JP2023519930A - インフルエンザｈ３ｎ２ウイルスのヘマグルチニン（ｈａ）およびノイラミニダーゼ（ｎａ）に対するモノクローナル抗体 - Google Patents

Abstract

本開示は、抗インフルエンザモノクローナル抗体の中和に関する。本開示は、さらに、単離された抗体の治療用途に関する。抗体は、インフルエンザＨ３Ｎ２のヘマグルチニン（ＨＡ）およびノイラミニダーゼ（ＮＡ）のいずれかを対象とする。【選択図】なし

Description

関連出願の相互参照
本出願は、２０２０年４月１日に出願された米国仮出願第６３／００３，４７１号の優先権を主張する。この出願の内容は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。

政府の利益
本発明は、米国国立衛生研究所によって授与されたＡＩ１１６２８５およびＡＩ１４５３３２の下で政府の支援を受けてなされた。政府は、本発明においてある特定の権利を有する。

本発明は、広く中和する抗インフルエンザＨＡまたはＮＡモノクローナル抗体（ｍＡｂ）またはその抗原結合断片に関する。本発明はさらに、抗体または抗原結合断片の治療用途に関する。

インフルエンザ、通称「流感」は、インフルエンザウイルスによって引き起こされる感染性疾患である。インフルエンザウイルスには以下の４つの型：Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤがある。ヒトインフルエンザＡ型およびＢ型ウイルスは、この疾患の季節的な流行を引き起こす。インフルエンザを予防するための最初の最も重要なステップは、毎年インフルエンザの予防接種を受けることである。認可されたインフルエンザワクチンは７０年以上にわたって利用可能であるが、インフルエンザ感染症は依然として公衆衛生上の主要な懸念事項である。年間、米国ではインフルエンザが約３万人の死者および約２０万人の入院をもたらし、世界では年間約３００万～５００万の重症例および２０万～５０万人の死者が出ている。主な脆弱さは、次のシーズン中に最も顕著になると予想される株に適切に一致するように、季節性インフルエンザワクチン組成物を毎年選択する必要性である。季節性ワクチンが循環株と一致しない場合、ワクチンは無効になる場合がある。インフルエンザの抗原ドリフトおよびシフトの傾向、および主に特異的抗体を誘発する傾向により、人類は、「スペイン風邪」が約３，０００万～５，０００万人を死亡させた１９１８年の場合のように、免疫が制限されている、または免疫が存在しない可能性のあるパンデミックの可能性を有する新しい株の波の影響を受けやすいままである。季節性ワクチン接種には、Ａ型インフルエンザＨ１、Ｈ３、およびＢ型インフルエンザ株が含まれるが、最新の２００９年の新型Ｈ１Ｎ１のパンデミックを含む最近のパンデミックは、多様なインフルエンザ株に対して広範な保護を与える新しいワクチン戦略および治療法を開発する必要性を示している。

本発明は、広く中和する抗インフルエンザＨＡまたはＮＡモノクローナル抗体もしくはその抗原結合断片を提供することによって、必要性に対処する。

一態様では、本発明は、（ｉ）配列番号１～３、配列番号７～９、ならびに配列番号７、８、および１２からなる群から選択されるＨＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号４～６、ならびに配列番号１０、５、および１１からなる群から選択されるＬＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含むインフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号２６、３０、および３４からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２８、３２、および３６からなる群から選択される配列を含む。一実施例では、重鎖可変領域は、配列番号１～３の配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４～６の配列を含む。別の実施例では、重鎖可変領域は、配列番号７、８、および９の配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１０、５、および１１の配列を含む。さらなる実施例では、重鎖可変領域は、配列番号７、８、および１２の配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１０、５、および１１の配列を含む。

別の態様では、本発明は、（ｉ）配列番号１３～１５および配列番号１９～２１からなる群から選択されるＨＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、（ｉｉ）配列番号１６～１８、および配列番号２２～２４からなる群から選択されるＬＣＤＲセットのそれぞれの配列を含むＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含むインフルエンザウイルスのノイラミニダーゼ（ＮＡ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片を提供する。いくつかの実施形態では、重鎖可変領域は、配列番号３８および４２からなる群から選択される配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号４０および４４からなる群から選択される配列を含む。一実施例では、重鎖可変領域は、配列番号１３～１５の配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号１６～１８の配列を含む。別の実施例では、重鎖可変領域は、配列番号１９～２１の配列を含み、軽鎖可変領域は、配列番号２２～２４の配列を含む。

さらに、上述の抗体または抗原結合断片のうちの１つ以上とのクロスブロッキングアッセイにおいてインフルエンザウイルスのＨＡまたはＮＡへの結合を競合する単離された抗体またはその抗原結合断片が提供される。

上述の抗体または抗原結合断片のそれぞれは、変異型Ｆｃ定常領域を含み得る。抗体または抗原結合断片は、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体であり得る。抗体または断片は、治療剤、ポリマー、検出可能な標識、または酵素に結合させることができる。ポリマーの例としては、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。治療剤の例としては、細胞傷害性剤が挙げられる。

別の態様では、本発明は、上述の抗体または抗原結合断片のうちいずれか１つのＣＤＲ、重鎖もしくは軽鎖可変領域、または抗原結合部分のうちの１つ以上をコードする単離された核酸または核酸のセットを提供する。核酸（単数または複数）は、ＨＣＤＲまたはＬＣＤＲＳのうちの１つ以上のセット、抗体もしくは抗原結合断片の鎖、または上述の抗体もしくは断片を有するポリペプチドを発現するために使用され得る。この目的のために、核酸（単数または複数）を好適な制御配列に作動可能に連結させて、発現ベクターを生成することができる。したがって、本発明の範囲内には、ベクターを含む培養宿主細胞、およびポリペプチド、抗体、またはその抗原結合部分を産生するための方法がある。本方法は、上述の抗体もしくはその抗原結合部分の上述したＣＤＲ、ポリペプチド、重鎖可変領域または軽鎖可変領域のうちの１つ以上をコードする核酸（単数または複数）を含むベクターを含む培養宿主細胞を得ることと、ベクターによりコードされるポリペプチドの発現を可能にし、抗体またはその断片を組み立てる条件下で、培地中で細胞を培養することと、培養された細胞または細胞の培地から抗体または断片を精製することと、を含む。

上述の抗体または断片は、インフルエンザウイルスの中和方法、またはインフルエンザウイルス感染症の治療、予防もしくは制御方法で使用され得る。本方法は、治療有効量の抗体または断片を、それを必要とする対象に投与することを含む。本方法は、対象に、治療有効量の第２の抗体またはその抗原結合断片を投与することをさらに含むことができる。したがって、本発明はまた、（ｉ）抗体またはその抗原結合断片のうちの１つ以上と、（ｉｉ）薬学的に許容される担体と、を含む薬学的組成物を提供する。

本発明の１つ以上の実施形態の詳細は、以下の説明に記載される。本発明の他の特徴、目的、および利点は、説明および特許請求の範囲から明らかになるであろう。

Ｈ３およびＮ２抗インフルエンザｈｍＡｂの結合プロファイルを示す一連の図である。ＥＬＩＳＡによるインフルエンザＨＡタンパク質（１Ａ）およびＮＡタンパク質（１Ｂ）（陰性対照）への結合について、ｈｍＡｂを、希釈（１０～０．０１μｇ／ｍｌ）で３通りで試験し、曲線下面積（ＡＵＣ）値を提示した。アイソタイプ対照ｈｍＡｂ（ＩＳＯ）は、陰性対照として含まれた。 Ｈ３Ｎ２インフルエンザ感染細胞へのｈｍＡｂの結合プロファイルを示す一連の写真である。ＭＤＣＫ細胞を示されたウイルスで疑似感染させ、１７時間後に固定し、示されたｈＭＡｂで染色し、免疫蛍光アッセイによって結合を評価した。核タンパク質（ＮＰ）ｍＡｂは、感染を確認するための内部対照である。 Ｈ３およびＮ２ ｈｍＡｂがＨ３Ｎ２インフルエンザ感染症からマウスを保護することを示す図である。５～７週齢の雌マウスを、感染の２４時間前に、２０ｍｇ／ｋｇの示されたＨ３およびＮ２ ｈｍＡｂで、またはアイソタイプ対照（ＩｇＧ）もしくはＰＢＳで、ｉ．ｐ．処置した。次いで、マウスをＨ３Ｎ２ Ｘ３１ウイルスの１０ＭＬＤ５０でチャレンジし、体重減少（Ａ）および生存（Ｂ）について毎日監視した。体重の２５％を減少させたマウスを殺処分した。データは、平均＋／－ＳＤ（ｎ＝５）を表す。肺でのウイルス複製（Ｃ）を評価するために、マウスを感染後２（ｎ＝３）および４（ｎ＝３）日で殺処分し、全肺を採取し、イムノフォーカスアッセイ（ＦＦＵ／ｍｌ）によってウイルス力価を決定した。記号は、個々のマウスからのデータを表す。バー、幾何平均肺ウイルス力価；点線、検出限界（２００ＦＦＵ／ｍｌ）。ウイルスは３匹のマウスのうち１匹のみで検出された。＊、スチューデントのｔ検定を用いてｐ＜０．０５。 １０９２Ｅ４および１１２２Ａ１１ ｈｍＡｂがインビボで強力な治療活性を有することを示す図である。５～７週齢の雌マウスに１０ＭＬＤ５０のＨ３Ｎ２ Ｘ３１ウイルスを感染させ、２４時間後に１ｍｇ／ｋｇまたは１０ｍｇ／ｋｇの示されたｈｍＡｂもしくはＰＢＳで処置し、体重減少（Ａ）および生存（Ｂ）について毎日監視した。体重の２５％を減少させたマウスを殺処分した。データは、平均＋／－ＳＤ（ｎ＝５）を表す。肺でのウイルス複製（Ｃ）を評価するために、マウスを感染後２（ｎ＝３）および４（ｎ＝３）日で殺処分し、全肺を採取し、イムノフォーカスアッセイ（ＦＦＵ／ｍｌ）によってウイルス力価を決定した。

本発明は、少なくとも部分的に、ある特定のモノクローナル抗体またはその抗原結合断片の予想外に広く中和する抗インフルエンザ活性に基づいている。これらの抗体および抗原結合断片は、インフルエンザ感染症からの防御における新規の治療戦略を構成する。

インフルエンザに対する現在の抗ウイルス治療（例えば、オセルタミビル／タミフル、アマンタジン／リマンタジン）は、耐性の発生率が増加し、治療可能時間域（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｗｉｎｄｏｗ）が制限されている（症状の発症から４８時間以内に開始しなければならない）ため、最適以下である。引き続き、インフルエンザに対する新たな予防的および治療的介入が模索されている。モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、その高い特異性、限定されたオフターゲット効果、および優れた安全性プロファイルのために、部分的には成長している薬物のクラスであり続けている。がんおよび自己免疫の治療におけるそれらの使用に加えて、いくつかのｍＡｂは、様々な感染症の治療および予防のために、既に許可されているか、または臨床試験において使用されている。

多様なインフルエンザ株を中和する能力を有するほんのわずかなヒトモノクローナル抗体（ｈｍＡｂ）が、単離されている。これらは全て、ビリオンの表面に発現されるヘマグルチニン（ＨＡ）タンパク質を標的とし、複数のＨ１単離物に結合する１Ｆ１（ＰＭＣ３５１６５４９）およびＣＨ６５（ＰＭＣ３１６１５７２）などのｈｍＡｂ、全てのグループ１のウイルスを認識するＦ１０（ＰＭＣ２６９２２４５）およびＣＲ６２６１（ＰＭＣ２７５８６５８）などのｈｍＡｂ、それぞれ、グループ１（例えば、Ｈ１、Ｈ２、Ｈ５）およびグループ２（例えば、Ｈ３、Ｈ７）ウイルスの両方を認識するｈｍＡｂ３Ｉ１４（ＰＭＣ５０２７２８１）、ＦＩ６／ＭＥＤＩ８８５２（ＰＭＩＤ：２１７９８８９４、ＰＭＣ４９６７４５５）、およびＶＳ１４０（ＰＭＣ４５６８２５２）、またはＡ型ウイルスおよびＢ型ウイルスの両方を認識するＣＲ９１１４（ＰＭＣ３５３８８４１）を含む。これらのｈｍＡｂのいくつかは現在、臨床試験中であり、さらに、それらの特性評価は、ユニバーサルインフルエンザワクチンおよび治療薬の開発の目標として有用であり得るインフルエンザＨＡにおける保存されたエピトープの特定につながっている。

広義には、抗ウイルスｈＭＡｂは、ワクチン誘導性免疫がまだ達成されていない（ワクチンの欠如［例えば、パンデミック］、最適以下のワクチン、および／またはワクチン未接種集団を表す）インフルエンザウイルス感染症を予防および治療するための有効な免疫療法剤のための優れた選択肢である。例えば、ＷＯ２０１８／２１３０９７、ＷＯ２０１９／２１３３８４、Ｐａｒｋ ＪＧ ｅｔ ａｌ．Ａ Ｂｒｏａｄ ａｎｄ Ｐｏｔｅｎｔ Ｈ１－Ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｈｕｍａｎ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｅｄ ｉｎ Ｐｌａｎｔｓ Ｐｒｅｖｅｎｔｓ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｖｉｒｕｓ Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｍｉｓｓｉｏｎ ｉｎ Ｇｕｉｎｅａ Ｐｉｇｓ．Ｖｉｒｕｓｅｓ．２０２０ Ｆｅｂ ２；１２（２），Ｐｉｅｐｅｎｂｒｉｎｋ ＭＳ ｅｔ ａｌ．Ｂｒｏａｄ ａｎｄ Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ Ｉｎｆｌｕｅｎｚａ Ｂ Ｖｉｒｕｓ Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ ｉｎ Ｈｕｍａｎｓ ａｆｔｅｒ Ｖａｃｃｉｎａｔｉｏｎ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ Ｃｌｏｎａｌ Ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ ａｓ Ｐｌａｓｍａ Ｃｅｌｌｓ．ＭＢｉｏ．２０１９ Ｍａｒ １２；１０（２），ａｎｄ Ｎｏｇａｌｅｓ Ａ ｅｔ ａｌ．Ａ ｈｉｇｈｌｙ ｐｏｔｅｎｔ ａｎｄ ｂｒｏａｄｌｙ ｎｅｕｔｒａｌｉｚｉｎｇ Ｈ１ ｉｎｆｌｕｅｎｚ－ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｈｕｍａｎ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ．Ｓｃｉ Ｒｅｐ．２０１８ Ｍａｒ １２；８（１）：４３７４を参照されたい。これらの文書の内容は、参照により組み込まれる。いくつかのＨＡ特異的ｈＭＡｂは、多様なインフルエンザ株に対する抗ウイルス活性を有し、入院患者および非合併性感染症の治療について臨床試験中であり、インフルエンザ特異的ｈＭＡｂの臨床的実現可能性および潜在性を強調している。

上述の広く中和する抗インフルエンザヒトモノクローナル抗体または断片は、インフルエンザウイルス感染症の治療、予防、または制御に使用することができる。抗体または断片は、インフルエンザ感染症の発症を潜在的に防止するために、インフルエンザ感染症のリスクが高い対象に予防的に投与され得る。抗体または断片は、インフルエンザ感染中に対象に投与して、感染の重症度および持続時間を減少させ、それによって感染を治療することができる。

抗体または断片は、パンデミックインフルエンザ感染症の予防および治療にも使用することができる。Ａｂの広範な反応性のため、これらは、季節性インフルエンザワクチンが無効であり得るか、または既存の免疫が制限され得るパンデミックインフルエンザ株に対する使用に独自に適している場合がある。本明細書に開示されるように、Ａｂの代替の形式が使用され得る。Ａｂは、機能的標識にコンジュゲートされたヒトＩｇＧタンパク質全体、そのサブユニット、またはＡｂとして使用され得る。本発明の範囲内には、Ａｂによって認識されるエピトープに基づくワクチンまたは薬物の生成がある。ｈｍＡｂによって認識される保存されたエピトープを標的とする免疫原または薬物は、インフルエンザウイルス感染症からの普遍的な防御を付与し得る。また、本発明の範囲内には、インフルエンザ感染症の予防および／または治療のための、本明細書に開示されるＡｂのうちの１つ以上と他の抗ウイルス／Ａｂとの併用治療がある。

抗体
本明細書に開示される本発明は、抗インフルエンザモノクローナル抗体またはその抗原結合断片を広く中和することを伴う。これらの抗体は、複数のインフルエンザウイルス株を中和する中和抗体のクラスを指す。抗体は、以下の表２に列挙されているようなインフルエンザウイルスによる致死的チャレンジから対象（例えば、以下の実施例に示すようなマウス）を予防的かつ治療的に防御することができる。

