JP2023093644A - アンジオテンシノーゲンの発現を調節するための化合物及び方法 - Google Patents

アンジオテンシノーゲンの発現を調節するための化合物及び方法 Download PDF

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Abstract

【課題】必要とする個体において、ＡＧＴを調節し、かつＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態を調節するための修飾オリゴヌクレオチドを含む、組成物及び化合物を提供する。【解決手段】高血圧などの個体におけるＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態は、ＡＧＴに対して標的化されたアンチセンス化合物の投与により、治療、改善、遅延または予防することができる。【選択図】なし

Description

配列表
本出願は、電子形式の配列表とともに出願されている。配列表は、２０１６年１０月３日に作成されたサイズ４５６ｋｂのＢＩＯＬ０２７０ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと題するファイルとして提出される。この電子形式の配列表中の情報は、その全体が参照により本明細書に援用される。
本発明は、動物におけるＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態を調節する目的で、アンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）の発現を調節するための化合物、組成物及び方法を提供する。本発明はまた、ＡＧＴ阻害薬を動物に投与することによって、高血圧及び器官障害を軽減するための化合物、組成物及び方法を提供する。
ＳＥＲＰＩＮＡ８またはＡＮＨＵとしても知られるアンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）は、セルピンファミリーのメンバーであり、レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）の一構成要素である。ＡＧＴは、主に肝臓で産生された後、循環系中に放出され、そこで、レニンによりアンジオテンシンＩに変換される。アンジオテンシンＩは、続いて、アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）によって、アンジオテンシンＩＩに変換される。アンジオテンシンＩＩは、血管収縮をもたらすペプチドホルモンであり、それにより血圧を上昇させることができる。アンジオテンシンＩＩはまた、副腎皮質からのホルモンアルドステロンの分泌を刺激する。アルドステロンは、腎臓にナトリウム及び水の再吸収を増加させるように働き、これにより、体内の体液量が増加し、結果として、血圧の上昇が生じ得る。ＲＡＡＳ経路の過剰な刺激または活性は、高い血圧につながる場合がある。慢性的な高い血圧は、高血圧として知られている。高血圧の対象では、この血圧の高さにより、心臓の働きを増大させて血液を血管に循環させる必要がある。
世界保健機関（ＷＨＯ）は、高血圧を心臓血管疾患の主原因であるとしている。高血圧は、寿命短縮、慢性腎疾患、脳卒中、心筋梗塞、心不全、血管の動脈瘤（例えば、大動脈瘤）、末梢動脈疾患、心臓障害（例えば、心拡大または心肥大）及び他の心臓血管に関連する疾患、障害及び／または病態などの様々な疾患、障害及び病態の主要危険因子である。
治療抵抗性高血圧（ＲＨＴＮ）、すなわち、薬物治療に耐性のある高血圧の罹患率は、集団の高齢化及び肥満症の発生率の絶え間ない増加により、数値が着実に増加している。米国における約１０００万人のＲＨＴＮ成人という現在の予測は、増加していくだろうと考えられている。
抗高血圧薬、腎デナベーション、圧受容器活性化療法、食生活の改善及び生活習慣の改善は、高血圧を軽減し、高血圧に関連する疾患、障害及び／または病態を軽減し得る（Ｐａｕｌｉｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｃａｒｄｉｏｌ，２０１２，９：２７６－２８５）。しかしながら、高血圧の治療に対して現在承認されている治療法には、全高血圧患者のうちのかなりの部分が十分な血圧制御を達成できていないため、限界がある。例えば、レニン－アンジオテンシン系（ＲＡＳ）経路の一部を標的にするＡＣＥ阻害薬及びアンジオテンシン受容体拮抗薬（ＡＲＢ）などの薬物は、ＲＡＡＳ経路を阻害する能力に限りがある（Ｎｏｂａｋｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０１１，７：３５６－３５９）。更に、ＡＣＥ阻害薬などの特定の抗高血圧薬は、患者の腎機能を弱める可能性があるため、腎疾患を伴う高血圧患者には禁忌である。
したがって、ＲＡＡＳ経路を阻害し、高血圧を治療するための代替治療を見出す必要がある。アンチセンス技術は、特定の遺伝子産物の発現を減少させるのに有効な手段として注目されている。しかしながら、ＡＧＴを標的にする初期のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、限定的な利益しかもたらさないか（ＷＯ１９９７／３３６２３）、非ヒトＡＧＴを標的にしている（ＷＯ２０１４／０１８９３０）。本明細書の化合物及び組成物は、ヒトＡＧＴを阻害する、非常に強力かつ忍容性のある新規化合物を提供するものであり、これらはまた、ヒト対象における使用に適している。更に、本明細書に開示される化合物は、コンジュゲート法を使用してアンチセンス化合物を肝臓に送達し、その腎臓内分布及び活性を制限することにより、高カリウム血症及び／または腎疾患のリスクのある患者において、従来のＲＡＳ拮抗薬の忍容性問題を低減すると予想される。
限定するものではないが、特許、特許出願、記事、書籍及び論文を含む、本出願に引用される全ての文献または文献の一部は、本明細書で考察される文献の一部について、またその全体が参照により明示的に本明細書に援用される。
動物においてＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質のレベルを低下させるための組成物、化合物及び方法が本明細書で提供される。
本明細書で開示される特定の実施形態は、ＡＧＴをコードする核酸配列を標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の実施形態において、化合物は、配列番号１～６のうちのいずれかの核酸塩基配列に示されるＡＧＴ配列を標的にする。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２５０～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２８１～２３００のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号４６、５３～５４、６１、６８、７６、８３、８５、９３、９６～９７、１０９、１２７、１２９～１３０、１３２、１３４～１５、１３７～３９、１４２、１６３～１７２、１８０～１８４、１８６、１８９、２３４、２３６、２３８～２３９、２６７、３１３、４１１、４５２、４６３～４７０、４７５～４７８、４８０、５００～５０３、５１２、５１７～５１８、５２４～５２６、６５４、６８９、７０２、７２５～７２６、７２８、７３８、７７９、７８６～７８７、８００、８０８、８１０～８１１、８２５、８６５、８６８、８８９、８９４、９０３、９０５、９０９、９５４、９６６、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０８０、１０８５、１２５８～１２５９、１２６１～１２６２、１２９３～１２９４、１２９９、１３２５、１４７０、１４７２～１４７３、１５２２、１５４２、１６０４、１６２３～１６２４、１６６７、１６７０、１６８２～１６８３、１６８７、１７００、１７０３～１７０４、１７０８、１７１４、１７１６、１７１９～１７２０、１７２４～１７２６、１７２９～１７３０、１８２７、１９３６、１８４３～１８４４、１８４６、１８８６、１８９３～１８９４、１９１４、
１９２３、１９２５、１９３２、１９７９、１９８６、１９８８、１９９０、２００３、２０１５、２０１８、２０２０、２０２７～２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、次式：ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ
Ａｅｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｅｓ Ｇｅｓ Ｇｅｓ Ｔｅｓ Ｔｅ（配列番号１９１４）（式中、Ａはアデニンであり、ｍＣは５－メチルシトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｔはチミンであり、ｅは２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、ｄは２’－デオキシヌクレオシドであり、ｓはホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）に従う修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
本明細書で開示される特定の実施形態は、次式を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
Figure 2023093644000001
前述の全般的な説明及び以下の詳細な説明は、いずれも例示的かつ説明的なものにすぎず、特許請求される本発明を制限するものではないことを理解されたい。本明細書中、単数形の使用は、特に明記しない限り、複数を含む。本明細書で使用されるとき、「ｏｒ（または）」の使用は、別の記載がない限り、「ａｎｄ／ｏｒ（及び／または）」を意味する。更に、「ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ（含む）」という用語ならびに「ｉｎｃｌｕｄｅｓ（含む）」及び「ｉｎｃｌｕｄｅｄ（含む）」などの他の形の使用は、限定的ではない。また、「要素」または「成分」などの用語は、特に明記しない限り、１単位を含む要素及び成分と、１つを超える下位単位を含む要素及び成分との両方を包含する。
本明細書で使用される段落見出しは、単に構成上の目的であり、記載される主題の限定を意図するものではない。限定するものではないが、特許、特許出願、記事、書籍及び論文を含む、本出願に引用される全ての文献または文献の一部は、本明細書で考察される文献の一部について、またその全体が参照により明示的に本明細書に援用される。
定義
特定の定義が提供されない限り、本明細書に記載される分析化学、有機合成化学及び医薬製薬化学に関して使用される用語ならびにこれらの手順及び技術は、当該技術分野にお
いてよく知られており、一般的に使用されるものである。化学合成及び化学分析には、標準的技術を使用することができる。許容される場合、本開示を通して参照される全ての特許、出願、公開出願、ならびに他の公開物、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）などのデータベースを通じて取得可能なＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号及び関連する配列情報、ならびに他のデータは、本明細書で考察される文献の一部について、またその全体が参照により本明細書に援用される。
特に指示がない限り、次の用語は、次の意味を有する。
「２’－Ｏ－メトキシエチル」（２’－ＭＯＥ及び２’－Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３も同様）は、フロシル環の２’位のＯ－メトキシ－エチル修飾を指す。２’－Ｏ－メトキシエチルで修飾された糖は、修飾糖である。
「２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチド」は、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾糖部分を含むヌクレオチドを意味する。
「５－メチルシトシン」とは、５’位にメチル基が結合した修飾されたシトシンを意味する。５－メチルシトシンは、修飾核酸塩基である。
「約」は、値の±１０％以内を意味する。例えば、「マーカーが約５０％増加し得る」と記載される場合、それは、そのマーカーが４５％～５５％増加し得ることを意味する。
アンジオテンシンＩＩの再活性化としても知られる「ＡＣＥエスケープ」は、血漿アンジオテンシンＩＩレベルを確実に抑制するための現在利用可能なＡＣＥ阻害薬の治療が効かなくなることを指す。ＡＣＥ阻害中の血漿アンジオテンシンＩＩレベルの上昇は、アンジオテンシンＩをアンジオテンシンに変換する他の酵素によって生じる。このアンジオテンシンＩＩレベルの不完全な遮断は、ＡＣＥ阻害薬による一部の高血圧の対象の効果的な治療を妨げている。アンジオテンシン受容体拮抗薬（ＡＲＢ）も同様に、ＡＴ１受容体以外の他の受容体がアンジオテンシン代謝産物に結合することから、ＡＣＥエスケープの影響を受け得る。
「活性薬剤」または「薬剤」とは、個体に投与したときに治療上の利益をもたらす、医薬組成物中の１つ以上の物質を意味する。例えば、特定の実施形態において、ＡＧＴに対して標的化されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、活性薬剤である。
「活性標的領域」または「標的領域」とは、１つ以上の活性アンチセンス化合物が標的とする領域を意味する。
「活性アンチセンス化合物」とは、標的核酸レベルまたはタンパク質レベルを低下させるアンチセンス化合物を意味する。
「同時に投与される」は、患者において２つの剤の両方の薬理作用が同時に顕在化される任意の方法での２つの剤の共投与を指す。同時投与は、両方の剤が、単一の医薬組成物、同じ剤形または同じ投与経路で投与されることを必要としない。両方の剤の作用が同時に顕在化される必要はない。作用は、ある期間にわたって重複しているだけでよく、同じ時間幅を有する必要はない。
「投与すること」とは、個体に薬剤を提供することを意味し、医療専門家による投与及び自己投与を含むが、これらに限定されない。
「アルドステロンエスケープ」または「アルドステロンブレイクスルー」は、一部の治療中対象において、アルドステロン放出を確実に抑制するための現在利用可能なＡＣＥ阻害薬 アンジオテンシン受容体拮抗薬（ＡＲＢ）及び／または直接的レニン阻害薬（ＤＲＩ）の治療が効かなくなることを指す。このアルドステロンの不完全な遮断は、ＡＣＥ阻害薬、ＤＲＩ及びＡＲＢによる一部の高血圧の対象の効果的な治療を妨げている。
「剤」とは、動物に投与したときに治療上の利益をもたらすことができる活性物質を意味する。「第１の剤」とは、本明細書で提供される治療用化合物を意味する。例えば、第１の剤は、ＡＧＴを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドである。「第２の剤」とは、第２の本明細書に記載される治療用化合物を意味する。例えば、第２の剤は、ＡＧＴまたはＡＧＴ以外の標的を標的にする第２のアンチセンスオリゴヌクレオチドであり得る。あるいは、第２の剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド以外の化合物であり得る。
「改善」または「改善する」は、関連する疾患、障害及び／または病態の少なくとも１つの指標、マーカー、徴候または症状の軽減を指す。特定の実施形態において、改善は、病態、障害及び／または疾患の１つ以上の指標の進行の遅延または減速を含む。指標の重症度は、当業者に知られている、主観的または客観的尺度によって決定することができる。
「アンジオテンシノーゲン」及び「ＡＧＴ」は、本明細書で区別なく用いられる。アンジオテンシノーゲンは、ＳＥＲＰＩＮＡ８及びＡＮＨＵとしても知られている。
「アンジオテンシノーゲン核酸」または「ＡＧＴ核酸」とは、ＡＧＴをコードする任意の核酸を意味する。例えば、特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸には、ＡＧＴをコードするＤＮＡ配列、ＡＧＴをコードするＤＮＡから転写されたＲＮＡ配列（イントロン及びエクソンを含むゲノムＤＮＡを含む）、及びＡＧＴをコードするｍＲＮＡ配列が含まれる。「ＡＧＴ ｍＲＮＡ」は、ＡＧＴタンパク質をコードするｍＲＮＡを意味する。
「ＡＧＴ特異的阻害薬」は、ＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはＡＧＴタンパク質の発現を特異的に阻害することができる任意の剤を指す。例えば、ＡＧＴ特異的阻害薬には、ＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはＡＧＴタンパク質の発現を特異的に阻害することができる、核酸（ＲＮａｓＨ、ｓｉＲＮＡ及びブロックマーアンチセンス化合物などのアンチセンス化合物を含む）、ペプチド、抗体、小分子及び他の剤が含まれる。特定の実施形態において、ＡＧＴ特異的阻害薬は、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベル及び／またはＡＧＴタンパク質発現を特異的に調節することによって、レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系（ＲＡＡＳ）経路の構成要素に影響を与えることができる。特定の実施形態において、ＡＧＴ特異的阻害薬は、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベル及び／またはＡＧＴタンパク質発現を特異的に調節することによって、血圧などのＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態に影響を与えることができる。同様に、特定の実施形態において、ＡＧＴ特異的阻害薬は、動物における他の分子プロセスに影響を与えることができる。
「動物」は、ヒトまたはヒト以外の動物を指し、限定するものではないが、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ブタ及び非ヒト霊長類（サル及びチンパンジーを含むが、これらに限定されない）が含まれる。
「抗高血圧薬」は、血圧を下げることができる薬物を指す。かかる薬物の例には、ＲＡＡＳ阻害薬、利尿薬、カルシウムチャネル拮抗薬、交感神経受容体遮断薬、交感神経作動薬及び血管拡張薬が挙げられるが、これらに限定されない。一例として、抗高血圧薬カプトプリルを本明細書に記載のＡＧＴ化合物と組み合わせて使用して、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／もしくは病態を有する動物、またはそのリスクのある動物を治療すること
ができる。
「抗高血圧処置」は、高血圧を軽減するために対象に対して実施される医療処置を指す。かかる処置の例には、腎デナベーション及び圧受容器活性化療法が挙げられる。
「抗体」は、何らかの方法で抗原と特異的に反応することを特徴とする分子を指し、抗体及び抗原は、他方の観点から互いに定義される。抗体は、完全な抗体分子、または重鎖、軽鎖、Ｆａｂ領域及びＦｃ領域などの任意のその断片もしくは領域を指す。
「アンチセンス活性」とは、アンチセンス化合物のその標的核酸へのハイブリダイゼーションに帰する何らかの検出可能または測定可能な活性を意味する。特定の実施形態において、アンチセンス活性は、標的核酸または当該標的核酸によってコードされているタンパク質の量または発現の減少である。
「アンチセンス化合物」とは、水素結合を介して標的核酸にハイブリダイゼーションを起こすことができるオリゴマー化合物を意味する。
「アンチセンス阻害」とは、アンチセンス化合物の非存在下での標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルと比較した、標的核酸に相補的なアンチセンス化合物の存在下での標的核酸レベルまたは標的タンパク質レベルの減少を意味する。
「アンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、標的核酸の対応する領域またはセグメントへのハイブリダイゼーションを可能にする核酸塩基配列を有する一本鎖オリゴヌクレオチドを意味する。
「二環式糖」とは、２つの非ジェミナル環原子の架橋によって修飾されたフロシル環を意味する。二環式糖は、修飾糖である。
「二環式核酸」または「ＢＮＡ」は、ヌクレオシドまたはヌクレオチドのフラノース部分が、フラノース環上の２つの炭素原子を接続している架橋を含み、これにより二環式系を形成している、ヌクレオシドまたはヌクレオチドを指す。
「血圧」は、循環系中の血液の血管壁に対する圧力を指す。血圧は、主に動物の心臓の鼓動によるものである。各心拍中に、血圧は、最高（収縮期）血圧（ＳＢＰ）と最低（拡張期）血圧（ＤＢＰ）との間で変動する。平均動脈圧（ＭＡＰ）は、心拍周期中の動脈圧の平均である。血圧は、血圧測定器（すなわち、血圧計）によって測定することができる。安静時の正常血圧は、収縮期１００～１４０ｍｍＨｇ及び拡張期６０～９０ｍｍＨｇの範囲内であり、一般に、収縮期圧（最高読み取り値）／拡張期圧（最低読み取り値）ｍｍＨｇとして表される。
「キャップ構造」または「末端キャップ部分」とは、アンチセンス化合物のいずれかの末端に組み込まれた化学修飾を意味する。
「ｃＥｔ」または「拘束エチル」とは、４’－炭素と２’－炭素とを接続する架橋を含み、当該架橋が式：４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’を有する、二環式糖部分を意味する。
「拘束エチルヌクレオシド」（ｃＥｔヌクレオシドも同様）とは、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’架橋を含む二環式糖部分を含むヌクレオシドを意味する。
「化学的に異なる領域」は、同じアンチセンス化合物の別の領域とは何らかの形で化学的に異なるアンチセンス化合物の領域を指す。例えば、２’－Ｏ－メトキシエチルヌクレオチドを有する領域は、２’－Ｏ－メトキシエチル修飾を含まないヌクレオチドを有する領域とは化学的に異なる。
「キメラアンチセンス化合物」とは、少なくとも２つの化学的に異なる領域を有するアンチセンス化合物を意味する。
「共投与」とは、個体への２つ以上の薬剤の投与を意味する。２つ以上の薬剤は、単一の医薬組成物であってもよいし、別個の医薬組成物であってもよい。２つ以上の薬剤のそれぞれは、同じ投与経路または異なる投与経路で投与することができる。共投与は、同時投与、並行投与または順次投与を包含する。
「相補性」とは、第１の核酸と第２の核酸の核酸塩基間の対合能力を意味する。特定の実施形態において、第１の核酸はアンチセンス化合物であり、第２の核酸は標的核酸である。
「連続した核酸塩基」とは、互いに直接隣接する核酸塩基を意味する。
「デオキシリボヌクレオチド」とは、ヌクレオチドの糖部分の２’位に水素を有するヌクレオチドを意味する。デオキシリボヌクレオチドは、種々の置換基のいずれかで修飾されてもよい。
「希釈剤」とは、薬理活性はないが、薬学的に必要であるか、望ましい、組成物中の成分を意味する。例えば、注射組成物中の希釈剤は、液体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）または水であり得る。
「製剤単位」とは、薬剤が提供される形態、例えば、丸剤、錠剤または当該技術分野において知られている他の製剤単位を意味する。特定の実施形態において、製剤単位は、凍結乾燥されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。特定の実施形態において、製剤単位は、再構成されたアンチセンスオリゴヌクレオチドを含有するバイアルである。
「用量」とは、１回の投与または指定された期間内に提供される薬剤の指定量を意味する。特定の実施形態において、ある用量は、１回、２回またはそれ以上のボーラス、錠剤または注射で投与することができる。例えば、皮下投与が望ましい特定の実施形態において、所望の用量は、１回の注射では容易に対応できない体積を必要とし、そのため、２回以上の注射を使用して所望の用量を達成することができる。特定の実施形態において、薬剤は、長期間にわたる注入または持続注入により投与される。用量は、時間、日、週または月あたりの薬剤の量として示すことができる。
「有効な量」または「治療上有効な量」とは、活性薬剤を必要とする個体において所望の生理学的結果をもたらすのに十分な活性薬剤の量を意味する。有効な量は、治療される個体の健康状態及び身体状態、治療される個体の分類群、組成物の処方、個体の医学的状態の評価、ならびに他の関連因子に応じて、個体間で変動し得る。一例として、有効量のＡＧＴアンチセンスオリゴヌクレオチドは、血圧を低下させ、かつ／または高血圧による器官障害を改善する。
「完全に相補的」または「１００％相補的」とは、第１の核酸の核酸塩基配列の各核酸塩基が、第２の核酸の第２の核酸塩基配列中に相補的な核酸塩基を有することを意味する
。特定の実施形態において、第１の核酸はアンチセンス化合物であり、第２の核酸は標的核酸である。
「ギャップマー」とは、ＲＮａｓｅ Ｈ切断を支援する複数のヌクレオシドを有する内側領域が、１つ以上のヌクレオシドを有する外側領域との間に配置されており、ここで、内側領域に含まれるヌクレオシドは、外側領域に含まれる１つ以上のヌクレオシドとは化学的に異なる、キメラアンチセンス化合物を意味する。内側領域は、「ギャップセグメント」と呼ぶことができ、外側領域は、「ウイングセグメント」と呼ぶことができる。
「ギャップ拡大」とは、１～６個のヌクレオシドを有する５’及び３’ウイングセグメントの間に配置され、これらのウイングセグメントに直接隣接した１２個以上の連続した２’－デオキシヌクレオシドのギャップセグメントを有するキメラアンチセンス化合物を意味する。
「ハイブリダイゼーション」とは、相補的な核酸分子のアニーリングを意味する。特定の実施形態において、相補的な核酸分子には、アンチセンス化合物と核酸標的が挙げられる。
「高血圧」または「ＨＴＮ」は、動物の血圧が上昇している、慢性的な医学的状態を指す。血圧が上昇すると、心臓の働きを増大させて血液を血管に循環させる必要がある。血圧が持続的に１４０／９０ｍｍＨｇ以上である場合、高血圧と言われる。高血圧は、一次性（本態性）または二次性に分類される。一次性高血圧は、明確な原因がなく、遺伝、食生活、運動不足及び肥満に関連すると考えられている。二次性高血圧は、別の医学的状態によって生じたものである。高血圧は、寿命短縮、慢性腎疾患、脳卒中、心筋梗塞、心不全、血管の動脈瘤（例えば、大動脈瘤）、末梢動脈疾患、器官障害（例えば、心拡大または心肥大）ならびに他の心臓血管系疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状の主要危険因子である。抗高血圧薬、食生活の改善及び生活習慣の改善は、高血圧を軽減し、高血圧に関連する疾患、障害及び／または病態を軽減し得る。高血圧は、薬物介入に抵抗がない（すなわち、市販の薬物での治療法によって制御可能である）場合もあれば、薬物介入に抵抗がある場合もある。
「ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態を有する動物、またはそのリスクのある動物を特定する」とは、ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態の診断を受けた動物を特定すること、またはＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態を発症する素因のある動物を特定することを意味する。ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態を発症する素因のある個体には、例えば、高血圧などのＲＡＡＳ関連疾患の家族歴を有する個体が含まれる。このような特定は、個体の病歴の評価及び標準的な臨床検査または臨床評価を含む任意の方法によって達成することができる。
「直接隣接する」とは、直接隣接する要素と要素との間に介在する要素が存在しないことを意味する。
「個体」または「対象」または「動物」とは、処置または治療のために選択されるヒトまたはヒト以外の動物を意味する。
「発現または活性を阻害する」は、ＲＮＡまたはタンパク質の発現または活性の低下または遮断を指し、必ずしも発現または活性の完全な排除を示すものではない。
「ヌクレオシド間結合」は、ヌクレオシド間の化学結合を指す。
「静脈内投与」とは、静脈内への投与を意味する。
「結合されたヌクレオシド」とは、互いに結合された隣接するヌクレオシドを意味する。
「マーカー」または「バイオマーカー」は、任意の測定可能かつ定量可能な生物学的パラメーターであり、健康または生理機能に関する評価の指標となる。例えば、血圧の上昇または器官障害（例えば、線維症）の軽減は、ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態のマーカーとみなすことができる。
「ミスマッチ」または「非相補的核酸塩基」または「ＭＭ」は、第１の核酸の核酸塩基が、第２の核酸または標的核酸の対応する核酸塩基と対合することができない場合を指す。
「修飾ヌクレオシド間結合」は、天然に生じるヌクレオシド間結合（すなわち、ホスホジエステルヌクレオシド間結合）からの置換または任意の変更を指す。
「修飾核酸塩基」とは、アデニン、シトシン、グアニン、チミジンまたはウラシル以外の任意の核酸塩基を指す。例えば、修飾核酸塩基は、５－メチルシトシンであり得る。「非修飾核酸塩基」とは、プリン塩基のアデニン（Ａ）及びグアニン（Ｇ）と、ピリミジン塩基のチミン（Ｔ）、シトシン（Ｃ）及びウラシル（Ｕ）とを意味する。
「修飾ヌクレオシド」とは、修飾糖部分及び／または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオシドを意味する。
「修飾ヌクレオチド」とは、修飾糖部分、修飾ヌクレオシド間結合及び／または修飾核酸塩基を独立して有するヌクレオチドを意味する。
「修飾オリゴヌクレオチド」とは、修飾ヌクレオシド間結合、修飾糖及び／または修飾核酸塩基を含むオリゴヌクレオチドを意味する。
「修飾糖」は、天然糖からの置換または変更を指す。例えば、修飾糖は、２’－ＭＯＥであり得る。
「調節する」とは、細胞、組織、器官または生物のある特徴を変化または調整することを指す。例えば、ＡＧＴ ｍＲＮＡを調節するとは、細胞、組織、器官または生物のＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはＡＧＴタンパク質のレベルを増加または減少させることを意味し得る。ＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはタンパク質の調節は、細胞、組織、器官または生物におけるＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態の増大または減少をもたらし得る。「調節薬」は、細胞、組織、器官または生物において変化をもたらす。例えば、ＡＧＴアンチセンス化合物は、細胞、組織、器官または生物のＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはＡＧＴタンパク質の量を増加または減少させる調節薬であり得る。
「モノマー」は、オリゴマーの１つの単位を指す。モノマーには、天然に生じるものまたは修飾されたものを問わず、ヌクレオシド及びヌクレオチドが挙げられるが、これらに限定されない。
「モチーフ」とは、アンチセンス化合物の化学的に異なる領域のパターンを意味する。
「天然に生じるヌクレオシド間結合」とは、３’－５’ホスホジエステル結合を意味す
る。
「天然糖部分」とは、ＤＮＡ（２’－Ｈ）またはＲＮＡ（２’－ＯＨ）に認められる糖を意味する。
「非治療抵抗性高血圧」、「非難治性高血圧」または「制御された高血圧」は、最大３種の抗高血圧剤の同時使用による治療に応答し、結果として、例えば、血圧がＳＢＰ＜１４０ｍｍＨｇまたはＤＢＰ＜９０ｍｍＨｇとなる高血圧と定義される。
「核酸」は、ヌクレオチドモノマーからなる分子を指す。核酸には、リボ核酸（ＲＮＡ）、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、一本鎖核酸、二本鎖核酸、低分子干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）及びｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）が含まれる。
「核酸塩基」とは、別の核酸の塩基と対合することができる複素環式部分を意味する。
「核酸塩基配列」とは、任意の糖、結合または核酸塩基の修飾に関係なく、連続した核酸塩基の順序を意味する。
「ヌクレオシド」とは、糖に結合した核酸塩基を意味する。
「ヌクレオシド模倣物」には、オリゴマー化合物の１つ以上の位置で、糖または糖及び塩基、また必須ではないが結合を置換するために使用される構造が含まれ、例えば、モルホリノ、シクロヘキセニル、シクロヘキシル、テトラヒドロピラニル、ビシクロまたはトリシクロ糖模倣物、例えば、フラノース以外の糖単位を有するヌクレオシド模倣物である。
「ヌクレオチド」とは、ヌクレオシドの糖部分にリン酸基が共有結合したヌクレオシドを意味する。
「ヌクレオチド模倣物」には、オリゴマー化合物の１つ以上の位置で、ヌクレオシド及び結合を置換するために使用される構造が含まれ、例えば、ペプチド核酸またはモルホリノ（－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（＝Ｏ）－Ｏ－または他の非ホスホジエステル結合によって結合されたモルホリノ）などである。
「器官障害」または「終末器官障害」は、循環系によって栄養補給される主要器官に生じる障害を指し、例えば、心臓（例えば、心筋肥大、心機能低下及び／または心不全）、腎臓（例えば、アルブミン尿、タンパク質尿、腎機能低下及び／または腎不全）、眼（例えば、高血圧性網膜症）、脳（例えば、脳卒中）などである。器官は、動物の高血圧によって障害を生じ得る。特定の実施形態において、心臓障害は、線維症、心拡大につながる心臓細胞及び／または心筋の肥大である。
「オリゴマー化合物」または「オリゴマー」は、２つ以上の下位構造（モノマー）を含み、核酸分子のある領域にハイブリダイズすることができる高分子構造を指す。特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオシドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、オリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、アンチセンス化合物である。特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、キメラオリゴヌクレオチドである。
「オリゴヌクレオチド」とは、結合されたヌクレオシドの重合体を指し、ヌクレオシド
のそれぞれは、互いに独立して修飾されていても修飾されていなくてもよい。
「非経口投与」とは、注射または注入による投与を意味する。非経口投与には、皮下投与、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、腹腔内投与または頭蓋内投与、例えば、髄腔内もしくは脳室内投与が含まれる。投与は、連続的、または長期的、または短期的、または断続的であり得る。
「ペプチド」は、少なくとも２つのアミノ酸をアミド結合によって結合することによって形成された分子を指す。ペプチドは、ポリペプチド及びタンパク質を指す。
「医薬組成物」とは、個体への投与に好適な物質の混合物を意味する。例えば、医薬組成物は、１つ以上の活性薬剤及び無菌水溶液を含み得る。
「薬学的に許容される担体」とは、オリゴヌクレオチドの構造に干渉しない媒体または希釈剤を意味する。このような特定の担体は、対象による経口摂取用の医薬組成物、例えば、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤及びロゼンジ剤の製剤化を可能にする。例えば、薬学的に許容される担体は、滅菌水またはＰＢＳなどの無菌水溶液であり得る。
「薬学的に許容される誘導体」は、本明細書に記載される化合物の薬学的に許容される塩、コンジュゲート、プロドラッグまたは異性体を包含する。
「薬学的に許容される塩」とは、アンチセンス化合物の生理学的及び薬学的に許容される塩、すなわち、親オリゴヌクレオチドの所望の生物学的活性を保持し、かつ望ましくない毒性作用を付与しない塩を意味する。
「ホスホロチオエート結合」とは、架橋していない酸素原子のうちの１つを硫黄原子で置き換えることによって、ホスホジエステル結合が修飾されている、ヌクレオシド間の結合を意味する。ホスホロチオエート結合は、修飾ヌクレオシド間結合である。
「部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）」とは、核酸のある所定数の連続した（すなわち、結合された）核酸塩基を意味する。特定の実施形態において、部分は、標的核酸のある所定数の連続した核酸塩基である。特定の実施形態において、部分は、アンチセンス化合物のある所定数の連続した核酸塩基である。
「予防する」とは、疾患、障害または病態の発症、発現または進行を、数分から無期限までの期間、遅延させ、または未然に防ぐことを指す。また、予防するとは、疾患、障害または病態を発症するリスクを低減することも意味する。
「プロドラッグ」とは、不活性形態で調製され、内因性酵素または他の化学物質もしくは条件の作用によって、体内またはその細胞内で活性形態に変換される、治療薬を意味する。
「レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系」、「レニン－アンジオテンシン－アルドステロン系経路」、「ＲＡＡＳ経路」または「ＲＡＡＳ」は、前駆体要素（アンジオテンシノーゲン）が、レニン及び酵素アンジオテンシン変換酵素（ＡＣＥ）などの様々な酵素によってアンジオテンシンＩ及びアンジオテンシンＩＩなどの下流要素に変換される多要素酵素経路を指す。アンジオテンシンＩは、経路中、ステロイドのアルドステロンの分泌を刺激する。ＲＡＡＳ経路は、体内の血圧と体液バランスを制御する。
「レニン－アンジオテンシン系」または「ＲＡＳ」または「ＲＡＳ経路」は、ＲＡＡＳ経路の一部を指す。この経路の様々な構成要素は、各構成要素の産生を妨げる作動薬または遮断薬の標的になっている。例えば、レニン阻害薬、ＡＣＥ阻害薬、アンジオテンシン受容体拮抗薬（ＡＲＢ）などは、ＲＡＳ経路を阻害または遮断するために開発されている。しかしながら、様々なＲＡＳ経路要素を標的にする市販の治療薬は、多様な機序に起因して、ＲＡＳ経路を完全に阻害または遮断するには効果的ではない（Ｎｏｂａｋｈｔ ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔ Ｒｅｖ Ｎｅｐｈｒｏｌ，２０１１，７：３５６－３５９）。
「ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態」または「ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態」は、動物におけるＲＡＡＳに関連する任意の疾患、障害または病態を指す。ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態の例には、寿命短縮、高血圧（例えば、非治療抵抗性高血圧、治療抵抗性高血圧）、腎疾患（例えば、慢性腎疾患、多発性嚢胞腎疾患）、脳卒中、心疾患（例えば、心筋梗塞、心不全、心臓弁膜症）、血管の動脈瘤（例えば、大動脈瘤）、末梢動脈疾患、器官障害（例えば、心臓障害または心肥大）、組織線維症ならびに他の心臓血管系疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状が挙げられる。特定の実施形態において、ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態は、高血圧を伴わない。
「治療抵抗性高血圧」または「ＲＨＴＮ」は、（１）薬物クラスが異なる３種の抗高血圧剤の同時使用にかかわらず、ＳＢＰ≧１４０ｍｍＨｇもしくはＤＢＰ≧９０ｍｍＨｇの血圧、または（２）血圧にかかわらず４種以上の抗高血圧薬の使用として定義される。
「副作用」とは、治療に起因すると考えられる、所望の効果ではない生理学的疾患及び／または病態を意味する。特定の実施形態において、副作用には、注射部位反応、肝機能検査異常、腎機能異常、肝毒性、腎毒性、中枢神経系異常、ミオパチー及び不調が含まれる。例えば、血清中アミノトランスフェラーゼレベルの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。例えば、ビリルビンの増加は、肝毒性または肝機能異常を示し得る。
「一本鎖オリゴヌクレオチド」とは、相補鎖にハイブリダイズしないオリゴヌクレオチドを意味する。
「特異的にハイブリダイズ可能」とは、特異的結合が望まれる条件下、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏアッセイ及び治療的処置の場合における生理学的条件下で、アンチセンスオリゴヌクレオチドと標的核酸との間に十分な程度の相補性を有し、所望の作用を誘導するが、非標的核酸に対する作用は最小であるか、全くないアンチセンス化合物を指す。例として、アンチセンス化合物は、化合物の標的核酸への結合が標的核酸の通常の機能に干渉して活性の消失を生じさせ、かつ特異的結合が望まれる条件下でアンチセンス化合物の非標的核酸配列に対する非特異的結合を回避するのに十分な程度の相補性がある場合、標的に特異的にハイブリダイズ可能である。
「皮下投与」とは、皮膚の直ぐ下への投与を意味する。
「標的にする」または「標的化された」とは、標的核酸に特異的にハイブリダイズし、所望の作用を誘導するアンチセンス化合物の設計及び選定のプロセスを意味する。
「標的核酸」、「標的ＲＮＡ」及び「標的ＲＮＡ転写物」は全てアンチセンス化合物によって標的化が可能な核酸を指す。
「標的セグメント」とは、標的核酸のうち、アンチセンス化合物が標的とするヌクレオチドの配列を意味する。「５’標的部位」とは、標的セグメントの最も５’側のヌクレオ
チドを指す。「３’標的部位」とは、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
「治療上有効な量」とは、動物に治療上の利益をもたらす薬剤の量を意味する。
「治療する」とは、動物の疾患、障害または病態の変化または改善を達成するために、当該動物に医薬組成物を投与することを指す。特定の実施形態において、１つ以上の医薬組成物を動物に投与することができる。
