JP2023156200A - Test reagent for lymphocytic infundibulo-neurohypophysitis or idiopathic diabetes insipidus - Google Patents
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Abstract
Description
本発明は、リンパ球性漏斗下垂体後葉炎又は特発性尿崩症の検査試薬に関する。 The present invention relates to a test reagent for lymphocytic retrohypophysitis or idiopathic diabetes insipidus.
下垂体機能障害の１つであるリンパ球性下垂体炎は、他の自己免疫疾患を合併する例や種々の自己抗体の陽性例があること、下垂体へのリンパ球浸潤がみられることから、自己免疫の関与が推測されているが、その発症機序の詳細は不明である。 Lymphocytic hypophysitis, a type of pituitary dysfunction, is associated with other autoimmune diseases, positive cases of various autoantibodies, and lymphocytic infiltration into the pituitary gland. Although autoimmunity is suspected to be involved, the details of its pathogenesis are unknown.
リンパ球性下垂体炎は、病変部位により以下のように分類される。
（１）下垂体前葉に炎症病変が限局し、下垂体前葉ホルモンの分泌が低下する、リンパ球性下垂体前葉炎（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ａｄｅｎｏｈｙｐｏｐｈｙｓｉｔｉｓ，ＬＡＨ）
（２）漏斗部及び後葉に炎症が限局し、中枢性尿崩症を呈する、リンパ球性漏斗下垂体後葉炎（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｉｎｆｕｎｄｉｂｕｌｏ－ｎｅｕｒｏｈｙｐｏｐｈｙｓｉｔｉｓ，ＬＩＮＨ）
（３）下垂体全体に炎症をきたし、ＬＡＨとＬＩＮＨの両者の臨床的特徴を有する、リンパ球性汎下垂体炎（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ ｐａｎｈｙｐｏｐｈｙｓｉｔｉｓ，ＬＰＨ）。
Lymphocytic hypophysitis is classified as follows depending on the site of the lesion.
(1) Lymphocytic adenohypophysitis (LAH) in which inflammatory lesions are localized to the anterior pituitary gland and secretion of anterior pituitary hormones decreases.
(2) Lymphocytic infundibulo-neurohypophysitis (LINH), where inflammation is localized to the infundibulum and posterior lobe, presenting with central diabetes insipidus.
(3) Lymphocytic panhypophysitis (LPH), which causes inflammation in the entire pituitary gland and has clinical features of both LAH and LINH.
リンパ球性漏斗下垂体炎（ＬＩＮＨ）の診断は、困難な場合が多い。ＬＩＮＨの確定診断には、下垂体の生検が必要であるが、頭や顔の骨を削る等の極めて侵襲的であるため生検が施行されることは少ない。よって、生検による確定診断が行われておらず、適切な治療が遅れたり、誤診されることがあり、非侵襲的な診断方法として、例えば、ＬＩＮＨの非侵襲的診断マーカーの開発が求められている。
特許文献１には、特定のアミノ酸の部分配列からなる抗ラブフィリン３ａ抗体のエピトープを含む、アミノ酸の数が６～３０個のペプチドで構成されたリンパ球性漏斗下垂体後葉炎検査試薬が開示されている。
Diagnosis of lymphocytic infundibular hypophysitis (LINH) is often difficult. A definitive diagnosis of LINH requires a biopsy of the pituitary gland, but a biopsy is rarely performed because it is extremely invasive, such as shaving the bones of the head and face. Therefore, a definitive diagnosis is not made by biopsy, and appropriate treatment may be delayed or misdiagnosis may occur.Therefore, there is a need for the development of non-invasive diagnostic markers for LINH as a non-invasive diagnostic method. ing.
Patent Document 1 discloses a test reagent for lymphocytic infundibular pituitary inflammation, which is composed of a peptide having 6 to 30 amino acids and which contains an epitope of an anti-labphilin 3a antibody composed of a partial sequence of specific amino acids. ing.
また、特発性尿崩症の発症機序についても不明な部分が多いが、自己免疫機序の関与が示唆され、ＬＩＮＨと特発性尿崩症の自己免疫機序等に関する共通性について考察されている（非特許文献１）。
現在まで、ＬＩＮＨと特発性尿崩症の違いは、ＭＲＩ検査等で下垂体部の膨張を有するか否かで判断可能とされている。ＬＩＮＨは、炎症に起因すると考えられる下垂体部の腫大が見られるのに対し、特発性尿崩症は、腫大等が見られない。
Furthermore, although much remains unclear regarding the pathogenesis of idiopathic diabetes insipidus, the involvement of autoimmune mechanisms has been suggested, and commonalities regarding autoimmune mechanisms between LINH and idiopathic diabetes insipidus have been discussed. (Non-patent Document 1).
Until now, it has been said that the difference between LINH and idiopathic diabetes insipidus can be determined by whether or not the patient has swelling of the pituitary gland by MRI examination or the like. In LINH, swelling of the pituitary gland is seen, which is thought to be caused by inflammation, whereas in idiopathic diabetes insipidus, no swelling is seen.
特許文献１に開示される検査試薬を用いても、反応が認められないＬＩＮＨ患者検体が存在する。 Even when using the test reagent disclosed in Patent Document 1, there are LINH patient specimens in which no reaction is observed.
本発明が解決しようとする課題は、ＬＩＮＨ又は特発性尿崩症の新たな非侵襲的診断マーカーを提供することにある。 The problem to be solved by the present invention is to provide a new non-invasive diagnostic marker for LINH or idiopathic diabetes insipidus.