以下に、いくつかの例示的な抗体の重鎖ＣＤＲ１－３（ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３）、軽鎖ＣＤＲ１－３（ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３）、重鎖（ＨＣ）可変領域、および軽鎖（ＬＣ）可変領域のアミノ酸配列を列挙する。また、対応する核酸配列も列挙される。

１０８６Ｇ８－重鎖
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／翻訳
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１０８６Ｇ８－カッパ
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／翻訳
ＥＩＶＭＴＱＳＰＡＴＬＳＶＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＲＨＮＬＡＷＹＱＨＫＰＧＱＰＰＲＬＬＩＹＧＡＳＴＲＡＡＳＶＰＡＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＱＳＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＹＮＨＷＰＰＹＴＦＧＱＧＴＫＬＥＩＫ （配列番号２８）
１０９２Ｃ４－重鎖
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａｇｇｔｇａａｇａａｇｃｃｔｇｇｇｇｃｃｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｃｔｃｃｔｇｃａａｇｇｃｃｔｃｔｇｇｔｔａｃａｇｔｔｔｔａｃｃａｇａｔａｔｇｇｔａｔｔａｇｃｔｇｇｇｔｇｃｇａｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｇａｃａａｇｇｃｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａｔｇｇａｔｃａｇｃｇｃｔｔａｃａｃｔｇｇｔａａｃａｃａｇａｃｔａｔｇｃａｃａｇａａｇｔｔｔｃａｇｇｇｃａｇａａｔｃａｃｃａｔｇａｃｃａｃａｇａｃａｃａｔｃｃａｃｇａｇｃａｃａｇｃｃｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｇａｇｃｃｔｇａｇａｔｃｔｇａｃｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔｔｔａｔｔａｃｔｇｔｇｃｇａｇａｇａｔｃｔｃｃｃｔｃａｇｇｇａｇｔａｇｔｔａｔａｔｔａｇｇｃｔｃｃｔａｔｔａｃｔａｃｇｇｔａｔｇｇａｃｇｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａａｃａｃｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号２９）
／翻訳
ＥＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＲＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＴＧＮＴＤＹＡＱＫＦＱＧＲＩＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＡＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＬＰＱＧＶＶＩＬＧＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＮＴＶＴＶＳＳ （配列番号３０）
１０９２Ｃ４－カッパ
ｇａａａｔｔｇｔｇｔｔｇａｃｇｃａｇｔｃｔｃｃａｇｇｃａｃｃｃｔｇｔｃｔｔｔｇｔｃｔｃｃａｇｇｇｇａａａｇａｇｃｃａｃｃｃｔｃｔｃｃｔｇｃａｇｇｇｃｃａｇｔｃａｇａｇｔｇｔｔａｃｃａｇｔａｇｇｔａｃｔｔａｇｃｃｔｇｇｔａｃｃａｇｃａａａａａｃｔｔｇｇｃｃａｇｇｃｔｃｃｃａｇｇｃｔｃｃｔｃａｔｃｔａｔｇｇｔｇｃａｔｃｃａｇｃａｇｇｇｃｃａｃｔｇｇｃａｔｃｃｃａｇａｃａｇｇｔｔｃａｇｔｇｇｃａｇｔｇｇｇｔｃｔｇｇｇａｃａｇａｃｔｔｃａｃｔｃｔｃａｃｃａｔｃａｇｃａｇｔｃｔｇｇａｇｃｃｔｇａａｇａｔｃｔｔｇｃａｇｔｔｔａｔｔａｃｔｇｔｃａｇｃａｇｔｃｔｇｇｔａｇｃｃｃａｃｇｇａｃｇｔｔｃｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａａａｔｃａａａｃ （配列番号３１）
／翻訳
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＳＲＹＬＡＷＹＱＱＫＬＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＬＡＶＹＹＣＱＱＳＧＳＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ （配列番号３２）
１０９２Ｅ４－重鎖
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／翻訳
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＫＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＲＹＧＩＳＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＷＩＳＡＹＴＧＮＴＤＹＡＱＫＦＱＧＲＩＴＭＴＴＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＲＳＬＲＳＤＤＴＡＶＹＹＣＡＲＤＨＰＱＧＶＶＩＬＧＳＹＹＹＧＭＤＶＷＧＱＧＮＴＶＴＶＳＳ （配列番号３４）
１０９２Ｅ４－カッパ
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／翻訳
ＥＩＶＬＴＱＳＰＧＴＬＳＬＳＰＧＥＲＡＴＬＳＣＲＡＳＱＳＶＴＳＲＹＬＡＷＹＱＱＫＬＧＱＡＰＲＬＬＩＹＧＡＳＳＲＡＴＧＩＰＤＲＦＳＧＳＧＳＧＴＤＦＴＬＴＩＳＳＬＥＰＥＤＦＡＶＹＹＣＱＱＳＧＳＰＲＴＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ （配列番号３６）
１１２２Ａ１１－重鎖
ｃａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｃａｇｔｃｔｇｇｇｇｃｔｇａｇｇｔｇａｇｃａａｇｃｃｔｇｇｇｇｃｃｔｃａｇｔｇａａｇｇｔｃｔｃｃｔｇｃａａｇｇｃａｔｃｔｇｇａｔａｃａｇｃｔｔｃａｃｃａｇｃｃａｇｔｃｔｃｔａｇｇｃｔｇｇｇｔｇｃｇｇｃａｇｇｃｃｃｃｔｇｇａｃａａｇｇｇｃｔｔｇａｇｔｇｇａｔｇｇｇａａｔａａｔｃａａｃｃｃｔａｇｔｇｇｔｇｇｔａｔｃａｃａａａｃｔａｃｇｃａｃａｃａａｇｔｔｃｃａｇｇｇｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｇａｃｃａｇｇｇａｃａｃｇｔｃｃａｃｇａｇｃａｃｇｇｔｃｔａｃａｔｇｇａｇｃｔｇａｇｃａｇｃｃｔｇａｇａｔｃｔｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｃｔｇｔａｔｔａｃｔｇｔｇｔｇａｇａｇａｔｔｔｇａｇｔｃａｔｔａｃａａｔｇａａｇｔｇｇｇａｃａｔｇａｃａｇｇｇｃｃｔａｃｔａｃｔａｃｇｇｔａｔｇｇａｃａｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａｃｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号３７）
／翻訳
ＱＶＱＬＶＱＳＧＡＥＶＳＫＰＧＡＳＶＫＶＳＣＫＡＳＧＹＳＦＴＳＱＳＬＧＷＶＲＱＡＰＧＱＧＬＥＷＭＧＩＩＮＰＳＧＧＩＴＮＹＡＨＫＦＱＧＲＶＴＭＴＲＤＴＳＴＳＴＶＹＭＥＬＳＳＬＲＳＥＤＴＡＬＹＹＣＶＲＤＬＳＨＹＮＥＶＧＨＤＲＡＹＹＹＧＭＤＩＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ （配列番号３８）
１１２２Ａ１１－ラムダ
ｔｃｃｔａｔｇａｇｃｔｇａｔｔｃａｇｃｃａｃｃｃｔｃａｇｔｇｔｃｃｇｔｇｔｃｃｃｃａｇｇａｃａｇａｃａｇｃｃａｇｃａｔｃａｃｃｔｇｔｔｃｔｇｇａｇａｔａａａｔｔｇｇｇｇａａａａａａｔａｔａｃｔｔｇｃｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａａｇｃｃａｇｇｃｃａｇｔｃｃｃｃｔｇｔｇｃｔｇｇｔｃａｔｃｔａｔｃａｇｇａｔａａｃａａｇｃｇｇｃｃｃｔｃａｇｇｇａｔｃｃｃｔｇａｇｃｇｇｔｔｃｔｃｔｇｇｃｔｃｃａａｃｔｃｔｇｇｇａａｃａｃａｇｃｃａｃｔｃｔｇａｃｃａｔｃａｇｃｇｇｇａｃｃｃａｇｇｃｔａｔｇｇａｔｇａｇｇｃｔｇａｃｔａｔｔａｃｔｇｔｃａｇｇｃｇｔｇｇｇａｃａｇｃａｇｃｇｃｔｇｔｇｇｔａｔｔｃｇｇｃｇｇａｇｇｇａｃｃａａｇｃｔｇａｃｃｇｔｃｃｔｇｇ （配列番号３９）
／翻訳
ＳＹＥＬＩＱＰＰＳＶＳＶＳＰＧＱＴＡＳＩＴＣＳＧＤＫＬＧＫＫＹＴＣＷＹＱＱＫＰＧＱＳＰＶＬＶＩＹＱＤＮＫＲＰＳＧＩＰＥＲＦＳＧＳＮＳＧＮＴＡＴＬＴＩＳＧＴＱＡＭＤＥＡＤＹＹＣＱＡＷＤＳＳＡＶＶＦＧＧＧＴＫＬＴＶＬ （配列番号４０）
１１２２Ｂ９－重鎖
ｇａｇｇｔｇｃａｇｃｔｇｇｔｇｇａｇｔｃｔｇｇｇｇｇａｇｇｃｔｔｇｇｔｃｃａｇｃｃｇｇｇｇｇｇｇｔｃｃｃｔｇａｇａｃｔｃｔｃｃｔｇｔｇｃａｇｃｃｔｃｔｇｇａｔｔｃａｃｃｔｔｔａｇｃｇｇｃｔａｔｇｃｃａｔｇａｇｃｔｇｇｇｔｃｃｇｃｃａｇｇｃｔｃｃａｇｇｇａａｇｇｇｇｃｔｇｇａｇｔｇｃｇｔｃｔｃａｇｇｔａｔｔａｔｔｇｇｔａｇｔｇｇｔｇｇａａｇｃａｃａｔａｃｔｃｃｇｃａｇａｃｔｃｃｇｔｇａａｇｇｇｃｃｇｇｔｔｃａｃｃａｔｃｔｃｃａｇａｇａｃａａｔｔｃｃａａｇａａｃａｃｇｃｔｇｇａｔｃｔｇｇａａａｔｇａａｃａｇｃｃｔｇａｇａｇｃｃｇａｇｇａｃａｃｇｇｃｃｇｔａｔａｔｔａｔｔｇｔｇｃｇａａａｃａｔａｃｃａａａｔｃｃｃａｃｔａｃｔａｔｔｃｃｇｇａａｔｇｇｇｃｇｔｃｔｇｇｇｇｃｃａａｇｇｇａｃｃａｃｇｇｔｃａｃｃｇｔｃｔｃｃｔｃａ （配列番号４１）
／翻訳
ＥＶＱＬＶＥＳＧＧＧＬＶＱＰＧＧＳＬＲＬＳＣＡＡＳＧＦＴＦＳＧＹＡＭＳＷＶＲＱＡＰＧＫＧＬＥＣＶＳＧＩＩＧＳＧＧＳＴＹＳＡＤＳＶＫＧＲＦＴＩＳＲＤＮＳＫＮＴＬＤＬＥＭＮＳＬＲＡＥＤＴＡＶＹＹＣＡＫＨＴＫＳＨＹＹＳＧＭＧＶＷＧＱＧＴＴＶＴＶＳＳ （配列番号４２）
１１２２Ｂ９－カッパ
ｇａｃａｔｃｃａｇａｔｇａｃｃｃａｇｔｃｔｃｃａｔｃｃｔｃｃｃｔｇｔｃｔｇｃａｔｃｔｇｔａｇｇａｇａｃａｇａｇｔｃａｃｃａｔｃａｃｔｔｇｃｃａｇｇｃｇａｇｔｃａｇｇａｃａｔｔａｇｃａａｃｔａｔｔｔａａａｔｔｇｇｔａｔｃａｇｃａｇａｇａｃｃａｇｇｇａａａｇｃｃｃｃｔａａａｃｔｃｃｔｇａｔｃｔａｃｇａｔｇｃａｇｃｃａａｔｔｔｇｇａａａｃａｇｇｇｇｔｃｃｃａｔｃａａｇｇｔｔｃａｇｃｇｇａａｇｔｇｇａｔｃｔｇｃｇａｃａｃａｇｔｔｔａｃｔｔｔｃａｃｃａｔｃａｇｃｇｇｃｃｔｇｃａｇｃｃｔｇａａｇａｔｔｔｔｇｃａａｃａｔａｔｔａｃｔｇｔｃａａｃａｇｔａｔｇａｔａａｔｃｔｃｃｃｔｃｔｃａｃｔｔｔｃｇｇｃｇｇｃｇｇｇａｃｃａａｇｇｔｇｇａａａｔｃａａａｃ （配列番号４３）
／翻訳
ＤＩＱＭＴＱＳＰＳＳＬＳＡＳＶＧＤＲＶＴＩＴＣＱＡＳＱＤＩＳＮＹＬＮＷＹＱＱＲＰＧＫＡＰＫＬＬＩＹＤＡＡＮＬＥＴＧＶＰＳＲＦＳＧＳＧＳＡＴＱＦＴＦＴＩＳＧＬＱＰＥＤＦＡＴＹＹＣＱＱＹＤＮＬＰＬＴＦＧＧＧＴＫＶＥＩＫ （配列番号４４）

断片
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体断片である。抗体断片としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆａｂ’－ＳＨ、Ｆ（ａｂ’）_２、Ｆｖ、および一本鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）断片、ならびに以下に記載される他の断片、例えば、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、および単一ドメイン抗体が挙げられるが、これらに限定されない。ある特定の抗体断片の概説については、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。ｓｃＦｖ断片の概説については、例えば、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ，ｉｎ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ ａｎｄ Ｍｏｏｒｅ ｅｄｓ．，（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ－Ｖｅｒｌａｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９－３１５（１９９４）を参照されたい：また、ＷＯ９３／１６１８５、ならびに米国特許第５，５７１，８９４号および同第５，５８７，４５８号も参照されたい。サルベージ受容体結合エピトープ残基を含み、インビボ半減期が増加したＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２断片の考察については、米国特許第５，８６９，０４６号を参照されたい。

ダイアボディは、二価または二重特異性であり得る２つの抗原結合部位を有する抗体断片である。例えば、ＥＰ４０４，０９７、ＷＯ１９９３／０１１６１、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）、およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ９０：６４４４－６４４８（１９９３）を参照されたい。トリアボディおよびテトラボディもまた、Ｈｕｄｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９：１２９－１３４（２００３）を参照されたい。

単一ドメイン抗体は、抗体の重鎖可変ドメインの全部もしくは一部、または軽鎖可変ドメインの全部もしくは一部を含む抗体断片である。ある特定の実施形態では、単一ドメイン抗体は、ヒト単一ドメイン抗体である（ＤＯＭＡＮＴＩＳ，Ｉｎｃ．，Ｗａｌｔｈａｍ，Ｍａｓｓ．；例えば、米国特許第６，２４８，５１６号を参照されたい）。

抗体断片は、本明細書に記載されるように、インタクト抗体のタンパク質分解消化、ならびに組換え宿主細胞（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉまたはファージ）による産生を含むが、これらに限定されない、様々な技法によって作製され得る。

キメラおよびヒト化抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、キメラ抗体である。ある特定のキメラ抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号、およびＭｏｒｒｉｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１－６８５５（１９８４）を参照されたい）。一実施例では、キメラ抗体は、非ヒト可変領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する可変領域）と、ヒト定常領域と、を含む。別の実施例では、キメラ抗体は、ヒト可変領域と、非ヒト定常領域（例えば、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、またはサルなどの非ヒト霊長類に由来する定常領域）と、を含む。さらなる実施例では、キメラ抗体は、クラスまたはサブクラスが親抗体のクラスまたはサブクラスから変更された「クラススイッチした」抗体である。キメラ抗体は、その抗原結合断片を含む。

ある特定の実施形態では、抗体は、ヒト化抗体である。典型的には、非ヒト抗体は、親非ヒト抗体の特異性および親和性を保持しながら、ヒトに対する免疫原性を低減するようにヒト化される。一般に、ヒト化抗体は、ＨＶＲ、例えばＣＤＲ、（またはその一部）が非ヒト抗体に由来し、ＦＲ（またはその一部）がヒト抗体配列に由来する、１つ以上の可変ドメインを含む。ヒト化抗体は、任意選択的に、ヒト定常領域の少なくとも一部分も含む。いくつかの実施形態では、ヒト化抗体におけるいくつかのＦＲ残基は、例えば、抗体特異性または親和性を修復または改善するために、非ヒト抗体（例えば、ＨＶＲ残基が由来する抗体）からの対応する残基で置換される。

