを備えている。適切な容器としては、例えば、ボトル、バイアル、シリンジ、ＩＶ溶液バッグなどが挙げられる。容器は、ガラス又はプラスチックなどの様々な材料から形成されてもよい。容器は、状態を処置、予防、及び／又は診断するのに有効な別の組成物と単独で又は組み合わせて使用される組成物を保持し、無菌アクセスポートを有していてもよい（例えば、容器は、静脈内溶液バッグ又は皮下注射針によって穿孔可能なストッパーを有するバイアルであってもよい）。組成物中の少なくとも１つの活性剤は、本発明の抗体である。ラベル又は添付文書は、組成物が、選択される症状を処置するために使用されることを示す。さらに、製造物品は、（ａ）組成物を含む第１の容器を含み、この組成物は本発明の抗体を含み、（ｂ）組成物を含む第２の容器を含み、この組成物は細胞疾患性又は他の治療剤を更に含む。本発明のこの態様における製造物品は、組成物が特定の状態を処置するために使用され得ることを示すパッケージ添付文書を更に含んでいてもよい。これに代えて、又はこれに加えて、製造物品は、薬学的に許容され得る緩衝液、例えば、注射用静菌水（ＢＷＦＩ）、リン酸緩衝化生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液及びデキストロース溶液を含む第２の（又は第３の）容器を更に備えていてもよい。他の緩衝剤、希釈剤、フィルタ、針、注射器等、商業的及び使用者の観点から望ましい他の材料を更に含んでいてもよい。
３．本発明の特定の実施形態
以下に、本発明の特定の実施形態を列挙する。
１．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内のＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、ＶＥＧＦパラトープが、抗体のＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含み、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープが、抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ酸残基を含む、抗体。
２．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内にＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインの対がヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに同時に結合する、抗体。
３．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内にＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、ＶＥＧＦパラトープに含まれるアミノ酸のいずれもＰＤＧＦ－Ｂパラトープに含まれない、抗体。
４．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内のＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、配列番号１１の可変重鎖ドメイン及び配列番号２１の可変軽鎖ドメインを有する抗体と同一のヒトＶＥＧＦ上のエピトープ及び同一のヒトＰＤＧＦ－Ｂ上のエピトープに結合する、抗体。（ＲＯ７１１３０８３）．
５．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内にＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、
● ＶＥＧＦパラトープは、抗体のＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含み、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープは、抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ酸残基を含む；及び／又は
● 可変軽鎖ドメインと可変重鎖ドメインとの対は、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに同時に結合する；及び／又は
● ＶＥＧＦパラトープに含まれるアミノ酸のいずれもＰＤＧＦ－Ｂパラトープに含まれない；及び／又は
● 配列番号１１の可変重鎖ドメイン及び配列番号２１の可変軽鎖ドメインを有する抗体と同一のヒトＶＥＧＦ上のエピトープ及び同一のヒトＰＤＧＦ－Ｂ上のエピトープに結合する；及び／又は
● 抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する；及び／又は
● 抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、６８℃以上の凝集開始温度を示す、抗体。
６．（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
７．（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
８．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む、抗体。
９．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む、抗体。
１０．（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
１１．（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
１２．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体。
１３．アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
１４．
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む、実施形態１３に記載の抗体。
１５．アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
１６．
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む、実施形態１５に記載の抗体。
１７．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、一組のＶＬドメイン及びＶＨドメイン内に、（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み；ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体。
１８．
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む、実施形態１７に記載の抗体。
１９．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、一組のＶＬドメイン及びＶＨドメイン内に、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み；ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体。
２０．
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５及びＲ６６、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含む、ＶＥＧＦパラトープ；並びに、
－ ＶＨドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｄ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２、並びにＶＬドメイン中に以下のアミノ酸残基：Ｅ５５及びＨ５６を含む、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含む、実施形態１９に記載の抗体。
２１．（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２２．（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２３．（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２４．（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２５．（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２６．（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２７．（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２８．（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン；（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインであって、アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
２９．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、抗体。
３０．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、抗体。
３１．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、抗体。
３２．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号２８のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、抗体。
３３．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでおりＤ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでおりＡ１、Ｉ２、Ｈ６８、及びＥ６９を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングはＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体。
３４．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含む、抗体。
３５．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
３６．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
３７．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
３８．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号３１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