「非修飾ヌクレオチド」とは、天然に生じる核酸塩基、糖部分及びヌクレオシド間結合で構成されたヌクレオチドを意味する。特定の実施形態において、非修飾ヌクレオチドは、ＲＮＡヌクレオチド（すなわち、β－Ｄ－リボヌクレオチド）またはＤＮＡヌクレオチド（すなわち、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオチド）である。
特定の実施形態
特定の実施形態は、ＡＧＴを特異的に調節する化合物を提供する。特定の実施形態において、ＡＧＴ特異的調節薬は、ＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／または病態を治療、予防または改善するために使用されるＡＧＴ特異的阻害薬である。特定の実施形態において、ＡＧＴ特異的阻害薬は、ＡＧＴ ｍＲＮＡ及び／またはＡＧＴタンパク質の発現を阻害することができる核酸化合物である。特定の実施形態において、核酸化合物は、オリゴマー化合物である。特定の実施形態において、オリゴマー化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、修飾アンチセンスオリゴヌクレオチドは、キメラアンチセンスオリゴヌクレオチドである。
特定の実施形態において、化合物は、ＡＧＴ核酸を標的にする。特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸は、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００００２９．３（配列番号１として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿１６７１８６．１のヌクレオチド２４３５４０００～２４３７０１００の相補体（配列番号２として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＫ３０７９７８．１（配列番号３として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＫ３０３７５５．１（配列番号４として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＫ２９３５０７．１（配列番号５として本明細書に援用される）、及びＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＣＲ６０６６７２．１（配列番号６として本明細書に援用される）に示されるヒト配列のうちのいずれかである。
本明細書で開示される特定の実施形態は、ＡＧＴをコードする核酸配列を標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の実施形態において、化合物は、配列番号１～６のうちのいずれかの核酸塩基配列に示されるＡＧＴ配列を標的にする。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１～６のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列は、配列番号１～６のいずれかのうちの長さの等しい部分に対して、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくと
も９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％または少なくとも９９％相補的である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、配列番号１～６のいずれかのうちの長さの等しい部分に１００％相補的な核酸塩基配列を含む。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２０２７～２０６８のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２０２７～２０６８のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２５０～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２５０～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２６６～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２６６～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２８１～２３００のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８
０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２２８１～２３００のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２３２４～２３４６のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１の核酸塩基２３２４～２３４６のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドの核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１４～２０５１の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号４０、４２、４６、４７、４９、５３～５５、６１、６２、６８、７１、７６、８２、８４、８５、８９、９３、９６～９８、１０２、１０９、１１４、１１９、１２７、１２９、１３０～１３５、１３７～１４０、１４２、１４３、１６０、１６２～２０７、２０９、２１０、２２３、２２５～２２７、２３０～２４３、２５２～２５４、２５７、２５８、２６２～２７３、２７６、２７８、２７９、２８１、２８４、４５２、４６３、４６４、４６６、４６７、４７０、４７７、４８０、５００、５０２、５１２、５１７、５２５、５２６、７２６、７２８、８６８、９０５、９０６、９５４、９６１、９６２、９６３、９６５、９６６、９７１、９７３、９８６、９８７、９８９、９９０、９９１、９９４、９９７、９９８、１０００、１００１、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０３５、１０８０、１０８５、１１５０、１２５８、１２５９～１２６２、１２９３、１２９４、１２９９、１３２５、１３２６、１３５４、１３５５～１３５７、１３７０、１３８４、１３９１、１３９３～１３９５、１４０６～１４０８、１４３１、１４６７、１４６８、１４７０、１４７２～１４７４、１４７６、１４８８、１４８９、１５００、１５０３、１５０４、１５２２、１５２４、１５２６、１５２８、１５３５、１５３６、１５３９、１５４２、１５４３、１５４５、１５８５、１５９２、１５９４、１５９５、１５９９、１６０４、１６１０～１６１２、１６１５、１６１８、１６１９～１６２４、１６２６、１６２８、１６２９、１６３１、１６３２、１６３５～１６３７、１６４０、１６５８、１６６２、１６６５～１６７１、１６７３、１６７６～１６７９、１６８１～１６８３、１６８６、１６８７、１６
９９～１７１０、１７１２、１７１４～１７２１、１７２４～１７２６、１７２８～１７３１、１７３５、１７３６、１７３９～１７４１、１７５１、１７５５、１７７１、１７７８、１７８１～１７８３、１８２７、１８３４、１８３６、１８４３～１８４６、１８７２、１８７４、１８７５～１８８８、１８９０～１８９５、１８９７、１８９８、１９００、１９０４～１９２７、１９３１～１９３３、１９３７、１９３９、１９４０、１９４３、１９５０、１９５１、１９５３、１９５５～１９５９、１９６２、１９６４～１９６７、１９６９～１９７１、１９７３、１９７７～１９８１、１９８４～１９９１、１９９３～１９９６、２０００～２００５、２００７～２０１２、２０１４～２０２５、２０２７、２０２８、２０３０、２０３２～２０３７、２０３９～２０４５、２０４７、２０５１の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号４６、５３、５４、６８、７６、８５、９６、９７、１１４、１２７、１２９～１３２、１３４、１３５、１３７～１３９、１４２、１６２～２０７、２２５、２２６、２３０～２４３、２５２、２６４、２６６～２７０、２８４、４６４、４６７、９６２、９６３、９６５、９６６、９７３、９９０、９９１、９９７、１０００、１００１、１０１１、１２６１、１２９９、１３５５、１３５６、１４７０、１４７２、１４７３、１５０３、１５０４、１５２２、１５２６、１５３５、１５３６、１５４２、１５４３、１５４５、１５９５、１５９９、１６０４、１６２０、１６２３、１６２４、１６２６、１６４０、１６６２、１６６６、１６６７、１６６９、１６７０、１６７３、１６８２、１６８３、１６８７、１６９９～１７０６、１７０８、１７１２、１７１４～１７１６、１７１９～１７２１、１７２４～１７２６、１７２９、１７３０、１７３６、１７７８、１７８３、１８３６、１８４３、１８７５～１８８８、１８９３～１８９５、１８９７、１９００、１９０４～１９０８、１９１１、１９１４～１９１８、１９２０、１９２２、１９２３、１９２５、１９２６、１９３１～１９３３、１９３７、１９３９、１９５５、１９５８、１９５９、１９６２、１９６６、１９６７、１９７０、１９７１、１９７３、１９７７、１９７８～１９８１、１９８５、１９８６、１９８７、１９８８、１９９０、１９９１、１９９４、１９９６、２０００、２００２～２００５、２０１０、２０１１、２０１４～２０２５、２０２７、２０２８、２０３５～２０３７、２０３９、２０４１～２０４５の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号９６、１２７、１２９～１３２、１３９、１６２～１６９、１７１～１８９、１９１～１９３、１９５、１９６、１９８～２０６、２３４、２３６、２３８～２４０、２６７～２７０、９６６、１０００、１５２２、１５４２、１６２３、１６２４、１６６７、１６８２、１６８３、１７００、１７０３、１７０４、１７０８、１７１４、１７１９、１７２０、１７２４～１７２６、１７２９、１８７５、１８７６、１８７８、１８８４～１８８６、１８９３、１８９４、１９０６、１９０８、１９１４、１９１７、１９１８、１９２２、１９２３、１９２５、１９２６、１９３２、１９３３、１９６７、１９７０、１９７８～１９８１、１９８５、１９８６、１９８８、１９９０、１９９１、２００３、２０１０、２０１５、２０１６、２０１８、２０２０、２０２１、２０２４、２０２５、２０２７、２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、
少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号１２９、１３０、１３２、１６３～１６８、１７１、１７２、１７５～１８６、１８８、１８９、１９２、１９３、１９５、１９８～２０６、２３８、２３９、９６６、１７０３、１７２０、１７２６、１９２３、１９２５、２００３、２０１５の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号４６、５３～５４、６１、６８、７６、８３、８５、９３、９６～９７、１０９、１２７、１２９～１３０、１３２、１３４～１５、１３７～３９、１４２、１６３～１７２、１８０～１８４、１８６、１８９、２３４、２３６、２３８～２３９、２６７、３１３、４１１、４５２、４６３～４７０、４７５～４７８、４８０、５００～５０３、５１２、５１７～５１８、５２４～５２６、６５４、６８９、７０２、７２５～７２６、７２８、７３８、７７９、７８６～７８７、８００、８０８、８１０～８１１、８２５、８６５、８６８、８８９、８９４、９０３、９０５、９０９、９５４、９６６、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０８０、１０８５、１２５８～１２５９、１２６１～１２６２、１２９３～１２９４、１２９９、１３２５、１４７０、１４７２～１４７３、１５２２、１５４２、１６０４、１６２３～１６２４、１６６７、１６７０、１６８２～１６８３、１６８７、１７００、１７０３～１７０４、１７０８、１７１４、１７１６、１７１９～１７２０、１７２４～１７２６、１７２９～１７３０、１８２７、１９３６、１８４３～１８４４、１８４６、１８８６、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、１９３２、１９７９、１９８６、１９８８、１９９０、２００３、２０１５、２０１８、２０２０、２０２７～２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。本明細書で開示される特定の実施形態は、配列番号２３８、１７１４、１７１９、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、２００３の核酸塩基配列のいずれかのうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物を提供する。
特定の実施形態において、化合物は、８～８０、２０～８０、１０～５０、２０～３５、１０～３０、１２～３０、１５～３０、１６～３０、２０～３０、２０～２９、２０～２８、２０～２７、２０～２６、２０～２５、２０～２４、２０～２３、２０～２２、２０～２１、１５～２５、１６～２５、１５～２４、１６～２４、１７～２４、１８～２４、１９～２４、１９～２２、１６～２１、１８～２１または１６～２０個の結合された核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、化合物は、１６個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。特定の実施形態において、化合物は、２０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチド
を含む。
特定の実施形態において、化合物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９もしくは８０個の長さ、または前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲の結合された核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、一本鎖である。
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。特定の実施形態において、少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。特定の実施形態において、各修飾ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、修飾糖を含むヌクレオシドを少なくとも１つ含む。特定の実施形態において、少なくとも１つの修飾糖は、二環式糖を含む。特定の実施形態において、少なくとも１つの修飾糖は、２’－Ｏ－メトキシエチル、拘束エチル、３’－フルオロ－ＨＮＡまたは４’－（ＣＨ２）ｎ－Ｏ－２’架橋（式中、ｎは１または２である）を含む。
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、修飾核酸塩基を含むヌクレオシドを少なくとも１つ含む。特定の実施形態において、修飾核酸塩基は、５－メチルシトシンである。
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、コンジュゲート基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、炭水化物部分である。特定の実施形態において、コンジュゲートは、ＧａｌＮＡｃ部分である。特定の実施形態において、ＧａｌＮＡｃは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ＧａｌＮＡｃ３である。特定の実施形態において、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートは、次式を有する。
Figure 2023093644000002
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－
トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１の領域２２５０～２３３７のうちの長さの等しい部分に対して標的化されているか、相補的である、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含む。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を更に含む。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１の領域２２６６～２３３７のうちの長さの等しい部分に対して標的化されているか、相補的である、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含む。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を更に含む。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１の領域２２８１～２３００のうちの長さの等しい部分に対して標的化されているか、相補的である、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含む。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を更に含む。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態に
おいて、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１の領域２０２７～２０６８のうちの長さの等しい部分に対して標的化されているか、相補的である、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１４～２０５１のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号４０、４２、４６、４７、４９、５３～５５、６１、６２、６８、７１、７６、８２、８４、８５、８９、９３、９６～９８、１０２、１０９、１１４、１１９、１２７、１２９、１３０～１３５、１３７～１４０、１４２、１４３、１６０、１６２～２０７、２０９、２１０、２２３、２２５～２２７、２３０～２４３、２５２～２５４、２５７、２５８、２６２～２７３、２７６、２７８、２７９、２８１、２８４、４５２、４６３、４６４、４６６、４６７、４７０、４７７、４８０、５００、５０２、５１２、５１７、５２５、５２６、７２６、７２８、８６８、９０５、９０６、９５４、９６１、９６２、９６３、９６５、９６６、９７１、９７３、９８６、９８７、９８９、９９０、９９１、９９４、９９７、９９８、１０００、１００１、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０３５、１０８０、１０８５、１１５０、１２５８、１２５９～１２６２、１２９３、１２９４、１２９９、１３２５、１３２６、１３５４、１３５５～１３５７、１３７０、１３８４、１３９１、１３９３～１３９５、１４０６～１４０８、１４３１、１４６７、１４６８、１４７０、１４７２～１４７４、１
４７６、１４８８、１４８９、１５００、１５０３、１５０４、１５２２、１５２４、１５２６、１５２８、１５３５、１５３６、１５３９、１５４２、１５４３、１５４５、１５８５、１５９２、１５９４、１５９５、１５９９、１６０４、１６１０～１６１２、１６１５、１６１８、１６１９～１６２４、１６２６、１６２８、１６２９、１６３１、１６３２、１６３５～１６３７、１６４０、１６５８、１６６２、１６６５～１６７１、１６７３、１６７６～１６７９、１６８１～１６８３、１６８６、１６８７、１６９９～１７１０、１７１２、１７１４～１７２１、１７２４～１７２６、１７２８～１７３１、１７３５、１７３６、１７３９～１７４１、１７５１、１７５５、１７７１、１７７８、１７８１～１７８３、１８２７、１８３４、１８３６、１８４３～１８４６、１８７２、１８７４、１８７５～１８８８、１８９０～１８９５、１８９７、１８９８、１９００、１９０４～１９２７、１９３１～１９３３、１９３７、１９３９、１９４０、１９４３、１９５０、１９５１、１９５３、１９５５～１９５９、１９６２、１９６４～１９６７、１９６９～１９７１、１９７３、１９７７～１９８１、１９８４～１９９１、１９９３～１９９６、２０００～２００５、２００７～２０１２、２０１４～２０２５、２０２７、２０２８、２０３０、２０３２～２０３７、２０３９～２０４５、２０４７、２０５１のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号４６、５３、５４、６８、７６、８５、９６、９７、１１４、１２７、１２９～１３２、１３４、１３５、１３７～１３９、１４２、１６２～２０７、２２５、２２６、２３０～２４３、２５２、２６４、２６６～２７０、２８４、４６４、４６７、９６２、９６３、９６５、９６６、９７３、９９０、９９１、９９７、１０００、１００１、１０１１、１２６１、１２９９、１３５５、１３５６、１４７０、１４７２、１４７３、１５０３、１５０４、１５２２、１５２６、１５３５、１５３６、１５４２、１５４３、１５４５、１５９５、１５９９、１６０４、１６２０、１６２３、１６２４、１６２６、１６４０、１６６２、１６６６、１６６７、１６６９、１６７０、１６７３、１６８２、１６８３、１６８７、１６９９～１７０６、１７０８、１７１２、１７１４～１７１６、１７１９～１７２１、１７２４～１７２６、１７２９、１７３０、１７３６、１７７８、１７８３、１８３６、１８４３、１８７５～１８８８、１８９３～１８９５、１８９７、１９００、１９０４～１９０８、１９１１、１９１４～１９１８、１９２０、１９２２、１９２３、１９２５、１９２６、１９３１～１９３３、１９３７、１９３９、１９５５、１９５８、１９５９、１９６２、１９６６、１９６７、１９７０、１９７１、１９７３、１９７７、１９７８～１９８１、１９８５、１９８６、１９８７、１９８８、１９９０、１９９１、１９９４、１９９６、２０００、２００２～２００５、２０１０、２０１１、２０１４～２０２５、２０２７、２０２８、２０３５～２０３７、２０３９、２０４１～２０４５のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合された
デオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号９６、１２７、１２９～１３２、１３９、１６２～１６９、１７１～１８９、１９１～１９３、１９５、１９６、１９８～２０６、２３４、２３６、２３８～２４０、２６７～２７０、９６６、１０００、１５２２、１５４２、１６２３、１６２４、１６６７、１６８２、１６８３、１７００、１７０３、１７０４、１７０８、１７１４、１７１９、１７２０、１７２４～１７２６、１７２９、１８７５、１８７６、１８７８、１８８４～１８８６、１８９３、１８９４、１９０６、１９０８、１９１４、１９１７、１９１８、１９２２、１９２３、１９２５、１９２６、１９３２、１９３３、１９６７、１９７０、１９７８～１９８１、１９８５、１９８６、１９８８、１９９０、１９９１、２００３、２０１０、２０１５、２０１６、２０１８、２０２０、２０２１、２０２４、２０２５、２０２７、２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１２９、１３０、１３２、１６３～１６８、１７１、１７２、１７５～１８６、１８８、１８９、１９２、１９３、１９５、１９８～２０６、２３８、２３９、９６６、１７０３、１７２０、１７２６、１９２３、１９２５、２００３、２０１５のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは
、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号４６、５３～５４、６１、６８、７６、８３、８５、９３、９６～９７、１０９、１２７、１２９～１３０、１３２、１３４～１５、１３７～３９、１４２、１６３～１７２、１８０～１８４、１８６、１８９、２３４、２３６、２３８～２３９、２６７、３１３、４１１、４５２、４６３～４７０、４７５～４７８、４８０、５００～５０３、５１２、５１７～５１８、５２４～５２６、６５４、６８９、７０２、７２５～７２６、７２８、７３８、７７９、７８６～７８７、８００、８０８、８１０～８１１、８２５、８６５、８６８、８８９、８９４、９０３、９０５、９０９、９５４、９６６、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０８０、１０８５、１２５８～１２５９、１２６１～１２６２、１２９３～１２９４、１２９９、１３２５、１４７０、１４７２～１４７３、１５２２、１５４２、１６０４、１６２３～１６２４、１６６７、１６７０、１６８２～１６８３、１６８７、１７００、１７０３～１７０４、１７０８、１７１４、１７１６、１７１９～１７２０、１７２４～１７２６、１７２９～１７３０、１８２７、１９３６、１８４３～１８４４、１８４６、１８８６、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、１９３２、１９７９、１９８６、１９８８、１９９０、２００３、２０１５、２０１８、２０２０、２０２７～２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号２３８、１７１４、１７１９、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、２００３のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、
ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６
ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、化合物は、２０個の結合されたヌクレオシドからなり、かつ配列番号１９１４のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、修飾オリゴヌクレオチドを含み、当該修飾オリゴヌクレオチドは、（ａ）１０個の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、（ｂ）５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、（ｃ）５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、ここで、ギャップセグメントは、５’ウイングセグメントと３’ウイングセグメントとの間に直接隣接して配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合であり、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
本明細書で開示される特定の実施形態は、次式：ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ
Ａｅｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｅｓ Ｇｅｓ Ｇｅｓ Ｔｅｓ Ｔｅ（配列番号１９１４）（式中、Ａはアデニンであり、ｍＣは５－メチルシトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｔはチミンであり、ｅは２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、ｄは２’－デオキシヌクレオシドであり、ｓはホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）に従う修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
本明細書で開示される特定の実施形態は、次式を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。
Figure 2023093644000003
特定の実施形態において、本明細書で開示される化合物または組成物は、修飾オリゴヌクレオチドの塩を含む。
特定の実施形態において、本明細書で開示される化合物または組成物は、薬学的に許容される担体または希釈剤を更に含む。
特定の実施形態において、動物は、ヒトである。
特定の実施形態は、本明細書に記載される修飾オリゴヌクレオチドを含む組成物または化合物を提供し、その粘度は、４０ｃＰ未満である。特定の実施形態において、組成物は、１５ｃＰ未満の粘度を有する。特定の実施形態において、組成物は、１２ｃＰ未満の粘度を有する。特定の実施形態において、組成物は、１０ｃＰ未満の粘度を有する。
本明細書で開示される実施形態は、細胞、組織、器官または動物においてＡＧＴを減少させるのに使用するための、ＡＧＴを標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物及び組成物を提供する。特定の実施形態において、ＡＧＴの減少は、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状の治療、予防、進行の遅延、発症の遅延及び／または軽減をもたらす。特定の実施形態において、ＡＧＴの減少により、高血圧が軽減す
る。特定の実施形態において、ＡＧＴの減少により、線維症が軽減または防止される。特定の実施形態において、ＡＧＴの減少により、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態の症状またはマーカーが調節される。特定の実施形態において、マーカーは、寿命短縮、高血圧、慢性腎疾患、脳卒中、心筋梗塞、心不全、心臓弁膜症、血管の動脈瘤、末梢動脈疾患、器官障害ならびに他の心臓血管系疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状のうちの１つ以上から選択され得る。
特定の実施形態において、治療法に使用するための、ＡＧＴを標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物及び組成物を提供する。特定の実施形態において、ＡＧＴを標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物及び組成物は、治療上有効な量で動物に投与される。
特定の実施形態において、薬剤の調製に使用するための、ＡＧＴを標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物及び組成物を提供する。特定の実施形態において、薬剤は、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状の治療、予防、進行の遅延、発症の遅延及び／または軽減のために使用される。
特定の実施形態において、ＲＡＡＳ経路関連疾患及び／または病態、疾患、障害または状態を治療、予防または改善するためのキットが提供され、当該キットは、（ｉ）本明細書に記載されるＡＧＴ特異的阻害薬；及び任意に（ｉｉ）本明細書に記載される追加の剤または治療法を含む。本発明のキットは、当該キットを使用して、本明細書に記載されるＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態を治療、予防または改善するための説明書を更に含み得る。
特定の実施形態において、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態は、寿命短縮、高血圧、腎疾患（例えば、慢性腎疾患）、脳卒中、心疾患（例えば、心筋梗塞、心不全、心臓弁膜症）、血管の動脈瘤、末梢動脈疾患、器官障害ならびに他のＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状である。特定の実施形態において、高血圧は、非治療抵抗性高血圧または治療抵抗性高血圧である。特定の実施形態において、血管の動脈瘤は、大動脈瘤である。特定の実施形態において、器官障害は、心筋肥大または器官もしくは組織の線維症である。特定の実施形態において、器官は、心臓、肝臓または腎臓であり、組織は、心臓、肝臓または腎臓に由来する。
化合物は、本明細書に記載される１つ以上の追加の剤または治療法とともに、併用療法で使用することができる。剤または治療法は、同時または順次、動物に施すことができる。特定の実施形態において、ＡＧＴを標的にする修飾オリゴヌクレオチドを含む組成物または化合物は、１つ以上の第２の剤（複数可）と共投与される。特定の実施形態において、第２の剤には、高血圧を軽減させるための処置、食生活の改善、生活習慣の改善、抗線維化薬及び抗高血圧薬、例えば、ＲＡＳまたはＲＡＡＳ阻害薬、利尿薬、カルシウムチャネル拮抗薬、交感神経受容体遮断薬、交感神経作動薬及び血管拡張薬が含まれる。特定の実施形態において、第２の剤は、第２のアンチセンス化合物である。更なる実施形態において、第２のアンチセンス化合物は、ＡＧＴを標的にする。他の実施形態において、第２のアンチセンス化合物は、ＡＧＴ以外の化合物を標的にする。
アンチセンス化合物
オリゴマー化合物には、オリゴヌクレオチド、オリゴヌクレオシド、オリゴヌクレオチド類似体、オリゴヌクレオチド模倣物、アンチセンス化合物、アンチセンスオリゴヌクレオチド及びｓｉＲＮＡが含まれるが、これらに限定されない。オリゴマー化合物は、標的核酸に対して「アンチセンス」であり得、これは、オリゴマー化合物が水素結合を介して標的核酸にハイブリダイゼーションを起こすことができることを意味する。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、５’から３’の方向で記載される場合、アンチセンス化合物が標的にする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配列を有する。このような特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、５’から３’の方向で記載される場合、アンチセンス化合物が標的にする標的核酸の標的セグメントの逆相補鎖を含む核酸塩基配列を有する。
特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物は、１０～３０個の長さのヌクレオチドである。言い換えれば、アンチセンス化合物は、１０～３０個の結合された核酸塩基である。他の実施形態において、アンチセンス化合物は、８～８０、１０～８０、１２～５０、１５～３０、１８～２４、１９～２２または２０個の結合された核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。このような特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６、４７、４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４、５５、５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２、６３、６４、６５、６６、６７、６８、６９、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９もしくは８０個の長さ、または前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲の結合された核酸塩基からなる修飾オリゴヌクレオチドを含む。いくつかの実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、短縮型または切断型修飾オリゴヌクレオチドを含む。短縮型または切断型修飾オリゴヌクレオチドは、５’末端（５’切断）、中央部分または３’末端（３’切断）から欠失した１つのヌクレオシドを有し得る。短縮型または切断型オリゴヌクレオチドは、５’末端から欠失した２つ以上のヌクレオシドを有し得、中央部分から欠失した２つ以上のヌクレオシドを有し得、あるいは３’末端から欠失した２つ以上のヌクレオシドを有し得る。あるいは、例えば、５’末端から１つ以上のヌクレオシドを欠失させ、中央部分から１つ以上のヌクレオシドを欠失させ、かつ／または３’末端から１つ以上のヌクレオシドを欠失させたアンチセンス化合物のように、欠失されたヌクレオシドが修飾オリゴヌクレオチド全体に分散していてもよい。
延長型オリゴヌクレオチド中に１つの追加のヌクレオシドが存在する場合、その追加のヌクレオシドは、当該オリゴヌクレオチドの５’末端、３’末端または中央部分に位置し得る。２つ以上の追加のヌクレオシドが存在する場合、その追加ヌクレオシドは、例えば、当該オリゴヌクレオチドの５’末端（５’付加）、３’末端（３’付加）または中央部分に２つのヌクレオシドが追加されたオリゴヌクレオチドのように、互いに隣接していてよい。あるいは、例えば、５’末端に１つ以上のヌクレオシドを追加し、３’末端に１つ以上のヌクレオシドを追加し、かつ／または中央部分に１つ以上のヌクレオシドを追加したオリゴヌクレオチドのように、追加ヌクレオシドがアンチセンス化合物全体に分散していてもよい。
活性を取り除くことなく、アンチセンスオリゴヌクレオチドなどのアンチセンス化合物の長さを増加もしくは減少させること、及び／またはミスマッチ塩基を導入することが可能である。例えば、Ｗｏｏｌｆら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９：７３０５－７３０９，１９９２）では、卵母細胞注入モデルにおける標的ＲＮＡの切断を誘導する能力について、１３～２５核酸塩基長の一連のアンチセンスオリゴヌクレオチドが試験された。アンチセンスオリゴヌクレオチドの末端近傍に８または１１個のミスマッチ塩基を含む２５核酸塩基長のアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ミスマッチを含有しないアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも程度が小さいものの、標的ｍＲＮＡの特異
的切断を導くことができた。同様に、１または３個のミスマッチを含むものを含む、１３核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドを使用した場合も、標的特異的切断が達成された。
Ｇａｕｔｓｃｈｉら（Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ Ｉｎｓｔ．９３：４６３－４７１，Ｍａｒｃｈ ２００１）は、ｂｃｌ－２ｍＲＮＡに対して１００％の相補性を有し、かつｂｃｌ－ｘＬｍＲＮＡに対して３つのミスマッチを有するオリゴヌクレオチドがｉｎ ｖｉｔｒｏ及びｉｎ ｖｉｖｏで、ｂｃｌ－２とｂｃｌ－ｘＬの両方の発現を減少させることができることを明らかにした。更に、このオリゴヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｖｏで、強力な抗腫瘍活性を示した。
Ｍａｈｅｒ及びＤｏｌｎｉｃｋ（Ｎｕｃ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．１６：３３４１－３３５８，１９８８）は、ウサギ網状赤血球アッセイでヒトＤＨＦＲの翻訳を阻止する能力について、一連の１４核酸塩基タンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドと、それぞれ２つまたは３つの当該タンデムアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列からなる２８及び４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドとを試験した。２８または４２核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドよりも控えめな程度であったが、３つの１４核酸塩基のアンチセンスオリゴヌクレオチドのそれぞれは、単独でも翻訳を阻害することができた。
特定のアンチセンス化合物モチーフ及び機序
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、阻害活性の向上、標的核酸に対する結合親和性の増大、またはｉｎ ｖｉｖｏヌクレアーゼによる分解に対する耐性などの特性をアンチセンス化合物に付与するために、パターンまたはモチーフで配置された化学修飾サブユニットを有する。
キメラアンチセンス化合物は、典型的に、ヌクレアーゼ分解に対する耐性の増大、細胞取込みの増加、標的核酸に対する結合親和性の増大及び／または阻害活性の増大を付与するように修飾された領域を少なくとも１つ含有する。キメラアンチセンス化合物の第２の領域は、例えば、ＲＮＡ：ＤＮＡ二重鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼＲＮａｓｅ Ｈの基質として機能するなど、別の所望の特性を付与することができる。
アンチセンス活性は、アンチセンス化合物（例えば、オリゴヌクレオチド）の標的核酸とのハイブリダイゼーションを含み、このハイブリダイゼーションが最終的に生物学的作用をもたらす、任意の機序から生じ得る。特定の実施形態において、標的核酸の量及び／または活性が調節される。特定の実施形態において、標的核酸の量及び／または活性が減少する。特定の実施形態において、アンチセンス化合物の標的核酸へのハイブリダイゼーションは、最終的に、標的核酸の分解をもたらす。特定の実施形態において、アンチセンス化合物の標的核酸へのハイブリダイゼーションは、標的核酸の分解を生じない。このような特定の実施形態において、標的核酸にハイブリダイズしたアンチセンス化合物の存在（占有）は、アンチセンス活性の調節をもたらす。特定の実施形態において、特定の化学モチーフまたは化学修飾のパターンを有するアンチセンス化合物は、１つ以上の機序を活用するのに特に適している。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、２つ以上の機序を介して機能し、かつ／または解明されていない機序を介して機能する。したがって、本明細書に記載されるアンチセンス化合物は、特定の機序に限定されない。