ヒト化抗体およびそれらの作製方法は、例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）に記載されており、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３３２：３２３－３２９（１９８８）；Ｑｕｅｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８６：１００２９－１００３３（１９８９）；米国特許第５，８２１，３３７号、同第７，５２７，７９１号、同第６，９８２，３２１号、および同第７，０８７，４０９号；Ｋａｓｈｍｉｒｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：２５－３４（２００５）（特異性決定領域（ＳＤＲ）グラフティングを記載する）；Ｐａｄｌａｎ，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８：４８９－４９８（１９９１）（「再表面化」を記載する）；Ｄａｌｌ’Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：４３－６０（２００５）（「ＦＲシャッフリング」を記載する）；ならびにＯｓｂｏｕｒｎ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ３６：６１－６８（２００５）およびＫｌｉｍｋａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８３：２５２－２６０（２０００）（ＦＲシャッフリングに対する「誘導選択」アプローチを記載する）にさらに記載されている。

ヒト化のために使用され得るヒトフレームワーク領域としては、「最良適合」法を使用して選択されたフレームワーク領域（例えば、Ｓｉｍｓ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６（１９９３）を参照されたい）、軽鎖または重鎖可変領域の特定のサブグループのヒト抗体のコンセンサス配列に由来するフレームワーク領域（例えば、Ｃａｒｔｅｒ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）、およびＰｒｅｓｔａ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３）を参照されたい）、ヒト成熟（体細胞変異した）フレームワーク領域またはヒト生殖系列フレームワーク領域（例えば、Ａｌｍａｇｒｏ ａｎｄ Ｆｒａｎｓｓｏｎ，Ｆｒｏｎｔ．Ｂｉｏｓｃｉ．１３：１６１９－１６３３（２００８）を参照されたい）、ならびにＦＲライブラリーのスクリーニングに由来するフレームワーク領域（例えば、Ｂａｃａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：１０６７８－１０６８４（１９９７）およびＲｏｓｏｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：２２６１１－２２６１８（１９９６）を参照されたい）が挙げられるが、これらに限定されない。

ヒト抗体
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、ヒト抗体である。ヒト抗体は、当該技術分野において既知の様々な技法を使用して、または本明細書に記載される技法を使用して産生され得る。ヒト抗体は、一般に、ｖａｎ Ｄｉｊｋ ａｎｄ ｖａｎ ｄｅ Ｗｉｎｋｅｌ， Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５：３６８－７４（２００１）ａｎｄ Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：４５０－４５９（２００８）に記載されている。

ヒト抗体は、抗原チャレンジに応答して、インタクトなヒト抗体またはヒト可変領域を有するインタクトな抗体を産生するように修飾されたトランスジェニック動物に免疫原を投与することによって調製されてもよい。そのような動物は、典型的には、内因性免疫グロブリン遺伝子座を置き換える、または染色体外に存在する、もしくは動物の染色体内にランダムに組み込まれる、ヒト免疫グロブリン遺伝子座の全てまたは一部を含有する。そのようなトランスジェニックマウスでは、内因性免疫グロブリン遺伝子座は、一般に不活性化されている。トランスジェニック動物からヒト抗体を得るための方法の概説については、Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２３：１１１７－１１２５（２００５）を参照されたい。また、例えば、ゼノマウス（ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ）技術を記載する米国特許第６，０７５，１８１号および同第６，１５０，５８４号、ＨＵＭＡＢ技術を記載する米国特許第５，７７０，４２９号、Ｋ－Ｍマウス技術を記載する米国特許第７，０４１，８７０号、ならびにＶＥＬＯＣＩＭＯＵＳＥ技術を記載する米国特許出願公開第２００７／００６１９００号も参照されたい）。そのような動物によって生成されたインタクトな抗体からのヒト可変領域は、例えば、異なるヒト定常領域と組み合わせることによって、さらに修飾され得る。

ヒト抗体は、ハイブリドーマベースの方法によって作製することもできる。ヒトモノクローナル抗体を産生するためのヒト骨髄腫およびマウス－ヒト異種骨髄腫細胞株が記載されている。（例えば、Ｋｏｚｂｏｒ Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ Ａｎｔｉｂｏｄｙ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１－６３（Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９８７）；およびＢｏｅｒｎｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４７：８６（１９９１）を参照されたい）。ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術を介して生成されたヒト抗体は、Ｌｉ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０３：３５５７－３５６２（２００６）を参照されたい。追加の方法としては、例えば、米国特許第７，１８９，８２６号（ハイブリドーマ細胞株からのモノクローナルヒトＩｇＭ抗体の産生を記載）およびＮｉ，Ｘｉａｎｄａｉ Ｍｉａｎｙｉｘｕｅ，２６（４）：２６５－２６８（２００６）（ヒト－ヒトハイブリドーマを記載）に記載されている方法が挙げられる。ヒトハイブリドーマ技術（Ｔｒｉｏｍａ技術）はまた、Ｖｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ，２０（３）：９２７－９３７（２００５）およびＶｏｌｌｍｅｒｓ ａｎｄ Ｂｒａｎｄｌｅｉｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ Ｆｉｎｄｉｎｇｓ ｉｎ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ ａｎｄ Ｃｌｉｎｉｃａｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２７（３）：１８５－９１（２００５）にも記載されている。

ヒト抗体はまた、ヒト由来ファージディスプレイライブラリーから選択されるＦｖクローン可変ドメイン配列を単離することによっても生成され得る。そのような可変ドメイン配列は、次いで、所望のヒト定常ドメインと組み合わせてもよい。抗体ライブラリーからヒト抗体を選択するための技術を以下に記載する。

本発明の抗体は、所望の活性を有する抗体について組み合わせライブラリーをスクリーニングすることによって単離され得る。例えば、ファージディスプレイライブラリーを生成し、所望の結合特性を有する抗体についてそのようなライブラリーをスクリーニングするための様々な方法が当該技術分野において知られている。そのような方法は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００１）に概説されており、さらに、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３４８：５５２－５５４；Ｃｌａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ ３５２：６２４－６２８（１９９１）；Ｍａｒｋｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１－５９７（１９９２）；Ｍａｒｋｓ ａｎｄ Ｂｒａｄｂｕｒｙ， ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ２４８：１６１－１７５（Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）；Ｓｉｄｈｕ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３８（２）：２９９－３１０（２００４）；Ｌｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３４０（５）：１０７３－１０９３（２００４）；Ｆｅｌｌｏｕｓｅ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０１（３４）：１２４６７－１２４７２（２００４）；およびＬｅｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ ２８４（１－２）：１１９－１３２（２００４）に記載されている。

ある特定のファージディスプレイ方法において、ＶＨおよびＶＬ遺伝子のレパートリーは、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）によって別々にクローニングされ、ファージライブラリー内でランダムに組み換えられ、次いで、これは、Ｗｉｎｔｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１２：４３３－４５５（１９９４）に記載されるように、抗原結合ファージについてスクリーニングされ得る。ファージは、典型的には、ｓｃＦｖ断片またはＦａｂ断片のいずれかとして、抗体断片を表示する。免疫化源からのライブラリーは、ハイブリドーマを構築することを必要とすることなく、免疫原に高親和性抗体を提供する。あるいは、ナイーブレパートリーを（例えば、ヒトから）クローニングして、Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ ｅｔ ａｌ．ＥＭＢＯ，Ｊ，１２：７２５－７３４（１９９３）に記載されるようないかなる免疫化もなしに、広範囲の非自己および自己抗原に抗体の単一源を提供することができる。最後に、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ａｎｄ Ｗｉｎｔｅｒ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２７：３８１－３８８（１９９２）に記載されるように、ナイーブライブラリーは、幹細胞からの再配列されていないＶ遺伝子セグメントをクローニングし、ランダム配列を含有するＰＣＲプライマーを使用して、高度に可変なＣＤＲ３領域をコードし、インビトロで再配列を達成することによって、合成的に作製され得る。ヒト抗体ファージライブラリーを記載する特許公開としては、例えば、米国特許第５，７５０，３７３号、ならびに米国特許公開第２００５／００７９５７４号、同第２００５／０１１９４５５号、同第２００５／０２６６０００号、同第２００７／０１１７１２６号、同第２００７／０１６０５９８号、同第２００７／０２３７７６４号、同第２００７／０２９２９３６号、および同第２００９／０００２３６０号に記載されている。ヒト抗体ライブラリーから単離された抗体または抗体断片は、本明細書ではヒト抗体またはヒト抗体断片と見なされる。

変異型
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体のアミノ酸配列変異体が企図される。例えば、抗体の結合親和性および／または他の生物学的特性を改善することが望ましい場合がある。抗体のアミノ酸配列変異体は、抗体をコードするヌクレオチド配列に適切な修飾を導入することによって、またはペプチド合成によって調製され得る。そのような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列からの残基の欠失、および／または抗体のアミノ酸配列内の残基の挿入および／もしくは置換が挙げられる。欠失、挿入、および置換の任意の組み合わせは、最終構築物が所望の特徴、例えば、抗原結合を有することを条件として、最終構築物に達するように作製され得る。

置換、挿入、および欠失変異型
ある特定の実施形態では、１つ以上のアミノ酸置換を有する抗体変異型が提供される。置換突然変異誘発の目的の部位としては、ＨＶＲおよびＦＲが挙げられる。保存的置換は、本明細書で定義される。アミノ酸置換は、目的の抗体に導入される可能性があり、生成物は、所望の活性、例えば、抗原結合の保持／改善、免疫原性の低下、またはＡＤＣＣもしくはＣＤＣの改善についてスクリーニングされる。

したがって、本発明の抗体は、本明細書に記載されるＣＤＲ、重鎖可変領域、または軽可変領域のうちの１つ以上の保存的修飾を含むことができる。本発明で開示されるペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質の保存的修飾または機能的等価物は、ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質のポリペプチド誘導体、例えば、１つ以上の点変異、挿入、欠失、切断（ｔｒｕｎｃａｔｉｏｎｓ）、融合タンパク質、またはそれらの組み合わせを有するタンパク質を指す。親ペプチド、ポリペプチド、またはタンパク質（本発明で開示されるものなど）に対する活性を実質的に保持する。一般に、保存的修飾または機能的等価物は、親（例えば、上述のアミノ酸配列のうちの１つ）と少なくとも６０％（例えば、６０％～１００％の任意の数（両端を含む）、例えば、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、および９９％）同一である。したがって、本発明の範囲内には、１つ以上の点変異、挿入、欠失、切断、融合タンパク質、またはそれらの組み合わせを有する重鎖可変領域または軽可変領域、ならびに変異型領域を有する抗体がある。

本明細書で使用される場合、２つのアミノ酸配列間の相同性パーセントは、２つの配列間の同一性パーセントに等しい。２つの配列間の同一性パーセントは、ギャップの数、および２つの配列の最適なアラインメントのために導入される必要がある各ギャップの長さを考慮して、配列によって共有される同一の位置の数（すなわち、相同性％＝同一の位置の数／位置の総数×１００）の関数である。配列の比較および２つの配列間の同一性パーセントの決定は、以下の非限定的な実施例に記載されるように、数学的アルゴリズムを使用して達成することができる。

２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、ＰＡＭ１２０重量残基表、１２のギャップ長ペナルティ、および４のギャップペナルティを使用して、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているＥ．Ｍｅｙｅｒｓ ａｎｄ Ｗ．Ｍｉｌｌｅｒ（Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．４：１１－１７（１９８８））のアルゴリズムを使用して決定することができる。加えて、２つのアミノ酸配列間の同一性パーセントは、Ｂｌｏｓｓｕｍ ６２マトリックスまたはＰＡＭ２５０マトリックスのいずれか、および１６、１４、１２、１０、８、６、または４のギャップ重み、ならびに１、２、３、４、５、または６の長さ重みを使用して、ＧＣＧソフトウェアパッケージ（ｗｗｗ．ｇｃｇ．ｃｏｍで入手可能である）のギャッププログラムに組み込まれているＮｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４４－４５３（１９７０））アルゴリズムを使用して決定することができる。

追加的または代替的に、本発明のタンパク質配列は、例えば、関連する配列を識別するために、公開データベースに対する検索を実行するための「問い合わせ（ｑｕｅｒｙ）配列」としてさらに使用することができる。そのような検索は、Ａｌｔｓｃｈｕｌ，ｅｔ ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３－１０のＸＢＬＡＳＴプログラム（バージョン２．０）を使用して行うことができる。ＢＬＡＳＴタンパク質検索は、ＸＢＬＡＳＴプログラム、スコア＝５０、ワード長＝３で実施して、本発明の抗体分子に相同なアミノ酸配列を得ることができる。比較目的のためのギャップアラインメントを得るために、Ｇａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴをＡｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５（１７）：３３８９－３４０２に記載されているように利用することができる。ＢＬＡＳＴおよびＧａｐｐｅｄ ＢＬＡＳＴプログラムを利用する場合、それぞれのプログラムのデフォルトパラメータ（例えば、ＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）を使用することができる（ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖを参照されたい）。

本明細書で使用される場合、「保存的修飾」という用語は、アミノ酸配列を含有する抗体の結合特性に有意に影響を与えないか、または変化しないアミノ酸修飾を指す。そのような保存的修飾には、アミノ酸置換、付加、および欠失が含まれる。修飾は、部位特異的変異誘発およびＰＣＲ媒介性変異誘発などの当該技術分野において既知の標準的な技法により、本発明の抗体に導入され得る。保存的アミノ酸置換は、アミノ酸残基が同様の側鎖を有するアミノ酸残基で置き換えられたものである。類似の側鎖を有するアミノ酸残基のファミリーは、当該技術分野において定義されている。これらのファミリーには、
塩基性側鎖を有するアミノ酸（例えば、リジン、アルギニン、ヒスチジン）、
酸性側鎖（例えば、アスパラギン酸、グルタミン酸）、
非荷電の極性側鎖（例えば、グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、スレオニン、チロシン、システイン、トリプトファン）、
非極性側鎖（例えば、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、メチオニン）、
ベータ分岐側鎖（例えば、スレオニン、バリン、イソロイシン）および
芳香族側鎖（例えば、チロシン、フェニルアラニン、トリプトファン、ヒスチジン）が挙げられる。

非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスと交換することを伴う。

例示的な置換変異型は、例えば、Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ １７８：１－３７（Ｏ’Ｂｒｉｅｎ ｅｔ ａｌ．，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，（２００１）を参照されたい。アミノ酸配列挿入には、１個の残基から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さの範囲のアミノ末端融合および／またはカルボキシル末端融合、ならびに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が含まれる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異型としては、抗体の血清半減期を増加させる酵素（例えば、ＡＤＥＰＴに対する）またはポリペプチドへの抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が挙げられる。

グリコシル化変異型
ある特定の実施形態では、本明細書に提供される抗体は、抗体がグリコシル化される程度を増加または減少させるように改変される。抗体へのグリコシル化部位の付加または欠失は、１つ以上のグリコシル化部位が作製または除去されるようにアミノ酸配列を変更することによって、好都合に達成され得る。

例えば、非グリコシル化抗体（すなわち、抗体がグリコシル化を欠く）を作製することができる。グリコシル化は、例えば、抗原に対する抗体の親和性を増加させるように変更することができる。そのような炭水化物修飾は、例えば、抗体配列内の１つ以上のグリコシル化部位を変更することによって達成され得る。例えば、１つ以上の可変領域フレームワークのグリコシル化部位の排除をもたらし、それによってその部位でのグリコシル化を排除する１つ以上のアミノ酸置換を作製することができる。そのような非グリコシル化は、抗原に対する抗体の親和性を増加させ得る。そのようなアプローチは、Ｃｏらによる米国特許第５，７１４，３５０号および同第６，３５０，８６１号にさらに詳細に記載されている。

Ｎ２９７上の定常領域のグリコシル化は、Ｎ２９７残基を別の残基、例えば、Ｎ２９７Ａに変異させることによって、および／または隣接するアミノ酸、例えば、２９８を変異させて、Ｎ２９７上のグリコシル化を低減することによって、防止してもよい。

追加的または代替的に、フコシル残基の量が減少した低フコシル化抗体、またはバイセクト（ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ）ＧｌｃＮａｃ構造が増加した抗体などの、変更されたタイプのグリコシル化を有する抗体を作製することができる。そのような変化したグリコシル化パターンは、抗体のＡＤＣＣ能力を増加させることが実証されている。そのような炭水化物修飾は、例えば、改変されたグリコシル化機構を有する宿主細胞において抗体を発現させることによって達成され得る。変更されたグリコシル化機構を有する細胞は、当該技術分野に記載されており、本明細書に記載される組換え抗体を発現し、それによって変更されたグリコシル化を有する抗体を産生する宿主細胞として使用され得る。例えば、ＨａｎａｉらによるＥＰ１，１７６，１９５は、フコシルトランスフェラーゼをコードする機能的に破壊されたＦＵＴ８遺伝子を有する細胞株を記載しており、そのような細胞株で発現される抗体が低フコシル化を示すようになっている。ＰｒｅｓｔａによるＰＣＴ公開第０３／０３５８３５号は、Ａｓｎ（２９７）結合炭水化物にフコースを取り付ける能力が低下し、その宿主細胞で発現される抗体の低フコシル化をもたらす、変異型チャイニーズハムスター卵巣細胞株、Ｌｅｄ ３細胞を記載する（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ。Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７７：２６７３３－２６７４０も参照されたい）。ＵｍａｎａらによるＰＣＴ公開第９９／５４３４２号は、操作された細胞株において発現された抗体が、抗体のＡＤＣＣ活性の増加をもたらす増加したバイセクトＧｌｃＮａｃ構造を示すように、糖タンパク質修飾グリコシルトランスフェラーゼ（例えば、ベータ（１，４）－Ｎ－アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ））を発現するように操作された細胞株を記載している（Ｕｍａｎａ ｅｔ ａｌ．（１９９９）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６－１８０も参照されたい）。