３９．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２５の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４０．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号２５の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４１．（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２８のアミノ酸配列を含むＶＨドメインであって、該アミノ酸置換が位置３～２４、２９、３０、３５ｃ～５２、５２ｂ、５４、５９、６０、６７～７２、７７～９３、９５、９７、９９、又は１０３～１１３に位置するＶＨドメイン；（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２５のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインであって、該アミノ酸置換が配列番号３１の位置３～２５、２７ｄ～５４、５７～６７、７０～９１、又は９７～１０７に位置する可変軽鎖ドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４２．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びにＶＬドメイン（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、抗体。
４３．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、（ａ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号１１のアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）１５個までのアミノ酸置換を有する配列番号２１のアミノ酸配列を含む可変軽鎖ドメインを含む、抗体。
４４．配列番号２２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４５．配列番号２６のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４６．配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４７．配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４８．配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
４９．配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５０．配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５１．配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体。
５２．配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５３．配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２０の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体。
５４．配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９の軽鎖アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５５．配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号１９の軽鎖アミノ酸配列を含む、ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体。
５６．配列番号１８の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７の軽鎖アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５７．配列番号３０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号２７の軽鎖アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５８．配列番号３０の重鎖アミノ酸配列及び配列番号３３の軽鎖アミノ酸配列を含む、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
５９．抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
６０．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、抗体。
６１．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含む抗体であって、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、抗体。
６２．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン；並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満の ＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、抗体。
６３．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、一対のＶＨドメイン及びＶＬドメイン中に、（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、抗体。
６４．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、抗体。
６５．抗体Ｆａｂフラグメントが６８℃以上の凝集開始温度を示す、先行する実施形態のいずれか一つの抗体。
６６．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが６８℃以上の凝集開始温度を示す抗体。
６７．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、６８℃以上の凝集開始温度を示す、抗体。
６８．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、及びＩ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは６８℃以上の凝集開始温度を示す、抗体。
６９．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、一対のＶＨドメイン及びＶＬドメイン中に、（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメインを含み、ＶＨドメイン及びＶＬドメインのナンバリングが、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従っており、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが６８°Ｃ以上の凝集開始温度を示す、抗体。
７０．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、（ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに、（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメインを含み、（ａ）配列番号１１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列と少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメインを含み、抗体の抗体Ｆａｂフラグメントは、６８℃以上の凝集開始温度を示す、抗体。
７１．モノクローナル抗体である、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
７２．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体フラグメントである、先行する実施形態のいずれか一つの抗体。
７３．二重特異性である、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
７４．Ｆａｂフラグメントである、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
７５．二重特異性抗体フラグメントである、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
７６．多重特異性抗体である、先行する実施形態のいずれか一つに記載の抗体。
７７．実施形態１～７６のいずれか一つに記載の抗体をコードする、単離された核酸。
７８．実施形態７７の核酸を含む、宿主細胞。
７９．実施形態７７の核酸を含む、発現ベクター。
８０．ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を産生する方法であって、抗体が産生されるように実施形態７８に記載の宿主細胞を培養するステップを含む、方法。
８１．抗体を宿主細胞から回収することをさらに含む、実施形態８０に記載の方法。
８２．実施形態８０又は８１の方法によって産生される抗体。
８３．実施形態１～７６のいずれか一項に記載の抗体と、薬学的に許容され得る担体とを含む、医薬製剤。
８４．医薬として使用するための、実施形態１～７６のいずれか一項に記載の抗体。
８５．血管疾患の処置における使用のための実施形態１～７６のいずれか一項に記載の抗体。
８６．眼血管疾患の処置における使用のための実施形態１～７６のいずれか一項に記載の抗体。
８７．医薬の製造における実施形態１～７６のいずれか１つに記載の抗体又は実施形態８３に記載の医薬組成物の使用。
８８．血管新生を阻害するための医薬の製造における実施形態１～７６のいずれか１つに記載の抗体又は実施形態８３に記載の医薬組成物の使用。
８９．血管疾患を有する個体を処置する方法であって、有効量の実施形態１～７６のいずれか一項に記載の抗体又は実施形態８３に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
９０．眼血管疾患を有する個体を処置する方法であって、有効量の実施形態１～７６のいずれか一項に記載の抗体又は実施形態８３に記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
９１．個体における血管新生を阻害する方法であって、血管新生を阻害するために有効量の実施形態１～７６のいずれかに記載の抗体又は実施形態８３のいずれかに記載の医薬組成物を個体に投与することを含む、方法。
Figure 2023520414000003
Figure 2023520414000004