アンチセンス機序には、限定するものではないが、ＲＮａｓｅ Ｈ媒介性アンチセンス；ＲＩＳＣ経路を活用し、限定するものではないが、ｓｉＲＮＡ、ｓｓＲＮＡ及びｍｉｃｒｏＲＮＡ機序を含む、ＲＮＡｉ機序；ならびに占有に基づく機序が含まれる。特定のアンチセンス化合物は、このような機序の２つ以上を介して、及び／または更なる機序を介して作用し得る。
ＲＮａｓｅ Ｈ媒介性アンチセンス
特定の実施形態において、アンチセンス活性は、少なくとも部分的には、ＲＮａｓｅ Ｈによる標的ＲＮＡの分解から生じる。ＲＮａｓｅ Ｈは、ＲＮＡ：ＤＮＡ二本鎖のＲＮＡ鎖を切断する細胞エンドヌクレアーゼである。「ＤＮＡ様」である一本鎖アンチセンス化合物が哺乳動物細胞においてＲＮａｓｅ Ｈ活性を誘発することは、当該技術分野において知られている。したがって、ＤＮＡまたはＤＮＡ様ヌクレオシドの少なくとも一部を含むアンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ Ｈを活性化し、標的核酸の切断をもたらすことができる。特定の実施形態において、ＲＮａｓｅ Ｈを活用するアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態において、かかるアンチセンス化合物は、１～８個の修飾ヌクレオシドのブロックを少なくとも１つ有する。このような特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、ＲＮａｓｅ Ｈ活性を支援しない。特定の実施形態において、かかるアンチセンス化合物は、本明細書に記載されるようなギャップマーである。このような特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、ＤＮＡヌクレオシドを含む。このような特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、ＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。このような特定の実施形態において、ギャップマーのギャップは、ＤＮＡヌクレオシド及びＤＮＡ様ヌクレオシドを含む。
ギャップマーモチーフを有する特定のアンチセンス化合物は、キメラアンチセンス化合物とみなされる。ギャップマーにおいて、ＲＮａｓｅＨ切断を支援する複数のヌクレオチドを有する内側領域は、その内側領域のヌクレオシドとは化学的に異なる複数のヌクレオチドを有する外側領域の間に配置されている。ギャップマーモチーフを有するアンチセンスオリゴヌクレオチドの場合、ギャップセグメントは、通常、エンドヌクレアーゼ切断の基質として機能し、一方、ウイングセグメントは、修飾ヌクレオシドを含む。特定の実施形態において、ギャップマーの領域は、それぞれ異なる領域を含む糖部分の種類によって区別される。ギャップマーの領域を区別するために使用される糖部分の種類には、いくつかの実施形態において、β－Ｄ－リボヌクレオシド、β－Ｄ－デオキシリボヌクレオシド、２’－修飾ヌクレオシド（このような２’－修飾ヌクレオシドには、とりわけ、２’－ＭＯＥ及び２’－Ｏ－ＣＨ３が含まれ得る）、及び二環式糖修飾ヌクレオシド（このような二環式糖修飾ヌクレオシドには、拘束エチルを有するものなどが含まれ得る）が含まれ得る。特定の実施形態において、ウイングのヌクレオシドは、例えば、２’－ＭＯＥ、及び拘束エチル（ｃＥｔ）またはＬＮＡなどの二環式糖部分を含む、いくつかの修飾糖部分を含み得る。特定の実施形態において、ウイングは、いくつかの修飾及び非修飾糖部分を含み得る。特定の実施形態において、ウイングは、２’－ＭＯＥヌクレオシド、拘束エチルヌクレオシドまたはＬＮＡヌクレオシドなどの二環式糖部分、及び２’－デオキシヌクレオシドの種々の組み合わせを含み得る。
それぞれ異なる領域は、一様な糖部分、変形形態または交互糖部分を含み得る。ウイング－ギャップ－ウイングモチーフは、「Ｘ－Ｙ－Ｚ」と記載されることが多く、ここで、「Ｘ」は、５’－ウイングの長さを表し、「Ｙ」は、ギャップの長さを表し、「Ｚ」は、３’－ウイングの長さを表す。「Ｘ」及び「Ｚ」は、一様な糖部分、変形形態または交互糖部分を含み得る。特定の実施形態において、「Ｘ」及び「Ｙ」は、１つ以上の２’－デオキシヌクレオシドを含み得る。「Ｙ」は、２’－デオキシヌクレオシドを含み得る。本明細書で使用されるとき、「Ｘ－Ｙ－Ｚ」と記載されるギャップマーは、ギャップが５’－ウイング及び３’ウイングのそれぞれに直接隣接して配置されるような構成を有する。したがって、５’－ウイングとギャップの間、またはギャップと３’－ウイングに間に介在するヌクレオチドは存在しない。本明細書に記載されるアンチセンス化合物はいずれもギャップマーモチーフを有し得る。特定の実施形態において、「Ｘ」と「Ｚ」は同じであり、他の実施形態において、「Ｘ」と「Ｚ」は異なる。特定の実施形態において、「Ｙ」は、８～１５個のヌクレオシドである。Ｘ、ＹまたはＺは、１、２、３、４、５、６、７
、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２５、３０個またはそれ以上のヌクレオシドのいずれかであり得る。
特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物は、ギャップが６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５または１６個の結合されたヌクレオシドからなるギャップマーモチーフを有する。
特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、以下の式Ａに示す糖モチーフを有する。
（Ｊ）ｍ－（Ｂ）ｎ－（Ｊ）ｐ－（Ｂ）ｒ－（Ａ）ｔ－（Ｄ）ｇ－（Ａ）ｖ－（Ｂ）ｗ－（Ｊ）ｘ－（Ｂ）ｙ－（Ｊ）ｚ
式中、
各Ａは、独立して、２’－置換ヌクレオシドであり、
各Ｂは、独立して、二環式ヌクレオシドであり、
各Ｊは、独立して、２’－置換ヌクレオシドまたは２’－デオキシヌクレオシドのいずれかであり、
各Ｄは、２’－デオキシヌクレオシドであり、
ｍは０～４であり、ｎは０～２であり、ｐは０～２であり、ｒは０～２であり、ｔは０～２であり、ｖは０～２であり、ｗは０～４であり、ｘは０～２であり、ｙは０～２であり、ｚは０～４であり、ｇは６～１４であり、
ただし、
ｍ、ｎ及びｒのうちの少なくとも１つは、０以外であり、
ｗ及びｙのうちの少なくとも１つは、０以外であり、
ｍ、ｎ、ｐ、ｒ及びｔの合計は、２～５であり、
ｖ、ｗ、ｘ、ｙ及びｚの合計は、２～５である。
ＲＮＡｉ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、干渉ＲＮＡ化合物（ＲＮＡｉ）であり、これには、二本鎖ＲＮＡ化合物（短い干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡとも呼ばれる）及び一本鎖ＲＮＡｉ化合物（すなわち、ｓｓＲＮＡ）が含まれる。このような化合物は、少なくとも部分的にＲＩＳＣ経路を介して作用し、標的核酸を分解及び／または隔離する（したがって、ｍｉｃｒｏＲＮＡ／ｍｉｃｒｏＲＮＡ模倣体化合物を含む）。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、当該アンチセンス化合物をこのような機序に特に適するようにする修飾を含む。
ｉ．ｓｓＲＮＡ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、一本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｓＲＮＡ）としての使用に特に適したものを含め、修飾された５’末端を含む。このような特定の実施形態において、５’末端は、修飾リン酸部分を含む。特定の実施形態において、このような修飾リン酸は、安定化する（例えば、非修飾５’－リン酸と比較して分解／切断に耐性がある）。特定の実施形態において、このような５’末端ヌクレオシドは、５’－リン部分を安定化させる。特定の修飾５’末端ヌクレオシドは、当該技術分野において、例えば、ＷＯ２０１１／１３９７０２に認めることができる。
特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡ化合物の５’－ヌクレオシドは、式ＩＩｃを有する。
Figure 2023093644000004
式中、
Ｔ１は、任意に保護されたリン部分であり、
Ｔ２は、式ＩＩｃの化合物をオリゴマー化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、Ａは、次式のうちの１つを有し、
Figure 2023093644000005
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたはＮ（Ｒ３）（Ｒ４）であり、
Ｑ３は、Ｏ、Ｓ、Ｎ（Ｒ５）またはＣ（Ｒ６）（Ｒ７）であり、
各Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシであり、
Ｍ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１４、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）、Ｃ（Ｒ１５）（Ｒ１６）Ｃ（Ｒ１７）（Ｒ１８）、Ｃ（Ｒ１５）＝Ｃ（Ｒ１７）、ＯＣ（Ｒ１５）（Ｒ１６）またはＯＣ（Ｒ１５）（Ｂｘ２）であり、
Ｒ１４は、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１５、Ｒ１６、Ｒ１７及びＲ１８は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
Ｂｘ１は、複素環式塩基部分であり、
あるいは、Ｂｘ２が存在する場合、Ｂｘ２は、複素環式塩基部分であり、Ｂｘ１は、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
あるいは、Ｊ４は、Ｊ５またはＪ７のうちの１つと架橋を形成し、ここで、当該架橋は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１９、Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）、Ｃ（Ｒ２０）＝Ｃ（Ｒ２１）、Ｃ［＝Ｃ（Ｒ２０）（Ｒ２１）］及びＣ（＝Ｏ）から選択される１～３個の結合された二価基を含み、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７のうちの他の２つは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキ
シ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
各Ｒ１９、Ｒ２０及びＲ２１は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
Ｇは、Ｈ、ＯＨ、ハロゲンまたはＯ－［Ｃ（Ｒ８）（Ｒ９）］ｎ－［（Ｃ＝Ｏ）ｍ－Ｘ１］ｊ－Ｚであり、
各Ｒ８及びＲ９は、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
Ｘ１は、Ｏ、ＳまたはＮ（Ｅ１）であり、
Ｚは、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたはＮ（Ｅ２）（Ｅ３）であり、
Ｅ１、Ｅ２及びＥ３は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、
ｎは、１～約６であり、
ｍは、０または１であり、
ｊは、０または１であり、
各置換基は、ハロゲン、ＯＪ１、Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）、＝ＮＪ１、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＮ、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）及びＣ（＝Ｘ２）Ｎ（Ｊ１）（Ｊ２）から独立して選択される任意に保護された置換基を１つ以上含み、
Ｘ２は、Ｏ、ＳまたはＮＪ３であり、
各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルであり、
ｊが１であるとき、ＺはハロゲンまたはＮ（Ｅ２）（Ｅ３）以外であり、
当該オリゴマー化合物は、８～４０個のモノマーサブユニットを含み、標的核酸の少なくとも一部にハイブリダイズ可能である。
特定の実施形態において、Ｍ３は、Ｏ、ＣＨ＝ＣＨ、ＯＣＨ２またはＯＣ（Ｈ）（Ｂｘ２）である。特定の実施形態において、Ｍ３は、Ｏである。
特定の実施形態において、Ｊ４、Ｊ５、Ｊ６及びＪ７は、それぞれＨである。特定の実施形態において、Ｊ４は、Ｊ５またはＪ７のうちの１つと架橋を形成する。
特定の実施形態において、Ａは、次式のうちの１つを有する。
Figure 2023093644000006
式中、
Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシである。特定の実施形態において、Ｑ１及びＱ２は、それぞれＨである。特定の実施形態において、Ｑ１及びＱ２は、それぞれ独立して、Ｈまたはハロゲンである。特定の実施形態において、Ｑ１及びＱ２はＨであり、Ｑ１及びＱ２の一方はＦ、ＣＨ３またはＯＣＨ３である。
特定の実施形態において、Ｔ１は、次式を有する。
Figure 2023093644000007
式中、
Ｒａ及びＲｃは、それぞれ独立して、保護ヒドロキシル、保護チオール、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシ、保護アミノまたは置換アミノであり、
Ｒｂは、ＯまたはＳである。特定の実施形態において、ＲｂはＯであり、Ｒａ及びＲｃは、それぞれ独立して、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＨ３またはＣＨ（ＣＨ３）２である。
特定の実施形態において、Ｇは、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＨ２Ｆ、ＯＣＨＦ２、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２Ｆ、ＯＣＨ２ＣＨＦ２、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＦ３、Ｏ（ＣＨ２）３－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＮ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒ１２）－（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）またはＯ（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒ１２）－Ｃ（＝ＮＲ１３）［Ｎ（Ｒ１０）（Ｒ１１）］（式中、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２及びＲ１３は、それぞれ独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルである）である。特定の実施形態において、Ｇは、ハロゲン、ＯＣＨ３、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２ＣＨ３、ＯＣＨ２ＣＦ３、ＯＣＨ２－ＣＨ＝ＣＨ２、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ（ＣＨ２）２－Ｎ（ＣＨ３）２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｈ）－（ＣＨ２）２－Ｎ（ＣＨ３）２またはＯＣＨ２－Ｎ（Ｈ）－Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２である。特定の実施形態において、Ｇは、Ｆ、ＯＣＨ３またはＯ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３である。特定の実施形態において、Ｇは、Ｏ（ＣＨ２）２－ＯＣＨ３である。
特定の実施形態において、５’末端ヌクレオシドは、式ＩＩｅを有する。
Figure 2023093644000008
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、ｓｓＲＮＡに特に適したものを含め、オリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って所定のパターンまたは所定の糖修飾モチーフで配置された、１種以上の修飾糖部分及び／または天然に生じる糖部分を含む。かかるモチーフは、本明細書で考察される糖修飾及び／または他の周知の糖修飾のいずれかを含み得る。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、一様な糖修飾を有する領域を含むか、当該領域からなる。このような特定の実施形態において、当該領域の各ヌクレオシドは
、同じＲＮＡ様糖修飾を含む。特定の実施形態において、当該領域の各ヌクレオシドは、２’－Ｆヌクレオシドである。特定の実施形態において、当該領域の各ヌクレオシドは、２’－ＯＭｅヌクレオシドである。特定の実施形態において、当該領域の各ヌクレオシドは、２’－ＭＯＥヌクレオシドである。特定の実施形態において、当該領域の各ヌクレオシドは、ｃＥｔヌクレオシドである。特定の実施形態において、当該領域の各ヌクレオシドは、ＬＮＡヌクレオシドである。特定の実施形態において、一様な領域は、オリゴヌクレオチドの全てを構成するか、オリゴヌクレオチドの全てを本質的に構成する。特定の実施形態において、当該領域は、１～４末端ヌクレオシドを除く、オリゴヌクレオチド全体を構成する。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、第１の種類の糖修飾を有するヌクレオチドと第２の種類の糖修飾を有するヌクレオチドでヌクレオシドが交互に繰り返される、１つ以上の交互糖修飾領域を含む。特定の実施形態において、ヌクレオシドは、両種類ともＲＮＡ様ヌクレオシドである。特定の実施形態において、交互ヌクレオシドは、２’－ＯＭｅ、２’－Ｆ、２’－ＭＯＥ、ＬＮＡ及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態において、交互修飾は、２’－Ｆと２’－ＯＭｅである。かかる領域は、連続的であってもよいし、異なる修飾ヌクレオシドまたはコンジュゲートヌクレオシドによって中断されてもよい。
特定の実施形態において、交互修飾の交互領域は、それぞれ１つのヌクレオシドからなる（すなわち、パターンは、（ＡＢ）ｘＡｙであり、式中、Ａは、第１の種類の糖修飾を有するヌクレオシドであり、Ｂは、第２の種類の糖修飾を有するヌクレオシドであり、ｘは１～２０であり、ｙは０または１である）。特定の実施形態において、交互モチーフ中の１つ以上の交互領域は、ある種類のヌクレオシドを２つ以上含む。例えば、オリゴヌクレオチドは、以下のヌクレオシドモチーフのうちのいずれかの領域を１つ以上含み得る。ＡＡＢＢＡＡ；
ＡＢＢＡＢＢ；
ＡＡＢＡＡＢ；
ＡＢＢＡＢＡＡＢＢ；
ＡＢＡＢＡＡ；
ＡＡＢＡＢＡＢ；
ＡＢＡＢＡＡ；
ＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ；
ＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ；または
ＡＢＡＢＢＡＡＢＢＡＢＡＢＡＡ；
ここで、Ａは第１の種類のヌクレオシドであり、Ｂは第２の種類のヌクレオシドである。
特定の実施形態において、Ａ及びＢは、２’－Ｆ、２’－ＯＭｅ、ＢＮＡ及びＭＯＥからそれぞれ選択される。
特定の実施形態において、このような交互モチーフを有するオリゴヌクレオチドは、式ＩＩｃまたはＩＩｅのものなどの修飾された５’末端ヌクレオシドも含む。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、２－２－３モチーフを有する領域を含む。かかる領域は、以下のモチーフを含む。
－（Ａ）２－（Ｂ）ｘ－（Ａ）２－（Ｃ）ｙ－（Ａ）３－
式中、Ａは、第１の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｂ及びＣは、Ａとは異なる修飾のヌクレオシドであるが、Ｂ及びＣは、互いに同じ修飾を有してもよいし、互いに異なる修飾を有してもよく、
ｘ及びｙは、１～１５である。
特定の実施形態において、Ａは、２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ｂ及びＣは、いずれも２’－Ｆ修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ａは、２’－ＯＭｅ修飾ヌクレオシドであり、Ｂ及びＣは、いずれも２’－Ｆ修飾ヌクレオシドである。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオシドは、以下の糖モチーフを有する。
５’－（Ｑ）－（ＡＢ）ｘＡｙ－（Ｄ）ｚ
式中、
Ｑは、安定化されたリン酸部分を含むヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ｑは、式ＩＩｃまたはＩＩｅを有するヌクレオシドであり、
Ａは、第１の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｂは、第２の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、隣接するヌクレオシドとは異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドである。したがって、ｙが０の場合、ＤはＢとは異なる修飾である必要があり、ｙが１の場合、ＤはＡとは異なる修飾である必要がある。特定の実施形態において、Ｄは、ＡとＢの両方と異なる。
Ｘは、５～１５であり、
Ｙは、０または１であり、
Ｚは、０～４である。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオシドは、以下の糖モチーフを有する。
５’－（Ｑ）－（Ａ）ｘ－（Ｄ）ｚ
式中、
Ｑは、安定化されたリン酸部分を含むヌクレオシドである。特定の実施形態において、Ｑは、式ＩＩｃまたはＩＩｅを有するヌクレオシドであり、
Ａは、第１の種類の修飾ヌクレオシドであり、
Ｄは、Ａとは異なる修飾を含む修飾ヌクレオシドである。
Ｘは、１１～３０であり、
Ｚは、０～４である。
特定の実施形態において、上記モチーフ中のＡ、Ｂ、Ｃ及びＤは、２’－ＯＭｅ、２’－Ｆ、２’－ＭＯＥ、ＬＮＡ及びｃＥｔから選択される。特定の実施形態において、Ｄは、末端ヌクレオシドを表す。特定の実施形態において、かかる末端ヌクレオシドは、標的核酸にハイブリダイズしないように設計する（ただし、１つ以上は偶然にハイブリダイズし得る）。特定の実施形態において、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基は、標的核酸の対応する位置での核酸塩基の同一性にかかわらず、アデニンである。特定の実施形態において、各Ｄヌクレオシドの核酸塩基は、チミンである。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、ｓｓＲＮＡとしての使用に特に適したものを含め、オリゴヌクレオチドまたはその領域に沿って所定のパターンまたは所定の修飾ヌクレオシド間結合モチーフで配置された修飾ヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、交互ヌクレオシド間結合モチーフを有する領域を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、一様に修飾されたヌクレオシド間結合の領域を含む。このような特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって一様に結合された領域を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合によって一様に結合される。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択される。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドの各ヌクレオシド間結合は、ホスホジエステル及びホスホロチオエートから選択され、少なくとも１つのヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートであ
る。
特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個のホスホロチオエートヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも６個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間結合のブロックを少なくとも１つ含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも８個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間結合のブロックを少なくとも１つ含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１０個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間結合のブロックを少なくとも１つ含む。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、少なくとも１２個の連続するホスホロチオエートヌクレオシド間結合のブロックを少なくとも１つ含む。このような特定の実施形態において、少なくとも１つの当該ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端に位置する。このような特定の実施形態において、少なくとも１つの当該ブロックは、オリゴヌクレオチドの３’末端の３ヌクレオシド以内に位置する。
本明細書に記載される種々の糖モチーフのいずれかを有するオリゴヌクレオチドは、任意の結合モチーフを有し得る。例えば、上記のものを含むが、これらに限定されないオリゴヌクレオチドは、非限定的な以下の表から選択される結合モチーフを有し得る。
Figure 2023093644000009
ｉｉ．ｓｉＲＮＡ化合物
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、二本鎖ＲＮＡｉ化合物（ｓｉＲＮＡ）である。このような実施形態において、一方または両方の鎖は、ｓｓＲＮＡに関して上記した任意の修飾モチーフを含み得る。特定の実施形態において、ｓｓＲＮＡ化合物は、非修飾ＲＮＡであり得る。特定の実施形態において、ｓｉＲＮＡ化合物は、非修飾ＲＮＡヌクレオシドを含むが、修飾ヌクレオシド間結合を含み得る。
いくつかの実施形態は、二本鎖組成物に関し、各鎖は、１つ以上の修飾または非修飾ヌクレオシドの位置によって定義されるモチーフを含む。特定の実施形態において、完全にまたは少なくとも部分的にハイブリダイズして２本鎖領域を形成する第１及び第２のオリゴマー化合物を含み、核酸標的に対して相補的であり、かつハイブリダイズする領域を更に含む、組成物が提供される。このような組成物は、核酸標的に対して完全な相補性または部分的な相補性を有するアンチセンス鎖である第１のオリゴマー化合物と、第１のオリゴマー化合物に対して相補性のある１つ以上の領域を有し、かつ第１のオリゴマー化合物と少なくとも１つの２本鎖領域を形成するセンス鎖である第２のオリゴマー化合物とを含むのが好適である。
いくつかの実施形態の組成物は、核酸標的にハイブリダイズすることによって遺伝子発現を調節し、その通常の機能の消失をもたらす。いくつかの実施形態において、標的核酸は、ＡＧＴである。特定の実施形態において、標的ＡＧＴの分解は、本発明の組成物と一緒になって形成される活性化ＲＩＳＣ複合体によって促進される。
いくつかの実施形態は、二本鎖組成物に関し、鎖の一方は、対の鎖のＲＩＳＣ（または切断）複合体への優先的な積み込みに影響を与えるのに有用である。組成物は、選択された核酸分子を標的にし、１つ以上の遺伝子の発現を調節するのに有用である。いくつかの実施形態において、本発明の組成物は、標的ＲＮＡの一部にハイブリダイズし、これにより、標的ＲＮＡの通常の機能の消失をもたらす。
特定の実施形態は、二本鎖組成物に関し、両方の鎖は、ヘミマーモチーフ、完全に修飾されたモチーフ、位置的に修飾されたモチーフまたは交互モチーフを含む。本発明の組成物の各鎖は、例えばｓｉＲＮＡ経路において、特定の役割を果たすように修飾され得る。各鎖中に異なるモチーフを用いることにより、または各鎖中に異なる化学修飾を含む同じモチーフを用いることにより、センス鎖の取込みを阻害しつつ、アンチセンス鎖のＲＩＳＣ複合体に対する標的化が可能となる。このモデルでは、各鎖は、その特定の役割を強化するように独立して修飾され得る。アンチセンス鎖は、５’末端をＲＩＳＣのある領域での役割を強化するように修飾することができ、一方、３’末端は、ＲＩＳＣの異なる領域での役割を強化するように異なる修飾を施すことができる。
二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、自己相補的なセンス領域とアンチセンス領域とを含む二本鎖ポリヌクレオチド分子であり得、ここで、アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。二本鎖オリゴヌクレオチド分子は、一方の鎖がセンス鎖であり、他方の鎖がアンチセンス鎖である、２つの別個のオリゴヌクレオチドから組み立てることができ、アンチセンス鎖及びセンス鎖は、自己相補的であり（すなわち、各鎖は、もう一方の鎖中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み；例えば、アンチセンス鎖とセンス鎖は、二本鎖または二本鎖構造を形成し、例えば、二本鎖領域は、約１５～約３０、例えば、約１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９または３０個の塩基対であり；アンチセンス鎖は、標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含み、センス鎖は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を含む（例えば、二本鎖オリゴヌクレオチド分子の約１５～約２５個以上のヌクレオチドは、標的核酸またはその一部に対して相補的である）。あるいは、二本鎖オリゴヌクレオチドは、１つのオリゴヌクレオチドから組み立てられ、ｓｉＲＮＡの自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域は、核酸ベースまたは非核酸ベースのリンカー（複数可）によって結合される。
二本鎖オリゴヌクレオチドは、自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域を有する二本鎖、非対称二本鎖、ヘアピンまたは非対称ヘアピン二次構造のポリヌクレオチドであってよく、ここで、アンチセンス領域は、別個の標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有する。二本鎖オリゴヌクレオチドは、２つ以上のループ構造及び自己相補的なセンス領域及びアンチセンス領域を含むステムを有する環状一本鎖ポリヌクレオチドであり得、ここで、アンチセンス領域は、標的核酸分子またはその一部中のヌクレオチド配列に対して相補的なヌクレオチド配列を含み、センス領域は、標的核酸配列またはその一部に対応するヌクレオチド配列を有し、環状ポリヌクレオチドは、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏのいずれかでプロセシングを受けて、ＲＮＡｉを媒介することが可能な活性ｓｉＲＮＡ分子を生成することができる。
特定の実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、別個のセンス及びアンチセンス配列または領域を含み、ここで、センス及びアンチセンス領域は、当該技術分野において知られているヌクレオチドまたは非ヌクレオチドリンカー分子によって共有結合される
か、イオン相互作用、水素結合、ファンデルワールス相互作用、疎水性相互作用及び／またはスタッキング相互作用によって交互に非共有結合される。特定の実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子のヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を含む。別の実施形態において、二本鎖オリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現の阻害を生じさせるような形で、標的遺伝子のヌクレオチド配列と相互作用する。
本明細書で使用されるとき、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ＲＮＡのみを含有する分子に限定されるものではなく、化学修飾ヌクレオチド及び非ヌクレオチドを更に包含する。特定の実施形態において、低分子干渉核酸分子は、２’－ヒドロキシ（２’－ＯＨ）含有ヌクレオチドを含まない。特定の実施形態において、低分子干渉核酸は、所望により、任意のリボヌクレオチド（例えば、２’－ＯＨ基を有するヌクレオチド）を含まない。しかしながら、ＲＮＡｉを支援する分子内にリボヌクレオチドの存在を必要としないこのような二本鎖オリゴヌクレオチドは、２’－ＯＨ基を含むヌクレオチドを１つ以上含有する、１つ以上の結合リンカーまたは他の結合もしくは会合した基、部分もしくは鎖を有し得る。任意に、二本鎖オリゴヌクレオチドは、ヌクレオチド位置の約５、１０、２０、３０、４０または５０％にリボヌクレオチドを含み得る。本明細書で使用されるとき、ｓｉＲＮＡという用語は、配列特異的ＲＮＡｉを媒介することが可能な核酸分子を記載するために使用される他の用語、例えば、短い干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、ｍｉｃｒｏＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、小ヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）、短い干渉オリゴヌクレオチド、短い干渉核酸、短い干渉修飾オリゴヌクレオチド、化学修飾ｓｉＲＮＡ、転写後遺伝子サイレンシングＲＮＡ（ｐｔｇｓＲＮＡ）及びその他と同等であることが意図される。更に、本明細書で使用されるとき、ＲＮＡｉという用語は、転写後遺伝子サイレンシング、翻訳阻害またはエピジェネティクスなどの配列特異的ＲＮＡ干渉を記載するために使用される他の用語と同等であることが意図される。例えば、二本鎖オリゴヌクレオチドを使用して、転写後レベル及び転写前レベルの両方でエピジェネティック的な遺伝子サイレンシングを行うことができる。非限定的な例として、本発明のｓｉＲＮＡ分子による遺伝子発現のエピジェネティック的な制御は、遺伝子発現を変更させる、クロマチン構造またはメチル化パターンのｓｉＲＮＡ媒介性調節から生じ得る（例えば、Ｖｅｒｄｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６７２－６７６；Ｐａｌ－Ｂｈａｄｒａ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｓｃｉｅｎｃｅ，３０３，６６９－６７２；Ａｌｌｓｈｉｒｅ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８１８－１８１９；Ｖｏｌｐｅ
ｅｔ ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，１８３３－１８３７；Ｊｅｎｕｗｅｉｎ，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２１５－２２１８；及びＨａｌｌ ｅｔ
ａｌ．，２００２，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２９７，２２３２－２２３７参照）。
本明細書で提供されるいくつかの実施形態の化合物及び組成物は、ｄｓＲＮＡ媒介性遺伝子サイレンシングまたはＲＮＡｉ機序によって、ＡＧＴを標的にすることができると考えられ、例えば、自己相補的な配列を含む単一のＲＮＡ鎖が二本鎖構造を取ることができる「ヘアピン」もしくはステム－ループ二本鎖ＲＮＡエフェクター分子、または２つの異なるＲＮＡ鎖を含む二本鎖ｄｓＲＮＡエフェクター分子を含む。種々の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、完全にリボヌクレオチドからなるか、リボヌクレオチドとデオキシヌクレオチドの混合物、例えば、２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号に開示されているＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドなどからなる。ｄｓＲＮＡまたはｄｓＲＮＡエフェクター分子は、その分子のあるセグメント中のヌクレオチドが、その分子の別のセグメント中のヌクレオチドと塩基対を形成するような自己相補性領域を含む単一分子であってよい。種々の実施形態において、単一分子からなるｄｓＲＮＡは、完全にリボヌクレオチドからなるか、デオキシリボヌクレオチド領域に相補的なリボヌクレオチド領域を含む。あるいは、ｄｓＲＮＡは、互いに相補的な領域を有する２つの異なる鎖を含み得る。
種々の実施形態において、両方の鎖が完全にリボヌクレオチドからなるか、一方の鎖が完全にリボヌクレオチドからなり、他方の鎖が完全にデオキシリボヌクレオチドからなるか、一方または両方の鎖がリボヌクレオチドとデオキシリボヌクレオチドの混合物を含有する。特定の実施形態において、相補性領域は、互いに、かつ標的核酸配列に対して、少なくとも７０、８０、９０、９５、９８または１００％相補的である。特定の実施形態において、二本鎖構造中に存在するｄｓＲＮＡの領域は、少なくとも１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、５０、７５，１００、２００、５００、１０００、２０００または５０００個のヌクレオチドを含むか、ｄｓＲＮＡ中に存在するｃＤＮＡまたは他の標的核酸配列中のヌクレオチドを全て含む。いくつかの実施形態において、ｄｓＲＮＡは、一本鎖末端などのいかなる一本鎖領域も含有しないか、ｄｓＲＮＡは、ヘアピンである。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、１つ以上の一本鎖領域またはオーバーハングを有する。特定の実施形態において、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、アンチセンス鎖または領域である（例えば、標的核酸に対して少なくとも７０、８０、９０、９５、９８または１００％の相補性を有する）ＤＮＡ鎖または領域と、センス鎖または領域である（例えば、標的核酸に対して少なくとも７０、８０、９０、９５、９８または１００％の同一性を有する）るＲＮＡ鎖または領域とを含み、逆もまた同様である。
種々の実施形態において、ＲＮＡ／ＤＮＡハイブリッドは、本明細書に記載されている方法、または２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４もしくは１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号に記載されている方法などの酵素的合成法または化学的合成法を使用して、ｉｎ ｖｉｔｒｏで作製される。他の実施形態において、ｉｎ ｖｉｔｒｏで合成されたＤＮＡ鎖は、ＤＮＡ鎖の細胞への形質転換の前、後、またはそれと同時に、ｉｎ ｖｉｖｏまたはｉｎ ｖｉｔｒｏで作製されたＲＮＡ鎖と複合体化される。更に他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、センス領域及びアンチセンス領域を含有する単一環状核酸であるか、ｄｓＲＮＡは、環状核酸及び第２の環状核酸または線状核酸のいずれかを含む（例えば、２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号参照）。例示的な環状核酸は、ヌクレオチドの遊離５’ホスホリル基が折り返すような形で別のヌクレオチドの２’ヒドロキシル基に結合されたラリアット構造を含む。
他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、糖の２’位にハロゲン（フッ素基など）を含有するか、アルコキシ基（メトキシ基など）を含有する、１つ以上の修飾ヌクレオチドを含む。これは、対応する２’位が水素またはヒドロキシル基を含有する対応するｄｓＲＮＡと比較してｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｉｎ ｖｉｖｏにおけるｄｓＲＮＡの半減期を増大させる。更に他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、隣接するヌクレオチド間に、１つ以上の天然に生じるホスホジエステル結合以外の結合を１つ以上含む。このような結合の例には、ホスホルアミド結合、ホスホロチオエート結合及びホスホロジチオエート結合が挙げられる。ｄｓＲＮＡはまた、米国特許第６，６７３，６６１号に教示されているような化学修飾核酸分子であってもよい。他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、例えば、２０００年４月１９日出願のＷＯ００／６３３６４または１９９９年４月２１日に出願の米国特許出願第６０／１３０，３７７号によって開示されているように、１本または２本のキャップ鎖を含有する。
他の実施形態において、ｄｓＲＮＡは、少なくとも部分的には、ＷＯ００／６３３６４に開示されているｄｓＲＮＡ分子のいずれか、ならびに米国特許仮出願第６０／３９９，９９８号及び米国特許仮出願第６０／４１９，５３２号及びＰＣＴ／ＵＳ２００３／０３３４６６に記載されているｄｓＲＮＡ分子のいずれかであってよい（これらの教示は、参照によって本明細書に援用される）。ｄｓＲＮＡはいずれも、本明細書に記載の方法またはＷＯ００／６３３６４に記載の方法などの標準的な方法を使用してｉｎ ｖｉｔｒｏま
たはｉｎ ｖｉｖｏで発現され得る。
占有