Ｆｃ領域変異型
本明細書に記載の抗体の可変領域は、Ｆｃ、例えば、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４のＦｃに連結されてもよく（例えば、共有結合もしくは融合されてもよい）、これらは、任意のアロタイプまたはアイソアロタイプであり得、例えば、ＩｇＧｌの場合：Ｇｌｍ、Ｇｌｍｌ（ａ）、Ｇｌｍ２（ｘ）、Ｇｌｍ３（ｆ）、Ｇｌｍｌ７（ｚ）；ＩｇＧ２の場合：Ｇ２ｍ、Ｇ２ｍ２３（ｎ）；ＩｇＧ３の場合：Ｇ３ｍ、Ｇ３ｍ２１（ｇｌ）、Ｇ３ｍ２８（ｇ５）、Ｇ３ｍｌｌ（ｂ０）、Ｇ３ｍ５（ｂｌ）、Ｇ３ｍｌ３（ｂ３）、Ｇ３ｍｌ４（ｂ４）、Ｇ３ｍｌ０（ｂ５）、Ｇ３ｍｌ５（ｓ）、Ｇ３ｍｌ６（ｔ）、Ｇ３ｍ６（ｃ３）、Ｇ３ｍ２４（ｃ５）、Ｇ３ｍ２６（ｕ）、Ｇ３ｍ２７（ｖ）；およびＫの場合：Ｋｍ、Ｋｍｌ、Ｋｍ２、Ｋｍ３である（例えば、Ｊｅｆｆｅｒｉｅｓ ｅｔ ａｌ．（２００９）ｍＡｂｓ １：１を参照されたい）。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体可変領域は、１つ以上の活性化Ｆｃ受容体（ＦｃγＩ、ＦｃγＩＩａ、またはＦｃγＩＩＩａ）に結合するＦｃに連結され、それによってＡＤＣＣを刺激し、Ｔ細胞枯渇を引き起こし得る。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体可変領域は、枯渇を引き起こすＦｃに連結されている。

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗体可変領域は、典型的には、血清半減期、補体固定、Ｆｃ受容体結合、および／または抗原依存性細胞傷害性などの抗体の１つ以上の機能的特性を変化させるために、１つ以上の修飾を含むＦｃに連結されてもよい。さらに、本明細書に記載の抗体は、化学修飾されてもよく（例えば、１つ以上の化学部分が抗体に結合されてもよい）、またはそのグリコシル化を変更して、抗体の１つ以上の機能的特性を変更してもよい。Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ＫａｂａｔのＥＵインデックスのものである。

Ｆｃ領域は、免疫グロブリン、好ましくはヒト免疫グロブリンの定常領域に由来するドメインを包含し、定常領域の断片、類似体、変異体、変異体、または誘導体を含む。好適な免疫グロブリンとしては、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、および他のクラス、例えば、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＭが挙げられる。免疫グロブリンの定常領域は、免疫グロブリンＣ末端領域に相同な天然に存在するポリペプチドまたは合成で産生されるポリペプチドとして定義され、ＣＨ１ドメイン、ヒンジ、ＣＨ２ドメイン、ＣＨ３ドメイン、またはＣＨ４ドメインを、別個にまたは組み合わせて含むことができる。いくつかの実施形態では、本発明の抗体は、野生型ＩｇＡ１の領域以外のＦｃ領域を有する。抗体は、ＩｇＧのもの（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４）またはＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥ、およびＩｇＭなどの他のクラスのものからのＦｃ領域を有することができる。Ｆｃは、ＩｇＡ１の変異体であり得る。

免疫グロブリンの定常領域は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合および補体結合（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ ｆｉｘａｔｉｏｎ）の重要な抗体機能に関与する。重鎖定常領域には、ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＭに分類される５つの主要なクラスがあり、それぞれがアイソタイプによって指定される特徴的なエフェクター機能を有する。例えば、ＩｇＧは、ＩｇＧｌ、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４として知られる４つのサブクラスに分離される。

Ｉｇ分子は、細胞受容体の複数のクラスと相互作用する。例えば、ＩｇＧ分子は、抗体のＩｇＧクラスに特異的な３つのクラスのＦｃγ受容体（ＦｃγＲ）、すなわち、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、およびＦｃγＲＩＩＬと相互作用する。ＩｇＧのＦｃγＲ受容体への結合のための重要な配列は、ＣＨ２およびＣＨ３ドメインに位置することが報告されている。抗体の血清半減期は、その抗体がＦｃＲに結合する能力によって影響を受ける。

ある特定の実施形態では、Ｆｃ領域は、望ましい構造的特徴および／または生物学的活性を提供するために、親Ｆｃ配列（例えば、その後、変異型を生成するように修飾される非修飾Ｆｃポリペプチド）に対して修飾された（例えば、アミノ酸置換、欠失、および／または挿入によって）変異型Ｆｃ領域である。例えば、（ａ）ＡＤＣＣが増加もしくは減少し、（ｂ）補体媒介性細胞傷害性（ＣＤＣ）が増加もしくは減少し、（ｃ）Ｃｌｑに対する親和性が増加もしくは減少し、および／または（ｄ）親Ｆｃと比較してＦｃ受容体に対する親和性が増加もしくは減少したＦｃ変異型を生成するために、Ｆｃ領域において修飾を行ってもよい。そのようなＦｃ領域変異型は、一般に、Ｆｃ領域内に少なくとも１つのアミノ酸修飾を含む。アミノ酸修飾を組み合わせることが特に望ましいと考えられる。例えば、変異型Ｆｃ領域は、例えば、本明細書で特定される特定のＦｃ領域位置のうちの２つ、３つ、４つ、５つなどの置換を含んでもよい。

変異体Ｆｃ領域はまた、ジスルフィド結合形成に関与するアミノ酸が除去されるか、または他のアミノ酸と置き換えられる配列改変を含んでもよい。そのような除去は、本明細書に記載される抗体を産生するために使用される宿主細胞内に存在する他のシステイン含有タンパク質との反応を回避し得る。システイン残基が除去されても、一本鎖Ｆｃドメインは、依然として、非共有結合で一緒に保持される二量体Ｆｃドメインを形成することができる。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、それを選択された宿主細胞とより適合させるように修飾され得る。例えば、典型的な天然Ｆｃ領域のＮ末端付近のＰＡ配列を除去してもよく、これは、プロリンイミノペプチダーゼなどのＥ．ｃｏｌｉ内の消化酵素によって認識されてもよい。他の実施形態では、Ｆｃドメイン内の１つ以上のグリコシル化部位を除去してもよい。典型的には、グリコシル化されている残基（例えば、アスパラギン）は、細胞溶解反応を付与してもよい。そのような残基は、非グリコシル化残基（例えば、アラニン）で欠失または置換され得る。他の実施形態では、補体との相互作用に関与する部位、例えば、Ｃｌｑ結合部位は、Ｆｃ領域から除去され得る。例えば、ヒトＩｇＧｌのＥＫＫ配列を欠失または置換してもよい。ある特定の実施形態では、Ｆｃ受容体への結合に影響を与える部位は除去されてもよく、好ましくは、サルベージ受容体結合部位以外の部位である。他の実施形態では、Ｆｃ領域は、ＡＤＣＣ部位を除去するように修飾されてもよい。ＡＤＣＣ部位は、当該技術分野において既知であり、例えば、ＩｇＧｌにおけるＡＤＣＣ部位に関して、Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２９（５）：６３３－９（１９９２）を参照されたい。変異型Ｆｃドメインの具体例は、例えば、ＷＯ９７／３４６３１およびＷＯ９６／３２４７８に開示されている。

一実施形態では、Ｆｃのヒンジ領域は、ヒンジ領域内のシステイン残基の数が変更されるように、例えば、増加または減少するように修飾される。このアプローチは、Ｂｏｄｍｅｒらによる米国特許第５，６７７，４２５号にさらに記載されている。Ｆｃのヒンジ領域におけるシステイン残基の数は、例えば、軽鎖および重鎖の組み立てを容易にするために、または抗体の安定性を増加または減少させるために変更される。一実施形態では、抗体のＦｃヒンジ領域は、抗体の生物学的半減期を減少させるように変異される。より具体的には、抗体が天然のＦｃ－ヒンジドメインＳｐＡ結合と比較してブドウ球菌タンパク質Ａ（ＳｐＡ）結合が障害されるように、１つ以上のアミノ酸変異が、Ｆｃ－ヒンジ断片のＣＨ２－ＣＨ３ドメイン界面領域に導入される。このアプローチは、Ｗａｒｄらによる米国特許第６，１６５，７４５号にさらに詳細に記載されている。

さらに他の実施形態では、Ｆｃ領域は、抗体のエフェクター機能を変更するために、少なくとも１つのアミノ酸残基を異なるアミノ酸残基で置き換えることによって変更される。例えば、アミノ酸残基２３４、２３５、２３６、２３７、２９７、３１８、３２０、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がエフェクターリガンドに対する変更された親和性を有するが、親抗体の抗原結合能力を保持するように、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。親和性が変更されるエフェクターリガンドは、例えば、Ｆｃ受容体または補体のＣＩ成分であり得る。このアプローチは、Ｗｉｎｔｅｒらによる米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号にさらに詳細に記載されている。

別の実施例では、アミノ酸残基３２９、３３１、および３２２から選択される１つ以上のアミノ酸は、抗体がＣｌｑ結合を変更し、および／またはＣＤＣを低減もしくは廃止したように、異なるアミノ酸残基で置き換えられ得る。このアプローチは、Ｉｄｕｓｏｇｉｅらによる米国特許第６，１９４，５５１号にさらに詳細に記載されている。

別の実施例では、アミノ酸位置２３１および２３９内の１つ以上のアミノ酸残基が変更され、それによって抗体が補体を固定する能力を変更する。このアプローチは、ＢｏｄｍｅｒらによるＰＣＴ公開第９４／２９３５１号にさらに記載されている。

さらに別の実施例では、Ｆｃ領域は、以下の位置で１つ以上のアミノ酸を修飾することによって、ＡＤＣＣを増加させる、および／またはＦｃγ受容体に対する親和性を増加させるように修飾され得る：２３４、２３５、２３６、２３８、２３９、２４０、２４１、２４３、２４４、２４５、２４７、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６２、２６３、２６４、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７６、２７８、２８０、２８３、２８５、２８６、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、２９９、３０１、３０３、３０５、３０７、３０９、３１２、３１３、３１５、３２０、３２２、３２４、３２５、３２６、３２７、３２９、３３０、３３１、３３２、３３３、３３４、３３５、３３７、３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７８、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３３、４３４、４３５、４３６、４３７、４３８または４３９。例示的な置換としては、２３６Ａ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６８Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｅ、２６８Ｆ、３２４Ｔ、３３２Ｄ、および３３２Ｅが挙げられる。例示的な変異型としては、２３９Ｄ／３３２Ｅ、２３６Ａ／３３２Ｅ、２３６Ａ／２３９Ｄ／３３２Ｅ、２６８Ｆ／３２４Ｔ、２６７Ｅ／２６８Ｆ、２６７Ｅ／３２４Ｔ、および２６７Ｅ／２６８Ｆ７３２４Ｔが挙げられる。ＦｃγＲおよび補体相互作用を増強するための他の修飾としては、置換２９８Ａ、３３３Ａ、３３４Ａ、３２６Ａ、２４７Ｉ、３３９Ｄ、３３９Ｑ、２８０Ｈ、２９０Ｓ、２９８Ｄ、２９８Ｖ、２４３Ｌ、２９２Ｐ、３００Ｌ、３９６Ｌ、３０５Ｉ、および３９６Ｌが挙げられるが、これらに限定されない。これらおよび他の修正は、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１において概説されている。

Ｆｃγ受容体への結合を増加させるＦｃ修飾は、Ｆｃ領域のアミノ酸位置２３８、２３９、２４８、２４９、２５２、２５４、２５５、２５６、２５８、２６５、２６７、２６８、２６９、２７０、２７２、２７９、２８０、２８３、２８５、２９８、２８９、２９０、２９２、２９３、２９４、２９５、２９６、２９８、３０１、３０３、３０５、３０７、３１２、３１５、３２４、３２７、３２９、３３０、３３５、３３７、３３３８、３４０、３６０、３７３、３７６、３７９、３８２、３８８、３８９、３９８、４１４、４１６、４１９、４３０、４３４、４３５、４３７、４３８または４３９のうちのいずれか１つ以上におけるアミノ酸修飾を含み、ここでは、Ｆｃ領域における残基の番号付けは、ａｂａｔにおけるＥＵインデックスと同じである（ＷＯ００／４２０７２）。

Ｆｃに行うことができる他のＦｃ修飾は、ＦｃγＲおよび／または補体タンパク質への結合を低減または除去するためのものであり、それによって、ＡＤＣＣ、ＡＤＣＰ、およびＣＤＣなどのＦｃ媒介性エフェクター機能を低減または除去する。例示的な修飾としては、２３４、２３５、２３６、２３７、２６７、２６９、３２５、および３２８位の置換、挿入、および欠失が挙げられるが、これらに限定されず、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。例示的な置換としては、２３４Ｇ、２３５Ｇ、２３６Ｒ、２３７Ｋ、２６７Ｒ、２６９Ｒ、３２５Ｌ、および３２８Ｒが挙げられるが、これらに限定されず、番号付けは、ＥＵインデックスに従う。Ｆｃ変異型は、２３６Ｒ／３２８Ｒを含み得る。ＦｃγＲおよび補体相互作用を低減するための他の修飾としては、置換２９７Ａ、２３４Ａ、２３５Ａ、２３７Ａ、３１８Ａ、２２８Ｐ、２３６Ｅ、２６８Ｑ、３０９Ｌ、３３０Ｓ、３３１Ｓ、２２０Ｓ、２２６Ｓ、２２９Ｓ、２３８Ｓ、２３３Ｐ、および２３４Ｖ、ならびに変異もしくは酵素的手段によって、またはタンパク質をグリコシル化しない細菌などの生物での産生によって、２９７位でのグリコシル化を除去することが挙げられる。これらおよび他の修正は、Ｓｔｒｏｈｌ，２００９，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２０：６８５－６９１において概説されている。

任意選択で、Ｆｃ領域は、当業者に既知の追加のおよび／または代替の位置に非天然型アミノ酸残基を含んでもよい（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号、同第６，２７７，３７５号、同第６，７３７，０５６号、同第６，１９４，５５１号、同第７，３１７，０９１号、同第８，１０１，７２０号；ＷＯ００／４２０７２、ＷＯ０１／５８９５７、ＷＯ０２／０６９１９、ＷＯ０４／０１６７５０、ＷＯ０４／０２９２０７、ＷＯ０４／０３５７５２、ＷＯ０４／０７４４５５、ＷＯ０４／０９９２４９、ＷＯ０４／０６３３５１、ＷＯ０５／０７０９６３、ＷＯ０５／０４０２１７、ＷＯ０５／０９２９２５およびＷＯ０６／０２０１１４を参照されたい）。

抑制性受容体ＦｃγＲＩＩｂに対する親和性を増強するＦｃ変異型も使用され得る。そのような変異型は、例えば、Ｂ細胞および単球を含む、ＦｃγＲＩＩｂ細胞に関連する免疫調節活性を有するＦｃ融合タンパク質を提供してもよい。一実施形態では、Ｆｃ変異型は、１つ以上の活性化受容体と比較して、ＦｃγＲＩＩｂに対する選択的に増強された親和性を提供する。ＦｃγＲＩＩｂへの結合を変更するための修飾には、ＥＵインデックスに従って、２３４、２３５、２３６、２３７、２３９、２６６、２６７、２６８、３２５、３２６、３２７、３２８、および３３２からなる群から選択される位置での１つ以上の修飾が挙げられる。ＦｃγＲＩＩｂ親和性を向上させるための例示的な置換としては、２３４Ｄ、２３４Ｅ、２３４Ｆ、２３４Ｗ、２３５Ｄ、２３５Ｆ、２３５Ｒ、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３６Ｎ、２３７Ｄ、２３７Ｎ、２３９Ｄ、２３９Ｅ、２６６Ｍ、２６７Ｄ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２７Ｄ、３２７Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、３２８Ｙ、および３３２Ｅが挙げられるが、これらに限定されない。例示的な置換としては、２３５Ｙ、２３６Ｄ、２３９Ｄ、２６６Ｍ、２６７Ｅ、２６８Ｄ、２６８Ｅ、３２８Ｆ、３２８Ｗ、および３２８Ｙが挙げられる。ＦｃγＲｌｌｂへの結合を増強するための他のＦｃ変異型としては、２３５Ｙ／２６７Ｅ、２３６Ｄ／２６７Ｅ、２３９Ｄ／２６８Ｄ、２３９Ｄ／２６７Ｅ、２６７Ｅ／２６８Ｄ、２６７Ｅ／２６８Ｅ、および２６７Ｅ／３２８Ｆが挙げられる。

