JP2023505169A - Ｂ型肝炎感染の治療における使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質 - Google Patents

Ｂ型肝炎感染の治療における使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質 Download PDF

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Abstract

本発明は、療法における使用のための、より詳しくは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、新規なインターフェロン会合抗原結合タンパク質並びにこのようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸及び発現ベクターに関する。本発明は又、療法における使用のための、より詳しくは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、このようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質又は核酸又は発現ベクターを含む医薬組成物に関する。本発明は更に、このようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質又は核酸又は発現ベクター又は医薬組成物を使用する治療方法を提供する。前記新規なインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、例えば、それらがウイルス複製を効果的に混乱させ、それによりＨＢＶウイルス量を低減するという点で、現在の技術水準に対して有益な改善をもたらす。【選択図】図１

Description

本発明は、療法における使用のための、より詳しくは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、新規なインターフェロン会合抗原結合タンパク質ならびにこのようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸及び発現ベクターに関する。本発明は又、療法における使用のための、より詳しくは、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、インターフェロン会合抗原結合タンパク質又は核酸又は発現ベクターを含む医薬組成物に関する。本発明は更に、このようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質又は核酸又は発現ベクター又は医薬組成物を使用する治療方法を提供する。前記新規なインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、例えば、それらがウイルス複製を効果的に混乱させ、それによりＨＢＶウイルス量を低減するという点で、現在の技術水準に対して有益な改善をもたらす。
ＨＢＶは世界で３億人以上に感染し、肝疾患及び肝癌の一般的な原因である（Ｌｉａｎｇ（２００９）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ４９：Ｓ１３）。ＨＢＶは、レトロウイルスに似た珍しい特徴を備えた小さなＤＮＡウイルスであり、ＲＮＡ中間体（プレゲノムＲＮＡ、ｐｇＲＮＡ）を介して複製し、宿主ゲノムに組み込まれ得る。ＨＢＶ複製サイクルのユニークな特徴は、感染細胞で存続するというウイルスの明確な能力を与える。ＨＢＶ感染は、急性（劇症肝不全を含む）から慢性肝炎、肝硬変及び肝細胞癌に至るまで、広範囲の肝疾患をもたらす。急性ＨＢＶ感染は、無症候性であるか又は症候性急性肝炎を呈する可能性がある。ＨＢＶに感染した小児の９０～９５％と成人の５～１０％はウイルスを除去できず、慢性感染となる。多くの慢性感染者は軽度の肝疾患を患っており、長期的な罹患率又は死亡率はほとんどゼロかゼロである。その他の慢性ＨＢＶ感染患者は活動性疾患を発症し、肝硬変及び肝臓癌に進行することがある。これらの患者は注意深い監視を必要とし、治療的介入が妥当である。
細胞内のＨＢＶ感染を調節することによってＨＢＶ感染を治療するための新規な方法が必要である。特に、ウイルス複製を効果的に混乱させ、ＨＢＶ感染細胞のＨＢＶウイルス量を低減し、ＨＢＶ感染細胞で完全閉環ＨＢＶ ＤＮＡの転写を低減し、及び／又はＨＢＶ感染細胞でプレゲノムＨＢＶ ＲＮＡの量を低減する方法細胞が必要である。
本発明は、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、（Ｉ）アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及び（ＩＩ）インターフェロン（ＩＦＮ）又はその機能的フラグメントを含むインターフェロン会合抗原結合タンパク質に関する。
本発明のこの態様によれば、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号５６と少なくとも９０％同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；並びに（ｂ）配列番号５２と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメントを含み得る。或いは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号５６と同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；並びに（ｂ）配列番号５２と同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメントを含み得る。
一実施形態によれば、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号５１に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖可変領域ＶL；及び／又は配列番号５５に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖可変領域ＶHを含む。
別の実施形態によれば、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；並びに／又は配列番号６、配列番号９、配列番号４９及び配列番号４８からなる群から選択される配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
更なる実施形態によれば、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、Ｉ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮ及びＩＩＩ型ＩＦＮ、又はその機能的フラグメントからなる群から選択され得る。好ましくは、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα若しくはＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである。
別の実施形態によれば、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα２ａ、又はその機能的フラグメントである。好ましい実施形態によれば、ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む。
別の実施形態によれば、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである。好ましい実施形態では、ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む。
別の実施形態によれば、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体の軽鎖又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに、好ましくは、Ｃ末端に融合される。
更なる実施形態によれば、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体の重鎖又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに、好ましくは、Ｃ末端に融合される。
別の実施形態によれば、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントとＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、リンカーを介して互いに融合される。好ましい実施形態では、リンカーは、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列を含む。
別の実施形態によれば、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、表９に開示される配列の組合せのうち１つを含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである。
別の実施形態によれば、使用は、インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするＲＮＡ若しくはＤＮＡ配列、又はインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするベクター若しくはベクター系を用いた遺伝子送達の手段によって、それを必要とする対象にインターフェロン会合抗原結合タンパク質を投与することを含む。
更に別の実施形態によれば、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、医薬組成物中に含まれる。
図１：この模式図は、例示的インターフェロン会合抗原結合タンパク質形式を示す。インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、インターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである。ＩＦＮは、抗体又はその抗原結合フラグメント上の種々の位置：軽鎖（ＬＣ）又は重鎖（ＨＣ）のＮ末端又はＣ末端部分にリンカーを介して会合される。特に、ＩＦＮは、Ｉ型、ＩＩ型及びＩＩＩ型インターフェロンファミリーから選択される。 図２Ａは、ｐＣＭＶプロモーターの制御下に配列番号３２をコードするｐｃＤＮＡ３．１プラスミドの例示的マップを示す。配列番号３２（配列番号７８）をコードする核酸配列も右に示す。斜体：シグナルペプチド配列；黒色：ＣＰ８７０，８９３重鎖コード配列；下線：ＨＬリンカーコード配列；太字：ＩＦＮβコード配列。 図２Ｂは、重鎖又は軽鎖のいずれかにＩＦＮα又はＩＦＮβが融合された数種のＩＦＡの還元条件でのＳＤＳ ＰＡＧＥの例を示す。親ＣＰ８７０，８９３移動も左に示す。 図３Ａ－３Ｂは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞におけるＣＤ４０介在ＮＦκＢ経路リポーターアッセイの活性化に対する、ＩＦＮβ融合を有する複数のＩＦＡ分子の用量依存的効果をグラフで示す。図３Ａは、重鎖（ＨＣ）のＣ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＡに対する抗ＣＤ４０活性の例を示す。 図３Ｂは、ＬＣ（ＩＦＡ３４）又はＨＣ（ＩＦＡ３６）のＮ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＡ及びＣ末端部分に対応する融合を有するＩＦＡ（ＩＦＡ３５及びＩＦＡ３７）に対する抗ＣＤ４０活性の例を示す。後者の群のＩＦＡの精製収率は極めて低くかったため、それらの活性を試験するために、ＨＥＫトランスフェクト細胞の上清を使用し、連続希釈してＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞に対する抗ＣＤ４０活性を評価した。 図３Ｃ－３Ｄは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ＩＦＮ－α／β細胞におけるＩ型ＩＦＮ経路の活性化に対する、ＩＦＮβ融合を有する複数のＩＦＡ分子の用量依存的効果をグラフで示す。図３Ｃは、ＨＣのＣ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＡに対するＩＦＮ活性の例を示す。 図３Ｄは、ＬＣ（ＩＦＡ３４）又はＨＣ（ＩＦＡ３６）のＮ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＡ及びＣ末端部分に対応する融合を有するＩＦＡ（ＩＦＡ３５及びＩＦＡ３７）に対するＩＦＮ活性の例を示す。図３Ｂと同じＨＥＫトランスフェクト細胞の上清を使用し、ＩＦＮ活性を評価するために連続希釈した。親抗体ＣＰ８７０，８９３を陰性対照として使用し、組換えヒトＩＦＮβを陽性対照として使用した。ＮＳ：無刺激。 図４Ａは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞におけるＣＤ４０介在ＮＦκＢ経路リポーターアッセイの活性化に対する、ＩＦＮα融合を有する複数のＩＦＡ分子の用量効果をグラフで示す。 図４Ｂは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ＩＦＮ－α／β細胞におけるＩ型ＩＦＮ介在経路の活性化に対する、ＩＦＮα融合を有する複数のＩＦＡ分子の用量効果をグラフで示す。ペガシスの活性を右下の角の挿入図に示す。 図４Ｃは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞におけるＣＤ４０介在ＮＦκＢ経路リポーターアッセイの活性化に対する、ＨＣ（ＩＦＡ３８）又はＬＣ（ＩＦＡ３９）上にＩＦＮα融合及びＨＬリンカーを有するＩＦＡ分子の効果をグラフで示す。 図４Ｄは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ＩＦＮα／β細胞におけるＩ型ＩＦＮ経路の活性化に対するＩＦＡ３８及びＩＦＡ３９の効果をグラフで示す。 図５は、ＨＢＶに感染した初代肝細胞からのＨＢｅＡｇ放出に対するＩＦＮβに基づくＩＦＡの用量依存的効果を示す。ＩＦＡ１、ＩＦＡ１２：それぞれＨＬ又はＲＬリンカーを介したＬＣのＣ末端へのＩＦＮβの融合。ＩＦＡ２及びＩＦＡ１３：それぞれＨＬ又はＲＬリンカーを介したＬＣのＣ末端へのＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓの融合。 図６Ａは、ＨＢＶに感染した初代ヒト肝細胞からのＨＢｅＡｇ放出に対するＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６及びＩＦＡ２７の用量依存的効果を示す。 図６Ｂは、ＨＢＶに感染した初代ヒト肝細胞からのＨＢｅＡｇ放出に対するＩＦＡ２８、ＩＦＡ２９及びＩＦＡ３０の用量依存的効果を示す。 図６Ｃは、ＨＢＶ感染ＰＨＨに対するＨＬリンカー（ＩＦＡ３８及びＩＦＡ３９）を有するＩＦＡの用量応答抗ウイルス活性（ＨＢｅＡｇ放出）を示す。 図６Ｄ－６Ｈは、ＨＢＶに感染した初代ヒト肝細に対する、ペプチドリンカーを介してＩＦＮαに融合された４つのＩＦＡ分子の用量応答抗ウイルス活性を示す。図６Ｄ：研究デザインを示す漫画。 図６Ｅ：ペガシスと比較したＨＢｅＡｇ放出に対するＩＦＡの効果。 図６Ｆ：ペガシスと比較したＨＢｓＡｇ放出に対するＩＦＡの効果。 図６Ｇ：ペガシスと比較したｐｇＲＮＡレベルに対するＩＦＡの効果。 図６Ｈ：ペガシスと比較したＣＸＣＬ１０放出に対するＩＦＡの効果。 ヒト全血細胞（ＷＢＣ）のｉｎ ｖｉｔｒｏサイトカイン放出アッセイからの結果を示す：４人の健康なボランティアドナーからのＷＢＣの刺激の後に得られたデータの例。ＷＢＣは、無刺激（ＮＳ）、ＬＰＳ処理（１０ｎｇ／ｍＬ）又はＩＦＡ１処理（１μｇ／ｍＬ）２４時間であった。上清を採取し、ヒトサイトカイン用のＭＳＤ ｕ－Ｐｌｅｘキットを使用したサイトカイン放出定量を行った。結果は、各ドナーからの２回の独立した刺激の平均を示す。ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＩＬ６、ＩＬ１β及びＴＮＦαのプロファイルを示す。 ［表１１ａ～ｂ］これらの表は、健康なボランティアから得た全血細胞（ＷＢＣ）のｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激後に得られたデータをまとめたものである。各ＩＦＡを４人の異なるドナーからのＷＢＣで試験した。ＷＢＣは、無刺激（ＮＴ）、２４時間のＬＰＳ処理（１０ｎｇ／ｍＬ）又はＩＦＡ処理（１μｇ／ｍＬ）とした。上清を採取し、ヒトサイトカイン用のＭＳＤ ｕ－Ｐｌｅｘキットを使用してサイトカイン放出定量を行った。結果は、各ドナーからの２回の独立した刺激の平均を示し、ｐｇ／ｍＬで表す（ｎｄ：検出されず）。 図８：マウスに対する０．５ｍｇ／ｋｇ（ＩＦＡ）又は０．３ｍｇ／ｋｇ（ペガシス）静脈内ボーラス注射後のＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２８、ＩＦＡ２９、及びＩＦＡ３０の薬物動態プロファイル。データは、片対数スケールで平均＋／－ＳＤとして表した。サンプルは投与後１日までに採取した。定量法のための二次抗体として抗ＩＦＮαを使用するＥＬＩＳＡアッセイを、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２９及びＩＦＡ３０（図８Ａ）並びにＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６及びＩＦＡ２８（図８Ｂ）に使用した。定量法のための二次抗体として抗ＩｇＧ２を使用するＥＬＩＳＡアッセイを、ＩＦＡ２５及びＩＦＡ２７（図８Ｃ）に使用した。図８Ｄ：ペガシス定量は、ヒトＩＦＮα適合抗体対を用いて行った。マークライン（ＬＬＯＱ）は、ペガシスアッセイの検出限界を表す。 ［表１２Ａ］表１２Ａ：ＰＫレポートサマリー：雄ＣＤ１スイスマウスへの０．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内投与後のＣＰ８７０，８９３、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２９及びＩＦＡ３０のＰＫパラメーター。ＣＰ８７０，８９３のＰＫパラメーターは７日の試験で調べ、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２９及びＩＦＡ３０のＰＫパラメーターは１０日の試験で調べた（ＩＦＡ２７の定量は、２つの異なるＥＬＩＳＡアプローチを使用して行った）。 ［表１２Ｂ］表１２Ｂ：ＰＫレポートサマリー：雄ＣＤ１スイスマウスへの０．５ｍｇ／ｋｇの単回静脈内ボーラス投与後のＣＰ８７０，８９３、ペガシス及び３つの異なるＩＦＡ（ＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６及びＩＦＡ２８）のＰＫパラメーター。ＣＰ８７０，８９３及びＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６、ＩＦＡ２８及びペガシスのＰＫパラメーターは２１日の試験で調べた（ＩＦＡ２５の定量は、２つの異なるＥＬＩＳＡアプローチを使用して行った）。 図９Ａは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞における、親抗ＣＤ４０抗体と比較した、Ｆｃ領域を含まないＩＦＡ５０及びＩＦＡ５１の用量依存的ＣＤ４０アゴニスト活性を示す。 図９Ｂは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＩＦＮ－α／β細胞におけるＩＦＡ５０及びＩＦＡ５１の用量依存的ＩＦＮα活性を示す。 図９Ｃ：ＨＢＶ感染ＰＨＨのＨＢｅＡｇ放出に対するＩＦＡ５０及びＩＦＡ５１の効果。 図１０Ａは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌリポーター細胞における、親抗ＣＤ４０抗体と比較した、ＩＦＮεに基づくＩＦＡ４９の用量依存的ＣＤ４０アゴニスト活性を示す。ＩＦＡ４９は、ペプチドリンカーを介したＨＣへのＩＦＮεの融合に相当する。 図１０Ｂは、Ｉ型インターフェロンにより活性されるリポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＩＦＮ－α／βリポーター細胞に対するＩＦＡ４９の用量依存的ＩＦＮ活性を示す。 図１０Ｃ：ＨＢＶ感染ＰＨＨからのＨｂｅＡｇ放出に対するＩＦＡ４９の効果。 図１１Ａは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌリポーター細胞における、親抗ＣＤ４０抗体と比較した、ＩＦＮωに基づくＩＦＡ４６の用量依存的ＣＤ４０アゴニスト活性を示す。ＩＦＡ４６は、ペプチドリンカーを介したＬＣへのＩＦＮωの融合に相当する。 図１１Ｂは、Ｉ型インターフェロンにより活性されるリポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＩＦＮ－α／βリポーター細胞に対する用量依存的ＩＦＮ活性を示す。 図１１Ｃ：ＨＢＶ感染ＰＨＨからのＨｂｅＡｇ放出に対するＩＦＡ４６の効果。 図１２Ａは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌリポーター細胞における、親抗ＣＤ４０抗体と比較した、ＩＦＮγに基づくＩＦＡ（ＩＦＡ４２及びＩＦＡ４３）の用量依存的ＣＤ４０アゴニスト活性を示す。ＩＦＡ４２は、ペプチドリンカーを介したＬＣへのＩＦＮγの融合に相当し、ＩＦＡ４３は、ペプチドリンカーを介したＨＣへのＩＦＮγの融合に相当する。 図１２Ｂは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ｈＩＦＮγ細胞におけるＩＦＡ４２及びＩＦＡ４３の用量依存的ＩＦＮ活性を示す。 図１２Ｃ：ＨＢＶ感染ＰＨＨからのＨｂｅＡｇ放出に対するＩＦＡ４２及びＩＦＡ４３の効果。 図１３Ａ：ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌリポーター細胞における、親抗ＣＤ４０抗体と比較した、ＩＦＮλに基づくＩＦＡ（ＩＦＡ４４及びＩＦＡ４５）の用量依存的ＣＤ４０アゴニスト活性を示す。ＩＦＡ４４は、ペプチドリンカーを介したＬＣへのＩＦＮλの融合に相当し、ＩＦＡ４５は、ペプチドリンカーを介したＨＣへのＩＦＮλの融合に相当する。 図１３Ｂは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ｈＩＦＮλ細胞におけるＩＦＡ４４及びＩＦＡ４５の用量依存的ＩＦＮ活性を示す。 ＨＢＶ感染ＰＨＨからのＨｂｅＡｇ放出に対するＩＦＮλに基づくＩＦＡ（ＩＦＡ４４及びＩＦＡ４５）の効果。 図１４は、３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体の重鎖にＩＦＮα又はＩＦＮβが融合された数種のＩＦＡの還元条件でのＳＤＳ ＰＡＧＥの例を示す。親３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体の移動を左に示す。 ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞におけるＣＤ４０介在ＮＦκＢ経路リポーターアッセイの活性化に対する、ＩＦＮβ融合を有する複数の３Ｇ５に基づくＩＦＡ分子の用量依存的効果をグラフで示す。親抗体３Ｇ５（この図ではＣＤＸ－３Ｇ５と呼称）も同様に示す。図１５Ａは、重鎖（ＨＣ）のＣ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＡに対する抗ＣＤ４０活性の例を示す。軽鎖にＩＦＮβが融合されたＩＦＡの精製収率は極めて低くかったため、それらの活性を試験するために、ＨＥＫトランスフェクト細胞の上清を使用し、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞で抗ＣＤ４０活性を評価するために連続希釈し、活性の例を図１５Ｂに示し、３Ｇ５含有上清を対照として使用した。 図１５Ｃ―Ｄは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ＩＦＮ－α／β細胞におけるＩ型ＩＦＮ経路の活性化に対する、ＩＦＮβ融合を有する複数のＩＦＡ分子の用量依存的効果をグラフで示す。図１５Ｃは、ＨＣのＣ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＡに対するＩＦＮ活性の例を示す。 図１５Ｄは、軽鎖にＩＦＮβが融合されたＩＦＡのＩＦＮ活性を示し、これらのタンパク質の生産レベルは極めて低くかったため、図１５Ｂと同様の上清を使用して図１５Ｄに２つのＩＦＡに対する活性の例を示す。 図１６Ａは、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞におけるＣＤ４０介在ＮＦκＢ経路リポーターアッセイの活性化に対する、ＩＦＮα融合を有する４つのＩＦＡ分子の用量効果をグラフで示す。親抗体３Ｇ５（この図ではＣＤＸ－３Ｇ５と呼称）との比較を同様に示す。 図１６Ｂは、リポーターＨＥＫ－Ｂｌｕｅ－ＩＦＮ－α／β細胞におけるＩ型ＩＦＮ介在経路の活性化に対する、ＩＦＮα融合を有する複数のＩＦＡ分子の用量効果をグラフで示す。 図１７は、ＨＢＶに感染したＰＨＨからのＨＢｅＡｇ放出に対する、Ｉ型ＩＦＮに基づくＩＦＡの用量依存的効果を示す。図１７Ａは、ＨＣのＣ末端部分にＩＦＮβが融合されたＩＦＮβに基づくＩＦＡ（ＩＦＡ１０６、ＩＦＡ１０７、ＩＦＡ１０８及びＩＦＡ１０９）で得られた結果を示す。 図１７Ｂは、ＨＣのＣ末端部分にＩＦＮαが融合されたＩＦＮαに基づくＩＦＡ（ＩＦＡ１２１、ＩＦＡ１２２、ＩＦＡ１２３及びＩＦＡ１２４）で得られた結果を示す。ＮＩ－ＮＴ：非感染、非処理。ＭＯＩ：多重感染度。 図１８：ヒト全血細胞（ＷＢＣ）のｉｎ ｖｉｔｒｏサイトカイン放出アッセイ：４人の健康なボランティアドナーからのＷＢＣの刺激の後に得られたデータの例。ＷＢＣは、無処理（ＮＴ）、２４時間のＬＰＳ処理（１０ｎｇ／ｍＬ）又はＩＦＡ１０９処理（１μｇ／ｍＬ）とされた。上清を採取し、ヒトサイトカイン用のＭＳＤ ｕ－Ｐｌｅｘキットを使用してサイトカイン放出定量を行った。結果は、各ドナーからの２回の独立した刺激の平均を示す。ＣＸＣＬ１０（ＩＰ１０）、ＩＬ６、ＩＬ１β及びＴＮＦαのプロファイルを示す。 ［表１３］この表は、健康なボランティアから得られた全血細胞のｉｎ ｖｉｔｒｏ刺激の後に得られたデータをまとめたものである。ＩＦＡ１０９は、４人の異なるドナーからのＷＢＣで試験した。ＷＢＣは、無処理（ＮＴ）、２４時間ＬＰＳ処理（１０ｎｇ／ｍＬ）又はＩＦＡ１０９処理（１μｇ／ｍＬ）とした。上清を採取し、ヒトサイトカイン用のＭＳＤ ｕ－Ｐｌｅｘキットを使用してサイトカイン放出定量を行った。結果は、各ドナーからの２回の独立した刺激の平均を示し、ｐｇ／ｍＬで表す（ｎｄ：検出されず）。
本発明の前述及び他の特徴及び利点は、以下の詳細な説明を添付の図面と共に参照すればより良く理解されるであろう。
本発明は、一部には、Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）療法における、（Ｉ）アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及び（ＩＩ）インターフェロン（ＩＦＮ）又はその機能的フラグメントを含む「インターフェロン会合抗原結合タンパク質」、これらの変異体又は誘導体の使用に基づく療法の発見に基づく。前記インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＨＢＶ感染細胞においてＢ型肝炎ウイルス完全閉環ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）のプレゲノムＨＢＶ ＲＮＡ（ｐｇＲＮＡ）への転写を阻害し、ＨＢＶ感染細胞からのｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）の放出を阻害し、非感染及びＨＢＶ感染肝細胞、特に、非感染及びＨＢＶ感染初代ヒト肝細胞におけるＩＦＮ経路を相乗作用的に増強する。ＨＢＶ感染細胞、又はＨＢＶに感染した対象にインターフェロン会合抗原結合タンパク質を投与することを含むＨＢＶ療法が提供される。
本発明は、以下に定義される選択用語を参照すれば、より容易に理解できる。
本明細書において使用する場合、「ＣＤ４０」という用語は、腫瘍壊死因子受容体（ＴＮＦＲ）スーパーファミリーのメンバーである「分化抗原群４０（Ｃｌｕｓｔｅｒ ｏｆ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ ４０）」を指す。ＣＤ４０は、抗原提示細胞（例えば、Ｂ細胞、樹状細胞、単球）、造血前駆細胞、内皮細胞、平滑筋細胞、上皮細胞、並びに大部分のヒト腫瘍に見られる補助刺激タンパク質である（Ｇｒｅｗａｌ ＆ Ｆｌａｖｅｌｌ， Ａｎｎ． Ｒｅｖ． ｌｍｍｕｎｏｌ．， １９９６， １６： １１１－３５； Ｔｏｅｓ ＆ Ｓｃｈｏｅｎｂｅｒｇｅｒ， Ｓｅｍｉｎａｒｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， １９９８， １０（６）： ４４３－８）。ＴH細胞上の天然リガンドＣＤ１５４（ＣＤ４０Ｌ）のＣＤ４０への結合は抗原提示細胞を活性化し、様々な下流効果を誘導する。ＴＮＦ受容体会合因子アダプタータンパク質ＴＲＡＦ１、ＴＲＡＦ２、ＴＲＡＦ６及びＴＲＡＦ５は、ＣＤ４０と相互作用し、シグナル伝達のメディエーターとして働く。最終的に、ＣＤ４０シグナル伝達は、カノニカル及び非カノニカルの両方のＮＦ－κＢ経路を活性化する。
アゴニスト抗ＣＤ４０抗体及びこれらの抗原結合フラグメント
本明細書において使用する場合、「抗体」という用語は、ジスルフィド結合によって相互接続された２つの重（Ｈ）鎖と２つの軽（Ｌ）鎖の４つのポリペプチド鎖を含む免疫グロブリン分子、並びにこれらの多量体（例えば、ＩｇＭ）を指す。各重鎖は、重鎖可変領域（略してＶＨ又はＶH）及び重鎖定常領域（ＣＨ又はＣH）を含む。重鎖定常領域は、ＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３の３つのドメインを含む。各軽鎖は、軽鎖可変領域（略してＶＬ又はＶL）及び軽鎖定常領域（ＣＬ又はＣL）を含む。軽鎖定常領域は、１つのドメイン（ＣＬ１）を含む。ＶＨ及びＶＬ領域は更に「相補性決定領域（ＣＤＲ）」と呼ばれる超可変領域に細分することができ、これに「フレームワーク領域」（ＦＲ）と呼ばれるより保存された領域が挿入されている。各ＶＨ及びＶＬは３つのＣＤＲと４つのＦＲから構成され、アミノ末端からカルボキシ末端に向かって以下の順序で配置される：ＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、ＦＲ４。フレームワーク領域は、抗原結合領域と抗原の間の結合を促進するために適切なＣＤＲコンフォメーションを維持する助けをすることができる。
治療的に最も慣用される免疫グロブリンは、四量体糖タンパク質である免疫グロブリンＧ（又はＩｇＧ）である。天然に存在する免疫グロブリンでは、各四量体は、２つの同一のポリペプチド鎖ペアから構成され、各ペアは１つの軽鎖（約２５ｋＤａ）と１つの重鎖（約５０～７０ｋＤａ）を有する。各鎖のアミノ末端部分は、主として抗原認識を担う約１００～１１０又はそれを超えるアミノ酸の可変領域を含む。各鎖のカルボキシ末端部分は、主としてエフェクター機能を担う定常領域を定義する。免疫グロブリンは、それらの重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて種々のクラスに割り当てることができる。
重鎖はミュー（μ）、デルタ（δ）、ガンマ（γ）、アルファ（α）、及びイプシロン（ε）として分類され、抗体のアイソタイプをそれぞれＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ、及びＩｇＥとして定義する。これらのうち幾つかは更に、サブクラス又はアイソタイプ、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２に分類することができる。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有し、例えば、ＩｇＧ１及びＩｇＧ３アイソタイプは、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）活性を有する。好ましい実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、ＩｇＧクラスである。より好ましい実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１又はＩｇＧ３サブクラスである。特に好ましい実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ１サブクラスである。他のより好ましい実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２又はＩｇＧ４サブクラスである。特に好ましい実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、ＩｇＧ２サブクラスである。
ヒト軽鎖は、カッパ（κ）及びラムダ（λ）軽鎖に分類される。よって、幾つかの実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、κクラスの軽鎖を含む。他の実施形態では、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質に含まれるアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はこれらのアゴニスト抗原結合フラグメントは、λクラスの軽鎖を含む。軽鎖及び重鎖内で、可変領域及び定常領域は、約１２又はそれを超えるアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結され、重鎖は更に約１０を超えるアミノ酸の「Ｄ」領域を含む。一般に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ， Ｃｈ． ７ （Ｐａｕｌ， Ｗ．編， 第２版 Ｒａｖｅｎ Ｐｒｅｓｓ， Ｎ．Ｙ． （１９８９））を参照。
「抗体」という用語には更に、限定されるものではないが、モノクローナル抗体、二重特異性抗体、ミニボディ、ドメイン抗体、合成抗体（「抗体模倣剤」と呼ばれる場合がある）、キメラ抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、及びそれぞれこれらのフラグメントが含まれる。特に断りのない限り、「抗体」という用語は、２つの全長重鎖及び２つの全長軽鎖を含む抗体の他、これらの誘導体、変異体、抗原結合フラグメント、及び突然変異タンパク質（これらの例は以下に記載する）を含む。
本明細書において使用する場合、「アゴニストＣＤ４０抗体」又は「アゴニスト抗ＣＤ４０抗体」という用語は、ＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０シグナル伝達を媒介する抗体を指す。好ましい実施形態では、それはヒトＣＤ４０に結合する。以下に記載するように、ＣＤ４０への結合は、表面プラズモン共鳴、好ましくは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システムを使用して決定することができる。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０を発現する細胞、組織又は生物に加えた際に１以上のＣＤ４０活性を少なくとも約２０％増強させ得る。幾つかの実施形態では、抗体は、ＣＤ４０活性を少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも８５％活性化する。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体のＣＤ４０活性は、全血表面分子上方調節アッセイ又はｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイ、例えば、実施例Ｉに詳細に記載するように、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎカタログ番号：ｈｋｂ－ｃｄ４０）を使用して測定することができる。これらのリポーター細胞は、ＣＤ４０アゴニストの活性を測定するために、ヒトＣＤ４０遺伝子及びＮＦκＢ誘導性分泌胚アルカリ性ホスファターゼ（ＳＥＡＰ）構築物によるＨＥＫ２９３細胞の安定トランスフェクションによって作出された。ＣＤ４０の刺激は、ＮＦκＢの活性化及び従ってＳＥＡＰの生産をもたらし、この生産は、ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（商標）などの発色基質を使用して上清中で検出することができる。
本発明の文脈において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＣＤ４０経路及びＩＦＮ経路の両方を活性化する。特定の実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＣＤ４０経路を４００、３００、２００、１５０、１００、７０、６０、５０、４０、３０、２５、２０、又は１５ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50で活性化する。より具体的な実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＣＤ４０経路を１０～２００ｎｇ／ｍＬの範囲のＥＣ50で活性化する。更により具体的な実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＣＤ４０経路を１０～５０ｎｇ／ｍＬ、好ましくは１０～３０ｎｇ／ｍＬの範囲のＥＣ50で活性化する。
好適なアゴニスト抗ＣＤ４０抗体の例としては、限定されるものではないが、ＣＰ８７０，８９３（Ｐｆｉｚｅｒ／Ｒｏｃｈｅ）、ＳＧＮ－４０（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＡＤＣ－１０１３（Ｊａｎｓｓｅｎ／Ａｌｌｉｇａｔｏｒ ＢｉｏＳｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｃｈｉ Ｌｏｂ ７／４（サウサンプトン大学）、ダセツズマブ（Ｓｅａｔｔｌｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）、ＡＰＸ００５Ｍ（Ａｐｅｘｉｇｅｎ，Ｉｎｃ．）、３Ｇ５ （Ｃｅｌｌｄｅｘ）及びＣＤＸ－１１４０（Ｃｅｌｌｄｅｘ）が挙げられる。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＰ８７０，８９３の例示的軽鎖配列及び重鎖配列を表７に示す。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体３Ｇ５の例示的軽鎖配列及び重鎖配列を表８に示す。
本明細書において使用する場合、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体の「アゴニスト抗原結合フラグメント」という用語は、細胞においてＣＤ４０に結合してＣＤ４０シグナル伝達のアゴニストとして働く能力など、元の抗体の１以上の機能的活性を保持するアゴニスト抗ＣＤ４０抗体のフラグメントを指し、例えば、それはＣＤ４０経路シグナル伝達を媒介する。このようなフラグメントは、ＣＤ４０との結合をめぐって無傷抗体と競合し得る。