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、ＲＮａｓｅ Ｈによる切断もしくは標的核酸をもたらすこと、またはＲＩＳＣ経路による切断もしくは除去をもたらすことを想定していない。このような特定の実施形態において、アンチセンス活性は、ハイブリダイズしたアンチセンス化合物の存在が標的核酸の活性を遮断する占有から生じ得る。このような特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、一様に修飾されていてもよいし、修飾の組み合わせならびに／または修飾及び非修飾ヌクレオシドを含んでもよい。
標的核酸、標的領域及びヌクレオチド配列
ＡＧＴをコードするヌクレオチド配列には、限定するものではないが、次のもの：ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００００２９．３（配列番号１として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿１６７１８６．１のヌクレオチド２４３５４０００～２４３７０１００の相補体（配列番号２として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＫ３０７９７８．１（配列番号３として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＫ３０３７５５．１（配列番号４として本明細書に援用される）、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＡＫ２９３５０７．１（配列番号５として本明細書に援用される）、及びＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＣＲ６０６６７２．１（配列番号６として本明細書に援用される）が含まれる。特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンス化合物は、ＡＧＴをコードする核酸配列を標的にする。特定の実施形態において、本明細書に記載されるアンチセンス化合物は、配列番号１～６のうちのいずれかの配列を標的にする。
本明細書に含まれる実施例において各配列番号で記載される配列は、糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対する何らかの修飾に依存しないことを理解されたい。したがって、配列番号によって定義されるアンチセンス化合物は、独立して、糖部分、ヌクレオシド間結合または核酸塩基に対する修飾を１つ以上含み得る。ＩＳＩＳ番号（ＩＳＩＳ
Ｎｏ）によって記載されるアンチセンス化合物は、核酸塩基配列及びモチーフの組み合わせを示す。
特定の実施形態において、標的領域は、構造的に画定された標的核酸の領域である。例えば、標的領域は、３’ＵＴＲ、５’ＵＴＲ、エクソン、イントロン、エクソン／イントロン境界、コード領域、翻訳開始領域、翻訳終止領域または他の画定された核酸領域を包含し得る。ＡＧＴについて構造的に画定された領域は、ＮＣＢＩなどの配列データベースからアクセッション番号によって得ることができ、そのような情報は、参照により本明細書に援用される。特定の実施形態において、標的領域は、当該標的領域内のある標的セグメントの５’標的部位から当該標的領域内の別の標的セグメントの３’標的部位までの配列を包含し得る。特定の実施形態において、標的領域は、アンチセンス化合物内のアンチセンス化合物の５’末端から少なくとも８個の連続した核酸塩基から選択される少なくとも８個の連続した核酸塩基を包含し得る（残りの核酸塩基は、標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能なアンチセンス化合物の５’末端の直ぐ上流から開始し、当該領域が約８～約８０個の核酸塩基を含有するまで連続する、連続したストレッチである）。特定の実施形態において、標的領域は、アンチセンス化合物内のアンチセンス化合物の３’末端から少なくとも８個の連続した核酸塩基から選択される少なくとも８個の連続した核酸塩基を包含し得る（残りの核酸塩基は、標的核酸に特異的にハイブリダイズ可能なアンチセンス化合物の３’末端の直ぐ下流から開始し、当該領域が約８～約８０個の核酸塩基を含有するまで連続する、連続したストレッチである）。特定の実施形態において、標的領域は、配列番号１４～２０５１のうちのいずれかから選択される少なくとも８個の連続した核酸塩基を含み、５’または３’の８個の連続する核酸塩基配列まで最大８０個の核酸塩基が
続く。
特定の実施形態において、「標的セグメント」は、核酸内の標的領域のより小さな下位部分として定義される。例えば、標的セグメントは、標的核酸のうち、１つ以上のアンチセンス化合物が標的とするヌクレオチドの配列であり得る。「５’標的部位」とは、標的セグメントの最も５’側のヌクレオチドを指す。「３’標的部位」とは、標的セグメントの最も３’側のヌクレオチドを指す。
標的化には、アンチセンス化合物がハイブリダイズして所望の作用が生じるような少なくとも１つの標的セグメントを決定することが含まれる。特定の実施形態において、所望の作用は、ｍＲＮＡ標的核酸レベルの減少である。特定の実施形態において、所望の作用は、標的核酸によってコードされているタンパク質のレベルの減少または標的核酸に関連した表現型変化である。
標的領域は、１つ以上の標的セグメントを含有し得る。標的領域内の複数の標的セグメントは、重複していてもよい。あるいは、それらは重複していなくてもよい。特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、約３００個以下のヌクレオチドによって隔てられている。特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、多数のヌクレオチドで隔てられており、標的核酸上、２５０、２００、１５０、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０、２０もしくは１０個のヌクレオチド、およそその数のヌクレオチド、それ以下の数のヌクレオチド、およそその数以下のヌクレオチド、または前述の値のうちのいずれか２つによって定義される範囲の数のヌクレオチドで隔てられている。特定の実施形態において、標的領域内の標的セグメントは、標的核酸上、５個以下または約５個以下のヌクレオチドで隔てられている。特定の実施形態において、標的セグメントは、連続している。本明細書で列挙される５’標的部位または３’標的部位のうちのいずれかである開始核酸を有する範囲によって定義される標的領域が企図される。
好適な標的セグメントは、５’ＵＴＲ、コード領域、３’ＵＴＲ、イントロン、エクソンまたはエクソン／イントロン境界内に存在し得る。開始コドンまたは終止コドンを含有する標的セグメントもまた好適な標的セグメントである。好適な標的セグメントは、開始コドンまたは終止コドンなどの特定の構造的に画定された領域を特に除外してもよい。
好適な標的セグメントの決定には、標的核酸の配列とゲノム全体の他の配列との比較が含まれ得る。例えば、ＢＬＡＳＴアルゴリズムを使用して、異なる核酸間で類似性を有する領域を同定することができる。この比較により、選択した標的核酸以外の配列（すなわち、非ターゲット配列またはオフターゲット配列）に非特異的にハイブリダイズし得るアンチセンス化合物配列の選択を避けることができる。
活性標的領域内でのアンチセンス化合物の活性（例えば、標的核酸レベルの減少率によって定義されるもの）には、ばらつきが生じ得る。特定の実施形態において、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルの減少は、ＡＧＴ発現の阻害を示す。ＡＧＴタンパク質のレベルの減少もまた、ＡＧＴ発現の阻害を示す。更に、表現型変化もＡＧＴ発現を示す。例えば、組織における線維症の低減は、ＡＧＴ発現の阻害を示し得る。別の例として、高血圧の軽減は、ＡＧＴ発現の阻害を示し得る。
ハイブリダイゼーション
いくつかの実施形態において、本明細書で開示されるアンチセンス化合物とＡＧＴ核酸との間でハイブリダイゼーションが生じる。最も一般的なハイブリダイゼーションの機序には、核酸分子の相補的な核酸塩基間での水素結合（例えば、ワトソン・クリック型、フーグスティーン型または逆フーグスティーン型の水素結合）が関与する。
ハイブリダイゼーションは、様々な条件下で生じ得る。ストリンジェントな条件は、配列依存的であり、ハイブリダイズされる核酸分子の性質及び組成によって決まる。
ある配列が標的核酸に特異的にハイブリダイズするかどうかについて決定する方法は、当該技術分野においてよく知られている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄ．，２００１）。特定の実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物は、ＡＧＴ核酸と特異的にハイブリダイズ可能である。
相補性
アンチセンス化合物及び標的核酸は、そのアンチセンス化合物の十分な数の核酸塩基が、所望の作用（例えば、ＡＧＴ核酸などの標的核酸のアンチセンス阻害）を生じるように、その標的核酸の対応する核酸塩基と水素結合することができるとき、互いに相補的である。
アンチセンス化合物とＡＧＴ核酸との間の非相補的核酸塩基は、そのアンチセンス化合物が依然としてＡＧＴ核酸に特異的にハイブリダイズすることができるのであれば、許容され得る。更に、アンチセンス化合物は、介在するまたは隣接するセグメントがハイブリダイゼーション事象に関与しないような形で、ＡＧＴ核酸の１つ以上のセグメントにわたってハイブリダイズしてもよい（例えば、ループ構造、ミスマッチまたはヘアピン構造）。
特定の実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物またはその指定された部分は、ＡＧＴ核酸、標的領域、標的セグメントまたはその指定された部分に対して、７０％、８０％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％相補的であるか、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも８６％、少なくとも８７％、少なくとも８８％、少なくとも８９％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％相補的である。アンチセンス化合物と標的核酸との相補性パーセントは、常法を使用して決定することができる。例えば、アンチセンス化合物の核酸塩基２０個中１８個が標的領域に対して相補的であり、そのため、特異的にハイブリダイズするアンチセンス化合物は、９０％の相補性になると言える。この例の場合、残りの非相補的核酸塩基は、ひとまとまりになっていてもよいし、相補的核酸塩基の間に散在していてもよく、また、互いに連続している必要も、相補的核酸塩基に対して連続している必要もない。したがって、標的核酸と完全に相補性な２つの領域に挟まれた４つの非相補的核酸塩基を有する１８核酸塩基長のアンチセンス化合物は、当該標的核酸と７７．８％の総相補性を有し、したがって、本発明の範囲内に包含される。
アンチセンス化合物と標的核酸のある領域との相補性パーセントは、当該技術分野において知られているＢＬＡＳＴプログラム（ベーシックローカルアライメント検索ツール）及びＰｏｗｅｒＢＬＡＳＴプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９０，２１５，４０３ ４１０；Ｚｈａｎｇ ａｎｄ Ｍａｄｄｅｎ，Ｇｅｎｏｍｅ Ｒｅｓ．，１９９７，７，６４９ ６５６）を使用して常法により決定することができる。相同性、配列同一性または相補性パーセントは、例えば、Ｓｍｉｔｈ及びＷａｔｅｒｍａｎのアルゴリズム（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．，１９８１，２，４８２ ４８９）を使用するギャッププログラム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ
Ａｎａｌｙｓｉｓ Ｐａｃｋａｇｅ，Ｖｅｒｓｉｏｎ ８ ｆｏｒ Ｕｎｉｘ，Ｇｅｎ
ｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｒｅｓｅａｒｃｈ
Ｐａｒｋ，Ｍａｄｉｓｏｎ Ｗｉｓ．）によって、デフォルト設定を使用して決定することができる。
特定の実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物またはその指定された部分は、標的核酸またはその指定された部分に対して、完全に相補的（すなわち、１００％相補性）である。例えば、アンチセンス化合物は、ＡＧＴ核酸またはその標的領域もしくは標的セグメントもしくは標的配列に完全に相補的であり得る。本明細書で使用されるとき、「完全に相補的」とは、アンチセンス化合物の各核酸塩基が、標的核酸の対応する核酸塩基と正確な塩基対を形成できることを意味する。例えば、２０個の核酸塩基のアンチセンス化合物は、対応する標的核酸の２０個の核酸塩基部分がそのアンチセンス化合物に対して完全に相補的である限り、４００核酸塩基長である標的配列に完全に相補的である。完全に相補的とは、第１及び／または第２の核酸の指定された部分に関しても使用され得る。例えば、３０個の核酸塩基のアンチセンス化合物の２０個の核酸塩基部分は、４００核酸塩基長である標的配列に「完全に相補的」であり得る。３０個の核酸塩基のオリゴヌクレオチドのうちの２０個の核酸塩基部分は、標的配列が、対応する２０個の核酸塩基部分を有し、その各核酸塩基が、アンチセンス化合物の２０個の核酸塩基部分に対して相補的であれば、その標的配列に完全に相補的である。同時に、当該３０個の核酸塩基のアンチセンス化合物全体は、そのアンチセンス化合物の残りの１０個の核酸塩基も同様に標的配列に対して相補的であるかどうかに応じて、標的配列に完全に相補的である場合もあれば、そうでない場合もある。
非相補的核酸塩基の場所は、アンチセンス化合物の５’末端でも３’末端でもよい。あるいは、１つまたは複数の非相補的核酸塩基は、アンチセンス化合物の内側の位置に存在し得る。２つ以上の非相補的核酸塩基が存在する場合、それらは、連続していてもよいし（すなわち、結合している）、非連続でもよい。一実施形態において、非相補的核酸塩基は、ギャップマーアンチセンスオリゴヌクレオチドのウイングセグメントに位置する。
特定の実施形態において、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０個の長さの核酸塩基または最大１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９もしくは２０個の長さの核酸塩基であるアンチセンス化合物は、ＡＧＴ核酸などの標的核酸またはその指定された部分に対して、４個以下、３個以下、２個以下または１個以下の非相補的核酸塩基（複数可）を含む。
特定の実施形態において、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０個の長さの核酸塩基または最大１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９もしくは３０個の長さの核酸塩基であるアンチセンス化合物は、ＡＧＴ核酸などの標的核酸またはその指定された部分に対して、６個以下、５個以下、４個以下、３個以下、２個以下または１個以下の非相補的核酸塩基（複数可）を含む。
本明細書で提供されるアンチセンス化合物には、標的核酸の一部分に相補的であるものも含まれる。本明細書で使用されるとき、「部分（ｐｏｒｔｉｏｎ）」は、標的核酸のある領域またはセグメント内の所定数の連続した（すなわち、結合された）核酸塩基を指す。「部分」はまた、アンチセンス化合物の所定数の連続した核酸塩基を指し得る。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも８核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１２核酸塩基部分に相補的である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、標的セグメントの少なくとも１５核酸塩基部分に相補的である。また、標的セグメ
ントの少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９、少なくとも２０もしくはそれ以上の核酸塩基部分またはこれらの値のうちのいずれか２つによって定義される範囲の核酸塩基部分に相補的であるアンチセンス化合物も企図される。
同一性
本明細書で提供されるアンチセンス化合物はまた、ある特定のヌクレオチド配列、配列番号もしくは特定のＩＳＩＳ番号によって表される化合物またはその部分に対して、所定の同一性パーセントを有し得る。本明細書で使用されるとき、アンチセンス化合物は、それが同じ核酸塩基対を形成する能力を有するのであれば、本明細書で開示される配列と同一である。例えば、開示されるＤＮＡ配列中でチミジンの代わりにウラシルを含有するＲＮＡは、ウラシルとチミジンがどちらもアデニンと対合するので、そのＤＮＡ配列と同一であるとみなされる。本明細書に記載されるアンチセンス化合物の短縮型及び延長型、ならびに本明細書で提供されるアンチセンス化合物に対して非同一塩基を有する化合物も企図される。非同一塩基は、互いに隣接していてもよいし、アンチセンス化合物全体に分散していてもよい。アンチセンス化合物の同一性パーセントは、比較対象の配列に対して同一の塩基対形成を有する塩基の数に応じて、算出される。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物またはその部分は、本明細書で開示されるアンチセンス化合物もしくは配列番号またはその部分の１つ以上と、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、少なくとも９９％または１００％同一である。
修飾
ヌクレオシドは、塩基－糖の組み合わせである。ヌクレオシドの核酸塩基（塩基としても知られる）部分は、通常、複素環式塩基部分である。ヌクレオチドは、ヌクレオシドの糖部分に共有結合したリン酸基を更に含むヌクレオシドである。ペントフラノシル糖を含むヌクレオシドの場合、リン酸基は、糖の２’、３’または５’ヒドロキシル部分に結合され得る。オリゴヌクレオチドは、隣接するヌクレオシドと互いに共有結合されることによって形成され、線状高分子オリゴヌクレオチドを形成する。リン酸基は、オリゴヌクレオチド構造内で、オリゴヌクレオチドのヌクレオシド間結合を形成するものと一般に言われている。
アンチセンス化合物に対する修飾は、ヌクレオシド間結合、糖部分または核酸塩基に対する置換または変更を包含する。修飾アンチセンス化合物は、例えば、細胞取込みの向上、核酸標的に対する親和性の向上、ヌクレアーゼ存在下での安定性の増大、または阻害活性の増加などの望ましい特性があるため、天然型よりも好ましいことが多い。
短縮型または切断型アンチセンスオリゴヌクレオチドのその標的核酸に対する結合親和性を増大させるには、化学修飾ヌクレオシドを利用することもできる。したがって、より短いアンチセンス化合物でも、このような化学修飾ヌクレオシドを有するものは、多くの場合、同等の結果を得ることができる。
修飾ヌクレオシド間結合
ＲＮＡ及びＤＮＡの天然に生じるヌクレオシド間結合は、３’－５’ホスホジエステル結合である。天然に生じるヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物よりも、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合、すなわち、天然に生じないヌクレオシド間結合を有するアンチセンス化合物のほうが、例えば、細胞取込みの向上、核酸標的に対する親和性の向
上及びヌクレアーゼ存在下での安定性の増大などの望ましい特性を有するため、選択されることが多い。
修飾ヌクレオシド間結合を有するオリゴヌクレオチドには、リン原子を保持するヌクレオシド間結合及びリン原子を持たないヌクレオシド間結合が含まれる。代表的なリン含有ヌクレオシド間結合には、ホスホジエステル、ホスホトリエステル、メチルホスホネート、ホスホロアミデート及びホスホロチオエートが挙げられるが、これらに限定されない。リン含有結合及びリン非含有結合の調製方法は、よく知られている。
特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾ヌクレオシド間結合を含む。特定の実施形態において、修飾ヌクレオシド間結合の少なくとも１つは、ホスホロチオエート結合である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物の各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。
修飾糖部分
本発明のアンチセンス化合物は、場合により、糖基が修飾されている１つ以上のヌクレオシドを含有することができる。このような糖修飾ヌクレオシドは、ヌクレアーゼ安定性の向上、結合親和性の増大または他の何らかの有益な生物学的特性をアンチセンス化合物に付与し得る。特定の実施形態において、ヌクレオシドは、化学修飾リボフラノース環部分を含む。化学修飾リボフラノース環の例には、限定するものではないが、置換基の付加（例えば、５’及び２’置換基、非ジェミナル環原子の架橋による二環式核酸（ＢＮＡ）の形成、リボシル環酸素原子のＳ、Ｎ（Ｒ）またはＣ（Ｒ１）（Ｒ２）（Ｒ、Ｒ１及びＲ２は、それぞれ独立してＨ、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは保護基である）による置き換え及びこれらの組み合わせが挙げられる。化学修飾糖の例には、２’－Ｆ－５’－メチル置換ヌクレオシド（開示されている他の５’，２’－ビス置換ヌクレオシドについては２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照）またはリボシル環酸素原子のＳの置き換えと２’位の更なる置換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願公開ＵＳ２００５－０１３０９２３参照）、あるいは、ＢＮＡの５’－置換（２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照；例えば、５’－メチルまたは５’－ビニル基で置換されたＬＮＡ）が挙げられる。
修飾糖部分を有するヌクレオシドの例には、５’－ビニル、５’－メチル（ＲまたはＳ）、４’－Ｓ、２’－Ｆ、２’－ＯＣＨ３、２’－ＯＣＨ２ＣＨ３、２’－ＯＣＨ２ＣＨ２Ｆ及び２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＯＣＨ３置換基を含むヌクレオシドが挙げられる。２’位の置換基は、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ１～Ｃ１０アルキル、ＯＣＦ３、ＯＣＨ２Ｆ、Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）２－Ｏ－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）、Ｏ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）及びＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｌ）－（ＣＨ２）２－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、各Ｒｌ、Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換または無置換Ｃ１～Ｃ１０アルキルである）から選択することもできる。
本明細書で使用されるとき、「二環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分を含む修飾ヌクレオシドを指す。二環式核酸（ＢＮＡ）の例には、限定するものではないが、４’リボシル環原子と２’リボシル環原子との間に架橋を含むヌクレオシドが挙げられる。特定の実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物には、１つ以上のＢＮＡヌクレオシドを含み、その架橋は、次式：４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’（ＬＮＡ）；４’－（ＣＨ２）－Ｓ－２’；４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’（ＥＮＡ）；４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’（ｃＥｔ）及び４’－ＣＨ（ＣＨ２ＯＣＨ３）－Ｏ－２’（及びその類似体；２００８年７月１５日に発行された米国特許第７，３９９，８４５号参照）；４’－Ｃ（
ＣＨ３）（ＣＨ３）－Ｏ－２’（及びその類似体；ＷＯ／２００９／００６４７８（２００９年１月８日公開）として公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２参照）；４’－ＣＨ２－Ｎ（ＯＣＨ３）－２’（及びその類似体；ＷＯ／２００８／１５０７２９（２００８年１２月１１日公開）として公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１参照）；４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（ＣＨ３）－２’（２００４年９月２日に公開された米国特許出願公開ＵＳ２００４－０１７１５７０参照）；４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’（式中、Ｒは、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキル保護基である）（２００８年９月２３日発行の米国特許第７，４２７，６７２号参照）；４’－ＣＨ２－Ｃ（Ｈ）（ＣＨ３）－２’（例えば、Ｚｈｏｕ，ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００９，７４，１１８－１３４参照）ならびに４’－ＣＨ２－Ｃ（＝ＣＨ２）－２’（及びその類似体：ＷＯ２００８／１５４４０１（２００８年１２月８日公開）として公開されたＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４参照）のうちの１つを含む。
更なる二環式ヌクレオシドは、公開文献に報告されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（２６）８３６２－８３７９；Ｆｒｉｅｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５－６３７２；Ｅｌａｙａｄｉ ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｉｎｖｅｎｓ．Ｄｒｕｇｓ，２００１，２，５５８－５６１；Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．，２００１，８，１－７；Ｏｒｕｍ
ｅｔ ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ Ｍｏｌ．Ｔｈｅｒ．，２００１，３，２３９－２４３；Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，２０００，９７，５６３３－５６３８；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｅｍ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１９９８，４，４５５－４５６；Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７－３６３０；Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９－２２２２；Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５－１００３９；米国特許第７，３９９，８４５号、同第７，０５３，２０７号、同第７，０３４，１３３号、同第６，７９４，４９９号、同第６，７７０，７４８号、同第６，６７０，４６１号、同第６，５２５，１９１号、同第６，２６８，４９０号；米国特許出願公開第ＵＳ２００８－００３９６１８号、同第ＵＳ２００７－０２８７８３１号、同第ＵＳ２００４－０１７１５７０号；米国特許出願第１２／１２９，１５４号、同第６１／０９９，８４４号、同第６１／０９７，７８７号、同第６１／０８６，２３１号、同第６１／０５６，５６４号、同第６１／０２６，９９８号、同第６１／０２６，９９５号、同第６０／９８９，５７４号；国際出願第ＷＯ２００７／１３４１８１号、同第ＷＯ２００５／０２１５７０号、同第ＷＯ２００４／１０６３５６号、同第ＷＯ９９／１４２２６号；ならびにＰＣＴ国際出願番号：ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６８９２２、ＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６６１５４及びＰＣＴ／ＵＳ２００８／０６４５９１参照）。前述の二環式ヌクレオシドのそれぞれは、例えばα－Ｌ－リボフラノース及びβ－Ｄ－リボフラノースを含む、１つ以上の立体化学的糖構造を有するように調製することができる（ＷＯ９９／１４２２６（１９９９年３月２５日公開）として公開されたＰＣＴ国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００３９３号参照）。
本明細書で使用されるとき、「単環式ヌクレオシド」は、二環式糖部分でない修飾糖部分を含むヌクレオシドを指す。特定の実施形態において、ヌクレオシドの糖部分または糖部分類似体は、任意の位置で修飾または置換され得る。
本明細書で使用されるとき、「４’－２’二環式ヌクレオシド」または「４’→２’二環式ヌクレオシド」は、糖環の２’炭素原子と４’炭素原子とを接続するフラノース環の２つの炭素原子を接続する架橋を含むフラノース環を含む二環式ヌクレオシドを指す。
特定の実施形態において、ＢＮＡヌクレオシドの二環式糖部分には、限定するものではないが、ペントフラノシル糖部分の４’炭素原子と２’炭素原子との間に少なくとも１つの架橋を有する化合物が含まれ、限定するものではないが、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｃ（Ｒｂ）－、－Ｃ（Ｒａ）＝Ｎ－、－Ｃ（＝ＮＲａ）－、－Ｃ（＝Ｏ）－、－Ｃ（＝Ｓ）－、－Ｏ－、－Ｓｉ（Ｒａ）２－、－Ｓ（＝Ｏ）ｘ－及び－Ｎ（Ｒａ）－から独立して選択される１個または１～４個の結合基を含む架橋を含み、式中、ｘは０、１または２であり、ｎは１、２、３または４であり、各Ｒａ及びＲｂは、独立して、Ｈ、保護基、ヒドロキシル、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ５～Ｃ２０アリール、置換Ｃ５～Ｃ２０アリール、複素環基、置換複素環基、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ５～Ｃ７脂環式基、置換Ｃ５～Ｃ７脂環式基、ハロゲン、ＯＪ１、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＣＯＯＪ１、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、ＣＮ、スルホニル（Ｓ（＝Ｏ）２－Ｊ１）、またはスルホキシル（Ｓ（＝Ｏ）－Ｊ１）であり、各Ｊ１及びＪ２は、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ５～Ｃ２０アリール、置換Ｃ５～Ｃ２０アリール、アシル（Ｃ（＝Ｏ）－Ｈ）、置換アシル、複素環基、置換複素環基、Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アミノアルキルまたは保護基である。
特定の実施形態において、二環式糖部分の架橋は、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－、－［Ｃ（Ｒａ）（Ｒｂ）］ｎ－Ｏ－、－Ｃ（ＲａＲｂ）－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－または－Ｃ（ＲａＲｂ）－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－である。特定の実施形態において、架橋は、４’－ＣＨ２－２’、４’－（ＣＨ２）２－２’、４’－（ＣＨ２）３－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’及び４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’－（式中、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基またはＣ１～Ｃ１２アルキルである）である。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、異性体配置によって更に定義される。例えば、４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’架橋を含むヌクレオシドは、α－Ｌ配置またはβ－Ｄ配置を取り得る。これまでに、α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡがアンチセンスオリゴヌクレオチドに組み込まれており、アンチセンス活性を示している（Ｆｒｉｅｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００３，２１，６３６５－６３７２）。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドには、４’→２’架橋を有するものが含まれ、かかる架橋には、限定するものではないが、α－Ｌ－４’－（ＣＨ２）－Ｏ－２’、β－Ｄ－４’－ＣＨ２－Ｏ－２’、４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’、４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’、４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’、４’－ＣＨ２－Ｓ－２’、４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－２’、４’－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－２’、及び４’－（ＣＨ２）３－２’（式中、Ｒは、Ｈ、保護基またはＣ１～Ｃ１２アルキルである）が含まれる。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、次式を有する。
Figure 2023093644000010
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
－Ｑａ－Ｑｂ－Ｑｃ－は、－ＣＨ２－Ｎ（Ｒｃ）－ＣＨ２－、－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｃ）－ＣＨ２－、－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒｃ）－、－ＣＨ２－Ｎ（Ｒｃ）－Ｏ－または－Ｎ（Ｒｃ）－Ｏ－ＣＨ２であり、
Ｒｃは、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたはアミノ保護基であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基、反応性リン基、リン部分または支持体への共有結合である。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、次式を有する。
Figure 2023093644000011
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基、反応性リン基、リン部分または支持体への共有結合であり、
Ｚａは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、アシル、置換アシル、置換アミド、チオールまたは置換チオールである。
一実施形態において、置換基のそれぞれは、独立して、ハロゲン、オキソ、ヒドロキシル、ＯＪｃ、ＮＪｃＪｄ、ＳＪｃ、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊｃ及びＮＪｅＣ（＝Ｘ）ＮＪｃＪｄから独立して選択される置換基でモノ置換またはポリ置換され、式中、各Ｊｃ、Ｊｄ及びＪｅは、独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アルキルであり、Ｘは、ＯまたはＮＪｃである。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、次式を有する。
Figure 2023093644000012
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基、反応性リン基、リン部分または支持体への共有結合であり、
Ｚｂは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換アシル（Ｃ（＝Ｏ）－）である。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、次式を有する。
Figure 2023093644000013
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基、反応性リン基、リン部分または支持体への共有結合であり、
Ｒｄは、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
各ｑａ、ｑｂ、ｑｃ及びｑｄは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニル、Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、置換Ｃ１～Ｃ６アルコキシル、アシル、置換アシル、Ｃ１～Ｃ６アミノアルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ６アミノアルキルである。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、次式を有する。
Figure 2023093644000014
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基、反応性リン基、リン部分または支持体への共有結合であり、
ｑａ、ｑｂ、ｑｅ及びｑｆは、それぞれ独立して、水素、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ１～Ｃ１２アルコキシ、置換Ｃ１～Ｃ１２アルコキシ、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）Ｎ
ＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、
あるいはｑｅ及びｑｆは、一緒になって＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、
ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。
４’－ＣＨ２－Ｏ－２’架橋を有する、アデニン、シトシン、グアニン、５－メチル－シトシン、チミン及びウラシル二環式ヌクレオシドの合成及び調製については、そのオリゴマー化及び核酸認識特性とともに記載されている（Ｋｏｓｈｋｉｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９８，５４，３６０７－３６３０）。二環式ヌクレオシドの合成は、ＷＯ９８／３９３５２及びＷＯ９９／１４２２６にも記載されている。
４’－ＣＨ２－Ｏ－２’及び４’－ＣＨ２－Ｓ－２’などの４’→２’架橋基を有する種々の二環式ヌクレオシドの類似体も調製されている（Ｋｕｍａｒ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，１９９８，８，２２１９－２２２２）。核酸ポリメラーゼの基質として使用する二環式ヌクレオシドを含むオリゴデオキシリボヌクレオチド二本鎖の調製についても記載されている（Ｗｅｎｇｅｌ ｅｔ ａｌ．，ＷＯ９９／１４２２６）。更に、立体配置が制限された新しい高親和性オリゴヌクレオチド類似体である２’－アミノ－ＢＮＡの合成についても当該技術分野において記載されている（Ｓｉｎｇｈ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，１９９８，６３，１００３５－１００３９）。加えて、２’－アミノ－ＢＮＡ及び２’－メチルアミノ－ＢＮＡが調製されており、相補的ＲＮＡ鎖とＤＮＡ鎖によるその二本鎖の熱安定性については先に報告されている。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドは、次式を有する。
Figure 2023093644000015
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔａ及びＴｂは、それぞれ独立して、Ｈ、ヒドロキシル保護基、コンジュゲート基、反応性リン基、リン部分または支持体への共有結合であり、
各ｑｉ、ｑｊ、ｑｋ及びｑｌは、独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルキル、Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルケニル、Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ１２アルキニル、Ｃ１～Ｃ１２アルコキシル、置換Ｃ１～Ｃ１２アルコキシル、ＯＪｊ、ＳＪｊ、ＳＯＪｊ、ＳＯ２Ｊｊ、ＮＪｊＪｋ、Ｎ３、ＣＮ、Ｃ（＝Ｏ）ＯＪｊ、Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｃ（＝Ｏ）Ｊｊ、Ｏ－Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝ＮＨ）ＮＪｊＪｋ、Ｎ（Ｈ）Ｃ（＝Ｏ）ＮＪｊＪｋまたはＮ（Ｈ）Ｃ（＝Ｓ）ＮＪｊＪｋであり、