本発明は、以下のとおりである。
＜１＞
ラブフィリン３ａの５０３～５４２位のアミノ酸配列、
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドを含有する、リンパ球性漏斗下垂体後葉炎又は特発性尿崩症の検査試薬。
＜２＞
ラブフィリン３ａの５１３～５３２位のアミノ酸配列（配列番号５）、
ラブフィリン３ａの５５８～５７７位のアミノ酸配列（配列番号６）、及び
ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列（配列番号７）の何れかのアミノ酸配列のうち、６～２０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドを含有する、＜１＞に記載の検査試薬。
＜３＞
前記ペプチドが、配列番号５～７のいずれか一つで示されるアミノ酸配列を有する、＜１＞に記載の検査試薬（好ましくは、リンパ球性漏斗下垂体後葉炎の検査試薬）。
＜４＞
前記ペプチドが、配列番号７で示されるアミノ酸配列を有する、＜１＞に記載の検査試薬（好ましくは、特発性尿崩症の検査試薬）。
＜５＞
以下の工程を含む、リンパ球性下垂体後葉炎及び／又は特発性尿崩症を予測するためのデータの取得方法：
（１）検体と、＜１＞～＜４＞のいずれかに記載の検査試薬を接触させる工程
（２）免疫複合体を検出する工程。
＜６＞
前記検体が、リンパ球性下垂体後葉炎及び／又は特発性尿崩症のおそれのある患者由来である、＜５＞に記載のデータの取得方法。
＜７＞
前記検体が、血液、血漿、血清、脳脊髄液又は尿である、＜５＞に記載のデータの取得方法。
The present invention is as follows.
<1>
Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a,
Lymphocytic peptide containing a peptide having 6 to 30 consecutive amino acid sequences from either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of lovephilin 3a and the amino acid sequence of positions 578 to 617 of lovephilin 3a. Test reagent for postinfundibulitis or idiopathic diabetes insipidus.
<2>
Amino acid sequence of positions 513 to 532 of lovefilin 3a (SEQ ID NO: 5),
A sequence of 6 to 20 consecutive amino acids from either the amino acid sequence of positions 558 to 577 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 6) and the amino acid sequence of positions 588 to 607 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 7). The test reagent according to <1>, which contains a peptide having the following.
<3>
The test reagent according to <1>, wherein the peptide has an amino acid sequence represented by any one of SEQ ID NOs: 5 to 7 (preferably, a test reagent for lymphocytic infundibular pituitaryitis).
<4>
The test reagent according to <1>, wherein the peptide has the amino acid sequence shown by SEQ ID NO: 7 (preferably a test reagent for idiopathic diabetes insipidus).
<5>
A method for obtaining data for predicting lymphocytic retrohypophysitis and/or idiopathic diabetes insipidus, including the following steps:
(1) A step of bringing the specimen into contact with the test reagent according to any one of <1> to <4>. (2) A step of detecting an immune complex.
<6>
The data acquisition method according to <5>, wherein the specimen is derived from a patient who is at risk of lymphocytic retrohypophysitis and/or idiopathic diabetes insipidus.
<7>
The data acquisition method according to <5>, wherein the specimen is blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, or urine.
１．検査試薬
本発明の第１の態様はＬＩＮＨの検査に有用な検査試薬に関する。
第１の態様における検査試薬は、
ラブフィリン３ａの５０３～５４２位のアミノ酸配列（配列番号２）、
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列（配列番号３）、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列（配列番号４）の何れかのアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチド（以下、本発明に係る検査試薬に用いるペプチドを総称して、「本発明に係るペプチド」と記載する。）を含有する。
本発明に係るペプチドは、抗ラブフィリン３ａ抗体が特異的に結合するペプチドであり、本発明に係るペプチドは、抗ラブフィリン３ａ抗体のエピトープである。
本明細書において、「抗ラブフィリン３ａ抗体が特異的に結合する」ことは、例えば、抗ラブフィリン３ａ抗体を用い、ＬＩＮＨ陽性検体（例えば、ＬＩＮＨ患者の血清）と本発明に係るペプチドに対する反応性を調べることにより確認することができる。
好ましくは、抗ラブフィリン３ａ抗体を用い、ＬＩＮＨ陰性検体（例えば、健常人の血清）とＬＩＮＨ陽性検体（例えば、ＬＩＮＨ患者の血清）と本発明の検査試薬に含有されるペプチドに対する反応性を調べることにより確認することができる。
本発明に係るペプチドは、下記実施例で示すとおり、ＥＬＩＳＡ法の結果に基づいて見い出されたものであり、ＬＩＮＨ患者血清との反応が特異的であることから、そのエピトープとしては、
ラブフィリン３ａの５０３～５４２位のアミノ酸配列、
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドである。
なお、一般的に、抗体のエピトープは、対象となるタンパク質に依存し、数個から十数個程度のアミノ酸配列からなるとされているが、本発明に係るペプチドは、６～３０個の連続したアミノ酸配列からなる。
1. Test Reagent The first aspect of the present invention relates to a test reagent useful for testing LINH.
The test reagent in the first aspect is
Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a (SEQ ID NO: 2),
A sequence of 6 to 30 consecutive amino acids from either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 3) and the amino acid sequence of positions 578 to 617 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 4). (hereinafter, the peptides used in the test reagent according to the present invention are collectively referred to as "peptides according to the present invention").
The peptide according to the present invention is a peptide to which an anti-lovephilin 3a antibody specifically binds, and the peptide according to the present invention is an epitope of the anti-lovephilin 3a antibody.
As used herein, "the anti-labophilin 3a antibody specifically binds" means, for example, that the anti-labophilin 3a antibody is used to detect the reactivity of a LINH-positive specimen (e.g., serum of a LINH patient) to the peptide of the present invention. This can be confirmed by checking.
Preferably, an anti-labfilin 3a antibody is used to examine the reactivity of a LINH-negative specimen (e.g., serum of a healthy person), a LINH-positive specimen (e.g., serum of a LINH patient), and the peptide contained in the test reagent of the present invention. This can be confirmed by
As shown in the examples below, the peptide according to the present invention was discovered based on the results of ELISA method, and since the reaction with LINH patient serum is specific, its epitope is as follows:
Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a,
It is a peptide having 6 to 30 consecutive amino acid sequences from either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of lovephilin 3a or the amino acid sequence of positions 578 to 617 of lovephilin 3a.
In general, the epitope of an antibody is said to consist of a sequence of several to more than ten amino acids, depending on the target protein, but the peptide according to the present invention consists of a sequence of 6 to 30 consecutive amino acids. Consists of an amino acid sequence.
ラブフィリン３ａは全長６９０アミノ酸（配列番号１）からなるタンパク質であり、そのＮ末端側にはＲａｂ結合ドメインが存在し、Ｎ末端側にはＣ２Ａドメイン及びＣ２Ｂドメインが存在する。 Rabfilin 3a is a protein consisting of a full length of 690 amino acids (SEQ ID NO: 1), and has a Rab-binding domain on its N-terminal side, and a C2A domain and a C2B domain on its N-terminal side.