アゴニスト抗ＣＤ４０抗体のアゴニスト抗原結合フラグメントは、組換えＤＮＡ技術によって作製することができるか、又は抗ＣＤ４０抗体の酵素的若しくは化学的切断によって作製することができる。アゴニスト抗原結合フラグメントとしては、限定されるものではないが、Ｆａｂフラグメント、ダイアボディ（短すぎて同じ鎖上の２つのドメイン間では対合できない短いペプチドリンカーを介して接続された軽鎖可変ドメインと同じポリペプチド上の重鎖可変ドメイン）、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）2フラグメント、Ｆｖフラグメント、ドメイン抗体及び一本鎖抗体が挙げられ、限定されるものではないが、ヒト、マウス、ラット、ラクダ科動物又はウサギを含むいずれの哺乳動物起源に由来してもよい。
「可変領域」又は「可変ドメイン」という用語は、一般に重鎖ではアミノ末端の１２０～１３０アミノ酸、軽鎖では約１００～１１０のアミノ末端アミノ酸を含む、抗体の軽鎖及び／又は重鎖の部分を指す。種々の抗体の可変領域は、同じ種又は同じクラスに由来する抗体であってもアミノ酸配列が大きく異なる。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＰ８７０，８９３の例示的ＶL及びＶHドメイン配列を表１に示す。抗体の可変領域は一般に、それがＣＤＲを含むことから、特定の抗体の、その標的に対する特異性を決定する。表１は又、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＰ８７０，８９３の例示的ＣＤＲ配列も示す。
Figure 2023505169000002
ＣＤＲの描写及び抗体の結合部位を含む残基の特定は、抗体の構造を解くこと、及び／又は抗体－リガンド複合体の構造を解くことによって達成され得る。これは、Ｘ線結晶学など、当業者に公知の様々な技術のいずれかによって達成することができる。ＣＤＲ領域を特定又は概算のために、様々な分析方法を使用することができる。このような方法の例としては、限定されるものではないが、Ｋａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義ｃｏｎｔａｃｔ定義が挙げられる。
Ｋａｂａｔ定義は、抗体の残基に番号を付けるための標準であり、一般に、ＣＤＲ領域を識別するために使用される。例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ ＆ Ｗｕ， Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．， ２８： ２１４－８ （２０００）参照。Ｃｈｏｃｈｉａ定義はＫａｂａｔ定義と類似しているが、Ｃｈｏｃｈｉａ定義では、特定の構造ループ領域の位置を考慮する。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １９６： ９０１－１７ （１９８６）； Ｃｈｏｔｈｉａ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３４２： ８７７－８３ （１９８９）参照。ＡｂＭ定義では、抗体構造をモデル化するＯｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｇｒｏｕｐによって作成されたコンピュータープログラムの統合スイートを使用する。例えば、Ｍａｒｔｉｎ ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ Ｎａｔｌ Ａｃａｄ Ｓｃｉ （ＵＳＡ）， ８６：９２６８－９２７２ （１９８９）； “ＡｂＭTM， Ａ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｐｒｏｇｒａｍ ｆｏｒ Ｍｏｄｅｌｉｎｇ Ｖａｒｉａｂｌｅ Ｒｅｇｉｏｎｓ ｏｆ Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，” Ｏｘｆｏｒｄ， ＵＫ； Ｏｘｆｏｒｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ， Ｌｔｄ．参照。ＡｂＭ定義では、既知のデータベースとＳａｍｕｄｒａｌａ ｅｔ ａｌ．， “Ａｂ Ｉｎｉｔｉｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｐｒｅｄｉｃｔｉｏｎ Ｕｓｉｎｇ ａ Ｃｏｍｂｉｎｅｄ Ｈｉｅｒａｒｃｈｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ，”によりＰＲＯＴＥＩＮＳ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ， Ｆｕｎｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｕｐｐｌ．， ３：１９４－１９８ （１９９９）に記載されているものなどのａｂ ｉｎｉｔｉｏ法を使用して一次配列から抗体の三次元構造をモデル化する。ｃｏｎｔａｃｔ定義は、利用可能な複雑な結晶構造の分析に基づく。ＭａｃＣａｌｌｕｍ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， ５：７３２－４５ （１９９６）参照。
特定の実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖及び重鎖可変領域の相補性決定領域（ＣＤＲ）は、同じ、又は別の種のフレームワーク領域（ＦＲ）にグラフトすることができる。特定の実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖及び重鎖可変領域のＣＤＲは、コンセンサスヒトＦＲにグラフトすることができる。コンセンサスヒトＦＲを作出するために、特定の実施形態では、数種のヒト重鎖又は軽鎖アミノ酸配列のＦＲをアラインしてコンセンサスアミノ酸配列を特定する。特定の実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖又は軽鎖のＦＲを、異なる重鎖又は軽鎖のＦＲで置換する。特定の実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖及び軽鎖のＦＲの希少アミノ酸は置換せず、残りのＦＲアミノ酸を置換する。希少アミノ酸は、ＦＲには通常見られない位置にある特定のアミノ酸である。特定の実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントからグラフトされた可変領域は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの定常領域とは異なる定常領域と共に使用することができる。特定の実施形態では、グラフトされた可変領域は、一本鎖Ｆｖ抗体の一部である。ＣＤＲグラフティングは、例えば、米国特許第６，１８０，３７０号、同第６，０５４，２９７号、同第５，６９３，７６２号、同第５，８５９，２０５号、同第５，６９３，７６１号、同第５，５６５，３３２号、同第５，５８５，０８９号、及び５，５３０，１０１、及びＪｏｎｅｓ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３２１： ５２２－５２５ （１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３３２： ３２３－３２７ （１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ， ２３９：１５３４－１５３６ （１９８８）、Ｗｉｎｔｅｒ， ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔｓ．， ４３０：９２－９４ （１９９８）に記載されており、これらは目的を問わず本明細書の一部として援用される。
「Ｆｃ」領域は一般に、抗体のＣH２及びＣH３ドメインを含む２つの重鎖フラグメントを含む。これら２つの重鎖フラグメントは、２つ以上のジスルフィド結合及びＣH３ドメインの疎水性相互作用によって共に保持されている。
「Ｆａｂフラグメント」は、１つの全長軽鎖並びに１つの重鎖のＣH１及び可変領域（ＶH及びＣH１領域の組合せは本明細書では「ｆａｂ領域重鎖」と呼称する）を含む。
「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖、並びに１つの重鎖の、ＶＨドメイン及びＣH１ドメイン、又、ＣH１ドメインとＣH２ドメインの間の領域を含む部分を含み、これにより、鎖内ジスルフィド結合が２つのＦａｂ’フラグメントの２つの重鎖の間で形成されてＦ（ａｂ’）2分子を形成することができる。
「Ｆ（ａｂ’）2フラグメント」は、２つの軽鎖及びＣH１ドメインとＣH２ドメインの間の定常領域の一部を含む２つの重鎖を含み、これにより、鎖内ジスルフィド結合が２つの重鎖の間で形成される。従って、Ｆ（ａｂ’）2フラグメントは、２つの重鎖の間のジスルフィド結合によって共に保持される２つのＦａｂ’フラグメントから構成される。
「Ｆｖ領域」は、重鎖及び軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠いている。
「一本鎖抗体」は、重鎖可変領域と軽鎖可変領域がフレキシブルリンカーによって接続されて単一のポリペプチド鎖を形成し、これが抗原結合領域を形成しているＦｖ分子である。一本鎖抗体は、国際特許出願公開第８８／０１６４９及び米国特許第４，９４６，７７８号及び同第５，２６０，２０３号に詳細に述べられており、これらの開示は本明細書の一部として援用される。
「ドメイン抗体」は、重鎖の可変領域又は軽鎖の可変領域のみを含む免疫学上機能的な免疫グロブリンフラグメントである。場合によっては、２つ以上のＶH領域がペプチドリンカーによって共有結合的に連結されて二価ドメイン抗体を形成している。二価ドメイン抗体の２つのＶH領域は、同じ又は異なる抗原を標的とすることができる。
抗体又は抗原結合タンパク質、例えば、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、好ましくは、その標的抗原に解離定数（Ｋd）≦１０-7Ｍで結合する。抗体又は抗原結合タンパク質は、Ｋd≦５×１０-9Ｍの場合に「高い親和性」で、又、Ｋd≦５×１０-10Ｍの場合に「極めて高い親和性」でその抗原に結合する。より好ましくは、抗体又は抗原結合タンパク質は、Ｋd≦１０-9Ｍを有する。幾つかの実施形態では、解離速度は、＜１×１０-5である。他の実施形態では、抗体又は抗原結合タンパク質は、ヒトＣＤ４０に約１０-9Ｍ～１０-13ＭのＫdで結合し、更に別の実施形態では、抗体又は抗原結合タンパク質は、Ｋd≦５×１０-10で結合する。当業者により認識されるように、幾つかの実施形態では、ありとあらゆる抗原結合フラグメントがＣＤ４０に結合し得る。好ましくは、前記定数は、表面プラズモン共鳴を使用して、より好ましくは、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システムを使用して決定される。
「表面プラズモン共鳴」という用語は、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）システム（ＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ， ａ ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ｃｏｍｐａｎｙ， Ｕｐｐｓａｌａ， Ｓｗｅｄｅｎ ａｎｄ Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ， Ｎ．Ｊ．）を使用したバイオセンサーマトリックス内のタンパク質濃度の変化の検出によるリアルタイム生体特異的相互作用の分析を可能とする光学現象を意味する。更に詳しい説明は、Ｊｏｎｓｓｏｎ ｅｔ ａｌ． （１９９３） Ａｎｎ． Ｂｉｏｌ． Ｃｌｉｎ． ５１：１９－２６を参照。「Ｋon」という用語は、結合タンパク質（例えば、抗体又は抗原結合タンパク質）が抗原に会合して、例えば、抗原結合タンパク質／抗原複合体を形成するための速度定数を意味する。「Ｋon」という用語、又は「結合速度」は又、本明細書において互換的に使用されるような「会合速度定数」、又は「ｋａ」を意味する。標的抗原への結合タンパク質の結合速度、又は結合タンパク質（例えば、抗体又は抗原結合タンパク質）と抗原との間の複合体形成の速度を示すこの値は又、下式：
抗体（「Ａｂ」）＋抗原（「Ａｇ」）→Ａｂ－Ａｇ
により示される。
「Ｋoff」、又は「解離速度」という用語は、例えば、当技術分野で公知のような抗原結合タンパク質／抗原複合体からの結合タンパク質（例えば、抗体又は抗原結合タンパク質）の解離に関する解離速度定数又は「解離速度定数」を意味する。この値は、結合タンパク質、例えば、抗体又は抗原結合タンパク質の、その標的抗原からの解離速度又は下式：Ａｂ＋Ａｇ←Ａｂ－Ａｇ
により示されるようなＡｂ－Ａｇ複合体の遊離抗体及び抗原への経時的分離を示す。
「Ｋd」及び「平衡解離定数」という用語は、平衡状態での力価測定において、又は解離速度定数（Ｋoff）を会合速度定数（Ｋon）で割ることにより得られる値を意味する。会合速度定数、解離速度定数、及び平衡解離定数は、抗原に対する結合タンパク質（例えば、抗体又は抗原結合タンパク質）の結合親和性を表すために使用される。会合及び解離速度定数を決定するための方法は当技術分野で周知である。蛍光に基づく技術を使用すると、高感度と平衡状態の生理学的緩衝液中のサンプルを調べる能力が提供される。ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）（生体分子相互作用分析）アッセイなどの他の実験アプローチ及び機器を使用することができる（例えば、ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ社であるＢＩＡｃｏｒｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ ＡＢ、ウプサラ、スウェーデンから入手可能な機器）。更に、Ｓａｐｉｄｙｎｅ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（Ｂｏｉｓｅ，ＩＤ）から入手可能なＫｉｎＥｘＡ（登録商標）（Ｋｉｎｅｔｉｃ Ｅｘｃｌｕｓｉｏｎ Ａｓｓａｙ）アッセイも使用可能である。
本発明による抗原結合タンパク質は、第２の標的よりも少なくとも１桁、好ましくは少なくとも２桁高い親和性で１つの標的に結合することができる。
「標的」という用語は、抗原結合タンパク質が結合し得る分子又は分子の一部を指す。特定の実施形態では、標的は、１以上のエピトープを有し得る。従って、標的は本発明の「抗原結合タンパク質」に対して「抗原」として機能し得ることが理解されるであろう。
「エピトープ」という用語は、抗体などの抗原結合タンパク質が結合し得るいずれの決定基も含む。エピトープは、ある抗原を標的とする抗原結合タンパク質が結合するその抗原の領域であり、抗原がタンパク質である場合には、抗原結合タンパク質に直接接触する特定のアミノ酸を含む。殆どの場合、エピトープはタンパク質上に存在するが、場合によっては、核酸などの他の種類の分子に存在することもある。エピトープ決定基には、アミノ酸、糖側、ホスホリル基又はスルホニル基などの分子の化学的に活性な表面群を含み得、特定の三次元構造特性、及び／又は特定の電荷特性を有し得る。一般に、特定の標的抗原に特異的な抗体は、タンパク質及び／又は高分子の複雑な混合物中の標的抗原上のエピトープを優先的／特異的に認識する。
例示的実施形態では、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質の部分（Ｉ）を形成するアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３配列と少なくとも９０％同一である３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）並びに配列番号６内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列と少なくとも９０％同一である３つの重鎖ＣＤＲを含む。アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは又、配列番号３内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３配列と同一である３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）並びに配列番号６内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列と同一である３つの重鎖ＣＤＲを含み得る。このような実施形態では、各ＣＤＲは、ＣＤＲのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、又はｃｏｎｔａｃｔ定義に従って定義され、好ましくは、各ＣＤＲは、ＫａｂａｔのＣＤＲ定義又はＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義に従って定義される。特定の実施形態では、各ＣＤＲは、Ｋａｂａｔ定義に従って定義される。他の特定の実施形態では、各ＣＤＲは、Ｃｈｏｔｈｉａ定義に従って定義される。
或いは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質の部分（Ｉ）を形成するアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号５６と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；並びに（ｂ）配列番号５２と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメントを含み得る。
幾つかの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、（ａ）配列番号５６と同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；及び（ｂ）配列番号５２と同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメントを含む。
より具体的には、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号５１に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖可変領域ＶL；及び／或いは配列番号５５に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖可変領域ＶHを含む。
本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は又、配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含むＦａｂ領域重鎖を含むアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントも含み得る。
幾つかの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；並びに／或いは配列番号６、配列番号９、配列番号４９、配列番号１２及び配列番号５０からなる群から選択される配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
より具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号６に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
より具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号４９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号１２に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号５０に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
幾つかの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号５９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；並びに／或いは配列番号６１、配列番号６３及び配列番号６５からなる群から選択される配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
より具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号５９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号６１に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号５９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号６３に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントは、配列番号５９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；及び／或いは配列番号６５に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質又はその成分の変異体及び誘導体
ポリペプチド（例えば、インターフェロン会合抗原結合タンパク質、インターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメント、抗体、抗原結合タンパク質、若しくはＩＦＮ、又はその成分）の「変異体」は、別のポリペプチド配列に対してアミノ酸配列に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超えるアミノ酸残基が挿入されている、それから欠失されている、及び／又はそれに置換されているアミノ酸配列を含む。好ましくは、変異体は、１０までの挿入、欠失及び／又は置換、より好ましくは、８までの挿入、欠失及び／又は置換を含む。より具体的には、変異体は、１０まで、より好ましくは、８までの挿入を含み得る。変異体は又、１０まで、より好ましくは、８までの欠失も含み得る。更により好ましい実施形態では、変異体は、１０までの置換、最も好ましくは、８までの置換を含む。幾つかの実施形態では、これらの置換は、以下に記載するような保存的アミノ酸置換である。
ポリヌクレオチド配列（例えば、ＲＮＡ又はＤＮＡ）の「変異体」は、別のポリヌクレオチド配列に対してポリヌクレオチド配列内に１以上の突然変異を含み、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える核酸残基が核酸配列に挿入されている、それから欠失されている、及び／又はそれに置換されている。好ましくは、変異体は、１０までの挿入、欠失及び／又は置換、より好ましくは、８までの挿入、欠失及び／又は置換を含む。より具体的には、変異体は、１０まで、より好ましくは、８までの挿入を含み得る。変異体は又、１０まで、より好ましくは、８までの欠失も含み得る。更により好ましい実施形態では、変異体は、１０までの置換、最も好ましくは、８までの置換を含む。前記１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超える突然変異は、別のアミノ酸配列と比較して変異体がコードするアミノ酸配列内に１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超えるアミノ酸交換が生じ得る（すなわち、非サイレント突然変異））。変異体は又、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ又はそれを超えるコドンが、アミノ酸交換が生じない、従って「サイレント突然変異」と呼ばれるそれらの同義物で置換されている核酸配列も含む。
「同一性」又は「相同性」という用語は、ポリペプチド又はヌクレオチド配列の変異体に関して、配列のアライン及び比較により決定されるような２つ以上のポリペプチド分子又は２つ以上の核酸分子の配列間の関係を指す。「同一性パーセント」は、比較する分子のアミノ酸又はヌクレオチドの間で同一の残基のパーセントを意味し、比較する分子の最小サイズに基づいて計算される。好ましくは、同一性は、配列の全長にわたって決定される。「少なくとも８０％同一」という表現は、特許請求される配列が参照配列と少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である実施形態を含む。「少なくとも９０％同一」という表現は、特許請求される配列が参照配列と少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である実施形態を含むと理解される。
同一性パーセントのために、アラインメントのギャップ（存在する場合）は、好ましくは、特定の数学的モデル又はコンピュータープログラム（すなわち、「アルゴリズム」）によって対処される。アラインされた核酸又はポリペプチドの同一性を計算するために使用可能な方法には、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， （Ｌｅｓｋ， Ａ． Ｍ．， ｅｄ．）， １９８８， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ； Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ ａｎｄ Ｇｅｎｏｍｅ Ｐｒｏｊｅｃｔｓ， （Ｓｍｉｔｈ， Ｄ． Ｗ．編）， １９９３， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄａｔａ， Ｐａｒｔ Ｉ， （Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ａ． Ｍ．， ａｎｄ Ｇｒｉｆｆｉｎ， Ｈ． Ｇ．編）， １９９４， Ｎｅｗ Ｊｅｒｓｅｙ： Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ；ｖｏｎ Ｈｅｉｎｊｅ， Ｇ．， １９８７， Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ； Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐｒｉｍｅｒ， （Ｇｒｉｂｓｋｏｖ， Ｍ． ａｎｄ Ｄｅｖｅｒｅｕｘ， Ｊ．編．）， １９９１， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ： Ｍ． Ｓｔｏｃｋｔｏｎ Ｐｒｅｓｓ；及びＣａｒｉｌｌｏ ｅｔ ａｌ．， １９８８， ＳＩＡＭ Ｊ． Ａｐｐｌｉｅｄ Ｍａｔｈ． ４８：１０７３に記載されているものが含まれる。
同一性パーセントを計算する際に、比較される配列は、通常、配列間の最大一致を与える方法でアラインされる。同一性パーセントを決定するために使用可能なコンピュータープログラムの一例は、ＧＡＰを含むＧＣＧプログラムパッケージである（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ ｅｔ ａｌ．， １９８４， Ｎｕｃｌ． Ａｃｉｄ Ｒｅｓ． １２：３８７；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ， Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ， Ｍａｄｉｓｏｎ， ＷＩ）。コンピューターアルゴリズムＧＡＰは、配列同一性パーセントが決定される２つのポリペプチド又はポリヌクレオチドをアラインするために使用される。配列は、それぞれのアミノ酸又はヌクレオチドを最適に一致させるようにアラインされる（アルゴリズムによって決定される「一致したスパン」）。ギャップオープニングペナルティ（平均対角線の３倍として計算される。「平均対角線」は使用されている比較マトリックスの対角線の平均であり、「対角線」は、特定の比較マトリックスにより各完全アミノ酸一致に割り当てられたスコア又は数値である。）及びギャップエクステンションペナルティ（通常はギャップオープニングペナルティの１／１０である）、並びにＰＡＭ２５０又はＢＬＯＳｕｍ６２などの比較マトリックスがアルゴリズムと共に使用される。特定の実施形態では、標準的な比較マトリックス（ＰＡＭ ２５０比較マトリックスについては、Ｄａｙｈｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， １９７８， Ａｔｌａｓ ｏｆ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ ａｎｄ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ５：３４５－３５２；ＢＬＯＳｕｍ ６２比較マトリックスについては、Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， １９９２， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． Ｕ．Ｓ．Ａ． ８９：１０９１５－１０９１９）は又、アルゴリズムにより使用される。
ＧＡＰプログラムを使用してポリペプチド配列又はヌクレオチド配列の同一性パーセントを決定する際に使用可能なパラメーターの例は、以下の通りである。
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ ｅｔ ａｌ．， １９７０， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ４８：４４３－４５３
比較マトリックス：Ｈｅｎｉｋｏｆｆ ｅｔ ａｌ．， １９９２， 前掲のＢＬＯＳｕｍ ６２
ギャップペナルティー：１２（ただし、エンドギャップのペナルティは無し）
ギャップレングスペナルティー：４
類似性閾値：０
２つのアミノ酸配列をアラインさせるための特定のアラインメントスキームは、２つの配列の短い領域のみの一致をもたらし得るが、この小さなアライン領域は、２つの全長配列の間に有意な関係がなくても極めて高い配列同一性を有する場合がある。従って、選択されたアラインメント法（ＧＡＰプログラム）は、必要であれば、標的ポリペプチドの連続するアミノ酸の少なくとも５０又は少なくとも１００、好ましくは全長にわたるアラインメントをもたらすように調整することができる。
保存的アミノ酸置換は、非天然アミノ酸残基を包含し、これらは一般に、生物系における合成ではなく化学的ペプチド合成によって組み込まれる。これらには、ペプチド模倣薬及びアミノ酸部分のその他の逆転型又は反転型が含まれる。
天然残基は、一般的な側鎖特性に基づいて複数のクラスに分類することができる：
１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；
２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；
３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；
４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；
５）鎖の配向に影響を及ぼす残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び
６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
例えば、非保存的置換は、これらのクラスのうちの１つのメンバーを別のクラスのメンバーと交換することを含み得る。このような置換された残基は、例えば、非ヒト抗体と相同であるヒト抗体の領域、又は分子の非相同領域に導入することができる。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質を変化させる際に、特定の実施形態によれば、アミノ酸のハイドロパシーインデックスを考慮することができる。各アミノ酸には、その疎水性と電荷特性に基づいてハイドロパシーインデックスが割り当てられている。それらは、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（－０．４）；スレオニン（－０．７）；セリン（－０．８）；トリプトファン（－０．９）；チロシン（－１．３）；プロリン（－１．６）；ヒスチジン（－３．２）；グルタミン酸（－３．５）；グルタミン（－３．５）；アスパラギン酸（－３．５）；アスパラギン（－３．５）；リシン（－３．９）；及びアルギニン（－４．５）である。
タンパク質に相互作用的な生物学的機能を付与する際のハイドロパシーアミノ酸インデックスの重要性は当技術分野で理解されている。Ｋｙｔｅ ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ．， １５７：１０５－１３１ （１９８２）。特定のアミノ酸は、同様のハイドロパシーインデックス又はスコアを有する他のアミノ酸の代わりに使用でき、なお同様の生物活性を保持することが知られている。ハイドロパシーインデックスに基づいて変化させる際に、特定の実施形態では、ハイドロパシーインデックスが±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。特定の実施形態では、±１以内のものが含まれ、特定の実施形態では、±０．５以内のものが含まれる。
同様のアミノ酸の置換は、親水性に基づいて効果的に行うことができることも当技術分野で理解されている。特定の実施形態では、隣接するアミノ酸の親水性によって支配される、タンパク質の最大のローカル平均親水性は、その免疫原性及び抗原性、すなわち、タンパク質の生物特性と相関する。
以下の親水性値がこれらのアミノ酸残基に割り当てられている：アルギニン（＋３．０）；リシン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０±１）；グルタミン酸（＋３．０±１）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（－０．４）；プロリン（－０．５±１）；アラニン（－０．５）；ヒスチジン（－０．５）；システイン（－１．０）；メチオニン（－１．３）；バリン（－１．５）；ロイシン（－１．８）；イソロイシン（－１．８）；チロシン（－２．３）；フェニルアラニン（－２．５）及びトリプトファン（－３．４）。同様の親水性値に基づいて変化させる際に、特定の実施形態では、親水性値が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれ、特定の実施形態では、±１以内であるものが含まれ、特定の実施形態では、±０．５以内であるものが含まれる。
例示的アミノ酸置換を表２に示す。
Figure 2023505169000003
本発明に照らして、当業者は、周知の技術を使用して、本明細書に示されるインターフェロン会合抗原結合タンパク質の適切な変異体を決定することができる。特定の実施形態では、当業者は、活性に重要であるとは考えられていない領域を標的とすることにより、活性を破壊することなく変化させ得る分子の適切な領域を特定することができる。特定の実施形態では、類似のポリペプチド間で保存されている分子の残基及び部分を特定することができる。特定の実施形態では、生物活性又は構造にとって重要であり得る領域に対しても、生物活性を破壊することなく、又はポリペプチド構造に悪影響を与えることなく、保存的アミノ酸置換を行うことができる。
更に、当業者は、活性又は構造に重要である類似のポリペプチド中の残基を特定する構造機能研究を再検証することができる。このような比較を考慮して、類似のタンパク質の活性又は構造に重要なアミノ酸残基に対応するタンパク質中のアミノ酸残基の重要性を予測することができる。当業者は、このような予測される重要なアミノ酸残基の化学的に類似したアミノ酸置換を選択することができる。
当業者は又、類似のタンパク質又はタンパク質ドメインにおけるその構造に関連する三次元構造及びアミノ酸配列を分析することができる。このような情報を考慮して、当業者は、三次元構造に関して本明細書に記載されているようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質、その抗体若しくは抗原結合フラグメント、又はインターフェロン若しくはその機能的フラグメントのアミノ酸残基のアラインメントを予測することができる。特定の実施形態では、当業者は、タンパク質の表面上にあると予測されるアミノ酸残基を根本的な変化させないように選択することができ、これはこのような残基は、他の分子との重要な相互作用に関与する可能性があるためである。更に、当業者は、各所望のアミノ酸残基に単一のアミノ酸置換を含む試験変異体を生成することができる。次に、当業者に公知の活性アッセイを使用して変異体をスクリーニングすることができる。このような変異体は、適切な変異体に関する情報を収集するために使用することができる。例えば、特定のアミノ酸残基への変更が活性の破壊、活性の望ましくない低下、又は不適切な活性をもたらしたことを発見した場合、そのような変更を伴う変異体を回避することができる。言い換えれば、そのような実験から収集された情報に基づき、当業者は、単独で又は他の突然変異と組み合わせて、更なる置換を回避すべきアミノ酸を容易に決定することができる。
特定の実施形態によれば、アミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させ、（２）酸化に対する感受性を低下させ、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させ、（４）結合親和性を変化させ、且つ／又は（５）そのようなポリペプチドに他の物理化学的若しくは機能的特性を付与若しくは変更するものである。特定の実施形態によれば、単一又は複数のアミノ酸置換（特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換）は、天然配列（特定の実施形態では、分子間接触を形成するドメインの外側のポリペプチドの部分）で行うことができる。特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換は一般に、親配列の構造的特徴を実質的に変化させないものであり得る（例えば、置換アミノ酸は、親配列で生じるヘリックスを破断する傾向がないか、又は親配列を特徴付ける他のタイプの二次構造を破壊する傾向がない）。当技術分野で認識されているポリペプチドの二次構造及び三次構造の例は、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ， Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ ａｎｄ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ （Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ編， Ｗ． Ｈ． Ｆｒｅｅｍａｎ ａｎｄ Ｃｏｍｐａｎｙ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ （１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ （Ｃ． Ｂｒａｎｄｅｎ ＆ Ｊ． Ｔｏｏｚｅ編， Ｇａｒｌａｎｄ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ， Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ， Ｎ．Ｙ． （１９９１））；及びＴｈｏｒｎｔｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ３５４：１０５ （１９９１）に記載されており、これらはそれぞれ本明細書の一部として援用される。