そのリガンドに対するＦｃ領域の親和性および結合特性は、平衡法（例えば、ＥＬＩＳＡ、または放射免疫測定法）、または動態（例えば、ＢＩＡＣＯＲＥ分析）、ならびに他の方法、例えば、間接結合アッセイ、競合阻害アッセイ、蛍光共鳴エネルギー伝達（ＦＲＥＴ）、ゲル電気泳動およびクロマトグラフィー（例えば、ゲル濾過）が挙げられるが、これらに限定されない当該技術分野において既知の様々なインビトロアッセイ方法（生化学的または免疫学的ベースのアッセイ）によって決定され得る。これらおよび他の方法は、検査されている構成要素のうちの１つ以上の標識を利用してもよく、および／または発色、蛍光、発光、または同位体標識が挙げられるが、これらに限定されない様々な検出方法を用いてもよい。結合親和性および動態の詳細な説明は、抗体と免疫原の相互作用に焦点を当てている、Ｐａｕｌ，Ｗ．Ｅ．，ｅｄ．，Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，４ｔｈ Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ－Ｒａｖｅｎ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９９）で見出すことができる。

ある特定の実施形態では、抗体は、その生物学的半減期を増加させるように修飾される。様々なアプローチが可能である。例えば、これは、ＦｃＲｎに対するＦｃ領域の結合親和性を増加させることによって行われ得る。例えば、米国特許第６，２７７，３７５号に記載されるように、以下の残基のうちの１つ以上が変異され得る：２５２、２５４、２５６、４３３、４３５、４３６。具体的な例示的置換としては、以下のうちの１つ以上が挙げられる：Ｔ２５２Ｌ、Ｔ２５４Ｓ、および／またはＴ２５６Ｆ。あるいは、生物学的半減期を増加させるために、抗体は、Ｐｒｅｓｔａらによる米国特許第５，８６９，０４６号および第６，１２１，０２２号に記載されているように、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２ドメインの２つのループから得られたサルベージ受容体結合エピトープを含有するようにＣＨ１またはＣＬ領域内で変更され得る。ＦｃＲｎへの結合を増加させる、および／または薬物動態特性を改善する他の例示的な変異型には、例えば、２５９Ｉ、３０８Ｆ、４２８Ｌ、４２８Ｍ、４３４Ｓ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、および４３４Ｍを含む、２５９位、３０８、４２８、および４３４位の置換が挙げられる。ＦｃＲｎへのＦｃ結合を増加させる他の変異型としては、２５０Ｅ、２５０Ｑ、４２８Ｌ、４２８Ｆ、２５０Ｑ／４２８Ｌ（Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ，，２００４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７９（８）：６２１３－６２１６，Ｈｉｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．２００６ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ １７６：３４６－３５６）、２５６Ａ、２７２Ａ、２８６Ａ、３０５Ａ、３０７Ａ、３０７Ｑ、３１１Ａ、３１２Ａ、３７６Ａ、３７８Ｑ、３８０Ａ、３８２Ａ、４３４Ａ（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００１，２７６（９）：６５９１－６６０４）、２５２Ｆ、２５２Ｔ、２５２Ｙ、２５２Ｗ、２５４Ｔ、２５６Ｓ、２５６Ｒ、２５６Ｑ、２５６Ｅ、２５６Ｄ、２５６Ｔ、３０９Ｐ、３１１Ｓ、４３３Ｒ、４３３Ｓ、４３３Ｉ、４３３Ｐ、４３３Ｑ、４３４Ｈ、４３４Ｆ、４３４Ｙ、２５２Ｙ／２５４Ｔ／２５６Ｅ、４３３Ｋ／４３４Ｆ／４３６Ｈ、３０８Ｔ／３０９Ｐ／３１１Ｓ（Ｄａｌｌ Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，２００２，１６９：５１７１－５１８０，Ｄａｌｌ‘Ａｃｑｕａ ｅｔ ａｌ．，２００６，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２８１：２３５１４－２３５２４）が挙げられる。ＦｃＲｎ結合を調節するための他の修飾は、Ｙｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２０１０，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ，１８２：７６６３－７６７１に記載されている。ある特定の実施形態では、特定の生物学的特徴を有するハイブリッドＩｇＧアイソタイプを使用してもよい。例えば、ＩｇＧｌ／ＩｇＧ３ハイブリッド変異型は、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域内のＩｇＧ１位置を、２つのアイソタイプが異なる位置でＩｇＧ３由来のアミノ酸で置換することによって構築されてもよい。したがって、１つ以上の置換、例えば、２７４Ｑ、２７６Ｋ、３００Ｆ、３３９Ｔ、３５６Ｅ、３５８Ｍ、３８４Ｓ、３９２Ｎ、３９７Ｍ、４２２Ｉ、４３５Ｒ、および４３６Ｆを含むハイブリッド変異型ＩｇＧ抗体を構築してもよい。本明細書に記載される他の実施形態では、ＩｇＧｌ／ＩｇＧ２ハイブリッド変異型は、ＣＨ２および／またはＣＨ３領域内のＩｇＧ２位置を、２つのアイソタイプが異なる位置でＩｇＧｌからのアミノ酸で置換することによって構築されてもよい。したがって、ハイブリッド変異型ＩｇＧ抗体は、１つ以上の置換、例えば、以下のアミノ酸置換のうちの１つ以上を含むＣＨＡＴによって構築され得る：２３３Ｅ、２３４Ｌ、２３５Ｌ、２３６Ｇ（２３６位のグリシンの挿入を指す）、および３２１ｈ。

さらに、ＦｃγＲｌ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎのヒトＩｇＧｌ上の結合部位がマッピングされ、改良された結合を有する変異型が記載されている（Ｓｈｉｅｌｄｓ，Ｒ．Ｌ．ｅｔ ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１－６６０４を参照されたい）。２５６位、２９０位、２９８位、３３３位、３３４位および３３９位の特異的変異は、ＦｃγＲＩＩＩへの結合を改善することが示された。加えて、以下の組み合わせ変異型は、ＦｃγＲＩＩＩ結合を改善することが示された：Ｔ２５６Ａ／Ｓ２９８Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ、Ｓ２９８Ａ／Ｋ２２４ＡおよびＳ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｋ３３４Ａ（これらは、増強されたＦｃγＲＩＩＩａ結合およびＡＤＣＣ活性を示すことが示されている）（Ｓｈｉｅｌｄｓ ｅｔ ａｌ．，２００１）。ＦｃγＲＩＩＩａへの結合が強く増強された他のＩｇＧｌ変異型が同定されており、これには、ＦｃγＲＩＩＩａに対する親和性の最大の増加、ＦｃγＲＩＩｂ結合の減少、およびカニクイザルにおける強い細胞傷害活性を示したＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２ＥおよびＳ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ変異を有する変異型が含まれる（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６）。アレムツズマブ（ＣＤ５２特異的）、トラスツズマブ（ＨＥＲ２／ｎｅｕ特異的）、リツキシマブ（ＣＤ２０特異的）、およびセツキシマブ（ＥＧＦＲ特異的）などの抗体への三重変異の導入は、インビトロで大幅に増強されたＡＤＣＣ活性に変換され、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ変異型は、サルにおけるＢ細胞を枯渇させる能力の増強を示した（Ｌａｚａｒ ｅｔ ａｌ．，２００６）。加えて、Ｂ細胞悪性腫瘍および乳がんのモデルにおいて、ヒトＦｃγＲＩＩＩａを発現するトランスジェニックマウスにおいてＦｃγＲＩＩＩａへの結合の増強および同時に増強されたＡＤＣＣ活性を示したＬ２３５Ｖ、Ｆ２４３Ｌ、Ｒ２９２Ｐ、Ｙ３００ＬおよびＰ３９６Ｌ変異を含有するＩｇＧｌ変異体が同定されている（Ｓｔａｖｅｎｈａｇｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００７；Ｎｏｒｄｓｔｒｏｍ ｅｔ ａｌ．，２０１１）。使用され得る他のＦｃ変異体としては、以下が挙げられる：Ｓ２９８Ａ／Ｅ３３３Ａ／Ｌ３３４Ａ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ、Ｓ２３９Ｄ／Ｉ３３２Ｅ／Ａ３３０Ｌ、Ｌ２３５Ｖ／Ｆ２４３Ｌ／Ｒ２９２Ｐ／Ｙ３００Ｌ／Ｐ３９６Ｌ、Ｍ４２８Ｌ／Ｎ４３４Ｓ。

ある特定の実施形態では、ＦｃγＲへの結合が減少したＦｃが選択される。ＦｃγＲ結合が減少した例示的なＦｃ、例えばＩｇＧｌ Ｆｃは、以下の３つのアミノ酸置換を含む：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５ＥおよびＧ２３７Ａ。

ある特定の実施形態では、補体固定が減少したＦｃが選択される。補体固定が減少した例示的なＦｃ、例えば、ＩｇＧｌ Ｆｃは、以下の２つのアミノ酸置換を有する：Ａ３３０ＳおよびＰ３３１Ｓ。

ある特定の実施形態では、本質的にエフェクター機能を有しない、すなわち、ＦｃγＲへの結合が減少し、補体固定が減少したＦｃが選択される。エフェクターレスである例示的なＦｃ、例えば、ＩｇＧｌ Ｆｃは、以下の５つの変異を含む：Ｌ２３４Ａ、Ｌ２３５Ｅ、Ｇ２３７Ａ、Ａ３３０Ｓ、Ｐ３３１Ｓ。

ＩｇＧ４定常ドメインを使用する場合、通常、置換Ｓ２２８Ｐを含むことが好ましく、これは、ＩｇＧｌ内のヒンジ配列を模倣し、それによってＩｇＧ４分子を安定化する。

抗体誘導体
本明細書に提供される抗体は、当該技術分野で既知であり、容易に入手可能な追加の非タンパク質性部分を含有するようにさらに修飾され得る。抗体の誘導体化に好適な部分としては、水溶性ポリマーが挙げられるが、これらに限定されない。

水溶性ポリマーの非限定的な例としては、ＰＥＧ、エチレングリコール／プロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリ－１，３－ジオキソラン、ポリ－１，３，６－トリオキサン、エチレン／マレイン酸無水物コポリマー、ポリアミノ酸（ホモポリマーまたはランダムコポリマーのいずれか）、およびデキストランまたはポリ（ｎ－ビニルピロリドン）ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、プロリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）、ポリビニルアルコール、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限定されない。ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒドは、水中でのその安定性のため、製造における利点を有し得る。ポリマーは、任意の分子量を有してもよく、分枝状または非分枝状であってもよい。抗体に結合したポリマーの数は様々であり、２つ以上のポリマーが結合している場合、それらは同じまたは異なる分子であり得る。一般に、誘導体化に使用されるポリマーの数および／または種類は、改善される抗体の特定の特性もしくは機能、抗体誘導体が定義された条件下で治療に使用されるかどうかなどが挙げられるが、これらに限定されない考慮事項に基づいて決定され得る。

別の実施形態において、放射線への曝露によって選択的に加熱され得る抗体と非タンパク質性部分とのコンジュゲートが提供される。一実施形態では、非タンパク質性部分は、カーボンナノチューブである（Ｋａｍ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ １０２：１１６００－１１６０５（２００５）を参照されたい）。放射線は、任意の波長のものであってもよく、通常の細胞に害を及ぼさないが、非タンパク質性部分を抗体非タンパク質性部分に近接する細胞が死滅する温度まで加熱する波長が含まれるが、これらに限定されない。

本明細書に記載される抗体の別の修飾は、ペグ化である。抗体をペグ化して、例えば、抗体の生物学的（例えば、血清）半減期を増加させることができる。抗体をペグ化するために、抗体、またはその断片を、典型的には、１つ以上のＰＥＧ基が抗体または抗体断片に結合する条件下で、ＰＥＧの反応性エステルまたはアルデヒド誘導体などのＰＥＧと反応させる。好ましくは、ペグ化は、アシル化反応または反応性ＰＥＧ分子（または類似の反応性水溶性ポリマー）とのアルキル化反応を介して実行される。本明細書で使用される場合、「ポリエチレングリコール」という用語は、モノ（ＣＩ－ＣＩＯ）アルコキシ－またはアリールオキシ－ポリエチレングリコールまたはポリエチレングリコール－マレイミドなどの他のタンパク質を誘導体化するために使用されているＰＥＧの形態のいずれかを包含することが意図される。ある特定の実施形態では、ペグ化される抗体は、非グリコシル化抗体である。タンパク質をペグ化するための方法は当該技術分野で既知であり、本明細書に記載の抗体に適用することができる。例えば、ＮｉｓｈｉｍｕｒａらのＥＰ０１５４３１６およびＩｓｈｉｋａｗａらのＥＰ０４０１３８４を参照されたい。

本発明は、治療剤、ポリマー、検出可能な標識または酵素にコンジュゲートされた、本明細書に記載のヒトモノクローナル抗体も包含する。一実施形態では、治療剤は、細胞傷害性剤である。一実施形態では、ポリマーは、ＰＥＧである。

産生の方法
抗体は、例えば、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されているように、組換え方法および組成物を使用して産生され得る。一実施形態では、本明細書に記載の抗体をコードする単離された核酸が提供される。そのような核酸は、ＶＬを含むアミノ酸配列および／または抗体のＶＨを含むアミノ酸配列（例えば、抗体の軽鎖および／または重鎖）をコードしてよい。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む１つ以上のベクター（例えば、発現ベクター）が提供される。さらなる実施形態では、そのような核酸を含む宿主細胞が提供される。そのような一実施形態では、宿主細胞は、以下を含む（例えば、それらで形質転換されている）：（１）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含むベクター、または（２）抗体のＶＬを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第１のベクター、および抗体のＶＨを含むアミノ酸配列をコードする核酸を含む第２のベクター。一実施形態では、宿主細胞は、真核細胞、例えば、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはリンパ系細胞（例えば、Ｙ０、ＮＳ０、Ｓｐ２０細胞）である。一実施形態では、抗体の作製方法が提供され、本方法は、抗体の発現に好適な条件下で、上記で提供したように、抗体をコードする核酸を含む宿主細胞を培養することと、任意選択的に、抗体を宿主細胞（または宿主細胞培養培地）から回収することと、を含む。

抗体の組換え産生のために、例えば上述のように、抗体をコードする核酸を単離し、宿主細胞におけるさらなるクローニングおよび／または発現のために１つ以上のベクターに挿入する。そのような核酸は、従来の手順を使用して（例えば、抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）容易に単離され、配列決定され得る。

抗体コードベクターのクローニングまたは発現に好適な宿主細胞には、本明細書に記載される原核細胞または真核細胞が含まれる。例えば、抗体は、細菌において、特にグリコシル化およびＦｃエフェクター機能が必要でない場合に産生され得る。細菌における抗体断片およびポリペプチドの発現については、例えば、米国特許第５，６４８，２３７号、同第５，７８９，１９９号、および同第５，８４０，５２３号を参照されたい。（また、Ｅ．ｃｏｌｉにおける抗体断片の発現を記載する、Ｃｈａｒｌｔｏｎ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．，２００３）、ｐｐ．２４５－２５４を参照されたい。）発現後、抗体は、可溶性画分中の細菌細胞ペーストから単離されてもよく、さらに精製され得る。

原核生物に加えて、糸状菌または酵母等の真核微生物は、グリコシル化経路が「ヒト化」され、部分的または完全なヒトグリコシル化パターンを有する抗体が産生される、真菌および酵母株を含む抗体コードベクターに好適なクローニングまたは発現宿主である。Ｇｅｒｎｇｒｏｓｓ，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２２：１４０９－１４１４（２００４）、およびＬｉ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．２４：２１０－２１５（２００６）を参照されたい。

グリコシル化抗体の発現に好適な宿主細胞もまた、多細胞生物（無脊椎動物および脊椎動物）に由来する。無脊椎動物細胞の例としては、植物細胞および昆虫細胞が挙げられる。特にＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞のトランスフェクションのために、昆虫細胞と併せて使用することができる多数のバキュロウイルス株が特定されている。