本発明に係るペプチドは、
ラブフィリン３ａの５０３～５４２位のアミノ酸配列、
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドであれば特に限定されるものではないが、好ましくは、
ラブフィリン３ａの５１３～５３２位のアミノ酸配列（配列番号５）、
ラブフィリン３ａの５５８～５７７位のアミノ酸配列（配列番号６）、及び
ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列（配列番号７）の何れかのアミノ酸配列のうち、６～２０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドである。
ここで、ラブフィリン３ａの５１３～５３２位のアミノ酸配列は、
ＥＲＶＩＰＭＫＲＡＧＴＴＧＳＡＲＧＭＡＬ
であり、ラブフィリン３ａの５５８～５７７位のアミノ酸配列は、
ＴＱＱＧＧＬＩＶＧＩＩＲＣＶＨＬＡＡＭＤ
であり、ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列は、
ＬＷＬＫＰＤＭＧＫＫＡＫＨＫＴＱＩＫＫＫ
である。
本発明に係るペプチドは、
ラブフィリン３ａの５０３～５４２位のアミノ酸配列、
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列を有するペプチドであってもよく、
ラブフィリン３ａの５１３～５３２位のアミノ酸配列、
ラブフィリン３ａの５５８～５７７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列を有するペプチドであってもよい。
The peptide according to the present invention is
Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a,
It is particularly limited if it is a peptide having 6 to 30 consecutive amino acid sequences from either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of Labophilin 3a and the amino acid sequence of positions 578 to 617 of Labophilin 3a. Although it is not necessary, it is preferable that
Amino acid sequence of positions 513 to 532 of lovefilin 3a (SEQ ID NO: 5),
A sequence of 6 to 20 consecutive amino acids from either the amino acid sequence of positions 558 to 577 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 6) and the amino acid sequence of positions 588 to 607 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 7). It is a peptide with
Here, the amino acid sequence at positions 513 to 532 of lovefilin 3a is:
ERVIPMKRAGTTGSARGMAL
The amino acid sequence from positions 558 to 577 of lovefilin 3a is:
TQQGGLIVGIIRCVHLAAMD
The amino acid sequence from positions 588 to 607 of lovefilin 3a is:
LWLKPDMGKKAKHKTQIKKK
It is.
The peptide according to the present invention is
Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a,
It may be a peptide having either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of lovephilin 3a, or the amino acid sequence of positions 578 to 617 of lovephilin 3a,
Amino acid sequence of positions 513 to 532 of lovefilin 3a,
It may be a peptide having either the amino acid sequence of positions 558 to 577 of labophilin 3a or the amino acid sequence of positions 588 to 607 of labophilin 3a.
本発明に係るペプチドの鎖長（アミノ酸数）は、６個～３０個であれば特に限定されるものではないが、好ましくは、６個～２０個、６個～１０個、１０個～２０個である。 The chain length (number of amino acids) of the peptide according to the present invention is not particularly limited as long as it is 6 to 30, but preferably 6 to 20, 6 to 10, or 10 to 20. It is individual.
本発明に係るペプチドは、その調製法は特に限定されるものではないが、公知のペプチド合成法（例えば固相合成法、液相合成法）によって製造してもよく、遺伝子工学的手法を用いて本発明に係るペプチドを調製してもよい。 The preparation method of the peptide according to the present invention is not particularly limited, but it may be produced by known peptide synthesis methods (for example, solid phase synthesis method, liquid phase synthesis method), or by using genetic engineering techniques. The peptide according to the present invention may be prepared by
本発明の検査試薬は、キットの形態として用いてもよい。
キットとしては、本発明に係るぺプチドを含めば、他は任意の試薬等を含んでいてもよい。
また、キットとしては、本発明に係るペプチドを含み、取り扱い説明書が添付されていてもよい。
キットは、ＬＩＮＨの検査を実施する際又はＬＩＮＨの検査によって得られたデータを取得する際に使用するその他の試薬（緩衝液、ブロッキング用試薬、酵素の基質、発色試薬など）及び／又は装置や器具（容器、反応装置、蛍光リーダーなど）を含んでいてもよい。なお、通常、本発明のキットには取り扱い説明書が添付される。
The test reagent of the present invention may be used in the form of a kit.
As long as the kit contains the peptide according to the present invention, it may contain any other reagents.
Further, the kit may contain the peptide according to the present invention and may be accompanied by an instruction manual.
The kit includes other reagents (buffers, blocking reagents, enzyme substrates, coloring reagents, etc.) and/or equipment used in performing the LINH test or acquiring data obtained by the LINH test. Equipment (vessels, reaction devices, fluorescent readers, etc.) may also be included. Note that an instruction manual is usually attached to the kit of the present invention.
本発明に係るペプチドを標識化して、標識量を指標に結合抗体量を測定することにより、ＬＩＮＨ検査法を実施してもよい。また、ＥＬＩＳＡ法のように、標識物質を結合させた二次抗体を利用してもよい。 The LINH test method may be performed by labeling the peptide according to the present invention and measuring the amount of bound antibody using the amount of label as an index. Alternatively, a secondary antibody bound to a labeling substance may be used as in the ELISA method.
標識物質としては、特に限定されず、ペルオキシダーゼ、マイクロペルオキシダーゼ、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）、アルカリホスファターゼ、β－Ｄ－ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ及びグルコース－６－リン酸脱水素酵素などの酵素、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）、テトラメチルローダミンイソチオシアネート（ＴＲＩＴＣ）及びユーロピウムなどの蛍光物質、ルミノール、イソルミノール及びアクリジニウム誘導体などの化学発光物質、ＮＡＤなどの補酵素、ビオチン、並びに１３１Ｉ及び１２５Ｉなどの放射性物質等が挙げられる。 Labeling substances include, but are not particularly limited to, enzymes such as peroxidase, microperoxidase, horseradish peroxidase (HRP), alkaline phosphatase, β-D-galactosidase, glucose oxidase, and glucose-6-phosphate dehydrogenase, and fluorescein isothiocyanate. Fluorescent substances such as (FITC), tetramethylrhodamine isothiocyanate (TRITC) and europium, chemiluminescent substances such as luminol, isoluminol and acridinium derivatives, coenzymes such as NAD, biotin, and radioactive substances such as 131I and 125I. Can be mentioned.