Figure 2023520414000005

Figure 2023520414000006

Figure 2023520414000007
以下の実施例は、本発明の理解を助けるために提供されており、その真の範囲は、特許請求の範囲に明記されている。本発明の思想から逸脱することなく、定められた手順に変更を加えることができると理解される。
実施例１：
二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントの作製
合成Ｆａｂフラグメントの２つの異なるファージディスプレイライブラリーを利用し、第１のファージディスプレイライブラリーでは、ＦａｂフラグメントのＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２領域内の残基が多様化しており、第２のファージディスプレイライブラリーでは、ＦａｂフラグメントのＣＤＲ－Ｌ１、ＣＤＲ－Ｌ３及びＣＤＲ－Ｈ２領域内の残基が多様化していた。各ライブラリーにおいて、他の３つのＣＤＲ領域は不変ダミー配列として多様化されないままであった。両方のライブラリーにおいて、ファージディスプレイを促進するために、ＦａｂフラグメントのＣＨ１ドメインをリンカーを介して切断型遺伝子－ＩＩＩタンパク質に融合した。
ファージライブラリーパニングによって、第１のライブラリーをヒトＰＤＧＦ－Ｂに対する結合剤について濃縮し、第２のライブラリーをヒトＶＥＧＦ－Ａに対する結合剤について濃縮した。パニング後、ファージミドベクターの両方の濃縮プールについてプラスミドミニプレップを作製した。ミニプレップを制限酵素で消化して、切断型遺伝子－ＩＩＩタンパク質をコードする領域を切り出し、ライゲーションによって再環状化して、それぞれＰＤＧＦ－Ｂ結合剤又はＶＥＧＦ－Ａ結合剤が濃縮された可溶性Ｆａｂフラグメントをコードする発現ベクターのプールを得た。これらのベクタープールをＴＧ１大腸菌細胞に形質転換し、個々のコロニーを採取し、マイクロタイタープレートにおける個々のＦａｂクローンの可溶性発現のために培養した。可溶性Ｆａｂフラグメントを含む上清を、標準的なＥＬＩＳＡ法を使用してＰＤＧＦ－Ｂ又はＶＥＧＦ－Ａへの結合についてスクリーニングし、特異的結合剤を産生するＴＧ１クローンをＤＮＡプラスミド調製及び配列決定に供して、それぞれＰＤＧＦ－Ｂ又はＶＥＧＦ－Ａのいずれかに特異的に結合するＶＨ及びＶＬ配列の対を得た。
ＶＥＧＦ－ＰＤＧＦ適用のための二重特異性設計の説明：
一対の二重特異性ＶＨ配列及びＶＬ配列を、（１）重鎖Ｎ末端領域を含むＶＨ残基１～３、ＣＤＲ－Ｈ１を含む２３～３５、ＶＨ外側ループ領域を含む７１～７７、及びＰＤＧＦ－Ｂ特異的Ｆａｂ配列からのＣＤＲ－Ｈ３を含む９３～１０２、並びにＶＥＧＦ－Ａ特異的Ｆａｂ配列からのＣＤＲ－Ｈ２を含むＶＨ残基５０～６５をＶＨ３及びＪＨフレームワーク配列とインフレームで配置し、（２）軽鎖Ｎ末端領域を含むＶＬ残基１～３、ＣＤＲ－Ｌ１を含む２４～３４、ＶＬ外側ループ領域を含む６６～７１、及びＶＥＧＦ－Ａ特異的Ｆａｂ配列からのＣＤＲ－Ｌ３を含む８９～９７、並びにＰＤＧＦ－Ｂ特異的Ｆａｂ配列からのＣＤＲ－Ｌ２を含むＶＬ残基４９～５７をＶｋａｐｐａ１及びＪＫフレームワークとインフレームで配置することによって、インシリコで設計した。
得られた二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体「Ｐ１ＡＥ２８４５」は、配列番号９の重鎖と配列番号１０の軽鎖とを特徴とする。
実施例２：
二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ ＦａｂフラグメントＰ１ＡＥ２８４５の発現
設計した二重特異性ＤｕｔａＦａｂのＶＨ及びＶＬ配列の対を合成し、ＣＨ１及びＣｋａｐｐａドメインをコードする遺伝子配列のコンテキストで大腸菌発現ベクターにクローニングした。ベクターをＴＧ１大腸菌細胞に形質転換し、二重特異性Ｆａｂフラグメントの可溶性発現のために個々のコロニーを培養した。ＴＧ１培養上清からアフィニティークロマトグラフィーにより二重特異性Ｆａｂフラグメントを精製し、ＰＤＧＦ－Ｂ及びＶＥＧＦ－Ａの両方に対する特異的結合を検証した。
実施例３：
二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ ＦａｂフラグメントＰ１ＡＥ２８４５の特徴付け
二重特異性抗体Ｐ１ＡＥ２８４５の結合親和性、親水性及び熱安定性を以下のように評価した。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価した場合のＶＥＧＦ結合動態：
抗Ｈｉｓ捕捉抗体（ａｎｔｉ－Ｈｉｓ ｃａｐｔｕｒｉｎｇ ａｎｔｉｂｏｄｙ：ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ２８９９５０５６）を、標準的なアミンカップリング化学を用いてＳｅｒｉｅｓ Ｓ Ｓｅｎｓｏｒ Ｃｈｉｐ Ｃ１（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ２９１０４９９０）に固定化し、約５００共鳴単位（ＲＵ）の表面密度を得た。ランニングバッファー及び希釈バッファーとして、ＨＢＳ－Ｐ＋（１０ｍＭ ＨＥＰＥＳ，１５０ｍＭ ＮａＣｌ ｐＨ７．４，０．０５％界面活性剤Ｐ２０）を使用した。ヒトＶＥＧＦ１２１－Ｈｉｓを表面に捕捉した結果、それぞれ約１０及び２０ＲＵのリガンド密度であった。二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントの希釈系列（１．２～１００ｎＭ、１：３希釈）をそれぞれ９０秒間連続して注入し、解離を３０μｌ／分の流量で３６００秒間監視した（単一サイクル速度論）。１０ｍＭのグリシンｐＨ１．５を６０秒間注入して表面を再生した。バルク屈折率の差は、ブランク注入を差し引くことで補正し、ヒトＶＥＧＦ１２１を捕捉していない対照フローセルから得られた応答を差し引くことで補正した。Ｂｉａｃｏｒｅ評価ソフトウェア内の１：１ Ｌａｎｇｍｕｉｒ結合モデルを用いて、曲線適合を行った。より堅牢なフィッティングを提供するために、両方のリガンド密度を使用したグローバルフィッティングのために、Ｍｕｌｔｉｐｌｅ Ｒｍａｘオプションを選択した。