「誘導体」という用語は、アミノ酸（又は核酸）の挿入、欠失、又は置換以外の化学修飾を含む分子を指す。特定の実施形態では、誘導体は、限定されるものではないが、ポリマー、脂質、又は他の有機若しくは無機部分との化学結合を含む共有結合修飾を含む。特定の実施形態では、化学的に修飾されたインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、化学的に修飾されていないインターフェロン会合抗原結合タンパク質よりも長い循環半減期を有し得る。特定の実施形態では、化学的に修飾されたインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、所望の細胞、組織、及び／又は器官に対する改善された標的化能力を有し得る。幾つかの実施形態では、誘導体インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、限定されるものではないが、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレングリコール、又はポリプロピレングリコールを含む、１以上の水溶性ポリマー付着物を含むように共有結合的に修飾される。例えば、米国特許第４，６４０，８３５号、同第４，４９６，６８９号、同第４，３０１，１４４号、同第４，６７０，４１７号、同第４，７９１，１９２号及び同第４，１７９，３３７号参照。特定の実施形態では、誘導体インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、限定されるものではないが、モノメトキシ－ポリエチレングリコール、デキストラン、セルロース、又はその他の炭水化物系ポリマー、ポリ－（Ｎ－ビニルピロリドン）－ポリエチレングリコール、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（例えば、グリセロール）及びポリビニルアルコール、並びにこのようなポリマーの混合物を含む１以上のポリマーを含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質の誘導体は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）サブユニットで共有結合的に修飾される。特定の実施形態では、１以上の水溶性ポリマーが誘導体の１以上の特定の位置、例えばアミノ末端において結合されている。特定の実施形態では、１以上の水溶性ポリマーが誘導体の１以上の側鎖にランダムに結合されている。特定の実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の治療能力を向上させるためにＰＥＧが使用される。特定のこのような方法は、例えば、米国特許第６，１３３，４２６号に述べられており、目的を問わず本明細書の一部として援用される。
特定の実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質変異体としては、グリコシル化部位の数及び／又はタイプが親ポリペプチドのアミノ酸配列と比較して変更されているグリコシル化変異体が含まれる。特定の実施形態では、タンパク質変異体は、天然タンパク質よりも多い数のＮ結合グリコシル化部位を含む。他の実施形態では、タンパク質変異体は、天然タンパク質よりも少ない数のＮ結合グリコシル化部位を含む。Ｎ結合グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ－Ｘ－Ｓｅｒ又はＡｓｎ－Ｘ－Ｔｈｒを特徴とし、ここで、Ｘと表示されるアミノ酸残基はプロリン以外のいずれのアミノ酸残基であってもよい。この配列を作り出すためのアミノ酸残基の置換は、Ｎ結合糖鎖の付加のための潜在的な新規部位を提供する。或いは、この配列を排除する置換は、既存のＮ結合糖鎖を除去する。又、Ｎ結合糖鎖の再配列が提供され、１つ、２つ、３つ、４つ、５つ、又はそれを超えるＮ結合グリコシル化部位（通常は天然に存在するもの）が排除され、１以上の新しいＮ結合部位が作出される。更なる好ましい変異体には、親アミノ酸配列と比較して、１以上のシステイン残基が別のアミノ酸（例えば、セリン）から削除又は置換されているシステイン変異体が含まれる。システイン変異体は、不溶性封入体の単離後など、抗体を生物学的に活性なコンフォメーションに再折り畳みする必要がある場合に有用であり得る。システイン変異体は一般に、天然タンパク質よりもシステイン残基が少なく、一般に、対合していないシステインに起因する相互作用を最小とするために偶数である。
ＨＢＶ及びＨＢＶマーカー
本明細書において使用する場合、「Ｂ型肝炎ウイルス」又は「ＨＢＶ」は、Ｂ型肝炎を引き起こす二本鎖ＤＮＡウイルスを指し、これは、ヘパドナウイルスと呼ばれる近縁ＤＮＡウイルスのファミリーに属する。ヘパドナウイルスは肝細胞感染への選好性が強く、腎臓、膵臓、及び単核細胞にも少量のヘパドナウイルスＤＮＡが見出される。しかしながら、これらの部位での感染は、肝外疾患とは無関係である。
ＨＢＶビリオン、すなわち、デーン粒子は、外側の脂質エンベロープと、タンパク質から構成される二十面体ヌクレオカプシドコアとからなる。ヌクレオカプシドは、ウイルスＤＮＡと、レトロウイルスと同様の逆転写酵素活性を有するＤＮＡポリメラーゼとを封入している。外側のエンベロープには、感受性細胞のウイルス結合及び侵入に関与するタンパク質が埋め込まれている。このウイルスは、ビリオンの直径が４２ｎｍの最小のエンベロープ動物ウイルスの１つであるが、コアを欠く糸状体及び球状体を含む多形性の形態が存在する。これらの粒子に感染力はなく、表面抗原（ＨＢｓＡｇ）と呼ばれるビリオンの表面の一部を形成する脂質とタンパク質で構成され、ウイルスのライフサイクル中に過剰に生成される。ＨＢＶは、ＨＢｓＡｇ、ＨＢｃＡｇ（及びそのスプライス変異体ＨＢｅＡｇ）、ＤＮＡポリメラーゼ及びＨｂｘを含む。ＨＢＶは、複製過程の一部として逆転写を採用する数少ない既知の非レトロウイルスウイルスの１つである。
ＨＢＶヌクレオカプシドは、比較的小さく、部分的に二本鎖の３．２ｋｂの環状ＤＮＡ、ウイルスポリメラーゼ及びコアタンパク質を含む。ゲノムは４つの長いオープンリーディングフレームのみを有する。ゲノムのｐｒｅ－Ｓ－Ｓ（ｐｒｅ－ｓｕｒｆａｃｅ－ｓｕｒｆａｃｅ）領域は、３つのインフレーム開始コドンのそれぞれで翻訳の開始が異なることにより、３つのウイルス表面抗原をコードする。
ＨＢＶの最も豊富なタンパク質は、２４ｋＤ Ｓタンパク質（ＨＢｓＡｇとして知られている）である。ｐｒｅ－Ｃ－Ｃ（ｐｒｅ－ｃｏｒｅ－ｃｏｒｅ）領域は、ＨＢｃＡｇ（ＨＢＶコア抗原）及びＨＢｅＡｇ（ＨＢＶ ｅ抗原）をコードする。ＨＢｅＡｇはウイルス複製に必要ではなく、ウイルスの組み立てには関与しないが、それでもやはり活発なウイルス複製の有用な指標である。ＨＢｅＡｇはＨＢＶに感染した肝細胞により分泌されるため、標準的な診断検査（ＥＬＩＳＡなど）で血中に検出することができるので、ウイルス血症性ＨＢＶ感染の検査マーカーとして使用される（Ｔｅｓｔｏｎｉ ｅｔ ａｌ．， Ｓｅｒｕｍ ｈｅｐａｔｉｔｉｓ Ｂ ｃｏｒｅ－ｒｅｌａｔｅｄ ａｎｔｉｇｅｎ （ＨＢｃｒＡｇ） ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｃｏｖａｌｅｎｔｌｙ ｃｌｏｓｅｄ ｃｉｒｃｕｌａｒ ＤＮＡ． Ｊ． Ｈｅｐａｔｏｌ． ２０１９， ７０， ６１５-６２５． ｈｔｔｐ：／／ｄｘ．ｄｏｉ．ｏｒｇ／１０．１０１６／ｊ．ｊｈｅｐ．２０１８．１１．０３０）。
Ｐコード領域は、ＤＮＡ合成及びＲＮＡキャプシド形成に関与する多機能酵素であるウイルスポリメラーゼに特異的である。Ｘオープンリーディングフレームは、ウイルスＸタンパク質（ＨＢｘ）をコードし、これは、宿主細胞のシグナル伝達を調節し、宿主及びウイルスの遺伝子発現に直接的及び間接的に影響を与え得る。
ＨＢＶのライフサイクルは、ウイルスがそのエンベロープタンパク質を介して宿主の細胞膜に付着した歳に始まると考えられている。ＨＢＶは、ＨＢＶ感染の最初のステップとして、大きなエンベロープタンパク質のｐｒｅ－Ｓ１ドメインを介して、主にヒト肝細胞に発現する原形質膜上の受容体に結合することが示唆されている。しかしながら、この受容体の性質にはなお議論の余地がある。次に、ウイルス膜が細胞膜と融合し、ウイルスゲノムが細胞内に放出される。
ＨＢＶの複製は、ホルモン、成長因子、及びサイトカインを含む様々な因子によって調節することができる。ウイルスゲノムが核に到達した後、細胞のＤＮＡ修復機構は、部分的な二本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ；弛緩環状ＨＢＶ ＤＮＡ（ｒｃＤＮＡ）とも呼ばれる）ゲノムを共有結合閉環状ＤＮＡ（ｃｃｃＤＮＡ）に変換する。得られたｃｃｃＤＮＡは、プレゲノムＲＮＡ及びサブゲノムＲＮＡを更に転写するための宿主ＲＮＡ Ｐｏｌ－ＩＩの鋳型である（Ａｌｌｗｅｉｓｓ Ｌ ａｎｄ Ｄａｎｄｒｉ Ｍ， Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ ｃｃｃＤＮＡ ｉｎ ＨＢＶ Ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ． Ｖｉｒｕｓｅｓ ２０１７， ９（６）：１５６；ｄｏｉ：１０．３３９０／ｖ９０６０１５６； Ｎｕｒ Ｋ． Ｍｏｈｄ－Ｉｓｍａｉｌ ， Ｚｉｊｉｅ Ｌｉｍ， Ｊａｙａｎｔｈａ Ｇｕｎａｒａｔｎｅ ａｎｄ Ｙｅｅ－Ｊｏｏ Ｔａｎ， Ｍａｐｐｉｎｇ ｔｈｅ Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡ ｗｉｔｈ Ｈｏｓｔ Ｆａｃｔｏｒｓ． Ｉｎｔ． Ｊ． Ｍｏｌ． Ｓｃｉ． ２０１９， ２０（１７）：４２７６； ｄｏｉ：１０．３３９０／ｉｊｍｓ２０１７４２７６）。
プレゲノムＲＮＡは二機能性であり、ウイルスＤＮＡ合成のための鋳型として、及びプレＣ、Ｃ、及びＰ翻訳のためのメッセンジャーとしての両方で機能する。サブゲノムＲＮＡは、もっぱらエンベロープとＸタンパク質の翻訳のために機能する。全てのウイルスＲＮＡは細胞質に輸送され、そこでその翻訳によってウイルスエンベロープ、コア、及びポリメラーゼタンパク質、並びにＨＢｘ及びＨＢｃＡｇが生じる。
ＨＢＶコア粒子はサイトゾル中で組み立てられ、この過程でプレゲノムＲＮＡの単一分子が組み立てられているウイルスコアに組み込まれる。ウイルスＲＮＡがキャプシド封入されると、逆転写が始まる。２つのウイルスＤＮＡ鎖の合成は連続している。最初のＤＮＡ鎖は、キャプシド封入されたＲＮＡ鋳型から作られ、この鎖の合成中又は合成後に、ＲＮＡ鋳型が分解され、新しく生成された最初のＤＮＡ鎖を鋳型として使用して、２番目のＤＮＡ鎖の合成が進行する。成熟したゲノムを有する幾つかのコアは核に戻され、そこで新たに作製されたＤＮＡゲノムをｃｃｃＤＮＡに変換して、転写鋳型の安定した核内プールを維持することができる。
ＨＢＶ表面抗原（ＨＢｓＡｇ）タンパク質は、最初に、粗面小胞体で合成及び重合される。これらのタンパク質は、ＥＲ後及びゴルジ前の区画に輸送され、そこでヌクレオカプシドの出芽に至る。組み立てられたＨＢＶビリオンとサブウイルス粒子は、表面タンパク質のグリカンを更に修飾するためにゴルジ体に輸送され、その後、宿主細胞から分泌されてライフサイクルを終了する。
本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、核酸、ベクター、ベクター系、方法及び組成物は、ＨＢＶ感染を治療するために使用することができる。本明細書において使用する場合、「ＨＢＶ感染の治療」及び「ＨＢＶ感染の治療」は、以下のうちの１以上を指す：（ｉ）ＨＢＶウイルス量／ウイルス力価の低減；（ｉｉ）ｃｃｃＤＮＡの転写の低減；（ｉｉｉ）細胞内のプレゲノムＲＮＡのレベルの低減；（ｉｖ）１以上のＨＢＶ関連障害の低減；及び（ｖ）対象の１以上のＨＢＶ関連症状の低減。
「ウイルス量」及び「ウイルス力価」という用語は、細胞、器官又は体液、例えば血液若しくは血清中のウイルス粒子の数を指す。ウイルス量又はウイルス力価は、多くの場合、アッセイの種類に応じて、１ｍＬ当たりのウイルス粒子又は感染性粒子として表される。今日、ウイルス量は通常、ミリリットル当たり国際単位（ＩＵ／ｍＬ）を使用して測定される。或いは、ウイルス量又はウイルス力価は、いわゆるウイルスゲノム同等物として決定され得る。より高いウイルス量、力価、又はウイルス量は、多くの場合、活動性のウイルス感染の重症度と相関している。従って、ウイルス量又はウイルス力価の低下は、例えば血清中の感染性ウイルス粒子の数の低下と相関している。ウイルス量は通常、核酸増幅に基づく試験（ＮＡＴｓ又はＮＡＡＴｓｓ）を使用して決定される。ＮＡＴ／ＮＡＡＴ試験では、例えば、ＰＣＲ、（定量的）逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ－ＰＣＲ又はｑＲＴ－ＰＣＲ）、核酸配列に基づく増幅（ＮＡＳＢＡ）、又はプローブに基づくアッセイを利用する。Ｂ型肝炎ウイルスＤＮＡ定量のためのリアルタイムＰＣＲアッセイは、例えば、Ｌｉｕ ｅｔ ａｌ．， Ｖｉｒｏｌ Ｊ １４， ９４ （２０１７） ｄｏｉ：１０．１１８６／ｓ１２９８５－０１７－０７５９－８に記載されている。ＰＣＲを使用したウイルスＤＮＡの検出が容易なため、ウイルス量は、治療中の奏効を監視するために臨床現場で有用である。１０．０００コピー／ｍＬ（２．０００ＩＵ／ｍＬ）を超えるウイルス量は、ＨＢｅＡｇの状態に関係なく、肝細胞癌の強力なリスク予測因子である。
「患者」及び「対象」という用語は互換的に使用され、ヒト及び非ヒト動物対象、好ましくはヒト対象、並びに正式に診断された障害を有するもの、正式に認識された障害を有さないもの、医療処置を受けているもの、障害を発症するリスクがあるものを含む。
特定の実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、核酸、ベクター、ベクター系、方法及び組成物は、ＨＢＶ感染細胞（例えば、細胞培養、ＨＢＶ感染器官又はＨＢＶ感染患者における）のＨＢＶウイルス量／ウイルス力価を低減するために使用することができる。ＨＢＶウイルス量／ウイルス力価は、非処理のＨＢＶ感染細胞培養物又は処置前の同じ患者に比べて約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％低減され得る。幾つかの実施形態では、ＨＢＶウイルス量／ウイルス力価は、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低減される。好ましくは、ＨＢＶウイルス量／ウイルス力価は、少なくとも３５％、より好ましくは、少なくとも５０％低減される。幾つかの実施形態では、ウイルス量／ウイルス力価は、ＰＣＲ又はｑＲＴ－ＰＣＲにより決定される。
特定の実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、核酸、ベクター、ベクター系、方法及び組成物は、ＨＢＶ感染細胞における（例えば、細胞培養物、ＨＢＶ感染器官又はＨＢＶ感染患者における）ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡの転写を低減するために使用することができる。ｃｃｃＤＮＡ転写は、非処理のＨＢＶ感染細胞培養物又は処置前の同じ患者に比べて約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％低減され得る。幾つかの実施形態では、ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡの転写は、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低減される。好ましくは、ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡの転写は、少なくとも３５％、より好ましくは、少なくとも５０％低減される。幾つかの実施形態では、ＨＢＶ ｃｃｃＤＮＡの転写は、ＰＣＲ又はｑＰＣＲにより決定される。
特定の実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、核酸、ベクター、ベクター系、方法及び組成物は、ＨＢＶ感染細胞において（例えば、細胞培養物、ＨＢＶ感染器官又はＨＢＶ感染患者において）プレゲノムＨＢＶ ＲＮＡのレベルを低減するために使用することができる。プレゲノムＨＢＶ ＲＮＡレベルは、非処理のＨＢＶ感染細胞培養物又は処置前の同じ患者に比べて約２０％、２５％、３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、又は１００％低減され得る。幾つかの実施形態では、プレゲノムＨＢＶ ＲＮＡのレベルは、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％又は少なくとも９５％低減される。好ましくは、プレゲノムＨＢＶ ＲＮＡのレベルは、少なくとも３５％、より好ましくは、少なくとも５０％低減される。幾つかの実施形態では、プレゲノムＨＢＶ ＲＮＡのレベルは、ｑＲＴ－ＰＣＲにより決定される。
本明細書において使用する場合、「ＨＢＶ関連障害」は、ＨＢＶによる対象の感染から生じる障害を指す。ＨＢＶ関連障害としては、限定されるものではないが、急性肝炎、慢性肝炎、発作性肝炎、劇症肝炎、亜劇症肝炎、並びにこれらの障害のいずれかから生じる症状及び／又は合併症が挙げられる。
本明細書において使用する場合、「ＨＢＶ関連症状」、「ＨＢＶ感染の症状」又は「ＨＢＶ関連合併症」には、ＨＢＶ感染に関連する１以上の身体的機能障害が含まれる。ＨＢＶの症状及び合併症としては、限定されるものではないが、肝硬変、肝細胞癌（ＨＣＣ）、膜性糸球体腎炎（ＭＧＮ）、死亡、急性壊死性血管炎（結節性多発性動脈炎）、膜性糸球体腎炎、小児乳頭状皮膚炎（ジアノッティ・クロスティ症候群）、ＨＢＶ関連腎症（例えば、膜性糸球体腎炎）、免疫介在性血液障害（例えば、本態性混合型寒冷グロブリン血症、再生不良性貧血）、門脈圧亢進症、腹水、脳症、黄疸、掻痒、白色便、狭窄症、結節性多発性動脈炎、糸球体疾患、異常なＡＬＴレベル、異常なＡＳＴレベル、異常なアルカリ性ホスファターゼレベル、ビリルビンレベルの上昇、食欲不振、倦怠感、発熱、悪心、嘔吐などが挙げられる。
インターフェロン
本明細書において使用する場合、「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」は、病原体又は腫瘍細胞の存在に応答して細胞によって典型的に産生及び放出されるサイトカイン又はその誘導体を指す。ＩＦＮには、Ｉ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮε、ＩＦＮκ、ＩＦＮι、ＩＦＮζ及びＩＦＮω）、ＩＩ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮγ）並びにＩＩＩ型ＩＦＮ（例えば、ＩＦＮλ１、ＩＦＮλ２及びＩＦＮλ３）が含まれる。「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」という用語には、限定されるものではないが、全長ＩＦＮ、その変異体若しくは誘導体（例えば、化学的に（例えば、ＰＥＧ化）修飾された誘導体若しくはムテイン）、又は全長ＩＦＮの１以上のシグナル伝達活性を保持するその機能的に活性なフラグメントが含まれる。
本明細書において使用する場合、「機能的フラグメント」という用語は、元の物質の１以上の機能的活性を保持する物質のフラグメントを指す。例えば、インターフェロンの機能的断片は、本明細書に記載されるように、ＩＦＮ機能を保持するインターフェロンの断片を指し、例えば、それは、ＩＦＮ経路シグナル伝達を媒介する。
ＩＦＮは、同族のＩＦＮ受容体（ＩＦＮαの場合はＩＦＮＡＲ、ＩＦＮβの場合はＩＦＮＢＲなど）を発現する細胞、組織、又は生物に添加すると、１以上のＩＦＮ受容体活性を少なくとも約２０％増強し得る。幾つかの実施形態では、インターフェロンは、ＩＦＮ受容体活性を少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、又は少なくとも８５％活性化する。ＩＦＮの活性（すなわち、「ＩＦＮ活性」）は、実施例Ｉにより詳細に記載されるように、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して、例えば、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号：ｈｋｂ－ｉｆｎαβ）、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－λ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号：ｈｋｂ－ｉｆｎｌ）又はＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）デュアルＩＦＮ－γ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号：ｈｋｂ－ｉｆｎｇ）を使用して測定することができる。これらのリポーター細胞は、ＨＥＫ２９３細胞にヒトＩＦＮ受容体遺伝子と、ＩＦＮの活性を測定するためのＩＦＮ刺激応答エレメント制御の分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）構築物を安定的にトランスフェクトすることによって作出した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ細胞は、Ｉ型、ＩＩ型又はＩＩＩ型インターフェロンによって誘導されるＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＩＳＧＦ３経路の活性化を監視するように設計されている。これらの経路の活性化は、ＳＥＡＰの産生及び放出を誘導する。
本発明の文脈において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＣＤ４０経路及びＩＦＮ経路の両方を活性化する。特定の実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＩＦＮ経路を、１００、６０、５０、４０、３０、２０、１０、又は１ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50で、好ましくは１１ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50で、より好ましくは６ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50で活性化する。これらの実施形態の幾つかで、ＩＦＮ経路は、ＩＦＮα（インターフェロンアルファ）、ＩＦＮβ（インターフェロンベータ）、ＩＦＮε（インターフェロンイプシロン）、ＩＦＮω（インターフェロンオメガ）、ＩＦＮγ（インターフェロンガンマ）、又はＩＦＮλ（インターフェロンラムダ）経路である。
特定の例示的実施形態によれば、本明細書に記載されるようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質には、全長ＩＦＮ、その変異体又は誘導体（例えば、化学的に（例えば、ＰＥＧ化）修飾された誘導体若しくはムテイン）、又は全長ＩＦＮの１以上のシグナル伝達活性を保持するその機能的に活性なフラグメントが含まれる。
特定の実施形態では、本明細書に記載されるようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質には、Ｉ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮ及びＩＩＩ型ＩＦＮ、又はその機能的フラグメントからなる群から選択されるＩＦＮ又はその機能的フラグメントが含まれる。
特定の実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、Ｉ型ＩＦＮ、又はその機能的フラグメントである。具体的な実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮω又はＩＦＮε、又はその機能的フラグメントである。より具体的な実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα又はＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである。他のより具体的な実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα、又はその機能的フラグメントである。他のより具体的な実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである。他のより具体的な実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮω、又はその機能的フラグメントである。他のより具体的な実施形態では、Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮε、又はその機能的フラグメントである。
特定の実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、ＩＦＮε若しくはＩＦＮω、又はその機能的フラグメントである。具体的な実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα若しくはＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである。
幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα、又はその機能的フラグメントである。より具体的な実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮα２ａ、又はその機能的フラグメントである。ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含み得る。
幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである。ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含み得る。ＩＦＮβ又はその機能的フラグメントは、配列番号１４に対してＣ１７Ｓ及びＮ８０Ｑから選択される１つ又は２つのアミノ酸置換を含み得る。幾つかの実施形態では、ＩＦＮβ又はその機能的フラグメントは、配列番号１４に対してアミノ酸置換Ｃ１７Ｓを含む。幾つかの実施形態では、ＩＦＮβは、配列番号１５に示されるようなアミノ酸配列を含む。他の実施形態では、ＩＦＮβは、配列番号１４に対してアミノ酸置換Ｃ１７Ｓ及びＮ８０Ｑを含む。更に他の実施形態では、ＩＦＮβは、配列番号１６に示されるようなアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮγ若しくはＩＦＮλ、又はその機能的フラグメントである。具体的な実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮγ、又はその機能的フラグメントである。より具体的な実施形態では、ＩＦＮγは、配列番号１９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む。他の具体的な実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮλ、又はその機能的フラグメントである。より具体的な実施形態では、ＩＦＮλ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮλ２、又はその機能的フラグメントである。ＩＦＮλ２は、配列番号１８に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含み得る。
幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮε、又はその機能的フラグメントである。ＩＦＮεは、配列番号８０に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含み得る。
幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、ＩＦＮω、又はその機能的フラグメントである。ＩＦＮωは、配列番号７９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含み得る。
特定の実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質で処理されたＨＢＶ感染細胞において１以上のＩＦＮシグナル伝達経路バイオマーカーの発現レベルが変更される、すなわち、上方調節又は下方調節される。特定の例示的実施形態によれば、１以上のＩＦＮ経路バイオマーカーの発現レベルは、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質で処理されたＨＢＶ感染細胞において上方調節される。この文脈において、「バイオマーカー」は、正常な生物学的過程、病原性過程、又は治療的介入に対する薬理学的応答の指標として客観的に測定及び評価される特性として理解されるべきである。
特定の実施形態によれば、本明細書で特徴付けられる好適なＩＦＮ経路バイオマーカーは、ケモカイン、例えば、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ１１からなる群から選択されるＣ－Ｘ－Ｃケモカインである。特定の例示的実施形態では、ＩＦＮ経路により誘導される好適なバイオマーカーは、ＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０及び／又はＣＸＣＬ１１、又、インターフェロン刺激遺伝子ＩＳＧ２０である。サイトカインの誘導又は放出は、ＥＬＩＳＡなどの当技術分野で公知の技術を用いて定量することができる。或いは、誘導は又、ＲＮＡシーケンス又はｑＲＴ－ＰＣＲなどのＲＮＡに基づくアッセイを使用して決定することもできる。特定の実施形態では、上方調節は、これらのサイトカインの少なくとも１．５倍、少なくとも２倍、少なくとも２．５倍、少なくとも３倍、少なくとも４倍、少なくとも５倍又は少なくとも１０倍の発現又は分泌を指し得る。
これら又は他の例示的実施形態では、炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＩＬ１０、ＩＬ１β及び／又はＩＬ２の発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時にヒト全血細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ１０の発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ヒト全血細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ１βの発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ヒト全血細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ２の発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ＨＢＶ感染細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ１０及びＩＬ１βの発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ＨＢＶ感染細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ１０及びＩＬ２の発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ＨＢＶ感染細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ１β及びＩＬ２の発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ＨＢＶ感染細胞において有意に上方調節されない。幾つかの実施形態では、ＩＬ１０、ＩＬ１β及びＩＬ２の発現レベルは、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質での処理時に、ＨＢＶ感染細胞において有意に上方調節されない。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質
「会合」という用語は、本明細書において使用する場合、一般に、２つの（又はそれを超える）分子の共有結合又は非共有結合を指す。会合するタンパク質は、２つ以上の異なるペプチド又はタンパク質を連結することによって作製され、元のタンパク質のそれぞれに由来する１以上の機能特性を有するタンパク質となる。本発明の文脈において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＣＤ４０経路及びＩＦＮ経路の両方を活性化する。会合するタンパク質は、単量体及び多量体、例えば、二量体、三量体、四量体など、別個の会合又は融合タンパク質の複合体を包含する。この文脈では、非共有結合は、通常、イオン、ファンデルワールス力、及び／又は水素結合の相互作用を介して、２つのタンパク質表面領域間の強力な相互作用から生じる。一方、共有結合には、ペプチド結合、ジスルフィド架橋などの実際の化学結合の存在が必要である。「融合」という用語は、本明細書において使用される場合、一般に、ペプチド結合を介した共有結合様式での２つ以上の別個のペプチド又はタンパク質の連結を指す。従って、「融合タンパク質」は、ペプチド結合を介して２つ以上の別個のペプチド又はタンパク質を連結することによって作製される、元のタンパク質のそれぞれに由来する１以上の機能特性を有する単一のタンパク質を指す。特定の実施形態では、２つ以上の別個のペプチド又はタンパク質は、１以上のペプチドリンカー（「Ｌ」）を介して互いに融合され得る。
本発明の全ての態様において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント及びＩＦＮ又はその機能的フラグメントを含むタンパク質である。
幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと非共有結合的に会合されている。より具体的な実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントはアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと、イオン、ファンデルワールス力、及び／又は水素結合の相互作用を介して非共有結合的に会合されている。
他の実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと共有結合的に会合されている。好ましい実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに融合されている。ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖に融合されてもよい。幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＮ末端に融合されている。他の実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＣ末端に融合されている。ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは又、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖に融合されてもよい。幾つかの実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＮ末端に融合されている。他の実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＣ末端に融合されている。これらの実施形態のいずれにおいても、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及びＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、リンカーを介して互いに融合されてもよい。
「リンカー」又は「Ｌ」という用語は、本明細書において使用する場合、１以上のアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと１以上のインターフェロン、又はその機能的フラグメントを共有結合的に連結するいずれの部分も指す。例示的実施形態において、リンカーは、ペプチドリンカーである。「ペプチドリンカー」という用語は、本明細書において使用する場合、２つ以上の部分を連結するように適合されたペプチドを指す。本明細書に言及されるペプチドリンカーは、以下に概略を示す特性のうち１以上を有し得る。特定の例示的実施形態によるペプチドリンカーの配列を表７に示す。
ペプチドリンカーは、任意の長さであってよく、すなわち、任意の数のアミノ酸残基を含み得る。例示的実施形態において、リンカーは、少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、少なくとも５個のアミノ酸を含む。リンカーは、少なくとも４個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも１１個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも１２個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも１３個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも１５個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも２０個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも２１個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、少なくとも２４個のアミノ酸を含み得る。
リンカーは一般に、連結された部分が互いの活性、例えば、ある部分の受容体に結合する能力に干渉しないように十分な程度のフレキシビリティーを提供するのに十分な長さである。例示的実施形態において、リンカーは、最大１０個、最大２０個、最大３０個、最大４０個、最大５０個、最大６０個、最大７０個、最大８０個、最大９０個、又は最大１００個のアミノ酸を含む。リンカーは、最大８０個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大４０個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大２４個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大２１個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大２０個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大１５個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大１３個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大１２個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大１１個のアミノ酸を含み得る。リンカーは、最大４個のアミノ酸を含み得る。