ｑｉ及びｑｊまたはｑｌ及びｑｋは、一緒になって、＝Ｃ（ｑｇ）（ｑｈ）であり、式中、ｑｇ及びｑｈは、それぞれ独立して、Ｈ、ハロゲン、Ｃ１～Ｃ１２アルキルまたは置換Ｃ１～Ｃ１２アルキルである。
４’－（ＣＨ２）３－２’架橋及びアルケニル類似体架橋４’－ＣＨ＝ＣＨ－ＣＨ２－
２’を有する、ある炭素環二環式ヌクレオシドが記載されている（Ｆｒｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９７，２５（２２），４４２９－４４４３及びＡｌｂａｅｋ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００６，７１，７７３１－７７４０）。炭素環二環式ヌクレオシドの合成及び調製についても、そのオリゴマー化及び生化学的研究とともに記載されている（Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２－８３７９）。
特定の実施形態において、二環式ヌクレオシドには、以下に示すように、（Ａ）α－Ｌ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｂ）β－Ｄ－メチレンオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｃ）エチレンオキシ（４’－（ＣＨ２）２－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｄ）アミノオキシ（４’－ＣＨ２－Ｏ－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、（Ｅ）オキシアミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－Ｏ－２’）ＢＮＡ、（Ｆ）メチル（メチレンオキシ）（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）ＢＮＡ（拘束エチルまたはｃＥｔとも呼ばれる）、（Ｇ）メチレン－チオ（４’－ＣＨ２－Ｓ－２’）ＢＮＡ、（Ｈ）メチレン－アミノ（４’－ＣＨ２－Ｎ（Ｒ）－２’）ＢＮＡ、（Ｉ）メチル炭素環式（４’－ＣＨ２－ＣＨ（ＣＨ３）－２’）ＢＮＡ、（Ｊ）プロピレン炭素環式（４’－（ＣＨ２）３－２’）ＢＮＡ、及び（Ｋ）ビニルＢＮＡが含まれるが、これらに限定されない。
Figure 2023093644000016
式中、Ｂｘは、塩基部分であり、Ｒは、独立して、Ｈ、保護基、Ｃ１～Ｃ６アルキルまたはＣ１～Ｃ６アルコキシである。
本明細書で使用されるとき、「修飾テトラヒドロピランヌクレオシド」または「修飾ＴＨＰヌクレオシド」という用語は、通常のヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに６員テトラヒドロピラン「糖」を有するヌクレオシドを意味し、糖代替物と呼ぶ場合もある。修飾ＴＨＰヌクレオシドには、当該技術分野においてヘキシトール核酸（ＨＮＡ）、アニトール核酸（ＡＮＡ）、マニトール核酸（ＭＮＡ）と呼ばれるもの（Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１－８５４参照）、または以下に示すテトラヒドロピラニル環系を有するフルオロＨＮＡ（Ｆ－ＨＮＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
Figure 2023093644000017
特定の実施形態において、糖代替物は、次式を有するものから選択される。
Figure 2023093644000018
式中、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立して、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をオリゴマー化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、あるいは、Ｔ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をオリゴマー化合物またはオリゴヌクレオチドに結合するヌクレオシド間結合基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合されたコンジュゲート基または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルであり、
Ｒ１及びＲ２の一方は、水素であり、他方は、ハロゲン、置換または無置換アルコキシ、ＮＪ１Ｊ２、ＳＪ１、Ｎ３、ＯＣ（＝Ｘ）Ｊ１、ＯＣ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２、ＮＪ３Ｃ（＝Ｘ）ＮＪ１Ｊ２及びＣＮから選択され、式中、Ｘは、Ｏ、ＳまたはＮＪ１であり、各Ｊ１、Ｊ２及びＪ３は、独立して、ＨまたはＣ１～Ｃ６アルキルである。
特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７は、それぞれＨである。特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つは、Ｈ以外である。特定の実施形態において、ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６及びｑ７のうちの少なくとも１つは、メチルである。特定の実施形態において、Ｒ１及びＲ２の一方がＦであるＴＨＰヌクレオシドが提供される。特定の実施形態において、Ｒ１はフルオロであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はメトキシであり、Ｒ２はＨであり、Ｒ１はメトキシエトキシであり、Ｒ２はＨである。
特定の実施形態において、糖代替物は、６個以上の原子を有し、２つ以上のヘテロ原子を有する環を含む。例えば、モルホリノ糖部分を含むヌクレオシド及びそのオリゴマー化合物における使用が報告されている（例えば、Ｂｒａａｓｃｈ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，４５０３－４５１０ならびに米国特許第５，６９８，６８５号；同第５，１６６，３１５号；同第５，１８５，４４４号；及び同第５，０３４，５０６号参照）。本明細書で使用される場合、「モルホリノ」という用語は、次式を有する糖代替物を意味する。
Figure 2023093644000019
特定の実施形態において、モルホリノは、例えば、上記のモルホリノ構造に種々の置換基を付加するか、上記のモルホリノ構造の種々の置換基を変更することによって、修飾されてもよい。このような糖代替物は、本明細書中、「修飾モルホリノ」ともいう。
修飾の組み合わせも提供され、限定するものではないが、２’－Ｆ－５’－メチル置換ヌクレオシド（開示されている他の５’，２’－ビス置換ヌクレオシドについては２００８年８月２１日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００８／１０１１５７を参照）及びリボシル環酸素原子のＳの置き換えと２’位の更なる置換（２００５年６月１６日に公開された米国特許出願公開ＵＳ２００５－０１３０９２３参照）、あるいは、二環式核酸の５’－置換（２００７年１１月２２日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２００７／１３４１８１を参照；４’－ＣＨ２－Ｏ－２’二環式ヌクレオシドは、５’位が５’－メチルまたは５’－ビニル基で更に置換される）などがある。炭素環二環式ヌクレオシドの合成及び調製についても、そのオリゴマー化及び生化学的研究とともに記載されている（例えば、Ｓｒｉｖａｓｔａｖａ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．２００７，１２９（２６），８３６２－８３７９参照）。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、天然に生じるヌクレオシド中のペントフラノシル残基の代わりに６員シクロヘキセニルを有するヌクレオシドである、修飾シクロヘキセニルヌクレオシドを１つ以上含む。修飾シクロヘキセニルヌクレオシドには、当該技術分野において記載されているものが含まれるが、これらに限定されない（例えば、所有者が共通である２０１０年４月１０日に公開されたＰＣＴ国際出願ＷＯ２０１０／０３６６９６、Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００８，１３０（６），１９７９－１９８４；Ｈｏｒｖａｔｈ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２００７，４８，３６２１－３６２３；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，２００７，１２９（３０），９３４０－９３４８；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００５，２４（５－７），９９３－９９８；Ｎａｕｗｅｌａｅｒｔｓ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００５，３３（８），２４５２－２４６３；Ｒｏｂｅｙｎｓ ｅｔ ａｌ．，Ａｃｔａ Ｃｒｙｓｔａｌｌｏｇｒａｐｈｉｃａ，Ｓｅｃｔｉｏｎ Ｆ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ
Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚａｔｉｏｎ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２００５，Ｆ６１（６），５８５－５８６；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，２００４，６０（９），２１１１－２１２３；Ｇｕ ｅｔ ａｌ．，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，２００３，１３（６），４７９－４８９；Ｗａｎｇ ｅｔ
ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００３，６８，４４９９－４５０５；Ｖｅｒｂｅｕｒｅ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２００１，２９（２４），４９４１－４９４７；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，２００１，６６，８４７８－８２；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ，２００１，２０（４－７），７８５－７８８；Ｗａｎｇ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．，２０００，１２２，８５９５－８６０２；ＰＣＴ出願公開ＷＯ０６／０４７８４２；及びＰＣＴ出願公開ＷＯ０１／０４９６８７参照；各文献は、その全体を参照により本明細書に援用する）。特定の修飾シクロヘキセニルヌクレオシドは、式Ｘを有する。
Figure 2023093644000020
式中、独立して、式Ｘの当該少なくとも１つのシクロヘキセニルヌクレオシド類似体のそれぞれについて、
Ｂｘは、複素環式塩基部分であり、
Ｔ３及びＴ４は、それぞれ独立して、シクロヘキセニルヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、あるいは、Ｔ３及びＴ４の一方は、テトラヒドロピランヌクレオシド類似体をアンチセンス化合物に結合するヌクレオシド間結合基であり、Ｔ３及びＴ４の他方は、Ｈ、ヒドロキシル保護基、結合されたコンジュゲート基または５’もしくは３’末端基であり、
ｑ１、ｑ２、ｑ３、ｑ４、ｑ５、ｑ６、ｑ７、ｑ８及びｑ９は、それぞれ独立して、Ｈ、Ｃ１～Ｃ６アルキル、置換Ｃ１～Ｃ６アルキル、Ｃ２～Ｃ６アルケニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルケニル、Ｃ２～Ｃ６アルキニル、置換Ｃ２～Ｃ６アルキニルまたは他の糖置換基である。
多くの他の単環式、二環式及び三環式環系が当該技術分野において知られており、本明細書で提供されるオリゴマー化合物に組み込み、ヌクレオシドを修飾するために使用することができる糖代替物として好適である（例えば、総説論文：Ｌｅｕｍａｎｎ，Ｃｈｒｉｓｔｉａｎ Ｊ．Ｂｉｏｏｒｇ．＆Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２００２，１０，８４１－８５４参照）。このような環系は、その活性を更に向上させるための様々な追加の置換を受け得る。
本明細書で使用されるとき、「２’－修飾糖」とは、２’位が修飾されたフラノシル糖を意味する。特定の実施形態において、このような修飾には、ハライド、限定するものではないが、置換及び無置換アルコキシ、置換及び無置換チオアルキル、置換及び無置換アミノアルキル、置換及び無置換アルキル、置換及び無置換アリルならびに置換及び無置換アルキニルから選択される置換基が含まれる。特定の実施形態において、２’修飾は、Ｏ［（ＣＨ２）ｎＯ］ｍＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＮＨ２、Ｏ（ＣＨ２）ｎＣＨ３、Ｏ（ＣＨ２）ｎＦ、Ｏ（ＣＨ２）ｎＯＮＨ２、ＯＣＨ２Ｃ（＝Ｏ）Ｎ（Ｈ）ＣＨ３、及びＯ（ＣＨ２）ｎＯＮ［（ＣＨ２）ｎＣＨ３］２（式中、ｎ及びｍは、１～約１０である）を含むがこれらに限定されない置換基から選択される。他の２’－置換基は、Ｃ１～Ｃ１２アルキル、置換アルキル、アルケニル、アルキニル、アルカリル、アラルキル、Ｏ－アルカリルまたはＯ－アラルキル、ＳＨ、ＳＣＨ３、ＯＣＮ、Ｃｌ、Ｂｒ、ＣＮ、Ｆ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、ＳＯＣＨ３、ＳＯ２ＣＨ３、ＯＮＯ２、ＮＯ２、Ｎ３、ＮＨ２、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルカリル、アミノアルキルアミノ、ポリアルキルアミノ、置換シリル、ＲＮＡ切断基、レポーター基、インターカレーター、アンチセンス化合物の薬物動態特性を改善する基または薬力学特性を改善する基、及び類似の特性を有する他の置換基から選択することもできる。特定の実施形態において、修飾ヌクレオシドは、２’－ＭＯＥ側鎖を含む（Ｂａｋｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，１９９７，２７２，１１９４４－１２０００）。このような２’－ＭＯＥ置換は、非修飾ヌクレオシドならびに２’－Ｏ－メチル、Ｏ－プロピル及びＯ－アミノプロピルなどの他の修飾ヌクレオシドと比較して結合親和性を改善することが記載されている。２’－ＭＯＥ置換基を有する
オリゴヌクレオチドはまた、ｉｎ ｖｉｖｏ使用に有用な特徴を有する、遺伝子発現のアンチセンス阻害剤であることが示されている（Ｍａｒｔｉｎ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ，１９９５，７８，４８６－５０４；Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｃｈｉｍｉａ，１９９６，５０，１６８－１７６；Ａｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．，１９９６，２４，６３０－６３７；及びＡｌｔｍａｎｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９７，１６，９１７－９２６）。
本明細書で使用されるとき、「２’－修飾」または「２’－置換」は、２’位にＨまたはＯＨ以外の置換基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。２’－修飾ヌクレオシドには、アリル、アミノ、アジド、チオ、Ｏ－アリル、Ｏ－Ｃ１～Ｃ１０アルキル、－ＯＣＦ３、Ｏ－（ＣＨ２）２－Ｏ－ＣＨ３、２’－Ｏ（ＣＨ２）２ＳＣＨ３、Ｏ－（ＣＨ２）２－Ｏ－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）またはＯ－ＣＨ２－Ｃ（＝Ｏ）－Ｎ（Ｒｍ）（Ｒｎ）（式中、各Ｒｍ及びＲｎは、独立して、Ｈまたは置換もしくは無置換Ｃ１～Ｃ１０アルキルである）などの架橋していない２’置換基を含むヌクレオシドが挙げられるが、これらに限定されない。２’－修飾ヌクレオシドは、他の修飾を、例えば、糖の他の位置及び／または核酸塩基に更に含み得る。
本明細書で使用されるとき、「２’－Ｆ」は、糖環の２’位にフルオロ基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書で使用されるとき、「２’－ＯＭｅ」または「２’－ＯＣＨ３」、「２’－Ｏ－メチル」または「２’－メトキシ」は、それぞれ糖環の２’位に－ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
本明細書で使用されるとき、「ＭＯＥ」または「２’－ＭＯＥ」または「２’－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３」または「２’－Ｏ－メトキシエチル」は、それぞれ糖環の２’位に－ＯＣＨ２ＣＨ２ＯＣＨ３基を含む糖を含むヌクレオシドを指す。
修飾糖の調製方法は、当業者によく知られている。このような修飾糖の調製について教示するいくつかの代表的な米国特許には、限定するものではないが、米国特許第４，９８１，９５７号、同第５，１１８，８００号、同第５，３１９，０８０号、同第５，３５９，０４４号、同第５，３９３，８７８号、同第５，４４６，１３７号、同第５，４６６，７８６号、同第５，５１４，７８５号、同第５，５１９，１３４号、同第５，５６７，８１１号、同第５，５７６，４２７号、同第５，５９１，７２２号、同第５，５９７，９０９号、同第５，６１０，３００号、同第５，６２７，０５３号、同第５，６３９，８７３号、同第５，６４６，２６５号、同第５，６７０，６３３号、同第５，７００，９２０号、同第５，７９２，８４７号及び同第６，６００，０３２号ならびに２００５年１２月２２日にＷＯ２００５／１２１３７１として公開された国際出願ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０１９２１９（２００５年６月２日出願）が含まれ、これらのそれぞれの全体を参照により援用する。
本明細書で使用されるとき、「オリゴヌクレオチド」とは、複数の結合されたヌクレオシドを含む化合物を指す。特定の実施形態において、複数のヌクレオシドのうちの１つ以上は、修飾されている。特定の実施形態において、オリゴヌクレオチドは、１つ以上のリボヌクレオシド（ＲＮＡ）及び／またはデオキシリボヌクレオシド（ＤＮＡ）を含む。
修飾糖部分を有するヌクレオチドにおいて、核酸塩基部分（天然、修飾またはこれらの組み合わせ）は、適切な核酸標的とのハイブリダイゼーションとのために保持される。
特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、修飾糖部分を有するヌクレオシドを１つ以上含む。特定の実施形態において、修飾糖部分は、２’－ＭＯＥである。特定の実施形態において、２’－ＭＯＥ修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフ中に配置される。特定の実施形態において、修飾糖部分は、（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）架橋基を有する二環式ヌクレオシドである。特定の実施形態において、（４’－ＣＨ（ＣＨ３）－Ｏ－２’）修飾ヌクレオシドは、ギャップマーモチーフのウイング全体に配置される。
修飾核酸塩基
核酸塩基（または塩基）の修飾または置換は、天然または合成の非修飾核酸塩基と構造的に区別可能であるが、機能的には交換可能である。天然核酸塩基と修飾核酸塩基はどちらも水素結合に関与することができる。このような核酸塩基修飾は、ヌクレアーゼ安定性、結合親和性または他の何らかの有益な生物学的特性をアンチセンス化合物に付与し得る。修飾核酸塩基には、合成及び天然核酸塩基、例えば、５－メチルシトシン（５－ｍｅ－Ｃ）などが含まれる。特定の核酸塩基置換は、５－メチルシトシン置換を含め、標的核酸に対するアンチセンス化合物の結合親和性を増大させるのに特に有用である。例えば、５－メチルシトシン置換は、核酸二本鎖の安定性を０．６～１．２℃増加させることが示されている（Ｓａｎｇｈｖｉ，Ｙ．Ｓ．，Ｃｒｏｏｋｅ，Ｓ．Ｔ．ａｎｄ Ｌｅｂｌｅｕ，Ｂ．，ｅｄｓ．，Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ ａｎｄ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ＣＲＣ Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ Ｒａｔｏｎ，１９９３，ｐｐ．２７６－２７８）。
更なる非修飾核酸塩基には、５－ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチン、２－アミノアデニン、アデニン及びグアニンの６－メチル及び他のアルキル誘導体、アデニン及びグアニンの２－プロピル及び他のアルキル誘導体、２－チオウラシル、２－チオチミン及び２－チオシトシン、５－ハロウラシル及びシトシン、５－プロピニル（－Ｃ≡Ｃ－ＣＨ３）ウラシル及びシトシンならびにピリミジン塩基の他のアルキニル誘導体、６－アゾウラシル、シトシン及びチミン、５－ウラシル（シュードウラシル）、４－チオウラシル、８－ハロ、８－アミノ、８－チオール、８－チオアルキル、８－ヒドロキシル及び他の８－置換アデニン及びグアニン、５－ハロ、特に５－ブロモ、５－トリフルオロメチル及び他の５－置換ウラシル及びシトシン、７－メチルグアニン及び７－メチルアデニン、２－Ｆ－アデニン、２－アミノ－アデニン、８－アザグアニン及び８－アザアデニン、７－デアザグアニン及び７－デアザアデニンならびに３－デアザグアニン及び３－デアザアデニンが含まれる。
複素環式塩基部分にはまた、プリン塩基またはピリミジン塩基が他の複素環、例えば、７－デアザ－アデニン、７－デアザグアノシン、２－アミノピリジン及び２－ピリドンで置き換えられたものも含まれる。アンチセンス化合物の結合親和性を増大させるのに特に有用な核酸塩基には、５－置換ピリミジン、６－アザピリミジンならびにＮ－２、Ｎ－６及びＯ－６置換プリン、例えば、２アミノプロピルアデニン、５－プロピニルウラシル及び５－プロピニルシトシンが含まれる。
特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物は、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたギャップ拡大アンチセンスオリゴヌクレオチドは、１つ以上の修飾核酸塩基を含む。特定の実施形態において、修飾核酸塩基のうちの少なくとも１つは、５－メチルシトシンである。特定の実施形態において、各シトシンは、５－メチルシトシンである。
医薬組成物を製するための組成物及び方法
アンチセンスオリゴヌクレオチドは、医薬組成物または製剤の調製のために、薬学的に
許容される活性物質または不活性物質と混合され得る。医薬組成物を製するための組成物及び方法は、限定するものではないが、投与経路、疾患の程度または投与される用量を含む、多くの基準に依存する。
ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物は、当該アンチセンス化合物を、好適な薬学的に許容される希釈剤または担体と組み合わせることによって、医薬組成物に利用することができる。薬学的に許容される希釈剤には、水、例えば、注射用水（ＷＦＩ）が含まれる。薬学的に許容される希釈剤には、生理食塩水、例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）が含まれる。水または生理食塩水は、非経口的に送達される組成物での使用に好適な希釈剤である。したがって、一実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物と、薬学的に許容される希釈剤とを含む医薬組成物が、本明細書に記載される方法において利用される。特定の実施形態において、薬学的に許容される希釈剤は、水または生理食塩水である。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。
アンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ヒトを含む動物に投与したときに、生物学的に活性な代謝産物またはその残基を（直接的または間接的に）もたらすことができる、あらゆる薬学的に許容される塩、エステルもしくは当該エステルの塩または任意の他のオリゴヌクレオチドを包含する。したがって、例えば、本開示はまた、アンチセンス化合物の薬学的に許容される塩、プロドラッグ、当該プロドラッグの薬学的に許容される塩及び他の生物学的同等物に関する。好適な薬学的に許容される塩には、ナトリウム塩及びカリウム塩が挙げられるが、これらに限定されない。
本明細書に記載の化合物の「薬学的に許容される塩」は、当該技術分野においてよく知られている方法によって調製することができる。薬学的に許容される塩の概説については、Ｓｔａｈｌ ａｎｄ Ｗｅｒｍｕｔｈ，Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓａｌｔｓ：Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｕｓｅ（Ｗｉｌｅｙ－ＶＣＨ，Ｗｅｉｎｈｅｉｍ，Ｇｅｒｍａｎｙ，２００２）を参照されたい。ヒトへの治療用投与には、アンチセンスオリゴヌクレオチドのナトリウム塩が有用であり、十分な認容性を示す。したがって、一実施形態において、本明細書に記載の化合物は、ナトリウム塩の形態である。
プロドラッグは、アンチセンス化合物の一端または両端に、体内の内因性ヌクレアーゼによって切断されて活性アンチセンス化合物を形成する、更なるヌクレオシドの組み込みを含み得る。
投薬
特定の実施形態において、医薬組成物は、投薬レジメン（例えば、用量、投与頻度及び継続期間）に従って投与され、投薬レジメンは、所望の効果を達成するように選択され得る。所望の効果は、例えば、ＡＧＴの減少またはＡＧＴに関連する疾患、障害もしくは病態の予防、減少、改善もしくは進行遅延であり得る。
特定の実施形態において、投薬レジメンの変数を調整して、対象における医薬組成物の所望の濃度をもたらすようにする。投薬レジメンに関して使用される「医薬組成物の濃度」は、化合物、オリゴヌクレオチド、または医薬組成物の活性成分を指し得る。例えば、特定の実施形態において、所望の効果を達成するのに十分な量の医薬組成物の組織濃度または血漿濃度を得るために、用量及び投与頻度を調整する。
投薬は、治療すべき疾患状態の重症度及び応答性に依存し、その治療クールは数日から数ヶ月、あるいは治癒が達成されるか、疾患状態の軽減が達成されるまで続く。投薬は、
薬効及び代謝にも依存する。特定の実施形態において、用量は、体重１ｋｇあたり０．０１μｇ～１００ｍｇまたは０．００１ｍｇ～１０００ｍｇの用量範囲内であり、毎日、毎週、隔週、毎月、３ヶ月毎、半年毎もしくは毎年１回以上、または２～２０年毎に１回投与することができる。治療が奏効した後、患者は、疾患状態の再発を防ぐために、維持療法を受けるのが望ましい場合があり、この場合、オリゴヌクレオチドは、体重１ｋｇあたり０．０１μｇ～１００ｍｇの範囲または０．００１ｍｇ～１０００ｍｇの用量範囲の維持用量で、毎日１回以上から２０年毎に１回、投与される。
投与
本発明の化合物または医薬組成物は、局所的または全身的治療が望ましいかに応じて、また治療対象領域に応じて、様々な方法で投与することができる。投与は、吸入（すなわち、肺）、経腸（すなわち、腸溶性）、非経口または局所投与であってよい。
特定の実施形態において、本明細書に記載される化合物及び組成物は、非経口投与される。非経口投与には、静脈内、動脈内、皮下、腹腔内、眼内、筋肉内、頭蓋内、髄腔内、髄内、室内または腫瘍内の注射または注入が含まれるが、これらに限定されない。非経口投与にはまた、経鼻投与が含まれる。
特定の実施形態において、非経口投与は、注入による。注入は、長期的、または連続的、または短期的、または断続的であり得る。特定の実施形態において、注入薬剤は、ポンプで送達される。
特定の実施形態において、非経口投与は、注射による。注射は、シリンジまたはポンプにより送達することができる。特定の実施形態において、注射は、ボーラス注射である。特定の実施形態において、注射は、組織または器官に直接投与される。
特定の実施形態において、非経口投与用製剤は、緩衝剤、希釈剤及び他の好適な添加剤、例えば、限定するものではないが、浸透増強剤、担体化合物及び他の薬学的に許容される担体または賦形剤も含有し得る無菌水溶液を含み得る。
特定の実施形態において、本明細書に記載される化合物及び組成物は、経腸投与される。腸内投与には、経口、経粘膜、腸または直腸（例えば、坐剤、浣腸）が含まれるが、これらに限定されない。特定の実施形態において、化合物または組成物の経腸投与用製剤は、限定するものではないが、薬学的担体、賦形剤、散剤または顆粒剤、微粒子、ナノ粒子、水もしくは非水性媒体中の懸濁剤もしくは液剤、カプセル剤、ゲルカプセル剤、サシェ剤、錠剤またはミニ錠剤を含み得る。粘稠剤、矯味剤、希釈剤、乳化剤、分散助剤または結合剤が望ましい場合もある。特定の実施形態において、経腸製剤は、本明細書で提供される化合物が１つ以上の浸透増強剤、界面活性剤及びキレート化剤とともに投与されるものである。
特定の実施形態において、投与は、経肺投与を含む。特定の実施形態において、経肺投与は、エアロゾル化したオリゴヌクレオチドを吸入によって対象の肺に送達することを含む。エアロゾル化したオリゴヌクレオチドを対象が吸入すると、オリゴヌクレオチドは、肺胞のマクロファージ、好酸球、上皮、血管内皮及び細気管支上皮を含む、正常な肺組織及び炎症性肺組織の両方の細胞に分布する。修飾オリゴヌクレオチドを含む医薬組成物の送達に好適な装置には、標準的なネブライザー装置が含まれるが、これに限定されない。更なる好適な装置には、ドライパウダー吸入器または定量吸入器が含まれる。
特定の実施形態において、医薬組成物は、全身曝露ではなく局所曝露を達成するように投与される。例えば、経肺投与は、最小の全身曝露で、医薬組成物を肺に送達する。
コンジュゲート化アンチセンス化合物
特定の実施形態において、本明細書で提供されるオリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物は、１つ以上のコンジュゲート基の共有結合によって修飾される。一般に、コンジュゲート基は、結合されるオリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物の１つ以上の特性、限定するものではないが、薬力学、薬物動態、安定性、結合、吸収、細胞分布、細胞取込み、電荷及びクリアランスなどの特性を変更する。本明細書で使用されるとき、「コンジュゲート基」とは、オリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に結合された原子団を含む特性基（ｒａｄｉｃａｌ ｇｒｏｕｐ）を意味する。一般に、コンジュゲート基は、結合される化合物の１つ以上の特性、限定するものではないが、薬力学、薬物動態、結合、吸収、細胞分布、細胞取込み、電荷及び／またはクリアランスなどの特性を変更する。コンジュゲート基は、化学技術分野で日常的に使用されており、コンジュゲート基をオリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に共有結合させるコンジュゲートリンカーを含み得る。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、コンジュゲート基をオリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に共有結合させる切断可能部分を含む。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、コンジュゲート基をオリゴヌクレオチドまたはオリゴマー化合物に共有結合させるコンジュゲートリンカー及び切断可能部分を含む。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、次の一般式を有する。
Figure 2023093644000021
式中、ｎは１～約３であり、ｎが１であるとき、ｍは０であり、あるいはｎが２または３であるとき、ｍは１であり、ｊは１または０であり、ｋは１または０であり、ｊとｋの合計は少なくとも１である。
特定の実施形態において、ｎは１であり、ｊは１であり、ｋは０である。特定の実施形態において、ｎは１であり、ｊは０であり、ｋは１である。特定の実施形態において、ｎは１であり、ｊは１であり、ｋは１である。特定の実施形態において、ｎは２であり、ｊは１であり、ｋは０である。特定の実施形態において、ｎは２であり、ｊは０であり、ｋは１である。特定の実施形態において、ｎは２であり、ｊは１であり、ｋは１である。特定の実施形態において、ｎは３であり、ｊは１であり、ｋは０である。特定の実施形態において、ｎは３であり、ｊは０であり、ｋは１である。特定の実施形態において、ｎは３であり、ｊは１であり、ｋは１である。
コンジュゲート基は、本明細書において、オリゴヌクレオチドなどのオリゴマー化合物への共有結合を形成するための結合を提供する基として示される。特定の実施形態において、オリゴマー化合物の結合点は、３’末端ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物の結合点は、３’末端ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドの３’－ヒドロキシル基の３’－酸素原子である。特定の実施形態において、オリゴマー化合物の結合点は、５’末端ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、オリゴマー化合物の結合点は、５’末端ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドの５’－ヒドロキシル基の５’－酸素原子である。特定の実施形態において、オリゴマー化合物の結合点は、ヌクレオシド、修飾ヌクレオシドまたはヌクレオシド間結合上の任意の反応性部位である。
本明細書で使用されるとき、「切断可能部分」及び「切断可能な結合」とは、特定の生理学的条件下で***または切断することが可能な切断可能な結合または原子団を意味する。特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能な結合である。特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、原子団である。特定の実施形態において、切断可能部分は、細胞内部またはリソソームなどの細胞内区画内部で選択的に切断される。特定の実施形態において、切断可能部分は、ヌクレアーゼなどの内因性酵素によって選択的に分解される。特定の実施形態において、切断可能部分は、１、２、３、４または４つ以上の切断可能な結合を有する原子団を含む。
特定の実施形態において、コンジュゲート基は、切断可能部分を含む。このような特定の実施形態において、切断可能部分は、オリゴマー化合物をコンジュゲートリンカーに共有結合させる。このような特定の実施形態において、切断可能部分は、オリゴマー化合物を細胞標的化部分に共有結合させる。
特定の実施形態において、切断可能な結合は、アミド、ポリアミド、エステル、エーテル、ホスホジエステルの一方もしくは両方のエステル、リン酸エステル、カルバメート、ジスルフィドまたはペプチドのうちから選択される。特定の実施形態において、切断可能な結合は、ホスホジエステルの一方のエステルである。特定の実施形態において、切断可能な結合は、ホスホジエステルの一方もしくは両方のエステルである。特定の実施形態において、切断可能部分は、オリゴマー化合物と残りのコンジュゲート基との間のホスホジエステル結合である。特定の実施形態において、切断可能部分は、オリゴマー化合物と残りのコンジュゲート基との間に位置しているホスホジエステル結合を含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸またはホスホジエステルを含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合のいずれかによってコンジュゲートリンカーに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル結合によってコンジュゲートリンカーに結合される。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、切断可能部分を含まない。
特定の実施形態において、切断可能部分は、切断可能なヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドである。特定の実施形態において、ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドは、プリン、置換プリン、ピリミジンまたは置換ピリミジンから選択される、任意に保護された複素環式塩基を含む。特定の実施形態において、切断可能部分は、ウラシル、チミン、シトシン、４－Ｎ－ベンゾイルシトシン、５－メチルシトシン、４－Ｎ－ベンゾイル－５－メチル－シトシン、アデニン、６－Ｎ－ベンゾイルアデニン、グアニン及び２－Ｎ－イソブチリルグアニンから選択されるヌクレオシドである。
特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル結合によってオリゴマー化合物の３’末端または５’末端ヌクレオシドのいずれかに結合され、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合によって残りのコンジュゲート基に共有結合された、２’－デオキシヌクレオシドである。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル結合によってオリゴマー化合物の３’末端または５’末端ヌクレオシドのいずれかに結合され、かつホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合によって残りのコンジュゲート基に共有結合された、２’－デオキシアデノシンである。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル結合によって３’末端ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドの３’－ヒドロキシル基の３’－酸素原子に結合された２’－デオキシアデノシンである。特定の実施形態において、切断可能部分は、ホスホジエステル結合によって５’末端ヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドの５’－ヒドロキシル基の５’－酸素原子に結合された２’－デオキシアデノシンである。特定の実施形態において、切断可能部分は、オリゴマー化合物のヌクレオシドまたは修飾ヌクレオシドの２’位に結合される
。
本明細書で使用されるとき、コンジュゲート基との関係における「コンジュゲートリンカー」とは、直接的または切断可能部分を介して、細胞標的化部分をオリゴマー化合物に共有結合させる任意の原子または原子団を含む、コンジュゲート基の一部を意味する。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル（－Ｓ－）及びヒドロキシルアミノ（－Ｏ－Ｎ（Ｈ）－）から選択される基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、アルキル基、アミノ基、オキソ基、アミド基及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、アルキル基及びアミド基から選択される基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、アルキル基及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、少なくとも１つのリン結合基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、少なくとも１つのホスホジエステル基を含む。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、少なくとも１つの中性結合基を含む。
特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、オリゴマー化合物に共有結合される。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、オリゴマー化合物及び分岐基に共有結合される。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、オリゴマー化合物及び係留リガンドに共有結合される。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、切断可能部分に共有結合される。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、切断可能部分及び分岐基に共有結合される。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、切断可能部分及び係留リガンドに共有結合される。特定の実施形態において、コンジュゲートリンカーは、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、コンジュゲートリンカーを含まない。
本明細書で使用されるとき、「分岐基」とは、２つ以上のテザー－リガンド及びコンジュゲート基の残りの部分に対して共有結合を形成することができる少なくとも３つの位置を有する原子団を意味する。一般に、分岐基は、コンジュゲートリンカー及び／または切断可能部分を介して、係留リガンドをオリゴマー化合物に接続するための複数の反応部位を提供する。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、アルキル、アミノ、オキソ、アミド、ジスルフィド、ポリエチレングリコール、エーテル、チオエーテル及びヒドロキシルアミノ基から選択される基を含む、分枝状脂肪族基を含む。このような特定の実施形態において、分枝状脂肪族基は、アルキル基、アミノ基、オキソ基、アミド基及びエーテル基から選択される基を含む。このような特定の実施形態において、分枝状脂肪族基は、アルキル基、アミノ基及びエーテル基から選択される基を含む。このような特定の実施形態において、分枝状脂肪族基は、アルキル基及びエーテル基から選択される基を含む。特定の実施形態において、分岐基は、単環式環系または多環式環系を含む。