表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）によって評価した場合のＰＤＧＦ－Ｂ結合動態：
ヒトＰＤＧＦ－ＢＢ結合ＥＬＩＳＡ：結合分析は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）ベースの技術を使用して行った。抗原ヒトＰＤＧＦ－ＢＢ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、カタログ番号８９２１ＢＦ）を、３８４ウェルマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４６４７１８）上に、ＰＢＳ、０．５％ ＢＳＡ及び０．０５％ Ｔｗｅｅｎ中２５μＬで１２５ｎｇ／ｍＬの濃度で固定化した。以下の各ステップの後に、分注及び吸引を伴う９０μＬのＰＢＳの３回の洗浄ルーチンを行った：１）ブロッキング工程：飽和非結合面（１時間、２％ ＢＳＡ）；２）１時間の漸増濃度の抗ＰＤＧＦ－ＢＢ抗体；３）検出抗体、希釈＝１：３０００（ＥＣＬ抗ウサギＩｇＧ－ＰＯＤ、ＮＡ９３４０Ｖ＋ＥＣＬ抗ヒトＩｇＧ－ＰＯＤ、ＮＡ９３３Ｖ、あるいはマウス抗体の場合はＥＣＬ抗マウスＩｇＧ－ＰＯＤ；ＮＡ９３１０Ｖ）。基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ、Ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ、カタログ番号３４０２１）を添加してから２０～３０分後、光学密度を３７０ｎｍで測定した。ＥＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ ６．０ソフトウェアを使用して４パラメータ・ロジスティック・モデルで計算した。
カニクイザルＰＤＧＦ－ＢＢ結合ＥＬＩＳＡ：結合分析は、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）ベースの技術を使用して行った。抗原ヒトＰＤＧＦ－ＢＢを、３８４ウェルマイクロタイタープレート（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号４６４７１８）上に、ＰＢＳ、０．５％ ＢＳＡ及び０．０５％ Ｔｗｅｅｎ中２５μＬで１２５ｎｇ／ｍＬの濃度で固定化した。以下の各ステップの後に、分注及び吸引を伴う９０μＬのＰＢＳ、０．５％のＢＳＡ、０．０５％のＴｗｅｅｎの３回の洗浄ルーチンを行った：１）ブロッキング工程：飽和非結合面（１時間、２％ ＢＳＡ）；２）１時間の漸増濃度の抗ＰＤＧＦ－ＢＢ抗体；３）検出抗体、希釈＝１：３０００（ＥＣＬ抗ウサギＩｇＧ－ＰＯＤ、ＮＡ９３４０Ｖ＋ＥＣＬ抗ヒトＩｇＧ－ＰＯＤ、ＮＡ９３３Ｖ、あるいはマウス抗体の場合はＥＣＬ抗マウスＩｇＧ－ＰＯＤ；ＮＡ９３１０Ｖ）。基質３，３’，５，５’－テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ、Ｐｉｅｒｃｅｎｅｔ、カタログ番号３４０２１）を添加してから２０～３０分後、光学密度を３７０ｎｍで測定した。ＥＣ５０は、ＧｒａｐｈＰａｄＰｒｉｓｍ ６．０ソフトウェアを使用して４パラメータ・ロジスティック・モデルで計算した。
疎水性相互作用クロマトグラフィー（ＨＩＣ）：
見かけの疎水性は、２０μｇの二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントを、２５ｍＭのリン酸Ｎａ、１．５Ｍの硫酸アンモニウム、ｐＨ７．０で平衡化したＨＩＣ－Ｅｔｈｅｒ－５ ＰＷ（Ｔｏｓｏｈ）カラムに注入することによって決定した。溶出は、０～１００％の緩衝液Ｂ（２５ｍＭリン酸ナトリウム、ｐＨ ７．０）の直線勾配で６０分以内に行った。保持時間を、既知の疎水性を有するタンパク質標準と比較した。
熱安定性：
二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントの試料を、２０ｍＭ ヒスチジン／ヒスチジンクロリド、１４０ｍＭ ＮａＣｌ中、ｐＨ ６．０で１ｍｇ／ｍＬの濃度にて調製し、０．４μｍフィルタプレートで遠心分離して光学３８４ウェルプレートに移し、パラフィンオイルで覆った。試料を２５℃から８０℃へ０．０５℃／分の率で加熱しながら、流体力学半径を、ＤｙｎａＰｒｏプレートリーダ（Ｗｙａｔｔ）における動力学的光散乱により繰り返し、測定した。あるいは、試料を１０μＬマイクロキュベットアレイへ移し、それらを２５℃から９０℃へ０．１℃／分の率で加熱しながら、静的光散乱データ及び２６６ｎｍレーザでの励起による蛍光データをＯｐｔｉｍ１０００装置（Ａｖａｃｔａ Ｉｎｃ．）で記録した。
凝集開始温度は、流体力学半径（ＤＬＳ）又は散乱光強度（Ｏｐｔｉｍ１０００）が増加し始める温度として定義される。
結果を表１及び表２に示す。
Figure 2023520414000008
Figure 2023520414000009
実施例４：
二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ ＦａｂフラグメントＰ１ＡＥ２８４５の改善
臨床適用のために、抗体は、例えばＰＤＧＦ－Ｂ及びＶＥＧＦ結合に関してさらに改善された。ＶＨドメイン及びＶＬドメインに異なるアミノ酸置換を導入することによって、数回の成熟を行った。熟成中、抗体Ｐ１ＡＥ２８４５に由来する候補抗体をスクリーニングし、収率、親和性、同時抗原結合、親水性、安定性、粘度及び他のパラメータに関するそれらの所望の特性に基づいて選択した。
改善された候補抗体Ｐ１ＡＡ９１２４並びに２８．０１、２８．０２、ＲＯ７１１３０８３及び２８．０７を、複数の試験された候補抗体分子から選択した。これらの改善された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントのアミノ酸配列を表３に特定する。
Figure 2023520414000010