本発明の第２の態様は特発性尿崩症の検査に有用な検査試薬に関する。
第２の態様における特発性尿崩症の検査に有用な検査試薬は、
ラブフィリン３ａの５０３～５４２位のアミノ酸配列、
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドを含有する。
本発明の第１の態様において、ＬＩＮＨについて記載された内容は、第２の態様における特発性尿崩症の検査に有用な検査試薬に関する記載として、ＬＩＮＨをそのまま特発性尿崩症と読み替えて理解される。
本発明の特発性尿崩症の検査に有用な検査試薬は、ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列のうち、６～２０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドであってもよく、ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列を有するペプチドであってもよい。
A second aspect of the present invention relates to a test reagent useful for testing idiopathic diabetes insipidus.
Test reagents useful for testing idiopathic diabetes insipidus in the second aspect include:
Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a,
It contains a peptide having 6 to 30 consecutive amino acid sequences from either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of lovephilin 3a or the amino acid sequence of positions 578 to 617 of lovephilin 3a.
In the first aspect of the present invention, the content described regarding LINH can be understood by reading LINH as it is as idiopathic diabetes insipidus, as the description regarding a test reagent useful for testing for idiopathic diabetes insipidus in the second aspect. be done.
The test reagent useful for testing for idiopathic diabetes insipidus of the present invention may be a peptide having a continuous amino acid sequence of 6 to 20 amino acids from the amino acid sequence of positions 588 to 607 of lovephilin 3a. It may be a peptide having the amino acid sequence from positions 588 to 607 of
本発明に係るペプチドを含有する検査試薬を用いることで、従来の同様の検査試薬では、検出が不可能であった検体に関しても、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の検査を行うことが可能である。また、本発明に係るペプチドのうち、
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチド
ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列のうち、６～２０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチド、又は
ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列を有するペプチド
を用いることにより、ＬＩＮＨと特発性尿崩症の双方の検査を同時的に行うことも可能となる。
By using the test reagent containing the peptide according to the present invention, it is possible to test for LINH and/or idiopathic diabetes insipidus even in specimens that could not be detected using conventional similar test reagents. It is. Furthermore, among the peptides according to the present invention,
A peptide having a sequence of 6 to 30 consecutive amino acids from the amino acid sequence of positions 578 to 617 of Labophilin 3a A peptide having a sequence of 6 to 20 consecutive amino acids of the amino acid sequence of positions 588 to 607 of Labophilin 3a By using a peptide having the amino acid sequence of positions 588 to 607 of Labphilin 3a, it becomes possible to simultaneously test for both LINH and idiopathic diabetes insipidus.
２．データの取得方法
本発明の第３の態様は第１又は第２の態様として示す検査試薬の用途に関する。
本発明のリンパ球性下垂体後葉炎及び／又は特発性尿崩症を予測するためのデータの取得方法（以下、「本発明に係るデータ取得方法」と記載する。）は、
（１）検体と、本発明の検査試薬を接触させる工程と、
（２）免疫複合体を検出する工程と、を含む。
本発明においては、本発明に係るデータ取得方法を実施することで、検体において罹患している疾患がＬＩＮＨであるか否か、又はＬＩＮＨの発症可能性を検査する方法を提供する。
本発明においては、本発明に係るデータ取得方法を実施することで、検体において罹患している疾患が特発性尿崩症であるか否か、又は特発性尿崩症の発症可能性を検査する方法を提供する。
本発明に係るデータ取得方法は、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の鑑別が可能になる方法を提供し得る。
本発明に係るデータ取得方法においては、本発明の検査試薬として、本発明に係るペプチドから選択される少なくとも１つのペプチドを用いればよいが、複数、すなわち２つ以上のペプチドを用いてもよい。
2. Data Acquisition Method The third aspect of the present invention relates to the use of the test reagent shown in the first or second aspect.
The method for acquiring data for predicting lymphocytic retrohypophysitis and/or idiopathic diabetes insipidus of the present invention (hereinafter referred to as "data acquisition method according to the present invention") includes:
(1) a step of bringing the test reagent of the present invention into contact with the specimen;
(2) Detecting an immune complex.
The present invention provides a method for testing whether or not a disease afflicted by a specimen is LINH, or the possibility of developing LINH, by implementing the data acquisition method according to the present invention.
In the present invention, by implementing the data acquisition method according to the present invention, it is possible to test whether or not the disease that a specimen is suffering from is idiopathic diabetes insipidus, or the possibility of developing idiopathic diabetes insipidus. provide a method.
The data acquisition method according to the present invention can provide a method that enables differentiation of LINH and/or idiopathic diabetes insipidus.
In the data acquisition method according to the present invention, at least one peptide selected from the peptides according to the present invention may be used as the test reagent according to the present invention, but a plurality of peptides, that is, two or more peptides may be used.
本発明に係るデータ取得方法に用いられる検体は、特に限定されるものではないが、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を予測することが求められる検体である。
検体は、特に限定されるものではないが、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を予測することが求められる被検者に由来する成分であることが好ましく、特に限定されるものではないが、例えば、血液、血漿、血清、脳脊髄液、尿等が挙げられる。
検体は、例えば、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を予測することが求められる被検者に由来する成分であることが好ましく、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を予測することが求められる被検者に由来する血液、血漿、血清、脳脊髄液、尿等が挙げられる。
被検者としては、特に限定されるものではないが、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症のおそれのある患者であることが好ましい。
検体は、例えば、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症のおそれのある患者の被検者に由来する成分であることが好ましく、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症のおそれのある患者の被検者に由来する血液、血漿、血清、脳脊髄液、尿等であってもよい。
Although the specimen used in the data acquisition method according to the present invention is not particularly limited, it is a specimen that is required to predict LINH and/or idiopathic diabetes insipidus.
Although the specimen is not particularly limited, it is preferably a component derived from a subject who is required to predict LINH and/or idiopathic diabetes insipidus; Examples include blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, urine, and the like.
The specimen is preferably a component derived from a subject who is required to predict LINH and/or idiopathic diabetes insipidus, for example, and is required to predict LINH and/or idiopathic diabetes insipidus. Examples include blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, urine, etc. derived from the subject.
The subject is not particularly limited, but is preferably a patient who is at risk of LINH and/or idiopathic diabetes insipidus.