特定の実施形態において、分岐基は、コンジュゲートリンカーに共有結合される。特定の実施形態において、分岐基は、切断可能部分に共有結合される。特定の実施形態において、分岐基は、コンジュゲートリンカー及び係留リガンドのそれぞれに共有結合される。特定の実施形態において、分岐基は、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、分岐基を含まない。
特定の実施形態において、本明細書で提供されるコンジュゲート基は、少なくとも１つの係留リガンドを有する細胞標的化部分を含む。特定の実施形態において、細胞標的化部分は、分岐基に共有結合した２つの係留リガンドを含む。特定の実施形態において、細胞
標的化部分は、分岐基に共有結合した３つの係留リガンドを含む。
本明細書で使用されるとき、「テザー」とは、リガンドをコンジュゲート基の残りの部分に接続する原子団を意味する。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル基、置換アルキル基、エーテル基、チオエーテル基、ジスルフィド基、アミノ基、オキソ基、アミド基、ホスホジエステル基及びポリエチレングリコール基から選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル基、エーテル基、チオエーテル基、ジスルフィド基、アミノ基、オキソ基、アミド基及びポリエチレングリコール基から選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル基、置換アルキル基、ホスホジエステル基、エーテル基及びアミノ基、オキソ基、アミド基から選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル基、エーテル基及びアミノ基、オキソ基、アミド基から選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル基、アミノ基及びオキソ基から選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル基及びオキソ基から選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、任意の組み合わせで、アルキル及びホスホジエステルから選択される１つ以上の基を含む、線状脂肪族基である。特定の実施形態において、各テザーは、少なくとも１つのリン結合基または中性結合基を含む。
特定の実施形態において、テザーは、１つ以上の切断可能な結合を含む。特定の実施形態において、各係留リガンドは、分岐基に結合される。特定の実施形態において、各係留リガンドは、アミド基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、各係留リガンドは、エーテル基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、各係留リガンドは、リン結合基または中性結合基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、各係留リガンドは、ホスホジエステル基を介して分岐基に結合される。特定の実施形態において、各テザーは、アミド基またはエーテル基のいずれかを介してリガンドに結合される。特定の実施形態において、各テザーは、エーテル基を介してリガンドに結合される。
特定の実施形態において、各テザーは、リガンドと分岐基との間の鎖長が約８～約２０個の原子を含む。特定の実施形態において、各テザーは、リガンドと分岐基との間の鎖長が約１０～約１８個の原子を含む。特定の実施形態において、各テザーは、鎖長が約１３個の原子を含む。
特定の実施形態において、本開示は、各リガンドがテザーを介してコンジュゲート基の残りの部分に共有結合しているリガンドを提供する。特定の実施形態において、各リガンドは、標的細胞上の少なくとも１種の受容体に対する親和性を有するように選択される。特定の実施形態において、リガンドは、哺乳動物の肝臓細胞の表面上にある少なくとも１種の受容体に対する親和性を有するものが選択される。特定の実施形態において、肝アシアロ糖タンパク質受容体（ＡＳＧＰ－Ｒ）に対する親和性を有するリガンドが選択される。特定の実施形態において、各リガンドは、炭水化物である。特定の実施形態において、各リガンドは、独立して、ガラクトース、Ｎ－アセチルガラクトサミン、マンノース、グルコース、グルコサモン及びフコースから選択される。特定の実施形態において、各リガンドは、Ｎ－アセチルガラクトサミン（ＧａｌＮＡｃ）である。特定の実施形態において、標的化部分は、１～３つのリガンドを含む。特定の実施形態において、標的化部分は、３つのリガンドを含む。特定の実施形態において、標的化部分は、２つのリガンドを含む。特定の実施形態において、標的化部分は、１つのリガンドを含む。特定の実施形態にお
いて、標的化部分は、３つのＮ－アセチルガラクトサミンリガンドを含む。特定の実施形態において、標的化部分は、２つのＮ－アセチルガラクトサミンリガンドを含む。特定の実施形態において、標的化部分は、１つのＮ－アセチルガラクトサミンリガンドを含む。
特定の実施形態において、各リガンドは、炭水化物、炭水化物誘導体、修飾炭水化物、多価炭水化物クラスター、多糖、修飾多糖または多糖誘導体である。特定の実施形態において、各リガンドは、アミノ糖またはチオ糖である。例えば、アミノ糖は、当該技術分野において知られている多数の化合物、例えば、グルコサミン、シアル酸、α－Ｄ－ガラクトサミン、Ｎ－アセチルガラクトサミン、２－アセトアミド－２－デオキシ－Ｄ－ガラクトピラノース（ＧａｌＮＡｃ）、２－アミノ－３－Ｏ－［（Ｒ）－１－カルボキシエチル］－２－デオキシ－β－Ｄ－グルコピラノース（β－ムラミン酸）、２－デオキシ－２－メチルアミノ－Ｌ－グルコピラノース、４，６－ジデオキシ－４－ホルムアミド－２，３－ジ－Ｏ－メチル－Ｄ－マンノピラノース、２－デオキシ－２－スルホアミノ－Ｄ－グルコピラノース及びＮ－スルホ－Ｄ－グルコサミン及びＮ－グリコロイル－α－ノイラミン酸から選択され得る。例えば、チオ糖は、５－チオ－β－Ｄ－グルコピラノース、メチル２，３，４－トリ－Ｏ－アセチル－１－チオ－６－Ｏ－トリチル－α－Ｄ－グルコピラノシド、４－チオ－β－Ｄ－ガラクトピラノース及びエチル３，４，６，７－テトラ－Ｏ－アセチル－２－デオキシ－１，５－ジチオ－α－Ｄ－グルコ－ヘプトピラノシドからなる群から選択され得る。
特定の実施形態において、本明細書で提供されるコンジュゲート基は、炭水化物クラスターを含む。本明細書で使用されるとき、「炭水化物クラスター」とは、２つ以上の炭水化物残基がテザー基を介して分岐基に結合されたコンジュゲート基の一部を意味する（例えば、炭水化物コンジュゲートクラスターの例については、Ｍａｉｅｒ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ
Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ ｔｏ ａ Ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｃｌｕｓｔｅｒ ｆｏｒ Ｃｅｌｌｕｌａｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ，” Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００３，（１４）：１８－２９（その全体を参照により本明細書に援用する）またはＲｅｎｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ－Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ
ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ，” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００４，（４７）：５７９８－５８０８を参照されたい）。
本明細書で使用されるとき、「修飾炭水化物」とは、天然に生じる炭水化物に対して１つ以上の化学修飾を有する任意の炭水化物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「炭水化物誘導体」とは、炭水化物を出発物質または中間体として使用して合成することができる任意の化合物を意味する。
本明細書で使用されるとき、「炭水化物」とは、天然に生じる炭水化物、修飾された炭水化物、または炭水化物誘導体を意味する。
特定の実施形態において、細胞標的化部分が次式を有するコンジュゲート基が提供される。
Figure 2023093644000022
特定の実施形態において、細胞標的化部分が次式を有するコンジュゲート基が提供される。
Figure 2023093644000023
特定の実施形態において、細胞標的化部分が次式を有するコンジュゲート基が提供される。
Figure 2023093644000024
特定の実施形態において、コンジュゲート基は、次式を有する。
Figure 2023093644000025
特定の実施形態において、上式に示すコンジュゲート基に結合されたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、配列番号１９１４の核酸塩基配列を有する。
上述したコンジュゲート基、コンジュゲート化オリゴマー化合物、例えば、コンジュゲート基、テザー、コンジュゲートリンカー、分岐基、リガンド、切断可能部分及び他の修飾を含むアンチセンス化合物などのいくつかの調製について教示する、代表的な米国特許、米国特許出願公開及び国際特許出願公開には、限定するものではないが、ＵＳ５，９９４，５１７、ＵＳ６，３００，３１９、ＵＳ６，６６０，７２０、ＵＳ６，９０６，１８２、ＵＳ７，２６２，１７７、ＵＳ７，４９１，８０５、ＵＳ８，１０６，０２２、ＵＳ７，７２３，５０９、ＵＳ２００６／０１４８７４０、ＵＳ２０１１／０１２３５２０、ＷＯ２０１３／０３３２３０、ＷＯ２０１４／１７９６２０及びＷＯ２０１２／０３７２５４が含まれ、これらのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する。
上述したコンジュゲート基、コンジュゲート化オリゴマー化合物、例えば、コンジュゲート基、テザー、コンジュゲートリンカー、分岐基、リガンド、切断可能部分及び他の修飾を含むアンチセンス化合物などのいくつかの調製について教示する、代表的な公開物には、限定するものではないが、ＢＩＥＳＳＥＮ ｅｔ ａｌ．，“Ｔｈｅ Ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ ｏｆ ａ Ｔｒｉａｎｔｅｎｎａｒｙ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ａ Ｐｏｔｅｎｔ Ｃ
ｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ Ｌｏｗｅｒｉｎｇ Ａｇｅｎｔ” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１８４６－１８５２，ＢＩＥＳＳＥＮ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｃｌｕｓｔｅｒ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｗｉｔｈ Ｈｉｇｈ Ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ
Ｒｅｃｅｐｔｏｒ” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９５）３８：１５３８－１５４６，ＬＥＥ ｅｔ ａｌ．，“Ｎｅｗ ａｎｄ ｍｏｒｅ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｍｕｌｔｉｖａｌｅｎｔ ｇｌｙｃｏ－ｌｉｇａｎｄｓ ｆｏｒ ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｆ ｍａｍｍａｌｉａｎ ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ” Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（２０１１）１９：２４９４－２５００，ＲＥＮＳＥＮ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ
ｔｈｅ Ｕｐｐｅｒ Ｓｉｚｅ Ｌｉｍｉｔ ｆｏｒ Ｕｐｔａｋｅ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｇａｎｄｓ ｂｙ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｏｎ Ｈｅｐａｔｏｃｙｔｅｓ ｉｎ Ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ Ｖｉｖｏ” Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００１）２７６（４０）：３７５７７－３７５８４，ＲＥＮＳＥＮ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ｎ－Ａｃｅｔｙｌｇａｌａｃｔｏｓａｍｉｎｅ－Ｔｅｒｍｉｎａｔｅｄ Ｇｌｙｃｏｌｉｐｉｄｓ ｆｏｒ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（２００４）４７：５７９８－５８０８，ＳＬＩＥＤＲＥＧＴ ｅｔ ａｌ．，“Ｄｅｓｉｇｎ ａｎｄ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ Ｎｏｖｅｌ Ａｍｐｈｉｐｈｉｌｉｃ Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ Ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｆｏｒ Ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ ｏｆ Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ ｔｏ ｔｈｅ Ｈｅｐａｔｉｃ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ” Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．（１９９９）４２：６０９－６１８及びＶａｌｅｎｔｉｊｎ ｅｔ ａｌ．，“Ｓｏｌｉｄ－ｐｈａｓｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｌｙｓｉｎｅ－ｂａｓｅｄ ｃｌｕｓｔｅｒ ｇａｌａｃｔｏｓｉｄｅｓ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ ａｆｆｉｎｉｔｙ ｆｏｒ ｔｈｅ Ａｓｉａｌｏｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ Ｒｅｃｅｐｔｏｒ” Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ，１９９７，５３（２），７５９－７７０が含まれ、これらのそれぞれの全体を参照により本明細書に援用する。
特定の実施形態において、コンジュゲート基には、限定するものではないが、インターカレーター、レポーター分子、ポリアミン、ポリアミド、ポリエチレングリコール、チオエーテル、ポリエーテル、コレステロール、チオコレステロール、コール酸部分、葉酸、脂質、リン脂質、ビオチン、フェナジン、フェナントリジン、アントラキノン、アダマンタン、アクリジン、フルオレセイン、ローダミン、クマリン及び色素が含まれる。特定のコンジュゲート基については、これまでに記載されており、例えば、コレステロール部分（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９８９，８６，６５５３－６５５６）、コール酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９４，４，１０５３－１０６０）、チオエーテル、例えば、ヘキシル－Ｓ－トリチルチオール（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ
ａｌ．，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，１９９２，６６０，３０６－３０９；Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ．，１９９３，３，２７６５－２７７０）、チオコレステロール（Ｏｂｅｒｈａｕｓｅｒ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９２，２０，５３３－５３８）、脂肪族鎖、例えば、ドデカンジオール残基もしくはウンデシル残基（Ｓａｉｓｏｎ－Ｂｅｈｍｏａｒａｓ ｅｔ ａｌ．，ＥＭＢＯ Ｊ．，１９９１，１０，１１１１－１１１８；Ｋａｂａｎｏｖ ｅｔ ａｌ．，ＦＥＢＳ Ｌｅｔｔ．，１９９０，２５９，３２７－３３０；Ｓｖｉｎａｒｃｈｕｋ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ，１９９３，７５，４９－５４）、リン脂質、例えば、ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロールもしくはトリエチル－アンモニウム １，２－ジ－Ｏ－ヘキサデシル－ｒａｃ－グリセロ－３－Ｈ－ホスホネ－
ト（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１－３６５４；Ｓｈｅａ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．，１９９０，１８，３７７７－３７８３）、ポリアミンもしくはポリエチレングリコール鎖（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ＆Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ，１９９５，１４，９６９－９７３）またはアダマンタン酢酸（Ｍａｎｏｈａｒａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，１９９５，３６，３６５１－３６５４）、パルミチル部分（Ｍｉｓｈｒａ ｅｔ ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１９９５，１２６４，２２９－２３７）、オクタデシルアミンもしくはヘキシルアミノ－カルボニル－オキシコレステロール部分（Ｃｒｏｏｋｅ ｅｔ ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，１９９６，２７７，９２３－９３７）がある。
特定の実施形態において、コンジュゲート基は、有効な薬剤物質、例えば、アスピリン、ワルファリン、フェニルブタゾン、イブプロフェン、スプロフェン、フェンブフェン、ケトプロフェン、（Ｓ）－（＋）－プラノプロフェン、カルプロフェン、ダンシルサルコシン、２，３，５－トリヨード安息香酸、フルフェナム酸、フォリン酸、ベンゾチアジアジド、クロロチアジド、ジアゼピン、インドメチシン、バルビツール酸系薬、セファロスポリン、サルファ薬、抗糖尿病薬、抗菌性物質または抗生物質を含む。
コンジュゲートリンカーのいくつかの非限定的な例には、ピロリジン、８－アミノ－３，６－ジオキサオクタン酸（ＡＤＯ）、４－（Ｎ－マレイミドメチル）シクロヘキサン－１－カルボン酸スクシンイミジル（ＳＭＣＣ）及び６－アミノヘキサン酸（ＡＨＥＸまたはＡＨＡ）が挙げられる。他のコンジュゲートリンカーには、限定するものではないが、置換Ｃ１～Ｃ１０アルキル、置換もしくは無置換Ｃ２～Ｃ１０アルケニル、または置換もしくは無置換Ｃ２～Ｃ１０アルキニルが含まれ、ここで、好ましい置換基の非限定的なリストには、ヒドロキシル、アミノ、アルコキシ、カルボキシ、ベンジル、フェニル、ニトロ、チオール、チオアルコキシ、ハロゲン、アルキル、アリール、アルケニル及びアルキニルが含まれる。
コンジュゲート基は、オリゴヌクレオチドの一末端もしくは両末端に結合され得（末端コンジュゲート基）、かつ／または任意の内側の位置に結合され得る。
特定の実施形態において、コンジュゲート基は、オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドの３’末端にある。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、３’末端近傍にある。特定の実施形態において、コンジュゲートは、オリゴマー化合物の３’末端であるが、１つ以上の末端基ヌクレオシドの前に結合される。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、末端基内に位置する。
特定の実施形態において、コンジュゲート基は、オリゴマー化合物のオリゴヌクレオチドの５’末端にある。特定の実施形態において、コンジュゲート基は、５’末端近傍にある。
特定の実施形態において、本明細書に記載されるＡＧＴを標的にする修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート基を更に含む。特定の実施形態において、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート基は、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３である。特定の実施形態において、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートは、次式を有する。
Figure 2023093644000026
特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
細胞培養及びアンチセンス化合物処理
アンチセンス化合物のＡＧＴ核酸のレベル、活性または発現に対する作用は、様々な細胞種においてｉｎ ｖｉｔｒｏで試験することができる。このような分析に使用される細胞種は、供給業者（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｍａｎａｓｓａｓ，ＶＡ；Ｚｅｎ－Ｂｉｏ，Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｔｒｉａｎｇｌｅ Ｐａｒｋ，ＮＣ；Ｃｌｏｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｗａｌｋｅｒｓｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手可能であり、供給業者の説明書に従って市販の試薬（例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を使用して細胞を培養する。例示的な細胞種には、ＨｅｐＧ２細胞、Ｈｅｐ３Ｂ細胞、Ｈｕｈ７（肝細胞癌）細胞、初代肝細胞、Ａ５４９細胞、ＧＭ０４２８１線維芽細胞及びＬＬＣ－ＭＫ２細胞が含まれるが、これらに限定されない。
アンチセンスオリゴヌクレオチドのｉｎ ｖｉｔｒｏ試験
ここでは、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理するための方法について記載する。この方法は、他のアンチセンス化合物による処理のために適宜変更され得る。
一般に、培養中の細胞が約６０～８０％コンフルエントに達したときに、細胞をアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために一般に使用される試薬の１つには、カチオン性脂質トランスフェクション試薬ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））が含まれる。ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（登録商標）１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））中でアンチセンスオリゴヌクレオチドをＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）と混合し、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチド最終濃度及び典型的に１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドにつき２～１２ｕｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）濃度を得る。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために使用される別の試薬には、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））が含まれる。ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））中でアンチセンスオリゴヌクレオチドをＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）と混合し、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチド最終濃度及び典型的に１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドにつき２
～１２ｕｇ／ｍＬの範囲であるＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）濃度を得る。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために使用される別の試薬には、Ｃｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））が含まれる。ＯＰＴＩ－ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））中でアンチセンスオリゴヌクレオチドをＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）と混合し、所望のアンチセンスオリゴヌクレオチド最終濃度及び典型的に１００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドにつき２～１２ｕｇ／ｍＬの範囲であるＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎ（登録商標）濃度を得る。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために使用される別の試薬には、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））が含まれる。Ｏｐｔｉ－ＭＥＭ（登録商標）１低血清培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））中でアンチセンスオリゴヌクレオチドをＯｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）と混合し、Ｏｌｉｇｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）のオリゴヌクレオチドに対する比が１００ｎＭにつき約０．２～０．８μＬとなる、所望のオリゴヌクレオチド濃度を得る。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために使用される別の試薬には、ＦｕＧＥＮＥ６（Ｒｏｃｈｅ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ Ｃｏｒｐ．（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ，ＩＮ））が含まれる。１ｍＬの無血清ＲＰＭＩ中でアンチセンスオリゴマー化合物をＦｕＧＥＮＥ６と混合し、ＦｕＧＥＮＥ６のオリゴマー化合物に対する比が１００ｎＭにつき１～４μＬのＦｕＧＥＮＥ６となる、所望のオリゴヌクレオチド濃度を得る。
アンチセンスオリゴヌクレオチドを培養細胞中に導入するために使用される別の技法には、エレクトロポレーションが含まれる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．２００１）。
細胞を常法によってアンチセンスオリゴヌクレオチドで処理する。典型的には、アンチセンスオリゴヌクレオチド処理から１６～２４時間後に細胞を回収し、この時点で標的核酸のＲＮＡまたはタンパク質レベルを当該技術分野において周知の方法及び本明細書に記載される方法によって測定する（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．２００１）。一般に、処理を複数の反復試験で実施する場合、データは、反復処理の平均として表す。
使用されるアンチセンスオリゴヌクレオチドの濃度は、細胞株ごとに異なる。特定の細胞株に対するアンチセンスオリゴヌクレオチドの至適濃度を決定する方法は、当該技術分野においてよく知られている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ．Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ．Ｔｈｉｒｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ．Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ．２００１）。
ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ２０００（登録商標）、ＬｉｐｏｆｅｃｔｉｎまたはＣｙｔｏｆｅｃｔｉｎを用いてトランスフェクトした場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、典型的に、１ｎＭ～３００ｎＭの範囲の濃度で使用される。エレクトロポレーションを用いてトランスフェクトした場合、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、６２５～２０，０００ｎＭの範囲のより高い濃度で使用される。
ＲＮＡ単離
ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに関して実施することができる。ＲＮＡ単離法は、当該技術分野においてよく知られている（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄ．，２００１）。ＲＮＡは、当該技術分野においてよく知られている方法を使用して、例えば、ＴＲＩＺＯＬ（登録商標）試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を使用して、製造元の推奨プロトコルに従って、調製される。
標的レベルまたは発現の阻害に関する分析
ＡＧＴ核酸のレベルまたは発現の阻害は、当該技術分野において周知の様々な方法でアッセイすることができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄ．，２００１）。例えば、標的核酸レベルは、例えば、ノーザンブロット分析、競合ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）または定量リアルタイムＰＣＲによって定量することができる。ＲＮＡ分析は、全細胞ＲＮＡまたはポリ（Ａ）＋ｍＲＮＡに関して実施することができる。ＲＮＡ単離法は、当該技術分野においてよく知られている。ノーザンブロット分析も当該技術分野において常法である。定量リアルタイムＰＣＲは、市販のＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００または７９００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ－Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から入手可能）を使用し、製造元の説明書に従って使用することにより、簡便に実施することができる。
標的ＲＮＡレベルの定量リアルタイムＰＣＲ分析
標的ＲＮＡレベルの定量は、定量リアルタイムＰＣＲにより、ＡＢＩ ＰＲＩＳＭ（登録商標）７６００、７７００または７９００ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ Ｓｙｓｔｅｍ（ＰＥ－Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ））を製造元の説明書に従って使用して、実施することができる。定量リアルタイムＰＣＲ法は、当該技術分野においてよく知られている。
リアルタイムＰＣＲの前に、単離したＲＮＡを逆転写酵素（ＲＴ）反応に供して、相補的ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）を生成し、次いで、これをリアルタイムＰＣＲ増幅の基質として使用する。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲ反応は、同じサンプルウェルで順次実施される。ＲＴ及びリアルタイムＰＣＲの試薬は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）から得られる。ＲＴ、リアルタイムＰＣＲの反応は、当業者によく知られている方法によって実施する。
リアルタイムＰＣＲによって得られた遺伝子（またはＲＮＡ）標的の量は、シクロフィリンＡなどの発現が一定である遺伝子の発現レベルを使用して正規化するか、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ．（Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ））を使用して全ＲＮＡを定量することによって正規化する。シクロフィリンＡ発現は、リアルタイムＰＣＲにより、標的と同時に、マルチプレックスに、または別個に実施することによって定量する。全ＲＮＡは、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）ＲＮＡ定量試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｉｎｃ（Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ））を使用して定量する。ＲＩＢＯＧＲ
ＥＥＮ（登録商標）によるＲＮＡ定量法は、Ｊｏｎｅｓ，Ｌ．Ｊ．ら（Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９８，２６５，３６８－３７４）に教示されている。ＣＹＴＯＦＬＵＯＲ（登録商標）４０００機器（ＰＥ Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用してＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）蛍光を測定する。
プローブ及びプライマーは、ＡＧＴ核酸にハイブリダイズするように設計する。リアルタイムＰＣＲのプローブ及びプライマーの設計法は、当該技術分野においてよく知られており、ＰＲＩＭＥＲ ＥＸＰＲＥＳＳ（登録商標）ソフトウェア（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ（Ｆｏｓｔｅｒ Ｃｉｔｙ，ＣＡ））などのソフトウェアの使用を含み得る。
タンパク質レベルの分析
ＡＧＴ核酸のアンチセンス阻害は、ＡＧＴタンパク質レベルを測定することによって評価することができる。ＡＧＴのタンパク質レベルは、当該技術分野においてよく知られている様々な方法、例えば、免疫沈降法、ウェスタンブロット分析（免疫ブロット法）、酵素結合免疫吸着法（ＥＬＩＳＡ）、定量タンパク質アッセイ、タンパク質活性アッセイ（例えば、カスパーゼ活性アッセイ）、免疫組織化学法、免疫細胞化学法または蛍光標識細胞分取法（ＦＡＣＳ）で評価または定量することができる（Ｓａｍｂｒｏｏｋ ａｎｄ Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ Ｅｄ．，２００１）。標的に対する抗体は、種々の市販供給源から特定及び入手することもできるし、当該技術分野においてよく知られている従来のモノクローナル抗体またはポリクローナル抗体作製法によって調製することもできる。
アンチセンス化合物のｉｎ ｖｉｖｏ試験
アンチセンス化合物、例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＡＧＴの発現を阻害する能力及び体内における高血圧の軽減などの表現型に変化をもたらす能力を評価するために動物で試験される。試験は、正常な動物または実験疾患モデルで実施することができる。動物に投与するために、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、滅菌注射用水またはリン酸緩衝生理食塩水などの薬学的に許容される希釈剤で製剤化される。投与には、腹腔内、静脈内及び皮下などの非経口投与経路が含まれる。アンチセンスオリゴヌクレオチドの用量及び投与頻度の算出は、投与経路及び動物の体重などの因子によって決まる。一実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置期間後、肝臓組織からＲＮＡを単離し、ＡＧＴ核酸発現における変化を測定する。ＡＧＴタンパク質レベルの変化は、直接測定することができる。ＡＧＴ発現の変化は、ＲＡＡＳ経路の阻害レベルを決定することによって測定することもできる。ＡＧＴ阻害のレベルを決定するためのマーカーとして、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態を使用することができる。
特定の適応
本発明の特定の実施形態は、化合物、組成物、ならびに当該化合物及び組成物を使用してＡＧＴレベルを減少させる方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、化合物、組成物、ならびに当該化合物または組成物の治療上有効な量を対象に投与することを含む、当該化合物及び組成物を使用して対象を治療する方法を提供する。特定の実施形態において、対象は、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態を有するか、そのリスクがある。特定の実施形態において、化合物または組成物は、アンチセンス化合物を含む。
特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物の治療上有効な量の投与は、対象の血清または組織中ＡＧＴレベルをモニターして、アンチセンス化合物に対する対象の応答を決定することを伴う。アンチセンス化合物の投与に対する対象の応答を使用して、医師は、治療介入の量及び継続期間を決定する。
特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物の投与は、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９％もしくは１００％またはこれらの値のうちのいずれか２つによって定義される範囲のＡＧＴ発現の減少をもたらす。特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物の投与は、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９％もしくは１００％またはこれらの値のうちのいずれか２つによって定義される範囲のＲＡＡＳ経路の阻害をもたらす。特定の実施形態において、ＡＧＴ核酸に対して標的化されたアンチセンス化合物の投与は、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害、病態、症状またはマーカー（例えば、高血圧または器官障害）の変化をもたらす。特定の実施形態において、ＡＧＴアンチセンス化合物の投与は、少なくとも１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９９％もしくは１００％またはこれらの値のうちのいずれか２つによって定義される範囲の分、ＲＡＡＳ関連疾患、障害、病態、症状またはマーカーを増大または低減させる。
特定の実施形態において、ＡＧＴに対して標的化されたアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ＡＧＴレベルを減少させるための薬剤の調製に使用される。特定の実施形態において、ＡＧＴに対して標的化されたアンチセンス化合物を含む医薬組成物は、ＲＡＡＳ関連疾患、障害もしくは病態を患う患者、またはそれらに罹りやすい患者を治療するための薬剤の調製に使用される。
特定の実施形態において、対象におけるＡＧＴレベルの減少は、疾患、病態または障害の治療、改善、予防、進行の遅延または発症の遅延をもたらす。特定の実施形態において、疾患、病態または障害は、寿命短縮、高血圧、高血圧緊急症（すなわち、悪性高血圧）、腎疾患（例えば、慢性腎疾患、多発性嚢胞腎疾患）、子癇前症、マルファン症候群、脳卒中、心疾患（例えば、心筋梗塞、心不全、鬱血性心不全、心臓弁膜症）、血管の動脈瘤、腹部動脈瘤、末梢動脈疾患、器官障害、肺動脈高血圧、肥満、メタボリックシンドローム、非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）、非アルコール性脂肪性肝疾患（ＮＡＦＬＤ）ならびにＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状である。特定の実施形態において、高血圧は、非治療抵抗性高血圧または治療抵抗性高血圧である。特定の実施形態において、血管の動脈瘤は、大動脈瘤である。特定の実施形態において、器官障害は、心筋肥大または器官もしくは組織の線維症である。特定の実施形態において、器官は、心臓、肝臓または腎臓であり、組織は、心臓、肝臓または腎臓に由来する。