植物細胞培養物も宿主として利用することができる。例えば、米国特許第５，９５９，１７７号、同第６，０４０，４９８号、同第６，４２０，５４８号、同第７，１２５，９７８号、および同第６，４１７，４２９号（トランスジェニック植物において抗体を産生するためのＰＬＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ技術を記載している）を参照されたい。

脊椎動物細胞も宿主として使用され得る。例えば、懸濁液中で成長するように適合される哺乳類細胞株が有用であり得る。有用な哺乳類宿主細胞株の他の例としては、ＳＶ４０（ＣＯＳ－７）によって形質転換されたサル腎臓ＣＶ１株；ヒト胚性腎臓株（例えば、Ｇｒａｈａｍ ｅｔ ａｌ．Ｊ．Ｇｅｎ Ｖｉｒｏｌ．３６：５９（１９７７）に記載されているような２９３または２９３細胞）；ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ）；マウスセルトリ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．２３：２４３－２５１（１９８０）に記載されているようなＴＭ４細胞）；サル腎臓細胞（ＣＶ１）；アフリカミドリザル腎臓細胞（ＶＥＲＯ－７６）；ヒト子宮頸がん細胞（ＨＥＬＡ）；イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ）；バッファローラット肝臓細胞（ＢＲＬ３Ａ）；ヒト肺細胞（Ｗ１３８）；ヒト肝臓細胞（Ｈｅｐ Ｇ２）；マウス***腫瘍（ＭＭＴ ０６０５６２）；ＴＲＩ細胞（例えば、Ｍａｔｈｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ａｎａｎａｌｓ Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．３８３：４４－６８（１９８２）に記載されているような）；ＭＲＣ５細胞；およびＦＳ４細胞である。他の有用な哺乳類宿主細胞株としては、ＤＨＦＲ^－ＣＨＯ細胞（Ｕｒｌａｕｂ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７７：４２１６（１９８０））を含むＣＨＯ細胞；ならびにＹ０、ＮＳ０およびＳｐ２／０などの骨髄腫細胞株が挙げられる。抗体産生に好適なある特定の哺乳類宿主細胞株の概説については、例えば、Ｙａｚａｋｉ ａｎｄ Ｗｕ，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．２４８（Ｂ．Ｋ．Ｃ．Ｌｏ，ｅｄ．，Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎ．Ｊ．），ｐｐ．２５５－２６８（２００３）を参照されたい。

組成物および製剤
本発明の抗体は、ヒトにおけるヒトインフルエンザ感染症の治療のための単独または追加の抗インフルエンザウイルス抗体との抗体カクテルのいずれかにおける抗ウイルス療法の開発のための優れた方法を表す。

別の態様では、本発明は、薬学的に許容される担体と共に製剤化される、本明細書に記載の本発明の抗体を含む薬学的組成物を提供する。組成物は、任意選択的に、別の抗体または治療剤などの１つ以上の追加の薬学的活性成分を含有してよい。本発明の薬学的組成物は、例えば、別の免疫刺激剤、抗ウイルス剤、またはワクチンなどとの併用療法で投与することもできる。ある特定の実施形態では、組成物は、少なくとも１ｍｇ／ｍｌ、５ｍｇ／ｍｌ、１０ｍｇ／ｍｌ、５０ｍｇ／ｍｌ、１００ｍｇ／ｍｌ、１５０ｍｇ／ｍｌ、２００ｍｇ／ｍｌ、１～３００ｍｇ／ｍｌ、または１００～３００ｍｇ／ｍｌの濃度で本発明の抗体を含む。

薬学的組成物は、任意の数の賦形剤を含むことができる。使用可能な賦形剤としては、担体、表面活性剤、増粘剤または乳化剤、固体結合剤、分散剤または懸濁助剤、可溶化剤、着色剤、香味剤、コーティング剤、崩壊剤、潤滑剤、甘味剤、防腐剤、等張剤、およびそれらの組み合わせが挙げられる。好適な賦形剤の選択および使用は、Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｙ，２０ｔｈ Ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＆ Ｗｉｌｋｉｎｓ ２００３）に教示されており、その開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

好ましくは、薬学的組成物は、静脈内、筋肉内、皮下、非経口、脊椎または表皮投与（例えば、注射または注入による）に好適である。投与経路に応じて、活性化合物は、それを酸の作用、およびそれを不活性化し得る他の自然条件から保護するための材料でコーティングされ得る。本明細書で使用される場合、「非経口投与」という語句は、通常、注射による経腸および局所投与以外の投与様式を意味し、静脈内、筋肉内、動脈内、くも膜下腔内、被膜内、眼窩内、心臓内、皮内、腹腔内、経気管、皮下（ｓｕｂｃｕｔａｎｅｏｕｓ）、表皮下（ｓｕｂｃｕｔｉｃｕｌａｒ）、関節内、被膜下、くも膜下、脊髄内、硬膜外および胸骨内注射および注入が挙げられるが、これらに限定されない。あるいは、本明細書に記載される本発明の抗体は、非非経口経路、例えば、局所、表皮または粘膜投与経路、例えば、鼻腔内、経口、膣内、直腸、舌下、または局所を介して投与され得る。

本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される塩の形態であり得る。「薬学的に許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、任意の望ましくない毒性効果を与えない塩を指す。そのような塩の例としては、酸付加塩および塩基付加塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸、硝酸、リン酸、硫酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、リン酸などの非毒性無機酸に由来するもの、ならびに脂肪族モノカルボン酸およびジカルボン酸、フェニル置換アルカン酸、ヒドロキシアルカン酸、芳香族酸、脂肪族および芳香族スルホン酸などの非毒性有機酸に由来するものが挙げられる。塩基付加塩としては、ナトリウム、カリウム、マグネシウム、カルシウムなどのアルカリ土類金属に由来するもの、ならびにＮ，Ｎ’－ジベンジルエチレンジアミン、Ｎ－メチルグルカミン、クロロプロカイン、コリン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、プロカインなどの非毒性有機アミンに由来するものが挙げられる。

本発明の薬学的組成物は、滅菌水溶液または分散液の形態であり得る。また、高い薬物濃度に好適なマイクロエマルジョン、リポソーム、または他の秩序構造で製剤化することもできる。

本明細書に記載の本発明の抗体は、徐放性製剤として投与することができ、その場合、より少ない頻度での投与が必要である。投薬量および頻度は、患者における抗体の半減期に応じて変化する。一般に、ヒト抗体は、ヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体に続いて、最も長い半減期を示す。投薬量および投与頻度は、治療が予防的であるか、または治療的であるかに応じて変化し得る。予防用途において、比較的低い投薬量は、長期間にわたって比較的低頻度の間隔で投与される。一部の患者は、生涯にわたって治療を受け続ける。治療用途では、疾患の進行が減少または終結するまで、および好ましくは、患者が疾患の症状の部分的または完全な寛解を示すまで、比較的短い間隔での比較的高い投薬量が必要とされることがある。その後、予防的レジームを患者に投与することができる。

単一の剤形を生成するために担体材料と組み合わせることができる活性成分の量は、治療される対象および特定の投与様式に応じて変化し、一般に、治療効果をもたらす組成物の量である。一般に、１００パーセントのうち、この量は、薬学的に許容される担体と組み合わせて、活性成分の約０．０１％～約９９％、好ましくは約０．１％～約７０％、最も好ましくは約１％～約３０％の範囲になる。

投薬量レジメンは、最適な所望の応答（例えば、治療的応答）を提供するように調整することができる。例えば、単回ボーラスを投与することができ、いくつかの分割された用量を経時的に投与することができるか、または用量を治療状況の緊急性によって示されるように比例して減少または増加させることができる。投与の容易さおよび投薬量の均一性のために、投与単位形態で非経口組成物を製剤化することが特に有利である。本明細書で使用される場合、投与単位形態は、治療される対象のための単位投薬量として適切な物理的に別個の単位を指し、各単位は、必要な医薬担体と関連して所望の治療効果を生じさせるように計算された所定の量の活性化合物を含有する。あるいは、抗体は、徐放性製剤として投与されてもよく、この場合、より少ない頻度での投与が必要とされる。抗体の投与に関しては、投薬量は宿主体重の約０．０００１～１００ｍｇ／ｋｇ、より通常は０．０１～５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、投薬量は、０．３ｍｇ／ｋｇ体重、１ｍｇ／ｋｇ体重、３ｍｇ／ｋｇ体重、５ｍｇ／ｋｇ体重または１０ｍｇ／ｋｇ体重であってもよく、または１～１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であってもよい。例示的な治療レジームは、週に１回、２週間に１回、３週間に１回、４週間に１回、月に１回、３ヶ月に１回、または３～６ヶ月に１回の投与を伴う。本発明の抗体の好ましい投薬量レジメンは、静脈内投与による１ｍｇ／ｋｇ体重または３ｍｇ／ｋｇ体重を含み、抗体は、以下の投与スケジュールのうちの１つを使用して供与される：（ｉ）６回の投薬については、４週間毎、次いで３ヶ月毎；（ｉｉ）３週間毎；（ｉｉｉ）３ｍｇ／ｋｇ体重を１回、続いて３週間毎に１ｍｇ／ｋｇ体重。いくつかの方法では、用量は、約１～１０００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度、およびいくつかの方法では、約２５～３００μｇ／ｍｌの血漿抗体濃度を達成するように調整される。本発明の抗体の「治療上有効な投薬量」は、好ましくは、疾患症状の重症度の低下、疾患症状のない期間の頻度および期間の増加、または疾患の苦痛による障害もしくは障害の予防をもたらす。例えば、対象におけるインフルエンザ感染症の治療のために、「治療上有効な投薬量」は、好ましくは、インフルエンザウイルスの複製または宿主細胞による取り込みを、未治療対象と比較して少なくとも約２０％、より好ましくは少なくとも約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約６０％、さらにより好ましくは少なくとも約８０％阻害する。治療有効量の治療用化合物は、インフルエンザウイルスを中和するか、または別の方法で、典型的にはヒトであるか、または別の哺乳動物であることができる対象における症状を改善することができる。薬学的組成物は、移植片、経皮パッチ、およびマイクロカプセル化送達系を含む制御放出製剤であり得る。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、およびポリ乳酸などの生分解性、生体適合性ポリマーを使用することができる。例えば、Ｓｕｓｔａｉｎｅｄ ａｎｄ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖｅｒｙ Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｊ．Ｒ．Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ｅｄ．，Ｍａｒｃｅｌ Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，１９７８を参照されたい。

治療用組成物は、（１）無針皮下注入デバイス（例えば、米国特許第５，３９９，１６３号、同第５，３８３，８５１号、同第５，３１２，３３５号、同第５，０６４，４１３号、同第４，９４１，８８０号、同第４，７９０，８２４号、および同第４，５９６，５５６号）、（２）微小注入ポンプ（米国特許第４，４８７，６０３号）、（３）経皮デバイス（米国特許第４，４８６，１９４号）、（４）注入装置（米国特許第４，４４７，２３３号および同第４，４４７，２２４号）、ならびに（５）浸透圧デバイス（米国特許第４，４３９，１９６号および同第４，４７５，１９６号）などの医療デバイスを介して投与することができ、これらの開示は、参照により本明細書に組み込まれる。

ある特定の実施形態では、本明細書に記載の本発明のヒトモノクローナル抗体は、インビボでの適切な分布を確実にするために製剤化することができる。例えば、本発明の治療用化合物が血液脳関門を通過することを確実にするために、それらは、特定の細胞または臓器への選択的輸送を増強するための標的部分を追加的に含み得るリポソーム中に製剤化され得る。例えば、米国特許第４，５２２，８１１号、同第５，３７４，５４８号、同第５，４１６，０１６号、および同第５，３９９，３３１号；Ｖ．Ｖ．Ｒａｎａｄｅ（１９８９）Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２９：６８５；Ｕｍｅｚａｗａ ｅｔ ａｌ，（１９８８）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．１５３：１０３８；Ｂｌｏｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９５）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３５７：１４０；Ｍ．Ｏｗａｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．３９：１８０；Ｂｒｉｓｃｏｅ ｅｔ ａｌ．（１９９５）Ａｍ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３３：１３４；Ｓｃｈｒｅｉｅｒ ｅｔ ａｌ．（１９９４）．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：９０９０；Ｋｅｉｎａｎｅｎ ａｎｄ Ｌａｕｋｋａｎｅｎ（１９９４）ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．３４６：１２３；ならびにＫｉｌｌｉｏｎ ａｎｄ Ｆｉｄｌｅｒ （１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ ４：２７３を参照されたい。

使用方法および方法
インフルエンザについての現在の抗ウイルス治療（例えば、オセルタミビル／タミフル、アマンタジン／リマンタジン）は、耐性の発生率が増加し、治療ウィンドウが制限されているため（症状発症後４８時間以内に開始しなければならない）、最適以下である（Ｂｅｉｇｅｌ Ｊ，ｅｔ ａｌ．２００８．Ａｎｔｉｖｉｒａｌ Ｒｅｓ ７８：９１－１０２；Ｇａｒｃｉａ－Ｓａｓｔｒｅ Ａ．２００６．Ｅｍｅｒｇ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ １２：４４－４７；およびＭａｒａｔｈｅ ＢＭ，ｅｔ ａｌ．２０１６．Ｓｃｉ Ｒｅｐ ６：２６７４２）。モノクローナル抗体は、その高い特異性、限定されたオフターゲット効果、および優れた安全性プロファイルのために、部分的には成長する薬物のクラスであり続けている。本明細書に記載される抗体、組成物、および製剤は、インフルエンザウイルスを中和し、それによってインフルエンザ感染症を治療するために使用され得る。

したがって、一態様では、本明細書に記載される抗体は、インフルエンザウイルスを中和するために使用され得る。インフルエンザウイルスの中和は、（ｉ）標的細胞に結合するインフルエンザウイルスを阻害することと、（ｉｉ）標的細胞によるインフルエンザウイルスの取り込みを阻害することと、（ｉｉｉ）インフルエンザウイルスの複製を阻害することと、（ｉｖ）感染細胞からのインフルエンザウイルス粒子の放出を阻害することと、によって行うことができる。当業者は、インフルエンザウイルスの中和を評価するための任意のアッセイを実施する能力を有する。特筆すべきことに、抗体の中和特性は、種々の試験によって評価されてもよく、これらは全て、（ｉ）標的細胞に結合するインフルエンザウイルスの阻害、（ｉｉ）標的細胞によるインフルエンザウイルス取り込みの阻害、（ｉｉｉ）インフルエンザウイルス複製の阻害、および（ｉｖ）感染細胞から放出されるインフルエンザウイルス粒子の阻害の結果を評価し得る。言い換えると、異なる試験を実施することは、同じ結果、すなわち、インフルエンザウイルスの感染性の喪失の観察につながり得る。したがって、一実施形態では、本発明は、本明細書に記載の本発明の抗体の治療効果量を投与することを含む、対象におけるインフルエンザウイルスを中和する方法を提供する。

本発明の別の態様は、インフルエンザ関連疾患の治療方法を提供する。そのような方法は、治療的（インフルエンザ感染後）および予防的（インフルエンザ曝露、感染または病理の前）を含む。例えば、インフルエンザ感染症のために個体を治療する治療的および予防的方法は、インフルエンザ感染症または病理を有するか、またはインフルエンザ感染症を有するリスクがある個体の治療、インフルエンザ感染症を有する個体の治療、およびインフルエンザ感染症から個体を保護する方法、個体におけるインフルエンザ感染症の可能性を低減または低減する方法、インフルエンザ感染症に対する個体の感受性を低減または低減する方法、または個体におけるインフルエンザ感染症を阻害または予防する方法、ならびに感染した個体から感染していない個体へのインフルエンザの伝播を低減、低減、阻害または抑制する方法を含む。そのような方法は、本発明の抗体または本明細書に開示される抗体を含む組成物を、インフルエンザ感染症または病理を有するか、もしくは有するリスクがある個体を治療的または予防的に治療する（ワクチン接種または免疫化する）ことを含む。したがって、方法は、インフルエンザ感染症または病理を治療することができ、または感染からの保護（例えば、予防的保護）を個体に提供することができる。

一実施形態では、インフルエンザ関連疾患を治療する方法は、それを必要とする個体に、本明細書に開示される抗体または治療組成物を、インフルエンザ感染症または病理に関連する１つ以上の生理学的状態または症状を低減するのに十分な量で投与し、それによってインフルエンザ関連疾患を治療することを含む。

一実施形態では、本明細書に開示される抗体または治療用組成物は、インフルエンザ関連疾患を治療するために使用される。本明細書に開示される抗体または治療用組成物の使用は、インフルエンザ感染症または病理に関連する１つ以上の生理学的状態もしくは症状を低減することによって、インフルエンザ関連疾患を治療する。この実施形態の態様では、本明細書に開示される抗体または治療組成物の投与は、インフルエンザ感染症または病理に関連する１つ以上の生理学的状態もしくは症状を低減するのに十分な量であり、それによって、インフルエンザに基づく疾患を治療する。この実施形態の他の態様において、本明細書に開示される抗体または治療組成物の投与は、インフルエンザクリアランスまたは除去を増加、誘導、増強、増強、促進、もしくは刺激するのに、または別の個体へのインフルエンザの伝播を減少、低減、阻害、抑制、予防、制御、もしくは制限するのに十分な量である。