幾つかの実施形態では、リンカーは、リジッドリンカー、フレキシブルリンカー及び／又はヘリックス形成リンカーを含む群から選択される。αヘリックスは、よりランダムコイルのコンフォメーションを想定しているペプチドよりも自由度が低いため、ヘリックス形成リンカーは又リジッドリンカーであってもよいと理解される。幾つかの実施形態では、リンカーはリジッドリンカーである。例示的なリジッドリンカーは、配列番号２０に示されるような配列を含む。更なる例示的なリジッドリンカーは、配列番号２２又は配列番号２３に示されるような配列を含む。関連の実施形態では、リンカーは、ヘリックス形成リンカーである。例示的ヘリックス形成リンカーは、配列番号２２又は配列番号２３に示されるような配列を含む。他の実施形態では、リンカーは、フレキシブルリンカーである。例示的フレキシブルリンカーは、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列を含む。
リンカーは又、異なる化学的性質を備えることもできる。リンカーは、酸性、塩基性、又は中性のリンカーから選択することができる。通常、酸性リンカーは、Ａｓｐ又はＧｌｕなどの１以上の酸性アミノ酸を含有する。塩基性リンカーは一般に、Ａｒｇ、Ｈｉｓ及びＬｙｓなどの１以上の塩基性アミノ酸を含有する。どちらのタイプのアミノ酸も極めて親水性が高い。幾つかの実施形態では、リンカーは酸性リンカーである。例示的な酸性リンカーは、配列番号２２又は配列番号２３に示されるような配列を含む。他の実施形態では、リンカーは塩基性リンカーである。更に他の実施形態では、リンカーは中性リンカーである。配列番号２０、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列を含む。
好ましい実施形態では、リンカーは、複数のグリシン、セリン、及び該当する場合にはスレオニン残基から構成されるＧｌｙ－Ｓｅｒ又はＧｌｙ－Ｓｅｒ－Ｔｈｒリンカーである。これらの実施形態の幾つかにおいて、リンカーは、アミノ酸グリシン及びセリンを含む。より具体的な実施形態では、リンカーは、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６に示されるような配列を含む。幾つかの実施形態では、リンカーは更に、アミノ酸スレオニンを含む。より具体的な実施形態では、リンカーは、配列番号２１に示されるような配列を含む。
本発明の例示的実施形態において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号２０～２６に示されるような配列、好ましくは、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列から選択される配列を含むリンカーを含む。好ましい実施形態では、リンカーは、配列番号２４に示されるような配列を含む。別の好ましい実施形態では、リンカーは、配列番号２５に示されるような配列を含む。別の好ましい実施形態では、リンカーは、配列番号２６に示されるような配列を含む。
本発明の態様のいずれか１つの種々の実施形態において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、（Ｉ）前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント及び（ＩＩ）前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントを形成するもの以外のアミノ酸を含まない。関連の実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、（Ｉ）前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、（ＩＩ）前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメント及び（ＩＩＩ）前記リンカーを形成するもの以外のアミノ酸を含まない。
（Ｉ）アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、（ＩＩ）インターフェロン（ＩＦＮ）又はその機能的フラグメント及び（ＩＩＩ）リンカーの種々の異なる構成を表す例示的実施形態を以下に概説する。
特定の好ましい実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、表３Ａ又は表３Ｂに示されるようなリンカーを介して、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＣ末端に融合されている。これらの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号４８又は配列番号４９、配列番号６１、又は配列番号６３に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓは、配列番号１５に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓ，Ｎ８０Ｑは、配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮγは、配列番号１９に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮλ２は、配列番号１８に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮεは、配列番号８０に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮωは、配列番号７９に示されるような配列を含み得る。言及されるリンカーは、表７に挙げられている。
ＩＦＮがアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＣ末端に融合されている実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は更に、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖を含む。より具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号４８、又は配列番号４９に示されるような配列を含み、軽鎖は、配列番号３に示されるような配列を含む。他のより具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号６１又は配列番号６３に示されるような配列を含み、軽鎖は、配列番号５９に示されるような配列を含む。
Figure 2023505169000004
Figure 2023505169000005
特定の好ましい実施形態では、ＩＦＮ又はその機能的フラグメントは、表４Ａ又は表４Ｂに示されるようなリンカーを介して、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＮ末端に融合されている。これらの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖は、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号４８、配列番号４９、配列番号５０、配列番号６１、配列番号６３又は配列番号６５に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓは、配列番号１５に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓ，Ｎ８０Ｑは、配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮγは、配列番号１９に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮλ２は、配列番号１８に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮεは、配列番号８０に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮωは、配列番号７９に示されるような配列を含み得る。言及されるリンカーは、表７に挙げられている。
ＩＦＮがアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＮ末端に融合されている実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は更に、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖を含む。より具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号４８、配列番号４９又は配列番号５０に示されるような配列を含み、軽鎖は、配列番号３に示されるような配列を含む。他のより具体的な実施形態では、重鎖は、配列番号６１、配列番号６３又は配列番号６５に示されるような配列を含み、軽鎖は、配列番号５９に示されるような配列を含む。
Figure 2023505169000006
Figure 2023505169000007
特定の好ましい実施形態では、ＩＦＮは、表５Ａ又は表５Ｂに示されるようなリンカーを介して、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＣ末端に融合されている。これらの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖は、配列番号３に示されるような配列を含み得る。他の実施形態では、軽鎖は、配列番号５９に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓは、配列番号１５に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓ，Ｎ８０Ｑは、配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮγは、配列番号１９に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮλ２は、配列番号１８に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮεは、配列番号８０に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮωは、配列番号７９に示されるような配列を含み得る。言及されるリンカーは、表７に挙げられている。
ＩＦＮがアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＣ末端に融合されている実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は更に、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖を含む。より具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号３に示されるような配列を含み、重鎖は、配列番号６、配列番号９、配列番号４９、配列番号４８、配列番号５０又は配列番号１２に示されるような配列を含む。他のより具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号５９に示されるような配列を含み、重鎖は、配列番号６１、配列番号６３又は配列番号６５に示されるような配列を含む。
Figure 2023505169000008
Figure 2023505169000009
特定の好ましい実施形態では、ＩＦＮは、表６Ａ又は表６Ｂに示されるようなリンカーを介して、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＮ末端に融合されている。これらの実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖は、配列番号３又は配列番号５９に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓは、配列番号１５に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮβ＿Ｃ１７Ｓ，Ｎ８０Ｑは、配列番号１６に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮγは、配列番号１９に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮλ２は、配列番号１８に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮεは、配列番号８０に示されるような配列を含み得る。ＩＦＮωは、配列番号７９に示されるような配列を含み得る。言及されるリンカーは、表７に挙げられている。
ＩＦＮがアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＮ末端に融合されている実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は更に、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖を含む。より具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号３に示されるような配列を含み、重鎖は、配列番号６、配列番号９、配列番号４９、配列番号４８、配列番号１２又は配列番号５０に示されるような配列を含む。他のより具体的な実施形態では、軽鎖は、配列番号５９に示されるような配列を含み、重鎖は、配列番号６１、配列番号６３又は配列番号６５に示されるような配列を含む。
Figure 2023505169000010
Figure 2023505169000011
本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質又はこれらの前駆体に含まれる例示的配列は、表７に挙げられている。
例示的な好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号２８～４７又は配列番号６６～７５から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントを含む。他の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８１～８８から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントを含む。例示的な好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号２８～４７又は配列番号６６～７５から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである。他の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８１～８８から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８１に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８１に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８２に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８２に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８４に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８４に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８５に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８５に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８６に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８６に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８７に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８７に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
特定の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８８に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別の例示的実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号８８に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
より好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２又は配列番号４３から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントを含む。より好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２又は配列番号４３から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである。他のより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントを含む。更に他のより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５から選択される配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである。
更により好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号３８に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。更に別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号３８に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号３９に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号３９に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４０に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４０に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４１に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４１に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４２に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４２に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号４３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７２に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７２に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７４に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７４に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７５に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントを含む。別のいっそうより好ましい実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、配列番号７５に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト結合フラグメントである。
Figure 2023505169000012
Figure 2023505169000013

Figure 2023505169000014

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Figure 2023505169000032

Figure 2023505169000033

Figure 2023505169000034

Figure 2023505169000035
好ましい実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、以下の表９、特に、表９Ａ又は表９Ｂ、より詳しくは、表９Ａに明示されたものに由来する、特に上記の配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２又は配列番号４３のポリペプチドに由来するポリペプチドを含むインターフェロン融合抗原結合タンパク質である。好ましい実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、以下の表９、特に、表９Ａ又は表９Ｂ、より詳しくは、表９Ａに明示されるものに由来する、特に、上記の配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２又は配列番号４３のポリペプチドに由来するポリペプチドからなるインターフェロン融合抗原結合タンパク質である。より好ましい実施形態では、インターフェロン融合抗体は、配列番号３８及び配列番号３に示されるような配列を含む。他のより好ましい実施形態では、インターフェロン融合抗体は、配列番号３９及び配列番号３に示されるような配列を含む。他のより好ましい実施形態では、インターフェロン融合抗体は、配列番号４０及び配列番号３に示されるような配列を含む。他のより好ましい実施形態では、インターフェロン融合抗体は、配列番号４１及び配列番号９に示されるような配列を含む。他のより好ましい実施形態では、インターフェロン融合抗体は、配列番号４２及び配列番号９に示されるような配列を含む。他のより好ましい実施形態では、インターフェロン融合抗体は、配列番号４３及び配列番号９に示されるような配列を含む。
Figure 2023505169000036
Figure 2023505169000037
他の好ましい実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、以下の表１０に明示されるものに由来するポリペプチドを含むインターフェロン融合抗原結合タンパク質である。好ましい実施形態では、本明細書に記載のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、以下の表１０に明示されるものに由来するポリペプチドからなるインターフェロン融合抗原結合タンパク質である。
Figure 2023505169000038
核酸及び発現ベクター
一態様において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの組合せが提供される。これらのポリヌクレオチドを発現させることを含むインターフェロン会合抗原結合タンパク質の作製方法も又提供される。
幾つかの実施形態では、本明細書に開示されるようにアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに融合されるＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードする核酸が提供される。特定の例示的実施形態では、核酸は、配列番号８１～８８に示される配列のいずれか、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の核酸配列に従うアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードしている。特定の例示的実施形態では、前記核酸は、配列番号８１～８８のいずれかをコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である。好ましい実施形態では、核酸は、配列番号２８～４７に示される配列のいずれか、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の核酸配列に従うアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードしている。更により具体的な実施形態では、前記核酸は、配列番号２８～４７のいずれかをコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である。他の好ましい実施形態では、核酸は、６６～７５に示される配列のいずれか、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の核酸配列に従うアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードしている。更により具体的な実施形態では、前記核酸は、配列番号６６～７５のいずれかをコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である。
核酸がアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖に融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードする実施形態では、その核酸は更に、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖をコードしてもよい。より具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖は、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号４８、配列番号４９、若しくは配列番号５０に示されるような配列、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の核酸配列を含む。更により具体的な実施形態では、前記核酸は、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号４８、配列番号４９、又は配列番号５０をコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一である。他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖は、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４若しくは配列番号６５に示されるような配列、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一である核酸配列を含む。このような他のいっそうより具体的な実施形態では、前記核酸は、配列番号６１、配列番号６２、配列番号６３、配列番号６４又は配列番号６５をコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である。
核酸がアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖に融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードする実施形態では、その核酸は更に、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖をコードしてもよい。より具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖は、配列番号３、配列番号４若しくは配列番号５に示されるような配列、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の核酸配列を含む。更により具体的な実施形態では、前記核酸は、配列番号３、配列番号４又は配列番号５をコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である。他のより具体的な実施形態では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖は、配列番号５９若しくは配列番号６０に示されるような配列、又はこれらの配列のいずれかをコードする核酸と少なくとも少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９８％若しくは少なくとも９９％同一の核酸配列を含む。更により具体的な実施形態では、前記核酸は、配列番号５９又は配列番号６０をコードする核酸と少なくとも９５％、少なくとも９８％又は少なくとも９９％同一である。
特定の実施形態では、本発明に記載の核酸は、収率を増大させるための配列（例えば、溶解度タグ）又は発現したタンパク質の精製を容易にするための配列（すなわち、精製タグ）をコードする配列を含み得る。精製タグは当業者に公知であり、グルタチオンＳ－トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）タグ、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグ、カルモジュリン結合ペプチド（ＣＢＰ）タグ、インテイン－キチン結合ドメイン（インテイン－ＣＢＤ）タグ、ストレプトアビジン／ビオチンに基づくタグ（例えば、ビオチン化シグナルペプチド（ＢＣＣＰ）タグ、ストレプトアビジン結合ペプチド（ＳＢＰ）タグ、Ｈｉｓ－ｐａｔｃｈ ＴｈｉｏＦｕｓｉｏｎタグ、タンデムアフィニティー精製（ＴＡＰ）タグ、低分子ユビキチン様修飾因子（Ｓｍａｌｌ ｕｂｉｑｕｉｔｉｎ－ｌｉｋｅ ｍｏｄｉｆｉｅｒ）（ＳＵＭＯ）タグ、ＨａｌｏＴａｇ（登録商標）（Ｐｒｏｍｅｇａ）、Ｐｒｏｆｉｎｉｔｙ ｅＸａｃｔ（商標）システム（Ｂｉｏ－Ｒａｄ）から選択することができる。幾つかの実施形態では、精製タグは、ポリヒスチジンタグ（例えば、Ｈｉｓ6タグ、Ｈｉｓ7タグ、Ｈｉｓ8タグ、Ｈｉｓ9タグ又はＨｉｓ10タグ）であり得る。他の実施形態では、精製タグは、Ｓｔｒｅｐタグ（例えば、Ｓｔｒｅｐタグ（登録商標）又はＳｔｒｅｐタグＩＩ（登録商標）；ＩＢＡ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）であり得る。更に他の実施形態では、精製タグは、マルトース結合タンパク質（ＭＢＰ）タグであり得る。
幾つかの実施形態では、核酸配列は、精製タグの除去のための切断部位をコードする配列を更に含み得る。このような切断配列は当業者に公知であり、エンドプロテアーゼ又はエキソプロテアーゼにより認識及び切断される配列から選択することができる。幾つかの実施形態では、精製タグの除去のためのエンドプロテアーゼは、エンテロペプチダーゼ、トロンビン、因子Ｘａ、ＴＥＶプロテアーゼ又はライノウイルス３Ｃプロテアーゼから選択することができる。幾つかの実施形態では、精製タグの除去のためのエキソプロテアーゼは、カルボキシペプチダーゼＡ、カルボキシペプチダーゼＢ又はＤＡＰアーゼから選択することができる。好ましい実施形態では、精製タグの除去のためのプロテアーゼは、ＴＥＶプロテアーゼである。より具体的な好ましい実施形態では、核酸は、Ｈｉｓ6タグ及びＴＥＶ切断部位をコードする配列を含む。更により具体的な好ましい実施形態では、前記核酸は、配列番号２７に示されるような配列をコードする配列を含む。
本発明の核酸分子は又、シグナルペプチドをコードする配列も含み得る。当業者は、発現したタンパク質を折り畳み、組立て及び／又は成熟の所望の部位に向けるだけでなく、最終タンパク質の培地への分泌をもたらして下流の処理を容易にするために利用可能な様々なシグナルペプチドを知っている。従って、幾つかの実施形態では、シグナルペプチドは、分泌シグナルペプチドである。コードされたシグナルペプチドは、配列番号１又は配列番号２に示される配列を含み得る。幾つかの実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号１に示されるような配列を含む。他の実施形態では、シグナルペプチドは、配列番号２に示されるような配列を含む。
シグナルペプチド１（配列番号１）は、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６、配列番号４７、配列番号５０、配列番号６５、配列番号６６、配列番号６７、配列番号６８、配列番号６９、配列番号７０、配列番号７１、配列番号７２、配列番号７３、配列番号７４及び配列番号７５に示されるようなポリペプチド配列の合成のために使用した。ポリペプチドのそれぞれの配列のＮ末端に最初に存在するこのようなシグナルペプチドは、合成中に切断される。
シグナルペプチド２（配列番号２）は、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２及び配列番号４３に示されるようなポリペプチド配列の合成のために使用した。ポリペプチドのそれぞれの配列のＮ末端に最初に存在するこのようなシグナルペプチドは、合成中に切断される。
配列番号８１、配列番号８２、配列番号８３、配列番号８４、配列番号８５、配列番号８６、配列番号８７及び配列番号８８に示されるようなポリペプチド配列の合成のために、シグナルペプチドＭＧＷＳＣＩＩＬＦＬＶＡＴＡＴＧＶＨＳ（配列番号１）を使用した。ポリペプチドのそれぞれの配列のＮ末端に最初に存在するこのようなシグナルペプチドは、合成中に切断される。
本明細書に開示されるようなアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードするポリヌクレオチドは一般に、所望の量の特許請求されるインターフェロン会合抗原結合タンパク質を生産するために使用可能な宿主細胞に導入するための発現ベクターに挿入される。よって、特定の態様では、本発明は、本明細書に開示されるポリヌクレオチドを含む発現ベクター並びに及びこれらのベクター及びポリヌクレオチドを含む宿主細胞を提供する。
「ベクター」又は「発現ベクター」という用語は、本明細書では、明細書及び特許請求の範囲に関して、細胞に導入し所望の遺伝子を発現させるためのビヒクルとして本発明で使用されるベクターを意味して使用される。当業者に知られているように、このようなベクターは特に、プラスミド、ファージ、ウイルス及びレトロウイルスからなる群から選択され得る。一般に、本発明に適合するベクターは選択マーカー、所望の遺伝子のクローニングを容易にするための適当な制限部位及び真核細胞又は原核細胞に侵入し、且つ／又はそこで複製する能力を含む。
多くの発現ベクター系が本発明の目的のために使用可能である。例えば、ベクターの１つのクラスは、ウシ乳頭腫ウイルス、ポリオーマウイルス、アデノウイルス、ワクシニアウイルス、バキュロウイルス、レトロウイルス（ＲＳＶ、ＭＭＴＶ又はＭＯＭＬＶ）、又はＳＶ４０ウイルスなどの動物ウイルスに由来するＤＮＡ要素を利用する。その他のものとして、内部リボソーム結合部位を有するポリシストロンシステムの使用が含まれる。更に、ＤＮＡを染色体に組み込んだ細胞は、トランスフェクトされた宿主細胞の選択を可能とする１以上のマーカーを導入することによって選択され得る。マーカーは、栄養要求性宿主に対する原栄養性、殺生物剤耐性（例えば、抗生物質）、又は銅などの重金属に対する耐性を提供し得る。選択可能なマーカー遺伝子は、発現させるＤＮＡ配列に直接連結することもできるし、又は同時形質転換によって同じ細胞に導入することができる。ｍＲＮＡの最適な合成には、追加の要素も必要とされることがある。これらの要素には、シグナル配列、スプライスシグナル、並びに転写プロモーター、エンハンサー、及び終結シグナルが含まれ得る。幾つかの実施形態では、クローニングされた可変領域遺伝子は、それらの１つがＩＦＮ又はその機能的フラグメントをコードする遺伝子と融合され、上記に述べたように合成された重鎖及び軽鎖定常領域遺伝子（例えば、ヒト遺伝子）と共に発現ベクターに挿入される。
他の実施形態では、本発明のベクター系は、２つ以上のベクターを含み得る。幾つかの実施形態では、ベクター系は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖に融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントの発現のための第１のベクター及びアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖の発現のための第２のベクターを含み得る。或いは、このようなベクター系は、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖に融合されたＩＦＮ又はその機能的フラグメントの発現のための第１のベクター及びアゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖の発現のための第２のベクターを含み得る。
他の実施形態では、本明細書に記載されるようなインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ポリシストロン構築物を使用して発現させることができる。このような発現系では、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体若しくはそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖に融合されたＩＦＮ若しくはその機能的フラグメントをコードし、且つ、前記抗体の軽鎖をコードするもの、又はアゴニスト抗ＣＤ４０抗体若しくはそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖に融合されたＩＦＮ若しくはその機能的フラグメントをコードし、且つ、前記抗体若しくはそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖をコードするものなどの、対象とする複数の遺伝子産物が、単一のポリシストロン構築物から生産され得る。これらのシステムは有利には、真核生物宿主細胞において比較的高レベルのポリペプチドを提供するために内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）を使用する。適合可能なＩＲＥＳ配列は、本明細書の一部として援用される米国特許第６，１９３，９８０号に開示されている。当業者は、このような発現系が本願に開示されているポリペプチドの全範囲を効果的に生産するために使用できることを認識するであろう。