特定の実施形態において、対象におけるＡＧＴレベルの減少は、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態の治療、改善、予防、進行の遅延または発症の遅延をもたらす。特定の実施形態において、ＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態は、寿命短縮、高血圧、高血圧緊急症（すなわち、悪性高血圧）、腎疾患（例えば、慢性腎疾患、多発性嚢胞腎疾患）、子癇前症、マルファン症候群、脳卒中、心疾患（例えば、心筋梗塞、心不全、鬱血性心不全、心臓弁膜症）、血管の動脈瘤、腹部動脈瘤、末梢動脈疾患、器官障害、肺動脈高血圧、肥満、メタボリックシンドローム、ＮＡＳＨ、ＮＡＦＬＤならびに他のＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状である。特定の実施形態において、高血圧は、非治療抵抗性高血圧または治療抵抗性高血圧である。特定の実施形態において、血管の動脈瘤は、大動脈瘤である。特定の実施形態において、器官障害は、心筋肥大または器官もしくは組織の線維症である。特定の実施形態において、器官は、心臓、肝臓または腎臓であり、組織は、心臓、肝臓または腎臓に由来する。
特定の実施形態において、疾患、障害及び／または病態の症状またはマーカーを調節するための化合物、組成物及び方法が提供される。特定の実施形態において、マーカーは、
寿命短縮、高血圧、高血圧緊急症（すなわち、悪性高血圧）、腎疾患（例えば、慢性腎疾患、多発性嚢胞腎疾患）、子癇前症、マルファン症候群、脳卒中、心疾患（例えば、心筋梗塞、心不全、鬱血性心不全、心臓弁膜症）、血管の動脈瘤、腹部動脈瘤、末梢動脈疾患、器官障害ならびに他のＲＡＡＳ関連疾患、障害及び／もしくは病態またはその症状のうちの１つ以上から選択することができる。
特定の併用療法
特定の実施形態において、本明細書で提供されるアンチセンス化合物を含む第１の剤は、１つ以上の第２の剤と共投与される。特定の実施形態において、アンチセンス化合物は、アンチセンスオリゴヌクレオチドである。特定の実施形態において、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、修飾オリゴヌクレオチドである。
特定の実施形態において、かかる第２の剤は、本明細書に記載される第１の剤と同じＲＡＡＳ経路関連疾患、障害または病態を治療するように設計される。特定の実施形態において、かかる第２の剤は、本明細書に記載される第１の剤と異なる疾患、障害または病態を治療するように設計される。特定の実施形態において、かかる第２の剤は、本明細書に記載される１つ以上の医薬組成物の好ましくない副作用を治療するように設計される。特定の実施形態において、かかる第１の剤は、第２の剤の好ましくない副作用を治療するように設計される。特定の実施形態において、第２の剤は、第１の剤の好ましくない副作用を治療するために、第１の剤と共投与される。特定の実施形態において、第２の剤は、第１の剤と共投与されて、併用または相加効果をもたらす。特定の実施形態において、第２の剤は、第１の剤と共投与されて、相乗効果をもたらす。
特定の実施形態において、第１の剤と第２の剤の共投与は、これらの剤を独立した療法として投与する場合にその治療効果または予防効果を達成するのに必要な用量よりも低い用量での使用を可能にする。特定の実施形態において、共投与される第２の剤の用量は、第２の剤が単独で投与される場合に投与される用量と同じである。特定の実施形態において、共投与される第２の剤の用量は、第２の剤が単独で投与される場合に投与される用量よりも多い。
特定の実施形態において、第１の剤及び１つ以上の第２の剤は、同時に投与される。特定の実施形態において、第１の剤及び１つ以上の第２の剤は、異なる時間に投与される。特定の実施形態において、第１の剤及び１つ以上の第２の剤は、単一の医薬製剤中に一緒に調製される。特定の実施形態において、第１の剤及び１つ以上の第２の剤は、個別に調製される。
特定の実施形態において、第２の剤には、特定の高血圧を軽減させるための処置、食生活の改善、生活習慣の改善、抗線維化薬及び抗高血圧薬、例えば、ＲＡＡＳ阻害薬、エンドセリン受容体拮抗薬、ネプリライシン阻害薬、利尿薬、カルシウムチャネル拮抗薬、交感神経受容体遮断薬、交感神経作動薬及び血管拡張薬が含まれるが、これらに限定されない。
高血圧を軽減させることができる処置の例には、腎デナベーション及び圧受容器活性化療法が挙げられるが、これらに限定されない。
ＲＡＳまたはＲＡＡＳ阻害薬の例には、ＡＣＥ阻害薬（例えば、カプトプリル、エナラプリル、ホシノプリル、リシノプリル、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、トランドラプリル及びベナゼプリル）、アンジオテンシンＩＩ受容体拮抗薬（例えば、カンデサルタン、エプロサルタン、イルベサルタン、ロサルタン、オルメサルタン、テルミサルタン及びバルサルタン）、レニン阻害薬（例えば、アリスキレン）、アルドステロン受容
体拮抗薬（例えば、エプレレノン、スピロノラクトン及びフィネレノン）が挙げられるが、これらに限定されない。
エンドセリン受容体拮抗薬の例には、アンブリセンタン、シタキセンタン、アトラセンタン、ＢＱ－１２３、ジボテンタン、ボセンタン、マシテンタン及びテゾセンタンが挙げられる。
ネプリライシン阻害薬の例にはサクビトリル及びオマパトリラトが挙げられる。
利尿薬の例には、ループ利尿薬（例えば、ブメタニド、エタクリン酸、フロセミド、トラセミド）、チアジド利尿薬（例えば、エピチジド、ヒドロクロロチアジド、クロロチアジド及びベンドロフルメチアジド）、チアジド様利尿薬（例えば、インダパミド、クロルタリドン及びメトラゾン）及びカリウム保持性利尿薬（例えば、アミロライド、トリアムテレン及びスピロノラクトン）が挙げられる。
カルシウムチャネル拮抗薬の例には、ジヒドロピリジン（例えば、アムロジピン、フェロジピン、イスラジピン、レルカニジピン、ニカルジピン、ニフェジピン、ニモジピン及びニトレンジピン）及び非ジヒドロピリジン（例えば、ジルチアゼム及びベラパミル）が挙げられる。
交感神経受容体遮断薬の例には、ベータ遮断薬（例えば、アテノロール、メトプロロール、ナドロール、オクスプレノロール、ピンドロール、プロプラノロール及びチモロール）、アルファ遮断薬（例えば、ドキサゾシン、フェントラミン、インドラミン、フェノキシベンザミン、プラゾシン、テラゾシン及びトラゾリン）及びアルファ＋ベータ混合遮断薬（例えば、ブシンドロール、カルベジロール及びラベタロール）が挙げられる。
血管拡張薬の例には、ニトロプルシドナトリウム及びヒドララジンならびにその誘導体が挙げられる。交感神経作動薬の例には、α－２作動薬（例えば、クロニジン、グアナベンズ、メチルドパ及びモキソニジン）が挙げられる。抗高血圧薬の更なる例には、グアネチジン、レセルピンなどが挙げられる。
第２の剤は、高血圧、器官障害などの疾患、障害及び／または病態を軽減するために、本明細書に記載される治療用化合物と組み合わせて使用することができる。
特定の化合物
ヒトの治療法としての使用を改善する有益な特性を有する好ましいアンチセンス化合物が本明細書の実施例において示される。簡潔性のため、好ましいアンチセンス化合物の選択に寄与する試験のみ記載する。参照を容易にするために、実施例の限定的な要約を以下に提供する。
ヒトＡＧＴを標的にするＭＯＥ含有及び／またはｃＥｔ含有ギャップマーモチーフを含むアンチセンス化合物を２０００以上設計した。実施例１は、ＨｅｐＧ２細胞で試験した２０００以上の強力なアンチセンス化合物のヒトＡＧＴ ｍＲＮＡに対する効果に関する代表的な単回投与阻害データを示す。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ単回投与で試験した２０００以上のアンチセンス化合物のうち、用量依存的阻害試験で試験するために、１６０を超えるアンチセンス化合物を選択して、ＨｅｐＧ２細胞における５０％阻害濃度（ＩＣ５０）を決定した（実施例２）。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ用量反応試験に基づいて、実施例３の例示的試験に記載されるように
、ヒトＡＧＴトランスジェニック（ｈｕＡＧＴ ｔｇ）マウスにおける単回投与での効力及び忍容性の試験について、５０以上のアンチセンス化合物を選択した。５０以上のアンチセンス化合物のうち、ｈｕＡＧＴ ｔｇマウスにおける用量反応及び忍容性試験のために、約１４のアンチセンス化合物を更に選択した（実施例４）。
ｈｕＡＧＴマウスにおいて著しい効力及び忍容性を呈した９つのアンチセンス化合物を、更なる試験：粘度アッセイ（実施例５）；アンチセンス化合物の忍容性を評価するためのＣＤ１マウス（実施例６）及びスプラーグドーリーラット（実施例７）での試験；サルＡＧＴを阻害する異種間効力を試験するためのサル肝細胞での試験（実施例８）；ならびに効力及び忍容性を評価するためのカニクイザルでの試験（実施例９）について選択した。実施例９に記載の試験におけるアンチセンス化合物は、カニクイザルで試験したが、カニクイザルＡＧＴ配列がアンチセンス化合物の配列との比較に利用できなかったため、アンチセンス化合物の配列は、近縁のアカゲザルの配列と比較した（実施例８）。
９つのアンチセンス化合物の広範な特性評価に基づいて、アンチセンス化合物ＩＳＩＳ６５４４７２（親化合物）の配列を更なる試験に選択した（実施例１０）。親化合物ＩＳＩＳ６５４４７２の配列を有するが、異なる化学修飾及びＧａｌＮＡｃコンジュゲートを有する、６つのアンチセンス化合物を設計した。新しく設計した６つの化合物をＣＤ１マウス（実施例１０）及びスプラーグドーリーラット（実施例１１）に投与して、これらの動物モデルにおける忍容性を試験した。６つのＧａｌＮＡｃコンジュゲート化アンチセンス化合物のうち、化合物ＩＳＩＳ７５７４５６を選択してｈｕＡＧＴマウスで試験し、親アンチセンス化合物ＩＳＩＳ６５４４７２と比較した。ＩＳＩＳ７５７４５６は、非コンジュゲート化化合物ＩＳＩＳ６５４４７２と比較して、８倍の効力改善を示した。
したがって、治療薬としての使用に有益な任意の特徴を１つ以上有するアンチセンス化合物が本明細書で提供される。特定の実施形態において、配列番号１～６のいずれかから選択されるヌクレオチドの領域に対して標的化され、または当該領域に特異的にハイブリダイズすることができる本明細書に記載の修飾オリゴヌクレオチドを含む、アンチセンス化合物が本明細書で提供される。
特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、ＡＧＴ発現を阻害する効力があることから、有効である。特定の実施形態において、化合物または組成物は、ＡＧＴを少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％、少なくとも７５％、少なくとも８０％、少なくとも８５％、少なくとも９０％または少なくとも９５％阻害する。
特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、ヒト細胞、例えば、Ｈｅｐ３Ｂ細胞株で試験したとき、ｉｎ ｖｉｔｒｏでのＩＣ５０が２０μＭ未満、１０μＭ未満、８μＭ未満、５μＭ未満、２μＭ未満、１μＭ未満、０．９μＭ未満、０．８μＭ未満、０．７μＭ未満、０．６μＭ未満または０．５μＭ未満であることから、有効的である（実施例２に記載するとおり）。
特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、実施例４に示すように、ｉｎ ｖｉｖｏでの５０％有効量（ＥＤ５０）が≦１０ｍｐｋ／週、≦９ｍｐｋ／週、≦８ｍｐｋ／週、≦７ｍｐｋ／週、≦６ｍｐｋ／週、≦５ｍｐｋ／週、≦４ｍｐｋ／週、≦３ｍｐｋ／週、≦２ｍｐｋ／週または≦１ｍｐｋ／週であることから、有効的である。特定の実施形態において、好ましいアンチセンス化合物、例えば、アンチセンス化合物ＩＳＩＳ７５７４５６は、実施例１２に示すように、≦３ｍｐｋ／週のＥＤ５０を有する。
特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、実施例５に記載されるように、４０ｃＰ未満、３５ｃＰ未満、３０ｃＰ未満、２５ｃＰ未満、２０ｃＰ未満、１５ｃＰ未満または１２ｃＰ未満の粘度を有することから、有効である。４０ｃＰを超える粘度を有するオリゴヌクレオチドは、至適粘度とは言えない。
特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、実施例に記載のｉｎ ｖｉｖｏ忍容性測定によって実証されるように、忍容性が高い。特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、生理食塩水で処置された動物に対して、３倍、２倍または１．５倍以下のＡＬＴ値及び／またはＡＳＴ値の増加を有することによって実証されるように、忍容性が高い。
特定の実施形態において、本明細書に記載される特定のアンチセンス化合物は、トランスジェニックマウスにおける５０％より大きい阻害効力、≦５ｍｐｋ／週のＥＤ５０、４０ｃＰ未満の粘度、ならびにＡＬＴ及び／またはＡＳＴの３倍以下の増加のうちの１つ以上を有することから、有効である。
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ７５７４５６（配列番号１９１４）が好ましい。この化合物は、ＡＧＴトランスジェニックマウスにおいて強力な阻害物質であり、ＣＤ－１マウスにおいて非常に忍容性のあるアンチセンス化合物であることが判明した。マウスでは、生理食塩水で処置された動物に対して、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴレベルが３倍以下の増加であった。ｈｕＡＧＴトランスジェニックマウスにおけるＥＤ５０は、≦３ｍｐｋ／週であった。
非限定的な開示と参照による援用
本明細書に記載される特定の化合物、組成物及び方法について、特定の実施形態に従って具体的に説明してきたが、以下の実施例は、本明細書に記載の化合物を例示するためにのみ提供するものであり、同化合物を限定するものではない。本出願で言及される参照文献のそれぞれは、その全体が参照により本明細書に援用される。
実施例１：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトアンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）のアンチセンス阻害
ヒトＡＧＴ核酸を標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドを２０００以上設計し、そのｉｎ ｖｉｔｒｏでのＡＧＴ ｍＲＮＡに対する効果について、類似の培養条件を有する一連の実験で試験した。代表的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの結果を以下の表に示す。
以下の表中の新しく設計されたキメラアンチセンスオリゴヌクレオチドは、ＭＯＥ及び／またはｃＥｔ含有ギャップマーとして設計した。ＭＯＥ含有オリゴヌクレオチドは、２’－デオキシヌクレオシドを含む中央ギャップセグメントを有し、中央ギャップセグメントには、５’方向及び３’方向にウイングセグメントが配されている。５’ウイングセグメント中の少なくとも１つのヌクレオシド及び／または３’ウイングセグメント中の１つのヌクレオシドが２’－ＭＯＥ糖修飾を有する。ｃＥｔ含有オリゴヌクレオチドは、２’－デオキシヌクレオシドを含む中央ギャップセグメントを有し、中央ギャップセグメントには、５’方向及び３’方向にウイングセグメントが配されている。５’ウイングセグメント中の少なくとも１つのヌクレオシド及び／または３’ウイングセグメント中の１つのヌクレオシドがｃＥｔ糖修飾を有する。いくつかの場合、ＭＯＥとｃＥｔの両方を含有するようにオリゴヌクレオチドを設計した。ＭＯＥ及びｃＥｔ含有オリゴヌクレオチドは、２’－デオキシヌクレオシドを含む中央ギャップセグメントを有し、中央ギャップセグメ
ントには、５’方向及び３’方向にウイングセグメントが配されている。５’ウイングセグメント中の少なくとも１つのヌクレオシド及び／または３’ウイングセグメント中の１つのヌクレオシドがＭＯＥ及び／またはｃＥｔ糖修飾を有する。
「化学的構造」の欄は、各オリゴヌクレオチドの糖修飾について記載する。「ｋ」は、ｃＥｔ糖修飾を示し、「ｄ」は、デオキシリボースを示し、「ｅ」は、ＭＯＥ修飾を示す。各ギャップマー中のヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート（Ｐ＝Ｓ）結合である。各ギャップマー中の全てのシトシン残基は、５－メチルシトシンである。
「開始部位」は、ギャップマーが標的にするヒト遺伝子配列中の最も５’側のヌクレオシドを示す。「終止部位」は、ギャップマーが標的にするヒト遺伝子配列中の最も３’側のヌクレオシドを示す。以下の表に示される各ギャップマーは、本明細書において配列番号１として示されるヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＭ＿００００２９．３）及び／または本明細書において配列番号２として示されるヒトＡＧＴゲノム配列（ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＴ＿１６７１８６．１からヌクレオチド２４３５４０００～２４３７０１００を切り出したもの）のいずれかを標的にする。
表１は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して４５００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１（本明細書において配列番号８として示されるフォワード配列ＣＣＣＴＧＡＴＧＧＧＡＧＣＣＡＧＴＧＴ；本明細書において配列番号９として示されるリバース配列ＡＧＣＡＧＧＧＡＧＡＡＧＣＣＣＴＴＣＡ；及び本明細書において配列番号１０として示されるプローブ配列ＣＣＣＴＧＧＣＴＴＴＣＡＡＣＡＣＣＴＡＣＧＴＣＣＡＣＴＸ（配列中、Ｘは蛍光標識である）を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表２は、更なるギャップマーオリゴヌクレオチドによるＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害率（％）を示す。約２０，０００細胞／ウェルの密度で培養したＨｅｐＧ２細胞に、エレクトロポレーションを使用して、４，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表３は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して５００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表４は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して１０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表５は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して１０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表６は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して１０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ４０３９（本明細書において配列番号１１として示されるフォワード配列ＧＧＡＣＡＡＧＧＴＧＧＡＧＧＧＴＣＴＣＡ；本明細書において配列番号１２として示されるリバース配列ＡＧＡＴＣＣＴＴＧＣＡＧＣＡＣＣＡＧＴＴＧ；及び本明細書において配列番号１３として示されるプローブ配列ＡＴＧＡＡＧＡＡＡＣＴＡＴＣＴＣＣＣＣＧＧＡＣＣＡＴＣＣＡＸ（配列中、Ｘは蛍光標識である）を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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Figure 2023093644000069
Figure 2023093644000070
表７は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して１０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ４０３９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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Figure 2023093644000072
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表８は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して４０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表９は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して４０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ４０３９を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表１０は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して４０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表１１は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して５００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整
した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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表１２は、アンチセンスオリゴヌクレオチドによるＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害率（％）を示す。約２０，０００細胞／ウェルの密度で培養したＨｅｐＧ２細胞に、エレクトロポレーションを使用して、３，０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
Figure 2023093644000106
Figure 2023093644000107
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表１３は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して４０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
Figure 2023093644000111
Figure 2023093644000112
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表１４は、２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して４０００ｎＭのアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトしたＨｅｐＧ２細胞中でのＡＧＴ ｍＲＮＡ阻害を示す。約２４時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
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実施例２：ＨｅｐＧ２細胞におけるヒトアンジオテンシノーゲン（ＡＧＴ）の用量依存性アンチセンス阻害
設計し、実施例１に記載のｉｎ ｖｉｔｒｏ単回投与アッセイで試験した２０００以上のアンチセンスオリゴヌクレオチドのうち、ＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい阻害を呈するアンチセンスオリゴヌクレオチドをいくつか選択し、ＨｅｐＧ２細胞において種々の用量で更に試験した。いくつかの一連の実験で試験した例示的なアンチセンスオリゴヌクレオチドの結果を以下の表に示す。
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表１５に明示するように、０．４０６μＭ、０．８１３μＭ、１．６３μＭ、３．２５μＭ、６．５μＭ及び１３．０μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮ
Ａレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000132
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表１６に明示するように、３９．１ｎＭ、１５６．３ｎＭ、６２５．０ｎＭ、２５００ｎＭ及び１０，０００ｎＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。結果は、２回の試験の平均である。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000133
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表１７及び１８に明示するように、３１２．５ｎＭ、６２５ｎＭ、１２５０ｎＭ、２５００ｎＭ及び５０００ｎＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。結果は、２回の試験の平均である。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000134
Figure 2023093644000135
Figure 2023093644000136
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表１９に明示するように、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、１，０００ｎＭ及び３，０００ｎＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。結果は、２回の試験の平均である。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000137
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表２０に明示するように。１２．３ｎＭ、３７ｎＭ、１１１ｎＭ、３３３ｎＭ、１，０００ｎＭ及び３，０００ｎＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。結果は、２回の試験の平均である。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000138
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表２１に明示するように、０．３３μＭ、１．０μＭ、３．０μＭ及び９．０μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000139
Figure 2023093644000140
細胞を２０，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表２２に明示するように、０．４４μＭ、１．３３μＭ、４．０μＭ及び１２．０μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約１６時間の処置期間後、ＲＮＡを細胞から単離し、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ヒトプライマープローブセットＲＴＳ３７２１を使用してｍＲＮＡレベルを測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。各オリゴヌクレオチドの５０％阻害濃度（ＩＣ５０）も示す。アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
Figure 2023093644000141
Figure 2023093644000142
実施例３：トランスジェニックマウスモデルにおけるヒトＡＧＴを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドの単回投与処置の忍容性及び有効性
トランスジェニック（Ｔｇ）マウスモデル「ｈｕＡＧＴ」を作製し、このｈｕＡＧＴ Ｔｇモデルでアンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性を評価した。ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験から選択したＡＧＴアンチセンスオリゴヌクレオチドをｈｕＡＧＴマウスで評価した。
ｈｕＡＧＴトランスジェニックマウスを１２時間の明暗サイクルで飼育し、通常ラット用飼料を不断給餌した。動物は、実験開始前に研究施設で少なくとも７日間馴化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で調製し、０．２μフィルターで濾過することによって滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
処置＃１
雌の１０週齢のトランスジェニックｈｕＡＧＴマウスをマウス各４匹の群に分けた。８群に対して、２．５週間にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を２０ｍｇ／ｋｇの用量で週１回行った（処置３回）。マウスの１群に、２．５週間、ＰＢＳの皮下注射を週１回行った。この生理食塩水注射群をオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃１
１７日目に、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、トランスジェニックマウスの肝臓及び腎臓から全ＲＮＡを抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照に対する阻害率（％）として示す。表２３に示すように、ほとんどのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000143
血漿中化学マーカー、処置＃１
アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素、総ビリルビン及び血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中レベルを測定した。結果を表２４に示す。肝機能または腎機能マーカーのうちのいずれかのレベル変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000144
体重及び器官重量、処置＃１
トランスジェニックマウスの体重を１５日目に測定した。各群の平均体重を以下の表に示す。肝臓、脾臓及び腎臓の重量を試験終了時に測定した。これを表２５に示す。器官重量の何らかの変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000145
処置＃２
ｈｕＡＧＴマウス２匹からなる群のそれぞれに、２週間にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を２５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で行った。ｈｕＡＧＴマウスの１群にＰＢＳの皮下注射を行い、これをオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃２
１０日目に、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、トランスジェニックマウスの肝臓から全ＲＮＡを抽出した。結果を、マウス２匹の各群について平均し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照に対する阻害率（％）として示す。表２６に示すように、ほとんどのアンチセンスアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの
著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000146
血漿中化学マーカー、処置＃２
アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素の血漿中レベルを測定した。結果を、マウス２匹の各群について平均し、表２７に示す。肝機能マーカーのうちのいずれかのレベル変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000147
体重及び器官重量、処置＃２
全処置群のｈｕＡＧＴマウスの体重を１日目及び８日目に測定した。１０日目に動物を屠殺し、その肝臓を摘出し、重量を測定した。結果を、マウス２匹の各群について平均し、表２８に示す。器官重量の何らかの変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000148
処置＃３
ｈｕＡＧＴマウス２匹からなる群のそれぞれに、２週間にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を２５ｍｇ／ｋｇ／週の用量で行った。ｈｕＡＧＴマウス４匹の１群にＰＢＳの皮下注射を行い、これをオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃３
１０日目に、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、トランスジェニックマウスの肝臓から全ＲＮＡを抽出した。結果を、マウス２匹の各群について平均し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照に対する阻害率（％）として示す。表２９に示すように、ほとんどのアンチセンスアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000149
血漿中化学マーカー、処置＃３
アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素の血漿中レベルを測定した。結果を、マウス２匹の各群について平均し、表３０に示す。肝機能マーカーのうちのいずれかのレベル変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000150
体重及び器官重量、処置＃３
全処置群のｈｕＡＧＴマウスの体重を１日目及び８日目に測定した。１０日目に動物を屠殺し、その肝臓を摘出し、重量を測定した。結果を、マウス２匹の各群について平均し、表３１に示す。重量の何らかの変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000151
処置＃４
雄の６週齢のトランスジェニックｈｕＡＧＴマウスをマウス各３～４匹の群に分けた。８群に対して、２週間にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を５ｍｇ／ｋｇの用量で週１回行った。マウスの１群に、２週間、ＰＢＳの皮下注射を週１回行った。この生理食塩水注射群をオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃４
１７日目に、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、トランスジェニックマウスの肝臓及び腎臓から全ＲＮＡを抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照に対する阻害率（％）として示す。表３２に示すように、ほとんどのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000152
血漿中化学マーカー、処置＃４
１５日目に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素、総ビリルビン及び血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中レベルを測定した。結果を表３３に示す。肝機能マーカーのうちのいずれかのレベル変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000153
体重及び器官重量、処置＃４
トランスジェニックマウスの体重を１、８及び１３日目に測定した。各群の平均を以下
の表に示す。また、１５日目に、肝臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。これを表３４に示す。重量の何らかの変化が、アンチセンスオリゴヌクレオチドについて予想される範囲を越えて生じたアンチセンスオリゴヌクレオチドは、更なる試験から除外した。
Figure 2023093644000154
実施例４：トランスジェニックマウスモデルにおけるヒトＡＧＴを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドの反復投与処置の忍容性及び有効性
ｈｕＡＧＴトランスジェニックマウスにおける単回投与試験から選択したＡＧＴアンチセンスオリゴヌクレオチドを、ｈｕＡＧＴトランスジェニックマウスにおける用量反応試験で更に評価した。
ｈｕＡＧＴトランスジェニックマウスを１２時間の明暗サイクルで飼育し、通常ラット用飼料を不断給餌した。動物は、実験開始前に研究施設で少なくとも７日間馴化させた。アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）を緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で調製し、０．２マイクロフィルターで濾過することによって滅菌した。オリゴヌクレオチドを注射用に０．９％ＰＢＳ中に溶解した。
処置＃１
４点用量反応試験のために、雄のｈｕＡＧＴマウスをマウス各４匹からなる３７群に分けた。３６群に対して、２．５週間にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を５、１０、２５及び５０ｍｇ／ｋｇ／週の用量で行った（合計３回の投与）。ｈｕＡＧＴマウスの１群に生理食塩水の皮下注射を行い、これをオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃１
１７日目に、ｈｕＡＧＴマウスを屠殺し、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、肝臓及び腎臓から全ＲＮＡを抽出した。ＲＴ－ＰＣＲの結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、生理食塩水処置対照群に対する平均阻害率（％）として示す。表３５に示すように、選択したアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドによる処置は、生理食塩水対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000155
Figure 2023093644000156
体重及び器官重量、処置＃１
全処置群のｈｕＡＧＴマウスの体重を実験の１、８及び１５日目に測定した。結果を、各マウス群について平均し、表３６に示す。
Figure 2023093644000157
Figure 2023093644000158
処置＃２
別の４点用量反応試験のために、５つの強力なヒトＡＧＴ標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ番号６２０００３、６５４４５１、６５４４７２、６５４６９１及び６５４９９９）を先の試験から選択し、ｉｎ ｖｉｔｒｏで強力であり、またｈｕＡＧＴトランスジェニックマウス単回投与試験で強力かつ忍容性を示したＩＳＩＳ５６８６３７と比較した。この試験では、ｈｕＡＧＴマウスをマウス各３匹からなる２５群に分けた。これらの群に、１０日にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を１、４、１０及び４０ｍｇ／ｋｇの用量で２回の注射により行った。ｈｕＡＧＴマウス３匹の１群に生理食塩水の皮下注射を行い、これをオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃２
１０日目に、アンチセンスオリゴヌクレオチド処置ｈｕＡＧＴマウスを屠殺し、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、肝臓及び腎臓から全ＲＮＡを抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照群に対するｍＲＮＡ平均阻害率（％）として示す。表３７に示すように、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、生理食塩水対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000159
血漿中化学マーカー、処置＃２
１０日目に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素、ビリルビン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。結果を表３８に示す。
Figure 2023093644000160
処置＃３
３点用量反応試験のために、５つの強力なヒトＡＧＴ標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＩＳＩＳ番号５６８６３７、５９４６２２、５９４６２４、５９４６２５及び５９４６２７）を先の用量反応試験から選択した。この試験では、ｈｕＡＧＴマウスをマウス各３匹からなる１６群に分けた。これらの群に、１週間にわたって、アンチセンスオリゴヌクレオチドの皮下注射を１、５及び１５ｍｇ／ｋｇの用量で２回の注射により行った。ｈｕＡＧＴマウス３匹の１群に生理食塩水の皮下注射を行い、これをオリゴヌクレオチド処置群と比較する対照群とした。