The specimen is preferably a component derived from a patient who is at risk of LINH and/or idiopathic diabetes insipidus; Blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, urine, etc. derived from a person may also be used.
本発明に係るデータ取得方法においては、検体と、本発明の検査試薬を接触させる工程を含む。
ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を予測することが求められる検体中に、抗ラブフィリン３ａ抗体が存在していることにより、検体と、本発明の検査試薬を接触させることにより、本発明に係るペプチドと、抗ラブフィリン３ａ抗体との免疫複合体が生成する。
かかる免疫複合体を検出することにより、本発明に係るデータ取得方法では、検体において罹患している疾患がＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症であるか否か、又はＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の発症可能性を検査する方法を提供し得る。
The data acquisition method according to the present invention includes the step of bringing a specimen into contact with the test reagent of the present invention.
Due to the presence of anti-labphilin 3a antibodies in the specimen required to predict LINH and/or idiopathic diabetes insipidus, the test reagent of the present invention can be detected by bringing the specimen into contact with the test reagent of the present invention. An immune complex between the peptide and the anti-labphilin 3a antibody is generated.
By detecting such immune complexes, the data acquisition method according to the present invention can determine whether the disease afflicted in the specimen is LINH and/or idiopathic diabetes insipidus, or whether LINH and/or idiopathic diabetes insipidus. A method for testing the possibility of onset of collapsing syndrome can be provided.
検体は、被検者から得られるものであれば特に限定されないことから、適宜採取すればよく、血液、血漿、血清、脳脊髄液、尿等をそのまま利用してもよく、血液、血漿、血清、脳脊髄液、尿等に対して、従来の処理を施して検体として利用してもよい。従来の処理とは、非凝固剤を添加するとか、安定剤を添加するなど適宜検体を処理してもよいことを意味する。 The specimen is not particularly limited as long as it can be obtained from the subject, and may be collected as appropriate; blood, plasma, serum, cerebrospinal fluid, urine, etc. may be used as is; blood, plasma, serum, etc. , cerebrospinal fluid, urine, etc. may be subjected to conventional processing and used as specimens. Conventional processing means that the specimen may be processed as appropriate, such as by adding a non-coagulant or by adding a stabilizer.
本発明に係るデータ取得方法においては、検体と、本発明の検査試薬を接触させる工程により生成した免疫複合体を検出する工程を含む。
免疫複合体の検出方法は、特に限定されるものではなく、抗原抗体反応による複合体を検出する公知の方法により実施することが可能である。
ＬＩＮＨの鑑別が必要な者、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の現在又は将来の発症可能性（即ち、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を発症しているか否か、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を発症している可能性の程度、ＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症を将来発症する可能性の程度）の判定が必要な者に対して、本発明に係るデータ取得方法を適用することにより、検体において罹患している疾患がＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症であるか否か、又はＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の発症可能性を検査するのに必要なデータが提供される。
本発明に係るデータ取得方法では、バイオマーカーとしての抗ラブフィリン３ａ抗体のレベルという客観的な指標に基づいて、当該診断の当否を判定することができる。本発明に係るデータ取得方法によれば、従来のＬＩＮＨ又は特発性尿崩症の診断に対して、補助或いは裏付ける情報を提供可能である。当該情報は、より適切な治療方針の決定に有益であり、治療効果の向上や患者のＱＯＬ（Ｑｕａｌｉｔｙ ｏｆ Ｌｉｆｅ、生活の質）の向上を促す。一方、罹患状態のモニターに本発明を利用し、難治化、重篤化、再発等の防止を図ってもよい。
The data acquisition method according to the present invention includes the step of detecting an immune complex generated by the step of contacting a specimen with the test reagent of the present invention.
The method for detecting the immune complex is not particularly limited, and any known method for detecting a complex by antigen-antibody reaction can be used.
People who need to be diagnosed with LINH, the current or future possibility of developing LINH and/or idiopathic diabetes insipidus (i.e., whether or not LINH and/or idiopathic diabetes insipidus has developed, LINH and/or idiopathic diabetes insipidus) The data acquisition method according to the present invention is applicable to those who need to determine the degree of possibility of developing diabetes insipidus, the degree of possibility of developing LINH and/or idiopathic diabetes insipidus in the future. By applying the data necessary to test whether the disease afflicted in the specimen is LINH and/or idiopathic diabetes insipidus, or the possibility of developing LINH and/or idiopathic diabetes insipidus. is provided.
In the data acquisition method according to the present invention, it is possible to determine the appropriateness of the diagnosis based on an objective index of the level of anti-labophilin 3a antibody as a biomarker. According to the data acquisition method according to the present invention, it is possible to provide information that assists or supports conventional diagnosis of LINH or idiopathic diabetes insipidus. This information is useful for determining a more appropriate treatment policy, and promotes improvement in treatment effects and patients' QOL (Quality of Life). On the other hand, the present invention may be used to monitor the diseased state to prevent it from becoming intractable, becoming more serious, recurrence, etc.
免疫複合体を検出するための測定法として、特に限定されるものではないが、ラテックス凝集法、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、酵素免疫測定法（ＥＩＡ法）、放射免疫測定法（ＲＩＡ法）、ウエスタンブロット法等が挙げられる。好ましい測定法としては、ＦＩＡ法及びＥＩＡ法（ＥＬＩＳＡ法を含む）が挙げられ、より好ましい測定法としては、ＥＬＩＳＡ法が挙げられる。
これら従来の方法により、免疫複合体を高感度、迅速且つ簡便に検出可能である。
Measuring methods for detecting immune complexes include, but are not limited to, latex agglutination method, fluorescence immunoassay (FIA method), enzyme immunoassay (EIA method), and radioimmunoassay (RIA method). ), Western blotting, etc. Preferred measurement methods include FIA and EIA (including ELISA), and more preferred measurement methods include ELISA.
By these conventional methods, immune complexes can be detected with high sensitivity, speed, and ease.