より一般には、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするベクター又はＤＮＡ配列が調製されると、発現ベクターを適切な宿主細胞に導入することができる。すなわち、宿主細胞は形質転換され得る。プラスミドの宿主細胞への導入は、当業者に周知の様々な技術によって達成することができる。これらには、限定されるものではないが、トランスフェクション（電気泳動及びエレクトロポレーションを含む）、プロトプラスト融合、リン酸カルシウム沈殿、エンベロープＤＮＡとの細胞融合、マイクロインジェクション、及び無傷のウイルスによる感染が挙げられる。例えば、Ｒｉｄｇｗａｙ， Ａ． Ａ． Ｇ． “Ｍａｍｍａｌｉａｎ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｖｅｃｔｏｒｓ” Ｃｈａｐｔｅｒ ２４．２， ｐｐ． ４７０－４７２ Ｖｅｃｔｏｒｓ， Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ａｎｄ Ｄｅｎｈａｒｄｔ， Ｅｄｓ． （Ｂｕｔｔｅｒｗｏｒｔｈｓ， Ｂｏｓｔｏｎ， ＭＡ １９８８）参照。形質転換細胞を、軽鎖及び重鎖の生産に適当な条件下で増殖させ、重鎖及び／又は軽鎖タンパク質合成に関してアッセイする。例示的アッセイ技術としては、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、又は蛍光活性化セルソーター分析（ＦＡＣＳ）、免疫組織化学などが挙げられる。
本明細書において使用する場合、「形質転換」という用語は、遺伝子型を変化させ、その結果、レシピエント細胞に変化をもたらすレシピエント宿主細胞へのＤＮＡの導入を指して広義で使用されるものとする。
同様に、「宿主細胞」は、組換えＤＮＡ技術を使用して構築され、少なくとも１つの異種遺伝子をコードするベクターで形質転換された細胞を指す。組換え宿主からポリペプチドを単離するための方法の説明において、「細胞」及び「細胞培養」という用語は、特に明記しない限り、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の供給源を表して互換的に使用される。言い換えれば、「細胞」からのポリペプチドの回収は、細胞全体の回転沈降からの回収、又は培地と懸濁細胞の両方を含む細胞培養からの回収のいずれかを意味し得る。
一実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の発現に使用される宿主細胞株は、真核生物起源又は原核生物起源のものである。本明細書において使用する場合、「発現」という用語は、２つ以上のポリペプチド鎖（例えば、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の抗体部分の重鎖及び軽鎖）の転写及び翻訳を含み得るものであり、これらは会合して最終的なインターフェロン会合抗原結合タンパク質を形成する。一実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の発現のために使用される宿主細胞株は、細菌起源である。一実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の発現のために使用される宿主細胞株は哺乳動物起源であり、当業者は、そこで発現される所望の遺伝子産物に最も適した特定の宿主細胞株を決定することができる。例示的宿主細胞株としては、限定されるものではないが、ＨｏｒｉｚｏｎからのＣＨＯ Ｋ１ ＧＳノックアウト、ＤＧ４４及びＤＵＸＢ１１（チャイニーズハムスター卵巣株、ＤＨＦＲマイナス）、ＨＥＬＡ（ヒト子宮頸癌）、ＣＶＩ（サル腎臓株）、ＣＯＳ（ＳＶ４０ Ｔ抗原を有するＣＶＩの誘導体）、Ｒ１６１０（チャイニーズハムスター線維芽細胞）ＢＡＬＢＣ／３Ｔ３（マウス線維芽細胞）、ＨＡＫ（ハムスター腎臓株）、ＳＰ２／Ｏ（マウス骨髄腫）、ＢＦＡ－１ｃ１ＢＰＴ（ウシ内皮細胞）、ＲＡＪＩ（ヒトリンパ球）、ＨＥＫ ２９３（ヒト腎臓）が挙げられる。好ましい実施形態では、ＨＥＫ ＦＳ Ｓ１１／２５４細胞が使用可能である。別の好ましい実施形態では、ＨｏｒｉｚｏｎからのＣＨＯ Ｋ１ ＧＳが使用可能である。一実施形態では、細胞株は、それから発現された抗体のグリコシル化の変更、例えばフコシル化をもたらす（例えば、ＰＥＲ．Ｃ６（登録商標）（Ｃｒｕｃｅｌｌ）又はＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞株（ＰＯＴＥＬＬＩＧＥＮＴ（商標）細胞）（Ｂｉｏｗａ、プリンストン、ＮＪ））。一実施形態では、ＮＳ０細胞が使用可能である。宿主細胞株は一般に、商業的サービスである又は公開文献から入手可能である。
一実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の発現のために使用される宿主は、非ヒトトランスジェニック動物又はトランスジェニック植物である。
本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は又、対象とする配列についてトランスジェニックである非ヒト動物（例えば、哺乳動物）又は植物の作出及びそこから回復可能な形態でのインターフェロン会合抗原結合タンパク質の生成を介してトランスジェニックに生産することができる。哺乳動物におけるトランスジェニック生産に関連して、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ヤギ、ウシ、又は他の哺乳類の乳汁中で生産し、そこから回収することができる。例えば、米国特許第５，８２７，６９０号、同第５，７５６，６８７号、同第５，７５０，１７２号、同第５，７４１，９５７号参照。例示的植物宿主は、タバコ属（Ｎｉｃｏｔｉａｎａ）、アラビドプシス属（Ａｒａｂｉｄｏｐｓｉｓ）、ウキクサ、トウモロコシ、コムギ、バレイショなどである。プロモーター及びベクターの説明、並びに植物の形質転換を含む、植物において抗体を発現させるための方法は、当技術分野で公知である。例えば、本明細書の一部として援用される米国特許第６，５１７，５２９号を参照。幾つかの実施形態では、非ヒトトランスジェニック動物又は植物は、標準的なトランスジェニック技術によって、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする１以上の核酸分子を動物又は植物に導入することによって生産される。Ｈｏｇａｎ及び米国特許第６，４１７，４２９号参照。トランスジェニック動物を作製するために使用されるトランスジェニック細胞は、胚性幹細胞又は体細胞であり得る。トランスジェニック非ヒト生物は、キメラ、非キメ異型接合体、及び非キメラ同型接合体であり得る。例えば、Ｈｏｇａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ Ｍｏｕｓｅ Ｅｍｂｒｙｏ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ 第２版， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓ （１９９９）； Ｊａｃｋｓｏｎ ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｕｓｅ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ ａｎｄ Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃｓ： Ａ Ｐｒａｃｔｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ， Ｏｘｆｏｒｄ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｐｒｅｓｓ （２０００）； 及びＰｉｎｋｅｒｔ， Ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ Ａｎｉｍａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｈａｎｄｂｏｏｋ， Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ （１９９９）参照。幾つかの実施形態では、トランスジェニック非ヒト動物は、対象とする配列をコードする標的化構築物による標的化された破壊及び置換を有する。インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、任意のトランスジェニック動物で作製することができる。好ましい実施形態では、非ヒト動物は、マウス、ラット、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウシ又はウマである。非ヒトトランスジェニック動物は、血液、乳汁、尿、唾液、涙、粘液及び他の体液において、前記インターフェロン会合抗原結合タンパク質を発現する。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ生産はスケールアップして、大量の所望のインターフェロン会合抗原結合タンパク質を得ることを可能にする。組織培養条件下での哺乳動物細胞培養の技術は当技術分野で公知であり、例えば、エアリフトリアクター又は連続スターラーリアクターでの均一懸濁培養、或いは例えば中空繊維、マイクロカプセル中、又はアガロースマイクロビーズ若しくはセラミックカートリッジ上での固定化又は捕捉された細胞培養を含む。必要に応じて、及び／又は所望により、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の溶液を、慣例のクロマトグラフィー法、例えば、ゲル濾過、イオン交換クロマトグラフィー、ＤＥＡＥ－セルロースでのクロマトグラフィー及び／又は（免疫）アフィニティークロマトグラフィーによって精製することができる。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする１以上の遺伝子は又、細菌又は酵母又は植物細胞などの非哺乳動物細胞で発現させることもできる。これに関して、細菌などの様々な単細胞非哺乳動物微生物、すなわち、培養又は発酵で増殖させることができるものも形質転換することができることが理解されるであろう。形質転換を受けやすい細菌としては、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ ｃｏｌｉ）やサルモネラ菌属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）の菌株などの腸内細菌科のメンバー、枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌｉｓ）などのバシラス科；肺炎球菌属（Ｐｎｅｕｍｏｃｏｃｃｕｓ）；連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、及びインフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）が挙げられる。更に、細菌で発現される場合、本発明によるインターフェロン会合抗原結合タンパク質又はその成分（すなわち、アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及びＩＦＮ又はＩＦＮの機能的フラグメント）は、封入体の一部となり得る。次に、所望のインターフェロン会合抗原結合タンパク質を単離し、所望により再折り畳みし、精製する必要がある可能性がある。
原核生物に加えて、真核微生物も使用することができる。サッカロミセス・セレビシエ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）、又は一般的なパン酵母は、真核微生物の中で最も一般的に使用されているが、他の多くの菌株が一般的に利用可能である。サッカロミセス属での発現の場合、例えば、プラスミドＹＲｐ７（Ｓｔｉｎｃｈｃｏｍｂ ｅｔ ａｌ．， Ｎａｔｕｒｅ， ２８２：３９ （１９７９）； Ｋｉｎｇｓｍａｎ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， ７：１４１ （１９７９）； Ｔｓｃｈｅｍｐｅｒ ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ， １０：１５７ （１９８０））が一般的に使用される。このプラスミドは既にＴＲＰ１遺伝子を含んでおり、これはトリプトファンで増殖する能力を欠く酵母の変異株、例えばＡＴＣＣ Ｎｏ．４４０７６又はＰＥＰ４－１の選択マーカーを提供する（Ｊｏｎｅｓ， Ｇｅｎｅｔｉｃｓ， ８５：１２ （１９７７））。酵母宿主細胞ゲノムの特徴としてのｔｒｐ１病変の存在は、トリプトファンの不在下での増殖による形質転換を検出するための効果的な環境を提供する。
治療用ベクター
インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸配列をベクターに挿入し、治療用ベクター、例えば、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質を発現するベクターとして使用することができる。好適な機能的発現構築物及び治療用発現ベクターの構築は、当業者に公知である。従って、特定の実施形態において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ＲＮＡ又はＤＮＡ配列、インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするベクター又はベクター系による遺伝子送達の手段によって対象に投与され得る。
治療用ベクターは、例えば、静脈内注射、局所投与（米国特許第５，３２８，４７０号参照）又は定位注射（例えば、ｃＨＥＮ ＥＴ ＡＬ．， ｐｎａｓ ９１：３０５４－３０５７ （１９９４）参照）によって対象に送達することができる。治療用ベクターの医薬製剤は、許容される希釈剤中にベクターを含み得る。
１又は複数の核酸をコードするインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸を送達するための治療プロトコールの一部として使用される遺伝子構築物に組み込むことができる。インターフェロン会合抗原結合タンパク質のｉｎ ｖｉｖｏトランスフェクション及び発現のための発現ベクターが提供される。
このような成分の発現構築物は、任意の生物学的に有効な担体、例えば、当業者に知られているように、ｉｎ ｖｉｖｏで成分の核酸配列を細胞に効果的に送達することができる任意の製剤又は組成物で投与することができる。アプローチとしては、限定されるものではないが、組換えレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ随伴ウイルス及び単純ヘルペスウイルス－１、組換え細菌又は真核生物プラスミドなどを含むウイルスベクターへの対象核酸配列の挿入が挙げられるが、これに限定されない。
レトロウイルスベクター及びアデノ随伴ウイルスベクターは、ｉｎ ｖｉｖｏで、特にヒトに外因性核酸配列を移入するための組換え送達系として使用することができる。このようなベクターは、細胞への遺伝子の効率的な送達を提供し、移入された核酸は、宿主の染色体ＤＮＡに安定して組み込まれ得る。
複製欠陥レトロウイルスのみを生産する特殊な細胞株（「パッケージング細胞」と呼ばれる）の開発により、遺伝子治療に関するレトロウイルスの有用性が高まり、欠陥レトロウイルスは、遺伝子治療目的の遺伝子導入の使用のために特徴付けられている（総説としては、例えば、Ｍｉｌｌｅｒ， Ｂｌｏｏｄ ７６：２７１－７８ （１９９０）を参照）。複製欠陥レトロウイルスはビリオン中にパッケージング可能であり、これは標準的な技術によるヘルパーウイルスの使用を介して標的細胞に感染させるために使用することができる。組換えレトロウイルスを産生するための、及びそのようなウイルスをｉｎ ｖｉｔｒｏ又はｉｎ ｖｉｖｏで細胞に感染させるためのプロトコールは、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．， （編） Ｇｒｅｅｎｅ Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ， （１９８９）， Ｓｅｃｔｉｏｎｓ ９．１０－９．１４及びその他の標準的な実験マニュアルに見出すことができる。好適なレトロウイルスの限定されない例としては、ｐＬＪ、ｐＺＩＰ、ｐＷＥ及びｐＥＭが挙げられ、これらは当業者に公知である。好適なパッケージングウイルス株の例としては、*Ｃｒｉｐ、*Ｃｒｅ、*２及び*Ａｍが挙げられる（例えば、Ｅｇｌｉｔｉｓ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２３０：１３９５－１３９８ （１９８５）； Ｄａｎｏｓ ａｎｄ Ｍｕｌｌｉｇａｎ， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：６４６０－６４６４ （１９８８）； Ｗｉｌｓｏｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８５：３０１４－３０１８ （１９８８）； Ａｒｍｅｎｔａｎｏ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８７：６１４１－６１４５ （１９９０）； Ｈｕｂｅｒ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８８：８０３９－８０４３ （１９９１）； Ｆｅｒｒｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８８：８３７７－８３８１ （１９９１）； Ｃｈｏｗｄｈｕｒｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５４：１８０２－１８０５ （１９９１）； ｖａｎ Ｂｅｕｓｅｃｈｅｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：７６４０－７６４４ （１９９２）； Ｋａｙ， ｅｔ ａｌ．， Ｈｕｍａｎ Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ ３：６４１－６４７ （１９９２）； Ｄａｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８９：１０８９２－１０８９５ （１９９２）； Ｈｗｕ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５０：４１０４－４１１５ （１９９３）； 米国特許第４，８６８，１１６号；米国特許第４，９８０，２８６号；国際特許出願公開第８９／０７１３６号；国際特許出願公開第８９／０２４６８号；国際特許出願公開第８９／０５３４５号；及び国際特許出願公開第９２／０７５７３号参照）。
別の実施形態では、アデノウイルス由来の送達ベクターが提供される。アデノウイルスのゲノムは、対象とする遺伝子産物をコードし、発現するように操作され得るが、通常の溶菌ウイルスのライフサイクルで複製する能力に関しては不活性化される。例えば、Ｂｅｒｋｎｅｒ， ｅｔ ａｌ．， ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ ６：６１６ （１９８８）； Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｓｃｉｅｎｃｅ ２５２：４３１－４３４ （１９９１）；及びＲｏｓｅｎｆｅｌｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｅｌｌ ６８：１４３－１５５ （１９９２）を参照。アデノウイルス株Ａｄ ５型ｄ１３２４又は他のアデノウイルス株（例えば、Ａｄ２、Ａｄ３、Ａｄ７など）に由来する好適なアデノウイルスベクターが当業者に知られている。組換えアデノウイルスは、非***細胞に感染することができず、上皮細胞を含む多様な細胞型に感染させるために使用できるという点で、特定の状況において有利であり得る（Ｒｏｓｅｎｆｅｌｄ、ｅｔ ａｌ。（１９９２）、前出）。更に、ウイルス粒子は比較的安定で、精製及び濃縮に適しており、上記のように、感染スペクトルに影響を与えるように改変することができる。更に、導入されたアデノウイルスＤＮＡ（及びそこに含まれる外来ＤＮＡ）は宿主細胞のゲノムに組み込まれず、エピソームに留まるため、導入されたＤＮＡが宿主ゲノムに組み込まれるｉｎ ｓｉｔｕ挿入型遺伝子変異の結果として発生する可能性のある潜在的な問題を回避する（例えば、レトロウイルスＤＮＡ）。更に、外来ＤＮＡのアデノウイルスゲノムの収容力は他の送達ベクターに比べて大きい（最大８キロベース）（Ｂｅｒｋｎｅｒ， ｅｔ ａｌ． （１９９８）， 前掲； Ｈａｊ－Ａｈｍａｎｄ ａｎｄ Ｇｒａｈａｍ， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ５７：２６７ （１９８６））。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸配列の送達に有用な更に別のウイルスベクター系は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）である。ＡＡＶは、効率的な複製と生産的なライフサイクルのためのヘルパーウイルスとして、アデノウイルス又はヘルペスウイルスなどの別のウイルスを必要とする天然に存在する欠陥ウイルスである（総説としては、Ｍｕｚｙｃｚｋａ， ｅｔ ａｌ．， Ｃｕｒｒ． Ｔｏｐｉｃｓ ｉｎ Ｍｉｃｒｏ． ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｌ． １５８：９７－１２９ （１９９２）参照）。それは又、そのＤＮＡを非***細胞に組み込み得る数少ないウイルスの１つであり、高頻度の安定した組み込みを示す（例えば、Ｆｌｏｔｔｅ， ｅｔ ａｌ．， Ａｍ． Ｊ． Ｒｅｓｐｉｒ． Ｃｅｌｌ． Ｍｏｌ． Ｂｉｏｌ． ７：３４９－３５６ （１９９２）； Ｓａｍｕｌｓｋｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６３：３８２２－３８２８ （１９８９）；及びＭｃＬａｕｇｈｌｉｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ６２：１９６３－１９７３ （１９８９）参照）。わずか３００塩基対のＡＡＶを含むベクターをパッケージングして、組み込むことができる。外因性ＤＮＡのスペースは約４．５ｋｂに制限されている。Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ５：３２５１－３２６０ （１９８５）に記載されているようなＡＡＶベクターは、細胞にＤＮＡを導入するために使用できる。様々な核酸が、ＡＡＶベクターを使用して種々の細胞型に導入されている（例えば、Ｈｅｒｍｏｎａｔ， ｅｔ ａｌ．， Ｐｒｏｃ． Ｎａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ ８１：６４６６－６４７０ （１９８４）； Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｃｅｌｌ． Ｂｉｏｌ． ４：２０７２－２０８１ （１９８５）； Ｗｏｎｄｉｓｆｏｒｄ， ｅｔ ａｌ．， Ｍｏｌ． Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ． ２：３２－３９ （１９８８）； Ｔｒａｔｓｃｈｉｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｖｉｒｏｌ． ５１：６１１－６１９ （１９８４）；及びＦｌｏｔｔｅ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ２６８：３７８１－３７９０ （１９９３）参照）。
ウイルス導入法に加えて、非ウイルス法を使用して、対象の組織においてインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸配列の発現を引き起こすこともできる。遺伝子導入のほとんどの非ウイルス性の方法は、高分子の取り込みと細胞内輸送を、哺乳動物細胞によって使用される通常の機序に依存している。幾つかの実施形態では、非ウイルス送達系は、標的細胞による対象遺伝子の取り込みをエンドサイトーシス経路に依存している。このタイプの例示的な送達系としては、リポソーム由来系、ポリリジンコンジュゲート、及び人工ウイルスエンベロープが挙げられる。他の実施形態としては、Ｍｅｕｌｉ， ｅｔ ａｌ．， Ｊ． Ｉｎｖｅｓｔ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ． １１６ （１）：１３１－１３５ （２００１）； Ｃｏｈｅｎ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ ７ （２２）：１８９６－９０５ （２０００）；又はＴａｍ， ｅｔ ａｌ．， Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ． ７ （２１）：１８６７－７４ （２０００）に記載されているようなプラスミド注入系が挙げられる。
臨床現場では、送達系は、それぞれが当技術分野でよく知られているいくつかの方法のいずれかによって対象に導入することができる。例えば、送達系の医薬製剤は、例えば、静脈内注射によって全身的に導入することができる。標的細胞におけるタンパク質の特異的形質導入は、主に、送達ビヒクルによって提供されるトランスフェクションの特異性、受容体遺伝子の発現を制御する転写調節配列による細胞型若しくは組織型の発現、又はそれらの組合せから生じる。他の実施形態では、組換え遺伝子の最初の送達は、動物への導入が極めて限局化されているためにより制限されている。例えば、送達ビヒクルは、カテーテル（米国特許第５，３２８，４７０号参照）又は定位注射（例えば、Ｃｈｅｎ， ｅｔ ａｌ．， ＰＮＡＳ ９１： ３０５４－３０５７ （１９９４））によって導入することができる。
治療用構築物の医薬製剤は、本質的に、許容される希釈剤中の送達系からなり得るか、又は送達ビヒクルが埋め込まれている徐放性マトリックスを含み得る。或いは、完全な送達系が組換え細胞、例えばレトロウイルスベクターから無傷で産生され得る場合、医薬製剤は、その送達系を生産する１つ以上の細胞を含み得る。
治療方法
一態様では、本発明は、本明細書に開示されるように、有効量のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）を投与することを含む、それを必要とする患者（例えば、ＨＢＶに感染した患者）を治療する方法を提供する。本発明は又、ＨＢＶの治療のための薬剤の調製における、本明細書に開示されるように、インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸配列（例えば、ｍＲＮＡ）の使用を提供する。特定の実施形態では、本発明は、そのような治療を必要とする哺乳動物対象において障害及び／又は症状、例えば、ＨＢＶ関連障害及び／又はＨＢＶ関連症状の治療のためのキット及び方法を提供する。特定の例示的実施形態では、対象はヒトである。
本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列は、多くの異なる用途において有用である。例えば、一実施形態では、対象インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列は、ＨＢＶ感染細胞からのＨＢｅＡｇ放出を低減するために有用である。幾つかの実施形態では、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける初代肝細胞によるＨＢｅＡｇ放出を１ｎｇ／ｍＬで少なくとも１０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも２０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも３０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも４０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも５０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも６０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも７０％、１ｎｇ／ｍＬで少なくとも８０％、又は１ｎｇ／ｍＬで少なくとも８５％低減する。幾つかの実施形態では、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける初代肝細胞によるＨＢｅＡｇ放出を１ｎｇ／ｍＬで少なくとも１２％低減する。幾つかの実施形態では、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおける初代肝細胞によるＨＢｅＡｇ放出を１ｎｇ／ｍＬで最大９０％低減する。関連の実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、３０ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50で、好ましくは１０ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50で、より好ましくは１ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＨＢｅＡｇ放出を低減する。
別の実施形態では、対象インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらのコードする核酸配列は、ＨＢＶ感染細胞においてｃｃｃＤＮＡのｐｇＲＮＡ転写を低減するために有用である。
別の実施形態では、対象インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列は、本明細書に記載されるように（後掲）、ＨＢＶ感染に関連する１以上の症状及び／又は合併症を低減するために有用である。
特定の実施形態では、対象インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列は、慢性ＨＢＶ感染に関連する１以上の障害、症状及び／又は合併症、例えば、数年の期間をかけて肝硬変に至る肝臓の慢性炎症（慢性肝炎）；肝細胞癌（ＨＣＣ）；膜性糸球体腎炎（ＭＧＮ）の発生；死亡リスク；急性壊死性血管炎（結節性多発性動脈炎）、膜性糸球体腎炎、及び小児期の丘疹性皮膚炎（ジアノッティ－クロスティ症候群）；ＨＢＶ関連腎症（例えば、膜性糸球体腎炎）；免疫性炎症性疾患（例えば、本態性混合型寒冷グロブリン血症、再生不良性貧血）などを軽減するために有用である。
特定の実施形態では、対象インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列は、急性ＨＢＶ感染、例えば、急性ウイルス肝炎に関連する１以上の症状及び／又は合併症（一般的な健康障害、食欲不振、悪心、嘔吐、身体疼痛、軽度の発熱、及び暗色尿で始まり、黄疸、劇症肝不全、及び／又は血清病様症候群の発症に進行する）；食欲不振；関節痛及び筋肉痛；微熱；胃痛；嘔吐；黄疸；膨満した胃などを軽減するために有用である。
よって、本発明は又、ヒト又は動物に、有効な非毒性量のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれをコードする核酸配列を投与することにより、ヒト又は他の動物におけるＨＢＶ感染に関連する１以上の障害、症状及び／又は合併症を治療する方法に関する。当業者は、慣例の実験により、ＨＢＶ感染を治療する目的で、インターフェロン会合抗原結合タンパク質又はそれをコードする核酸配列の有効な非毒性量がどれであるかを決定することができるであろう。
例えば、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質の「治療上有効な量」は、対象の病期（例えば、急性と慢性）、年齢、性別、医学的合併症（例えば、ＨＩＶ同時感染、免疫抑制性の病態又は疾患）及び体重、並びに対象において所望の応答を誘発するインターフェロン会合抗原結合タンパク質の能力などの因子に応じて変化し得る。投与計画は、最適な治療応答を提供するように調整することができる。例えば、いくつかの分割された用量が毎日投与され得るか、又は用量は、治療状況の緊急性によって示されるように比例して低減され得る。
一般に、本発明で提供される組成物は、非感染細胞を予防的に処置するか、又はインターフェロン会合抗原結合タンパク質によるＨＢＶ感染細胞の標的化を可能にする抗原マーカーを含む任意のＨＢＶ感染細胞を治療的に処置するために使用され得る。
医薬組成物及びこれらの投与
特定の実施形態では、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質又はそれらをコードする核酸配列（ベクター又はベクター系を含む）が医薬組成物に含まれる。本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列を調製し、対象に投与する方法は周知であるか、又は本明細書及び当技術分野における知識を指針として使用して当業者により容易に決定され得る。本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列の投与経路は、経口、非経口、吸入又は局所であり得る。「非経口」という用語は、本明細書において使用する場合、静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与又は膣投与を含む。これらの投与形態は全て、本発明の範囲内であると明確に企図されるが、投与形態は、注射、特に静脈内又は動脈内注射又は点滴のための溶液である。通常、注射に適した医薬組成物は、緩衝剤（例えば、酢酸塩、リン酸塩又はクエン酸塩緩衝液）、界面活性剤（例えば、ポリソルベート）、場合により安定剤（例えば、ヒトアルブミン）などを含み得る。いくつかの実施形態では、緩衝剤は酢酸塩である。別の実施形態では、緩衝剤はギ酸塩である。更に別の実施形態では、緩衝剤はクエン酸塩である。関連する実施形態において、界面活性剤は、プルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール及びチロキサパルからなるリストから選択され得る。好ましい実施形態では、界面活性剤はポリソルベートである。より好ましい実施形態では、界面活性剤は、ポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０又はポリソルベート１００、好ましくはポリソルベート２０又はポリソルベート８０である。
幾つかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらをコードする核酸配列は、有害な細胞集団（例えば、肝臓）の部位に直接送達され、それにより、治療薬への病変組織の曝露を増加させ得る。
非経口投与のための製剤には、滅菌水性又は非水性の溶液、懸濁液、及びエマルションが含まれる。非水性溶媒体の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油などの植物油、及びオレイン酸エチルなどの注射可能な有機エステルである。水性担体には、水、アルコール／水溶液、エマルション、又は生理食塩水及び緩衝媒体を含む懸濁液が含まれる。本発明の組成物及び方法において、薬学的に許容される担体としては、限定されるものではないが、０．０１～０．１Ｍ、例えば、０．０５Ｍリン酸緩衝液、又は０．８％生理食塩水が挙げられる。他の一般的な非経口ビヒクルとしては、リン酸ナトリウム溶液、リンゲルのデキストロース、デキストロースと塩化ナトリウム、乳酸加リンゲル液、又は硬化油が挙げられる。静脈内ビヒクルとしては、液体及び栄養素補充剤、リンゲルのデキストロースに基づくものなどの電解質補充剤などが挙げられる。例えば、抗菌剤、抗酸化剤、キレート剤、及び不活性ガスなどの防腐剤及び他の添加剤も存在してよい。より具体的には、注射可能な使用に適した医薬組成物には、無菌の水溶液（水溶性の場合）又は分散液、及び無菌の注射可能な溶液又は分散液の即時調製のための無菌粉末が含まれる。このような場合、組成物は無菌でなければならず、容易なシリンジ性が存在する程度に流動性でなければならない。製造及び保存の条件下で安定している必要があり、通常、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用から保護される。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセロール、プロピレングリコール、及び液体ポリエチレングリコールなど）、及びこれらの好適な混合物を含む溶媒又は分散媒であり得る。適切な流動性は、例えば、レシチンなどのコーティングの使用、分散の場合には必要な粒径の維持、及び界面活性剤の使用によって維持することができる。
微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどによって達成することができる。多くの場合、等張剤、例えば、糖、ポリアルコール、例えば、マンニトール、ソルビトール、又は塩化ナトリウムが組成物に含まれる。注射可能な組成物の長期吸収は、吸収を遅らせる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを組成物に含めることによってもたらすことができる。
いずれの場合も、無菌注射溶液は、必要に応じて、本明細書に列挙された成分の１つ又は組合せを含む適切な溶媒中に、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又は前記インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードする核酸などの活性化合物を単独で、又は他の有効薬剤と組み合わせて必要な量で配合し、次いで、濾過除菌を行うことによって調製することができる。一般に、分散液は、有効化合物を、塩基性分散媒及び上記に列挙されたものからの必要な他の成分を含む無菌ビヒクルに配合することによって調製される。無菌注射溶液を調製するための無菌粉末の場合、例示的な調製方法は、真空乾燥及び凍結乾燥を含み、これにより、予め濾過除菌されたその溶液から有効成分及び任意の付加的な所望の成分の粉末が生成される。注射用の製剤は処理され、アンプル、バッグ、ボトル、シリンジ又はバイアルなどの容器に充填され、当技術分野で公知の方法に従って無菌条件下で密封される。更に、製剤は、キットの形態で包装及び販売され得る。このような製品は一般に、関連する組成物がＨＢＶ感染に苦しむ対象を治療するために有用であることを示すラベル又はパッケージ挿入物を有するであろう。
上記のＨＢＶ感染関連病態の治療のための本発明の組成物の有効用量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるか動物であるか、投与された他の薬剤、及び治療が予防的であるか治療的であるかを含む多くの異なる因子に応じて異なる。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物、特に非ヒト霊長類を含む非ヒト哺乳動物も治療することができる。安全性及び有効性を最適化するために、当業者に公知の慣例法を使用して、治療用量を微調整することができる。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質による治療の場合、用量は、宿主体重の例えば約０．０００１～約１００ｍｇ／ｋｇ、より通常には約０．０１～約５ｍｇ／ｋｇ（例えば、約０．０２ｍｇ／ｋｇ、約０．２５ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ、約０．７５ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ、約２ｍｇ／ｋｇなど）の範囲であり得る。例えば、用量は、約１ｍｇ／ｋｇ体重又は約１０ｍｇ／ｋｇ体重又は約１～約１０ｍｇ／ｋｇの範囲、例えば、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇであり得る。上記範囲の中間の用量も本発明の範囲内であることが意図される。対象には、そのような用量を毎日、隔日、毎週、又は経験的分析によって決定された他の任意のスケジュールに従って投与することができる。例示的治療は、長期間、例えば、少なくとも６ヶ月にわたる複数の用量での投与を伴う。更なる例示的治療計画は、約２週間に１回、又は約１か月に１回、又は約３～６か月に１回の投与を伴う。例示的投与計画には、連続日で約１～約１０ｍｇ／ｋｇ又は約１５ｍｇ／ｋｇ、隔日で約３０ｍｇ／ｋｇ、又は約毎週６０ｍｇ／ｋｇが含まれる。
インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はこれらのいずれかを発現する核酸配列は、複数回投与することができる。単回投与の間隔は、毎週、毎月、又は毎年であり得る。患者におけるその成分のインターフェロン会合抗原結合タンパク質の血中レベルを測定することによって示されるように、間隔はまた不定期であってもよい。或いは、インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はこれらのいずれかを発現する核酸配列を徐放性製剤として投与することもでき、その場合、より低頻度の投与が必要とされる。用量及び頻度は、患者中でのインターフェロン会合抗原結合タンパク質の半減期によって異なる。
本明細書で言及される「半減期」又は「ｔ１／２」という用語は、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質などの化合物の安定性及び／又はクリアランス速度に関する。実際には、化合物の半減期は通常、血清中で測定され、血清濃度が投与時の血清濃度の５０％である投与後の時間を示す。本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、マウスにおける長い血清半減期を特徴とする。いくつかの実施形態において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の半減期は、少なくとも５０時間、少なくとも６０時間、少なくとも７０時間、少なくとも８０時間、少なくとも９０時間、又は少なくとも１００時間である。いくつかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の半減期は、少なくとも１００時間である。好ましい実施形態では、マウスにおけるインターフェロン会合抗原結合タンパク質の半減期は、１１６～１５８時間の範囲である。
タンパク質の半減期は、そのクリアランスに関連する。「クリアランス」又「クリアランス速度」という用語は、本明細書において使用する場合、単位時間当たりにタンパク質が除去された血漿の量を指す。本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランスは低い。幾つかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランスは、１０ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満、５ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満、２．５ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満、１ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満、又は０．５ｍＬ未満である。幾つかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランスは、５ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満である。幾つかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランスは、１ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満である。幾つかの実施形態では、マウスにおけるインターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランスは、０．２８～０．４９ｍＬ／ｈ／ｋｇの範囲である。
「分布容積」、「ＶD」、「ＶSS」又は「見掛けの分布容積」は、本明細書において使用する場合という用語は、本発明のインターフェロン会合抗原などの投与された化合物の総量を血漿中で観察されるのと同じ濃度で含むために必要となる理論的容積を指し、経口又は非経口投与後の血漿と体の残りの部分との間の前記化合物の分布に関係する。特定の実施形態において、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の分布容積Ｖｓｓは、５００ｍＬ／ｋｇ未満、４００ｍＬ／ｋｇ未満、３００ｍＬ／ｋｇ未満、２００ｍＬ／ｋｇ未満、又は１００ｍＬ／ｋｇ未満である。幾つかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の分布容積Ｖｓｓは、１００ｍＬ／ｋｇ未満である。幾つかの実施形態では、マウスにおけるインターフェロン会合抗原結合タンパク質の分布容積Ｖｓｓは、５０～９８ｍＬ／ｋｇの範囲である。
別の関連する薬物動態パラメーターは、全身曝露である。本明細書で使用される場合、「全身曝露」、「ＡＵＣ」又は「曲線下面積」という用語は、濃度－時間曲線の積分を指す。全身曝露は、血漿（血清又は血液）濃度又は親化合物及び／又は代謝物のＡＵＣによって表すことができる。本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、それらの親抗体よりも高い全身曝露（ＡＵＣ（０－ｉｎｆ））で血中を循環する。幾つかかの実施形態では、親抗体は、ＣＰ８７０，８９３である。他の実施形態では、親抗体は３Ｇ５である。幾つかの実施形態では、インターフェロン会合抗原結合タンパク質の全身曝露は、少なくとも６００μｇ*ｈ／ｍＬ、少なくとも７００μｇ*ｈ／ｍＬ、少なくとも８００μｇ*ｈ／ｍＬ、少なくとも９００μｇ*ｈ／ｍＬ又は少なくとも１０００μｇ*ｈ／ｍＬ、好ましくは少なくとも１０００μｇ*ｈ／ｍＬである。幾つかの実施形態では、マウスにおけるインターフェロン会合抗原結合タンパク質の全身曝露は、１０３３μｇ*ｈ／ｍＬ～１７９３μｇ*ｈ／ｍＬの範囲である。
前述のように、本発明のインターフェロン会合抗原結合タンパク質は、哺乳動物障害のｉｎ ｖｉｖｏ治療のために薬学上有効な量で投与され得る。これに関して、開示されているように、インターフェロン会合抗原結合タンパク質は、投与を容易にし、活性剤の安定性を促進するように調剤されることが認識されるであろう。
本発明による医薬組成物は、生理食塩水、非毒性緩衝液、防腐剤などの薬学上許容される非毒性の無菌担体を含み得る。インターフェロン会合抗原結合タンパク質の薬学上有効な量は一般に、ＨＢＶ感染細胞からのＨＢｅＡｇ放出の減少；ＨＢＶ感染細胞におけるｐｇＲＮＡ転写の減少；及び感染細胞におけるＩＦＮシグナル伝達経路の刺激のうち１以上を媒介するために十分な量である。当然のことながら、本発明の医薬組成物は、薬学上有効な量のインターフェロン会合抗原結合タンパク質を提供するために、単回又は複数回の用量で投与することができる。
本発明の範囲に沿って、インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらのいずれかを発現する核酸配列は、前述の治療方法に従って、ヒト又は他の動物に、治療効果を生じるために十分な量で投与することができる。インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらのいずれかを発現する核酸配列は、インターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらのいずれかを発現する核酸配列を、既知の技術に従って薬学上許容される担体又は希釈剤と組み合わせることによって調製される慣例の剤形で、このようなヒト又は他の動物に投与することができる。薬学上許容される担体又は希釈剤の形態及び特徴は、それが組み合わされる有効成分の量、投与経路、及び他の周知の変数によって決定されることが当業者によって認識されるであろう。当業者は更に、本明細書に記載されている少なくとも１種以上のインターフェロン会合抗原結合タンパク質、又はそれらのいずれかを発現する核酸配列を含むカクテルが効果的であることを認識するであろう。
本発明に記載される方法は、特定の方法及び本明細書に開示される実験条件に限定されず、そのような方法及び条件は変更可能であると理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は、特定の実施形態を説明することのみを目的としており、限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。
更に、本明細書に記載の実験は、別段の断りのない限り、当技術分野の技術の範囲内の従来の分子及び細胞生物学的及び免疫学的技術を使用する。そのような技術は当業者に周知であり、文献で十分に説明されている。例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ， ｅｔ ａｌ．，編， Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ， Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ， Ｉｎｃ．， ＮＹ， Ｎ．Ｙ． （１９８７－２００８）（全ての補遺を含む）， Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ （Ｆｏｕｒｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ） ｂｙ ＭＲ Ｇｒｅｅｎ ａｎｄ Ｊ． Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｈａｒｌｏｗ ｅｔ ａｌ．， Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ： Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ， Ｃｈａｐｔｅｒ １４， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ， Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ （２０１３， 第２版）参照。
別段の定義がない限り、本明細書で使用される科学用語及び技術用語は、当業者によって共通に理解される意味を有する。潜在的なあいまいさが生じた場合、ここで提供される定義が辞書又は外部定義よりも優先される。文脈上別段の必要がない限り、単数形には複数形が含まれ、複数形には単数形が含まれるものとする。「又は」の使用は、別段の明記がない限り、「及び／又は」を意味する。「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」という用語、並びに「含む（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」及び「含まれる」などの他の形式の使用は、限定的ではない。「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語の使用には、別段の明記がない限り、「からなる」という用語が含まれるものとする。
一般に、本明細書に記載の細胞及び組織培養、分子生物学、免疫学、微生物学、遺伝学並びにタンパク質及び核酸化学並びにハイブリダイゼーションに関連して使用される命名法は周知であり、当技術分野で一般的に使用されている。本明細書で提供される方法及び技術は一般に、当技術分野で周知の従来の方法に従って、特段の明記がない限り本明細書全体で引用及び論じられる様々な一般的且つより具体的な参考文献に記載されるように実施される。酵素反応及び精製技術は、当技術分野で一般的に達成されているように、又は本明細書に記載されているように、製造業者の仕様に従って実施される。本明細書に記載の分析化学、合成有機化学、並びに医薬品化学及び医薬化学に関連して使用される命名法、及びそれらの実験手順及び技術は当技術分野で周知であり、一般的に使用されているものである。標準的な技術は、化学合成、化学分析、医薬品の調製、調剤、及び送達、並びに患者の治療に使用される。
本明細書で使用される節の見出しは編成を目的とするに過ぎず、記載されている主題を制限するものとして解釈されるべきではない。文献、特許及び特許出願の内容、並びに本明細書で言及又は引用されている他の全ての文書及び電子的に入手可能な情報は、各個の刊行物が具体的且つ個々に本明細書の一部として援用されることが示されている場合と同程度に、それらの全内容が本明細書の一部として援用される。出願人は、そのような文献、特許、特許出願、又はその他の物理的及び電子的文書からのあらゆる資料及び情報を本願に物理的に組み込む権利を留保する。
本発明をその特定の実施形態を参照して説明してきたが、本発明の真の趣旨及び範囲から逸脱することなく、本開示を指針として使用して様々な変更を行うことができ、同等物と置き換えることができることが当業者により理解されるべきである。ここで特定の実施形態を詳細に説明してきたが、以下の実施例を参照することにより、同じことがより明確に理解されるであろう。これらの実施例は単に例示を目的として含まれ、限定を意図するものではない。
実施例Ｉ
アゴニスト抗ＣＤ４０抗体ＣＰ８７０，８９３に基づくインターフェロン融合抗体（ＩＦＡ）の作製及びリポーター細胞における特性評価
Ｉ．ａ－ＩＦＡの設計
ＣＰ８７０，８９３アゴニスト抗ＣＤ４０抗体をバックボーン抗体として設計した例示的ＩＦＡの配列組合せを、ＩＦＮの位置及びリンカーの性質と共に表７及び表９に示す。表７に示すように、ＩＦＮは、軽鎖（ＬＣ）又は重鎖（ＨＣ）のＮ末端又はＣ末端部分でリンカーを介して融合された。ＨＣ、ＬＣ、又は融合体をコードする核酸は、最適化された哺乳動物発現コドンを用いて合成し、ｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などの真核生物発現ベクターにクローニングした。図２Ａは、ｐＣＭＶプロモーターの制御下に配列番号３２をコードするｐｃＤＮＡ３．１プラスミドの例示的マップを示す。
Ｉ．ｂ－ＩＦＡの生産
フリースタイル２９３－Ｆ細胞（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を、ＨＣ／ＬＣ比４／６でＨＣとＬＣの両方をコードするプラスミドで一過性に同時トランスフェクトした。トランスフェクション６日後に、上清を回収し、遠心分離し、０．２２μｍフィルターで濾過した。精製工程は、ＡｋｔａＥｘｐｒｅｓｓクロマトグラフィーシステム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）で、Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ ＭａｂＳｅｌｅｃｔ Ｓｕｒｅ ５ｍＬ １．６／２．５ｃｍカラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を５ｍＬ／分の流速で使用する２段階の精製ステップで実行した。サンプルの結合はＤ－ＰＢＳ１Ｘ ｐＨ７．５バッファー中で行い、グリシン／ＨＣｌ ０．１Ｍ ｐＨ３．０バッファーで溶出した。溶出ピークをループに保存し、次いで、ＨｉＴｒａｐ脱塩２６／１０カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）に、Ｄ－ＰＢＳ１Ｘ ｐＨ７．５バッファーを１０ｍＬ／分の流速で注入した。溶出ピークを９６ウェルマイクロプレート（２ｍＬフラクション）に収集した。プールは、ＵＶピークプロファイルに従って行った。０．２２μｍフィルター（Ｓａｒｔｏｒｉｕｓ ＭｉｎｉＳａｒｔ）で濾過した後、Ｅｎｄｏｓａｆｅ（登録商標）ｎｅｘｇｅｎ－ＰＴＳ（商標）（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ）を使用する細菌内毒素、純度及びオリゴマーを決定するためにＳＥＣ ２００ Ｉｎｃｒｅａｓｅ １０／３００カラム（ＧＥ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ）を使用するサイズ排除クロマトグラフィー、及びＭＥＳ ＳＤＳランニングバッファー中、ＮｕＰＡＧＥゲルシステム（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）での還元及び非還元条件下でＳＤＳ－ＰＡＧＥを含む品質管理を行った。生産収率を表９に示す。一部のＩＦＡでは、生産収率が極めて低かった。その場合、アゴニストＣＤ４０活性とＩＦＮ活性は、更に精製することなく、ＩＦＡを含む上清を使用して直接評価した。
精製されたＩＦＡの還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、ＨＣ及びＬＣに対応する２つの主要なバンドの存在を示した。ＩＦＮ（ＩＦＮファミリーメンバーが何であれ）をＨＣに融合した場合、その分子量のシフトが観察され、ＩＦＮと融合したＬＣでも同じ現象が観察された（図２Ｂ）。
Ｉ．ｃ－リポーター細胞のＩＦＡ特性評価
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎカタログ番号：ｈｋｂ－ｃｄ４０）又はＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号：ｈｋｂ－ｉｆｎαβ）を、ＣＤ４０アゴニストによるＮＦκＢ経路の活性化又はＩ型ＩＦＮによって誘導されるＩＦＮ経路の活性化をそれぞれ監視するために使用した。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌは、ＣＤ４０アゴニストの生物活性を測定するために、ヒトＣＤ４０遺伝子及びＮＦκＢ誘導性分泌型胚性アルカリホスファターゼ（ＳＥＡＰ）構築物（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ）によるＨＥＫ２９３細胞の安定トランスフェクションによって作出した。ＣＤ４０を刺激するとＮＦκＢが誘導され、次にＳＥＡＰが生産され、これは、ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（商標）（Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ、カタログ番号ｒｅｐ－ｑｂｓ２）を使用して上清中に検出される。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ細胞は、Ｉ型ＩＦＮによって誘導されるＪＡＫ／ＳＴＡＴ／ＩＳＧＦ３経路の活性化を監視するように設計されている。この経路の活性化は、ＳＥＡＰの生産及び放出を誘導する。ＳＥＡＰレベルは、ＱＵＡＮＴＩ－Ｂｌｕｅ（商標）を使用して上清中で容易に評価される。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／βは、ヒトＩＦＮα又はＩＦＮβの活性を監視するために使用される。
細胞を９６ウェルプレートに播種し（ウェル当たり５０，０００細胞）、各ＩＦＡ又は対照について示された濃度で刺激し、３７℃で２４時間インキュベートした。次に、上清を回収し、上清を約３０分間、ＱｕａｎｔｉＢｌｕｅ（商標）と共にインキュベートし、Ｅｎｓｉｇｈｔプレートリーダー又はＰｈｅｒａＳｔａｒ（Ｌａｂ Ｂｉｏｔｅｃｈ）にて６２０ｎｍで光学密度（Ｏ．Ｄ．）評価を行った後、ＳＥＡＰレベルを定量した。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）デュアルＩＦＮ－γ細胞（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号：ｈｋｂ－ｉｆｎｇ）又はＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－λ（ＩｎｖｉｖｏＧｅｎ、カタログ番号：ｈｋｂ－ｉｆｎｌ）を使用して、それぞれＩＩ型及びＩＩＩ型ＩＦＮの活性を監視することができる。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－λ細胞は、ＩＦＮλの活性を監視するように設計されている。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）デュアルＩＦＮ－γ細胞は、生物活性のあるヒトＩＦＮγの検出を可能にする。
Ｉ．ｄ－リポーター細胞に対するＩＦＮα／βに基づくＩＦＡの機能的活性
図３は、ＩＦＡの用量応答の例を示し、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ（図３Ａ～３Ｂ）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞（図３Ｃ～３Ｄ）上で、表７に明示されているようなＩＦＮβ又はその変異型が表７に示されているようにＨＣに融合された。ＩＦＡのアゴニスト抗ＣＤ４０活性を表９にまとめ、例を図３Ａ及び図３Ｂに示す。結果は、試験した全てのＩＦＡが、ＣＤ４０経路とＩＦＮ－α／β経路の両方を用量依存的に活性化するように機能することを示す。ＨＣ又はＬＣのＣ末端への融合の場合、アゴニストＣＤ４０のＥＣ50値は１１．１ｎｇ／ｍＬ～１９２ｎｇ／ｍＬの範囲である（表９）。図３に示す実験では、親抗体の平均ＥＣ50値は４８ｎｇ／ｍＬ及び５７ｎｇ／ｍＬである。ＨＣ又はＬＣのＮ末端にＩＦＮが融合されたＩＦＡもＣＤ４０経路を活性化できたが、これらのＩＦＡに関して、精製タンパク質を使用せずに上清から直接活性を測定したために正確なＥＣ50値は測定できなかった（図３Ｂ）。
様々なＩＦＡのＩＦＮ活性を表９にまとめ、例を図３Ｃ～３Ｄに示す。ＩＦＮβ又は変異型ＩＦＮβ（表７に明示）をＨＣ又はＬＣのＣ末端へ融合した場合、ＩＦＮ活性はリンカー配列に応じて変化し、ＥＣ50値は０．１４ｎｇ／ｍＬ～４．５ｎｇ／ｍＬの範囲である（図３Ｃ及び表９）。図３Ｄは、ＩＦＮβがＮ末端部分に融合されたＩＦＡは高いＩＦＮ活性を示すことを示している。陰性対照として使用した親抗体は活性を示さなかったが、組換えＩＦＮβは強い用量依存的応答を示す。まとめると、これらの結果は、ＩＦＮβ又は表７に明示されているようなその変異型の抗体との融合が、場所に関係なく、効力の点で違いはあるものの、両方の生物学的機能を維持することを示す。
図４は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ（図４Ａ及び図４Ｃ）並びに及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞（図４Ｂ及び図４Ｄ）で、表７に示すようにＩＦＮαがＨＣ又はＬＣに融合されたＩＦＡの用量応答の例を示す。結果は、試験した全てのＩＦＡが、ＣＤ４０経路とＩＦＮα／β経路の両方を用量依存的に活性化するように機能していることを示す。意外にも、全てのＩＦＮαに基づくＩＦＡについて、ＣＤ４０経路の効力は親抗体の効力よりも再現性よく高かった。ＩＦＮαに基づくＩＦＡのＥＣ50値は１１．１ｎｇ／ｍＬ～２２．７ｎｇ／ｍＬの範囲であり、ＣＰ８７０，８９３のＥＣ50は３０ｎｇ／ｍＬ～８０ｎｇ／ｍＬの範囲であった（平均ＥＣ50値：４８ｎｇ／ｍＬ）。
ＩＦＡのＩＦＮ活性は、リンカー配列によって異なり、ＥＣ50値は１．６ｎｇ／ｍＬ～５．１ｎｇ／ｍＬの範囲である。同じアッセイで、ＰＥＧ化ＩＦＮα２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（登録商標））も用量依存的に活性があり、ＥＣ50値は約１ｎｇ／ｍＬであった。
Ｉ．ｅ－Ｆｃ領域を有さないＩＦＡの作製及び特徴評価
本発明による好適な構築物は又、Ｆｃ領域を有さないインターフェロン会合抗原結合タンパク質であり得る。ＴＥＶ－Ｈｉｓタグに融合されたＣＰ８７０，８９３のｆａｂフラグメントの重鎖をコードする構築物を設計し（配列番号５０）、発現プラスミドｐｃＤＮＡ３．１にクローニングした。この構築物は、前述のようにＨＥＫ細胞で、配列番号２８、配列番号２９、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号４１、配列番号４２、又は配列番号４３などの種々のＩＦＮにリンカーを介して融合されたＬＣと共に同時トランスフェクトされた。タンパク質及び／又は上清を、リポーター細胞及び／又はＰＨＨのＨＢＶ感染に対するそれらの作用響で評価する。当業者は、療法に使用するための構築物がもはやＴＥＶ－Ｈｉｓタグを含まないことを理解するであろう。これらの構築物も同様に本発明の実施形態である。Ｆｃ部分を有さないインターフェロン会合抗原結合タンパク質はＨＢＶ感染に対して活性がある。次に、２つのＩＦＡが作製され、それらの機能特性は例Ｖに記載されている：ＩＦＡ５０：（配列番号４１）＋（配列番号５０）及びＩＦＡ５１：（配列番号４２）＋（配列番号５０）。
実施例ＩＩ
ＨＢＶ感染初代肝細胞に対するＩＦＡの効果
実施例ＩＩＨＢＶに感染した初代肝細胞に対するＩＦＡの効果
ＩＩ．ａ－初代ヒト肝細胞におけるＨＢＶ感染に対するＩＦＡの効果
初代ヒト肝細胞（ＰＨＨ）におけるＨＢＶ感染に対するＩＦＡの効果を検討した。ＰＨＨ細胞を、９６ウェルプレート（７０，０００細胞／ウェル）の１０％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）（ＳＨ３００６６．０２、Ｈｙｃｌｏｎｅ）、インスリン（１９２７８－５ＭＬ、Ｓｉｇｍａ）、ヒドロコルチゾン（Ｈ２２７０－１００ＭＧ、Ｓｉｇｍａ）及びペニシリン／ストレプトマイシン（１５１４０、Ｇｉｂｃｏ）を追加したＷｉｌｌｉａｍのＥ ＧｌｕｔａＭＡＸ培地（３２５５１－０２０、Ｇｉｂｃｏ）中に播種した。４時間後、細胞をすすぎ、培地を交換した。翌日、培地をマトリゲル含有培地（０．２５ｍｇ／ｍＬ；３５６２３１、Ｃｏｒｎｉｎｇ）に交換した。播種４８時間後に、細胞を、５％ＦＣＳ、４％ＰＥＧ ８０００（８１２６８、Ｓｉｇｍａ）、２％ＤＭＳＯ（ＤＭＳＯ－１００ＭＬ、Ｓｉｇｍａ）及び１％ペニシリン／ストレプトマイシンを追加したＩｎＶｉｔｒｏＧＲＯ ＨＩ培地（Ｚ９９００９、Ｂｉｏｒｅｃｌａｍａｔｉｏｎ ＩＶＴ）中に、５００～１，０００ｖｇｅ／細胞（ウイルスゲノム当量）のＭＯＩ（多重感染度）で感染させた。
感染１６時間後に、細胞をＰＢＳで３回洗浄した。感染４日後に、細胞は未処理のままにするか、図に示すように連続希釈したＩＦＡで処理した。処理３日後に、培養上清を回収し、更にタンパク質を検出するために－８０℃で保存した。
ＩＩ．ｂ．－ＨＢＶｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）放出アッセイ
細胞培養上清中のＨＢＶｅ－抗原（ＨＢｅＡｇ）レベルを、製造業者が記載しているようにＥＬＩＳＡを使用して測定し、結果をＰＥＩ Ｕｎｉｔ（ＨＢｅＡｇ ＣＬＩＡ ９６Ｔ／Ｋ：ＣＬ０３１２－２；Ａｕｔｏｂｉｏ）又は発光で表した。
ＩＩ．ｃ．－ＨＢＶｓ抗原（ＨＢｓＡｇ）放出アッセイ
上清中のＨＢｓＡｇの定量は、ＡｕｔｏＢｉｏ ＨＢｓＡｇ ＣＬＩＡキット（＃ＣＬ０３１０－２）のプロトコールに従って行い、主なステップは次の通りとした：まずサンプルを１×ＰＢＳで１／５希釈した。次に、５０μＬの標品、対照、及び希釈サンプルをウェルに入れた。５０μＬの「酵素コンジュゲート」溶液を各ウェルに加え、３７℃で１時間インキュベートした。続いて、プレートウォッシャーを使用して、キットの洗浄溶液３００μＬでプレートを６回洗浄した。次に、５０μＬの「基質溶液」（試薬Ａ及びＢ中容量／容量混合物）を各ウェルに添加し、暗所で１０分間のインキュベーションを行った。その後、プレートを、ＰＨＥＲＡＳＴＡＲマイクロプレートリーダー（ＢＭＧＬａｂｔｅｃｈ）にて発光モードで読み取った。
ＩＩ．ｄ．－ｐｇＲＮＡの定量
ｑＰＣＲ技術を使用して、試験化合物で処理した感染細胞からのｐｇＲＮＡの発現レベルを比較した。感染細胞からのｐｇＲＮＡの定量は、９６ウェルプレートにてＱｕａｎｔ Ｓｔｕｄｉｏ １２ＫＦｌｅｘで行った。ｃＤＮＡはＲＴによって取得され、続いてＴａｑＭａｎ Ｆａｓｔ Ｖｉｒｕｓアッセイを使用したｑＰＣＲを１ステップで行った（ＴｈｅｒｍｏＦｉｓｈｅｒ カタログ番号４４４４４３４）。結果はΔΔＣｔ法によって処理し、二重鎖のハウスキーピング遺伝子ＧＵＳＢを用いて正規化した。ｐｇＲＮＡは、以下のプライマー及びプローブ：（プローブとしてフォワード：ＣＣＴＣＡＣＣＡＴＡＣＴＧＣＡＣＴＣＡ、リバース：ＧＡＧＧＧＡＧＴＴＣＴＴＣＴＴＣＴＡＧＧ、ＡＧＴＧＴＧＧＡＴＴＣＧＣＡＣＴＣＣＴＣＣＡＧＣ）を使用して増幅した。ＧＵＳＢ遺伝子は、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ（Ｈｓ９９９９９９０８－ｍ１）からのＴａｑＭａｎアッセイを使用した増幅した。
ＩＩ．ｅ．－ＣＸＣＬ１０放出
ＣＸＣＬ１０放出は、製造者の説明（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ ４３９９０４）に従ってＥＬＩＳＡキットを使用して評価した。サンプルを１／５０希釈し、発光をＥｎＳｉｇｈｔマイクロプレートリーダーにて４５０ｎｍで評価した。
ＩＩ．ｆ－ＨＢＶ感染に対するＩＦＮα／βに基づくＩＦＡの効果
幾つかのＩＦＡを、ＰＨＨのＨＢＶ感染後のＨＢｅＡｇ分泌を減少させるそれらの能力について試験した。図５では、ＬＣのＣ末端にＩＦＮβ又はその変異型が融合したＩＦＡを使用した。結果は、試験した全てのＩＦＡがＨＢｅＡｇの放出を強く減少させることを示す。実際に、試験した最低濃度（１ｎｇ／ｍＬ）でも、ＩＦＡに応じて、ＨＢｅＡｇ放出の７０％から９０％阻害が見られ、強力な抗ウイルス効果が付与されていることを示す。感染４日後に処置が開始され、その時点でＨＢｅＡｇ（ｍＲＮＡ及びタンパク質）の既存のプールが既に細胞内に存在し、その後も生産され続けるため、この実験では１００％の阻害には到達できなかったことは注目に値する。
ＩＦＮαに融合したＩＦＡの効果を、ＨＢＶに感染したＰＨＨでも試験した。図６は、これらのＩＦＡがＨＢＶ感染に対して極めて強力であり、ＥＣ50値は、ＨＣのＣ末端にＩＦＮα２ａが融合されたＩＦＡでは、０．０６ｎｇ／ｍＬ～０．２ｎｇ／ｍＬの範囲（ＩＦＡ２５：０．１６ｎｇ／ｍＬ、ＩＦＡ２６：０．１ｎｇ／ｍＬ；ＩＦＡ２７：０．０６ｎｇ／ｍＬ；及びＩＦＡ３８；約０．２ｎｇ／ｍＬ（約２．２ｐＭ）；図６Ａ及び図６Ｃ）であり、ＬＣのＣ末端にＩＦＮα２ａが融合されたＩＦＡでは０．１５ｎｇ／ｍＬ～０．３６ｎｇ／ｍＬの範囲（ＩＦＡ２８：０．３６ｎｇ／ｍＬ；ＩＦＡ２９：０．１５ｎｇ／ｍＬ；ＩＦＡ３０：０．３１ｎｇ／ｍＬ；及びＩＦＡ３９：約０．３ｎｇ／ｍＬ（約３ｐＭ）；図６Ｂ及び図６Ｃ）であった。ペガシスの抗ウイルス効果をＩＦＡ３８及びＩＦＡ３９と比較するために、結果をｐＭで表し、ＩＦＡ３８の約２．２ｐＭ及びＩＦＡ３９の約３ｐＭと比較して、ペガシスのＥＣ50は約２５０ｐＭであることを示し、これはＩＦＡがペガシスよりも遙かに強力であることを示している。
ＩＩ．ｇ－強力な抗ウイルス活性を誘導するために短期間の処理で十分である
ＨＢＶに感染した初代肝細胞の短期間のＩＦＡ処理の効果を評価するために、細胞を感染させ、４日間インキュベートし、ＩＦＡ２５、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２８、ＩＦＡ３０又はペガシスで２４時間、用量依存的に処理し、洗浄した後、処理せずに新鮮な培地でインキュベートした。３日後、ＨＢｅＡＧ（図。６Ｅ）、ＨＢｓＡＧ（図６Ｆ）及びＣＸＣＬ１０（図６Ｈ）の放出レベルを評価するために上清を回収し、細胞を溶解し、ｐｇＲＮＡの定量（図６Ｇ）のためにＲＮＡを抽出した。結果は、試験した全てのＩＦＡがＨｂｅＡＧ及びＨＢｓＡＧの放出、並びにｐｇＲＮＡの発現を用量依存的に阻害できたことを示す。ペガシス単独では、ＨＢｅＡＧの放出を阻害すること、及びｐｇＲＮＡレベルを低下させることができるに過ぎなかった。この点で、ＩＦＡはウイルスパラメーターに関してペガシスよりも少なくとも２ログ活性が高い。意外にも、試験した全てのＩＦＡはＨＢｓＡｇ放出の用量依存的な阻害を示したが、最高濃度でもペガシスでは低下は見られなかった。ＩＦＮ経路のバイオマーカーであるＣＸＣＬ１０の分析は、ＩＦＡもペガシスよりも遙かに強力であることを示した。
実施例ＩＩＩ
サイトカインの放出
ＩＩＩ．ａ－ヒト全血細胞からのサイトカイン放出評価（ＣＲＡ）
全血細胞（ＷＢＣ）ｅｘ ｖｉｖｏ刺激アッセイを使用して、ＩＦＡ刺激後のサイトカインの放出を検討した。４人の健常なドナーからＷＢＣを回収し、ＲＰＭＩ１６４０（７２４００－０２１、Ｇｉｂｃｏ）で１／３希釈し、滅菌反応試験管（３００μｌ）に分注した。細胞を刺激せずにおくか、陽性対照として１０ｎｇ／ｍＬのＬＰＳ（ＬｉｐｏＰｏｌｙＳａｃｃｈａｒｉｄｅ）Ｋ１２（ｔｌｒｌ－ｅｋｌｐｓ、Ｉｎｖｉｖｏｇｅｎ）で、又は１μｇ／ｍＬのＩＦＡで刺激し、３７℃で２４時間インキュベートした。次に、上清を回収し、分析の日まで－２０℃で凍結した。
ヒト炎症誘発性サイトカインは、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）－α、インターロイキン（ＩＬ）－１β、ＩＬ－２、ＩＬ－６、ＩＬ－８、ＩＬ－１０、ＩＬ－１２／ＩＬ－２３ｐ４０及びＩＦＮγを測定する多重化ＭＳＤアッセイ（Ｋ１５０６７Ｌ－４）を使用して分析した。ＭＳＤプレートは１３００ＭＥＳＯ ＱｕｉｃｋＰｌｅｘ ＳＱ１２０装置（ＭＳＤ）で分析した。
図７は、刺激されていないか、ＬＰＳ又はＩＦＡ１で処理されたヒトＷＢＣのｉｎ ｖｉｔｒｏサイトカイン放出評価からの例示的な結果を示している。
［００２１］ＩＦＮβ／変異型ＩＦＮβ及びＩＦＮαに基づくＩＦＡの試験からの結果を表１１ａ及び１１ｂにまとめる。結果は、全てのドナーについて、ＬＰＳが極めて高レベルの炎症性サイトカイン（ＩＬ－１β、ＴＮＦ－α、ＩＬ－６、ＩＬ－１２ｐ４０及びＩＦＮγ）を誘導することを示す。又、それはＩＦＮ経路のバイオマーカーであり中程度のレベルのＩＬ－１０であるＩＰ１０（ＣＸＣＬ１０）を誘導した。２つのＩＦＮβに基づくＩＦＡ（表１１ａ）と６つのＩＦＮαに基づくＩＦＡ（表１１ｂ）を試験した。それらは全て、バイオマーカーＩＰ１０を誘導した。しかしながら、それらはＩＬ－１０、ＩＬ－１β及びＩＬ－２を誘導せず、極めて低い～中程度のレベルのＩＦＮγ、ＩＬ－６及びＴＮＦ－αを誘導するに過ぎず、従って、炎症性サイトカインの誘導に関して有利な安全性プロファイルを示唆する。
実施例ＩＶ
薬物動態試験
ＩＶ．ａ－ＩＦＡ定量のためのＥＬＩＳＡアッセイの開発
ＥＬＩＳＡ定量のために、９６ウェルプレート（ＰＬＡＴＥ ９６ ｗｅｌｌｓ Ｍａｘｉｓｏｒｐ、ＴＨＥＲＭＯ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｑｕｅ；４４２４０４）を、炭酸ナトリウム（０．０５Ｍ、ｐＨ９．６、Ｃ－３０４１、Ｓｉｇｍａ）中、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に融合されたヒトＣＤ４０の細胞外ドメイン（ＣＤ４０－Ｆｃ；Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；１４９３－ＣＤＢ－０５０）０．５μｇ／ｍＬからなる１００μｌの組換えヒトＣＤ４０／ＴＮＦＲＳＦ５ Ｆｃキメラタンパク質で４℃にて一晩コーティングした。ひっくり返して空にした後、プレートをＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０－１％ミルク（ＳＩＧＭＡ；７０１６６－５００ｇ）と共に３７℃で１時間インキュベートし、続いてＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄した。次に、サンプル及び対照（１００μｌの１／２連続希釈液）を３７℃で９０分間インキュベートした後、３回洗浄し（ＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）、ＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０－１％ミルク中、二次抗ＩｇＧ２コンジュゲートＨＲＰ（１／５０００、ａｂ９９７７９、Ａｂｃａｍ）抗体又は抗ＩＦＮαコンジュゲートＨＲＰ（１／１０００、ｅＢＩＯＳＣＩＥＮＣＥ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ＢＭＳ２１６ＭＳＴ）と共にインキュベートした。ＰＢＳで３回洗浄した後、０．０５％Ｔｗｅｅｎ２、ＴＭＢ（テトラメチルベンジジン、Ｔｅｂｕ Ｂｉｏ；ＴＭＢＷ－１０００－０１）を添加し、プレートを暗所で２０分間インキュベートした。１Ｍ ＨＣｌを加えることにより反応を停止させた。プレートは、Ｅｎｓｉｇｈｔプレートリーダー（Ｐｅｒｋｉｎ Ｅｌｍｅｒ）を使用して４５０～６５０ｎｍで読み取った。ペガシスの定量は、同様のプロトコール手順を使用して評価したが、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ／ＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎからのヒトＩＦＮα適合抗体ペアを使用した。炭酸ナトリウム（０．０５Ｍ、ｐＨ９．６、Ｃ－３０４１、Ｓｉｇｍａ）中の１μｇ／ｍＬで、１００μＬのヒト抗ＩＦＮα抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ／Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；ＢＭＳ２１６ＭＳＴ）を使用して捕捉を行った。検出のために、ＰＢＳ－０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０－１％ミルク中、二次抗ＩＦＮαコンジュゲートＨＲＰ抗体（１／１０００、Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘ ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ／ＢＭＳ２１６ＭＳＴ；１５５０１７０７）を適用した。
ＩＶ．ｂ－マウスにおけるｉｎ ｖｉｖｏバイオアベイラビリティ
ＰＫパラメーターを決定するために、ＣＰ８７０，８９３、ＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２８、ＩＦＡ２９及びＩＦＡ３０を０．５ｍｇ／ｋｇで、又、ペガシスを０．３ｍｇ／ｋｇｉ．ｖで雄ＣＤ１－スイスマウスにボーラス投与し、種々の時点で血液サンプルを採取した。上記のＥＬＩＳＡアプローチを使用し、抗ＩＦＮαコンジュゲートＨＲＰで明らかにされた循環分子の定量例を図８Ａ及び８Ｂに示し、抗ＩｇＧ２コンジュゲートＨＲＰで明らかにされた定量例を図８Ｃに示す。ペガシスの定量を図８Ｄに示す。表１２Ａにまとめた一連の実験では、ＣＰ８７０，８９３のＰＫパラメーターが７日間の実験で調査され、ＩＦＡ２７、ＩＦＡ２９、及びＩＦＡ３０のＰＫパラメーターを１０日間の実験で調べた（ＩＦＡ２７の定量は２つの異なるＥＬＩＳＡアプローチを使用して行った）。表１２Ｂにまとめた別の一連の実験では、ＣＰ８７０，８９３及びＩＦＡ２５、ＩＦＡ２６、ＩＦＡ２８、及びペガシスのＰＫパラメーターを２１日間の実験で調べた（ＩＦＡ２５の定量は２つの異なるＥＬＩＳＡアプローチを使用して行った）。