ＲＮＡ分析、処置＃３
８日目に、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡ発現に関するリアルタイムＰＣＲ解析及び測定のために、トランスジェニックマウスの肝臓及び腎臓から全ＲＮＡを抽出した。結果を、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照に対する阻害率（％）として示す。表３９に示すように、ほとんどのアンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＰＢＳ対照と比較して、ヒトＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい減少をもたらした。
Figure 2023093644000161
血漿中化学マーカー、処置＃３
８日目に、アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素、総ビリルビン及び血中尿素窒素（ＢＵＮ）の血漿中レベルを測定した。結果を表４０に示す。
Figure 2023093644000162
体重及び器官重量、処置＃３
トランスジェニックマウスの体重を１、８及び１３日目に測定した。各群の平均を以下の表に示す。また、１５日目に、肝臓、脾臓及び腎臓の重量を測定した。これを表４１に示す。
Figure 2023093644000163
実施例５：９つの有力なＡＧＴ標的化アンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度評価
４０ｃＰを超える粘度を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドをスクリーニングして除去する目的で、９つのアンチセンスオリゴヌクレオチドの粘度を測定した。４０ｃＰを超える粘度を有するオリゴヌクレオチドは、いずれの対象への投与にも粘度が高すぎると考えられる。
アンチセンスオリゴヌクレオチド（３２～３５ｍｇ）をガラスバイアル中に秤量し、水１２０μＬを加え、バイアルを５０℃で加熱することによってアンチセンスオリゴヌクレオチドを溶液中に溶解した。予熱した試料の一部（７５μＬ）をマイクロ粘度計（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ）にピペットで分注した。マイクロ粘度計の温度を２５℃に設定し、試料の粘度を測定した。予熱した試料の別の部分（２０μＬ）を、８５℃、２６０ｎＭでのＵＶ読み取りのために（Ｃａｒｙ ＵＶ機器）、水１０ｍＬ中にピペットで分注した。結果を表４２に示す。結果は、試験したアンチセンスオリゴヌクレオチドが４０ｃＰの粘度を超えないことを示している。
Figure 2023093644000164
実施例６：９つの有力なヒトＡＧＴ標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のＣＤ１マウスにおける忍容性
ＣＤ１（登録商標）マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ，ＭＡ）は、多目的マウスモデルであり、安全性及び有効性試験によく利用されている。上記試験から選択したアンチセンスオリゴヌクレオチドでマウスを処置し、種々の血漿中化学マーカーのレベル変化について評価した。
上記の実施例で特定した９つのアンチセンスオリゴヌクレオチドをＣＤ１マウスにおける忍容性について試験した。マウスを１群あたりマウス４匹の群に分け、５０ｍｇ／ｋｇのアンチセンスオリゴヌクレオチドを週２回、６週間、皮下注射した（１００ｍｇ／ｋｇ／週の用量）。雄のＣＤ１マウスの一群に、ＰＢＳを週２回、６週間、皮下注射した。最終投与から４８時間後にマウスを安楽死させ、更なる分析のために器官及び血漿を採取した。
体重及び器官重量
ＡＳＯ処置ＣＤ１マウスの体重を毎週測定した。４３日目に、マウスを屠殺し、器官を摘出し、重量を測った。試験終了時の体重及び器官重量をグラム単位（ｇ）で表４３に示す。
Figure 2023093644000165
血漿中化学マーカー
オリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、ＡＬＴ（アラニンアミノ基転移酵素）及びＡＳＴ（アスパラギン酸アミノ基転移酵素）、ビリルビン、クレアチニンならびにＢＵＮの血漿中レベルを測定した。
結果を、各群について平均し、各項目について表４４に示す。
Figure 2023093644000166
別個の試験で、アンチセンス化合物ＩＳＩＳ５６８６３７、５９４６２２、５９４６２４、５９４６２５及び５９４６２７についてもＣＤ１マウスで試験したが、いくつかの忍容性の問題を呈したため、この試験は早々に終了した。
実施例７：９つの有力なヒトＡＧＴ標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のスプラーグドーリーラットにおける忍容性
スプラーグドーリー（ＳＤ）ラットは、安全性及び有効性評価に使用される多目的モデ
ルである。上記実施例に記載した試験から選択した９つのアンチセンスオリゴヌクレオチドでＳＤラットを処置し、種々の血漿中化学マーカーのレベル変化について評価した。
処置
雄のＳＤラットを１２時間の明暗サイクルで飼育し、Ｐｕｒｉｎａ通常ラット用飼料を不断給餌した。ラットを１群あたりラット４匹の群に分け、各群に１００ｍｇ／ｋｇ／週で、６週間、皮下注射した。最終投与から４８時間後にラットを安楽死させ、更なる分析のために器官及び血漿を採取した。
器官重量
アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したラットの肝臓、脾臓及び腎臓の重量を試験終了時に測定した。体重及び器官重量をグラム単位で表４５に示す。
Figure 2023093644000167
肝機能及び腎機能
９つのアンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、ＡＬＴ（アラニンアミノ基転移酵素）及びＡＳＴ（アスパラギン酸アミノ基転移酵素）、アルブミン、ＢＵＮ、クレアチニンならびにビリルビンの血漿中レベルを測定した。また、総尿蛋白及び尿クレアチニンレベルを測定し、総尿蛋白とクレアチニンの比（Ｐ／Ｃ比）を求めた。
各群の結果を平均し、各項目について表４６に示す。
Figure 2023093644000168
組織学
アンチセンスオリゴヌクレオチドで処置したラットの肝臓及び腎臓を顕微鏡で検査したが、処置に関連する顕著な有害な所見は観察されなかった。
別個の試験で、アンチセンス化合物ＩＳＩＳ５６８６３７、５９４６２２、５９４６２４、５９４６２５及び５９４６２７についてもＳＤラットで試験したが、いくつかの忍容性の問題を呈したため、この試験は早々に終了した。
実施例８：９つの有力なヒトＡＧＴ標的化アンチセンスオリゴヌクレオチド（ＡＳＯ）のカニクイザル肝細胞における効力
本試験に着手した時点で、カニクイザルのゲノム配列は、国立生物工学情報センター（ＮＣＢＩ）データベースで入手できなかったため、カニクイザル遺伝子配列との交差反応性は確認できなかった。その代わりに、相補性について、カニクイザルで使用したアンチセンスオリゴヌクレオチドの配列をアカゲザル配列と比較した。アカゲザル配列に対して相補性を有するアンチセンスオリゴヌクレオチドは、カニクイザル配列とも十分に交差反応性であると予想される。
試験したヒトアンチセンスオリゴヌクレオチドは、アカゲザルゲノム配列（本明細書において配列番号７として示される、ＧＥＮＢＡＮＫアクセッション番号ＮＷ＿００１１０９２５９．１からヌクレオチド１６０９００００～１６１０６０００を切り出したもの）と最大３つのミスマッチを有した。ヒトオリゴヌクレオチドとアカゲザル配列との間の相補性が大きいほど、そのヒトオリゴヌクレオチドは、アカゲザル配列及びカニクイザル配列と交差反応性できる可能性が高くなる。配列番号７に対する各オリゴヌクレオチドの開始部位及び終止部位を表４７に示す。「開始部位」は、ギャップマーが標的にするアカゲザル遺伝子配列中の最も５’側のヌクレオチドを示す。
先の試験でＡＧＴ ｍＲＮＡの著しい阻害及び忍容性を示した９つのアンチセンスオリゴヌクレオチドを選択し、凍結保存された個々の雄のカニクイザル初代肝細胞において種
々の用量で試験した。これらの９つの有力なアンチセンスオリゴヌクレオチドを以下の表に記載する。
Figure 2023093644000169
カニクイザル初代肝細胞を３５，０００細胞／ウェルの密度で培養し、エレクトロポレーションを使用して、以下の表４８に明示するように、０．１５６μＭ、０．３１３μＭ、０．６２５μＭ、１．２５μＭ、２．５μＭ、５．０μＭ、１０．０μＭ及び２０．０μＭ濃度のアンチセンスオリゴヌクレオチドをトランスフェクトした。約２４時間の処置期間後、細胞を洗浄し、溶解し、ＲＮＡを単離した。サルＡＧＴ ｍＲＮＡレベルを、プライマープローブセットＲＴＳ４０３９を使用して、定量リアルタイムＰＣＲによって測定した。ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）によって測定した全ＲＮＡ含量に従ってＡＧＴ
ｍＲＮＡ標的レベルを調整した。無処置の対照細胞に対するＡＧＴの阻害率（％）として結果を示す。
Figure 2023093644000170
アンチセンスオリゴヌクレオチド処置細胞では、ほとんどのサルＡＧＴ ｍＲＮＡレベルが用量依存的に著しく減少した。
実施例９：ヒトＡＧＴを標的にするアンチセンスオリゴヌクレオチドのカニクイザルにおける効果
１２週間の用量反応試験において、上記実施例に記載した試験から選択した９つのアンチセンスオリゴヌクレオチドでカニクイザルを処置した。アンチセンスオリゴヌクレオチドの有効性及び忍容性ならびに肝臓及び腎臓におけるその薬物動態プロファイルを評価した。
処置
試験に先立って、サルを隔離状態に置き、その期間中、全般的な健康状態について動物を毎日観察した。サルは２～４歳で、体重は２～４ｋｇであった。無作為に割り当てた５匹の雄のカニクイザルの１０群のそれぞれに、アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはＰＢＳを皮下注射した。サルには、合計１５回の投与で、４０ｍｇ／ｋｇ／週のアンチセンスオリゴヌクレオチドを週１回、１２週間投与した（サルは第１週及び第２週に４０ｍｇ／ｋｇを２回投与する負荷処置を受けた）。対照群のカニクイザルには類似の方法でＰＢＳを注射し、これを対照群とした。
試験期間中、疾病または苦痛の徴候についてサルを１日２回観察した。治療、外傷または疾病に起因する一時的または軽微な程度を越える疼痛または苦痛を経験する動物は、獣医スタッフが、試験責任者と相談後、承認された鎮痛薬または痛みを緩和する薬を用いて治療した。更なるモニタリング及び安楽死の可能性を要する、健康状態の悪い動物または瀕死状態であり得る動物を特定した。１２週間の試験の最後に、サルを屠殺し、器官を取り出した。実施例に記載のプロトコルは、動物実験委員会（ＩＡＣＵＣ）による承認を受けたものである。
体重及び器官重量
体重を毎週評価したが、アンチセンスオリゴヌクレオチドの体重に対する顕著な作用は観察されなかった。７７日目に体重を測定し、７９日目に器官重量を測定した。これを以下の表４９に示す。
Figure 2023093644000171
薬力学
試験中、分析のために血漿、血清及び尿を採取した。９つの有力なアンチセンスオリゴ
ヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、７９日目に、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、ＡＬＴ（アラニンアミノ基転移酵素）及びＡＳＴ（アスパラギン酸アミノ基転移酵素）、ＢＵＮならびにビリルビンの血漿中レベルを測定した。表５０に示すように、ＡＬＴ、ＡＳＴ、ＢＵＮ及びビリルビンに対する著しい作用は観察されなかった。
Figure 2023093644000172
更に、ＥＣＧ、血圧、血漿電解質、蛋白尿、炎症反応（例えば、ＣＲＰレベル）または腎臓蓄積における著しい変化は、観察されなかった。概して、アンチセンスオリゴヌクレオチドは良好な忍容性を示した。
ＲＮＡ分析
試験の最後に、ＡＧＴのｍＲＮＡ発現を測定するリアルタイムＰＣＲ解析のために、サルの肝臓及び腎臓からＲＮＡを抽出した。プライマープローブセットＲＴＳ４０３９を使用した。各群の結果を平均し、ＲＩＢＯＧＲＥＥＮ（登録商標）により正規化した、ＰＢＳ対照に対するｍＲＮＡ阻害率（％）として示す。表５１に示すように、アンチセンスオリゴヌクレオチドによる処置は、ＡＧＴ ｍＲＮＡレベルに異なる効果をもたらした。
Figure 2023093644000173
実施例１０：ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドのＣＤ－１マウスにおける忍容性
上記試験から有力候補（ＩＳＩＳ６５４４７２）の５－１０－５完全ホスホロチオエートＭＯＥギャップマーを選択し、これを、同じヌクレオチド配列を有するが、以下の表５２に記載するように主鎖構造が異なる、６つの５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３（別名「ＧａｌＮＡｃ」）－コンジュゲート化５－１０－５ＭＯＥギャップマーの設計のベースとして使用した。「ｓ」は、ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である。「ｏ」は、ホスホジエステルヌクレオシド間結合である。「Ａ」は、アデニン核酸塩基である。「ｍＣ」は、５－メチルシトシン核酸塩基である。「Ｇ」は、グアニン核酸塩基である。「Ｔ」は、チミン核酸塩基である。「ｅ」は、ＭＯＥ修飾を示す。「ｄ」は、デオキシリボースを示す。
Figure 2023093644000174
３点用量反応試験のために、ＣＤ１マウス４匹からなる１６群のそれぞれに、４週間にわたって、１０ｍｇ／ｋｇ／週のＧａｌＮＡｃ－コンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドを皮下注射した。マウスの一群に、ＰＢＳを週２回、６週間、皮下注射した。ＡＳＯ処置ＣＤ１マウスの体重を毎週測定した。最終投与から４８時間後にマウスを安楽死させ、更なる分析のために器官及び血漿を採取した。血漿及び尿を採取し、アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価するために、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して、アミノ基転移酵素、ビリルビン及びＢＵＮの血漿中レベルを測定した。実験終了時に、肝臓、腎臓及び脾臓を摘出し、重量を測った。
結果を、各群について平均し、表５３に示す。
Figure 2023093644000175
実施例１１：ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化ＡＳＯのＳＤラットにおける忍容性
２８匹の雄のＳＤラットを、１群あたりラット４匹の７群に分けた。ラットに、４週間にわたって、ＰＢＳ（無処置対照）または１０ｍｇ／ｋｇ／週のＧａｌＮＡｃコンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドを皮下注射した。
血漿及び尿を採取し、臨床化学自動分析装置（Ｈｉｔａｃｈｉ Ｏｌｙｍｐｕｓ ＡＵ４００ｅ（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ））を使用して分析して、アンチセンスオリゴヌクレオチドの肝機能及び腎機能に対する作用を評価した。実験終了時に、肝臓、腎臓及び脾臓を摘出し、重量を測った。
結果を各群動物４匹の平均として示し、表５４に示す。
Figure 2023093644000176
実施例１２：非コンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドとＧａｌＮＡｃコンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドの雄及び雌のｈｕＡＧＴマウスにおける用量反応比較
先の実施例に記載したように、ｈｕＡＧＴマウスは、アンチセンスオリゴヌクレオチドの効力を試験するのに有用である。親５－１０－５ＭＯＥギャップマー（ＩＳＩＳ６５４４７２）と、同じ配列を有するＧａｌＮＡｃコンジュゲート化化合物（ＩＳＩＳ７５７４５６）との用量反応比較を実施した。表５５に示すように、ＧａｌＮＡｃコンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドは、非コンジュゲート化アンチセンスオリゴヌクレオチドよりも８倍強力である。
Figure 2023093644000177
配列表
本出願は、電子形式の配列表とともに出願されている。配列表は、２０１６年１０月３日に作成されたサイズ４５６ｋｂのＢＩＯＬ０２７０ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと題するファイルに対応する。電子形式の配列表及びＢＩＯＬ０２７０ＷＯＳＥＱ＿ＳＴ２５．ｔｘｔと題されたファイルの中の情報は、その全体が参照により本明細書に援用される。
本明細書で開示される特定の実施形態は、次式：ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ Ａｅｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｅｓ Ｇｅｓ Ｇｅｓ Ｔｅｓ Ｔｅ（配列番号１９１４の核酸塩基配列を有する）（式中、Ａはアデニンであり、ｍＣは５－メチルシトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｔはチミンであり、ｅは２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、ｄは２’－デオキシヌクレオシドであり、ｓはホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）に従う修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
本明細書で開示される特定の実施形態は、次式：ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ Ａｅｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｅｓ Ｇｅｓ Ｇｅｓ Ｔｅｓ Ｔｅ（配列番号１９１４の核酸塩基配列を有する）（式中、Ａはアデニンであり、ｍＣは５－メチルシトシンであり、Ｇはグアニンであり、Ｔはチミンであり、ｅは２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオシドであり、ｄは２’－デオキシヌクレオシドであり、ｓはホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）に従う修飾オリゴヌクレオチドを含む化合物を提供する。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、ＧａｌＮＡｃコンジュゲートを更に含む。特定の実施形態において、コンジュゲートは、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートである。特定の実施形態において、修飾オリゴヌクレオチドは、切断可能部分によって、５’－トリスヘキシルアミノ－（ＴＨＡ）－Ｃ６ ＧａｌＮＡｃ３コンジュゲートに結合される。特定の実施形態において、切断可能部分は、リン酸基である。
特定の実施形態において、ＩＳＩＳ７５７４５６（配列番号１９１４の核酸塩基配列を有する）が好ましい。この化合物は、ＡＧＴトランスジェニックマウスにおいて強力な阻害物質であり、ＣＤ－１マウスにおいて非常に忍容性のあるアンチセンス化合物であることが判明した。マウスでは、生理食塩水で処置された動物に対して、ＡＬＴ及び／またはＡＳＴレベルが３倍以下の増加であった。ｈｕＡＧＴトランスジェニックマウスにおけるＥＤ５０は、≦３ｍｐｋ／週であった。
Figure 2023093644000179
Figure 2023093644000180
 ある態様において、本発明は以下であってもよい。
［態様１］配列番号１の核酸塩基２２５０～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物。
［態様２］配列番号１の核酸塩基２２８１～２３００のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物。
［態様３］前記修飾オリゴヌクレオチドが、１５～３０、１５～２５、１５～２４、１６～２４、１７～２４、１８～２４、１９～２４、２０～２４、１９～２２、２０～２２、１６～２０、１６または２０個の結合されたヌクレオシドからなる、態様１または２に記載の化合物。
［態様４］前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を含む、態様１または２に記載の化合物。
［態様５］前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％相補的である、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様６］１２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号１４～２０５１の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様７］１２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号４６、５３～５４、６１、６８、７６、８３、８５、９３、９６～９７、１０９、１２７、１２９～１３０、１３２、１３４～１５、１３７～３９、１４２、１６３～１７２、１８０～１８４、１８６、１８９、２３４、２３６、２３８～２３９、２６７、３１３、４１１、４５２、４６３～４７０、４７５～４７８、４８０、５００～５０３、５１２、５１７～５１８、５２４～５２６、６５４、６８９、７０２、７２５～７２６、７２８、７３８、７７９、７８６～７８７、８００、８０８、８１０～８１１、８２５、８６５、８６８、８８９、８９４、９０３、９０５、９０９、９５４、９６６、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０８０、１０８５、１２５８～１２５９、１２６１～１２６２、１２９３～１２９４、１２９９、１３２５、１４７０、１４７２～１４７３、１５２２、１５４２、１６０４、１６２３～１６２４、１６６７、１６７０、１６８２～１６８３、１６８７、１７００、１７０３～１７０４、１７０８、１７１４、１７１６、１７１９～１７２０、１７２４～１７２６、１７２９～１７３０、１８２７、１９３６、１８４３～１８４４、１８４６、１８８６、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、１９３２、１９７９、１９８６、１９８８、１９９０、２００３、２０１５、２０１８、２０２０、２０２７～２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様８］１２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号２３８、１７１４、１７１９、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、２００３の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様９］１２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号１９１４の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様１０］一本鎖である、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様１１］二本鎖である、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様１２］少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様１３］少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様１２に記載の化合物。
［態様１４］各修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、態様１２に記載の化合物。
［態様１５］前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾糖を含む、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様１６］少なくとも１つの修飾糖が二環式糖である、態様１５に記載の化合物。
［態様１７］少なくとも１つの修飾糖が、２’－Ｏ－メトキシエチル、拘束エチル（ｃＥｔ）、３’－フルオロ－ＨＮＡまたは４’－（ＣＨ２）ｎ－Ｏ－２’架橋（式中、ｎは１または２である）を含む、態様１５に記載の化合物。
［態様１８］少なくとも１つのヌクレオシドが修飾核酸塩基を含む、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様１９］前記修飾核酸塩基が５－メチルシトシンである、態様１８に記載の化合物。
［態様２０］前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなり、
ａ．複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
ｂ．複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
ｃ．複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含む、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様２１］前記修飾オリゴヌクレオチドが１６～２０個の結合された核酸塩基からなる、態様２０に記載の化合物。
［態様２２］前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を更に含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２３］前記修飾オリゴヌクレオチドが修飾核酸塩基を更に含む、態様２０に記載の化合物。
［態様２４］前記修飾オリゴヌクレオチドが、
ａ．１０個の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
ｂ．３～５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
ｃ．３～５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
を含む、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合を含み、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである、態様２０に記載の化合物。
［態様２５］次式：ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ Ａｅｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｅｓ Ｇｅｓ Ｇｅｓ Ｔｅｓ Ｔｅ（配列番号１９１４）；
（式中、
Ａ＝アデニン、
ｍＣ＝５’－メチルシトシン
Ｇ＝グアニン、
Ｔ＝チミン、
ｅ＝２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオシド、
ｄ＝２’－デオキシヌクレオシド、及び
ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）
に従う修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
［態様２６］コンジュゲート基を更に含む、先行態様のいずれか一に記載の化合物。
［態様２７］前記コンジュゲート基がＧａｌＮＡｃ部分である、態様２６に記載の化合物。
［態様２８］配列番号１９１４のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、２０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、
ａ．１０個の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
ｂ．５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
ｃ．５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、
ｄ．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートとを含み、
前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合を含み、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである、化合物。
［態様２９］次式に従う修飾オリゴヌクレオチド。
Figure 2023093644000181
 ［態様３０］先行態様のいずれか一に記載の化合物もしくは修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む、組成物。
［態様３１］治療法に使用するための、先行態様のいずれか一に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチドを含む、組成物。
［態様３２］薬剤の調製に使用するための、先行態様のいずれか一に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチドを含む、組成物。
［態様３３］細胞、組織、器官または動物においてＡＧＴを減少させるのに使用するための、先行態様のいずれか一に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
［態様３４］動物におけるＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態に関連する疾患、障害または病態の治療、予防、改善または進行遅延に使用するための、先行態様のいずれか一に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
［態様３５］前記疾患、障害または病態が高血圧である、態様３４に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。

Claims (35)

  1. 配列番号１の核酸塩基２２５０～２３３７のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物。
  2. 配列番号１の核酸塩基２２８１～２３００のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも８個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を有する１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が配列番号１に対して少なくとも８０％相補的である、化合物。
  3. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、１５～３０、１５～２５、１５～２４、１６～２４、１７～２４、１８～２４、１９～２４、２０～２４、１９～２２、２０～２２、１６～２０、１６または２０個の結合されたヌクレオシドからなる、請求項１または２に記載の化合物。
  4. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、配列番号１のうちの長さの等しい部分に相補的な少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または少なくとも２０個の連続した核酸塩基部分を含む核酸塩基配列を含む、請求項１または２に記載の化合物。
  5. 前記修飾オリゴヌクレオチドの前記核酸塩基配列が、配列番号１に対して、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９５％または１００％相補的である、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  6. １２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号１４～２０５１の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  7. １２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号４６、５３～５４、６１、６８、７６、８３、８５、９３、９６～９７、１０９、１２７、１２９～１３０、１３２、１３４～１５、１３７～３９、１４２、１６３～１７２、１８０～１８４、１８６、１８９、２３４、２３６、２３８～２３９、２６７、３１３、４１１、４５２、４６３～４７０、４７５～４７８、４８０、５００～５０３、５１２、５１７～５１８、５２４～５２６、６５４、６８９、７０２、７２５～７２６、７２８、７３８、７７９、７８６～７８７、８００、８０８、８１０～８１１、８２５、８６５、８６８、８８９、８９４、９０３、９０５、９０９、９５４、９６６、１０１１、１０１５、１０２１、１０２４、１０８０、１０８５、１２５８～１２５９、１２６１～１２６２、１２９３～１２９４、１２９９、１３２５、１４７０、１４７２～１４７３、１５２２、１５４２、１６０４、１６２３～１６２４、１６６７、１６７０、１６８２～１６８３、１６８７、１７００、１７０３～１７０４、１７０８、１７１４、１７１６、１７１９～１７２０、１７２４～１７２６、１７２９～１７３０、１８２７、１９３６、１８４３～１８４４、１８４６、１８８６、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、１９３２、１９７９、１９８６、１９８８、１９９０、２００３、２０１５、２０１８、２０２０、２０２７～２０２８、２０３５、２０３７、２０３９、２０４４の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３
    、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  8. １２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号２３８、１７１４、１７１９、１８９３～１８９４、１９１４、１９２３、１９２５、２００３の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  9. １２～３０個の結合されたヌクレオシドを含み、かつ配列番号１９１４の核酸塩基配列のうちの少なくとも８、少なくとも９、少なくとも１０、少なくとも１１、少なくとも１２、少なくとも１３、少なくとも１４、少なくとも１５、少なくとも１６、少なくとも１７、少なくとも１８、少なくとも１９または２０個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  10. 一本鎖である、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  11. 二本鎖である、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  12. 少なくとも１つのヌクレオシド間結合が修飾ヌクレオシド間結合である、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  13. 少なくとも１つの修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１２に記載の化合物。
  14. 各修飾ヌクレオシド間結合がホスホロチオエートヌクレオシド間結合である、請求項１２に記載の化合物。
  15. 前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１つの修飾糖を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  16. 少なくとも１つの修飾糖が二環式糖である、請求項１５に記載の化合物。
  17. 少なくとも１つの修飾糖が、２’－Ｏ－メトキシエチル、拘束エチル（ｃＥｔ）、３’－フルオロ－ＨＮＡまたは４’－（ＣＨ２）ｎ－Ｏ－２’架橋（式中、ｎは１または２である）を含む、請求項１５に記載の化合物。
  18. 少なくとも１つのヌクレオシドが修飾核酸塩基を含む、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  19. 前記修飾核酸塩基が５－メチルシトシンである、請求項１８に記載の化合物。
  20. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、１２～３０個の結合されたヌクレオシドからなり、
    ａ．複数の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
    ｂ．複数の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
    ｃ．複数の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントとを含み、
    前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、修飾糖を含む、先行請求
    項のいずれか一項に記載の化合物。
  21. 前記修飾オリゴヌクレオチドが１６～２０個の結合された核酸塩基からなる、請求項２０に記載の化合物。
  22. 前記修飾オリゴヌクレオチドが少なくとも１つのホスホロチオエートヌクレオシド間結合を更に含む、請求項２０に記載の化合物。
  23. 前記修飾オリゴヌクレオチドが修飾核酸塩基を更に含む、請求項２０に記載の化合物。
  24. 前記修飾オリゴヌクレオチドが、
    ａ．１０個の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
    ｂ．３～５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
    ｃ．３～５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと
    を含む、１６～２０個の結合されたヌクレオシドからなり、
    前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合を含み、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである、請求項２０に記載の化合物。
  25. 次式：ｍＣｅｓ Ａｅｓ ｍＣｅｓ Ａｅｓ Ａｅｓ Ａｄｓ ｍＣｄｓ Ａｄｓ Ａｄｓ Ｇｄｓ ｍＣｄｓ Ｔｄｓ Ｇｄｓ Ｇｄｓ Ｔｄｓ ｍＣｅｓ Ｇｅｓ Ｇｅｓ
    Ｔｅｓ Ｔｅ（配列番号１９１４）；
    （式中、
    Ａ＝アデニン、
    ｍＣ＝５’－メチルシトシン
    Ｇ＝グアニン、
    Ｔ＝チミン、
    ｅ＝２’－Ｏ－メトキシエチル修飾ヌクレオシド、
    ｄ＝２’－デオキシヌクレオシド、及び
    ｓ＝ホスホロチオエートヌクレオシド間結合である）
    に従う修飾オリゴヌクレオチドを含む、化合物。
  26. コンジュゲート基を更に含む、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物。
  27. 前記コンジュゲート基がＧａｌＮＡｃ部分である、請求項２６に記載の化合物。
  28. 配列番号１９１４のうちの少なくとも８個の連続した核酸塩基を含む核酸塩基配列を有する、２０個の結合されたヌクレオシドからなる修飾オリゴヌクレオチドを含み、前記修飾オリゴヌクレオチドは、
    ａ．１０個の結合されたデオキシヌクレオシドからなるギャップセグメントと、
    ｂ．５個の結合されたヌクレオシドからなる５’ウイングセグメントと、
    ｃ．５個の結合されたヌクレオシドからなる３’ウイングセグメントと、
    ｄ．ＧａｌＮＡｃコンジュゲートとを含み、
    前記ギャップセグメントは、前記５’ウイングセグメントと前記３’ウイングセグメントとの間に配置され、各ウイングセグメントの各ヌクレオシドは、２’－Ｏ－メトキシエチル糖を含み、各ヌクレオシド間結合は、ホスホロチオエート結合を含み、各シトシン残基は、５－メチルシトシンである、化合物。
  29. 次式に従う修飾オリゴヌクレオチド。
    Figure 2023093644000178
  30. 先行請求項のいずれか一項に記載の化合物もしくは修飾オリゴヌクレオチドまたはその塩と、薬学的に許容される担体または希釈剤とを含む、組成物。
  31. 治療法に使用するための、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチドを含む、組成物。
  32. 薬剤の調製に使用するための、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチドを含む、組成物。
  33. 細胞、組織、器官または動物においてＡＧＴを減少させるのに使用するための、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
  34. 動物におけるＲＡＡＳ経路関連疾患、障害及び／または病態に関連する疾患、障害または病態の治療、予防、改善または進行遅延に使用するための、先行請求項のいずれか一項に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
  35. 前記疾患、障害または病態が高血圧である、請求項３４に記載の化合物または修飾オリゴヌクレオチド。
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