インフルエンザ感染症または病理に関連する１つ以上の生理学的状態もしくは症状は、本明細書に開示される治療方法に応答するであろう。インフルエンザ感染症の症状または病理は、感染の段階に応じて変化する。

本発明の別の態様では、本明細書に記載の抗体は、様々な検出方法で、例えば、インフルエンザ感染症の進行を監視する、そのような感染の治療に対する患者の応答を監視するなどで使用するために使用することができる。本開示は、個体から得られた生体試料中のＨＡまたはＮＡポリペプチドの検出方法を提供する。本方法は、概して、ａ）生体試料を、対象の抗ＨＡまたは抗ＮＡ抗体と接触させることと、ｂ）試料中に存在するエピトープへの抗体の結合（もしあれば）を検出することと、を含む。いくつかの事例では、抗体は、検出可能な標識を含む。生体試料中で検出されるＨＡまたはＮＡポリペプチドのレベルは、インフルエンザ感染症の病期、程度、または重症度の指標を提供することができる。生体試料中で検出されるＨＡまたはＮＡポリペプチドのレベルは、インフルエンザ感染症の治療に対する個体の応答の指標を提供することができる。

本明細書に記載される抗体は、インフルエンザウイルスを中和し、それによってインフルエンザ感染症を治療するために、１つ以上の他の抗インフルエンザウイルス抗体と共に使用され得る。

定義
本明細書で言及される「抗体」という用語は、全抗体およびその任意の抗原結合断片または一本鎖を含む。全抗体は、ジスルフィド結合によって相互接続された少なくとも２つの重（Ｈ）鎖および２つの軽（Ｌ）鎖を含む糖タンパク質である。各重鎖は、重鎖可変領域（本明細書では、Ｖ_Ｈと略記する）および重鎖定常領域から構成される。重鎖定常領域は、Ｃ_Ｈ１、Ｃ_Ｈ２、およびＣ_Ｈ３の３つのドメインから構成される。各軽鎖は、軽鎖可変領域（本明細書では、Ｖ_Ｌと略記する）および軽鎖定常領域から構成される。軽鎖定常領域は、１つのドメイン、Ｃ_Ｌから構成される。Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ領域は、相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる、超可変性の領域にさらに細分化され、フレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれる、より保存された領域と共に散在させることができる。各Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌは、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で並べられた３つのＣＤＲおよび４つのＦＲからなる：ＦＲｌ、ＣＤＲｌ、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。重鎖可変領域ＣＤＲおよびＦＲは、ＨＦＲｌ、ＨＣＤＲｌ、ＨＦＲ２、ＨＣＤＲ２、ＨＦＲ３、ＨＣＤＲ３、ＨＦＲ４である。軽鎖可変領域ＣＤＲおよびＦＲは、ＬＦＲｌ、ＬＣＤＲｌ、ＬＦＲ２、ＬＣＤＲ２、ＬＦＲ３、ＬＣＤＲ３、ＬＦＲ４である。重鎖および軽鎖の可変領域は、抗原と相互作用する結合ドメインを含有する。抗体の定常領域は、免疫系の様々な細胞（例えば、エフェクター細胞）および古典的補体系の第１の成分（ＣＩｑ）を含む、免疫グロブリンの宿主組織または因子への結合を媒介することができる。

本明細書で使用される場合、「抗体」という用語は、最も広い意味で使用され、具体的には、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体および多反応性抗体）、ならびに抗体断片を含むが、これらに限定されない、天然または部分的または完全に合成されて産生される任意の免疫グロブリンを含み得る。

「二重特異性抗体」という用語は、２つの異なる抗原に結合する２つの異なるモノクローナル抗体の断片からなる人工免疫グロブリン構築物を指す。三官能性抗体および化学的に連結されたＦａｂが挙げられるが、これらに限定されない、いくつかの異なる種類の二重特異性抗体が存在する。本明細書に記載される抗体は、二重特異性抗体を含み得、本明細書に記載される１つ以上の異なる抗体または既知の抗インフルエンザウイルス抗体を含む、１つ以上の異なる抗ＨＡまたはＮＡ抗体の断片を含む。その二重特異性抗体の作製および使用方法は、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ／ＵＳ１６／６４７１３に記載されている。

本明細書で使用される場合、抗体の「抗原結合断片または部分」（または単に「抗体断片または部分」）という用語は、抗原（例えば、インフルエンザＡ型またはＢ型ウイルスのＨＡまたはＮＡ）に特異的に結合する能力を保持する抗体の１つ以上の断片を指す。抗体の抗原結合機能は、完全長抗体の断片によって行われ得ることが示されている。抗体の「抗原結合断片または部分」という用語に包含される結合断片の例としては、（ｉ）Ｆａｂ断片、Ｖ_Ｌ、Ｖ_Ｈ、Ｃ_ＬおよびＣ_ＨＩドメインからなる一価断片、（ｉｉ）Ｆ（ａｂ’）２断片、ヒンジ領域におけるジスルフィド架橋によって連結された２つのＦａｂ断片を含む二価断片、（ｉｉｉ）本質的にヒンジ領域の一部を有するＦａｂであるＦａｂ’断片（ＦＵＮＤＡＭＥＮＴＡＬ ＩＭＭＵＮＯＬＯＧＹ（Ｐａｕｌ ｅｄ．，３^ｒｄ ｅｄ．１９９３）を参照されたい）、（ｉｖ）Ｖ_ＨおよびＣ_ＨＩドメインからなるＦｄ断片、（ｖ）抗体の単一アームのＶ_ＬおよびＶＨドメインからなるＦｖ断片、（ｖｉ）ＶＨドメインからなるｄＡｂ断片（Ｗａｒｄ ｅｔ ａｌ．，（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ ３４１：５４４－５４６）、（ｖｉｉ）単離されたＣＤＲ、ならびに（ｖｉｉｉ）ナノボディ、単一可変ドメインおよび２つの定常ドメインを含有する重鎖可変領域が挙げられる。さらに、Ｆｖ断片の２つのドメイン、ＶＬおよびＶＨは、別個の遺伝子によってコードされるが、それらは、組換え方法を使用して、ＶＬおよびＶＨ領域が対合して一価分子（一本鎖ＦｖまたはｓｃＦｖとして知られる）を形成する単一のタンパク質鎖として作製することを可能にする合成リンカーによって結合することができる；例えば、Ｂｉｒｄ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ ２４２：４２３－４２６；およびＨｕｓｔｏｎ ｅｔ ａｌ．（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：５８７９－５８８３を参照されたい）。そのような一本鎖抗体はまた、抗体の「抗原結合断片または部分」という用語内に包含されることが意図される。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来技術を使用して得られ、断片は、インタクト抗体と同じ方法で有用性についてスクリーニングされる。

本明細書で使用される場合、「単離された抗体」は、異なる抗原特異性を有する他の抗体を実質的に含まない抗体を指すことが意図される（例えば、インフルエンザＡ型またはＢ型ウイルスのＨＡまたはＮＡなどの特定の抗原に特異的に結合する単離された抗体は、特定の抗原以外の抗原に特異的に結合する抗体を実質的に含まない）。単離された抗体は、他の細胞物質および／または化学物質を実質的に含まないことができる。

本明細書で使用される場合、「モノクローナル抗体」または「モノクローナル抗体組成物」という用語は、単一分子組成物の抗体分子の調製物を指す。モノクローナル抗体組成物は、特定のエピトープに対する単一の結合特異性および親和性を示す。

「ヒト抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する抗体を含むことが意図される。さらに、抗体が定常領域を含有する場合、定常領域は、ヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列にも由来する。本発明のヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってコードされないアミノ酸残基（例えば、インビトロでのランダムまたは部位特異的変異誘発によって、またはインビボでの体細胞変異によって導入される変異）を含むことができる。しかしながら、本明細書で使用される場合、「ヒト抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列がヒトフレームワーク配列に移植された抗体を含むことを意図しない。

「ヒトモノクローナル抗体」という用語は、フレームワークおよびＣＤＲ領域の両方がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する、単一の結合特異性を示す抗体を指す。一実施形態では、ヒトモノクローナル抗体は、トランスジェニック非ヒト動物、例えば、トランスジェニックマウスから得られたＢ細胞を含み、ヒト重鎖導入遺伝子と、不死化細胞に融合された軽鎖導入遺伝子とを含むゲノムを有するハイブリドーマによって産生され得る。

本明細書で使用される場合、「組換えヒト抗体」という用語は、（ａ）ヒト免疫グロブリン遺伝子のためのトランスジェニックまたはトランス染色体である動物（例えば、マウス）から単離された抗体、またはそこから調製されたハイブリドーマ（以下にさらに記載）、（ｂ）ヒト抗体を発現するように形質転換された宿主細胞から、例えば、トランスフェクトーマから単離された抗体、（ｃ）組換え、組換えヒト抗体ライブラリーから単離された抗体、および（ｄ）ヒト免疫グロブリン遺伝子配列の他のＤＮＡ配列へのスプライシングを伴う任意の他の手段によって調製、発現、作製、または単離された抗体などの、組換え手段によって調製、発現、作製、または単離された全てのヒト抗体を含む。そのような組換えヒト抗体は、フレームワークおよびＣＤＲ領域がヒト生殖細胞系免疫グロブリン配列に由来する可変領域を有する。しかしながら、ある特定の実施形態では、そのような組換えヒト抗体は、インビトロ突然変異誘発（または、ヒトＩｇ配列に対してトランスジェニックな動物が使用される場合、インビボ体細胞突然変異誘発）を受けることができ、したがって、組換え抗体のＶ_ＨおよびＶ_Ｌ領域のアミノ酸配列は、ヒト生殖系列Ｖ_ＨおよびＶ_Ｌ配列に由来し、関連しながらも、ヒト抗体生殖系列レパートリー内にインビボで自然に存在し得ない配列である。

「アイソタイプ」という用語は、重鎖定常領域遺伝子によってコードされる抗体クラス（例えば、ＩｇＭまたはＩｇＧ１）を指す。「抗原を認識する抗体」および「抗原に特異的な抗体」は、本明細書では、「抗原に特異的に結合する抗体」という用語と同義に使用される。

「ヒト抗体誘導体」という用語は、ヒト抗体の任意の修飾形態、例えば、抗体と別の薬剤または抗体とのコンジュゲートを指す。「ヒト化抗体」という用語は、マウスなどの別の哺乳類種の生殖細胞系に由来するＣＤＲ配列が、ヒトのフレームワーク配列に移植された抗体を指すことが意図されている。追加のフレームワーク領域修飾は、ヒトフレームワーク配列内で行うことができる。

「キメラ抗体」という用語は、可変領域配列が１つの種に由来し、定常領域配列が別の種に由来する抗体、例えば、可変領域配列がマウス抗体に由来し、定常領域配列がヒト抗体に由来する抗体を指すことが意図されている。この用語はまた、その可変領域配列またはＣＤＲが１つの供給源（例えば、ＩｇＡ１抗体）に由来し、定常領域配列またはＦｃが異なる供給源（例えば、異なる抗体、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ２、ＩｇＤ、ＩｇＥまたはＩｇＭ抗体）に由来する抗体を指すことができる。

本明細書で使用される場合、「親和性」という用語は、分子（例えば、抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば、抗原）との間の非共有結合相互作用の合計の強度を指す。別途示されない限り、本明細書で使用される場合、「結合親和性」は、結合対のメンバー（例えば、抗体および抗原）間の１：１の相互作用を反映する固有の結合親和性を指す。分子ＸのパートナーＹに対する親和性は、一般に、解離定数（ＫＤ）により表すことができる。親和性は、本明細書に記載されるものを含む、当技術分野で既知の一般的な方法によって測定され得る。

本明細書で使用される場合、「インフルエンザウイルスのＨＡに特異的に結合する」抗体は、インフルエンザウイルスのＨＡに結合するが、実質的に非インフルエンザウイルスのＨＡに結合しない抗体を指す。同様に、「インフルエンザウイルスのＮＡに特異的に結合する」抗体は、インフルエンザウイルスのＮＡに結合するが、実質的に非インフルエンザウイルスＮＡに結合しない抗体を指す。

好ましくは、抗体は、「高親和性」、すなわち、１×１０^－７Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは３×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは１×１０^－８Ｍ以下、より好ましくは５×１０^－９Ｍ以下、またはさらにより好ましくは１×１０^－９Ｍ以下のＫＤで、ＨＡまたはＮＡに結合する。本明細書で使用される場合、「実質的に結合しない」という用語は、タンパク質または細胞に高い親和性で結合しない、または結合しないことを意味し、すなわち、１×１０^－６Ｍ以上、より好ましくは１×１０^－５Ｍ以上、より好ましくは１×１０^－４Ｍ以上、より好ましくは１×１０^－３Ｍ以上、さらにより好ましくは１×１０^－２Ｍ以上のＫＤでタンパク質または細胞に結合する。

本明細書で使用される場合、「Ｋａｓｓｏｃ」または「Ｋａ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の会合速度を指すことが意図され、一方、本明細書で使用される場合、「Ｋｄｉｓ」または「Ｋｄ」という用語は、特定の抗体－抗原相互作用の解離速度を指すことが意図される。本明細書で使用される場合、「ＫＤ」という用語は、Ｋｄ対Ｋａの比（すなわち、Ｋｄ／Ｋａ）から得られ、モル濃度（Ｍ）として表される解離定数を指すことが意図される。抗体のＫＤ値は、当該技術分野において十分に確立された方法を使用して決定することができる。抗体のＫＤを決定するための好ましい方法は、表面プラズモン共鳴を使用すること、好ましくはＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）システムなどのバイオセンサーシステムを使用することである。

本明細書で使用される場合、「エピトープ」という用語は、パラトープとして知られる抗体分子の可変領域で特異的な抗原結合部位と相互作用する抗原決定基を指す。単一の抗原は、２つ以上のエピトープを有し得る。したがって、異なる抗体は、抗原上の異なる領域に結合してもよく、異なる生物学的効果を有してもよい。「エピトープ」という用語はまた、Ｂおよび／またはＴ細胞が応答する抗原上の部位を指す。また、抗体によって結合される抗原の領域も指す。エピトープは、構造的または機能的として定義され得る。機能的エピトープは、一般に、構造的エピトープのサブセットであり、相互作用の親和性に直接寄与する残基を有する。エピトープはまた、立体構造、すなわち、非線形アミノ酸から構成され得る。ある実施形態では、エピトープは、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基、またはスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面基である決定基を含んでもよく、ある実施形態では、特定の三次元構造特性、および／または特定の電荷特性を有してもよい。エピトープは、典型的には、固有の空間立体配座において、少なくとも３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個のアミノ酸を含む。どのエピトープが所与の抗体によって結合されるかを決定する方法（すなわち、エピトープマッピング）は、当該技術分野で周知であり、例えば、免疫ブロッティングおよび免疫沈降アッセイを含み、ここで、ＨＡまたはＮＡタンパク質からの重複または連続ペプチドが、所与の抗体との反応性について試験される。エピトープの空間コンフォメーションを決定する方法としては、当該技術分野および本明細書に記載の技術、例えば、Ｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴が挙げられる（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ Ｍａｐｐｉｎｇ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．６６，Ｇ．Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ，Ｅｄ．（１９９６）を参照されたい）。

「エピトープマッピング」という用語は、抗体－抗原認識のための分子決定因子の同定プロセスを指す。

「エピトープに結合する」または「エピトープを認識する」という用語は、抗体または抗体断片に関して、抗原内のアミノ酸の連続的または不連続的なセグメントを指す。当業者は、用語が必ずしも抗体または抗体断片がエピトープ配列内の全てのアミノ酸に直接接触していることを意味しないことを理解する。

「同一のエピトープに結合する」という用語は、２つ以上の抗体に関して、抗体がアミノ酸の同じ、重複する、または連続的または不連続的なセグメントを包含するように結合することを意味する。当業者は、「同一のエピトープに結合する」という語句は、抗体が全く同一のアミノ酸に結合または接触することを必ずしも意味しないことを理解する。抗体が接触する正確なアミノ酸は、異なる場合がある。例えば、第１の抗体は、第２の抗体によって結合されるアミノ酸のセグメントによって完全に包含されるアミノ酸のセグメントに結合することができる。別の実施例では、第１の抗体は、第２の抗体によって結合された１つ以上のセグメントに有意に重複するアミノ酸の１つ以上のセグメントに結合する。本明細書の目的のために、そのような抗体は、「同じエピトープに結合する」と見なされる。