本発明に係るデータ取得方法により免疫複合体の存在量を用いて、検体において、罹患している疾患がＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症であるか否かを判定する。
免疫複合体の存在量は、採用する免疫複合体を検出するための測定法に準じて決定してよい。
本発明に係るデータ取得方法では、対照検体（コントロール）を用いて取得されるデータと比較することでより適切なＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の診断を可能とすることができる。
対象検体としては、健常人の検体や他の自己免疫疾患に罹患している患者の検体などを用いてよい。
本発明に係るデータ取得方法により得られる免疫複合体に関するデータは、定性的なものでも、定量的なものであってもよいが、医師や検査技師など専門知識を有する者の判断によらずとも自動的／機械的に行うことができる。
Using the amount of immune complexes present in the data acquisition method according to the present invention, it is determined whether the disease afflicted by the specimen is LINH and/or idiopathic diabetes insipidus.
The amount of immune complexes present may be determined according to the assay method employed for detecting immune complexes.
In the data acquisition method according to the present invention, a more appropriate diagnosis of LINH and/or idiopathic diabetes insipidus can be made by comparing the data with data acquired using a reference specimen (control).
As the target specimen, a specimen from a healthy person or a specimen from a patient suffering from another autoimmune disease may be used.
The data regarding immune complexes obtained by the data acquisition method of the present invention may be qualitative or quantitative, but it does not need to be based on the judgment of a person with specialized knowledge such as a doctor or a laboratory technician. Can be done automatically/mechanically.
本発明においては、特許文献１や特許第５９２４５０２号に記載される各種方法を採用して（なお、これらの先行の特許文献の関連するいわゆるファミリー出願において開示される内容を採用してもよい）、あるいは、その変法により、検体において罹患している疾患がＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症であるか否か、又はＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症の発症可能性を検査する方法としてよい。 In the present invention, various methods described in Patent Document 1 and Patent No. 5924502 are adopted (in addition, contents disclosed in so-called family applications related to these earlier patent documents may also be adopted). Or, by a modified method thereof, as a method for testing whether the disease in a specimen is LINH and/or idiopathic diabetes insipidus, or the possibility of developing LINH and/or idiopathic diabetes insipidus. good.
ラブフィリン３ａペプチドの作成
全長ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．１－６９０）からエピトープ部位を絞り込むため、ユーロフィン社に受託し、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５１３－５３２）を合成した。さらに、シグマ社に受託し、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５５８－５７７）、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５７３－５９２）、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５８８－６０７）を合成した。いずれも、ＨＰＬＣ分析による純度は、＞９５％であった。
ラブフィリン３ａ抗原として、ラブフィリン３ａペプチドのアミノ酸配列のＮ末に６個のアミノ酸ＣＧＧＧＧＳ（配列番号１２）が付加されるように構成した。合成したラブフィリン３ａペプチドのアミノ酸配列を下記に示す。
ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５１３－５３２）：
ＣＧＧＧＧＳＥＲＶＩＰＭＫＲＡＧＴＴＧＳＡＲＧＭＡＬ 合計２６アミノ酸（配列番号８）
ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５５８－５７７）：
ＣＧＧＧＧＳＴＱＱＧＧＬＩＶＧＩＩＲＣＶＨＬＡＡＭＤ 合計２６アミノ酸（配列番号９）
ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５８８－６０７）：
ＣＧＧＧＧＳＬＷＬＫＰＤＭＧＫＫＡＫＨＫＴＱＩＫＫＫ 合計２６アミノ酸（配列番号１０）
ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５７３－５９２）：
ＣＧＧＧＧＳＬＡＡＭＤＡＮＧＹＳＤＰＦＶＫＬＷＬＫＰ 合計２６アミノ酸（配列番号１１）
Preparation of Lovephilin 3a Peptide In order to narrow down the epitope site from the full-length Lovephilin 3a (a.a. 1-690), Lovefilin 3a (a.a. 513-532) was synthesized under contract to Eurofins. Furthermore, Lovefilin 3a (a.a. 558-577), Lovefilin 3a (a.a. 573-592), and Lovefilin 3a (a.a. 588-607) were synthesized under contract to Sigma. In all cases, the purity by HPLC analysis was >95%.
The lovefilin 3a antigen was constructed so that six amino acids CGGGGS (SEQ ID NO: 12) were added to the N-terminus of the amino acid sequence of the lovephilin 3a peptide. The amino acid sequence of the synthesized lovefilin 3a peptide is shown below.
Lovephilin 3a (a.a. 513-532):
CGGGGSERVIPMKRAGTTGSARGMAL Total 26 amino acids (SEQ ID NO: 8)
Lovephilin 3a (a.a. 558-577):
CGGGGSTQQGGLIVGIIRCVHLAAMD Total 26 amino acids (SEQ ID NO: 9)
Lovefilin 3a (a.a. 588-607):
CGGGGSLWLKPDMGKKAKHKTQIKKK Total 26 amino acids (SEQ ID NO: 10)
Lovephilin 3a (a.a. 573-592):
CGGGGSLAAMDANGYSDPFVKLWLKP Total 26 amino acids (SEQ ID NO: 11)
血清収集
ＬＩＮＨ患者の血清、特発性中枢性尿崩症患者の血清、腫瘍に伴い尿崩症を呈する患者の血清（コントロール症例）、及び健常人の血清を常法で収集した。
Serum Collection Serum from LINH patients, serum from patients with idiopathic central diabetes insipidus, serum from patients exhibiting diabetes insipidus due to tumor (control cases), and serum from healthy individuals were collected in a conventional manner.