短い分布段階の後、ＩＦＡの薬物動態プロファイルは、１１６～２１８時間の範囲の長い血清半減期によって特徴付けられる（表１２Ａ及び表１２Ｂ）。単回投与の１０日後でも循環レベルが高い６つの試験ＩＦＡで極めて類似したＰＫプロファイルが得られた。表１２Ａ／Ｂにまとめた薬物動態パラメーターは、これらのＩＦＡは意外にも、ＩＦＡの場合に１０３３μｇ．ｈ／ｍＬ～２５５２μｇ．ｈ／ｍＬの範囲という、親抗体ＣＰ８７０，８９３（最大３．２倍）の場合のそれぞれ５９０又は７９７μｇ．ｈ／ｍＬと比較して高い全身曝露量（ＡＵＣ（０－ｉｎｆ））で血中を循環していることを示し、これは又、ＩＦＡのクリアランス値がより低いことも反映している。分布容積Ｖｓｓは低く、５０～１０５ｍＬ／ｋｇにランク付けされ、この種の血漿血管容積（５０ｍＬ／ｋｇ）よりわずかに高かった。全てのＩＦＡについて、クリアランスは低いとランク付けされた（０．２８～０．４９ｍＬ／ｈ／ｋｇ）。興味深いことに、ペガシスのクリアランス（１．４ｍＬ／ｈｒ／ｋｇ）は、ＩＦＡのクリアランス（例えば、ＩＦＡ２７の場合は０．２ｍＬ／ｈｒ／ｋｇ）の最大７倍であり、ＩＦＡのより高い全身曝露を示している。
実施例Ｖ
Ｖ．ａ－リポーター細胞に対するＦｃ領域を有さないＩＦＡの機能的活性及びＨＢＶ感染
活性にＩＦＡのＦｃ部分が必要かどうかを決定するために、ＨＣのＦａｂフラグメントに関連するＬＣのＣ末端部分へのＩＦＮαの融合を設計及び作出した。ＩＦＮαは、（Ｇ４Ｓ）２（ＩＦＡ５０）又は（Ｇ４Ｓ）３（ＩＦＡ５１）リンカーでＬＣ部分に連結されていた。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞での評価は、そのようなＩＦＡが依然としてアゴニストＣＤ４０活性を示し（図９Ａ）、それぞれ約１２８ｎｇ／ｍｌ（ＩＦＡ５０）及び１２３ｎｇ／ｍＬ（ＩＦＡ５１）のＥＣ50値でＣＤ４０経路を活性化することを示した。
ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞に対するＩＦＮ活性の評価は、試験した両方のＩＦＡがＩＦＮ活性を示すことを示した（図９Ｂ）。ＥＣ50値は表９Ｂに報告されており、ＩＦＡ５０では約１．３６ｎｇ／ｍｌ、ＩＦＡ５１では１．４３ｎｇ／ｍＬである。
両方のＩＦＡを、前述のようにＨＢＶ感染で試験し、両方のＩＦＡは、それぞれ約４．１ｐＭ（ＩＦＡ５０）及び２．７ｐＭ（ＩＦＡ５１）のＥＣ50値で強力な抗ウイルス活性を示す。
Ｖ．ｂ－リポーター細胞及びＨＢＶ感染に対するＩＦＮεに基づくＩＦＡの機能的活性
第３のＩ型インターフェロン（ＩＦＮイプシロン；ＩＦＮε）に対するＣＰ８７０，８９３の融合も設計及び作製されている。このようなＩＦＡをＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞で試験し、それらがアゴニストＣＤ４０活性を維持することを実証することができた。このようなＩＦＡ（ＩＦＡ４９）の結果を図１０Ａに示す。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＩＦＮ－α／β細胞（実際にはＩ型インターフェロンによって活性化される）の評価は、ＩＦＡ４９がＩＦＮ－Ｉ経路も活性化できることを示した（図１０Ｂ）。ＥＣ50値を表９Ｂに報告する。更に、ＩＦＡ４９は又、初代肝細胞におけるＨＢＶ感染についても試験し、ペガシスと同様の活性を示した（図１０Ｃ）。
これらの結果は、ＩＦＮεを伴うＩＦＡがＩＦＮ及びアゴニストＣＤ４０の活性の両方を維持し（すなわち、二機能性であり）、抗ウイルス活性を有することを示した。
Ｖ．ｃ－リポーター細胞及びＨＢＶ感染に対するＩＦＮωに基づくＩＦＡの機能的活性
第４のＩ型インターフェロン（ＩＦＮオメガ；ＩＦＮω）に対するＣＰ８７０，８９３の融合も設計及び作製されている。このようなＩＦＡをＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞で試験し、結果はそれらがアゴニストＣＤ４０活性を維持することを示した。このようなＩＦＡ（ＩＦＡ４６）の結果を図１１Ａに示す。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ｈＩＦＮ－α／β細胞（実際にはＩ型インターフェロンによって活性化される）の評価は、ＩＦＡ４６がＩＦＮ－Ｉ経路も活性化できることを示した（図１１Ｂ）。ＥＣ50値を表９Ｂに報告する。更に、ＩＦＡ４６は又、初代肝細胞におけるＨＢＶ感染についても試験し、ペガシスと同様の活性を示した（図１１Ｃ）。
これらの結果は、ＩＦＮωを伴うＩＦＡがＩＦＮ及びアゴニストＣＤ４０の活性の両方を維持し（すなわち、二機能性であり）、抗ウイルス活性を有することを示した。
Ｖ．ｄ－リポーター細胞、ＨＢＶ感染に対するＩＦＮγに基づくＩＦＡの機能的活性
ＩＩ型インターフェロン（ＩＦＮガンマ；ＩＦＮγ）に対するＣＰ８７０，８９３の融合も設計及び作製されている。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞でのこれらのＩＦＡの評価は、それらが、ＩＦＮγがＬＣ（ＩＦＡ４２）のＣ末端部分に連結されているかＨＣ（ＩＦＡ４３）のＣ末端部分に連結されているかに関わらず、アゴニストＣＤ４０活性を維持することを示す（図１２Ａ）。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）－ＩＦＮγ細胞でのこれらのＩＦＡの評価（図１２Ｂ）は、それらがＩＦＮγ経路も活性化できることを示した。ＩＦＮγ活性は、ＩＦＡ４２（ＥＣ50：１５ｎｇ／ｍｌ）及びＩＦＡ４３（ＥＣ50：＜０．０１ｎｇ／ｍｌ）の間で多少異なっていた。ＥＣ50値を表９Ｂに報告する。更に、ＩＦＡ４２及びＩＦＡ４３を、前述のように、初代肝細胞のＨＢＶ感染に対して用量依存的に試験した。結果は、両方のＩＦＡが用量依存的にＨｂｅＡｇ放出を減少させることを示し（図１２Ｃ）、これはＩＩ型ＩＦＮを伴うＩＦＡにＨＢＶ感染に対する活性があることを示している。
まとめると、これらの結果は、ＩＦＮγを伴うＩＦＡがＩＦＮ及びアゴニストＣＤ４０活性の両方を維持し（すなわち、二機能性である）、を有することを示す。
Ｖ．ｅ－リポーター細胞及びＨＢＶ感染に対するＩＦＮλに基づくＩＦＡの機能的活性
ＩＩＩ型インターフェロン（ＩＦＮラムダ；ＩＦＮλ）に対するＣＰ８７０，８９３の融合も設計及び作製されている。これらのＩＦＡをＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞で試験し、結果は、それらが、ＩＦＮλがＬＣ（ＩＦＡ４４）のＣ末端部分に連結されているかＨＣ（ＩＦＡ４５）のＣ末端部分に連結されているかに関わらず、アゴニストＣＤ４０活性を維持することを示した（図１３Ａ）。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）－ＩＦＮλ細胞でのこれらのＩＦＡの評価は、それらがＩＦＮλ経路もできることを示した（図１３Ｂ）。ＥＣ50値を表９Ｂに報告する。これらの結果は又、ＩＦＮλを伴うＩＦＡがＩＦＮ及びアゴニストＣＤ４０活性の両方を維持する（すなわち、二機能性である）ことを示す。
ＩＦＡ４４及びＩＦＡ４５は、前述のように、初代肝細胞のＨＢＶ感染について単回投与でペガシスと比較して試験した。結果は、両方のタイプのＩＦＡがＨｂｅＡｇの放出をそれぞれ６５％及び７８％低減することを示す。これらの条件下で、ペガシスはＨｂｅＡｇの放出を８１％阻害した。これらの結果は、ＩＩＩ型ＩＦＮを伴うＩＦＡはＨＢＶ感染に対して活性があり、試験された両方のＩＦＡのＥＣ50値は１０ｎＭ未満であったことを示す（図１３Ｃ）。
実施例ＶＩ
抗ＣＤ４０抗体３Ｇ５に基づくインターフェロン融合抗体（ＩＦＡ）の作製及びリポーター細胞での特性評価
ＶＩ．ａ－ＩＦＡの設計
３Ｇ５抗ＣＤ４０抗体（Ｃｅｌｌｄｅｘ）をバックボーン抗体として用いて設計された例示的なＩＦＡの配列の組合せを、ＦＮの位置及びリンカーと共に表７及び表１０に示す。表７に示すように、ＩＦＮは、軽鎖（ＬＣ）又は重鎖（ＨＣ）のＣ末端部分にリンカーを介して融合された。ＨＣ、ＬＣ、又は融合体をコードする核酸は、最適化された哺乳動物発現コドンを用いて合成し、ｐｃＤＮＡ３．１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）などの真核生物発現ベクターにクローニングした。
ＶＩ．ｂ－ＩＦＡの生産
ＩＦＡの生産は前述のように行い、生産収率を表１０に示す。一部のＩＦＡでは、主としてＩＦＮβをＬＣのＣ末端部分に融合させる場合は生産収率が極めて低かった。これらのＩＦＡの場合、アゴニストＣＤ４０及びＩＦＮ活性は、更に精製することなく、ＩＦＡを含む上清を使用して直接評価した。精製されたＩＦＡの還元ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析は、ＨＣ及びＬＣに対応する２つの主要なバンドの存在を示した。ＩＦＮをＨＣに融合した場合、その分子量のシフトが観察された（図１４）。
ＶＩ．ｃ－リポーター細胞に対するＩＦＮα／βに基づくＩＦＡの機能的活性
リポーター細胞に対する３Ｇ５Ｉ ＦＡの特性評価を、前述のように（Ｉ．ｃ参照）、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞（図１５Ａ～Ｂ、及び図１６Ａ）並びにＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞（図１５Ｃ～Ｄ、及び図１６Ｂ）で行った。
ＶＩ．ｃ．１．ＩＦＮβに基づくＩＦＡ
図１５は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞における、ＩＦＮβが３Ｇ５のＨＣ又はＬＣに融合されたＩＦＡの用量応答の例を示す（図１５）。表１０にまとめた結果は、試験した全てのＩＦＮβに基づくＩＦＡが機能的であり、ＣＤ４０経路とＩＦＮα／β経路の両方を用量依存的に活性化できることを示す。
ＣＤ４０活性の例を図１５Ａ及び図１５Ｂに示す。ＨＣのＣ末端部分へのＩＦＮβの融合は、高い変動性の抗ＣＤ４０活性を示し、全ての場合で、ＥＣ50値が３０ｎｇ／ｍＬ～１９０．５ｎｇ／ｍＬの範囲の親抗体よりも低かった（図１５Ａ及び表１０）。親３Ｇ５抗体の平均ＥＣ50値は９．３ｎｇ／ｍＬである。
ＬＣのＣ末端部分への融合については、生産収率は極めて低く、活性は、ＨＥＫ細胞での過剰発現後のＩＦＡ含有上清を使用して評価した。ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌでのこれらの上清の評価（図１５Ｂ）は、これらのＩＦＡにＣＤ４０経路に対する活性があることを示す。３Ｇ５の場合、上清を３００倍希釈しても、アゴニスト抗ＣＤ４０活性がなお検出される。逆に、活性を観察するために、ＩＦＡ含有上清には１／１０希釈が必要であった（図１５Ｂ）。
ＩＦＡのＩＦＮ活性をＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞で試験し、結果を表１０にまとめる。例を図１５Ｃ～Ｄに示す。ＨＣのＣ末端部分でのＩＦＮβの融合の場合、ＩＦＮ活性はリンカー配列に応じて変化し、ＥＣ50値は０．４５ｎｇ／ｍＬ～１０．３ｎｇ／ｍＬの範囲である（図１５Ｃ）。ＬＣ含有上清のＣ末端部分にＩＦＮβ融合を伴うＩＦＡの場合、上清の１００００倍希釈の後でもＩＦＮ活性がなお検出される（図１５Ｄ）。
ＶＩ．ｃ．２ ＩＦＮαに基づくＩＦＡ
図１６は、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞（図１６）及びＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮα／β細胞（図１６Ｂ）に対する、３Ｇ５のＨＣにＩＦＮαが融合されたＩＦＡの用量応答の例を示す。
結果は、全てのＩＦＡがＣＤ４０経路とＩＦＮα／β経路の両方の機能的活性化を用量依存的に示すことを示す（平均ＥＣ50値を表１０に報告する）。
全てのＩＦＮαに基づくＩＦＡについて、ＣＤ４０経路に対する効力は親抗体と同様であり、平均ＥＣ50値は１１．７４ｎｇ／ｍＬ～１４．２ｎｇ／ｍＬの範囲であった（図１６Ａ及び表１０）。親３Ｇ５抗体の平均ＥＣ50値は９．３ｎｇ／ｍＬである。
ＩＦＮαに基づくＩＦＡのＩＦＮ活性をＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞で試験し、極めて高い活性を示す。これらのＩＦＡのＩＦＮ活性の平均ＥＣ50値は、０．０４ｎｇ／ｍＬ～０．１２ｎｇ／ｍＬの範囲であった（図１６Ｂ及び表１０）。
ＶＩ．ｄ－Ｆｃ領域を有さないＩＦＡの作製及び特性評価
本発明による好適な構築物は又、Ｆｃ領域を有さないインターフェロン会合抗原結合タンパク質であってもよい。ＴＥＶ－Ｈｉｓタグに融合された３Ｇ５のＦａｂフラグメントの重鎖をコードする構築物を設計し（配列番号６５）、発現プラスミドｐｃＤＮＡ３．１にクローニングした。この構築物を、前述のようにＨＥＫ細胞に同時トランスフェクトし、配列番号７０又は配列番号７１など、ＬＣが異なるリンカーを介してＩＦＮに融合されていた。タンパク質及び／又は上清をリポーター細胞で評価し、及び／又はＰＨＨにおけるＨＢＶ感染に対するそれらの効果を評価した。当業者は、療法に使用するための構築物はもはやＴＥＶ－Ｈｉｓタグを含まないことを理解するであろう。これらの構築物も同様に本発明の実施形態である。Ｆｃ部分を有さないインターフェロン会合抗原結合タンパク質にはＨＢＶ感染に対する活性がある。
実施例ＶＩＩ
ＶＩＩ．ａ－ＨＢＶ感染に対するＩＦＮα／βに基づくＩＦＡの効果
ＶＩＩ．ａ．１．ＩＦＮβに基づくＩＦＡ
ＩＦＮβに融合されたＩＦＡを、前述のように、ＨＢＶによるＰＨＨの感染後のＨＢｅＡｇ放出を低減するそれらの能力に関して試験し、例を図１７Ａに示す。結果は、これらのＩＦＡにＨＢＶ感染に対する活性があることを示す。試験した全てのＩＦＡで、用量依存的な阻害が見られ、１ｎｇ／ｍＬで１２％～５２％の低減が得られ、１００ｎｇ／ｍＬのＩＦＡ１０９で約８５％の最大低減が見られた。感染４日後に処置が開始され、その時点でＨＢｅＡｇ（ｍＲＮＡ及びタンパク質）の既存のプールが既に細胞内に存在し、その後も生産され続けるため、１００％の阻害には到達できなかった。
ＶＩＩ．ａ．２ ＩＦＮαに基づくＩＦＡ
ＩＦＮαに融合されたＩＦＡを又、前述のように、ＨＢＶによるＰＨＨの感染後のＨＢｅＡｇ放出を低減するそれらの能力に関して試験し、例を図１７Ｂに示す。結果は、これらのＩＦＮαに基づくＩＦＡがＨＢＶ感染に対して極めて強力であることを示す。試験した全てのＩＦＡについて、用量依存的な阻害も見られ、１ｎｇ／ｍＬで６１％～８０％の低減が得られ、全てのＩＦＡで１００ｎｇ／ｍＬで最大低減（８５％～９２％）にほぼ達した。これらは、ＩＦＮαに基づくＩＦＡが極めて強力な抗ＨＢＶ抗ウイルス分子であることを示す。
実施例ＶＩＩＩ
ヒト全血細胞からのサイトカイン放出アッセイ（ＣＲＡ）
ＷＢＣ ｅｘ ｖｉｖｏ刺激アッセイを使用して、前述のように、ＩＦＡ刺激後のサイトカインの放出を調べた（ＩＩＩ．ａ参照）。ＩＦＡ１０９を用いた例を図１８及び表１３に示す。結果は、全てのＩＦＡがＣＸＣＬ１０放出を誘導することを示す。それらはＩＬ－１０、ＩＬ－１β及びＩＬ－２を誘導せず、極めて低い～中程度のレベルのＩＦＮγ、ＩＬ－６及びＴＮＦ－αを誘導するに過ぎず、従って、炎症性サイトカインの誘導に関して有利な安全性プロファイルを示唆する。
均等論
本発明は、その趣旨又は本質的な特徴から逸脱することなく、他の特定の形態で具体化することができる。従って、以上の実施形態は、本発明を限定するのではなく、あらゆる点で例示的であると見なされるべきである。従って、本発明の範囲は、以上の説明ではなく、添付の特許請求の範囲によって示され、よって、特許請求の範囲の意味及び均等の範囲内にある全ての変更は、本明細書に含まれることが意図される。
項目
上記を考慮して、本発明は以下の項目にも関連することが認識されるであろう。
１．Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、
（Ｉ）アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及び
（ＩＩ）インターフェロン（ＩＦＮ）又はその機能的フラグメント
を含む、インターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、配列番号３内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３配列と少なくとも９０％同一である３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに配列番号６内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列と少なくとも９０％同一である３つの重鎖ＣＤＲを含む、項目１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、配列番号３内のＣＤＲＬ１、ＣＤＲＬ２及びＣＤＲＬ３配列と同一である３つの軽鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）；並びに配列番号６内のＣＤＲＨ１、ＣＤＲＨ２及びＣＤＲＨ３配列と同一である３つの重鎖ＣＤＲを含む、項目１又は２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４．各ＣＤＲがＣＤＲのＫａｂａｔ定義、Ｃｈｏｔｈｉａ定義、ＡｂＭ定義、又はｃｏｎｔａｃｔ定義に従って定義され；好ましくは、各ＣＤＲがＫａｂａｔのＣＤＲ定義又はＣｈｏｔｈｉａのＣＤＲ定義に従って定義される、項目２又は３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、
（ａ）配列番号５６と少なくとも９０％同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；並びに
（ｂ）配列番号５２と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメント
を含む、項目１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、
（ａ）配列番号５６と同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；並びに
（ｂ）配列番号５２と同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメント
を含む、項目１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、
配列番号５１に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖可変領域ＶL；及び／又は配列番号５５に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖可変領域ＶHを含む、項目１～６のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖が、配列番号１２に示されるようなアミノ酸配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含むＦａｂ領域重鎖を含む、項目１～７のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、配列番号３に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；並びに／又は配列番号６、配列番号９、配列番号４９及び配列番号４８からなる群から選択される配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む、項目１～８のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０．前記ＨＣが配列番号６に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１．前記ＨＣが配列番号９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２．前記ＨＣが配列番号４９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３．前記ＨＣが配列番号４８に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがヒトインターフェロンである、項目１～１２のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮ及びＩＩＩ型ＩＦＮ、又はその機能的フラグメントからなる群から選択される、項目１～１４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩ型ＩＦＮ、又はその機能的フラグメントである、項目１～１５のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７．前記Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮω、又はＩＦＮε、又はその機能的フラグメントである、項目１６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８．前記Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα又はＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである、項目１６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９．前記Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮω、又はその機能的フラグメントである、項目１６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２０．前記Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮε、又はその機能的フラグメントである、項目１６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２１．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα、ＩＦＮβ、ＩＦＮγ、ＩＦＮλ、ＩＦＮω又はＩＦＮε、又はその機能的フラグメントである、項目１～１４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２２．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα又はＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである、項目２１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２３．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα、又はその機能的フラグメントである、項目２２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２４．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα２ａ、又はその機能的フラグメントである、項目２３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２５．前記ＩＦＮα２ａが配列番号１７に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目２４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２６．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである、項目２２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２７．前記ＩＦＮβが配列番号１４に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目２６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２８．前記ＩＦＮβ又はその機能的フラグメントが配列番号１４に対して、Ｃ１７Ｓ及びＮ８０Ｑから選択される１つ又は２つのアミノ酸置換を含む、項目２６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２９．前記ＩＦＮβ又はその機能的フラグメントが配列番号１４に対してアミノ酸置換Ｃ１７Ｓを含む、項目２８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３０．前記ＩＦＮβが配列番号１５に示されるようなアミノ酸配列を含む、項目２９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３１．前記ＩＦＮβ又はその機能的フラグメントが配列番号１４に対してアミノ酸置換Ｃ１７Ｓ及びＮ８０Ｑを含む、項目２８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３２．前記ＩＦＮβが配列番号１６に示されるようなアミノ酸配列を含む、項目３１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３３．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮγ若しくはＩＦＮλ、又はその機能的フラグメントである、項目２１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３４．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮγ、又はその機能的フラグメントである、項目３３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３５．前記ＩＦＮγが配列番号１９に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目３４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３６．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮλ、又はその機能的フラグメントである、項目３３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３７．前記ＩＦＮλ又はその機能的フラグメントがＩＦＮλ２、又はその機能的フラグメントである、項目３６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３８．前記ＩＦＮλ２が配列番号１８に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、項目３７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
３９．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと非共有結合的に会合されている、項目１～３８のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４０．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと、イオン、ファンデルワールス力、及び／又は水素結合の相互作用を介して非共有結合的に会合されている、項目３９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４１．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと共有結合的に会合されている、項目１～３８のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４２．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに融合されている、項目４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４３．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖に融合されている、項目４２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４４．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＮ末端に融合されている、項目４３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４５．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＣ末端に融合されている、項目４３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４６．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖に融合されている、項目４２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４７．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＮ末端に融合されている、項目４６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４８．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＣ末端に融合されている、項目４６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
４９．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントと前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがリンカーを介して互いに融合されている、項目４２～４８のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５０．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、（Ｉ）前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、（ＩＩ）前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメント、及び（ＩＩＩ）前記リンカーを形成するもの以外のアミノ酸を含まない、項目４９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５１．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、（Ｉ）前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及び（ＩＩ）前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントを形成するもの以外のアミノ酸を含まない、項目１～４９のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５２．前記リンカーがペプチドリンカーである、項目４９～５０のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５３．前記リンカーが少なくとも１個、少なくとも２個、少なくとも３個、少なくとも４個、又は少なくとも５個のアミノ酸を含む、項目５２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５４．前記リンカーが少なくとも４個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５５．前記リンカーが少なくとも１１個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５６．前記リンカーが少なくとも１２個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５７．前記リンカーが少なくとも１３個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５８．前記リンカーが少なくとも１５個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
５９．前記リンカーが少なくとも２０個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６０．前記リンカーが少なくとも２１個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６１．前記リンカーが少なくとも２４個のアミノ酸を含む、項目５３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６２．前記リンカーが最大１０個、最大２０個、最大３０個、最大４０個、最大５０個、最大６０個、最大７０個、最大８０個、最大９０個、又は最大１００個のアミノ酸を含む、項目５２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６３．前記リンカーが最大８０個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６４．前記リンカーが最大４０個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６５．前記リンカーが最大２４個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６６．前記リンカーが最大２１個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６７．前記リンカーが最大２０個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６８．前記リンカーが最大１５個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
６９．前記リンカーが最大１３個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７０．前記リンカーが最大１２個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７１．前記リンカーが最大１１個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７２．前記リンカーが最大４個のアミノ酸を含む、項目６２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７３．前記リンカーが酸性、塩基性及び中性リンカーからなる群から選択される、項目５２～７２のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７４．前記リンカーが酸性リンカーである、項目７３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７５．前記リンカーが配列番号２２又は配列番号２３に示されるような配列を含む、項目７３又は７４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７６．前記リンカーが塩基性リンカーである、項目７３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７７．前記リンカーが中性リンカーである、項目７３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７８．前記リンカーが配列番号２０、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列を含む、項目７３又は７７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
７９．前記リンカーがリジッドリンカー、フレキシブルリンカー及びヘリックス形成リンカーからなる群から選択される、項目５２～７８のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８０．前記リンカーがリジッドリンカーである、項目７９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８１．前記リンカーが配列番号２０、配列番号２２又は配列番号２３に示されるような配列を含む、項目７９又は８０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８２．前記リンカーがフレキシブルリンカーである、項目７９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８３．前記リンカーが配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列を含む、項目７９又は８２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８４．前記リンカーがヘリックス形成リンカーである、項目７９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８５．前記リンカーが配列番号２２又は配列番号２３に示されるような配列を含む、項目７９又は８４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８６．前記リンカーがアミノ酸グリシン及びセリンを含む、項目５２～７４、７６、７７、７９、８０、８２又は８４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８７．前記リンカーが配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５、又は配列番号２６に示されるような配列を含む、項目８６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８８．前記リンカーが更にアミノ酸スレオニンを含む、項目８６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