図２及び図３は、生成された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントの可変重鎖ドメイン及び可変軽鎖ドメインのアラインメントを示す。ＶＨドメイン及びＶＬドメイン内のアミノ酸位置のナンバリングは、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従う。簡単にするために、ナンバリングを図に含め、フレームワーク及びＣＤＲアミノ酸位置をさらに例示する。
実施例５：
改善された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントの抗原結合動態
候補抗体について、ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ－Ｂに対する結合動態を、示された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメント（表３に示されるアミノ酸配列）を使用して実施例３に記載されるように評価した。
ＰＤＧＦ－Ｂ結合動態の結果を表４ａ、４ｂ並びに表５ａ、ｂ及びｃに示す。比較のために、国際公開第２０１６／０７５０３６号に開示される完全長ＩｇＧ抗体である先行技術の抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体０１１７の抗原の結合動態を示す。また、ペグ化アプタマーである先行技術のＰＤＧＦ阻害剤ペグプレラニブ（Ｆｏｖｉｓｔａ（登録商標））のＰＤＧＦ結合動態を示す。
Figure 2023520414000011
Figure 2023520414000012
Figure 2023520414000013
Figure 2023520414000014
Figure 2023520414000015
Figure 2023520414000016
ＶＥＧＦ結合動態の結果を表６ａ及びｂに示す。
Figure 2023520414000017
Figure 2023520414000018
実施例６：
改善された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメントの生物物理学的特性（安定性及び疎水性）
候補抗体の示された生物物理学的特性を、示された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ Ｆａｂフラグメント（表３に示されるアミノ酸配列）を使用して実施例３に記載されるように評価した。
表７は、分析した抗体の熱安定性及び疎水性を示す。比較のために、国際公開第２０１６／０７５０３６号に開示される完全長ＩｇＧ抗体である先行技術の抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ抗体０１１７の熱安定性が含まれる。
Figure 2023520414000019
実施例７：
ＶＥＧＦ１２１及びＶＥＧＦ１６５のブロッキング活性（ＶＥＧＦベースラインアッセイ）
Ｍａｘｉｓｏｒｐ ９６ウェルプレート（ＴｈｅｒｍｏＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃ＃４４２４０４）を、１μｇ／ｍＬの最終濃度で室温で１時間、２００ｍＭ ＮａＨＣＯ３、ｐＨ９．４中の５０μＬ／ウェルのｈＶＥＧＦＲ－１－Ｆｃでコーティングした。示されている候補Ｆａｂフラグメントを、２８０μＬのＰＢＳＴ－１％ＢＳＡ中４０９．６ ｎＭの濃度に希釈した。２倍段階希釈では、この希釈Ｆａｂ試料１４０μＬを、１４０μＬのＰＢＳＴ－１％ＢＳＡと混合し、穏やかなピペッティングによって７回混合した。この２倍希釈工程をさらに９回繰り返した。丸底９６ウェルプレートに、ＰＢＳＴ－１％ＢＳＡ中の２ｎＭ ＶＥＧＦ１２１又は２ｎＭ ＶＥＧＦ１６５を５０μＬ／ウェルで予め充填した。５０μＬのＦａｂ希釈液をＶＥＧＦプレートに添加し、６回混合し、１．５時間インキュベートした。続いて、ｍａｘｉｓｏｒｐプレートをＰＢＳＴで２回洗浄した後、２００μＬの２％ ＭＰＢＳＴを添加し、続いて室温で４５分間インキュベートした。その後、プレートをＰＢＳＴで２回洗浄した。５０μｌのＦａｂ－ＶＥＧＦプレミックスをＭａｘｉｓｏｒｐプレートに移し、室温で１．５時間インキュベートした。その後、プレートをＰＢＳＴで２回洗浄し、５０μＬの抗ＶＥＧＦ－バイオ抗体（ＰＢＳＴで１：２０００希釈）及びＳＡ－ＨＲＰ（ＰＢＳＴで１：２０００希釈）を添加し、室温で３０分間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで６回洗浄し、５０μＬのＴＭＢ基質溶液を添加し、室温で３０分間インキュベートした。最後に、５０μＬの１Ｎ硫酸を添加して反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取る。結果を図４に示す。
実施例８：
改善された二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ ＦａｂフラグメントＰ１ＡＡ９１２４の構造解析
ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ－Ｂと複合体を形成した二重特異性抗ＶＥＧＦ／抗ＰＤＧＦ－Ｂ ＦａｂフラグメントＰ１ＡＡ９１２４の結晶構造から、それぞれの抗原ＶＥＧＦ及びＰＤＧＦ－Ｂと接触しているアミノ酸残基を同定した。
Ｆａｂ－ＶＥＧＦ複合体の結晶化：ＶＥＧＦＡ－１２１（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ－カタログ番号１００－２０Ａ）と複合体を形成したＦａｂフラグメントＰ１ＡＡ９１２４の結晶を得るために、両タンパク質をＶＥＧＦモノマーに対して１：１のモル比で混合した。複合体を１１ｍｇ／ｍｌに濃縮し、２０°Ｃで０．１Ｍ ＭＥＳ ｐＨ６．５及び１．６Ｍ硫酸マグネシウムに対し、滴下蒸気拡散法により結晶化を行った。針状結晶は約１２０日間で成長し、凍結防止剤として２０％グリセロールを含む液体窒素中で凍結された。