ＥＬＩＳＡ法の構築と測定
（１）抗原固相化ＥＬＩＳＡプレート作成
冷ＰＢＳにラブフィリン３ａ抗原を溶解して抗原水溶液（濃度１μｇ／ｍＬ）を作成した。抗原水溶液を１００μＬ／ｗｅｌｌでＥＬＩＳＡプレートに分注し、４℃で一晩静置した。抗原水溶液を捨て、ブロッキングバッファーを１００μＬ／ｗｅｌｌでＥＬＩＳＡプレートに入れ、４℃で一晩静置した。続いて、ブロッキングバッファーを捨て、乾燥剤とともに使用まで４℃で保存した。
（２）ＥＬＩＳＡ測定
血清に反応用バッファーを加えて患者血清希釈液を作成した。抗原固相化プレートに、患者血清希釈液（１：１０１希釈）を１００μＬ／ｗｅｌｌで添加し、２時間室温で振盪し、反応させた。その後、患者血清希釈液を捨て、洗浄バッファーを用いて、ＥＬＩＳＡプレートを洗浄した。次に、２次抗体液Ａｎｔｉ－Ｈｕｍａｎ ＩｇＧ（γｃｈａｉｎ）－ＨＲＰをＥＬＩＳＡプレートに１００μＬ／ｗｅｌｌずつ添加し、１時間室温で振盪した。２次抗体液を捨て、洗浄バッファーを用いてＥＬＩＳＡプレートを洗浄した。続いて、４℃反応基質液をＥＬＩＳＡプレートに１００μＬ／ｗｅｌｌずつ添加し、１５分室温で静置した。反応停止液を１００μＬ／ｗｅｌｌ添加し、反応を停止させた後、波長４５０ｎｍ（副波長６２０ｎｍ）を測定した。
（３）ラブフィリン３ａ抗原固相化ＥＬＩＳＡの結果
（３－１）ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５１３－５３２）抗原固相化ＥＬＩＳＡの結果
ＬＩＮＨ２２例、健常人１０例、腫瘍に伴う尿崩症８例、特発性尿崩症８例で検討を行った結果、ＬＩＮＨ２２例中１例でラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５１３－５３２）に対する吸光度の上昇が認められた（図１）。
（３－２）ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５５８－５７７）抗原固相化ＥＬＩＳＡの結果
ＬＩＮＨ２２例、健常人１０例、腫瘍に伴う尿崩症８例、特発性尿崩症８例で検討を行った結果、ＬＩＮＨ２２例中３例でラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５５８－５７７）に対する吸光度の上昇が認められた（図２）。
また、特許文献１では吸光度の上昇が観察できなかった検体が、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５５８－５７７）を用いた場合に吸光度の上昇が認められる結果を得ており、本願発明の有効性を裏付ける結果を得ている。
（３－３）ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５８８－６０７）抗原固相化ＥＬＩＳＡの結果
ＬＩＮＨ２２例、健常人１０例、腫瘍に伴う尿崩症８例、特発性尿崩症８例で検討を行った結果、ＬＩＮＨ２２例中３例、及び特発性尿崩症８例中２例でラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５８８－６０７）に対する吸光度の上昇が認められた（図３）。特発性尿崩症はその中の多くの原因に自己免疫機序としてＬＩＮＨが関与することが知られており、特発性尿崩症で吸光度の上昇が認められたことは本ＥＬＩＳＡの有効性を裏付ける（図3）。
また、特許文献１では吸光度の上昇が観察できなかった検体が、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５８８－６０７）を用いた場合に吸光度の上昇が認められる結果を得ており、本願発明の有効性を裏付ける結果を得ている。
Construction and measurement of ELISA method (1) Preparation of antigen-immobilized ELISA plate Lovephilin 3a antigen was dissolved in cold PBS to prepare an aqueous antigen solution (concentration 1 μg/mL). The antigen aqueous solution was dispensed into an ELISA plate at 100 μL/well and allowed to stand at 4° C. overnight. The antigen aqueous solution was discarded, and 100 μL/well of blocking buffer was added to the ELISA plate, and the plate was left standing at 4° C. overnight. Subsequently, the blocking buffer was discarded and the sample was stored at 4°C with a desiccant until use.
(2) ELISA measurement A patient serum dilution solution was prepared by adding a reaction buffer to serum. A diluted patient serum solution (1:101 dilution) was added to the antigen-immobilized plate at 100 μL/well, and the plate was shaken at room temperature for 2 hours to react. Thereafter, the patient serum dilution solution was discarded and the ELISA plate was washed using washing buffer. Next, 100 μL/well of the secondary antibody solution Anti-Human IgG (γchain)-HRP was added to the ELISA plate and shaken for 1 hour at room temperature. The secondary antibody solution was discarded, and the ELISA plate was washed using a washing buffer. Subsequently, 100 μL/well of the 4° C. reaction substrate solution was added to the ELISA plate, and the plate was allowed to stand at room temperature for 15 minutes. After adding 100 μL/well of a reaction stop solution to stop the reaction, a wavelength of 450 nm (subwavelength 620 nm) was measured.
(3) Results of ELISA immobilized with Lovephilin 3a antigen (3-1) Results of ELISA immobilized with Lovefilin 3a (a.a. 513-532) antigen 22 cases of LINH, 10 cases of healthy subjects, 8 cases of diabetes insipidus associated with tumor For example, as a result of a study conducted on 8 cases of idiopathic diabetes insipidus, an increase in absorbance for lovefilin 3a (a.a. 513-532) was observed in 1 out of 22 LINH cases (Figure 1).
(3-2) Labphilin 3a (a.a. 558-577) Antigen-immobilized ELISA results Study conducted in 22 cases of LINH, 10 cases of healthy subjects, 8 cases of tumor-associated diabetes insipidus, and 8 cases of idiopathic diabetes insipidus. As a result, an increase in the absorbance for lovefilin 3a (a.a. 558-577) was observed in 3 out of 22 LINH cases (Figure 2).
In addition, in Patent Document 1, a sample in which no increase in absorbance could be observed showed an increase in absorbance when Lovefilin 3a (a.a. 558-577) was used, demonstrating the effectiveness of the present invention. We have obtained results that support this.
(3-3) Labfilin 3a (a.a. 588-607) antigen-immobilized ELISA results: Study on 22 cases of LINH, 10 cases of healthy subjects, 8 cases of tumor-associated diabetes insipidus, and 8 cases of idiopathic diabetes insipidus. As a result, an increase in the absorbance for lovefilin 3a (a.a. 588-607) was observed in 3 out of 22 LINH cases and 2 out of 8 idiopathic diabetes insipidus cases (Figure 3). LINH is known to be involved in many of the causes of idiopathic diabetes insipidus as an autoimmune mechanism, and the fact that increased absorbance was observed in idiopathic diabetes insipidus supports the effectiveness of this ELISA. This is confirmed (Figure 3).
In addition, in Patent Document 1, a sample in which no increase in absorbance could be observed was found to have an increase in absorbance when Lovefilin 3a (a.a. 588-607) was used, demonstrating the effectiveness of the present invention. We have obtained results that support this.