８９．前記リンカーが配列番号２１に示されるような配列を含む、項目８８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９０．前記リンカーが配列番号２０～２６に示されるような配列から選択される配列を含む、項目５２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９１．前記リンカーが配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列から選択される配列を含む、項目９０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９２．前記リンカーが配列番号２４に示されるような配列を含む、項目９１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９３．前記リンカーが配列番号２５に示されるような配列を含む、項目９１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９４．前記リンカーが配列番号２６に示されるような配列を含む項目９１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９５．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが、表３、特に表３Ａ又は表３Ｂ、より詳しくは表３Ａに示されるようなリンカーを介して、前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＣ末端に融合されている、項目４９、５０又は５２～９４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９６．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖が、配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号４８又は配列番号４９に示されるような配列を含む、項目９５の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９７．前記ＩＦＮα２ａが配列番号１７に示されるような配列を含む、項目９５又は９６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９８．前記ＩＦＮβが配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含む、項目９５又は９６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
９９．前記ＩＦＮβが配列番号１４に示されるような配列を含む、項目９８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１００．前記ＩＦＮβが配列番号１５に示されるような配列を含む、項目９８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０１．前記ＩＦＮβが配列番号１６に示されるような配列を含む、項目９８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０２．前記ＩＦＮγが配列番号１９に示されるような配列を含む、項目９５又は９６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０３．前記ＩＦＮλ２が配列番号１８に示されるような配列を含む、項目９５又は９６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０４．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が更にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖を含む、項目９５～１０３のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０５．前記軽鎖が配列番号３に示されるような配列を含む、項目１０４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０６．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが、表４、特に表４Ａ又は表４Ｂ、より詳しくは表４Ａに示されるようなリンカーを介して、前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖のＮ末端に融合されている、項目４９、５０又は５２～９４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０７．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖が配列番号６、配列番号９、配列番号４９、配列番号４８、又は配列番号１２に示されるような配列を含む、項目１０６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０８．前記ＩＦＮα２ａが配列番号１７に示されるような配列を含む、項目１０６又は１０７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１０９．前記ＩＦＮβが配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含む、項目１０６又は１０７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１０．前記ＩＦＮβが配列番号１４に示されるような配列を含む、項目１０９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１１．前記ＩＦＮβが配列番号１５に示されるような配列を含む、項目１０９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１２．前記ＩＦＮβが配列番号１６に示されるような配列を含む、項目１０９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１３．前記ＩＦＮγが配列番号１９に示されるような配列を含む、項目１０６又は１０７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１４．前記ＩＦＮλ２が配列番号１８に示されるような配列を含む、項目１０６又は１０７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１５．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が更にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖を含む、項目１０６～１１４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１６．前記軽鎖が配列番号３に示されるような配列を含む、項目１１５の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１７．前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントが、表５、特に表５Ａ又は表５Ｂ、より詳しくは表５Ａに示されるようなリンカーを介して、前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＣ末端に融合されている、項目４９、５０又は５２～９４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１８．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖が配列番号３に示されるような配列を含む、項目１１７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１１９．前記ＩＦＮα２ａが配列番号１７に示されるような配列を含む、項目１１７又は１１８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２０．前記ＩＦＮβが配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含む、項目１１７又は１１８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２１．前記ＩＦＮβが配列番号１４に示されるような配列を含む、項目１２０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２２．前記ＩＦＮβが配列番号１５に示されるような配列を含む、項目１２０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２３．前記ＩＦＮβが配列番号１６に示されるような配列を含む、項目１２０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２４．前記ＩＦＮγが配列番号１９に示されるような配列を含む、項目１１７又は１１８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２５．前記ＩＦＮλ２が配列番号１８に示されるような配列を含む、項目１１７又は１１８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２６．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が更にアゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖を含む、項目１１７～１２５のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２７．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体の重鎖が配列番号６、配列番号９、配列番号４９、配列番号４８、又は配列番号１２に示されるような配列を含む、項目１２６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２８．前記ＩＦＮが、表６、特に表６Ａ又は表６Ｂ、より詳しくは表６Ａに示されるようなリンカーを介して、前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖のＮ末端に融合されている、項目４９、５０又は５２～９４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１２９．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの軽鎖が配列番号３に示されるような配列を含む、項目１２８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３０．前記ＩＦＮα２ａが配列番号１７に示されるような配列を含む、項目１２８又は１２９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３１．前記ＩＦＮβが配列番号１４、配列番号１５又は配列番号１６に示されるような配列を含む、項目１２８又は１２９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３２．前記ＩＦＮβが配列番号１４に示されるような配列を含む、項目１３１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３３．前記ＩＦＮβが配列番号１５に示されるような配列を含む、項目１３１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３４．前記ＩＦＮβが配列番号１６に示されるような配列を含む、項目１３１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３５．前記ＩＦＮγが配列番号１９に示されるような配列を含む、項目１２８又は１２９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３６．前記ＩＦＮλ２が配列番号１８に示されるような配列を含む、項目１２８又は１２９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３７．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が更に抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントの重鎖を含む、項目１２８～１３６のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３８．前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体の重鎖が配列番号６、配列番号９、配列番号４９、配列番号４８、又は配列番号１２に示されるような配列を含む、項目１３７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１３９．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が配列番号２８、配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３、配列番号３４、配列番号３５、配列番号３６、配列番号３７、配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２、配列番号４３、配列番号４４、配列番号４５、配列番号４６及び配列番号４７から選択される配列を含む、項目１～１３８のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４０．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が配列番号３８、配列番号３９、配列番号４０、配列番号４１、配列番号４２又は配列番号４３から選択される配列を含む、項目１３９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４１．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、表９、特に表９Ａ又は表９Ｂ、より詳しくは表９Ａに開示される配列の組合せのうち１つを含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１３９又は１４０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４２．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、配列番号３８及び配列番号３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４３．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、配列番号３９及び配列番号３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４４．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、配列番号４０及び配列番号３に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４５．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、配列番号４１及び配列番号９に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４６．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、配列番号４２及び配列番号９に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４７．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が、配列番号４３及び配列番号９に示されるような配列を含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、項目１４１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４８．インターフェロン会合抗原結合タンパク質がＣＤ４０経路とＩＦＮ経路の両方を活性化する、項目１～１４７のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１４９．ＣＤ４０活性が全血表面分子上方調節アッセイ又はｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して決定される、項目１４８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５０．ＣＤ４０活性がｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して、場合により、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＣＤ４０Ｌ細胞を使用して決定される、項目１４９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５１．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が４００、３００、２００、１５０、１００、７０、６０、５０、４０、３０、２５、２０、又は１５ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＣＤ４０経路を活性化する、項目１４８～１５０のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５２．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が１０～２００ｎｇ／ｍＬの範囲のＥＣ50でＣＤ４０経路を活性化する、項目１５１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５３．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が１０～５０ｎｇ／ｍＬ、好ましくは１０～３０ｎｇ／ｍＬの範囲のＥＣ50でＣＤ４０経路を活性化する、項目１５２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５４．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が１００、６０、５０、４０、３０、２０、１０、又は１ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＩＦＮ経路を活性化する、項目１４８～１５３のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５５．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が１１ｎｇ／ｍＬ未満、好ましくは６ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＩＦＮ経路を活性化する、項目１４８～１５４のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５６．前記ＩＦＮ経路がＩＦＮα経路、ＩＦＮβ経路、ＩＦＮε経路、ＩＦＮγ経路、ＩＦＮω経路又はＩＦＮλ経路である、項目１４８～１５５のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５７．ＩＦＮβ活性がｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して、場合により、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞を使用して決定される、項目１５６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５８．ＩＦＮα活性がｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して、場合により、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－α／β細胞を使用して決定される、項目１５６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１５９．ＩＦＮγ活性がｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して、場合により、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）Ｄｕａｌ ＩＦＮ－γ細胞を使用して決定される、項目１５６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６０．ＩＦＮλ活性がｉｎ ｖｉｔｒｏリポーター細胞アッセイを使用して、場合により、ＨＥＫ－Ｂｌｕｅ（商標）ＩＦＮ－λ細胞を使用して決定される、項目１５６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６１．インターフェロン会合抗原結合タンパク質がｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて初代肝細胞によるＨＢｅＡｇ放出を１ｎｇ／ｍＬで少なくとも１２％低減する、項目１～１６０のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６２．インターフェロン会合抗原結合タンパク質がｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて初代肝細胞によるＨＢｅＡｇ放出を１ｎｇ／ｍＬで最大９０％低減する、項目１６１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６３．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が３０ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＨＢｅＡｇ放出を低減する、項目１６１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６４．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が１０ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＨＢｅＡｇ放出を低減する、項目１６３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６５．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が１ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＨＢｅＡｇ放出を低減する、項目１６４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６６．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が０．１ｎｇ／ｍＬ未満のＥＣ50でＨＢｅＡｇ放出を低減する、項目１６４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６７．１以上のＩＦＮ経路バイオマーカーの発現レベルが、ＨＢＶ感染細胞においてインターフェロン会合抗原結合タンパク質で処理された際に、好ましくは少なくとも１．５倍、より好ましくは少なくとも２倍、最も好ましくは少なくとも３倍上方調節される、項目１～１６６、特に項目１４８～１６５のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６８．前記ＩＦＮ経路バイオマーカーがケモカインである、項目１６７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１６９．前記ＩＦＮ経路バイオマーカーがインターフェロンにより刺激される遺伝子ＩＳＧ２０である、項目１６８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７０．前記ＩＦＮ経路バイオマーカーがＣＸＣＬ９、ＣＸＣＬ１０及びＣＸＣＬ１１からなる群から選択されるＣ－Ｘ－Ｃケモカインである、項目１６８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７１．前記ＩＦＮ経路バイオマーカーがＣＸＣＬ１０である、項目１７０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７２．ＩＬ１０、ＩＬ１β及びＩＬ２の１以上の発現レベルが、ＨＢＶ感染細胞においてインターフェロン会合抗原結合タンパク質で処理された際に有意に上方調節されない、項目１～１７１、特に項目１４８～１７１のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７３．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の全身曝露が抗体ＣＰ８７０，８９３に比べて、好ましくは少なくとも１０％、より好ましくは少なくとも１５％、最も好ましくは少なくとも２５％増大する、項目１～１７２のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７４．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の全身曝露が少なくとも１０００μｇ*ｈ／ｍＬである、項目１～１７３のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７５．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の全身曝露が１０３３μｇ*ｈ／ｍＬ～１７９３μｇ*ｈ／ｍＬの範囲である、項目１７４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７６．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の半減期が少なくとも１００時間である、項目１～１７５のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７７．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の半減期が１１６～１５８時間の範囲である、項目１７６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７８．インターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランス速度が０．５ｍＬ／ｈ／ｋｇ未満である、項目１～１７７のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１７９．インターフェロン会合抗原結合タンパク質のクリアランスが０．２８～０．４９ｍＬ／ｈ／ｋｇの範囲である、項目１７８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８０．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の分布容積Ｖｓｓが１００ｍＬ／ｋｇ未満である、項目１～１７９のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８１．インターフェロン会合抗原結合タンパク質の分布容積Ｖｓｓが５０～９８ｍＬ／ｋｇの範囲である、項目１８０の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８２．インターフェロン会合抗原結合タンパク質を、それを必要とする対象に、インターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするＲＮＡ若しくはＤＮＡ配列、又はインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするベクター若しくはベクター系を用いた遺伝子送達の手段によって投与することを含む、項目１～１８１のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８３．インターフェロン会合抗原結合タンパク質が医薬組成物中に含まれる、項目１～１８２のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８４．前記医薬組成物が経口投与、非経口投与、若しくは局所投与、又は吸入による投与のために好適である、項目１８３の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８５．前記医薬組成物が経口投与のために好適である、項目１８４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８６．前記医薬組成物が局所投与のために好適である、項目１８４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８７．前記医薬組成物が吸入による投与のために好適である、項目１８４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８８．前記医薬組成物が非経口投与のために好適である、項目１８４の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１８９．前記医薬組成物が静脈内投与、動脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、皮下投与、直腸投与又は膣投与のために好適である、項目１８８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９０．前記医薬組成物が注射、好ましくは静脈内注射又は動脈内注射又は点滴のために好適である、項目１８９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９１．前記医薬組成物が少なくとも１種類の緩衝剤を含む、項目１８３～１９０のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９２．前記緩衝剤が酢酸塩、ギ酸塩又はクエン酸塩である、項目１９１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９３．前記緩衝剤が酢酸塩である、項目１９２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９４．前記緩衝剤がギ酸塩である、項目１９２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９５．前記緩衝剤がクエン酸塩である、項目１９２の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９６．前記医薬組成物が界面活性剤を含む、項目１８３～１９５のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９７．前記界面活性剤がプルロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール及びチロキサパルからなるリストから選択される、項目１９６の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９８．前記界面活性剤がポリソルベートである、項目１９７の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
１９９．前記界面活性剤がポリソルベート２０、ポリソルベート４０、ポリソルベート６０、ポリソルベート８０又はポリソルベート１００である、項目１９８の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２００．前記界面活性剤がポリソルベート２０である、項目１９９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２０１．前記界面活性剤がポリソルベート８０である、項目１９９の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
２０２．前記医薬組成物が分解防止剤を含み、場合により、前記分解防止剤はアルブミンである、項目１８３～２０１のいずれか一項の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
Figure 2023505169000039
Figure 2023505169000040
Figure 2023505169000041
Figure 2023505169000042
Figure 2023505169000043

Claims (15)

  1. Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）感染の治療における使用のための、
    （Ｉ）アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、及び
    （ＩＩ）インターフェロン（ＩＦＮ）又はその機能的フラグメント
    を含む、インターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  2. 前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、
    （ａ）配列番号５６と少なくとも９０％同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又そのフラグメント；並びに
    （ｂ）配列番号５２と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と少なくとも９０％同一であるＣＤＲＬ３を含む軽鎖又はそのフラグメント
    を含む、請求項１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  3. 前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、
    （ａ）配列番号５６と同一である相補性決定領域（ＣＤＲ）ＣＤＲＨ１、配列番号５７と同一であるＣＤＲＨ２、及び配列番号５８と同一であるＣＤＲＨ３を含む重鎖又はそのフラグメント；並びに
    （ｂ）配列番号５２と同一であるＣＤＲＬ１、配列番号５３と同一であるＣＤＲＬ２、及び配列番号５４と同一であるＣＤＲＬ３を含む、軽鎖又はそのフラグメント
    を含む、
    請求項１の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  4. 前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体、又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、配列番号５１に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖可変領域ＶL；及び／又は配列番号５５に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖可変領域ＶHを含む、請求項１～３のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  5. 前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントが、配列番号３に示されるような配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む軽鎖（ＬＣ）；並びに／又は配列番号６、配列番号９、配列番号１２、配列番号４９及び配列番号４８からなる群から選択される配列、若しくはそれと少なくとも９０％同一の配列を含む重鎖（ＨＣ）を含む、請求項１～４のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  6. 前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩ型ＩＦＮ、ＩＩ型ＩＦＮ及びＩＩＩ型ＩＦＮ、又はその機能的フラグメントからなる群から選択される、請求項１～５のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  7. 前記Ｉ型ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα又はＩＦＮβ、又はその機能的フラグメントである、請求項６に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  8. 前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮα２ａ、又はその機能的フラグメントであり、好ましくは、前記ＩＦＮα２ａは、配列番号１７に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  9. 前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがＩＦＮβ又はその機能的フラグメントであり、好ましくは、前記ＩＦＮβは、配列番号１４に示されるような配列、又はそれと少なくとも９０％同一の配列を含む、請求項１～７のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  10. 前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがアゴニスト抗ＣＤ４０抗体の軽鎖又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントに、好ましくは、Ｃ末端に融合される、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  11. 前記ＩＦＮ又はその機能的フラグメントがアゴニスト抗ＣＤ４０抗体の重鎖又はそのアゴニスト抗原結合フラグメント、好ましくは、Ｃ末端に融合される、請求項１～９のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  12. 前記アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのアゴニスト抗原結合フラグメントとＩＦＮ又はその機能的フラグメントがリンカーを介して互いに融合され、好ましくは、前記リンカーは、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２４、配列番号２５又は配列番号２６に示されるような配列を含む、請求項１～１１のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  13. 表９、特に、表９Ａ又は表９Ｂ、より詳しくは、表９Ａに開示される配列の組合せのうち１つを含むインターフェロン融合アゴニスト抗ＣＤ４０抗体又はそのインターフェロン融合アゴニスト抗原結合フラグメントである、請求項１～１２のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  14. 前記使用がインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするＲＮＡ若しくはＤＮＡ配列、又はインターフェロン会合抗原結合タンパク質をコードするベクター若しくはベクター系を用いた遺伝子送達の手段によって、それを必要とする対象にインターフェロン会合抗原結合タンパク質を投与することを含む、請求項１～１３のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
  15. インターフェロン会合抗原結合タンパク質が医薬組成物中に含まれる、請求項１～１４のいずれか一項に記載の使用のためのインターフェロン会合抗原結合タンパク質。
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