データ収集及び結晶構造決定Ｆａｂ－ＶＥＧＦ複合体：ＭａｒＭｏｓａｉｃ ２２５検出器を備えたステーションＩ９１１－３（ＭＡＸ ＩＶ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｌｕｎｄ，Ｓｗｅｄｅｎ）で、１００Ｋの温度でデータを収集した。露光時間３０秒及び画像あたり１°の振動範囲で合計２００個の回折画像を収集した。データを統合し、ＸＤＳ（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（１９９３）．２６，７９５－８００）を使用してスケーリングし、次いでＸＤＳＣＯＮＶを使用してマージし、ＭＴＺフォーマットに変換した。Ｔｈｅ ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ（Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．（２０１１）．Ｄ６７，２３５－２４２）を使用して、Ｐｈａｓｅｒ（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（２００７）．４０，６５８－６７４）を用いた分子置換によってＤｕｔａＦａｂ：ＶＥＧＦ複合体の構造を解明及び精密化した。溶媒含有量及びＭａｔｔｈｅｗｓの係数は、それぞれ４３．５％及び２．１８Å３／Ｄａであると計算された。これは非対称単位中の２つのＦａｂ：ＶＥＧＦ複合体に対応する。探索モデルとして、ＶＥＧＦの構造（ＰＤＢ １ＢＪ１）及び関連Ｆａｂ（ＰＤＢ １ＪＰＳ）を使用して、それぞれ非対称単位中の１及び２コピーを探索した。Ｐｈａｓｅｒは、二量体ＶＥＧＦ及び２つのＦａｂ分子を局在化することができた。分子置換後、Ｒｅｆｍａｃ５（Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．（１９９７）．Ｄ５３，２４０－２５５）で剛体精密化を行った。Ｒｅｆｍａｃ５における反復の制限された精密化及びＣｏｏｔ（Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．（２００４）．Ｄ６０，２１２６－２１３２）におけるモデル構築は、それぞれ２２．２％及び２７．２％のＲ値及びＲｆｒｅｅ値を有する最終構造をもたらした。
Ｆａｂ－ＰＤＧＦ複合体の結晶化：ＰＤＧＦ－ＢＢ（Ｐｅｐｒｏｔｅｃｈ－カタログ番号１００－１３Ａ）と複合体を形成したＦａｂフラグメントＰ１ＡＡ９１２４の結晶を得るために、両タンパク質をＰＤＧＦ モノマーに対して１：１のモル比で混合した。複合体を１２ｍｇ／ｍｌに濃縮し、２０°Ｃで０．１Ｍ Ｔｒｉｓ ｐＨ７．５、４２％（＋／－）－２－メチル－２，４－ペンタンジオール（ＭＰＤ）に対し、滴下蒸気拡散法により結晶化を行った。板状結晶は数週間以内に成長し、凍結防止剤として２０％グリセロールを含む液体窒素中で凍結させた。
データ収集及び結晶構造決定Ｆａｂ－ＰＤＧＦ複合体：Ｐｉｌａｔｕｓ３ ６Ｍ検出器を備えたステーションＩ０３（Ｄｉａｍｏｎｄ Ｌｉｇｈｔ Ｓｏｕｒｃｅ，ＵＫ）で１００Ｋの温度でデータを収集した。露光時間０．１秒及び画像あたり０．２°の振動範囲で合計８００個の回折画像を収集した。データを統合し、ＸＤＳ（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（１９９３）．２６，７９５－８００）を使用してスケーリングし、次いでＸＤＳＣＯＮＶを使用してマージし、ＭＴＺフォーマットに変換した。Ｔｈｅ ＣＣＰ４ ｓｕｉｔｅ（Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．（２０１１）．Ｄ６７，２３５－２４２）を使用して、Ｐｈａｓｅｒ（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．（２００７）．４０，６５８－６７４）を用いた分子置換によってＤｕｔａＦａｂ：ＰＤＧＦ－ＢＢ複合体の構造を解明及び精密化した。溶媒含有量及びＭａｔｔｈｅｗｓの係数は、それぞれ５３．２％及び２．６３Å３／Ｄａであると計算された。これは非対称単位中の２つのＤｕｔａＦａｂ：ＰＤＧＦ複合体に対応する。検索モデルとして、単量体ＰＤＧＦ（ＰＤＢ ４ＱＣＩ）及びＤｕｔａＦａｂ：ＶＥＧＦ構造からのＦａｂを使用して、非対称単位中のそれぞれ２コピーを検索した。Ｐｈａｓｅｒは、２つのＦａｂ分子を局在化することができた。分子置換後、Ｒｅｆｍａｃ５（Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．（１９９７）．Ｄ５３，２４０－２５５）で剛体精密化を行った。制限された精密化の第１ラウンドは、十分に明確なマップをもたらしたので、二量体ＰＤＧＦ－ＢＢを手動で配置することができた。Ｒｅｆｍａｃ５における反復の制限された精密化及びＣｏｏｔ（Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔ．（２００４）．Ｄ６０，２１２６－２１３２）におけるモデル構築は、それぞれ２６．７％及び３０．９％のＲ値及びＲｆｒｅｅ値を有する最終構造をもたらした。
Figure 2023520414000020
ＶＨドメイン及びＶＬドメイン内のパラトープアミノ酸残基の位置の例示を図２に示す。図示されているように、ＶＥＧＦパラトープとＰＤＧＦ－Ｂパラトープは重なっていない。ＶＥＧＦパラトープに寄与するアミノ酸はＰＤＧＦ－Ｂパラトープに寄与しない。逆に、ＰＤＧＦ－Ｂパラトープに寄与するアミノ酸はＶＥＧＦパラトープに寄与しない。
軽鎖ＣＤＲ１及びＣＤＲ３並びに重鎖ＣＤＲ２由来のアミノ酸は、ＶＥＧＦパラトープに寄与する。ＶＥＧＦパラトープは、軽鎖ＣＤＲ２、重鎖ＣＤＲ１及び重鎖ＣＤＲ３由来のアミノ酸を含まない。
抗原結合に寄与すると同定されたアミノ酸残基を以下の表８（可変重鎖ドメインアミノ酸残基について）及び表９（可変軽鎖ドメインアミノ酸残基について）に同定する。アミノ酸位置は、Ｋａｂａｔナンバリングシステムに従ってナンバリングされる（図１及び図２において同じナンバリングが使用される）。抗原結合に関与するアミノ酸位置は、ＶＨ又はＶＬドメイン中のそれらのＫａｂａｔ位置によって同定される（図１及び図２のナンバリングも参照）。
Figure 2023520414000021
Figure 2023520414000022