（３－４）ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５７３－５９２）抗原固相化ＥＬＩＳＡの結果
ＬＩＮＨ２２例、健常人１０例、腫瘍に伴う尿崩症８例、特発性尿崩症８例で検討を行った結果、吸光度の上昇を認める検体はなかった。
以上の結果から、ラブフィリン３ａ（ａ．ａ．５１３－５３２、ａ．ａ．５５８－５７７、ａ．ａ．５８８－６０７）の部分にＬＩＮＨ及び／又は特発性尿崩症に特異的なエピトープが存在する可能性が高いと考えられた。
(3-4) Labfilin 3a (a.a. 573-592) antigen-immobilized ELISA results: Study on 22 cases of LINH, 10 cases of healthy subjects, 8 cases of tumor-associated diabetes insipidus, and 8 cases of idiopathic diabetes insipidus. As a result, no specimen showed an increase in absorbance.
From the above results, the epitope specific to LINH and/or idiopathic diabetes insipidus is present in the labophilin 3a (a.a. 513-532, a.a. 558-577, a.a. 588-607) region. It was thought that there was a high possibility that it existed.
ＬＩＮＨ特異的な抗原蛋白ラブフィリン３ａにおいて、ａ．ａ．５１３－５３２、ａ．ａ．５５８－５７７、ａ．ａ．５８８－６０７が有力なエピトープ候補であることを見出すことに成功した。ａ．ａ．５１３－５３２、ａ．ａ．５５８－５７７、ａ．ａ．５８８－６０７とその近傍を含めた領域にＬＩＮＨ特異的な自己抗体（抗ラブフィリン３ａ抗体）のエピトープが存在することを強く支持するものである。当該エピトープに対する抗体（抗ラブフィリン３ａ抗体）を指標にすれば、極めて高い感度及び特異度をもってＬＩＮＨの検査（例えば鑑別や病態把握）が可能になる。従って、当該エピトープはＬＩＮＨの検査用試薬として極めて有用である。
また、ａ．ａ．５８８－６０７において、特発性尿崩症でも吸光度の上昇が確認されており、当該エピトープに対する抗体が指標となることを見出した。
以上のとおり、例えば、本発明に係るデータ取得方法における免疫複合体を検出するための測定法として、ＥＬＩＳＡ法を用いた場合、吸光度を測定しある一定値以上の吸光度である場合に、リンパ球性下垂体後葉炎及び／又は特発性尿崩症の予測を行うことが可能である。また、例えば、健常人における吸光度の測定結果を指標として、当該吸光度よりも高い場合に、リンパ球性下垂体後葉炎及び／又は特発性尿崩症の予測を行うことが可能である。
In the LINH-specific antigenic protein labophilin 3a, a. a. 513-532, a. a. 558-577, a. a. We succeeded in finding that 588-607 is a strong epitope candidate. a. a. 513-532, a. a. 558-577, a. a. This strongly supports the existence of an epitope of a LINH-specific autoantibody (anti-labphilin 3a antibody) in the region including 588-607 and its vicinity. If an antibody against the epitope (anti-labphilin 3a antibody) is used as an index, it becomes possible to test for LINH (for example, for differentiation and understanding of pathological conditions) with extremely high sensitivity and specificity. Therefore, the epitope is extremely useful as a reagent for LINH testing.
Also, a. a. In No. 588-607, an increase in absorbance was confirmed even in idiopathic diabetes insipidus, and it was found that antibodies against the epitope could serve as an indicator.
As described above, for example, when the ELISA method is used as a measurement method for detecting immune complexes in the data acquisition method according to the present invention, when the absorbance is measured and the absorbance is above a certain value, lymphocytes are detected. It is possible to predict posthypophysitis and/or idiopathic diabetes insipidus. Furthermore, for example, by using the absorbance measurement result in a healthy person as an index, it is possible to predict lymphocytic posterior pituitary inflammation and/or idiopathic diabetes insipidus if the absorbance is higher than the absorbance.
本発明により、特許文献１において検出が不可能であった検体に関して、ａ．ａ．５１３－５３２、ａ．ａ．５５８－５７７及びａ．ａ．５８８－６０７のペプチドを用いることで検出が可能となった。 According to the present invention, a. a. 513-532, a. a. 558-577 and a. a. Detection became possible by using peptide 588-607.
本発明により見いだされたペプチドに対する自己抗体を解析することで、より感度、特異度に優れたＬＩＮＨ又は特発性尿崩症のバイオマーカーとなる可能性がある。また、本発明に係るペプチドや自己抗体は、診断キットとして開発されることが期待される。 By analyzing autoantibodies against the peptides discovered by the present invention, it may become a biomarker for LINH or idiopathic diabetes insipidus with higher sensitivity and specificity. Furthermore, the peptides and autoantibodies according to the present invention are expected to be developed as diagnostic kits.
Claims (7)
ラブフィリン３ａの５４８～５８７位のアミノ酸配列、及び
ラブフィリン３ａの５７８～６１７位のアミノ酸配列の何れかのアミノ酸配列のうち、６～３０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドを含有する、リンパ球性漏斗下垂体後葉炎又は特発性尿崩症の検査試薬。 Amino acid sequence of positions 503 to 542 of lovephilin 3a,
Lymphocytic peptide containing a peptide having 6 to 30 consecutive amino acid sequences from either the amino acid sequence of positions 548 to 587 of lovephilin 3a and the amino acid sequence of positions 578 to 617 of lovephilin 3a. Test reagent for postinfundibulitis or idiopathic diabetes insipidus.
ラブフィリン３ａの５５８～５７７位のアミノ酸配列（配列番号６）、及び
ラブフィリン３ａの５８８～６０７位のアミノ酸配列（配列番号７）の何れかのアミノ酸配列のうち、６～２０個の連続したアミノ酸配列を有するペプチドを含有する、請求項１に記載の検査試薬。 Amino acid sequence of positions 513 to 532 of lovefilin 3a (SEQ ID NO: 5),
A sequence of 6 to 20 consecutive amino acids from either the amino acid sequence of positions 558 to 577 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 6) and the amino acid sequence of positions 588 to 607 of labophilin 3a (SEQ ID NO: 7). The test reagent according to claim 1, which contains a peptide having the following.
（１）検体と、請求項１～４のいずれか１項に記載の検査試薬を接触させる工程
（２）免疫複合体を検出する工程。 A method for obtaining data for predicting lymphocytic retrohypophysitis and/or idiopathic diabetes insipidus, including the following steps:
(1) A step of contacting a specimen with the test reagent according to any one of claims 1 to 4. (2) A step of detecting an immune complex.
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