「標的への結合に関して他の抗体と競合する」抗体は、他の抗体の標的への結合を（部分的にまたは完全に）阻害する抗体を指す。２つの抗体が、標的への結合に関して互いに競合するかどうか、すなわち、一方の抗体が他方の抗体の標的への結合を阻害するかどうかおよびどの程度であるかは、既知の競合実験を使用して判定され得る。ある実施形態では、抗体は、別の抗体と標的との結合を少なくとも１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、または１００％競合し、阻害する。阻害または競合のレベルは、どの抗体が「遮断抗体」（すなわち、標的と最初にインキュベートされる寒冷（ｃｏｌｄ）抗体）であるかに応じて異なってもよい。競合アッセイは、例えば、Ｅｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂ Ｐｒｏｔｏｃ；２００６；ｄｏｉ：１０．１１０１／ｐｄｂ．ｐｒｏｔ４２７７またはＥｄ Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｄａｖｉｄ Ｌａｎｅによる「Ｕｓｉｎｇ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ，ＵＳＡ１９９９の第１１章に記載されるように実施することができる。競合抗体は、同じエピトープ、重複するエピトープ、または隣接するエピトープに結合する（例えば、立体障害によって証明されるように）。他の競合結合アッセイとしては、固相直接または間接ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、固相直接または間接酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）、サンドイッチ競合アッセイ（Ｓｔａｈｌｉ ｅｔ ａｌ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ ９：２４２（１９８３））；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｋｉｒｋｌａｎｄ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３７：３６１４（１９８６）を参照されたい）；固相直接標識化アッセイ、固相直接標識化サンドイッチアッセイ（Ｈａｒｌｏｗ ａｎｄ Ｌａｎｅ， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ（１９８８）を参照されたい）；１～１２５標識を使用した固相直接標識ＲＩＡ（Ｍｏｒｅｌ ｅｔ ａｌ．，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５（１）：７（１９８８）を参照されたい）；固相直接ビオチン－アビジンＥＩＡ（Ｃｈｅｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７６：５４６（１９９０））；および直接標識化ＲＩＡ（Ｍｏｌｄｅｎｈａｕｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｓｃａｎｄ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：７７（１９９０））が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「免疫応答」という用語は、脊椎動物内での外来剤に対する生物学的応答を指し、この応答は、生物をこれらの薬剤およびそれらによって引き起こされる疾患から保護する。免疫応答は、免疫系の細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、マクロファージ、好酸球、肥満細胞、樹状細胞もしくは好中球）、ならびにこれらの細胞もしくは肝臓（抗体、サイトカイン、および補体を含む）のいずれかによって産生される可溶性巨大分子の作用によって媒介され、脊椎動物の侵入病原体、病原体に感染した細胞もしくは組織、がん性もしくは他の異常細胞、または自己免疫もしくは病理学的炎症の場合、正常なヒト細胞もしくは組織の選択的標的化、結合、損傷、破壊、および／もしくは脊椎動物の体内からの排除をもたらす。免疫反応としては、例えば、Ｔ細胞、例えば、エフェクターＴ細胞もしくはＴｈ細胞、例えば、ＣＤ４＋もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞の活性化もしくは阻害、またはＴｒｅｇ細胞の阻害が挙げられる。

本明細書で使用される場合、「検出可能な標識」という用語は、放射性同位体、蛍光体、化学発光体、発色団、酵素、酵素基質、酵素補助因子、酵素阻害剤、発色団、色素、金属イオン、金属ゾル、リガンド（例えば、ビオチン、アビジン、ストレプトアビジンまたはハプテン）、挿入（ｉｎｔｅｒｃａｌａｔｉｎｇ）色素などを含むがこれらに限定されない、検出可能な分子を指す。「蛍光体」という用語は、検出可能な範囲で蛍光を示すことができる物質またはその一部を指す。

本明細書で使用される場合、「対象」という用語は、動物を指す。好ましくは、動物は哺乳動物である。対象は、例えば、霊長類（例えば、ヒト）、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、ウサギ、ラット、マウス、魚、鳥なども指す。好ましい実施形態では、対象はヒトである。

本明細書で使用される場合、本発明の化合物の「治療有効量」という用語は、対象の生物学的または医学的応答を誘発するか、または症状を改善するか、疾患の進行を遅延もしくは遅延させるか、または疾患を予防する本発明の化合物の量を指す。一実施形態では、この用語は、微生物コロニー形成または感染を阻害または低減する量を指す。一実施形態において、この用語は、感染を阻害もしくは低減するか、または細菌バイオフィルムの形成を防止もしくは破壊する量を指す。個々の活性成分に適用する場合、単独で投与され、この用語は、その成分単独を指す。組み合わせに適用される場合、この用語は、組み合わせて投与されるか、連続的に投与されるか、または同時に投与されるかにかかわらず、治療効果をもたらす活性成分の組み合わせ量を指す。

本明細書で使用される「薬学的に許容される担体または賦形剤」という用語は、組成物の活性成分の生物学的活性の有効性を妨げず、それが投与される濃度では宿主に対して過度に毒性がない担体培地または賦形剤を指す。本発明の文脈において、薬学的に許容される担体または賦形剤は、好ましくは、局所製剤に好適である。この用語には、溶媒、安定剤、可溶化剤、等張化剤、構造形成剤、懸濁剤、分散剤、キレート剤、乳化剤、消泡剤、軟膏基剤、皮膚軟化剤、皮膚保護剤、ゲル形成剤、増粘剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、浸透促進剤、錯化剤、潤滑剤、粘滑剤、増粘剤、生体接着性ポリマー、またはそれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されない。（例えば、参照によりその全体が本明細書に組み込まれる、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」，Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ，１８ｔｈ Ｅｄ．，１９９０，Ｍａｃｋ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ｃｏ．：Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡを参照されたい）。

本明細書で使用される場合、任意の疾患または障害の「治療すること」または「治療」という用語は、一実施形態では、疾患または障害を緩和すること（すなわち、疾患またはその臨床症状の少なくとも１つの発症を阻止または低減すること）を指す。別の実施形態では、「治療すること」または「治療」とは、患者によって識別され得ない少なくとも１つの身体パラメータを改善することを指す。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害を、身体的に、（例えば、識別可能な症状の安定化）、生理学的に、（例えば、身体パラメータの安定化）、または両方のいずれかで調節することを指す。さらに別の実施形態では、「治療すること」または「治療」は、疾患または障害の発症、発達、または進行を予防もしくは遅延させることを指す。

本明細書で使用されるとき、本発明の文脈において（とりわけ、請求項の文脈において）使用される「ａ」、「ａｎ」、「ｔｈｅ」という用語および同様の用語は、別様に本明細書に示唆されるか、または文脈に明確に矛盾しない限り、単数形および複数形の両方を網羅するように解釈されるべきである。本明細書における値の範囲の列挙は、単に、その範囲内に収まる各別個の値を個別に参照する簡略表現法としての役割を果たすことが意図される。本明細書に別段の指示がない限り、各個別の値は、本明細書に個別に列挙されているかのように本明細書に組み込まれる。本明細書に記載されるすべての方法は、本明細書に別段の指示がない限り、または文脈に明確に矛盾しない限り、任意の好適な順序で実行され得る。本明細書で提供される任意のおよびすべての例、または例示的な言語（例えば、「など（ｓｕｃｈ ａｓ）」）の使用は、本発明をより良く示すことを意図しているに過ぎず、他の方法で特許請求される本発明の範囲に限定をもたらさない。本明細書中のいかなる言語も、本発明の実施に不可欠な任意の非請求の要素を示すものとして解釈されるべきではない。

「約」という用語は、所与の値または範囲の１０％以内、好ましくは５％以内、より好ましくは１％以内を指す。あるいは、「約」という用語は、当業者によって考慮される場合、平均の許容できる標準誤差内を指す。

実施例１ ｈｍＡｂの生成。
末梢血形質細胞（ＣＤ１９＋ＩｇＤ－ＣＤ３８＋ＣＤ２７＋＋）を、２０１４～２０１５年の季節性不活化四価インフルエンザワクチンで免疫化した約７日後に、対象から単一細胞を選別した。単一細胞ＰＣＲを使用して、免疫グロブリン重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶｋまたはＶｌ）可変領域を配列決定した。Ｌｉａｏ ｅｔ ａｌ．Ｊ Ｖｉｒｏｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ．２００９ Ｊｕｎ；１５８（１－２）：１７１－９（ＰＭＣ２８０５１８８）に記載される免疫グロブリン発現カセットプロセスおよびＫｅｖｉｎ Ｓａｕｎｄｅｒｓ博士（デューク大学）によって得られた対応するプラスミドを用いて、重鎖および軽鎖可変領域を、これらの単一細胞選別形質芽細胞（ｐｌａｓｍａｂｌａｓｔｓ）から発現させた。免疫グロブリンを、それぞれＨ３タンパク質およびＮ２タンパク質およびＨ３Ｎ２ウイルスの結合および中和についてスクリーニングした。次いで、最大の幅および活性を有する免疫グロブリン重鎖と軽鎖との対を、完全なＩｇＧ１ヒトモノクローナル抗体としてクローニングし、それらの遺伝子使用を表１に詳細に示す。

実施例２ ｈｍＡｂのインビトロ活性。
５つのｈｍＡｂを、様々なＨＡおよびＮＡタンパク質に結合するためのＥＬＩＳＡによって特性評価した（図１）。１０９２Ｃ４、１０９２Ｅ４、および１０８６Ｇ８ ｈｍＡｂは、Ｈ３タンパク質およびＨ７タンパク質に対する広範な反応性を有する。それらは、Ｈ１タンパク質に対して最小限の反応性を有する。１１２２Ａ１１および１１２２Ｂ９は、Ｎ１タンパク質に対する反応性を有さないＮ２タンパク質に対する広範な反応性を有する。ｈｍＡｂは、広範囲のＨ３Ｎ２インフルエンザウイルスに感染した細胞を認識する（図２）。ｈｍＡｂを、広範囲のＨ３Ｎ２インフルエンザウイルスを中和するそれらの能力について試験した（表２）。

実施例３ ｈｍＡｂのインビボ活性。
Ｈ３およびＮ２ ｈｍＡｂの防御活性を評価するために、マウスは、Ｈ３Ｎ２ Ｘ３１インフルエンザウイルスの致死的鼻腔内チャレンジ用量（１０ＭＬＤ５０）の前に、２０ｍｇ／ｋｇの指示されたｈｍＡｂを受けた。ＰＢＳまたはアイソタイプ対照ｈｍＡｂで処置した全てのマウスは、重度の体重減少を有し、７日以内に感染症で死んだ（図３ＡおよびＢ）。１０９２Ｅ４ ｈｍＡｂで処置したすべてのマウスは、体重を維持し、感染症を切り抜けて生存した。１０８６Ｇ８、１０９２Ｂ６、または１１２２Ａ１１で処置したマウスの８０％は感染症を切り抜け、それらの体重を維持した。生存率の増加と一致して、Ｈ３またはＮ２ ｈｍＡｂで処置したマウスは、感染後（ｐｉ）２日目および４日目に肺におけるウイルス力価の有意な低下を有し、これには、１１２２Ａ１１ ｈｍＡｂで処置したマウスのいずれにも、ｄ４で検出可能なウイルスが存在しなかったことが含まれた（図３Ｃ）。

１０９２Ｅ４Ｈ３特異的ｈｍＡｂおよび１１２２Ａ１１Ｎ２特異的ｈｍＡｂの優れた防御活性を実証し、次に、本発明者らは、抗体の治療活性を評価した。Ｈ３Ｎ２ Ｘ３１インフルエンザウイルスの致死量（１０ＭＬＤ５０）でマウスをチャレンジし、次いで感染後２４時間、１または１０ｍｇ／ｋｇのｈｍＡｂで処置した。ＰＢＳまたはアイソタイプ対照ｈｍＡｂで処置した全てのマウスは、重度の体重減少を有し、６日以内に感染症で死んだ（図４Ａおよび４Ｂ）。１０ｍｇ／ｋｇの１０９２Ｅ４内で処置しすべてのマウスは、感染症を切り抜けて生存し、感染後にＤ４で肺に検出可能なウイルスを有さなかった（図４Ｃ）。１ｍｇ／ｋｇの１１２２Ａ１１による処置は、４０％の生存率を付与した。これらの結果は全体的に、１０９２Ｅ４および１１２２Ａ１１がインビボでＨ３Ｎ２インフルエンザウイルスに対する強力な防御活性および治療活性の両方を有することを実証している。

好ましい実施形態の前述の実施例および説明は、特許請求の範囲によって定義される本発明を限定するものではなく、例示するものとして理解されるべきである。容易に理解されるように、上記の特徴の多数の変形および組み合わせは、特許請求の範囲に記載される本発明から逸脱することなく利用され得る。そのような変形例は、本発明の範囲から逸脱したものとは見なされず、すべてのそのような変形例は、以下の特許請求の範囲の範囲内に含まれることが意図される。本明細書で引用される全ての参照は、その全体が、参照により組み込まれる。

Claims (22)

1. インフルエンザウイルスのヘマグルチニン（ＨＡ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
   （ｉ）配列番号１～３、配列番号７～９、ならびに配列番号７、８、および１２からなる群から選択されるＨＣＤＲセットのそれぞれの配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、
   （ｉｉ）配列番号４～６ならびに配列番号１０、５、および１１からなる群から選択されるＬＣＤＲセットのそれぞれの配列を含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
2. 前記重鎖可変領域が、配列番号２６、３０、および３４からなる群から選択される配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２８、３２、および３６からなる群から選択される配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
3. 前記重鎖可変領域が、配列番号１～３の配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号４～６の配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
4. 前記重鎖可変領域が、配列番号７、８、および９の配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１０、５、および１１の配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
5. 前記重鎖可変領域が、配列番号７、８、および１２の配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１０、５、および１１の配列を含む、請求項１に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
6. インフルエンザウイルスのノイラミニダーゼ（ＮＡ）に特異的に結合する単離された抗体またはその抗原結合断片であって、
   （ｉ）配列番号１３～１５および配列番号１９～２１からなる群から選択されるＨＣＤＲセットのそれぞれの配列を含む、ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２、およびＨＣＤＲ３を含む重鎖可変領域と、
   （ｉｉ）配列番号１６～１８および配列番号２２～２４からなる群から選択されるＬＣＤＲセットのそれぞれの配列を含む、ＬＣＤＲ１、ＬＣＤＲ２、およびＬＣＤＲ３を含む軽鎖可変領域と、を含む、単離された抗体またはその抗原結合断片。
7. 前記重鎖可変領域が、配列番号３８および４２からなる群から選択される配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号４０および４４からなる群から選択される配列を含む、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
8. 前記重鎖可変領域が、配列番号１３～１５の配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号１６～１８の配列を含む、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
9. 前記重鎖可変領域が、配列番号１９～２１の配列を含み、前記軽鎖可変領域が、配列番号２２～２４の配列を含む、請求項６に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
10. 変異型Ｆｃ定常領域をさらに含む、請求項１～９のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
11. 前記抗体が、キメラ抗体、ヒト化抗体、またはヒト抗体である、請求項１～１０のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
12. 前記抗体または断片が、治療剤、ポリマー、検出可能な標識、または酵素にコンジュゲートされている、請求項１～１１のいずれか一項に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
13. 前記ポリマーが、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である、請求項１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
14. 前記治療剤が、細胞傷害性剤である、請求項１２に記載の単離された抗体またはその抗原結合断片。
15. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合部分のＣＤＲ、重鎖軽鎖可変領域、または軽鎖可変領域をコードする、単離された核酸。
16. 請求項１５に記載の核酸を含む、発現ベクター。
17. 請求項１５に記載の核酸または請求項１６に記載の発現ベクターを含む、培養宿主細胞。
18. 抗体、またはその抗原結合部分を調製する方法であって、
    請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体、またはその抗原結合部分のＣＤＲ、重鎖可変領域、または軽鎖可変領域をコードする核酸配列を含むベクターを含む培養宿主細胞を得ることと、
    前記ベクターによってコードされるポリペプチドの発現を可能にし、抗体またはその断片を組み立てる条件下で、前記細胞を培地中で培養することと、
    培養された前記細胞または前記細胞の前記培地から前記抗体または断片を精製することと、を含む、方法。
19. 請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体またはその抗原結合断片と、薬学的に許容される担体と、を含む、薬学的組成物。
20. 対象においてインフルエンザウイルスを中和する方法であって、前記対象に、治療有効量の請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または治療有効量の請求項１９に記載の組成物を投与することを含む、方法。
21. インフルエンザウイルス感染症を治療する方法であって、それを必要とする対象に、治療有効量の請求項１～１４のいずれか一項に記載の抗体もしくはその抗原結合断片、または治療有効量の請求項１９に記載の組成物を投与することを含む、方法。
22. 前記対象に、治療有効量の第２の抗体またはその抗原結合断片を投与することをさらに含む、請求項２０～２１のいずれか一項に記載の方法。

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