Claims (15)

  1. ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、可変軽鎖ドメイン（ＶＬドメイン）及び可変重鎖ドメイン（ＶＨドメイン）の１つの同族対内のＶＥＧＦパラトープ及びＰＤＧＦ－Ｂパラトープを含み、前記ＶＥＧＦパラトープが、前記抗体のＣＤＲ－Ｈ２、ＣＤＲ－Ｌ１及びＣＤＲ－Ｌ３由来のアミノ酸残基を含み、前記ＰＤＧＦ－Ｂパラトープが、前記抗体のＣＤＲ－Ｈ１、ＣＤＲ－Ｈ３及びＣＤＲ－Ｌ２由来のアミノ酸残基を含む、抗体。
  2. ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、
    － （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメイン；又は
    － （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３を含むＶＨドメイン、並びに（ｄ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｅ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、及び（ｆ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３を含むＶＬドメイン
    を含む、抗体。
  3. ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体であって、
    － （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号１３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメイン；又は
    － （ａ）配列番号３のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ１、（ｂ）配列番号２９のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ２、及び（ｃ）配列番号１４のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｈ３、（ｄ）（ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、及びＷ２８を含むＦＲ１、（ｉｉ）アミノ酸残基Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、及びＲ９４を含むＦＲ３を有するヒト重鎖フレームワークを含むＶＨドメイン、並びに、（ｅ）配列番号１５のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ１、（ｆ）配列番号１６のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ２、（ｇ）配列番号１７のアミノ酸配列を含むＣＤＲ－Ｌ３、及び（ｈ）（ｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２を含むＦＲ１、及び（ｉｉ）アミノ酸残基Ｈ６８、及びＥ６９を含むＦＲ３を有するヒト軽鎖フレームワークを含むＶＬドメイン
    を含み、前記ＶＨドメイン及び前記ＶＬドメインがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体。
  4. ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、一組のＶＬドメイン及びＶＨドメイン内に、
    － （ｉ）アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｓ５６、Ｔ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメイン；又は
    － アミノ酸残基Ｄ１、Ｌ２、Ｄ２５、Ｇ２６、Ｗ２７、Ｗ２８、Ｙ３１、Ｔ３５ｂ、Ｙ５２ａ、Ｇ５５、Ｈ５６、Ｋ５７、Ｙ５８、Ｔ６１、Ｋ６２、Ｆ６３、Ｉ６４、Ｇ６５、Ｒ６６、Ｄ７３、Ｄ７４、Ｔ７５、Ｎ７６、Ｒ９４、Ｄ９６、Ｙ９８、Ｄ１０１、及びＴ１０２を含むＶＨドメイン、並びに（ｉｉ）アミノ酸残基Ａ１、Ｉ２、Ｓ２６、Ｙ２７、Ｗ２７ａ、Ｌ２７ｂ、Ｓ２７ｃ、Ｅ５５、Ｈ５６、Ｈ６８、Ｅ６９、Ｒ９２、Ｙ９３、Ｈ９４、Ｐ９５及びＹ９６を含むＶＬドメイン
    を含み、前記ＶＨドメイン及び前記ＶＬドメインのナンバリングがＫａｂａｔナンバリングシステムに従う、抗体。
  5. － （ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は
    － （ａ）配列番号１１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は
    － （ａ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号２５のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン；又は
    － （ａ）配列番号２８のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン；及び（ｂ）配列番号３１のアミノ酸配列に対して、少なくとも９０％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン
    を含む、請求項１から４のいずれか一項に記載の抗体。
  6. 配列番号２２；配列番号２６；又は配列番号３２のアミノ酸配列を含むＬ－ＦＲ－１を含む、請求項１から５のいずれか一項に記載の抗体。
  7. － 配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列；
    － 配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列；
    － 配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列；又は
    － 配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列
    を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載の抗体。
  8. ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに特異的に結合する抗体であって、
    － 配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２１のＶＬ配列；
    － 配列番号１１のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列；
    － 配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号２５のＶＬ配列；又は
    － 配列番号２８のＶＨ配列及び配列番号３１のＶＬ配列
    を含む、抗体。
  9. 前記抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが、（ｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して５０ｐＭ未満のＫＤでヒトＶＥＧＦ１２１に結合し、（ｉｉ）表面プラズモン共鳴によって測定して１０ｎＭ未満のＫＤでヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する、請求項１から８のいずれか一項に記載の抗体。
  10. 前記抗体の抗体Ｆａｂフラグメントが６８℃以上の凝集開始温度を示す、請求項１から９のいずれか一項に記載の抗体。
  11. 前記抗体がＦａｂフラグメントである、請求項１から１０のいずれか一項に記載の抗体。
  12. 請求項１から１１のいずれかに記載の抗体をコードする、単離された核酸。
  13. 請求項１２に記載の核酸を含む、宿主細胞。
  14. 請求項１３に記載の核酸を含む、発現ベクター。
  15. ヒトＶＥＧＦ及びヒトＰＤＧＦ－Ｂに結合する抗体を産生する方法であって、前記抗体が産生されるように請求項１３に記載の宿主細胞を培養することを含み、前記宿主細胞から前記抗体を回収することをさらに含む、方法。
JP2022559622A 2020-03-30 2021-03-25 Ｖｅｇｆ及びｐｄｇｆ－ｂに結合する抗体及び使用方法 Pending JP2023520414A (ja)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP20166630 2020-03-30
EP20166630.2 2020-03-30
PCT/EP2021/057814 WO2021198034A1 (en) 2020-03-30 2021-03-25 Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JP2023520414A true JP2023520414A (ja) 2023-05-17

Family

ID=70058171

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2022559622A Pending JP2023520414A (ja) 2020-03-30 2021-03-25 Ｖｅｇｆ及びｐｄｇｆ－ｂに結合する抗体及び使用方法

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20230105324A1 (ja)
EP (1) EP4126940A1 (ja)
JP (1) JP2023520414A (ja)
CN (1) CN115397850A (ja)
WO (1) WO2021198034A1 (ja)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023217933A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 F. Hoffmann-La Roche Ag Antibody that binds to vegf-a and il6 and methods of use

Family Cites Families (54)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
JP3101690B2 (ja) 1987-03-18 2000-10-23 エス・ビィ・２・インコーポレイテッド 変性抗体の、または変性抗体に関する改良
DK0564531T3 (da) 1990-12-03 1998-09-28 Genentech Inc Berigelsesfremgangsmåde for variantproteiner med ændrede bindingsegenskaber
CA2103059C (en) 1991-06-14 2005-03-22 Paul J. Carter Method for making humanized antibodies
WO1993006217A1 (en) 1991-09-19 1993-04-01 Genentech, Inc. EXPRESSION IN E. COLI OF ANTIBODY FRAGMENTS HAVING AT LEAST A CYSTEINE PRESENT AS A FREE THIOL, USE FOR THE PRODUCTION OF BIFUNCTIONAL F(ab')2 ANTIBODIES
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
PT1068241E (pt) 1998-04-02 2007-11-19 Genentech Inc Variantes de anticorpos e respectivos fragmentos
ATE297452T1 (de) 1998-07-23 2005-06-15 Avebe Coop Verkoop Prod Klebemittelzusammensetzung
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
MXPA01007170A (es) 1999-01-15 2002-07-30 Genentech Inc Variantes de polipeptidos con funcion efectora alterada.
JP2003516755A (ja) 1999-12-15 2003-05-20 ジェネンテック・インコーポレーテッド ショットガン走査、すなわち機能性タンパク質エピトープをマッピングするための組み合わせ方法
EP1513879B1 (en) 2002-06-03 2018-08-22 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US20040101920A1 (en) 2002-11-01 2004-05-27 Czeslaw Radziejewski Modification assisted profiling (MAP) methodology
RS51318B (sr) 2002-12-16 2010-12-31 Genentech Inc. Varijante imunoglobulina i njihova upotreba
CA2510003A1 (en) 2003-01-16 2004-08-05 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
KR101471732B1 (ko) 2003-08-27 2014-12-16 옵쏘테크 코포레이션 안구의 혈관신생성 장애를 치료하기 위한 조합 치료법
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
EP2374817B1 (en) 2004-04-13 2017-09-06 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-P-selectin antibodies
TWI309240B (en) 2004-09-17 2009-05-01 Hoffmann La Roche Anti-ox40l antibodies
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
EP2465870A1 (en) 2005-11-07 2012-06-20 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus VH/VL hypervariable sequences
US20070237764A1 (en) 2005-12-02 2007-10-11 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
EP2016101A2 (en) 2006-05-09 2009-01-21 Genentech, Inc. Binding polypeptides with optimized scaffolds
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
DE102007001370A1 (de) 2007-01-09 2008-07-10 Curevac Gmbh RNA-kodierte Antikörper
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
AR075896A1 (es) 2009-03-20 2011-05-04 Genentech Inc Anticuerpos anti-her (factor de crecimiento epidermico)
EP3165606A1 (en) 2009-05-01 2017-05-10 Ophthotech Corporation Methods for treating or preventing ophthalmological diseases
CN114246952A (zh) 2010-06-08 2022-03-29 基因泰克公司 半胱氨酸改造的抗体和偶联物
SG193554A1 (en) 2011-03-29 2013-11-29 Roche Glycart Ag Antibody fc variants
EP2726510B1 (en) 2011-05-27 2023-03-08 F. Hoffmann-La Roche AG Dual targeting
JP6152120B2 (ja) 2012-02-15 2017-06-21 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ Ｆｃ受容体に基づくアフィニティークロマトグラフィー
CN104428315B (zh) 2012-07-13 2017-09-29 罗氏格黎卡特股份公司 双特异性抗‑vegf/抗‑ang‑2抗体及其在治疗眼血管疾病中的应用
CA2891566A1 (en) * 2012-12-05 2014-06-12 Dutalys Gmbh Dual targeting
SG10201800492PA (en) 2013-04-29 2018-03-28 Hoffmann La Roche Human fcrn-binding modified antibodies and methods of use
UA117289C2 (uk) 2014-04-02 2018-07-10 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Мультиспецифічне антитіло
WO2016016299A1 (en) 2014-07-29 2016-02-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
JP2017524012A (ja) 2014-08-11 2017-08-24 オプソテック コーポレイションＯｐｈｔｈｏｔｅｃｈ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ 眼科症状を処置するまたは予防するための方法
BR112017003236A2 (pt) 2014-09-12 2017-11-28 Genentech Inc anticorpos elaborados com cisteína, conjugados de droga e anticorpos, método de preparação de conjugado de droga e anticorpo e composição farmacêutica
BR112017009792A2 (pt) 2014-11-10 2018-02-27 Hoffmann La Roche anticorpos anti-pdgf-b e métodos de uso
CA2963175A1 (en) * 2014-11-10 2016-05-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Bispecific antibodies and methods of use in ophthalmology

Also Published As

Publication number Publication date
EP4126940A1 (en) 2023-02-08
CN115397850A (zh) 2022-11-25
US20230105324A1 (en) 2023-04-06
WO2021198034A1 (en) 2021-10-07

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP7426190B2 (ja) ヒトＦｃＲｎ結合改変抗体及び使用方法
JP2020007325A (ja) 修飾されたＦｃＲｎ結合特性およびプロテインＡ結合特性を有するＦｃ領域変種
JP2019062905A (ja) 二重特異性抗ｖｅｇｆ／抗ａｎｇ−２抗体及び眼血管疾患の処置におけるそれらの使用
JP2017505768A (ja) ＦｃＲｎ結合特性が改変されているＦｃ領域変異体
JP2017505767A (ja) ＦｃＲｎ結合特性が改変され、プロテインＡ結合特性が保持されているＦｃ領域変異体
JP2019167363A (ja) ＦｃＲｎ結合が無効となった抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体及び血管性眼疾患の処置におけるそれらの使用
US20230374119A1 (en) Antibody that binds to vegf-a and ang2 and methods of use
US20240101657A1 (en) Antibody that binds to vegf and il-1beta and methods of use
US20230105324A1 (en) Antibody that binds to vegf and pdgf-b and methods of use
RU2816476C2 (ru) Антитело, которое связывается с vegf и il-1бета, и способы применения
TW202402810A (zh) 與ｖｅｇｆ—ａ及ｉｌ６結合之抗體及其使用方法

Legal Events

Date Code Title Description
A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20221201

A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20240322